FR2915382A1 - Use of an active ingredient obtained from hydrolyzed maize, in a cosmetic composition or for preparing a pharmaceutical composition comprising the active ingredient or composition to activate cytochrome c and stimulate mitochondria - Google Patents
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Abstract
Description
-1- La présente invention se situe dans le domaine cosmétique etThe present invention is in the field of cosmetics and
pharmaceutique, et plus particulièrement dans le domaine de la dermatologie. La présente invention concerne l'utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace de principe actif issu du maïs (Zea mays L.) ; le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à activer le cytochrome c. De préférence, le principe actif provient de l'hydrolyse de protéines de maïs et contient principalement des polypeptides ou des peptides. Il peut être utilisé seul ou en association avec au moins un autre principe actif. L'invention est également relative à l'utilisation d'une composition cosmétique destinée à stimuler les fonctions des mitochondries et à augmenter le niveau énergétique cellulaire. L'invention porte encore sur un procédé de traitement cosmétique destiné à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané. Le principe actif, activateur du cytochrome c, peut également être utilisé pour préparer des compositions pharmaceutiques destinées à prévenir ou lutter contre les pathologies liées à des dysfonctionnements mitochondriaux ; par exemple, certaines dégénérescences neuromusculaires ou cardiaques, le diabète de type II ou encore certaines pathologies du vieillissement. pharmaceutical, and more particularly in the field of dermatology. The present invention relates to the use, in a cosmetic composition or for the preparation of a pharmaceutical composition, of an effective amount of active principle derived from corn (Zea mays L.); the active ingredient, or the composition containing it, being intended to activate cytochrome c. Preferably, the active ingredient is derived from the hydrolysis of maize proteins and contains mainly polypeptides or peptides. It can be used alone or in combination with at least one other active ingredient. The invention also relates to the use of a cosmetic composition intended to stimulate the functions of mitochondria and to increase the cellular energy level. The invention also relates to a cosmetic treatment method intended to protect the skin and the integuments from external aggressions and to fight against skin aging. The active ingredient, activator of cytochrome c, can also be used to prepare pharmaceutical compositions intended to prevent or fight against pathologies related to mitochondrial dysfunctions; for example, certain neuromuscular or cardiac degenerations, type II diabetes or certain pathologies of aging.
Le terme phanères selon l'invention englobe l'ensemble des annexes kératiniques présentes à la surface du corps, en particulier les poils, les cils, les sourcils, les ongles et les cheveux. The term dander according to the invention encompasses all the keratinous appendages present on the surface of the body, in particular the hairs, the eyelashes, the eyebrows, the nails and the hair.
La peau est un organe vital qui recouvre toute la surface du corps et assure des fonctions protectrices, sensitives, immunitaires, métaboliques ou encore thermorégulatrices. La peau, comme les autres organes, est soumise au vieillissement. Or, un des mécanismes majeurs impliqués dans les processus du vieillissement est l'accumulation de dommages oxydatifs dans des molécules essentielles telles que les lipides membranaires, les protéines, l'ADN et tout particulièrement l'ADN mitochondrial (ADNmt). The skin is a vital organ that covers the entire surface of the body and provides protective, sensitive, immune, metabolic or thermoregulatory functions. The skin, like other organs, is subject to aging. However, one of the major mechanisms involved in aging processes is the accumulation of oxidative damage in essential molecules such as membrane lipids, proteins, DNA and especially mitochondrial DNA (mtDNA).
Les dommages oxydatifs sont provoqués par les radicaux libres, des espèces chimiquement instables et très réactionnelles générées par le métabolisme intracellulaire ou les agressions extérieures. Parmi ces agressions extérieures, on peut citer : les rayonnements UV, les toxines, les polluants atmosphériques, les oxydants alimentaires. -2- Dans la peau, on observe un vieillissement prématuré survenant dans les zones exposées aux rayonnements, caractérisé par des phénomènes d'altérations des macromolécules (péroxydation lipidique, carbonylation des protéines) touchant en particulier l'élastine, le collagène ou la fibronectine. On a également pu montrer un déclin progressif des fonctions mitochondriales avec l'âge, probablement lié à l'accumulation de mutations sur l'ADNmt (K. Singh, Ann. N.Y. Acad. Sei. 1019, 2004). Une des conséquences importantes de l'accumulation des dommages oxydatifs est une réduction de la capacité de la cellule à produire de l'ATP (Porteous et al., Eur J Biochem 1998, 257(1):192-201). Ainsi, le phénomène du vieillissement cellulaire est en relation avec les dommages oxydatifs que subit la cellule mais aussi avec le processus de production d'énergie nécessaire à la cellule pour survivre. L'organisme possède des mécanismes de défense capables de piéger ou de transformer les radicaux libres (enzymes, glutathion, vitamines A et E, coenzyme Q10, etc.). Cependant, ces systèmes de défenses antioxydants s'avèrent souvent insuffisants devant les nombreux stress et agressions extérieures auxquels sont soumis les organismes et la peau en particulier. Dans ce contexte, les propriétés particulières du cytochrome c apparaissent comme particulièrement intéressantes : Le cytochrome c est une petite protéine soluble de 15 kDa qui joue un rôle essentiel dans la fonction mitochondriale et dans la survie cellulaire. Le cytochrome c est une molécule hautement conservée chez la plupart des eucaryotes ; on la trouve dans les mitochondries des plantes, des animaux et de nombreux organismes unicellulaires. Le cytochrome c présente une structure protéique organisée autour d'une porphyrine, constituée de quatre noyaux pyrrol, eux-mêmes liés à un atome de fer. Oxidative damage is caused by free radicals, chemically unstable and highly reactive species generated by intracellular metabolism or external aggression. These external aggressions include: UV radiation, toxins, air pollutants, food oxidants. In the skin, there is premature aging occurring in the areas exposed to radiation, characterized by alterations phenomena macromolecules (lipid peroxidation, carbonylation of proteins) particularly affecting elastin, collagen or fibronectin. It has also been possible to show a progressive decline in mitochondrial function with age, probably related to the accumulation of mutations on mtDNA (Singh, K., N.Y. Acad Sci 1019, 2004). One of the important consequences of the accumulation of oxidative damage is a reduction in the ability of the cell to produce ATP (Porteous et al., Eur J Biochem 1998, 257 (1): 192-201). Thus, the phenomenon of cellular aging is related to the oxidative damage that the cell undergoes but also to the process of energy production necessary for the cell to survive. The body has defense mechanisms capable of trapping or transforming free radicals (enzymes, glutathione, vitamins A and E, coenzyme Q10, etc.). However, these systems of antioxidant defenses often prove insufficient in the face of the many stresses and external aggressions to which organisms and the skin in particular are subjected. In this context, the particular properties of cytochrome c appear to be particularly interesting: Cytochrome c is a small soluble protein of 15 kDa that plays an essential role in mitochondrial function and in cell survival. Cytochrome c is a highly conserved molecule in most eukaryotes; it is found in the mitochondria of plants, animals and many unicellular organisms. Cytochrome c has a protein structure organized around a porphyrin, consisting of four pyrrol nuclei, themselves linked to an iron atom.
Le rôle principal du cytochrome c est d'assurer le transfert d'électrons, grâce au changement de valence de l'atome de fer. Le cytochrome c qui est soluble, transporte ainsi les électrons depuis le complexe III (coenzyme QH2-cytochrome c réductase) jusqu'au complexe IV (cytochrome oxydase). Les électrons, qui sont le substrat de la cytochrome oxydase, sont alors transférés par l'enzyme vers l'oxygène. The main role of cytochrome c is to ensure the transfer of electrons, thanks to the change of valence of the iron atom. Cytochrome c, which is soluble, transports electrons from complex III (coenzyme QH2-cytochrome c reductase) to complex IV (cytochrome oxidase). The electrons, which are the substrate for cytochrome oxidase, are then transferred by the enzyme to oxygen.
La recherche de composés pouvant stimuler les mitochondries et augmenter le niveau énergétique cellulaire afin de prévenir ou de lutter contre les signes du vieillissement cutané, ou les dommages causés par les agressions extérieures, telles que les -3- rayonnements UV, les radiations, ou les expositions à des toxines ou à des polluants, est une préoccupation importante de la recherche médicale et de la cosmétique. A cet égard, il a été proposé des solutions telles que l'apport de substances impliquées dans le métabolisme énergétique, et plus particulièrement d'intermédiaires ou de cofacteurs du cycle de Krebs tels que le fumarate, le L-malate, l'acétyl CoA (WO 02064129) ou encore le traitement de la peau par des substances capables de diminuer les radicaux libres, telles que la vitamine C (US 2004/0086526) ou la L-ergothionéine (WO 9836748). Mais à la connaissance de la demanderesse, aucune composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant des composés de nature peptidique, issus du maïs, capables d'activer le cytochrome c n'a encore été décrite. The search for compounds that can stimulate mitochondria and increase the cellular energy level in order to prevent or fight against the signs of skin aging, or the damage caused by external aggressions, such as UV-radiation, radiation, or exposures to toxins or pollutants, is a major concern of medical research and cosmetics. In this regard, it has been proposed solutions such as the supply of substances involved in energy metabolism, and more particularly intermediates or cofactors of the Krebs cycle such as fumarate, L-malate, acetyl CoA (WO 02064129) or the treatment of the skin with substances capable of reducing free radicals, such as vitamin C (US 2004/0086526) or L-ergothioneine (WO 9836748). But to the knowledge of the applicant, no cosmetic or pharmaceutical composition comprising peptide compounds derived from corn, capable of activating cytochrome c has yet been described.
La présente invention a pour principal objectif l'utilisation d'un principe actif issu de l'hydrolyse du maïs, capable de protéger la peau des agressions extérieures et de lutter contre le vieillissement cutané. Ledit principe actif pourra être utilisé seul ou en association avec au moins un autre principe actif. Les inventeurs ont en effet mis en évidence une activité thérapeutique, et plus particulièrement dermatologique et cosmétique, de principes actifs de nature peptidique issus de l'hydrolyse du maïs, capables d'activer le cytochrome c. Il a notamment été mis en évidence que ces polypeptides ou ces peptides, qui constituent le principe actif, lorsqu'ils sont appliqués sur la peau, stimulent de façon importante les fonctions mitochondriales. Cela a, entre autre, été démontré par une augmentation de l'expression du cytochrome c, une augmentation de l'activité de la cytochrome oxydase et une augmentation de la synthèse d'ATP. Ce nouveau principe actif stimulateur des mitochondries, et plus généralement capable de protéger la peau des agressions extérieures permet ainsi d'ouvrir de nouvelles perspectives thérapeutiques et cosmétiques. On entend par principe actif capable de protéger la peau des agressions extérieures , toute substance d'origine végétale, et plus particulièrement issue du maïs (Zea mays L.), capable de présenter des propriétés protectrices ou de diminuer l'apoptose dans des cellules ou des tissus soumis à un stress d'origine physico-chimique ou environnementale. On entend par principe actif capable d'activer le cytochrome c , toute substance d'origine végétale, et plus particulièrement issue du maïs (Zea mays L.), capable d'augmenter l'expression du cytochrome c, soit par l'activation de la synthèse protéique -4- (par modulation directe ou indirecte de l'expression génique du cytochrome c), soit par l'augmentation de l'activité biologique du cytochrome c, soit par d'autres processus biologiques tels que la stabilisation de la protéine cytochrome c ou encore la stabilisation des transcrits d'ARN messager. The present invention has for main objective the use of an active ingredient derived from the hydrolysis of corn, able to protect the skin from external aggressions and to fight against skin aging. Said active ingredient may be used alone or in combination with at least one other active ingredient. The inventors have in fact demonstrated a therapeutic activity, and more particularly a dermatological and cosmetic activity, of active principles of a peptide nature resulting from the hydrolysis of corn, capable of activating cytochrome c. In particular, it has been demonstrated that these polypeptides or peptides, which constitute the active principle, when applied to the skin, significantly stimulate mitochondrial functions. This has, among other things, been demonstrated by an increase in the expression of cytochrome c, an increase in cytochrome oxidase activity and an increase in ATP synthesis. This new stimulating active principle of the mitochondria, and more generally able to protect the skin from external aggressions thus opens up new therapeutic and cosmetic perspectives. The term "active principle" capable of protecting the skin against external aggressions is understood to mean any substance of plant origin, and more particularly derived from corn (Zea mays L.), capable of exhibiting protective properties or of decreasing apoptosis in cells or tissues subjected to stress of physicochemical or environmental origin. The term "active ingredient capable of activating cytochrome c" means any substance of plant origin, and more particularly derived from corn (Zea mays L.), capable of increasing the expression of cytochrome c, either by the activation of protein synthesis -4- (by direct or indirect modulation of cytochrome c gene expression), either by increasing the biological activity of cytochrome c, or by other biological processes such as the stabilization of the protein cytochrome c or the stabilization of messenger RNA transcripts.
On entend par principe actif capable de stimuler les fonctions des mitochondries , toute substance d'origine végétale, et plus particulièrement issue du maïs (Zea mays L.), capable d'augmenter l'expression ou l'activité des principales molécules actives présentes dans les mitochondries, et plus généralement capables de d'augmenter les principales fonctions énergétiques de la mitochondries ; à savoir, la chaîne de phosphorylation oxydative et la synthèse d'ATP. Préférentiellement, le principe actif capable d'activer le cytochrome c selon l'invention est un extrait de nature peptidique et provient de l'hydrolyse des protéines du maïs (Zea mays L.). On entend par de nature peptidique , un mélange de composés majoritairement représentés par des peptides ou des polypeptides. Le terme peptide désigne un enchaînement de deux ou plusieurs acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques ou par des liaisons peptidiques modifiées ; le terme polypeptide désignant un peptide de taille plus importante. Par l'expression biologiquement actif , on entend qui possède une activité in vivo ou in vitro caractéristique de l'activité du principe actif selon l'invention . Le terme "hydrolysat ou issu de l'hydrolyse" désigne toute substance ou mélange de substances, ou préparation isolée, obtenue après hydrolyse de matière végétale. The term active ingredient capable of stimulating the functions of mitochondria, any substance of plant origin, and more particularly from corn (Zea mays L.), capable of increasing the expression or activity of the main active molecules present in the mitochondria, and more generally capable of increasing the main energy functions of the mitochondria; that is, the oxidative phosphorylation chain and ATP synthesis. Preferably, the active ingredient capable of activating cytochrome c according to the invention is an extract of a peptide nature and comes from the hydrolysis of maize proteins (Zea mays L.). By peptide nature is meant a mixture of compounds predominantly represented by peptides or polypeptides. The term peptide denotes a sequence of two or more amino acids linked together by peptide bonds or by modified peptide bonds; the term polypeptide designating a peptide of larger size. By biologically active expression is meant that has an activity in vivo or in vitro characteristic of the activity of the active ingredient according to the invention. The term "hydrolyzate or derived from hydrolysis" refers to any substance or mixture of substances, or isolated preparation, obtained after hydrolysis of plant material.
Le principe actif selon l'invention peut être obtenu par extraction de protéines d'origine végétale, suivie d'une hydrolyse contrôlée qui libère des fragments peptidiques biologiquement actifs. De très nombreuses protéines trouvées dans les plantes sont susceptibles de contenir des fragments peptidiques biologiquement actifs au sein de leur structure. L'hydrolyse ménagée permet de dégager ces fragments peptidiques. Il est possible, mais non nécessaire pour réaliser l'invention, d'extraire soit les protéines concernées d'abord et de les hydrolyser ensuite, soit d'effectuer l'hydrolyse d'abord sur un extrait brut et de purifier les fragments peptidiques ensuite. Il est également possible d'utiliser certains extraits hydrolysés sans en purifier les fragments peptidiques correspondant aux peptides -5- biologiquement actifs selon l'invention, mais en s'assurant toutefois de la présence desdits fragments par des moyens analytiques appropriés. Pour réaliser l'extraction, on peut utiliser la plante entière, ou une partie spécifique de la plante (feuille, grain, etc.). The active ingredient according to the invention can be obtained by extraction of proteins of plant origin, followed by controlled hydrolysis which releases biologically active peptide fragments. Many proteins found in plants are likely to contain biologically active peptide fragments within their structure. The controlled hydrolysis makes it possible to release these peptide fragments. It is possible, but not necessary to carry out the invention, to extract either the proteins concerned first and then hydrolyze them, or to carry out the hydrolysis first on a crude extract and then to purify the peptide fragments. . It is also possible to use certain hydrolysed extracts without purifying the peptide fragments corresponding to the biologically active peptides according to the invention, but nevertheless ensuring the presence of said fragments by appropriate analytical means. To carry out the extraction, one can use the whole plant, or a specific part of the plant (leaf, grain, etc.).
Plus particulièrement selon l'invention, on utilise une des nombreuses plantes de la famille des poacées (poaceae), du genre Zea et préférentiellement l'espèce Zea mays L. Le maïs (Zea mays L.) est une plante tropicale herbacée annuelle de la famille des Poacées, largement cultivée comme céréale pour ses grains riches en amidon. Selon l'invention, le matériel végétal utilisé sera le grain et préférentiellement le grain débarrassé de son enveloppe par une étape de décorticage, ou le tourteau. Dans une première étape, la plante est broyée à l'aide d'un broyeur à plantes. La poudre ainsi obtenue peut ultérieurement être "délipidée" à l'aide d'un solvant organique classique (comme par exemple un alcool, l'hexane ou de l'acétone). On réalise ensuite l'extraction des protéines cle la plante suivant le procédé classique (Osborne, 1924) modifié le broyat de plante est mis en suspension dans une solution alcaline contenant un produit adsorbant de type polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) insoluble (0.01 -20 %) ; en effet il a été observé que les opérations d'hydrolyses et de purifications ultérieures étaient facilitées par ce moyen. La concentration des substances de type phénoliques interagissant avec les protéines se trouve ainsi réduite. More particularly according to the invention, one of the many plants of the family Poaceae (poaceae), the genus Zea and preferably the species Zea mays L. Corn (Zea mays L.) is an annual herbaceous tropical plant of the Poaceae family, widely grown as a cereal for its starch-rich grains. According to the invention, the plant material used will be the grain and preferentially the grain removed from its envelope by a dehulling step, or the cake. In a first step, the plant is ground using a plant grinder. The powder thus obtained may subsequently be "delipidated" with the aid of a conventional organic solvent (for example an alcohol, hexane or acetone). The plant proteins are then extracted according to the conventional method (Osborne, 1924). The plant mash is suspended in an alkaline solution containing an insoluble polyvinylpolypyrrolidone adsorbent product (PVPP) (0.01-20%). ; in fact, it has been observed that the hydrolysis and subsequent purification operations are facilitated by this means. The concentration of phenolic-type substances interacting with the proteins is thus reduced.
La fraction soluble est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration, cette solution brute constituant alors une première forme de l'extrait contenant les protéines, les glucides et éventuellement des lipides. Les protéines sont ensuite précipitées en faisant varier la force ionique en acidifiant le milieu, ce qui permet d'éliminer les composants solubles et les acides nucléiques. The soluble fraction is collected after centrifugation and filtration steps, this crude solution then constituting a first form of the extract containing the proteins, carbohydrates and optionally lipids. The proteins are then precipitated by varying the ionic strength by acidifying the medium, which eliminates soluble components and nucleic acids.
Le précipité est ensuite lavé à l'aide d'un solvant organique tel que, par exemple, l'éthanol ou le méthanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide. Le précipité riche en protéines est remis en solution dans l'eau ou un autre solvant et constitue alors une forme plus purifiée de l'hydrolysat. L'extraction peut également être réalisée en milieu neutre ou acide toujours en présence de polyvinylpolypyrrolidone. Après une étape de filtration, l'étape de précipitation s'effectue alors à l'aide d'un agent classique de précipitation tel que les sels (chlorure de sodium, sulfate d'ammonium) ou un solvant organique (alcool, acétone). Le -6-précipité obtenu peut être séparé des agents de précipitation par dialyse après remise en solution dans de l'eau ou un autre solvant. La fraction protéique isolée selon l'invention est ensuite hydrolysée dans des conditions ménagées pour générer des polypeptides et des peptides solubles. L'hydrolyse se définit comme étant une réaction chimique impliquant le clivage d'une molécule par de l'eau, cette réaction pouvant se faire en milieu neutre, acide ou basique. Selon l'invention, l'hydrolyse est réalisée par voie chimique et/ou de façon avantageuse par des enzymes protéolytiques. On peut alors citer l'utilisation des endoprotéases d'origine végétale (papaïne, bromelaïne, ficine) et de micro-organismes (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, etc.). Pour les mêmes raisons que précédemment, lors de cette étape d'hydrolyse ménagée, une quantité de polyvinylpolypyrrolidone est additionnée au milieu réactionnel. Après filtration la solution obtenue constitue l'hydrolysat actif. L'hydrolysat actif peut être encore purifié afin de sélectionner les poids moléculaires et la nature des peptides générés. Le fractionnement peut s'effectuer avantageusement par ultrafiltration et/ ou par une méthode de type chromatographique. L'une quelconque des formes plus ou moins purifiées de l'hydrolysat est alors solubilisée dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis stérilisée par ultrafiltration. The precipitate is then washed with an organic solvent such as, for example, ethanol or methanol and the solvent is evaporated by drying in vacuo. The protein-rich precipitate is dissolved in water or other solvent and is then a more purified form of the hydrolyzate. The extraction can also be carried out in neutral or acidic medium always in the presence of polyvinylpolypyrrolidone. After a filtration step, the precipitation step is then carried out using a conventional precipitation agent such as salts (sodium chloride, ammonium sulfate) or an organic solvent (alcohol, acetone). The precipitate obtained can be separated from the precipitating agents by dialysis after being redissolved in water or another solvent. The isolated protein fraction according to the invention is then hydrolyzed under mild conditions to generate polypeptides and soluble peptides. Hydrolysis is defined as a chemical reaction involving the cleavage of a molecule by water, this reaction being possible in a neutral, acidic or basic medium. According to the invention, the hydrolysis is carried out chemically and / or advantageously by proteolytic enzymes. We can then mention the use of endoproteases of plant origin (papain, bromelain, ficin) and microorganisms (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, etc.). For the same reasons as above, during this controlled hydrolysis step, an amount of polyvinylpolypyrrolidone is added to the reaction medium. After filtration, the solution obtained constitutes the active hydrolyzate. The active hydrolyzate can be further purified in order to select the molecular weights and the nature of the peptides generated. The fractionation can advantageously be carried out by ultrafiltration and / or by a chromatographic type method. Any of the more or less purified forms of the hydrolyzate is then solubilized in water or in any mixture containing water, and then sterilized by ultrafiltration.
L'hydrolysat végétal obtenu selon l'invention est analysé qualitativement et quantitativement pour ses caractéristiques physico-chimiques et sa teneur en composés de nature protéique et peptidique. On entend par composés de nature peptidique, les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans le mélange. Les peptides, acides aminés et fragments de protéines sont dosés selon les techniques classiques, bien connues de l'homme du métier. Ainsi, selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'hydrolysat végétal actif a un pH compris entre 4 et 7, et préférentiellement, entre 5 et 6, un extrait sec titrant entre 1 et 8 g/1, et de manière préférée entre 2 et 5 g/l, sa teneur en composés de nature peptidique est comprise entre 0,1 et 5g/1, et préférentiellement entre 0,5 et 2 g/1 et sa teneur en sucres est de 0,5 à 2,5 g/l. The vegetable hydrolyzate obtained according to the invention is analyzed qualitatively and quantitatively for its physico-chemical characteristics and its content of protein and peptide compounds. Peptide-like compounds are understood to mean protein fragments, peptides and free amino acids present in the mixture. The peptides, amino acids and protein fragments are determined according to conventional techniques, which are well known to those skilled in the art. Thus, according to an advantageous embodiment of the invention, the active plant hydrolyzate has a pH of between 4 and 7, and preferably between 5 and 6, a solids content of between 1 and 8 g / l, and preferred between 2 and 5 g / l, its content of peptide compounds is between 0.1 and 5g / 1, and preferably between 0.5 and 2 g / 1 and its sugar content is 0.5 to 2 , 5 g / l.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou -7- pharmaceutiquement acceptables, classiquement utilisés par l'homme de métier, comme l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques, la vaseline, une huile végétale ou tout mélange de ces solvants. According to an advantageous embodiment of the invention, the active ingredient according to the invention is first solubilized in one or more cosmetically or pharmaceutically acceptable solvents, conventionally used by those skilled in the art, such as water, glycerol or , ethanol, propylene glycol, butylene glycol, dipropylene glycol, ethoxylated or propoxylated diglycols, cyclic polyols, petroleum jelly, a vegetable oil or any mixture of these solvents.
Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif selon l'invention est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisé dans, ou fixé sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. La composition utilisable selon l'invention peut en particulier consister en une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, un après-shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une lotion restructurante pour les cheveux, un masque, etc. La composition cosmétique selon l'invention peut être utilisée notamment dans les traitements mettant en oeuvre une application qui est suivie ou non suivie d'un rinçage, ou encore sous forme de shampooing. Elle peut également se présenter sous forme de teinture ou de mascara à appliquer au pinceau ou au peigne, en particulier sur les cils, les sourcils ou les cheveux. According to yet another advantageous embodiment of the invention, the active principle according to the invention is previously solubilized in a cosmetic or pharmaceutical vector such as liposomes or adsorbed on powdery organic polymers, mineral supports such as talcs and bentonites, and more generally solubilized in, or attached to, any cosmetically or pharmaceutically acceptable carrier. The composition that may be used according to the invention may in particular consist of a composition for hair care, and in particular a shampoo, a conditioner, a setting lotion, a treatment lotion, a cream or a styling gel, a restructuring lotion for hair, a mask, etc. The cosmetic composition according to the invention can be used in particular in treatments using an application that is followed or not followed by rinsing, or in the form of shampoo. It can also be in the form of dye or mascara to be applied with a brush or a comb, in particular on eyelashes, eyebrows or hair.
Il est bien entendu que le principe actif selon l'invention peut être utilisé seul ou bien en association avec au moins un autre principe actif, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique et/ou dermatologique. Les compositions selon l'invention pourront être appliquées par toute voie appropriée, notamment orale, parentérale ou topique externe, et leur formulation sera adaptée par l'homme du métier, en particulier pour des compositions cosmétiques ou dermatologiques. Avantageusement, les compositions selon l'invention sont destinées à une administration par voie topique cutanée. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, et couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions pourront notamment être sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, ou eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions, gels, laits, lotions, sticks ou encore de poudres, adaptés à une application sur la peau, les lèvres et/ou les phanères. -8- Ces compositions comprennent les excipients nécessaires à leur formulation, tels que solvants, épaississants, diluants, tensioactifs, anti-oxydants, colorants, conservateurs, parfums. Avantageusement, les compositions utilisables selon l'invention contiennent en outre divers principes actifs destinés, notamment, à la prévention et/ou au traitement des désordres liés au photo-vieillissement. Ainsi, la composition selon l'invention peut associer, au principe actif selon l'invention, d'autres principes actifs favorisant son action. Par exemple, il peut être ajouté des principes actifs ayant une action anti-radicalaire ou antioxydante, choisis parmi la vitamine C, la vitamine E, le coenzyme Q10 et les extraits polyphénoliques de plantes. La composition selon l'invention peut encore associer, au principe actif selon l'invention, des principes actifs stimulant les synthèses des macromolécules dermiques (laminine, fibronectine, collagène), par exemple le peptide de collagène commercialisé sous le nom Collaxyl par la société Vincience. It is understood that the active ingredient according to the invention can be used alone or in combination with at least one other active ingredient, in a cosmetic composition or for the preparation of a pharmaceutical and / or dermatological composition. The compositions according to the invention may be applied by any appropriate route, in particular oral, parenteral or external topical, and their formulation will be adapted by those skilled in the art, in particular for cosmetic or dermatological compositions. Advantageously, the compositions according to the invention are intended for topical administration to the skin. These compositions must therefore contain a cosmetically and / or dermatologically acceptable medium, that is to say compatible with the skin and superficial body growths, and cover all cosmetic or dermatological forms. These compositions may especially be in the form of creams, oil-in-water or water-in-oil emulsions or multiple emulsions, solutions, suspensions, gels, milks, lotions, sticks or even powders, suitable for application on the skin. , lips and / or integuments. These compositions comprise the excipients necessary for their formulation, such as solvents, thickeners, diluents, surfactants, antioxidants, dyes, preservatives, perfumes. Advantageously, the compositions that can be used according to the invention also contain various active principles intended, in particular, for the prevention and / or treatment of disorders associated with photoaging. Thus, the composition according to the invention can associate, with the active principle according to the invention, other active ingredients promoting its action. For example, it may be added active ingredients having an anti-radical or antioxidant action, selected from vitamin C, vitamin E, coenzyme Q10 and polyphenolic extracts of plants. The composition according to the invention may also associate, with the active principle according to the invention, active principles stimulating the synthesis of dermal macromolecules (laminin, fibronectin, collagen), for example the collagen peptide sold under the name Collaxyl by the company Vincience .
La composition selon l'invention peut également associer, au principe actif selon l'invention, des principes actifs stimulant le métabolisme énergétique, comme le principe actif commercialisé sous la dénomination GP4CG par la société Vincience. Selon un autre aspect, la composition selon l'invention peut être une composition solaire, c'est-à-dire une composition aidant à la protection contre le rayonnement solaire. The composition according to the invention can also associate, with the active principle according to the invention, active principles stimulating the energy metabolism, such as the active ingredient marketed under the name GP4CG by Vincience. According to another aspect, the composition according to the invention may be a solar composition, that is to say a composition helping to protect against solar radiation.
Ainsi, il peut être avantageusement ajouté, à la composition selon l'invention, des actifs aidant à la protection solaire tels que, par exemple, des filtres solaires. Il est bien évident que l'invention s'adresse aux mammifères en général et plus particulièrement aux êtres humains. La quantité efficace de principe actif correspond à la quantité nécessaire afin d'obtenir le résultat recherché, à savoir : activer le cytochrome c, stimuler les mitochondries et augmenter le niveau énergétique cellulaire, et plus généralement, protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et lutter contre le vieillissement cutané Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le principe actif est présent dans les compositions de l'invention à une concentration comprise entre 0,0001 % à 20 % environ, et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,05 % et 5 % environ par rapport au poids total de la composition finale. Ces compositions pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ; d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou -9- émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions, ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les phanères. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d"une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif communément utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des actifs cosmétiques ou pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. Thus, it can be advantageously added to the composition according to the invention, assets assisting the sun protection such as, for example, sunscreens. It is obvious that the invention is directed to mammals in general and more particularly to humans. The effective amount of active ingredient corresponds to the amount necessary to obtain the desired result, namely: activate the cytochrome c, stimulate mitochondria and increase the cellular energy level, and more generally, protect the skin and integuments of external aggressions and fight against skin aging According to an advantageous embodiment of the invention, the active principle is present in the compositions of the invention at a concentration of between 0.0001% to 20% approximately, and preferably at a concentration between Approximately 0.05% and 5% relative to the total weight of the final composition. These compositions may especially be in the form of an aqueous solution, hydroalcoholic or oily; an oil-in-water, water-in-oil emulsion or multiple emulsions; they may also be in the form of creams, suspensions or powders, suitable for application to the skin, mucous membranes, lips and / or integuments. These compositions may be more or less fluid and have the appearance of a cream, lotion, milk, serum, ointment, gel, paste or paste. They may also be in solid form, such as a stick or applied to the skin in the form of an aerosol and may be used as a care product and / or as a make-up product for the skin. in addition, any additive commonly used in the field of application envisaged as well as the adjuvants necessary for their formulation, such as solvents, thickeners, diluents, antioxidants, dyes, sunscreens, organic agents, bronzers, pigments, fillers, preservatives, perfumes, odor absorbers, cosmetic or pharmaceutical active ingredients, essential oils, vitamins, essential fatty acids, surfactants, film-forming polymers, etc.
Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. In all cases, those skilled in the art will ensure that these adjuvants and their proportions are chosen so as not to adversely affect the desirable properties of the composition according to the invention. These adjuvants may, for example, correspond to 0.01 to 20% of the total weight of the composition. When the composition of the invention is an emulsion, the fatty phase may represent from 5 to 80% by weight and preferably from 5 to 50% by weight relative to the total weight of the composition. The emulsifiers and co-emulsifiers used in the composition will be chosen from those conventionally used in the field under consideration. For example, they can be used in a proportion ranging from 0.3 to 30% by weight, relative to the total weight of the composition.
Par ses activités particulières, le principe actif selon l'invention pourra être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique. En particulier, le principe actif selon l'invention pourra être utilisé avantageusement dans une composition cosmétique destinée à lutter de manière préventive et/ou curative contre les manifestations du vieillissement cutané et, plus spécifiquement, afin de lutter contre et/ou de prévenir le vieillissement photo-induit (photo-vieillissement). Par manifestations cutanées du vieillissement, on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau et des phanères dues au vieillissement comme, par exemple, les rides -10- et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, la peau terne et sans éclat ou les taches de pigmentation de la peau, la décoloration des cheveux ou les taches sur les ongles, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, toute dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux rayonnements ultraviolets (UV). Le principe actif selon l'invention, ou la composition le contenant, permettra de lutter, en particulier, contre la perte d'élasticité et de fermeté de la peau. Le principe actif selon l'invention permet de protéger la peau et les phanères contre tous types d'agressions extérieures. L'utilisation du principe actif, ou d'une composition le contenant, va permettre à la peau et aux phanères d'être protégés et de mieux résister aux stress environnementaux. On entend, par l'expression agression extérieure , les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. Par pollution, on entend aussi bien la pollution extérieure , due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution intérieure qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldehyde), ou bien encore la fumée de cigarette. Le principe actif selon l'invention peut être avantageusement utilisé dans une composition cosmétique ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, en tant qu'agent photo-protecteur et, plus particulièrement, en tant qu'agent photo-protecteur dit secondaire . On distingue, en effet, les agents photo-protecteurs primaires des agents photo-protecteurs secondaires. Les agents photo-protecteurs primaires sont des substances qui exercent un pouvoir physique : ils sont en mesure d'absorber les rayonnements UV et de les restituer sous forme de chaleur afin de protéger la peau. Les agents photo-protecteurs secondaires sont des substances qui ont généralement un effet biologique ; ce sont, par exemple, les agents capables de limiter les dommages causés à l'ADN et aux membranes par la pénétration des rayonnements UV dans la peau. By its particular activities, the active ingredient according to the invention can be used advantageously in a cosmetic composition or for the preparation of a pharmaceutical composition. In particular, the active ingredient according to the invention may advantageously be used in a cosmetic composition intended to fight in a preventive and / or curative manner against the manifestations of skin aging and, more specifically, in order to fight against and / or prevent aging. photo-induced (photo-aging). Skin manifestations of aging means any changes in the external appearance of the skin and skin appendages due to aging, such as, for example, wrinkles and fine lines, wilted skin, soft skin, thinned skin, lack of elasticity and / or tone of the skin, dull and lackluster skin or spots of skin pigmentation, discoloration of the hair or spots on the nails, but also any internal change in the skin that does not This does not necessarily translate into a modified external appearance, such as, for example, any internal degradation of the skin as a result of exposure to ultraviolet (UV) radiation. The active ingredient according to the invention, or the composition containing it, will make it possible, in particular, to combat the loss of elasticity and firmness of the skin. The active ingredient according to the invention makes it possible to protect the skin and integuments against all types of external aggressions. The use of the active ingredient, or a composition containing it, will allow the skin and integuments to be protected and to better withstand environmental stresses. By the term external aggression, we mean the aggressions that the environment can produce. By way of example, mention may be made of aggressions such as pollution, UV, or irritating products such as surfactants, preservatives or perfumes. Pollution is understood to mean both external pollution, eg due to diesel particles, ozone or heavy metals, as well as internal pollution which may be due to solvent emissions from paints, adhesives or paper. (such as toluene, styrene, xylene or benzaldehyde), or even cigarette smoke. The active ingredient according to the invention can be advantageously used in a cosmetic composition or for the preparation of a pharmaceutical composition, as a photoprotective agent and, more particularly, as a so-called secondary photory protective agent. In fact, the primary photoprotective agents are distinguished from the secondary photoprotective agents. Primary photoprotective agents are substances that exert physical power: they are able to absorb UV radiation and release it as heat to protect the skin. Secondary photoprotective agents are substances that usually have a biological effect; these are, for example, the agents capable of limiting damage to DNA and membranes by the penetration of UV radiation into the skin.
L'invention se rapporte encore à l'utilisation dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace de -11- principe actif selon l'invention, le principe actif ou la composition le contenant, étant destiné à augmenter la synthèse d'ATP intracellulaire des cellules de la peau. L'invention a également pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace de principe actif selon l'invention, le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à prévenir les dommages causés à la peau par une exposition au soleil ou une exposition à des rayonnements ionisants lors de radiothérapies. L'invention a également pour objet l'utilisation dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace de principe actif selon l'invention, le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à stimuler les mitochondries, en particulier sur les zones du corps exposées aux rayonnements UV. L'invention se rapporte encore à l'utilisation dans une composition cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, d'une quantité efficace de principe actif tel que décrit précédemment, le principe actif, ou la composition le contenant, étant destiné à protéger la peau des dommages causés par les radicaux libres. L'invention consiste encore en une composition pharmaceutique caractérisée en ce que le principe actif selon l'invention est formulé pour atténuer une pathologie liée à des dysfonctionnements mitochondriaux, par exemple, certaines dégénérescences neuro- musculaires ou cardiaques, le diabète de type II, certaines pathologies du vieillissement. L'invention consiste encore en un procédé de traitement cosmétique destiné à stimuler les défenses et à protéger la peau et les phanères des agressions extérieures et à lutter contre le vieillissement cutané, caractérisé par l'application sur la peau ou les phanères à traiter d'une composition contenant une quantité efficace de principe actif selon l'invention. The invention also relates to the use in a cosmetic composition, or for the preparation of a pharmaceutical composition, of an effective amount of active principle according to the invention, the active ingredient or the composition containing it, being intended to increase the synthesis of intracellular ATP of skin cells. The subject of the invention is also the use in a cosmetic composition, or for the preparation of a pharmaceutical composition, of an effective quantity of active principle according to the invention, the active principle, or the composition containing it, being intended to to prevent damage to the skin caused by exposure to the sun or exposure to ionizing radiation during radiation therapy. The subject of the invention is also the use in a cosmetic composition, or for the preparation of a pharmaceutical composition, of an effective quantity of active principle according to the invention, the active principle, or the composition containing it, being intended to to stimulate the mitochondria, in particular on the areas of the body exposed to UV radiation. The invention also relates to the use in a cosmetic composition, or for the preparation of a pharmaceutical composition, of an effective amount of active ingredient as described above, the active ingredient, or the composition containing it, being intended to to protect the skin from damage caused by free radicals. The invention also consists in a pharmaceutical composition characterized in that the active principle according to the invention is formulated to attenuate a pathology related to mitochondrial dysfunctions, for example certain neuromuscular or cardiac degenerations, type II diabetes, certain pathologies of aging. The invention also consists of a cosmetic treatment method intended to stimulate the defenses and to protect the skin and integuments from external aggressions and to fight against skin aging, characterized by the application on the skin or integuments to be treated of a composition containing an effective amount of active ingredient according to the invention.
Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif. -12Exem , le 1 : Pré , aration de rinci s e actif à artir de tourteau de maïsZea mails L.) Les tourteaux sont les résidus solides obtenus après extraction de l'huile des graines de maïs. Ils représentent de 50 à 75 % de la masse des graines. Le principe actif est obtenu à partir de plantes de l'espèce Zea mays L. Bien entendu l'extrait peut être préparé à partir de plantes d'au moins l'une quelconque des nombreuses variétés et espèces appartenant au genre Zea Dans une première étape, 1 kg de tourteau de maïs est broyé dans un broyeur à céréales. La farine obtenue est délipidée par l'action d'un solvant organique, l'hexane. Particular embodiments of this cosmetic treatment method also result from the foregoing description. Other advantages and characteristics of the invention will appear better on reading the examples given by way of illustration and not limitation. -12Exem, 1: Pre-aration of rinci s active maize maize cake zea mails L.) The cakes are the solid residues obtained after extraction of oil from corn kernels. They represent 50 to 75% of the seed mass. The active principle is obtained from plants of the species Zea mays L. Of course the extract can be prepared from plants of at least one of the many varieties and species belonging to the genus Zea In a first step 1 kg of corn cake is milled in a cereal mill. The flour obtained is delipidated by the action of an organic solvent, hexane.
Après filtration et séchage sous vide, la poudre obtenue est mise en suspension dans une solution aqueuse alcaline (dilution au 1/10) pH 10. contenant 1 % de polyvinylpolypyrrolidone ( Polyclar V ISP). Ce mélange est maintenu sous agitation pendant un temps suffisamment long pour permettre la solubilisation des fractions solubles. La température d'extraction est variable (comprise entre 4 et 80 C) ; préférentiellement l'opération sera réalisée à froid. Après cette phase d'extraction le milieu est clarifié par centrifugation puis filtré sur filtre à plaque. Ce filtrat qui contient les fractions solubles du maïs est ensuite soumis à une précipitation des protéines en faisant varier la force ionique en milieu neutre ou acide, ce qui permet d'éliminer les composants glucidiques solubles, les lipides et les acides nucléiques le milieu est amené à pH 3,5. Le surnageant est éliminé et le précipité est ensuite lavé à l'aide d'un solvant tel que, par exemple, l'éthanol ou le méthanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide. A ce stade, on obtient environ 50 grammes de poudre de couleur jaune clair d'extrait protéique brut contenant : Protéines : 75 % - Glucides : 20 % - Lipides : 5 % After filtration and drying under vacuum, the powder obtained is suspended in an aqueous alkaline solution (dilution 1/10) pH 10. containing 1% polyvinylpolypyrrolidone (Polyclar V ISP). This mixture is stirred for a time long enough to allow the solubilization of the soluble fractions. The extraction temperature is variable (between 4 and 80 C); preferably the operation will be performed cold. After this extraction phase, the medium is clarified by centrifugation and then filtered through a plate filter. This filtrate, which contains the soluble fractions of the corn, is then subjected to precipitation of the proteins by varying the ionic strength in a neutral or acidic medium, which makes it possible to eliminate the soluble carbohydrate components, the lipids and the nucleic acids. at pH 3.5. The supernatant is removed and the precipitate is then washed with a solvent such as, for example, ethanol or methanol and the solvent is evaporated by drying in vacuo. At this stage, about 50 grams of light yellow powder of crude protein extract containing: Proteins: 75% - Carbohydrates: 20% - Lipids: 5%
Le précipité riche en protéines est remis en solution dans l'eau ou un autre solvant. L'extrait protéique brut est alors soumis à une série d'hydrolyses ménagées et sélectives consistant en des hydrolyses chimiques et enzymatiques en présence de 0,5 % de PVPP (Polyclar V) et d'endopeptidases à cystéine (papaïne, ficine). Après réaction l'hydrolysat est filtré sur plaque puis sur cartouche stérilisante (0,2 m). -13- On obtient alors un hydrolysat de couleur claire, titrant de 15 à 30 g/1 d'extrait sec, qui est alors dilué de telle sorte que la concentration en composés de nature peptidique déterminée par la méthode de Lowry, soit comprise entre 0,1 et 5g/1 et préférentiellement entre 0,5 et 2 g/1. L'analyse physico-chimique de l'hydrolysat végétal, qui constitue le principe actif, montre que son pH est compris entre 4 et 7, et préférentiellement entre 5 et 6, l'extrait sec titre de 1 à 8 g/1 et de manière préférée entre 2 et 5 g/1, sa teneur en composés de nature peptidique est comprise entre 0,1 et 5g/l, et préférentiellement, entre 0,5 à 2 g/1 et sa teneur en sucres entre 0,5 à 2,5 g/1. The protein-rich precipitate is dissolved in water or another solvent. The crude protein extract is then subjected to a series of gentle and selective hydrolyses consisting of chemical and enzymatic hydrolyses in the presence of 0.5% PVPP (Polyclar V) and cysteine endopeptidases (papain, ficin). After reaction, the hydrolyzate is filtered on a plate and then on a sterilizing cartridge (0.2 m). A light-colored hydrolyzate, titrating with 15 to 30 g / l of dry extract, is then obtained, which is then diluted so that the concentration of peptides determined by the method of Lowry is between 0.1 and 5 g / l and preferably between 0.5 and 2 g / l. The physicochemical analysis of the vegetable hydrolyzate, which constitutes the active ingredient, shows that its pH is between 4 and 7, and preferably between 5 and 6, the dry extract has a titre of 1 to 8 g / l and preferably between 2 and 5 g / 1, its content of peptide compounds is between 0.1 and 5 g / l, and preferably between 0.5 to 2 g / l and its sugar content between 0.5 to 2.5 g / l.
Exemple 2 : Préparation de principe actif à partir de tourteau de maïs (Zen mavs L.) Une variante du protocole de l'exemple 1 consiste à réaliser la même séquence d'hydrolyses enzymatiques ménagées et sélectives mais en présence de 0,5 % de PVPP. On obtient alors un hydrolysat de couleur claire titrant de 15 à 30 g/1 d'extrait sec après filtration stérilisante On procède ensuite à une ultrafiltration de la solution sur une cartouche de filtration Millipore Helicon (seuil de coupure ; 1 kDa). Les hauts poids moléculaires contenus dans le retentât sont écartés, le filtrat est conservé. La concentration en composés de nature peptidique est déterminée par la méthode de Lowry, soit comprise entre 0.1 et 5g/1 et préférentiellement entre 0,5 et 2 g/1. L'analyse physico-chimique de l'hydrolysat végétal, qui constitue le principe actif, montre que son pH est compris entre 4 et 7, et préférentiellement, entre 5 et 6, l'extrait sec titre entre 1 à 8 g/l, et de manière préférée entre 2 et 5 g/1, sa teneur en composés de nature peptidique est comprise entre 0,1 et 5g/1 et préférentiellement entre 0,5 à 2 g/1 et sa teneur en sucres entre 0,5 à 2,5 g/l. EXAMPLE 2 Preparation of active ingredient from corn meal (Zen mavs L.) A variant of the protocol of Example 1 consists of carrying out the same sequence of gentle and selective enzymatic hydrolysis but in the presence of 0.5% of PVPP. A light-colored hydrolyzate titrant of 15 to 30 g / l of dry extract is then obtained after sterile filtration. The solution is then ultrafiltered on a Millipore Helicon filtration cartridge (cut-off point, 1 kDa). The high molecular weights contained in the retentate are removed, the filtrate is preserved. The concentration of compounds of peptide nature is determined by the method of Lowry, between 0.1 and 5 g / l and preferably between 0.5 and 2 g / l. The physicochemical analysis of the plant hydrolyzate, which constitutes the active principle, shows that its pH is between 4 and 7, and preferably between 5 and 6, the solids content between 1 to 8 g / l, and preferably between 2 and 5 g / 1, its content of peptide compounds is between 0.1 and 5 g / 1 and preferably between 0.5 to 2 g / 1 and its sugar content between 0.5 to 2.5 g / l.
Une autre variante consiste à effectuer une purification du principe actif, obtenu selon l'exemple 1 ou 2, par chromatographie d'échange d'ions, sur une colonne TSK gel (TosoHaas) avec un tampon phosphate pH 7. -14- Exemple 3: Mise en évidence de l'effet stimulant du principe actif selon l'exemple 1 sur la synthèse d'ATP intracellulaire Le but de cette étude est de déterminer l'influence du principe actif selon l'exemple 1 sur la synthèse d'ATP, produit par les mitochondries. Another variant consists in carrying out a purification of the active principle, obtained according to Example 1 or 2, by ion exchange chromatography, on a TSK gel column (TosoHaas) with a phosphate buffer pH 7. EXAMPLE 3 : Demonstration of the stimulating effect of the active principle according to Example 1 on the synthesis of intracellular ATP The aim of this study is to determine the influence of the active principle according to Example 1 on the synthesis of ATP, produced by mitochondria.
Protocole : Cette étude s'effectue à l'aide d'un Kit ATP Bioluminescence Assay Kit HS II (Roche Applied Science). Des fibroblastes dermiques sont traités avec une solution à 1 %, de principe actif selon l'exemple 1, pendant une période allant de 1 à 3 heures. A la fin de l'incubation, les puits sont rincés avec 2 ml de PBS froid avant d'ajouter 250 l d'un tampon de lyse fournis par le kit. Les cellules de chaque puits sont ensuite grattées puis récoltées dans des tubes de 14 ml. Chaque puits est rincé avec 2 x 500 l PBS froid et le tout est de nouveau récolté dans les tubes respectifs. A partir de ces échantillons, une dilution est réalisée au 1/120001etne dans du PBS froid avant chaque lecture. Le dosage d'ATP est réalisé sur ces échantillons : 50 L de cette dilution sont déposés dans une luma-cuvette et 50 pL de luminol sont ajoutés. Après 10 secondes, la lecture de la luminescence est déclenchée. Les valeurs sont standardisées par rapport à la quantité de protéines pour chaque échantillon. Les mesures sont effectuées à l'aide d'un appareil : le Biocounter M2010A LUMAC /3M. Résultats : Les dosages d'ATP montrent qu'il y a une augmentation importante de la quantité d'ATP intracellulaire après 1 heure et 3 heures, clans des cellules traitées par le principe actif selon l'exemple 1 , en comparaison des cellules non traitées. Conclusion : Le principe actif selon l'exemple 1 augmente sensiblement le niveau énergétique de cellules cutanées telles que les fibroblastes, et plus généralement stimule les fonctions mitochondriales. Exemple 4 : Mise en évidence de l'effet activateur du principe actif selon l'exemple 1 sur l'expression de cytochrome c Le but de cette étude est de déterminer l'influence du principe actif selon l'exemple 1 sur l'expression du cytochrome c. Pour cela la quantité de cytochrome c a été évaluée par la technique de l'immuno-transfert (ou western blot). Protocole : Des fibroblastes dermiques humains sont traités avec une solution à 1 %, de principe actif selon l'exemple 1, pendant 72 heures. Les cellules sont ensuite lysées et homogénéisées par sonication, puis centrifugées 10 minutes à 1000 g. Les échantillons, -15- standardisés pour leur concentration en protéine (dosage kit BCA , Pierce), sont soumis à une électrophorèse sur gel Bis-TRIS 4-12 % (InvitroGen). Après électrotransfert, les membranes sont incubées pendant une nuit avec un anticorps anticytochrome c, dilué au 1/500 (Mouse monoclonal anti cytochrome c, TEBU). Un anticorps secondaire, couplé à la peroxydase et dilué au 1/5000 est ensuite utilisé (peroxydase conjugated F(ab')2, Goat antimouse, Immunotech). Le signal chimioluminescent est ensuite quantifié à l'aide du kit Supersignal West Femto Trial kit et lu dans une chambre de lecture (Multilmage light Cabinet, Alpha Immunotech Corporation). Résultats : On observe une nette augmentation de l'expression du cytochrome c dans les fibroblastes traités par le principe actif selon l'exemple 1. Conclusions : Le principe actif selon l'exemple 1 stimule fortement l'expression du cytochrome c dans les cellules cutanées, et plus généralement les fonctions mitochondriales. Exemple 5: Mise en évidence de l'effet activateur du principe actif selon l'exemple 1 sur l'activité enzymatique de la cytochrome oxydase Le but de cette étude est de déterminer l'influence du principe actif selon l'exemple 1 sur l'activité mitochondriale. Pour cela l'activité enzymatique totale (mitochondriale) de la cytochrome oxydase a été mesurée. Protocole : Des fibroblastes humains normaux sont traités avec une solution à 1 %, de principe actif selon l'exemple 1, pendant 3 heures et 24 heures. Les cellules sont récoltées, rincées puis lysées par sonication. Une première centrifugation est réalisé pour éliminer les principaux débris cellulaires et le surnageant est ensuite centrifugé de nouveau à 10 000 g pendant 10 min. L'activité enzymatique est dosée dans le surnageant et/ou dans le 2eme culot, par une méthode biochimique, à l'aide de kit Cytocox 1 (Sigma) puis standardisée pour la teneur en protéines (dosée par le kit BCA, Pierce). Résultats : Les dosages montrent qu'il y a une augmentation très importante de l'activité enzymatique de la cytochrome oxydase après 3 heures et 24 heures d'application du principe actif selon l'exemple 1, en comparaison des cellules non traitées. -16- Conclusion : Le principe actif selon l'exemple 1 stimule très fortement l'activité enzymatique de la cytochrome oxydase, et plus généralement l'activité mitochondriale, dans les cellules cutanées. Protocol: This study is carried out using an ATP Kit Bioluminescence Assay Kit HS II (Roche Applied Science). Dermal fibroblasts are treated with a 1% solution, of active principle according to Example 1, for a period ranging from 1 to 3 hours. At the end of the incubation, the wells are rinsed with 2 ml of cold PBS before adding 250 l of lysis buffer provided by the kit. The cells of each well are then scraped and then harvested in 14 ml tubes. Each well is rinsed with 2 x 500 l PBS cold and all is harvested again in the respective tubes. From these samples, dilution is carried out 1/120001 and in cold PBS before each reading. The ATP assay is performed on these samples: 50 L of this dilution are deposited in a luma-cuvette and 50 of luminol are added. After 10 seconds, the reading of the luminescence is triggered. The values are standardized with respect to the amount of protein for each sample. The measurements are made using a device: the Biocounter M2010A LUMAC / 3M. Results: The ATP assays show that there is a significant increase in the amount of intracellular ATP after 1 hour and 3 hours, in cells treated with the active ingredient according to Example 1, compared to untreated cells. . Conclusion: The active ingredient according to Example 1 substantially increases the energy level of cutaneous cells such as fibroblasts, and more generally stimulates mitochondrial functions. EXAMPLE 4 Demonstration of the Activating Effect of the Active Principle According to Example 1 on the Expression of Cytochrome c The aim of this study is to determine the influence of the active principle according to Example 1 on the expression of the cytochrome c. For this, the quantity of cytochrome c was evaluated by the technique of immuno-transfer (or western blot). Protocol: Human dermal fibroblasts are treated with a 1% solution of active ingredient according to Example 1 for 72 hours. The cells are then lysed and homogenized by sonication, and then centrifuged for 10 minutes at 1000 g. The samples, standardized for their protein concentration (BCA kit assay, Pierce), are subjected to 4-12% Bis-TRIS gel electrophoresis (InvitroGen). After electrotransport, the membranes are incubated overnight with anticytochrome c antibody, diluted 1/500 (mouse monoclonal anti cytochrome c, TEBU). A secondary antibody, coupled to peroxidase and diluted 1/5000 is then used (conjugated peroxidase F (ab ') 2, Goat antimouse, Immunotech). The chemiluminescent signal is then quantified using the Supersignal Kit West Femto Trial kit and read in a reading chamber (Multilage Light Cabinet, Alpha Immunotech Corporation). Results: A marked increase in the expression of cytochrome c in the fibroblasts treated with the active principle according to Example 1 is observed. Conclusions: The active principle according to Example 1 strongly stimulates the expression of cytochrome c in cutaneous cells , and more generally the mitochondrial functions. EXAMPLE 5 Demonstration of the Activating Effect of the Active Principle According to Example 1 on the Enzyme Activity of Cytochrome Oxidase The aim of this study is to determine the influence of the active ingredient according to Example 1 on the mitochondrial activity. For this, the total enzymatic activity (mitochondrial) of cytochrome oxidase was measured. Protocol: Normal human fibroblasts are treated with a 1% solution of active ingredient according to Example 1 for 3 hours and 24 hours. The cells are harvested, rinsed and then lysed by sonication. A first centrifugation is carried out to remove the main cellular debris and the supernatant is then centrifuged again at 10,000 g for 10 min. The enzymatic activity is assayed in the supernatant and / or in the 2nd pellet, by a biochemical method, using a Cytocox 1 kit (Sigma) then standardized for the protein content (assayed by the BCA kit, Pierce). Results: The assays show that there is a very significant increase in the enzymatic activity of cytochrome oxidase after 3 hours and 24 hours of application of the active ingredient according to Example 1, in comparison with the untreated cells. Conclusion: The active ingredient according to Example 1 very strongly stimulates the enzymatic activity of cytochrome oxidase, and more generally the mitochondrial activity, in cutaneous cells.
Exemple 6: Mise en évidence de l'effet protecteur du principe actif selon l'exemple 1 sur le potentiel de membrane mitochondriale Le but de cette étude est de déterminer l'effet protecteur du principe actif selon l'exemple 1, vis-à-vis des mitochondries de fibroblastes dermiques soumis à un stress oxydatif, provoqué par de l'eau oxygénée (H2O2) ou à une irradiation UVB. On utilise pour cela un marqueur du potentiel de membrane des mitochondries (JC-1). Le JC-1 est un marqueur qui émet une fluorescence différente selon le niveau de polarisation de la membrane mitochondriale. Protocole : Les fibroblastes dermiques humains sont traités avec une solution à 1 % de principe actif selon l'exemple 1, pendant 96 heures, puis soumis à un stress oxydatif, provoqué par de l'H2O2 à 2 mM pendant 30 minutes, ou à une irradiation par des UVB à 50 mJ/cm2. Des contrôles non traités par le peptide ou par de l'H2O2 ou non irradiés sont réalisés dans les mêmes conditions. A la fin de l'expérimentation, les cellules sont lavées, fixées et soumises à un marquage par une solution de JC-1 (Molecular Probes) à 0,2 pg/ml, afin de révéler le potentiel de membrane des mitochondries. EXAMPLE 6 Demonstration of the Protective Effect of the Active Principle According to Example 1 on the Mitochondrial Membrane Potential The aim of this study is to determine the protective effect of the active ingredient according to Example 1, with respect to mitochondria of dermal fibroblasts subjected to oxidative stress, caused by hydrogen peroxide (H2O2) or UVB irradiation. A marker of the membrane potential of mitochondria (JC-1) is used for this purpose. JC-1 is a marker that emits a different fluorescence depending on the level of polarization of the mitochondrial membrane. Protocol: The human dermal fibroblasts are treated with a solution containing 1% of active principle according to Example 1, for 96 hours, then subjected to oxidative stress, caused by H2O2 at 2 mM for 30 minutes, or at a temperature of irradiation with UVB at 50 mJ / cm 2. Controls not treated with the peptide or with H2O2 or non-irradiated are carried out under the same conditions. At the end of the experiment, the cells are washed, fixed and labeled with a solution of JC-1 (Molecular Probes) at 0.2 μg / ml, in order to reveal the membrane potential of the mitochondria.
Résultats : Dans les fibroblastes traités par le principe actif selon l'exemple 1, les mitochondries présentent une fluorescence rouge (JC-1 agrégé), signe d'un potentiel de membrane élevé, plus important que dans les cellules contrôle. Les fibroblastes irradiés ou soumis à un stress oxydatif ont des mitochondries qui fluorescent peu dans le rouge, et principalement dans le vert (JC-1 monomérique), signe d'une altération du potentiel de membrane mitochondrial. Dans ces dernières conditions, l'application du principe actif selon l'exemple 1 permet d'observer une fluorescence rouge plus marquée. Conclusions : L'application du principe actif selon l'exemple 1 provoque une augmentation du potentiel de membrane des mitochondries. D'autre part, le principe actif selon l'exemple 1 protège efficacement les mitochondries des cellules cutanées soumises à un stress oxydatif ou à une irradiation par des UVB. -17- Exemple 7 : Préparation de compositions 1 - Crème protection solaire: Noms commerciaux I Noms INCI % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Pemulen TRI Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate 0,40 Crosspolymer Glycerine Glycerin 3,00 Nipastat Sodium Sodium Methylparaben (and) Sodium 0,15 Ethylparaben (and) Sodium Butyl paraben (and) Sodium Propylparaben (and) Sodium Isobutylparaben PHASE B Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 7,50 Eusolex 4360 Benzophenone-3 3,00 Parsol 1789 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2,00 Myritol 318 Caprylic/Capric Triglyceride 4,00 Emulgade SEV Hydrogenated Pain Glycerides (and) 5,00 Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol Propylparaben Propylparaben 0,15 Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1,00 PHASE C TEA I Triethanolamine 0,20 PHASE D Principe actif de l'exemple 1 3 Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément entre 70 C et 75 C. La phase B est émulsionnée dans la phase A sous agitation. La phase C est ajoutée, à 45 C, en augmentant l'agitation. La phase D est ensuite additionnée lorsque la température se situe en dessous de 40 C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25 C sous vive agitation. ûLait après-soleil : Noms commerciaux Noms INCI % massique PHASE A Montanov L C 14-22 Alcohols (and) C 12-20 3,00 Alkyl Glucoside Waglinol 2559 Cetearyl Isononanoate 4,00 Tegosoft TN C12-15 Alkyl Benzoate 3,00 Huile de Noyaux d'Abricot Prunus Armeniaca (Apricot) Kernel 2,00 Oil Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,00 Abil 350 Dimethicone 1,00 PHASE B Eau déminéralisée Aqua (Water) 1 qsp PHASE C Simulgel EG Sodium Acrylate/Acryloyldimethyl 0,4 Taurate Copolymer (and) Isohexadecane (and) Polysorbate 80 Copolymer (and) Polysorbate 80 PHASE D Phenonip Phenoxyethanol (and) 0,30 Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Ethylparaben and Propylparaben and Buthylparaben Germall 115 Imidazolidinyl Urea 0,20 PHASE E Principe actif de l'exemple 1 0,1 -18-5 -19- Préparer la phase A sous agitation. Incorporer la gomme xanthane progressivement, sous agitation défloculeuse. Les phases C et D seront incorporées une fois le gel terminé. La phase E, préparée préalablement jusqu'à parfaite dissolution de la DHA, sera rajoutée ensuite. Ajuster le pH si nécessaire à 4 - 4,5. Colorer et parfumer. Results: In the fibroblasts treated with the active principle according to Example 1, the mitochondria exhibit a red fluorescence (JC-1 aggregated), a sign of a high membrane potential, greater than in the control cells. The irradiated or oxidatively stressed fibroblasts have mitochondria which fluoresce little in the red, and mainly in the green (monomeric JC-1), a sign of an alteration of the mitochondrial membrane potential. In these latter conditions, the application of the active ingredient according to Example 1 makes it possible to observe a more pronounced red fluorescence. Conclusions: The application of the active ingredient according to Example 1 causes an increase in the membrane potential of the mitochondria. On the other hand, the active ingredient according to Example 1 effectively protects the mitochondria of cutaneous cells subjected to oxidative stress or irradiation with UVB. Example 7: Preparation of compositions 1 - Sun protection cream: Trade names I INCI names% by weight PHASE A Demineralized water Aqua (Water) qsp Pemulen TRI Acrylates / C10-30 Alkyl Acrylate 0.40 Crosspolymer Glycerine Glycerin 3.00 Nipastat Sodium Sodium Methylparaben (and) Sodium 0.15 Ethylparaben (and) Sodium Butyl paraben (and) Sodium Propylparaben (and) Sodium Isobutylparaben PHASE B Parsol MCX Ethylhexyl Methoxycinnamate 7.50 Eusolex 4360 Benzophenone-3 3.00 Parsol 1789 Butyl Methoxydibenzoylmethane 2, 00 Myritol 318 Caprylic / Capric Triglyceride 4.00 Emulgade SEV Hydrogenated Bread Glycerides (and) 5.00 Ceteareth-20 (and) Ceteareth-12 (and) Cetearyl Alcohol Propylparaben Propylparaben 0.15 Nacol 16-98 Cetyl Alcohol 1.00 PHASE C TEA I Triethanolamine 0.20 PHASE D Active principle of Example 1 3 Fragrance Fragrance qsp Colorant qsp The constituents of phase A and phase B are heated separately between 70 ° C. and 75 ° C. Phase B is emulsified in the phase A with stirring. Phase C is added at 45 ° C., increasing stirring. Phase D is then added when the temperature is below 40 C. Cooling is continued to 25 C with vigorous stirring. After-sun milk: Trade names INCI names% by mass PHASE A Montanov LC 14-22 Alcohols (and) C 12-20 3.00 Alkyl Glucoside Waglinol 2559 Cetearyl Isononanoate 4.00 Tegosoft TN C12-15 Alkyl Benzoate 3.00 Apricot kernels Prunus Armeniaca (Apricot) Kernel 2.00 Oil Avocado Oil Persea Gratissima (Avocado) Oil 1.00 Abil 350 Dimethicone 1.00 PHASE B Demineralized water Aqua (Water) 1 qsp PHASE C Simulgel EG Sodium Acrylate / Acryloyldimethyl 0.4 Taurate Copolymer (and) Isohexadecane (and) Polysorbate 80 Copolymer (and) Polysorbate 80 PHASE D Phenonip Phenoxyethanol (and) 0.30 Methylparaben (and) Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Ethylparaben and Propylparaben and Buthylparaben Germall 115 Imidazolidinyl Urea 0.20 PHASE E Active principle of Example 1 0.1 -18-5 Prepare phase A with stirring. Incorporate the xanthan gum gradually, with deflocculating stirring. Phases C and D will be incorporated once the gel is complete. Phase E, prepared before perfect dissolution of the DHA, will be added later. Adjust the pH if necessary to 4 - 4.5. Color and perfume.
3 ûCrème anti-âge : Noms Noms INCI % commerciaux massique Phase A Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6,00 Squalane Squalane 3,00 Cetiol SB 45 Butyrospennum Parkii ( Shea Butter) 2,00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3,00 Amerchol L- 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 Abil 350 Dimethicone 1,50 BHT BHT 0,01 Coenzyme Q10 Ubiquinone 0,10 Phase B Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,25 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) Ethylparaben 0,75 (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) 1sobutylparaben Phase C Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Glucam El0 Methyl Gluceth-10 1,00 Allantoin Allantoin 0,15 Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0,20 -20- Noms Noms INCI % commerciaux massique Phase D TEA Triethanolamine 0,18 Phase E Principe actif de 0,5 l'exemple 1 GP4G Water (and) Artemia Extract 1,50 Collaxyl Water (and) Butylene Glycol (and) Hexapeptide-9 3,00 Phase F Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Préparer et fondre la phase A à 65-70 C. Chauffer la phase C à 65-70 C. La phase B est ajoutée à la phase A juste avant d'émulsionner A dans B. A environ 45 C, le carbomer est neutralisé par addition de la phase D. La phase E est ensuite additionnée sous légère agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25 C. La phase F est alors additionnée si souhaité. 3 ûAnti-age Cream: Names INCI Names% commercial mass A Phase Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl Glucoside 6.00 Squalane Squalane 3.00 Cetiol SB 45 Butyrospennum Parkii (Shea Butter) 2.00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3.00 Amerchol L- 101 Ore Oil (and) Lanolin Alcohol 2.00 Abil 350 Dimethicone 1.50 BHT BHT 0.01 Coenzyme Q10 Ubiquinone 0.10 Phase B Avocado Oil Persea Gratissima (Avocado) Oil 1.25 Phenonip Phenoxyethanol (and Methylparaben (and) Ethylparaben 0.75 (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) 1sobutylparaben Phase C Demineralized Water Aqua (Water) qsp Butylene Glycol Butylene Glycol 2.00 Glucam El0 Methyl Gluceth-10 1.00 Allantoin Allantoin 0, Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0.20 -20- Names INCI% commercial% Mass Phase D TEA Triethanolamine 0.18 Phase E Active ingredient 0.5 Example 1 GP4G Water (and) Artemia Extract 1.50 Collaxyl Water (and) ) Butylene Glycol (and) Hexapeptide-9 3.00 Phase F Perfume Perfume (Fragrance) qsp Colorant q sp Prepare and melt phase A at 65-70 C. Heat phase C at 65-70 C. Phase B is added to phase A just before emulsifying A in B. At about 45 C, the carbomer is neutralized by addition of phase D. Phase E is then added with gentle stirring and cooling is continued to 25 C. Phase F is then added if desired.
4 ùCrème protectrice de jour : Noms commerciaux Noms INCI % massique Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG- 4,00 75 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 Canette O Cetearyl Alcohol 1,50 L) C 200 Fluid/100cs Dimethicone 1,00 DUB 810C Coco Caprylate/Caprate 1,00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3,00 -21- DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate/Hexacaprate 1,50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1,00 Vitamine E Tocopherol 0,30 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) 0,70 Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase B Eau déminéralisée Aqua qsp 100 Glycerine Glycerin 2,00 Carbopol EDT 2020 Acrylates/C10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0,15 Keltrol BT Xanthan Gum 0,30 Phase C Sodium Hydroxide (sol.à Sodium Hydroxide 0,30 10%) Phase D Eau déminéralisée Aqua 5,00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0,50 Phase E Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Dekaben CP Chlorphenesin 0,20 Phase F GP4G Water (and) Artemia Extract 1,00 Principe actif de l'exemple 1 5 Préparer la phase A et chauffer à 75 C sous agitation. Préparer la phase B en dispersant le carbopol, puis la gomme xanthane sous agitation. Laisser reposer. Chauffer à 75 C. -22- A température, émulsionner A dans B sous agitation rotor-stator. Neutraliser avec la phase C sous agitation rapide. Après refroidissement à 40 C, additionner la phase D, puis la phase E. Le refroidissement est poursuivi sous agitation légère et la phase F rajoutée. 4 ùShield Day Cream: Trade Names INCI Names% by mass Phase A Emulium Delta Cetyl alcohol (and) Glyceryl Stearate (and) PEG- 4.00 75 Stearate (and) Ceteth-20 (and) Steareth-20 Canette O Cetearyl Alcohol 1 , 50 L) C 200 Fluid / 100cms Dimethicone 1.00 DUB 810C Coco Caprylate / Caprate 1.00 DPPG Propylene Glycol Dipelargonate 3.00 -21- DUB DPHCC Dipentaerythrityl Hexacaprylate / Hexacaprate 1.50 Cegesoft PS6 Vegetable Oil 1.00 Vitamin E Tocopherol 0.30 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) 0.70 Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben Phase B Demineralized Water Aqua qs 100 Glycerin Glycerin 2.00 Carbopol EDT 2020 Acrylates / C10-30Alkyl Acrylate Crosspolymer 0.15 Keltrol BT Xanthan Gum 0.30 Phase C Sodium Hydroxide (Sodium Hydroxide Sodium 0.30 10%) Phase D Demineralized Water Aqua 5.00 Stay-C 50 Sodium Ascorbyl Phosphate 0.50 Phase E Butylene Glycol Butylene Glycol 2.00 Dekaben CP Chlorphenesin 0.20 Phase F GP4G Water (and) Artemi EXAMPLE 1.00 Active ingredient of Example 1 Prepare phase A and heat to 75 ° C. with stirring. Prepare phase B by dispersing the carbopol, then the xanthan gum with stirring. Let rest. Heat to 75 C. At temperature, emulsify A in B with rotor-stator stirring. Neutralize with phase C with rapid stirring. After cooling to 40 ° C., add phase D and then phase E. Cooling is continued with gentle stirring and phase F added.
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