FR2759374A1 - Polypeptide a activite de recepteur ob25 specifique des cellules myelinisantes chez le rat, application au criblage de medicaments et medicaments - Google Patents

Abstract

Poypeptide ayant une activité de récepteur OB25 spécifique des cellules myélinisantes chez le rat et séquence codant pour ce polypeptide. Des hôtes cellulaires transformés par des vecteurs dans lequel ont été insérés tout ou partie desdites séquences expriment le polypeptide selon l'invention. Application du polypeptide selon l'invention à l'obtention d'anticorps, à la réalisation de médicaments, de sondes nucléotidiques de diagnostic et de sélection de médicaments, au criblage de médicaments destinés, notamment au traitement d'affections neurologiques ou métaboliques affectant principalement les cellules productrices de la myéline.

Description

La présente invention concerne un polypeptide ayant une activité de récepteur spécifique des cellules myélinisantes chez le rat, dénommé récepteur OB25.

Elle concerne également la séquence nucléotidique codant pour ce polypeptide ainsi que des vecteurs comprenant ladite séquence et des hôtes cellulaires transformés susceptibles d'exprimer ledit polypeptide et notamment les gènes codant pour le récepteur contenant ou constitué par ledit polypeptide, ces hôtes cellulaires permettant d'étudier l'activité d'agoniste ou d'antagoniste dudit récepteur.

L'invention est encore relative à des sondes nucléotidiques susceptibles de se fixer par hybridation sur ladite séquence ou la séquence complémentaire, le transcrit ou les gènes codant pour ledit polypeptide et destinées au diagnostic et à la sélection de médicaments utilisables dans le traitement de maladies neurologiques ou métaboliques, notamment pour le traitement de maladies de la myéline, de maladies neuromusculaires.

L'invention a également trait à des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, dirigés contre ledit polypeptide.

Elle concerne aussi des moyens de criblage de candidats médicaments, permettant notamment d'étudier l'affinité de substances candidates pour ledit polypeptide.

Enfin, I'invention a trait à des médicaments destinés notamment au traitement d'affections neurologiques ou métaboliques affectant principalement les cellules productrices de la myéline, notamment la sclérose en plaques ou les gliomes, les maladies neuro-musculaires, contenant une substance ayant une affinité élevée pour ledit polypeptide à activité de récepteur spécifique des cellules myélinisantes chez le rat ou encore des substances ayant une activité sur des cellules transfectées par une séquence codant pour ledit polypeptide.

Les maladies de la myélinisation peuvent être acquises suite à une inflammation ou à une infection, être d'origine nutritionnelle ou toxique, secondaires à une affection neuronale ou bien encore à déterminants génétiques.

Les voies de traitement connues à ce jour pour les maladies de la myélinisation sont essentiellement symptomatiques (anti-inflammatoires).

Dans le traitement de ces maladies profondément handicapantes,
I'un des objectifs est d'obtenir une stimulation de la synthèse et de la production de myéline ou bien la multiplication ou la différentiation des cellules produisant la myéline (oligodendrocytes et cellules de Schwann).

La réalisation de cet objectif se heurte au fait qu'il n'existe que très peu de facteurs connus susceptibles de moduler spécifiquement l'activité des cellules productrices de myéline.

Les gènes impliqués dans la synthèse, I'enroulement ou la compaction de la myéline constituent, à l'évidence, des gènes candidats dans les affections démyélinisantes pour lesquelles une composante génétique est évoquée ou avérée, et dont le locus reste à identifier.

II y a donc un intérêt pour le diagnostic et le traitement des maladies neuromusculaires, notamment des maladies de la myéline à utiliser un récepteur exprimé sélectivement par les cellules productrices de myéline et ses ligands naturels ou synthétiques.

La présente invention répond à ce besoin en fournissant des moyens utiles à des fins de diagnostic et de traitement des maladies de la myélinisation.

L'invention a ainsi pour objet un polypeptide ayant une activité de récepteur spécifique des cellules myélinisantes chez le rat, dénommé récepteur OB25.

Celui-ci est constitué par ou comprend tout ou partie de la séquence d'acides aminés de rat définie dans l'identificateur de séquence
SEQ ID N" 2 ou une séquence homologue contenant le ou les sites faisant partie de ladite séquence peptidique dont la présence est nécessaire pour que le polypeptide ait les mêmes caractéristiques pharmacologiques que le récepteur OB25 ou pour qu'il soit reconnu par des anticorps qui reconnaissent également la séquence d'acides aminés précitée.

Cette homologie peut être une homologie d'espèce ou une homologie correspondant à des mutations artificielles ou spontanées de nature ponctuelle et ne modifiant pas les propriétés essentielles du polypeptide et notamment son activité sur le récepteur OB25.

Le polypeptide selon l'invention a été obtenu par criblage d'une banque d'ADN copie de bulbe olfactif de rat en utilisant des sondes nucléotidiques codant pour des récepteurs de la famille des récepteurs heptahélicaux couplés aux protéines G.

De manière inattendue, les inventeurs ont établi que ledit polypeptide est sélectivement exprimé dans les cellules productrices de myéline, à savoir les cellules de Schwann et les oligodendrocytes et que son expression au cours du développement est en accord avec un rôle dans la myélinisation.

Le polypeptide selon l'invention peut être utilisé en étant isolé ou fixé sur des supports, d'une façon tout-à-fait classique, ou encore en étant réuni à des séquences d'acides aminés sans relation avec le récepteur
OB25.

La présente invention a également pour objet les acides nucléiques constitués par ou comprenant tout ou partie de la séquence nucléotidique codant pour le polypeptide selon l'invention, ainsi que les acides nucléotidiques homologues.

Ayant établi la séquence codante du récepteur OB25 (donnée dans la liste de séquences annexée), les inventeurs ont constaté que celle-ci est homologue (82.8% d'identité en nucléotides) à une séquence obtenue chez le Mouton, apparaissant dans la base Genebank sous le code d'accès N U18405. Les informations accompagnant cette séquence n'indiquent qu'une structure compatible avec un couplage à une protéine
G, mais aucune fonction ni utilisation pratique de cette séquence n'est suggérée.

De même, I. Masana et coll. (Receptors and Channels, 1995, 3: 255-262) décrivent le clonage de l'ADNc de mouton correspondant à cette séquence et l'expression dans une cellule CHO dont le pouvoir de division en présence de sérum paraît accru. Cette réponse mitogène est commune à de nombreux récepteurs recombinants de la même superfamille et ne suggère en rien la fonction ni l'utilisation pratique du récepteur exprimé dans ce système artificiel.

Une portion de la séquence codante du récepteur OB25 est également homologue (91.1% d'identité en nucléotides) à une séquence humaine (Code d'accès à Genebank N" HSC1CG081), obtenue par séquençage systématique d'ADN complémentaires (Expressed Sequence
Tags), sans que la correspondance avec un fragment de récepteur ni, a fortiori, qu'aucune fonction lui soit attribuée.

Des acides nucléiques selon l'invention sont notamment des acides nucléiques comprenant ou constitués par la séquence SEQ ID N" 1 de la liste de séquences annexée ou des fragments de celle-ci.

Parmi les acides nucléiques selon l'invention, ceux constitués par la séquence s'étendant du nucléotide en position 152 au nucléotide en position 1243 de la séquence SEQ ID N" 1 annexée sont particulièrement intéressants.

Les acides nucléiques homologues selon l'invention peuvent comporter des variations propres à la dégénérescence du code ainsi que des mutations localisées dans la mesure où les acides nucléiques variants s'hybrident avec les sondes susceptibles de s'hybriber, de façon spécifique, avec la séquence SEQ ID N" 1.

D'autres acides nucléiques homologues selon l'invention sont des acides nucléiques présentant une homologie d'espèce et qui sont tels qu'ils peuvent être identifiés et clonés par les méthodes classiques grâce à l'utilisation de sondes nucléotidiques constituées par ou comprenant tout ou partie de la séquence SEQ ID N" 1 ou des séquences de
Genebank N" U18405 ou N" HSC1CG081.

Ces acides nucléiques, une fois clonés, peuvent être séquencés de manière usuelle.

De telles séquences d'acides nucléiques homologues comprennent notamment les séquences d'origine ovine ou humaine constituées par ou contenant tout ou partie de la séquence Genebank N" U18405 ou de la séquence N" HSC1CG081.

Les acides nucléiques selon l'invention peuvent être obtenus par synthèse chimique classique d'acide nucléique, par réplication dans des vecteurs qui les contiennent ou par tout autre moyen, et notamment multiplication par le procédé PCR à partir d'une faible quantité d'acide nucléique selon l'invention.

L'invention a également pour objet les vecteurs recombinants, utilisables pour le clonage ou pour l'expression des acides nucléiques, et contenant un acide nucléique selon l'invention, tel que des plasmides, des phages ou virus contenant la séquence selon l'invention en un site non essentiel pour la réplication.

Les vecteurs selon l'invention peuvent contenir, le cas échéant, les éléments nécessaires pour l'expression dans un hôte cellulaire tels que promoteur, codon d'initiation, terminateur, séquence signal ou séquence d'ancrage ou tout autre élément utile à la régulation.

L'invention a également pour objet les hôtes cellulaires transformés par un vecteur selon l'invention et susceptibles d'exprimer le polypeptide selon l'invention de façon à présenter à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques du vecteur OB25.

Ces hôtes peuvent être des celules en culture telles que CHO (Chinese Hamster Ovary), COS ou encore PC12.

L'invention a encore pour objet l'utilisation des acides nucléiques selon l'invention pour cloner puis séquencer des séquences d'acides nucléiques ovine ou humaine et notamment les gènes des récepteurs ovin et humain présentant chez le mouton ou l'homme une activité correspondant à celle du récepteur OB25 chez le rat.

La détermination de ces séquences permet, par recombinaison génétique, d'exprimer les récepteurs ovin ou humain et de les utiliser pour l'induction d'anticorps et le criblage de médicaments pour le traitement d'affections neurologiques ou métaboliques affectant principalement les cellules productrices de la myéline, telles que la sclérose en plaques ou les gliomes, ou des maladies neuromusculaires.

L'invention a aussi pour objet des anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre le récepteur OB25.

Ces anticorps sont obtenus par induction à partir d'un polypeptide selon l'invention, comprenant la totalité ou une partie de la séquence donnée en annexe, ou de toutes autres séquences comprenant des sites polypeptidiques suffisamment proche de ladite séquence pour que les anticorps ainsi fabriqués reconnaissent cette dernière.

Ces anticorps peuvent être obtenus par injections sous-cutanées répétées d'un mélange d'adjuvant de Freund et d'un polypeptide selon l'invention ou d'un fragment de ce polypeptide fusionné ou couplé avec une protéine courante telle que sérum albumine, ovalbumine.

Les anticorps selon l'invention sont utiles, par exemple, pour diagnostiquer par réaction anticorps-antigène mise en évidence à l'aide d'une technique de révélation classique, une prolifération de cellules exprimant ie récepteur OB25 ou la présence d'un anticorps endogène dans une maladie auto-immune.

L'invention a pour objet des sondes nucléotidiques susceptibles de se fixer par hybridation sur la séquence complémentaire, le transcrit ou le gène codant pour le polypeptide.

Les sondes sont constituées d'une partie ou de la totalité de la séquence donnée en annexe, ou de toutes autres séquences homologues, telles que ces dernières hybrideraient avec la séquence en annexe.

Les sondes sont utilisées de façon classique en étant mise en contact, dans les conditions usuelles, avec des préparations présentant des acides nucléiques suspectés de présenter une anomalie. Elles peuvent aussi être utilisées, par exemple, pour détecter une expression pathologique du récepteur OB25 en révélant la présence de son ARN messager.

Le polypeptide et les acides nucléiques selon l'invention peuvent être utilisés pour le diagnostic et la mise au point de médicaments destinés au traitement d'affections de la myéline chez l'homme comme il est décrit ci-après.

L'invention fournit ainsi un procédé de criblage de médicaments destinés au traitement d'affections neurologiques ou métaboliques affectant principalement les cellules productrices de la myéline, telles que la sclérose en plaques ou les gliomes, ou des maladies neuromusculaires.

Le criblage d'un médicament peut utiliser la capacité de la molécule candidate à se comporter comme ligand vis-à-vis d'un polypeptide selon l'invention.

II consiste, par exemple, à mettre en contact, dans un milieu convenable, la molécule candidate avec les membranes d'un hôte cellulaire transformé par un vecteur comprenant un insert codant pour un tel polypeptide et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à présenter à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques du récepteur 0825, de manière telle que la liaison spécifique du ligand candidat puisse être évaluée ou indirectement estimée, par exemple en détectant l'éventuel complexe ligand-polypeptide.

Ce procédé peut également comprendre la mesure d'une réponse induite par la liaison avec la cellule, telle que par exemple la production d'AMP cyclique de façon à permettre de différencier les molécules qui se comportent comme des agonistes ou comme des antagonistes.

Dans ce but de criblage, on peut également utiliser un procédé déterminant l'affinité du récepteur OB25 pour des ligands déterminés, dans lequel on cultive l'hôte cellulaire transformé exprimant le polypeptide correspondant, après quoi on met la culture cellulaire en contact avec le ligand déterminé et on vérifie s'il se forme une liaison spécifique entre l'hôte cellulaire et le ligand, notamment par des tests de radioliaison de préférence, de mesure de taux de production ou de libération d'un indicateur convenable tel que L'VAMP cyclique, ou ions intracellulaires, ces derniers tests permettant de distinguer et de définir les agonistes et leur caractère partiel, ainsi que les antagonistes.

L'invention fournit aussi un procédé de criblage de ligands marqués, tels que ligands radioactifs ou fluorescents dans lequel on mesure la liaison spécifique de ligands candidats avec la membrane d'une cellule transformée par un vecteur comprenant un insert codant pour un polypeptide et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à exprimer à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide de manière telle que la liaison spécifique du ligand candidat puisse être évaluée ou indirectement estimée.

On peut également utiliser un hôte cellulaire transformé comme précédemment décrit, pour exprimer et présenter dans sa membrane le récepteur 0825 pour identifier le ligand endogène du récepteur OB25. Ce ligand peut être utilisé pour synthétiser des analogues pour servir à la mise au point ou au criblage de médicaments interagissant avec le récepteur 0825. Le ligand endogène peut être utilisé pour générer des anticorps utilisables en diagnostic ou thérapeutique pour diminuer son action sur les cellules productrices de myéline.

L'invention a ainsi pour objet un procédé d'identification de tissus ou cellules exprimant spontanément à leur surface membranaire le polypeptide, tel que lesdits tissus ou cellules puissent servir à la mise au point de médicaments ou ligands marqués.

L'invention a encore pour objet des médicaments contenant, dans une dose prévue pour être administrée, une quantité thérapeutiquement efficace d'une substance active sur un polypeptide ayant une activité de récepteur 0825, dans un véhicule pharmaceutiquement acceptable.

On peut ainsi prévoir l'injection d'anticorps dirigés contre les polypeptides selon l'invention ou des homologues de ceux-ci, notamment chez le mouton ou chez l'homme, comme défini précédemment.

On peut également prévoir l'administration de médicaments sélectionnés par les procédés de criblage décrits ci-dessus.

D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaitront à la lecture de la description suivante donnée à titre illustratif et non limitatif.

1. Clonage du récepteur OB25.

On a criblé une banque d'ADN copie de bulbe olfactif de Rat (Stratagene,
Ozyme, Montigny-le-Bretonneux) dans des conditions de stringence basse avec un mélange de sondes ADN marquées au 32P codant pour les récepteurs heptahélicaux de la dopamine, le récepteur D2 de rat (nucléotides 172-1191), le récepteur D2 de Xénope (nucléotides 76-1273), le récepteur D3 (nucléotides 196-1242) et le récepteur D4 de rat (nucléotides 306635 et 985-1125). Sept clones correspondant à une nouvelle et même séquence codante ont été isolés. La séquence nucléotidique du clone 0825 comporte 1543 bases, code pour un récepteur de 364 acides aminés dont les homologies avec l'ensemble des récepteurs connus permettent de conclure qu'il fait partie de la famille des récepteurs à 7 domaines transmembranaires couplé à une protéine G.

2. Expression du récepteur OB25 dans les cellules CHO.

Le vecteurs d'expression dérivent du plasmide SV-D2 (Sokoloff, et al:,
Nature, 347 :146-151, 1990). Pour exprimer le récepteur OB25, le fragment de restriction Hindlll-BamHI du pSVD2 est remplacé par un fragment Hindlll-BamHI du plasmide Bluescript 0825 issus du criblage de la banque de d'ADN copie. Cette construction est cultivée puis le plasmide extrait et purifié (Birnboim, Enzymol., 100:243-255, 1983). Des cellules d'Ovaire de Hamster Chinois déficientes en dihydrofolate réductase sont alors transfectées en utilisant la DOTAP (Boehringer,
Mannheim). Les transfectants stables sont sélectionnés dans un milieu de culture (Dulbecco's Modified Eagle Medium) sans hypoxanthine et sans thymidine.

3. Expression du récepteur 0825 dans les cellules PC12.

Le vecteur d'expression est constitué du fragment Hindlll-Xbal du plasmide Bluescript contenant la séquence du récepteur OB25 inséré dans le plasmide RclCMV (Invitrogen, San Diego) préalablement digéré par les enzymes Hindîli et Xbal. Les cellules PC12 sont transfectées par électroporation (Potter, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:7161-7165, 1984), puis sélectionnées dans un milieu de culture contenant de la néomycine.

4. Expression au cours du développement.

Des hybridations in situ sont pratiquées chez le rat à différents stades du développement. Pour cela, on utilise des coupes (10,ut) fixés au paraformaldéhyde 4% pendant 40 min. Ces coupes sont hybridées avec une ribosonde codant pour la séquence inverse complémentaire du fragment Pstl, située dans la partie 5' de la séquence de l'ARN messager du récepteur OB25 , marquée avec de I'UTP-33P (Simmons, et al., J.

Histotechnol., 12:169-181, 1989). Après l'hybridation, les coupes sont exposées 3 semaines contre des films p-max.

Pour connaître les variations au cours du développement du récepteur 0825, des ARN messagers sont préparés à partir de cerveau de rats à différent âges postnataux (RNABLeS), Eurobio, Les Ullis). Des échantillons (îOpg) sont dénaturés, soumis à une électrophorèse sur agarose, transférés sur des menbranes de nitrocellulose puis hybridées en utilisant un fragment de 520 pb marqué au 32P obtenu par amplification par PCR de la partie 5' de la séquence d'ADN codant pour le récepteur.

L'expression du transcrit croit du 1e' au 21âme jour après la naissance puis diminue légèrement et se maintient. Cette augmentation du transcrit est parallèle à la phase de myélinisation. La MBP, la PLP et la CNPase, marqueurs spécifiquess de la myéline, ont un développement temporel pratiquement identique (Kanfer, et al., J. Mol. Neurosci., 1:39-46, 1989).

Le développement spatial se fait selon un gradient caudo-rostral, identique une fois de plus à celui de la MBP.

5. Expression du récepteur chez l'adulte.

L'hybridation simple montre que le récepteur est uniquement localisé dans la substance blanche au niveau central. Des expériences de colocalisation ont utilisé une 2eme sonde codant pour un marqueur des oligodendrocytes, la protéine basique de la myéline, marquée par de l'UTP-DIG et révélée par la phosphatase alcaline (Miller, et al., J.

Histochem. and Cytochem., 41:1741-1750, 1993). Le récepteur 0825 apparaît localisé exclusivement dans les oligodendrocytes. II apparaît aussi au niveau périphérique dans la racine des nerfs moteurs, I'isle du rein, le thymus.

LISTE DE SEQUENCES (1) INFORMATION GENERALE:
(i) DEPOSANT:
(A) NOM: INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA
RECHERCHE MEDICALE
(B) RUE: 101 rue de Tolbiac
(C) VILLE: PARIS
(E) PAYS: FRANCE
(F) CODE POSTAL: 75654
(ii) TITRE DE L'INVENTION: Polypeptide à activité de récepteur OB25
spécifique des cellules myélinisantes chez le rat,
application au criblage de médicaments et médicaments
(iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 2
(iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR:
(A) TYPE DE SUPPORT: Floppy disk
(B) ORDINATEUR: IBM PC compatible
(C) SYSTEME D'EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS
(D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB) (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 1543 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: récepteur 0B25 chez le rat
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 152..1243
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: i:
CACGAGCAGC CGCCCCGCGT CTCCTGCCCT TTGGCCAGGC TTTCAGTTCC TCCTAGCATG 60
ACTGAGATCT GACCAGCCGA CTCACGAGTT GCTTCTTGTG CCACCACTGC AGTGCTGGGG 120
CCTCTTCATC GCTCCAAACT ACAGCACTGT C ATG GCA GCT GCC TCT ACT TCC 172
Met Ala Ala Ala Ser Thr Ser
1 5
AGC CCT GTG ATT TCA CAG CCC CAG TTC ACA GCC ATG AAC GAA CAA CAG 220
Ser Pro Val Ile Ser Gln Pro Gln Phe Thr Ala Met Asn Glu Gln Gln
10 15 20
TGC TTC TAC AAC GAG TCT ATC GCC TTC TTC TAT AAC CGG AGT GGA AAG 268
Cys Phe Tyr Asn Glu Ser Ile Ala Phe Phe Tyr Asn Arg Ser Gly Lys
25 30 35
TAT CTA CCC ACA GAA TGG AAC ACT GTG AGC AAG CTG CTG ATG GGA CTC 316
Tyr Leu Ala Thr Glu Trp Asn Thr Val Ser Lys Leu Val Met Gly Leu
40 45 50 55
GGC ATC ACT CTC TGC CTG TTC ATC ATC CTG CCC AAT CTA CTG GTC ATC 364
Gly Ile Thr Val Cys Val Phe Ile Met Leu Ala Asn Leu Leu Val Met
60 65 70
CTG GCA ATT TAC GTC AAC CGC CGC TTC CAT TTC CCT ATT TAT TAC TTG 412
Val Ala Ile Tyr Val Asn Arg Arg Phe His Phe Pro Ile Tyr Tyr Leu
75 80 85
ATC CCC AAC CTG GCT GCT GCA GAC TTC TTC GCT GGA CTC CCC TAC TTC 460
Met Ala Asn Leu Ala Ala Ala Asp Phe Phe Ala Gly Leu Ala Tyr Phe
90 95 100
TAC CTC ATG TTC AAC ACG GGA CCT AAT ACC CGG AGA CTG ACC GTG AGC 508
Tyr Leu Met Phe Asn Thr Gly Pro Asn Thr Arg Arg Leu Thr Val Ser
105 110 115
ACA TGG CTT CTC CGG CAG GGC CTC ATC GAC ACC AGC CTG ACG GCT TCT 556
Thr Trp Leu Leu Arg Gln Gly Leu Ile Asp Thr Ser Leu Thr Ala Ser 120 125 130 135
CTG CCC AAC CTG CTG CCC ATT CCC ATC GAG AGG CAC ATC ACA GTT TTC 604
Val Ala Asn Leu Leu Ala Ile Ala Ile Glu Arg His Ile Thr Val Phe
140 145 150
CGA ATG CAG CTC CAT ACA CGA ATG AGC AAC CGA CGT GTG GTG GTG GTG 652
Arg Met Gln Leu His Thr Arg Met Ser Asn Arg Arg Val Val Val Val
155 160 165
ATT GTA CTC ATC TGG ACT ATG CCC ATT GTG ATG GGT CCC ATA CCC AGT 700
Ile Val Val Ile Trp Thr Met Ala Ile Val Met Gly Ala Ile Pro Ser
170 175 180 CTC GGC TGG AAC TGC ATC TGT GAT ATC GAT CAT TGT TCC AAC ATG GCG 748
Val Gly Trp Asn Cys Ile Cys Asp Ile Asp His Cys Ser Asn Met Ala
185 190 195
CCC CTC TAC AGT GAC TCC TAC TTA GTC TTC TGG CCC ATT TTC AAC CTG 796
Pro Leu Tyr Ser Asp Ser Tyr Leu Val Phe Trp Ala Ile Phe Asn Leu 200 205 210 215
GTG ACC TTT CTC CTC ATG GTG GTT CTC TAC GCT CAC ATC TTT GGC TAT 844
Val Thr Phe Val Val Met Val Val Leu Tyr Ala His Ile Phe Gly Tyr
220 225 230
GTT CGC CAG AGG ACT ATG AGA ATG TCC CGG CAT AGT TCT GGA CCC AGG 892
Val Arg Gln Arg Thr Met Arg Met Ser Arg His Ser Ser Gly Pro Arg
235 240 245
AGG AAT CCC GAC ACC ATG ATG AGC CTT CTG AAG ACT GTG CTC ATT GTG 940
Arg Asn Arg Asp Thr Met Met Ser Leu Leu Lys Thr Val Val Ile Val
250 255 260
CTC GGT CCC TTT ATT CTC TGC TGG ACT CCC GGA TTG CTC TTG CTA CTG 988
Leu Gly Ala Phe Ile Val Cys Trp Thr Pro Gly Leu Val Leu Leu Leu
265 270 275
CTC GAT GTG TGT TGC CCC CAG TGC GAT GTC CTC CCC TAT GAG AAC TTC 1036
Leu Asp Val Cys Cys Pro Gln Cys Asp Val Leu Ala Tyr Glu Lys Phe 280 285 290 295
TTC CTC CTC CTC CCC GAG TTC AAC TCT GCT ATG AAC CCC ATC ATC TAC 1084
Phe Leu Leu Leu Ala Glu Phe Asn Ser Ala Met Asn Pro Ile Ile Tyr
300 305 310
TCC TAC CGC GAC AAA GAG ATG AGC CCC ACC TTC AGG CAG ATC CTG TGT 1132
Ser Tyr Arg Asp Lys Glu Met Ser Ala Thr Phe Arg Gln Ile Leu Cys
315 320 325
TGC CAG CGC AAC GAG AAC CCC AAC GGC CCC ACG GAA GGC TCT GAC AGC 1180
Cys Gln Arg Asn Glu Asn Pro Asn Gly Pro Thr Glu Gly Ser Asp Ser
330 335 340
TCG CCC TCC TCC CTC AAC CAC ACT ATT CTG GCT GGA GTT CAC AGC AAT 1228
Ser Ala Ser Ser Leu Asn His Thr Ile Leu Ala Gly Val His Ser Asn
345 350 355
GAC CAC TCT GTG GTT TAGAAGGAAG CCAGCCGGCC TTTGTGGATT TGTGAACCCC 1283
Asp His Ser Val Val 360 ACCCTACCCG CATTGCCAGG GCAAGGTGGG GCGCCAGAGG AGACGAAGAC ACTCCTGTAC 1343
TTAACACTAA CCAATGGCAG TATTTGTCCC TAGACCCAAG AGACTTTAGG ATGAACTTGC 1403 TTGGTAGCCC CCATCTTCTC CTTTGGAAAA GAGAAGGGGA CCGTCTTGCA GTGGAATTCA 1463 GAAACGGACT CTGGGGAGAC CGTGTATGTA GCCTTCACTA ACTAGACTTA AAAGATTTTA 1523 TGTGGTTTGG CCTAAGCCAG 1543 (2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 364 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:
Met Ala Ala Ala Ser Thr Ser Ser Pro Val Ile Ser Gln Pro Gln Phe
1 5 10 15
Thr Ala Met Asn Glu Gln Gln Cys Phe Tyr Asn Glu Ser Ile Ala Phe
20 25 30
Phe Tyr Asn Arg Ser Gly Lys Tyr Leu Ala Thr Glu Trp Asn Thr Val
35 40 45
Ser Lys Leu Val Met Gly Leu Gly Ile Thr Val Cys Val Phe Ile Met
50 55 60
Leu Ala Asn Leu Leu Val Met Val Ala Ile Tyr Val Asn Arg Arg Phe
65 70 75 80
His Phe Pro Ile Tyr Tyr Leu Met Ala Asn Leu Ala Ala Ala Asp Phe
85 90 95
Phe Ala Gly Leu Ala Tyr Phe Tyr Leu Met Phe Asn Thr Gly Pro Asn
100 105 110
Thr Arg Arg Leu Thr Val Ser Thr Trp Leu Leu Arg Gln Gly Leu Ile
115 120 125
Asp Thr Ser Leu Thr Ala Ser Val Ala Asn Leu Leu Ala Ile Ala Ile
130 135 140
Glu Arg His Ile Thr Val Phe Arg Met Gln Leu His Thr Arg Met Ser 145 150 155 160
Asn Arg Arg Val Val Val Val Ile Val Val Ile Trp Thr Met Ala Ile
165 170 175
Val Met Gly Ala Ile Pro Ser Val Gly Trp Asn Cys Ile Cys Asp Ile
180 185 190
Asp His Cys Ser Asn Met Ala Pro Leu Tyr Ser Asp Ser Tyr Leu Val
195 200 205
Phe Trp Ala Ile Phe Asn Leu Val Thr Phe Val Val Met Val Val Leu
210 215 220
Tyr Ala His Ile Phe Gly Tyr Val Arg Gln Arg Thr Met Arg Met Ser 225 230 235 240
Arg His Ser Ser Gly Pro Arg Arg Asn Arg Asp Thr Met Met Ser Leu
245 250 255
Leu Lys Thr Val Val Ile Val Leu Gly Ala Phe Ile Val Cys Trp Thr
260 265 270
Pro Gly Leu Val Leu Leu Leu Leu Asp Val Cys Cys Pro Gln Cys Asp
275 280 285
Val Leu Ala Tyr Glu Lys Phe Phe Leu Leu Leu Ala Glu Phe Asn Ser
290 295 300
Ala Met Asn Pro Ile Ile Tyr Ser Tyr Arg Asp Lys Glu Met Ser Ala 305 310 315 320
Thr Phe Arg Gln Ile Leu Cys Cys Gln Arg Asn Glu Asn Pro Asn Gly

Claims (14)

1. REVENDICATIONS 1. Polypeptides ayant une activité de récepteur OB25, spécifique des cellules myélinisantes chez le rat, constitués par ou comprenant tout ou partie de la séquence de 364 acides aminés de rat définie dans l'identificateur de séquence SEQ ID N" 2 de la liste de séquence annexée ou une séquence homologue contenant le ou les sites faisant partie de ladite séquence dont la présence est nécessaire pour que ledit polypeptide ait les mêmes caractéristiques pharmacologiques que le récepteur OB25 ou pour qu'il soit reconnu par des anticorps qui reconnaissent également la séquence d'acides aminés précitée.
2. 2. Acides nucléiques contenant ou constitués par tout ou partie de la séquence nucléotidique codant pour le polypeptide selon la revendication 1, ainsi que les acides nucléiques homologues.
3. 3. Acides nucléiques comprenant ou constitués par la séquence codante

   SEQ ID N" 1 ou des fragments de celle-ci.
4. 4. Acides nucléiques selon la revendication 3, constitués par la séquence s'étendant du nucléotide en position 152 au nucléotide en position 1243 de la séquence SEQ ID N" 1.
5. 5. Vecteur recombinant, utilisable pour le clonage ou l'expression des acides nucléiques, contenant un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications 2 à 4.
6. 6. Hôtes cellulaires transformés par un vecteur selon la revendication 5 et susceptible d'exprimer la séquence codant pour la synthèse d'un polypeptide selon la revendication 1.
7. 7. Anticorps monoclonaux ou polyclonaux dirigés contre un polypeptide selon la revendication 1.
8. 8. Sondes nucléotidiques comprenant ou constituées par tout ou partie de la séquence nucléotidique donné à l'identificateur de séquence SEQ ID N" 1, ou des séquences homologues pouvant s'hybrider avec ladite séquence ou la séquence complémentaire, le transcrit ou le gène codant pour un polypeptide selon la revendication 1.
9. 9. Sondes selon la revendication 8, pour le diagnostic ou le traitement d'affections neurologiques ou métaboliques, affectant principalement les cellules produisant la myéline comme la sclérose en plaques ou les gliomes.
10. 10. Procédé de criblage de médicaments destinés aux traitements d'affections neurologiques ou métaboliques affectant principalement les cellules productrices de la myéline ou d'affections neuromusculaires, dans lequel on met en contact, dans un milieu convenable, une molécule candidate avec les membranes d'un hôte cellulaire transformé par un vecteur comprenant un insert codant pour un polypeptide selon la revendication 1 et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à présenter à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide, l'éventuel complexe ligand-polypeptide qui se forme étant alors détecté.
11. 11. Procédé de criblage de médicaments destinés aux traitements d'affections neurologiques ou métaboliques, affectant principalement les cellules produisant la myéline comme la sclérose en plaques ou les gliomes, dans lequel on mesure une réponse induite par la liaison d'une molécule candidate avec une cellule, transformée par un vecteur comprenant un insert codant pour un polypeptide selon la revendication 1 et susceptible d'exprimer ledit poypeptide de façon à présenter à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide de telle manière que la mesure d'un signal, tel que la production d'AMP cyclique, permette de différencier les molécules qui se comportent comme des antagonistes ou des agonistes.
12. 12. Procédé de criblage de ligands marqués, tels que ligands radioactifs ou fluorescents dans lequel on mesure la liaison spécifique de ligands candidats avec la membrane d'une cellule transformée par un vecteur comprenant un insert codant pour un polypeptide selon la revendication 1 et susceptible d'exprimer ledit polypeptide de façon à exprimer à la surface membranaire un ou plusieurs sites spécifiques de ce polypeptide de manière telle que la liaison spécifique du ligand candidat puisse être évaluée ou indirectement estimée.
13. 13. Procédé d'identification de tissus ou cellules exprimant spontanément à leur surface membranaire le polypeptide selon la revendication 1, tel que lesdits tissus ou cellules puissent servir à la mise au point de médicaments ou ligands marqués selon les revendications 10 à 12.
14. 14. Médicament contenant, dans une dose prévue pour être administrée,

    une quantité thérapeutiquement efficace d'une substance active sur un

    polypeptide ayant une activité de récepteur 0825, dans un véhicule

    pharmaceutiquement acceptable.