FI90532B - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten oktahydroindolijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

1 90532

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten ok-tahydroindolijohdannaisten valmistamiseksi

Jakamalla erotettu hakemuksesta 812652 5

Keksintö koskee uusien kaavan I mukaisten oktahyd-roindolijohdannaisten ja niiden fysiologisesti hyväksyttävien suolojen valmistusta, 10

-COOH

U-«N

nC0-CH-NH-CH-C00R-,

I I J

Rl R2 15 jossa kaavassa Rx on CH3 tai CH2F, R2 on alkyyli, jossa on enintään 6 hiiliatomia ja joka voi olla substituoitu ami-nolla tai hydroksilla, ja R3 on vety tai alkyyli, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että Rx ja R2 20 eivät samanaikaisesti tarkoita metyyliä. Näillä yhdisteillä on verenpainetta alentava vaikutus.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden fysiologisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan valmistaa siten, että a) kaavan II mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan 25 kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa, f Q-CH-C00R~ -N\ r2

CO-CH-Q

.30 I

: . Ri (11) (III) joissa kaavoissa Rlf R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, toinen symboleista Q on nukleofuginen ryhmä ja 35 toinen on NH2 ja R4 on H, metyyli, etyyli, bentsyyli tai 2 90532 tert.-butyyli, ja haluttaessa saatu esteri muutetaan kar-boksyylihapoksi (R2 ja/tai R4 = vety), tai b) yhdiste, jonka kaava on 5 POOC-(j:H-NH-CH-COOP (IV) R1 R2 jossa R3 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, P on vety tai toinen symboleista P voi myös tarkoittaa samaa kuin 10 edellä määritelty R3, kuten tert.-butyyliä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on ^C00R4 3.5 II ΊΓ U_iXh jossa R4 tarkoittaa samaa kuin edellä, kondensointiaineen 20 läsnä ollessa, ja haluttaessa toinen tai kumpikin esteri-ryhmä muutetaan karboksyylihapoksi, tai c) kaavan VI mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan VII mukaisen yhdisteen kanssa, 25 I^^Y^\r-'C00R4 T=C-C00Ro f I 3 L J-N r9 \ λ

:. C0-C=T

(VI) Rx (VII) 30 joissa kaavoissa n, Rx, R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja toinen symboleista T on vety ja NH2 ja toinen on happiatomi, ja saatu Schiffin emäs pelkistetään, ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste muu-35 tetaan suolaksi.

li 3 90532

Valmistettaessa yhdisteitä I voidaan lähteä esimerkiksi 2-halogeenikarboksyylihappojohdannaisista II tai III, jotka reagoivat nukleofiilisten yhdisteiden kanssa. Tämä reaktio suoritetaan ensisijaisesti veden kanssa se-5 koittuvissa orgaanisissa liuottimissa, mahdollisesti veden läsnäollessa, jolloin lisätään epäorgaanista tai tertiääristä tai kvartääristä orgaanista emästä. Jos reaktio-osapuolet liukenevat aproottisiin orgaanisiin liuottimiin, sellaista liuotinta on pidettävä parempana, jol-10 loin emäkseksi on edullista lisätä trialkyyliamiinia, tetra-alkyyliammoniumhydroksida tai tetrametyyliguanidii-nia tai alkali- tai maa-alkalikarbonaatin suspensiota.

Lähtöaine

Co.

M

1 COOH

H

X

20 valmistetaan hydraamalla katalyyttisesti, lähinnä ro-dium-katalyyteillä, yhdiste, jonka kaava on if; ccl

- · COOH

:.: 25 H

VIII

Tästä saadaan tunnetulla tavalla estereitä, joissa on R4, ja ne kondensoidaan halogeenikarboksyylihapoilla . . 30 yhdisteiksi II (Q = halogeeni) joko happokloridien, seka-anhydridien, aktiivisten esterien kautta tai muin menetelmin, joita on perusteellisesti selostettu teoksessa Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Band 15.

Kun Rx = CH3, voidaan lähteä esim. L-maitohaposta hel-35 posti saatavasta D-2-klooripropionihaposta.

4 90532

Kaavan II mukaisia välituotteita (Q = NH2) saadaan yleiskaavan V mukaisista karbonihappoestereistä konden-soimalla N-suojatun 2-aminokarboksyylihapon kanssa. Suo-jaryhmä lohkaistaan kondensoinnin päätyttyä jälleen pois.

5 Suojaryhmänä tulee kysymykseen esim. bensyylioksikarbon-yyli.

Kondensointia ei voida suorittaa pelkästään DCC/HOBt-yhdistelmällä (disykloheksyylikarbodi-imidi/1-hydroksibensotriatsoli) vaan myös muulla sopivalla kon-10 densointiaineella, esim. teoksessa Houben-Weyl, Band 15 selostetulla kondensointiaineella.

Menetelmätavassa (b) lähdetään kaavan IV mukaisista yhdisteistä.

Jos Rj ja R2 ovat identtiset, niin P voi olla ve-15 ty. Kondensointi suoritetaan silloin esim. disykloheksyy-likarbodi-imidin läsnäollessa ekvivalenttimäärän kanssa kaavan V mukaista yhdistettä ja R4 lohkaistaan tunnetulla tavalla. Reaktio tapahtuu mahdollisesti eristettävissä olevan anhydridin XII kautta, joka avataan sen jälkeen 20 kaavan V mukaisella yhdisteellä.

H

/ N\ ' ' 25 R.-HC CH-FL , 1 I I 2 + o=c c=o

XLI

30 R400Cv^CH2^/^ ^\/ch2\/coor4

HN-l J V. J-N-CO-CH-N-CHt-COOH

. 35 I

H

v = 90532

Jos Rj ja R2 yhdisteessä IV ovat erilaiset, ensisijaisesti ainoastaan toinen tähteistä P on vety, toisen tulisi merkitä lähinnä R3:a tai tert.-butyyliä. Konden-sointi suoritetaan silloin selostetulla tavalla kaavan V 5 mukaisten yhdisteiden kanssa ja toinen tai kummatkin es-teriryhmät muutetaan mahdollisesti karboksyylihapoksi.

Kun kaavoissa VI tai VII T = NH2 ja H, merkittävä kondensointi 2-ketokarboksyylihappojen tai niiden esterien kanssa menetelmän (c) mukaisesti johtaa tunnetulla 10 tavalla Schiff’in emäksien kautta esim. natriumboorihyd-ridillä tai natriumsyaaniboorihydridillä pelkistämisen jälkeen, hydraamalla katalyyttisesti tai pelkistämällä elektrolyyttisesti, vastaavien kaavan I mukaisten yhdisteiden muodostumiseen hyvin puhtaina.

15 Uusissa yhdisteissä on muun muassa 3 kiertokeskus ta α-C-atomien kohdalla. Ligandien järjestys vastaa lähinnä L-konfiguraatiota. Kiteyttämällä voidaan yleensä saada steerisesti suurin piirtein yhtenäisiä kaavan I mukaisia yhdisteitä. Steerisesti yhtenäisempien muotojen 20 rikastamiseksi ensisijaisia ovat vastavirtajakautus- tai preparatiivinen HPLC-menetelmät.

Välituotevaiheessa kaavan X mukaiset diastereomee-rit voidaan mahdollisesti erottaa kiteyttämällä tai pre-paratiivisella HPLC-menetelmällä siten, että edellä se-25 lostetun menetelmän mukaisesti voidaan saada kaavan I mukaisia tuotteita, joissa kaikissa kiertokeskuksissa on yhtenäinen eteerinen järjestys.

Kaavan I mukaisilla uusilla yhdisteillä on pitkäaikainen, intensiivinen verenpainetta alentava vaikutus.

... 30 Niitä voidaan käyttää erilaisista syistä aiheutu neen korkean verenpaineen torjuntaan ja niitä voidaan käyttää sellaisinaan tai yhdistelmänä muiden verenpainetta alentavien, verisuonia laajentavien tai virtsaneritystä lisäävien yhdisteiden kanssa. Tyypillisiä näiden vai-35 kutusluokkien edustajia on selostettu esim. artikkelissa Erhart-Rusching, Arzneimittel, 2. Auflage, Weinheim 1972.

6 90532

Niitä voidaan käyttää laskimonsisäisesti, ihonalaisesti tai suun kautta.

Suun kautta annettaessa annostus on 20 - 200 mg yksityistä annosta kohden. Vaikeammissa tapauksissa sitä 5 voidaan myös suurentaa, koska toistaiseksi ei ole todettu toksisia ominaisuuksia. Myös annoksen pienentäminen on mahdollista ja sitä sovelletaan ensisijaisesti silloin, kun samanaikaisesti annetaan virtsaneritystä lisääviä aineita. Laskimonsisäisesti tai ihonalaisesti annettaessa 10 yksittäisen annoksen pitäisi olla välillä 0,01 - 10 mg.

Kaavan I mukaiset yhdisteet esiintyvät sisäisinä suoloinaan. Mikäli molemmat karboksyyliryhmät ovat vapaita, lisäksi voidaan muodostaa alkali- ja maa-alkalisuolo-ja ja suoloja fysiologisesti vaarattomien amiinien kans-15 sa. Edelleen läsnäolevan vapaan aminoryhmän voidaan antaa reagoida suolaksi epäorgaanisen hapon tai orgaanisen hapon kanssa. Myös muita kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää vapaassa muodossa tai mainitun kaltaisina suoloina.

20 Yhdisteiden farmakologinen aktiivisuus on määri tetty ACE-analyysin avulla. ACE vastaa ensisijaisesti an-giotensiini I:n hydrolyysistä vasopressoriaktapeptidiksi angiotensiini II. Sen aktiivisuus voidaan määrittää käyttäen substraattina hippuryyli-l-histidyyli-l-leusiinia 25 (HHL) tai hippuryyliglysidyyliglysiiniä.

Entsyymi valmistetaan seuraaavalla tavalla: 10 g kaniinin keuhkojauhetta uutetaan 10 min 100 ml:11a ka-liumfosfaattipuskuria (50 mol, pH 8,3) ja sentrifugoidaan sitten 40 min 40 000 g. Supernatantti säilytetään 30 5°C:ssa. Entsyymianalyysi on muunnelma julkaisusta

Biochem. Pharmacol. 20 (1971), s. 1673 tunnetusta menetelmästä. Yhdisteiden inhiboiva vaikutus tutkitaan siten, että 10 ml inhibiittoria tislatussa vedessä tai DMS0:ssa lisätään 40 pl:aan puskuria (750 nM, 115 mol kaliumfos-35 faattia, pH 8,3) ja 40 pl:aan (3-H)-HHL (500 pmol) 115 mol kaliumfosfaattipuskurissa, pH 8,3. DMSO-pitoisuus 7 90532 pidetään alle 1 %:n. Reaktio saatetaan tapahtumaan lisäämällä 20 μΐ em. entsyymiliuosta. Inkuboidaan 60 min 37°C:ssa, jonka jälkeen reaktio pysäytetään lisäämällä 1 ml 0,1 HC1. (3-H)hippuurihappo uutetaan sitten 1 ml:11a 5 etikkaesteriä. 10 min sentrifugoinnin jälkeen päällä olevasta etikkahappouutteesta otetaan 150 - 200 μΐ ja lisätään se 10 ml:aan tuikenestettä. Radioaktiivisuus mitataan tuikelaskimella ja tuloksesta lasketaan IC50-arvo.

Keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä on 10 pitkäaikainen intensiivinen verenpainetta alentava vai kutus.

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.

Esimerkeissä käytetään seuraavia lyhenteitä:

Tie 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 15 Die dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo

Idc indoliini-2-karbonihappo

Oic oktahydroindoli-2-karbonihappo Z bentsyylioksikarbonyyli

Boc tert.-butyylioksikarbonyyli 20 tBu, Bu", tert-C^Hg tert.-butyyli Nb 4-nitrobentsyyli DCC disykloheksyylikarbodi-imidi DMF dimetyyliformamidi 25 DMA dimetyyliasetamidi NEM N-etyylimorfoliini CA sykloheksyyliamiini DCA disykliheksyyliamiini

Mikäli mitään muuta menetelmää ei ole mainittu, . 30 seuraavissa esimerkeissä selostetut yhdisteet puhdiste taan analyysiä ja biologista määritystä varten HPLC-puh-distusmenetelmällä.

Esimerkeissä 1-23 kuvatut yhdisteet eivät ole kaavan I mukaisia, mutta mainituista esimerkeistä ilmene-. 35 vät kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistuksessa käytetyt menetelmät.

8 '90532

Esimerkki 1 N-(l-karboksi-3-fenyylipropyyli)-L-alanyyli- 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo a) 2-karbobentsoksi-3-karboksi-l,2,3, 4-tetra- 5 hydroisokinoliini (Z-Tic) 188 g (1,05 moolia) 3-karboksi-l,2,3,4-tetra-hydroisokinoliinia lisätään 0°:ssa 1050 ml:aan 1-norm. NaOH:a, ja sitten lisätään tiputtamalla tässä lämpötilassa sekoittaen samanaikaisesti 160 ml kloorihiili-10 happobentsyyliesteriä ja vielä 1050 ml 1-norm. Na0H:a. Sen jälkeen sekoitetaan 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Uutetaan kolme kertaa eetterillä ja alkalinen vesifaa-si tehdään happameksi väk. HCl:lla pH-arvoon 1. Erottunut öljy uutetaan etikkaesteriin. Etikkaesteriliuos 15 pestään vedellä kunnes vesifaasin pH on 3,0. Natrium-sulfaatilla kuivaamisen jälkeen tuote kiteytyy etik-kaesteriliuoksesta konsentroinnin ja hiertämisen jälkeen. Kidesuspensioon lisätään 1,5 litraa di-isopro-pyylieetteriä ja sekoitetaan tunnin ajan huoneen lämpö-20 tilassa, suodatetaan imussa, ja tuote kuivataan suur-.:· tyhjössä fosforipentoksidin päällä.

Saanto: 256,7 g Sp. 138-139°C.' b) 2-karbobentsoksi-3-karboksi-l,2,3,4-tetra-hydroisokinoliini-tert.-butyyliesteri 25 Liuokseen, jossa on 248,8 g (0,8 moolia) 2- karbobentsoksi-3-karboksi-1,2,3,4-tetrahydroisokinolii-nia 1600 ml.-ssa metyleenlkloridia, lisätään 312 ml tert.-butanolia ja 8 g 4-dimetyyliaminopyridiiniä. Jäähdytetään -5°C:seen ja sitten lisätään annoksittain : 30 liuos, jossa on 176 g disykloheksyylikarbodi-imi- diä 350 ml:ssa metyleenikloridia. Sekoitetaan 5 tun-\ tia 0°:ssa ja seoksen annetaan sitten olla paikoil- h 9 90532 laan 16 tuntia huoneen lämpötilassa. Kun disykloheksyy-liurea on imetty pois, reaktioliuos uutetaan kolme kertaa kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella. Kuivataan magnesiumsulfaatilla, konsentroidaan vakuu-5 missä huoneen lämpötilassa öljymäiseksi. Jälelle jää 286 g tuotetta kellertävänä öljynä (97 % teoreettisesta) .

NMR: 7,30 s (5H) ; 7,20 s (4H); 5,l-4,3m (3H); 5 , Os· (2H); 1,46 (9H).

10 c) 3-karboksi-l,2,3,4-tetrahydroisokinoliini- tert-butyyliesterihydrokloridi 284 g 2-karbobentsokisi-3-karboksi-l,2,3,4-tetra-hydroisokinoliini-tert.-butyyliesteriä (0,775 moolia) liuotetaan 3 litraan metanolia, lisätään 15 g 10 %:ista 15 Pd-bariumsulfaatti-katalyyttiä ja hydrataan vedyllä normaalipaineessa. Liuoksen pH-arvo pidetään 1-norm.

HCl:n metanoliliuosta tiputtaen lisäämällä 4,0:ssa (lasielektrodi) . Katalyytti suodatetaan pois ja liuos haihdutetaan kuiviin vakuumissa huoneen lämpötilassa.

20 Kiteistä tuotetta hierretään vedettömän eetterin kanssa, suodatetaan imussa ja kuivataan vakuumissa fosfori-··· pentoksidin päällä.

: Saanto: 156 g sp. 180° (hajoten).

·.; : Tosylaattia voidaan saada joko lisäämällä hyd- 25 rauksen aikana suolahapon metanoliuoksen asemesta :··: tolueenisulfonihapon metanoliuosta, tai hydrokloridi liuotetaan veteen, lisätään laskettu määrä n-atrium-tosylaattia ja jäähdytetään lisäämällä siemenkiteitä ja sekoittamalla noin 4°C:seen. Tällöin tosylaatti ’..1 30 saostuu erilleen kiteisessä muodossa. Kiteet suodate taan erilleen, pestään vedellä ja kuivataan.

Sp. 139-140° (hajoten).

d) Karbobentsoksi-L-alanyyli-3-karboksyyli-12,3,4-tetrahydroisokinoliini-tert.-butyyliesteri 35 27 g (0,15 moolia) 3-karboksi-l,2,3,4-tetra- hydroisokinoliini-tert.-butyyliesterihydrokloridia 10 90532 suspendoidaan 200 ml:aan dimetyyliformamidia, jäähdytetään sekoittaen ja kosteudelta suojattuna -5°C:seen, ja lisätään 19 ml (0,15 moolia) N-etyylimorfoliinia sekä liuos, jossa on 33,4 g karbobentsoksialaniinia, 5 20 g N-hydroksibentsotriatsolia ja 33g disykloheksyyli- karbodi-imidiä 100 ml:ssa dimetyyliformamidia. Sekoitetaan tunnin ajan 0°C:ssa, annetaan olla paikoillaan yön ajan +4°C:ssa ja jatkokäsitellään sitten tunnin ajan huoneen lämpötilassa sekoittamisen jälkeen. Eroit-10 tunut disykloheksyyliurea suodatetaan erilleen ja reaktioliuos haihdutetaan suurvakuumissa huoneen lämpötilassa kuiviin. Jälelle jäänyt öljy liuotetaan 1 litraan etikkaesteriä ja pestään kolme kertaa 150 ml:n erillä kyllästettyä natriumkarbonaattiliuosta, 5 %:isella 15 kaliumvetysulfaattiliuoksella ja kerran vedellä. Ve dettömällä natriumsulfaatilla kuivaamisen jälkeen liuotin tislataan pois vakuumissa huoneen lämpötilassa. Saanto: 59 g öljyä.

e) L-alanyyli-3-karboksi-l,2,3,4-tetrahydroiso-20 kinoliini-tert.-butyyliesteri-hydrokloridi (Ala-Tie-0-But) 15 g karbobentsoksi-alanyyli-3-karboksi-l, 2,3,4- : tetrahydroisokinoliini-tert.-butyyliesteriä hydra-

taan 400 ml:ssa metanolia 8 grammalla 10 %:ista Pd/ba-25 riumsulfaatti-katalyyttiä. Liuoksen näennäinen pH

pidetään (lasielektrodi) 1-norm. suolahapon metanoli-liuosta lisäämällä arvossa 4,0. 8 tunnin kuluttua katalyytti suodatetaan pois ja liuos haihdutetaan vakuumissa huoneen lämpötilassa kuiviin. Kiinteätä jään- • 30 nöstä digeroidaan sitten di-isopropyylieetterin kanssa ja kuivataan vakuumissa.

Sulamispiste 110° (hajoten).

Samalla tavalla kuin yhdistettä Ala-Tic-OBut * . valmistetaan yhdisteitä: i: n 90532 rv-ι XOOt-C , Hn I 4 9 c=o K3C-CH-NH2 5 7,3-6,5m (4H); 4,4t (1H) ; 3,8-3,0 m+d (3H); 1,4s (9H); 1,2d (3H) 10 COO-t-C^Hg ^ssi^'^X^C-CK-NH - II I 2

O R

15 seuraavat signaalit ovat yhteisiä seuraaville yhdisteille: 7,2s (4H); 5,1-3,3m (3H); 3,9-3,0m (4H); 1,4s (9H) kun R:H ,2s (4H); 3,9-3,0m (5H) 20 j:h2 ¢/

H

13,1s (1H)j 7,5s (1H); 6,8s (1H); 2,8m (2H) 25 CH-, 3\ CH-CH-- 1,5m (3H); 0,9d (6H) • : X 2 • ; CH^ CH2F_ 5,1-4,3m (5H) 12 90532 /~Vs-CH2-CH2 1,2-7,Oi» (SH) i 2,7-2,On I4E) CH,-CH,-CH- 1,5-1,On (9H)

3 * I

CH3 5 fyCK2- 7,1s (5H)f 2,7d (2H) 10 -^CK2 I J) 7,8-6,4n (9H)

H

HO-CH2- 3,7d (2H) 15 / N^-CH^-0-C-NH-CH2-CH2-CH2-CH2- 7,1s (5H); 5,0s 0 {2H) ; 2,4m (2H) ; 1,8-1,3m (6H) 20 07,Is (5H); 5,0s -ch2-o-c-kh-ch2-ck2-ch2-ch2-ch2- (2h); 2i4m ;·; 0 (2H) ; 1,8-1,3m (8H) 25 / ^-CK^-O-C-NH-CH-j-CHp-CIi^- 7'ls <5Η) · 5 '0s (2H) ; \=/ ^ 2,4m (2H); 1,8-1,3m V‘: (4H) I.

13 90532

Cy-CH2_0-C-KH-CH2~ 1' ls (5H) ; 5,0s (2H); 2,3m J O (2H)

5 H2N

·> C-NCH,CH,CH,_ 8,3-7,6m (2H); 2,9-1,6m (6H) IIN ^ ' “ - 10 / ^>-CHo-0-C-NH-CH7CH2- 7,1s (5H); 5,0s (2H); 2,4m Ö (2H) ; 1,7-1,4m (2H) f) N-(l-karboksi-3-fenyylipropyyli)-L-alanyyli- 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo-tert.-bu-15 tyyliesteri 305 mg alanyyli-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini- 3-karbonihappobutyyliesteriä (Ala-Tic-OBut) ja 445 mg 4-fenyyli-2-okso-voihappoa liuotetaan 4 ml:aan meta-nolia ja pH säädetään 1-norm. NaOH:n vesiliuoksella 20 arvoon 7,5. Lisätään 200 mg natriumsyaaniboorihydridiä ja annetaan reagoida 36 tuntia. Haihdutetaan kuiviin ja aine otetaan talteen kromatografioimalla kolonnissa silikageelillä (eluointiseos: kloroformi/metanoli/ vesi/jääetikka 20 + 15+-2 + 1) .

25 Saanto: 382 mg; sp. 120°:sta alkaen, hajoten.

g) N-(l-karboksi-3-fenyylipropyyli)-L-alanyyli- 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 350 mg yhdistettä N-(l-karboksi-3-fenyylipro-pyyli)-Ala-Tic-OBut liuotetaan 3 ml:aan vedetöntä 30 trifluorietikkahappoa ja annetaan olla 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja jälelle jäänyttä öljyä hierretään kylmän di-isopro-pyylieetterin ja petrolieetterin kanssa.

14 90532

Saanto: 276 mg amorfista ainetta.

NMR: 7,20 u. 7,10 (s); 4,3 (s, leveä); 3,0-3,9 (m, leveä); 1,23 u. 1,15 (d).

Esimerkki 2 5 N-(l-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-L-alanyyli- 1.2.3.4- tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 4,8 g yhdistettä H-Ala-Tic-0But. Tos-OH liuotetaan 40 ml:aan absoluuttista etanolia, pH säädetään K0H:n etanoli liuoksella, arvoon 7 ja lisätään 6,2 g 10 2-okso-4-fenyylivoihappo-etyyliesteriä ja sekoitetaan siten, että läsnä on 9 g jauhettua molekyyliseulaa 4 A, lisäämällä hitaasti liuos, jossa on 2 g natriumsyaani-boorihydridiä 15 ml:ssa absoluuttista etanolia.

Noin 20 tunnin kuluttua suodatetaan ja liuotin tisla-15 taan pois vakuumissa. Jäännös jaetaan etikkaesteriin ja veteen liukeneviin osiin, etikkaesterifaasi eroite-taan ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös kroma-tografioidaan silikageelillä käyttämällä eluointiai-neena seosta etikkaesteri/sykloheksaani (1:2 1:4).

20 Tuote liuotetaan 20 ml:aan trifluorietikkahappoa ja sekoitetaan 30 min. huoneen lämpötilassa. Trifluori-etikkahappo tislataan pois vakuumissa, sitten tislataan tolueenin kanssa ja kromatografioidaan silikageelillä käyttämällä seosta metyleenikloridi/metano--· 25 li (10:1) .

Saanto: 2,2 g.

Esimerkki 3 N- (l-karboksi-5-aminopentyyli)-L-alanyyli- 1.2.3.4- tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 30 1,2 gramman päälle N-(l-karboksi-5-Boc-amino- pentyyli)-L-alanyyli-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappoa kaadetaan 10 ml jääkylmää trifluori-etikkahappoa ja sekoitetaan tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen haihdutetaan kuiviin vakuu-35 missä. Jäännös liuotetaan veteen ja kuivataan jäähdy- 15 90532 tyskuivausta käyttäen.

Saanto: 0,95 g.

Esimerkki 4 N-(l-karboksi-3-fenyyli-propyyli)-L-alanyyli-5 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 880 mg N-(l-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-L-alanyyli-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappoa liuotetaan 20 ml:aan dioksaani/vesi-seosta (9:1) ja saippuoidaan huoneen lämpötilassa 4,5 ml :11a 1-norm.

10 natriumhydroksidiliuosta. Tunnin kuluttua liuos teh dään happameksi ekvivalenttimäärällä 1-norm. suolahappoa ja pääosa dioksaanista haihdutetaan pois. Jäännös uutetaan useaan kertaan etikkaesterillä, ja liuottimen poistamisen jälkeen, orgaaninen faasi kromato-15 grafioidaan kationinvaihtajalla (DOWEX 50).

Saanto: 630 mg.

Esimerkki 5 N-(l-karbetoksi-3-amino-propyyli)-L-alanyyli- 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 20 1,1 g N-(l-karbetoksi-3-bentsoksikarbonyyliamino- propyyli)-L-alanyyli-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappoa liuotetaan 150 ml:aan metanolia ja hyd-I ; ; rataan 40°C:ssa normaalipaineessa siten, että läsnä oh : 100 mg palladium-aktiivihiili-katalyyttiä (10 %:ista).

25 Reaktion päätyttyä katalyytti suodatetaan pois ja liuotin imetään pois vakuumissa.

Saanto: 0,79 g.

Esimerkki 6 N-(l-karboksi-3-fenyyli-3-tiapropyyli)-alanyyli-30 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo a.) 2-(2-okso-propionyyli)-1,2,3,4-tetrahydro-: “· isokinoliini-3-karbonihappotert-butyyliesteri -50°C:seen jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 700 mg yhdistettä Tic-OBut ja 630 mg disyklohek-35 syylikarbodi-imidiä 15 ml:ssa vedetöntä kloroformia, 16 90532 sekoitetaan nopeasti vasta tislattu liuos, jossa on 270 mg palorypälehappoa 5 mlrssa kloroformia. Seoksen annetaan olla 16 tuntia syväjäähdytyskaapissa (~20°C) ja erilleen laskehtinut DC-urea suodatetaan pois.

5 Liuos pestään KHS04~liuoksella ja sen jälkeen KHC0'3~ liuoksella, kuivataan Na2S04:lla ja konsentroidaan vakuumissa. Yhdiste (öljyä) sisältää hiukan disyklo-heksyyliureaa; sitä kromatografioitiin analyysiä varten silikageelillä seoksella CHCl^/CH^OH 15:1.

10 Samalla tavalla kuin kondensoitaessa palorypäle happoa yhdisteen Tic-OBut kanssa, yhdisteestä Tie, Idc ja vastaavasta «tketokarbonihaposta valmistetaan seuraavia kondensaatiotuotteita.

Il I ·7,3-6,5m (4H); 2,4s (3H); l,4s 15 λ I 4 9 (9H) CO-CO-CH3 20 seuraavien yhdisteiden osalta | T T j havaitaan yhdenmukaisesti seuraa- 25 vat perusrungolle ominaiset signaalit 7 ,2s (4H); 5,l-4,3m (3H); 3,9-3,0m (2H); 1,4s (9H) : 30 13,Is (1H) ; 7,5s (1H) ; 6,8s C 2~L_Jh (1H) ; 3,9-3, Om (4H)

II

17 90532 -CH2-CH(CH3) 2 2,4-1,0 m+d (9H) -CH2-S-^> 1,2-1,0m (9H) ; 2,5m (2H) -CH2F 4,4s (2H) 10 -C»2-Q 7,15s {5H) ; 3,0ε (2H) -CHy-CH-ClU-CH.* 2,4-1,9m (3H); l,5-l,0m (8H) / I Δ 3

CiU

15 3 " CH2"Tj (^} 7-,8-6,4m (9H) ; 3,9-2,9m (4H)

H

20 b.) N-(l-karboksi-3-fenyyli-3-tiapropyyli)-ala- nyyli-1,2,3,4-tetrahydro-isokinoliini-3-; karbonihappo-tert.-butyyliesteri : 1,52 g yhdistettä pyruvyyli-Tic-OBut ja 394 mg .:. S-fenyyli-kysteiiniä liuotetaan 5 ml:aan metanolia 25 ja pH säädetään 1-norm. NaOHrlla (vesiliuos) arvoon 7,0. Lisätään 400 mg natriumsyaaniboorihydridiä ja seoksen annetaan olla 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Haihdutetaan kuiviin vakuumissa, liuotetaan kloroformiin, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin.

30 Tuote saadaan puhtaana kromatografroimalla silikagee-Iillä (seos CHC13/CH30H/CH3C00H/H20 50/20/5/1).

NMR: 7,3-7,0m (9H) ; 5,l-4,3m (3H); 3,9-3,0m <4H); 2 ,5m (2H) .

is 90532 c.) N-(l-karboksi-3-fenyyli-3-tiapropyyli) -ala-nyyli-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 1 g esimerkin 6b butyyliesteriä liuotetaan 5 ml: 5 aan trifluorietikkahappoa. Haihdutetaan 30 minuutin kuluttua kuiviin vakuumissa, jäännöstä digeroidaan di-isopropyylieetterin kanssa ja kuivataan kaliumhydrok-sidilla.

Saanto 0,95 g trifluoriasetaattia (hygroskooppista). 10 NMR: 7,4-7,lm (9H); 5,2-4,4m (3H); 3,9-3,0m (4H); 2,5m (2H);l,25m (3H).

Esimerkki 7 N-(l-karbetoksi-2-bentsyylisulfinyylietyyli)-L-alanyyli-L-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 15 Jäillä jäähdytettynä sekoitettuun seokseen, jos sa on 0,64 g natriumperjodaattia ja 20 ml vettä, lisätään 1,3 g N- (l-karbetoksi-2-bentsyylitio-etyyli)-L-alanyyli-L-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karboni-happoa liuotettuna 20 ml:aan metanolia. Reaktioseosta 20 sekoitetaan 24 tuntia 0°C:ssa ja sen jälkeen natrium--·· jodaatti suodatetaan pois. Suodos uutetaan useaan ker- : .·. taan metyleenikloridilla. Liuottimen poistamisen jäi- . , : .·. keen saadaan 1,1 g sulfoksidia. NMR-spektrissä on havait- tavissa seuraavat signaalit: 7,3-7,0m (9H); 5,l-4,3m 25 (3H) ; 4, Is (2H) ; 3,9-3 ,0m (4H);.2,6m (2H) ; l,2d (3H) .

Esimerkki 8 N- (l-karbetoksi-3-fenyylisulfonyyli-propyyli)-L-alanyyli-1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 260 mg N-(l-karbetoksi-3-fenyylitio-propyyli)-L-— 30 alanyyli-1,2 ,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbonihap- poa ja 20 mg natriumvolframaatti-dihydraattia lisä-. tään 50 ml:aan vettä ja tiputtamalla lisätään 1 ml per- hydrolia (30 %:sta). Seosta lämmitetään 30 minuut-tia 80°C:ssa ja sen jälkeen sekoitetaan tunnin ajan 35 huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen ylimääräinen peroksidi li 19 90 532 tuhotaan bariumsulfaatilla olevalla palladiumilla ja hapen kehittymisen päätyttyä palladium-katalyytti suodatetaan pois liuoksesta, joka haihdutetaan kuiviin. Raakatuote puhdistetaan ioninvaihtokromatograafises-5 ti DOWEX 50 H+-muodolla.

Saanto: 220 mg NMR: 7,7m (9H); 5,l-4,3m (3H); 3,9-3,0m (4H); 2,8m (2H); 1,5m (2H); l,2d (3H).

Esimerkki 9 10 N-(2-amino-l-karboksipropyyli)-L-alanyyli-1,2,3,4- tetrahydroisokinoliini-3-karbonihappo 2,2 g N/» -Boc—o£,/^ -diaminovoihappoa, valmistettu artikkelin Coll. czech. chem. Cortunun. 31, 2955 (1966) mukaisesti samalla tavalla kuin -Boc-yhdistettä, 15 annetaan reagoida 2,4 gramman kanssa yhdistettä pyru-vyyli-Tic-OBut, valmistettu esimerkin 6a) mukaisesti, esimerkissä 6b) selostetulla tavalla. Boc-suojaryhmä lohkaistaan sen jälkeen pois esimerkissä 3 selostetulla tavalla.

20 Saanto: 2,6 g.

Esimerkki 10 N-(l-karboksi-3-fenyylipropyyli)-L-alanyyli-dekahydroisokino1iini-3-karbonihappo a. L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo (Die) 25 250 g L-l,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-3-karbo- nihappoa suspendoidaan 2 litraan 90 %:ista etikkahappoa. Lisätään 10 g hiilellä olevaa rodium-katalyyttiä ja hydrataan 24 tuntia 60-80°C:ssa ja 120 baarin paineessa. Suodatettu liuos haihdutetaan kuiviin, jäännös liuo-30 tetaan 200 ml:aan etikkaesteriä ja lisätään tiputtamalla voimakkaasti sekoitettuun 2 litraan di-isopropyyli-- eetteriä. Liuos dekantoidaan hartsimaisen jäännöksen päältä, haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja sama käsit--: tely toistetaan noin 1/3 :11a edellä käytetystä liuotin- ·;·.;· 35 määrästä. Hartsimaiset sakat yhdistetään ja niitä käsi- 20 90532 teilaan kuumalla etikkaesterillä, jolloin ainoastaan osa liukenee. Lisätään juoksuttamalla voimakkaasti sekoittaen 3 litraan dietyylieetteri-di-isopropyylieet-teri-seosta 1:1, jolloin muodostuu höytymäistä sakkaa, 5 joka suodatetaan erilleen, pestään eetterillä ja kuivataan. Saanto: 234 g; ohutkerroskromatograafisesti se ei ole yhtenäistä (diastereoisomeeriseosta). UV-spektrin ja NMR:n perusteella aromaattista ainetta ei enää ole läsnä, alkuaineanalyysi on moitteeton.

10 Ainetta käytetään enempää puhdistamatta seuraa- vassa vaiheessa.

b. N-bentsyylioksikarbonyyli-L-dekahydroisokino- liini-3-karbonihappo (Z-Dic-OH) 58 g L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappoa 15 liuotetaan 315 ml:aan 1-norm. NaOH:a. Voimakkaasti sekoittaen 0-5°C:ssa lisätään tunnin kuluessa tiputtamalla samanaikaisesti 48 ml bentsyylioksikarbonyyli-kloridia ja 370 ml 1-norm. NaOH:a. Tällöin saostuu paksu sakka. Lisäyksen päätyttyä sekoitetaan vielä 2 20 tuntia, sitten uutetaan eetterillä ja sakka suodatetaan erilleen (=diastereoisomeerin "A" natriumsuolaa; saanto 43 g). Suodoksen pH säädetään väkevällä HCl:lla arvoon 1,5-2, jolloin laskehtii erilleen öljyä. Se liuotetaan etikkaesteriin. Vesifaasi uutetaan etikka-25 esterillä, yhdistetyt etikkaesteriliuokset pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja konsentroidaan pienitilavuiseksi (noin 200 ml:ksi). Lisättäessä 15-18 ml sykloheksyyliamiinia (CA) saostuu sakka, joka jäävedellä jäähdyttämisen jälkeen suodatetaan 30 erilleen ja pestään pienellä määrällä kylmää etikka-esteriä ja kuivataan sen jälkeen. Saanto: 48 g (iso-meeriseoksen B CA-suolaa).

"A":n natriumsuola muutetaan CA-suolaksi seuraavasti: yhdiste suspendoidaan 500 ml:aan vettä, päälle 35 kaadetaan kerrokseksi 200 ml etikkaesteriä ja tehdään 21 90532 ha-pameksi väkevällä HCl:lla kunnes pH on 1,5-2. Ravistelun jälkeen etikkaesteri-faasi eroitetaan, pestään pienellä määrällä vettä ja kuivataan natriumsulfaati11a. Konsentroidaan kuten edellä ja lisätään 16 ml syklohek-5 syyliamiinia. CA-suola eristetään kuten edellä.

Puhdistusta varten "A":n CA-suola kiteytetään uudelleen kahdeksankertaisesta etikkaesterimäärästä. Sulamispiste 197-198°C, = 7,5° (c = 1, metanolis- sa). Alkuaineanalyysi on moitteeton.

10 "B":n Ca-suola kiteytetään uudelleen nelinker taisesta etikkaesterimäärästä. Sp.: 190° (sintrau-tuu 187°:sta alkaen) 1 = +14,6° (c = 1, metano- lissa). Alkuaineanalyysi on moitteeton.

Vapaita happoja saadaan tunnetulla tavalla 15 suspendoimalla CA-suolat vesi/etikkaesteri-seokseen ja tekemällä happameksi sitruunahapolla. Etikkaesterifaasit pestään pienellä määrällä vettä ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan yhdistettä Z-Dic-OH öljymäisenä jäännöksenä .

20 c. Ben.tsyylioksikarbonyyli-L-dekahydroisokinolii- ni-3-karbonihappo-tert.-butyyliesteri (Z-Dic-OBu^) .

41 g yhdistettä Z-Dic-OH ("A") liuotetaan 350 ml: aan metyleenikloridia. Lisätään 52 ml t-butanolia ja 25 1,3 g 4-dimetyyliaminopyridiiniä, jäähdytetään 0°C:seen ja sekoittaen lisätään tiputtamalla liuos, jossa on 29 g disykloheksyylikarbodi-imidiä (DCC) 60 ml:ssa metyleenikloridia. Sen jälkeen sekoitetaan vielä 20 min. 0°C:ssa ja 5 tuntia huoneen lämpötilassa ja erilleen laskehti-30 nut disykloheksyyliurea suodatetaan pois. Suodos haihdutetaan vakuumissa kuiviin, jäännös liuotetaan etikka-esteriin, liuos pestään peräkkäin KHSO^/^SO^-liuoksel-la, natriumvetykarbonaatilla (Z-Dic-OH :n reagoimaton Na-suola saostuu ja suodatetaan pois) ja vedellä, kui-35 vataan ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös öljy-mäistä. Saanto: 38,5 g = -17,3° (c = 1, metano- 22 90532 lissa). Analogisen yhdisteen saamiseksi yhdisteestä "B" menetellään samalla tavalla. Saanto 38,1 g, = +6,7° (c = 1, metanolissa).

d. L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo-tert.- 5 butyyliesteri-tosylaatti (H-Dic-OBu*" .TosOH) .

27 g esimerkin 10c mukaisesti valmistettu "A" :n yhdistettä hydrataan katalyyttisesti 250 mlrssa metano-lia lisäämällä tiputtaen 4-norm. TosOH:n metanoliliuos-ta, Pd/hiili-katalyyttiä, käyttäen pH:n ollessa 4,5 10 (pH-Stat). Suodatettu liuos haihdutetaan sitten kuiviin vakuumissa, kiteistä jäännöstä digeroidaan eetterin kanssa ja kuivataan. Saanto: 22,6 g. Analyysiä varten kiteytetään uudelleen näyte etikkaesteristä. Sp.: 159-160°C; = -6,5° (C = 1, metanolissa) . Alkuaineana- 15 lyysi on moitteeton. Yhdiste on ohutkerroskromatograafi-sesti yhtenäistä.

Isomeeriseoksen "B":n esimerkin 10c mukaisesti valmistetun yhdisteen osalta menetellään samalla tavalla. Etikkaesteristä uudelleenkiteytyksen jälkeen saadaan 20 tällöin ainetta, jonka sulamispiste on 162-164°C, -Q = -4,4° (c = 1, metanolissa). Alkuaineanalyysi on moitteeton.

e. N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyyli-L-deka-hydroisokinoliini-3-karbonihappo-tert.-butyy- 25 liesteri (Z-Ala-Dic-OBu*") 12,4 g yhdistettä H-Dic-0But.TosOH, valmistettu esimerkin lOd mukaisesti yhdistettä "A" käyttäen, liuotetaan 250 ml:aan metyleenikloridia. Lisätään 6,7 g yhdistettä Z-Ala-0H ja 4,05 ml 1-hydroksibentsotriatso-: 30 lia (HOBt), lisätään 4,2 ml N-etyylimorfoliinia ja 0-4°C: ssa sekoittaen lisätään tiputtamalla liuos, jossa on 6,6 g disykloheksyylikarbodi-imidiä (DCC) 30 mlrssa metyleenikloridia. 5 tunnin kuluttua suodatetaan, suo-” dos haihdutetaan kuiviin, jäännös liuotetaan etikka- 35 esteriin ja pestään lämpötilan ollessa 5°C:n alapuo- li 23 90532 lella 10 %:sella KHSO^/I^SO^-seoksella (1:2), 1-mo-laarisella natriumvetykarbonaatilla ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja liuotin tislataan pois. Jäännös hartsia, liukenee helposti kaikkiin orgaanisiin 5 liuottimiin. Saanto: 15,2 g. Samalla tavalla menetellään isomeeriseoksen "B" yhteydessä, joka voidaan tässä vaiheessa eristää käyttämällä preparatiivista HPLC-kä-sittelyä silikageelillä eluoimalla seoksella klorofor-mi/sykloheksaani (9:1).

10 f. L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karboni- happo-tert.-butyyliesteri-tosylaatti (H-Ala-Dic-OBu*1 .TosOH) 8,5 g Z-yhdistettä hydrataan katalyyttisesti esimerkin lOd mukaisesti. Liuottimen tislaamisen jäl-15 keen aluksi hartsimainen jäännös kiteytyy jonkin ajan kuluttua tai hierrettäessä etikkaesterin kanssa ja kiteytetään analyysiä varten uudelleen etikkaesteristä.

Sp.: 151-153°C (haj .) , = -28,8° (c = 1, metanolis- sa). Alkuaineanalyysi on moitteeton. Samalla tavalla 2o menetellään isomeeriseoksen "B" osalta. Saadaan kiteyty-mätöntä hartsia? alkuaineanalyysi on moitteeton.

Samalla tavalla kuin yhdistettä H-Ala-Dic-OBu valmistetaan yhdistettä alanyyli-oktahydroindoli-2- t karbonihappo-t-butyyliesteriä (H-Ala-0ic-0Bu ) ja 25 seuraavia yhdisteitä ja eristetään ensisijaisesti tosy-laatteina (NMR-arvot perusrungon osalta): 4,9 t (1H); 4,5-3,0 m (2H); 1,4 s (9H); 1,2 d(3H); 2,0-1,0 m (11H), (H-Ala-0ic-0Bufc).

K" CXk , ^C00-t-C.Hq c=o H3C-CH-NH2 24 90532

Aminokarbonihappo-lähtöainetta oktahydroindoli-2-karbonihappoa valmistetaan seuraavasti: 45 g indoli-2-karbonihappoa liuotetaan 500 mlraan 4-prosenttista natronlipeää. Lisätään 20 g Raney-nik-5 keliä ja hydrataan 24 tuntia 40°C:ssa. Suodatetaan, tehdään happameksi väk. HCl:lla, liukenematon aines suodatetaan pois ja vesifaasi uutetaan useaan kertaan butanolilla. Orgaaninen faasi konsentroidaan ja kroma-tografioidaan. (CHCl^/metanoli/jääetikka 50:20:5).

10 Saanto: 22 g. Sp.: 260°C.

Samalla tavalla valmistetaan, eeuraavia yhdisteitä. Yhdisteiden NMR-signaalit ovat seuraavat: ^\^\^COO-t-C4Hg 5,1-4,3 m (2H); 3,9-3,0 m 15 I I [ (2H); 1,4 s (9H); 2,0-1,0m

Il I 2 (12H)

0 R

kun R : H 3,9-3,0 m (4H) 20 .;· _s CH2 13,1 s (1H ) ; 7,5 s (1H) ; f H 6,8 s (1H) ; 2,8 m (2H)

: H

..:r 25 CH3 1,0-2,0 m . (15H) ; 0,9 d (6H) XCH'CH2- ·· / CH3 . : 5,1-4,3 m (4H)

: : 30 -CH2F

/—^ 7,2 s (5H) ; 2,7-2,0 m (4H) // V_s-ch2-ch-

Ii CH3-CH2-CH- 1,0-2,0 m (21H) CH3 25 90532

QcH2- 7,1 s (5H) ; 2,7 d (2H) / CH2~ ί I \j 7,8-6,4 m (5H) ; 2,8 m (2H)

H

HO-CH2- 3,7 d (2H) 15 —CH2-0-<:-NH-CH2-CH2-CH2-CH2- 7,1 s (SH); 5,0 s ( 2 H) ; 0 2,4 m (2H); 2,0-1,0 m {1 8 H) 20 ^—CH2-CKj:-NH-CH2-CH2-CH2-€H2-CH2- 7,1 s (5H); 5,0 s O (2H); 2,4 m (2H); 2,0-1,0 m (20H) 25 (/ \—ί:Η2-Ό-<:-ΝΗ-αΗ2-αΗ2-€Η2- 7,1 s(5H); 5,0s (2H); 0 2,4 m (2H) ; 2,0-1,0 m (16H) 26 90 532 VV)_CH0-0-C-NH-CH— 7,1 s (5H); 5,0 s (2H); \==/ O 2,3 m (2H) H2N\ . C-NCH9CH CH^- 8,3-7,6 iti (2H); 2,9-l»0 m 5 (18H) hun C-NH-CHr- 8,3-7,6 ra (2H) ; 2,9-2,5 m H” .- (2H) 10 /-CH2-0-C-NH-CH2CH2- 7,1 s (5H); 5,0 s (2H); O 2,4 m (2H) ; 2,0-1,0 m(14H)

H C 3 "S—N

15 Γ\ /)—NH-CH2-CH2-CH- 7,4 s (1 H) ; 2,5 m (2H); 2.3 s (6H); 2,0-1,0 ra (16H) 3

CH

20 (/ \— NH_CH_ 7,4 s (1H) ; 2,5 m (2H); 2.3 s (6H) H 3 25 4,9 m (1H); 4,5-3,0 m (2H); COO-t-C4H9 1,4 s (9H) ; 2,0-1,0 m (11H) C-CH-NH-

Ui2

OR

30 kun R:H 3,9—3,0rn(4H) n-2 13,1 s {1H) ; 7,5 s {1 H) ; 35 6,8 s (1H) ; 2,8 m (2H)

H

27 90532

cb3V

.CH-CH2~ 1,0-2,0 m (14H); 0,9 d (6H) cv c -CH-F 5,1-4,3 m (4H) D l -S-CH0-CH2- 7,2-7,0 m (5H); 2,7-2,0 m(4H) 10 CH^-CH^-CH- 1,0-2,0 m (20H) 3 2 | ch3 —CH,- 7,1 s (5H) ; 2,7 d (2H) 15 _/ CH,~ - 7,8-6,4 m (5H); 2,8 m (2H)

H

20 HO-CH2- 3,7 d (2H) ft ''Vo^-C^C-NH-C^-C^-C^-C^ 7,1 s (5H); 5,0 s (2H); 25 NC=l/ 0 2,4 m (2H); 2,0-1,0 m (1 7 H) 012-0-C-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2~ 7,1 s 5,0 s '< 2H) ; 0 2,4m (2H); 2,0-1,0 m ' 30 (19H) (/ Vy_CH.-0-C-NH-CHo-CH_-CH-- 7,1 s (5H); 5,0 s (2H); ^==7 0 2,4 m (2H); 2,0-1,0 m (1 5 H) 28 90532 CH^O-C-NH-CH^- 7,1 s (5H); 5,0 s (2H); O 2,3 m (2H)

H2N\ H

5 ^C-N-CH2CH2CH— 8,3-7,6 m (2H); 2,9-1,0 m m (1 7 H)

H Νχ H

x,C-N-CH - 8,3-7,6 m (2H); 2,9-2,5 m

HN'' Z

<2K) 10 (/ n__ 0Η7-0-0-ΝΗ-0Η20Η2- 7,1 s (5H) ; 5,0 s (2H); N'==/ O 2,4 m (2H) ; 2,0-1,0 m (13H)

HA

15 7,4 s(1H); 2,5 m(2H); 2,3 s NH~CH2CH2CH2~ (6H); 2,0-1,0 m (15H)

H3C

h3c7«* L \—NH-CH-— 7,4 s (1H) ; 2,5 m (2H) ; y* ' 2,3 s ,6H, h3c g. N-(l-karboksi-3-fenyylipropyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo- 25 tert.-butyyliesteri 305 mg alanyyli-dekahydroisokinoliini-3-karboni-happo-t-butyyliesteriä (Ala-Dic-OBut) ja 445 mg 4-fe-nyyli-2-okso-voihappoa liuotetaan 4 ml:aan metanolia ja pH säädetään 1-norm. Na0H:n vesiliuoksella arvoon 7,5.

.30 Lisätään 200 mg natriumsyaaniboorihydridiä ja seoksen annetaan reagoida 36 tuntia. Haihdutetaan kuiviin ja aine saadaan talteen kromatografioimalla silikageeliko-lonnissa (eluointiseos: kloroformi/metanoli/vesi/jää-etikka 20+15+2+1). 1 29 90 532

Saanto: 376 mg; sp.: 123°:sta alkaen, hajoten.

h. N-(l-karboksi-3-fenyylipropyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 350 mg yhdistettä N-(l-karboksi-3-fenyylipro-5 pyyli)-Ala-Dic-OBut liuotetaan 3 ml:aan vedetöntä trifluorietikkahappoa ja annetaan olla 30 minuuttia huoneen lämpötilassa. Haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja jälelle jäänyttä öljyä hierretään kylmän di-iso-propyylieetterin ja petrolieetterin kanssa.

10 Saanto: 226 mg amorfista ainetta.

NMR: 7,10 (s); 3,0-3,9 (m, leveä); 1,23 ja 1,15 (d); 2,0-1,0 (m, leveä).

Esimerkki 11 N-(l-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-L-alanyyli-15 L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 4,83 g yhdistettä H-Ala-Dic-OBut.TosOH liuotetaan 40 ml:aan absoluuttista etanolia, pH säädetään K0H:n etanoli liuoksella arvoon 7 ja lisätään 6,2 g 2-ok-so-4-fenyylivoihappoetyyliesteriä ja sekoitetaan, siten, 20 että läsnä on 9 g jauhettua molekyyliseulaa 4 A, lisäämällä hitaasti liuos, jossa on 2 g natriumsyaaniboori-hydridiä 15 ml:ssa absoluuttista etanolia. Noin 20 tunnin kuluttua suodatetaan ja liuotin tislataan pois vakuumissa. Jäännös jaetaan etikkaesteriin ja veteen liuke-25 neviin osiin, etikkaesterifaasi eroitetaan ja haihdu tetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioidaan silikageelillä käyttämällä eluointiin etikkaesteri syk-loheksaani-seosta (1:2—*1:4).

Tuotetta liuotetaan 30 minuutin.>ajan 20 ml:aan 30 trifluorietikkahappoa. Trifluorietikkahappo tislataan pois vakuumissa, sitten tislataan tolueenin kanssa kro-matografioidaan silikageelillä seoksella metyleeni-kloridi/metanoli (10:1).

Saanto: 1,8 g.

30 90 532

Esimerkki 12 N-(l-karboksi-3-fenyyli-3-tiapropyyli)-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo a.) 2 -(2-okso-propionyyli)-L-dekahydroisokino-5 liini-3-karbonihappo-tert.-butyyliesteri -50°C:seen jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 700 mg yhdistettä Dic-OBut ja 630 mg disykloheksyyli-karbodi-imidiä 15 ml:ssa vedetöntä kloroformia, sekoitetaan nopeasti jäähdytetty ja vastatislattu liuos, 10 jossa on 270 mg palorypälehappoa 5 ml:ssa kloroformia. Seos jätetään 16 tunniksi syväjäähdytyskaappiin (-20°C) ja erilleen laskehtinut DC-urea suodatetaan pois. Liuos pestään KHSO^- ja sitten KHCO^-liuoksella, kuivataan Na2S0^:lla ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Yhdiste 15 (öljyä) sisältää hiukan disykloheksyyliureaa; analyysiä varten sitä kromatografioitiin silikageelillä seoksella CHC13/CH30H (15:1) .

Samalla tavalla kuin kondensoitaessa palorypälehappoa yhdisteen Dic-OBut kanssa vastaavien o<-keto-20 karbonihappojen kanssa valmistetaan seuraavia konden-saatiotuotteita.

-·* 4,9 m (1H) ; 4,2-3,5 m -1 (1H) ; 3,0-1,2 m (UH) ; ΝΛ 2,4 s (3H) ; 1,4 s (9H) ·.* 25 | COO-t-C4H9 CO-CO-CH3 seuraavien yhdisteiden yh-—^^--COO-t-C^Hg teydessä havaitaan perusrun- 1 ] iff gon osalta yhtenäisesti 30 ^^ . ...

|1r seuraavat signaalit: 0 5,1-4,8m (1H); 3,9-3,0m (2H); 1,4 s (9H) ; 2,0-1,0m (12H) I: 3i 90532 _CH —f ^ 13,1 s (1H); 7,5 s (1H); 6,8s 2 I-Ah (1H) ; 3,9-3,0 m (4H) — CH2-CH(CH3)2 2,4-1,0 ra (21H) CH^-S-^ 7,2-7,0 m (5 H) ; 2,5 m ( 2 H) 10 -CH2F 4,4 s (2H) -ch2~^3 7,15 (5h); 3,0 s (2h) 15 - CH2-p-CK2-CH3 2,4-1,0 m (23H) CH3 CH2ll-7,8-6,4 m (5H); 3,9-2,9 m(4H) 20 : :H · · b.) N-(l-karboksi-3-fenyyli-3-tiapropyyli)-ala-nyy li -L -dekahydroisoki no 1 i i ni - 3 -karboni -25 happo-tert.-butyyliesteri 1,52 g yhdistettä pyruvyyli-Dic-OBut ja 394 mg fenyyli-kysteiiniä liuotetaan 5 ml:aan metanolia ja:; pH säädetään 1-norm, NaOHrlla (vesiliuos) arvoon 7,0. Lisätään 400 mg natriumsyaaniboorihydridiä ja seoksen . . 30 annetaan olla 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Haihdu tetaan kuiviin vakuumissa, liuotetaan kloroformiin, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Tuote saadaan puhtaana kromatografioimalla silikagee-lillä (seos CHCl3/CH3OH/CH3CO0H/H2O 50/20/5/1).

32 9 O 5 S 2 NMR: 7,3 m (5H); 5,1-4,8 m (1H); 3,9-3,0 m (4H); 2,5 m (H H2H).

c.) N - (l-karboksi-3-fenyyli-3-tiapropyyli)-ala-nyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 5 1 g esimerkissä 12b saatua butyyliesteriä liuo tetaan 5 ml:aan trifluorietikkahappoa. 30 minuutin kuluttua haihdutetaan kuiviin vakuumissa, jäännöstä di-geroidaan di-isopropyylieetterin kanssa ja kuivataan kaliumhydroksidin päällä· 10 Saanto: 0,95 g trifluoriasetaattia (hygroskooppista).

NMR: 7,3 m (5H); 5,2-4,8 m (1H); 3,9-3,0 m (4H); 2,5 m (2H) ; 1,25 m (3H) .

Esimerkki 13 N-(1-karboksi-3-fenyyli-propyyli)-L-alanyyli-L-15 dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 880 mg N-(1-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappoa liuotetaan 20 ml: aan dioksaani/vesi-seosta (9:1) ja saippuoidaan huoneen lämpötilassa 4,5 ml :11a 1-norm. natriumhydroksidiliuos-20 ta. Tunnin kuluttua liuos tehdään happameksi ekvivalent-timäärällä 1-norm. suolahappoa ja pääosa dioksaanista haihdutetaan pois. Jäännös uutetaan useaan kertaan etikkaesterillä, ja liuottimen poistamisen jälkeen, orgaaninen faasi kromatografioidaan kationinvaihtajalla 25 (DOWEX 50) .

Saanto: 630 mg.

Esimerkki 14 N-(l-karboksi-5-aminopentyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 30 1,2 gramman päälle N-(l-karboksi-5-Boc-amino- pentyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karboni-happoa kaadetaan 10 ml jääkylmää trifluorietikkahappoa ja sekoitetaan tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös liuo-35 tetaan veteen ja kuivataan jäähdytyskuivausta" jäyttäen. Saanto: 0,90 g.

33 90532

Esimerkki 15 N-(l-karbetoksi-3-amino-propyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 1,1 g N-(l-karbetoksi-3-ben tsoksikarbonyyliamino-5 propyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karboni- happoa liuotetaan 150 ml:aan metanolia ja hvdra-taan 100 mg:n palladium/aktiivihiili-erän (10 %:ista) läsnäollessa 40°C:ssa normaalipaineessa. Reaktion päätyttyä katalyytti suodatetaan pois ja liuotin imetään 10 pois vakuumissa. Saanto: 0,79 g.

NMR: 5,1-4,8 m (1H); 3,9-2,5 m (6H); 2,0-1,0 m (14H); 1,2 d (3H) .

Esimerkki 16 N- (l-karbetoksi-2-bentsyylisulfinyylietyyli)-L-15 alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo Jäissä jäähdyttäen sekoitettuun seokseen, jossa on 0,64 g natriumperjodaattia ja 20 ml vettä, lisätään 1,3 g N-(l-karbetoksi-2-benstsyyli-tioetyyli)-L-ala-nyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappoa liuotettu-20 na 20 ml:aan metanolia. Reaktioseosta sekoitetaan sekoitetaan 24 tuntia 0°C:ssa ja suodatetaan sen jälkeen erilleen natriumjodaatista. Suodos uutetaan useaan kertaan metyleenikloridilla. Liuottimen poistamisen jälkeen saadaan 1,1 g sulfoksidia. NMR-spektrissä havai-25 taan seuraavat signaalit: 7,3 m (5H); 5,1-4,8 m (1H); 4,1 s (1H); 3,9-3,0 m (4H); 2,6 m (2H) ; 1,2 d (3H) .

Esimerkki 17 N-(l-karbetoksi-3-fenyylisulfonyyli-propyyli)-L-30 alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 260 mg N-(l-karbetoksi-3-fenyylitio-propyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappoa ja 20 mg natriumvolframaatti-dihydraattia lisätään 50 ml:aan vettä ja tiputtamalla lisätään 1 ml per-35 hydrolia (30 %:ista). Seosta lämmitetään 30 min. 80°C:ssa 34 90532 ja sen jälkeen sekoitetaan tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Ylimääräinen peroksidi tuhotaan sitten barium-sulfaatilla olevalla palladiumilla ja hapen kehittymisen päätyttyä liuos suodatetaan erilleen palladium-5 katalyytistä ja haihdutetaan kuiviin. Raakatuote puhdistetaan suorittamalla ioninvaihtokromatografiointi DOWEX 50 H+-muodolla. Saanto: 220 mg.

NMR: 7,7 m (5H); 5,1-4,8 m (1H); 3,9-3,0 m (4H); 2,8 m (2H); 1,5 m (2H); 1,2 d (3H) .

10 Esimerkki 18 N-(2-amino-l-karboksipropyyli)-L-alanyyli-L-deka-hydroisokinoliini-3-karbonihappo 2,2 g N/5 -Boc- -diaminovoihappoa, valmistettu artikkelin Coll. Czech, chem. Commun. 31, 2955 (1966) 15 mukaisesti, annetaan reagoida 2,4 gramman kanssa yhdistettä pyruvyyli-Dic-OBut, valmistettu esimerkin 12a mukaisesti, esimerkissä 12b selostetulla tavalla. Boc-suojaryhmä lohkaistaan tämän jälkeen esimerkissä 14 selostetulla tavalla. Saanto: 2,6 g.

20 NMR: 5,1-4,8 m (1H); 3,9-3,0 m (5H); 2,0-1,0 m (15H); 1,2 d (3H).

Esimerkki 19 L-N-(l-karbetoksi-5-aminopentyyli)-L-alanyyli-L-dekahydroisokinoliini-3-karbonihappo 25 a) 35 g N,£ -bentsyylioksikarbonyyli-L-lysiini-etyy- liesteri-hydrokloridia ja 30,6 g ^-bromipropionihappoa liuotetaan seokseen, jossa on 350 ml dioksaania, 50 ml etanolia ja 75 ml 4-norm. Na0H:a. Sekoitetaan yön ajan huoneen lämpötilassa pitämällä pH vakiona arvossa 8,8-9 30 autotitraattoria käyttäen, minkä jälkeen pH säädetään pienellä määrällä HCl:a arvoon 7-8 ja liuotin tislataan pois vakuumissa. Jäännös liuotetaan mahdollisimman pieneen määrään vettä ja liuoksen -pH'säädetään suolahapolla arvoon 5-6. Jäähdytetään jäillä ja sakka suodate-35 taan erilleen lyhyen paikoillaan olon jälkeen, pestään I.

35 90 532 pienellä määrällä jääkylmää vettä ja eetterillä ja kuivataan vakuumissa. Vesiliuos voidaan muuttaa myös heikosti emäksisen ioninvaihtajan avulla kahtaisioniksi ja puhdistaa. Sen jälkeen suodos yksinkertaisesti lyofi-5 loidaan. Saanto: 12,9 g (52 %).

b) Yhdiste liuotetaan 100 ml:aan dimetyyliform-amidia ja lisätään peräkkäin huoneen lämpötilassa 23 g yhdistettä H-Dic-OBzl. TosOH (valmistettu tavalliseen tapaan aminohaposta kiehuttamalla bensyylialkoholi- 10 tolueenisulfonihapossa vettä eroittaen), 6,5 ml N-etyylimorfoliinia, 6,8 g l-hydroksibensotriatsolia ja 11 g disykloheksyylikarbodi-imidiä. 4 tunnin sekoittamisen jälkeen urea suodatetaan erilleen, liuotin tislataan pois vakuumissa ja jäännös kromatografioidaan 15 silikageelillä seoksella sykloheksaani-etikkaesteri (4:1).

Tällöin diastereoisomeerit eroittuvat. Otsikon yhdistettä sisältävät yhtenäiset fraktiot yhdistetään, liuotin tislataan pois vakuumissa.

c) Jäännös liuotetaan metanoliin, hydrataan 20 katalyyttisesti Pd/hiilikatalyytillä, ja mahdollisen katalyytin erilleen suodattamisen jälkeen, suoritetaan muuttaminen hydrokloridiksi säätämällä liuoksen pH ar-, voon 3. Liuotin tislataan pois ja jäännös kuivataan vakuumissa.

25 Esimerkki 20 L-N-(l-karbetoksi-3-fenyylipropyyli)-L-alanyyli-L-oktahydroindoli-2-karboksyylihappo a) Seosta, jossa on 55 g 2-bromi-4-fenyyli-n-voihappoetyyliesteriä, 14,5 g L-alaniini-t-butyylies-30 teriä ja 45 ml trietyyliamiinia, pidetään 24 tuntia tetrahydrofuraanissa. Liuotin tislataan pois vakuumissa, jäännös jätetään veteen ja etikkaesteriin liukeneviin osiin, etikkaesterifaasi eroitetaan, kuivataan nat-— riumsulfaati11a ja liuotin tislataan pois vakuumissa.

36 90532 Jäännös kromatografioidaan silikageelillä seoksella syk-loheksaani-etikkaesteri (4:1), jolloin puhdistumisen lisäksi tapahtuu myös diastereoisomeerien eroittuminen. Vastaavien fraktioiden konsentroinnin jälkeen pidettäessä yhdistettä 5 trifluorietikkahapossa 20 minuutin ajan t-butyyliesteri lohkeaa. Trifluorietikkahappo tislataan pois vakuumissa ja sen jälkeen tislataan vakuumissa tolueenin kanssa.

b) 7 g N-(l-L-karbetoksi-3-fenyylipropyyli)-L-alaniinia, 11 g oktahydroindoli-2-karbonihappo-bentsyyli-10 esteri-tosylaattia, 3,2 ml N-etyylimorfoliinia, 3,3 g 1-hydroksibentsotriatsolia ja 5,5 g disykloheksyylikarbo-di-imidiä annetaan sitten reagoida esimerkin 19b mukaisesti dimetvyliformamidissa, käsittelyä jatketaan siinä selostetulla tavalla ja diastereomeerit erote-15 taan kromatografroimalla silikageelillä seoksella syk- loheksaani-etikkaesteri (4:1). Bentsyyliesteri lohkaistaan kromatograafisesti yhtenäisestä yhdisteestä hydraamalla katalyyttisestä.

Esimerkki 21 20 L-N-/_l-karbetoksi-4- (4,6-dimetyyli-pyrimidyyli- 2-amino)-butyylf7“L-alanyyli-L-dekahydroisokino-liini-3-karbonihappo a) 15,3 g oi-bromipropionihappoa ja 41,1 g yhdistettä H-Dic-OBut.TosOH kondensoidaan 300 ml:ssa 25 tetrahydrofuraania, jolloin läsnä on 12,8 ml N-etyyli- morfoliinia ja 1,35 g 1-hydroksibensotriatsolia, käyttämällä 22 g disykloheksyylikarbodi-imidiä. 4 tunnin kuluttua urea suodatetaan pois ja liuotin tislataan pois vakuumissa. Jäännös liuotetaan etikkaesteriin, liuos pes-: 30 tään natriumvetykarbonaatti- ja sitruunahappoliuoksella ja vedellä, etikkaesteriliuos kuivataan natriumsulfaa-tilla ja liuotin tislataan pois vakuumissa.

b) 3,75 g yhdistettä ο^-bromipropionyyli-Dic-0But annetaan reagoida huoneen lämpötilassa 20 ml:ssa tetra- ·· " 35 hydrof uraania 2,5 gramman kanssa - (4,6-dimetyyli- pyrimidin-2-yyli-L-ornitiini-etyyliesteriä lisäämällä 1 ml 1: 37 90532 di-isopropyylietyyliamiinia. 24 tunnin kuluttua liuotin tislataan pois vakuumissa, jäännös liuotetaan etikka-esteriin, liuos pestään vedellä, kuivataan natriumsul-faatilla ja haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös kro-5 matografioidaan esimerkin (20 b) mukaisesti diastereo-isomeerien eroittuessa. t-butyyliesteri lohkaistaan liuottamalla yhdiste dioksaani/HCl-seokseen. 10-15 minuutin kuluttua liuotin tislataan pois ja jäännös kuivataan tarkasti vakuumissa K0H:n päällä. Yhdiste on 10 hydrokloridina.

Esimerkki 22 N - (l-S-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-S-alanyyli-cis-oktahydroindoli-2-S-karbonihappo a) N-(l-S-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-alaniini 15 bentsyyliesteri

Uuttamalla etikkaesterillä natriumkarbonaatin vesiliuoksesta, jossa on 70 g alaniini-bentsyyliesteri-tolueenisulfonaattia, saadaan vapaata emästä. Vedettömällä natriumsulfaatilla kuivattuun orgaaniseen faasiin 20 lisätään 200 ml dimetyyliasetamidia (DMA) ja haihdute taan huoneen lämpötilassa kuiviin vesisuihkuvakuumia käyttäen. Kun on lisätty 90 g »d-bromi-fenyyli-voihappo-etyyliesteriä ja 40 ml N-etyylimorfoliinia, liuoksen annetaan olla 4 päivää huoneen lämpötilassa. Reaktion 25 kulkua seurataan ohutkerroskromatograafisesti silikagee- lilevyillä (seos: sykloheksaani/etikkaesteri 2:1). Haihdutetaan lähes kuiviin vakuumissa, pH säädetään 2-norm. suolahapon metanoliliuoksella arvoon 3 ja lisätään 10 ml - - vettä. Ylimääräinen bromiesteri ja lipofiilinen tuote 30 uutetaan petrolieetteriin, metanolifaasi haihdutetaan kuiviin, lisätään 3 %:sta soodaliuosta (250 ml) ja reaktiotuotteet uutetaan etikkaesteri/eetteri-seokseen (1:1). Kiinteällä natriumsulfaatilla kuivaamisen jälkeen haih-’ : dutetaan kuiviin ja puhdistus ja diastereomeerien eroit- 38 90532 taminen suoritetaan kromatografioimalla silikageelil-lä (seos sykloheksaani/etikkaesteri 4:1). S,S-yhdisteen R^-arvo on alhaisempi ja laskehtii pääosiltaan raskaampana erilleen (48 %). öljymäistä ainetta käsitellään 5 välittömästi edelleen.

b) N-(l-S-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-S-alaniini 37 g bentsyyliesteriä liuotetaan 250 ml:aan etanolia ja bensyyli lohkaistaan hydraamalla katalyyttises-ti 2 tuntia normaalipaineessa käyttämällä 1 g Pd/hiili- 10 katalyyttiä (10 % Pd). Katalyytti suodatetaan pois, liuos haihdutetaan vakuumissa lähes kuiviin ja saostami-nen suoritetaan lisäämällä petrolieetteriä.

Saanto: 33 g; amorfista ainetta; NMR: 1,18 (d, 3H) ; 1,18 (t, 3H) ; 1,5-2,1 (m, 2H) ; 15 2,4-2,8 (m, 2H); 3,0-3,4 (2 m, kumpikin 1H); 4,07 (q, 2H) ; 4,3-5,5 (b, 2H) ; 7,17 (s, 5H) . DMSO-dg.

c) N-(l-S-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-S-ala-nyyli-cis-oktahydroindoli-2-R,S-karbonihappo-bentsyyliesteri 20 5 g N- (l-S-karbetoksi-3-fenyylipropyyli)-S-ala niini a liuotetaan 20 ml:aan DMF:a. Lisätään 2,45 g 1-hydroksibentsotriatsolia, 5,1 g cis-oktahydroindoli-2-karboksyylihappo-bentsyyliesteri-hydrokloridia, 1,5 ml N-etyylimorfoliinia sekä 4 g disykloheksyylikarbodi- 25 imidiä ja sekoitetaan 3 tuntia huoneen lämpötilassa.

Laimennetaan 30 ml :11a etikkaesteriä ja urea suodatetaan pois. Vakuumissa suoritetun kuiviin haihduttamisen jälkeen jäännös liuotetaan 100 ml:aan eetteriä ja uutetaan 2 kertaa vetykarbonaatin vesiliuoksella. Natrium- 30 sulfaatilla kuivattu ja kuiviin haihdutettu orgaaninen faasi kromatografoidaan silikageelillä. Eluoidaan etikka-ester/petrolieetteri-seoksella 4:3 ja saadaan 2 fraktiota, joista haihduttamalla kuiviin vakuumissa saadaan värittömiä öljyjä.

39 90 532

Alkuaineanalyysit: C H N

laskettu yhdisteelle C31H40N2°5 71,5 7,7 5,4 Saant°:

Fraktio 1 71,3 7,8 5,3 3,3 g 5 Fraktio 2 71,6 7,6 5,6 3,9g d) N- (l-S-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-S-alanyy-' li-cis-ktahydroindoli-2-S-karbonihappo 3 g bentsyyliesteriä (fraktio 2) liuotetaan etanoliin ja bentsyyli lohkaistaan hydraamalla katalyytti-10 sesti normaalipaineessa 200 mg:lla Pd/hiilikatalyyttiä (10 %). Vedyn sitoutumisen päätyttyä (noin tunnin kuluttua) katalyytti suodatetaan pois ja liuos haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Lisätään hiukan pentaania, lämmitetään noin 45°C:seen ja käsitellään tehokkaassa 15 vakuumissa. Muodostuu amorfista, kiinteätä vaahtoa.

Saanto: 2,4 g.

NMR (CDC13): 1,20 (d, 3H); 1,23 (t, 3H); multiplet-ti 1,0-2,9 (11H); 3,0-4,5 (m, 3H); 4,12 (q, 2H) ; 4,65 (b, 2H); 7,13 (s, 5H).

20 Esimerkki 23 N-(l-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-alanyyli-oktahydroindoli-2-karbonihappobentsyyliesteri a) N-tert,-butyylioksikarbonyyli-alanyyli-okta-hydroindoli-2-karbonihappo-bentsyyliesteri (Boc-Ala-Oic - 25 OBzl) 19 g yhdistettä Boc-Ala-0H liuotetaan 100 ml: aan DMF:a ja lisätään 13 ml N-etyylimorfoliinia, 13,5 g yhdistettä HOBt sekä 29,6 g oktahydroindoli-2-karboni-happobentsyyliesteri-hydrokloridia. Jäähdytetään jäähau-30 teessä, lisätään 21 g disykloheksyylikarbodi-imidiä ja sekoitetaan 15 tuntia huoneen lämpötilassa. Erilleen laskehtinut urea suodatetaan pois imussa, suodos haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja jäännös liuotetaan etikka-esteriin. Uutetaan 3 kertaa KHSO^- ja KHCO^-vesiliuok-35 sella ja kyllästetyillä NaCl-liuoksilla ja orgaaninen 40 90532 faasi haihdutetaan kuiviin vakuumissa.

Saanto: 38,5 g.

NMR: 1,26 (d, 3H); 1,40 (s, 9H); 1,1-2,4 (m, 12H); 3,2-3,9 (m, 2H) ; 5,28 (s, 2H) ; 7,31 (s, 5H) .

5 b) Alanyyli-oktahydroindoli-2-karbonihappobent- syyliesteri-trifluoriasetaatti 21,5 g yhdistettä Boc-Ala-Oic-OBz1 liuotetaan 50 ml:aan trifluorietikkahappoa. Haihdutetaan kuiviin vakuumissa, jäännöstä digeroidaan useaan kertaan di-iso-10 propyylieetterin kanssa ja kuivataan vakuumissa.

Saanto: 21 g.

NMR:ssä tert.-butyyliryhmän protonisignaali puuttuu täydellisesti.

c) N- (l-karbetoksi-3-fenyyli-propyyli)-alanyyli-15 oktahydroindoli-2-karbonihappoben.tsyyliesteri

Seosta, jossa on 11,1 g yhdistettä Ala-Oic-OBzl. TFA, 7 g o£-bromi-fenyylihappoetyyliesteriä ja 3,3 ml N-etyylimorfoliinia, sekoitetaan 4 päivää huoneen lämpötilassa 20 ml:ssa dimetyyliasetamidia. Haihdutetaan 20 lähes kuiviin vakuumissa, jäännös liuotetaan metanoliin, pH säädetään 2-norm. HCl:n vesiliuoksella arvoon 2 ja lipofiiliset yhdisteet uutetaan petrolieetterillä. Metanolifaasi haihdutetaan kuiviin, lisätään 5 %:ista soodaliuosta ja reaktiotuote uutetaan etikkaesteriin.

25 Kromatografoimalla silikageelillä (seos, etikkaes- teri petrolieetteri 5:3) saadaan otsikon yhdistettä värittömänä öljynä.

Seuraavassa esitetyt esimerkkiyhdisteet on valmistettu jollakin seuraavista menetelmistä A-C, jolloin 30 osoitetut menetelmät ovat luonnehdittavissa seuraavasti: h « 90532

Menetelmä A;

Kondensaatiotuotteen, joka on valmistettu esimerkin (6a tai 12a) mukaisesti yhdisteestä Tie tai Dic-OtC^Hg-esteri tai -bentsyyliesteri tai yhdistees-5 tä Oic-OtC^Hg-esteri tai -bensyyliesteri ja vastaavasta «»^-ketokarbonihaposta, pelkistysaminointi vastaavalla aminohappojohdannaisella esimerkin (6b) mukaisesti, suojaryhmien lohkaiseminen esimerkin (6c tai 12c tai 22d) mukaisesti ja mahdollinen saippuointi esimer-10 kin (13) mukaisesti.

Menetelmä B;

Dipeptidi-t-butyyliesterin, joka on valmistettu esimerkin (le tai lOe, f) mukaisesti, pelkistysaminointi vastaavalla ckketokarbonihappojohdannaisella esi-15 merkin (If, lOg, 11) mukaisesti ja mahdollisesti suojaryhmien lohkaiseminen esimerkin (lOh tai 11) mukaisesti ja/tai mahdollisesti esimerkin (13) mukaisesti.

Menetelmä C:

Menetelmän A mukainen pelkistysaminointi ja 20 ^-suojattua bifunktionaalista aminohappoa käytettäes sä, suojaryhmän lohkaisu käytetystä aminohappojohdan-

Ellei toisin ole ilmoitettu, alempana esitettyjen yhdisteiden osalta pätevät seuraavat NMR-arvot (cT -arvot, ppm; TMS standardina): 25 4,9m (2H); 4,5-3,0m (3H); 2,0-1,0m (11H) .

Kun kyseessä on etyyliesteri, esiintyvät lisäksi seuraavat signaalit: 4,2 q u HZ (2H) 30 1,2 t 7 Hz (3H) .

42 ; π ς · ' k .» ,—S.

ον μ C Ό ε tN ° ε ε · ^

« ° o ^ I

* I IS s - s . . — m CN CN '— '' _ T3 — Tl ..S ε S0' X X X r- · “ ° IN n IN ro “ ~ i zz 5 Ό ε X m ^ = *^r cn rr r-* · . T-.

• * · *- ^ ^ c CN T- (N '—

:trS

-h < m 0) ® υ u

rn C

ex « O s 0 u “>

1 to X

irj X <N

O—ai ^ cn O

*i * U

X X ΤΟ O—X *~

Oi ” ^ O 0=0 m= ΓΜ

(N X

X O

U\ / XX

\_/ CN CN O U

• · / \ oj XX I <N

-'/ \ en xx es — \/ II X ^

\_/ -in "cr u X

— ^ u CN CN —

X X

U U

CN

X

o m m m Pn te ti te x ου υ o o o o •-.e

... - C\J

C\J n 00 co ^ co o VN- ^

Claims (2)

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten oktahydroindolijohdannaiten ja nii-5 den fysiologisesti hyväksyttävien suolojen valmistamisek si, —cooh 10 1 (i) L J-N. ' ' NCO-CH-NH-CH-COORt I I 3 R1 R2 15 jossa kaavassa R2 on CH3 tai CH2F, R2 on alkyyli, jossa on enintään 6 hiiliatomia ja joka voi olla substituoitu ami-nolla tai hydroksilla, ja R3 on vety tai alkyyli, jossa on 1-6 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että R3 ja R2 eivät samanaikaisesti tarkoita metyyliä, tunnettu 20 siitä, että a) kaavan II mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa,

25. I Q-CH-COOR^ k CO-CH-Q R1 (li) (III) 30 joissa kaavoissa Rlf R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, toinen symboleista Q on nukleofuginen ryhmä ja toinen on NH2 ja R4 on H, metyyli, etyyli, bentsyyli tai tert.-butyyli, ja haluttaessa saatu esteri muutetaan karboksyy-lihapoksi (R2 ja/tai R4 = vety), tai 35 b) yhdiste, jonka kaava on 44 90 532 POOC-CH-NH-CH-COOP (IV) I I R1 R2 5 jossa Rx ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, P on vety tai toinen symboleista P voi myös tarkoittaa samaa kuin edellä määritelty R3, kuten tert.-butyyliä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 10 U_tH 15 jossa R4 tarkoittaa samaa kuin edellä, kondensointiaineen läsnä ollessa, ja haluttaessa toinen tai kumpikin esteri-ryhmä muutetaan karboksyylihapoksi, tai c) kaavan VI mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan 20 kaavan VII mukaisen yhdisteen kanssa, —COOR4 T=C-COOR3 -N R2

25 NvC0-C=T <VI) Rx (VII) joissa kaavoissa n, Rx, R2, R3 ja R( tarkoittavat samaa kuin edellä ja toinen symboleista T on vety ja NH2 ja toinen on 30 happiatomi, ja saatu Schiffin emäs pelkistetään, ja haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste muutetaan suolaksi .

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yh-35 diste, jossa a - C-atomien kahdella tai kolmella kiraali-sella keskuksella on L-konfiguraatio. i 45 9 0 532