FR2623090A1 - Compositions pharmaceutiques contenant une calcitonine - Google Patents

Abstract

L'invention concerne des compositions comprenant une calcitonine, une quantité efficace d'un promoteur d'absorption, qui est un glycyrrhizinate, et un véhicule convenant en pharmacie; les compositions de l'invention améliorent l'absorption d'une calcitonine à travers une muqueuse.

Description

COMPOSITIONS PHARNACEUTIQUES CONTENANT UNE CALCITONINE
La présente invention concerne de nouvelles compositions pharmaceutiques contenant une calcitonine. L'invention concerne également un nouveau procédé pour accroitre l'absorption d'une calcitonine à travers une muqueuse.

Les calcitonines constituent une catégorie de peptides à activité pharmacologique d'origines naturelle et synthétique contenant environ 32 amino-acides et capables d'assurer la régulation des taux sériques du calcium.

Diverses calcitonines, y compris par exemple les calcitonines naturelles humaine, de saumon et d'anguille, ainsi que l'analogue synthétique de la calcitonine d'anguille qu'est l'elcatonine, sont actuellement commercialisées et couramment utilisées, par exemple dans le traitement de la maladie de Paget, la maladie de Sudeck et l'ostéoporose.

Un problème considérable et bien connu de l'administration des peptides est qu'ils sont sensibles à une dégradation rapide induite par les acides et les enzymes lorsqu'on les administre par voie orale. Pour cette raison, l'administration parentérale a été à ce jour le-mode d'administration le plus couramment utilisé et, dans le cas des peptides de poids moléculaire élevé, tels que les calcitonines, a été le seul mode notablement efficace d'aministration.

Il est bien connu que l'administration par injection peut être malaisée et désagréable pour le malade, en particulier lorsque l'administration doit être répétée à des intervalles réguliers pendant des périodes prolongées, par exemple dans le traitement de l'ostéoporose postménopausique avec des caleì.onines. On s'est donc de plus en plus intéressé à l'administration des peptides selon d'autres voies non invasives plus acceptables, par exemple sous forme de comprimés sublingaux, de suppositoires, de poudres intrapulmonaires, de gouttes intranasales, de pulvérisations, de poudres , de gels, de pommades et d'inserts (voir par exemple l'EP 94157 (Takeda), l'EP 173990 (Teijin), 1'US 4 476 116 (Syntex) et le
GB 2 042 888 (Teijin)).

Un problème important que posent de nombreux peptides, en particulier ceux de poids moléculaire élevé, est qu'ils ne sont que mal absorbés à travers les membranes biologiques, par exemple les muqueuses, si bien que la biodisponibilité du peptide est souvent très faible. Des recherches considérables ont donc été effectuées pour trouver des procédés d'amélioration de l'absorption transépithéliale des peptides. Un abord est l'utilisation d'un adjuvant ou d'un promoteur d'absorption, et de nombreuses publications présentent des composés auxquels sont attribuées des propriétés d'amélioration de l'absorption des peptides.

Ainsi, par exemple, des esters de la choline (EP 214898), des acylcarnitines (EP 215697), des aldoses et des glucosamines (demande de brevet japonais n 61 126034), des ascorbates et des salicylates (EP 37943), l' -cyclodextrine (EP 0094157), des esters pyroglutamiques (EP 173990), des agents chélatants (US 4 476 116) et divers autres composés (EP 183527) ont été proposés comme promoteurs de l'absorption.

Récemment on a également proposé (Norimoto et coll., Int. J.

Pharm. 37, 134-136, 1985) qu'une base constituée d'un gel aqueux d'acide polyacrylique puisse améliorer l'absorption d'une calcitonine, l'elcatonine, à travers la muqueuse nasale.

On a également indiqué d'un composant de la réglisse, le glycyrrhétinate de sodium, peut améliorer l'absorption nasale de l'insuline (Mishima et coll., J. Pharmacobio-Dyn, 10, s-69 (1987).

Cependant, les auteurs de la publication ont démontré que le glycyrrhétinate de sodium est, vis-à-vis de l'insuline, un promoteur d'absorption plus faible que le caprate de sodium.

De nombreuses publications indiquent que des agents tensio-actifs peuvent améliorer l'absorption des polypeptides, voir par exemple 1'EP 115627 (Armour), le GB 2 127 689 (Sandoz), l'US 4 548 922 (Careyet coll.) et Hirai et coll., Int. J. Pharm., 9, 165-i84, 1981.

Cependant, un problème connu des promoteurs d'absorption tensio-actifs est qu'ils peuvent provoqueur une irritation et une lésion tissulaire au site d'administration. Dans le cas de l'administration nasale, on a proposé (voir Hirai et coll., supra) que la capacité d'un agent tensio-actif à accroître l'absorption découle au moins en partie de son pouvoir de perturbation ou d'altération de l'intégrité structurale de la muqueuse nasale ; donc, l'irritation et l'activité d'établissement d'une lésion tissulaire de l'agent tensio-actif sont directement liées à sa capacité d'amélioration de l'absorption.

Les problèmes de l'irritation, des lésions tissulaires et, par conséquent, de la mauvaise tolérance par les patients prennent une grande importance lorsque le peptides est administré régulièrement pendant une période prolongée.

L'importance de la poursuite des recherches de procédés pour améliorer l'absorption des peptides prouve que l'on n'a pas encore obtenu de compositions contenant des peptides tels que les calcitonines, pouvant être administrées par une voie autre que la voie parentérale pour assurer des teneurs sanguines appropriées du.

peptide, c'est-à-dire une bonne biodisponibilité, et surtout qui sont bien tolérées par le patient pendant une période prolongée.

La demanderesse a maintenant découvert qu'un dérivé de l'acide glycyrrhétinique de type 3- (acide 2-O-P-D-glycopyrannurono- syl-Û-D-glucapyrannosiduronique, appelé acide glycyrrhizinique, et ses sels ont non seulement d'excellentes propriétés d'amélioration de l'absorption à travers les muqueuses en ce qui concerne la calcitonine, mais de plus ne posent pas les problèmes de toxicité locale précités associés à de nombreux promoteurs de l'absorption lorsqu'on les administre pendant une période prolongée.

Selon un premier aspect, l'invention fournit donc un procédé pour accroitre l'absorption d'une calcitonine à travers une muqueuse, ce procédé comprenant la coadministration avec la calcitonine d'une quantité efficace d'un promoteur d'absorption qui est un glycyrrhizinate.

L'invention fournit également une composition pharmaceutique comprenant une calcitonine, une quantité efficace d'un promoteur d'absorption, qui est un glycyrrhizinate, et un véhicule convenant en pharmacie.

En plus de la tolérance physiologique, les compositions de l'invention possèdent l'avantage que les glycyrrhizinates se sont révélés être des promoteurs plus efficaces de l'absorption nasale que les agents connus, tels que le chlorure de benzalkonium et le taurocholate de sodium.

Le terme glycyrrhizinate, tel qu'on l'utilise ici, désigne à la fois l'acide glycyrrhizinique et ses sels de type carboxylate.

Des sels glycyrrhiziniques particuliers sont le glycyrrhizinate d'ammonium et les sels de métaux alcalins, tels que le glycyrrhizinate de sodium et le glycyrrhizinate de potassium. Un sel préféré est le glycyrrhizinate d'ammonium.

Le terme calcitonine, tel qu'on l'utilise ici, désigne la catégorie de polypeptides à activité pharmacologique comprenant non seulement les calcitonines naturelles, mais également divers de leurs dérivés et analogues dans lesquels un ou plusieurs des restes des amino-acides ou une ou plusieurs des séquences naturellement présents manque(nt), est(sont) remplacé(s), inversé(s) ou modifié(s) d'autre façon ou dont l'extrémité N- ou C-terminale est modifiée.

Le terme général calcitonine, tel qu'on l'utilise ci-après, comprend toutes ces calcitonines, qu'elles soient naturelles ou synthétiques.

Des exemples des calcitonines naturelles comprennent la calcitonine humaine, Chemical Abstract Service Registry Number (CAS RN) = 21215-62-3, qui a la structure

la calcitonine de rat (CAS RN = 11118-25-5 qui a la structure

la calcitonine de saumon (CAS RN = 47931-85-1) qui a la structure

la calcitonine d'anguille (CAS RN = 57014-02-5) qui a la structure

la calcitonine I de poulet réduite (CAS RN = 96157-98-1) qui a la structure
H-Cys-Ala-Ser-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly
-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln
-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly -Thr-Pro-NH2;; la calcitonine Il de poulet (CAS RN = 103468-65-1) qui a la structure

la calcitonine de boeuf (CAS RN = 26112-29-8) qui a la structure

la calcitonine de porc (CAS RN = 12321-44-7) qui a la structure

la calcitonine de mouton (CAS RN = 40988-57-6) qui a la structure

Des exemples des calcitonines dans lesquelles un ou plusieurs amino-acides manquent sont les dés-[Ser2, Tyr22J-Gly8- calcitonines décrites dans 1'US 4 597 900 et la dés-LTyr22J- calcitonine de saumon décrite dans l'US 4 304 692.

Des exemples des calcitonines dans lesquelles la séquence naturelle a été modifiée comprennent les 1,7-dicarbacalcitonines, telles que la 1,7-dicarbacalcitonine d'anguille (elcatonine CAS RN = 60731-46-6) qui a la structure

la 1,7-dicarbacalcitonine de saumon (CAS RN = 60864-37-1) qui a la structure

la 1,7-dicarbacalcitonine humaine (CAS RN = 66811-56-1) qui a la structure

Dans le contexte de la présente invention, une calcitonine particulièrement préférée est l'elcatonine (CAS RN = 60731-46-6). La préparation et les propriétés de l'elcatonine et de 1,7-dicarbacalcitonines apparentées sont décrites dans le brevet britannique 1 516 947 (Toyo Jozo).

une autre calcitonine préférée est la calcitonine naturelle d'anguille (CAS RN = 57014-02-5). La préparation et les propriétés de la calcitonine d'anguille sont décrites dans le brevet US 3 988 309 (Matsuda et coll.).

Les compositions de l'invention peuvent de façon appropriée être administrées selon des procédés connus dans l'art pour l'apport à travers les muqueuses de substances à activité pharmacologique.

Les compositions peuvent être administrées par exemple aux muqueuses nasale, sublinguale, buccale, rectale, vaginale et colique et peuvent être sous forme de gouttes, d'aérosols, de comprimés, de capsules, de poudres, de gels, de pommades, d'inserts, de suppositoires, de pessaires, de timbres et de membranes. Les compositions peuvent également être sous forme de compositions orales solides à délitage entérique comme décrit par exemple dans 1'EP 127535 (Hadassah Medical Organisation).

Des compositions particulières sont celles destinées à l'administration à la muqueuse nasale.

Lorsque la composition est destinée à l'apport à la muqueuse nasale, des formes particulières d'administration sont des aérosols, des gouttes, des gels et des poudres. Typiquement, les compositions en aérosol comprennent une solution ou suspension fine de la substance active dans un solvant aqueux ou non aqueux physiologiquement acceptable et on les présente généralement sous forme de doses unitaires ou multiples stériles dans un récipient bouché hermétiquement. Le récipient bouché hermétiquement peut être sous forme d'une cartouche ou d'une recharge pour un dispositif d'atomisation ou peut être sous forme d'un dispositif d'administration unitaire tel qu'un inhalateur nasal monodose (voir la demande de brevet français FR 2578426) ou d'un distributeur d'aérosol muni d'une valve doseuse et qui est destiné à être jeté lorsque le récipient est vide.Lorsque la forme unitaire d'administration comprend un distributeur d'aérosol, elle contient un propulseur qui peut être un gaz comprimé, tel que l'air comprimé, ou un propulseur organique, tel qu'un fluorochlorohydrocarbure. Ces distributeurs d'aérosol sont bien connus dans l'art. Les formes d'administration en aérosol peuvent également consister en un atomiseur à pompe et ces formes sont également bien connues dans l'art.

Les dispositifs pour distribuer par atomisation ou autrement des aérosols sont typiquement conçus pour délivrer des particules ayant une taille supérieure à 10 micromètres. Pour assurer le maintien de quantités suffisantes de la composition au contact des muqueuses orale ou nasale, sans qu'elles soient inhalées, les particules doivent, de façon appropriée, avoir une taille d'environ 10 à 160 micromètres.

Lorsque la composition est destinée à être administrée sous forme d'une pulvérisation liquide, la viscosité de la composition liquide doit être ajustée à la demande selon des procédés connus pour que la composition puisse être pulvérisée.

Les solvants ou véhicules liquides utilisés dans la présente composition sont de préférence aqueux, mais ils peuvent également être choisis parmi les solvants non aqueux physiologiquement acceptables. Des exemples des solvants ou véhicules non aqueux sont des alcools, en particulier les alcools polyhydroxylés, tels que le propylèneglycol et le glycérol, et les huiles végétales et minérales Ces solvants ou véhicules non aqueux peuvent être ajoutés à diverses concentrations à l'eau pour former des solutions, des émulsions huile dans l'eau et des émulsions eau dans l'huile. De préférence le solvant est l'eau
En plus d'un solvant ou véhicule, les compositions liquides de la présente invention peuvent contenir des excipients, tels que des antioxydants, des stabilisants, des conservateurs, des agents d'ajustement de la viscosité et de la tonicité et des agents tampons.

Lorsqu'on utilise un conservateur, on le choisit pour qu'en les quantités nécessaires à la conservation de la composition, il ne provoque pas d'irritation de la muqueuse nasale. Cela est particulièrement important lorsque la composition est destinée à être administrée -à long terme, par exemple lorsqu'on l'utilise dans le traitement de l'ostéoporose postménopausique. Les conservateurs appropriés sont les p-hydroxybenzoates d'alcoyle (parabens), tels que le p-hydroxybenzoatede méthyle et le p-hydroxybenzoate de propyle. De préférence le conservateur ne comprend pas de chlorure de benzalkonium.

Les formes d'administration particulières pour l'administration buccale et sublinguale sont les gels, les suspensions, les comprimés, les timbres, les poudres, les pommades et les solutions. Des formes particulières d'administration vaginale et rectale comprennent les pessaires, les suppositoires, les solutions, les mousses, les suspensions, les gels, les pommades et les comprimés.

Les compositions précitées peuvent être préparées selon des modes opératoires pharmaceutiques bien connus et on peut par exemple consulter Remington's Pharmaceutical Sciences, 17ème édition, Snack
Publishing Company, 1985.

Lorsque la composition est à délitage entérique et est destinée à l'administration orale, elle peut typiquement être sous forme d'un comprimé ou d'une capsule enrobés d'un agent d'enrobage permettant le passage de la calcitonine dans l'estomac et l'intestin grêle puis sa libération dans le colon. Des agents d'enrobage appropriés comprennent des polymères anioniques, tels que les copolymères d'acide acrylique/ester d'acide méthacrylique (par exemple l'Eudragit S).

Les compositions peuvent également contenir un inhibiteur des protéases, de préférence un inhibiteur des protéases non tensio-actif, par exemple comme décrit dans 1'EP 127535.

Les compositions de la présente invention peuvent etre utilisées dans le traitement de maladies telles que la maladie de
Paget (ostéite déformante), l'ostéoporose, la maladie de Sudeck et divers états hypercalcémiques (voir par exemple le Physician Desk
Reference, 42ème édition, 1988, pages 1796 et 1797).

Les compositions sont administrées au patient à des doses contenant une quantité de calcitonine efficace pour traiter la maladie en question.

La quantité de substance à activité pharmacologique dans une dose unitaire des compositions de l'invention varie selon l'activité de la calcitonine et la nature de la composition. Cependant, en général, une dose unitaire d'une composition destinée à l'utilisation humaine contient typiquement entre 5 et 200 unités internationales (UI) d'une calcitonine. Pour I'elcatonine, une dose unitaire contient de préférence 20 à 100 UI.

Le terme "unité internationale" désigne la préparation internationale de référence (P.R.I.) appropriée des calcitonines humaines, de saumon ou porcine ou l'elcatonine, établie par le
National Institute for Biological Standards and Control, Blanche
Lane, South Mimms, Potters Bar, Hertfordshire, EN6 3QG, Royaume-Uni.

Lorsqu'une composition est une composition liquide, en particulier une pulvérisation, le volume d'une dose unitaire est typiquement dans la gamme de 50 à 130 1.

Le pH des compositions de la présente invention peut varier dans une gamme étendue, selon les propriétés physico-chimiques des différents ingrédients dans les compositions. Cependant, de façon appropriée, le pH de la composition est dans la gamme de pH 3 à 8, en particulier d'environ pH 4,5 à environ pH 6,
On peut utiliser des agents tampons pour maintenir une valeur particulière du pH.

Des exemples des agents tampons sont les citrates, les phosphates ou les acétates et un agent tampon particulier est un mélange d'acide citrique et de citrate de sodium.

La concentration du promoteur d'absorption constitué de glycyrrhizinate est typiquement d'au moins 0,1 % (p/p), de façon appropriée de 0,5 à 10 % (p/p) et de préférence de 0,5 à 5 t (p/p) relativement au poids total de la composition.

Lorsqu'une composition est sous forme d'un liquide ou d'un gel, le glycyrrhizinate est de façon appropriée présent en une quantité correspondant à 0,5 à 5 g/100 ml de composition. De préférence le glycyrrhizinate est présent en une quantité correspondant à environ 2 g/100 ml.

Pour les compositions aqueuses, la forme pharmaceutique finale, c'est-à-dire une solution liquide ou un gel, dépend du pH, de la force ionique de la solution et de la concentration du glycyrrhizinate. En général, les compositions ayant un pH d'environ 5,5 et plus existent sous forme de liquides, tandis que les compositions ayant un pH plus bas tendent à être plus visqueuses et, au voisinage de pH 4,5, existent sous forme d'un gel.

L'invention est illustrée de façon plus détaillée par les exemples suivants.

Exemples 1-9 Tableau 1
Exemple n
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Elcatonine (g) 1 415 1 415 1 415 7 380 7 380 1 415 7 380 1 415 7 380 (activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium 1 2 5 1 5 2 2 0,5 0,5
(g)
Acide citrique (mg) 37 37 37 37 37 37 37 37 37
Citrate de sodium dihydraté 463 463 463 463 463 463 463 463 463
(mg) p-hydroxybenzoate de méthyle 130 130 130 130 130 - - 130 130
(mg) p-hydroxybenzoate de propyle 20 20 20 20 20 - - 20 20
(mg)
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N (qsp pH) 6 6 6 6 6 6 6 4,5* 4,5* * On utilise du NaOH 0,1 N pour ajuster le pH à 4,5
On prépare les compositions des exemples 1 à 9 par mélange ensemble du glycyrrhizinate d'ammonium, de l'acide citrique, du citrate de sodium dihydraté, du p-hydroxybenzoate de méthyle, du p-hydroxybenzoate de propyle, de l'eau distillée et de l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C. On laisse la solution obtenue refroidir à la température ambiante puis on ajoute l'elcatonine.

Les compositions des exemples 8 et 9 sont des gels.

Exemple 10
On pèse exactement 1 415 Fg d'elcatonine (activité 6 500
UI/mg) et on les dissout dans 100 ml d'un véhicule constitué des ingrédients suivants - Glycyrrhizinate d'ammonium, comme promoteur d'absorption, 1 g - Acide acétique, 200 mg et acétate de sodium trihydraté, 200 mg, comme ingrédients tampons - p-hydroxybenzoate de méthyle, 130 mg et p-hydroxybenzoate de propyle, 20 mg, comme agents conservateurs - Eau distillée qsp 100 ml ; - Le pH du véhicule est ajusté à 3,5 par addition d'HCl 1N.

On prépare le véhicule dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C.

On laisse ensuite le gel obtenu refroidir à la température ambiante avant d'ajouter l'ingrédient actif.

Exemple 11
On pèse exactement 1 670 Fg de calcitonine de saumon (activité 5 500 UI/mg) et on les dissout avec 100 ml d'un véhicule constitué des ingrédients suivants - Glycyrrhizinate d'ammonium comme promoteur d'absorption, 2 g - Acide citrique, 37 mg et citrate de sodium dihydraté, 463 mg, comme ingrédients tampons - p-hydroxybenzoate de méthyle, 130 mg et p-hydroxybenzoate de propyle, 20 mg, comme agents conservateurs - Eau distillée qsp 100 ml - Le pH du véhicule est ajusté à 6 par addition de NaOH 1N.

On prépare le véhicule dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60 C.

On laisse ensuite la solution obtenue refroidir à la température ambiante avant d'ajouter l'ingrédient actif.

Exemple 12
On pèse exactement 1 840 Fg de calcitonine d'anguille (activité 5 000 UI/mg) et on dissout avec 100 ml d'un véhicule constitué des ingrédients suivants - Glycyrrhizinate d'ammonium comme promoteur d'absorption, 2 g - Acide citrique, 37 mg et citrate de sodium dihydraté, 463 mg, comme ingrédients tampons ; - p-hydroxybenzoate de méthyle, 130 mg et p-hydroxybenzoate de propyle, 20 mg, comme agents conservateurs - Eau distillée qsp 100 ml - Le pH du véhicule est ajusté à 6 par addition de NaOH iN.

On prépare le véhicule dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C.

On laisse ensuite la solution obtenue refroidir à la température ambiante avant d'ajouter l'ingrédient actif.

Exemples 13 et 14
On prépare les compositions suivantes selon le procédé décrit dans les exemples 1 à 9.

Tableau 2
Exemple n
13 14
Elcatonine (g > 7 380 3 690
(Activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 2 2
Acide citrique (mgt 37 37
Citrate de sodium dihydraté (mg) 463 463
p-hydroxybenzoate de méthyle (mg) 130 130
p-hydroxybenzoate de propyle (mg) 20 20
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Exemple 15
ESSAI A
On compare la préparation indiquée dans l'exemple 2, contenant 2 % de glycyrrhizinate d'ammonium comme promoteur d'absorption, dans un essai de l'activité pharmacodynamique, c'est-à-dire d'abaissement de la concentration calcique du sérum, avec les préparations suivantes une composition contenant la même concentration d'elcatonine et les mêmes excipients, à l'exception du glycyrrhizinate d'ammonium (préparation de référence A) ; une composition contenant la même concentration d'elcatonine, 0,01 % de chlorure de benzalkonium et des citrates comme excipients (préparation de référence B) ; une composition contenant la même concentration d'elcatonine, 1 % de taurocholate de sodium, 0,15 % de parabens et des citrates (préparation de référence C).

On administre les préparations par voie intranasale avec un petit cathéter, en un volume de 10 Fl à des groupes de 10 rats mâles
Sprague Dawley pesant 160 + 10 g. On anesthésie les animaux après une nuit de jeûne avec du tribromoéthanol (TBE) à 2 % (0,9 ml/100 g de poids corporel par voie ip) 15 minutes avant l'administration de l'elcatonine.

On mesure la concentration sérique du calcium (avec un spectrophotomètre d'absorption atomique VARIAN 30/40) sur des échantillons de sang prélevés à chaque animal dans le sinus orbital, 60 et 120 minutes après l'administration du produit.

On détermine les valeurs basales aux mêmes temps chez des animaux à jeun et anesthésiés comme décrit ci-dessus mais non traités.

Les résultats figurent dans le tableau 3
Tableau 3
% de baisse du calcium
sérique par rapport aux
valeurs de base
Dose administrée
UI/kg 1 h 2 h
Préparation de l'invention
- Mentionnée dans 4 18,1 21,3
l'exemple 2
Préparation de référence A 4 12,8 4,5
Préparation de référence B 4 14,1 5,2
Préparation de référence C 4 15,5 15,8
ESSAI B
On compare la préparation indiquée dans l'exemple 1, contenant 1 N de glycyrrhizinate d'ammonium comme promoteur d'absorption, dans un essai de l'activité pharmacodynamique, c'est-à-dire d'abaissement de la concentration du calcium dans le sérum, avec les préparations suivantes une composition contenant la même concentration d'elcatonine et les mêmes excipients, à l'exception du glycyrrhizinate d'ammonium (préparation de référence A), une composition contenant la même concentration d'elcatonine, 0,01 N de chlorure de benzalkonium et des citrates comme excipients (préparation de référence B).

Les technologies d'essai sont les mêmes que celles décrites pour l'essai A.

Les résultats figurent dans le tableau 4.

Tableau 4
% de baisse du calcium
sérique par rapport aux
valeurs de base
Dose administrée
UI/kg 1 h 2 h
Préparation de l'invention
- Mentionnée dans 4 15,6 13,3
l'exemple 1
Préparation de référence A 4 12,0 3,6
Préparation de référence B 4 13,5 2,3
ESSAI C
On compare la préparation indiquée dans l'exemple 3, contenant 5 % de glycyrrhizinate d'ammonium comme promoteur d'absorption, dans un essai de l'activité pharmacodynamique, c'est-à-dire d'abaissement de la concentration du calcium dans le sérum, avec les préparations suivantes une composition contenant la même concentration d'elcatonine et les mêmes excipients à l'exception du glycyrrhizinate d'ammonium (préparation de référence A) ; une composition contenant la même concentration d'elcatonine, 0,01 % de chlorure de benzalkonium et des citrates comme excipients (préparation de référence B) ; une composition contenant la même concentration d'elcatonine, 1 % de taurocholate de sodium, 0,15 % de parabens et des citrates (préparation de référence C).

Les technologies d'essai sont les mêmes que celles décrites pour l'essai A, si ce n'est que les échantillons de sang sont préleves 60, 120 et 240 minutes après le traitement.

Les résultats figurent dans le tableau 5.

Tableau 5
% de baisse du calcium
sérique par rapport aux
valeurs de base
Dose administrée ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~
UI/kg 1 h 2 h 4 h
Préparation de l'invention
- Mentionnée dans 4 18,4 21,9 9,0
l'exemple 3
Préparation de référence A 4 10,4 3,5 -0,5
Préparation de référence B 4 12,1 5,2 0,7
Préparation de référence C 4 14,2 20,4 2,2
Exemple 16
ESSAI D
On compare la préparation indiquée dans l'exemple 13, contenant de l'elcatonine comme ingrédient actif et 2 % de glycyrrhizinate d'ammonium comme promoteur d'absorption, selon un essai de biodisponibilité (c'est-à-dire de cinétique de l'elcatonine dans le sérum) avec les préparations suivantes une composition contenant la meme concentration d'elcatonine et les mêmes excipients, à l'exception du glycyrrhizinate d'ammonium (préparation de référence A) ; une composition contenant la même concentration d'elcatonine, 0,01 * de chlorure de benzalkonium et des citrates comme excipients (préparation de référence B).

On administre les préparations par voie intranasale (avec une pompe doseuse libérant un volume de 100 pl) à deux chiens beagles mâles pesant 10 kg. Chaque animal reçoit une bouffée dans chaque narine, c'est-à-dire au total 80 UI.

On mesure la concentration de l'elcatonine dans le sérum selon une méthode radio-immunologique à partir d'échantillons de sang provenant de chaque animal (prélevés à la veine saphène) à des intervalles de 5 minutes après l'administration du produit (du temps
O à 60 minutes).

Les résultats figurent dans le tableau 6.

Tableau 6
Concentration de pointe et
aires sous la courbe de
l'elcatonine
Concen
Dose admi- tration Temps de ASC
nistrée de pointe pointe min x
UI/kg pg/ml min pg/ml
Préparation de l'invention
- Mentionnée dans 8 515 10 7 587
l'exemple 13
Préparation de référence A 8 95 10 1 270
Préparation de référence B 8 217 20 2 869
Exemples 17, 18 et 19
On prépare les compositions suivantes selon le procédé décrit dans les exemples 1 à 9.

Tableau 7
Exemple n-
17 18 19
Elcatonine ( g) 7 380 3 690 3 690
(activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium 0,5 0,5 (g)
Acide citrique (mg) 37 37 37
Citrate de sodium dihydraté 463 463 463 (mg)
p-hydroxybenzoate de méthyle 130 130 130
(mg)
p-hydroxybenzoate de propyle 20 20 20
(mg)
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Exemples 20 à 25 Tableau 8
Exemple n
20 21 22 23 24 25
Elcatonine (g) 7 380 3 690 7 380 3 690 7 380 3 690 (activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium 0,5 0,5 1 1 2 2
(g)
Acide citrique (mg) 37 37 37 37 37 37
Citrate de sodium dihydraté 463 463 463 463 463 463
(mg) p-hydroxybenzoate de méthyle 130 130 130 130 130 130
(mg) p-hydroxybenzoate de propyle 20 20 20 20 20 20
(mg)
Chlorure de sodium (mg) 600 600 600 600 600 600
Polysorbate 80 (mg) 5 5 5 5 5 5
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 20 à 25, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, l'acide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, le polysorbate 80, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C. On laisse la solution obtenue refroidir à la température ambiante, puis on ajoute l'elcatonine.

Exemples 26 à 31 Tableau 9
Exemple n
26 27 28 29 30 31
Elcatonine (g) 7 380 3 690 7 380 3 690 7 380 3 690 (activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium 0,5 0,5 1 1 2 2
(g)
Acide citrique (mg) 37 37 37 37 37 37
Citrate de sodium dihydraté 463 463 463 463 463 463
(mg) p-hydroxybenzoate de méthyle 130 130 130 130 130 130
(mg) p-hydroxybenzoate de propyle 20 20 20 20 20 20
(mg)
Chlorure de sodium (mg) 600 600 600 600 600 600
Polysorbate 80 (mg) 10 10 10 10 10 10
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 26 à 31, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, l'acide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, le polysorbate 80, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C. On laisse refroidir la solution obtenue à la température ambiante, puis on ajoute l'elcatonine.

Exemples 32 à 37 Tableau 10
Exemple n
32 33 34 35 36 37
Elcatonine (g) 7 380 3 690 7 380 3 690 7 380 3 690 (activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium 0,5 0,5 1 1 2 2
(g)
Acide citrique (mg) 37 37 37 37 37 37
Citrate de sodium dihydraté 463 463 463 463 463 463
(mg) p-hydroxybenzoate de méthyle 130 130 130 130 130 130
(mg) p-hydroxybenzoate de propyle 20 20 20 20 20 20
(mg)
Chlorure de sodium (mg) 600 600 600 600 600 600
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 32 à 37, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, l'acide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C. On laisse refroidir la solution obtenue à la température ambiante, puis on ajoute l'elcatonine.

Exemple 38
ESSAI E
On compare les préparations indiquées dans les exemples 36 et 37, contenant de l'elcatonime comme ingrédient actif (respectivement 40 UI/100 pl et 20 UI/100 l) et 2 % de glycyrrhizinate d'ammonium comme promoteur d'absorption, selon un test de biodisponibilité (c'est-à-dire de cinétique de l'elcatonine dans le sérum) avec les préparations suivantes une composition contenant la même concentration d'elcatonine que dans l'exemple 36 et les mêmes excipients, à l'exception du glycyrrhizinate d'ammonium (préparation de référence A) ; une composition contenant la même concentration d'elcatonine que dans l'exemple 37 et les mêmes excipients, à l'exception du glycyrrhizinate d'ammonium (préparation de référence B) ; une composition contenant 40 UI/ml d'elcatonine dans du tampon acétate Isoosmotique, pH 4,25 (préparation de référence C).

On administre les préparations des exemples 36 et 37 et les préparations de référence A et B par voie intranasale (avec une pompe doseuse libérant un volume de 100 p1) à six volontaires masculins. Chaque volontaire reçoit une bouffée dans chaque narine, soit au total 80 UI pour la préparation de l'exemple 36 et la préparation de référence A, soit 40 UI pour la préparation de l'exemple 37 et la préparation de référence B.

On administre la préparation de référence C par voié intramusculaire sous un volume de 1 ml (40 UI) aux mêmes six sujets selon une structure avec permutation.

On mesure la concentration de l'elcatonine dans le sérum par dosage radio-immunologique d'échantillons de sang prélevés à chaque sujet à des intervalles de 5 minutes après l'administration du produit (du temps 0 à 60 minutes).

Les résultats figurent dans le tableau 11. Tableau 11
Concentration de pointe et
aires sous la courbe de
l'elcatonine
Concen- ASC
Dose admi- tration Temps de (Erreur type de
nistrée de pointe pointe la moyenne)
UI/kg pg/ml min min x pg/ml
Composition de 80 186,3 15,2 3 551,2 (# 160,1)
l'exemple 36
Composition de 40 92,5 15,1 2 301,9 (# 170,7)
l'exemple 37
Préparation de référence A 80 57,6 15,6 1 270,2 (+ 135,6)
Préparation de référence B 40 27,9 15,1 551,0 (+ 85,4)
Préparation de référence C 40 233,3 20,6 3 675,2 (# 190,6
Exemple 39 et 40
Tableau 12
Exemple n'
39 40
Calcitonine de saumon (g) 9 090 18 180
(Activité 5 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 2 2
Acide citrique (mg) 37 37
Citrate de sodium dihydraté (mg) 463 463
p-hydroxybenzoate de méthyle (mg) 130 130
p-hydroxybenzoate de propyle (mg) 20 20
Chlorure de sodium (mg) 600 600
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 39 et 40, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, placide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C. On laisse refroidir la solution obtenue à la température ambiante, puis on ajoute la calcitonine de saumon.

Exemples 41 et 42
Tableau 13
Exemple n
41 42
Calcitonine d'anguille (g) 10 000 20 000
(Activité 5 000 VI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 2 2
Acide citrique (mg) 37 37
Citrate de sodium dihydraté (mg) 463 463
p-hydroxybenzoate de méthyle (mg) 130 130
p-hydroxybenzoate de propyle (mg) 20 20
Chlorure de sodium (mg) 600 600
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 41 et 42, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, l'acide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60-C. On laisse refroidir la solution obtenue à la température ambiante, puis on ajoute la calcitonine d'anguille.

Exemples 43 et 44
Tableau 14
Exemple n
43 44
Calcitonine II de poulet (g) 10 000 20 000
(Activité 5 000 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 2 2
Acide citrique (mg) 37 37
Citrate de sodium dihydraté (mg) 463 463
p-hydroxybenzoate de méthyle (mg) 130 130
p-hydroxybenzoate de propyle (mg) 20 20
Chlorure de sodium (mg) 600 600
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 43 et 44, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, l'acide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60-C. On laisse refroidir la solution obtenue à la température ambiante, puis on ajoute la calcitonine II de poulet.

Exemples 45 et 46
Tableau 15
Exemple n
45 46
Calcitonine humaine (mg) 250 500
(Activité 200 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 2 2
Acide citrique (mg) 37 37
Citrate de sodium dihydraté (mg) 463 463
p-hydroxybenzoate de méthyle (mg) 130 130
p-hydroxybenzoate de propyle (mg) 20 20
Chlorure de sodium (mg) 600 600
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 45 et 46-, on mélange ensemble le glycyrrhizinate dfammonium, l'acide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C. On laisse refroidir la solution obtenue à la température ambiante, puis on ajoute la calcitonine humaine.

Exemples 47 et 48
Tableau 16
Exemple n'
47 48
Calcitonine porcine (mg) 834 1 668
(Activité 60 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 2 2
Acide citrique (mg) 37 37
Citrate de sodium dihydraté (mg) 463 463
p-hydroxybenzoate de méthyle (mg) 130 130
p-hydroxybenzoate de propyle (mg) 20 20
Chlorure sodium (mg) 600 600
Eau distillée qsp 100 ml
NaOH 1N qsp pH 6
Pour préparer les compositions des exemples 47 et 48, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, l'acide citrique, le citrate de sodium dihydraté, le p-hydroxybenzoate de méthyle, le p-hydroxybenzoate de propyle, le chlorure de sodium, l'eau distillée et l'hydroxyde de sodium dans un bain-marie ajusté à une température d'environ 60'C. On laisse refroidir la solution obtenue à la température ambiante, puis on ajoute la calcitonine de porc.

Poudre pour l'administration nasale
Exemples 49 et 50
Tableau 17
Exemple n
49 50
Elcatonine (mg) 3,69 7,38
(Activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 2,0 2,0
Lactose qsp (g) 25,0 25,0
Pour préparer les compositions des exemples 49 et 50, on humidifie le lactose avec une solution aqueuse d'elcatonine et on sèche sous vide. On mélange la poudre séchée avec du glycyrrhizinate d'ammonium et on place le mélange final dans des capsules de gélatine dure (25 mg par capsule).

On administre la poudre, après avoir percé les capsules, en utilisant un insufflateur nasal.

Comprimés sublinguaux
Exemples 51 et 52
Tableau 18
Exemple n
51 52
Elcatonine (mg) 7,7 15,4
(Activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 4,0 4,0
Saccharose (g) 35,0 35,0
Mannitol (g) 35,0 35,0
Polyéthylèneglycol 6000 (g) 10,0 10,0
Lactose qsp (g) 120,0 120,0
Pour préparer les compositions des exemples 51 et 52, on mélange ensemble le saccharose, le mamnitol et le lactose. On humidifie le mélange obtenu avec une solution aqueuse d'elcatonine, on granule à travers un tamis d'acier inoxydable et on sèche sous vide. On mélange les granules séchés avec le polyéthylèneglycol et le glycyrrhizinate d'ammonium, puis on presse en comprimés de 120 mg chacun.

Comprimés buccaux
Exemples 53 et 54
Tableau 19
Exemple n
53 54
Elcatonine (mg) 7,7 15,4
(Activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 4,0 4,0
Saccharose (g) 30,0 30,0
Mannitol (g) 35,0 35,0
Polyéthylèneglycol 6000 (g) 15,0 15,0
Carbopol 934 (g) 15,0 15,0
Lactose qsp (g) 150,0 150,0
Pour préparer les compositions des exemples 53 et 54, on mélange ensemble le saccharose, le mannitol et le lactose. On humidifie le mélange obtenu avec une solution aqueuse d'elcatonine, on granule à travers un tamis d'acier inoxydable et on sèche sous vide. On mélange les granules séchés avec le glycyrrhizinate d'ammonium, le carbopol et le polyéthylêneglycol puis on presse en comprimés de 150 mg chacun.

Comprimés oraux pour l'administration colique
Exemples 55 et 56
Tableau 20
Exemple n
55 56
Elcatonine (mg) 15,4 30,8
(Activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 6,0 6,0
Amidon prégélatinisé 80,0 80,0
Stéarate de magnésium (g) 2,0 2,0
Lactose qsp (g) 210,0 210,0
Eudragit S (g) 20,0 20,0
Polyéthylèneglycol 6000 (g) 2,0 2,0
Pour préparer les compositions des exemples 55 et 56, on mélange ensemble l'amidon prégélatinisé et le lactose. On humidifie le mélange obtenu avec une solution aqueuse d'elcatonine, on granule à travers un tamis d'acier inoxydable et on sèche sous vide. On mélange les granules séchés avec le glycyrrhizinate d'ammonium et le stéarate de magnésium, puis on presse en comprimés de 210 mg chacun.

On enrobe les comprimés avec une suspension aqueuse de polyéthylèneglycol et d'Eudragit jusqu'à un poids final de 232 mg/comprimé.

Comprimés gynécologiques
Exemples 57 et 58
Tableau 21
Exemple n
57 58
Elcatonine (mg) 15,4 30,8
(Activité 6 500 UI/mg)
Glycyrrhizinate d'ammonium (g) 8,0 8,0
Amidon de mais (g) 180,0 180,0
Acide adipique (g) 140,0 140,0
Bicarbonate de sodium (g) 110,0 110,0
Stéarate de magnésium (g) 20,0 20,0
Lactose qsp (g) 1 600,0 1 600,0
Pour préparer les compositions des exemples 57 et 58, on mélange ensemble le glycyrrhizinate d'ammonium, l'amidon de mais, l'acide adipique et le lactose. On humidifie le mélange obtenu avec une solution aqueuse d'elcatonine, on granule à travers un tamis d'acier inoxydable et on sèche sous vide. On mélange les granules séchés avec du bicarbonate de sodium et du stéarate de magnésium, puis on presse en comprimés de 1,6 g chacun.

Claims (11)

REVENDICATIONS

1. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend une calcitonine, une quantité efficace d'un promoteur d'absorption qui est un glycyrrhizinate et un véhicule convenant en pharmacie.

2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le glycyrrhizinate est le glycyrrhizinate d'ammonium.

3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le glycyrrhizinate est présent à une concentration d'au moins 0,1 % (p/p) du poids total de la composition.

4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que la concentration du glycyrrhizinate est de 0,5 à 5 % (p/p).

5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la calcitonine est l'elcatonine.

6. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que la calcitonine est la calcitonine d'anguille.

7. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle est sous forme d'un liquide ou d'un gel approprié à l'application à la muqueuse nasale.

8. Composition selon la revendication 7 caractérisée en ce que le glycyrrhizinate est présent en une quantité correspondant à environ 2 g/100 ml de composition.

9. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'ellé a un pH dans la gamme d'environ 4,5 à environ 6.

10. Composition pharmaceutique liquide caractérisée en ce qu'elle comprend comme véhicule une solution salée aqueuse tamponnée à un pH d'environ 6, une quantité efficace non toxique d'un conservateur et, pour 100 ml de composition, 20 000 à 100 000 unités internationales d'elcatonine et environ 2 g de glycyrrhizinate d'ammonium.

11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle est conditionnée pour l'administration sous forme d'une pulvérisation.