FR2672617A1 - Sequences nucleotidiques codant pour des regions variables de chaines beta des recepteurs des lymphocytes t humains, segments peptidiques correspondants et les applications diagnostiques et therapeutiques. - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne de nouvelles séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes beta des récepteurs des lymphocytes T humains, les segments peptidiques correspondants et les applications diagnostiques et thérapeutiques.

Description

La présente invention concerne de nouvelles séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînesp des récepteurs des cellules T, les segments peptidiques correspondants et les applications diagnostiques et thérapeutiques.

Il est connu que les récepteurs reconnaissant les antigenes à la surface des lymphocytes T matures (désignés ci-après récepteurs des cellules T) possèdent une structure ayant une certaine analogie avec celles des immunoglobulines. Ainsi, ils comprennent des structures hétérodimériques comportant des chaînes glycoprotéiques get pou des chaines glycopro téiques > et g (voir Meuer et al. (1), Moingeon et al. (2), Brenner et al. (3), Bank et al. (4)).

Le répertoire des récepteurs des cellules T doit pouvoir faire face à l'immense diversité des déterminants antigéniques. Ceci est obtenu par recombinaison génétique des différents segments discontinus des gènes qui codent pour les différentes régions structurales des récepteurs des cellules T. Ainsi7 les gènes comprennent des segments V (segments variables), éventuellement des segments D (segments de diversité), des segments J (segments de jonction) et des segments
C (segments constants). Pendant la différenciation des cellules T,- des gènes spécifiques sont créés par recombinaison des segments V, D et J pour les locusss et # et des segments V et J pour les locus α et ss .

Ces combinaisons spécifiques ainsi que l'appariement des deux chaînes créent la diversité combinatoire.

Cette diversité est fortement amplifiée par deux mécanismes supplémentaires, à savoir la réunion imprécise des segments V-D-J ou V-J et l'addition de nucléotides correspondant à la région N (Davis et al.

(5)).

On connaît déjà un certain nombre de segments géniques V. Ces segments ont été groupés en sous-familles en fonction de la similarité des séquences. Par définition, les segments qui présentent plus de 75 % de similarité dans la séquence nucléotidique ont été considérés comme des membres de la même sous famille (Crews et al. 6)). Actuellement, on connait environ 60 segments géniques VP distincts (Wilson et al. (7), Robinson (8), Leider et al. (9),
Reynolds (10), Li et al. (11)) qui ont été classés en 20 sous- familles dont 7 avec un seul membre (voir
Wilson et al. déjà cité).

On a par ailleurs décrit récemment dans WO 90/06758 des anticorps monoclonaux dirigés contre des segments spécifiques des parties variables des récepteurs des cellules T, notamment des chaînes g
Ces anticorps monoclonaux sont utiles non seulement comme outils de diagnostic mais également comme outils thérapeutiques, par exemple vis-à-vis de l'arthrite rhumatoïde.

On a également décrit l'utilisation de peptides synthétiques correspondant à des régions variables des chaînes cl ou dans le traitement des maladies auto-immunes (27 et 28).

Il est par ailleurs connu qu'il existe des variations d'un individu à un autre dans l'expression des différents segments variables du récepteur T chez l'homme (27 et 28).

La présente invention vise à enrichir le répertoire des segments géniques codant pour des régions variables des chaînes P des récepteurs des cellules T en fournissant de nouveaux segments géniques VÉ appartenant à des nouvelles sous familles ou appartenant à des sous-familles dont on connaît déjà au moins un membre.

La présente invention ainsi pour objet des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables -de chaînes / des récepteurs des lymphocytes
T humains, correspondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 19, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides.

La présente invention a plus particulièrement pour objet des séquences codant pour des régions variables des chaînes p des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des
ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments Vt correspondant à l'une des séquences SEQ ID N -l à 5, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides.

Par l'expression "et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides", on englobe les allèles qui présentent jusqu'à 8 nucléotides de différence, mais le plus souvent 1 ou 2 nucléotides de différence, ou qui peuvent différer par la délétion ou l'addition d'un ou deux codons.

La présente invention a également plus particulièrement pour objet
- des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant-à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments Vss correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 5, et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides,
- des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes 1b des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à l'une des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments Vp correspondant à l'une des séquences SEQ ID NO 6 à 15, les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides et les fragments de celles-ci, notamment les fragments des séquences qui correspondent à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V P orrespondant à lune des séquences
1 à 155 de SEQ ID N 8
1 à 125 de SEQ ID N 9
1 à 111 de SEQ ID N 10, et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides,
- des séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes /j des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V correspondant à l'une des séquences
1 à 195 de SEQ ID N 16
1 à 99 de SEQ ID N 17
1 à 113 de SEQ ID N 18
1 à 186 de SEQ ID N 19, et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides.

Par ltexpression "séquences nucléotidiques correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques", on désigne aussi bien les séquences complètes que des fragments de ces séquences, y compris des fragments courts qui trouvent des applications en tant que sondes (généralement comportant au moins 10 nucléotides) ou en tant qu'amorce (comportant généralement au moins 15 nucléotides). La présente invention englobe d'une manière générale l'ensemble des nouveaux oligonucléotides qui sont des fragments des séquences Vp selon l'invention.

Quant aux séquences qui diffèrent par un ou deux nucléotides, elles correspondent à des variations que l'on a observé expérimentalement lors de la détermination de la séquence nucléotidique de plusieurs
ADNc.

La présente invention a également pour objet les peptides codés par des séquences nucléotidiques selon l'invention ainsi que les allèles et les dérivés de ceux-ci qui possèdent la même fonction.

D'une manière générale, la présente invention englobe les peptides constitués ou comprenant une séquence peptidique codée par les séquences nucléotidiques selon l'invention ainsi que les fragments de ces peptides . Elle englobe également les peptides qui diffèrent de ceux-ci d'un ou plusieurs aminoacides et qui possèdent la même fonction. Ces peptides peuvent correspondre à des modifications telles que celles connues avec les mutéines ou à des variations allèliques. Il a en effet été montré en particulier que certains segments géniques codant pour des régions variables de chaînes du récepteur T chez l'homme étaient soumis à un phénomène de polymorphisme génétique appelé variation allèlique (29). La présente invention englobe les peptides provenant de ce phénomène.

Les séquences nucléotidiques selon l'invention ont été obtenues selon les étapes suivantes
- isolement des ARN de lymphocytes périphériques d'un individu
- obtention de 1'ADN complémentaire à l'aide de reverse transcriptase et d'une amorce A spécifique de la région C (SEQ ID N 20)
- amplification génique (par Anchored Polymerase Chain Reaction ou A-PCR) à l'aide d'une ADN polymérase, d'une amorce poly C (SEQ ID Nw 21) et d'une amorce B spécifique de la région C ss(SET ID N 22)
- nouvelle amplification par A-PCR à l'aide de ADN polymérase et d'une amorce C spécifique de la région C ss(SEQ ID N 23)
- insertion dans un vecteur plasmidique
- transformation d'un hote bactérien avec le vecteur recombinant
- criblage des colonies bactériennes recombinantes avec un oligonucléotide D spécifique de (SEQ ID N 24) marqué
- extraction des plasmides des colonies positives,
- et séquençage des fragments d'ADN contenant la région CA .

La présente invention peut être reproduite notamment par amplification génique bispécifique (polymerase chain reaction ou PCR) en partant de lymphocytes périphériques exprimant les ARNm incluant segments les segments ss variables ou jonctionnels correspondant aux séquences ID N- 1 à 19 de l'invention ou alternativement en appliquant cette technique de PCR à de l'ADN génomique de toute cellules somatique d'un individu pris au hasard. L'invention peut aussi bien être reproduite en préparant les séquences géniques ci-dessus par synthèse chimique d'oligonucléotides.

Les peptides selon l'invention peuvent être obtenus par synthèse peptidique classique. Ils peuvent être également obtenus par application des techniques connues de génie génétique comprenant l'insertion d'une séquence d'ADN codant pour un peptide selon l'invention dans un vecteur d'expression tel qu'un plasmide et la transformation de cellules avec ce vecteur d'expression.

La présente invention a donc également pour objet des plasmides et des vecteurs d'expression comprenant une séquence d'ADN codant pour un peptide selon l'invention ainsi que hotes transformés avec ce vecteur.

La présente invention a également pour objet des anticorps et notamment des anticorps monoclonaux, dirigés contre un déterminant antigénique appartenant à ou comprenant un peptide selon l'invention.

Les anticorps monoclonaux peuvent être obtenus par toutes les techniques qui permettent la production de molécules d'anticorps à partir de culture de lignée cellulaire. Ces techniques comprennent les différentes techniques utilisant des hybridomes.

La production d'anticorps peut être obtenue chez l'animal par immunisation des animaux par injection des peptides ou des fragments selon l'invention7 qu'ils soient naturels, recombinants ou synthétiques, éventuellement après couplage à un agent immunogène tel que l'anatoxine tétanique, ou encore par injection de lymphocytes T humains exprimant les séquences correspondantes à leur surface, y compris des cellules recombinantes transfectées avec les séquences codantes correspondantes.

La présente invention a également pour objet des hybridomes produisant des anticorps monoclonaux dirigés contre les polypeptides selon 1 t invention
La présente invention englobe également les fragments et les dérivés d'anticorps monoclonaux selon l'invention qui sont réactifs avec des régions variables définies des récepteurs des cellules T. Ces fragments sont notamment les fragments F(ab')2 qui peuvent être obtenus par clivage enzymatique des molécules d'anticorps avec la pepsine, les fragments
Fab' qui peuvent être obtenus par réduction des ponts disulfure des fragments F(ab')2 et les fragments Fab qui peuvent être obtenus par clivage enzymatique des molécules d'anticorps avec la papaine en présence d'un agent réducteur. Les fragments peuvent être également obtenus par génie génétique.

Les dérivés d'anticorps monoclonaux sont par exemple des anticorps ou des fragments de ces anticorps auxquels sont liés des marqueurs tel qu'un radioisotope. Les dérivés d'anticorps monoclonaux sont également des anticorps ou des fragments de ces anticorps auxquels sont liées des molécules thérapeutiquement actives, notamment des composés cytotoxiques.

Les produits de l'invention trouvent plusieurs types d'application dans le domaine du diagnostic et dans le domaine de la thérapeutique.

1 - Les applications dans le domaine du diagnostic
Les oligonucléotides contenus dans les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisés pour constituer des sondes de détection (généralement au moins 10 nucléotides) capables de s'hybrider à une région variable d'une caine/6u des amorces pour l'amplification d'ADN (comportant généralement au moins 15 nucléotides et de préférence au moins 17 nucléotides) capables de se lier à une séquence à amplifier.

Les oligonucléotides trouvent ainsi une application dans le diagnostic des désordres immunitaires en détectant la présence de séquences d'acides nucléiques homologues d'un gène codant pour des régions variables de chaînes n des récepteurs des cellules T dans 1'ARNm d'un échantillon d'un patient.

Différentes méthodes peuvent être utilisées pour établir un lien entre l'expression des gènes des cellules T et une maladie. Ces méthodes comprennent
a - la production et l'analyse de banques d'expressions d'ADNc obtenu à partir de cellules T liées à la maladie pour déterminer la fréquence de gènes dominants
b - l'analyse d'échantillons d'ADN génomique par Southern blot pour déterminer s'il existe des polymorphismes génétiques ou des réarrangements des gènes codant pour les récepteurs des cellules T
c - l'analyse d'échantillons par obtention d'ADNc, amplification par PCR et hybridation avec des sondes marquées
d - l'hybridation in situ de cellules T sans culture préalable des cellules T.

Les amorces trouvent une application dans des réactions de PCR dans une méthode telle que celle définie sous c.

Les anticorps monoclonaux, les fragments ou les dérivés de ces anticorps selon l'invention peuvent être utilisés pour étudier des réponses immunitaires de type T, par exemple dans le domaine des maladies auto-immunes de la cancérologie, de l'allergie, de la transplantation et des maladies infectieuses. En particulier, le répertoire des différents segments variables < du récepteur T peut être étudié, qu'il s'agisse de cellules T du sang ou des tissus. D'une manière générale, les techniques utilisées peuvent être des méthodes in vitro ou in vivo.

Dans les méthodes in vitro, les échantillons utilisés peuvent être des échantillons de fluides corporels ou des échantillons de tissus. Les techniques utilisées peuvent inclure notamment la cytofluorimétrie de flux pour analyser les lymphocytes
T du sang ou des marquages par immunopéroxydase sur coupe anatomopathologique pour étudier les lymphocytes infiltrant les tissus.

Dans les méthodes in vivo, les anticorps, leurs fragments ou leurs dérivés sont administrés par les voies habituelles, par exemple par la voie intraveineuse, et l'on détecte les liaisons immunospécifiques. Ceci peut être obtenu par exemple dans le cas ou l'on utilise un anticorps marqué par un radioisotope.

2 - Les applications dans le domaine thérapeutique
Les oligonucléotides contenus dans les séquences nucléotidiques selon l'invention peuvent être utilisés en thérapeutique comme oligonucléotides antisens. On sait en effet qu'il est possible in vitro d'inhiber l'expression d'un gène transcript dans des lymphocytes humains en incubant ces lymphocytes avec un olignoculéotide antisens spécifique du gène en question (30). Ces oligonucléotides antisens comprennent généralement au moins 10 et de préférence au moins 16 nucléotides. Ces oligonucléotides antisens peuvent être notamment les séquences inversées et complémentées correspondant aux 20 nucléotides en amont du site d'inititation de la traduction (ATG).

L'intérêt d'une utilisation in vitro d'oligonucléotides antes en spécifique d'un segment génique V? est d'abolir (ou de diminuer fortement) l'expression d'un récepteur T comprenant ce segment V ? et donc d'obtenir un phénomène de délétion clonale au niveau de la réactivité spécifique des lymphocytes T. Les oligonucléotides antes en peuvent non seulement être utilisés in vitro sur des lymphocytes T humains qui sont ensuite réinjectés, mais également in vivo par injection locale ou systémique de préférence après modification pour augmenter la stabilité in vivo et la pénétration à l'intérieur des lymphocytes de ces oligonucléotides.

Les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent être utilisés pour moduler le système immunitaire. C'cst ainsi que les anticorps peuvent être administrés pour bloquer l'interaction des cellules T effectrices avec leur antigène spécifique. On peut également administrer des anticorps anti-récepteurs T liés par exemple à une molécule cytotoxique ou à un radioisotope de façon à obtenir une délétion clonale, grâce à la fixation spécifique sur une chainefi d'un récepteur de cellule T.Les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent être utilisés en thérapeutique à des concentrations faiblement mitogéniques de façon à activer de façon spécifique certains sousensembles de cellules T ou peuvent être utilisés à des concentrations beaucoup plus élevées pour se fixer aux récepteurs concernés et ainsi marquer ces sous-ensembles en vue de leur élimination par le système rcti- culo-endothélial. Un critère important pour le traitement d'une maladie est l'aptitude à moduler des sous-ensembles de cellules T liées à une maladie. La nature exacte de cette modulation thérapeutique, à savoir bloquer ou supprimer un sous-ensemble particu lier de cellules T ou au contraire stimuler et activer un sous-ensemble particulier, dépendra de la maladie en question et du sous-ensemble spécifique dc cellules
T concerné.

Ce type de traitement présente un avantage par rapport aux traitements actuels utilisant des anticorps tels que le traitement par des anticorps anti CD3 chez des patients ayant subi une trans planta- tion rénale et ayant un problème de rejet, étant donné que grâce à l'invention il n'y aura pas de modulation de la totalité de la population des cellules T mais seulement du sous-ensemble de cellules T exprimant la sous-famillepparticulière de récepteurs de cellules T.

Par ailleurs, la réponse des cellules T étant souvent oligoclonale, il convient généralement d'utiliser en thérapeutique des "cocktails" de plusieurs anticorps.

On peut en outre utiliser les anticorps anti V P pour sélectionner in vitro des lymphocytes T, par exemple par passage sur une colonne contenant des billes portant l'anticorps. Cette séparation de certains lymphocytes T peut être utilisée en vue d'une mise en culture de ces lymphocytes avant de les réinjecter au patient.

En outre, on peut utiliser en thérapeutique tout ou partie des séquences peptidiques selon l'invention, c'est-à-dire les séquences peptidiques codées par les séquences nucléotidiques selon l'invention ou les fragments de ces séquences (comprenant généralement au moins 8 à 10 aminoacides). Ces séquences ou fragments administrés à l'homme ou à l'animal, peuvent agir en tant que leurre, c'est-à-dire qu'ils vont se fixer sur l'épitope porté par l'antigène néfaste et empêcher la réaction des cellules T normales avec l'antigène, en empêchant ainsi le développement d'une maladie agressive contre les déterminants du soi. Ils peuvent aussi être utilisés en tant qu'immunogènes dans la fabrication de vaccins (éventuellement après couplage à des porteurs protéiques).

On décrira ci-après plus en détail l'obtention des séquences nucléotidiques selon l'invention, en se reportant aux Fig. annexées sur lesquelles
- les Fig. 1 à 6 donnent en alignement à la fois des séquences Vp connues et des séquences partielles des nouvelles séquences selon 1 invention (SEQ
ID Ne 6 à 19), notées IGRa 08 à IGRa 20 appartenent à des sous-familles V p connues. Sur ces Figures, la numérotation des nucléotides commence au codon ATG d'initiation (qui est souligné). Les points indiquent les nucléotides identiques. Les séquences qui sont supposées être des séquences leader sont surlignées.

- La Fig. 7 donne les analyses par Southern blot de 1'ADN génomique traité par une enzyme de restriction en utilisant des sondes spécifiques des sous-familles V P . Les enzymes de restriction utili- sées sont EcoRI (colonne R), Hind III (colonne H) et
Bam III (colonne B). Sur cette Figure, les triangles marquent les positions des fragments d'ADN s'hybridant de façon spécifique avec C.

I - Obtention de l'ADNc et amplification Par PCR
On a utilisé comme source d'ARN des lymphocytes périphériques d'un individu.

L'ARN total a été préparé selon la méthode à llisothiocyanate de guanidinium et au chlorure de césium (Chirgwin (12)) ou selon la méthode en une seule étape par extraction avec de l'isothiocyanate de guanidinium, du phénol et du chloroforme (Chomczynski (13)).

Le premier brin d'ADNc a été synthétisé dans un volume final de 50 micro litres à une température de 42 C pendant 1 heure en utilisant 5 microgrammes d'ARN total, la reverse transcriptase et une amorce A spécifique de la région Cp constituée par la séquence 5'-TATCTGGAGTCATTGAGGGCGGGC (SEQ ID N 20). Ce matériau a été ensuite purifié par extraction au phénol/chloroforme et précipitation à l'acétate d'ammonium. Après sélection d'une fraction 0,45/1 kb sur gel d'agarose, on a réalisé l'addition d'une extrémité dG sur l'hétéro duplex ARN/ADNc dans un tampon d'addition CoC12 avec 14 unités de terminal désoxynucléotidyl transférase (Tdt) pendant 30 mn à 37 C. La réaction a été stoppée par maintien à 70 C pendant 10 mn.NaOH 1N (1/3 de volume) a été ajouté et l'échantillon a été mis à incuber à 50 C pendant 1 heure pour hydrolyser 1'ARN puis a été neutralisé avec du Tris HCl 2M pH 8 et HC1 1N. Après extraction par un mélange phénol/ chloroforme le premier brin d'ADNc à extrémité G a été précipité avec de l'éthanol et soumis à une amplification en utilisant la technique
PCR (Polymerase Chain Reaction décrite par Saiki et al. (14)) dans un volume final de 100 microlitres contenant 50 mM de KC1, 10 mM de Tris-Cl pH 8.3, 1,5 mM de MgC12, 0,1 % (poids/ volume) de gélatine, 200 micromoles de dNTP, 2,5 unités de Taq polymérase et 100 picomoles de deux amorces.Les deux amorces utilisées sont, d'une part, une amorce poly-C (5'-GCATGCGCGCGGCCGCGGAGG-14C) (SEQ ID N 21) décrite par Loh et al. (15) ainsi qu'une amorce B spécifique de la région C P CÉ (5'-TGTGGCCAGGCATGCCAGTGTGGCC) (SEQ
ID N 22).

On effectue 25 cycles d'amplification suivis par une période de 15 mn d'élongation finale à 72 C.

Chaque cycle comprend une étape de dénaturation à 92
C pendant 1 minute, une étape d'hybridation à 55 C pendant 2 mn et une période d'élongation à 72 C pendant 4 mn. Les produits amplifiés sont ensuite précipités par de 1'méthanol, remis en suspension dans de l'acétate de sodium 30 mM pH57 NaCl 50 mM7 ZnCl2 1 mM7 glycérol 5 % en volume, et 1/10 de ce matériau est purifié en fonction de la taille sur un gel d'agarose à bas point de fusion 1 %.

Une seconde phase d'amplification est ensuite réalisée directement sur approximativement 10 % de la bande contenant l'agarose en suivant les mêmes conditions que précédemment, sauf qu'on utilise comme amorce C spécifique de la région C ss l'amorce 5'-GGTGT
GGGAGAATTCTGCTTCTGA (SEQ ID N 23). Le mélange de réaction est ensuite précipité par l'éthanol et remis en suspension dans 60 jil H20.

II - Clonage et séauencaae des ADNc
1/3 du produit de la seconde amplification est mis à digérer avec Sac II, séparé sur gel d'agarose 1 % et purifié par absorption sur des billes de verre. Le matériau est inséré dans le vecteur
Bluescript SK (Stratagene, La Jolla, U.S.A.) et les recombinants obtenus sont utilisés pour transformer des souches XL1-bleu de E. Coli (Stratagene).Après dépôt en présence de X-galactosidase et IPTG, on fait un test sur les colonies blanches en utilisant une technique "dot blot" et comme sonde un troisième oligonucléotide spécifique de la région CA (5'-TCTGCTTCT
GATGGCTCAA) (SEQ ID N 24) marqué au 32-P. On extrait 1'ADN plasmidique des colonies positives et on séquence sous les deux brins par le procédé par terminaison de chaîne didésoxy (Sanger et al. (16)) avec de la
Sequenase 2,0 (United States Biochemicals, Clevelandr
Etats-Unis) en suivant les recommandations du fournisseur.

Les séquences obtenues ont été comparées aux séquences publiées V en utilisant la méthode développée par Lipman et Pearson (17). Les codons de départ présumés ont été identifiés en recherchant la présence de la séquence consensus Kozak pour les sites d'initiation des traductions dans les cellules eucaryotes (Kozak (18)). La présence de séquences leader hydrophobes du côté N-terminal a été décelée par analyse de l'hydrophobicité selon la méthode décrite par Kyte (19).

III - Analvse Par Southern blot
L'ADN a été extrait de la lignée cellulaire érythroleucémique humaine K562 et mis à digérer avec l'une des enzymes de restriction suivantes : Eco RI,
Bam HI ou Hind III. L'ADN (15 microgrammes) a été soumis à une électrophorèse sur agarose 0,7 % et a été transféré sur des membranes de Nylon comme décrit par
Triebel et al. (20). Les hybridations ont été réalisées à 65 C avec 6 X SSC, 0,5 % de SDS, 5 X
Denhardt's et 100 microgrammes d'ADN de sperme de saumon dénaturé pendant 16 heures. Les membranes ont été lavées à 65' C avec 2 X SSC, 0,2 % de SDS.

On a utilisé comme sondes VA spécifiques des sondes obtenues par amplification d'ADNc V-J-C en utilisant comme amorce l'amorce poly-C et l'amorce
C. Les sondes ont été purifiées sur gel d'agarose 1 %.

Des sondes d'ADN marquées au 32p ont été préparées à partir des fragments purifiés sur agarose par la méthode de Feinberg (21).

IV - Résultats
En utilisant la méthode A-PCR, 350 ADNc qui hybrident avec la sonde CA ont été clonés, puis séquencés. Parmi ceux-ci, 226 ADNc correspondent à des régions variables V-J-C uniques.

Les séquences Vf de l'invention figurent dans la liste des séquences sous les SEQ ID N 1 à 19. Les séquences SEQ ID N 1 à 5 correspondent à 4 sous familles nouvelles tandis que les séquences SEQ
ID N" 6 à 19 correspondent à de nouveaux membres de sous-familles V ss connues ou à des extensions de segments Vss connus.

1. Séquences Vf correspondant à des sous-familles nouvelles
Sous-famille V ssw21 (SEQ ID N 1 et 2)
Cette sous-famille a été identifiée par l'analyse de 5 clones distincts d'ADNc. 4 de ces clones sont semblables et définissent un nouveau segment génique V? (SEQ ID N' 1). Un 5ème clone (SEQ
ID N' 2) présente 89,5 % d'homologie des séquences nucléotidiques et représente un nouveau membre de la même sous-famille.

Le segment V P humain qui est le plus homologue de Vw21 est un membre de la sous-famille
V 6, le segment PH 11 (Tillinghast (22)) qui présente une homologie de 74 et 72 % avec respectivement les segments IGR bOl et IGR bO2.

Sous-famille Vssw22 (SEQ ID N 3)
Le segment SEQ ID N' 3 a été défini comme séquence consensus à partir de 23 clones distincts d'ADNc. On a observé en position 322 un C au lieu d'un
T et en position 350 un A au lieu d'un G.

Sous-famille Vssw23 (SEQ ID N' 4)
Le segment ID N 4 a été défini comme séquence consensus à partir de 4 clones distincts. On a observé en position 154 un G au lieu d'un A et en position 160 un A au lieu d'un G. I1 présente une homologie de 75,7 % avec la séquence VB12A1 (Leiden déjà cité) mais présente une homologie inférieure à 75 % avec les autres membres de la sous-famille Vss5 (représentés sur la Fig. 1). I1 ne fait donc pas partie de la sous-famille V 5.

Sous-famille Vssw24 (SEQ ID N' 5)
Le segment SEQ ID N' 5 a été défini à partir de 2 clones distincts d'ADNc.

Les analyses par Southern blot d t ADN de lignée germinale soumis à une digestion par les endonucléases, en utilisant des sondes V-J-C sscompre- nant des fragments Vss correspondant aux sous-familles
Vssw21 à Vssw24 ont été réalisées dans des conditions d'hybridation de "faible stringence" pour identifier le nombre de segments géniques VÉ appartenant à chaque famille et pour caractériser des fragments de restriction d'ADN portant ces segments géniques Vss .

Des résultats représentatifs sont reportés sur la
Figure 7.

Ces analyses sont compatibles avec la présence dans les cellules érythroleucémiques K 562 d'au moins trois segments géniques pour la sousfamille V/S w21, deux pour la sous-famille V ssw23 et un pour les sous-familles Vv w22 etV ssw24.

Les tailles des fragments de restriction de l'ADN germinal sont les suivantes
V p w21 : Eco RI 1,7-,3- et 6,5 kb, Hind III 2,5-, 7,2-, 11,7-, 14- et 18 kb, Bam HI 5,5-, 16,5- et 23 kb; w22 ; Eco RI 2,8 kb, Hind III 8,8 kb, Bam HI 5,3 kb; Vp w23 : Eco RI 3,2- et 4,4 kb, Hind III 7,4-,15,5- et 16,5 kb, Bam HI 2,5- et 5,7 kb
V ssw24 : Eco RI 8 kb, Hind III 20 kb et 7,3 kb, Bam HI 11,- et 22 kb.

2. Séquences Vp appartenant à des sousfamilles connues
Sous-famille V ss5 (Fig. 1)
SEQ ID N' 6 et 7 (IGR b06 et IGR b07)
Ces séquences présentent une homologie respectivement de 79 à 86 % et de 76 à 70 % avec les 4 segments précédemment connus VB12A1 (Leiden déjà cité), HBP51 (Kimura (23)), PH24 (Tillinghast déjà cité) et PL25 (Concannon (24)) et représentent de nouveaux membres.

SEQ ID N 8 et 9 (IGR b08 et IGR b09)
Ces séquences correspondent à des extensions du côté 5' des clones VB12A1 et PL25 respectivement.

Pour SEQ ID N' 8 deux substitutions de nucléotides sont observées par rapport à VB12A1.

Sous-famille VA6 (Fig. 2)
SEQ ID N' 10 (IGR bli)
Cette séquence correspond à une extension du côté 5' du clone HBP25 (Kimura, déjà cité).

SEQ ID N' Il (IGR b12)
Cette séquence qui représente un nouveau membre présente une homologie des nucléotides de 94 % avec PH 16 (Tillinghast, déjà cité), GPPA (Li, déjà cité) et HT45 (Kimura (25)).

Sous-famille Vu 12 (Fig. 3)
SEQ ID N" 12 (IGR b13)
Cette séquence qui représente un nouveau membre correspond à plus de 85 % d'homologie avec les séquences PH27 (Tillinghast, déjà cité) et PL42 (Concannon, déjà cité).

Sous-famille Vu 13 (Fig. 4)
SEQ ID N' 13, 14 et 15 (IGR b14, IGR b15 et
IGR b16)
Les séquences SEQ ID N' 13 et 14 qui représentent de nouveaux membres présentent une homologie respectivement de 78 à 91 % et de 77 à 79 % avec les autres séquences connues HBVP34 (Kimura (23)) et CEM (Duby (26)).

La séquence SEQ ID N' 15 présente une homologie de 94 % avec HBVP34. Il est à noter que la séquence SEQ ID N' 15 présente un intron (représenté en caractères minuscules) dans la région leader. La séquence SEQ ID N" 15 est une séquence consensus. On a observé en position 231 un C au lieu d'un T et en position 259 un A au lieu d'un G.

Sous-famille Vp 7 (Fig. 5)
SEQ ID N 16 et 17 (IGR b17 et IGR b18)
Ces séquences présentent une forte homologie avec la séquence PL4.19 tronquée (Concannon, déjà cité) et la prolongent du côté 5' jusqu'au signal de début de la traduction.

SEQ ID N 18 (IGR b19)
Cette séquence prolonge la séquence PL4.9 (Concannon, déjà cité) du côté 5' jusqu'au signal de début de la traduction.

Sous-famille Vf 9 (Fig. 6)
SEQ ID N 19 (IGR b20)
Cette séquence prolonge la séquence PL2.6 (Concannon, déjà cité) du côté 5'. On observe une différence entre les deux séquences aux positions 98 et 100 correspondant à des aminoacides différents.
REFERENCES 1. Meuer, S.C., et al., J. Exp. Med. 1983. 157:705.

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31. Kappler J., Science, 244, 811.

32. Choi Y., PNAS, 86, 8941.

LISTE DES SEQUENCES
I - INFORMATION GENERALE
(1) DEMANDEUR : Société dite ROUSSEL UCLAF
(2) TITRE DE L'INVENTION :
Séquences nucléotidiques codant pour des
régions variables des chaînes p des récepteurs
des lymphocytes T humains , segments peptidi
ques correspondants et les applications diag
nostiques et thérapeutiques.

(3) NOMBRE DE SEQUENCES : 24 II - INFORMATION POUR SEQ ID N 1
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 365 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b Ol
SEQUENCE
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
TCCCATCCTT CCCTGACCCT GCC ATG GGC ACC AGG CTC CTC TGC TGG 47
Met Gly Thr Arg Leu Leu Cys Trp
1 5
GCG GCC CTC TGt CTC CTG GGA GCA GAA CTC ACA GAA GCT GGA GTT GCC 95
Ala Ala Leu cys Leu Leu Gly Ala Glu Leu Thr Glu Ala Gly Val Ala
10 15 20
CAG TCT CCC AGA TAT AAG ATT ATA GAG AAA AGG CAG AGT GTG GCT TTT 143 Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile Glu Lys Arg Gln Ser Val Ala Phe 25 30 35 40
TGG TGC AAT CCT ATA TCT GGC CAT GCT ACC CTT TAC TGG TAC CAG CAG 191
Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His Ala Thr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln
45 50 55
ATC CTG GGA CA GGC CCA AAG CTT CTG ATT CAG TTT CAG AAT AAC GGT 239
Ile Leu Gly Gi 141y Pro Lys Leu Leu Ile Gln Phe Gln Asn Asn Gly
60 65 70
GTA GTG GAT GAT TCA CAG TTG CCT AAG GAT CGA TTT TCT GCA GAG AGG 287
Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg
75 80 85
CTC AAA GGA GTA GAC TCC ACT CTC AAG ATC CAA CCT GCA AAG CTT GAG 335
Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu Lys Ile Gln Pro Ala Lys Leu Glu
90 95 100
GAC TCG GCC GTG TAT CTC TGT CCC AGC AGC 365
Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser 105 110
III - INFORMATION POUR SEQ ID N' 2
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 387 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE :ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 02
SEQUENCE
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
AGTGACCCTG ATCTGGCAAA GCTTCCATCC TGCCCTGACC CTGCC ATG 48
MET
GGT ACC AGG CTC CTC TGC CGG CTC GCC TTC TCT CTC CTC GTG GAA GAA 96
Gly Thr Arg Leu Leu Cys Arg Val Ala Phe Cys Leu Leu Val Glu Glu
5 10 15
CTC ATA GAA GCT CGA GTG GTT CAG TCT CCC AGA TAT AAG ATT ATA GAG 144
Leu Ile Glu Ale Gly Val Val Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile Glu
20 25 30
AAA AAG CAG CCT GTG GCT TTT TCC TGC AAT CCT ATT TCT CCC CAC AAT 192
Lys Lys Gln Pro Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His Asn
35 40 45
ACC CTT TAC TGG TAC CGG CAG AAC TTC GGA CAG CCC CCG GAG CTT CTG 240
Thr Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Asn Leu Gly Gln Gly Pro Glu Leu Leu
50 55 60 65
ATT CGA TAT GAG AAT GAG GAA GCA GTA GAC GAT TCA CAG TTC CCT AAG 288
Ile Arg Tyr Glu Asn Glu Glu Ala Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro Lys
70 75 80
GAT CGA TTT TCT GCA GAG AGG CTC AAA GGA GTA GAC TCC ACT CTC AAG 336
Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu Lys
85 90 95
ATC CAG CCT GCA GAG CTT CCC GAC TCG GCC CTC TAT CTC TCT GCC AGC 384
lie Gln Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser
100 105 110
AGC 387
Ser
IV - INFORMATION POUR SEQ ID N 3
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 395 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
SEQUENCE CONSENSUS
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 03
SEQUENCEVss
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
ACAGGACCAG ATGCCTGAGC TAGGAAAGGC CTCATTCCTG CTGTGATC 48
CTGCC ATC GAT ACC TCG CTC GTA TGC TGC GCA ATT TTT AGT CTC TTC 95
Met Asp Thr Trp Leu Val cys Trp Ala Ile Phe Ser Leu Leu
1 5 10
AAA GCA GGA CTC ACA GAA CCT GAA GTC ACC CAG ACT CCC AGC CAT CAG 143
Lys Ala Gly Leu Thr Glu Pro Glu Val Thr Gln Thr Pro Ser His Gln
15 20 25 30
GTC ACA CAG ATG GGA CAG GAA GTG ATC TTC CGC TGT GTC CCC ATC TCT 191
Val Thr Gln Met Gly Gln Glu Val Ile Leu Arg Cys Val Pro Ile Ser
35 40 45
AAT CAC TTA TAC TTC TAT TCG TAC AGA CAA ATC TTC CGC CAG AAA GTC 239
Asn His Leu Tyr Phe Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Lys Val
50 55 60
GAG TTT CTC GTT TCC TTT TAT AAT AAT GAA ATC TCA GAG AAG TCT GAA 287
Glu Phe Leu Val Ser Phe Tyr Asn Asn Glu Ile Ser Glu Lys Ser Glu
65 70 75
ATA TTC GAT GAT CAA TTC TCA GTT GAA AGG CCT GAT GGA TCA AAT TTC 335
Ile Phe Asp Asp Gin Phe Ser Val Glu Arg Pro Asp Gly Ser Asn Phe
80 85 90
ACT CTG AAG ATC CGG TCC ACA AAC CTC GAG GAC TCA GCC ATG TAC TTC 383
Thr Leu Lys Ile Arg Ser Thr Lys Leu Glu Asp Ser Ala Met Tyr Phe
95 100 105 110
TCT GCC AGC AGT 395
Cys Ala Ser Ser
V - INFORMATION POUR SEQ ID N 4
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 329 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE :ADNc pour ARNm
SEQUENCE CONSENSUS
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 04
SEQUENCE
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
AGCTCCTCTG CCATGTC ATG CTT TGT CTC CTG GGA GCA GGT TCA GTG 47
Met Leu Cys Leu Leu Gly Ala Gly Ser Val
1 5 10
GCT GCT GGA GTC ATC CAG TCC CCA AGA CAT CTG ATC AAA GAA AAC AGG 95
Ala Ala Gly Val Ile Gln Ser Pro Arg His Leu Ile Lys G::Lu Lys Arg
15 20 25
GAA ACA GCC ACT CTG AAA TGC TAT CCT ATC CCT AGA CAC GAC ACT GTC 143
Glu Thr Ala Thr Leu Lys Cys Tyr Pro Ile Pro Arg His Asp Thr Val
30 35 40
TAC TGG TAC CAG CAG GGT CCA GGT CAG GAC CCC CAG TTC CTC ATT TCG 191
Tyr Trp Tyr G1 Gln Gly Pro Gly Gln Asp Pro Gln Phe Leu lie Ser
45 50 55
TTT TAT GAA AAC ATG CAG AGC GAT AAA GGA AGC ATC CCT GAT CGA TTC 239
Phe Tyr Glu Lys Met Gln Ser Asp Lys Gly Ser Ile Pro Asp Arg Phe
60 65 70
TCA GCT CAA CAG rTc AGT GAC TAT CAT TCT GAA CTG AAC ATG AGC TCC 287
Ser Ala Gln Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser ser 75 80 85 90
TTC GAG CTG CGC GAC TCA GCC CTG TAC TTC TGT GCC AGC AGC 329
Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser
95 100
VI - INFORMATION POUR SEQ ID N' 5
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 366 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 05
SEQUENCE
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
ATTCCTGTAT GGGGTGGTAT TCCTGCC ATG GGT CCT CCC CTT CTC CAC 48
Met Gly Pro Gly Leu Leu His
1 5
TGG ATG GCC CTT TGT CTC CTT GGA ACA GGT CAT GGG GAT GCC ATG GTC 96
Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Thr Gly His Gly Asp Ala Met Val
10 15 20
ATC CAG AAC CCA AGA TAC CAG GTT ACC CAG TTT GGA AAG CCA GTG ACC 144
Ile Gln Asn Pro Arg Tyr Gln Val Thr Gln Phe Gly Lys Pro Val Thr
25 30 35
CTG AGT TGT TCT CAG ACT TTC AAC CAT AAC GTC ATG TAC TGG TAC CAG 192
Leu Ser Cys Ser Gln Thr Leu Asn His Asn Val Met Tyr Trp Tyr Gln 40 45 50 55
CAG AAC TCA AGT CAG CCC CCA AAG CTG CTG TTC CAC TAC TAT GAC AAA 240 Gln Lys Ser Ser Gln Ala Pro Lys Leu Leu Phe His Tyr Tyr Asp Lys
60 65 70
GAT TTT AAC AAT GAA GCA GAC ACC CCT GAT AAC TTC CAA TCC AGG AGG 288
Asp Phe Asn Asn Glu Ala Asp Thr Pro Asp Asn Phe Gln Ser Arg Arg
75 80 85 CCG AAC ACT TCT TTC TGC TTT CTT GAC ATC CCC TCA CCA CCC CTC CCC 336
Pro Asn Thr Ber.Phe Cys Phe Leu Asp Ile Arg Ser Pro Gly Leu Gly
90 95 100
GAC GCA GCC ATC TAC CTC TCT GCC ACC AGC 366
Asp Ala Ala Met Tyr Leu Cys Ala Thr Ser
105 110
VII - INFORMATION POUR SEQ ID N' 6
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 238 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 06
SEQUENCE Vss 5
A GGA CAG CAA CCC ACT CTG AGA TGC TCT CCT ATC TCT CCC CAC ACC 46
Gly Gln Gln Ala Thr Leu Arg Cys Ser Pro Ile Ser Gly His Thr
1 5 10 15
AGT GTG TAC TGG TAC CAA CAG GCC CTG GGT CTC CCC CTC CAG CTC CTC 94
Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Leu Gly Leu Gln Leu Leu
20 25 30
CTT TCG TAT GAC GAG GGT GAA GAG AGA AAC AGA GGA AAC TTC CCT CCT 142
Leu Trp Tyr Asp Glu Gly Glu Glu Arg Asn Arg Gly Asn Phe Pro Pro
35 40 45
AGA TTT TCA GG? CCC CAG TTC CCT AAT TAT AGC TCT GAG CTC AAT CTC 190
Arg Phe Ser Gly Arg Gln Phe Pro Asn Tyr Ser Ser Glu Leu Asn Val
50 55 60
AAC GCC TTC GAG CTG GAG GAC TCG GCC CTC TAT CTC TGT GCC AGC AGC 238
Asn Ala Leu Gla Leu Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser
65 65 70
VIII - INFORMATION POUR SEQ ID N' 7
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 192 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 07
SEQUENCE Vp 5
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
ACT GTG TCC TGG TAC CAA CAG GCC CTG GGT CAG GGG CCC CAG TTT ATC 48
Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Gln Phe Ila 1 5 10 15
TTT CAG TAT TAT AGG GAG GAA GAG AAT GGC AGA GGA AAC TCC CCT CCT 96
Phe Gln Tyr Tyr Arg Glu Glu Glu Asn Gly Arg Gly Asn Ser Pro Pro
20 25 30
AGA TTC TCA GGT CTC CAG TTC CCT AAT TAT AGC TCT GAG CTG AAT GTC 144
Arg Phe Ser Gly Leu Gln Phe Pro Asn Tyr Sûr Ser Glu Lcu Asn Val
35 40 45
AAC GCC TTG GAG CTG GAC GAC TCG GCC CTG TAT CTC TGT GCC AGC AGC 192
Asn Ala Leu Glu Leu Asp Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser
50 55 60
IX - INFORMATION POUR SEQ ID N' 8
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 371 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 08
SEQUENCE Vss 5
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
GAACTCACTG GGTTCTTCCC CACGAGGACC AACCCCTGAA TCAGGTGCAG 50
TGCTGCCTGC CCCACTGTGC C ATC GGC CCT GCC CTC CTC TGC TGG 95
Met Gly Pro Gly Leu Leu Cys Trp
1 5
GTG CTG CTT TGT CTC CTG GGA GCA GGC CCA GTG GAC GCT GGA GTC ACC 143
Val Leu Leu Cys Leu Leu Gly Ala Gly Pro Val Asp Ala Gly Val Thr
10 15 20
CAA AGT CCC ACA CAC CTG ATC AAA ACG AGA GGA CAG CAA GTG ACT CTG 191
Gln Ser Pro Thr His Leu Ile Lys Thr Arg Gly Gln Gln Val Thr Leu
25 30 35 40
AGA TGC TCT CCT ATC TCT GAG CAC AAG AGT GTG TCC TGG TAC CAA CAG 239
Arg Cys Ser Pro Ile Ser Glu His Lys Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln
45 50 55
GTC CTG GGT CAG CGC CCC CAG TTT ATC TTT CAG TAT TAT GAG AAA GAA 287
Val Leu Gly Gln Gly Pro Gln Phe Ile Phe Gln Tyr Tyr Glu Lys Glu
60 65 70
GAG AGA GGA AGA GGA AAC TTC CCT GAT CGA TTC TCA GCT CGC CAG TTC 335
Glu Arg Gly Arg Gly Asn Phe Pro Asp Arg Phe Ser Ala Arg Gln Phe
75 80 85
CCT AAC TAT AGC TCT GAG CTG AAT GTC AAC GCC TTC TTC CTC CCC GAC 383
Pro Asn Tyr Ber Scr Glu Leu Asn Val Asn Ala Leu Leu Leu Gly Asp
90 95 100
TCG GCC CTG TAT CTC TGT GCC AGC AGC 410
Ser Ala Leu TyR Leu Cys Ala Ser Ser
105 110
X - INFORMATION POUR SEQ ID N 9
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 380 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 09
SEQUENCE V ss 5
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
AAGCCCTGAA TCAGATGCAG TGCTTCCTGTC CCTCTGTGCC ATG GGC 47
Met Gly
1
CCC CCC CTC CTC TGC TCG GCA CTG CTT TGT CTC CTG GGA GCA GGC TTA 95
Pro Gly Leu Les Cys Trp Ala Leu Leu Cys Leu Leu Gly Ala Gly Leu
5 10 15
GTG GAC GCT GGA CTC ACC CAA AGT CCC ACA CAC CTC ATC AAA ACC AGA 143
Val Asp Ala Gly final Thr Gln Ser Pro Thr ilis Leu Lie Lys Thr Arg
20 25 30
GGA CAG CAA GTG ACT CTG AGA TGC TCT CCT AAG TCT CGC CAT GAC ACT 191
Gly Gln Gln Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Lys Ser Gly His Asp Thr
35 40 45
CTC TCC TCC TAC CAA CAG GCC CTG GGT CAG CGC CCC CAG TTT ATC TTT 239
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Gln Phe Ile Phe
50 55 60 65
CAG TAT TAT GAG GAG GAA GAG AGA CAG AGA GGC AAC TTC CCT GAT CGA 287
Gln Tyr Tyr Glu Glu Glu Glu Arg Gln Arg Gly Asn Phe Pro Asp Arg
70 75 80
TTC TCA GGT CAC CAG TTC CCT AAC TAT AGC TCT GAG CTG AAT GTG AAC 335
Phe Ser Gly His Gln Phe Pro Asn Tyr Ser Ser Glu Leu Asn Val Asn
85 90 95
GCC TTG TTG CTG CCC GAC TCG GCC CTC TAT CTC TCT GCC AGC AGC 380
Ala Leu Leu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser
100 105 110
XI - INFORMATION POUR SEQ ID N' 10
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 351 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b Il
SEQUENCE Vp 6
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
GACCCTGCC ATG CCC ACC AGT CTC CTA TGC TGG GTG GTC CTG GGT TTC 48
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Val Val Leu Gly Phe
1 5 10
CTA CGC ACA GAT CAC ACA GGT GCT GGA GTC TCC CAG TCT CCC AGG TAC 96
Leu Gly Thr Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr
15 20 25
AAA GTC ACA AAG AGG GGA CAG GAT GTA GCT CTC AGG TGT GAT CCA ATC 144
Gln Val Thr Lys Arg Gly Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile 30 35 40 45
TCG GGT CAT GTA TCC CTT TAT TCC TAC CGA CAG GCC CTG GGG CAG GGC 192
Ser Gly His Val Ser Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Leu Gly Gln Gly
50 55 60
CCA GAG TTT CTG ACT TAC TTC AAT TAT GAA GCC CAA CAA GAC AAA TCA 240
Pro Glu Phe Leu Thr Tyr Phe Asn Tyr Glu Ala Gln Gln Asp Lys Ser
65 70 75
GGG CTG CCC AAT GAT CGG TTC TCT GCA GAG ACC CCT GAG GGA TCC ATC 288
Gly Leu Pro Asn Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Ile
80 85 90
TCC ACT CTG ACG ATC CAG CGC ACA GAG CAG CGG GAC TCG GCC ATG TAT 336
Ser Thr Leu Thr Ile Gln Arg Thr Glu Gln Arg Asp Ser Ala Met Tyr
95 100 105
CCC TCT GCC AGC AGC 351
Arg Cys Ala Ser Ser 110 xrI - INFORMATION POUR SEQ ID N' 11
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 238 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 12
SEQUENCE VA 6
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
A AAG GAT GTA GAG CTC AGG TGT GAT CCA ATT TCA GGT CAT ACT GCC 46
Lys Asp Val Glu Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His Thr Ala
1 5 10 15
CTT TAC TCG TAC CGA CAG AGC CTG GGG CAG GGC CTG GAG TTT TTA ATT 94
Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ser Leu Gly Gln Gly J,eu Glu Phe Leu Ile
20 25 10
TAC TTC CAA GGC AAC AGT GCA CCA GAC AAA TCA GGG CTG CCC AAC GAT 142
Tyr Phe Gln Gly Asn Ser Ala Pro Asp Lys Ser Gly Leu Pro Asn Asp
35 40 45 CGG TTC TTT GC GTC AGG CCT GAG GGA TCC GTC TCT ACT CTG AGG ATC 190
Arg Phe Phe Ala Val Arg Pro Glu Gly Ser Val Ser Thr Leu Arg Ile
50 55 60
CAG CGC ACA GAG CGG GGG GAC TCA GCC GTG TAT CTC TGT GCC AGC AGC 238 Gln Arg Thr Glu Arg Gly Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser
65 70 75
XIII - INFORMATION POUR SEQ ID N 12
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 294 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 13
SEQUENCE VA 12
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
TCA GGA CAC ACG GAT GCT GAA ATC ACC CAG AGC CCA AGA CAC AAG ATC 48
Ser Gly His Arg Asp Ala Glu Ile Thr Gln Ser Pro Arg His Lys Ile
1 5 10 15
ACA GAG ACA GGA AGG CAG GTG ACC TTG GCG TGT CAC CAG ACT TGG AAC 96
Thr Glu Thr Gly Arg Gln Val Thr Leu Ala cys flis Gln Thr Trp Asn
20 25 30
CAC AAC AAT ATC TTC TGG TAT CGA CAA GAC CTG GGA CAT GGG CTG AGG 144
His Asn Asn Met Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Leu Gly His Gly Leu Arg
35 40 45
CTG ATC CAT TAC TCA TAT GGT GTT CAA GAC ACT AAC AAA CCA GhA GTC 192
Leu Ile His Tyr Ser Tyr Gly Val Gln Asp Thr Asn Lys Gly Glu Val
50 55 60
TCA GAT GGC TAC AGT GTC TCT AGA TCA AAC ACA GAG GAC CTC CCC CTC 240
Ser Asp Gly Tyr Ser Val Ser Arg Ser Asn Thr Glu Asp Leu Pro Leu
65 70 75 80
ACT CTG GAG TCT GCT GCC TCC TCC CAG ACA TCT GTA TAT TTC TGC GCC 288
Thr Leu Glu Ser Ala Ala Ser Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
AGC AGT 294
Ser Ser
XIV - INFORMATION POUR SEQ ID N' 13
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres pondant
LONGUEUR : 369 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 14
SEQUENCE V ss 13
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
AGAAGACCCC TCCATCCTGT AGCACCTGCC ATG AGC ATC CGC CTC CTC 48
Met Ser Ile Gly Leu Leu
1 5
TGC TGT GTG GCC TTT TCT CTC CTG TGG GCA AGT CCA GTG AAT GCT GGT 96
Cys Cys Val Ali Pha Ser Lau Leu Trp Ala Ser Pro Val Ana Ala Gly
10 15 20
GTC ACT CAG ACC CCA AAA TTC CAG GTC CTG AAG ACA GGA CAG AGC ATG 144
Val Thr Gln Th Pro Lys Phe Gln Val Leu Lys Thr Gly Gln Ser Met
25 30 35
ACA CTG CAG TGT GCC CAG GAT ATC AAC CAT AAC TCC ATG TAC TCC TAT 192
Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His Asn Ser Met Tyr Trp Tyr
40 45 50
CGA CAA GAC CCA CCC ATC GGA CTG AGG CTC ATT TAT TAC TCA GCT TCT 240
Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu lia Tyr Tyr Ser Ala Ser 55 60 65 70
GAG GGT ACC ACT GAC AAA GGA GAA GTC CCC AAT CCC TAC AAT GTC TCC 288
Glu Gly Thr Thr X9p Lys Gly Glu Val Pro Asn Gly Tyr Asn Val Ser
75 80 85
AGA TTA AAC AAA CGG GAG TTC TCG CTC AGG CTG GAG TCG GCT GCT CCC 336
Arg Leu Asn Ly Arg Glu Phe Ser Leu Arg Leu Glu Ser Ala Ala Pro
90 95 100
TCC CAG ACA TCT GTC TAC TTC TGT GCC AGC ACC 369
Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser Thr
105 110
XV - INFORMATION POUR SEQ ID N' 14
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 356 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE :ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 15
SEQUENCE V ss 13
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
TGCTTGTAGC .itTCTGCC ATG AGA ATC AGG CTC CTG TGC TGT GTG GCC 47
Met Arg Ile Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala
1 5 10
TTT TCT CTC CTC TGG GCA GGT CCA GTG ATT GCT GGG ATC ACC CAG GCA 95
Phe Ser Leu Leu Trp Ala Gly Pro Val Ile Ala Gly Ile Thr Gln Ala
15 20 25
CCA ACA TCT CAG ATC CTG GCA GCA GGA CGG CCC ATG ACA CTG AGA TCT 143
Pro Thr Ser Gln Ile Leu Ala Ala Gly Arg Arg Met Thr Leu Arg Cys
30 35 40
ACC CAG GAT ATG AGA CAT AAT GCC ATG TAC TCG TAT AGA CAA GAT CTA 191
Thr Gin Asp Met Arg Ris Asn Ala Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Leu
45 50 55
GGA CTG CCC CTA AGG CTC ATC CAT TAT TCA AAT ACT CCA CCT GGT ACC ACT 239
Gly Leu Gly Leu Arg Leu Ile His Tyr Ser Asn Thr Ala Gly Thr Thr
60 65 70
CCC AAA GGA GAA GTC CCT GAT GGT TAT AGT GTC TCC AGA GCA AAC ACA 287
Gly Lys Gly Glu Val Pro Asp Gly Tyr Ser Val Ser Arg Ala Asn Thr
75 80 85 90
GAT GAT TTC CCC CTC ACG TTC GCG TCT GCT GTA CCC TCT CAG ACA TCT 335
Asp Asp Phe Pro Leu Thr Leu Ala Ser Ala Val Pro Ser Gln Thr Ser
95 100 105
CTC TAC TTC TGT GCC AGC AGT 356
Val Tyr Phe Cys Ala Ser Ser
110
XVI - INFORMATION POUR SEQ ID N' 15
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 345 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE :ADNc pour ARNm
SEQUENCE CONSENSUS
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 16
SEQUENCE
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
AAGGCCCAGC CCCTTTCCAT TGGGGCTGCA GCATCAGCTG TTTCCTTCTC 50
TGCAGGT CCA GTG AAT GCT GGT GTC ACT CAG ACC CCA AAA TTC CGC 96
Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Arg
1 5 10
ATC CTG AAG ATA GGA CAG AGC ATG ACA CTG CAG TCT GCC CAG GAT ATG 144
Ile Leu Lys ila Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met
15 20 25
AAC CAT AAC TAC ATG TAC TCG TUr CGA CAA GAC CCA CCC ATC CCC CTC 192
Asn His Asn Tyr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu
30 35 40 45
AAG CTG ATT TAT TAT TCA GTT GGT GCT GGT ATC ACT GAT AAA GGA GAA 240
Lys Leu Ile Tyr Tyr Ser Val Gly Ala Gly Ile Thr Asp Lys Gly Glu
50 55 60
GTC CCG AAT GGC TAC AAC GTC TCC AGA TCA ACC ACA GAG GAT TTC CCG 288
Val Pro Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Thr Glu Asp Phe Pro
65 70 75
CTC AGG CTG GAG TTG GCT GCT CCC TCC CAG ACA TCT GTG TAC TTC TGT 336
Leu Arg Leu Glu Leu Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys
80 85 90
GCC AGC AGT 345
Ala Ser Ser
95
XVII - INFORMATION POUR SEQ ID N 16
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 450 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE :ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 17
SEQUENCE V ss 7
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
TGGAGCAGTG ACATCACAGG AAAAACCACC AACCAAGGCC 40
AAGGAGACCA GAGCCCAGCA CCTCACCCAG AGGACCCCAG TCAGAGGCCC CATCTCAGAC 100
CCGAGGCTAG C ATG CGC TGC AGG CTG CTC TGC TGT GCG GTT CTC 144
Met Gly Cys Arg Leu Leu cys Cys Ala Val Leu
1 5 10
TCT CTC CTC GGA CCC GTC CCC ATG GAA ACG GGA GTT ACG CAG ACA CCA 192
cys Leu Leu Gly Ala Val Pro Met Glu Thr Gly Val Thr Gln Thr Pro
15 20 25
AGA CAC CTG GTC ATC GGA ATG ACA AAT AAG AAG TCT TTG AAA TGT GAA 240
Arg His Leu Val Met Gly Met Thr Asn Lys Lys Ser Leu Lys cys Glu
30 35 40
CAA CAT CTG GGG CAT AAC GCT ATG TAT TGG TAC AAG CAA AGT GCT AAC 288
Gln His Leu Gly His Asn Ala Met Tyr Trp Tyr Lys Gln Ser Ala Lys
45 50 55
AAC CCA CTC GAG CTC ATC TTT GTC TAC AAC TTT AAA GAA CAG ACT GAA 336
Lys Pro Leu Glu Leu Met Phe Val Tyr Asn Phe Lys Glu Gln Thr Glu
60 65 70 75
AAC AAC AGT GTG CCA AGT CCC TTC TCA CCT GAA TGC CCC AAC AGC TCT 384
Asn Asn Ser Val Pro Ser Arg Phe Ser Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser
80 85 90
CAC TTA TGC CTT CAC CTA CAC ACC CTG CAG CCA GAA GAC TCC GCC CTG 432
His Leu Cys Leu His Leu His Thr Leu Gln Pro Glu Asp SersAla Le:
95 100 105
TAT CTC TGT GCC AGC ACC 450
Tyr Leu Cys Ala Ser Thr
110
XVIII - INFORMATION POUR SEQ ID N' 17
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 354 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 18
SEQUENCE V ss 7
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
AGACCCGAGG CTAGC ATG GGC TGC ACC CTG CTC TGC TCT CCC GTT CTC 48
Met Gly Cys Arg Leu Leu Cys Ser Ala Val Leu
1 5 10
TGT CTC CTG GGA CCC GTC CCC ATG GAA ACC GGA GTT ACG CAG ACA CCA 96
Cys Leu Leu Gly Ala Val Pro Met Glu Thr Gly Val Thr Gln Thr Pro
15 20 25
AGA CAC CTG GTC ATG GGA ATG ACA AAT AAG AAG TCT TTC AAA TGT GAA 144
Arg His Leu Val Met Gly Met Thr Asn Lys Lys Ser Leu Lys Cys Glu
30 35 40
CAA CAT CTG GGT CAT AAC GCT ATC TAT TCC TAC AAG CAA AGT GCT AAG 192 Gln His Leu Gly His Asn Ala Met Tyr Trp Tyr Lys Gln Ser Ala Lys
45 50 55
AAG CCA CTG GAG CTC ATG TTT GTC TAC AGT CTT GAA GAA CGG GTT GAA 240
Lys Pro Leu Glu Leu Met Phe Val Tyr Ser Leu Glu Glu Arg Val Glu 60 65 70 75
AAC AAC AGT GTG CCA AGT CGC TTC TCA CCT GAA TGC CCC AAC AGC TCT 288
Asn Asn Ser Val Pro Ser Arg Phe Ser Pro Glu cys Pro Asn Ser Ser
80 85 90
CAC TTA TCC CTT CAC CTA CAC ACC CTC CAG CCA GAA GAC TCG GCC CTG 336
His Leu Ser Leu His Leu His Thr Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu
95 100 105
TAT CTC TGC GCC AGC AGC 354
Tyr Leu Cys Ala Ser Ser
110
XIX - INFORMATION POUR SEQ ID N' 18
CARACTERISTIQUES DES SEQUENCES
TYPE :: nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 368 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN : IGR b 19
SEQUENCE Vp 7
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
AGAGGCCCCA TCTCAGACCC GAGGCTAGC ATG GGC TGC AGG CTG*CTC 47
Met Gly cys Arg Leu Lau
L 5
TGC TGT CCC GTT CTC TGT CTC CTG GGA GCA GTT CCC ATA GAC ACT GAA 95
Cys Cys Ala Val Leu Cys Leu Leu Gly Ala Val Pro Ile Asp Thr Glu
10 15 20
GTT ACC CAG ACA CCA AAA CAC CTG GTC ATG GGA ATG ACA AAT AAG AAG 143
Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Val Met Gly Met Thr Asn Lys Lys
25 30 35
TCT TTC AAA TGT GAA CAA CAT ATG CGC CAC AGG GCT ATG TAT TGG TAC 191
Ser. Leu Lys Cys Glu Gln His Met Gly His Arg Ala Met Tyr Trp Tyr
40 45 50
AAG CAG AAA GCT AAG AAG CCA CCG GAG CTC ATC TTT GTC TAC AGC TAT 239
Lys Gln Lys Ala Lys Lys Pro Pro Glu Leu Met Phe Val Tyr Ser Tyr
55 60 65 70
GAG AAA CTC TCT ATA AAT GAA AGT GTC CCA AGT CGC TTC TCA CCT GAA 287
Glu Lys Leu Ser Ile Asn Glu Ser Val Pro Ser Arg Phe Ser Pro Glu
75 80 85
TGC CCC AAC AGC TCT CTC TTA AAC CTT CAC CTA CAC GCC CTG CAG CCA 335
Cys Pro Asn Ser Ser Leu Leu Asn Leu His Leu His Ala Leu Gln Pro
90 95 100
GAA GAC TCA GCC CTG TAT CTC TGC GCC AGC AGC 368
Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser
105 110
XX - INFORMATION POUR SEQ ID N' 19
CARACTERISTIQU-ES DES SEQUENCES
TYPE : nucléotide et sa protéine corres
pondante
LONGUEUR : 432 paires de bases
NOMBRE DE BRINS : simple
CONFIGURATION : linéaire
TYPE DE MOLECULE : ADNc pour ARNm
ORIGINE
ORGANISME : humain
LIGNEE CELLULAIRE : lymphocytes T humains
CARACTERISTIQUES
NOM DE L'ADN :IGR b 20
SEQUENCE V ss 9
DESCRIPTION DE LA SEQUENCE
ACCTCTCAAC GGCAGTGAAA CCACAGCCTA GTCCTCTCAC 40
CACTGCAGAC CAGAATCCTG CCCTGGGCCT TGCCTGGTCT GCCTCACTCT GCC ATG 96
MET
1
GGC TGC AGG CTC CTC TGC TGT GTG GTC TTC TGC CTC CTC CAA GCA GGT 144
Gly Cys Arg Lau Leu cys Cys Val Val Phe Cys Leu Leu Gln Ala Gly
5 10 15
CCC TTC GAC ACA GCT GTT TCC CAG ACT CCA AAA TAC CTC GTC ACA CAG 192
Pro Leu Asp Thr Ala Val Ser Gln Thr I > ro l.yn 'lyr l,eu Val Thr Gln
20 25 30
ATG GGA AAC GAC AAG TCC ATT AAA TGT GAA CAA AAT CTG GGC CAT GAT 240
Met Gly Asn Asp Lys Ser Ile Lys Cys Glu Gln Asn Leu Gly His Asp
35 40 45
ACT ATG TAT TGG TAT AAA CAG GAC TCT AAG AAA TTT CTG AAG ATA ATG 288
Thr Met Tyr Trp Tyr Lys Gln Asp Ser Lys Lys Phe Leu Lys Ile Met
50 55 60 65
TTT AGC TAC AAT AAT AAG GAG CTC ATT ATA AAT GAA ACA GTT CCA AAT 336
Phe Ser Tyr Asn Asn Lys Glu Leu Ile Ile Asn Glu Thr Val Pro Asn
70 75 80
CCC TTC TCA CCT AAA TCT CCA GAC AAA GCT CAC TTA AAT CTT CAC ATC 384
Arg Phe Ser Pro Lys Ser Pro Asp Lys Ala His Leu Asn Leu His Ile
85 90 95
AAT TCC CTG GAG CTT GGT GAC TCT GCT GTC TAT TTC TCT GCC AGC AGC 432
Asn Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ser Ser
100 105 110
XXI - INFORMATION POUR SEQ ID N 20 à 24
OLIGONUCLEOTIDES
SEQ ID N 20 5'-TATCTGGAGTCATTGAGGGCGGGC
SEQ ID N 21 5'-GCATGCGCGCGGCCGCGGAGG-14C
SEQ ID N- 22 5'-TGTGGCCAGGCATGCCAGTGTGGCC
SEQ ID N 23 5'-GGTGTGGGAGAATTCTGCTTCTGA
SEQ ID N 24 5'-TCTGCTTCTGATGGCTCAA.

Claims (21)

REVENDICATIONS

1. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes ss des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments Vp correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 19, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides.

2. Séquences selon la revendication 1 codant pour des régions variables des chaînes des récepteurs des lymphocytes T humains, correspondant à des

ADNc comprenant des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments VÙ correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 5, et les séquences qui en diffèrent par un ou plusieurs nucléotides.

3. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments V - pondant à l'une des séquences SEQ ID N 1 à 5, et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides.

4. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes P des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à l'une des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments VÊ correspondant à l'une des séquences SEQ ID N 6 à 15, les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides et les fragments de celles-ci.

5. Séquences nucléotidiques selon la revendication 4 dans laquelle les fragments des séquences correspondent à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments Vù correspondant à l'une des séquences

1 à 155 de SEQ ID N 8

1 à 125 de SEQ ID N 9

1 à 111 de SEQ ID N- 10 et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides.

6. Séquences nucléotidiques codant pour des régions variables de chaînes ss des récepteurs des lymphocytes T humains correspondant à des ADNc correspondant à tout ou partie des séquences nucléotidiques choisies parmi l'un quelconque des segments VÉ correspondant à l'une des séquences

1 à 195 de SEQ ID N- 16

1 à 99 de SEQ ID N- 17

1 à 113 de SEQ ID N- 18

1 à 186 de SEQ ID N- 19 et les séquences qui en diffèrent par un ou deux nucléotides.

7. Peptides codés par l'une quelconque des séquences nucléotidiques telles que définies à l'une quelconque des revendications 1 à 6 , ainsi que les allèles et les dérivés de ceux-ci qui possèdent la même fonction.

8. Vecteurs d'expression comprenant une séquence d'ADN codant pour l'un des peptides tel que défini à la revendication 7.

9. Hotes transformés avec un vecteur selon la revendication 8.

10. Anticorps dirigés contre un déterminant antigénique d'un des peptides définis à la revendication 7.

11. Anticorps selon la revendication 10 qui est un anticorps monoclonal ou un fragment de celui-ci.

12. Fragment Fab, Fab' ou (Fab')2 d'un anticorps monoclonal selon la revendication 11 et dérivés de celui-ci.

13. Dérivés d'un anticorps monoclonal ou d'un fragment de celui-ci selon la revendication 11 ou 12 auxquels sont liés un marqueur détectable et/ou au moins une molécule thérapeutique.

14. Hybridomes produisant un anticorps selon la revendication 11.

15. Composition de diagnostic comprenant un ou plusieurs anticorps monoclonaux, fragments ou dérivés de ceux-ci tels que définis à l'une quelconque des revendications 11 à 13.

16. Composition thérapeutique comprenant un ou plusieurs anticorps monoclonaux1 fragments ou dérivés de ceux-ci tels que définis à l'une des revendica tions Il à 13.

17. Composition selon la revendication 16 comprenant des dérivés contenant une molécule cytotoxique ou un radioisotope.

18. Composition thérapeutique comprenant au moins l'un des peptides définis à la revendication 7.

19. Composition thérapeutique comprenant des oligonucléotides antisens correspondant à l'une quelconque des séquences d'un segment Vp telles que définies à l'une quelconque des revendications 3 à 6.

20. Utilisation, en tant qu'amorces pour l'amplification d'ADN, de séquences nucléotidiques d'environ au moins 17 nucléotides comprises dans l'une quelconque des séquences d'un segment Vp telles que définies à l'une quelconque des revendications 3 à 6.

21. Utilisation, en tant que sonde de détection, de séquences nucléotidiques d'environ au moins 10 nucléotides comprises dans l'une quelconque des séquences d'un segment V ss telles que définies à lcune quelconque des revendications 3 à 6.