FR2682596A1

FR2682596A1 - Matiere cosmetique obtenue a partir d'un bouillon de fermentation d'acide lactique.

Info

Publication number: FR2682596A1
Application number: FR9212584A
Authority: FR
Inventors: Lee Ho; Yang Seung Gak
Original assignee: Amorepacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 1991-10-22
Filing date: 1992-10-21
Publication date: 1993-04-23
Anticipated expiration: 2012-10-21
Also published as: FR2682596B1; US5324515A; KR950014592B1; KR930007435A; JPH05201828A; JPH0714852B2

Abstract

La présente invention fournit une matière cosmétique qui consiste en une phase de désintégration qui est obtenue en prélevant des cellules bactériennes d'acide lactique du bouillon de fermentation lactique, en désintégrant les cellules, en soumettant les cellules brisées à une centrifugation pour donner un surnageant et en ajoutant au surnageant 10 muM à 500 muM d'ions d'au moins un métal puis en filtrant pour obtenir un filtrat, et en une phase d'extraction qui est obtenue en extrayant les pastilles de cellules précipitées par l'étape de centrifugation (a), avec de l'eau ou un solvant organique et un agent tensioactif non ionique et en soumettant l'extrait à une filtration pour obtenir un filtrat. La matière cosmétique de la présente invention présente des propriétés d'épuration des espèces d'oxygène nocives, de renforcement du système de réparation de l'ADN cutané et de renforcement des systèmes immunitaires cutanés. Elle comprend de plus des mannitols et des flavonoïdes afin de stimuler sa capacité d'épuration des espèces d'oxygène nocives.

Description

i

MATIERE COSMETIQUE OBTENUE A PARTIR D'UN BOUILLON

DE FERMENTATION D'ACIDE LACTIQUE

DONNEES DE BASE DE L'INVENTION

1 Domaine de l'invention La présente invention se rapporte à une matière cosmétique fonctionnelle Plus précisément, elle se rapporte à une matière cosmétique fonctionnelle obtenue à partir d'un bouillon de fermentation d'acide lactique, qui présente des propriétés d'épuration des espèces d'oxygène actif, de renforcement du système de

réparation de l'ADN et de renforcement du système immunitaire.

2 Description de l'art antérieur

Les études récentes menées en biologie cellulaire ont permis de développer des cosmétiques fonctionnels

pour, par exemple, retarder le vieillissement chez l'homme Un aspect du développement des cosmétiques20 fonctionnels est de fournir des cosmétiques qui soient capables d'épurer les espèces nocives d'oxygène actif.

Les espèces d'oxygène actif sont des sous-produits engendrés par le métabolisme de l'oxygène chez l'homme et d'autres mammifères, et comprennent, par exemple, le25 radical superoxyde ( 02), le radical hydroxyle ( OH) et l'oxygène singulet ( 102) Ces espèces d'oxygène actif ont des rôles essentiels dans la superoxydation des lipides, la dénaturation des protéines et la mutation des acides nucléiques Bien que les espèces nocives d'oxygène30 actif soient continuellement détruites par des enzymes protectrices, par exemple, la superoxyde dismutase, la catalase et la glutathione peroxydase, ces défenses ne sont pas efficaces à 100 %, et en particulier le vieillissement et les stimuli de l'environnement amoindrissent

l'efficacité des défenses par les enzymes protectrices.

Ainsi, une destruction chimique des cellules peut-elle en résulter Un exemple de lésion cellulaire provoquée par ces espèces d'oxygène sont la lésion de l'ADN, qui peut pratiquement aboutir à la formation d'un cancer

(Leibvitz B E & Siegel B W 1980, J Gerontol 35:45).

Les espèces d'oxygène actif sont également liées à l'inflammation (William F P et al, Proc Natl Acad. Sci USA 77:1159 ( 1980)) et à diverses maladies

(Chikako Nishigen M D et al, J Invest Derma 1989).

La nécessité de trouver un agent actif artificiel qui puisse épurer les espèces d'oxygène nocives a conduit au développement de matières cosmétiques contenant de la superoxyde dismutase, des flavonoïdes15 et des lactoférines Toutefois, ces composants actifs présentent un inconvénient, lorsqu'ils sont utilisés dans des compositions cosmétiques pour la peau, dans la mesure o la superoxyde dismutase est très peu soluble dans les huiles, instable et que son adsorption et son20 absorption par la peau sont médiocres En outre, les lactoférines ont un inconvénient dans la mesure o leur production à partir du lait par des méthodes d'extraction est compliquée et que le rendement est faible.25 Un autre aspect du développement de cosmétiques fonctionnels est de découvrir un agent qui puisse renforcer les systèmes de réparation de l'ADN dans la peau L'ADN est le matériau génétique d'une cellule qui porte les informations génétiques et qui joue les plus30 grands rôles dans la survie des cellules Les molécules d'ADN sont toujours exposées à diverses sources y occasionnant des lésions et possèdent également des mécanismes enzymatiques spécifiques pour réparer les sites lésés Toutefois, les agressions continues de35 l'environnement et le vieillissement amoindrissent l'efficacité de réparation de 1 'ADN par le mécanisme enzymatique Les cellules lésées, qui ne sont pas réparées, peuvent devenir cancéreuses et engendrer des disparitions de cellules cutanées et des maladies de la peau en nombre anormalement élevé (V A Bohr et al, 1989, Laboratory Investigation 61 ( 2):143) En particulier, une exposition excessive à la lumière UV du soleil provoque une formation de dimère de thymine qui engendre des disparitions cellulaires et la

mutation de l'ADN.

Jusqu'ici certaines matières cosmétiques agissant comme agent antimutation ont été développées afin de conférer une capacité de réparation de l'ADN aux compositions cosmétiques et ces matières cosmétiques15 comprennent, par exemple, des extraits végétaux spécifiques, des extraits de placenta et des extraits de la souche Actinomycetes Toutefois, les extraits dérivés de végétaux et des souches Actinomycetes ne sont pas très bien tolérés par la peau et peuvent avoir20 des effets indésirables Les extraits de placenta ne présentent pas ces problèmes, mais leur production est limitée. Un autre aspect du développement des compositions cosmétiques fonctionnelles est de fournir un agent qui puisse renforcer les systèmes immunitaires cutanés Le système immunitaire est un mécanisme de défense d'un organisme vivant, qui maintient et protège l'organisme de l'environnement contenant une grande diversité d'agents microbiens infectieux Le vieillissement30 affaiblit considérablement la capacité du système immunitaire, ce qui conduità diverses maladies de la peau (Atsushi Uchida, Fragrance J, 19 C 9):29 ( 1991)). Toutefois, jusqu'ici aucun agent stimulant la fonction des systèmes immunitaires dermiques, qui puisse être35 utilisé dans des compositions cosmétiques, n'a été proposé. A ce propos, il est connu qu'un facteur hydratant utile peut être obtenu à partir du lait écrémé En particulier, l'USP 4 524 136 décrit un procédé de préparation d'une matière cosmétique comprenant les étapes de réalisation simultanée des procédés de fermentation de l'acide lactique par les bactéries de l'acide lactique et de décomposition de la caséine par les protéases dans le lait écrémé; et de réalisation10 simultanée des procédés de stérilisation des bactéries de l'acide lactique et d'inactivation des protéases pour produire un matériau cosmétique Toutefois, ledit brevet est fondé sur le fait que les lactates sont un facteur hydratant utile et son objectif est de fournir15 une matière cosmétique transparente qui puisse être aisément absorbée et adsorbée par la peau et, par conséquent, n'a pas de rapport avec la présente invention. Les présents inventeurs ont découvert qu'une matière cosmétique, qui soit utile pour épurer les espèces d'oxygène nocives et possède la propriété

d'hydratation, peut être obtenue par fermentation d'une bactérie de i' acide lactique dans du lait écrémé ou du lait écrémé en poudre contenant des ions métalliques et25 des protéases et par traitement des cellules recueillies (demande de brevet coréen no 90-6419).

Toutefois, la matière cosmétique obtenue par la méthode décrite dans ladite demande de brevet est insuffisante au niveau de sa capacité de renforcement du système de30 réparation de l'ADN En outre, cette méthode est moins rentable et l'efficacité de renforcement de la réparation de l'ADN par ce produit est moindre car seul le surnageant obtenu par centrifugation des cellules brisées est utilisé. 35 Par conséquent, il est encore nécessaire de trouver une matière cosmétique qui présente des propriétés d'épuration des espèces nocives d'oxygène actif, de renforcement du système de réparation de l'ADN et de renforcement du système immunitaire tout en étant 5 compatible avec la peau et absorbée par elle, et qui

l'irrite moins.

RESUME DE L'INVENTION

Ainsi, un objectif de l'invention est de fournir une matière cosmétique présentant des propriétés d'épuration des espèces d'oxygène nocives, de renforcement du système de réparation de l'ADN et de renforcement du système immunitaire, qui consiste en15 (a) une phase de désintégration qui est obtenue en prélevant des cellules bactériennes d'acide lactique du bouillon de fermentation lactique, en désintégrant les cellules, en soumettant les cellules brisées à une centrifugation pour donner un surnageant et en ajoutant20 au surnageant 10 p M à 500 p M d'ions d'au moins un métal puis en filtrant pour donner un filtrat et (b) une phase d'extraction qui est obtenue en extrayant les pastilles de cellules, qui proviennent de l'étape de centrifugation en (a), avec de l'eau ou un solvant25 organique et un agent tensioactif non ionique et en soumettant l'extrait à une filtration pour donner un filtrat. Un autre objectif de l'invention est de fournir une matière cosmétique présentant des propriétés d'épuration des espèces d'oxygène nocives, de renforcement du système de réparation de l'ADN et de renforcement du système immunitaire, qui consiste en (a) une phase de désintégration qui est obtenue en prélevant des cellules bactériennes d'acide lactique du bouillon de fermentation lactique, en désintégrant les cellules, en soumettant les cellules brisées à une centrifugation pour donner un surnageant, et en ajoutant au surnageant 10 p M à 50 p M d'ions d'au moins un métal puis en filtrant pour donner un filtrat, (b) 5 une phase d'extraction qui est obtenue en extrayant les pastilles de cellules avec de l'eau ou un solvant

organique et un agent tensioactif non ionique et en soumettant l'extrait à une filtration pour donner un filtrat et (c) un épurateur des espèces d'oxygène10 nocives à poids moléculaire bas choisi parmile mannitol et les flavonoïdes.

Une appréciation plus complète de l'invention et de ses nombreux avantages sera aisément perçue en se

reportant ci-après à la description détaillée de15 l'invention, donnée pour une meilleure compréhension de celle-ci D'autres objectifs, avantages et

caractéristiques de la présente invention seront reconnus par les spécialistes de l'art à partir des descriptions suivantes.20

BREVE DESCRIPTION DES DESSINS

La figure 1 est un graphique présentant l'action de renforcement des systèmes de réparation de l'ADN cutané par la matière cosmétique selon l'invention, et la figure 2 est un diagramme en bâtons présentant l'action de renforcement des systèmes immunitaires

cutanés par la matière cosmétique selon l'invention.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION

Les bactéries d'acide lactique utiles dans la présente invention comprennent les souches du genre Lactobacillus comme Lactobacillus bulgaricus,35 Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus casel et les souches du genre

Streptococcus comme Streptococcus thermophilus.

Le milieu de fermentation de l'acide lactique, qui est utile dans la présente invention, peut être choisi dans les milieux connus qui sont habituellement utilisés pour la fermentation de l'acide lactique, et peuvent comprendre, par exemple, le lait écrémé, le lait écrémé en poudre, le milieu de bouillon MRS

(Difco) et le milieu de bouillon Rogosa (Difco).

Les bactéries d'acide lactique peuvent être inoculées dans le milieu en une concentration de 1 à % La fermentation lactique par les bactéries d'acide lactique se déroule habituellement à 35 à 40 C pendant 20 à 25 heures Il est préférable d'ajouter des protéases au milieu de f açon à décomposer la caséine formée au cours de la fermentation lactique Une

protéase neutre ou acide peut être utilisée.

Le prélèvement des cellules bactériennes d'acide lactique du bouillon de fermentation peut se réaliser par des méthodes connues, par exemple, une centrifugation à 6000 g pendant 30 minutes Les cellules recueillies sont lavées plusieurs fois avec du sérum physiologique ( 0,9 % Na Cl) ou 50 m M d'un tampon de phosphate de potassium (p H 7,5).25 Les cellules lavées peuvent être désintégrées par des méthodes connues De préférence, les cellules sont

désintégrées à l'aide d'un broyeur dyno avec des billes de verre d'un diamètre de 0,1 mm ou par des méthodes décrites par Brian Austin et al, 1981, dans Manual of30 Methods of General Bacteriology édité par ASM.

Les cellules brisées sont centrifugées à 15000 g pendant 30 minutes et 10 à 500 p M d'ions d'au moins un métal sont ajoutés dans le surnageant La solution est filtrée avec un ultrafiltre dont la coupure est de35 10 000 daltons Le filtrat en résultant est dénommé phase de désintégration Les ions métalliques ajoutés dans le surnageant sont des métaux bivalents choisis

dans le groupe consistant en Cu, Fe, Mn, Mg, Zn et Ni.

Les métaux sont présents sous la forme de sels avec des acides inorganiques ou organiques, par exemple, des sulfates, des phosphates, des chlorures, des bromures et des citrates Les sels inorganiques, surtout les sulfates, sont de préférence utilisés Les sels métalliques peuvent être utilisés seuls ou mélangés

entre eux.

Par ailleurs, les pastilles de cellules obtenues par la centrifugation des cellules brisées sont extraites avec de l'eau ou un solvant organique polaire choisi parmi l'éthanol ou le méthanol dilués plus un agent tensioactif non ionique L'eau ou le solvant organique polaire est utilisé en une quantité représentant 20 à 50 fois en volume le poids des pastilles de cellules La quantité de l'agent tensioactif non ionique utilisé peut aller de 0,01 à 0,1 * (p/v) L'extraction peut se dérouler par un repos de 2 à 5 jours ou par chauffage pendant 30 min à 3 heures L'extrait est

filtré avec un ultrafiltre dont la coupure est de 10.000 daltons Le filtrat en résultant est dénommé phase d'extraction.

Les agents tensioactifs non ioniques peuvent être choisis parmi les agents connus qui sont couramment utilisés dans des compositions cosmétiques et peuvent comprendre, par exemple, du Tween 20 (polyoxyéthylène ( 20) sorbitanne monolaurate), du Tween 60 (polyoxyéthylène ( 60) sorbitanne monostéarate), du Tween 80 (polyoxyéthylène ( 80) sorbitanne monooléate) et du polyoxyéthylène ( 23) lauryl éther. Le rapport pondéral entre la phase de désintégration et la phase d'extraction contenues dans la matière cosmétique selon l'invention varie entre :1 et 1:10, de préférence entre 2:1 et 1:2, et de

préférence encore 2:1.

La matière cosmétique selon l'invention comprend, en plus de la phase de désintégration et de la phase d'extraction, un épurateur d'oxygène actif à poids moléculaire bas choisi parmi les mannitols et les flavonoïdes de façon à stimuler son action d'épuration des oxygènes nocifs La quantité d'épurateur ajouté dans la matière cosmétique varie habituellement entre10 10 Pl M et 1 m M.

L'expression phase de désintégration utilisée dans la description et les revendications de la demande

signifie une solution qui est obtenue en prélevant des cellules bactériennes d'acide lactique du bouillon15 de fermentation lactique, en désintégrant les cellules, en soumettant les cellules brisées à une centrifugation

pour donner un surnageant et en ajoutant au surnageant entre 10 p M et 500 p M d'ions d ' au moins un métal puis en filtrant pour obtenir un filtrat Et l'expression20 phase d'extraction utilisée dans la description et les revendications signifie une solution qui est

obtenue en prélevant des cellules bactériennes d'acide lactique du bouillon de fermentation lactique, en désintégrant les cellules, en soumettant les cellules25 brisées à une centrifugation pour donner des pastilles de cellules et en extrayant les pastilles de cellules avec de l'eau ou un solvant organique polaire plus un agent tensioactif non ionique puis en filtrant pour obtenir un filtrat.30 La matière cosmétique présente d'excellentes propriétés d'épuration des espèces d'oxygène nocives et de renforcement du système de réparation de l'ADN et du système immunitaire cutané. La matière cosmétique selon l'invention peut être incorporée dans les compositions cosmétiques conventionnelles en une quantité de 0,01 à 1,0 % en poids sur la base de la composition cosmétique La composition cosmétique peut être, mais n'y est pas limitée, une composition cosmétique de soins cutanés comme les lotions cutanées, les eaux de toilettes, les astringents, les crèmes pour le visage, les lotions, les lotions corporelles, les crèmes démaquillantes, les lotions démaquillantes, les lotions pour les mains, les essences, les masques pour le visage ou les crèmes de massage et une composition cosmétique de soins capillaires comme les shampoings, les démêlants, les

laques, les crèmes ou les lotions.

La présente invention étant décrite dans son ensemble, une compréhension plus complète peut être apportée en se reportant aux exemples qui sont fournis ici à des fins d'illustration uniquement, et ne

limitent l'invention draucune manière.

Exemple l

Après avoir stérilisé et refroidi un milieu, qui a été préparé en ajoutant 1,0 % de protéase bactérienne neutre (activité: 8000 (PU)T Yr Ca S F-RI/9) d'une source de Bacillus subtiles à 1 t de lait écrémé ( 10 % de teneur en matières solides non grasses) et en faisant réagir le mélange à 45 O C pendant 30 min, d'une manière25 conventionnelle, 2 à 3 % de starter de Lactobacillus bulgaricus y ont été inoculés Après culture à 40 O C pendant 48 heures, la solution de culture a été centrifugée à 6000 g pendant 20 minutes pour recueillir les cellules.30 Les cellules ont été mises en suspension à une concentration de 10 * dans une solution de Na Cl aqueuse à 0,9 % et désintégrées avec un broyeur dyno contenant des billes en verres de 0, 1 mm ( 3000 tr/min) à raison de 3 ú/heure La suspension en résultant a été soumise35 à une centrifugation à 15000 g pendant 30 min et 10 p M 1 l de Mn SO 4 ont été ajoutés dans le surnageant Le mélange a été filtré avec un ultrafiltre NMWC 10 000 (coupure de 10.000 daltons, Whatman) pour obtenir 250 ml de filtrat Le filtrat est dénommé phase de désintégration. Par ailleurs, aux pastilles de cellules obtenues dans l'étape de centrifugation ci-dessus ont été ajoutés 20 volumes d'eau et 0,01 % (p/v) de Tween 80 (polyoxyéthylène ( 80) sorbitanne monooléate) et l'extraction s'est déroulée sous chauffage pendant 3 heures L'extrait a été filtré avec un ultrafiltre NMWC 10 000 (Whatman) pour obtenir 150 ml de filtrat,

qui est dénommé phase d'extraction.

Exemple 2

En suivant la procédure de l'exemple 1 mis à part que 2 à 3 % de starter de Streptococcus thermophilus ont été inoculés dans le milieu de bouillon MRS (Difco), un surnageant a été obtenu Après adjonction de 100 p M de Fe 504 et 100 p M de Ni SO 4-6 H 20, le mélange a été filtré avec un ultrafiltre NMWC 10 000 (Whatman) pour obtenir 200 ml de filtrat qui est dénommé phase de désintégration. Par ailleurs, aux pastilles de cellules résultant de la centrifugation ont été ajoutés 30 volumes d'éthanol à 70 % et 0,05 % (p/v) de Tween 20 (polyoxyéthylène ( 20) sorbitanne monooléate) et l'extraction s'est déroulée sous chauffage pendant 2 heures L'extrait a été filtré avec un ultrafiltre NMWC 10 000 (Whatman) pour obtenir 180 ml de filtrat, qui est dénommé phase d'extraction. Exemple 3 En suivant la procédure de l'exemple 1 mis à part que 2 à 3 % de starter de Lactobacillus helveticus ont été inoculés dans le milieu de bouillon Rogosa (Difco), un surnageant a été obtenu Après adjonction de 200 p M de Zn 504, le mélange a été filtré avec un ultrafiltre NMWC 10 000 (Whatman) pour obtenir 180 ml de filtrat

qui est dénommé phase de désintégration.

Par ailleurs, aux pastilles de cellules résultant de la centrifugation ont été ajoutés 30 volumes de méthanol à 50 % et 0,05 % (p/v) de Tween 20 (polyoxyéthylène ( 20) sorbitanne monooléate), et l'extraction s'est déroulée en laissant reposer le mélange à température ambiante pendant 3 jours.10 L'extrait en résultant a été filtré avec un ultrafiltre NMWC 10 000 (Whatman) pour obtenir 120 ml de filtrat

qui est dénommé phase d'extraction.

Exemple expérimental 1: Action d'épuration des espèces nocives d'oxygène actif par la matière cosmétique selon l'invention Afin d'évaluer l'action d'épuration des espèces nocives d'oxygène actif par la matière cosmétique selon l'invention, diverses matières cosmétiques ont été20 préparées en mélangeant la phase de désintégration et la phase d'extraction, qui sont obtenues dans les

exemples 1 à 3, selon la représentation du tableau 1 et testées quant à leur capacité d'épuration des radicaux anioniques superoxyde à l'aide de xanthine oxydase25 par la méthode suivante.

Ainsi, 200 pi d'un tampon de phosphate de potassium 0,5 M, 100 pi de Triton X-100 16 % (Sigma), 10 pl d'acide éthylènediamine-tétraacétique 10 m M, 300 pi de chlorure de néo-tétrazolium 1,2 m M et 150 Pil de xanthi-30 ne oxydase ( 1 unité/nl) ont été mélangés et 200 pi de chaque échantillon de matière cosmétique exposé au tableau 1 y a été ajouté La superoxyde dismutase a été utilisée comme matériau de référence Après adjonction de 100 pi d'hypoxanthine et d'une petite quantité d'eau, le mélange a été mis à réagir à 37 C pendant 20 min Après la fin de la réaction, une absorption a été mesurée à 540 nm et l'activité de la superoxyde dismutase qui inhibe 50 % de la réduction du chlorure de néo-tétrazolium par les radicaux 5 anioniques superoxyde formés à partir de l'hypoxanthine par une action de la xanthine oxydase

a été estimée comme 1 unité L'expérience a été reproduite deux fois et la moyenne a été calculée. Les résultats sont exposés au tableau 1.

Tableau 1

Action d'épuration des radicaux anioniques superoxyde par la matière cosmétique de l'invention Echantillon (dilué à 50 %) Activité Activité d'épuration correspondante

Rapport entre la phase de radical de la superoxy-

Exemple de désintégration anionique sude dismutase n et la phase d'extraction peroxyde (%) a (Unité) b

1:1 96 10

1 1:2 90 5

2:1 98 12

1:1 90 5

2 1:2 85 3

2:1 93 7

1:1 95 9

3 1:2 90 5

2:1 96 10

a Taux d'inhibition de la réduction chlorure de néotétrazolium b 1 unité correspond à environ 150 ng superoxyde dismutase Note: du de Comme le montre le tableau 1, les matières

cosmétiques selon l'invention présentent une excellente capacité d'épuration des radicaux anioniques su-

-peroxyde nocifs, et en particulier les mélanges 2:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction ont un meilleur taux d'inhibition de la réduction du

chlorure de néotétrazolium par le radical anionique su-

peroxyde. Exemple expérimental 2: Action de renforcement du système de réparation de l'ADN par la matière cosmétique selon l'invention L'action de renforcement du système de réparation de l'ADN par la matière cosmétique selon l'invention a été évaluée à l'aide des mêmes échantillons que dans

l'exemple expérimental 1.

Les dimères de thymine formés par le rayonnement UV sont réparés par les systèmes de réparation de l'ADN de l'organisme et, lorsque les systèmes de réparation de l'ADN fonctionnent efficacement, la fixation de thymidine augmente La méthode d'évaluation de la capacité de réparation de l'ADN par la mesure de la fixation de la thymidine est dénommée méthode UDS (Synthèse non prévue de l'ADN) et l'action de renforcement du système de réparation de l'ADN des

échantillons a été testée selon la méthode suivante.

Ainsi, des kératinocytes prélevés dans des cellules épithéliales humaines à l'aide d'un couvercle en verre ont été mis en culture dans un milieu KGM (Clonetics) pendant 24 heures Après avoir exposé les cellules à de la lumière UV à l'aide d'une ampoule germicide G 15 T 8 (Philips) à 10 J/m 2 pendant 10 min, 2,5 m M d'hydroxy- urée et 10 p Ci/ml de 3 H-thymidine ont été ajoutés et la fermentation s'est déroulée pendant 3 heures 0,1 %; 0,3 % ou 0,5 % des échantillons ont été respectivement ajoutés tandis qu'aucun échantillon n'était ajouté au témoin 0,1 m N de thymidine froide a été ajouté pour fixer les cellules, qui ont été enrobées d'une émulsion35 NR-M 2 (Konica) Après maintien à 4 'C pendant 1 semaine, les cellules ont été colorées avec une solution de Giemsa et la radioactivité a été mesurée par spectroscopie à scintillation liquide L'UDS est mesurée en comptant le nombre de grains dans 100 (cent) noyaux de phase non S La mesure a été répétée trois

fois et la moyenne a été calculée.

Les résultats sont exposés à la figure 1 Dans la figure 1, le chiffre 1 indique un mélange 2:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 1, le chiffre 2 indique un mélange 1:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 1, le chiffre 3 indique un mélange 1:2 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 1, le chiffre 4 indique un mélange 2:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 2, le chiffre 5 indique un mélange 2:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 3, et

le chiffre 6 indique le témoin ne contenant pas la matière cosmétique de l'invention.

Comme le montre la figure 1, les matières cosmétiques selon l'invention présentent une excellente

propriété de renforcement du système de réparation de25 l'ADN cutané.

Exemple expérimental 3: Action de renforcement du système immunitaire par la matière cosmétique selon l'invention30 Dans une plaque à 96 trous ont été répartis 50 pl d'antisérum d'immunoglobuline G antihumaine (Ig G) ( 3,5 mg/ml) qui ont été dilués 100 fois avec 5 m M de tampon de carbonate de sodium (p H 9,0) et la plaque a

été maintenue à température ambiante pendant 8 heures.

Après lavage de la plaque avec du TBS (solution saline tamponnée Tris; 10 m M Tris, p H 7,0; 0,15 M Na Cl) complété par du Tween 80 0,01 % (polyoxyéthylène ( 80) sorbitanne monooléate), 100 pl de TBSA (TBS contenant 1 % d'albumine de sérum bovin) ont été ajoutés et le mélange a été laissé au repos pendant 1 heure 50 pl d'une culture de lymphocytes B préparée comme ci-dessous ont été ajoutés et le mélange a été mis à réagir pendant 1 heure Après adjonction de peroxydase de raifort-Ig Gantihumaine dilué 1000 fois avec du TBS, le

mélange a été mis à réagir pendant 1 heure De l'O-

phénylènediamine comme agent de développement de la couleur a été ajoutée et la densité optique à 490 nm a été mesurée L'Ig Ghumaine étalon a été utilisée pour obtenir la courbe étalon à partir de laquelle la

quantité d'Ig G des échantillons a été calculée.

lPréparation de culture de lymphocytes Bl Du milieu RPMI 1640 (Flow Laboratories) complété avec 10 % de sérum de foetus de veau, 50 pg/ml de pénicilline et 100 pg/ml de streptomycine a reçu des lymphocytes T en une concentration de 2 x 106 cellules/ml et 0,5 % d'échantillons obtenus dans l'exemple expérimental 1 y ont été individuellement ajoutés La fermentation s'est déroulée à 37 C pendant 2 jours Le surnageant de la culture de lymphocytes T a été ajouté25 en une concentration de 10 % (v/v) à 10 % de milieu de sérum de foetus de veau pour la culture de lymphocytes B et la culture s'est déroulée pendant 6 jours pour obtenir une culture de lymphocytes B. Les résultats sont exposés à la figure 2 Dans la figure 2, le chiffre 1 indique un mélange 2:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 1, le chiffre 2 un mélange 1:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 1, le chiffre 3 un35 mélange 1:2 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 1, le chiffre 4 un mélange 2:1 de la phase de désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 2, le chiffre 5 un mélange 2:1 de la phase de 5 désintégration et de la phase d'extraction obtenues dans l'exemple 3 et le chiffre 6 indique le témoin ne contenant pas la matière cosmétique del'invention. Comme le montre la figure 2, les matières cosmétiques selon l'invention présentent une excellente

propriété de renforcement du système immunitaire dermique.

Claims

LES REVENDICATIONS SONT LES SUIVANTES

1 Matière cosmétique présentant des propriétés d'épuration des espèces d'oxygène nocives, de renforcement du système de réparation de l'ADN cutané et de renforcement du système immunitaire cutané, qui consiste en (a) une phase de désintégration qui est obtenue en prélevant des cellules bactériennes d'acide lactique du bouillon de fermentation lactique, en désintégrant les cellules, en soumettant les cellules brisées à une centrifugation pour donner un surnageant et en ajoutant au surnageant 10 p M à 500 p M d'ions d'au moins un métal puis en filtrant pour obtenir un filtrat et (b) une phase d'extraction qui est obtenue en extrayant les pastilles de cellules précipitées par l'étape de centrifugation (a) avec de l'eau ou un solvant organique et un agent tensioactif non ionique et en soumettant l'extrait à une filtration pour obtenir un filtrat. et le rapport pondéral entre ladite phase de désintégration et ladite phase d'extraction est de 10:1 à 1:10.25 2 Matière cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle les bactéries d'acide lactique utilisées dans la fermentation lactique sont choisies parmi les souches du genre Lactobacillus et du genre Streptococcus.30 3 Matière cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle lesdits ions métalliques sont des ions de

métal bivalent qui sont choisis dans le groupe consistant en Cu, Fe, Mn, Mg, Zn et Ni, et sont35 utilisés seuls ou mélangés entre-eux.

4 Matière cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle ledit solvant organique est choisi dans des

solvants organiques polaires consistant en méthanol et 5 éthanol.

Matière cosmétique selon la revendication 1, dans laquelle ladite filtration se déroule à l'aide d'un ultrafiltre dont la coupure est de 10 000 daltons.10 6 Matière cosmétique selon la revendication 1, qui comprend de plus un épurateur des espèces d'oxygène

actif à poids moléculaire bas choisi parmi les mannitols et les flavonoïdes.