FR2718329A1 - Lapin transgénique sensibilisé aux dyslipoprotéinémies. - Google Patents
Lapin transgénique sensibilisé aux dyslipoprotéinémies. Download PDFInfo
- Publication number
- FR2718329A1 FR2718329A1 FR9403263A FR9403263A FR2718329A1 FR 2718329 A1 FR2718329 A1 FR 2718329A1 FR 9403263 A FR9403263 A FR 9403263A FR 9403263 A FR9403263 A FR 9403263A FR 2718329 A1 FR2718329 A1 FR 2718329A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- rabbit
- apolipoprotein
- transgenic
- dyslipoproteinemias
- dna sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 title claims abstract description 55
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 20
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 14
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 claims description 12
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 claims description 11
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 claims description 11
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 claims description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 108010073614 apolipoprotein A-IV Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 claims description 2
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 claims description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 2
- 101710095342 Apolipoprotein B Proteins 0.000 claims 1
- 102100040202 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 claims 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 claims 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 13
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 12
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 8
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 8
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 5
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 101150102415 Apob gene Proteins 0.000 description 4
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 4
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 4
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 102000014190 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 108010011964 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108010008150 Apolipoprotein B-100 Proteins 0.000 description 3
- 102000006991 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 description 3
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 3
- 108010004103 Chylomicrons Proteins 0.000 description 3
- 101100216294 Danio rerio apoeb gene Proteins 0.000 description 3
- 101000733802 Homo sapiens Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 101100379247 Salmo trutta apoa1 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 102000051062 human APOA1 Human genes 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- 206010042434 Sudden death Diseases 0.000 description 2
- 206010042573 Superovulation Diseases 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 2
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 102200140330 rs74315300 Human genes 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 108010087614 Apolipoprotein A-II Proteins 0.000 description 1
- 102000009081 Apolipoprotein A-II Human genes 0.000 description 1
- 101800001976 Apolipoprotein B-48 Proteins 0.000 description 1
- 102100040214 Apolipoprotein(a) Human genes 0.000 description 1
- 101710115418 Apolipoprotein(a) Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 238000008620 Cholesterol Assay Methods 0.000 description 1
- 108010061846 Cholesterol Ester Transfer Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012336 Cholesterol Ester Transfer Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 102100027909 Folliculin Human genes 0.000 description 1
- 101710182803 Folliculin Proteins 0.000 description 1
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 102000019267 Hepatic lipases Human genes 0.000 description 1
- 108050006747 Hepatic lipases Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 206010020961 Hypocholesterolaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102100022119 Lipoprotein lipase Human genes 0.000 description 1
- 108010033266 Lipoprotein(a) Proteins 0.000 description 1
- 102000057248 Lipoprotein(a) Human genes 0.000 description 1
- 102220555108 MORC family CW-type zinc finger protein 1_K107M_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102220635760 Opalin_E139G_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 102000003867 Phospholipid Transfer Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000216 Phospholipid Transfer Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 101000650578 Salmonella phage P22 Regulatory protein C3 Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 101001040920 Triticum aestivum Alpha-amylase inhibitor 0.28 Proteins 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 102100037814 Vigilin Human genes 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010048215 Xanthomatosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 210000002403 aortic endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003914 blood derivative Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 102200027196 c.530G>A Human genes 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- JVHIPYJQMFNCEK-UHFFFAOYSA-N cytochalasin Natural products N1C(=O)C2(C(C=CC(C)CC(C)CC=C3)OC(C)=O)C3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 JVHIPYJQMFNCEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMAODHOXRBLOQO-UHFFFAOYSA-N cytochalasin-A Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(=O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 ZMAODHOXRBLOQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000497 foam cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 108010092427 high density lipoprotein binding protein Proteins 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000003516 hyperlipidaemic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006575 hypertriglyceridemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 108010053156 lipid transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 230000008604 lipoprotein metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009689 neuronal regeneration Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 208000030683 polygenic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000004141 reverse cholesterol transport Effects 0.000 description 1
- 102220236043 rs1131691533 Human genes 0.000 description 1
- 102220313900 rs1553129083 Human genes 0.000 description 1
- 102200082935 rs34404985 Human genes 0.000 description 1
- 102220276606 rs745424307 Human genes 0.000 description 1
- 102220086132 rs762818044 Human genes 0.000 description 1
- 102220071427 rs794728108 Human genes 0.000 description 1
- 102200009232 rs863225082 Human genes 0.000 description 1
- 102220223719 rs878854064 Human genes 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002966 stenotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 1
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/15—Humanized animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/107—Rabbit
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0362—Animal model for lipid/glucose metabolism, e.g. obesity, type-2 diabetes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
La présente invention se rapporte à un lapin transgénique exprimant une protéine susceptible d'interférer dans les pathologies liées aux dyslipoprotéinémies, son procédé de préparation ainsi que son usage à titre de modèle animal.
Description
La présente invention a pour objet un lapin transgénique exprimant une
protéine susceptible d'interférer dans les pathologies liées aux dyslipoprotéinémies, son procédé de préparation ainsi que son usage à titre de modèle animal.
Les dyslipoprotéinémies sont des désordres du métabolisme des li-
poprotéines, responsables du transport dans le sang et les fluides périphéri-
ques de lipides comme le cholestérol et les triglycérides. Elles conduisent à des pathologies importantes, liées respectivement à l'hypercholestérolémie,
l'hypocholestérolémie ou l'hypertriglycéridémie telle que notamment l'athé-
rosclérose. L'athérosclérose est une maladie complexe, polygénique, qui est
définie, sur le plan histologique, par des dépôts (plaques lipidiques ou fibro-
lipidiques) de lipides et d'autres dérivés sanguins dans la paroi des grosses artères (aorte, artères coronaires, carotide). Ces plaques, plus ou moins calcifiées selon l'avancement du processus, peuvent être jumelées à des lésions et sont liées à l'accumulation dans les artères de dépots graisseux constitués essentiellement d'esters de cholestérol. Ces plaques s'accompagnent d'un épaississement de la paroi artérielle, avec hypertrophie du muscle lisse, apparition de cellules spumeuses et accumulation de tissu fibreux. La plaque athéromateuse est très nettement en relief sur la paroi, ce qui lui confère un caractère sténosant responsable des occlusions vasculaires par athérome, thrombose ou embolie qui surviennent chez les patients les plus atteints. Les hypercholestérolémies peuvent donc conduire à des pathologies cardio-vasculaires très graves telles que l'infarctus, la mort subite, la décompensation cardiaque, les accidents cérébro- vasculaires, etc. Il est donc particulièrement important de pouvoir disposer rapidement de traitements permettant de diminuer, dans certaines situations pathologiques, les taux de cholestérol plasmatique voire de stimuler l'effiux de cholestérol (transport inverse du cholestérol) au niveau des tissus périphériques afin de décharger les cellules ayant accumulé du cholestérol dans le contexte de la formation d'une plaque d'athérome. (Le cholestérol est véhiculé dans le sang par diverses lipoprotéines dont les lipoprotéines de faible densité (LDL] et les lipoprotéines de haute densité (HDL). Les LDL sont synthétisées au niveau du foie et permettent d'approvisionner les tissus périphériques en cholestérol. Au contraire, les HDL captent le cholestérol au niveau des tissus périphériques et le
transportent vers le foie o il est stocké et/ou dégradé).
Dans cette perspective, il serait intéressant de disposer d'un modèle animal capable d'exprimer une protéine susceptible d'interférer dans les pathologies liées aux dyslipoprotéinémies. Un tel modèle animal serait particulièrement avantageux pour la compréhension de ces pathologies et plus particulièrement des mécanismes de régulation qu'elles initient. Il permettrait de tester, in vivo et rapidement, un nombre important d'agents thérapeutiques pour détecter une activité potentielle au niveau de l'expression desdites protéines. Un tel modèle serait en outre intéressant pour développer de nouvelles méthodes thérapeutiques pour le traitement de ce type de pathologies telles des méthodes basées sur la thérapie génique
par exemple.
La présente invention a précisément pour objet de proposer un lapin
génétiquement modifié dans ce sens.
D'une manière générale, les murins à savoir les souris, rats et cobayes sont les modèles animaux les plus répandus. Ils sont facilement manipulables et de faible coût. Malheureusement, ces petits mammifères ne sont pas toujours compatibles avec l'application visée. C'est ainsi qu'ils ne
sont pas toujours représentatifs du modèle humain et de ses métabolismes.
Plus proche de l'homme, le chimpanzé est un animal témoin qui est surtout utilisé pour détecter des agents thérapeutiques et des vaccins dirigés contre le sida et le cancer. Toutefois, son coût très important constitue un
handicap majeur et contraignant au niveau de son utilisation.
Le lapin s'est avéré dans le cadre de la présente invention, le modèle animal approprié. Le métabolisme et les pathologies liées aux lipoprotéines sont connues, chez le lapin, de façon exhaustive. Cest un animal qui est classé 'mammifère à LDL", c'est-à-dire que les LDL sont les transporteurs majoritaires du cholestérol plasmatique comme chez l'homme, contrairement aux rats et souris qui sont des animaux classés mammifres à HDL". De plus, il existe de nombreuses variations génétiques des niveaux des lipoprotéines parmi les lignées de lapins tels que les lapins WHHL, déficients en récepteur LDL (Watanabe heritable hyperlipidaemic rabbit) ou bien les lapins "St Thomas Hospital" qui surproduisent les LDL (Rosenfeld et al, 1990, Arteriosclerosis 10, 680-687; Sedon et al; 1987,
Arteriosclerosis 7, 113-124).
Plus précisément, la présente invention concerne un lapin transgénique dans le génome duquel est insérée au moins une séquence d'ADN génomique exogène codant pour une protéine susceptible d'interférer
dans les pathologies liées aux dyslipoprotéinémies.
Un lapin transgénique selon l'invention peut intégrer la séquence d'ADN génomique dans toutes ses cellules ou seulement dans un certain pourcentage de cellules, il sera alors dit mosaïique. En général, la séquence
d'ADN génomique est intégrée au niveau de toutes les cellules.
Au sens de la présente invention, on entend couvrir sous la désignation "protéine susceptible d'interférer dans les pathologies liées aux dyslipoprotéinémies", les apolipoprotéines et tout produit protéique ayant une activité liée aux pathologies cardiovasculaires. De préférence le terme produit protéique désigne tout mutant, fragment ou peptide possédant au moins une propriété biologique d'une apolipoprotéine, ainsi que tout variant
naturel des apolipoprotéines.
Par séquence d'ADN génomique, on entend désigner selon l'invention, l'ADN génomique ou une construction hybride consistant par
exemple en un ADNc dans lequel seraient insérés un ou plusieurs introns.
De préférence, il s'agit d'une séquence d'ADN génomique humaine.
Avantageusement, l'utilisation d'ADN génomique comparativement à l'ADN complémentaire conduit à des taux d'expression nettement plus
élevés.
La séquence d'ADN génomique, insérée selon l'invention, code pour tout ou une partie active d'une protéine impliquée dans le métabolisme des lipoprotéines. Il peut s'agir: -d'une apolipoprotéine choisie par exemple parmi les apolipoprotéines A-I, A-II, A-IV, B, C-I, C-II, C- III, D, E, F, G, H, J et apo(a), -d'une enzyme telle la lipoprotéine lipase, la lipase hépatique ou la lécithine cholestérol acyltransférase, -d'une protéine de transfert de lipides comme la protéine de transfert des esters de cholesterol et la protéine de transfert des phospholipides, -d'une protéine de liaisons des HDL ou encore -d'un récepteur choisi par exemple parmi les récepteurs LDL, récepteurs
des chylomicrons-remnants et les récepteurs scavenger.
Bien entendu, cette liste est présentée à titre non limitatif du
domaine de l'invention.
Parmi les séquence d'ADN insérées au sens de la présente invention, on peut citer plus particulièrement les gènes codant pour tout ou une partie active des apolipoprotéines AI, B, AIV ou E ou d'un variant ou d'un dérivé
de celles-ci.
L'apolipoprotéine AI est une protéine constituée de 243 acides aminés, synthétisée sous la forme d'une préproprotéine de 267 résidus, ayant une masse moléculaire de 28.000 daltons. Elle est synthétisée chez l'homme spécifiquement dans le foie et rl'intestin et elle constitue la protéine essentielle des particules HDL (70% de leur masse en protéines). Elle est abondante dans le plasma (1.0-1.2 g/l). Son activité la mieux caractérisée
sur le plan biochimique est l'activation de la lécithine-cholestérol acyl-
transférase (LCAT), mais de nombreuses autres activités lui sont attribuées, comme notamment la stimulation de rl'efflux de cholestérol cellulaire. Le rôle physiologique de l'apolipoprotéine AI semble contrebalancé par l'apolipoprotéine AII puisque chez l'homme, le rapport des deux concentrations plasmatiques (AII/AI) est très étroitement corrélé avec le risque coronarien. L'apolipoprotéine AI joue un rôle majeur dans la résistance à l'athérosclérose, probablement lié au transport inverse du cholestérol, puisque la seule expression de cette apolipoprotéine dans des souris transgéniques permet de réduire de 40 fois la surface des dépôts lipidiques au niveau de l'aorte par rapport à des souris contrôles (Rubin et al. 1993 Science, vol 365 p 762). Son gène, long de 1863 bp, a été cloné et séquencé {Sharpe et al., Nucleic Acids Res. 12191 (1984) 3917). Parmi les produits protéiques à activité de type apolipoprotéine AI, on peut citer
notamment les variants naturels décrits dans l'art antérieur (tableau ci-
après).
Variant: Mutation Variant Mutation Milano Argl73Cys Norway Glu 136Lys Marburg Lysl070 Prol65Arg Munster2B Ala 158Glu Pro3His Giessen Prol43Arg ArgO1Leu Munster3A Asp 103Asn Gly26Arg Munster3B Pro4Arg Asp89Glu Munster3C Pro3Arg Lys107Met Munster3D Asp213Gly Glu139Gly Munster4 Glu198Lys Glu147Val Yame Asp 13Tyr Ala 58Glu Asp213Gly Glu169Gln Arg177His L'apolipoprotéine B-100 est le constituant protéique majeur des lipoprotéines de très basses densité 1VLDL), des lipoprotéines de basse densité (LDL1 et de la lipoprotéine Lp(a). Cette protéine est le ligand physiologique du récepteur LDL, et sa concentration plsmatique est positivement corrélée avec le développement de l'athérosclérose (Brunzell et al. 1984 Arterioscerosis 4, 79-93). L'apoB-100 est une des plus grosses protéines connues avec une masse de 550 kDa et elle contient 4536 acides aminés (Chen et al. 1986 J; biol, Chem, 261, 12919-21). Cette apolipoprotéine est synthétisée uniquement dans le foie. Sa concentration plasmatique est de 1,0-1,2 g/l. L'apoB-100 est le transporteur plasmatique majeur du cholestérol synthétisé dans le foie vers les autres cellules de l'organisme. Une autre version de l'apoB, l'apoB-48, est présente dans les
chylomicrons. Chez l'homme, l'apoB-48 est synthétisée dans l'intestin.
L'apoB-48 a une masse de 260kDa et contient 2152 acides aminés qui correspondent de façon linéaire à 48% du côté N-terminal de l'apoB-100 (Powell et al, 1987, Cell 50, 831-40). Sachant que la moitié C-terminale de l'apoB-100 contient la zone de liaison de l'apoB-100 au récepteur LDL, l'apoB-48 ne se fixe pas sur ce dernier et se comporte métaboliquement différemment. L'apolipoprotéine AIV (apoAIV] est une protéine constituée de 376 acides aminés, synthétisée spécifiquement dans l'intestin sous la forme d'un précurseur de 396 résidu. La protéine plasmatique, est relativement abondante [0.16 g/l] et a une masse moléculaire de 46.000 daltons. Elle est un composant majeur des chylomicrons sécrétés dans la lymphe, mais elle présente la particularité d'être majoritairement sous forme non associée avec des lipoprotéines dans le plasma (R.B. Weinberg et Coil., 1983, J. Lipid. Research, 24: 52-59). Par ailleurs, l'apoAIV plasmatique est polymorphe, bien que la nature de ce polymorphisme soit encore inconnue (G. Utermann et Coll., 1982, J. Biol. Chem. 257: 501-507). Le rôle physiologique de l'apoAIV demeure également assez peu connu. On sait qu'elle peut activer in vitro la lécithin-cholestérol-acyltransférase [LCAT) (Steinmetz et Coll., 1985, J. Biol. Chem., 260: 2258-2264) et qu'elle peut, comme l'apolipoprotéine AI, interférer avec la fixation des particules de HDL sur les cellules endothéliales aortiques bovines (Savion et Coll., 1987, Eur. J. Biochem., 257: 4171-4178). Ces deux activités indiquent que l'apoAIV intervient très vraisemblablement comme médiateur du transport inverse du cholestérol. Le gène de l'apoAIV a été cloné et décrit dans l'art antérieur (voir notamment WO 92/05253 et Elshourbagy et col, J. Biol. Chem., 1987, 262(17), 7973-7981). Parmi les produits protéiques à activité de type apolipoprotéine AIV, on peut citer notamment les fragments et dérivés
décrits dans la demande de brevet FR 92 00806.
L'apolipoprotéine E comprend 317 résidus dont 18 correspondent au peptide signal. Il n'y a pas de propeptide. Le gène de rapoE a été cloné et séquencé (environ 3600bp) et code pour un ARNm de 1163bp, [Das et coll, J. Biol. Chem., 1985, 260, 6240-6247). L'apoE est répartie dans le plasma entre les particules VLDL et HDL. Elle représente environ 10-20% des proteines des VLDL et 2% des protéines des HDL. Les HDL-E constituent une sous-classe distincte de HDL. La concentration plasmatique de l'apoE
est d'environ 0.05 g/l. L'apoE est synthétisée sous la forme d'une sialo-
protéine qui est ensuite désialilée dans le plasma. La synthèse de rapoE est réalisée par le foie et faiblement par l'intestin. Cependant, contrairement aux autres apolipoprotéines, l'apoE est également synthétisée dans de
nombreux autres tissus (cerveau, rein, surrénales, cellules réticulo-
endothéliales...). L'apoE reconnait avec une très forte affinité le récepteur aux LDL (apoB/E receptor) mais également un autre récepteur sur les cellules hépatiques ne reconnaissant pas l'apoB (chylomicron/remnant receptor). Un polymorphisme a été mis en évidence sur la base de mobilités electrophorètiques différentes. Six phénotypes majeurs {E2/2, E2/3, E2/4, E3/4, E3/3, E4/4) ont ainsi été décrits. Selon les études menées sur de grandes populations caucasiennes, la prévalence des allèles correspondants serait de 14-15% pour e4, de 74-78% pour e3 et 8-12% pour e2. Un écart est trouvé chez les Finlandais pour lesquels e4 est plus abondant (2396%) et e2 moins abondant(4%). L'allèle normal est e3. L'allèle e2 correspondrait à la dyslipoprotéinémie de type III (phénotype E2/2), maladie associée à une augmentation du cholestérol et des triglycérides, des xanthomes et à une athérosclerose précoce. Une association entre l'allèle e4 et la maladie
d'Alzheimer familiale a été rapportée récemment (Strittmatter et al. P.N. A.S.
99 (1993) 1977). Plus récemment la destruction du gène de l'apoE dans la
souris a montré l'apparition d'une hypersusceptibilité à l'athérosclérose (E.
Rubin et al. Cell 1992).
Généralement, la séquence d'ADN génomique insérée comprend également des séquences permettant son expression dans la cellule la contenant. Il peut s'agir de séquences qui sont naturellement responsables de l'expression dudit gène lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans ladite cellule. Il peut également s'agir de s6quences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences de gênes eucaryotes ou viraux. A titre d'exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter, ou du génome d'un virus, et notamment, les promoteurs des gènes E1A, MLP d'adénovirus, le promoteur CMV, LTR-RSV, etc. Les séquences promotrices non virales préférentiellement utilisées sont les promoteurs ApoAI ou les enhancers hépatiques de l'ApoE ou intestinaux de l'apo CIII. Bien entendu, ces séquences d'expression peuvent en outre, être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, etc. la présente invention vise également la protection d'un lapin transgénique selon l'invention susceptible d'interférer dans les pathologies
liées aux dyslipoprotéinémies.
L'invention a également pour objet un procédé d'obtention du lapin
transgénique revendiqué.
Plus précisément, elle se rapporte à un procédé d'obtention du lapin transgénique selon l'invention mettant en oeuvre rinjection dans un embryon de lapin, d'au moins une séquence d'ADN exogène génomique codant pour une protéine susceptible d'interférer dans les pathologies liées aux dyslipoprotéinémies, le transfert de l'embryon à une lapine receveuse et après la naissance, le contrôle de la présence de ladite séquence d'ADN
génomique dans le génome du lapin nouveau-né.
Le procédé d'obtention selon l'invention est décrit plus en détail dans l'exemple 2 présenté ci-après. La mise en oeuvre d'un tel procédé ne pose aucune difficulté à l'homme de l'art familiarisé aux techniques de
micro-injection, de prélèvement et d'implantation d'embryons.
La présente invention se rapporte également à l'utilisation du lapin transgénique revendiqué pour détecter l'activité d'agents thérapeutiques ou de méthodes thérapeutiques en vu de prévenir et/ou traiter les pathologies liées aux dyslipoprotéinémies ainsi qu'aux procédés de détection de nouveaux composés mettant en oeuvre ce lapin et aux composés ainsi caractérisés. La présente invention offre ainsi un modèle animal particulièrement avantageux pour détecter des agents thérapeutiques spécifiques au traitement et/ou à la prévention des pathologies liées aux dyslipoprotéinémies, en particulier dans le domaine des affections cardiovasculaires comme l'infarctus du myocarde, l'angor, la mort subite, la décompensation cardiaque, les accidents cérébro-vasculaires, ou dans le domaine des affections neurologiques o certaines apolipoprotéines comme l'apoE semblent jouer un rôle important (maladies du viellissement
neuronal, Alzheimer familial, régénération neuronale).
La présente invention est plus complètement décrite à l'aide des exemples et de la figure 1 qui suivent, qui doivent être considérés comme
illustratifs et non limitatifs.
Figure 1: Représentation de l'ADN génomique codant pour
l'apolipoprotéine AI.
EXEMPLE 1
PREPARATION DU FRAGMENT GENOMIDUE D'APO-AI
Un fragment d'ADN contenant le gène codant pour l'apolipoprotéine AI humaine, sous contrôle de son propre promoteur, a été obtenu par
criblage d'une banque génomique humaine.
Pour cela, une banque de fragments partiels EcoRI d'ADN chromosomique issu des cellules K562 a été construite dans le bactériophage Charon 4a. Cette banque a été ensuite criblée par hybridation avec une sonde d'ADN complémentaire de l'apolipoprotéine AI humaine. Le clone K 3-5-10 a été isolé dans ce criblage et analysé par rapport aux cartes de restriction publiées pour le complexe génomique AI/CII/AIV
(S.K. Karathanasis et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 6147-6151, 1983.
S.K. Karanthanasis, Proc Natl. Acad. Sci. USA, 82, 6374-6378, 1985). Il contient en particulier un fragment EcoRI d'environ 12,5 kbases qui hybride
avec l'ADN complémentaire de l'Apo-AI (cf. figure 1).
Le phage K3-5-10 a été amplifié en milieu solide et son ADN préparé par des techniques classiques. Le fragment de restriction EcoRI-BamHI (la digestion BamHI permet de bien séparer ce fragment sur un gel d'agarose) contenant le gène de l'ApoAI a ensuite été purifié à partir d'un gel d'agarose préparatif et dialysé contre une solution de tris 10 mM pH 7-5
EDTA 0.1 nM avant injection.
EXEMPLE 2
GENERATION DES LAPINS TRANSGENIOUES SELON L'INVENTION
La superovulation de 28 lapines de la race néozélandaise et agées de 5 mois a été induite par injection de 0,375 mg de FSH (folliculine stimulating hormone) de porc matin et soir pendant 1 jour, puis de 0,782 mg de FSH de porc matin et soir le jour suivant et enfin de 0,375 mg de FSH de porc le 3ème jour au matin. Vers 16 heures le même jour, les 16 lapines, en état de superovulation, ont été mises en présence de mâles de la même race, pour être fécondées. A l'issue de la fécondation, 0,33 mg de LH (luteising hormone) sont injectées à chaque lapine. Le 4ême jour au matin, les femelles ont été séparées des mâles, puis sacrifiées. Les embryons sont
prélevés par lavage de l'utérus de chaque lapine.
Les oeufs, encore agglutinés par un tissu folliculeux sont trempés pendant 20 minutes, environ dans une solution de hyaluronidase. Puis ils sont lavés deux fois dans la solution de Brinster. Pour les manipuler ensuite sous le microscope, les oeufs ont été déposés dans une goutte de solution Brinster-Hépès additionnée de cytochalasine. Cette solution permet
à l'oeuf d'avoir une meilleure résistance à l'injection.
Par observation au microscope (grossissement xlO0 x 200) les oeufs ont été sélectionnés et mis en culture dans du milieu B2 Menezo@. Environ
500 embryons ont été retenus pour la microinjection.
Ce même quatrième jour, dans un délai très court de l'ordre de 30 minutes après leur prélèvement, les embryons reçoivent par micro- injection dans le pronucléus mâle 2 picolitres d'une solution de l'ADN obtenu selon l'exemple 1. L'ADN est à la concentration de 2,5 pg/ml dans lOmM Tris pH
7,5-0,1 mM EDTA.
Ces embryons microinjectés ont été ensuite répartis entre 24 lapines de la race néozélandaise en état de pseudo-gestation. Sur ces 24 lapines seulement 3 d'entre elles n'ont pas mené leur gestation à terme. 41
lapereaux sont nés pour 3 mort-nés.
Pour l'identification des transgéniques, les 41 lapereaux ont été analysés de la façon suivante L'ADN, extrait à partir d'un fragment de queue prélevé sur chaque lapereau, est analysé par PCR pour la présence de l'ADN génomique humain codant pour l'ApoAI. Les amorces suivantes, '-TGGCrCTCGCCAAGTGTCT'ITCAGGTGG-3' et 'GACAGCGGCAGAGACTATGTGTCCCAGTIGAA-3', sont spécifiques de la séquence de l'ApAI humaine et permettent d'amplifier un fragment de
800pb chez les animaux transgéniques.
6 lapereaux transgéniques sur les 41 analysés, ont de cette manière
été identifiés.
Ultérieurement, il a été vérifié que les lapins transgéniques
transmettaient le gène Apo-AI à leur descendance.
EXEMPLE 3
CONTROLE DE L'EXPRESSION DE L'APOLIPOPROTEINE A-I HUMAINE DANS LE PLASMA
DES LAPINS TRANSGENIOUES
Des échantillons de sang frais des lapins transgéniques, agés de 5 mois, et des lapins témoins ont été obtenus par prélèvement à l'oreille après
une nuit à jeun, et introduits dans des tubes contenant de l'acide éthylène-
diamine-tétraacétique à la concentration finale de 1,5 g/l. Après le prélèvement, ces tubes ont été mis directement dans de la glace pillée. Le
plasma a été obtenu par centrifugation lente de 30 minutes à 4 C.
La concentration d'apolipoprotéine A-I humaine a été quantifiée par le kit HYDRAGEL APOAIB (SEBIA, réf. N 4050), kit de gels d'agarose contenant 2 anticorps polyclonaux monospécifiques: anti apoA-I et anti apoB. Ces anticorps sont faits chez le lapin, ce qui exclue les réactivités
croisées homme-lapin.
Les résultats des dosages d'apolipoprotéine A-I humaine obtenus
chez les six lapins transgéniques A-I figurent dans le tableau I ciaprès.
Lapin ApoA-I humaine (g/l) N 1 (mâle) 1,00 N 2 (mâle] 1,21 N 3 (mâle) 0,73 N 4 (mâle) 0,17 N 5 (mâle) 0,30 N 6 (femelle) 0,92 Témoins (5 mâles et 5 femelles) 0,00
Tableau I
EXEMPLE 4
MODIFICATIONS DES PROFILS LIPOPROTEIOUES CHEZ LES LAPINS TRANSGENIQUES
Les dosages de cholestérol total, triglycérides et du cholestérol HDL (high density lipoprotéines) ont été réalisés avec des kits commerciaux (Boehringer Mannheim, Allemagne). Les différentes fractions de lipoprotéines ont été séparées par ultracentrifugation selon la méthode de Havel et al. (R.J. Havel, H.A. Eder et J.H. Bragon, 1955, J. Clin. Invest, vol
34, 1345).
Les résultats des dosages de lipides obtenus chez les 6 lapins transgéniques A-I et lapins témoins, tous âgés de 5 mois, sont représentés
dans les tableaux II et III.
Lapin Triglycérides I(mg/dll N 1 (mâle) 39,10 N 2 (mâle) 11,80 N 3 (mâle] 15,10 N 4 (mâle) 09,80 N 5 (mâle] 29,40 N 6 (femelle*] 09,50 Témoins (5 mâles et 5 femelles) 25,20 (8)
Tableau II
VLDL**
Lapin Cholestérol +LDL-C VLDL LDL HDL Total HDL-C mg/dl g/dl mg/dl mg/dl N 1 (mâle) 0,9 09,7 26,6 37,2 0,40 N 2 (mâle) 0,4 06,0 30,9 37,3 0,20 N 3 (mâle) 1,2 11, 5 19,6 32,0 0,45 N 4 (mâle) 0,6 07,6 13,9 22,1 0,58 N 5 (mâle) 1,2 03,1 10,8 15,1 0,39 N 6 (femelle*) 1,5 06,6 22,5 30,6 0,36 Témoins (5 mâles & 5 2,3 (0,5) 26,1 23,6 52,0 01,20 (0,2) femelles) (5,1] (4,3) (8,2) Tableau ml * = femelle gestante. Entre parenthèse = écart-type
**=Very Low Density Lipoprotein.
Claims (1)
1. Composés mis en évidence selon le procédé de la revendication 10.
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9403263A FR2718329B1 (fr) | 1994-03-21 | 1994-03-21 | Lapin transgénique sensibilisé aux dyslipoprotéinémies. |
EP95913204A EP0751993A1 (fr) | 1994-03-21 | 1995-03-16 | Lapin transgenique sensibilise aux dyslipoproteinemies |
CA002184202A CA2184202A1 (fr) | 1994-03-21 | 1995-03-16 | Lapin transgenique sensibilise aux dyslipoproteinemies |
JP7524423A JPH10501683A (ja) | 1994-03-21 | 1995-03-16 | 異常リポタンパク質血症に対して感作された形質転換ウサギ |
PCT/FR1995/000318 WO1995025793A1 (fr) | 1994-03-21 | 1995-03-16 | Lapin transgenique sensibilise aux dyslipoproteinemies |
US08/704,582 US5792902A (en) | 1994-03-21 | 1995-03-16 | Dyslipoproteinaemia-sensitized transgenic rabbit |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9403263A FR2718329B1 (fr) | 1994-03-21 | 1994-03-21 | Lapin transgénique sensibilisé aux dyslipoprotéinémies. |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2718329A1 true FR2718329A1 (fr) | 1995-10-13 |
FR2718329B1 FR2718329B1 (fr) | 2002-09-20 |
Family
ID=9461240
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR9403263A Expired - Fee Related FR2718329B1 (fr) | 1994-03-21 | 1994-03-21 | Lapin transgénique sensibilisé aux dyslipoprotéinémies. |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5792902A (fr) |
EP (1) | EP0751993A1 (fr) |
JP (1) | JPH10501683A (fr) |
CA (1) | CA2184202A1 (fr) |
FR (1) | FR2718329B1 (fr) |
WO (1) | WO1995025793A1 (fr) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2236982C (fr) * | 1995-11-09 | 2010-07-27 | The Government Of The United States Of America Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Utilisation de la lecithine-cholesterol acyltransferase (lcat) dans le traitement de l'atherosclerose |
GB9525481D0 (en) * | 1995-12-13 | 1996-02-14 | Royston M C | Novel method |
FR2755699B1 (fr) * | 1996-11-08 | 1998-12-18 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouvelles constructions et vecteurs pour l'expression ciblee et inductible des genes |
PT1049767E (pt) * | 1998-01-08 | 2005-10-31 | Agronomique Inst Nat Rech | Coelho transgenico que expressa uma lipoproteina (a) humana funcional |
PL356887A1 (en) | 2000-01-12 | 2004-07-12 | Yale University | Nogo receptor-mediated blockade of axonal growth |
EP1122314A1 (fr) * | 2000-02-04 | 2001-08-08 | Leja Research B.V. | Procédé de production de protéine |
US20040033480A1 (en) * | 2002-08-15 | 2004-02-19 | Wong Norman C.W. | Use of resveratrol to regulate expression of apolipoprotein A1 |
EP1838296B1 (fr) * | 2004-10-20 | 2012-08-08 | Resverlogix Corp. | Flavanoides et isoflavanoides pour la prevention et le traitement de maladies cardio-vasculaires |
WO2007016525A2 (fr) * | 2005-07-29 | 2007-02-08 | Resverlogix Corp. | Compositions pharmaceutiques pour la prevention et le traitement de maladies complexes et leur administration par des dispositifs medicaux inserables |
ES2454966T3 (es) | 2007-02-01 | 2014-04-14 | Resverlogix Corp. | Compuestos para la prevención y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares |
US8114995B2 (en) | 2008-06-26 | 2012-02-14 | Resverlogix Corp. | Methods of preparing quinazolinone derivatives |
ES2542835T3 (es) | 2009-01-08 | 2015-08-12 | Resverlogix Corporation | Compuestos para la prevención y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares |
CA3146333A1 (fr) | 2009-03-18 | 2010-09-23 | Resverlogix Corp. | Derives de la phenyl-quinazolin-4(3h)-one et de la phenyl-pyrido[2,3-d]pyrimidin-4(3h)-one et leurs compositions utiles comme agents anti-inflammatoires |
ES2821018T3 (es) | 2009-04-22 | 2021-04-23 | Resverlogix Corp | Nuevos agentes antiinflamatorios |
RS58911B1 (sr) | 2011-11-01 | 2019-08-30 | Resverlogix Corp | Oralne formulacije sa trenutnim otpuštanjem za supstituisane hinazolinone |
WO2014080291A2 (fr) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Rvx Therapeutics Inc. | Dérivés biaryle servant d'inhibiteurs de bromodomaines |
US9073878B2 (en) | 2012-11-21 | 2015-07-07 | Zenith Epigenetics Corp. | Cyclic amines as bromodomain inhibitors |
US9271978B2 (en) | 2012-12-21 | 2016-03-01 | Zenith Epigenetics Corp. | Heterocyclic compounds as bromodomain inhibitors |
CA2977308A1 (fr) | 2015-03-13 | 2016-09-22 | Resverlogix Corp. | Compositions et procedes therapeutiques pour le traitement de maladies associees au complement |
EP4281034A1 (fr) | 2021-01-24 | 2023-11-29 | Forrest, Michael, David | Inhibiteurs d?utilisations cosmétiques et thérapeutiques d?atp synthase |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993019166A1 (fr) * | 1992-03-23 | 1993-09-30 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Petits animaux modeles pour l'etude de metabolisme du cholesterol |
-
1994
- 1994-03-21 FR FR9403263A patent/FR2718329B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-03-16 JP JP7524423A patent/JPH10501683A/ja not_active Ceased
- 1995-03-16 US US08/704,582 patent/US5792902A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-16 EP EP95913204A patent/EP0751993A1/fr not_active Withdrawn
- 1995-03-16 CA CA002184202A patent/CA2184202A1/fr not_active Abandoned
- 1995-03-16 WO PCT/FR1995/000318 patent/WO1995025793A1/fr not_active Application Discontinuation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993019166A1 (fr) * | 1992-03-23 | 1993-09-30 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Petits animaux modeles pour l'etude de metabolisme du cholesterol |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
BIOLOGICAL ABSTRACTS, vol. 96, no. 3, 1 August 1993, Philadelphia, PA, US; abstract no. 28308, PEREVOZCHIKOV, A.P. ET AL.: "Human APO A-1 cDNA gene expression in transgenic rabbits: modeling of the neurological syndrome of human Tangier disease" page 507-508; * |
DUVERGER, N. ET AL.: "Functional characterization of human recombinant apolipoprotein AIV produced in Escherichia coli", EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY, vol. 201, no. 2, October 1991 (1991-10-01), pages 373 - 383 * |
LATTA, M. ET AL.: "Human apolipoprotein AII can be overproduced as a recombinant protein from E. coli.", CIRCULATION, vol. 86, no. 4, October 1992 (1992-10-01), pages 133 * |
MOL. BIOL., vol. 27, no. 1, 1993, MOSCOU, RUSSIE, pages 24 - 37 * |
SCHULTZ, J.R. ET AL.: "Protein composition determines the anti-atherogenic properties of HDL in transgenic mice", NATURE., vol. 365, no. 6448, 1993, LONDON GB, pages 762 - 764 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0751993A1 (fr) | 1997-01-08 |
CA2184202A1 (fr) | 1995-09-28 |
WO1995025793A1 (fr) | 1995-09-28 |
US5792902A (en) | 1998-08-11 |
FR2718329B1 (fr) | 2002-09-20 |
JPH10501683A (ja) | 1998-02-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FR2718329A1 (fr) | Lapin transgénique sensibilisé aux dyslipoprotéinémies. | |
Zhao et al. | Hyperlipidemia induces typical atherosclerosis development in Ldlr and Apoe deficient rats | |
Fan et al. | Rabbit models for the study of human atherosclerosis: from pathophysiological mechanisms to translational medicine | |
Langner et al. | The fatty liver dystrophy (fld) mutation: a new mutant mouse with a developmental abnormality in triglyceride metabolism and associated tissue-specific defects in lipoprotein lipase and hepatic lipase activities | |
Agellon et al. | Reduced high density lipoprotein cholesterol in human cholesteryl ester transfer protein transgenic mice | |
AU720830B2 (en) | Transgenic "knock out" mice expressing a human apolipoprotein_E | |
EP0701450B1 (fr) | Virus recombinants et leur utilisation en therapie genique | |
Bosze et al. | Application of rabbits in biomedical research: a review | |
JP2002507898A (ja) | アポリポ蛋白質eトランスジェニック動物および解析方法 | |
Fan et al. | Cholesterol-fed and transgenic rabbit models for the study of atherosclerosis | |
JP2010000090A (ja) | 機能あるヒトリポタンパク質(a)を発現するトランスジェニックウサギ | |
Maeda et al. | Anatomical differences and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice with 129/SvEv and C57BL/6 genetic backgrounds | |
US7960606B2 (en) | Mouse model of chronic heart failure and coronary atherosclerosis regression | |
Swanson et al. | High level expression of human apolipoprotein AI in transgenic rats raises total serum high density lipoprotein cholesterol and lowers rat apolipoprotein AI | |
US6437215B1 (en) | SR-BI and ApoE knockout animals and use thereof as models for atherosclerosis and heart attack | |
JP2002536459A (ja) | アテローム性動脈硬化症性病変の形成の阻害 | |
Chan et al. | Animal models of diet-induced Hypercholesterolemia | |
Grimes et al. | Rpl3l gene deletion in mice reduces heart weight over time | |
D’Orléans-Juste et al. | Cardiovascular diseases: new insights from knockout mice | |
US20190289835A1 (en) | Mouse Models Having a Knockin Scavenger Receptor Class B Type I | |
US7081561B2 (en) | Gene-targeted animal model of apolipoprotein E4 domain interaction and uses thereof | |
Wada et al. | Marked high density lipoprotein deficiency due to apolipoprotein AI Tomioka (codon 138 deletion) | |
US9018437B2 (en) | Transgenic mouse expressing human apo(a) and human apo(B-100) with disabled vitamin C gene produces human Lp(a) | |
Benlian | Genetics of dyslipidemia | |
CA2383982C (fr) | Animal transgenique exprimant une forme multi-mutee de la preseniline 1 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
CD | Change of name or company name | ||
ST | Notification of lapse |