FR2781229A1

FR2781229A1 - Nouveaux composes analogues des nucleotides, leurs procedes de preparation et leurs applications

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Publication number: FR2781229A1
Application number: FR9809140A
Authority: FR
Inventors: Ayicoue Isidore Ayi; Roger Guedj; Vmf Cardona; Anne Marie Aubertin
Original assignee: Universite de Nice Sophia Antipolis UNSA
Current assignee: Universite de Nice Sophia Antipolis UNSA
Priority date: 1998-07-17
Filing date: 1998-07-17
Publication date: 2000-01-21
Anticipated expiration: 2018-07-17
Also published as: FR2781229B1

Abstract

La présente invention a pour objet de nouvelles molécules de type " analogues de nucléotides ", leurs procédés de préparation et leurs applications en particulier comme inhibiteurs du développement viral ou comme substances antitumorales. Un analogue de nucléotide est une molécule qui mime structurellement un nucléotide naturel. Il est constitué de trois parties : un analogue de base nucléique ou une base nucléique naturelle ou un dérivé, une partie analogue d'un ribose ou d'un désoxyribose ou un dérivé, une partie mimant un groupement phosphate naturel : un groupement phosphinique libre ou protégé. Ces trois parties sont liées entres elles pour mimer un nucléotide naturel et toutes les combinaisons entre les constituants de ces trois parties sont possibles pour constituer un analogue de nucléotide.A l'heure actuelle, le traitement curatif des infections virales est lié au développement de la chimiothérapie et toute drogue agissant sélectivement au niveau de l'une des phases de la réplication virale est susceptible d'interférer sur la multiplication virale.La présente invention a précisément pour objet l'utilisation d'un type nouveau de groupement d'atomes capable de conférer à des analogues de nucléosides possédant une activité antivirale, ou antitumorale des propriétés accentuées ou bien de conférer à des analogues nouveau de nucléosides des propriétés antivirales, ou antitumorales intéressantes. Ce groupement nouveau d'atomes est fixé sur la partie osidique ou analogue osidique des molécules analogues de nucléosides.La présente invention a également pour objet des préparations à usage thérapeutique anti-virale, anti-cancéreuse comprenant au moins une des molécules répondant à la formule 1 de l'invention. Selon l'invention, les composés répondent à la formule générale suivante : (CF DESSIN DANS BOPI) Les préparations peuvent comprendre, en outre, une ou plusieurs molécules inhibant la réplication virale, par exemple dans le cas des VIH, des molécules agissant sur la protéase du VIH ou sur d'autres cibles virales ou cellulaires conduisant à une diminution de la prolifération du VIH.

Description

Description de l'invention
La présente invention a pour objet de nouvelles molécules de type "analogues de nucléotides", leurs procédés de préparation et leurs applications en particulier comme inhibiteurs du développement viral ou comme substances antitumorales.

Un analogue de nucléotide est une molécule qui mime structurellement un nucléotide naturel. Il est constitué de trois parties : un analogue de base nucléique ou une base nucléique naturelle ou un dérivé, une partie analogue d'un ribose ou d'un désoxyribose ou un dérivé, une partie mimant un groupement phosphate naturel : un groupement phosphinique libre ou protégé. Ces trois parties sont liées entres elles pour mimer un nucléotide naturel et toutes les combinaisons entre les constituants de ces trois parties sont possibles pour constituer un analogue de nucléotide.

Deux cents espèces de virus environ sont pathogènes pour l'homme et parmi les différentes stratégies visant à limiter la multiplication virale dans l'organisme, des drogues ont été mises au point qui agissent sur une ou plusieurs étapes du développement viral.

Par convention, les virus sont des assemblages supramoléculaires ne pouvant se multiplier qu'au sein des cellules hôtes. Il se reproduisent à partir de leur matériel génétique par réplication.

Chaque particule virale ne contient qu'un seul type d'acide nucléique qui constitue son matériel génétique. Ce matériel génétique viral peut-être soit de l'ARN soit de l'ADN. Cet acide nucléique (ADN ou ARN) constitue le génome viral et est enfermé dans une capside protéique, l'ensemble constituant une unité fonctionnelle ; la nucléocapside. Les phases de la multiplication virale comprennent l'adsorption du virus sur la membrane cellulaire, sa pénétration et sa décapsidation, l'intégration du matériel génétique viral soit directement dans le patrimoine génétique de la cellule pour les virus à ADN, soit indirectement, après transcription de l'ARN génomique du virus en ADN pour les virus à ARN, la réplication de son génome et la production de toutes les substances nécessaires à la constitution de nouveaux virions (matériel génétique, ARNm, protéines...).

A l'heure actuelle, le traitement curatif des infections virales est lié au développement de la chimiothérapie et toute drogue agissant sélectivement au niveau de l'une des phases de la réplication virale est susceptible d'interférer sur la multiplication virale.

Parmi les drogues antivirales utilisées à ce jour, un certain nombre d'entre elles possède une structure nucléosidique. Le schéma 1 décrit des drogues antivirales de type analogues de nucléosides.

Ces analogues structuraux des nucléosides naturels agissent par la perturbation de la synthèse des acides nucléiques viraux et leur sélectivité d'action est due au fait que les virus possèdent ou encodent des enzymes du métabolisme des acides nucléiques différentes de celles des cellules hôtes. L'efficacité d'un analogue nucléosidique dépend de son aptitude a être plus ou moins facilement phosphorylé intracellulairement et du pouvoir inhibiteur et/ou du caractère substrat de son métabolite triphosphate vis-à-vis des polymérases virales, de sa capacité à pénétrer à l'intérieur des cellules infectées et de sa faible toxicité. La sélectivité d'action est en relation directe avec une interaction préférentielle de son dérivé triphosphate avec les polymérases virales.

Le schéma 2 montre le passage de l'analogue nucléosidique, sous sa forme généralement administrée, en dérivé triphosphate, qui représente en général la forme active de la substance, après mono-, di- et tri-phosphorylation par des enzymes virales ou cellulaires. Cependant, la forme active peut-être la molécule administrée, ou l'une des formes intermédiaires décrites dans le schéma 2.

Il peut exister pour ce type de composés des problèmes de passage des membranes cellulaires, qui est en rapport avec la lipophilie des molécules, de biodisponibilité, de phosphorylation et d'autres encore montrant qu'il y a un intérêt certain à modifier les fonctions alcools portées par l'analogue de l'ose, en particulier la fonction alcool primaire, par un groupement d'atomes.

Pour ce qui concerne les substances anticancéreuses, les analogues de nucléosides sont utilisés et il est important de surmonter les problèmes posés par les membranes cellulaires c'est-à-dire de biodisponibilité.

Il est donc souhaitable de concevoir des molécules, analogues de nucléosides, permettant de limiter le développement viral, ou possédant une activité antitumorale.

La présente invention a précisemment pour objet l'utilisation d'un type nouveau de groupement d'atomes capable de conférer à des analogues de nucléosides possédant une activité antivirale, ou antitumorale des propriétés accentuées ou bien de conférer à des analogues nouveau de nucléosides des propriétés antivirales, ou antitumorales intéressantes. Ce groupement nouveau d' atomes est fixé sur la partie osidique ou analogue osidique des molécules analogues de nucléosides telles qu'elles ont été décrites précédemment.

Selon l'invention, les composés répondent à la formule générale suivante :

1 \/H R,#P#0#C6 . ) -P-O-C, 6 A, H 4f\ÎI IYlt H I 3 12H R2 R4 Formule 1 dans laquelle :
1- A est un hétéroatome, 0, S, un atome de carbone porteur de deux atomes d'hydrogène, un carbone porteur d'un atome d'hydrogène et dans ce cas il existe une double liaison entre les carbones 5 et 4 , un atome de carbone porteur d'un hydrogène et d'un groupement hydroxyle OH, OR7 avec R7 un radical alkyle linéaire ou ramifié (Cl-C24) substitué ou non, un radical alkényle (C2-C24) linéaire ou ramifié contenant une ou plusieurs doubles liaisons, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non et contenant une ou plusieurs triples liaisons, un radical alkyloxy linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényloxy linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical aryloxy substitué ou non, un radical arylméthyloxy substitué ou non, un radical formé d'un ou de plusieurs cycles à cinq ou six liaisons possédant un ou plusieurs hétéroatomes dans sa structure, une ou plusieurs doubles liaisons et diversement substitué ou non substitué ; B est un atome de carbone simplement lié ou doublement lié au C2, un hétéroatome.

De préférence, A est un hétéroatome, 0, S, un atome de carbone porteur de deux atomes d'hydrogène, un carbone porteur d'un atome d'hydrogène et dans ce cas il existe une double liaison entre les carbones 5 et 4 , un atome de carbone porteur d'un hydrogène et d'un groupement hydroxyle OH, akyloxy OR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut.

2 - Quand B est un atome de carbone, R1, R2, R3, R4 sont un atome d'hydrogène, un groupement OR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut, un radical alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) contenant une ou plusieurs doubles liaisons, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non et contenant une ou plusieurs triples liaisons, un radical alkyloxy linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényloxy linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical aryloxy substitué ou non, un radical arylméthyloxy substitué ou non, un groupe SR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut, NR7R8 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut et Rg est un atome d'hydrogène ou un atome d'azote libre ou substitué une ou

deux fois par un radical R7 tel qu'il a été défini plus haut, un radical azido, isonitrile, méthylisonitrile ; une double liaison peut unir les atomes C2 et C3, alors RIR2 = un atome d'hydrogène et R3R4 = un atome d'hydrogène.

De préférence, R1, R2, R3, R4 sont un atome d'hydrogène ; un groupement OR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut, dans ce cas si Ri ou R2 est H alors R2 ou R1 est OR?, si R3 ou R4 est H alors R4 ou R3 est OR7, si R1 ou R2 est un radical azido alors R2 ou R1 est H et R3 et R4 sont H ou R4 ou R3 sont H et OR?, si Ri ou R2 est un radical isonitrile alors R2 ou R1 est H et R3 et R4 sont H ou R4 ou R3 sont H et OR7, si R1 ou R2 est un radical méthyisonitrile alors R2 ou R1 est H et R3 et R4 sont H ou R4 ou R3 sont H et OR7 ; une double liaison peut unir les atomes C2 et C3, alors R1R2 = un atome d'hydrogène et R3R4 = un atome d'hydrogène.

3 - Quand B est un hétéroatome R3, R4 sont un atome d'hydrogène, R3 ou R4 est H et R4 ou R3 un groupement OR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut, un radical alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) contenant une ou plusieurs doubles liaisons, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical alkynyl linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, un radical alkyloxy linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényloxy linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical aryloxy substitué ou non, un radical arylméthyloxy substitué ou non, un groupe SR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut, NR7R8 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut et Rg est H ou Rg un atome d'azote libre ou substitué une ou deux fois par un radical R7, un radical azido, isonitrile, méthylisonitrile.

De préférence B est un atome de soufre, un oxygène, et R3 et R4 sont un atome d'hydrogène, R3 ou R4 est H alors R4 ou R3 est un groupement OR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut, un radical alkyle linéaire ou ramifié (CI-C24) substitué ou non, un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) contenant une ou plusieurs doubles liaisons, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical alkynyle (C2-C24) linéaire ou ramifié substitué ou non, un radical alkyloxy (C1-C24) linéaire ou ramifié substitué ou non, un radical alkényloxy (C2-C24) linéaire ou ramifié substitué ou non, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical aryloxy substitué ou non, un radical arylméthyloxy substitué ou non, un groupe SR7 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut, NR7R8 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut et R8 un hydrogène ou un atome d'azote libre ou substitué une ou deux fois par un radical R7, un radical azido, isonitrile, méthylisonitrile.

4 - R5 est une base nucléique naturelle purique ou pyrimidique la liaison entre l'ose ou son analogue s'effectuant entre le C1 et l'atome d'azote N9 pour les bases puriques et Ni pour les bases pyrimidiques selon la nomenclature conventionnelle. Les bases puriques et pyrimidiques sont l'adénine, l'hypoxanthine, la guanine, la thymine, la cytidine, un dérivé d'une base nucléique naturelle par couplage de la fonction amine avec un groupement fluorényméthyloxycarbonyle, tert-butyloxycarbonyle, di tert-butyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, un radical alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) contenant

une ou plusieurs doubles liaisons, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical alkynyle (C2-C24) linéaire ou ramifié substitué ou non, un radical alkyloxy (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényloxy (C2-C24) substitué ou non, un radical alkényloxy (C2-C24) substitué ou non, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical aryloxy substitué ou non, un radical arylméthyloxy substitué ou non ; une base nucléique dont la fonction amine a été substituée par une amine de type NR7R8 avec R7 tel qu'il a été défini précédemment et R8 est un hydrogène ou avec R7R8 = -(CH2)n et n compris entre 2 et 5, un radical alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) contenant une ou plusieurs doubles liaisons, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical alkynyle (C2-C24) linéaire ou ramifié substitué ou non, un radical alkyloxy (C1-C24), un radical alkényloxy (C2-C24) substitué ou non, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical aryloxy substitué ou non, un radical arylméthyloxy substitué ou non, un hétéroatome ; base nucléique naturelle modifiée par substitution d'atomes d'hydrogène par un ou plusieurs atomes d'halogène en particulier du fluor ; une pseudo-base purique avec soit le cycle à six chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles soit le cycle à cinq chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles, le couplage entre l'ose ou son analogue s'effectuant entre le Ci de l'ose ou de son analogue et l'atome d'azote de la base modifiée analogue de l'azote Ni pour les bases pyrimidiques et N7 des bases puriques.

De préférence, R5 est une base nucléique naturelle purique ou pyrimidique, adénine, hypoxanthine, guanine, thymine, cytidine, ces bases pouvant être libres ou protégées sur les groupements fonctionnels portés par ces bases, une base naturelle modifiée , en particulier, par un ou des atomes de fluor, un ou des groupements trifluorométhyle, un ou des groupements cyclopropylamine, cyclobutylamine, cyclopentylamine, cyclohexylamine, une ou des fonctions oxo, une ou des fonctions amine ; est une pseudo-base purique avec soit le cycle à six chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles, soit le cycle à cinq chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles, le couplage entre l'ose ou son analogue s'effectuant entre le Ci de l'ose ou de son analogue et l'atome d'azote de la base modifiée analogue de l'azote Ni pour les bases pyrimidiques et N7 des bases puriques.

5 - R6 est un hydrogène, un radical alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) contenant une ou plusieurs doubles liaisons, un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène, un radical alkynyle (C2-C24) linéaire ou ramifié substitué ou non, un radical alkyloxy (C1-C24) substitué ou non, un radical alkényloxy (C2-C24) substitué ou non, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical aryloxy substitué ou non, un radical arylméthyloxy substitué ou non ; un radical formé d'un ou de plusieurs cycles à cinq ou six liaisons possédant un ou plusieurs hétéroatomes dans sa structure, une ou plusieurs doubles liaisons et diversement substitué ou non substitué ;
De préférence, R6 est un hydrogène, un radical aryle substitué ou non, un radical arylméthyle substitué ou non, un radical phényloxy substitué ou non, un radical phénylméthyloxy

substitué ou non ; un radical formé d'un ou de plusieurs cycles à cinq ou six liaisons possédant un ou plusieurs hétéroatomes dans sa structure, une ou plusieurs doubles liaisons et diversement substitué ou non substitué, un atome d'azote NR7R8 avec R7 tel qu'il a été défini plus haut et Rg un hydrogène ou un atome d'azote libre ou substitué une ou deux fois par un radical R7 ; R7Rg= -(CHR9)n- avec n compris entre 2 et 5 et R9 identique à R7 et tel qu'il a été défini plus haut.

La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 1 ci-dessus.

Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention le procédé de préparation des molécules répondant à la formule 1 consiste : a - à préparer le nucléoside dont les fonctions sur la partie osidique ou analogue et sur la partie base ou analogue sont éventuellement protégées. b - à coupler le groupement phosphoré, par exemple, sur la fonction alcool primaire de l'ose - i) au moyen par exemple de l'acide O-benzyl H-phosphonate après activation sous forme de chlorure ii) au moyen par exemple de l'acide O-benzyl H-phosphonate en présence de Bop ou de Brop à basse température iii) au moyen par exemple de l'acide O-benzyl H-phosphonate en présence de dicyclohexylcarbodiimide, ou d'une diimide en général, en présence ou non de diméthylaminopyridine. Une déprotection éventuelle des fonctions de l'ose et de la base nucléosique ou de son analogue conduit au dérivé phosphoré avec un bon rendement en produit de formule 2. D'une manière générale, on peut utiliser une des méthode décrite par J. Stawinski dans "Handbook of organophosphorous Chemistry" Engel R. Ed. ; MarcelDekker : New-York,
1992 ; pp 377-434.

/ H BASE Il \/ BASE R6-P-0-C6 1 1 4C R 4f\Îl IYlt H f312H R2 R4 Formule 2 où BASE représente une base nucléique naturelle adénine, hypoxanthine, guanine, cytosine, thymine, uracile ou un analogue de base nucléique ; B est un atome de carbone (C3), quand il y a une double liaison entre ce carbone et le carbone C2 alors R1 ou R2 sont un atome d'hydrogène et R3 ou R4 sont un atome d'hydrogène ; quand il n'y a pas de double liaison entre C3 et C2, alors

Ri, R3, R4 sont des atomes d'hydrogène et R2 est un radical azoture ; R6 représente un radical phénylméthyloxy.

6 - La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 3 ci-dessous.

o HN/CH3 HN I 'HJ p N D 1 A B Formule 3 dans laquelle :
G représente un groupement alkyloxy linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényloxy linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs double liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkényloxy substitué ou non, contenant une ou plusieurs double liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un résidu d'acide a aminé naturel ou non, avec la fonction N terminale libre ou protégée en particulier par un groupement Fmoc, Boc ou un dérivé trialkylsilyle.

A représente un atome d'hydrogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (Cl-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyle substitué ou non, contenant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkényle substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène.

B représente un atome d'hydrogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ;un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyle substitué ou non, contenant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkényle substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène.

D représente un atome d'hydrogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyle substitué ou non, contenant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkényle substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène.

7 - La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 4 ci-dessous.

0 K G# P# O# 0 H R Formule H 1 B Formule 4 dans laquelle :
A, B et G tels qu'ils ont été définis dans le procédé ci-dessus (formule 3).

K représente une base nucléique naturelle purique ou pyrimidique, adénine, hypoxanthine, guanine, thymine, cytidine, ces bases pouvant être libres ou protégées sur les groupements fonctionnels portés par ces bases, une base naturelle modifiée, en particulier, par un ou des atomes

de fluor, un ou des groupements trifluorométhyle, un ou des atomes d'halogène, un ou des groupements cyclopropylamine, cyclobutylamine, cyclopentylamine, cyclohexylamine, une ou des fonctions oxo, une ou des fonctions amine ; représente une pseudo-base purique avec soit le cycle à six chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles, soit le cycle à cinq chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles, le couplage entre l'ose ou son analogue s'effectuant entre le C1 de l'ose ou de son analogue et l'atome d'azote de la base modifiée analogue de l'azote Ni pour les bases pyrimidiques et N7 des bases puriques.

8 - La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 5 ci-dessous.

o CH3 HN p/,N D G--0o! H 1 Q Formule 5 dans laquelle :
D et G tels qu'ils ont été définis dans le procédé ci-dessus (formule 3).

L, M, N et Q représentent un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement azido, isonitrile, méthylisonitrile ; groupement NR7R8 ; un groupement de type SR7 avec :
R7 représente un atome d'hydrogène ; un radical alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical alkyloxy linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes

d'halogène ; un radical alkényloxy linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical aryloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical arylméthyloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical formé d'un ou de plusieurs cycles à trois, cinq ou six liaisons possédant un ou plusieurs hétéroatomes dans sa structure, un ou plusieurs atomes d'halogène, une ou plusieurs doubles liaisons et diversement substitué ou non substitué.

Rg représente un atome d'hydrogène ; un atome d'azote libre ou substitué une ou deux fois par un radical R7 tel qu'il a été défini plus haut ; un radical R7.

9 - La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 6 ci-dessous.

0 K O H N Formule 6 dans laquelle :
G tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 3).

K tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 4).

L, M, N et Q tels qu'ils ont été définis dans le procédé ci-dessus (formule 5).

10 - La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 7 ci-dessous.

0 K G-P- X Formule 7 dans laquelle :
A et B tels qu'ils ont été définis dans le procédé ci-dessus (formule 3).

G tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 3).

K tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 4).

X représente un hétéroatome de préférence un oxygène ou un soufre ; un groupement NR7 ; un atome de carbone porteur de deux atomes d'hydrogène ; un atome de carbone porteur de deux atomes d' halogène identiques ou différents ; un groupement C(Rs)2 ; un atome de carbone porteur d'un atome d'halogène et d'un groupement R8; un atome de carbone porteur d'un groupement Rg et dans ce cas il existe une double liaison entre les carbones 4 et 5 ; atome de carbone porteur d'un hydrogène et un groupement hydroxyle OH, akyloxy OR7.

R7 et Rg tels qu'ils ont été définis dans le procédé ci-dessus (formule 5).

11 - La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 8 ci-dessous.

o H \/ Q Formule 8 dans laquelle :
G tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 3).

K tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 4).

X tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 7).

12 - La présente invention a également pour objet des procédés de préparation des molécules de formule 9 ci-dessous.

0 K Bzz H y Formule 9 dans laquelle :
G tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 3).

K tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 4).

N et Q tels qu'ils ont été définis dans le procédé ci-dessus (formule 5).

X tel qu'il a été défini dans le procédé ci-dessus (formule 7).

Y représente un hétéroatome de préférence un oxygène ou un soufre.

13 - A titre de produits industriels, les composés de formules générâtes (3), (4), (5), (6), (7), (8) et (9) dans lesquelles le groupement G peut être un radical polyhalogénoalkyloxy éventuellement substitué ou ramifié.

14 - Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce qui sont des produits intermédiaires dans la préparation de dérivés di- et tri-phosphorylés.

15 - Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisés en ce qui sont des produits industriels entrant dans la composition de préparations à usage thérapeutique antivirale, anticancéreuse ou autre. Les préparations peuvent être sous forme de solutions, de dispersions dans un solvant approprié, de gélules, de comprimés, de cachets, de suppositoires, de capsules ou de pilules.

Les molécules de la présente invention répondant à la formule 1 ci-dessus ont l'avantage de comporter, en particulier, sur la fonction alcool primaire de l'ose un groupement H-phosphonate diester conférant une activité antivirale ou antitumorale à un nucléoside ou une activité antivirale ou antitumorale et en particulier anti-HIV accrue par rapport au nucléoside ne possédant pas ce radical phosphoré. En effet, des mesures de l'activité anti-VIH de plusieurs molécules de la présente invention ont été réalisées sur différentes souches de VIH comme par exemple la souche HTLV IIIB et la souche LAI. La multiplication du VIH-1 (souche LAI) dans les cellules CEM-SS (infectées avec 20 TCID50) a été évaluée, après 5 jours de culture, par dosage de la Transcriptase inverse (TI) dont l'activité traduit la présence de virus relargué dans le surnageant de culture. Les molécules de l'invention ont été ajoutées après l'ajout du virus dans le milieu de culture. L'effet toxique des molécules de l'invention sur les cellules CEM-SS non infectées est apprécié par la réaction colorimétrique (MTT) basée sur la capacité des cellules vivantes à réduire le bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium en formazan après 5 jours d'incubation en présence de l'inhibiteur potentiel à différentes concentrations.

Les résultats rassemblés dans le tableau 1 ont montré un pouvoir inhibiteur sur le VIH-1 des molécules de la présente invention traduit par une faible CI50 (concentration en inhibiteur réduisant la prolifération virale de 50%) et une faible toxicité exprimée par une CC50 (concentration en inhibiteur produisant une mortatalité cellulaire de 50%) élevée. De même, ce pouvoir inhibiteur a été évalué sur les cellules MT4 et les résultats sont donc rassemblés dans le tableau 2. Le tableau 3 rassemble quant à lui, les résultats biologiques obtenus pour ces mêmes molécules, sur des cellules CEM-TK- déficientes en thymidine kinase ; enzyme de première phosphorylation, pour des analogues nucléosidiques comme la d4T et l'AZT.

L'examen des tableaux 1 et 2 montrent clairement que les propriétés inhibitrices sont exacerbées par la présence du groupement situé sur la fonction alcool primaire du nucléoside inhibiteur. De plus, dans le tableau 3, on peut remarquer qu'au contraire du d4T qui ne possède aucune activité antivirale dans les cellules CEM-TK-, le dérivé H-phosphonate de cet analogue nucléosidique (4) a une valeur de CI50 de 0,3 M, ce qui fait de lui un puissant inhibiteur du VIH-1dans ces cellules. Il peut ainsi jouer le rôle de prodrogue en libérant à l'intérieur de la cellule le nucléotide monophosphate du d4T qui pourra ensuite être métabolisé facilement en d4T-triphosphate ; entité active sur la transcriptase inverse du VIH-1.

Références <SEP> CI50 <SEP> (M) <SEP> CC50 <SEP> (M)
<tb> d4T <SEP> 4,9.10-8 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> (30%)
<tb> AZT <SEP> 4,0. <SEP> 10-9 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 1 <SEP> 4,4.10-6 <SEP> > <SEP> 10-4
<tb> 2 <SEP> 1,1.10-8 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 3 <SEP> 3,5.10-6 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 4 <SEP> 1,6.10-8 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> (44%)
<tb> 5 <SEP> 5,0.10-9 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> (38%)
<tb> 6 <SEP> 7,3.10-7 <SEP> > <SEP> 10-4
<tb>
où d4T est le 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine et AZT le 3'-azido-2',3'-didésoxythymidine
Tableau 1

<tb>
<tb> Références <SEP> CI50 <SEP> (M) <SEP> CC50 <SEP> (M)
<tb> d4T <SEP> 3,3.10-7 <SEP> 4,7.10-5
<tb> AZT <SEP> 7,0.10-7 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 1 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> 7,4.10-5
<tb> 2 <SEP> 9,8.10-7 <SEP> 1,0. <SEP> 10-5
<tb> 3 <SEP> 4,7.10-5 <SEP> 3,2. <SEP> 10-5
<tb> 4 <SEP> 3,4.10-8 <SEP> 2,4. <SEP> 10-5
<tb> 5 <SEP> 1,4.10-8 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 6 <SEP> 7,1.10-7 <SEP> 4,2. <SEP> 10-5
<tb>
Tableau 2

<tb>
<tb> Références <SEP> CI50 <SEP> (M) <SEP> CC50 <SEP> (M)
<tb> d4T <SEP> 1,4.10-5 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> AZT <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> > <SEP> 10-4
<tb> 1 <SEP> 5,5.10-6 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 2 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 3 <SEP> ND <SEP> ND
<tb> 4 <SEP> 3,0.10-7 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> (34%)
<tb> 5 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb> 6 <SEP> @ <SEP> 2,4. <SEP> 10-5 <SEP> > <SEP> 10-4 <SEP>
<tb>
Tableau 3
La présente invention a également pour objet des préparations à usage thérapeutique anti-virale, anti-cancéreuse comprenant au moins une des molécules répondant à la formule 1 de l'invention.

Les préparations peuvent comprendre, en outre, une ou plusieurs molécules inhibant la réplication virale, par exemple dans le cas des VIH, des molécules agissant sur la protéase du VIH ou sur d'autres cibles virales ou cellulaires conduisant à une diminution de la prolifération du VIH.

Les préparations peuvent être sous forme de solutions, de dispersions dans l'eau ou tout autre solvant approprié, de gélules, de comprimés, de cachets, de suppositoires, de capsules ou de pilules. Ces préparations peuvent être administrées par voie orale, anale, bucale, parentérale, intraveineuse, intrapéritonéale et intramusculaire. Ainsi, selon le mode de réalisation, la préparation est une solution comportant au moins une molécule de l'invention.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif.

Conditions opératoires
Les chromatographies sur couches minces (CCM) sont sur plaques de silice Merck 60 F 254, 0,25 mm. Les produits sont révélés à la lumière U.V. (254 nm) et/ou par pulvérisation d'une solution de molybdénum blue suivie d'un chauffage pour les produits phosphorylés.

Les chromatographies sur colonne de gel de silice sont effectuées avec de la silice Merck 60H (granulométrie 0,040-0,063 mm, 230-400 mesh, art. 7736). Les chromatographies échangeuses de cations sont effectuées avec de la résine (Dowex 50 H+ x2,50-100 mesh). Les chromatographies échangeuses d'anions sont réalisées avec une résine (Sephadex-DEAE A-25, 40-120 micron).

Les analyses HPLC sont effectuées avec une colonne Merck Interchrom 203110 (diam. : 3,9 mm, L : mm) C18 de granulométrie sphérique de 2,5 M ou avec une colonne DEAE-5PW (diam. : 7,5 mm, L : mm), selon le type de produits à séparer. Un préfiltre est utilisé pour protéger les colonnes. Le système HPLC Merck est composé d'un injecteur Rhéodyne U6K, d'une pompe L-6200 et d'un intégrateur D-2500. Les spectres U. V. sont enregistrés à l'aide d'un détecteur U. V. L-4000. L'élution est réalisée avec différents types d'éluants (solutions méthanol/eau ou acétonitrile/eau, tampons phosphate monosodiques, bicarbonate de triethylammonium, formiate d'ammonium) selon le type de colonne (C18 ou DEAE). Le débit d'élution varie de 0,5 ml/min à 3 ml/min.

Les spectres de Résonance Magnétique Nucléaire (RMN) du 1H, 31P et 13C sont enregistrés sur un spectromètre Bruker W-200 MHz. Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm et les constantes de couplage (J) en Hertz (Hz). La multiplicité et l'allure des signaux observés par RMN sont indiquées par une (ou plusieurs) lettre (s) : (singulet), d (doublet), t (triplet), q (quadruplet), m (multiplet), 1 (signal large), td (triplet de doublet).

La spectrométrie de masse est réalisée avec un spectromètre de masse Finnigan Mat INCOS 500 E équipé d'une sonde d'introduction directe régulée en température. Pour un produit solide, on opère en ionisation chimique en mode positif pour visualiser l'ion quasimoléculaire (M+H)+ en utilisant l'isobutane comme gaz réactant.

Exemple 1 : Synthèse du 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'-dibenzylphosphate (1)
A une solution de 423 mg (3,17.10-3 mol) de N-chlorosuccinimide dans 6,5 ml de toluène anhydre, on ajoute 690 )iL (leq. ) de dibenzylphosphite. Le mélange obtenu est agité sous atmosphère inerte d'azote à température ambiante pendant 2h30. Le mélange est filtré afin d'enlever la succinimide. Le filtrat est alors concentré pour obtenir un volume final de 2 ml d'un liquide visqueux. Ce liquide est solubilisé dans 0,7 ml de pyridine.

Un bicol de 25 ml contenant 200 mg (8,9.10-4 mol) de 2',3'-didéhydro-2',3'- didésoxythymidine en solution dans 2 ml de pyridine est refroidi à -5 C. Sous flux d'azote, on ajoute goutte à goutte la solution précédente. Après 18 heures d'agitation, le mélange est traité. On lave successivement avec de l'eau distillée, une solution d'acide chlorhydrique de concentration

IN et pour finir par une solution aqueuse saturée par NaHC03. La phase organique est alors recueillie, séchée sur Na2S04 filtrée et évaporée.

La purification se fait par une chromatographie sur gel de silice avec comme phase mobile (90% CH2C12 / 10% MeOH). Les diverses fractions contenant le composé attendu sont alors rassemblées puis lyophilisées. Le composé 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'- dibenzylphosphate (1) est isolé sous forme d'une huile avec un rendement de 84%.

Caractérisations : HPLC (C18) : Tr = 8,5 min (50% H20 - 50% CH3CN) CCM : Rf = 0,58 (éluant CH2CI2 / MeOH) (92/8 v/v) RMN 1H (200 MHz, CDCl3) # : 8,21 (s, 1H, NH base) ; 7,27 (m, 10H, C6H5) ; 7,20 (s, 1H, H-6) ; 6,91 (m, 1H, H-l') ; 6,08 (d, 1H, H-3', J3 = 6 Hz) ; (d, 1H, H-2', J3 = 6 Hz) ; 4,81 (d, 4H, CH2-C6H5, J2 = 8,6 Hz) ; (m, 1H, H-4') ; (m, 2H, H-5') ; 1,70 (s, 3H, CH3 base) RMN 3ip (200 MHz, CDC13) 8 : - 0,08 Masse : (M+H+) = 485 ; = 507 ; (M+K+) = 523 Exempte 2 : Synthèse du 3'-azido-2',3'-didésoxythymidine-5'-dibenzylphosphate (2)
Le composé 3'-azido-2', 3'-didésoxythymidine-5'-dibenzylphosphate (2) a été préparé selon la méthode utilisée pour la synthèse du composé (1). Le temps de réaction pour le couplage du chlorure de dibenzylphosphite sur le 3'-azido-2', 3'-didésoxythymidine a été modifié. Il est alors de 19 heures.

Le composé 3'-azido-2', 3'-didésoxythymidine-5'-dibenzylphosphate (2) a été ainsi isolé sous forme d'une huile avec un rendement de 62%.

Caractérisations :
HPLC (C18): Tr = 11,0 min (50% H20 - 50% CH3CN)
CCM : Rf = 0,59 (éluant CH2C12 / MeOH) (95/5 v/v)
RMN 1H (200 MHz, CDCI3) # : 7,95 (s, 1H, NH base) ; 7,38 (m, 10H, C6H5) ; 7,24 (s, 1H, H-6) ; 6,10 (m, 1H, H-l') ; 5,00 (d, 4H, CH2-C6H5, J2 = 10,4 Hz) ; 4,02-3,86(m, 4H, H-3', H-4', 2H-5') ; 2,55 (m, 2H, H-2') ; (s, 3H, CH3 base)
RMN 31P (200 MHz, CDC13) 8 : - 0,11
Masse : (M+H+) = 528 ; (M+Na+) = 550

Exemple 3 : Synthèse du 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'-diéthylphosphate (3)

(McGuigan et al. Bioorg. Medicinal Chem. Letter, 1993, 3, 6, 1203-1206)
Ce composé 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'-diéthylphosphate (3) a été préparé en utilisant une méthode similaire à celle qui a été exposée précédemment.

A une solution de 425 mg (3,18.10-3 mol) de N-chlorosuccinimide dans 6 ml de toluène anhydre, on ajoute 700 L (2eq. ) de diéthylphosphite. Le mélange obtenu est agité sous atmosphère inerte d'azote à température ambiante pendant lh30. On filtre le mélange et le filtrat est évaporé et solubilisé dans 1 ml de pyridine.

Un bicol de 25 ml contenant 200 mg (8,9.10-4 mol) de 2',3'-didéhydro-2',3'- didésoxythymidine (d4T) en solution dans 2 ml de pyridine est refroidi à -10 C. On ajoute goutte à goutte la solution précédente. Après 4h30 d'agitation il n'y a plus de trace de d4T. On additionne 10 ml d'eau distillée. Ce mélange réactionnel est évaporé et l'on obtient une huile de couleur jaune. Elle est mise en solution dans 10 ml d'eau distillée et on l'extrait avec (3 x 10 ml) de chloroforme. La phase organique est alors recueillie, séchée sur Na2S04 puis filtrée et évaporée.

La purification se fait par une chromatographie sur gel de silice avec comme phase mobile (90% CH2CI / 10% MeOH). Les diverses fractions contenant le composé attendu sont alors rassemblées puis lyophilisées. Le composé 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'- diéthylphosphate (3) est isolé sous forme d'une huile avec un rendement de 92%.

Caractérisations : HPLC (C18) : Tr = 8,7 min (60% H20 - 40% CH3CN) CCM : Rf = 0,50 (éluant CH2C12 / MeOH) (92/8 v/v) RMN 1H (200 MHz, CDCI3) 8 : 7,86 (s, 1H, NH base) ; (s, 1H, H-6) ; (m, 1H, H-l') ; 6,26 (d, 1H, H-3', J3 = 6 Hz) ; (d, 1H, H-2', J3 = 6 Hz) ; (m, 1H, H-4') ; (m, 2H, H-5') ; 4,10 et 4,08 (2q, 4H, CH2-CH3) ; 1,90 (s, 3H, CH3 base) ; 1,28 et 1,26 (2t, 6H, CH3-CH2)
RMN 31P (200 MHz, CDC13) 8 : - 0,30 Masse : (M+H+) = 361 ; = 383
Exemple 4 : Synthèse du 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'-benzyl H-phosphonate (4)
Une solution de 628 L (2,84.10-3 mol) de dibenzylphosphite dans 10 ml de toluène anhydre est agité sous atmosphère inerte d'azote. On ajoute 318 mg (leq. ) de 1,4-diazabicyclo- [2. 2.2]octane (DABCO). Le mélange est chauffé à reflux pendant 3h30. On évapore le solvant et le résidu obtenu est solubilisé dans une solution aqueuse d'acide chlorhydrique à 5%. On extrait avec du dichlorométhane (2 x 10 ml) et la phase organique est séparée de la phase aqueuse qui contient le sel de N-benzyl-N-méthyl morpholinium. La phase organique recueillie est séchée sur

Na2S04, filtrée puis amenée à sec pour donner avec un rendement de 74%, l'intermédiaire (acide O-Benzyl-H-phosphonate) sous la forme d'une huile et utilisé tel quel.

A une solution de 258 mg (1,5.10-3 mol) d'acide O-Benzyl-H-phosphonate dans du toluène anhydre maintenue à une température de 0 C, on additionne goutte à goutte et sous flux d'azote, 262 (iL (3,0.10-3 mol) de chlorure d'oxalyle dans 5 L de diméthylformamide. L'agitation est maintenue 45 minutes et le mélange réactionnel est laissé revenir à température ambiante. Le précipité formé lors de la réaction est ensuite filtré et le filtrat est amené à sec. Le chlorure de l'acide O-Benzyl-H-phosphonate est alors mis en solution dans 2,5 ml de pyridine et agité dans un bain de glace. On ajoute sous flux d'azote, 112 mg (0,5.10-3 mol) de 2', 3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine dans 4 ml de pyridine. Ce mélange est agité 4 heures à température ambiante.

Après évaporation, le mélange réactionnel est passé sur une colonne de gel de silice (90% CH2C12/ 10% CH30H). Les fractions correspondantes au composé 2',3'-didéhydro-2',3'didésoxythymidine-5'-benzyl H-phosphonate (3) sont alors rassemblées, évaporées et purifiées de nouveau sur HPLC C18 (60% H20 / 40% CH3CN). Le 2',3'-didéhydro-2',3'didésoxythymidine-5'-benzyl H-phosphonate (4) est alors isolé sous la forme d'une huile avec un rendement de 56%.

Caractérisations : HPLC (Cig) : Tr = 5,8 min (60% H20 - 40% CH3CN) CCM :Rf = 0,40 (éluant CH2C12 / MeOH) (92/8 v/v) RMN IH (200 MHz, CDC13) 8 : 8,45 (s, 1H, NHbase) ; 7,32 (ls, 5H, C6H5) ; 7,18 (s, 1H, H-6) ; 7,00 (m, 1H, H-l') ; 6,20 (d, 1H, H-3', J3 = 6,2 Hz) ; 5,82 (d, 1H, H-2', J3 = 6,2 Hz) ; 5,10 (d, 2H, CH2-C6H5, J2 = 11,6 Hz) ; (m, 1H, H-4') ; 4,16 (d, 2H, H-5', J2 = 7,1 Hz) ; 1,81 (s, 3H, CH3 base) RMN 31P (CDC13) # : 8,50 (d, JP-H = 708 Hz) Masse : (M+H+) = 379 ; (M+Na+) = 401 ; (M+K+)= 417 Exemple 5 : Synthèse du 3'-azido-2',3'-didésoxythymidine-5'-benzyl H-phosphonate (5)
Ce composé 3'-azido-2',3'-didésoxythymidine-5'-benzyl H-phosphonate (5) a été préparé en utilisant la même méthode que celle utilisée pour la synthèse du composé 2',3'-didéhydro- 2', 3'-didésoxythymidine-5'-benzyl H-phosphonate (4) exposée précédemment.

Le 3'-azido-2',3'-didésoxythymidine-5'-benzyl H-phosphonate (5) est alors isolé sous forme d'une huile avec un rendement de 52%.

Caractérisations : HPLC (Cig) : Tr = 5,6 min (60% H20 - 40% CH3CN)
CCM : Rf = 0,48 (éluant CH2C12 / MeOH) (95/5 v/v)

RMN IH (200 MHz, CDC13) # : 8,10 (s, 1H, NH base) ; 7,35 (m, 5H, C6H5) ; 7,20 (s, 1H, H-6) ; 6,08 (m, 1H, H-l') ; 5,10 (d, 2H, CH2-C6H5, J2 = 12,4 Hz) ; (m, 2H, H-5') ; (m, 2H, H-3', H-4') ; 2,40 (m, 2H, H-2') ; 1,82 (s, 3H, CH3 base) RMN 31P (CDC13) 8 : 8,67 (d, JP-H = 890 Hz) Masse : (M+H+) = 422 ; (M+Na+) = 444 Exemple 6 : Synthèse du 2', 3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'-monophosphate, sel de triéthylamine (6).

Ce composé a été préparé selon une méthode similaire à celle décrite par Mansuri et al.

(J. Med. Chem. , 1989,32, 461-466). Les caractéristiques spectrales sont en accord avec celles décrites.

Dans un ballon de 10 ml, sous flux d'azote, on introduit 100 mg (4,46.10-4 mol) de 2',3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine et 1 ml de triméthylphosphate. Le mélange est refroidi à 0 C et agité afin d'obtenir un mélange homogène. On additionne ensuite par fractions 160 L (4 eq. ) de POCl3 et l'agitation est maintenue 2h30 à température ambiante. La réaction est terminée en additionnant une solution d'ammoniaque 2N. Ce mélange est alors amené à sec et le produit brut obtenu est extrait avec (3 x 10 ml) d'éther éthylique. La phase aqueuse est évaporée et le résidu est solubilisé dans 2 ml d'eau. Cette solution est purifiée en isochratique sur HPLC Ci≈avec comme phase mobile une solution de formate d'ammonium de concentration 0,15M à pH 7,3. On récupère les fractions ayant un temps de rétention de 24,6 min qui correspondent au d4T-monophosphate sous forme de sel d'ammonium. La solution une fois concentrée est passée sur une colonne échangeuse de cations (Dowex H+), puis éluée avec de l'eau distillée. Les fractions contenant le 2', 3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'-monophosphate sont alors neutralisées avec une solution de triéthylamine (IN). Le sel de triéthylammonium du 2', 3'-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine-5'-monophosphate (6) est obtenu avec un rendement de 56%.

Caractérisations : HPLC (Cig) : Tr = 24,6 min [HCOO-,NH4+]=0,15 M, pH = 7,3 CCM : Rf = 0,54 (éluant H20, isopropanol, NH40H 2N) (1/6/3 v/v/v) RMN 1H (200 MHz, D20) # : 7,57 (s, 1H, H-6) ; (s, 1H, H-l') ; 6,42 (d, 1H, H-3', J3 = 6 Hz) ; (d, 1H, H-2', J3 = 6 Hz) ; (m, 1H, H-4') ; 3,98 (m, 2H, H-5') ; 1,84 (s, 3H, CH3 base)

RMN 31 (D20) 8 : 0,87 Masse : (M+H+) = 303

Exemple 7 Evaluation de l'activité anti-VIH des composés sur les cellules CEM-SS La multiplication du VIH-1(souche LAI) dans les cellules CEM-SS (infectées avec 20 TCID50) est évaluée, après 5 jours de culture, par dosage de la transcriptase inverse (TI) dont l'activité traduit la présence de virus relargué dans le surnageant de culture. Les composés testés sont ajoutés après l'ajout du virus dans le milieu de culture.

L'effet toxique des composés sur les cellules CEM-SS non infectées est apprécié par la réaction colorimétrique (MTT) basée sur la capacité des cellules vivantes à réduire le bromure de 3-(4,5 diméthylthiazol-2-yl) -2,5 diphényl-tétrazolium en formazan après 5 jours d'incubation en présence de l'inhibiteur potentiel à différentes concentrations.

Les résultats sont rassemblés dans le tableau 1.

Exemple Evaluation de l'activité anti-VIH des composés sur les cellules MT4 La multiplication du VIH-1(souche HTLV IIIB) dans des cellules MT4 (cellules T4 transformées par le HTLV-1) est suivie par l'effet cytopathogène induit par le virus. Les cellules sont infectées avec une dose de VIH-1 produisant, après 5 jours de culture, une diminution de 90% du nombre de cellules vivantes. Les composés testés sont ajoutés après l'adsorption du virus dans le milieu de culture à différentes concentrations. La variabilité des cellules est mesurée par la réaction colorimétrique (MTT) basée sur la capacité des cellules vivantes à réduire le bromure de 3- (4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényl-tétrazolium en formazan, propriété due aux deshydrogénases mitonchondriales. La quantité de formazan produite (DO à 540 nm) est proportionnelle au nombre de cellules vivantes. Le pourcentage de protection des cellules infectées par le traitement avec les composés est calculé en appliquant la formule proposée par Pauwels et coll.

D0540 des cellules infectées traitées (T) - DO540 des cellules infectées Témoin (S2)
D0540 des cellules non-infectées (SI) - D0540 des cellules infectées Témoin (S2) L'effet toxique des composés sur les cellules MT4 non infectées est mesuré par la même réaction colorimétrique. La concentration cytotoxique 50% (CC50) est la concentration de composé provoquant une diminution de moitié de la D0540 par rapport à celle des cellules témoins. S'il y a lieu, la concentration du composé conférant une protection de 50% (CI50, c'est-à-dire la concentration inhibant la réplication virale de 50%) est calculée.

Les résultats sont rassemblés dans le tableau 2.

Claims

REVENDICATIONS 1 - A titre de produits industriels, les composés de formule générale (3)

0 CH3 0 HN 0 N D - O-i 1 Jk. Formule 3 dans laquelle :

G représente un groupement alkyloxy linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényloxy linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs double liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkényloxy substitué ou non, contenant une ou plusieurs double liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un résidu d'acide a aminé naturel ou non, avec la fonction N terminale libre ou protégée en particulier par un groupement Fmoc, Boc ou un dérivé trialkylsilyle.

A représente un atome d'hydrogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyle substitué ou non, contenant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; groupement cycloalkényle substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène.

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B représente un atome d'hydrogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (Cl-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyle substitué ou non, contenant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkényle substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène.

D représente un atome d'hydrogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (Cl-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkyle substitué ou non, contenant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement cycloalkényle substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène.

2 - A titre de produits industriels, les composés de formule générale (4)

0 K G-f - 0 B Formule 4 dans laquelle :

A, B et G tels qu'ils ont été définis dans la revendication 1.

K représente une base nucléique naturelle purique ou pyrimidique, adénine, hypoxanthine, guanine, thymine, cytidine, ces bases pouvant être libres ou protégées sur les groupements fonctionnels portés par ces bases, une base naturelle modifiée, en particulier, par un ou des atomes de fluor, un ou des groupements trifluorométhyle, un ou des atomes d'halogène, un ou des

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groupements cyclopropylamine, cyclobutylamine, cyclopentylamine, cyclohexylamine, une ou des fonctions oxo, une ou des fonctions amine ; représente une pseudo-base purique avec soit le cycle à six chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles, soit le cycle à cinq chaînons ouvert et portant diverses modifications fonctionnelles, le couplage entre l'ose ou son analogue s'effectuant entre le C1 de l'ose ou de son analogue et l'atome d'azote de la base modifiée analogue de l'azote Ni pour les bases pyrimidiques et N7 des bases puriques.

3 - A titre de produits industriels, les composés de formule générale (5)

o CH3 HN p/'N G-'-<0 H 0 N Q Formule 5 dans laquelle :

D et G tels qu'ils ont été définis dans la revendication 1.

L, M, N et Q représentent un atome d'hydrogène ; un atome d'halogène ; un groupement alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un groupement azido, isonitrile, méthylisonitrile ; un groupement NR7R8; un groupement de type SR7 avec :

R7 représente un atome d'hydrogène ; un radical alkyle linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical alkényle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical alkynyle linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs triples liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical alkyloxy linéaire ou ramifié (C1-C24) substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical alkényloxy linéaire ou ramifié (C2-C24) substitué ou non, contenant une ou plusieurs doubles liaisons, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes

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d'halogène ; un radical aryle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical arylméthyle substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical aryloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical arylméthyloxy substitué ou non, possédant un ou plusieurs hétéroatomes, un ou plusieurs atomes d'halogène ; un radical formé d'un ou de plusieurs cycles à trois, cinq ou six liaisons possédant un ou plusieurs hétéroatomes dans sa structure, un ou plusieurs atomes d'halogène, une ou plusieurs doubles liaisons et diversement substitué ou non substitué.

Rsreprésente un atome d'hydrogène ; un atome d'azote libre ou substitué une ou deux fois par un radical R7 tel qu'il a été défini plus haut ; un radical R7.

4 - A titre de produits industriels, les composés de formule générale (6)

0 Il K 0 H Formule 6 dans laquelle :

G tel qu'il a été défini dans la revendication 1.

K tel qu'il a été défini dans la revendication 2.

L, M, N et Q tels qu'ils ont été définis dans la revendication 3.

5- A titre de produits industriels, les composés de formule générale (7)

<tb>

<tb> 0

<tb> K

<tb>

G-I - X

<tb>

<tb> Formule <SEP> 7

<tb>

dans laquelle :

A et B tels qu'ils ont été définis dans la revendication 1.

G tel qu'il a été défini dans la revendication 1.

K tel qu'il a été défini dans la revendication 2.

X représente un hétéroatome de préférence un oxygène ou un soufre ; un groupement NR7 ; un atome de carbone porteur de deux atomes d'hydrogène ; un atome de carbone porteur de deux

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atomes d'halogène identiques ou différents ; un groupement C(Rg)2 ; un atome de carbone porteur d'un atome d'halogène et d'un groupement Rg ; un atome de carbone porteur d'un groupement Rg et dans ce cas il existe une double liaison entre les carbones 4 et 5 ; atome de carbone porteur d'un hydrogène et un groupement hydroxyle OH, akyloxy OR7.

R7 et R8 tels qu'ils ont été définis dans la revendication 3.

6- A titre de produits industriels, les composés de formule générale (8)

o L N Q Formule 8 dans laquelle :

G tel qu'il a été défini dans la revendication 1.

K tel qu'il a été défini dans la revendication 2.

L, M, N et Q tels qu'ils ont été définis dans la revendication 3.

X tel qu'il a été défini dans la revendication 5.

7- A titre de produits industriels, les composés de formule générale (9)

0 K G-r-1-X H Formule 9 dans laquelle :

G tel qu'il a été défini dans la revendication 1.

K tel qu'il a été défini dans la revendication 2.

N et Q tels qu'ils ont été définis dans la revendication 3.

X tel qu'il a été défini dans la revendication 5.

Y représente un hétéroatome de préférence un oxygène ou un soufre.

8 - A titre de produits industriels, les composés de formules générales (3), (4), (5), (6), (7), (8) et (9) dans lesquelles le groupement G peut être un radical polyhalogénoalkyloxy éventuellement substitué ou ramifié.

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9 - Composés selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisés en ce qui sont des produits intermédiaires dans la préparation de dérivés di- et tri-phosphorylés.

10 - A titre de produits industriels entrant dans la composition de préparations à usage thérapeutique antivirale, anticancéreuse ou autre. Les préparations peuvent être sous forme de solutions, de dispersions dans un solvant approprié, de gélules, de comprimés, de cachets, de suppositoires, de capsules ou de pilules.