FR2676072A1 - Vecteur de delivrance d'arn. - Google Patents

Vecteur de delivrance d'arn. Download PDF

Info

Publication number
FR2676072A1
FR2676072A1 FR9105465A FR9105465A FR2676072A1 FR 2676072 A1 FR2676072 A1 FR 2676072A1 FR 9105465 A FR9105465 A FR 9105465A FR 9105465 A FR9105465 A FR 9105465A FR 2676072 A1 FR2676072 A1 FR 2676072A1
Authority
FR
France
Prior art keywords
rna
rna fragment
sep
fragment
pharmaceutical composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
FR9105465A
Other languages
English (en)
Other versions
FR2676072B1 (fr
Inventor
Meulien Pierre
Krishnan Shivadasan
Martinon Frederic
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Transgene SA
Original Assignee
Transgene SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Transgene SA filed Critical Transgene SA
Priority to FR919105465A priority Critical patent/FR2676072B1/fr
Priority to AU17681/92A priority patent/AU652831B2/en
Priority to JP4509832A priority patent/JPH06502998A/ja
Priority to CA002086510A priority patent/CA2086510A1/fr
Priority to EP92910885A priority patent/EP0537326A1/fr
Priority to PCT/FR1992/000393 priority patent/WO1992019752A1/fr
Publication of FR2676072A1 publication Critical patent/FR2676072A1/fr
Application granted granted Critical
Publication of FR2676072B1 publication Critical patent/FR2676072B1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

La présente invention concerne un vecteur de délivrance d'ARN qui comprend un liposome et au moins un fragment d'ARN codant pour un déterminant antigénique caractéristique d'une tumeur ou d'un agent pathogène, ledit au moins un fragment d'ARN étant encapsulé dans ledit liposome.

Description

La présente invention concerne des moyens destinés au transfert à l'intérieur d'une cellule d'un fragment d'ARN codant pour un déterminant antigénique caractéristique d'une tumeur ou d'un agent pathogène ainsi qu'aux compositions pharmaceutiques les comprenant. La présente invention s'applique en particulier au domaine des vaccins.
D'une manière générale, la vaccination traditionnelle consiste à sensibiliser le système immunitaire d'un individu à un agent infectieux (bactérie, virus ou parasite). A cette fin, trois types de vaccins ont été proposés et développés selon les cas, de manière plus ou moins empirique: - Les vaccins inactivés (ou tués) obtenus à partir de bactéries ou de virus entiers qui
ont perdu leur infectivité grâce à des traitements chimiques; - Les vaccins vivants qui sont constitués par des bactéries ou des virus infectieux dont
ia virulence a été atténuée par mutagénèse ou par passages dans divers milieux qui
provoquent des mutations ; et - Les vaccins sous-unités, à base de toxines bactériennes ou d'antigènes d'agents
infectieux purifiés.
D'autre part' on a récemment proposé d'appliquer le principe des vaccins à la prévention des tumeurs malignes. En effet, la plupart des cellules tumorales expriment à leur surface des antigènes qui diffèrent soit qualitativement, soit quantitativement des antigènes présents à la surface des cellules normales correspondantes. Ces antigènes sont dits spécifiques lorsqu'ils sont uniquement exprimes par des cellules tumorales.
Lorsqu'ils sont présents à la fois sur des cellules normales et tumorales, ces antigènes
sont dits associés à la tumeur ; dans ce cas, ils sont présents soit en plus grande quantité,
soit sous une forme différente dans les cellules tumorales.
Une fois le vaccin administré, les cellules du système immunitaire reconnaissent les antigènes du germe étranger, réagissent spécifiquement à cette intrusion et gardent ces antigènes en mémoire ; elles protègeront l'organisme lors d'une infection ultérieure.
D'une manière générale il existe deux grands types de réponse immunitaire: la réponse de type humoral qui est caractérisée par la production d'anticorps par les lymphocytes B et la réponse immunitaire à médiation cellulaire qui met en jeu des cellules effectrices i.e., essentiellement les lymphocytes T8 (lymphocytes cytotoxiques). Ces réponses sont initialement activées par les cellules présentatrices d'antigènes et modulées par les cellules régulatrices i.e., les lymphocytes T4 (lymphocytes T helper) et les lymphocytes T suppresseurs.
Dans ses très grandes lignes, la réponse immunitaire fonctionne ainsi: - Les cellules présentatrices d'antigène (monocytes, macrophages et lymphocytes B)
capturent l'antigène, le digèrent et en réexposent des fragments à leur surface, en
association avec des molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (MHC) de
classe I ou II.
- Les lymphocytes T4 stimulent la prolifération des lymphocytes B producteurs
d'anticorps et celle des lymphocytes T8 (lymphocytes T cytotoxiques ou CI L) quand
ils "voient" les fragrnents d'antigènes associés au complexe majeur
d'histocompatibilité de classe II.
- Les lymphocytes B produisent les anticorps qui vont interagir avec les antigènes
circulants de manière à les neutraliser.
- Enfin les lymphocytes T8 détruisent les cellules infectées quand ils reconnaissent les
fragments d'antigènes associés au complexe majeur d'histocompatibilite de classe I.
On pense actuellement que les vaccins doivent probablement induire à la fois une réponse humorale et à médiation cellulaire pour conférer une immunité solide et durable.
Parmi les types de vaccins cités ci-dessus, les vaccins vivants sont souvent les plus efficaces: ils activent simultanément les lymphocytes B, T4 et T8 en conférant un bon niveau d'immunité. De plus, comme ils se multiplient dans l'organisme, ils agissent à faibles doses et n'exigent généralement pas de rappel. Malheureusement, pour demeurer vivants, ces vaccins doivent généralement être conservés au froid. Le maintien de la chaîne du froid lors des transports est un facteur qui grève de façon nonnégligeable le coût de ces vaccins. Enfin, leur virulence qui est atténuée n'est pas nulle et ils induisent parfois des effets secondaires chez des sujets immunodéprimés. Plus grave encore, ils peuvent recouvrer leur virulence à la suite de mutations inverses, ce qui est rarissime mais proprement intolérable.
Les vaccins sous-unités n'ont pas ces défauts mais ils stimulent généralement moins bien les cellules immunitaires et nécessitent des adjuvants (des molécules qui renforcent leur pouvoir immunogène). Le vaccin contre l'hépatite B, constitué par l'antigène majeur de surface du virus, obtenu par la technologie de l'ADN recombinant, est un exemple de vaccin sous-unité développé avec succès. Toutefois, dans d'autres cas, les résultats ont été décevants.
On pense qu'un facteur limitant le succès des vaccins sous-unités réside dans le fait qu'ils ne sont pas capables d'induire une réponse immunitaire de type cellulaire suffisamment forte. Ceci résulte vraisemblablement de l'impossibilité pour certains antigènes d'être correctement processés et/ou pour leurs fragments, d'entrer en contact avec les molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (MHC) de classe L
En effet, I'association entre les molécules du MHC de classe I (qui participent à la réponse immunitaire de type cellulaire) et les fragments peptidiques a lieu dans le réticulum endoplasmique de la cellule. Pour cela, il faut donc, au préalable, que l'antigène parvienne jusque dans ce compartiment cellulaire.D'une façon générale, l'entrée dans ce compartiment se fait à partir du cytosol où les protéines sont synthétisées par traduction des ARN messagers correspondants. Le passage du cytosol au reticulum endoplasmique s'effectue grâce à deux types de mécanismes: - soit un mécanisme de sécrétion lorsque la protéine est synthétisée sous forme de
précurseur (mis en jeu d'un peptide signal), - soit un mécanisme de "pompe" à peptides.
Les types de vaccins connus jusqu'à présent ne permettent absolument pas de maîtriser cette donnée importante qu'est l'association des molécules du MHC de classe I et des fragments peptidiques. Le plus souvent, les éléments infectieux (bactéries, virus, parasites ou antigènes) sont en effet absorbés par les cellules phagocytaires selon le mécanisme d'endocytose (ou phagocytose). Les vésicules d'endocytose fusionnent avec des lysosomes dont le contenu enzymatique assure la dégradation du matériel phagocyté. Ces vésicules endocytaires et lysosomaies forment un ensemble distinct du réticulum endoplasmique et ne sont pas en contact avec ce dernier.
Par conséquent, même si un antigène est capable d'induire une production d'anticorps neutralisants à son encontre, il n'est absolument pas certain qu'il se révélera au bout du compte efficace pour la mise en oeuvre d'un vaccin sous-unité.
On a maintenant trouvé de manière surprenante que la synthèse d'un antigène pouvait être réalisée directement dans les cellules présentatrices d'antigènes de l'individu à immuniser, lorsque L'ART codant pour cet antigène était administré sous forme apropriée e.g., sous forme de composition liposomale. Le destin de l'ARN ainsi injecté était en effet hautement incertain compte-tenu de sa très courte demi-vie. De plus, il n'était absolument pas évident que 1'ARN soit correctement délivré dans le cytosol et qu'il soit pris en charge par la machinerie cellulaire assurant le processus de traduction.
Ce nouveau mode de vaccination favorise nettement l'association des molécules MHC de classe I avec les fragments peptidiques issus de la digestion de l'antigène puisqu'il a été montré que l'individu ainsi traité était capable de développer une réponse immunitaire mettant en jeu les lymphocytes T cytotoxiques (CTL).
En conséquence, l'invention propose: (i) Un vecteur de délivrance d'ARN qui comprend un liposome et au moins un
fragment d'ARN codant pour un déterminant antigénique caractéristique d'une
tumeur ou d'un agent pathogène, ledit au moins un fragment d'ARN étant
encapsulé dans ledit liposome; (ii) Une composition pharmaceutique destinée au traitement d'une tumeur ou
d'une maladie induite par un agent pathogène, à des fins préventives ou
curatives, qui comprend à titre d'agent thérapeutique un vecteur de délivrance
d'ARN selon l'invention; (iii) Une composition pharmaceutique destinée au traitement d'une tumeur ou
d'une maladie induite par un agent pathogène, à des fins préventives ou
curatives, qui comprend à titre d'agent thérapeutique au moins un fragment
d'ARN codant au moins pour un déterminant antigénique caractéristique de
ladite tumeur ou dudit agent pathogène;; (iv) L'usage d'un vecteur de délivrance d'ARN selon l'invention pour traiter de
manière préventive ou curative, une tumeur ou une maladie induite par un
agent pathogène; (v) En vue de traiter, de manière préventive ou curative, une tumeur ou une
maladie induite par un agent pathogène, I'usage d'un fragment d'ARN codant
au moins pour un déterminant antigénique caractéristique de ladite tumeur ou
dudit agent pathogène.
Un fragment d'ARN utile aux fins de la présente invention est par nature un fragment d'ARN non-infectieux Par définition, il ne contient pas les éléments qui lui permettraient de se répliquer à l'intérieur d'une cellule. De même il ne contient pas l'information génétique nécessaire à la reconstitution d'un agent pathogène (e.g., une bactérie, un virus, ou un parasite) substantiellement complet.
Par "déterminant antigénique", on entend n'importe quel peptide comportant au moins un épitope caractéristique d'un antigène de tumeur ou d'un agent pathogène. Ce déterminant antigénique peut donc être l'antigène natif complet, un précurseur ou un analogue de celui ci, un fragment de l'antigène natif ou un analogue de ce fragment. Par "analogue", on entend une molécule ayant une séquence en acides aminés sensiblement différente de celle de la molécule native e.g., dont la séquence en acides aminés présente un degré d'homologie au moins d'environ 80tu, de préférence d'au moins 90%, de manière tout à fait préférée d'au moins 95% avec la séquence de.la molécule native.
D'une manière générale, le déterminant antigénique peut être caratéristique de n'importe quel type de tumeur ou de n'importe quel agent pathogène.
Afin d'illustrer ce qui précède, on cite à titre d'exemple: - La protéine de la nucléocapside (nucléoprotéine) du virus de la grippe de type A
affectant les humains telle que définie par la séquence de l'ARNm qui lui
correspond. Cette séquence a été publiée dans Huddleston & Brownlee, Nucl. Ac.
Res. (1982) 10 (3):1029.
- Un peptide comportant l'épitope de séquence : Thr-Tyr-Glu-Arg-Thr-Arg-Ala-Leu
Val-Arg. Cet épitope est caractéristique de la nucléoprotéine des virus de la grippe
type - Un peptide comportant la séquence : Thr-Tyr-Glu-Arg-Thr-Arg-Ala-Leu-Val-Thr.
- L'antigène de tumeur H23-ETA associé au cancer du sein chez les humains, tel que décrit dans Wreschner et al, J. Biochem. (1990) 189: 463.
- Un peptide comportant l'épitope majeur de l'antigène H23-ETA, ayant la séquence: Pro-Gly-Ser-Thr-Ala-Pro-X-Ala-His-Gly-Val-Thr-Ser-Ala-Pro-Asp-Y-Arg-Pro-X,
dans laquelle X est Pro ou Ala et Y est Thr ou Asn.
Un vecteur de délivrance d'ARN selon l'invention ainsi qu'une composition pharmaceutique selon l'invention peuvent contenir différents fragments d'ARN chacuns de ces fragments codant pour un déterminant antigénique particulier. Par exemple, un vecteur de délivrance d'ARN selon l'invention destiné au traitement préventif de la grippe peut contenir à la fois: - Un fragment d'ARN codant pour la nucléoprotéine des virus de la grippe de type A
et un fragment d'ARN codant pour la nucléoprotéine des virus de la grippe de type B
ou bien, - Un fragment d'ARN codant pour la nucléoprotéine des virus de la grippe de type A
et un ou plusieurs fragment(s) d'ARN, chacun de ces derniers codant pour
l'hémaglutinine d'une souche particulière du virus de la grippe.
Aux fins de la présente invention, un fragment d'ARN peut être obtenu de manière conventionnelle e.g., par synthèse chimique ou par transcription in vitro du fragment d'ADN correspondant.
Par "liposome", on entend une vésicule essentiellement formée d'une membrane constituée de lipides en double couche. Une telle vésicule peut présenter une ou plusieurs strates membranaires. Dans le premier cas, on parle d'une vésicule unilamellaire tandis que dans le deuxième cas il s'agit d'une vésicule oligo- ou plurilamellaire. De manière typique, la membrane des liposomes est constituée de lipides amphiphyliques tels que les phospholipides, en association ou non avec d'autres consituants lipidiques. Des phospholipides appropriés sont par exemple, la phosphatidylcholine, la phosphatidylsérine, la phosphatidyléthanolamine, les sphingolipides, la cardiolipine, le phosphatidylinositol, l'acide phosphatidique et le phosphatidylglycérol.De plus, on peut aussi prévoir d'utiliser des phospholipides synthétiques dérivés ou non des phospholipides mentionnés ci-dessus, contenant par exemple, des groupements variés tels que des groupement hydroxyles, imidazoles, amine, amides, sulphydryles, etc.
De préférence, d'autres lipides tels que des stérides, le cholestérol, des amines aliphatiques, peuvent être mélangés aux phospholipides. De tels lipides sont en particulier utiles à titre d'agents stabilisants ou anti-oxydants.
Aux fins de la présente invention, un mélange lipidique avantageux est constitué de phosphatidylcholine (PC) et de cholestérol (CH) en proportion variable. On indique toutefois que des proportions PC: CH satisfaisantes sont de l'ordre (en terme de part) de 5:1 à 5 : 5. Un tel mélange à part égale convient particulièrement.
La préparation des liposomes ainsi que l'encapsidation de l'ARN peut être mises en oeuvre selon des techniques connues. En particulier, les techniques d'encapsidation de l'ADN qui sont couramment utilisées, sont applicables dans le cas présent.
En outre, la membrane peut aussi contenir diverses protéines insérées dans la membrane, attachées par liaison covalente à un lipide de la membrane, directement ou indirectement via un agent de liaison, ou simplement en interaction avec un phospholipide. Lorsque'une protéine est liée par liaison covalente à un lipide, ce dernier est de préférence un lipide possédant une fonction amine tel que par exemple, la phosphatidyléthanolamine. Avantageusement ces protéines peuvent être utilisées comme agent de ciblage des liposomes sur une classe particulière de cellules. Ce sont par exemple, des anticorps monoclonaux ou des lymphokines.
Afin de mettre en oeuvre une composition pharmaceutique selon l'invention, 1'ARN peut être de manière avantageuse, soit simplement mélangé à des liposomes mais non encapsidé, soit encapsidé dans des liposomes ; cette dernière alternative étant préférée.
Lorsque l'ARN se trouve simplement mélangé à des liposomes, ces derniers sont de préférence de type cationique. On entend par ce dernier terme, un liposome dont la surface est chargée positivement. De tels liposomes sont en particulier décrits dans Felgner et al, PNAS (1987) 84 :7413.
Aux fins de la présente invention, le (ou les) fragment(s) d'ARN codant pour un déterminant antigénique d'une tumeur ou d'un agent pathogène est (sont) avantageusement accompagné(s) d'un fragment d'ARN codant pour une interleukine- 1, d'un fragment d'ARN codant pour une interleukine4 ou d'un fragment d'ARN codant pour une interleukine-2 ; ce dernier étant tout particulièrement préféré.
Conformément aux buts poursuivis par la présente invention, il doit être entendu qu'un fragment d'ARN codant pour un déterminant antigénique ou une interleukine comporte outre la séquence codante, tous les éléments nécéssaires à la traduction de cette dernière
Lorsque différents fragments d'ARN composent un vecteur ou une composition pharmaceutique selon l'invention, ceux-ci peuvent être partiellement ou totalement liés les uns aux autres, de manière à former au moins un fragment d'ARN polycistronique.
Enfin, une composition pharmaceutique selon l'invention peut être fabriquée de manière conventionnelle. En particulier on associe le ou les agents thérapeutiques selon l'invention avec un diluant ou un support acceptable d'un point de vue pharmaceutique.
Une composition selon l'invention peut être administrée par n'importe quelle voie conventionnelle en usage dans le domaine des vaccins, en particulier par voie souscutanée, par voie intra-musculaire ou par voie intra-veineuse, par exemple sous forme de suspension injectable. L'administration peut avoir lieu en dose unique ou répétée une ou plusieurs fois après un certain délai d'intervalle. Le dosage approprié varie en fonction de divers paramètres, par exemple, de l'individu traité ou du mode d'administration.
L'invention est illustrée ci-après en se référant à la Figure 1 qui représente le plasmide pGEM-3Z.
Exemple 1: Préparation de liposomes chargés en ARN codant pour la nucléoprotéine du virus de la grippe de type A
A) Préparation de l'ARN.
Un fragment EcoRI-SalI comprenant le cDNA codant pour la nucléoprotéine du
virus de la grippe de type A, souche A/NT/60/68 (Huddleston & Brownlee, Nucl.
Ac. Res. (1982) 10 (3): 1029) est obtenu par digestion du plasmide pNP28 (Jones & BR<
Brownlee, Gene (1985) 35: 333).
Ce fragment EcoRI-SalI est inséré dans le plasmide pGEM-3Z (Promega Corp
Figure 1) digéré par EcoRI et Sall de manière à placer le cDNA codant pour la
nucléoprotéine sous le contrôle d'un promoteur reconnu par la RNA polymérase du
phage T7. On obtient ainsi le plasmide pTG3003.
Le plasmide pTG3003 est ensuite linéarisé par digestion avec Sali; puis transcrit en
utilisant un kit de transcription in vitro (Stratagène; ref. catalogue 200 341) selon
les instructions du fournisseur. L'ARN ainsi obtenu est cappé par adjonction dans le
tampon de transcription de 10ul d'une solution de m7G(5')ppp(5')G 5mM
(Pharmacia; n" produit 274635).
B) Préparation des vésicules unilamellaires.
On prépare une solution de cholestérol en dissolvant le produit en poudre (Sigma)
dans du chloroforme à raison de 100mg/ml. Puis dans un tube Corex de 30ml, on
mélange 58yI de la solution de cholestérol et 11+1 d'une solution de
phosphatidylcholine à 100mg/ml (Sigma). Le mélange final a une concentration en
lipides de l'ordre de 30 moles.
Ce mélange est agité vigoureusement au vortex Puis on laisse le solvant s'évaporer
à 40"C. L'opération de séchage est complétée par lyophilisation pendant environ lh.
La couche Iipidique déposée au fond du tube est reprise dans lml d'eau. Le
mélange est homogénéisé au vortex et soniqué à la fréquence minimale en utilisant
un sonicateur Labsonic L de Braun. L'opération s'effectue pendant 10 min. par
passages intermittents de 15 secondes, espacés par 30 secondes de repos au froid.
La suspension ainsi obtenue est centrifugée à 16000 rpm, à 4"C pendant 15 min.
pour sédirnenter les particules de titane et les vésicules les plus grandes
(Biofuge/Heraeus en tube eppendorff). Puis le surnageant contenant une majorité
de vésicules unilamellaires ayant pour diamètre 50 microns environ, est récupéré
dans des tubes Corex de 15ml.
C) Préparation des vésicules oligolamellaires contenant l'ARN.
A la suspension vésiculaire obtenue en B), on ajoute 135nul de la préparation
d'ARN obtenue en A) ; soit 40 pg d'ARN environ. Le mélange est plongé
doucement dans l'azote liquide, en roulant entre ses doigts le tube maintenu
vertical. Lorsque le mélange est complètement congelé, on le lyophilise pendant
toute une nuit.
Le Iyophilisat est réhydraté progressivement dans 100 vil d'eau distillée. Puis on
ajoute goutte à goutte 0,9 ml de tampon Hepes pH 7,05 de composition: NaCI 140
mM, KC1 SmM, Na2HPOq 2H20 0,75mM, Hepes 25mM. La suspension vésiculaire
est ensuite calibrée par extrusions successives au travers d'un premier et deuxième
filtre dont les pores ont respectivement un diamètre de 400nm et de 200nm. La
suspension ainsi obtenue contient une majorité de vésicules oligolamellaires qui ont
encapsulé l'ARN.
Afin d'éliminer de manière substantielle l'ARN non-encapsulé, la suspension est
déposée sur une colonne de Sepharose 4B (10ml ; colonne de section lcm)
prééqullibrée en tampon Hepes. L'élution est poursuivie en tampon Hepes. Les
fractions éluées d'aspect blanc qui contiennent les vésicules sont collectées
ensemble; ceci correspond à un volume d'environ 2ml.
Exemple 2: Induction d'une réponse CII initiée par des liposomes chargés en
ARN codant pour la nucléoprotéine du virus de la grippe de type AO
Trois séries de souris BALB/c correspondant respectivement (i) au test, (ii) contrôle positif et (iii) au contrôle négatif sont préparées comme suit:
(i) Test : les souris recoivent par voie intra-veineuse 21 de la préparation de liposomes obtenue à l'exemple 1.
(ii) Contrôle positif : les souris reçoivent par voie intra-péritonéale 130 unités hémaglutinantes du virus de la grippe de type A, souche Caen (A-Caen). Les différentes souches de type A diffèrent parfois entre elles pour certaines protéines comme l'hémaglutinine ou la neuraminidase mais jamais pour la nucléoprotéine. Par contre il existe des variations en ce qui concerne la nucléoprotéine entre les virus de typeAetB.
(iii) Contrôle négatif : les souris reçoivent par voie intra-veineuse 200ul d'une préparation de liposomes préparées comme à l'exemple 1, l'addition d'ARN ayant été ommise.
15 jours après, les souris de (i) et (iii) reçoivent une injection identique à la première et dans les mêmes conditions.
15 jours après la deuxième injection, la rate des souris est prélevée et dilacérée. Les hématies sont éliminées par choc osmotique. Puis les cellules spléniques sont mises en culture dans des plaques à godets à raison de 5.106 cellules/godets sous un volume de 2ml en milieu de culture DMEM (Gibco) complémenté à 10% de sérum de veau fétal, 2mM de L-glutamine, 50 uM de B-mercaptoethanol, 10mM d'Hepes,lmM de pyruvate de sodium, 10 unités/ml de pénicilline, 10ug/ml de streptomycine, 2,5 Jlg/ml d'amphotéricine et des acides aminés non-essentiels (Flow labs).
Ce milieu contient en outre 5pM du peptide NP 147-158R- de formule : Thr-Tyr-Glu Arg-Thr-Arg-Ala-Leu-Val-Thr-Giy Ce peptide correspond à un épitope systématiquement reconnu par les CIL des souris BALB/c lorsqu'elles sont immunisées avec le virus de la grippe de type A (Bodmer et al, Cell (1988) 52 : 253).
La culture est poursuivie à 37"C sous atmosphère à 7% de C02. Au bout de 7 jours, le milieu de culture initial est remplacé par du milieu frais. Dans chaque godet, on ajoute, de plus, 5 106 cellules de rate de souris BALB/c non soumises à immunisation, ces cellules ayant été irradiées par 4000 Rad de rayonnement gamma
Au 12ième jour de culture, l'activité des CIL est détectée par le test classique de relargage du 51Cr notamment décrit par Martinon et al, J. Immunol. (1989)142 ; 3489.
Des précisions sont données comme suit: 1 à 10x106 cellules de mastocytome de souris DBA/2 (H-2d) histocompatible avec les souris BALB/c (cellules P815), en milieu DMEM, sont incubées en présence de 100 > uCi de Na2 51CrO4 (CEA, France) pendant lh. à 37"C. Les cellules sont lavées deux fois, puis reprises en milieu DMEM.
L'opération est répétée en utilisant des cellules P815 infectées par le virus de la grippe de type A, souche Bangkok (P815/A-Ban) ou par le virus de la grippe de type B souche
Yamagata (P815/B-Yam) L'infection des cellules P815 est au préalable menée comme suit : 106 cellules dans 0,5 ml de milieu DMEM sont infectées par 100 unités hémaglutinantes de virus. Après 90 min à 37C,les cellules sont lavées dans 20 ml de milieu DMEM complémenté avec 10% de SVF pour stopper l'infection. L'expression des protéines du virus est poursuivie 3h à 37 C avant que les cellules soient utilisées dans le test de cytolyse.
Les cellules P815 (cellules cibles) sont alors distribuées dans les puits d'une plaque de microtitration à raison de 3000 cellules par puits. Dans les trois cas (i), (ii) et (iii), les cellules spléniques (cellules effectrices), en milieu DMEM, sont ajoutées dans chaque puit de manière à constituer des séries formant une gamme de rapport cellules effectrices / cellules cibles comprise entre 100/1 et 0,3/1 approximativement. Le peptide NP 147-158R est enfin ajouté à la concentration finale de 2,5 pu. Dans chaque puit, le volume final est de 200ji1.
La plaque est ensuite incubée 4h à 37"C puis centrifugée. Dans chaque puit, on prélève 100 ul de surnageant. La radioactivité de chaque prélèvement est mesurée et les résultats sont exprimés dans le tableau ci-dessous, en pourcentage du relargage du chrome dû à l'activité des cn::
(relargage observé - relargage spontané) lOox ---------------- ---- ---------
(quantité totale de chrome incorporée - relargage spontané)
Figure img00130001
<tb> Infection <SEP> Effectrices <SEP> P815/- <SEP> P815 <SEP> P815 <SEP> PS15 <SEP>
<tb> <SEP> /cibles <SEP> /NP <SEP> /A-Ban <SEP> /B-Yam
<tb> Contrôle <SEP> 40 <SEP> < 5 <SEP> 71 <SEP> 63 <SEP> < 5
<tb> <SEP> positif <SEP> 13 <SEP> < 5 <SEP> 52 <SEP> 46 <SEP> < 5
<tb> (A-Caen) <SEP> 4,4 <SEP> < 5 <SEP> 45 <SEP> 46 <SEP> < 5
<tb> <SEP> 1,5 <SEP> < 5 <SEP> 32 <SEP> 29 <SEP> 9
<tb> Contrôle <SEP> 22 <SEP> < 5 <SEP> 10 <SEP> 11 <SEP> 8
<tb> <SEP> négatif <SEP> 7,4 <SEP> < 5 <SEP> < 5 <SEP> 7 <SEP> < s <SEP>
<tb> <SEP> 2,5 <SEP> < 5 <SEP> < 5 <SEP> 8 <SEP> < 5
<tb> <SEP> Q8 <SEP> < 5 <SEP> < 5 <SEP> 10 <SEP> < 5
<tb> <SEP> Test <SEP> 22 <SEP> 10 <SEP> 53 <SEP> 50 <SEP> 10
<tb> <SEP> 7,4 <SEP> < 5 <SEP> 39 <SEP> 28 <SEP> 5
<tb> <SEP> 2,5 <SEP> < 5 <SEP> 18 <SEP> 20 <SEP> 5
<tb> <SEP> Q8 <SEP> < 5 <SEP> < 5 <SEP> 12 <SEP> < 5
<tb>

Claims (14)

  1. encapsulé dans ledit liposome.
    tumeur ou d'un agent pathogène, ledit au moins un fragment d'ARN étant
    fragment d'ARN codant pour un déterminant antigénique caractéristique d'une
    REVENDICATIONS 1.Un vecteur de délivrance d'ARN qui comprend un liposome et au moins un
  2. 2. Un vecteur de délivrance d'ARN selon la revendication 1, qui comprend un
    liposome, au moins un fragment d'ARN codant pour un déterminant antigénique
    caractéristique d'une tumeur ou d'un agent pathogène et un fragment d'ARN
    codant pour une interleukine-2 ; ledit au moins un fragment d'ARN et ledit
    fragment d'ARN codant pour une interleukine-2 étant encapsulé dans ledit
    liposome.
  3. 3. Un vecteur de délivrance d'ARN selon la revendication 2, dans lequel ledit au
    moins un fragment d'ARN et ledit fragment d'ARN codant pour une interleukine
    2 étant lié l'un à l'autre de manière à former un fragment d'ARN polycistronique.
  4. 4. Un vecteur de délivrance d'ARN selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel
    ledit au moins un fragment d'ADN code pour un déterminant antigénique
    caractéristique d'un virus de la grippe qui est sélectionné parmi la protéine de la
    nucléocapside dudit virus et l'hémaglutinine dudit virus.
  5. 5. Un vecteur de délivrance d'ARN selon la revendication 4, dans lequel un premier
    fragment d'ARN code pour la protéine de la nucléocapside du virus de la grippe et
    un deuxième fragment d'ARN code pour l'hémaglutinine du virus de la grippe
    lesdits premier et deuxième fragments d'ARN étant liés l'un à l'autre de manière à
    former un fragment d'ARN polycistronique qui est encapsulé dans ledit liposome.
  6. 6. Une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention d'une
    tumeur ou d'une maladie induite par un agent pathogène, qui comprend à titre
    d'agent thérapeutique un vecteur de délivrance d'ARN selon 1 ' une des
    revendications 1 à 5, avec un diluent ou un support acceptable d'un point de vue
    pharmaceutique.
  7. 7. Une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention d'une
    tumeur ou d'une maladie induite par un agent pathogène, qui comprend à titre
    d'agent thérapeutique au moins un fragment d'ARN codant au moins pour un
    déterminant antigénique caractéristique de ladite tumeur ou dudit agent
    pathogène , avec un diluent ou un support acceptable d'un point de vue
    pharmaceutique.
  8. 8. Une composition pharmaceutique selon la revendication 7, qui comprend à titre
    d'agent thérapeutique un fragment d'ARN codant au moins pour un déterminant
    antigénique caractéristique d'une tumeur ou d'un agent pathogène en association
    avec un composant liposomal cationique et avec un diluent ou un support
    acceptable d'un point de vue pharmaceutique.
  9. 9. Une composition pharmaceutique selon la revendication 8, dans laquelle ledit
    fragment d'ARN code en outre pour une interleukine-2.
  10. 10. Une composition pharmaceutique selon la revendication 8 ou 9, dans laquelle ledit
    fragment d'ARN code au moins pour un déterminant antigénique caractéristique
    d'un virus de la grippe qui est sélectionné parmi la protéine de la nucléocapside
    dudit virus et l'hémaglutinine dudit virus.
  11. 11. Une composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle ledit
    fragment d'ARN code pour la protéine de la nucléocapside d'un virus de la grippe
    et pour l'hémaglutinine d'un virus de la grippe.
  12. 12. Une composition pharmaceutique selon la revendication 7, qui comprend à titre
    d'agents thérapeutiques au moins un fragment d'ARN codant pour un déterminant
    antigénique caractéristique d'une tumeur ou d'un agent pathogène et un fragment
    d'ARN codant pour une interleukine-2.
  13. 13. Une composition pharmaceutique selon la revendication 12, dans laquelle ledit au
    moins un fragment d'ARN et ledit fragment d'ARN codant pour une interleukine
    2 sont liés l'un à l'autre de manière à former un fragment d'ARN polycistronique.
  14. 14. Une composition pharmaceutique selon la revendication 7, 12 ou 13, dans laquelle
    ledit au moins un fragment d'ARN code pour un déterminant antigénique d'un
    virus de la grippe qui est sélectionné parmi la protéine de la nucléocapside dudit
    virus et l'hémaglutinine dudit virus.
    Une composition pharmaceutique selon la revendication 14, dans laquelle un premier fragment d'ARN code pour la nucléocapside d'un virus de la grippe et un second fragment d'ARN code pour l'hémaglutinine d'un virus de la grippe; ledit premier et deuxième r pigments d'ARN étant liés l'un à l'autre de manière à former un fragment d'ARN polycistronique.
FR919105465A 1991-05-03 1991-05-03 Vecteur de delivrance d'arn. Expired - Fee Related FR2676072B1 (fr)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR919105465A FR2676072B1 (fr) 1991-05-03 1991-05-03 Vecteur de delivrance d'arn.
AU17681/92A AU652831B2 (en) 1991-05-03 1992-04-30 RNA delivery vector
JP4509832A JPH06502998A (ja) 1991-05-03 1992-04-30 Ｒｎａデリバリーベクター
CA002086510A CA2086510A1 (fr) 1991-05-03 1992-04-30 Vecteur de delivrance d'arn
EP92910885A EP0537326A1 (fr) 1991-05-03 1992-04-30 Vecteur de delivrance d'arn
PCT/FR1992/000393 WO1992019752A1 (fr) 1991-05-03 1992-04-30 Vecteur de delivrance d'arn

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR919105465A FR2676072B1 (fr) 1991-05-03 1991-05-03 Vecteur de delivrance d'arn.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
FR2676072A1 true FR2676072A1 (fr) 1992-11-06
FR2676072B1 FR2676072B1 (fr) 1994-11-18

Family

ID=9412502

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FR919105465A Expired - Fee Related FR2676072B1 (fr) 1991-05-03 1991-05-03 Vecteur de delivrance d'arn.

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP0537326A1 (fr)
JP (1) JPH06502998A (fr)
AU (1) AU652831B2 (fr)
CA (1) CA2086510A1 (fr)
FR (1) FR2676072B1 (fr)
WO (1) WO1992019752A1 (fr)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999052503A2 (fr) * 1998-04-16 1999-10-21 John Wayne Cancer Institute Vaccin d'arn contre le cancer et ses procedes de mise en application
EP1083232A1 (fr) * 1999-09-09 2001-03-14 Jung, Günther, Prof. Dr. Transfert de mARN á l'aide de composés polycationiques
US6472375B1 (en) 1998-04-16 2002-10-29 John Wayne Cancer Institute DNA vaccine and methods for its use

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9320548D0 (en) * 1993-10-06 1993-11-24 Sandoz Ltd Improvements in or relating to organic compounds
LT3243526T (lt) 2010-07-06 2020-02-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Rnr pristatymas, skirtas keleto imuninio atsako paleidimui
WO2012006378A1 (fr) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Liposomes à lipides ayant une valeur de pka avantageuse pour la délivrance d'arn
DK2591114T3 (en) 2010-07-06 2016-08-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunization of large mammals with low doses of RNA
DK2611461T3 (da) 2010-08-31 2022-05-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Pegylerede liposomer til afgivelse af RNA, der koder immunogen
WO2012051211A2 (fr) 2010-10-11 2012-04-19 Novartis Ag Plateformes de délivrance d'antigènes
ES2656050T3 (es) 2011-07-06 2018-02-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composiciones de combinación inmunogénica y usos de las mismas
WO2015048744A2 (fr) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucléotides codant des polypeptides de modulation immunitaire
EP3052521A1 (fr) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucléotides codant pour un récepteur de lipoprotéines de faible densité
SG10201912038TA (en) 2014-04-23 2020-02-27 Modernatx Inc Nucleic acid vaccines
EP4218805A1 (fr) 2015-07-21 2023-08-02 ModernaTX, Inc. Vaccins contre les maladies infectieuses
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
HUE057613T2 (hu) 2015-09-17 2022-05-28 Modernatx Inc Vegyületek és készítmények terápiás szerek intracelluláris bejuttatására
SG11201803360UA (en) 2015-10-22 2018-05-30 Modernatx Inc Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)
JP2018531290A (ja) 2015-10-22 2018-10-25 モデルナティーエックス， インコーポレイテッド 性感染症ワクチン
MX2018004916A (es) * 2015-10-22 2019-07-04 Modernatx Inc Vacuna contra el virus de la influenza de amplio espectro.
WO2017070624A1 (fr) 2015-10-22 2017-04-27 Modernatx, Inc. Vaccins contre des maladies tropicales
DK3394030T3 (da) 2015-12-22 2022-03-28 Modernatx Inc Forbindelser og sammensætninger til intracellulær afgivelse af midler
EP3538067A1 (fr) 2016-11-08 2019-09-18 Modernatx, Inc. Formulations stabilisées de nanoparticules lipidiques
US10925958B2 (en) 2016-11-11 2021-02-23 Modernatx, Inc. Influenza vaccine
WO2018107088A2 (fr) 2016-12-08 2018-06-14 Modernatx, Inc. Vaccins à acide nucléique contre des virus respiratoires
CA3056133A1 (fr) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Formes cristallines d'aminolipides
FI3596041T3 (fi) 2017-03-15 2023-01-31 Yhdiste ja koostumuksia terapeuttisten aineiden antamiseen solun sisään
US11969506B2 (en) 2017-03-15 2024-04-30 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
WO2018170245A1 (fr) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Vaccin à large spectre contre le virus de la grippe
EP3595713A4 (fr) 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. Vaccin contre le virus respiratoire syncytial
WO2018170270A1 (fr) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Vaccin contre le virus varicelle-zona
US11752206B2 (en) 2017-03-15 2023-09-12 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
WO2018232120A1 (fr) 2017-06-14 2018-12-20 Modernatx, Inc. Composés et compositions pour l'administration intracellulaire d'agents
US11786607B2 (en) 2017-06-15 2023-10-17 Modernatx, Inc. RNA formulations
WO2019046809A1 (fr) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. Procédés de fabrication de nanoparticules lipidiques
MA50253A (fr) 2017-09-14 2020-07-22 Modernatx Inc Vaccins à arn contre le virus zika
WO2019148101A1 (fr) 2018-01-29 2019-08-01 Modernatx, Inc. Vaccins à base d'arn contre le vrs
EP3852728B1 (fr) 2018-09-20 2024-09-18 ModernaTX, Inc. Préparation de nanoparticules lipidiques et leurs méthodes d'administration
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
EP3938379A4 (fr) 2019-03-15 2023-02-22 ModernaTX, Inc. Vaccins à base d'arn contre le vih
CN112237628A (zh) * 2019-07-17 2021-01-19 四川大学华西医院 靶向EBV的LMP2-mRNA纳米疫苗
US11066355B2 (en) 2019-09-19 2021-07-20 Modernatx, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235871A (en) * 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
FR2598619A1 (fr) * 1986-05-16 1987-11-20 Mafitra Management Services In Medicament antiviral a base d'acide nucleique modifie, et son procede de preparation
GB8827592D0 (en) * 1988-11-25 1988-12-29 Taniguchi T Improvements in & relating to regulation of expression
ATE165516T1 (de) * 1989-03-21 1998-05-15 Vical Inc Expression von exogenen polynukleotidsequenzen in wirbeltieren

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999052503A2 (fr) * 1998-04-16 1999-10-21 John Wayne Cancer Institute Vaccin d'arn contre le cancer et ses procedes de mise en application
WO1999052503A3 (fr) * 1998-04-16 2001-05-10 Wayne John Cancer Inst Vaccin d'arn contre le cancer et ses procedes de mise en application
US6432925B1 (en) 1998-04-16 2002-08-13 John Wayne Cancer Institute RNA cancer vaccine and methods for its use
US6472375B1 (en) 1998-04-16 2002-10-29 John Wayne Cancer Institute DNA vaccine and methods for its use
EP1083232A1 (fr) * 1999-09-09 2001-03-14 Jung, Günther, Prof. Dr. Transfert de mARN á l'aide de composés polycationiques

Also Published As

Publication number Publication date
AU652831B2 (en) 1994-09-08
JPH06502998A (ja) 1994-04-07
AU1768192A (en) 1992-12-21
CA2086510A1 (fr) 1992-11-04
EP0537326A1 (fr) 1993-04-21
FR2676072B1 (fr) 1994-11-18
WO1992019752A1 (fr) 1992-11-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FR2676072A1 (fr) Vecteur de delivrance d&#39;arn.
Dal Monte et al. Effect of liposome encapsulation on antigen presentation in vitro. Comparison of presentation by peritoneal macrophages and B cell tumors.
US5840707A (en) Stabilizing and delivery means of biological molecules
Zhou et al. Induction of cytotoxic T lymphocytes in vivo with protein antigen entrapped in membranous vehicles.
AU4221489A (en) Affinity associated vaccine
JPH06500128A (ja) 免疫刺激及び免疫増強性再構成インフルエンザウイロソーム及びそれを含有するワクチン
WO1999003499A1 (fr) Vesicule cellulaire denommee &#39;&#39;exosome&#39;&#39;, leur preparation et utilisation dans la stimulation d&#39;une reponse immunitaire
JP2000513352A (ja) リポソームインフルエンザワクチンの組成物および方法
EP0765170A1 (fr) Composition destinee a l&#39;induction d&#39;une reponse immunitaire mucosale
von Hoegen Synthetic biomimetic supra molecular Biovector™(SMBV™) particles for nasal vaccine delivery
EP0356340B1 (fr) Vaccin à affinité associée
EP1651257B1 (fr) Vaccin therapeutique cible contre la p-glycoproteine 170 pour inhiber la resistance multidrogues dans le traitement des cancers
US5897873A (en) Affinity associated vaccine
JP2002541811A (ja) テロメラーゼ特異的癌ワクチン
US20020018806A1 (en) Lipopeptide adjuvants
TWI829949B (zh) 用於免疫治療的二氧化矽奈米球
JPH05504756A (ja) 免疫刺激性を有する組成物と、そのヒトと獣医学用医薬への応用
WO2013147232A1 (fr) Nanocapsule biologique comportant un anticorps dirigé contre une protéine de surface d&#39;une cellule dendritique
Westerfeld et al. Peptides delivered by immunostimulating reconstituted influenza virosomes
Chikh et al. Characterization of hybrid CTL epitope delivery systems consisting of the Antennapedia homeodomain peptide vector formulated in liposomes
CA2927616C (fr) Vaccin therapeutique contre le cancer a base de proteines de stress rendues immunogenes
WO1990001947A1 (fr) Vaccin a affinite associee
EP1276468A1 (fr) Utilisation de vecteurs particulaires dans l&#39; immunomodulation
JPWO2008105174A1 (ja) 細胞性免疫誘導用リポソーム
Deigin et al. Peptide ILE-GLU-TRP (Stemokin) Potential Adjuvant Stimulating a Balanced Immune Response

Legal Events

Date Code Title Description
ST Notification of lapse