FR2642428A1 - Derives glycosyl phospholipidiques de nucleosides et leur application en tant que medicaments - Google Patents
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Abstract
Les dérivés glycosyl phospholipidiques de nucléosides de l'invention répondent à la formule I : (CF DESSIN DANS BOPI) dans laquelle R3 est un groupe : (CF DESSIN DANS BOPI) dans lequel " ose " est un motif sucre en C5 ou C6 , D ou L, excepté le glucose lorsque x est égal à 1, la chaîne de substitution phosphorylée étant fixée en position 1 ou 6 du motif ose auquel elle est rattachée; x est un nombre de 1 à 12; y de 1 à 4; z égal à 0 ou 1; - A est hydrogène ou un groupe alc. de 5 à 30 atomes de carbone - R1 est N3 , hydrogène, alcoyle de C1 à C4 , halogène, nitrile ou hydroxyle et - R2 est alcoyle en C1 à C4 , halogène ou nitrile. Ces dérivés sont utiles pour l'élaboration de compositions pharmaceutiques possédant notamment des propriétés anti-virales.
Description
DRIVES GLYCOSYL PHOSPHOLIPIDIQUES DE NUCLEOSIDES ET
LEUR APPLICATION EN TANT OUE MEDICAMENTS
L'invention a pour objet des dérivés glycosyl phospholipidiques de nucléosides plus spécialement de thymidine -et d'uridine, possédant notamment des propriétés antirétrovirales.
LEUR APPLICATION EN TANT OUE MEDICAMENTS
L'invention a pour objet des dérivés glycosyl phospholipidiques de nucléosides plus spécialement de thymidine -et d'uridine, possédant notamment des propriétés antirétrovirales.
On sait que des dérivés de nucléosides se sont révélés actifs pour la prévention et.le traitement des infections provoquées par des rétrovirus tels que HIV-1 2t HI V- .
L'un des produits les plus intéressants est constitué par l'azido 3' thymidine (AZT). D'autres dérivés de base pyrimidique actifs sont constitués par la didésoxy 2',3' thymidine (ddT) et la désoxy 2' fluoro 5' uridine (dUF).
Dans la demande FR 88/07252 du 31 mai 1988, également au nom des demandeurs, "Glucosyl phosphotriesters de dérivés de thymidine ayant une activité contre les rétrovirus", on a décrit des phosphodiesters et des- phosphotriesters glucosylés de dérivés de la thymidine présentant notamment une activité sur les rétrovirus.
Les développements de ces travaux ont montré que d'autres dérivés de base pyrimidique, possédant un motif sucre autre que le glucose, en particulier un motif mannose, possèdent des propriétés pharmacologiques particulièrement avantageuses.
Ces dérivés constituent en effet notamment des transporteurs lipophiles capables de traverser une membrane cellulaire ou virale, des prodrogues de nucléotides, c'est-à-dire de l'entité biologiquement active du -nucléoside ainsi que des vecteurs de ciblage dirigés préférentiellement vers les macrophages.
L'invention a donc pour but de fournir des phosphodiesters et des phosphotriesters dérivés de la thymidine et de l'uridine possédant notamment des propriétés antirétrovirales.
Elle vise également à fournir un procédé d'obtention de ces dérivés.
L'invention a en outre pour but de fournir des médicaments renfermant ces dérivés à titre de principe actif.
Les dérivés selon l'invention sont caractérisés en ce qu'il s'agit de dérivés glycosylés répondant à la formule I
dans laquelle - Ra représente un groupe (ose)x
dans lequel - "ose" représente un motif sucre en Cs ou en Cs, D ou
L, à l'exception du glucose lorsque x est égal à 1, la chaîne de substitution phosphorylée étant fixée en position I ou en position 6 du motif ose auquel elle est rattachée, - x est un nombre de 1 à 12 - y est un nombre de 1 à 4 - z est égal à O ou 1, et - A représente un atome d'hydrogène ou un groupe alc.
dans laquelle - Ra représente un groupe (ose)x
dans lequel - "ose" représente un motif sucre en Cs ou en Cs, D ou
L, à l'exception du glucose lorsque x est égal à 1, la chaîne de substitution phosphorylée étant fixée en position I ou en position 6 du motif ose auquel elle est rattachée, - x est un nombre de 1 à 12 - y est un nombre de 1 à 4 - z est égal à O ou 1, et - A représente un atome d'hydrogène ou un groupe alc.
représentant un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, de 5 à 30 atomes de carbone, le cas échéant substitué, - Ri représente un groupe N3, un atome d'hydrogène, un groupe alcoyle de 1 à 4 atomes de carbone, un atome d'halogène, un groupe nitrile ou un groupe hydroxyle, et - R2 représente un groupe alcoyle de 1 à 4 atomes de carbone, un atome d'halogène ou un groupe nitrile.
Dans la formule ci-dessus, le motif ose est un sucre choisi parmi les sucres en Cs ou en Ça, D ou L.
On citera le mannose, le galactose, le fructose, le fucose, les amino hexoses et le désoxy-2 glucose pour les hexoses et l'arabinose, le xylose, le ribose et le désoxy-2 ribose pour les pentoses.
Les dérivés mannosylés sont particulièrement préférés. Outre des qualités de transport transmembranaire, ils permettent d'orienter le nucléoside préférentiellement vers les macrophages qui possèdent des récepteurs avec des molécules D-mannose.
Les rétrovirus se fixant de préférence dans ces macrophages et s'y répliquant, on mesure l'importance de disposer de dérivés constituant des vecteurs de ciblage sur les macrophages. Une telle orientation sélective des molécules biologiquement actives permet en effet de réduire les effets secondaires de ces dérivés ou leur toxicité vis-à-vis d'autres types de cellules.
Dans un groupe de dérivés de l'invention, x est un nombre de 2 à 12, ces dérivés étant alors substitués par une chaîne disaccharidique ou oligosaccharidique de 3 à 12 motifs sucre, ces motifs étant identiques ou différents.
Un autre groupe de dérivés de l'invention comporte un seul motif ose.
Les dérivés substitués par le mannose sont plus spécialement préférés.
Des dérivés mannosylés de phosphotriesters particulièrement avantageux sont phosphorylés en position 6 du motif mannose et répondent à la formule
Il
dans laquelle alc., Ri et R2 sont tels que définis cidessus.
Il
dans laquelle alc., Ri et R2 sont tels que définis cidessus.
Une autre famille préférée de phosphotriesters est formée des dérivés phosphorylés en position 1 du motif mannose et répond à la formule III
dans laquelle Ri , R2, Y et alc. sont tels que définis ci-dessus.
dans laquelle Ri , R2, Y et alc. sont tels que définis ci-dessus.
Dans les formules II et III, le groupe alc.
représente avantageusement une chai ne alcoyle ou alcoxy renfermant de 5 à 20 atomes- de carbone. Cette chaîne est, le cas échéant, substituée à l'extrémité par un groupe -SHz, -NHR' ou -N(R',R"}, dans lequel R' et R", identiques ou différents, représentent un groupe alcoyle de 1 à 4 atomes de carbone.
Des phosphodiesters, précurseurs des phosphotriesters ci-dessus, qui entrent également dans le cadre de l'invention, répondent avantageusement à la formule IV
dans laquelle - R1 et R2 sont tels que définis ci-dessus, et - R4 représente un groupe : (ose)*
dans lequel le terme "ose", x, Y et z sont tels que définis en rapport avec la formule I.
dans laquelle - R1 et R2 sont tels que définis ci-dessus, et - R4 représente un groupe : (ose)*
dans lequel le terme "ose", x, Y et z sont tels que définis en rapport avec la formule I.
Des phosphodiesters de nucléosides préférés comportent un motif mannose substitué en position 6 et répondent plus spécialement à la formule V
dans laquelle R1 et R: sont tels que définis ci-dessus.
dans laquelle R1 et R: sont tels que définis ci-dessus.
D'autres phosphodiesters de nucléosides préférés sont des dérivés de mannose phosphorylés en position 1 et répondent à la formule VI
dans laquelle Rt, Rz et v sont tels que définis cidessus.
dans laquelle Rt, Rz et v sont tels que définis cidessus.
Des dérivés spécialement avantageux répondant aux formules I à VI ci-dessus sont des dérivés de 3'azido thymidine (AZT), de didésoxy 2',3' thymidine (ddT) ou de désoxy 2' fluoro 5 uridine (dUF).
Les dérivés de formule I de l'invention sont obtenus en mettant en oeuvre les étapes suivantes de - condensation d'un dérivé osidique de formule VII (ose)
dans laquelle - la chaîne de substitution phosphorylée occupe la position 1 ou la position 6 du motif ose sur lequel elle est fixée, les autres radicaux hydroxyle du ou des motifs ose étant bloqués nar des groupes protecteurs de radicaux hydroxyle, ces groupes étant identiques ou différents - x, Y et z sont tels que définis ci-dessus1 - avec un dérivé de nucléoside de formule VIII: :
dans laquelle - la chaîne de substitution phosphorylée occupe la position 1 ou la position 6 du motif ose sur lequel elle est fixée, les autres radicaux hydroxyle du ou des motifs ose étant bloqués nar des groupes protecteurs de radicaux hydroxyle, ces groupes étant identiques ou différents - x, Y et z sont tels que définis ci-dessus1 - avec un dérivé de nucléoside de formule VIII: :
Ri et R2 étant tels que définis ci-dessus, ce qui conduit à un phosphodiester dans lequel le ou les motifs ose sont protégés, de formule IX (ose)
- élimination des groupements protecteurs du ou des motifs ose des phosphodiesters pour libérer les groupes -OH, suivie, lorsqu'on souhaite préparer un phosphotriester, d'une réaction du phosphodiester avec un dérivé réactif de formule X : B-alc. dans laquelle B représente un groupe capable de réagir avec le groupe -OH fixé sur le-phosphore en fixant le radical alc. sur l'élément P et en formant un composé BH qui sera éliminé, le phosphotriester formé répondant à la formule -I ci-dessus dans laquelle A représente le groupe alc.
- élimination des groupements protecteurs du ou des motifs ose des phosphodiesters pour libérer les groupes -OH, suivie, lorsqu'on souhaite préparer un phosphotriester, d'une réaction du phosphodiester avec un dérivé réactif de formule X : B-alc. dans laquelle B représente un groupe capable de réagir avec le groupe -OH fixé sur le-phosphore en fixant le radical alc. sur l'élément P et en formant un composé BH qui sera éliminé, le phosphotriester formé répondant à la formule -I ci-dessus dans laquelle A représente le groupe alc.
L'étape de condensation entre les dérivés VII et VIII est réalisée avantageusement à une température supérieure à l'åmbiante, en milieu solvant organique.
Des solvants appropriés comprennent la pyridine et l'acétonitrile.
Lorsqu'on utilise la pyridine comme solvant réactionnel, on obtient le couplage désiré en opérant à une température de 60 à 800C, notamment voisine de 700C. La réaction est effectuée sous atmosphère de gaz inerte tel que l'azote. ou l'argon.
On utilise avantageusement un excès de dérivé de formule VII par rapport au nucléoside de formule
VIII. Un excès en moles de 1,5 à 2 permet de réaliser le couplage dans des conditions satisfaisantes.
VIII. Un excès en moles de 1,5 à 2 permet de réaliser le couplage dans des conditions satisfaisantes.
Pour favoriser la réaction de condensation, on ajoute un composé activateur tel que le trichloroacétonitrile (Cramer F. et Weimann G. (1961)
Chem. Ber. 94 996-1007).
Chem. Ber. 94 996-1007).
Les phosphomonoesters utilisés sont sous forme de sel de pyridinium, de ' morpholine, de tétraéthylammonium.
Les groupes protecteurs sont éliminés préalablement à la fixation d'une chaîne alcoyle.
Parmi les groupes convenant pour la mise en oeuvre de l'invention, on citera les groupes acyle, notamment acétyle, ou le groupe benzoyle ou encore ces radicaux diversement substitués.
L'élimination de ces groupes est réalisée selon les techniques classiques de chimie organique, en opérant dans des conditions n'altérant pas la struture du phosphodiester IX ou X, ni ses substituants.
Les groupements acyle sont élimines par exemple à l'aide de solutions de soude, d'un mélange NHa/CH3OH, ou de méthylate de sodium.
Pour l'étape de fixation du groupe alc., on utilise un dérivé réactif B-alc. dans lequel B est avantageusement un halogénure, en particulier un bromure ou un iodure, ou encore un tosylate, ou un sel de sulfonium.
La réaction est réalisée avec avantage en milieu solvant organique, à une température supérieure à l'ambiante, notamment de 50 à 1000C. Parmi les solvants organiques utilisables, on citera l'acétonitrile, le diméthylformamide et le nitrométhane.
Le dérivé réactif B-alc. est utilisé selon un excès d'au moins environ 10 fois plus, en mole, par rapport au phosphodiester, qui est de préférence sous forme de sel de haute réactivité.
Selon une autre variante de synthèse, on fait réagir un dérivé d'oside dans lequel un motif ose est substitué en position 6 ou 1 par un groupe cyanoéthylphosphate, ce dérivé répondant à la formule
XI (ose)x
dans laquelle x, y et z sont tels que définis en rapport avec la formule I, ce dérivé étant avantageusement sous forme de sel, avec un dérivé de nucléoside de formule VIII ci-dessus, puis on élimine les groupes de blocage des fonctions hydroxyle.
XI (ose)x
dans laquelle x, y et z sont tels que définis en rapport avec la formule I, ce dérivé étant avantageusement sous forme de sel, avec un dérivé de nucléoside de formule VIII ci-dessus, puis on élimine les groupes de blocage des fonctions hydroxyle.
La réaction de couplage est effectuée avantageusement dans un solvant organique, à température ambiante en présence de TPSNT.
Le dérivé de formule XI est avantageusement obtenu par réaction de l'ose ou de l'oligosaccharide que l'on souhaite introduire dans le dérivé à synthétiser avec du cyanoéthylphosphate sous forme de sel réactif.
Les propriétés anti-rétrovirales des produits de l'invention ont été mises en évidence en étudiant in vitro, plus spécialement leur action inhibitrice vis-h-vis de l'effet cytopathogène de rétrovirus et vis-å-vis de la réplication de ces rétrovirus,
Selon un aspect revêtant un intérêt majeur, ces actions inhibitrices sont obtenues à des doses non toxiques pour les lymphocytes T humains, ce qui permet d'utiliser les dérivés de l'invention pour l'élaboration de compositions anti-rétrovirales.
Selon un aspect revêtant un intérêt majeur, ces actions inhibitrices sont obtenues à des doses non toxiques pour les lymphocytes T humains, ce qui permet d'utiliser les dérivés de l'invention pour l'élaboration de compositions anti-rétrovirales.
L'invention a donc également pour objet des compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles comprennent une quantité efficace d'au moins un dérivé de formule I en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
L'invention vise en particulier les compositions pharmaceutiques élaborées à partir de dérivés mannosylés.
Ces compositions sont particulièrement utiles pour traiter le SIDA et les maladies apparentées.
Ces compositions se présentent sous des formes appropriées pour l'administration par voie orale, nasale, topique, rectale, vaginale, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire ou intradermique.
Les compositions administrables par voie orale comprennent des tablettes, comprimés, granules, solutions ou suspensions en milieu aqueux ou non aqueux. Pour l'administration par voie rectale, on utilise des suppositoires et par voie vaginale des crèmes ou des mousses.
Les formulations utilisées pour l'administration par voie parentérale sont avantageusement formées par des solutions ou des suspensions stériles ou non-aqueuses
Afin d'illustrer l'invention, on rapporte ciaprès des exemples de préparation de dérivés de thymidine et des résultats d'essais pharmacologiques montrant l'activité de ces dérivés.
Afin d'illustrer l'invention, on rapporte ciaprès des exemples de préparation de dérivés de thymidine et des résultats d'essais pharmacologiques montrant l'activité de ces dérivés.
EXEMPLE 1 : PREPARATION DE DERIVES DE L'AZT DE FORMULE
dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou une chaîne hexadécyle
Cette synthèse est réalisée à partir du Dmannose 6-phosphate et comprend les cinq étapes suivantes 1. Blocage des groupes -OH du D-mannose 6phosphate 2. Condensation du dérivé protégé avec l'azido 3' thymidine 3. Déprotection des groupes -OH du motif mannose 4. Echange du sel de pyridinium en sel de tétrabutylammonium, et 5. Fixation d'une chaîne hexadécyle sur le groupe -OH libre du motif phosphate, conduisant à un phosphotriester.
dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou une chaîne hexadécyle
Cette synthèse est réalisée à partir du Dmannose 6-phosphate et comprend les cinq étapes suivantes 1. Blocage des groupes -OH du D-mannose 6phosphate 2. Condensation du dérivé protégé avec l'azido 3' thymidine 3. Déprotection des groupes -OH du motif mannose 4. Echange du sel de pyridinium en sel de tétrabutylammonium, et 5. Fixation d'une chaîne hexadécyle sur le groupe -OH libre du motif phosphate, conduisant à un phosphotriester.
Ces étapes sont réalisées comme suit 1 : Blocage des groupes -OH du D-mannose 6-DhosDhate (1) et obtention du sel de nvridiniun du 1,2,3,4 tétra-O-acetvl, D-iannose 6-Dhosohate (2)
On soumet à agitation pendant 16 h à température ambiante, lg (3,29 mmoles) de sel de sodium du D-mannose 6-phosphate (1) et 3,6 ml d'anhydride acétique distillé (42,3 mmoles) dans 4 ml de pyridine anhydre. Un précipité blanc se forme. On contrôle la réaction par chromatographie en couche mince (CCM) (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 60/35/5. Rf. départ : 0 ; Rf produit acétylé : 0,53
On filtre le précipité et refroidit le filtrat.
On soumet à agitation pendant 16 h à température ambiante, lg (3,29 mmoles) de sel de sodium du D-mannose 6-phosphate (1) et 3,6 ml d'anhydride acétique distillé (42,3 mmoles) dans 4 ml de pyridine anhydre. Un précipité blanc se forme. On contrôle la réaction par chromatographie en couche mince (CCM) (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 60/35/5. Rf. départ : 0 ; Rf produit acétylé : 0,53
On filtre le précipité et refroidit le filtrat.
On ajoute doucement environ 30 ml de glace pour hydrolyser l'anhydride en excès. On laisse l'hydrolyse se poursuivre 30 mn puis on évapore le mélange à sec sous vide et coévapore ensuite plusieurs fois avec du toluène pour ôter toute trace de pyridine. On reprend ensuite par de l'eau et on lave plusieurs fois la phase aqueuse avec du dichlorométhane. La phase aqueuse est ensuite réduite de volume avant d'être passée sur colonne de résine Dowex 50 WX8 H+R, préalablement échangée sous forme pyridinium.
On contrôle la sortie de colonne par CCM et on lyophilise : m = 1,203 g ; Rdt = 63%.
2 : Condensation et obtention du sel de pyridinium du 1,2,3,4 tétra-O-acétyl. 6-mannosyl 5'-(azido-3') thynidinyl hosnhate (3)
On coévapore 3 fois avec de la pyridine anhydre (distillée sur CaH2 puis sur chlorure para-toluène sulfonique), 100 mg (0,375 mmole) d'azido 3' thymidine (4) et 330 mg (0,375 x 1,5 mmoles) de 1,2,3,4 tétra-O acétyl 6-D-mannose phosphate (2) sous forme pyridinium.
On coévapore 3 fois avec de la pyridine anhydre (distillée sur CaH2 puis sur chlorure para-toluène sulfonique), 100 mg (0,375 mmole) d'azido 3' thymidine (4) et 330 mg (0,375 x 1,5 mmoles) de 1,2,3,4 tétra-O acétyl 6-D-mannose phosphate (2) sous forme pyridinium.
On ajoute environ 10 ml de pyridine anhydre et 1,275 ml (0,375x34 excès) de trichloroacétonitrile. On chauffe à 700C en agitant bien et sous atmosphère d'azote jusqu'au lendemain. On vérifie la réaction par CCM (CH2Cl3 : CH3OH : H2O 13/5/1). On évapore à sec sous vide puis on reprend le mélange par un minimum de dichlorométhane et on précipite par l'éther de pétrole.
Le solvant est décanté et le précipité est chromatographié sur colonne de silice 7734 Merckt éluée au dichlorométhane enrichi graduellement en méthanol.
Le composé est élué vers un mélange à 6% de méthanol : m = 202 mg ; Rdt = 71% ; Rf = 0,62 (CH2Cl2 : CH: :
H2O 13/5/1).
H2O 13/5/1).
3 : Déprotection des grouses -OH du mannose et obtention du sel de pyridinum du 6-Dmannosyl-5' (azido-3')thymidinyl phosphate (5)
Pour éliminer les groupes acétyle, on fait régir 202 mg de (3) dans du méthylate de sodium à 18 dans le méthanol pendant 10 mn, à température ambiante.
Pour éliminer les groupes acétyle, on fait régir 202 mg de (3) dans du méthylate de sodium à 18 dans le méthanol pendant 10 mn, à température ambiante.
Il apparaît un léger trouble. On vérifie par CCM que la réaction est complète.
On neutralise par addition de résine Dowex 50 WX8 H+2. A pH = 7. on filtre la résine et le précipité et on évapore la phase méthanolique à sec.
On reprend par un minimum d'eau et on passe sur colonne de Biogel P2 R 200/400 mesh éluée à l'eau.
La sortie de colonne est détectée par U.V. à 254 nm. Après CCM, les fractions contenant le composé cherché sont lyophilisées avant d'être repassées sur une colonne de C18* éluée à l'eau : m = 78,5 mg ; Rdt = 50% ; Rf = 0,544 (isopropanol : NHoOH : H20 ; 7/1/2).
4 : Echanqe du sel de nvridinium en sel de tétrabutylammonium (6) (produit CT 7626)
On prépare une colonne de résine Dowex 50 WX8 H+ préalablement équilibrée sous forme tétrabutylammonium par agitation de cette résine dans le tétrabutylammonium hydroxyde concentré et lavage jusqu'à pH neutre des eaux de lavage.
On prépare une colonne de résine Dowex 50 WX8 H+ préalablement équilibrée sous forme tétrabutylammonium par agitation de cette résine dans le tétrabutylammonium hydroxyde concentré et lavage jusqu'à pH neutre des eaux de lavage.
Les 78,5 mg obtenus précédemment du produit (5) sont passés sur cette colonne éluée à l'eau.
On recueille les fractions absorbant à 254 nm et on lyophilise : m = 98 mg ; Rdt = 98% ; Rf inchangé ; masse FAB-m-t = 508 (sans N(Bu)+4) ; HPLC temps de rétention 10,489 mn (2/25).
5 : Fixation de la chaîne hexadécyle et obtention du 6-D-mannosyl hexadécyl 5' (azido-3')-thymidinyl phosphate (7) (produit CT 7627 >
On coévapore sous vide, avec de l'acétonitrile anhydre, 70 mg (0,093 mmole) de diester sous forme tétrabutylammonium (6 > et 0,528 ml (0,093 x 18 mmoles) de 1-iodohexadécane (8-). Puis on rajoute environ 10 ml d'acétonitrile anhydre et on chauffe à 800C pendant 16 à 20 h sous agitation. On contrôle la réaction par CCM et on évapore à sec le mélange réactionnel. Celui-ci est alors déposé sur colonne de silice Merck 7734R.
On coévapore sous vide, avec de l'acétonitrile anhydre, 70 mg (0,093 mmole) de diester sous forme tétrabutylammonium (6 > et 0,528 ml (0,093 x 18 mmoles) de 1-iodohexadécane (8-). Puis on rajoute environ 10 ml d'acétonitrile anhydre et on chauffe à 800C pendant 16 à 20 h sous agitation. On contrôle la réaction par CCM et on évapore à sec le mélange réactionnel. Celui-ci est alors déposé sur colonne de silice Merck 7734R.
L'élution est faite tout d'abord au dichlorométhane pur pour ôter l'hexadécane en excès, puis l'éluant est enrichi progressivement en méthanol.
Les fractions contenant le phosphotriester sont éluées par un éluant à 6% de méthanol et évaporées à sec. On obtient : m = 38 mg ; Rdt = 56% ; Rf = 0,674 (isopropanol : NH4OH : H2O 7/1/2) = 0,71 (CH2Cl2 :
CH3OH 11:0 13/5/1 ; masse : FAB+ = 734 (m + 1) ; HPLC : temps de rétention : 21,87 mn (5/95-95) ; RMN (DMSO- d6) : chaîne CH3 (0,87), (CH2)n (1,25), CH2-CH2-
OP(1,63), CH2-CH2-OP(4,01 ; mannose-α H1 (4,90),
H2 (3,58), H3 (3,57) H4 (3,45), H5 (372), H6 (4,23),
H6'(4,09) ; nucléotide H6(7,51 et 7,49 41/50),
CH3 (1,82) ; H1, (6,14), H2'(2,44) H2"(2,36), H3'(4,46),
H4'(4,02), H5'5"(4,20).
CH3OH 11:0 13/5/1 ; masse : FAB+ = 734 (m + 1) ; HPLC : temps de rétention : 21,87 mn (5/95-95) ; RMN (DMSO- d6) : chaîne CH3 (0,87), (CH2)n (1,25), CH2-CH2-
OP(1,63), CH2-CH2-OP(4,01 ; mannose-α H1 (4,90),
H2 (3,58), H3 (3,57) H4 (3,45), H5 (372), H6 (4,23),
H6'(4,09) ; nucléotide H6(7,51 et 7,49 41/50),
CH3 (1,82) ; H1, (6,14), H2'(2,44) H2"(2,36), H3'(4,46),
H4'(4,02), H5'5"(4,20).
EXEMPLE 2 : PREPARATION DE DERIVES DE LA ddT DE FORMULE
dans laquelle X est tel que défini dans l'exemple 1.
dans laquelle X est tel que défini dans l'exemple 1.
On opère comme indiqué dans l'exemple 1. Pour l'étape 2, 50 mg (0,221 mmole) de ddT (9) et 195 mg (0,221 x 1.5 mmoles) de mannose acétylé 6-phosphate (2) sont traités par 0,75 ml (0,221 x 34 mmoles) de trichloroacétonitrile dans la pyridine anhydre. On obtient après chromatographie : 111 mg du phosphodiester protégé (10) ; Rdt = 70% ; Rf = 0,63 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1).
On réalise l'étape 3 comme indiqué ci-dessus.
A partir des 111 mg du produit (10X, f on obtient, après passage sur Biogel P2 200/400 mesh et
C18*, 48 mg de phosphodiester déprotégé (11) : Rdt = 57% ; Rf = 0,5 (isopropanol : NH4OH : H2O 7/1/2).
C18*, 48 mg de phosphodiester déprotégé (11) : Rdt = 57% ; Rf = 0,5 (isopropanol : NH4OH : H2O 7/1/2).
L'étape 4, réalisée à partir des 48 mg du phosphodiester (11), conduit à 62 mg de phosphodiester sous forme de sel de tétrabutylammonium (12] (produit
CT 7389) : Rdt = 99% ; Rf inchangé; masse FAB- = 468 (M-1) ; HPLC temps de rétention : 10,659 (0/25).
CT 7389) : Rdt = 99% ; Rf inchangé; masse FAB- = 468 (M-1) ; HPLC temps de rétention : 10,659 (0/25).
On applique le protocole de l'étape 5 sur 55 mg (0,075 immolez du phosphodiester (12) et 0,44ml (0,0775 x 18) de 1-iodohexadécane (8). On obtient, après chromatographie : 17 mg de 6-D-mannosyl hexadécyl 5' didésoxy 2'3' thymidinyl phosphate (13) (produit CT 7390) : Rdt = 32% ; Rf = 0,631 (isopropanol :NHsOH
H2O 7/1/2) ; Rf = 0,82 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1) :
Masse FAB* m+t = 693 ; HPLC : temps de rétention : 12,983 (50-95)
EXEMPLE 3 : PREPARATION DE DERIVES DE LA dUF DE FORMULE
dans laquelle X est tel que défini dans l'exemple 1.
H2O 7/1/2) ; Rf = 0,82 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1) :
Masse FAB* m+t = 693 ; HPLC : temps de rétention : 12,983 (50-95)
EXEMPLE 3 : PREPARATION DE DERIVES DE LA dUF DE FORMULE
dans laquelle X est tel que défini dans l'exemple 1.
On a recours au même mode opératoire que celui utilisé pour préparer les dérivés de l'AZT ou de la ddT.
L'étape 2 est réalisée à partir de 250 mg de désoxy-2' fluoro-5 uridine (1,015 mmole) (14) et de 892 mg (1,015 x 1,5 mmoles) de 1,2,3,4 tétra-O-acétyl 6-Dmannose phosphate (2), traités par 3,55 ml (1,015 x 34 excès) de trichloroacétonitrile dans la pyridine anhydre. On obtient après chromatographie, 540 mg du phosphodiester protégé (15) : Rdt = 72% ; Rf = 0,44 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1).
Dans l'étape 3, à partir des 540 mg du phosphodiester (15), on obtient, après passage sur
BiogelR et C18R : 200 mg de phosphodiester déprotégé (16) : Rdt = 48%; Rf = 0,544 (isopropanol: NH4OH : HO 7/1/2).
BiogelR et C18R : 200 mg de phosphodiester déprotégé (16) : Rdt = 48%; Rf = 0,544 (isopropanol: NH4OH : HO 7/1/2).
Avec les 200 mg précédents, on obtient selon l'étape 4, 238 mg de phosphodiester sous forme de sel de tétrabutylammonium (17) (produit CT 7088) : Rdt = 92% ; Rf = inchangé ; masse FAB- = 729 (m-l) ; HPLC temps de rétention 2 pics: 2,077 mn, 2,386 mn (5/25).
Pour l'étape 5, on utilise 218 mg (0,298 mmole) du diester (17) et 1,689 ml (0,298 x 18 mmoles) de 1iodohexadécane (8). On obtient 63,4mg de phosphotriester (18), ou CT 7325 : Rdt = 30% ; Rf = 0,628 (isopropanol : NH4OH : H2O 7/1/2) = 0,84 (CH2Cl2 : CHaOH: HO 13/5/1) ; masse FAB+ = 735 (m + Na') ) ;
HPLC temps de rétention = 12,829 (50/95) ; RMN (DMSO- d,) : chaîne CH3 (0,85), (CH2)n (1,24), CH2-CH2-OP (1,58), CH2-CH2-OP(3,99) ; mannose α H2(4,90), H2 (3,57), H3(5,53), H4 (3,41), H5(3,71), H6(4,06), H6, (4,14) ; nucléotide H6 (7,88 et 7,85 45/55), H1, (6,15), H2'2" (2,14) H3' (4,24), H4'(3,95),
H5',5" (4,19).
HPLC temps de rétention = 12,829 (50/95) ; RMN (DMSO- d,) : chaîne CH3 (0,85), (CH2)n (1,24), CH2-CH2-OP (1,58), CH2-CH2-OP(3,99) ; mannose α H2(4,90), H2 (3,57), H3(5,53), H4 (3,41), H5(3,71), H6(4,06), H6, (4,14) ; nucléotide H6 (7,88 et 7,85 45/55), H1, (6,15), H2'2" (2,14) H3' (4,24), H4'(3,95),
H5',5" (4,19).
EXEMPLE 4 : PREPARATION DE DERIVES D'AZT DE FORMULE
dans laquelle X est tel que défini dans l'exemple 1.
dans laquelle X est tel que défini dans l'exemple 1.
Cette synthèse est réalisée à partir d'un dérivé du D-mannose dont les groupes -OH sont protégés à l'exception du carbone anomère, à savoir l'α bromo-l tétra-O-benzoyl 2,3,4,6-D-mannose (19) et comprend les étapes suivantes a) Fixation en position 1 d'une chaîne benzyloxyéthyle b) Elimination du groupe benzyle sur la chaîne fixée en position 1 c) Fixation d'une chaîne cyanoéthyl phosphate d) Condensation avec 1'AZT e) Elimination des groupes benzoyle et du groupe cyanoéthyle f) Echange en sel de tétrabutylammonium g) Fixation d'une chaîne hexadécyle conduisant à l'obtention d'un phosphotriester.
a) Fixation d'une chaîne henzyloxyéthyle en position 1 et obtention du (2-benzvloxvéthyl > -1 tétra-Obenzovl 2.3.4.6-D mannose (20). -
Dans un ballon de 100 ml, on prépare le mélange réactionnel suivant : 0,71 ml (5 mmoles) de 2 benzyloxyéthanol (21) dans 15 ml de nitrométhane anhydre et 15 ml de toluène anhydre. On ajoute 2,282 g (5 x 1,266 mmoles) de bromure mercurique HgBr2 et 1,6 g (5 x 1,266 mmoles) de cyanure mercurique HgCN2 ainsi que 5 g de tamis moléculaire 4 A. On laisse sous agitation 1 h bien fermé. Puis on ajoute 3,295 g (5 mmoles) d'a bromo-l tétra-O-benzoyl 2,3,4,6 D-mannose (19).On laisse sous agitation une heure sous azote jusqu'à réaction complète en vérifiant par CCM (acétate d'éthyle : hexane 1/2 ; Rf départ = 0,38; Rf produit attendu : 0,28).
Dans un ballon de 100 ml, on prépare le mélange réactionnel suivant : 0,71 ml (5 mmoles) de 2 benzyloxyéthanol (21) dans 15 ml de nitrométhane anhydre et 15 ml de toluène anhydre. On ajoute 2,282 g (5 x 1,266 mmoles) de bromure mercurique HgBr2 et 1,6 g (5 x 1,266 mmoles) de cyanure mercurique HgCN2 ainsi que 5 g de tamis moléculaire 4 A. On laisse sous agitation 1 h bien fermé. Puis on ajoute 3,295 g (5 mmoles) d'a bromo-l tétra-O-benzoyl 2,3,4,6 D-mannose (19).On laisse sous agitation une heure sous azote jusqu'à réaction complète en vérifiant par CCM (acétate d'éthyle : hexane 1/2 ; Rf départ = 0,38; Rf produit attendu : 0,28).
On filtre le précipité et on dilue le filtrat par du toluène. On lave ensuite la phase organique par de l'eau glacée, du bicarbonate de sodium saturé glacé, et de nouveau par de l'eau glacée. La phase organique est évaporée à sec après séchage et filtration sur sulfate de sodium.
L'huile obtenue est chromatographiée sur colonne de silice Merck 7734R équilibrée avec un mélange hexane/10% acétate d'éthyle, puis on enrichit graduellement en acétate d'éthyle Le produit cherché est élué avec un mélange à 30% d'acétate d'éthyle. On obtient le produit (20) sous forme d'une huile jaune pale : m = 3,079 g ; Rdt = 80% ; Rf = 0,28 (acétate d'éthyle : hexane 1/2).
b) Eliiination du groupe benzvle sur la chaîne en
Position 1 et obtention du [2-hydroxyéthyl]-1, tétra0-benzoyl 2,3,4,6 D-mannose (22)
On dissout l'huile obtenue précédemment (20) dans 60 ml d'éthanol absolu et on hydrogène en présence de 50 mg de palladium sur charbon à 10%.
Position 1 et obtention du [2-hydroxyéthyl]-1, tétra0-benzoyl 2,3,4,6 D-mannose (22)
On dissout l'huile obtenue précédemment (20) dans 60 ml d'éthanol absolu et on hydrogène en présence de 50 mg de palladium sur charbon à 10%.
On attend une heure avant de faire le premier contrôle en CCM (AcOEt : hexane 2/1 ; Rf départ : 0,65 ; Rf produit attendu : 0,44) Ac =' CH3CO- et Et = CH3CH-. Si nécessaire, on attend un peu plus longtemps en rajoutant 25 mg de Pd/C. Quand la réaction est presque totale, on filtre sur Délitez et on rince rapidement avec de l'acétate d'éthyle sec. On évapore le filtrat et chromatographie l'huile obtenue sur colonne de silice 7734 MerckR équilibrée avec un mélange hexane/ 10% acétate d'éthyle. On enrichit progressivement en acétate d'éthyle. Le composé est élué par un mélange à 30% d'acétate d'éthyle et vérifié en CCM. On obtient le produit recherché (22) sous forme de paillettes : m = 2,135 g ; Rdt = 79%.
c) Cvanoéthyl (éthoxv-1 tétra 2,3,4,6-O-benzoyl Dmannosyl) phosphate (23)
On échange tout d'abord le sel de baryum du cyanoéthyl phosphate en sel de pyridinium. A cet effet, on ajoute 2,6 g de ce sel de baryum (8,043 mmoles) dans 15 ml d'eau et avec une bonne agitation, on ajoute de la résine Dowex 50 WX8 H+' jusqu'à dissolution complète du sel. On laisse sous agitation encore une heure puis on passe le mélange sur une colonne Dowex 50 WX8 H+R et on recueille directement le produit dans la pyridine.
On échange tout d'abord le sel de baryum du cyanoéthyl phosphate en sel de pyridinium. A cet effet, on ajoute 2,6 g de ce sel de baryum (8,043 mmoles) dans 15 ml d'eau et avec une bonne agitation, on ajoute de la résine Dowex 50 WX8 H+' jusqu'à dissolution complète du sel. On laisse sous agitation encore une heure puis on passe le mélange sur une colonne Dowex 50 WX8 H+R et on recueille directement le produit dans la pyridine.
On élue avec de l'eau et on continue de collecter- tant que le pH de l'éluat est acide.
On évapore ensuite à sec et on coévapore l'huile obtenue 3 fois avec de la pyridine.
On ajoute alors 2,053 g (3,179 mmoles) du sucre (22) et on coévapore de nouveau 3 fois avec de la pyridine anhydre. Enfin, on ajoute environ 40 ml de pyridine anhydre et 20 ml de trichloroacétonitrile distillé. On met sous azote et on porte le mélange à 700C en agitant durant environ 14 heures. On obtient une solution orangée que l'-on contrôle par CCM.
Rf = O (AcOEt : hexane 2/1) ; Rf = 0,72 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1).
Le mélange est évaporé à sec, repris par un minimum de dichlorométhane et précipité par ltéther de pétrole. Le produit est purifié sur colonne de silice 7734 MerckR équilibrée avec un mélange hexane : acétate d'éthyle 1/1 et enrichie progressivement jusqu'à l'acétate d'éthyle pur.
Après évaporation, on obtient le produit recherché (23) sous forme d'une poudre blanche : m = 1,809 g ; Rdt = 67%.
d) Condensation avec l'AZT (4) et obtention de l'étho xy-1 tétra-2,3,4,6-O-benzoyl D-mannosyl) 5'-(azido-3') thymidinyl phosphate (24)
On . coévapore 3 fois avec de -la pyridine anhydre, 100 mg (0,375 mmole) d'azido 3' thymidine et 540 mg (0,375 x 1,7 mmoles) de mannose benzoylé (23).
On . coévapore 3 fois avec de -la pyridine anhydre, 100 mg (0,375 mmole) d'azido 3' thymidine et 540 mg (0,375 x 1,7 mmoles) de mannose benzoylé (23).
on ajoute ensuite environ 10 ml de pyridine anhydre et 285 mg (0,375 x 2 mmoles) de triisopropyl-2,4,6 benzénesulfonyl nitro-3 triazole-1,2,4 (TPSNT).
On laisse bien fermé à température ambiante et au bout d'une heure, on contrôle par CCM. S'il reste du produit de départ, on rajoute du TPSNT et on attend à nouveau en contrôlant en CCM. On dilue alors par du dichlorométhane, on lave au bicarbonate de sodium saturé, à l'eau, puis on évapore la phase organique à sec après séchage sur sulfate de sodium. On reprend par un minimum de dichlorométhane et on précipite par l'éther de pétrole. La gomme obtenue est chromatographiée sur colonne de silice 7734 MerckR équilibrée au dichlorométhane, éluée avec CH2Cl2 pur.
Le produit est ensuite élué par un mélange CH2Cl2 1% méthanol.
Le produit est ensuite élué par un mélange CH2Cl2 1% méthanol.
On obtient le phosphodiester (22) sous forme d'une poudre beige : m = 198 mg ; Rdt = 52% ; Rf = 0,40 (CH2Cl2 10% CH2OH).
e) Elimination des groupes benzovle et cvanoéthyle et obtention de 1'éthoxy-1 D-mannosyi 5'-(azido-3') thymidinyl phosphate (25)
On dissout les 198 mg (0,194 mmole) obtenus précédemment de (24) dans 20 ml de méthylate de sodium à 1% dans le méthanol.
On dissout les 198 mg (0,194 mmole) obtenus précédemment de (24) dans 20 ml de méthylate de sodium à 1% dans le méthanol.
On agite pendant 10 mn et vérifie par CCM qu'il n'y a plus-de produit de départ. on neutralise par de la Dowex 50 WX8 H+R R on filtre et on évapore à sec. On gratte le produit obtenu avec de l'éther éthylique pour ôter le benzoate obtenu. Le résidu est dissous dans l'eau et passé sur une colonne de C181 éluée à l'eau
Les fractions sont détectées à 254 nm et contrôlées en
CCM. Après lyophilisation, on obtient le phosphodiester déprotégé (25) sous forme d' une poudre blanche : m = 78 mg ; Rdt = 73% ; Rf = 0,529 (isopropanol : NH4OH f120 7/1/2).
Les fractions sont détectées à 254 nm et contrôlées en
CCM. Après lyophilisation, on obtient le phosphodiester déprotégé (25) sous forme d' une poudre blanche : m = 78 mg ; Rdt = 73% ; Rf = 0,529 (isopropanol : NH4OH f120 7/1/2).
f) Echange en sel de tétrabutvlammonium (26) ou CT 7624
On prépare une colonne de résine Dowex 50 WX8 H.1 échangée sous forme tétrabutylammonium.
On prépare une colonne de résine Dowex 50 WX8 H.1 échangée sous forme tétrabutylammonium.
On passe les 78 mg de phosphodiester (25) sur cette colonne en éluant avec H2O. On recueille les fractions absorbant à 254 nm et on lyophilise : m = 100 mg ; Rdt = 89% ; Rf = inchangé ; masse FAB- = 552 (m-1) HPLC : temps de rétention = 8,475 mn (5/25).
g) Obtention du phosphotriester (27), à savoir l'éthoxy-1 D-mannosyl hexadécyl 5'-(acido-3') thymidinyl phosphate (Ct 7625)
On coévapore avec de l'acétonitrile anhydre 70 mg (0,088 mmole) du phosphodiester (26) et 0,498 ml de l-iodohexadécane (8) (0,088 x 18 mmoles). Puis on ajoute 10 ml d'acétonitrile anhydre et on porte à 800C pendant 16 à 20 h sous agitation. On vérifie alors par
CCM qu'il n'y a plus de produit de départ. Le mélange est évaporé à sec et passé sur colonne de silice 7-734
MerckR. La colonne est éluée avec du dichlorométhane pur pour ôter le iodohexadécane en excès. Puis on enrichit progressivement en méthanol. Le composé cherché est élué par un mélange à 6% de méthanol.On l'obtient sous forme d'une poudre blanche : m = 47 mg;
Rdt = 69% ; Rf = 0,692 (isopropanol: NH4OH H,O 7/1/2) ; masse FAB- = 776 (m-1) ; HPLC 2 pics temps de rétention = 14,091 mn, 14,5 mn (50/95) ; RMN (DMSO-d6) : chaine CH3(0,85), (CH2)n (1,25), C11,-CH,-Op (1,59),
CH2-CH2-OP (4,00) ; mannose α H1 (4,69), H2 (3,63)
H3 (3,48), H4 (3,35), H5 (3,42), Ho ,o ' (3,50) ; nucléotide
H6 (7,64), CH3 (1,80), H1, (6,13), H2',2" (2,40), H3 (4,46), H4 (4,02), H5',3" (4,19) ; CH2-CH2-OP (3,59 et 3,79), CH2-CH2-OP (4,18),
EXEMPLE 5 : PREPARATION DE DERIVES DE ddT DE FORMULE:
On coévapore avec de l'acétonitrile anhydre 70 mg (0,088 mmole) du phosphodiester (26) et 0,498 ml de l-iodohexadécane (8) (0,088 x 18 mmoles). Puis on ajoute 10 ml d'acétonitrile anhydre et on porte à 800C pendant 16 à 20 h sous agitation. On vérifie alors par
CCM qu'il n'y a plus de produit de départ. Le mélange est évaporé à sec et passé sur colonne de silice 7-734
MerckR. La colonne est éluée avec du dichlorométhane pur pour ôter le iodohexadécane en excès. Puis on enrichit progressivement en méthanol. Le composé cherché est élué par un mélange à 6% de méthanol.On l'obtient sous forme d'une poudre blanche : m = 47 mg;
Rdt = 69% ; Rf = 0,692 (isopropanol: NH4OH H,O 7/1/2) ; masse FAB- = 776 (m-1) ; HPLC 2 pics temps de rétention = 14,091 mn, 14,5 mn (50/95) ; RMN (DMSO-d6) : chaine CH3(0,85), (CH2)n (1,25), C11,-CH,-Op (1,59),
CH2-CH2-OP (4,00) ; mannose α H1 (4,69), H2 (3,63)
H3 (3,48), H4 (3,35), H5 (3,42), Ho ,o ' (3,50) ; nucléotide
H6 (7,64), CH3 (1,80), H1, (6,13), H2',2" (2,40), H3 (4,46), H4 (4,02), H5',3" (4,19) ; CH2-CH2-OP (3,59 et 3,79), CH2-CH2-OP (4,18),
EXEMPLE 5 : PREPARATION DE DERIVES DE ddT DE FORMULE:
On opère comme décrit dans l'exemple 4.
L'étape de condensation d) est réalisée à partir de 100 mg de ddT (9) (0,442 mmole) et 600 mg (0,442 x 1,59 excès) de phosphate (28) condensés dans la pyridine anhydre en présence de 336 mg de TPSNT (0,442 x 2 mmoles). On obtient après purification sur colonne de silice : 245 mg de phosphodiester protégé (29) ; Rdt = 56% ; Rf = 0,437 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1).
L'étape de débenzoylation et de décyanoéthylation e) est réalisée à partir des 245 mg de (29) traités par 25 ml de méthylate de sodium à 1%.
Après purification, on obtient : 98 mg de phosphodiester (30) sous forme de sel de pyridinium ;
Rdt = 70% ; Rf = 0,605 (isopropanol : NH4OH : H2O 7/1/2).
Rdt = 70% ; Rf = 0,605 (isopropanol : NH4OH : H2O 7/1/2).
Dans l'étape f), le sel de pyridinium est échangé en sel de tétrabutylammonium. On obtient 113 mg de phosphodiester (31) sous forme de sel de tétrabutylammonium CT 7622 : Rdt = 86% ; Rf = inchangé ; masse FAB- = 511 (m-1) ; HPLC : temps de rétention = 5,348 mn (5/25).
Le phosphotriester (32) est obtenu selon l'étape g)- en traitant 83 mg (0,11 mmole) du diester (31) par 0,633 ml (O,11 x 18 mmoles) de 1iodohexadécane (8) dans l'acétonitrile sec. On obtient après passage sur colonne 54 mg du phosphotriester CT 7623: Rdt = 67% ; Rf = 0,69 (isopropanol : NHtOH : H2O 7/1/2) = 0,78 (CH2C12 :CH3OH : 1120 13/5/11 ; masse FAB+ = 759,4 (m+Na+) ; HPLC 2 pics temps de rétention = 13,597 mn, 14,028 mn (50/95).
EXEMPLE 6 : PREPARATION DE DERIVES DE dUF DE FORMULE:
On opère comme indiqué dans l'exemple 4.
L'étape de condensation est réalisée à partir de 100 mg de désoxy 2' fluoro 5 uridine (14) (0,406 mmole) et 588 mg (0,406 x 17 excès) de phosphate condensés (23) dans la pyridine anhydre en présence de 309 mg de TPSNT (0,406 x 2 mmoles). On obtient après chromatographie 141 mg de phosphodiester protégé (33) sous forme de sel pyridinium : Rdt = 35% ; Rf = 0,46 (CH2Cl2 : CH3OH : HoO 13/5/1).
La débenzoylation et la décyanoéthylation sont effectuées selon l'étape e) comme indiqué dans l'exemple 4 à partir des 141 mg de (33). On obtient, par traitement par 15 ml de méthylate de sodium à 1% 53 mg de phosphodiester déprotégé (34) sous forme de sel de pyridinium : Rdt = 71% ; Rf = 0,52 (isopropanol
NH4OH : H2O 7/1/2)
L'échange en sel de tétrabutylammonium, selon l'étape f), conduit à 67 mg de produit (35) CT 7387
Rdt = 87%; Rf = inchangé ; masse FAB- = 531 (m-1) ;
HPLC : temps de rétention = 10,574 (0/25).
NH4OH : H2O 7/1/2)
L'échange en sel de tétrabutylammonium, selon l'étape f), conduit à 67 mg de produit (35) CT 7387
Rdt = 87%; Rf = inchangé ; masse FAB- = 531 (m-1) ;
HPLC : temps de rétention = 10,574 (0/25).
Le phosphotriester (35) est obtenu par traitement de 55 mg (0,067 mmole) du diester (34) dans l'acétonitrile par 0,38 ml (0,067 x 18 mmoles) de iodo-1 hexadécane (8), de façon usuelle : m = 35,3 mg
CT 7388 ; Rdt = 69,5% ; Rf = 0,66 (isopropanol : NH4OH : H20 7/1/2) ; Rf = 0,77 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1)
masse FAB+ = 779,8 (m+ Na+) ; HPLC 2 pics temps de rétention = 10,414 mn, -10,834 mn (50/95) ; RMN (DMSO- d6) : chaîne CH3 (0,89), (CH2)n (1,25), CH2-CH2-OP 1,60,
CH2-CH2-OP (3,95) ; mannose α H1 (4,67), H2 (3,64)
H3 (3,46), H4 (3,32), H6, H6,6'(3,45) ; nucléotide H6 (7,90 et 7,88 45/55), Hi' (6,17), H2',2"(2,15),
H3'(4,24), H4'(3,94), H5'5"(4,00) ; CH2-CH2-OP(3,61 et 3,77), CH,-CH2-OP (4,11).
CT 7388 ; Rdt = 69,5% ; Rf = 0,66 (isopropanol : NH4OH : H20 7/1/2) ; Rf = 0,77 (CH2Cl2 : CH3OH : H2O 13/5/1)
masse FAB+ = 779,8 (m+ Na+) ; HPLC 2 pics temps de rétention = 10,414 mn, -10,834 mn (50/95) ; RMN (DMSO- d6) : chaîne CH3 (0,89), (CH2)n (1,25), CH2-CH2-OP 1,60,
CH2-CH2-OP (3,95) ; mannose α H1 (4,67), H2 (3,64)
H3 (3,46), H4 (3,32), H6, H6,6'(3,45) ; nucléotide H6 (7,90 et 7,88 45/55), Hi' (6,17), H2',2"(2,15),
H3'(4,24), H4'(3,94), H5'5"(4,00) ; CH2-CH2-OP(3,61 et 3,77), CH,-CH2-OP (4,11).
EXEMPLE 7
ETUDE DE L'EFFET ANTI-HIV DE DERIVES DE L'INVENTION
Les résultats rapportés ci-dessous concernent des tests permettant de suivre - l'inhibition de l'effet cytopathogène (ECP) du virus
HIV vis-å-vis d'une lignée continue de lymphocytes T4, par dosage colorimétrique au MTT, technique développée dans le laboratoire d'Oncologie virale (O.Schwartz et al, 1988, AIDS Research and Human Retrovirus, vol 4, n06, p.441); - l'inhibition de la réplication virale, par microdosage de l'activité de l'enzyme virale transcriptase inverse.
ETUDE DE L'EFFET ANTI-HIV DE DERIVES DE L'INVENTION
Les résultats rapportés ci-dessous concernent des tests permettant de suivre - l'inhibition de l'effet cytopathogène (ECP) du virus
HIV vis-å-vis d'une lignée continue de lymphocytes T4, par dosage colorimétrique au MTT, technique développée dans le laboratoire d'Oncologie virale (O.Schwartz et al, 1988, AIDS Research and Human Retrovirus, vol 4, n06, p.441); - l'inhibition de la réplication virale, par microdosage de l'activité de l'enzyme virale transcriptase inverse.
MATERIELS
Cellules
La lignée CEM-C113 (un clone particulièrement sensible à l'ECP du virus) a été employée.
Cellules
La lignée CEM-C113 (un clone particulièrement sensible à l'ECP du virus) a été employée.
Virus
Isolat LAVI-BRU déposé à la Collection des
Cultures Nationales de Microorganismes (CNCM) de l'Institut Pasteur, le 15 juillet 1983 sous le n I-232.
Isolat LAVI-BRU déposé à la Collection des
Cultures Nationales de Microorganismes (CNCM) de l'Institut Pasteur, le 15 juillet 1983 sous le n I-232.
La solution virale utilisée, obtenue à partir d'un surnageant de cellules CEM productrices, a été titrée avant emploi.
Produits testés
Les produits qui se présentent sous forme de poudre sont mis en solution à 5 mM dans de l'eau ou du
DMSO (diméthylsulfoxyde) selon leurs solubilités respectives. Ces- solutions de stockage sont conservées à + 40C. Elles sont ensuite diluées dans du milieu
RPMI, afin d'obtenir les concentrations de test désirées (les concentrations finales testées sont de 25 uM à 0,2 uM > . A titre de comparaison, l'AZT, la didéoxycytidine (ddC) et la didéoxythymidine (ddT) ont également été étudiées dans les mêmes conditions.
Les produits qui se présentent sous forme de poudre sont mis en solution à 5 mM dans de l'eau ou du
DMSO (diméthylsulfoxyde) selon leurs solubilités respectives. Ces- solutions de stockage sont conservées à + 40C. Elles sont ensuite diluées dans du milieu
RPMI, afin d'obtenir les concentrations de test désirées (les concentrations finales testées sont de 25 uM à 0,2 uM > . A titre de comparaison, l'AZT, la didéoxycytidine (ddC) et la didéoxythymidine (ddT) ont également été étudiées dans les mêmes conditions.
. ETUDE DE L'INHIBITION DE L'ECP DU VIRUS HIV VIS-A-VIS
D'UNE LIGNEE CONTINUE DE LYMPHOCYTES T4 PAR DOSAGE
COLORIMETRIQUE AU MTT a) Dosage de 1'ECP du virus et de la cytotoxicité des produits testés
Le test colorimétrique utilise le MTTS3-(4,5- diméthylthiazol-2-yl)-2,5 diphényltétrazolium bromure), un substrat jaune qui entraîne la formation d'un produit de couleur bleu foncé, lorsqu'il est incubé avec des cellules vivantes. L'intensité de la couleur formée est directement proportionnelle à la concentration de cellules vivantes présente dans l'échantillon étudié.
D'UNE LIGNEE CONTINUE DE LYMPHOCYTES T4 PAR DOSAGE
COLORIMETRIQUE AU MTT a) Dosage de 1'ECP du virus et de la cytotoxicité des produits testés
Le test colorimétrique utilise le MTTS3-(4,5- diméthylthiazol-2-yl)-2,5 diphényltétrazolium bromure), un substrat jaune qui entraîne la formation d'un produit de couleur bleu foncé, lorsqu'il est incubé avec des cellules vivantes. L'intensité de la couleur formée est directement proportionnelle à la concentration de cellules vivantes présente dans l'échantillon étudié.
Le protocole employé décrit dans AIDS Research and Human Retrovirus par O. Schwartz et al (référence ci-dessus) (1) est résumé brièvement ici - 100 ul de cellules CEM-CL13 t3.104/ml) ont été répartis en microplaques - 50 ul des différentes dilutions de produits à tester sont ajoutés.
Pour chaque concentration, 6 puits sont préparés . 3, pour l'étude de la cytotoxicité des produits 3, pour l'étude des propriétés inhibitrices de la production virale.
Après une incubation de 2 h à 370C en étuve à 5% de CO2, sont ajoutés soit 100 l de milieu de culture (étude de la cytotoxicité) soit 100 l de solution virale, à une multiplicité d'infection de 0,008 (étude de l'effet antiviral).
Après 7 jours de culture, 50 l de surnageant sont prélevés pour le dosage de l'activité transcriptase inverse (ATI). Les cellules sont ensuite remises en suspension par agitation. 100 pl de suspension cellulaire sont prélevés afin de pratiquer le test MTT. Sur les cellules restantes sont rajoutés 150 ul de milieu frais contenant les drogues aux concentrations désirées. Les cellules sont ainsi passées tous les 3 à 4 jours. A chaque passage l'activité transcriptase inverse et l'ECP sont dosés.
Ab Test MTT
Le MTT est dissous dans du PBS à 5 g/ml et filtré. Dix pl de cette solution stock est ajoutée aux micropuits contenant 100 ul d'échantillon de cellules à tester.
Le MTT est dissous dans du PBS à 5 g/ml et filtré. Dix pl de cette solution stock est ajoutée aux micropuits contenant 100 ul d'échantillon de cellules à tester.
Les plaques sont incubées à 370C pendant 4 heures. Les surnageants sont ensuite délicatement enlevés et 150 ul de solution HCl 0,04 N en isopropanol est ajouté pour dissoudre les -cristaux bleus formés.
Les plaques sont ensuite lues dans un lecteur de microplaque (Biotek) à une longueur d'onde de 540 nm.
Etude de la cytotoxi ci té des Produits testés - Les cellules traitées par les drogues, mais non infectées par du HIV sont utilisées pour déterminer la toxicité des drogues.
- Les cellules contrôle (sans virus et sans drogue) définissent l'absorbance de 100% lors du test
MTT.
MTT.
- La dose cytotoxique 50 (CD50) est définie comme étant celle entraînant une diminution d'absorbance de 50% par rapport aux témoins.
Etude de la protection des produits testés
L'activité anti-HIV est déterminée en utilisant la formule suivante
D.O. (drogue + HIV) - D.O. (HIV) Protection = ------------------ x 100%
D.O. (drogue) - D.O. (HIV)
où D.O. (drogue + HIV) représente l'absorbance à 540 nm des cellules traitées par les drogues et infectées par le virus.
L'activité anti-HIV est déterminée en utilisant la formule suivante
D.O. (drogue + HIV) - D.O. (HIV) Protection = ------------------ x 100%
D.O. (drogue) - D.O. (HIV)
où D.O. (drogue + HIV) représente l'absorbance à 540 nm des cellules traitées par les drogues et infectées par le virus.
D.O.(HIV) représente l'absorbance à 540 nm des cellules infectées par le virus et non traitées par les drogues.
D.O. (drogue) représente l'absorbance à 540 nm des cellules traitées par les drogues et non infectées.
La dose protectrice ' 50 (ED50) est celle entraînant une protection de 50% de l'ECP.
Détermination de 1 'index de sélectivité
Un produit sera d'autant plus intéressant si l'écart entre la CD50 et la ED50 est élevé. Cet écart est quantifié par l'index de sélectivité (rapport CD50/ED50).
Un produit sera d'autant plus intéressant si l'écart entre la CD50 et la ED50 est élevé. Cet écart est quantifié par l'index de sélectivité (rapport CD50/ED50).
On rapporte dans les tableaux la et lb ci-après les résultats obtenus après 7 à 22 jours de culture, concernant, respectivement, l'effet protecteur et les indices de protection (CD 50/ED 50)
- de dérivés mannosylés de l'AZT selon l'invention (phosphodiesters 7624 et 7626, phosphotriesters 7625 et 7627). - de 1'AZT, de la ddC et de la ddT.
- de dérivés mannosylés de l'AZT selon l'invention (phosphodiesters 7624 et 7626, phosphotriesters 7625 et 7627). - de 1'AZT, de la ddC et de la ddT.
TABLEAU Ia
<tb> <SEP> JOURS <SEP> DE <SEP> CULTURE <SEP> :
<tb> <SEP> J7 <SEP> J11 <SEP> J18 <SEP> J22
<tb> <SEP> CD50 <SEP> ED50 <SEP> CD50 <SEP> ED50 <SEP> CD50 <SEP> ED50 <SEP> CD50 <SEP> ED50
<tb> <SEP> PROOUIT <SEP> :
<tb> <SEP> 7624 <SEP> 25 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> 0.@
<tb> <SEP> 7625 <SEP> 20 <SEP> < 0,2 <SEP> 28 <SEP> 1 <SEP> 2.4 <SEP> > 1 <SEP> 3.4 <SEP> > 1
<tb> <SEP> 7626 <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> 0.2 <SEP> 24 <SEP> 0.2 <SEP> 24 <SEP> 0.6
<tb> 7627 <SEP> 26 <SEP> < 0,2 <SEP> 26 <SEP> 0.3 <SEP> 2.5 <SEP> 0.5 <SEP> 2.5 <SEP> 0.4
<tb> <SEP> AZT <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> 23 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> 22 <SEP> 0.45
<tb> <SEP> ddC <SEP> 27 <SEP> < 0,2 <SEP> 0.4 <SEP> - <SEP> < 0,2 <SEP> - <SEP> < 02 <SEP>
<tb> <SEP> ddT <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> < 25 <SEP> 0.7 <SEP> > 25 <SEP> 0,8 <SEP> > 25 <SEP> > 25
<tb> <SEP> CDSo-Dose <SEP> Cytotoxique <SEP> 50 <SEP> % <SEP> (en <SEP> uM)
<tb> <SEP> ED <SEP> 50-Dose <SEP> Ptolectr@ce <SEP> 50 <SEP> <SEP> x <SEP> (en <SEP> uM)
<tb> - <SEP> : <SEP> pas <SEP> deffel <SEP> prolecteur <SEP> delec@@
<tb>
TABLEAU Ib
INDICES DE PROTECTION (I.P.)
J7 Jll J19 J22
PRODUIT 7624 > 125 > 125 > 125 > 42 7625 > 100 28 < 3,4 < 3,4 7626 > 125 > 125 > 120 > 40 7627 > 13 9 5 6
AZT > 125 > 125 > 125 49 ddC > 35 0 0 0
On constate que l'AZT présente un index de sélectivité supérieur à 50 après 22 jours de culture.
<tb> <SEP> J7 <SEP> J11 <SEP> J18 <SEP> J22
<tb> <SEP> CD50 <SEP> ED50 <SEP> CD50 <SEP> ED50 <SEP> CD50 <SEP> ED50 <SEP> CD50 <SEP> ED50
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<tb> <SEP> 7624 <SEP> 25 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> < 0,2 <SEP> > 25 <SEP> 0.@
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<tb> <SEP> ddC <SEP> 27 <SEP> < 0,2 <SEP> 0.4 <SEP> - <SEP> < 0,2 <SEP> - <SEP> < 02 <SEP>
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<tb> <SEP> CDSo-Dose <SEP> Cytotoxique <SEP> 50 <SEP> % <SEP> (en <SEP> uM)
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<tb>
TABLEAU Ib
INDICES DE PROTECTION (I.P.)
J7 Jll J19 J22
PRODUIT 7624 > 125 > 125 > 125 > 42 7625 > 100 28 < 3,4 < 3,4 7626 > 125 > 125 > 120 > 40 7627 > 13 9 5 6
AZT > 125 > 125 > 125 49 ddC > 35 0 0 0
On constate que l'AZT présente un index de sélectivité supérieur à 50 après 22 jours de culture.
D'une manière avantageuse, les produits 7624, 7626, présentent des index de sélectivité comparables à 1'AZT.
ETUDE DE L 'INHIBITION DE LA REPDICATION VIRALE PAR
MICRODOSAGE DE L'ACTIVISTE DE L'ENZYME VIRALE
TRANSCRIPTASE INVERSE
L'activité transcriptase inverse est déterminée directement à partir de 50 pl de surnageant de culture selon la méthode suivante : les activités enzymatiques sont mesurées après addition de 10 pl d'un mélange réactionnel contenant 0,1% Triton X100, 0,1 M KCl, 10 mM DTT auquel est ajouté 40 pl d'un mélange réactionnel contenant 5mM EGTA dans 0,5 M de tampon Tris-HCl, 0,5 M
MgCl2, 1 uCi HTTP, 0,5 g/l poly (rA) oligo (dT). Après une heure d'incubation à 370C, la réaction est arrêtée par addition d'une solution de Na4P2O7 O7 à 120 mM dans du
TCA 60% puis laissée à 40C pendant 15 minutes.Le matériel précipité est récupéré par un système de filtration Skatron après plusieurs lavages par du Na4P2Oz à 12 mM en 5% TCA. Les filtres sont séchés et la radioactivité est mesurée à l'aide d'un compteur à scintillation ss (Packard).
MICRODOSAGE DE L'ACTIVISTE DE L'ENZYME VIRALE
TRANSCRIPTASE INVERSE
L'activité transcriptase inverse est déterminée directement à partir de 50 pl de surnageant de culture selon la méthode suivante : les activités enzymatiques sont mesurées après addition de 10 pl d'un mélange réactionnel contenant 0,1% Triton X100, 0,1 M KCl, 10 mM DTT auquel est ajouté 40 pl d'un mélange réactionnel contenant 5mM EGTA dans 0,5 M de tampon Tris-HCl, 0,5 M
MgCl2, 1 uCi HTTP, 0,5 g/l poly (rA) oligo (dT). Après une heure d'incubation à 370C, la réaction est arrêtée par addition d'une solution de Na4P2O7 O7 à 120 mM dans du
TCA 60% puis laissée à 40C pendant 15 minutes.Le matériel précipité est récupéré par un système de filtration Skatron après plusieurs lavages par du Na4P2Oz à 12 mM en 5% TCA. Les filtres sont séchés et la radioactivité est mesurée à l'aide d'un compteur à scintillation ss (Packard).
Le tableau 2 ci-dessous représente le dosage de l'activité transcriptase inverse dans les surnageants de cultures après 7 à 26 jours.
TABLEAU II
<tb> <SEP> EFFEY <SEP> ANTI <SEP> HV <SEP> Cellufes <SEP> CEM
<tb> <SEP> JOURS <SEP> de <SEP> CULTURE <SEP> :
<tb> <SEP> PRODUITS <SEP> J7 <SEP> J11 <SEP> J15 <SEP> J18 <SEP> J22 <SEP> J26
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<tb> <SEP> 5uM <SEP> 1670 <SEP> 1000 <SEP> 852 <SEP> 2700 <SEP> 5500 <SEP> 42000
<tb> <SEP> 1uM <SEP> 2@00 <SEP> <SEP> 1900 <SEP> 2200 <SEP> 12000 <SEP> 26000 <SEP> 55000
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<tb> <SEP> 5uM
<tb> <SEP> 1uM <SEP> 6000 <SEP> 6000 <SEP> 5500 <SEP> 47000 <SEP> 48000 <SEP> 64000
<tb> <SEP> 0,2uM <SEP> 3900 <SEP> 2900 <SEP> 2400 <SEP> 25000 <SEP> 52000 <SEP> 61000
<tb> <SEP> 7626 <SEP> 25uM <SEP> 1100 <SEP> 700 <SEP> 900 <SEP> 2200 <SEP> 900 <SEP> 900
<tb> <SEP> 5uM <SEP> 1500 <SEP> 1000 <SEP> 1300 <SEP> 8000 <SEP> 12000 <SEP> 103000
<tb> <SEP> 1uM <SEP> 2700 <SEP> 1300 <SEP> 1200 <SEP> 5000 <SEP> 15000 <SEP> 50000
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<tb> <SEP> 5 <SEP> uM
<tb> <SEP> 1 <SEP> uM <SEP> 2000 <SEP> 1100 <SEP> 500 <SEP> 1400 <SEP> 3900 <SEP> 20000
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<tb> <SEP> AZT <SEP> 25uM <SEP> 600 <SEP> 550 <SEP> 400 <SEP> 300 <SEP> 500 <SEP> 900
<tb> <SEP> 5uM <SEP> 500 <SEP> @00 <SEP> 500 <SEP> 700 <SEP> 500 <SEP> 1300
<tb> <SEP> 1uM <SEP> 100 <SEP> 750 <SEP> 600 <SEP> 650 <SEP> 1700 <SEP> 12000
<tb> <SEP> 0,2uM <SEP> 1500 <SEP> 1600 <SEP> 1100 <SEP> 1800 <SEP> 6400 <SEP> 24000
<tb> <SEP> ddT <SEP> 25uM <SEP> 2500 <SEP> 1000 <SEP> 800 <SEP> 7000 <SEP> 4000 <SEP> 5000
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<tb> <SEP> Témoln <SEP> mon <SEP> tralté <SEP> 21000 <SEP> 57000 <SEP> 18000 <SEP> 13000 <SEP> 5000 <SEP> 15000
<tb> <SEP> Témoln <SEP> tellules
<tb> non <SEP> Inteclées <SEP> 600 <SEP> 800 <SEP> 500 <SEP> 1300 <SEP> 600 <SEP> 700
<tb>
<tb> <SEP> JOURS <SEP> de <SEP> CULTURE <SEP> :
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<tb>
Claims (11)
1. Dérivés glycosyl phospholipidiques de nucléosides, caractérisés en ce qu'il s'agit de dérivés glycosylés répondant à la formule I
dans laquelle - R3 représente un groupe (ose)x
dans lequel - "ose" représente un motif sucre en C5 ou en C6, D ou L. à å l'exception du glucose lorsque x est égal à 1, la chaîne de substitution phosphorylée étant fixée en position 1 ou en position 6 du motif ose auquel elle est rattachée, - x est un nombre de 1 à 12 - y est un nombre de 1 à 4 - z est égal à 0 ou 1, et - A représente un atome d'hydrogène ou un groupe alc.
représentant un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, de 5 à 30 atomes de carbone, le cas échéant substitué, - Rt représente un groupe Na, un atome d'hydrogène, un groupe alcoyle de 1 à 4 atomes de carbone, un atome d'halogène, un groupe nitrile ou un groupe hydroxyle, et - R2 représente un groupe alcoyle de 1 à 4 atomes de carbone, un atome d'halogène ou un groupe nitrile.
2. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés en ce le motif ose est choisi parmi le mannose, la galactose, le fructose le fucose, les aminohexoses, le désoxy-2 glucose pour les sucres en Co, et parmi l'arabinose, le xylose, le ribose et le désoxy-2 ribose pour les sucres en Ca.
3. Dérivés selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce qui x est égal à 1.
4. Dérivés selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce qu'il s'agit de phosphotriesters de formule Il
dans laquelle alc. Ri et R2 sont tels que définis dans la revendication 1.
5. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'il s'agit de phosphotriesters de formule III :
dans laquelle Rl, R2 , y et alc. sont tels que définis dans la revendication 1.
6. Dérivés selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisés en ce que le groupe alc. représente une chaîne alcoyle ou alcoxy renfermant de 5 à 20 atomes de carbone, le cas échéant substitué à l'extrémité par un groupe -NH2, NHR' ou -N(R',R") dans lequel R' et R" identiques ou différents, représentent un groupe alcoyle de 1 à 4 atomes de carbone.
7. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'il s'agit de phosphodiesters répondant à la formule V
dans laquelle - R1 et R2 sont tels que définis dans la revendication 1, - R4 représente un groupe (ose)x
dans lequel le terme "ose", x, Y et z sont tels que définis en rapport avec la formule I.
8. Dérivés selon la revendication 7, caractérisés en ce qu'il s'agit de phosphodiesters répondant à la formule VI
dans laquelle Rl, R2 et y sont tels que définis dans la revendication 1.
9. Dérivés selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisés en ce qu'il s'agit de dérivés de 3'-azido thymidine (AZT), de didésoxy 2',3' thymidine (ddT) ou de désoxy 2' fluoro 5 uridine (dUF).
10. Procédé de préparation de dérivés de formule I selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de - condensation d'un dérivé osidique de formule VII (ose)x
dans laquelle - la chaine de substitution phosphorylée occupe la position 1 ou la position 6 du motif ose sur lequel elle est fixée, les autres radicaux hydroxyle du ou des motifs ose étant bloqués par des groupes protecteurs de radicaux hydroxyle, ces groupes étant identiques ou différents - K, y et z sont tels que définis ci-dessus, - avec un dérivé de nucléoside de formule VIII::
Rt et R2 étant tels que définis ci-dessus, ce qui conduit à un phosphodiester dans lequel le ou les motifs ose sont protégés, de formule IX
- élimination des groupements protecteurs du ou des motifs ose des phosphodiesters pour libérer les groupes -OH, suivie, lorsqu'on souhaite préparer un phosphotriester, d'une réaction du phosphodiester avec un dérivé réactif de formule X : B-alc. dans laquelle B représente un groupe capable de réagir avec le groupe -OH fixé sur le phosphore en fixant le radical alc. sur l'élément P et en formant un composé BH qui sera éliminé, le phosphotriester formé répondant à la formule I ci-dessus dans laquelle A représente le groupe alc.
11. Compositions pharmaceutiques, caractérisées ce qu'elles renferment une quantité efficace d'au moins un dérivé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
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| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 110, 1989, résumé no. 53299a, Columbus, Ohio, US; T.N. DRUZHININA et al.: "The incorporation of modified hexosyl residues into the Salmonella serogroups E, B, C2 and C3 O-specific polysaccharides using synthetic nucleotide sugars", & BIOORG. KHIM. 1988, 14(9), 1242-9 * |
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| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 86, 1977, page 547, résumé no. 106952c, Columbus, Ohio, US; V.N. SHIBAEV et al.: "Synthesis of thymidine-5'-(beta-L-mannopyranosyl) and (4,6-dideoxy-L-lyxohexopyranosyl) pyrophosphates", & IZV. AKAD. NAUK SSSR, SER. KHIM. 1976, (11), 2588-91 * |
| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 90, 1979, page 315, résumé no. 182936y, Columbus, Ohio, US; J.H. PAZUR: "Biosynthesis of thymidine diphosphate galactose and immunogenic glycans in Streptococcus faecalis", & J. CARBOHYDR. NUCLEOSIDES, NUCLEOTIDES 1978 (Pub. 1979), 5(5), 443-56 * |
| TETRAHEDRON LETTERS, vol. 28, no. 31, 1987, pages 3581-3584, Pergamon Journals, Ltd, Oxford, GB; F. IGLESIAS GUERRA et al.: "Synthetic 6-glucosyl phospholipid as a drug transport system" * |
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