FR2921490A1

FR2921490A1 - Procede et dispositif pour recueillir du materiel cellulaire de cellules isolees sur filtre

Info

Publication number: FR2921490A1
Application number: FR0757779A
Authority: FR
Inventors: Yvon Cayre
Original assignee: METAGENEX SA
Current assignee: METAGENEX SA
Priority date: 2007-09-21
Filing date: 2007-09-21
Publication date: 2009-03-27
Anticipated expiration: 2027-09-21
Also published as: US20110104670A1; EP2191250A1; WO2009047436A1; FR2921491B1; FR2921491A1; US20090081772A1; FR2921490B1; JP2010538672A

Abstract

Le procédé pour recueillir du matériel cellulaire de cellules particulières présentes dans un liquide, comporte :- une étape (210) d'insertion du liquide dans un compartiment par l'intermédiaire d'une ouverture supérieure du compartiment, ledit compartiment présentant une ouverture inférieure, entre les deux ouvertures étant positionné un filtre dont les micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules,- une étape (215) de filtration au cours de laquelle le principal du liquide et desdites autres cellules passe à travers le filtre,- une étape (230) de lyse des cellules retenues sur le filtre et- une étape (245, 230) de récupération de matériel cellulaire des cellules lysées, sur le filtre.

Description

La présente invention concerne un procédé et un dispositif pour recueillir du matériel cellulaire de cellules isolées sur filtre. Elle s'applique, en particulier à recueillir le matériel génétique de cellules particulières présentes dans un liquide, notamment le sang. Certaines cellules particulières du sang, par exemple les cellules tumorale ou foetale, sont en très faible concentration et doivent être concentrées pour une analyse cytopathologique. Cependant, par rapport aux cellules sanguines, elles sont de plus grande taille. Il est connu, par exemple du document PCT/FR 2006/000562, d'appliquer un tampon de fixation à base de formaldéhyde à un échantillon sanguin pour fixer les cellules recherchées, puis de faire passer le liquide résultant dans un filtre poreux. Ce filtre est ensuite analysé en laboratoire pour y rechercher les cellules sous microscope. On peut, par la suite, les prélever sur le filtre pour des analyses, par exemple par une analyse génétique. Cependant, cette procédure ne peut faire l'objet d'une reproduction à grande échelle et à un coût raisonnable, du fait du temps, des matériels et de la précision de travail qu'elle implique. Cela permettrait la conduite d'analyses de biologie moléculaire à la fois sur des cellules tumorales et sur des cellules trophoblastiques. La présente invention vise à remédier à ces inconvénients et à répondre à ce besoin en permettant de recueillir dans des conditions compatibles avec des examens de laboratoire de routine, une grande proportion du matériel cellulaire, en particulier, ARN et ADN, des cellules considérées, en bon état. A cet effet, selon un premier aspect, la présente invention vise un procédé pour recueillir du matériel cellulaire de cellules particulières présentes dans un liquide, caractérisé en ce qu'il comporte : - une étape d'insertion du liquide dans un compartiment par l'intermédiaire d'une ouverture supérieure du compartiment, ledit compartiment présentant une ouverture inférieure, entre les deux ouvertures étant positionné un filtre dont les micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - une étape de filtration au cours de laquelle le principal du liquide et desdites autres cellules passe à travers le filtre, - une étape de lyse des cellules retenues sur le filtre et - une étape de récupération de matériel cellulaire des cellules lysées, sur le filtre. En général, le matériel cellulaire récupéré grâce à la mise en oeuvre de la présente invention est le matériel génétique des cellules. Le procédé objet de la présente invention permet ainsi la récupération, directement sur filtre et pratiquement sans perte, du matériel génétique de cellules rares, jusqu'à une seule cellule isolée. On recueille ainsi une grande proportion du matériel génétique des cellules considérées, en bon état, dans des conditions compatibles avec des examens de laboratoire de routine. Selon des caractéristiques particulières, le procédé tel que succinctement exposé ci-dessus comporte, préliminairement à l'étape de filtration, une étape d'application d'un tampon de fixation sans formaldéhyde au liquide contenant les cellules particulières. Ainsi, on durcit spécifiquement les cellules particulières recherchées, sans altérer le matériel génétique. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape d'insertion, le compartiment présente la forme générale d'une seringue dans laquelle le filtre est positionné entre les deux ouvertures. Grâce à ces dispositions, on peut appliquer un piston dans l'ouverture supérieure sans modifier la position du filtre. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape de filtration, on applique une aspiration par dépression en dessous du filtre. Grâce à ces dispositions, la filtration est plus efficace et plus rapide qu'en l'absence d'aspiration.

Selon des caractéristiques particulières, à la suite de l'étape de filtration et avant l'étape de récupération, on place le compartiment sur un tube du type Eppendorf. On réalise ainsi un passage direct depuis le filtre vers un tube du type Eppendorf.

Selon des caractéristiques particulières, avant l'étape de récupération, on positionne, dans l'ouverture supérieure du compartiment, un piston comportant un poinçon central mobile à l'intérieur du piston. Selon des caractéristiques particulières, le poinçon central mobile présente une extrémité inférieure pointue.

Selon des caractéristiques particulières, l'extrémité inférieure pointue présente une forme en étoile. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape de récupération, on applique une pression sur la partie haute du poinçon pour perforer le filtre avec la pointe du poinçon.

Selon des caractéristiques particulières, le piston comportant un moyen de blocage longitudinal du poinçon, au cours de l'étape de récupération, on fait pivoter le poinçon à l'intérieur du piston pour le dégager dudit moyen de blocage, avant d'appliquer une pression sur sa partie haute. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape de récupération, on applique une pression verticale vers le bas sur le piston pour faire passer le contenu du compartiment dans un tube placé en dessous du compartiment. Grâce à chacune de ces dispositions, le matériel cellulaire des cellules particulières peut être extrait sans détérioration à travers la perforation du filtre. Selon des caractéristiques particulières, à la suite de l'étape de filtration et avant l'étape de récupération, on isole le contenu du compartiment en en bouchant l'ouverture inférieure par une membrane. Selon des caractéristiques particulières, ladite membrane est positionnée sous une barrette entourant l'ouverture inférieure de chaque compartiment. On assure ainsi l'étanchéité et le maintien du liquide de lyse au dessus du filtre.

Selon des caractéristiques particulières, ladite membrane est une membrane adhésive. Grâce à chacune de ces dispositions, le contenu du compartiment est maintenu à l'écart de l'environnement entre la filtration et la récupération du matériel cellulaire des cellules particulières. Selon des caractéristiques particulières, au cours de l'étape de récupération, on applique une pression sur la partie haute du poinçon pour perforer la membrane isolant le contenu du compartiment. Selon des caractéristiques particulières, le filtre est réalisé en polycarbonate avec un traitement de surface hydrophile. L'utilisation d'un tel filtre améliore le taux de retenu des cellules particulières et réduit l'adhérence du matériel cellulaire à récupérer. Selon des caractéristiques particulières, le filtre possède un diamètre de pores centré sur 7,5 pm. Ainsi, du fait de la dispersion des diamètres, pratiquement aucun pore ne possède un diamètre supérieur à 8 pm. La mise en oeuvre de ce diamètre de pores, inférieur au diamètre de pores traditionnellement utilisé pour les filtres d'analyse cytologique, permet de les éloigner, ce qui réduit le nombre de pores jointifs et évite de perdre des cellules particulières.

Selon un deuxième aspect, la présente invention vise un dispositif pour recueillir du matériel génétique de cellules particulières présentes dans un liquide, caractérisé en ce qu'il comporte : - un compartiment comportant une ouverture supérieure et une ouverture inférieure, entre les deux ouvertures étant positionné un filtre dont les micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - un moyen d'insertion du liquide dans ledit compartiment par l'intermédiaire de l'ouverture supérieure, - un moyen de filtration faisant passer le principal du liquide et desdites autres cellules à travers le filtre, - un moyen de lyse des cellules retenues sur le filtre et - un moyen de récupération de matériel cellulaire des cellules lysées, sur le filtre. Les avantages, buts et caractéristiques de ce dispositif étant similaires à ceux du procédé objet de la présente invention, tel que succinctement exposé ci-dessus, ils ne sont pas rappelés ici. D'autres avantages, buts et caractéristiques de la présente invention ressortiront de la description qui va suivre, faite, dans un but explicatif et nullement limitatif en regard des dessins annexés, dans lesquels : - la figure 1 représente, schématiquement, en perspective, des pièces de deux modes de réalisation particuliers du dispositif objet de la présente invention, mises en oeuvre dans une première phase du procédé objet de la présente invention, - la figure 2 représente, schématiquement, en coupe, des pièces des deux modes de réalisation particuliers du dispositif objet de la présente invention, mises en oeuvre dans une première phase du procédé objet de la présente invention, - la figure 3 représente, schématiquement, en perspective, des pièces d'un premier mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention, -la figure 4 représente, schématiquement, en élévation, des pièces du premier mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention, - la figure 5 représente, schématiquement, en coupe, des pièces du premier mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention, - la figure 6 représente, schématiquement, en perspective, des pièces d'un deuxième mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention, - la figure 7 représente, schématiquement, en coupe, des pièces du deuxième mode de réalisation particulier du dispositif objet de la présente invention - la figure 8 représente, schématiquement, en perspective, des pièces des deux modes de réalisation particuliers du dispositif objet de la présente invention, utilisés dans une deuxième phase du procédé objet de la présente invention et - la figure 9 représente, sous forme d'un logigramme, des étapes mises en oeuvre dans un mode de réalisation particulier du procédé objet de la présente invention. Comme on l'observe en regard des figures 1 et 2, dans les deux modes de réalisation illustrés dans les figures, le dispositif pour recueillir du matériel cellulaire, ici génétique, comporte des (ici quatre) compartiments en forme de seringue 105 présentant, chacun, une ouverture supérieure 106 et une ouverture inférieure 107. Une rondelle ou bague 118 placée dans l'ouverture inférieure 107 retient un filtre 115. Les filtres 115 sont micro perforés et collés sur les rondelles ou bagues 118 puis insérés à l'extrémité distale, c'est-à-dire au fond, des quatre compartiments en forme de seringue 105. Par exemple, le filtre 115 est réalisé en polycarbonate avec un traitement de surface hydrophile. L'utilisation d'un tel filtre améliore le taux de retenu des cellules particulières et réduit l'adhérence du matériel cellulaire à récupérer. Le filtre 115 présente, par exemple, un diamètre de pores centré sur 7,5 pm. Du fait de la dispersion des diamètres, pratiquement aucun pore ne possède alors un diamètre supérieur à 8 pm. A la petite ouverture, ou ouverture inférieure, de chaque compartiment 105 est placé, de façon étanche, un embout (en anglais tip ) 117 afin d'éviter de potentielles contaminations de l'extrémité du compartiment 105 par des éclaboussures provenant du réservoir 112. Ces compartiments 105 sont assemblés par une barrette 116, en matière plastique, pour constituer une pièce unique. L'ensemble, ainsi constitué des quatre compartiments 105, de la barrette supérieure 116, les quatre pistons 140 et la barrette-bouchon 120 (décrite plus loin) est à usage unique.

Dans la première phase du procédé pour recueillir du matériel cellulaire, les compartiments 105 sont supportés par une platine 110 insérée dans un porte-tiroir 111 comportant un compartiment relié à un réservoir 112 sous la surface inférieure de la platine 110 par laquelle une aspiration peut être effectuée. Un joint torique 113 assure l'étanchéité de la liaison entre un embout 117 et la platine 110. Un joint torique 114 assure l'étanchéité de la liaison entre la platine 110 et le porte tiroir 111. L'étanchéité offerte par les joints toriques 113 et 114 permet l'aspiration du contenu des compartiments. Lors de l'aspiration par le réservoir 112, certaines cellules particulières du liquide présent dans le compartiment 105, de plus fort diamètre, sont retenues par le filtre 115 alors que le principal du liquide et des cellules de petites dimensions sont aspirées en dehors du compartiment 105, à travers le filtre 115. A la fin de la première phase du procédé pour recueillir du matériel cellulaire, les compartiments 105 sont retirés de la partie du dispositif illustrée en figures 1 et 2 et les embouts 117 sont retirés des ouvertures inférieures des compartiments 105. Puis, une barrette-bouchon 120 est insérée à l'embout des compartiments 105 en forme de seringues. Il s'agit d'une barrette avec quatre perforations qui reçoivent l'embout inférieur des compartiments. Un film-plastique est collé à la face inférieure de cette barrette-bouchon 120, et constitue une membrane étanche, préférentiellement adhésive. Le contenu du compartiment 105 est ainsi maintenu à l'écart de l'environnement jusqu'à la récupération du matériel cellulaire des cellules particulières. Lors de la deuxième phase du procédé, la barrette 116, portant les compartiments 105, associés à la barrette de bouchons 120, est mise en appui sur un portoir 133 en matière plastique. Puis, on réalise, en étuve, la lyse des cellules présentes dans le compartiment 105. A cet effet, après l'addition des réactifs pour la lyse des membranes cellulaires des cellules recherchées, le portoir 133, maintenant les compartiments 105 verticaux, est transporté dans une étuve. A la sortie de l'étuve, après refroidissement, on positionne les tubes de type Eppendorf sur le support inférieur 131 du portique 130. On positionne la barrette 116 portant les compartiments 105, associés à la barrette de bouchons 120 sur le portique 130 et on place le portique 130 sur le support inférieur 131.

Ensuite, par l'ouverture supérieure 106 de chaque compartiment 105, est inséré un piston 140 muni d'un poinçon axial central 141 se finissant par une pointe 142. Préférentiellement, en coupe, cette pointe 142 présente une forme en étoile, par exemple à quatre branches, la pointe étant alors cruciforme. En dessous de chaque compartiment 105 est positionné un tube de type Eppendorf 125 retenu en position par une étagère du portique 130. Les figures 3 et 4 illustrent les positions respectives successives du piston 140 et du poinçon 141 au cours de la deuxième phase du procédé. A gauche de chacune de ces figures 3 et 4, le piston 140 et le poinçon 141 sont pratiquement intégralement en dehors du compartiment 106 et la partie supérieure du poinçon 141 dépasse verticalement au dessus du piston 140. Puis, par application d'une rotation, on fait passer le poinçon d'une position de sécurité dans laquelle le poinçon 141 ne peut pas coulisser longitudinalement à l'intérieur d'un piston 140 du fait d'une butée mécanique, à une position d'activation dans laquelle le poinçon peut coulisser longitudinalement à l'intérieur du piston 140. Ensuite, on applique une force verticale vers le bas sur le sommet du poinçon 141, on fait descendre la pointe 142 de ce poinçon 141 dans le corps du compartiment 106, vers le filtre 115. En poursuivant cette descente, la pointe 142 perce d'abord le filtre 115 puis la membrane 120 jusqu'à pénétrer légèrement dans le tube 125. Le poinçon 141 est alors maintenu en position par contact sur l'ouverture inférieure du compartiment 105. Enfin, comme représenté à droite des figures 3 et 4, en maintenant en place le poinçon 141, on applique une force vers le bas sur le piston 140 afin qu'il repousse le contenu du compartiment 105 vers le tube 125, par l'intermédiaire du trou formé dans le filtre 115 et dans la membrane 120 par la pointe du poinçon 142. Les tubes de type Eppendorf 125 sont ensuite retirés du support inférieur 131, par retrait, vers le haut du portique 130, des compartiments 105 et de la membrane 120, pour analyse du matériel génétique, notamment l'ADN ou l'ARN des cellules d'intérêt, recueillis dans ces tubes 125, de manière connue en soi.

La platine 110, le portoir 133, le portique 130 et le support 131 sont réutilisables. Dans le deuxième mode de réalisation, illustré en regard des figures 1, 2, 6 et 7, un support 131 du portique 130 est remplacé par un support 132 présentant huit ouvertures au lieu de quatre. Les quatre tubes de type Eppendorf 125 sont remplacés par une barrette de huit tubes de type Eppendorf 126 de capacité inférieure, typiquement de 0.25 ml. Au lieu de 1,5 ml. Ces tubes de type Eppendorf sont adaptés à un autre mode de récupération de matériel cellulaire permettant d'extraire le matériel génétique directement sur le filtre mais dans un plus petit volume. Un tel volume peut alors être contenu dans des tubes de type Eppendorf directement adaptés à un appareil de RTPCR (acronyme de reverse transcription polymerase chain reaction pour transcription reverse et réaction en chaîne à la polymerase) en temps réel. On note que, lors de l'utilisation de huit tubes de type Eppendorf, quatre tubes servent à recueillir du matériel génétique et quatre tubes servent à réaliser des témoins, positifs ou négatifs. Comme on l'observe en figure 9, le procédé objet de la présente invention comporte d'abord, de manière connue, une étape 200 de prélèvement d'un échantillon de liquide à analyser, par exemple de sang auquel on applique, éventuellement, une dilution ou une filtration. Au cours d'une étape 205, on applique un tampon de fixation sans formaldéhyde afin de fixer, c'est-à-dire durcir, spécifiquement les cellules particulières recherchées, sans altérer leur matériel génétique. Par exemple, ce tampon de fixation est composé de PBS , un tampon de phosphate, de saponine pour lyser les globules rouges de BSA, sérum albumine bovine pour préserver la morphologie des cellules de l'ETDA chélateur de calcium, de NaOH pour ajuster le pH à 7,2 et de RCL2, un fixateur de cellules n'altérant pas leur matériel génétique. On note que le formaldéhyde n'est pas utilisé car il induit des cassures dans le matériel génétique.

Au cours d'une étape 210, on place le liquide résultant de l'étape 205 dans un compartiment 105 qui se termine par un filtre dont les micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des cellules recherchées et celui des autres cellules de l'échantillon de liquide. En variante, on effectue la fixation de l'étape 205 à l'intérieur du compartiment 105, après l'étape 210. Au cours d'une étape 215, on applique une aspiration par dépression en dessous du filtre. Le principal du liquide ainsi que les cellules de diamètre inférieur à celui des pores du filtre 115 traversent alors le filtre 115. En revanche, les cellules recherchées de diamètre inférieur à celui des pores du filtre 115 sont retenues au dessus du filtre 115, dans le compartiment 105. Au cours d'une étape 220, on retire les compartiments de la platine 110, on retire les embouts 117 des compartiments 105 et on isole ce contenu restant dans le compartiment 105 en en bouchant l'ouverture inférieure par une barrette-bouchon recouverte, dans sa partie inférieure d'une membrane adhésive 120. Au cours d'une étape 225, les compartiments 105, associés d'une part à la barrette de bouchons 120 et à la barrette 116, sont insérés dans le portoir 133, la barrette 116 étant maintenue par ce portoir 133. Au cours d'une étape 230, on lyse les cellules retenues sur le filtre, selon des techniques connues. A cet effet, après l'addition des réactifs pour la lyse des membranes cellulaires des cellules recherchées, le portoir 133, maintenant les compartiments 105 verticaux, est maintenu dans une étuve pendant une durée connue. Après la sortie de l'étuve, au cours d'une étape 232, on retire du portoir 133, la barrette 116, les compartiments 105 et la barrette de bouchons 120 et on les place sur le portique 130. Au cours d'une étape 235, on place chaque compartiment 105 au dessus d'un tube du type Eppendorf 125, ou 126 en positionnant ce tube sur le support inférieur, 131 ou 132 respectivement, puis on positionne le portique 130 avec la barrette 116, les compartiments 105 et la barrette de bouchons 120 sur la partie inférieure 131, ou 132, respectivement. Au cours d'une étape 240, par l'ouverture supérieure 106 de chaque compartiment 105, est inséré un piston 140 muni d'un poinçon axial central 141 mobile par rapport au piston 140 et se finissant, à l'intérieur du compartiment 105, par une pointe 142. Préférentiellement, en coupe transversale, cette pointe 142 présente une forme en étoile, par exemple à quatre branches, la pointe étant alors cruciforme. Au cours d'une étape 245, on tourne le poinçon pour le sortir de sa position de sécurité. Puis, on applique une pression sur la partie haute du poinçon 141 pour le faire descendre le long de l'axe longitudinal du compartiment 105, en étant guidé par le piston 140. Au cours de ce déplacement longitudinal, la pointe 142 du poinçon 141 perfore, successivement, le filtre 115 et le bouchon ou la membrane adhésive 120. Au cours d'une étape 250, on applique une pression sur le reste du piston 140 pour que le contenu restant du compartiment 105 passe à travers le filtre 115 et le bouchon ou la membrane 120, et atteigne le tube de type Eppendorf, par l'ouverture entourant la pointe 142 du poinçon 141. Ainsi, le matériel génétique des cellules particulières est extrait sans détérioration à travers la perforation du filtre.

Au cours d'une étape 255, le support, 131 ou 132, et les tubes de type Eppendorf, 125 ou 126, sont retirés après retrait, vers le haut du portique 130, des compartiments 105 et de la membrane 120. Au cours d'une étape 265, on effectue une analyse du matériel génétique, notamment l'ADN et l'ARN des cellules recherchées, recueilli dans 20 ces tubes 125 ou 126, de manière connue en soi. Comme on le comprend à la lecture de la description, le procédé et le dispositif objets de la présente invention permettent de recueillir dans des conditions compatibles avec des examens de laboratoire de routine, une grande proportion du matériel génétique des cellules considérées, en bon état, 25 même si l'échantillon ne comporte qu'une seule cellule recherchée.

Claims

REVENDICATIONS

1 - Procédé pour recueillir du matériel cellulaire de cellules particulières présentes dans un liquide, caractérisé en ce qu'il comporte : - une étape (210) d'insertion du liquide dans un compartiment (105) par l'intermédiaire d'une ouverture supérieure (106) du compartiment, ledit compartiment présentant une ouverture inférieure (107), entre les deux ouvertures étant positionné un filtre (115) dont les micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - une étape (215) de filtration au cours de laquelle le principal du liquide et desdites autres cellules passe à travers le filtre, - une étape (230) de lyse des cellules retenues sur le filtre et - une étape (245, 250) de récupération de matériel cellulaire des cellules lysées, sur le filtre.

2 û Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte, préliminairement à l'étape (215) de filtration, une étape (205) d'application d'un tampon de fixation sans formaldéhyde au liquide contenant les cellules particulières.

3 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que, au cours de l'étape (210) d'insertion, le compartiment (105) présente la forme générale d'une seringue dans laquelle le filtre (115) est positionné entre les deux ouvertures.

4 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que, au cours de l'étape (215) de filtration, on applique une aspiration par dépression en dessous du filtre (115).

5 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que, à la suite de l'étape (215) de filtration et avant l'étape (245, 250) de récupération, on place le compartiment sur un tube (125, 126) du type Eppendorf.

6 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que, avant l'étape (245, 250) de récupération, on positionne, dans l'ouverturesupérieure (106) du compartiment (105), un piston (140) comportant un poinçon (141) central mobile à l'intérieur du piston.

7 ù Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que, le poinçon (141) central mobile présente une extrémité inférieure (142) pointue.

8 ù Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que, l'extrémité inférieure (142) pointue du poinçon (141) central présente une forme en étoile.

9 ù Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que, au cours de l'étape (245, 250) de récupération, on applique une pression verticale vers le bas sur la partie haute du poinçon (141) pour perforer le filtre avec la pointe (142) du poinçon.

10 ù Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9, caractérisé en ce que, le piston (140) comportant un moyen de blocage longitudinal du poinçon (141), au cours de l'étape (245, 250) de récupération, on fait pivoter le poinçon à l'intérieur du piston pour le dégager dudit moyen de blocage, avant d'appliquer une pression verticale sur sa partie haute.

11 ù Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, caractérisé en ce que, au cours de l'étape (245, 250) de récupération, on applique une pression sur le piston (141) pour faire passer le contenu restant du compartiment (105) dans un tube (125, 126) placé en dessous du compartiment.

12 ù Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que, à la suite de l'étape (215) de filtration et avant l'étape (245, 250) de récupération, on isole le contenu du compartiment (105) en en bouchant l'ouverture inférieure (107) par une membrane.

13 ù Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que ladite membrane est positionnée sous une barrette (120) entourant l'ouverture inférieure (107) de chaque compartiment (105).

14 ù Procédé selon l'une quelconque des revendications 12 ou 13, caractérisé en ce que ladite membrane est une membrane adhésive.

15 ù Procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 11 et l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisé en ce que, au cours de l'étape (245, 250) de récupération, on applique une pression sur la partie hautedu poinçon (141) pour perforer la membrane isolant le contenu du compartiment (105).

16 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que le filtre (115) est réalisé en polycarbonate traité avec un traitement de surface hydrophile.

17 û Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, caractérisé en ce que le filtre (115) possède un diamètre de pores centré sur 7,5 pm.

18 - Dispositif pour recueillir du matériel génétique de cellules particulières présentes dans un liquide, caractérisé en ce qu'il comporte : - un compartiment (105) comportant une ouverture supérieure (106) et une ouverture inférieure (107), entre les deux ouvertures étant positionné un filtre (115) dont les micropores ont un diamètre intermédiaire entre celui des dites cellules particulières et celui d'autres cellules, - un moyen d'insertion du liquide dans ledit compartiment par l'intermédiaire de l'ouverture supérieure, - un moyen (111, 112) de filtration faisant passer le principal du liquide et desdites autres cellules à travers le filtre, - un moyen de lyse des cellules retenues sur le filtre et - un moyen de récupération de matériel cellulaire des cellules lysées, sur le filtre.