FI91073C - Parannettu menetelmä ja peptidi AIDS-sukuisten tautien osoittamiseksi - Google Patents
Parannettu menetelmä ja peptidi AIDS-sukuisten tautien osoittamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI91073C FI91073C FI865313A FI865313A FI91073C FI 91073 C FI91073 C FI 91073C FI 865313 A FI865313 A FI 865313A FI 865313 A FI865313 A FI 865313A FI 91073 C FI91073 C FI 91073C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- leu
- glu
- gln
- ala
- lys
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 183
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 7
- 208000012124 AIDS-related disease Diseases 0.000 title 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 92
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 35
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 21
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 14
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 13
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 5
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 claims 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 21
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 3
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 2
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 abstract 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 26
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 9
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 9
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 9
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 7
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 7
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- -1 gp65 Proteins 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 5
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 3
- 102100033620 Calponin-1 Human genes 0.000 description 3
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 description 3
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 3
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000906736 Escherichia phage Mu DNA circularization protein N Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N Magnesium oxide Chemical compound [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800005164 Peptide V Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 101000764570 Streptomyces phage phiC31 Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 1
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 102000004860 Dipeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090001081 Dipeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 229940126656 GS-4224 Drugs 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 241001174911 Iasis Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical group CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 101800001386 Peptide II Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010038997 Retroviral infections Diseases 0.000 description 1
- 101150007770 SLS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 101710100266 Serine/threonine-protein phosphatase 6 catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 1
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 125000004119 disulfanediyl group Chemical group *SS* 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 150000002742 methionines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 108010053118 myohemerythrin Proteins 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006069 physical mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229940064914 retrovir Drugs 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/66—General methods for inserting a gene into a vector to form a recombinant vector using cleavage and ligation; Use of non-functional linkers or adaptors, e.g. linkers containing the sequence for a restriction endonuclease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
i 91073
PARANNETTU MENETELMA JA PEPTIDI AIDS-SUKUISTEN TAUTIEN OSOITTA-MISEKSI
Kun todettiin, ettS tarttuva retrovirus, joihin kuuluu lymf-adenopatiavirus (LAV), ihmisen T-solulymfotrooppinen virus-III (HTLV-III), AIDS-sukuinen virus (ARV) ja immunipuutokseen liit-tyvå virus (IDAV), aiheuttaa taudit, joita kutsutaan nimilla lymfadenopatiasyndrooma ja hankittu immuunipuutostauti (AIDS), syntyi akillinen tarve todeta taudin mahdolliset tartunnanlåh-teet, kuten sairastuneen ihmisen veri, jota voidaan kåyttåå verensiirtoihin, tai josta voidaan erottaa erityisiå veriteki-jdita.
Taudin potentiaalisten tartunnanlahteiden osoittamisessa tarvi-taan virusproteiineja ja/tai tallaisten proteiinien vasta-ai-neita. LAV/HTLV-III-retroviruksen viljelemiseen liittyvistå vaaroista johtuen on tarpeellista kehittaa menetelmia, joilla saadaan virusproteiineja tai niiden immunologisia ekvivalentte-ja, jolloin ei ole tarpeen kåsitella suuria maåria elavaa, mah-dollisesti tarttuvaa virusta. Vaihtoehtoja valittaessa tulee huomioida se seikka , ettS virusten on raportoitu olevan erit-tåin monimuotoisia ja usein muuttuvia niita kasiteltaessa.
Lyhyt kuvaus asiaan liittyv&sta kirjallisuudesta
Retrovirusten erilaisia antigeeneja kuvasivat Saxinger et al., Science (1985) 227:1036-1038. Kuten myos Gallo et al., ibid.
(1984) 224:500; Sarangadharn et al., ibid. 224:506; Barre-Sinoussi et al.: ibid. (1983) 220:868; Montagnier et al., in Human T-Cell Leukemia/Lymphoma Virus, Gallo, Essex, Gross, eds. (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York), 1984, s.363. NSihin voi kuulua, muttei rajoitu, pl3, pl8, p25, p36, gp43, p55, gp65, gpllO, jne., joissa numerot voivat vaih-della raportoijasta riippuen.
2
Hopp ja Woods, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1981) 2£:3824, kuvasivat kriteerit peptidien valitsemiseksi polypeptidien potentiaalisiksi epitoopeiksi riippuen niiden suhteellisesta hydrofiilisyydestå. Erååsså tutkimuksessa kåytettiin nåitå kriteerejå ja syntetisoitiin 12 aminohapon peptidi joka sitoi 9 \ natiiviproteiinin antibodeista (Hopp, Molec. Immunol. (1981) 16.:869). Yleisesti, on osoitettu, ettei Hopp/Woods-kriteereillå ole korkeaa ennustearvoa. Edelleen, on esitetty epitooppeja, jotka eivåt ole hydrofiilisiå (Kazim et al., Biochem. J. (1982) 203:201). Muihin tutkimuksiin polypeptidien antigeenisyydestå kuuluvat: Green et al., Cell (1982) 2£:477, jossa tehtiin peptideja jotka toivat esiin antibodeja jotka pystyivåt tarttumaan natiiviproteiiniin, kun taas kåån-tåen natiiviproteiinin esiin tuomat antibodit eivåt voineet tarttua peptideihin; ja Trainer et al., Nature (1984) 212:127, jonka tulokset myohemerytriinillå vastasivat Green et al.:n tuloksia.
Wain-Hobson et al., Cell (1985) 4£:9 raportoivat LAV:n tåy-dellisen nukleotidisekvenssin. HTLV-III:n tåydellisen sek-venssin esittivåt Muesing et al., Nature (1985) 313:450. ja ARV:n tåydellisen sekvenssin esittivåt Sanchez-Pescador et al., Science (1985) 227:484. Nåmå kaikki kolme virusta osoit-tavat olennaista nukleotidihomologiaa ja ne ovat samanlaisia morfologialtaan, sytopatologialtaan ja vaatimuksiltaan opti-maalisen kåånteisen transkriptaasin aktiivisuuden suhteen, sekå ainakin muutamien antigeenisten ominaisuuksien suhteen (Levy et al., Science (1984) 226:840; Shupbach et al.,
Science (1984) 224:503). ja nåin niitå voidaan pitåå saman viruksen eri muotoina (isolates). Katso myos, Chang et al.; Science (1985) 228:93.
Keksinnon yhteenveto;
Peptidisekvenssejå, jotka pystyvat immunologisesti jåljitte-lemåån LAV/HTLV-III-retroviruksen aafl“ ja/tai env-alueiden koodaamia proteiineja, voidaan kåyttåå reagensseina seulotta-
II
91073 3 essa verta ja verituotteita retrovirustartunnan havaitsemi-seksi. Peptidit ovat ainakin kuuden aminohapon pituisia ja niitå voidaan kåyttåå erilaisissa spesifisisså sidontamene-telmisså osoittamaan LAV/HTLV-III-viruksen antibodeja tai sen antigeenejå, tai immunogeeneinå.
Spesifien suoritusmuotojen kuvaus: Tåsså kuvauksessa viruksen katsotaan olevan sama tai ekviva-lentti LAV/HTLV-III-viruksen kanssa mikåli se tåyttåå oleel-lisesti seuraavat kriteerit: a) Virus on trooppinen T-lymfosyyteille, erityisesti T-autta-jasoluille (CD4+, kansainvålisen luokituksen mukaan, kuvattu-na Bernard et al., eds. Leucocyte Typing. New York: Springer Verlag, 1984); b) Virus on sytopaattinen infektoiduille CD4+-soluille (enneramin kuin transformoiva, kuten HTLV-I ja -II); c) Virus koodaa RNA-riippuvaista DNA-polymeraasia (kåånteinen transkriptaasi) joka vaatii Mg2+-ionia (optimikonsentraatio 5mM), jonka pH-optimi on 7,8, jota ei voi inhiboida aktino-mysiini-D:llå ja joka voi kåyttåå oligo(dT)12-18 priimerinå kåånteiselle transskriptiolle alkaen 3'-pååstå (LTR); d) Virus kerååntyy sakkaroosigradienttiin jonka tiheys on n. 1,16; e) Viruksen voi leimata [3H]-uridiinilla; f) Virus reagoi immunologisesti oleellisesti ristiin LAV/HTLV-III:n aaa- ja env-alueiden koodaamien proteiinien kanssa; ja g) Virus on oleellisesti homologinen nukleotidien (n. 75 -100 %) ja aminohapposekvenssin (n. 75 - 100¾) suhteen LAV-tai HTLV-III-kanssa.
4
On kehitetty uusia peptidejå jotka immunologisesti jåljitte-levåt LAV/HTLV-III-retroviruksen koodaamia proteiineja, eri-tyisesti virusgenomin gag- ja/tai eny-alueiden koodaamia proteiineja. Ettå voitaisiin tehdå ketjusta-ketjuun-variaatioita eri isolaateille, voidaan tehdå jårjestelyjå konservatiivi-sille substituutioille ja valintaa vaihtoehdoista joissa teh-dåån ei-konservatiivisia substituutioita. Nåitå peptidejå voidaan kayttåå yksitellen tai yhdesså osoitettaessa virusta tai sen antibodia fysiologisesta nåytteestå. Riippuen testi-menetelmåstå, peptidit voivat olla leimattuja tai leimaamat-tomia, sidottuja kiinteåån pintaan, konjugoituja kantajaan tai muihin yhdisteisiin, tms.
Halutut peptidit voidaan johtaa gag- ja/tai env-alueiden koo-daamista peptideistå. Nåmå peptidit johdetaan primååristi p55:5tå tai sen osista esim. p25:sta ja p16:star tai gp150:sta ja sen osista, esim. gp41:sta. Nåille peptideille annetaan roomalaiset numerot mutta niille annetaan myos nume-raaliset kuvaukset jotka ovat mielivaltaisessa yhteydesså niiden valmistustapaan.
gag-alueella erityisen kiinnostavia ovat koodaavat alueet ulottuen LAV/HTLV-III-retroviruksen emåsparista (bp) n. 450 bp 731:een, erityisesti våleiltå bp 450 - bp 545 (97) ja bp 696 - bp 731 (71); alueet n. bp 900 - bp 1421, erityisesti våleiltå n. bp 921 - bp 1016, sisåltåen bp 921 - bp 1010; bp 972 - bp 1016 (92); ja bp 936 - bp 995 (17); tai n. bp 1158 - n. bp 1400, erityisesti bp 1164 - bp 1250 (90); bp 1278 - bp 1385 (88); ja bp 1320 - bp 1385 (15). (Numerointi vastaa Wain-Hobson et al., supra.) (Katso Liite 1).
env-alueella erityisen kiinnostavia alueita ovat polypeptidit jotka on koodattu alueilla bp 7210 - bp 7815, erityisesti vålillå bp 7231 - bp 7794, erityisemmin våleillå bp 7246 - bp 7317 (36), bp 7516 - bp 7593 (39), erityisesti våleillå bp ti 91073 5 7543 - bp 7593 (79) ja bp 7561 - bp 7593 (78), bp 7708 - bp 7779 (23), bp 7630 - bp 7689 (40), bp 7498 - bp 7554 (56).
Kiinnostavat peptidit sisSltåvåt våhintåån kuusi, joskus kahdek-san, joskus kaksitoista, ja våhenunån kuin 50, mieluiranin vShem-mån kuin n. 35 ja mieluimmin våhemmån kuin n. 25 aininohappoa sisåltyen LAV/HTLV-III-retroviruksen koodaamaan sekvenssiin. Jokaisessa tapauksessa oligopeptidi on mieluiten niin pieni kuin mahdollista kuitenkin siten, ettå sillå on oleellisesti kaikki suuremman peptidin aktiivisuus. Joissain tapauksissa voi olla suositeltavaa yhdiståå kaksi tai useampia oligopeptide jå, jotka eivåt mene påållekkåin samassa peptidiraken-teessa tai yksittåisinå peptideinå, joilla erikseen tai yh-desså on ekvivalentti herkkyys isåntåån.
Peptideja voidaan muokata lisååmållå konservatiivisia tai ei-konservatiivisia substituentteja peptideihin siten, ettå yleenså våhemmån kuin 20 %, mieluummin våhemmån kuin 10 % peptideistå vaihdetaan. Niisså tapauksissa, joissa alueiden on huomattu olevan polymorfisia, voi olla tarpeen vaihtaa yksi tai useampia tiettyjå aminohappoja ettå saataisiin tehokkaampi jaljittely eri retroviruskantojen eri epitoopeil-le. Monissa tapauksissa metioniini voidaan korvata norleusii-nilla ettå såilytettåisiin kemiallinen ja fysikaalinen pysy-vyys .
Tulisi ymmårtåå, ettå tåmån keksinnon mukaisten polypeptidien - ei tarvitse olla identtisiå minkån erityisen LAV/HTLV-III-polypeptidisekvenssin kanssa, kunhan kyseiset yhdisteet voi-vat toimia ainakin yhden LAV/HTLV-III-retroviruskannan immunologisina kilpailijoina.
Tåten nåihin polypeptideihin voidaan kohdistaa monia muutok-sia kuten insertioita, deleetioita ja substituutioita, konservatiivisia tai ei-konservatiivisia, kun nåmå muutokset tarjoaisivat erityisiå etuja nåiden kåytosså. Konservatiivi- 6 silla substituutioilla tarkoitetaan kombinaatioita kuten gly, ala; val, ile, leu; asp, glu; asn, gin; ser,thr; lys, arg; ja phe, tyr. Yleenså sekvenssi ei eroa yli 20 \:a ainakin yhden LAV/HTLV-III-retroviruskannan sekvenssistå paitsi kun lisåt-tåvåt aminohapot lisåtåån jompaankumpaan terminaaliin ettå saataisiin tehtyå kåsivarsi joilla saataisiin keksinnon mukaiset peptidit immobilisoitua. Kåsivarret ovat yleenså våhintåån yhden aminohapon mittaisia ja voivat olla 50 tai useampia aminohappoja pitkiå, useammin 1-10 aminohappoa pitkiå.
Lisåksi yksi tai kaksi aminohappoa voidaan lisåtå oligopepti-din tai peptidin påihin mahdollistamaan peptidien helpon si-toutumisen toisiinsa, kytkeytymisen kantajaan tai suurempaan peptidiin, jåljempånå tarkemmin selitettåvistå syistå, muut-tamaan peptidin tai oligopeptidin kemiallisia tai fysikaali-sia ominaisuuksia, tai muusta syystå.
Aminohapot, kuten tyrosiini, kysteiini, lysiini, glutamiini-tai asparagiinihappo tai vastaavat, voidaan lisåtå peptidin C- tai N-terminaaliin jolloin saadaan hyodyllinen kyky sitou-tua. Erityisen kiinnostava on yhdestå kolmeen kysteiinin lås-nåolo C- tai N-terminaalissa sitomassa kantajaan. Kysteiini voi sitoutua disulfidisidoksella ditio- tai tiofunktionaali-seen kantajaan tai tioeetterisidoksella aktivoituun olefiini-kantajaan.
Lisåksi voivat peptidi- tai oligopeptidisekvenssit erota luonnollisista sekvensseistå siten, ettå sekvenssiå on modi-fioitu terminaalisen NH2.*n asyloinnilla, esim. asetyloinnil-la, tai tioglykolihapon amidoinnilla, terminaalisen karbok-syyliryhmån amidoinnilla, esim. ammoniakilla, metyyliamiinil-la jne. Joissakin tapauksissa nåillå modifioinneilla voidaan saada aikaan sitoutumiskohtia kantajaan tai toiseen molekyy-liin.
II
7 91073
Seuraavassa kuvataan kiinnostavia peptidejå ja oligopeptide-jå. Ensimmåiset kiinnostavat peptidit johdetaan qag-alueesta. erityisesti proteiineista, joita kutsutaan nimillå p25 ja p18.
p25:n peptidit ovat seuraavat:
Alueen bp 1320 - bp 1385 koodaamalla peptidi I (15):11a on seuraava aminohapposekvenssi jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit.: (I) (15) Y-Asp-Cys-Lys-Thr-1le-Leu-Lys-Ala-Leu-
Gly-Pro-Ala-Ala-Thr-Leu-Glu-Glu-Met-Met-
Thr-Ala-Cys-X, jossa X on OH tai NH2, jossa aminoterminaali Y, esixn. Tyr tai Cys on, mikåli låsnå, lisåtty helpottamaan peptidin kytkeytymistå proteiinikanta-jaan.
Alue n. bp 936 - bp 995 koodaa seuraavan peptidin II (17) ja sillå on seuraava aminohapposekvenssi jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (II) (17) Y-Leu-Lye-Glu-Thr-Ile-Asn-Glu-Glu-Ala-
Ala-Glu-Trp-Asp-Arg-Val-His-Pro-Val-His- I
Ala-X# jossa X on OH tai NH2, ^ jolloin aminoterminaali Y on mååritelty edellå.
8
Erityisen kiinnostava on oligopeptidi Ila: (Ila) Y-Ala-Alβ-Glu-Trp-Asp-Arg-Z-X # jossa X ja Y on mååritelty edellå ja Z on sitova, aminohappo, joka mahdollistaa kytkeytymisen, esim. kysteiini, tyrosiini, jne., tai yhdesså X:n kanssa muodostaa funktionaalisen ryhmån, jota voidaan kåyttåå kytkemiseen, esim. olefiinin allyylisså tai maleimidyylisså, ditioryhmån, jne.
Seuraava kiinnostava peptidi on alueen n. bp 972 - bp 1016 koodaama III (92) ja sillå on seuraava sekvenssi jolloin seu-raavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (III) (92) Y-Asp-Arg-Val-His-Pro-Val-His-Ala-Gly-Pro-Ile-Ala-Pro-Gly-Gln-X, jossa X, Y ja Z on mååritelty edellå.
On suositeltavaa ettei tåsså peptidisså ole enempåå kuin n.
15 LAV/HTLV-III-genomin koodaamaa aminohappoa.
Alueen n. bp 1164 - bp 1250 koodaamalla seuraavalla peptidi IV (90):11a on seuraava sekvenssi jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (IV) 490) Y-Tyr-Ser-Pro-Thr-Sar-I le-Leu-Aep-I le-Arg-Gln-Gly-Pro-Lys-Glu-Pro-Phe-Arg-Aap-Tyr-Val-Aap-Arg-Phe-Tyr-Lya-Thr-Leu-Arg-Z-X, ti 9 91073 jossa X, Y ja Z on mååritelty edellå.
On suositeltavaa ettei tåsså peptidisså ole enempåå kuin n.
29 LAV/HTLV-III-genomin koodaamaa aminohappoa.
Alue n. bp 1278 - bp 1385 koodaa peptidi V (88):n jolla on seuraava sekvenssi jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (V) (88) Y-Asn-Trp-Nor-Thr-Glu-Thr-Leu-Leu-Val-Gln-Asn-Ala-Asn-Pro-Asp-Cys-Lys-Thr-Ile-Leu-Lys-Ala-Leu-Gly-Pro-Ala-Ala-Thr-Leu-Glu-Glu-Nor-Nor-Thr-Ala-Cys-X, jossa X ja Y on mååritelty edellå.
Seuraavat kiinnostavat peptidit on johdettu ofta-nroteiini — alueesta jota esitetåån nimellå p18.
Alueen n. bp 450 - bp 545 koodaamalla seuraavalla kiinnosta-valla peptidi VI (97):11a on seuraava sekvenssi jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (VI) (97) Y-Arg-Gl«-Leu-Glu-Arg-Phe-Ala-Val-Asn-Pro-Gly-Leu-Leu-Glu-Thr-Ser-Glu-Gly-Cys-Arg-Gln-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Gln-Pro-Ser-Leu-Gln-Thr-X» jossa X ja Y on mååritelty edellå.
10
Alue n. bp 696 - bp 731 koodaa seuraavan kiinnostavan peptidi VII (71):n. Tåhån peptidiin kuuluvat kaikki oligopeptidit jotka koodaavat seuraavan sekvenssin lineaariset epitoopit: IVII) (71) Y-Aap-Thr-Gly-Hia-Ser-Ser-Gln-Val-Ser-Gln-Aen-Tyr, jossa Y on mååritelty edellå.
Seuraavat kiinnostavat polypeptidit on johdettu env-alueesta. gp110:sta (110 kDal).
Seuraava kiinnostava peptidi VIII on alueen n. bp 7246 - bp 7317 koodaama ja edellåmainittuihin yleisiin rajoituksiin viitaten sillå ei mieluiten olisi enempåå kuin 24 LAV/HTLV- III-genomin koodaamaa aminohappoa.
KiinnOstavalla peptidillå on yleisesti seuraava aminohappo-sekvenssi jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopepti-deihin kuuluvat myos sellaisen sekvenssin lineaariset epitoopit : (VIII) (36)
Val-Lys-Ile-Glu-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Pro-Thr-Lys-Ala-Lys-Arg-Arg-Val-Val-Gln-Arg-Glu-Lys-Arg-Ala-Z-X, jossa X on OH tai NH2( jolloin karboksiterminaali Z, esim. Cys, ollessaan låsnå, on aminohappo joka on lisåtty helpottamaan peptidin kytkeytymis-tå proteiinikantajaan.
Erityisen kiinnostavaa on, jos kuusi, tai sopivasti jopa neljå luontaisesti esiintyvåå C-terminaalianinohappoa on poistettu tai substituoitu.
il 91073 1 1
Yllåolevan erityisen kiinnostavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat seuraavat: (Villa) (49)
Y-Arg-Val-Val-Gln-Arg-Glu-Lya-Arg-Z-X
(VII Ib) (50) Y-Pro-Thr-Lye-Ala-Ly«-Arg-Arg-Val-Val-Gln-Arg-Glu-Lya-Arg-X.
Seuraavat kiinnostavat peptidit on johdettu env-alueesta gp41 .
Seuraava peptidi IX (56) on alueen n. bp 7498 - bp 7554 koo-daama, jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos sellaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (IX) (56)
Ile-Lys-Gln-Leu-Gln-Ala-Arg-Ile-Leu-Ala-Va1-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lyβ-Asp-G1n-Gln-Z-X, jossa X, Y ja Z on edellå mååritelty.
Yllåolevaan erityisen kiinnostavan sekvenssin sisåltåmiin oligopeptideihin kuuluvat: (IXa) (56/39)
Y-Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Ly s-Asp-Gln-Gln-Z-X
ja (IXb) (39/56) Y-Ile-Lye-Gln-Lau-Gln-Ala-Arg-Ile-Leu-Z-X.
12
Seuraava kiinnostava peptidi X (39) on alueen n. bp 7516 - bp 7593 koodaama ja sillå on seuraava aminohapposekvenssi, jol-loin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (X) (39)
Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cy·-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cya-X, jossa X on OH tai NH2.
Seuraava peptidi XI (40) on alueen n. bp 7630 - bp 7689 koodaama jolloin seuraavan sekvenssin mukaisiin oligopeptideihin kuuluvat myos tållaisen sekvenssin lineaariset epitoopit: (XI) (40) Y-Lys-Ser-Leu-Glu-Gln-lle-Trp-Asn-Asn-
Met-Thr-Trp-Met-Glu-Trp-Asp-Arg-Glu-
Ile-Asn-Z-X, jossa X, Y ja Z on edellå mååritelty.
Seuraava kiinnostava peptidi XII (23) on alueen n. bp 7708 -bp 7779 koodaama. Tama peptidi sisåltåå seuraavan aminohappo-sekvenssin mukaiset oligopeptidit jotka koodaavat lineaarisia epitooppeja: (XII) (23) Y-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser-Gln-Asn-Gln-Gln-Glu-Lye-Asn-Glu-Gln-Glu-Leu-Leu-Glu-heu-Asp-Lys-Trp-Z-X,
Il jossa X, Y ja Z on edellå mååritelty.
91073 13
Seuraava kiinnostava peptidi XIII (79) on alueen n. bp 7543 -bp 7593 koodaama. Tama peptidi sisåltåå seuraavan aminohappo-sekvenssin mukaiset oligopeptidit jotka koodaavat lineaarisia epitooppeja: (XIII) (79) Y-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cye-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-X, jossa X ja Y on edellå mååritelty.
Seuraava kiinnostava peptidi XHIa (78) on alueen n. bp 7561 - bp 7593 koodaama. Tama peptidi sisåltåå seuraavan aminohap-posekvenssin mukaiset oligopeptidit jotka koodaavat lineaarisia epitooppeja: (Xllla) (78)
Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cye.
Erityisen kiinnostavaa on kysteiinien tai tioglykolihappojen merkaptoryhmån kåytto terminaalisen aminoryhmån tai vastaavan asylointiin kytkettåesså yhteen kaksi peptidiå tai oligopep-tidiå tai niiden yhdistelmåå disulfidisillalla tai pidemmållå sillalla. Tåmån saavuttamiseksi voidaan kåyttåå yhdisteitå, joilla on bis-haloasetyyliryhmiå kuten nitroaryylihalideja tai vastaavia, jolloin reagenssit ovat spesifejå tioryhmil-le. Kuitenkin eri peptidien tai oligopeptidien kahden merkaptoryhmån kytkentå voi olla yksinkertainen sidos tai våhintåån kahden, yleenså våhintåån neljån ja enintåån 16:n, yleenså enintåån 14:n hiiliatomin pituinen kytkentåryhmå. Erityisen kiinnostavaa on, kun qaa-alueen sekvenssin osa on kytketty £ny-alueen sekvenssin osaan. Nåitå kimeerisiå peptide jå, jotka voivat sisåltåå ei-aminohappo-sidoksia, voidaan edelleen modifioida kuten kuvataan peptideillå ja oligopepti-deillå.
14 Tållaisia peptidejå voidaan kåyttåå kytkettynå liukoiseen makromolekyyliseen (esim. 2. 5 kDal) kantajaan. Sopivasti kanta ja voi olla sellainen poly(aminohappo), joko luonnossa esiintyvå tai synteettinen, johon antibodit eivåt todennåkoi-sesti tormåå. Kuvaaviin polypeptideihin kuuluvat poly-L-lysiini, naudan seerumin albumiini, simpukan (keyhole limpet) hemosyaniini, naudan gammagiobuliini jne. Valinta riippuu sopivuudesta ja kåyttokelpoisuudesta.
Tållaisissa konjugaateissa tulee olla ainakin yhden kyseeseen tulevan peptidin sisåltåvå ainakin yksi molekyyli makromole-kyylisså muttei enempåå kuin n. 1/0,5 kDal, yleenså ei enem-påå kuin yksi kahdessa kDal makromolekyyliå. Yksi tai useam-pia erilaisia peptidejå voidaan kytkeå samaan makromolekyy-liin.
Kytkentåtapa on konventionaalinen, jolloin kåytetåån reagensse ja, kutan jD-maleimidobentsoehappoa, .p-metyyliditiobentsoe-happoa, maleiinihappoanhydridiå, glutaraldehydiå jne. Kytken-tå voi tapahtua N-terminaaliin, C-terminaaliin tai molekyylin påiden våliselle alueelle. Kyseesså olevaa peptidiå voidaan muokata kytkentåå vårten, kytkeå sen ollesea sidottuna kanta-jaan, tai vastaavaa.
Yhdisteitå voidaan kåyttåå leimattuna tai ilman kåyttotarkoi-tuksesta riippuen. (Leima-aineella tarkoitetaan molekyyliå, joka suoraan tai epåsuorasti aikaansaa mitattavissa olevan signaalin.) Voidaan kåyttåå erilaisia leima-aineita, kuten radionuklideja, entsyymejå, fluoresoivia tai kemoluminisoivia aineita, entsyymisubstraatteja, -kofaktoreita tai -inhibiit-toreita, partikkeleita, esim. magneettisia partikkeleita, ligandien ja reseptorien kombinaatteja, esim. biotiinia ja avidiinia, tai vastaavia. Lisåksi peptidejå voidaan nodifioi-da monin tavoin tarttumaan pintaan, esim mikrotiitterilevyyn, lasihelmiin, kromatografiseen pintaan, esi·. paperiin, sellu-loosaan, silikageeliin, tai vastaavaan. Tapa, jolla polypep- ti 91073 15 tidit kiinnitetåån toiseen yhdisteeseen tai pintaan on tavan-omainen ja sitå on kuvattu laajalti kirjallisuudessa. Katso esimerkiksi US-patentit nro 4 371 515, 4 487 715 sekå nåiden viitejulkaisut.
Voidaan kåyttåå monia analyysimenetelmiå osoitettaessa retro-virusten tai niiden antibodien låsnåolo. Erityisen kiinnosta-vaa on peptidin kåytto leimattuna reagenssina, jossa merkki antaa mitattavan signaalin, peptidin sitominen joko suoraan tai epåsuorasti pintaan, jossa nåytteen peptidin antibodi sitoutuu pinnan peptidiin. Peptidiin sitoutuneen ihmisen antibodin låsnåolo voidaan osoittaa lisååmållå ihmisen immu-noglobuliinille spesifiå ksenogeenistå antibodia, tavallises-ti sekå ihmisen IgM ettå IgG, tai immunokomplekseille spesi-fejå leimattuja proteiineja, esim. S. aureus-proteiini-A:n Rf-faktoria.
Voidaan kåyttåå erilaisia heterogeenisiå menetelmiå, joko kompetetiivisiå tai non-kompetetiivisiå. Peptidi voidaan si-toa pintaan tai kantajaan (support) ja antaa leimatun antibodin kilpailla nåytteen antibodin kanssa rajoitetusta måå-råstå sidottua peptidiå. Kantajaan sidotun leima-aineen måårå on suhteessa nåytteen kompetetiivisen antibodin mååråån.
Antibodi voi sitoutua kantajaan ja nåyte leimattuun peptidiin. Reaktioseoksen oltua kontaktissa sidotun antibodin kanssa, kantajaan sitoutuneen leima-aineen måårå on suhteessa nåytteen samansukuisen antibodin mååråån.
Ksenogeeniset anti-humaani-antibodit, esim Fc:n IgG:n ja IgM:n (immunoglobuliineja) antibodit voivat sitoutua kantajaan. Nåyte voidaan saattaa kontaktiin immunoglobuliinien ja leimatun peptidin kanssa, jolloin kantajaan sitoutuneen leimatun peptidin maåra osoittaa samansukuisten antibodien lås-nåolon.
16
Vaihtoehtoisesti voidaan kåyttåå homogeenisiå analyysimene-telmiå joissa peptidi on sidottu entsyymiin, fluoresoivaan aineeseen tai johonkin muuhun leima-aineeseen, jolloin anti-bodin sitoutuminen peptidiin mahdollistaa spesifisti sitoutu-vaan parikompleksiin tarttuneen leima-aineen ja leima-aineen, joka ei ole sitoutunut kompleksiin, erottelun. Nåitå menetel-æiå kåyttåviå analyysitekniikoita esitellåån US-patenteissa 3 817 837, 3 850 752, 3 901 654, 3 935 074, 3 984 533, 3 996 345, 4 034 074 ja 4 098 876 jotka on tåsså mainittu referensseinå.
Kyseesså olevan keksinnon valaisemiseksi voidaan keksinnon-mukaisiin peptideihin liittåå fluoresoiva molekyyli, kuten fluoreseiini, rodamiini tai umbelliferoni. Monenlaisia mene-telmiå voidaan kåyttåå osoitettaessa kompleksimuodostus anti-bodien kanssa, esim. fluoresenssipolarisaatiota. Tåsså mene-telmåsså fluoresenssipolarisaatio on erilainen kompleksisen ja kompleksittoman peptidikonjugaatin vålillå. Saatavissa on laitteistoja mittaamaan fluoresenssipolarisaation muutoksia, esim. TDx, jota valmistaa Abbott Laboratories, Chicago, 111.
Kuvaavaa analyysimenetelmille on nåytesåilioiden kåytto, esim mikrotiitterilevykuopat (microtiter plate wells), jossa polypeptidit tai niiden konjugaatit tarttuvat såilion pohjaan ja/tai seiniin joko kovalenttisesti tai non-kovalenttisesti. Nåyte, tavallisesti ihmisen verta tai seerumia liuotettuna sopivasti puskuroituun våliaineeseen, lisåtåån såilioon ja annetaan riittåvåsti aikaa kompleksien muodostumiselle poly-peptidi(e)n ja nåytteen samansukuisten antibodien vålille. Supernatantti poistetaan ja såilio peståån ettå saataisiin poistetuksi ei-spesifisti sitoutuneet proteiinit.
Leimattu spesifisti sitoutuva proteiini joka sitoutuu spesi-fisesti kompleksiin viedåån ilmaisimeen. Såilioon voidaan lisåtå humaani-immunoglobuliinin ksenogeenisiå antiseerumei-ta, erityisesti anti(humaani IgM ja IgG) sopivasti puskuroi-
II
91073 17 dussa våliaineessa. Ksenogeeniset antiseerumit leimataan nor-maalisti osoitettavalla leimalla, esim. radionuklidilla tai entsyymillå. Antiseerumien tilalla voidaan kåyttåå immuuni-kompleksille spesifejå proteiineja, esim. S. aureus-proteiini A:ta. Sen jålkeen leima osoitetaan. Kehitinliuos lisåtåån ei-spesifisesti sitoutuneen entsyymileiman poistamisen jålkeen esim. entsyymin kanssa. Kehitinliuos sisaltåå entsyymin sub-straattia ja mahdollisesti entsyymin kofaktoreita, kromogee-nejå jne. jotka reaktion aikana tekevåt vårillisen tai fluo-resoivan tuotteen, joka voidaan osoittaa kolorimetrisesti tai fluorometrisesti, vastaavasti.
Peptideja voidaan valmistaa monin eri tavoin. Peptidejå voidaan niiden suhteellisen pienen koon takia valmistaa liuok-sesta tai kiinteån kantaja-aineen pinnalla tavanomaisilla tekniikoilla. Kaupallisesti on nykyåån saatavissa monenlaisia syntetisoijia ja niitå voidaan kåyttåå tunnettujen menetelmi-en mukaan. Katso esimerkiksi Stewart & Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2. laitos, Pierce Chemical Co., 1984, sekå Tam et al., J. Am. Chem. Soc. (1983) 105:6442.
Vaihtoehtoisesti voidaan kåyttåå hybridi-DNA-tekniikkaa, jos-sa synteettinen geeni valmistetaan kåyttåmållå yksinkertaisia ketjuja jotka koodaavat polypeptidejå, tai niille oleellises-ti komplementaarisia ketjuja, jolloin yksinkertaiset ketjut limittyvåt ja ne voidaan saattaa yhteen låmpokåsittelyainees-sa hybridisoitumaan. Hybridisoituneet ketjut voidaan sitten sitoa yhteen muodostamaan tåydellinen geeni ja valitsemalla sopivat terminaalit, voidaan geeni lisåtå ekspressiovektorei-hin, joita on saatavissa nykyåån. Katso esimerkiksi Maniatis et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, CSH. Cold Spring Harbor Laboratory, 1982. Vaihtoehtoisesti voidaan peptidiå koodaava virusgenomin osa kloonata tavanomaisilla rekombinantti-DNA-tekniikoilla ja ekspressoida (katso Maniatis, supra).
18 DNA:ta koodaavat sekvenssit, joita voidaan kåyttåå ilmennettåesså peptidejå I - XIII ovat:
I (15) (TAT) GATTGTAAGACTATTTTAAAAGCATTGGGACCAG
CAGCTACACTAGAAGAAATGATGACAGCATCT
II (17) (TGT)TTAAAAGAGACCATCAATGAGGAAGCTGCAGAAT
GGGATAGAGTGCATCCAGTGCATGCA
III (92) GATAGAGTGCATCCAGTGCATGCAGGGCCTATTGCACCA
GGCCAG
IV (90) TATAGCCCTACCAGCATTCTGGACATAAGACAAGGACCA
AAAGAACCCTTTAGAGACTATGTAGACCGGTTCTATAAA
ACTCTAAGA
V (88) AATTGGATGACAGAAACCTTGTTGGTCCAAAATGCGAAC
CCAGATTGTAAGACTATTTTAAAAGCATTGGGACCAGCA
GCTACACTAGAAGAAATGATGACAGCATGT
VI (97) AGGCAGCTAGAACGATTCGCTGTTAATCCTGGCCTGTTA
GAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTA
CAACCATCCCTTCAGACA
VII (71) GACACAGGACACAGCAGCCAGGTCAGCCAAAATTAC
VIII (36) GTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCA
AAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCA (TGT)
IX (56) ATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGA
TACCTAAAGGATCAACAG(TGT)
X (39) AGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAG
CTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGC
91073 19
XI (40) (TGT)AAATCTCTGGAACAGATTTGGAATAACATGACCT
GGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAAC(TGT)
XII (23) (TGT)CATTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAG
AAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGG
(GGA)
XIII (79) AAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGA
AAACTCATTTGC
Nåiden sekvenssien fragmentteja voidaan kåyttåå peptidifrag-menttien ekspressioon, konservatiivisia emåsvaihtoja voidaan tehdå, jolloin modifoitu(dut) kodon(it) koodaa(vat) samaa (samoja) aminohappoa(ja), tai voidaan tehdå ei-konservatiivi-sia muutoksia koodaaviin sekvensseihin, jolloin seurauksena oleva aminohappo voi olla konservatiivinen tai ei-konserva-tiivinen vaihdos.
Koodaavia sekvensseja voidaan laajentaa joko 5'- tai 3'-ter-minaaleista tai molemmista terninaalista pidentåen peptidiå kuitenkin såilyttåen sen epitooppinen kohta. Pidennys voi olla kytkentåkåsivarsi esim. leima-aineeseen, kuten entsyy-miin, tai kytkemåån kaksi tai kaikki peptidit samaan ketjuun aikaansaamaan antigeenistå aktiivisuutta, tai vastaavaa.
Ekspressiota vårten koodaavaan sekvenssiin lisåtåån start- ja stop-kodonit, promoottori- ja pååtealueet ja yleenså repli-kaatiosysteemi jolloin saadaan ekspressiovektori ekspressioon soluisåntåån, esim. prokaryoottiin, eukaryoottiin, baktee-riin, hiivaan, nisåkkååseen jne.
Itse sekvensseja, niiden fragmentteja tai laajempia sekvensse ja, yleenså våhintåån 15 emåstå, mieluummin våhintåån 18 emåstå, voidaan kåyttåå osoitettaessa retrovirus-RNA:ta tai 20 provirus-DNA:ta. On kuvattu lukuisia tekniikoita, kuten Griinstein-Hogness-tekniikka, Southern-tekniikka, Northern-tekniikka, dot-blot, nåiden parannuksia, kuten muuta metodo-logiaa. Katso esimerkiksi WO 83/02277 ja Berent et al., Biotechniques (1985) 3:208.
Sopivasti polypeptidit voidaan valmistaa fuusioproteiineina, jolloin polypeptidi voi olla fuusiopolypeptidin N- tai C-ter-minaalina. Tuotteena olevaa fuusioproteiinia voidaan kåyttåå suoraan sellaisenaan reagenssina tai haluttu polypeptidi voidaan katkaista koko fuusioproteiinin jåljellejååvåstå sek-venssistå tai sen osasta. Jollei polypeptidisså ole sisåisiå metioniineja voidaan, lisååmållå metioniini fuusiokohtaan, katkaista polypeptidi syaanibromidilla. Mikåli on sisåinen metioniini, voi olla tarpeen tehdå proteolyyttinen katkaisu-kohta, esim. poly-lysiini ja/tai -arginiini tai nåiden kombi-naatio, tai sisåinen metioniini voidaan substituoida aminoha-polla, kuten leusiinilla, tai N-terminaalinen metioniini voidaan lisåtå syaanibromidikatkaisua vårten. Tunnetaan suuri måårå proteaaseja, mukaanlukien dipeptidaaseja, ja tarvittava prosessointisignaali voidaan sijoittaa oikeaan kohtaan. Pro-sessointisignaali voi sisåltåå tandemtoiston varmistamaan katkaisun siten, ettå yhden tai useamman ylimååråisen amino-hapon låsnåolo ei vaikuta kyseesså olevien polypeptidien kåyttokelpoisuuteen.
Analyysimenetelmån luonteesta riippuen fysiologinen nåyte, esim. sylki, veri, plasma tai seerumi voidaan esikåsitellå liuottamalla analyysivåliaineeseen, joka on tavallisesti pus-kuroitu vesiliuos, jossa on yhtå useista puskureista, kuten fosfaattia, tris- tai vastaavaa. Suositeltava liuotin on blotto (5\ w/v rasvatonta maitojauhetta, 0,01% tiomerosaalia, 0,01% Antifoam A:ta 0,01M natriumfosfaatissa, pH 7,2, ja 0,15 H NaCl). Yleensa pH on vålillå n. 6-9. Tåmån jålkeen nåyte ja reagenssi yhdistetåån kåytettåvån menetelmån mukaisesti ja annetaan riittåvåsti aikaa sitoutumiseen. Kåytettåesså hete- 2, 91073 rogeenistå systeemiå vaiheiden jålkeen yleenså suoritetaan pesu etta saataisiin minimoitua ei-spesifinen sitoutuminen. Toi-menpiteen lopussa leima osoitetaan tavanomaisilla menetelmil-lå.
Kyseesså olevien peptidien ja niiden homologien kSyton analyy-seisså lisåksi kyseesså olevia peptidejå voidaan kåyttåå sel-laisenaan tai yhdistelminå rokotteissa. Peptidejå voidaan kåyttåå tavanomaisin tavoin yleisesti pitoisuuksien ollessa vålillå 1 ug - 20 mg/isånnån paino kg:ssa. Fysiologisesti hyvåksyttåviå aineita voidaan kåyttåå kantajina, kuten ste-riiliå vettå, suolaliuosta, fosfaattipuskuroitua suolaliuos-ta, ja vastaavia. Voidaan kåyttåå adjuvansseja kuten alumini-umhydroksidigeeliå tai vastaavaa. Annostelu voi tapahtua in-jektiolla esim. lihaksensisåisesti, vatsaontelonsisåisesti, ihonalaisesti, laskimonsisåisesti jne. Voidaan kåyttåå kerta-annostusta tai useita annoksia, yleenså 1-4 viikon vålein.
Seuraavat esimerkit on tarkoitettu valaisemaan keksintoå eivåtkå ne rajaa sen suojapiiriå.
Kokeellista
Peptidit 15, 71, 88, 90, 92 ja 97 liitettiin t-butyylioksi-karbonyyli(BOC)-metyylibentsyylikysteiini-fenyyli-asetamido-metyyli(PAM)polystyreeni/divinyylibentseenihartsiin (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). Karboksiamidipeptideille 78 ja 79 kåytettiin p-metyylibentshydryyliamiini-polystyree-ni/divinyylibentseeniå. Symmetriset anhydridikytkennåt teh-tiin Applied Biosystems 430A syntetisoijalla, paitsi ettå glutaroiini ja asparagiini kytkettiin hydroksibentsotriatsoli-estereinå. Kåytettiin bentsyylipohjaista sivuketjusuojausta ja BOC-alfa-amiinisuojausta. Tryptofaani suojattiin formyyli-osalla, metioniini suojattiin sulfoksidillaan, ja dinitrofe-nolia kåytettiin suojaamaan histidiiniå. Suojaavat ryhmåt poistettiin tavanomaisin menetelmin.
22
Peptidi 36 liitettiin bentshydryyliamiinipolystyreeni/di-vinyylibentseenihartsiin Beckman 990 peptidisyntetisoijassa (Beckman Instruments, La Brea, CA). Kåytettiin bentsyylipoh-jaista sivuketjusuojausta ja BOC-alfa-amiinisuojausta. Kaikki tåhteet lisåttiin suoralla disykloheksyylikarbodi-imidimene-telmållå, paitsi ettå glutamiini kytkettiin hydroksibentso-triatsoliesterinå.
Peptidi 39 syntetisoitiin bentshydryyliamiinihartsilla kuten on kuvattu peptidin 36 kohdalla ja myoskin asparagiini kytkettiin esterinå.
Kun peptidit radioleimattiin, se tapahtui asetyloimalla ami-noterminaali 3H-etikkahapolla ja disykloheksyylikarbodi-imi-diylimåårållå.
Peptidien suojaus poistettiin ja ne irroitettiin hartsista Tam "low-high"-HF-menetelmållå (Tam et al., supra). Peptidit 36, 39, 79, 78, 88, 90, 92 ja 97 uutettiin hartsista 5Vssa etikkahapossa ja kåytettiin geelisuodatuskromatografiaa 5\:ssa etikkahapossa. Peptidit 15 ja 71 uutettiin 0,5M ammo-niumkarbonaatti/ 0,001M ditiotreitolissa (DTT) ja kromatogra-foitiin 0,05M ammoniumkarbonaatti/0,005M B-merkaptoetanolil-la. Peptideja sisåltåvåt fraktiot eroteltiin ja lyofilisoi-tiin. Synteettisten tuotteiden eheys varmistettiin ninhydrii-nimonitoroinnilla jokaisen kytkennån jålkeen sekå analyytti-sellå kåånteisfaasikromatografialla ja aminohappoanalyysillå.
Peptidit 90, 92 ja 97 polymeroitiin hapettamalla niiden sulf-hydryyliryhmåt molekyylinsisåisiksi disulfideiksi. Lyhyesti, lyofilisoitu redusoitu peptidi liuotettiin mahdollisimman våhåån 6M guanidiini-HCl/ 0,1M natriumfosfaattiin, pH 9,0, ja annettiin hapettua yon yli huoneen låmpotilassa.
Edellå valmistetut peptidit 15, 23, 36, 40, 49, 50 ja 56 kon-jugoitiin naudan seerumin albumiiniin (BSA) johon oli liitet- ti 91073 23 ty N-sukkinimidyyli-4-(N-maleimidometyyli)-sykloheksaani-1-karboksylaatti (SMCC) oleellisesti kuin Ishikawa et al., J.
Sil Immunoassay ( 1983) 4.:209 on kuvannut.
2 ml:aan BSA-liuosta (20 mg/ml 0,1M:ssa kaliumfosfaattia, pH 7,0) 30°C:ssa lisåttiin 1,5 ml SMCC-liuosta (8mg/ml dimetyy-liformamidissa). Seosta sekoitettiin magneettisesti tunti jonka jålkeen se sentrifugoitiin jåånnosalbumiinin poistami-seksi. Kirkastettu liuos geelisuodatettiin 0,1M kaliumfosfaa-tilla ph 6,0 tasapainotetulla Sephadex G-25:lla. Proteiineja sisåltåvåt fraktiot, osoitettuna niiden absorbanssilla 280 nm:ssa, eroteltiin ja såilottiin jåådytettynå -70eC:ssa kun-nes tarvittiin.
Edellå syntetisoidut peptidit liuotettiin 0,1M natriumfos-faattiin, pH 8,0 konsentraatioon 5 mg/ml (peptidi 36), 8 mg/ml (peptidi 15) tai 1,6 mg/ml (peptidi 39). 1,5 ml:aan jo-kaista liuosta lisåttiin 2 mg kiinteåtå DTT:a. Liuoksia sekoitettiin 30 min ajan 30*C:ssa jonka jålkeen kåytettiin gee1isuodatuskromatografiaa Sephadex G-10:a tasapainotettuna 0,1M kaliumfosfaatilla pH 6,0. Tritiumpitoiset fraktiot tasa-osien tuikemittauksella osoitettuina eroteltiin ja sekoitettiin 1 ml:aan (0,5 ml:aan peptidillå V) SMCC-johdetulla BSA:lla. Saatuja seoksia sekoitettiin 30°C:ssa 12 tunnin ajan ja sitten ne dialysoitiin perin pohjin vettå vasten.
Toiset peptidit valmistettiin edellå kuvattujen menetelmien mukaisesti ja konjugoitiin BSA-.han edellå kuvattujen menetelmien mukaisesti. Peptidien suhde BSA:han mååritettiin lisåå-mållå radiomerkkiainetta tavanomaisin menetelmin.
24 mooleia peptidiå moolissa BSA.ta I (15) 14 II (17) 5 VIII (36) 9 IX (56) 17 X (39) 6 XI (40) 18 XII (23) 30 * * voi olla virheellinen ja voisi olla jopa 55.
ELISA-analyysi
Lyofilisoitu peptidi tai proteiini/peptidikonjugaatti liuo-tettiin 6M guanidiini-HCl:iin. Guanidiiniliuos liuotettiin 0,05M karbonaatti/bikarbonaattipuskuriin (pH 9,6) 8 - 40pg/rol lopulliseen peptidikonsentraatioon juuri ennen applikointia 96-kuoppaiselle levylle. 50 >il peptidiliuosta tasattiin mik-rotiitterikuoppaan ja inkuboitiin 4eC:ssa yon yli. Levyt pei-tettiin BLOTTO:11a (5\ w/v rasvatonta maitojauhetta, 0,01\ tiomerosaalia, 0,01\ Antifoam A:ta 0,01M natriumfosfaatissa, pH 7,2, ja 0,15 M NaCl) tunnin ajan 37eC:ssa. Seerumit liuotettiin 1:100 BLOTTO:n ja PBS:n (0,01M natriumfosfaattia, pH 7,3/0,15M NaCl) 1:1 seokseen, ja 50 jil liuotettuja seerumeita lisåttiin jokaiseen kuoppaan ja inkuboitiin tunnin ajan 37°C:ssa. Seerumit poistettiin ja levyt pestiin kolmesti pesupuskurilla (0,15M NaCl/0,05\ [w/v] Tween 20) ennen 100 ul vuohen antihumaani-IgG/piparjuuriperoksidaasikonjugaatin (50\ stock liuotettuna 1:10000 50 mM natriumsitraattiin/0,05\
Tween 20/1\ låmmollå inaktivoitua tavallista vuohen seerumia; saatavana Antibodies Inc., Davis CA) lisåystå tunnin ajan 37°C:ssa. Konjugaatti poistettiin ja levyt pestiin kolmesti 0,15M NaCl/0,05\ (w/v) Tween 20:11a. ELISA kehitettiin lisaa-mållå 100 /il substraattiliuosta (10mg 3,3',5,5'-tetrametyyli-bentsidiiniå 50 ml:ssa 0,05M natriumsitraattia, pH 7,0) joka 91073 25 kuoppaan 30 min ajan huoneen låmpbtilassa. Reaktiot pysåytet-tiin 100 μΐ:11a per kuoppa 3N H2S04:a ja optinen tiheys 450 nn:ssa mååritettiin automaattisella ELISA-lukijalla.
Taulukon 1 vhteenveto
Taulukko 1 antaa ELISA-tulokset kaikille immunoreaktiivisille peptideille.
Peptidit 49 ja 50 ovat peptidin 36 osa.
Peptidi 56 peittåå osittain peptidin 39.
Peptidi 49-BSA on reaktiivinen 10/10 positiivisten seerumien kanssa; ei reaktiivinen 2/2 negatiivisten seerumien kanssa.
Peptidi 50-BSA on reaktiivinen 10/10 positiivisten seerumien kanssa; ei reaktiivinen 2/2 negatiivisten seerumien kanssa.
Peptidi 56-BSA on reaktiivinen 10/10 positiivisten seerumien kanssa; ei reaktiivinen 2/2 negatiivisten seerumien kanssa.
Peptidi 40-BSA on reaktiivinen 10/10 positiivisten seerumien kanssa; ei reaktiivinen 2/2 negatiivisten seerumien kanssa.
Peptidi 23-BSA on reaktiivinen 10/10 positiivisten seerumien kanssa; ei reaktiivinen 2/2 negatiivisten seerumien kanssa.
Peptidi 15-BSA on reaktiivinen 10/10 positiivisten seerumien kanssa; ei reaktiivinen 2/2 negatiivisten seerumien kanssa.
Peptidi 36-BSA on reaktiivinen 9/10 positiivisten seerumien kanssa; ei reaktiivinen 2/2 negatiivisten seerumien kanssa.
26
Laajemmin tarkasteltuna, peptidi 56 joka osittain peittåå peptidin 39 ei ole reaktiivinen kaikkien peptidin 39 kanssa reaktiivisten seerumien kanssa. Tåmå antaa olettaa, ettå pep-tidisså 39 on ainakin kaksi reaktiivistå epitooppia tai ettå peptidit 39 ja 56 sisåltåvåt ei-limittyviå reaktiivisia epi-tooppeja.
Peptidiå 23 (sekå konjugoituna BSA:han ettå konjugoimattoma-na) testattiin suuremmalla måårållå seerumeita (23 positii-vista, 8 negatiivista) se osoitti 80 - 90% herkkyyttå.
Taulukon 2 vhteenveto
Taulukko 2 osoittaa, ettå kaksi qaq-alueesta johdettua peptidiå (15 ja 17) on reaktiivista LAV-seropositiivisille seeru-meille jotka eivåt reagoi tai reagoivat huonosti peptidin 39 kanssa. Tåmå osoittaa kannattavaksi oaa- ja env-peptidien yhdistelmån kåyton tehtåesså herkempåå analyysia.
Taulukon 3 vhteenveto
Taulukossa 3 vertaillaan peptideillå 15-BSA ja 39 sekå nåiden fysikaalisella seoksella (15-BSA + 39) sekå nåiden kemialli-sella kombinaatiolla (tioli-oksidoitu 15 + 39) saatuja tuloksia.
Tulokset, jotka saatiin kun positiivisia nåytteitå analysoi-tiin joko peptidien 15 ja 39 fysikaalisella tai kemiallisella seoksella, olivat yleisesti parempia kuin kummallakin pepti-dillå erikseen saadut. Tåmå on selvåsti havaittavissa nåyt-teisså 126, 131, 135, 138 ja 1296.
Taulukon 4 vhteenveto
Taulukossa 4 vertaillaan tuloksia, jotka on saatu peptideistå 71, 78, 79, 88, 90, 92 ja 97 ELISA-analyysilla. Kaikki peptidit yhtå lukuunottamatta antoivat yli 70% korrelaation positiivisille ja kaksi peptidiå antoi 100% korrelaation.
II
27 91073 fu _ k tf Φ W # β W ff' ^ ♦ ^ r*S O tf «η r* tf tf tf £? a · <N tf tf ·- NO Ο Ο
A} · · · Ζ ···*· « · · * I
^ ο ν ο ο «- ο *- ο ο ο ο ,35ϊ2ϋ2ϊ!κ s a a « ’ ^ ^ V Ν Μ Ο Ν ^ tftf a* a
ί 5 *· ^ ^ ^ · Μ 9 Μ «V
2 · * ·· · · · · · · · « · • ^ «· · ^ 0 κ Μ ^ ^ •ν S S * * ** ** ««Λ K — Ν « ·- Μ ® ^ · *“ β ν ^ ^ Ο Ο ^ ^ ο Ο Ο Μ «AMMAN·»·«·» Μ 0 μ μ S 3· 55535222 2 2 2 2 U ^^·*^Μ«Μ Μ « · · (0 μ S-riSS*»1· ·»*·«·« 5 S'". “ η -. β ° D Η »--·-·-- - - - · ο ►3 Η _ < ο jeSsss'SHs? 5>Ε 5 5
Hg - - * · - · - « *" ** · . · >2 ι«μ*ο·μμ22 «η£ο ' ω 5ί ·:*:·!*.·*· - 5 · : " 2η «·. · · · · · ^ ο 2 2 . '
Η Q
Η Ο Μ ^ Ν Μ Μ · ·· · · · μ 52 as **"35333 Ϊ 2 : : UH - -······ J > ο ο Η 2 lJ iC . ffl Μ tf tf ^ tf f* tf tf « tf tf tn i 1 « · n mm z* * S £ ** « « « v tf. tf tf ~tf « « , BS-C ······ *··*··? H |J I - >3 ·< I > . ·» -*<\l O —
04 «« « I- X
K« S'iZ - 2- 22222 22 -.22
Oco ·ο·22~~ — — ~ — t u · i i i "il <” I s> nn * Η £ 2 < « Ir- h < >22 SSSSSSSff 2 S 2 S ' ^ ^ ~ M Æ OffA A A A Mm e «
Hin w e · OT tf O > P4 H ·-« Ji *- ^ w Η ω . _ 2 2 ft W 2222222222 S 5 s Si Si si si Si Si Si Si Si Si i i
- & ΐ{ ΐ{ ?? *ϊ1 *5-5 -i -* ϊί *5* ϊί S S
ff 25 25 25 25 >«· τ»· ”· ·~· ·«· ·«· ·; ·* I 3 si si si si si si si si si si al al S » ♦*
S ^ I
S ;; s ? s ! · S : S ;ϊ : i * * i?! ·“*"* 28 Μ in Μ ΕΞ22 2**»·* [(1 « Ν · · in · ή · · · · ·
S
Η Μ DH 1325 2 2·*«· Μ Μ J · Τ *ϊ · Μ Ο “ · *· · · — · · < ιη Η Ο - 0S 3 η , Μ 2 1322 2 5·*· > W *12”«· Ι*··1: Μ -“·«» · · ο a 2 Ο •Ο <* {Ο m Η s i Η ν ««οι Μ 9 « S* ίϊί 2 '2 ; - - £5 ||ϊ - i i i t c i W iJ > · Οι < in *-> in i LJ Al· 2 tn 2 2 * w H >«S2S S · · ** m >< o S · - · · · · - OM -SSL ··- - - ~ · - m »i x. —
HZ
ft < i - 2
Ml — " ** — ··*·- e*< · S - 3333 lin, gac-S*.·-· 8 · 2«: | | 2 25 22 22 % % åd 2 I * -· -¾ ·ί i s - . i I 3i »I si li li I hiS 5 * i 5 b É i 29 91073 Μ < H< in H CO 3 HZ t w< o
tn M « S
Hffl (Λ -X « K a v A _ jn k ® * · ~rrr”r ·“-»« - - 3·< We" * * e o o M - %?l a ? z z i i ~ ~ * h H «· e e * e » e c ο ο o
Ul ’* :· : : : s * * * * = s * ? = HAU --••••e
B!U M
UA Q a JU m « ········« I ! · ’ Η Η) Η ·—·····
<D Z
££ « · - g S S S
05 Η I , e c c c ? Z Λ, ^ 4) ^ 0 ^ © ^ O ^ Η ύ * «* « k«* k« fr<«« fc« <*« is-g 2 - - 2 2 2 2 2 2 2 52 S2 S2 S2
(O £ ^ « & · p4 erf erf erf erf erf eU e^ ^ _ J
ow 22- 1 1 £ ί £ i $ £ £ £ τι τι τι τι (OX vO © · •r-> *h > ·
M W if>H H
rW >< 1 W i-5 ξζ. .
Kill < £«» _ _ _ um as s*252.SSS. ·«»--·> 33 ?ι*!!:::5;*»* *. * * = 2 m < < 5« " — — ·*······ H w W .
AS m 22222 WW^> ,. - -222222 22222 ““ i |i |i li ?ϊ ini ii |i! i i ro 5 ' w· η· *Ί ·! M *· 1 e ·! «{ «{ «{ g " si si si si si si si si I I li il il J! K j I ^ 2 5 S 3 δ 5 a δ 1 8 1 $ g 5 |H - i 1 1 30 3 +*
O
2 m 0 - £ S'·*······««::;; -Ϊ *" ·,*β"···*β — éeec·^ — 5 ►- «· · j · · · · ....
T" * ~*-~ee2*e*«é22
•H
— 2^2 2 22 S^*·^ ***»·«*· 0 . *! 2 “!···*·"·"·· — «2 «· — "···- — ·- — O»^ — »^e — «2 S£S222m2222*m S - ~°········όο· 3 ·· «·* _ • «« · ·* mm mm *m M 2 JJ · * «i m m ;}j i Ϊί Π i i i i i ! ! S } X w > 4 · > · i •r- 3 - -S 2 SSSSSss^S^*1···^ >"2 22222222#··“*··’ 22^*5-:··!····!···· § *- ...... * £ „c cl 222--------- •ri S c 2*53 — 3 - 3 - 3 -2 3 2 3 ”33 "33 «3 53 53 5 3 i 3 >5 52 ϋ2 Zl 3 3 23 il i s 3 2 33 33 33 33 33 0 0 II li "si si si si si si si si si si si si * i 1 i*i?8Ss.5«-SS**SSs2 <
H
il 31 91073 9 +* 4*
O
*< ’· · Μ N K
• *3 ^ ~ O
Λ * ·
0 4 C · · O
·»* «Λ P
«· Μ P ^ p ^ P Λ Λ ^ • · · · ί· * * ° * • * «*
« Μ Μ M
o o O O
• ·„· · · Ψ · · o o •4
S MI M N
I · · · · tf · · · o 9 — V 44 fj 4« • 4* · · * · · ♦» · j* v • o · · * · · 4« α · c c c c > o * X u > Λ p > · 9
W V
4« «« «0 > O P · · ·
OP · ^ ^ V
Jt · · · · · OX · c c c 44 V« 4« 4* ί · 3 3 3 5 tf o · · S · .21 e -* Jf Jf ^ π c P · · · * o o o o 44 Ik o 4 i i, »4.
~ ° £5 ij ?5 25 « « 21 51 0 i K 3 ·
V O
g r i i s i 32 • ι i ·
• I
I · I · • · i ocoNxncoø'« m*»uriNn4"iift ««oomtinoo' « ao· ΝΠαβΝ·^ — — O-^eCC^iA^tncONrvrv IO as r- I ·<ί>»0<·4~μ — m* — — fv«v — o — — rvG ZOOOOO — OO lev — 35 ·..........................i° -
Μ « I I
< td * *
C ™ i «a««««»» afM<C4ieiMr»oei(Ni <v iMno*o<Nn I
ZJ « i <ioc«4-cnQe«4ee~ciei«iCCMNNei4r««B ι O oo KM rs ι ηβθΝ·>η<*ιοχιη··ιηοηη^ι··κιΛζη··Μ··ΜΜ«·· ι n — U Z ..........................ι · J> ,¾ I ev — — rv ~ — — — — —< tv — mm IO ao
» H ! I
r» μ ι βοααα^Νηο^αΜΜΟιηΜβ·' -eo-eOmo ι λ m| Mn---inainMBne!OMO''CO'jQOOaiM^aOCN ι O ao juJjJ «neieNmNn«-innnnNPi-nij;-oO*<--00 I rv — •t~\0 ι..... * ’ IO <c <Λ Z J } ^ w i æ-MftMn-Oio^o-iCff'-'irin n«ovmao m«v i M r»i ΐΠ4θθ>ΝΐηΡ>βιβαΝΝθνθ'θΜ'βιηοο<βΝ.θ'ΜΐηΜΐηΝ IO oo -Ω O' I *rimmmfn^r>ir»me»<oivmm»v«r»r»cvst*MMMMMMMM ι rv m r- O · ................ . . - ....-.-I N.
r~ffl j ^ ^ M— — — — »V JO to
Μ I I
- M I I
IS. w I ONN«Mer*0«eNO«N « N · C0»0 — «tvo-veof' I
‘ ~ ο ΜΜΡ.»ο^·Α«^ΜΑ«α^ΝθασΜηβΝθηΝ»»Μβ(α ιο to
Cl <0»nf<><Mnx>rNO»KN4ZM«OZN-»»O0'OO IN — ι ι........................ . · ι · — .S |mmm M rv rv I O e-1 00 < J I “
® j i S
I eor\<eN^40nm<e~40'ine'-*e l .%«; ο I coi^ee^<t4M4anncoo>m<*e>oooM»N<ccieN to oo
Ami »i Ne<~<neM«MC««tONe>«i^eOKK«iCin«n<tinin jr« - σι U) Jm’mm*— *— *’*mm***’m ....... ΙΟ ·π mi I — -10 < }
^ I mOccnmO· β·»^0«0ΝΝ-· « <rt · m ·· « « r« I
m>4 «vi ONONM<’VMnoO'a<nanoaoO»r>0'P^r^inccrs<nN IO ao mi rvrv — — — MM — JC — mmmmo—" — -»0*00000000 I — — &£ i..........................°’ 5
Μ < I
a ι «
Hm L\ &3 ·ί\ g, *“ i|SS55SSSSSS5S5SSSSSSS if? 'r — a »* i ·! Sac O £4.1 S3c * j a SS3 J j o S > · < { 2 *5- i i i is! S ‘I f«o«(A««inn«iAr>o«NenM«<«t rv ·» ·* ««<o -3 r«ii ; til ΝηΝΝΝπηιηιηιηΛΝΜΐΉΊηποΝ-η-νη»·««- a c · c ι J * ) ΜΜΜ — — MMM«-MMMMMMMM^M».**e^ieKK* M -«.· & j ;. J ' 33 91073
Alaviitteita taulukkoihin 1-3 1 Valmistettu UK-hakemuksen Sarja nro 83/24800, jStetty 15.9.1993 2 Radioleimatut LAV-antigeenit hajoitettiin RIPA-puskurissa (Gilead et al.. Nature (19761 264:263. ja niiden annettiin rea-goida ihmisen seerumin kanssa. Saadut immunokompleksit erotet-tiin sitomalla Staphylococcus aureus-adsorbenttiin (Kessler, J. Immunology (1975) 115:1617\. jota seurasivat lukuisat pesut.
Immuunisakkautuneet antigeenit analysoitiin SDS-polyakryyliami-digeelielektroforeesilla (Laemmli, Nature (1970) 227:680. jota seurasi fluorografia. Joko p25 tai gp43 nauhan lasnaolo todet-tiin tarpeelliseksi ja riittSvaksi osoittamaan naytteen sero-positiiviseksi.
3 LAS= lymfadenopatiasyndrooma 4 n.d. = ei m&Sritelty
EdellSsaadut tulokset tekevat ilmeiseksi sen, etta kehittamålla yksi keksinndnmukainen peptidi tai peptidikombinaatio, saadaan tarkka ja herkkå testi AIDS-vasta-aineiden osoittamiseksi. Kek-sinnon mukaisia peptideja voidaan kayttåå joko yksinSan tai yh-distettynå seulonta-analyysiin tai toteamisanalyysiin, jossa voidaan kåyttaa kokonaista lysaattia tai kokonaisia vasta-ai-neita itsenaisena menetelmSna. Edelleen peptidien spesifisyy-desta johtuen voidaan olettaa etta peptideja koodaavat DNA-sek-venssit voivat myos osoittaa samanlaista spesifisyytta DNA-hy-bridianalyysissa. Nain olien esilia oleva keksintd mahdollistaa potilaiden loytSmisen, jotka ovat altistuneet lymfadenopatia-syndrooman ja/tai AIDSsn retroviraaliselle etiologiselle teki-jSlle.
Vaikka kyseessa oleva keksintd on kuvattu tietyin osin yksityis-kohtaisesti keksinndn valaisemiseksi ja ymmartamisen helpottami-seksi, on ilmeista, etta voidaan tehda tietynlaisia muunnoksia pysyen patenttivaatimusten maarååmåssa suojapiirissa.
LUTE 1 34 ε ϊ ·5* '5g =88-3 '-3 '13 '-3 ^38^3 ‘33 Ίδ ΊϊΕ 'IsSSi 3 5 8 55 ξ| 5}*5§ 55 53 33 3ls52 ig 5g HE H|*f i 1 I €5 33 il 53 53 53 si 5: Id ia if si; j5§ £ 3 2 .Ε .58 .35 .sg .*8 .tf .33 .53 .35 .58 .55 .33 .aS .336 .J 1 2 | 13 1$ ύ it 4 53 53 53 33 *2 ύ fig |if i 5 M ;E e* ;3 eg es sg 33 s3 sS j: las s*g I 2 = 8-1 ?3 £3 13 £C £S tc ig Sg jg Si i~i :1ft i
5*3 '/£§ 'si '£B 'Sgslv -If "is -si ‘iigfl ·38 ·ϊϊ: ’ifl *2 S
h $1 11 «s ihi ij il li ii"i! 11 irf |ll i f I i if |1 II Ig li l| il !| fl I! lif ii| c § t *3 ·*$ *1$ -ts vs -t3 *ts *tt ·*3 *tv *5x8 v 1* ·i a c 8 il ?§ ii tS ί§ ύ tg £3 |l! | g s I £8 xS ti ί| 13 Is S3 i3 t$ -i, at g 5?i i i •J -Eglv 'sg ·ϊε ·2ΐ ·£§8-3 ‘13 ‘ff ’si ’slsf* 'SfI ‘if^ ‘1 ! IB a8ti tS 55 s; sS*s2 52 53 si S3st: ass es; e i I § 35 53 55; 5: if 53 il >5 ξί 28 33 ||| M g | I I .5 33 tv s; 33 5a Si sg si tJ 5§ elg 256 g a § '8 -il fl ‘ii '4 ΊΕ -Si ‘3! 'if 53 '58 'ξΙ ^33 *||| ‘1 § I 8 *1 Ig 5l 5$ i\ 55 i\ 53 53 52 53 258 3?! J δ § i 1 ί2· il Si *1 eA si li il si li si h | s i i ssii il li é lisii i| Il 4 ψ 11 N i \ ϊ l g Si 53 5v |s i§ 53 si S3 23 || 52 |5S | δ 5 .i . g .s: .¾¾ .5i .@2 .53 .3» .5a .33 .l| .52 . t§ .sSg .¾ s 5 3 I 2j 53 53 |2 33 tg 53 33 53 33 33 |δ| 1 | Η i i! 35 33 Ig Ig 52 il 3g 33 38 fg s|g | g
M * 4 S3 H ig 33 53 é 53 Ig 5| 21„ί5| = I
I ’g’ i ’3: 558 ’5i il'SrSglsi's| ‘ii - 52!ss3 |J
Se i si Ig Ie 1 il srsl ig iS s srlsi |:l i E i 32 53 55 i 53 i| 5; 5E 13 V· 51 fgg 253 6 % · i *S* *£3 *t| ί9§ ·£§ *53 *S3 *1» *x3 *53 · §i ·<!$§ vig 3 3 i si 52 si ia 53 55 55 23 58 23 l- 25§ Jig j r. ϊ — « »*p λ u ISpl ·* 4 op ou · ►> (h ·<» ·*« t><4& · ww »5 L· u u« op C a La øø o u oC »ø J W x < wj ·39 ο«·ο
Co i l« Ib »C 3kJ o 3 · P op oP « · «* ·Ρ «»< ». »o 4 W i io pi 3 j bh) M 3 m *3 «4 ijS <1 2< O Η ·ί < h 3 ϋ · l v: zti vs ‘te *st;8 ίξ ν: v2 · il vs3sis3 5 3 3 Ig 5Γ33 P la M :3sd il li 13 123==558 3 c 3 i3 tS ti Εβ H8 13 t« 13 IE st tn att itg Π 3 S 15 ?: tt t| 13 33 SH tg 1c £§ 2¾¾ o . G · H irl ···· Mt· I»>4 111· ibU ··< · kU 'gb ·]< i 'J' ‘ · Ϊ4 ' Ϊ II! P o C PP V> ** H hl· Et ο h < < ft u P<f 4 4 øv -<< /»·«· o Γ P C 1.4 » 3 MØ · ft* 4 U ft · h 4 9* · 0 04 Μ v V hø H h 4 »* G Q — U fcjj op ·4 «Ρ 4 · «0 — * h4 4 0 ft< t »Q · »0 C ft* O UO Jt 4 4 4 4 B 4 U V C 4 O V J 3 ft* 4 *4* -0 4 -Øh μ C u ».o · ø 4 4 14 · u m* * u ·* mi* - 4 m « u tø >* ø4 C 2 C —p II· - 3 ^4 OO -l · ft* ft.· ft. I* M ft* ft.* h-4 id 5 g 3 » ή ”5 “2 ‘3 i *3 Jl “5 *3 J3 *”1 si2 LUTE 1 jatkuu 91073 35
h '52 ’i| lists ia ia -Is igtfi Is ig ij| III
Is S§ £5 IHs Sg 59 SS 95 53 ?§ *§ *5 -Γ r§ 53 Jp *3 -H -1 3p 5i «3 ~3 Ss 23 si -ss ·ί§ ·?1 -si ·ϊ§ ·*1 ·*| -si ·>3 ·*1 il i g ·*ξ · hi ,?i .il jul .i a .i ml å .fi. .
I f fl il8!! If i 1s! 1 il il .13 .18 .13 .S3 .« .il .tg .S3 .S3 .18 .18 .13 .il · IS i§ si li i| || *§ «i si i\ ss se il jf
S3 ig Si sg S3 II li m y. *; ί§ *5 -g SS
u ss li s| si |i |i h Si sg f| ύ il i| ·52*£5 ·ί! ·58 ·χ§ ·ϊΙι·2δ ·ϊ1 -25 ·*ϊΧ ·iasiS ·*8 ·χΕ · $|*ι1 s| si Is 11Μ si si s· ll*y ύ 33 il li II II s| si s· si si ύ si si ss si .Sg .Sg .S{ .39 .fi .S: .|1 Jl .1 -il -d -II i -li · S3 ss Is sa 33 si SS tS %1 le tg te i§ i g
Il il Si S3 li S3 S3 S3 li 3i 3a S3 58 38 S3 S3 S 3; 33 S3 S3 Ss 1§ S: 33 il 33 ig •sa isssi 'il -sa *sf ’siisl 'Is ·« ‘ss 'tests -si
tf il fi Is li li å il si η n si if H
•Ss ·33 ‘SS ‘S3 ·£8 -S3 *3s ·«§ ·3§ ?§ *t§ ‘Si ·5ί ·*!{ · 35 lg si i| tf si sa si si s& ss ss si s| .S3 .SE .53,33 .SE .« .S» .Sb.SS .58 .33 .S3 .SLS3 .
il si ylfs ss si s; sgisf -g si tf ssasa
Il S3 is 1§ 18 S3 S3 1§ S§ SS S3 S3 S3 33 •il -Il il-1; -Il -s -ti -Il -is-23 -53 .sa.-i Ja. η la il i l| n Jl fg is il n is 19 la ti 1« li t| la If II fi si Ig il si sg |f il il il ililS Al ‘11 ·|1 ililf is ii i§ *|øs β|8 J?i Ϊ3 s3 s5 tp ::3 ?3 *3 :c ·κ 58 fS 33 £3 13 ΙΕ i§ xs iø ti tg 52 sE Jp 53 ► li fi? 38 £8 fil· <3 έΡ £ϊ fil· fi 5 si SS Ss S3 il sa 3g S§ 33 S3 Ss s il S3 53 33 SS S3 S: S3 ia Si Ιξ il gi 58 S3 53 Λ*. 5^ sg 5g »*.V 53 fi\ Λϋ «3 ···; <*5 36 LUTE 1 jatkuu il ii If is Ipli H l!i · Is ·|ΐϊ|| If i μι | fc* «« — h 4 r <{« · h «υ η Η h hF **h J u 34 P j Η β ·{ I* Thi bC tp «4 · ^ M ) 4 JH fc4 Ϊη 2 U *g * 6 P u
St ·ι»ρ »So ·ρί ·£Ε ·3ο · ^4 ·ί®6 » ·ρ · η 4 · ·Κ ·|β *5« ·ϊ *5 ·Ρ ·3 *
li il I] li li 11 if ft! i 12 11 i i | I I
«o S & S% Z 4 Z 3 Z μ Z 2 - g P 4 mS hh up 3 G x S
si £5 3* jil ;g s| £ I -I S3 ^5 58*] 5 h c 3 si*« *11 'S^ *-l *3 '3 S' «si *%s *5lsii *5! *s *1 si * 11 ·§ 5! n ·< ?s ΐ s si ?d i i 23 si s : * s ic co si ii 38 2: J2 3 3 iS ίρ IS 58 tij gi : 3 56 33 38 ί\ se 32 33 3 3 ?8 ?s 23 *3 V i \ :s ► G S3 S3 4 0 H 2 3 d 4 S 4 b 4 PO 52 1 3 b j 3 < J 3 • u k H u o $ < · b 1 4 it p «4 4 A g ·· Q kW ·4 ΑΧ P ) » r
k. 4 «4 · H kW KO ·>< A d · H M OQ K U 4 4 P< 4 < · O
d 4 4 Q S 4 KU up op P4 P & M4 »4 KO »P ·« P ' * ζ *3 23 *3 2 c 28 jig 23 i 2 «38 i§ 33 »3 2: 2 § 3 *8 *88813 '-2 *i8 *18 "titt 5 **2p *:3 *ιρ ·£3|2 *g ·ι ·3 ·2§ jr3 18SS3 26 18 S3 5531 8 3-3 18 13 5325] i 3 § 5« i 3 13 23 2: £3 *5 ti 2 8 23a s s s3 18 £ Π s 13 12 38 8i i g li h 3 3 5:2 2 2 S3 23 3 5 3 = 5 23 23 Si 36 23 ¢1 S3 3 S3 s3 S3 52 3i i B ! 5; tg *23 * 82 ·2: *28 *12 *2i *2 6 *223 *26 *J8 *22 *2; 3 *8 : '3 15 *£3 iS 33 53 58 13 3 a 513 zi tt 23 5] 5 3 i 3 S3 ss so ss ca so s s i* 3 233 *3 ts 52 £§ 3 s : 3 S3 23 3*» i*2 *5 S3 SS 2 2 25§ tC 13 *6 12 3 3 G 5 s s *2P *238ss *ea *s5 *23 *2 6813.3 *33 *13 *33 *ii 8 # *a *3 ·Ε * 22 2P «4n jp jp 26 *n C 84 ·»ip —3 JT2 88 Si S i 4 4 p
M 4 CP 4 0 M4 Cb M< kb d C K—P —2 —U kC ba · U Η P
• 2 14 ·ρ · U 1P · < »4 · Q «Ρ k U k& *Q a 4 O P
.»2 *P KO M'U ·4 K< mP k« « Kk O 4 4 4 4 H 4 *· * ** U P U
UU Ju up 4 0 4· A o m4 ·» 2 U · F *2 kU «k (U < U K 4 kb — <4 bU ^4 b« «I —2 * 2 kHk PU >U «Η ΪΡ O P 4 4 2 <P tp «Ρ t( K< kU — U «M 4 PU PH k U d( . W . i* ,P .tf .
44 «ku ·Μ4 'ko 'W1 *d< *22*4 o •4ki| >·ρ i|4 ···! ι·< ·ί» 'K ·Μ ·ί · ·» U ·4 ρ U · Ρ Κ| f a I 4 · 4 Ρ·Ρ al 4 Γ* 2 ·* Ρ Κ« Η Ο Ο 4 2G 22 28 S3 S3 2§ S3 2 8 253 1$ 53 S2 ίί Π Π 22 ?3 S2 «ρ 15 23 28 2 3 226 28 SS S3 ¢3 Ρ Π § 5 JP 44 kU ko 22 OU UU O Q UPQ k U PU K4 -Ρ P 4 W « IO *u pa| «a pO *4 «4 · 4 · — a ap pp p U lb P 2 u 4 S3 w4 -< 4p 23 23 4u 2 2 23L8 **3 —S *t3 tP 3 3 jj {
Ϊ3·23·23·^3823·:5·ϊ6·ί 8,S2ii8u3,2G,JC#33,38g‘J,i V
-A ?3 sS9S2 33 i3 s e i?33&s 23 I2 :g 22E ; ]
$3 SS 23 26 S3 2S 22 J E S33 S6 88 S6 S 6 3 { S
S& SG 23 ZH 22 SC 28 5 3 ^23 S3 S3 38 j : C g g 53 23 28 22 S3 »S 53 <L 6 *£23 25 26 2.3 56 3 g .3 6
12 iS 58 58 S3 58 8g 1 3 8βΙ8 23 t2 ?3 53 g E C C
S3 2C 26 23 23 26 s§ 2 3 «»g 33 Ϊ8 3 C 8 13 23 :6 23 12 12 2 S3 215 23 S3 55 i] J S 3 ! 18 12 18 83 13 13 5l 13 128 2§ 28 26 22 g 1 6 3 -!'-I if ie "ifsii ·ιι j i *ili ·ί§*|1 ·ί|·ι| ·§ *ιι| · · 38 S3 35 lE i: 2 3 1 S3 23^?3 28 £3 8 g"3 i sj S3 33 S3 23 23 Si 2 g 215 33 23 *3 3 £ 5 *t 83 p2 p3 k2 ·3 i; w C ·7ν S3 S3 2 i 28 g 6 3 1 l. 1 .38 .5E .52 .83 .38 .lg .5 g .12: .26 .23 .2 : .S3 .C .3 .3 .] .
|| |i Js jjj li s| |l j I II: 11 12 tf Is J 1 I i
ié 11 ’4 11 il 4 2f I i 5=1 i =g 4 Ji i I i I
II
37 LUTE 1 jatkuu 91073 sa ·ϊκ · tat sa *sa · te ·;κ ·μι aa ·ίΡ ise ’sa · .'.asa« ' 1 £5 3251s ί'. 18 ts 3ssm 1§ rag 3' <3=*· α !l lå il s· ύ 13 =5 ¢8 i* Ug s; s i
Si ti £3 Is ?i “g 53 £5 jl Si if S3 Sg V.
Si '4 '12 'll '.Si 'il Ί3 '£§ ‘SS Ί) '35 '15 ' l| '5: ' fi ί§ ύ se «I ia 33 si si Is i; si l| s il ί: 18 ig il «§ ή Si ti |3 S3 tg gg ja “å ·?ί ·|2 *ζΗ*^Ι '52 ’ti *** *ϊβ*·3 ·*§ *-i * »3 i «I l| ll3Sglii l| 13 1 *1§ 33 i§ S3 ξβ= i lp 18 13 S| 33 13 si S IS 58 33 i§ ti S .33 .£8 .13 .33 .13 .18 .33 .3 .S3 .38 .13 .Sb .1 .
i ή «i *1 *4 si « si ?| ti Si «I H i; s Is 5§ ύ *A si Is Is ?§ <·« ii -ii i ‘3§ '15 'S3 '13238 Ί| is '33 122S 'S3 '13 '33 ' 1 -4 η ή 33*35 s| S3 <i3*si ή Sg 13 i si 13 S3 13 ti ti si .li 4 n S3 si 15 1 · *12 'S3 iS ·*δ *t2 *iS *lg ·?1 ‘Ig ·$» · ύ ·Η3 · 3 4 *§ *Λ si *= *4 *§ p! li si li 3] *§ S 25 38 2¾ ¢5 c: as gu h* *9 *5 ¢9 C'* s8
C c\ ¢3 Cd 44 38 *8 gu 35 JC§ 3; 35 ic JC
Ils! li li lis ‘list 1 'il 'si s§ 'mil 'li 'li' 5 15 33 S3 12 si 18 33 €8 '33 1g 33 I| Sg 3 S3 15 18 13 13 S3 S3 15 52 13 1 .Ss 13 I Ί8 'Sg '33 Ί8 '58 'il ‘si 'S3 'S3 |g Sj il 'ti ' s Ss il 33' II li 15 53 33 15 ag S3 Is s5 i 15 15 il 33 13 18 ig 38 S3 il 1§ *A 15 s · 13 g 52 -33 ‘la ’Sa ·5Ϊ|5ΐ ‘53 ·33 ’Sa ·3||15 ·5| · δ 1Β*ί§ S3 18 33 12*53 15 3| S3 332ίΙ ί| 8 S3 £3 -a? tjj se tg ·ϊ3 ia s5 "§ *5 1.58 .13 .15 .IE .13 .18 .13 .13 .S3 .15 .Sa .32 .|5 .
i ·§ 59 *S £g ig £g ig 5g £g ^9 ?g u ύ ?c i g S 3 33 Ιξ 88 £E ^3 ?a ·ΐ§ I ‘ύ ·φ£5 ·]§ hi ·£§ ·£3Η3 "S| *ξ| 'φΐϊ m 3 J-3 g gu c μ gS ¢5- a3 «9 cg s£**ce S c6 il si cl ci ||i || cl |5 tu (3 4 «4 ^4 · «I · jl G au K4 au · r aj al; ah lu I Ίμ ‘3·» *53 Ί§ ·ίξ ^3g ·ϊ8 ·1| ·1§ ·48 'ag ·1δ ·13 · I 11 Si li 5| ^3 ύ 13 33 1 33 1| 12 33 1 33 53 33 12 53 13 12 12 1 11 .52 53 is 3 sg λλ ΐ8 ¢5 sa sa 5a sb sb cs Isa ti aa LUTE 1 jatkuu 38 \\ *« -a -«ifi *« ·« is' liifl 11 Is It' I1 j ‘ ϋ .s| .si .il.! .fl .|j .si. is .11.1} .¾ \\ \ -l.
»5 *5 i§ i: *2 *§ ύ ύ is li S3 5 ? S5 £3 ig ΛΪ *6 ic £ Ϊ3 eg eg ·§ £§ 12 Ec S§ ·?§ *|jl ·ϊ| ·ί|$5§ "ij ·|| · if ’Isisa ’ll 'a! ’ f i* «§ 5¾ if si iPsi si ei |e llsi| |I n § r si n la ia ss ss si s| fa Is |1 Μ 1 ·? a
Is .Sj .13 .li .SS .15 .Is .52 . $3 -li -II ·!! -si ·??·?· si sg s| is ύ ij g| h| fs Ss II li li S3 i l! li l! P If |i ύ ύ ύ If ύ |l jf ύ \ sm!j ’si il i i *ls |f| II * ff 1j 1 ill ‘a! ’ J ’ {‘ «! ii II li si 11 ii| jf i! tf 11 li il l as I ί "W1 j il 1 il · ifl ’}! li il li Ί| i i il si SS J· JE s; Il JE H| 5 S! S3 i| |« g g »e ss -4 *1 ·1|*|§ -lig ·!§ -il -iisii -ti -s -i · tf ifii 3i if si II si I|1 il || || si i| fif !) li ij i l| I i I fl i li if f l n \\ «Pli |i ύ «I sPfi ij |f jf |P|| 1 jf if -si i I li il il Ή Ί i il 4 il il il Ί1 · - J ji se se rg |g ϊ $ *3 li 11 || fa 1 § si S8 il Jc ig i| fi s§ I i 82 52 83 fl fl f 1 ji Is ’5S -=3 -ii - jg -s gsHS -58 -SE ·|§ *s|sl ’I ’ il si n «ris «3 al i« ! I 11 21 li η 111 i ·ί3 'ύ ·ί1 *·§ -ύ I ·|ί ‘la 'ξ\ ’δ! ‘S *1 ‘ ss jc ig 53 ¢9 28 s5 ig i S 3: V: iS ?3 8 2 j| ή =ξ il jfi JE ii I 2 si |§ 58 S3 |3 1 g
si j§ al al ύ 53 S3 si 2 i n Js Js =2 I S
II
Claims (10)
1. Parannus menetelmåån LAV/HTLV-III-viruksen tai LAV/HTLV-III-viruksen vasta-aineen låsnåolon toteamiseksi, jossa nayte kom-binoidaan yhdisteeseen, jolla on epitooppiset kohdat, jotka kil-pailevat immunologisesti LAV/HTLV-III:n epitooppisten kohtien kanssa, jolloin vasta-aineet sitoutuvat sellaiseen proteiiniyh-disteeseen, ja muodostavat spesifin sitoutuneen parikompleksin ja kompleksinmuodostuksen måårå mååritetåån, tunnettu siitå, ettå analyysivåliaineeseen lisåtåån reagenssina yhdiste, joka sisåltåå vahintåån yhden peptidin, jossa on ainakin 6 ami-nohappoa ja vahemman kuin 50 aminohappoa ja jota koodaa LAV/HTLV-III:n koodaava alue emasparien 450-545, 696-731, 900-1421 tai 7210-7815 valillS.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå yhdiste koostuu vahintåån kahdesta peptidistå, jois-ta toista koodaa alue emåsparista 1320 emåspariin 1385 ja toista alue emåsparista 7231 emåspariin 7794.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå jokainen måårittely on tehty itsenåisesti kuhunkin peptidiin sitoutumisen perustee11a.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå peptidillå on sekvenssi, joka sisåltyy sekvenssinå ainakin yhteen seuraavista peptidisekvensseistå: 1 (15) Y-Asp-Cys-Lys-Thr-Ile-Leu-Lys-Ala-Leu- Gly-Pro-Ala-Ala-Thr-Leu-Glu-Glu-Met-Met- Thr-Ala-Cys-X (ID (17) Y-Leu-Lys-Glu-Thr-Ile-Asn-Glu-Glu-Ala- Ala-Glu-Trp-Asp-Arg-Val-His-Pro-Val-His- Ala-Z-X (III) (92) Y-Asp-Arg-Val-llis-Pro-Val-His-Ala-Gly-Pro- Ile-Ala-Pro-Gly-Gln-X (IV) (90) Y-Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Ile-Leu-Asp-Ile-Arg- Gln-Gly-Pro-Lys-Glu-Pro-Phe-Arg-Asp-Tyr-Val- Asp-Arg-Phe-Tyr-Lys-Thr-Leu-Arg-Z-X (V) (88) Y-Asn-Trp-Nor-Thr-Glu-Thr-Leu-Leu-Val-Gln- Asn-Ala-Asn-Pro-Asp-Cys-Lys-Thr-Ile-Leu-Lys- Ala-Leu-Gly-Pro-Ala-Ala-Thr-Leu-Glu-Glu-Nor- Nor-Thr-Ala-Cys-X (VI) (97) Y-Arg-Glu-Leu-Glu-Arg-Phe-AIa-Val-Asn-Pro-Gly- Leu-Leu-Glu-Thr-Ser-Glu-Gly-Cys-Arg-Gln-Ile- Leu-Gly-Gln-Leu-Gln-Pro-Ser-Leu-Gln-Thr-X (VII) (71) Y-Asp-Thr-Gly-His-Ser-Ser-Gln-Val-Ser-GIn- Asn-Tyr II 4i 91073 (VIII) (36) Val-Lys-Ile-Glu-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Pro-Thr-Lys-Ala-Lys-Arg-Arg-Val-Val-Gln-Arg-Glu-Lys-Arg-Ala-Z-X (IX) (56) Ile-Lys-Gln-Leu-Gln-Ala-Arg-Ile-Leu- Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Z-X (X) (39) Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys- Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys- Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-X (XI) (40) Y-Lys-Ser-Leu-Glu-Gln-Ile-Trp-Asn-Asn- Met-Thr-Trp-Met-Glu-Trp-Asp-Arg-Glu- Ile-Asn-Z-X (XII) (23) Y-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser-Gln-Asn- Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Glu-Cln-Glu-Leu-Leu- Glu-Leu-Asp-Lys-Trp-Z-X (XIII) (79) Y-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-X, jossa X on OH tai NH2, ja Y ja Z, jos niitå on lHsna, ovat amino-happoja, jotka on lisåtty helpottamaan kytkeytymista, ja peptidi on vapaa muista peptideista tai konjugoitu makromolekyyliin, jolle vasta-aineet olennaisesti puuttuvat ihmisen seerumista.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelma, tunnettu suta, etta yhdiste sisåltaå våhintåån kaksi mainittua peptidia, jolloin ainakin yhdella on peptidisekvenssien I-VII mukainen aminohapposekvenssi ja ainakin yhdella peptideista on peptidien VIII-XIII mukainen aminohapposekvenssi.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta kaksi mainituista peptideista on kovalenttisesti sidottu toisiinsa sidoksen tai ketjun valityksellå.
7. Peptidi, tunnettu siitå, ettfi siinS. on ainakin 6 ja våheiranån kuin 50 aminohappoa, jotka sisaltyvat ainakin yhteen seuraavan kaavan mukaisen peptidisekvenssin sekvenssiins (I) (15) Y-Asp-Cys-Lys-Thr-Ile-Leu-Lys-Ala-Leu- Gly-Pro-Ala-Ala-Thr-Leu-Glu-Glu-Met-Met- Thr-Ala-Cys-X (II) (17) Y-Leu-Lys-Glu-Thr-Ile-Asn-Glu-Glu-Ala- Ala-Glu-Trp-Asp-Arg-Val-His-Pro-Val-His- Ala-Z-X (III) (92) Y-Asp-Arg-Val-His-Pro-Val-His-Ala-Gly-Pro- Ile-Ala-Pro-Gly-Gln-X (IV) (90) Y-Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Ile-Leu-Asp-Ile-Arg- Gln-Gly-Pro-Lys-Glu-Pro-Phe-Arg-Asp-Tyr-Val- Asp-Arg-Phe-Tyr-Lys-Thr-Leu-Arg-Z-X (V) (88) Y-Asn-Trp-Nor-Thr-Glu-Thr-Leu-Leu-Val-Gln- Asn-Ala-Asn-Pro-Asp-Cys-Lys-Thr-Ile-Leu-Lys- Ala-Leu-Gly-Pro-Ala-Ala-Thr-Leu-Glu-Glu-Nor- Nor-Thr-Ala-Cys-X (VI) (97) Arg-Glu-Leu-Glu-Arg-Phe-Ala-Val-Asn-Pro-Gly- Leu-Leu-Glu-Thr-Ser-Glu-Gly-Cye-Arg-Gln-Ile- Leu-Gly-Gln-Leu-Gln-Pro-Ser-Leu-Gln-Thr tl 43 91073 (VII) (71) Asp-Thr-Gly-His-Ser-Ser-Gln-Val-Ser-Cln-Asn-Tyr (VIII) (36» Val-Lys-Ile-Glu-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Pro- Thr-Lys-Ala-Lys-Arg-Arg-Val-Va 1-Gln-Arg-Glu-Lys-Arg-Ala-Z-X (IX) (56) Ile-Lys-Gln-Leu-Cln-Ala-Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Z-X (X) (39) Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys- Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Cly-Cys- Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-X (XI) (40) V-Lys-Ser-Leu-Glu-Gln-Ile-Trp-Asn-Asn- Met-Thr-Trp-Met-Glu-Trp-Asp-Arg-Glu- Ile-Asn-Z-X (XII) (23) Y-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser-Gln-Asn- Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Glu-Gln-Glu-Leu-Leu- Glu-Leu-Asp-Lys-Trp-Z-X TAI (XIII) (79) Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cy s-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys, joissa X on OH tai NH2 ja sekå Y etta Z, jos ovat lSsnå, ovat aminohappoja, jotka on lisåtty helpottamaan kytkeytymistå.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen peptidi, tunnettu siita, ettå peptidin N-paa on asetyloitu.
9. Patenttivaatimuksen 7 mukainen peptidi, tunnettu siita, ettS peptidi on kytketty peptidiin tai proteiiniin, jonka molekyylipaino on ainakin 5000, jollainen peptidi tai proteiini ei normaalisti sitoudu ihmisisannassa esiintyviin vasta-ainei-siin.
10. LAV/HTLV-III:n vasta-aineita maarittamaan tarkoitetuissa immunologisissa kokeissa kaytettava peptidi, joka sisaitaa ainakin kuusi aminohappoa ja vahemman kuin 50 aminohappoa, jotka sisMltyvat sekvenssiin Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys (X) (39), seka sen homologit. II 45 91073
Applications Claiming Priority (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US72805285A | 1985-04-29 | 1985-04-29 | |
| US72805285 | 1985-04-29 | ||
| US76730385 | 1985-08-19 | ||
| US06/767,303 US4629783A (en) | 1985-04-29 | 1985-08-19 | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| US84448586A | 1986-03-26 | 1986-03-26 | |
| US84448586 | 1986-03-26 | ||
| US8600831 | 1986-04-21 | ||
| PCT/US1986/000831 WO1986006414A1 (en) | 1985-04-29 | 1986-04-21 | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI865313A FI865313A (fi) | 1986-12-29 |
| FI865313A0 FI865313A0 (fi) | 1986-12-29 |
| FI91073B FI91073B (fi) | 1994-01-31 |
| FI91073C true FI91073C (fi) | 1994-05-10 |
Family
ID=27419109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI865313A FI91073C (fi) | 1985-04-29 | 1986-12-29 | Parannettu menetelmä ja peptidi AIDS-sukuisten tautien osoittamiseksi |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6485900B1 (fi) |
| EP (1) | EP0220273B2 (fi) |
| KR (1) | KR910002374B1 (fi) |
| AT (1) | ATE116006T1 (fi) |
| DE (1) | DE3650175T3 (fi) |
| DK (2) | DK171250B1 (fi) |
| FI (1) | FI91073C (fi) |
| WO (1) | WO1986006414A1 (fi) |
Families Citing this family (54)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1341482C (en) | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
| US7273695B1 (en) | 1984-10-31 | 2007-09-25 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | HIV immunoassays using synthetic envelope polypeptides |
| US7285271B1 (en) | 1984-10-31 | 2007-10-23 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Antigenic composition comprising an HIV gag or env polypeptide |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| JP2702911B2 (ja) * | 1985-09-11 | 1998-01-26 | ユナイテツド・バイオメデイカル・インコ−ポレ−テツド | 合成ペプチド、並びにそれを用いたエイズおよびプリ・エイズの検出方法 |
| GB8525615D0 (en) * | 1985-10-17 | 1985-11-20 | Hoffmann La Roche | Polypeptides |
| US7115363B1 (en) | 1986-01-22 | 2006-10-03 | Institut Pasteur | Retrovirus capable of causing AIDS, means and methods for detecting it in vitro |
| US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
| FR2625100A2 (fr) * | 1986-03-13 | 1989-06-30 | Lurhuma Zirimwabagabo | Utilisation d'antigenes pour la preparation de vaccins, proteine rendue immunogene et composition pharmaceutique la comportant |
| US5075211A (en) * | 1986-03-26 | 1991-12-24 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| US4879212A (en) * | 1986-04-02 | 1989-11-07 | United Biomedical Inc. | Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III |
| US4925784A (en) * | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
| DK169582B1 (da) * | 1986-06-23 | 1994-12-12 | Squibb Bristol Myers Co | Humant monoklonalt antistof, der er i stand til at reagere med en epitop på LAV/HTLV-III kappeglycoproteinet gp41, cellelinier, som producerer sådant antistof, farmaceutisk præparat indeholdende antistoffet samt fremgangsmåde til bestemmelse af nærværelsen af LAV/HTLV-III i en biologisk prøve og fremgangsmåde til separering af specifikke antigendeterminanter af LAV/HTLV-III under anvendelse af ant |
| US5087557A (en) * | 1986-06-23 | 1992-02-11 | Genetic Systems Corporation | Human monoclonal antibody to lymphadenopathy-associated virus |
| NZ221440A (en) * | 1986-08-20 | 1991-11-26 | Genetic Systems Corp | Composition containing monoclonal antibodies/peptides useful in treating and diagnosing hiv infections |
| WO1988005783A1 (en) * | 1987-01-28 | 1988-08-11 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Immunosuppressive peptides and methods of use |
| DE3850593T3 (de) * | 1987-03-25 | 2001-01-04 | Genetic Systems Corp., Seattle | Synthetische Antigene zur Bestimmung der AIDS-bezogenen, von LAV-2 verursachten Krankheiten. |
| NO881151L (no) * | 1987-03-27 | 1988-09-28 | Syntello Ab | Syntetisk hiv-1-antigen. |
| SE8701628D0 (sv) * | 1987-04-16 | 1987-04-16 | Erling Norrby | Medel for analys mm |
| CA1339363C (en) * | 1987-05-01 | 1997-08-26 | Alan Ray Flesher | Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use |
| US4921787A (en) * | 1987-05-01 | 1990-05-01 | Cambridge Bioscience Corporation | Detection of antibodies to human immunodeficiency virus by agglutination of antigen coated latex |
| FI872409A0 (fi) * | 1987-05-29 | 1987-05-29 | Labsystems Oy | Foerfarande foer detektering av hiv-1 motkroppar. |
| US5128319A (en) * | 1987-08-28 | 1992-07-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Prophylaxis and therapy of acquired immunodeficiency syndrome |
| NZ226026A (en) * | 1987-09-04 | 1991-03-26 | Wellcome Found | Immunoassay for an antibody using recombinant antigens expressed in two different genera |
| SE8704185L (sv) * | 1987-10-28 | 1989-04-29 | Ferring Ab | Nya peptider, artificiella antigener och immunoanalystestsatser |
| US7442525B1 (en) | 1987-12-24 | 2008-10-28 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Method for expressing HIV polypeptides |
| SE8705197D0 (sv) * | 1987-12-30 | 1987-12-30 | Jonas Blomberg | New peptides, two diagnostic methods using the peptides and a medicament based on the peptides |
| US6218102B1 (en) * | 1988-01-27 | 2001-04-17 | Biochem Immunosystems, Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| US6210874B1 (en) | 1988-01-27 | 2001-04-03 | Biochem Immunosystems, Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| US5241047A (en) * | 1988-12-08 | 1993-08-31 | Biochem Pharma Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| US6214537B1 (en) | 1988-01-27 | 2001-04-10 | Biochem Immunosystems, Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| ATE134195T1 (de) * | 1988-06-10 | 1996-02-15 | United Biomedical Inc | Peptidfragmente von hiv |
| GB8828097D0 (en) * | 1988-12-01 | 1989-01-05 | Wellcome Found | Peptides |
| GB8828098D0 (en) * | 1988-12-01 | 1989-01-05 | Wellcome Found | Peptides |
| GB8910145D0 (en) * | 1989-05-03 | 1989-06-21 | Connaught Lab | Synthetic peptides for an hiv-1 vaccine |
| WO1991008227A1 (en) * | 1989-11-27 | 1991-06-13 | Replico Medical Aktiebolag | NEW HIV-1 p17 PEPTIDES, DIAGNOSTIC ANTIGENS AND IMMUNOASSAY METHOD |
| US6248574B1 (en) * | 1989-12-13 | 2001-06-19 | Avigdor Shaffermann | Polypeptides selectively reactive with antibodies against human immunodeficiency virus and vaccines comprising the polypeptides |
| EP0510054A1 (en) * | 1990-01-05 | 1992-10-28 | United Biomedical, Inc. | Hiv-1 core protein fragments |
| FR2657017B1 (fr) * | 1990-01-16 | 1995-08-18 | Clonatec Sa | Peptides derivant de la glycoproteine d'enveloppe du virus-hiv-1, leurs applications a la detection d'une infection due a ce virus et a la vaccination contre le sida. |
| EP0438332B1 (fr) * | 1990-01-16 | 1998-04-08 | Orgenics Ltd. | Peptides dérivant de la glycoprotéine d'enveloppe de virus HIV, leurs applications à la détection d'une infection due à ces virus et à la vaccination contre le SIDA |
| SE468168B (sv) * | 1990-02-20 | 1992-11-16 | Replico Medical Ab | Hiv-1, p24 peptider, diagnostiska antigener och foerfarande foer saerskiljande diagnostik av preliminaert hiv-1 positiva serumprov |
| SE470074B (sv) * | 1990-08-16 | 1993-11-01 | Replico Medical Ab | Förfarande för diagnos av picorna- och/eller flavivirusinfektion, peptider, diagnostiska antigener och vaccinkomposition med dessa peptider |
| DE4039925A1 (de) * | 1990-12-14 | 1992-06-17 | Behringwerke Ag | Ausgewaehlte peptide des gruppenspezifischen antigens (gag) von humanem immundefizienzvirus (hiv), ihre herstellung und verwendung |
| AU4387193A (en) * | 1992-05-29 | 1993-12-30 | Abbott Laboratories | Ligase chain reaction starting with rna sequences |
| US6479055B1 (en) | 1993-06-07 | 2002-11-12 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including respiratory syncytial virus transmission |
| FR2732346B1 (fr) * | 1995-03-27 | 1997-05-30 | Centre Nat Rech Scient | Proteines mutees, codees par un gene env mute de lentivirus, fragments peptidiques inclus dans lesdites proteines, vecteurs d'expression exprimant lesdites proteines mutees et leurs applications |
| FR2773156B1 (fr) * | 1997-12-26 | 2000-03-31 | Biovacs Inc | Nouveaux immunogenes anti-retroviraux (toxoides), nouveaux procedes de preparation et application a la prevention et au traitement du sida |
| FR2781158B1 (fr) | 1998-07-15 | 2002-12-13 | Vacs Internat | Nouvelles proteines modifiees immunogenes non immunosuppressives, leur procede de preparation et leurs applications |
| CA2676762C (en) * | 1998-11-30 | 2015-12-29 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Peptides for the detection of hiv-1 group o |
| FR2802426B1 (fr) | 1999-12-15 | 2004-04-02 | Neovacs | Utilisation de proteines immunogenes immunosuppressives et/ou angiogeniques rendues inactives, pour la production d'iga secretoires |
| DE60336978D1 (de) * | 2003-04-11 | 2011-06-16 | Pasteur Institut | Synthetische Peptid-HIV-Vakzine: das CBD-Epitop als effizientes Immunogen zur Induktion HIV-neutralisierender Antikörper |
| FR2882557A1 (fr) * | 2005-02-25 | 2006-09-01 | Centre Nat Rech Scient | Epitopes de vih et composition pharmaceutique les contenant |
| AU2016218254B2 (en) | 2015-02-09 | 2019-12-19 | Slingshot Biosciences, Inc. | Hydrogel particles with tunable optical properties and methods for using the same |
| US11313782B2 (en) | 2020-01-24 | 2022-04-26 | Slingshot Biosciences, Inc. | Compositions and methods for cell-like calibration particles |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8324800D0 (en) | 1983-09-15 | 1983-10-19 | Pasteur Institut | Antigens |
| FR2571968B1 (fr) | 1984-10-18 | 1989-03-17 | Pasteur Institut | Virus purifie des lymphadenopathies et du syndrome d'immuno-depression acquise et antigenes d'enveloppe de ce virus, procede d'obtention de ce virus et de ces antigenes d'enveloppe de ce virus, applications de ce virus ou de ces antigenes a la preparation de compositions immunogenes ou pour le diagnostic des susdites affections. |
| GB8429099D0 (en) | 1984-11-16 | 1984-12-27 | Pasteur Institut | Closed dna sequences |
| US4520113A (en) * | 1984-04-23 | 1985-05-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with AIDS and pre-AIDS conditions |
| GB8501473D0 (en) | 1985-01-21 | 1985-02-20 | Pasteur Institut | Cloned dna sequences |
| ES8705522A1 (es) | 1984-10-18 | 1987-05-01 | Pasteur Institut | Un procedimiento para la preparacion de derivados purificados de una glicoproteina. |
| US4774175A (en) | 1985-03-01 | 1988-09-27 | Centocor, Inc. | Immunochemical methods for the detection of antibody against HTLV-III |
| US4784941A (en) | 1985-04-08 | 1988-11-15 | Genetic Systems Corporation | Expression and diagnostic use of pENV-3 encoded peptides which are immunologically reactive with antibodies to LAV |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| US4843011A (en) | 1985-08-01 | 1989-06-27 | Akzo N.V. | Monoclonal antibodies for binding HTLV-III proteins, and cell lines for their production |
| US4735896A (en) * | 1986-03-04 | 1988-04-05 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptide and process of using same for the detection and diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions |
| US4803156A (en) * | 1985-09-11 | 1989-02-07 | New York Blood Center | Peptide-beta-lactamase conjugates for enzyme-linked immunoassays |
| US4956273A (en) | 1985-10-24 | 1990-09-11 | Southwest Foundation For Biomedical Research | Synthetic peptides and method of use for diagnosis and vaccination for AIDS and ARC |
| US4839288A (en) | 1986-01-22 | 1989-06-13 | Institut Pasteur | Retrovirus capable of causing AIDS, antigens obtained from this retrovirus and corresponding antibodies and their application for diagnostic purposes |
| US4772547A (en) * | 1986-02-03 | 1988-09-20 | Hoffmann-La Roche Inc. | HTLV-III envelope peptides |
| US4753873A (en) | 1986-02-03 | 1988-06-28 | Cambridge Bioscience Corporation | Peptides for the diagnosis of HTLV-III antibodies, their preparation and use |
| US4808536A (en) | 1986-02-27 | 1989-02-28 | Centocor, Inc. | Immunochemical method for detection of antibody against HTLV-III core protein based upon recombinant HTLV-III gag gene encoded protein |
| US4879212A (en) | 1986-04-02 | 1989-11-07 | United Biomedical Inc. | Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III |
| US4957737A (en) | 1986-05-27 | 1990-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | HTLV-III (LAV) envelope peptides |
| US5017688A (en) | 1986-06-12 | 1991-05-21 | Biogen, Inc. | Peptides involved in the pathogenesis of HIV infection |
| US4861707A (en) | 1987-02-02 | 1989-08-29 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Human immunodeficiency virus antigen |
| US4943628A (en) | 1988-06-13 | 1990-07-24 | Ortho Pharmaceutical Corporation | HIV peptide-inducted T cell stimulation |
-
1986
- 1986-04-21 DE DE3650175T patent/DE3650175T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-21 KR KR1019860700948A patent/KR910002374B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-04-21 WO PCT/US1986/000831 patent/WO1986006414A1/en active IP Right Grant
- 1986-04-21 EP EP86902998A patent/EP0220273B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-21 AT AT86902998T patent/ATE116006T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-12-23 DK DK626486A patent/DK171250B1/da not_active IP Right Cessation
- 1986-12-29 FI FI865313A patent/FI91073C/fi not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-06-20 US US07/541,163 patent/US6485900B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-06-01 US US08/252,987 patent/US6214539B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-07-18 DK DK084195A patent/DK84195A/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI91073B (fi) | 1994-01-31 |
| ATE116006T1 (de) | 1995-01-15 |
| FI865313A (fi) | 1986-12-29 |
| AU597884B2 (en) | 1990-06-14 |
| EP0220273B2 (en) | 2007-01-17 |
| DE3650175D1 (de) | 1995-02-02 |
| EP0220273B1 (en) | 1994-12-21 |
| DK84195A (da) | 1995-07-18 |
| DK171250B1 (da) | 1996-08-12 |
| US6214539B1 (en) | 2001-04-10 |
| AU5773386A (en) | 1986-11-18 |
| WO1986006414A1 (en) | 1986-11-06 |
| KR910002374B1 (ko) | 1991-04-20 |
| DK626486D0 (da) | 1986-12-23 |
| US6485900B1 (en) | 2002-11-26 |
| EP0220273A4 (en) | 1989-10-04 |
| EP0220273A1 (en) | 1987-05-06 |
| DK626486A (da) | 1986-12-23 |
| KR880700080A (ko) | 1988-02-15 |
| DE3650175T3 (de) | 2007-09-06 |
| DE3650175T2 (de) | 1995-06-14 |
| FI865313A0 (fi) | 1986-12-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI91073C (fi) | Parannettu menetelmä ja peptidi AIDS-sukuisten tautien osoittamiseksi | |
| US4629783A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| AU616383B2 (en) | Synthetic antigen for detection of aids-related disease | |
| US6869608B2 (en) | Peptides derived from a retrovirus of the HIV group and their use | |
| US6322964B1 (en) | Synthetic HIV-2 gag and env oligopeptides reactive with HIV-2 specific antibodies | |
| EP0284383B2 (en) | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease caused by LAV-2 | |
| AU753780B2 (en) | Synthetic antigen for the detection of antibodies immunoreactive with HIV virus | |
| DK173905B1 (da) | HIV-beslægtede polypeptider, diagnostiske systemer og analysemetoder | |
| US6130314A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| AU597884C (en) | Synthetic antigens for the detection of AIDS-related disease | |
| JP2705791B2 (ja) | Ａｉｄｓ関連病の検出のための合成抗原 | |
| CA2676762C (en) | Peptides for the detection of hiv-1 group o | |
| NO173034B (no) | Fremgangsmaate og peptider for paavisning av aids-relatert sykdom | |
| Komoto et al. | Low or no antibody responses to human immunodeficiency virus type 1 Nef in infected carriers with subtype E, in contrast to subtype B that showed antibodies preferentially recognizing subtype-specific Nef epitopes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: GENETIC SYSTEMS CORPORATION |
|
| MA | Patent expired |