FI92650C - Menetelmä ihon kautta tapahtuvaa virtausta lisäävän farmaseuttisen valmisteen valmistamiseksi - Google Patents

Description

92650

Menetelma ihon kautta tapahtuvaa virtausta lisaavan far-maseuttisen valmisteen valmistamiseksi

Keksinto koskee menetelmåå ihon kautta tapahtuvaa 5 virtausta lisMavån farmaseuttisen valmisteen, joka on tar-koitettu annettavaksi ihon kautta ihmiselle tai alemmalle elåimelle.

Seuraavat Rajadhyakshalle kuuluvat patentit, jotka on julkaistu 1976 - 1984, esittelevat menetelmia ja val-10 misteita, joissa kaytetåSn l-alkyyliatsasykloheptan-2-one- ja ja niiden homologeja tarkoituksena lisata farmakologisesti aktiivisten aineiden tunkeutumista ihmisen ja elåi-men ihon lMvitse; US-patentti julkaisut 3 989 816; 4 316 893; 4 405 616 ja 4 444 762.

15 Stoughton, Arch. Derm., 118, 474 - 477 (1982) kos kee l-dodekyyliatsasykloheptan-2-onia, johon tasså viita-taan nimityksellS Azone ja sen kykya lisata ihon lapi tunkeutumista.

Cooperin US-patenttijulkaisut 4 557 934 ja 20 4 537 776 esittelevat ei-steroidi-tulehduksenvastaisia yhdisteita, virusvastaisia aineita, yskånlaakkeita ja mui-ta lååkeaineita sisaltåviå paikallisia valmisteita, jotka sisåltavat etanolia, eraita glykoleja, pyrrolidonia, l-(2-hydroksietyyli)atsasyklopentan-2-onia ja 1 - 35 % 1-dode-·’ 25 kyyliatsasykloheptan-2-onia (Azone).

Cooper, J. Pharm. Sco. , 73, 1153 - 1156 (1984) esittelee menetelman poolittomieh molekyylien, kuten sali-syylihapon, ihon kautta kuljetuksen lisaåmiseksi lisaamal-la rasva-alkoholeja tai rasvahappoja ihon kautta annetta-30 viin valmisteisiin, jotka ovat erilaisissa glykoliliuot-timissa.

Akhter ja Barry, J. Pharm. Pharmacol., 36, 7P (1984) selostavat, etta oljyhappo ja Azone lisåavat propy-leeniglykolissa ja muissa liuottimissa olevien flurbipro-35 feenivalmisteiden ihon lSvitse tunkeutumista.

2 926S0 EP-patenttijulkaisu 43 738 esittelee binaarisen, ihon lavitse tunkeutumista lisåavån vehikkelin tulehduk-senvastaisia aineita vårten, joka vehikkeli sisåltåå (CM)diolia, dioliesteria tai diolieetteriå ja solun 5 paållystM epåjarjestykseen saattavaa yhdistettå, joka on valittu mm. (C,2.,4)rasvahappojen alempialkyyliestereiden, oljyhapon, lauryyliasetaatin ja myristyyliasetaatin jou-kosta.

Patel et al., Journ. Soc. Cosmetic Chem. 36, 303 -10 311 (1985) on maininnut, ettS propyleeniglykoli, joka on alalla enneståån tunnettujen ihon kautta kåytettåviksi tarkoitettujen farmaseuttisten valmisteiden yleinen aine-osa, aiheuttaa arsytystS ja/tai herkistysta, kun sen kon-sentraatio ylittaS 10 %.

15 US-patenttijulkaisu 4 572 909, joka on julkaistu 25. helmikuuta 1986, esittelee amlodipiinin, 2-[(2-amino-etoksi)metyyli]-4-(2-kloorifenyyli)-3-etoksikarbonyyli-5-metoksikarbonyyli-6-metyyli-l,4-dihydropyridiinin ja sen suoloja ja niiden kMytdn iskemian vastaisina ja korkeaa 20 verenpainetta alentavina aineina.

US-patenttijulkaisu 3 591 584 esittelee piroksikaa-min, 4-hydroks i-2-metyy1i-N-2-pyr idinyyli-2H-l,2-bentso- tiatsiini-3-karboksamidi-l,1-dioksidin ja sen kMyton tu-lehduksenvastaisena ja kipua lievittåvånå aineena.

25 Sopivia piroksikaamin esilååkemuotoja on esitelty US-patenttijulkaisuissa 4 309 427 ja 4 563 452.

US-patenttijulkaisu 4 188 390 esittelee doksatso- siinin, 4-amino-2-[4-(l,4-bentsodioksaani-2-karbonyyli)- piperatsin-l-yyli]-6,7-dimetoksikinatsoliinin ja sen kay- . 30 tdn kardiovaskulaarisen jarjestelmSn saånnostelijanM, eri- < · · tyisesti kohonneen verenpaineen hoidossa.

Glipitsidin, l-sykloheksyyli-3-[p-[2-(5-metyylipy-ratsiinikarboksamido)etyyli]fenyylisulfonyyli]urean, kayt-t8 sokeritautilSåkkeenå on esitelty US-patenttijulkaisussa 35 3 669 966.

• · • · 3 92650 Tåsså keksinnossa tarjotaan uusia edullisia ihon kautta tapahtuvaa virtausta lisaavia farmaseuttisia val-misteita annettaviksi ihon kautta ihmisille tai alemmille elåimille. Keksinnon mukaiselle menetelmalle tåmån valmis-5 teen valmistamiseksi on tunnusomaista, etta sekoitetaan (a) turvallinen ja tehokas maara farmakologisesti aktiivista yhdistettå, joka on valittu ryhmasta, joka koostuu metyylisalisylaatista, salisyylihaposta, ibupro-feenista, amlodipiinista, glipitsidista, doksatsosiinista, 10 piroksikaamista, piroksikaamin esilååkkeestå ja nåiden farmaseuttisesti hyvåksyttåvistå kationi- ja happoadditio-suoloista, (b) vesipitoinen liuotinjSrjestelmS, joka sisåltåå noin 15-75 tilavuus-% yhta tai useampaa veteen sekoittu- 15 vaa liuotinta, joka on valittu ryhmasta, joka koostuu eta-nolista, propyleeniglykolista, polyetyleeniglykolista ja t glyserolista, ja (c) noin 0,01 - 5 % (paino/tilavuus) tunkeutumista lisaåvaa ainetta, joka on valittu ryhmasta, joka koostuu 20 N-dodekyyli-l-atsasykloheptan-2-onista, oljyhaposta ja cis-vaksenihaposta edellyttSen, ettS kun vesipitoinen li-uotinjårjestelma sisSltåS yhtå veteen sekoittuvaa liuotinta, se ei ole etanoli ja kun se sisaltåå kahta veteen sekoittuvaa liuotinta, ne eivat ole etanoli ja polyetylee-25 niglykoli. Keksinnon erityisen yllattavia piirteita ovat, etta maarattya farmakologisesti aktiivista yhdistetta tai esilaaketta vårten nåyttSa olevan tietty liuottim(i)en konsentraatio yllM olevalta alueelta, jossa konsentraa-tiossa ihon kautta tapahtuva virtaus on optimaalinen, ja 30 etta kaytetyn liuotinsysteemin taytyy olla vesipitoinen.

• Erityisen hyvSna pidetty keksinnon mukainen valmiste on siten sellainen, jossa liuottimen tai liuottimien konsentraatio on 10 %:n tarkkuudella se konsentraatio, joka ai-kaansaadaan optimaalisen virtauksen ihon kautta kysymyk-35 sesså olevalle farmakologisesti aktiiviselle yhdisteelle , 92650 tai esilååkkeelle. Vaikka liuottimen tai yhdistettyjen liuottimien koko konsentraatioalue on noin 15 - 75 %, yleensa aikaansaa selvåsti parantuneen virtauksen ihon lavitse verrattuna liuotinmååriin, jotka ovat tåmån alueen 5 ulkopuolella, on rajoitetumpi alue "aukko", jossa ihon kautta tapahtuvan virtauksen on todettu olevan suotuisin.

Edella kuvattu vesipitoinen liuotinseos sisaltaa vetta ja yhtS tai useampaa veteen sekoittuvaa liuotinta. Sellaisia veteen sekoittuvia liuottimia ovat, etanoli, 10 propyleeniglykoli, polyetyleeniglykoli ja glyseroli. Par-haina liuottimina tåta keksintoa vårten pidetaån sellaisia, jotka ovat våhiten vahingollisia iholle ja niihin kuuluvat etanoli ja glyseroli. Aivan erityisen hyvånå pi-detty tåmån keksinnon liuotin on etanoli. Tåssa keksinnds-15 sM kMytettava vesi voidaan puskuroida ja pH voidaan såataéi kysymyksesså olevan farroakologisesti aktiivisen yhdisteen tai esilåakkeen stabiiliuden optimoimiseksi ja ihon vahin-goittamisen vahentSmiseksi tai poistamiseksi. Jos vesi puskuroidaan, pidetSan parhaana puskuroida se noin pH:hon 20 6,5-7,5. Anionisia puskureita pidetaan suotavimpina tå- hSn tarkoitukseen. Sopiva farmaseuttisesti hyvaksyttavS anioninen puskuri on Sorensenin puskuri, joka sisaltaa yhdistetta NaH2P041H20, Na2HP04 ja NaCl ja joka on alan asiantuntijoille tuttu. Voidaan myos kayttaå eraitå sel-25 laisia kationisia puskureita kuin esimerkiksi Tris, mutta on todettu, ettå Tris våhentåå oljyhapon vaikutusta sar-veiskerroksen lipideihin konsentraatiosta riippuvalla ta-valla.

Optimivirtauksen vaatima veden ja liuottimen tai 30 liuottimien vålinen suhde vaihtelee jossakin måårin kysymyksesså olevan valmisteen liuottim(i)en, tunkeutumista lisååvån aineen ja farmakologisesti aktiivisen yhdisteen tai esilååkkeen funktiona. Tåmån keksinnon puitteissa ovat vesi/liuotin (liuottimet) -suhteiden vaihtelun rajat noin 35 15/85 - noin 85/15 (tilavuus/tilavuus-%).

5 92650 TSma keksinto on erityisen hyodyllinen sellaisia valmisteita vårten, joita kSytetaån hoidettaessa ihmisiS tai alempia elSimiS, jotka karsivat reumaattisista tai tulehduksellisista tiloista, iskemiasydansairaudesta, eri-5 tyisesti anginasta, kohonneesta verenpaineesta tai sokeri-taudista.

i

Erityisen hyddyllisiå farmakologisesti aktiivisia yhdisteita tai esilSåkkeita keksinndn valmisteita vårten ovat metyylisalisylaatti, salisyylihappo, ibuprofeeni, 10 piroksikaami ja piroksikaamin esilaåkkeet ja naiden farmakologisesti hyvåksyttavåt kationi- ja happoadditiosuolat reumaattisten tai tulehduksellisten tilojen hoitoa vårten. Erityisen hyddyllisiå piroksikaamin esilaåkkeita ovat sel-laiset, joilla on kaava 15 O Λ ii CT ίΙΗ-

OCOR I M I I

1/C0NH r^rVc^ 20 fi| i 3 °2 °2 1 25 ja niiden farmaseuttisesti hyvSksyttSvat happoadditiosuo lat, joissa R on (C,,9) alkyyli, joka voi olla suoraketjuinen tai haarautunut alkyyli, CH(R')OCOR2, jossa R1 on H tai (C,.

3) alkyyli ja R2 on (CM)alkyyli tai (CM)alkoksi.

Muita erityisen hyvinå pidettyjM valmisteita, jotka 30 ovat hyddyllisiS hoidettaessa iskemiasydånsairautta, eri-tyisesti anginaa tai kohonnutta verenpainetta ihmisella tai alemmilla elaimillS, jotka ovat sellaisen hoidon tar-peessa, ovat sellaisia, joissa kåytetaan amlodipiiniS, joka on esitelty US-patenttijulkaisussa 4 572 909, joka 35 liitetaSn tahan viitteenS.

92650 6

Lisaksi ovat erityisen hyvinå pidettyjå valmisteita sellaiset, jotka sisåltåvåt turvallisen ja tehokkaan måå-rån glipitsidiå sokeritautitilojen hoitamista vårten. Tåmå farmakologisesti aktiivinen yhdiste ja sen kayttd sokeri-5 tautitilojen hoidossa tunnetaan US-patenttijulkaisusta 3 669 966, joka liitetåån tåhån viitteenå. Viela muita erityisen hyvinå pidettyja keksinnon mukaisesti valmistettuja valmisteita ovat sellaiset, joissa kåytetåån turvallista ja tehokasta mååråå doksatsosiinia, joka on hyodyllinen 10 kohonneen verenpaineen hoitamiseksi. Yhdiste ja sen kåyt-tomahdollisuudet verenpaineen alentamisessa on esitelty US-patenttijulkaisussa 4 188 390, joka myos liitetåån ta-han viitteenM.

Piroksikaamin esteriesilåMkkeitå on esitelty US-15 patenttijulkaisussa 4 309 427, US-patenttijulkaisussa 4 563 452 esitellaån ylla olevat piroksikaamin oksatsino-[5,6-c]1,1,2-bentsotiatsiini-esilååkemuodot. Kumpikin edellå oleva patenttijulkaisu liitetåån myos tåhån viitteena .

20 Erityisen hyvinå tunkeutumista lisååvinå aineina pidetåån niiden tehokkuuden ja helpon saatavuuden vuoksi cis-9-oktadekeenihappoa (dljyhappo), cis-ll-oktadekeeni-happoa (cis-vaksenihappo) ja l-dodekyyliatsasykloheptan-2-onia, johon myos viitataan tåsså Azonena.

25 Erityisen hyvånå pidetty veteen sekoittuvan liuot- timen tai yhdistettyjen veteen sekoittuvien liuottimien konsentraatioalue fysiologisesti aktiivisten yhdisteiden ja niiden esilååkkeiden optimaalisen ihon kautta virtauk-sen aikaansaamiseksi on tåmån keksinnon mukaisesti valmis-30 tetuissa 20 - 60 tilavuus-%.

Tunkeutumista lisååvien aineiden aivan erityisen hyvånå pidetty konsentraatioalue on 0,1 - 1 paino/tila-vuus-% ja erikoisesti 0,25 - 0,5 paino/tilavuus-% tehok-kuussyistå ja årsytyksen puuttumisen vuoksi.

92650 7

Reumaattisia tai tulehduksellisia tiloja voidaan hoitaa kåyttåmållå farmaseuttisia valmisteita, jotka si-såltåvåt turvallisen ja tehokkaan måårån farmakologisesti aktiivista yhdistettå, joka on valittu metyylisalisylaa-5 tin, salisyylihapon, ibuprofeenin, piroksikaamin ja piroksikaamin esilååkkeiden joukosta.

Iskemiasydansairautta tai kohonnutta verenpainetta voidaan hoitaa kåyttåmållå keksinnon mukaisesti valmistet-tuja valmisteita, jotka sisåltåvåt turvallisen ja tehok-10 kaan måårån amlodipiiniå. Sokeritautia hoidetaan kåyttåmållå turvallista ja tehokasta mSarSa glipitsidia ja ko- honnutta verenpainetta hoidetaan kayttåmallå doksatsosii-nia vastaavalla tavalla kayttSen keksinnon mukaisesti val-mistettuja valmisteita.

15 Keksinnon mukaisesti valmistetuissa farmaseuttisis- sa valmisteissa kåytettMvan farmakologisesti aktiivisen yhdisteen tai esilååkkeen turvallisen ja tehokkaan·maarån tarkoitetaan tåsså merkitsevån mååråå, joka aiheuttaa aktiivisen yhdisteen terapeuttisesti hyodyllisen tason ve-20 ressa ja/tai paikallisen tason ihon kautta annettaessa. Yksittåisten farmakologisesti aktiivisten yhdisteiden ja esilååkkeiden terapeuttisesti hyodylliset tasot ovat sel-laisia, joiden alalia tiedetåån olevan hyodyllisiå kunkin sellaisen yhdisteen tapauksessa. Hainitut farmaseuttiset 25 valmisteet voivat olla monissa eri muodoissa, esim. aktiivisen yhdisteen tai esilååkkeen liuoksena, geelinå tai suspensiona.

Fysiologisesti aktiivisen yhdisteen esilååkkeellå tarkoitetaan tåsså rakenteeltaan låheisesti samanlaista 30 yhdistettå tai aktiivisen yhdisteen johdannaista, joka • imeytyy ihmisen tai alemman elåimen kehoon, jossa se muut- tuu halutuksi fysiologisesti aktiiviseksi yhdisteeksi. Esilååkkeellå itsellåån voi olla våhån tai ei ollenkaan haluttua aktiivisuutta.

8 92650 Mååråtyn fysiologisesti aktiivisen yhdisteen tai esilååkkeen kåytettåvå måårå vaihtelee lååkårin pStevån harkinnan puitteissa kysymyksesså olevan hoidettavan tilan, tilan vakavuuden, hoidon keston, kåytetyn yhdisteen 5 luonteen, potilaan tilan ja muiden tekijoiden mukaan, jot-ka kuuluvat hoitavan lååkårin erityistietoihin ja asian-tuntemukseen.

Keksinnon mukaisesti valmistettujen farxnaseuttisten valmisteiden annostusmuotoja voivat olla liuokset, huuhte-10 lunesteet, salvat, voiteet, geelit, lååkepuikot, rajoite-tulla nopeudella pitkåaikaisesti vapauttavat valmisteet ja mekanismit sellaisia vårten.

Valmisteiden tarpeellisten liuottim(i)en, veden ja tunkeutumista lisååvån aineen lisåksi voivat tyypillisesti 15 annostusmuodot sisåltåå inerttejå kantaja-aineita, kuten esimerkiksi geelin aikaansaavia aineita, mineraalioljyjå, emulgoimisaineita, bentsyylialkoholia ja vastaavia.· Yksi-tyiskohtaisia esimerkkejå useista sellaisista koostumuk-sista on esitetty jåljempånå olevissa esimerkeisså.

20 Yllå mainittujen fysiologisesti aktiivisten yhdis- teiden farmaseuttisesti hyvåksyttåvåt suolat kåsittåvåt sellaisten yhdisteiden, jotka sisåltåvåt happaman ryhmån, kuten esimerkiksi karboksyylihapon, kationisuoloja ja emåksisen typpiatomin sisåltåvien yhdisteiden happoaddi-: 25 tiosuoloja.

Farmaseuttisesti hyvåksyttåvillå kationisuoloilla tarkoitetaan suoloja, jotka on muodostettu neutraloimalla farmakologisesti aktiivisten yhdisteiden, esim. salisyyli-hapon ja ibuprofeenin, vapaa karboksyylihapporyhmå. Neut-30 ralointi suoritetaan saattamalla mainitut karboksyylihapon sisåltåvåt yhdisteet kosketuksiin farmaseuttisesti hyvåk-syttåvån metallin emåksen, ammoniakin tai amiinin kanssa. Esimerkkejå sellaisista metalleista ovat natrium, kalium, kalsium ja magnesium. Esimerkkejå sellaisista amiineista 35 ovat N-metyyliglukamiini ja etanoliamiini.

. · · 9 92650

Tennilla farmaseuttisesti hyvåksyttavat happoaddi-tiosuolat tarkoitetaan sellaisia'suoloja, jotka on muodos-tanut ylla olevien fysiologisesti aktiivisten yhdisteiden (esim. piroksikaami, amlodipiini ja doksatsosiini) vapaa 5 aminoryhma ja farmaseuttisesti hyvaksyttava happo. Esi-merkkeja sellaisista hapoista ovat etikka-, bentsoe-, bro-mivety-, kloorivety-, sitruuna-, fumaari-, maleiini-, me-ripihka-, viini-, bentseenisulfoni-, p-tolueenisulfoni- ja metaanisulfonihappo.

10 Ihonaytteita lapaisemistutkimuksia vårten

Urospuolisia karvattomia hiiria, jotka olivat ial-taan 8-16 viikkoa, tapettiin saattamalla kaula sijoil-taan. Poistettiin leikkaamalla kappale taysipaksuista vatsan ihoa ja se kiinnitettiin kahden identtisen diffuusio-15 astianpuolikkaan (rinnakkaiset loket, jotka oli hankittu toiminimelta Crown Glass Co., Somerville, New Jersey) va-liin, joiden pinta-ala oli 1,0 cm2. Ihoja hydratoitiin sit-ten noin 18 tunnin ajan Sorensenin isotonisella puskurili-uoksella (0,067 M natriumfosfaatti, pH 7,38) ennen kokei-20 den suorittamista. Ihmisen ihoa, jota oli otettu leikkauk-sessa tai ruumiinavauksessa, kSsiteltiin dermatomilla noin 400 ^m:n paksuiseksi ja hydratoitiin samalla tavalla.

Valmistettiin sarveiskerroslevyjS sian tai ihmisen ihosta trypsiinikasittelyn avulla. Talloin kasiteltiin : 25 tåysipaksuisia ihonSytteitS dermatomilla saaden paksuudek-si 350 - 400 Mm, ne levitettiin, sarveiskerros ylSspain, suodatinpaperille, joka oli kyllSstetty 0,5 % raa'alla trypsiinillS (tyyppi II toiminimelta Sigma Chemical, St. Louis, MO 63178, USA), joka oli fosfaatilla puskuroidussa 30 suolaliuoksessa pH 7,4. Kun oli pidetty useita tunteja 37 °C:ssa, sarveiskerros kuorittiin irti alla olevista kerroksista, pestiin soijapavun trypsiini-inhibiittorilla ja useita kertoja tislatulla vedella ja levitettiin metalli lankaverkolle kuivumaan. NSytteita sailytettiin kuivat-35 tuina huoneenlSmpotilassa kayttoon asti.

10 92650

Esimerkki 1 (Vertailu)

Amlodipiinin ihon kautta tapahtuvaa virtausta kos-kevia tutkimuksia

Karvatonta hiiren ihoa, jota oli hydratoitu 18 tun-5 nin ajan Sorensenin isotonisella puskuriliuoksella (pH 7,38) kiinnitettiin diffuusioastiaan. Asiaankuuluvat luo-vuttaja ja vastaanottajafaasi lisattiin korvaten hydra-tointiliuos. Kumpaankin astianpuolikkaaseen jårjestettiin jatkuva sekoitus magneettisekoitussauvojen avulla, joita 10 liikutti synkroninen moottori, joka oli saådetty nopeudel-la 300 kierrosta minuutissa. Diffuusioastiat oli varustet-tu vaipalla ja niitå pidettiin 37 °C:ssa kiertovesiputki-jårjestelmån avulla koko kokeen ajan. 60 - 90 minuutin våliajoin poistettiin vastaanottaja, joka sisålsi noin 15 3,0 ml ja siitå tutkittiin amlodipiini HPLC:n avulla. Vas taanotta jalokero tåytettiin uudella liuoksella korvaten tutkittava materiaali. Aikayksikosså siirtynyt amlodipii-nimåårå laskettiin ja ilmoitettiin vakiotilannevirtauk-sena.

20 Amlodipiinin luovuttaia/vastaanottaialiuoksia

Kaikissa tutkimuksissa kåytettiin amlodipiinibent-seenisulfonaattia 2-[(2-aminoetoksi)metyyli]-4-(2-kloori-f enyy 1 i) - 3 -etoksikarbonyy 1 i- 5 -metoks ikar bonyy 1 i - 6 -metyy li- 1,4-dihydropyridiinibentseenisulfonaattia. Valmistettiin : 25 vesipitoisia etanoliliuoksia, jotka sisålsivåt 55, 30 ja 20 tilavuus-% etanolia 0,01 M asetaattipuskuriliuoksessa, pH 5. Osaan nåistå liuoksista lisattiin riittavåsti cis-9-oktadekeenihappoa (dljyhappo), niin ettå saatiin kon-sentraatioksi 0,25 tilavuus/tilavuus-% (0,224 paino/tila-30 vuus-%). Muihin osiin lisattiin Azonea konsentraatioksi 0,5 tilavuus/tilavuus-%. Maåritettiin amlodipiinibentsee-nisulfonaatin liukoisuus kuhunkin våliaineeseen 25 °C:ssa, niin ettå voitiin kåyttåå 80-%:isesti kyllåstettyå lååke-aineliuosta luovuttajafaasina. Vastaanottajalokerossa kåy-35 tettiin luovuttajaliuoksen vastinetta ilman lååkeainetta • · 11 92650 tai tunkeutumista lisaavaa ainetta (cis-9-oktadekeenihappo (oljyhappo) tai Azone).

Amlodipiinin maaritvs

Amlodipiinin analyysi suoritettiin kayttaen korkea-5 painenestekromatografiaa (HPLC), jolloin osoittaminen ta- pahtui UV:n avulla kayttaen aallonpituutta 240 nanometriå. Liikkuva faasi oli 6 mmolaarinen 1-oktaaninatriumsulfo-naatti, 42 % (tilavuus/tilavuus) asetoniriili ja 1 % (ti-lavuus/tilavuus) tetrahydrofuraani 0,1 M natriumdivetyor-10 tofosfaattipuskuriliuoksessa, jonka pH oli såådetty 3,0:ksi 85 % (paino/tilavuus) ortofosforihapolla. Virtaus-nopeutena pidettiin 1,0 ml/min 32 °C:ssa. Kaikki naytteet ja standardit laimennettiin vahintåan 1:1 liikkuvalla faa-silla ennen sisaanruiskuttamista. Huipun korkeus -tarkis-15 tuskåyrat olivat lineaarisia ja toteamisraja oli suunnil-leen 0,05 μιη/ιηΐ.

Kokeen tuloksista on yhteenveto alla olevassa tau-lukossa.

I 12 92650 I 3 •P <0 _ „ H 4J n· O m .—I M P- N· ·— r~ 00 ·- U1 CN ·~ dp p m ao m <p m cn >—i <u >

P

i -C C

Φ 3®»

“ W C

c ^ (0

(0 -. +J

' c e " <u -π E ' -η cn flj g -t->c r _ in (N h m cn ο o in = 5Jj ao ,c ^ ^ ·-*·>-·*- w «— «- ~ w rn «Τ *-t m t—t m m <u

-Η SCO ’[j AC

c Z: c c -η > = o > -p £ «0

»H sfO C

W * J2 c · w * ε Q) iH ^ ^ ^ Ή cn — cn — in ·τ —. cm — —

p JJ CN · · in · · CN · VO rr (D

£ in g mm· mm· m · · in •P P p TJ« p p o <h r» m ^ «. o "" " " —" ~ ~ ~ '"" ru e p “ Γ> ac os p > mom p m r~ n o\ n p ο J3 2 c ·£ a: ac co r- ao <y\ p w ϊ 5 •po' cn m >3· cn mm n £ S > E p g (0 Ό a; o ^

Q. D

0 a p « * p ,3 cn o> o cn σν p *r a\ a\ i p ZG K ·— ♦— * in >-m CU in ΤΓ m n ^ n m rr tt 2 CO > Η Π3 ‘Η Ή — <0 ·Ρ

(OP P

C

p ® ία cn p ^ P 3 P C C 3 (0 O i - 0 > J 3 oi m in m coo ooc iop S'5· cp mmm mmm cn cn cn jop

Sa P* S3 * 3 W 3 cn -p o in <o in Φ c m pc a; a: o c <U «0 I c

01 P s C CN P

Φ P . 0) 0 I -p in p S > c p ppP (0P(0(0 coS'f _ Λ „ C(0P(0 5 3 2· tr. m m ια p a in

,2 p -CP I CN I I CN I I CN I O A O

jp ,-, · - I » - · ^S-gJS

in c £ > a: p o 3 0° a: -m p u Ο P >1 op p jj in -

•π P P > (0 C

p O (0 0 in a> 3 C (0 P £ a id Μ p (0 p p _ p 3 p p c d ® s > -i “ p ϊ ΐ m m m CC 5.» i i *-»i «^ii W <—I >1 13 ♦

.-j/n O-P 1 I »*11 ^11 c W <TJ

S n^. oil oil oil o p ω in p

Q, p *C P ACiOTJOIP

p Ο > 0 <U Φ

p p C <0 ·Ό P C

OP P P I £ P

P Οι Λ COP3(0 p ,_j ^ *p in 5 m P -P (0 C »0 ^ e a in 0 in «ο , p in 3 > n -p 71 op ® en ^ c σ> o 3 c p -·<ο 2'p£ pPOPin 3 -p cNcm o^m vo m ,-> g 3 n p p p ft ^ ^ « in < > p 3 p. (-- -3· r-~ 000 mmm *λι 2 O« 3 3 σι p p «*®0 • i P c • BO < A! 13 92650

Tarkastelu

Amlodipiinin maksimivirtaus aikaansaatlin kåyttaen 30 % etanolivehikkeliå, jossa oli joko Azonea tax cis-9-oktadekeenihappoa (oljyhappo) tunkeutumista lisååvana ai-5 neena. Asia oli nain siita huolimatta, etta 30-%:inen eta-nolivehikkeli sisalsi suunnilleen 10 kertaa våhemmån låM-keainetta kuin 55-%:inen etanolivehikkeli. Azonea ja cis- 9-oktadekeenihappoa (dljyhappo) sisåltåvien vehikkelien, joissa oli 30 % etanolia, tapauksessa olivat virtausnopeu-10 det vastaavasti 87- ja 58-kertaiset verrattuna samaan ve-hikkeliin, joka ei sisaltånyt tunkeutumista lisaåvåå ai-netta. Amlodipiinilla oli aika, joka kului vakiotilanne-virtauksen saavuttaroiseen, so. viivåstyma, cis-9-oktade-keenihappoa (oljyhappo) sisMltåvien vehikkelien tapaukses-15 sa vSliltS 3,4 - 5,0 tuntia. Azonea sisåltavien vehikkelien tapauksessa viivåstymS oli ainoastaan 1,5 - 3,2 tuntia. Kahden tunkeutumista lisaavien aineiden ryhmån vii-våstymien valinen ero arvioitiin merkityksettoméiksi.

Esimerkki 2 (Vertailu) 20 Piroksikaamin ihon kautta tapahtuvaa virtausta kos- kevia tutkimuksia

Mitattiin piroksikaamin virtaus in vitro etanoli/-puskurivehikkelista, jotka sisålsivat 0,25 tilavuus/tila-vuus-% (0,224 paino/tilavuus-%) cis-9-oktadekeenihappoa : 25 (oljyhappo). Kåytettiin Sorensenin puskuriliuosta, pH

7,3 - 7,41 ja kaikki kokeet suoritettiin 32 °C:ssa. Nåyt-teita joko karvattomasta hiiren ihosta tax ihmisen ihosta kiinnitettiin saman diffuusiolaitteen, jota kaytettiin amlodipiinikokeissa, kahden puoliskon våliin. Pantiin 30 pelkkåå puskuriliuosta lokeroon (vastaanottaja), joka oli kosketuksissa ihon sisapuolen kanssa. Luovuttajalokero, joka oli kosketuksissa ihon ulkopuolen kanssa, taytettiin «

Puskuriliuos valmistettiin kayttSen 3,68 g natriumdivety-35 fosfaattimonohydraattia, 8,80 g natriumkloridia, jotka laimennettiin 2 000 ml:aan deionoidulla vedella.

14 92650 asiaankuuluvalla etanoli/puskurivehikkelillå, joka sisalsi 0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-oktadekeenihappoa (oljyhap-po) ja ylimåårån piroksikaamia. Alla on ilmoitettu pirok-sikaamin kyllåstyskonsentraatio kussakin etanoli/puskuri-5 vehikkelisså, jotka sisalsivat 0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-oktadekeenihappoa (oljyhappo), laskettuna HPLC-måå-rityksen avulla.

t/t-% etanoli/puskuri-liuos, joka sisålsi 10 0,25 t/t-%· cis-9-oktade- Piroksikaamin kyllåstyskon- seenihappoa (Sljyhappoa) sentraatio, mg/ml_ 0/100 0,04 10/90 0,19 20/80 0,46 15 30/70 0,71 40/60 1,2 50/50 1,5 100/0 1,2 20 Kunkin vehikkelin tapauksessa ihon låvitse siirtynyt pi-roksikaamimaårS maaritettiin suorittamalla HPLC-analyysi naytteille, joita oli otettu vastaanottajasta ajoittain 72 tunnin aikana. Karvattoman hiiren ihon ja ihmisen ihon tapauksessa saaduista tuloksista on esitetty yhteenveto 25 alia olevissa taulukoissa I ja II.

Taulukko I

Piroksikaamin virtaus karvattoman hiiren ihon låvitse in vitro kåytettåesså erilaisia etanoli/pus-kurivehikkeleitå (joista kukin sisålsi 0,25 tila-30 vuus/tilavuus-% oljyhappoa) 32 °C:ssa is 92650 t/t_% Piroksaamin vir.taus Suhteellinen etanoli/puskuri ( uq/cm /h)ta) virtaus (fa)

0/100 o II

10/90 1r7 1,1 20/80 7 ,7 (1,8) 5,1 (1,2) 30/70 16,0 10,7 40/60 24,0 (36) 16 (24) 10 5°/50 20 r 0 13,3 100/0 1,5 1,0 ' (a) Kolmen rinnakkaisajon keskiarvo. Suluissa ole-vat luvut ovat uusintakokeista.

(b) Virtaus verrattuna siihen, joka saatiin kaytet-15 taessa 100 % etanolia/0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-ok- tadekeenihappoa (oljyhappo).

Taulukko II

Piroksikaamin virtaus ihmisen ihon lavitse in vitro kaytettaessa erilaisia etanoli/puskurive 20 hikkeleita(joista kukin sisålsi 0,25 tilavuus/ tilavuus-% oljyhappoa) 32 °C:ssa t/t-% Piroksaamin virtaus Suhteellinen etanoli/puskuri (ug/cm2/h) virtaus(d) : 25 0/100 f02 0,3 20/80 0,18 3,0 40/60 0,43 7,2 100/0 0,06 1,0 30 (c) Virtaus verrattuna siihen, joka saatiin kåytet- tåesså 100 % etanolia/0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-ok-tadekeenihappoa (oljyhappo).

Korkeapainenestekromatografia (HPLC) -analyysi suo-ritettiin kåyttåen kåånteisfaasi-Clg-Mbondapack-pylvåstå 35 (Waters Chromatography, Milton, MA 01757).

16 92650

Liikkuva faasi: 40:40:15:15 tilavuus/tilavuus.

0,1 M kaliumdivetyfosfaatti (pH 3,0), metanoli, asetonitriili, tetrahydrofuraani; virtausnopeus 1 ml/min.

Detektori: Ultravioletti 313 nanometrin aallonpi-5 tuus, LDC/Milton Roy Spectromonitor D.

Injektori: Automatisoitu nåytteenotto/automatisoitu injektointi, 10 ml:n injektioita.

Kun yllå oleva menetelmå toistettiin, mutta kåyt-tåen kyllåstettyjå piroksikaamin liuoksia etanolissa, pus-10 kurissa ja etanoli/puskuriliuoksissa, jotka sisålsivåt 20, 30, 40 ja 50 tilavuus/tilavuus-% etanolia ja kukin vehik-keli sisalsi 0,25 tilavuus/tilavuus-% 80,23 paino/tila-vuus-%) l-dodekyyliatsasykloheptan-2-onia (Azone), olivat virtausnopeudet karvattoman hiiren ihon alojen låvitse 15 taulukossa III ilmoitetun roukaiset.

Taulukko III

Piroksikaamin virtaus karvattoman hiiren ihon lå-vitse in vitro kåytettåesså erilaisia etanoli/ puskurivehikkeleitå (jotka kukin sisålsivat 0,25 20 % Azonea) 32 °C:ssa t/t-* ^iroksaamin virtaus Suhteellinen - 2 etanoli/puskuri (uo/cm /hl virtaus 0/100 0 f 05 0r2 : 20/80 3,7 5,3 30/70 11,0 15,7 40/60 42 r 8 61 5°/50 55,7 80 100/0 0,7 1 30 (d) Virtaus verrattuna siihen, joka saatiin kåytet tåesså 100 % etanolia/0,25 tilavuus/tilavuus-% Azonea. Esimerkki 3 (Vertailu)

Piroksikaamin esilååkkeid.en virtaus ihon låvitse Valmistettiin kaksi kyllåstettyå 4-n-butyryylioksi-35 2-metyyli-N-2-pyridyyli-2H-l,2-bentsotiatsiini-3-karboks- 17 92650 amidi-1,1-dioksidin (piroksikaamin n-voihappoesteri) liuosta seoksessa 55 etanolia/45 Sorensenin puskuria pH 7,3, tilavuuden mukaan. Yhteen liuoksista lisMttiin cis-9-oktadekeenihappoa (oljyhappo) konsentraatioksi 0,224 pai-5 no/tilavuus-% (0,25 tilavuus/tilavuus-%). Mitattiin vir- tausnopeus karvattoman hiiren ihon lavitse kyseisen kahden liuoksen tapauksessa måårittåmållM vastaanottajalokerosta piroksikaami HPLC:n avulla samalla menetelmållå, jota kay-tettiin ylla piroksikaamin tapauksessa. Tuloksista on esi-10 tetty yhteenveto alla.

Virtaus in vitro karvattoman hiiren ihon lavitse kåytettåessa 55/45 tilavuus/tilavuus etanoli/pus-kurivehikkelia, jossa oli tai ei ollut oljyhap-poa, 32 °C:ssa

Piroksaamin virtaus Suhteellinen % olivhappoa (up/cm /h) vir^aus — 0^ 224 paino/tilavuus 4^10±0^40 24 0,17 i 0,02 1 20 i

Kun yllS olevassa menetelmassM kaytettiin 4-n-pentanoyyli-oksi-2-metyyli-N-2-pyridyyli-2H-l, 2-bentsotiatsiini-3-kar-boksamidi-l,l-dioksidia ylla olevan piroksikaamin n-buty-raattiesterin asemesta, saatiin seuraavat tulokset: 25

Piroksaamin virtaus Suhteellinen 2 % Sljyhappoa (ug/cm /h) virtaus 0,224 paino/tilavuus 7,93±0,62 14 0,56 i 0,17 1 30

Esimerkki 4 (Vertailu)

Erilaisten rasvahappojen vaikutusten salisyylihapon virtauksen lisaamiseen, infrapunaspektritulosten ja DSC-kalorimetrian korrelaatio sian sarveisker-35 roksen tapauksessa 1β 92650

Valmistettiin sarveiskerroslevyja sian ihosta tryp-siinikåsittelyn avulla. Tatå vårten tehtiin tåysipaksui-sista sian ihonaytteistå dermatomin avulla 350 μιη:η pak-suisia ja ne levitettiin sarveiskerrospuoli yldspain suo-5 datinpaperille, joka oli kyllåstetty 0,5-%:isella raa'alla trypsiinilla, joka oli fosfaatilla puskuroidussa suola-liuoksessa pH:ssa 7,4 (Sorensenin puskuri). Kun oli pidet-ty useita tunteja 37 °C:ssa, sarveiskerros kuorittiin irti, pestiin soijapavun trypsiini-inhibiittorilla, vedellå 10 ja kuivattiin. NMytteita sailytettiin kuivattuina huoneen-lampotilassa kSyttoon asti. Ennen kayttoå inkuboitiin kui-via ihonaytteita, joiden paino tunnettiin, kahden tunnin ajan asiaankuuluvan rasvahapon 0,15 M liuoksessa etanolis-sa, nåytteitS pestiin sitten 10 sekunnin ajan etanolissa, 15 ne levitettiin metalliverkolle, kuivattiin kuivausaineen avulla ja kuiva nåyte punnittiin uudelleen. Sar-veiskerrosnaytteita pidettiin sitten useiden paivién ajan kaapissa 22 °C:ssa 95 %:n suhteellisessa kosteudessa, jol-loin sarveiskerrosnSytteet tasapainottuivat 30 %:n (pai-20 no/paino) vesipitoisuuteen.

Infrapunaspektritulokset

Infrapunaspektrit aikaansaatiin fouriermuunnosinf-rapunaspektrometrin (Analect-malli FX-6200, Laser Precision Corp., Irvine, Kalifornia) (FTIR) avulla, joka oli 25 varustettu nesteytetyn typen avulla jaahdytetyllS eloho- pea-kadmiumtelluridi-detektorilla. Veden menettSmisen es-tåmiseksi hydratoidut naytteet oli suljettu sinkkisulfidi-ikkunoiden våliin pitåen niitå 22 °C:ssa, 95 %:n suhteellisessa kosteudessa. Suljetut naytteet pantiin spektromet-30 riin, jossa suoritettiin keskimaarin 127 ajoa noin kuudes-sa minuutissa kunkin rasvahappokasittelyn tapauksessa. Numeeristetut tulokset siirrettiin tietokoneeseen (Apple Ile) C-H-antisymmetrisen venytyksen absorbanssin frekvens-sin ja kaistaleveyden måårittSmiseksi. FTIR-laitteen digi-35 taalisesta luonteesta johtuen absorbanssi- ja frekvenssi- i 19 92650 tulokset esiintyvåt ainoastaan erillisinå lisåyksinå. Kåy-tetylla laitteella voitiin kunkin frekvenssipisteen tås-mallinen arvo måårittåå ainoastaan tarkkuudella, joka oli korkeintaan 2,7 cm'1. Huippufrekvenssi arvioitiin kuitenkin 5 paljon suuremmalla tarkkuudella kåyttåen sellaista paino-pistealgoritmiå numeeristettuja tietoja vårten, jonka ovat selostaneet Cameron et al., Applied Spectr., 36, 245 - 250 (1982) .

DSC-kalorimetria 10 DSC-kalorimetria (Microcal-malli MC-1, Microcal

Inc., Amherst, Massachusetts) kaytettiin ajonopeudella 0,75 °C/min. Kaksi rinnakkaista naytetta kustakin yllå olevasta FTIR-kokeesta yhdistettiin DSC-mittauksia vårten. Vaihtoehtoisesti kSsiteltiin tunnetun painoisia (noin 15 20 mg) sarveiskerrosnaytteita kullakin rasvahapolla samal- la tavalla kuin on kuvattu yllå. Kåsiteltyjå nåytteita hydratoitiin useiden paivien ajan 95 %:n suhteellisessa kosteudessa, 2 °C:ssa ja ne punnittiin uudelleen. Tulokset osoittavat suunnilleen 30 % (paino/paino) veden ottoa 20 riippumatta kSytetysta rasvahaposta.

Virtausmenetelma

Irti leikatun sian ihon levyt, jotka oli leikattu 350 μπκη paksuisiksi, kiinnitettiin diffuusioastian kahden puoliskon våliin siten, ettå sarveiskerrospuoli oli luo-25 vuttajalokeroon påin, joka lokero sisålsi 1,0 ml kyllås-tettyå salisyylihapon liuosta etanolissa (0,31 g/ml) plus noin 105 dpm6/ml ,4C:lla merkittyå salisyylihappoa. Sitten 6dpm - hajoamista minuutissa 30 fotonien pulsseia minuutissa * laskennan tehokkuus lisåttiin asiaankuuluvaa rasvahappoa lopulliseksi konsent-raatioksi 0,15 M. Vastaanottajalokero sisålsi 1,0 ml So-rensenin puskuriliuosta, pH 7,4. Kumpaakin lokeroa sekoi-35 tettiin magneettisekoittimen avulla ja pidettiin 32 °C:ssa.

i 20 92650

Diffuusioastian vastaanottajapuolesta poistettiin ajoittain naytteitS, sekoitettiin tuikeseoksen kanssa (Scintisol, Isolabs, Inc., Akron, OH) ja laskettiin usei-den minuuttien ajan nestetuikelaskurissa (Model Mark III-5 6881, Tracor Analytical, Elk Grove Village, IL). Noin kuu- den tunnin alkuviivastymån jalkeen oli vastaanottajapuo-lella esiintyva salisyylihappomMara lineaarinen ajan kanssa kokeen ajan (tavallisesti 24 - 48 tuntia). Naiden tu-losten lineaarisesta pienixtunån neliosununan analyysista 10 påSteltiin salisyylihapon vastaanottajapuoliskoon ilmaan-tumisen nopeus (dpm/tunti). Kun tama arvo jaettiin salisyylihapon spesifisella aktiivisuudella kyllastetyssa liuoksessa (suunnilleen 300 dpm/mg) ja alttiina olevan ihon alalia (0,2 cm2), saatiin virtaus (rog/cm2/tunti).

15 Nåytteet, jotka oli otettu luovuttajapuolelta kokeen alus-sa ja lopussa, sisalsivåt virheen rajoissa, saman måarSn salisyylihappoa. Luovuttajapuolella såilyi siten lapitun-keutuvan aineen vakiokonsentraatio koko kokeen ajan.

Kaikkien kolmen tutkimuksen tuloksista on yhteen-20 veto taulukossa IV.

9 t 21 92650

Taulukko IV

Yhteenveto spektri-, termisistå ja virtausmuutok- i sista, jotka seurasivat sian sarveiskerroksen kasittelyå 18 hiilen pituisilla rasvahapoilla. IR- ja DSC-tulokset 5 saatiin nSytteillS, jotka oli hydratoitu 30 %:n (pai-no/paino) vesipitoisuuden omaaviksi. Yhden kaksoissidoksen omaaville hapoille on kunkin isomeerin muoto (cis tai trans) ja asema hiiliketjussa osoitettu suluissa. Kukin arvo edustaa vahintaSn kahden nSytteen keskiarvoa 10

DSC

Huippu-IR- ip s Salisyylihapon frekvenssi π» virtaus -1 2 Kåsittelv (cm ) (°C) (mq/cm /h

Steariinihappo *2918,0 ± 0,4 *62,5 ± 1,0 1,21 15 ' ' *

Petroseleenihappo 2919,0 60,5 0,79 (cis-6,7)

Petroseladihappo 2919,0 62,0 0,97 (trans-6,7) 20

Oljyhappo *2920,0 i 0,5 *59,0 ±1,5 3,81 (cis-9,10) ' '

Elaidiinihappo 2919,4 61,5 2,35 (trans-9,10) cis-vaksenihappo 29 20,1 57,0 5.53 25 (cis-11.12) Γ r ’ trans-vaksenihappo 2818,8 61,0 1,11 (trans-11,12)

Etanoli *2918,8 ± 0,4 *62f0 ± 1,0 1,31 30 Ei kåsittelya 2918,8 62,0 --- r *Arvo edustaa kolmen nSytteen keskiarvoa ± SEM (keski-arvon keskivirhe).

35 e’Transitiomaksimin lampot i la « 22 92650

Oljy- ja cis-vaksenihapolla saatiin kummallakin suurin infrapuna-absorbanssi kohdalla 2 920 cm'1, kun taas tyydyttyneella steariinihapolla ja kahdella trans-hapolla saatiin alempia arvoja (noin 2 918 - 2 919) samoin kuin 5 kontrolleilla. Vaikka rasvahapporyhmien vålinen ero on pienempi kuin laitteen digitaalinen resoluutio (2,7 cm1), antaa huippufrekvenssin måarittamisen painopistetekniikka riittavan tarkkuuden helposti arvioida 1,0 cm‘1:n erot nu-meeristetuista tuloksista. Lisaksi useat kokeista suori-10 tettiin kolmena rinnakkaisena, jolloin keskiarvon keski-virhe oli pienempi kuin 0,5 cm'1. Vaikka siten huippufrek-venssimuutokset, jotka seurasivat sarveiskerroksen kasit-telyå oljy- ja cis-vaksenihapolla, ovat toisin verrattaes-sa pieniå, ovat ne merkitsevia.

15 DSC-tuloksista nShdaan myos, etta kahdella cis-ras- vahapolla esiintyy alentunut transitiomaksimien lampotila verrattuna steariinihappoon, kahteen trans-rasvahappoon ja kontrolleihin. Havaittiin myos, etta cis-rasvahapot antoi-vat leveamman huipun (huipun leveyden suhde huipun kor-20 keuteen) kuin muut. Tulokset viittaavat myos siihen, etta kaksoissidoksen etåisyyden karboksyyliryhmastM suurentami-nen aikaansaa Tm:n suuremman alenemisen.

cis-9-oktadekeenihappon (oljyhappo) virtaustulos on myos merkitsevasti suurempi kuin steariinihapon, etanoli-’· 25 kontrollin ja elaidiinihapon. Virtausnopeuksien ero on viela suurempi verrattaessa cis-vaksenihappoa kontrolleihin ja trans-vaksenihappoon. Ylla olevat infrapuna- ja DSC-tulokset osoittavat siten kukin suurta korrelaatiota virtausnopeuden kanssa.

30 Esimerkki 5 (Vertailu) DSC:n avulla saadun lipidien sulamisiampotilan kor-relaatio bljyhappoa sisaltavien vesipitoisten ve-hikkelien etanolikonsentraation kanssa Kayttaen ylla olevaa menetelmMa sian sarveiskerros-35 naytteiden lipidien transitioléjmpotilan maarittamiseksi 23 92650 DSC-kalorimetrian avulla, maaritettiin sulamislampStila, Tm, sarveiskerrokselle erilaisissa etanoli/S8rensenin pus-kuriliuoksissa, jotka kukin sisalsivat 0,25 tilavuus/tila-vuus-% cis-9-oktadekeenihappoa (61jyhappo) (0,22 pai.no/-5 tilavuus-%). Tuloksista on yhteenveto seuraavassa taulu-kossa.

% etanolia (t/t) etanoli/ Sian sarveiskerroksen li- puskurivehikkeleisså*, jot- pidien transitiolåmpotila,

ka sisalsivat 0,25 t/t-% Tm, °C

10 · Sljyhappoa_ _ 0/100 57.5 20/80 54 r 5 30/70 54r0 40/60 53,2 ± 0;6 15 50/50 55.1 60/40 53,4 70/30 58,8 100/0 66,4 20 *Sorensenin puskuri, pH 7,3.

Samoissa olosuhteissa saatiin sarveiskerrosnSyt-teille pelkassa Sorensenin puskurissa [ei etanolia eikå cis-9-oktadekeenihappoa (dljyhappo)] Tm 64 °C. Sarveisker-roksella, joka oli 40/60 tilavuus/tilavuus etanoli/pusku- : 25 ria sisåltåvåsså vehikkelissa, jossa ei ollut cis-9-okta- dekeenihappoa (51jyhappo), oli myos Tro 64 °C.

Ylia olevat tulokset viittaavat vahvasti siihen, etta 20 - 70 tilavuus/tilavuus-% etanolia sisaltavilia vehikkeleilla ja erityisesti sellaisilla, joissa on 30 -30 60 % etanolia, on ainutlaatuinen kyky hajottaa sarveisker- rosta, joka ominaisuus viittaa ihon kautta tapahtuvan vir-tauksen suurenturoiseen.

Esiroerkki 6 (Vertailu)

Kayttåen esiroerkin 2 menetelmåa, routta kayttaen 35 piroksikaamin asemesta kyllastettyja metyylisalisylaatin « « 24 92650 ja ibuprofeenin, 2-(4-isobutyylifenyyli)propionihapon, liuoksia etanoli/Sorensenin puskuriliuoksissa, jotka kukin sisalsivåt 0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-oktadekeenihap-poa (oljyhappo), saatiin seuraavat suhteellista virtausta 5 karvattoman hiiren ihon låvitse koskevat tulokset.

Metyylisalisylaatin suhteellinen virtaus karvatto-man hiiren ihon lavitse etanoli/puskurivehikkeleis-tå, jotka sisalsivåt 0,25 tilavuus/tilavuus-% oljy-happoa 10 % etanolia/puskuria Suhteellinen tilavuus/tilavuus virtaus* 0/100 i 20/80 6 30/70 11,5 15 40/60 80 50/50 200 60/40 450 70/30 300 100/0 4 (arvioitu) 20 ♦Virtaus suhteessa siihen, joka saatiin kåytettåesså 0/100 etano1i/puskur ia.

Ibuprofeenin suhteellinen virtaus karvattoman hiiren ihon låvitse etanoli/puskurivehikkeleistå, jotka si-25 sålsivåt 0,25 tilavuus/tilavuus-% bljyhappoa % etanolia/puskuria Suhteellinen tilavuus/tilavuus virtaus* 0/100 1r0 20/80 1r5 30 30/70 1r ® 40/60 3r5 50/50 5 60/40 4T5 70/30 4r5 35 100/0 4-*5 25 92650 *Virtaus suhteessa siihen, joka saatiin kåytettåesså 0/100 etanoli/puskuria.

Es inter kk i 7 (Vertailu)

Doksatsosiinin ihon kautta tapahtuva virtaus kar-5 vattoman hiiren ihon låvitse

Luovuttajaliuokset valmistettiin liuottarnalla doksatsosiinin vapaata emastå 30 tilavuus/tilavuus-% etano-li/puskuriliuokseen (0,1 M natriumasetaatti, pH 5), joka sisalsi 0,5 tilavuus/tilavuus-% 1-dodekyyliatsa-syklohep-10 tan-2-onia (Azone) ja mååråtyn maårån metaani- sulfonihap-poa (mesylaatti). Kaytettiin neljåa erilaista doksatsosii-nikonsentraatiota, jotka olivat valilla 2,2 - 8,95 mg/ml, vehikkeleissa, jotka sisalsivat joko 1,3 tai 2,2 mg/ml mesylaattia. Otettiin mukaan suurimman luovuttajakonsen-15 traation omaava kontrolli, jossa ei ollut Azonea. Vastaan-ottajaliuokset sisHlsivat ainoastaan 30 tilavuus/tila vuus-% etanoli/puskuria.

Doksatsosiinin analyysi suoritettiin kMyttåen kor-keapainenestekromatografiaa ja osoittamista UV:n avulla 20 aallonpituudella 246 nm. Liikkuva faasi kasitti 6 mM 1-oktaaninatriumsulfonaattia, 35 % (tilavuus/tilavuus) ase-tonitriiliM ja 1 % (tilavuus/tilavuus) tetrahydrofuraania 0,1 H natriumdivetyortofosfaattipuskuriliuoksessa. Lopul-linen pH sSSdettiin 3,0:ksi 85 % (paino/tilavuus) ortofos-25 forihapon avulla. Analyysin aikana pidettiin virtausnopeu-tena 1,3 ml/min Waters Nova-Pak (15 cm, 3 μm:n hiukkasia) C18-pylvMSn lavitse, jonka låmpotila oli saSdetty termo-staatin avulla 38 eC:seen. Kaikki nåytteet (ja standardit) i laimennettiin våhintåån 1:1 liikkuva11a faasilla ennen 30 sisaSnruiskuttamista. Huipun korkeustarkistuskåyrat olivat lineaarisia ja toteamisraja oli suunnilleen o,05 μg/ml.

Kuten seuraavissakin kokeissa, joissa kaytettiin glipitsidiå, virtausnopeudet laskettiin HPLC-tiedoista. Tuloksista on yhteenveto taulukossa.

26 9 2 6 5 0

Doksatsosiinin kulkeutuminen in vitro karvattoman hiiren ihon lMvitse kåytettåesså liukoista mesy-laattisuolaa vehikkeleisså, jotka sisalsivåt 30 % etanolia ja 1/2 % Azonea 5 Konsentraatio

Luovut- Mesy- tajaa laatti Azone1^ . Virtausc Viivåstymå (mq/ml) (mq/ml) t/t-% pHP (mg/py/30 cm2) (h) 8.95 2.2 0.5 4.3 59.4 2,1 (7 5) 10 8,55 2.2 — 4,2 0,6 < 1,5 (0,1) r 4,31 2,2 0,5 4,8 32,1 2,5 15 (15,2) 6,82 1,3 0,5 4,6 42,3 1,8 19,7) 4,35 1,3 0,5 4,8 30,2 1,5 20 (4,4) 4.24 1,3 0,5 4,9 28,7 1,8 2.24 1,3 05 5,1 12,2 1,6 (5,6) 25 2,21 1,3 0,5 5,0 13 8 2,5 (6,4) a) Doksatsosiinin konsentraatio vapaana emåksena.

b) Luovuttajafaasin lopullinen pH (alku-pH oli kai-30 kissa tapauksissa 5,0).

c) Suluissa olevat luvut tarkoittavat keskiarvon keskihajontaa.

d) 0,5 tilavuus/tilavuus-% vastaa 0,46 paino/tila- vuus-%.

• · > 27 92650

Tarkastelu

Virtaus in vitro oli valilta 12 - 59 mg/pv/30 cm2, riippuen kysymyksessM olevasta l,uovuttajan doksatsosiini-konsentraatiosta. Virtauksen ja luovuttajan konsentraation 5 vålinen suhde oli selvasti lineaarinen ja riippumaton me-sylaatista. Suurin testattu konsentraatio (so. 8,95 mg/ml) edustaa doksatsosiinimesylaatin kyllastysliukoisuutta 30 % etanoli/puskuriliuokseen (0,1 M asetaatti, pH 5) ja rajakul jetusnopeutta 25 °C:ssa. Kontrolli (ei Azonea) -luovut-10 tajavehikkelillå saatiin virtaus 0,6 mg/pv/30 cm2, mika on suunnilleen 100 x vahemman kuin vastaavalla vehikkelillå, jossa oli Azonea.

Samoissa olosuhteissa kuin yllå, saatiin luovutta-jaliuoksella, jossa oli 2,40 mg/ml doksatsosiinin vapaata 15 emastå (ei mesylaattia) 55 tilavuus/tilavuus-% etanoli/- puskuriliuoksessa, joka sisalsi 3 tilavuus/tilavuus-% Azonea, virtaus 46,2 mg/pv/30 cm2.

Esimerkki 8 (Vertailu)

Glipitsidin ihon kautta tapahtuva virtaus karvat-20 toman hiiren ihon lavitse

Glipitsidin, l-sykloheksyyli-3-[[p-[2-(metyylipy-ratsiinikarboksamido)etyyli]fenyyli]sulfonyyli]urean ihon kautta tapahtuva virtaus liuoksissa, joissa on 20, 30 ja 55 % etanolia (tilavuus/tilavuus) kayttaen Azonea, N-dode-25 kyyli-l-atsasykloheptan-2-onia, tunkeutumista lisåavanå aineena. Kukin vehikkeli testattiin kMyttaen 0,5 tilavuus/tilavuus-% Azonea7 ja ilman Azonea noin pH:ssa 9 0,01 M Tris-puskuriliuoksessa. Vastaanottajalokerossa kaytet-tiin luovuttajaliuoksen vastinetta ilman glipitsidiS tai 30 Azonea.

* Glipitsidin analyysi suoritettiin kåyttåen HPLC ja 228 nm:n UV-detektoria. Liikkuva faasi kSsitti 41 tilavuus/tilavuus-% asetonitriiliå o; 1 M natriumdivetyfosfaat- 35 7Azonen tiheys on 25 °C:ssa 0,912 g/ml. Azone-liuokset ovat siten kukin 0,46 paino/tilavuus-%.

♦ 28 92650 tipuskuriliuoksessa. Lopullinen pH såådettiin 4,0:ksi 85 paino/tilavuus-% fosforihapolla. Liikkuvan faasin virtaus-nopeutena pidettiin 1,0 ml/min Waters Novapak -pylvaån (15 cm, hiukkaskoko 3 μιη) låvitse 32 °C:ssa. Kaikki naytteet 5 laimennettiin vahintaSn 1:1 liikkuvalla faasilla ennen sisaSnruiskuttamista. Huipunkorkeustarkistuskåyrat olivat lineaarisia ja toteamisraja noin 0,05 /ig/ml. HPLC-analyy-sin tuloksista laskettiin karvattoman hiiren ihon lavitse aikayksikossa kulkeutunut glipitsidimåårå ja se ilmoitet-10 tiin vakiotilannevirtauksena. Tuloksista on yhteenveto alia olevassa taulukossa.

Glipitsidin kuljetus in vitro karvattoman hiiren ihon lSvitse

Glipitsidi Azone EtOH Virtausa Viivåstymå 15 (mg/ml) (t/t-%) (fc/t-%) pH (mg/pv/30 cm2) _(h)_ 1 ^ τ ^ 8p5 55 8,3 30,8 (6,5) 3,6 17r9 " 55 9,1 2,7 (0,5) 4,6 8,1 0,5 30 8,8 101,4 (10,3) 1,7 20 8,2 — 30 8,9 0,6 (0,2) 0,4 6,8 0,5 20 8,8 55,9 (38,8) 3,3 6r7 — 20 8,9 0,4 (0,04) 0,5 • 25 a) Suluissa olevat luvut tarkoittavat keskiarvon keskihajontaa.

Tarkastelu

Glipitsidin kuljetus in vitro karvattoman hiiren ihon lSvitse oli vMliltH 30,8 - 101,4 mg/pv/30 cm2. Laake-30 aineen konsentraation suurentaminen ei valttamatta johta-nut suurentuneeseen virtaukseen. Suurin virtaus havaittiin 30 % etanolissa, joka sisalsi 0,5 tilavuus/tilavuus-% Azo-nea. Vaikka lMMkeaineen konsentraatio oli tåsså vehikke-lissa ainoastaan puolet 55 % etanolivehikkelissa olleesta 35 konsentraatiosta, oli kuljetusnopeus suunnilleen 3,5 ker- 29 92650 taa suurempi. Samankaltainen kåyttåytyminen havaittiin esimerkisså 1 amlodipiinin tapauksessa.

Esimerkki 9

Liuosvalmisteita valmistetaan seuraavasti: 5 A. Oljyhappoa 0,25 g

Amlodipiinibentseenisulfonaattia 1,0 g Propyleeniglykolia 40,0 ml Vettå g.s. 100 ml:aan asti NaOH g.s. pH:n sååtåmiseksi 5', 0:ksi 10 B. Oljyhappoa 0,25 g

Piroksikaamia 1,0 g Glyserolia 40,0 ml Vettå g.s. 100 ml:aan asti NaOH g.s. pH:n sååtåmiseksi 7,5:ksi 15 C. Oljyhappoa 0,25 g

Piroksikaamia 1,0 g Etanolia 20,0 ml Propyleeniglykolia 40,0 ml Vettå g.s. 100 ml:aan asti 20 NaOH g.s. pH:n sååtåmiseksi 7,5:ksi D. Oljyhappoa 0,5 g Piroksikaamia 1,0 g Etanolia 20,0 ml Glyserolia 40,0 ml 25 Vettå g.s. 100 ml:aan asti

NaOH g.s. pH:n sååtåmiseksi 7,5:ksi E. Oljyhappoa 0,25 g Piroksikaamia 1,0 g Etanolia 20,0 ml 30 Propyleeniglykolia 40,0 ml

Fosforihappoa 0,1 ml Vettå g.s. 100 ml:aan asti NaOH g.s. pH:n sååtåmiseksi 7,5:ksi

Esimerkki 10 35 Seuraavat ovat keksinndn mukaisesti valmistettujen 30 ' 92650 koostumusten kuvaavia geeliformulaatioita.

A. Tunkeutumista lisååvåå ainetta9 0,01 - 5,0 g Carbopol® 940: tå 1,0 g Bentsyylialkoholia 1,0 g 5 Di-isopropanoliamiinia 1,0 g

Hydroksietyyliselluloosaa 0,5 g

Yhtå tai useampaa veteen sekoittuvaa liuotinta10 15-75 ml

Metyylisalisylaattia 10 g 10 Vettå q.s. 100 ml:aan asti B. Oljyhappoa 0,25 g Carbopol 940:tå 0,70 g Bentsyylialkoholia 1,0 g Di-isopropanoliamiinia 1,0 g 15 Hydroksietyyliselluloosaa 0,4 g

Piroksikaamia 0,5 g Etanolia 25,0 ml Propyleeniglykolia 20,0 ml Vettå q.s. 100 ml:aan asti 20 Aineosat yhdistetåån, låmmitetåån sekoittaen dis- pergoitumisen aikaansaamiseksi ja annetaan jååhtyå huo-neenlåmpotilaan.

®Carbopol 940 on polyakryylihappopolymeeri, jota on saata-25 vissa toiminimellå B.F. Goodrich Co., Inc.

’Tunkeutumista lisååviå aineita oVat cis-9-oktadekeenihap-po (oljyhappo), cis-ll-oktadekeenihappo ja 1-dodekyyli-atsasykloheptan-2-oni.

30 ,0Veteen sekoittuvia liuottimia ovat etanoli, propyleeni-glykoli, polyetyleeniglykoli ja glyseroli.

C. Oljyhappoa 0,25 g Carbopol 934:åå 0,70 g Bentsyylialkoholia 1,0 g 35 Trietanoliamiinia 1,1 g

Hydroksietyyliselluloosaa 0,4 g Piroksikaamia 1,0 g 31 92650

Glyserolia 30,0 ml Vettå g.s. 100 ml:aan asti

Aineosia kåsitellåån, kuten yllå kohdassa B halutun geelin muodostamiseksi.

5 Esimerkki 11

Seuraavat seokset ovat esimerkkejå hydrofiili- sis-ta salvoista keksinnon mukaisesti valmistettujen valmis-teiden annostusrouotoina.

A. Oljyhappoa 0,25 g 10 Aktiivista aineosaa12 1 - 5 g PEG 4000:tan 17,0 g PEG 400:aa11 17,0 g

Yhtå tai useampaa veteen sekoittuvaa liuotinta13 15 -55 ml i 15 Vetta q.s. 100 ml:aan asti UPEG200 on kaupallinen polyetyleeniglykoli, jonka molekyy-lipaino on 190 - 210. PEG 400 on kaupallinen polyetyleeniglykoli, jonka molekyylipaino on 380 - 420. PEG 4000 on 20 kaupallinen polyetyleeniglykoli, mol.p. 3 000 -3 700.

12Aktiivisisia aineosia ovat metyylisalisylaatti, salisyy-lihappo, ibuprofeeni, piroksikaami, amlodipiinibentseeni-sulfonaatti, doksatsosiinimesylaatti ja glipitsidi.

,3Veteen sekoittuvia liuottimia ovat etanoli, propylee-25 niglykoli, polyetyleeniglykoli ja glyseroli.

B. Oljyhappoa 0,25 g Piroksikaamia 1,0 g PEG 4000:ta 17,2 g PEG 200:aan 17,2 g 30 Propyleeniglykolia 30,0 ml

Vetta q.s. 100 ml:aan asti t

Esimerkki 12 DSC:n avulla mååritetyn lipidien sulamislåmpotilan korrelointi bljyhappoa sisåltåvien vesipitoisten 35 vehikkelien glyserolikonsentraation kanssa Kåyttåen yllå olevan esimerkin 4 menetelmåå sian sarveiskerrosnåytteiden lipidien transitiolåmpotilan måa- g g f. π r.

y jl l, - ϋ 32 rittåmiseksi DSC-kalorimetrian avulla mååritettiin sula-mislåmpdtila, Tm, sarveiskerrokselle erilaisissa glysero-li/0,1 M Tris-puskuriliuoksissa (pH 6,8 - 7,3), jotka ku-kin sisålsivSt 0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-oktadekeeni-5 happoa (oljyhappo) (0,22 paino/tilavuus-%). Tuloksista on yhteenveto seuraavassa taulukossa.

% glyserolia (t/t-%;

0,1 M Tris-puskuri (pH

6/8 - 7,3) -vehikkeleisså, Sian sarveiskerroksen lipi- 1n jotka sisåltåvåt 0,25 t/t-% dien transitiolåmpotila, Tm, *·0 61 jyhappoa _ o q 0/100 58 20/80 62,5 40/60 57 15 60/40 54 80/20 59

Samoissa olosuhteissa saatiin sarveiskerrosnåyt-teille pelkåsså 0,1 M Tris-puskuriliuoksessa (pH 6,8 -20 7,3) (ei glyserolia eika cis-9-oktadekeenihappoa (oljyhap po) ] Tm 61 C.

YllS olevat tulokset osoittavat, ettå noin 40 -60 % glyserolia sis&ltMvåt vehikkelit kykenevåt hajotta-- maan sarveiskerrosta, mikå ominaisuus viittaa ihon kautta 25 tapahtuvan virtauksen lisååntymiseen, kuten todettiin esi-merkissa 5.

Esimerkki 13 (Vertailu) DSC-kalorimetrian avulla maåritetyn lipidien sula- mislåmpotilan korrelointi oljyhappoa ja Tris-pus-30 kuria sisaltavien vesipitoisten vehikkelien etano- likonsentraation kanssa KMyttSmSlla yllS olevan esimerkin 4 menetelmåå, sian sarveiskerrosnåytteiden lipidien transitiolampotilan mMårittamiseksi DSC-kalorimetrian avulla maåritettiin su-35 lamislampotila, Tm, sarveiskerrokselle erilaisissa etano- li/0,1 M Tris-puskuriliuoksissa (pH 6,8 - 7,3), jotka ku- 33 92650 kin sisålsivåt 0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-oktadekeeni-happoa (oljyhappo) (0,22 paino/tilavuus-%). Tuloksista on yhteenveto seuraavassa taulukossa.

% etanolia (t/t-%)

5 0,1 M Tris-puskuri (pH

6,8 - 7,3) -vehikkeleisså, Sian sarveiskerroksen lipi- jotka sisålsivat 0,25 t/t-% dien transitiolåmpotila, Tm, oljyhappoa _ __ 0/100 58 20/80 59 10 40/60 55 60/40 59 80/20 61

Samoissa olosuhteissa saatiin sarveiskerrosnåyt-15 teille pelkassa 0,1 M Tris-puskuriliuoksessa (pH 6,8 -7,3) [ei etanolia eika cis-9-oktadekeenihappoa (dljyhap-po)] Tm 61 °C.

Kun ylla olevia tuloksia verrataan esimerkissa 5 saatuihin, ne osoittavat, etta vaikka yllå olevat, noin 40 20 % etanolia 0,1 M Tris-puskurissa·(pH 6,8 - 7,3) sisaltavat etanolivehikkelit hajottavat sarveiskerrosta, on vaikutus jonkin verran våhentynyt verrattuna samankaltaisiin vehik-keleihin, jotka ovat Sorensenin puskurissa (esimerkki 5). Esimerkki 14 • · 25 DSC-kalorimetrian avulla mSaritetyn lipidien sula- mislampotilan korrelointi oljyhappoa sisSltavien vesipitoisten vehikkelien polyetyleeniglykoli 200 (PEG 200) konsentraation kanssa KMyttaen yllå olevan esimerkin 4 menetelmåå, sian 30 sarveiskerrosnåytteiden lipidien transitiolMmpotilan maa- rittamiseksi DSC-kalorimetrian avulla måaritettiin sula-mislampotila, Tm, sarveiskerrokselle erilaisissa PEG 200/0,1 M Tris-puskuriliuoksissa (pH 6,8 - 7,3), jotka kukin sisålsivåt 0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-oktade-35 keenihappoa (oljyhappo( 0,22 pairio/tilavuus-%). Tuloksista . on yhteenveto seuraavassa taulukossa.

92650 34 % PEG 200:a (t/t-%)

0,1 M Tris-puskuri (pH

6,8 ~ 7,3) -vehikkeleisså, Sian sarveiskerroksen lipi- jotka sisålsivåt 0,25 t/t-% dien transitiolåmpotila, Tm, dljyhappoa oc 5 0/100 59 20/80 59 40/60 57f5' 60/40 57 80/20 61 10

Samoissa olosuhteissa saatiin sarveiskerrosnåyt-teille pelkasså 0,1 M Tris-puskurissa (pH 6,8 - 7,3) [ei PEG 200:aa eika cis-9-oktadekeenihappoa (oljyhappo)] Tm 61 °C.

15 Y11S olevat tulokset osoittavat, ettM noin 40 - 60 % PEG 200:aa sisåltåvåt vehikkelit kykenevSt hajotta-maan sarveiskerrosta, mika ominaisuus viittaa ihon kautta tapahtuvan virtauksen lisåantymiseen, kuten on todettu esimerkissM 5.

20 Esimerkki 15 DSC:n avulla mMaritetyn lipidien sulamislåmpotilan korrelointi dljyhappoa si^altéivien vesipitoisten vehikkelien etanoli- ja propyleeniglykoli (PG) -konsentraatioiden kanssa *25 KayttSen ylla olevan esimerkin 4 menetelmåå, sian sarveiskerrosnaytteiden lipidien transitiolampotilan maa-rittMmiseksi DSC-kalorimetrian avulla maSritettiin sula-mislampotila, Tm, sarveiskerrokselle erilaisissa etanoli/-PG/0,1 M Tris-puskuriliuoksissa (pH 6,8 - 7,3), jotka ku- 30 kin sisSlsivSt 0,25 tilavuus/tilavuus-% cis-9-oktadekeeni-happoa (dljyhappo) (0,22 paino/tilavuus-%). Tuloksista on yhteenveto seuraavassa taulukossa.

• · t 35 92650 % etanolia ja PG:a (t/t/t-%)

0,1 M Tris-puskuri (pH

6,8 - 7,3) -vehikkeleisså, Sian sarveiskerroksen lipi- jotka sisålsivåt 0,25 t/t-% dien transitiolåmpotila, Tm, oljyhappoa__ 40/20/40 58,5 33/33/34 59 66/34/0 60 20/40/40 55 40/40/20 60 10 34/66/0 61

Samoissa olosuhteissa saatiin sarveiskerrosnayt-teille pelkåsså 0,1 M Tris-puskurissa (pH 6,8 - 7,3) [ei etanolia eikS PG:aa eikS cis-9-oktadekeenihappoa (Sljyhap-po)] Tm 62,5 °C.

15 Ylla olevat tulokset osoittavat, ettå vesipitoiset vehikkelit, joissa on kahta sekoittuvaa liuotinta, kykene-våt hajottamaan sarveiskerrosta ja etta hajaannuksen aste voi vaihdella liuottimien keskinåisen suhteen mukaan (ver-taa suhdetta 40:20:40, jossa Tm oli 58,5 °C, suhteeseen 20 20/40/40, jossa Tm oli 55 °C).

♦ «

Claims (6)

36 92650

1. Menetelma ihon kautta tapahtuvaa virtausta li-såavan farmaseuttisen valmisteen, joka on tarkoitettu an- 5 nettavaksi ihon kautta ihmiselle tai alemmalle elåimelle, valmistamiseksi, tunnettu siita, etta sekoitetaan (a) turvallinen ja tehokas maårå farmakologisesti aktiivista yhdistettå, joka on valittu ryhmåsta, joka koostuu metyylisalisylaatista, salisyylihaposta, ibupro- 10 feenista, amlodipiinista, glipitsidista, doksatsosiinista, piroksikaamista, piroksikaamin esilåSkkeesta ja naiden farmaseuttisesti hyvMksyttåvistå kationi- ja happoadditio-suoloista, (b) vesipitoinen liuotinjårjestelmå, joka sisaltaa 15 noin 15 - 75 tilavuus-% yhta tai useampaa veteen sekoittu- vaa liuotinta, joka on valittu ryhmastå, joka koostuu eta-nolista, propyleeniglykolista, polyetyleeniglykolista ja glyserolista, ja (c) noin 0,01 - 5 % (paino/tilavuus) tunkeutumista 20 lisååvåå ainetta, joka on valittu ryhnråstS, joka koostuu N-dodekyyli-l-atsasykloheptan-2-onista, dljyhaposta ja cis-vaksenihaposta edellyttSen, ettå kun vesipitoinen li-uotinjarjestelmS sisSltaa yhta veteen sekoittuvaa liuotinta, se ei ole etanoli ja kun se sisSltSS kahta veteen se-25 koittuvaa liuotinta, ne eivSt ole etanoli ja polyetylee-niglykoli.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta kohdan (b) liuottimen tai liuotinyhdistelmMn mSårå on 10 %:n tarkkuudella se maara, 30 jolla saavutetaan mainitun yhdisteen tai esila¾keen opti-maalinen ihon kautta tapahtuva virtaus.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, tunnettu siita, etta kohdassa (b) vesipitoinen liuotinjårjestelma sisaltaa 20 - 60 tilavuus-% yhtå tai 35 useampaa veteen sekoittuvaa liuotinta. c • ·« . 37 92650

4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen me-netelmå, tunnettu siita, etta piroksikaamin esi-laakkeella on kaava ’ i r^i O ^NH--U J ocos I n II r<YV”"-y ^ySA

10 UX,/CH3 ' °2 2 ja niiden farmaseuttisesti hyvaksyttavat kationi- ja hap-poadditiosuolat, 15 jossa R on (C,_9) alkyyli, joka voi olla suoraketjuinen tai haarautunut, CHfR^OCOR2, jossa R1 on H tai (C,.3)alkyyli ja R2 on (CM) alkyyli tai (CM) alkoks i.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta piroksikaamin esilMMkkeella 20 on kaava Q Λ JD o ΝϊΗ-—y OCOR I J II 1 conkU v Ί X^ -C

25 L *1 NCH tai X^/\S-NCfi3 s/ 0. °2 2 jossa R on (C^) alkyyli, CH2OCOC(CH3)3 tai CH(CH3)OCOC(CH3)3.

6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen me- netelmM, tunnettu siita, ettå veteen sekoittuvat liuottimet on valittu ryhmSsta, joka koostuu etanolista ja glyserolista. 38 92650 i