FR2777904A1 - Cassette ainsi que procede et appareil d'analyse de l'air l'utilisant - Google Patents
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Abstract
La cassette comporte un corps (2) présentant une grille (7) et une paroi annulaire (8) orientée transversalement à cette grille et l'entourant, et comportant une couche (3) de gélose ainsi qu'un film (4) étanche souple tendu sur une surface d'extrémité de la paroi annulaire (8) et délimitant une surface d'extrémité de la couche de gélose (3).Selon le procédé, on frappe la surface de la couche de gélose (3) délimitée à la fabrication par le film tendu (4), avec des jets d'air, pour impacter sur cette surface les micro-organismes présents dans l'air.L'appareil comporte un support de positionnement commun à un crible pour former les jets d'air et au corps (2) de la cassette (1).
Description
L'invention a trait d'une manière générale à la détection des
micro-organismes tels que les bactéries, levures ou moisissures.
On sait que pour effectuer cette détection, on utilise des récipients contenant une couche de gélose pour recevoir des micro-organismes issus de l'environnement que l'on souhaite contrôler, le récipient étant ensuite mis à
incuber à la température et pendant le temps requis pour permettre aux micro-
organismes reçus de se développer sous forme de colonies visibles à l'oeil nu,
de façon qu'on puisse les compter et les identifier.
La collecte des micro-organismes s'effectue, suivant le degré de précision recherché, de façon passive, par exemple avec une boîte de Pétri qui est laissée ouverte quelques heures avec la couche de gélose exposée à l'air afin de recueillir par sédimentation des micro- organismes, ou alors de façon
active, c'est-à-dire par dépôt dans des conditions connues de micro-
organismes issus d'un échantillon de volume prédéterminé du milieu que l'on
souhaite contrôler.
L'invention vise à accroître la précision de la détection, en particulier
dans le cas d'une collecte active.
Elle propose à cet effet une cassette pour la culture de micro-
organismes, comportant un corps présentant une grille et une paroi annulaire orientée transversalement à ladite grille et l'entourant, et comportant une couche de gélose orientée parallèlement à ladite grille et l'enrobant, caractérisée en ce qu'elle comporte un film étanche souple tendu sur une surface d'extrémité de ladite paroi annulaire et délimitant une surface
d'extrémité de ladite couche de gélose.
La mise en place de cette couche dans la cassette se fait en chauffant de la gélose pour la rendre liquide puis en la coulant dans la cuvette formée par le corps et par le film souple étanche tendu, depuis le côté du corps qui est opposé à celui o se trouve le film, une quantité suffisante de gélose
étant versée pour que la grille soit recouverte.
La surface d'extrémité de la couche de gélose qui est délimitée par le film est prévue pour recevoir les micro-organismes issus de l'échantillon à analyser, le film étant bien entendu enlevé avant de procéder au dépôt des micro-organismes. Par rapport à la cassette antérieure décrite dans le brevet français 2605330, o c'est un couvercle en contact étanche avec une surface d'extrémité de la paroi annulaire qui délimite la couche de gélose, la présente cassette offre l'avantage de bénéficier de l'excellente précision géométrique que l'on peut obtenir d'un film tendu, et donc de bénéficier d'une excellente reproductibilité de la géométrie de la surface de la couche de gélose délimitée
par le film.
L'utilisation de cette surface pour procéder au dépôt des micro-
organismes issus de l'échantillon permet, grâce à cette reproductibilité, d'éviter que d'une analyse à l'autre, il y ait dans les conditions de dépôt des variations
susceptibles d'affecter la précision des mesures.
En outre, cette reproductibilité simplifie considérablement la tâche de
l'opérateur lorsque la cassette est utilisée dans un appareil d'analyses micro-
biologiques de l'air du type o l'échantillon d'air est aspiré au travers d'un crible présentant une multitude de trous calibrés de sorte qu'une multitude de fins jets d'air vient frapper l'une des surfaces d'extrémité d'une couche de gélose afin que les micro-organismes présents dans l'échantillon d'air se fixent sur cette
couche de gélose.
En effet, I'utilisation d'une cassette telle qu'exposée ci-dessus dont la surface de la couche de gélose délimitée à la fabrication par le film souple sert de surface frappée par les fins jets d'air permet, du fait de la précision de la géométrie de cette surface, d'éviter l'étape de réglage de l'écartement entre la surface qui doit être frappée et le crible, la simple mise en place de la cassette et du crible étant suffisante pour obtenir les caractéristiques requises pour cet écartement. On notera que la suppression du réglage d'écartement augmente la fiabilité des résultats, puisque ce réglage était délicat, et donc source d'erreurs
de mesures.
Selon des caractéristiques préférées, la cassette comporte un couvercle amovible adapté à coincer ledit film entre la surface externe de ladite
paroi annulaire et une surface interne d'une paroi latérale dudit couvercle.
L'emmanchement du couvercle sur la paroi annulaire du corps o le film a été préalablement positionné procure une mise en tension du film du fait que la surface interne de la paroi latérale du couvercle glisse sur le film au-delà de la surface d'extrémité de la paroi annulaire du corps et tend donc à entraîner le film le long de la surface externe de cette paroi annulaire, de sorte que le film
est automatiquement tendu du simple fait de l'emmanchement du couvercle.
On notera par ailleurs, d'une façon générale, que la présence du couvercle est favorable à la conservation de la couche de gélose puisque le
couvercle maintient la tension du film et lui offre une protection mécanique.
De préférence, ledit couvercle est également adapté à coincer ledit film entre ladite surface d'extrémité de ladite paroi annulaire du corps et une
deuxième surface interne dudit couvercle.
Le fait que le film soit ainsi coincé à la fin du mouvement d'emmanchement, o il est tendu, est favorable à l'étanchéité entre le film et la
surface d'extrémité de la paroi annulaire du corps.
De préférence, ledit couvercle comporte un flasque de fermeture disposé à distance dudit film lorsque ladite deuxième surface interne de la paroi latérale du couvercle coince ledit film contre ladite surface d'extrémité de ladite
paroi annulaire du corps.
Ainsi, après avoir enlevé le film et déposé les micro-organismes sur la surface d'extrémité de la couche de gélose que le film délimitait initialement, le couvercle peut être emmanché directement jusqu'en butée pour procéder à la mise en culture des micro-organismes, I'espace nécessaire entre la surface de la couche de gélose et le flasque étant directement prévu, ce qui est beaucoup plus commode que la cassette antérieure précitée o des mesures
spéciales doivent être prises pour permettre l'existence de cet espace.
De préférence, ledit couvercle comporte au moins un trou permettant une communication entre l'intérieur et l'extérieur du couvercle lorsque celui-ci
est emmanché sur ledit corps.
Ce ou ces trou(s) permet(tent) la pénétration du gaz de stérilisation lors de la fabrication, et les échanges gazeux nécessaires entre l'intérieur et
l'extérieur du couvercle lors des cultures (aérobies ou anaérobies).
De préférence, ledit corps et ledit couvercle sont chacun en matière
plastique moulée, ledit couvercle étant plus souple que ledit corps.
La différence de dureté entre le corps et le couvercle favorise leur coopération et leur permettent de tendre et de coincer le film dans les
meilleures conditions.
Selon d'autres caractéristiques préférées, notamment pour des
raisons de simplicité et de commodité, ledit film est en matière plastique.
Selon d'autres caractéristiques préférées, la cassette comporte un fond amovible adapté à s'emmancher sur ledit corps à l'opposé dudit film pour délimiter une chambre étanche sur laquelle donne la surface d'extrémité de
ladite couche de gélose qui est opposée à celle délimitée par ledit film.
Cette chambre, grâce à son caractère étanche, peut se mettre en surpression par rapport à la pression extérieure qui est celle prévue pour régner sur la surface d'extrémité de la couche de gélose initialement délimitée
par le film.
Cette surpression est favorable, ainsi qu'il sera expliqué ci-après, à
la réhomogénéisation ou à la réhydratation de la couche de gélose.
De préférence, pour des raisons pratiques de fabrication et de commodité d'obtention de l'étanchéité: - ledit fond s'emmanche extérieurement sur ladite paroi annulaire dudit corps et comporte une surface interne venant en contact avec la surface d'extrémité de ladite paroi annulaire située du côté du fond; et/ou - ledit corps et ledit fond sont en matière plastique moulée, ledit fond
étant plus souple que ledit corps.
Selon d'autres caractéristiques préférées, ledit corps comporte, entre ladite paroi annulaire et ladite grille, une couronne pleine présentant vers
I'intérieur une surépaisseur formant un bourrelet.
Ce bourrelet en surépaisseur, du fait qu'il est présent vers l'intérieur, reste enrobé par la couche de gélose, même lorsque celle-ci a subi un certain retrait qui a eu pour effet de décoller son pourtour de la paroi annulaire du corps. Etant donné que le bourrelet reste enrobé et que la couronne est pleine, il n'y a pas de passage possible entre le pourtour de la couche de gélose et le corps, de sorte que les espaces situés à l'intérieur du corps respectivement de part et d'autre de la couche de gélose sont séparés de manière étanche. Cela rend possible l'existence de la chambre étanche
susmentionnée.
De préférence, ladite couronne ne présente aucune saillie du côté
qui regarde le film.
Cette absence de saillie du côté opposé à celui par lequel on coule la couche de gélose permet à celle-ci de se disposer correctement entre le film
et la couronne.
Selon d'autres caractéristiques préférées, pour faciliter le comptage des colonies une fois la culture effectuée, ladite grille est à mailles carrées, et
éventuellement d'une couleur contrastant avec ladite couche de gélose.
L'invention vise également, sous un deuxième aspect, un procédé d'analyse de l'air caractérisé en ce qu'il comporte l'utilisation d'une cassette telle qu'exposée ci-dessus, avec une opération de frappe par des jets d'air de ladite surface d'extrémité de la couche de gélose délimitée initialement par ledit film. Ainsi qu'expliqué ci-dessus, la précision que permet d'obtenir le film de la cassette selon l'invention est particulièrement favorable à la simplicité et à la précision de l'opération de frappe. Selon des caractéristiques préférées, le procédé selon l'invention comporte, après ladite opération de frappe, une opération de dépôt d'un volume prédéterminé de solution réhydratante sur la surface d'extrémité de
ladite couche de gélose opposée à celle délimitée initialement par ledit film.
Le dépôt de cette solution permet de réhydrater, au travers de la
couche de gélose, la surface d'extrémité initialement délimitée par le film, c'est-
à-dire celle qui a été frappée, et donc desséchée, par les jets d'air.
De préférence, on effectue ladite opération de dépôt d'un volume
prédéterminé de solution réhydratante avec ladite cassette qui est retournée.
La solution réhydratante progresse ainsi au travers de la couche de gélose par gravité. On notera, ainsi qu'expliqué ci-après, que la réhomogénéisation et que la réhydratation s'effectuent plus rapidement lorsqu'il y a en outre une légère surpression du côté de la couche de gélose o l'on
dépose la solution réhydratante.
L'invention vise également, sous un troisième aspect, un appareil d'analyse de l'air comportant un crible amovible présentant une paroi dans laquelle sont pratiquées une multitude de fines perforations pour former chacune un jet d'air venant frapper une surface d'une couche de gélose d'un récipient mis en place dans ledit appareil, caractérisé en ce que ledit récipient est formé par une cassette telle qu'exposée ci- dessus, la surface frappée étant la surface d'extrémité de la couche de gélose initialement délimitée par ledit film, et en ce que ledit appareil comporte un support de positionnement
commun audit crible et au corps de ladite cassette.
Ce support commun, et non des supports distincts susceptibles d'avoir un positionnement relatif variable en raison des tolérances de fabrication, permet d'avoir un positionnement relatif précis et répétitif du crible par rapport au corps, et donc du crible par rapport à la surface de la couche de gélose initialement délimitée par le film, puisque c'est sur le corps que le film
est tendu.
De préférence, pour des raisons pratiques d'encombrement et de circulation d'air dans l'appareil, le support commun comporte des encoches
pour loger le bout d'oreilles externes qui comporte ledit corps.
De préférence, lesdites oreilles sont perforées, afin qu'elles
perturbent le moins possible la circulation de l'air vers la turbine d'aspiration.
L'exposé de l'invention sera maintenant poursuivi par la description
d'un exemple de réalisation, donnée ci-après à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés. Sur ceux-ci: - la figure 1 est une vue en élévation-coupe prise dans une cassette conforme à l'invention - la figure 2 est une vue de dessus de cette cassette dans laquelle le couvercle, le film et la couche de gélose ne sont pas représentés; - la figure 3 est une vue en élévation-coupe de la cassette, en position retournée et sans le fond - la figure 4 est une vue en élévation-coupe montrant cette cassette, dont le couvercle et le film ont été enlevés, en place dans un appareil de prélèvement d'un échantillon d'air et d'impact sur la couche de gélose des micro- organismes présents dans cet échantillon; - la figure 5 est une vue partielle en élévation-coupe montrant la coopération des oreilles de la cassette avec cet appareil; et - la figure 6 est une vue en élévation- coupe montrant cette cassette à nouveau munie de son couvercle, en position retournée, avec son fond enlevé pour déposer sur la couche de gélose un volume prédéterminé de
solution réhydratante.
La cassette 1 illustrée comporte un corps 2, une couche de gélose 3,
un film 4, un couvercle 5 et un fond 6.
Le corps 2 est en matière plastique moulée relativement rigide. Il présente une grille 7 et une paroi annulaire 8 orientée transversalement à la
grille 7 et l'entourant.
La grille 7 est formée par des brins à section circulaire, ainsi qu'on le voit notamment sur la figure 1 et elle est à mailles de forme carrée, c'est-à-dire à quatre côtés ayant chacun la même longueur, ainsi qu'on le voit sur la figure 2. La périphérie de la grille 7 est reliée à la paroi 8 par l'intermédiaire d'une couronne pleine 9 présentant vers l'intérieur, c'est-à-dire vers la grille 7, une surépaisseur formant un bourrelet 10, cette surépaisseur étant ici présente uniquement du côté qui regarde le fond 6 (il n'y a aucune saillie du côté qui
regarde le film 4).
La paroi annulaire 8 est d'épaisseur constante et a la forme générale d'un tube à section circulaire relativement court. Entre sa surface d'extrémité du côté du film 4 et la couronne 9, la paroi 8 s'étend sur une longueur prédéterminée correspondant sensiblement à la moitié de l'épaisseur prévue pour la couche 3 de gélose, alors qu'elle s'étend sur une longueur à peu près deux fois plus importante entre la couronne 9 et sa surface d'extrémité située
du côté du fond 6.
Des oreilles saillantes 11 s'étendent transversalement à partir de la surface externe de la paroi 8, la distance entre les oreilles 11 et la surface d'extrémité de la paroi 8 située du côté du film 4 étant précisément identique pour chacune des oreilles. Des perforations sont pratiquées dans chacune des oreilles 11. Ces dernières sont ici au nombre de quatre qui présentent chacune
trois perforations.
Le film 4 est en matière plastique souple et étanche. Il a initialement la forme d'un carré aux angles arrondis, de côté largement supérieur au diamètre de la surface externe de la paroi 8. Une fois le couvercle installé, les
coins du film forment des protubérances qui en facilitent la préhension.
Le couvercle 5 est en matière plastique moulée semi-rigide, et donc plus souple que la matière de corps 8. Il a la forme générale d'une cuvette dont la paroi latérale est constituée par deux tronçons tubulaires à section circulaire 12A et 12B et par un tronçon annulaire 13 orienté transversalement aux
tronçons 12A et 12B entre lesquels il est disposé.
Le tronçon 12A présente un diamètre interne très légèrement supérieur à celui du diamètre externe de la paroi 8 de sorte que le tronçon 12A peut être emmanché avec un certain serrage autour de la paroi 8 avec le film 4
interposé entre cette paroi et le tronçon 12A.
Le tronçon 12B a un diamètre interne plus petit que celui du tronçon 12A, les surfaces internes des tronçons 12A et 12B étant raccordées par une surface annulaire fournie par le tronçon 13, le dimensionnement de cette surface annulaire correspondant à celui de la surface d'extrémité de la paroi 8 située du côté du film 4, de sorte que celui-ci puisse être appliqué intimement sur cette surface d'extrémité de la paroi 8 lorsque le couvercle 5 est enfoncé
sur le corps 8 jusqu'en butée.
Le couvercle 5 est fermé par un flasque 14 formé par une paroi plane se raccordant par sa périphérie à la surface interne du tronçon 12B de la paroi latérale, le flasque 14 étant orienté transversalement à ce tronçon. Le flasque 14 est disposé à une distance relativement importante de l'extrémité du tronçon 12B qui se raccorde au tronçon 13. Le tronçon 12B présente une portion située entre le flasque 14 et son extrémité libre dans laquelle sont ménagés des créneaux 15. Quatre petits trous 16 sont pratiqués dans le flasque 14 à sa jonction avec le tronçon 12B de la paroi latérale,
respectivement au niveau du centre de chacun des créneaux 15.
Le fond 6 est en matière plastique moulée semi-rigide, de même que le couvercle 5. Il a comme lui la forme générale d'une cuvette dont la paroi latérale est constituée par deux tronçons tubulaires 17A et 17B à section circulaire et par un tronçon annulaire 18 orienté transversalement aux tronçons
17A et 17B entre lesquels il est disposé.
Le diamètre interne du tronçon 17A correspond au diamètre externe de la paroi 8 de sorte que le tronçon 17A puisse s'emmancher sur la paroi 8 avec sa surface interne qui est en contact intime avec la surface externe de la
paroi 8.
Des créneaux sont ménagés à l'extrémité du tronçon 17A pour permettre de loger les oreilles 11, ainsi qu'on le voit sur la droite de la figure 1 et sur la figure 5. Le diamètre interne du tronçon 17B est plus petit que celui du tronçon 17A, les surfaces internes des tronçons 17A et 17B étant reliées par une surface annulaire orientée transversalement aux surfaces internes des tronçons 17A et 17B, cette surface annulaire étant fournie par le tronçon 18 et étant prévue pour entrer en contact intime avec le surface d'extrémité de la
paroi 8 du côté du fond 6.
Un flasque 19 à centre bombé du côté intérieur ferme le fond 6, ce flasque se raccordant transversalement à l'extrémité du tronçon 17B opposé à
celle par laquelle celui-ci se raccorde au tronçon 18.
Lorsque le fond 6 est enfoncé jusqu'en butée sur le corps 8, c'est-à-
dire avec les oreilles 11 logées dans les créneaux du tronçon 17A et le tronçon
18 en butée sur la paroi 8, il y a étanchéité entre le corps 2 et le fond 6.
Il est également possible de positionner le couvercle 6 de sorte que ce ne soit plus les créneaux situés au bout du tronçon 17A qui sont en regard des oreilles 11, mais les redents situés entre les créneaux, de sorte que le fond 6 s'enfonce sur le corps 2 seulement jusqu'à une position o l'extrémité libre
des redents du tronçon 17A vient porter sur les oreilles 11.
Dans cette position, les petites fentes 20 ménagées extérieurement dans la paroi 8 sur une certaine longueur à partir de son extrémité libre côté fond 6, ne sont plus entièrement masquées par le fond 6 (le tronçon 17A entoure la paroi 8 sur une distance moins grande que la longueur des fentes ) de sorte qu'il y a une communication avec l'extérieur par l'intermédiaire des
fentes 20.
On va maintenant expliquer comment l'on fabrique la cassette 1 et
comment l'on procède à sa stérilisation.
On dispose tout d'abord le film 4 sur la surface d'extrémité correspondante de la paroi 8, puis l'on procède à l'emmanchement de ce couvercle sur le corps 2, ce qui procure une mise en tension du film 4 du fait que la surface interne du tronçon 12A de la paroi latérale du couvercle 5 glisse sur le film au-delà de la surface d'extrémité de la paroi 8 et tend donc à entraîner le film le long de la surface externe de cette paroi, le film étant pris, à la fin du mouvement d'emmanchement, entre la surface externe de la paroi 8 et la surface interne du tronçon 12A et entre la surface d'extrémité de la paroi 8 et la surface annulaire qui se trouve entre les surfaces internes des tronçons 12A et 12B. Grâce aux petits trous 16, on évite qu'il y ait entre les deux côtés du film
4 une différence de pression susceptible de le déformer.
Le film 4, qui est ainsi tendu et coincé par le couvercle 5, est en
contact étanche avec la paroi 8.
On emmanche ensuite le fond 6 dans la position o ce sont les redents du tronçon 17A qui viennent porter sur les oreilles 11, c'est-à-dire dans
la position o les petites fentes 20 ne sont pas entièrement masquées.
On place alors la cassette dans une enceinte contenant un gaz de stérilisation tel que l'ETO, ce gaz pénétrant à l'intérieur de la cassette par les
trous 16 du couvercle 5 et par les fentes 20 de la paroi 8.
Une fois la stérilisation effectuée, on se place en conditions aseptiques, on enlève le fond 6, on retourne l'ensemble corps 2, film 4 et couvercle 5 et on le pose sur la sorte de trépied que forme la partie du tronçon 12B située au-delà du flasque 14, puis on coule de la gélose, préalablement chauffée pour la rendre liquide, dans la cuvette formée le corps 8 et par le film 4, jusqu'à recouvrir la grille 7, comme montré sur la figure 3, et après refroidissement de la gélose on positionne le fond 6 pour que les créneaux du tronçon 17A soient en regard des oreilles 11 et on enfonce complètement le
fond 6.
La cassette 1 est alors dans la configuration montrée sur la figure 1.
On notera que dans cette configuration, la couche de gélose 3 est gardée
complètement stérile puisqu'elle est préservée de tout contact avec l'extérieur.
Du fait que le bourrelet 10 de la couronne 9 ne présente aucune saillie du côté qui regarde le film 4, ce bourrelet ne gêne pas le remplissage de
l'espace situé entre le film 4 et la couronne 9 lors de la coulée de la gélose.
Le bourrelet 10, du fait qu'il est en saillie du côté interne de la couronne 9, reste entièrement enrobé par la couche de gélose 3, même si celle-ci subit un retrait ayant pour effet de décoller son pourtour de la paroi
annulaire 8 du corps 2.
Ainsi, un tel retrait ne provoque pas de rupture d'étanchéité à l'intérieur du corps 2 entre les espaces situés de part et d'autre de la couche de
gélose 3.
Grâce à cette étanchéité et à celle existant entre le corps 2 et le couvercle 6, I'espace que regarde la surface d'extrémité de la couche de gélose 3 opposée à celle délimitée par le film 4, forme une chambre étanche
dans laquelle peut exister une certaine surpression, ainsi qu'expliqué ci-après.
La cassette 1 a été conçue pour effectuer l'analyse d'un échantillon d'air avec l'aide de la machine 21 montrée partiellement sur la figure 4, qui sert à déposer les micro-organismes présents dans l'échantillon d'air sur la surface
de la couche de gélose 3 délimitée par le film 4.
La machine 21 comporte un manchon aérodynamique 22 sur lequel est monté un déflecteur 23 de sorte qu'il existe autour du déflecteur 23 un
conduit 24 d'écoulement d'air vers une turbine d'aspiration non représentée.
Un crible amovible 25 se monte sur le bout du manchon 22 qui est muni d'encoches 22' (figure 5) pour recevoir le bout des oreilles d'une cassette 1 dont le couvercle 5 et le film 4 ont été enlevés, le crible 25 présentant une paroi centrale 26 située exactement en regard de la surface de la couche de gélose 3 qui était délimitée par le film 4, une multitude de fines perforations
étant pratiquée dans la paroi 26.
Lorsque fonctionne la turbine (non représentée) de l'appareil 21, I'air extérieur est aspiré, comme montré par les flèches, à travers les perforations de la paroi 26 puis s'écoule vers la turbine dans le conduit 24, le bout du
déflecteur 23 étant obturé par le fond 6.
L'écoulement d'air entre la couche de gélose 3 et la paroi 26 se fait sous la forme d'une multitude de fins jets correspondant chacun à une
perforation. Ces jets d'air viennent frapper la couche de gélose 3, les micro-
organismes présents dans l'air qui frappe ainsi la couche de gélose se fixant sur celle-ci par impaction. On observera que l'écartement entre la couche de gélose 3 et la paroi perforée 26 du crible 25 a des caractéristiques géométriques qui se répètent d'une cassette à l'autre, l'utilisation du film 4 pour conformer la surface de la couche 3 permettant de fixer avec précision le positionnement de cette surface par rapport au corps 2, le positionnement de celui-ci par rapport à la paroi 26 étant répété d'une cassette à l'autre par la mise en place de la cassette sur le manchon 22 à l'aide des oreilles 11, de sorte que d'une cassette à l'autre, le débit d'air aspiré pour chaque tour de la turbine reste sensiblement le même, la vitesse de frappe sur la couche de gélose 3 restant par conséquent constante pour une même vitesse de rotation de la turbine, de même que le volume d'air aspiré reste constant pour un même nombre de tours effectués par
la turbine.
La coopération entre les oreilles 11 de la cassette 1 et leurs encoches de réception 22' situées au bout du manchon 22 procure à la fois un positionnement axial et un centrage de la cassette 1, seul le bout des oreilles
11, dont l'extrémité libre est incurvée, étant reçu dans ces encoches.
Les oreilles 11 sont alors disposées en travers du conduit 24, mais les perforations, ici au nombre de trois, qui y sont pratiquées, permettent le
passage de l'air vers la turbine.
La coopération entre la cassette 1 et le déflecteur 23 se fait avec un certain jeu, suffisant pour obturer le déflecteur, le couvercle 6 s'y emmanchant intérieurement, le diamètre externe du tronçon 17B étant plus petit que le
diamètre interne du bout du déflecteur 23.
Une fois que le volume d'air requis a été aspiré, on enlève le crible 25 de la machine 21, on remet en place le couvercle 6 de la cassette 1 et on
récupère celle-ci.
Il n'y a plus qu'a effectuer, de façon classique, la culture des micro-
organismes impactés sur la couche 3, en mettant la cassette dans un incubateur chauffé à une température prédéterminée telle que 32,5 C 2, 5 C pendant le temps voulu, par exemple deux jours, la cassette 1 permettant, grâce aux trous 16 du couvercle 5, les échanges gazeux, notamment aérobies,
nécessaires au développement des colonies.
La cassette 1 est de préférence retournée pour effectuer la culture, enétant posée sur la sorte de trépied formé par la portion du tronçon 12B de paroi latérale qui s'étend au-delà du flasque 14, les créneaux 15 permettant la circulation de l'air, le fait que le flasque 14 soit situé en-dessous de la couche de gélose 3 (et non au-dessus) évitant de façon bien connue les phénomènes
de condensation sur le couvercle.
L'espace 27 délimité par la couche de gélose 3, la paroi 8 et le fond 6 formant une chambre étanche, I'air qui y est contenu a été mis en légère surpression lors de la fermeture du fond 6, et en outre il va se créer une surpression supplémentaire du fait que cet air se dilate lorsqu'il prend la température de l'incubateur, qui est en principe plus élevée que la température
initiale de ce volume d'air.
L'espace 28 délimité par la couche de gélose 3, la paroi 8 et le couvercle 5 étant en communication avec l'extérieur, notamment par les trous 16, il existe du fait de la surpression dans la chambre 27 une différence de pression entre les deux surfaces d'extrémité de la couche de gélose. Cette différence de pression favorise la réhomogénéinisation de la couche de gélose
3, en particulier au niveau de la surface qui a été impactée dans la machine 21.
En effet, les jets d'air ayant frappé cette surface de la couche de gélose 3 ont pratiqué dans celle-ci des cratères et ont provoqué un certain
assèchement qui en diminue les capacités nutritives.
Cet assèchement est relativement important: on estime par exemple qu'il est courant de perdre 2 g d'eau pour un volume d'air échantillonné de 1
m3, ceci sur un total de 34 g pour la couche de gélose 3.
Il est possible, plutôt que de compter exclusivement sur l'eau restant dans la couche de gélose 3 pour réhydrater la surface impactée, de déposer sur la couche 3, du côté opposé à la surface impactée, un certain volume de
solution réhydratante 29, ainsi que montré sur la figure 6.
Pour procéder à ce dépôt, on enlève le fond 6 et on dépose, avec une pipette 30, le volume requis de solution réhydratante 29, qui correspond par exemple à 80 ou 90 % de la déshydratation constatée par pesée de la
cassette 1.
La solution réhydratante va parvenir jusqu'à la surface opposée de la couche 3 grâce à la gravité, mais aussi et surtout grâce à la surpression dans la chambre étanche, qui favorise la diffusion de liquide, et notamment de la
solution 29, dans la couche 3.
La réhydratation de la surface impactée fait disparaître les cratères, ce qui est bénéfique au développement des colonies et donc facilite leur identification, le fait que la surface soit lisse favorisant en outre le comptage, et
aussi le repiquage des colonies nécessitant une identification spécifique.
Suivant les circonstances, la solution réhydratante comporte uniquement de l'eau ou alors de l'eau mélangée à des substances nutritives et/ou à des colorants spécifiques permettant une croissance ou une
identification sélective des micro-organismes impactés sur la couche de gélose.
On notera que la forme carrée des mailles de la grille 7 fournit avantageusement à l'utilisateur une indication de la taille de la surface sur laquelle se sont développées les colonies, chaque maille délimitant par exemple une surface de 1 cm2. La gélose étant transparente, il est préférable que la grille 7 soit colorée pour être facilement visible, le corps 2 étant par exemple moulé dans une matière plastique noire. Le couvercle 5 est transparent afin que la lecture puisse s'effectuer alors que la cassette 1 reste fermée. Il est bien entendu que la cassette selon l'invention peut être utilisée pour d'autres types d'analyses, par exemple pour déterminer la contamination d'un liquide, la surface de la couche de gélose 3 qui est délimitée initialement par le film 4 recevant une membrane au travers de laquelle on a fait passer le
volume requis de liquide à analyser.
De nombreuses variantes sont possibles en fonction des circonstances, et on rappelle à cet égard que l'invention ne se limite pas aux exemples décrits et représentés.
Claims (20)
1. Cassette pour la culture de micro-organismes, comportant un corps (2) présentant une grille (7) et une paroi annulaire (8) orientée transversalement à ladite grille (7) et l'entourant, et comportant une couche (3) de gélose orientée parallèlement à ladite grille (7) et l'enrobant; caractérisée en ce qu'elle comporte un film (4) étanche souple tendu sur une surface d'extrémité de ladite paroi annulaire (8) et délimitant une surface d'extrémité de
ladite couche (3) de gélose.
2. Cassette selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comporte un couvercle (5) amovible adapté à coincer ledit film entre la surface externe de ladite paroi annulaire (8) et une surface interne d'une paroi latérale
(12A, 12B, 13) dudit couvercle (5).
3. Cassette selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit couvercle (5) est également adapté à coincer ledit film (4) entre ladite surface d'extrémité de ladite paroi annulaire (8) du corps (2) et une deuxième surface
interne dudit couvercle (5).
4. Cassette selon la revendication 3, caractérisée en ce que ledit couvercle (5) comporte un flasque (14) de fermeture disposé à distance dudit film (4) lorsque ladite deuxième surface interne de la paroi latérale (12A, 12B, 13) du couvercle (5) coince ledit film contre ladite surface d'extrémité de ladite
paroi annulaire (8) du corps (2).
5. Cassette selon la revendication 4, caractérisée en ce que ledit couvercle (5) comporte au moins un trou (16) permettant une communication entre l'intérieur et l'extérieur du couvercle lorsque celui-ci est emmanché sur
ledit corps (2).
6. Cassette selon l'une quelconque des revendications 2 à 5,
caractérisée en ce que ledit corps (2) et ledit couvercle (5) sont chacun en matière plastique moulée, ledit couvercle (5) étant plus souple que ledit corps (2).
7. Cassette selon l'une quelconque des revendications 1 à 6,
caractérisée en ce que ledit film (4) est en matière plastique.
8. Cassette selon l'une quelconque des revendications 1 à 7,
caractérisée en ce qu'elle comporte un fond (6) amovible adapté à s'emmancher sur ledit corps (2) à l'opposé dudit film (4) pour délimiter une chambre étanche (27) sur laquelle donne la surface d'extrémité de ladite couche de gélose (3) qui est opposée à celle délimitée par ledit film (4).
9. Cassette selon la revendication 8, caractérisée en que ledit fond (6) s'emmanche extérieurement sur ladite paroi annulaire dudit corps (2) et comporte une surface interne venant en contact avec la surface d'extrémité de
ladite paroi annulaire (8) située du côté du fond (6).
10. Cassette selon l'une quelconque des revendications 8 ou 9,
caractérisée en ce que ledit corps (2) et ledit fond (6) sont en matière plastique
moulée, ledit fond (6) étant plus souple que ledit corps (2).
11. Cassette selon l'une quelconque des revendications 1 à 10,
caractérisée en ce que ledit corps (2) comporte, entre ladite paroi annulaire (8) et ladite grille (7), une couronne pleine (9) présentant vers l'intérieur une
surépaisseur formant un bourrelet (10).
12. Cassette selon la revendication 11, caractérisée en ce que ladite
couronne ne présente aucune saillie du côté qui regarde le film (4).
13. Cassette selon l'une quelconque des revendications 1 à 12,
caractérisée en ce que ladite grille (7) est à mailles carrées.
14. Cassette selon la revendication 13, caractérisée en ce que ladite
grille (7) est d'une couleur contrastant avec ladite couche de gélose (3).
15. Procédé d'analyse de l'air caractérisé en ce qu'il comporte
l'utilisation d'une cassette selon l'une quelconque des revendications 1 à 14,
avec une opération de frappe par des jets d'air de ladite surface d'extrémité de
la couche de gélose (3) délimitée initialement par ledit film (4).
16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'il comporte, après ladite opération de frappe, une opération de dépôt d'un volume prédéterminé de solution réhydratante (29) sur la surface d'extrémité de
ladite couche de gélose opposée à celle délimitée initialement par ledit film (4).
17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'on effectue ladite opération de dépôt d'un volume prédéterminé de solution
réhydratante (29) avec ladite cassette (1) qui est retournée.
18. Appareil d'analyse de l'air comportant un crible amovible (25) présentant une paroi (26) dans laquelle sont pratiquées une multitude de fines perforations pour former chacune un jet d'air venant frapper une surface d'une couche de gélose d'un récipient mis en place dans ledit appareil, caractérisé en ce que ledit récipient est formé par une cassette (1) selon l'une quelconque des
revendications 1 à 14, la surface frappée étant la surface d'extrémité de la
couche de gélose (3) initialement délimitée par ledit film (4), et en ce que ledit appareil comporte un support de positionnement (22) commun audit crible (25)
et au corps (2) de ladite cassette.
19. Appareil selon la revendication 18, caractérisé en ce que ledit support (22) comporte des encoches (22') pour loger le bout d'oreilles (11)
externes qui comporte ledit corps (2).
20. Appareil selon la revendication 19, caractérisé en ce que lesdites
oreilles (11) sont perforées.
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