FI89173C - Analogimetod foer tillverkning av terapeutiskt anvaendbara polysvavelsyraestrar av bis-aldonamider och deras derivat - Google Patents

Description

89173

ANALOGIAMENETELMÄ TERAPEUTTISESTI KÄYTTÖKELPOISTEN BIS-ALDONAMI-DIEN POLYRIKKIHAPPOESTEREIDEN JA NIIDEN JOHDANNAISTEN VALMISTAMISEKSI - ANALOGIMETOD FÖR TILLVERKNING AV TERAPEUTISKT ANVÄND-BARA POLYSVAVELSYRAESTRAR AV BIS-ALDONAMIDER OCH DERAS DERIVAT

Tämän keksinnön kohteena on patenttivaatimuksen l johdanto-osan mukainen analogiamenetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten bis-aldonamidien polyrikkihappoestereiden ja niiden johdannaisten valmistamiseksi.

Keksintö koskee yleisen kaavan I mukaisia bi s-aldonamidien polynj kki happoesterei tä ja niiden johdannaisia | 0 Ί r1o—ch2—ch(0X)—ch(0R2)—ch(or5)—CH(OX)— c—W(R4) —La (1) L J2 j ossa j oko kaikki radikaalit R*·, R* ja Re toisistaan riippumatta edustavat x:ää, t a i kaksi radikaaleista R1, R· ja Rs edustavat x:ää ja kolmas edustaa kaavojen II-VII mukaista radikaalia, ch2ox X01—o

Icyp" H 1 I H (II)

H OX CHgOX

r \pX |/l a (III) H -

H 0X

2 89173 CH2OX H /-0

(pj) β xo —Γ H

H H (IV)

CH-OX

H/°r \ox ox/Lii < v>

xo '—I

H H

CH2OX ch2ox H 0 H H y 0 H ” fjX H/L-O__IV H/l_0__ (VI) Η OX H OX Jm ch2ox CHgOX H J-0 HJ—H/j (VII) ξ\Γ- -tyf» -

\ / H H OX

XO

H OX

X kaavoissa t-VIT samanai kai sps+. i tai toisistaan riippumatta ertustaa

II

3 89173 vetyatomia tai ryhmää -SO jossa ainakin yksi X edustaa ryhmää -SO3H, m edustaa numeroita O, 1,2, 3, A, 3 tai 6, A kaavassa I edustaa suoraketjuista tai haarautunutta, tyydytettyä a 1 keeniradikaa11 a, jossa on 2-22 hiiliatomia, jonka korvaa valinnaisesti yksi tai useampi -CO2P^-radikaal1 ja tämän a 1 keeniradikaa1in keskeyttää va1innaisesti enijjt&än 5 ryhmää -O-, -S-, -S-S-, -S(O)„-, -C-NH- tai/ja -NR^-ryhmää tai syk1oa1 keeni- tai ary 1eeniradikaa1eja, tai A edustaa yksinkertaista sidosta tai radikaalia ~0~CH2~0— n on 1 tai 2, R R^ ja samanaikaisesti tai riippumatta toisistaan edustavat vetyatomia tai C1-C*-a1 kyy1iradikaa1ia ja niiden epäorgaanisten tai orgaanisten emästen kanssa muodostuvia suoloja.

Keksinnön mukaiset yhdisteet edustavat aktiivisia yhdisteitä, joille on hyödyllisiä 4armako1ogisia ominaisuuksia, kuten esitetään myöhemm i n.

Seuraavat. huomautukset pätevät erilaisiin subst i tuent te i h i n tai radikaaleihin (ilmaistu eri kaavoissa), jotka mainitaan keksinnön yhteydessä:

A1 donihapol11 a, joihin po1yrikk 1happoesterit perustuvat, on yleinen kaava VITI

R10—CH2—CH(OH)— CH(0R2)-CH(0R3)-CH(0H)— co2h (VIII) jossa Rl, R 2ja r3 omaavat Jo mainitun merkityksen. Nämä aldonihapot voivat olla D-muodossa, L-muodossa tai niiden rasemaattien muodossa, sopivimmin niiden luonnollisessa vallitsevassa muodossa.

Esimerkkejä näistä aldonihapoista ovat hekson1 hapot, ailonihappo, a 1tronihappo, ga1aktonthappo, g 1 ukonihappo, gulonihappo, idonihappo, mannonihappo ja talonihappo, edullisesti ga1aktonihappo, gtukonihap-po, gulonihappo ja mannonihappo. Muita esimerkkejä ovat näiden hekso- 4 89173 nihappojen johdannaiset, jotka ovat yhtyneet g J ykos i di e i dokse 1 1 a hap-piatomeihin 3-, 4- tai 6-asennossa kaavojen II-VII Johonkin radikaaliin RJ tai r3 rI, missä X edustaa vetyä. Tässä sidos voi olla $i — tai ^3- gl ykos i d i ei dos . Radikaalit II-V ovat gal aktopyranosy 1 i - ja mannopyranosyliradikaaleja. Radikaalit VI ja VII ovat glukopyranosy-1iradikaa1eja (tapauksessa, Jossa m = O) Ja c*(l->4) tai /3 f 1 - >4 >-si doksi ei a o 1 t gog 1 ukopyr anoey I i rad i kaa lej a (kun tn * t-6). Indeksi m kaavoissa VI ja VII edustaa edullisesti Olaa tai t:tä.

Aldon 1 happoon sidotut sakkaridiyksiköt ovat tavallisesti D-muodossa. Esimerkkejä yleisen kaavan VIII mukaisista heksonihapolsta, jotka on substituoitu kaavojen II-VII mukaisilla radikaaleilla, ovat glukopyranosyli-glukonihapot, glukopyranosy1i-mannonihapot, glukopy-r anoey l i -ga 1 afctoni hapot, gal aktopyranosy 1 i -g 1 ukon 1 hapot., mannopyrano-syli-glukonihapot, mannopyranosy1i-mannanihapot ja oiigo-glukopyrano-syl i -gl ukon i hapot. Laktobtonihappo (4-0-^ 3>-0-galakto-pyranosy 1 i -glu-konihappo), gentiobionihappo, me1ibionihappo (6-0-crf -D-galakto-pyra-nosy1i-glukonihappo) mannoblonihappo, sei Iobionihappo (4-0-/3“D-gluko--pyranosy1i-g1ukonihappo) ja maltobionihappo (4-0-Pd-D-gluko-pyranosy-1i-glukonihappo) ja myös ma1totrionthappo ja seilotrionihappo ovat edullisia näiden joukosta.

Esimerkkejä suolaa muodostavista emäksistä ovat tria 1 kyy 1iamiinit, Joissa on 1-6 hiiliatomia ai kyy 1I osassa, kuten esim. trimetyy1iamii-ni, trietyy11 amiini, tripropyy1iamiini, tributyy1iamiini, tripentyy-liamiini Ja triheksyy1iamiini. Edullisia ovat trimetyyIiamiini, tri-etyyliamiini Ja tributyy1iamiini.

Esimerkkejä fysiologisesti siedettävistä epäorgaanisista ja orgaanisista suoloista ovat ammoniakki-, litium-, natrium-, kalium-, magnesium-, kalsium- ja alumlnlumsuolat ja niiden etanoliamiinin, trieta-noliamttntn, mor-fol i t n t n, pyrldiinin ja plperldtinin kanssa muodostamat suolat. Edullisia ovat natrium-, kalium-, kalsium-, aluminium- ja etanoliami inisuolat.

Esimerkkejä suoraketjuislsta tai haarautuvista, kyllästetyistä aikeeni rad i kaa 1 ei st a , joissa on 2-22 hiiliatomia, edustaen A-ryhmää ovat etyleeni, tri-, tetra-, penta-, heksa-, hepta-, okta-, nona-, deka-, undeka-, dodeka-, tetradeka-, heksadeka-, oktadeka-, ikosa- ja doko-sametyleenl ja myös metyy1ietyleeni, metyy1tpropy1eeni, metyylibuty- 5 39173 leeni, metyylipenty1eeni ja d imet yy I i et y 1 een i. Edullisia ovat etyleeni, tri-, tetra-, hekea-, nona-, dodeka- ja dokosamety1eeni ja myös metyy]iety1eeni Ja metyy1ipenty1eeni.

Esimerkkejä ary 1eeniradikaa1 ei st a, joilla A-ryhmän a 1 keeniradikaa1i voidaan keskeyttää, ovat fenyleeni, na-ftyleeni, antryleeni, -fenantry-1eenit ja fluoreny1eenit. Tässä yhteydessä ovat edullisia orto-, neta- ja parateny1een1 radikaa1it.

Esimerkkejä syk1oa1 keeniradikaa1 eista, joilla A-ryhmän alkeeniradi-kaalit voidaan keskeyttää, ovat syklopenty1eeni, syk 1oheksy1eeni, syk1ohepty1eeni ja syklo-oktyleeni| 1,3- ja 1,4-syk 1oheksyleeni ollen edu1 lisiä tässä.

A-ryhmän suoraketjuisessa tai haarautuneessa, kyllästetyssä leenira-dikaalissa on edullisesti ?-12 hiiliatomia. Jos A-ryhmän suoraketjui-sen tai haarautuneen, kyllästetyn a 1 keeniradikaa1in keskeyttää jokin mainituista radikaaleista tai ryhmistä, se on edullisesti 1 tai 7 näistä radikaaleista tai ryhmistä.

Er11yiees 1merkkejä a 1 keeniradikaa1 ei st a, Jotka edustavat määritelmän mukaan A-ryhmää, ovat seuraavista Οί,^-diemiineista johdetut ryhmät:

HN—(CH,)~— NH

i £ l i CH3 ch3 c°2r5 H2N—CH-- (CH2)4~NH2 lysiinin enanti omeer it (R 5 = H) ja sen esterit <R5 * Cj-Cfc-alkyyli) joissa on S-atomeJa: R502C-HC(NH2)-CH2S-CH2-(NH2)CH-C02R5

Lant Ioni Inin (R 5* H) d i astereomeer i t ja esterit (R 5= C 1-C kalkyyli) R502C-HC(NH2)-(CH2)x -S-S-(CH2)x -(NH2)CH-C02R5 6 89173

Systitnin <* = 1, f?5 . H, d1astereomeerit ja esterit (R 5 = c 1 -C 6-a 1 kyy | i )

Homosysti inin <x = 2, r5 s H> diastereomeerit ja esterit 1R 5= Cj-C 6-alkyyll>

H02C-CH(NH2)-(CH2)2-S-CH2-CH(NH2)-C02H

Systationiinin diastereomeerit joissa on NH-ryhmiä: ( “CH2 “CH2 “NH ) -CH2“CH2 “NH2 x = 1 d i ety 1 een i t r i ami i n i x = 2 triety1eenitetramiini x = 3 tetraety1eenipentamiini H,N-(CH2)j-NH-(CH2)j-NH-(CHj)2-NH2 i,*-il..ino-3,7-di.t..Bon.nl H2N-(CH2)j-N'H-(CH2)2-NH-(CH2)j-(*2 l,lo-<l»»<no-«,7-di.t.«i.i.„Bi h K. (CH2 )g-NH-(CH2 )6-NH2 bis- <6-aminoheksyyl i )ami ini H2N-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH-(CH3)3"NH2 5perm<ini H2N-(CH2)4-NH-(CH2)3-NH2 sperm1d 1 i ni H7N-(CH2),-N’H-(CH2)3-NH-(CH2) j-NH2 1, 11-di ami no-4,8-di at saundeWaani Joissa on O atomeja: H2N-(CH2)2-0~(CH2)2-,VH2 bis-(2-aminoetyyl i ) eetteri A-ryhmÄ voi edullisesti edustaa seuraavia radikaaleja: ; OcsK> CH^ 7 89173 -CH-CH,-CH,-CH,-

' S

CO2R5 -CH-CH--S -CH.-CH- | * p ‘ | joissa p * l tai 2 co2ir co2r5 -(CH2)2-S-S-(CH2)2- -(CH2)j-0-(CH2)4-0-(CH2)3- -(CH2)3-NH-(CH2)3- -(CH2)6-NH-C-(CH2)3-|NH-(CH2)6-

Ryhroien R * R^ ja R^ C^-C ft-radlkaal ien esimerkkejä ovat metyyli, etyyli, n-propyyli, n-butyyli, n-pentyyli, n-heksyyli, isopropyyli, ieobutyyli, tert.butyy1i, neopentyyli, joista metyyli, etyyli, n-pro-pyyli, isopropyyli, tert.butyyli Ja n-butyyli ovat edullisia.

Keksintö koskee myös yleisen kaavan I mukaisten bis-aldoniamidien po1yrikkihappoestereiden valmistusmenetelmää, johon kuuluu yleisen kaavan IX

R10—CHj-CH(OH)—CH(0B2)—CE(0E5)—CH(OH)— 12 3 4 missä R , R , R , R ja A saavat mainitut merkitykset, mutta missä kaavoissa II-VII X edustaa vetyä, mukaisten bis-a1donamid1 en saattaminen reagoimaan sulfatoivan aineen kanssa aproottisessa liuottimessa ja näin saatujen tuotteiden muuttaminen vastaaviksi suoloiksi käyttäen epäorgaan i st.a Ja orgaanista emästä. Yleisen kaavan IX mukaiset yhdisteet saadaan analogisesti kirjallisuudesta tunnettujen menetelmien kanssa (esim. F. Scholnick, P.E.P-fef + er, J. Dairy Sei. «3 (3), 471 (1980) I W.N. Emmerllng, B. Pfannemti 1 Ier, Starch 33 (6», 202 (1991> >. Yleisen kaavan IX mukaisten bis-a1donamidien valmistamiseksi vleisen kaavan VIII mukaisten aidonlhappojen laktonlen annetaan reagoida liuottimessa Jonkin diaminoyhdieteen R^HN-A-NHR* kanssa. Lakto-neja voidaan käyttää sekä yleisen kaavan X 1,4-laktonimuodossa Ja myös yleisen kaavan XI 1,5-1aktonimuodossa.

χΟ-C^0 fs10-CH2—C3(0H)|CH Ls(OH) (x) L . ' J \h(ör*) 8 89173 /°_c\ CH1ocr2)=H ^5(0:-:) Cxn (R20>CE—C3(0?.^)

Yleisten kaavojen X ja XI mukaiset yhdisteet saadaan poistamalla vesi aldonihapoista VIII. Aldonihapot voidaan valmistaa kirjallisuudesta tunnetuilla menetelmillä (esim. E.N. Emmerling, B. PfannemuIler, Starch 33 (6), 202 (1981)5 R. Schatter, H.S. Isbell, 3. Am. Chem.

Soc. 81., 2178 (1959), H. W.Diehl et ai., Carbohydrate Research 38, 364 (1974) vastaavien aldoosien elektrokemial1isella tai hypohaliittiok-sidoinnilla. Yleisen kaavan IX mukaisten bls-aldonamidien valmistamiseksi käytetään 2 mol aldonolaktonia diaminoyhdistemoo1ia kohden. Reaktioon sopivia liuottimia ovat metanoli, etanoli, ety1eeniglyko1i, dimetyy1isu 1 foksidi, dimetyyliformamidi tai N-metyy1ipyrrolidoni. Edullinen on d imetvy 1 i-f ormam i d i . Reaktioajat vaihtelevat useasta tunnista useaan päivään, edullisesti 5-8 h. Reaktioiämpöt11 at vaihtelevat huonelämpötilan ja vastaavien liuottimien kiehumapisteiden välillä, edullisesti välillä 40*C ... 80«*C . A l don i happoami d i t joko krist a 11 oi tuvat pois reaktioliuoksesta tai ne voidaan saostaa lisäämällä jotain orgaanista liuotinta. Sopivia tähän tarkoitukseen ovat metanoli, etanoli, isopropanoli tai asetoni, edullisesti i sopropano1i.

Yleisen kaavan I mukaisia, tämän keksinnön piiriin kuuluvien yhdisteiden valmistamiseksi kaavan IX mukainen/mukaiset a1donamidi(t) liuotetaan tai suspendoidaan aproottiseen liuottimeen. Pyridiini, dimetyy1iformamidi, dimetyyliasetamidi, N-metyy1i-pyrrolidoni jne. ovat sopivia, joista edullisin on d imetyy 1 i -f ormam i d i .

Seosta kuumennetaan 20eC ... 100eC, edullisesti 30“C ... 70eC

välisiin lämpötiloihin Ja sulfatoivaa ainetta lisätään. Tästä esimerkkeinä ovat k 1oori-su 1 tonihapot, rikkitrioksidi, oleum tai eetteri- tai amiinirikkitrioksidikomp1eks1t. Edullisesti käytetään r1 kkitrinksidin knmplekseja trimetyyI iami1 nin, trietyy1iamitnin Ja pyridiinin kanssa.

Yleisen kaavan I, jossa jokainen X edustaa ryhmää -SO^M, mukaisten bie-a1donamidien polyrikkihappoestere1den saamiseksi käytetään 1-2

II

9 89173 ekvivalenttia sulfatoivaa ainetta, edullisesti 1,4-1,7 ekvivalenttia, jokaista ester8itymiskykyistä hydroksyy1iryhmää kohti. Yhdisteet, joissa jotkut X:t ovat vetyatomeja ja muut ryhmiä -S03H, saadaan, kun sulfatoivaa ainetta käytetään subekv i va 1 ent t i määr i nä. Sultatoi van aineen määrä valitaan riippuen siitä, miten suuri tuotteen rikkipitoisuuden pitäisi olla. 0,3:n Ja l:n ekvivalentin välillä olevat su 1-fatoivan aineen määrät esteröintiin kykenevää hydroksyy 1 i ryhmää kohden ovat sopivimpia. Reaktioseosta hämmennetään 1-24 h 20...100eC lämpötilassa. Näin saaduista yleisen kaavan I mukaisista polysulfaat-t i yhd i st.e i st 8, missä X edustaa -S0sH-ry hmää, Joka voi olla läsnä myös käytetyn amiinirikkitrioksidikomp1eksin amiinisuolana, saadaan vastaavat epäorgaanisten emästen suolat lisäämällä näitä emäksiä tai niiden epäorgaanisia suoloja. A1 ka1imetaMien ja maa-a1 ka 1 imetä 11ien hydroksideja ja asetaatteja käytetään edullisesti tässä yhteydessä. Fysiologisesti hyväksyttävien orgaanisten emästen suoloja saadaan joko käyttämällä näiden emästen rikkitridioksidikomp1eksia sulfataa-tioreaktiossa tai käsittelemällä maa-alkalimetal1isuolaa tai alkali-metalli suolaa happamessa muodossa kationivaihtaja11 a ja sen jälkeen neutra 1 oi ma 11 a hapan rikkihapon hemiesteri kyseisellä orgaanisella emäksellä. Keksinnön mukaisten yhdisteiden eristäminen tapahtuu yleisesti ottaen reaktio11uoksista tai vesiliuoksista seostamalla käyttäen orgaanisia liuottimia. Sopivia orgaanisia liuottimia ovat metanoli, etanoli, isopropanoli tai asetoni, edullisesti metanoli.

Yhdisteet voidaan puhdistaa toistuvalla saostamisel1 a vesiliuoksista käyttäen edellä mainittuja liuottimia ja käsittelemällä niitä aktiivihiilellä tai vetyperoksidilla. Yleisesti ottaen näin saadut tuotteet ovat seoksia, joissa on suurempi tai pienempi pitoisuus yhdisteitä, joiden kaikki hydroksyy 1 i ryhmät on esteröity su 1 f aat t i r ad i -kaaleilla, ja yhdisteitä, joiden hydroksyy1iryhmistä on vain osa su I -fatoitu, riippuen käytetyn sulfatoivan aineen määrästä. Saadut seokset voidaan va1innaisesti erottaa tuotteiksi, joissa on yhtäläinen su I f aat t. i rad i kaa 1 i en pitoisuus erilaisin erotusprosessen . Erottelu voi tapahtua erilaisin -f ys i kaa 1 i s i n erotusprosessei n, joita ovat esimerkiksi -f rakt i osaostus, gee11 kromatografia, ion i nvai htokromat ograf i a tai affinoimiskromatografia, HPLC- tai sähköforeesiprosessit. Frak-tinsaostus on edullisin. Valmistetaan esimerkiksi tuoteseoksen vesiliuos Ja lisätään 1-4-kertainen määrä orgaanista liuotinta. Veteen sekoittuvat liuottimet kuten metanoli, etanoli, isopropanoli, asetoni 10 391 73 tai tetrshydroturaani ovat sopivia, joista metanoli ori edullinen.

Näin saadun sakan annetaan laskeutua. Yleensä yhdisteet, joissa on korkeampi βυ1 faattipitoisuus, väkevöidään sitten sakassa, ja yhdisteet, joissa on alhaisempi su 1 faattipitoisuus, väkevöidään superna-tanttiliuoksessa. Yhdisteitä, joissa on tietty määrä su 1 faattiryhmiä, saadaan sakkojen tai supernatantt i en toistuvalla -f rakt i osaostukse 1 1 a.

Keksinnön mukaisen prosessin eräässä edullisessa suoritusmuodossa kaavan I mukaiset yhdisteet valmistetaan kaavan VIII mukaisista a 1don i h apo i st a eristämättä välttämätöntä väliainetta.

Tässä yhteydessä vapaiden a 1donihappojen VIII vesiliuos valmistetaan kationivaihtajan avulla a 1donihappojen VIII a1 ka1imeta11isuo1oista tai maa-aI ka Iimetat1isuo1 oista, jotka hapot on syntetisoitu kaupallisesti tai kirjallisuudesta tunnetuilla menetelmillä (esim. W.N. Emmerling, B. P-fannemu11er, Starch 33 (6), 202 (1981); R. Schatter, H.S. Isbell, J. Am. Chem. Soc. 81, 2178 (1939), H. W. Diehl et ai., Carbohydrate Research 28, 364 (1974)) ja tämä liuos väkevöidään olennaisesti. A1donihappoja VIIT vastaavat laktonit valmistetaan sitten in situ eristämättä poistamalla vesi. Tässä tarkoituksessa jäännös, Joka yleensä on aldonlhapon ja laktonin vesipitoinen seos, liuotetaan korkeassa lämpötilassa kiehuvaan 1iuottimeen. Esimerkkejä korkeassa lämpötilassa kiehuvista liuottimista ovat dimetyylisu 1toksidi, dime-tyy1 i+ormamid1, N-metyy11 pyrrolidon1, dimetoksimetyy1ieetteri jne., joista dimetyy1itormanidi on edullinen. Toista, alhaisessa lämpötilassa kiehuva liuotinta, joka voi muodostaa atseotroopin veden kanssa, lisätään sitten. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi n-pentaani, n-heksaani, sykloheksaani, bentseeni jne., joista n-heksaani on edullinen. Vesi poistetaan sitten kvantitatiivisesti aldonihapoista vedenerottimessa. Alhaisessa lämpötilassa kiehuva uuttamisaine tislataan sitten pois ja jäljellä olevassa, korkeassa lämpötilassa kiehuvassa liuottimessa oleva laktoni saatetaan sitä eristämättä reagoimaan kyseisen diaminoyhdisteen kanssa. Tällöin reaktioiämpöti1 at ovat 20...120"C, edullisesti 50...80*C. Seosta hämmennetään 3-24 tunnin ajan, edullisesti 3-8 tuntia. Eristämättä näin saatuja bis-aldonamideja tämän annetaan reagoida sultatolvan aineen kanssa samassa reaktioastiässä. Reaktio-olosuhteet ja tuotteiden eristäminen sekä puhdistaminen on kuvailtu aikaisemmin mainitussa menetelmässä.

li 11 89173

Yleisen kaavan I mukaiset yhdisteet ovat farmakologisesti hyödyllisiä aineita. Niillä on antitronboottisia ja tulehdusta vastustavia ominaisuuksia. Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat sen takia soveliaita kaikentyyppisten reumaattisten sairauksien hoitoon Ja laskimo- ja vattimotromboosien ennalta ehkäisyyn ja hoitoon. Keksintö koskee näin ollen myös ihmisten- ja eläinlääketieteelliseen käyttöön tarkoitettua lääkeainetta. Ihmisille sopiva käyttö on etusijalla.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden antitromboottinen aktiviisuus on erityisen yllättävää.

Tähän asti hepariinia on ensisijaisesti käytetty tromboosin ennalta ehkäisyyn. Hepariint on mukopo1ysakkaridi, joka eristetään eläinkudoksesta, erityisesti sian sykkyräsuoI estä (Thomas, D. P. (1981), Clinics in Haematology, Voi. 10, p. 443-458, Saunders Comp. Ltd., (1981)). Hepariinin lisäksi muissa luonnossa esiintyvillä mukopoly-sakkar1 dei11 a kuten dermatanisu 1 faati11 a tai heparanisu 1 faati11 a on myös antitromboottisi a ominaisuuksia (Rosenberg, R. D., Rosenberg, J. S. (19884), J. Clin, Invest. 74, 1-6| Sie, P., Ofosu, F., Fernanda?, F., Buchanan, M. R., Petitou, M., Boneu, B. (1986) Br. J. Haematol. 64, 707-714). Tunnetaan myös puolisynteettinen kondroitiinipolysu1- faatti, esim. julkaisusta DE-PS 3,118,588, jolla yhdisteellä on mm. antitromboottisi a ominaisuuksia. Kuitenkin vain hepariini on terapeuttisessa käytössä. Viime aikoina on kehitetty useita pienimo 1ekyy-lipainoisia hepariineja kliiniseen käyttöön. Ne ovat tällöin aineita, joita voidaan saada heparlinista erilaisilla kemiallisilla tai entsy-maattisillä depolymerointiprosessel1 la (Thomas, D. P., Merton, R.E. 0932) Thromos. Res. 28, 343-350? Walenga, J.M., Fareed, J., Petitou, M., Samana, M., Lormeau, 3. C., Choay, J. (1986) Thrombos. Res. 43, 243-248? Koller, M., Schoh, U., Buchmann, P., Largiader, F., von Felten, A., Frick, P.G. (1986) Thrombos. Haemostas. 56. 243-246).

Hepariinien ja pienimo1ekyyIipainoisten hepariinien haittana on se, että ne ovat luonnosta peräisin olevia (esim. eläimistä saatavia). Niissä on sen takia pieniä määriä eläinkudoksesta peräisin olevia antigeenejä, jotka voivat johtaa anafy1aktieiin reaktioihin kuten trombosyyttimäärän vähenemiseen, tromboosiin ja emboliaan. Nämä sivuvaikutukset ovat tietenkin verrattain harvinaisia, mutta ne voivat 12 891 73 olla vakavia ja kliinisesti vaikeita hallita.

Sit* vastoin keksinnön mukaiset yhdisteet ovat kokonaan synteettisiä ja sen takia e 1äinantigeenista vapaita.

Toinen olennaisesti useammin esiintyvä komplikaatio tromboosien ennalta ehkäisyssä hepariinia ja pienimolekyy1ipainoista hepariinia käyttäen on verenvuotojen ilmaantuminen. Sellaiset aineet, jotka aiheuttavat vähemmän verenvuotoa yhdessä samanveroisen ant itromboot-ttsen vaikutuksen kanssa, voivat sen takia edustaa huomattavaa terapeuttista edistysaskelta.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden antitromboottisen aktiivisuuden ja tulehdusta ehkäisevän aktiivisuuden testaukseen käytettiin useita farmakologisia testejä.

1. Fibrino 1vvsin kiihdyttäminen

Kliinisesti havaittavan (suhteellisen suuren) trombin muodostuminen voidaan estää eri tavoin. Ensiksikin voidaan poistaa ne tekijät, jotka liittyvät primaarin trombin muodostumiseen, kuten verihiutalei-den aggregaatio tai veren hyytymisjärjestelmä.

Toisaalta primaarisen trombin liukenemista voidaan nopeuttaa poten-tioimalla endogeenista fibrinolyysiä. Endogeenlsen fibr1nolyysin potent toiminen voi myös auttaa hajottamaan jo kliinisesti havaittavat trombit uudelleen. Jonkin aineen fibrino1yyttise 11ä vaikutuksella on siten suuri merkitys tromboosin ennalta ehkäisyssä Ja hoidossa. Keksinnön mukaisten aineiden fibrino 1yyttinen vaikutus määritettiin seuraavalla testillä. Tämä testi on hieman muunneltu eräästä alan kirJa 1Iisuudesta tunnetusta menetelmästä fibrinolyy11isen vaikutuksen määrittämiseksi (Kluft, C. (1979) Throm. Haemostas. 41., 365-383).

li 13 89 1 73

Fibr inolvvsitest 1 ,

Fibrinolyysi määritettiin plasminogeenia sisältävillä f ibrt i nilevyillä.

Petrimaljoja, hai kaisija 1 taan 9 cm, esi1ämmitettiin 40 “Creen. 3 ml 2 % fibrinogeenin (Behringwerke, Marburg) vesiliuosta, 1 ml plasmino-geeni1iuosta, 2 CTA/ml (Behringwerke, Marburg), 3 ml 1 % agaroosi-1iuosta (Serve, Heidelberg) 50 nM:ssä TRIS.HClrää, pH 7,8, ja 1 ml 15 lUml-trombitnia (Behringwerke, Marburg) sisältävää vesiliuosta ptpe-toitiin maljoihin huljuttamalla. Levyjen jäähdyttämisen Jälkeen niihin painettiin 5 mm ha1 kai eijaiset kuopat.

0,1 ml plasmaa (humaania standardiplasmaa, Behringwerke, Marburg), 0,8 ml vettä ja 0,1 ml eri väkevyislä testattavan aineen liuoksia inkuboitiin 10 min 37 eC lämpötilassa. Kun oli lisätty 0,9 ml 0,025 % etikkahappaa, seosta inkuboitiin 5 min 4 °c:ssa ja sen jälkeen lingottiin 5 min 2 OOO gillä. Sakka otettiin 0,1 allaan puskuriin (20mM TRIS/HC1, 100 mM NaC1, 2,7 mM EDTA, pH 7,8).

0,02 ml tätä liuosta ja 0,005 m! 14,3 mM -f lufenamihappol iuosta (Sigma, Tau+kirchen) puskurissa pipetoitiin tibritni1evyjen kuoppiin. Kun niitä oli pidetty 1 vrk 37 “Cissa, lyystkehät p1animetroitiin. Lyysikehien pinta-alat, joista on vähennetty ilman kyseisen aineen 1« 89173 lisäämistä saadut. 1 yys i p i n ta-a 1 at, ovat f i br i i n i 1 yys i ä lisäävän aktiivisuuden mitta.

Tulos esitetään alla olevassa taulukossa.

Aine Fibrinolyysi 2/^g/ml:ssa (mm*) es imerk i stä 23 21,6 20 19,2 24 17,8

Hepar ii n i 14,8 2. Veren hyytymisen inhibolnti

Veren hyytymisen Inhibolnti voidaan mitata yksinkertaisella tavalla aktivoidun osittaisen trombop1ast1iniajan (aPTTTrn) avulla. Se antaa tietoa aktivoituneen hyytymisjärJesteImän yleisestä inhiboimista. Verenvuotojen insidenssin vähentämiseksi pyritään tässä saamaan mahdollisimman alhaiseen veren hyytymisen inhibointiin.

Hvytvmlstest1 aPTT

0,1 ml plasmaa ja 0,1 ml ainetta Pathromtin* (Behringwerke, Marburg* inkuboidaan 37 “Clssa 2 min Ja 0,1 ml 25 mM CaC1*-Iiuoste lisätään. Hyytymisalka mitataan Schnitger it Grossin koagulometri1lä. Ainetta valmistetaan kutakin konsentraat1 ota kohden viiteen yksittäiseen määritykseen riittävä määrä. Standardina käytetään 175 U/mg sisältävää hepariinia (Pharmindustrie> .

Hyytymisajan piteneminen muunnetaan hepariinlyksiköiksi kalibrointi-käyrän avulla. Koska kaiibrointikäyrät eivät ole yhdensuuntaisia, t yh J äkoearvon piteneminen 150 % verran valitaan vert.auspisteeksi .

Tulos: Seuraava taulukko esittää keksinnän mukaisten yhdisteiden hepari iniyksikkttaarvot .

Il is 89173

Aine ee.imtrktttl» U/mg 23 30.9 25 5.85 20 42.1 24 14.1 31 10.2 34_ 15.1_

Hepsrl i n i W 175

Fr agmi i n i [p i en i mo 1 . pa i no i nen hepariinil 64.5 » ____ _______.

3. Vaikutus verenvuotoa!kaan

Rotilta leikattiin n. 2 mm mittainen kappale hännästä. Mitattiin aika, kun veri lakkasi juoksemasta. Eläimille annettiin 9 min ennen verenvuodon aiheuttamista testattavaa ainetta eri väkevyyksin tai •fysiologista keittosuolaliuosta (verrokei lie). Näin käsiteltiin 20 eläimen ryhmiä. Verenvuotoajan pidentyminen verrattuna verrokkiryhmään ilmaistiin prosenttelna.

Aine Verenvuotoajan pidentyminen esimerkistä (X)

Annos (mg/kg) 0.25 0.5 2 20 - 5.1 35.1 nepariini 55.4 120 4· Tulehdusta vastustava vaikutus

Tulehdusprosesseissa vapautuu fagosyyteistä <po1ymor + onuk1eaarisist a leukosyyteistä ja makrotaageista> suuria määriä reaktiokykyisiä happi lajeja, niiden joukossa superoksidiradikaaleja ja hydroksyy1tradi- 16 891 73 kaaleja. Nämä radikaalit ovat osallisia kudoksen tuhoamisessa. Sellaiset aineet, jotka inhiboivat radikaalien muodostumista leukosyytissä, ovat sen takia terapeuttisesti hyvin mielenkiintoisia tulehdusten hallinnassa (Flohe, L-, Giertr, H., Beckmann, P. (19Θ5) teoksessa The Pharmacology of int1 ämmätion, Voi. 5 (Bonta, I. et ai. eds.) p. 255-281, Flsevier, Amsterdam-New York).

Leukosyyteissä tapahtuva radikaalien muodostuminen voidaan mitata mittaamalla luminolilla potentioitu kem11um1nesenssi koko veressä (Peter, M. et ai. <1985) in Chi. Forum 85 (Stelzner, F., eds), p. 8t-84, Springer Verlag, Berlin).

Tulehdusta vastustavan vaikutuksen testaus

Testattavat aineet liuotetaan PBStään ja valmistetaan sarjalaimenno-Mset PBSrään. 600 γΐ PBS, 1OO 1 testattavan aineen liuosta, lOO

fA 1 tsymosaanisuspensiota (100 mg/ml) ja 100 γ 1 sttratoitua kaniinin verta pipetoidaan kyvetteihin, jotka sopivat LKB:n 1251-Luminometriin. Mittaus aloitetaan lisäämällä 100 1 10~3 M Lumi- noli-1iuosta. Kemi luminesenssi mitataan 5 min välein 90 minuutin ajan jokaisesta näytteestä. Määritetään maksimikemiluminesenssi. Näytettä, jossa ei ole testiainetta, käytetään vertailuarvona. Näytettä, johon ei ole lisätty tsymosaania, käytetään tyhjäkoearvona. Kutakin ainetta kohden suoritetaan kolme toisistaan riippumatonta määritystä.

Jäljelle jäävän kerni luminesenssin laskeminen suoritetaan seuraavan kaavan mukaan: CLm»„ (aine) - Cl rnÄ„ (tyhjä) -------------------------------- * 100 CLm»« (vert.) - CLme,„ (tyhjä) 50 % Cl inhibitiota vastaavat konsentraatiot <IC -arvot) saadaan

OU

puolilogaritmisesta p1irroksesta, jossa Jäljelle jäävä kerni luminenssi on esitetty konsentraation logaritmin Funktiona.

Tti I os:

Keksinnön mukaisten yhdisteiden aikaansaama Luminoltn potentioiman kemiIuminesenssin (CL) inhlbltio ilmenee alla olevassa taulukosta.

li n 89173

Aine IC^ t^g/ml) esimerkistä__ 23 225 25 155 20 540 24 220 31 170

Xndometasiini 240

Esillä oleva keksintö koskee myös sellaisia -farmaseuttisia valmisteita, joissa on yksi tai useampi keksinnön mukainen aktiivinen yhdiste tai jotka muodostuvat yhdestä tai useammasta keksinnön mukaisesta aktiivisesta yhdisteestä ei-toksiSten, inerttien, farmaseuttisesti sopivien täyteaineiden lisäksi.

Ei-toksisi11 a, inerteiltä, farmaseuttisesti sopivilla täyteaineilla tarkoitetaan kiinteitä, puolikiinteitä tai nestemäisiä laimenteita, täyteaineita tai minkä tahansa tyyppisiä koostumukseen käytettäviä apuai re i t a.

Edullisia lääkevalmisteita, jotka voidaan mainita, ovat tabletit, kapselit, pillerit, rakeet, suppositorit, liuokset, suspensiot ja emulsiot, tahnat, voiteet, geelit, kreemit, lotionit, jauheet, sumutteet Ja aerosolit.

Tabletit, rakeet, kapselit ja pillerit voivat sisältää aktiivista yhdistettä/ aktiivisia yhdisteitä seuraavien tavanomaisten täyteaineiden lisäksi: <a) täyteaineet ja Jatkeet, esim. tärkke1ysaineet, laktoosi, glukoosi, sukroosi, mannitoli Ja piidioksidi, (b) sideaineet, esimerkiksi karboksimetyy1ise 1lu1oosa, alginaatit, gelatiini, polyvinyylipyrrolldoni, <c> kostuttavat aineet, esimerkiksi glyseroli, (d) hajottajat, esimerkiksi agar-agar, ka1 siumkarbonaatti Ja natriumbikarbonaatti, te) liuokemisen hidastajat, esimerkiksi pa-raffilni, ja (f) imeytymistä nopeuttavat aineet, <g> kostutusaineet, esimerkiksi setyy1ia 1 koho 1i, gIysero1imonostearaatti, (h) adsorptio- aineet, esimerkiksi kaoliini ja bentoniitti, sekä (i) voiteluaineet, esimerkiksi talkki, ka 1 siumstearaatti ja magnesiumstearaatti Ja kiinteät po1 vety 1eenig 1 yko 1it tai kohdissa ta>-ti) mainittujen aineiden seko > tukset.

18 89 1 73

Tableteissa, rakeissa, kapseleissa ja pillereissä voidaan käyttää tavanomaisia päällysteitä, jotka sisältävät soveltuvissa tapauksissa samenninaineita, esimerkiksi sokeria, pääl1ystys1 akkaa, jotka voivat olla myös koostumukseltaan sellaisia, että ne vapauttavat aktiivisen yhdisteen/aktiiviset yhdisteet, tarvittaessa viivästettynä, yksinomaan tai edullisesti tietyssä ruoansulatuskanavan osassa, jolloin esim. polymeeri aineita ja vahoja voidaan käyttää kapse 1ointiai neina.

Sopivissa tapauksissa aktiivinen yhdiste/aktiiviset yhdisteet voi olla läsnä myös mikrokapse1 oidussa muodossa yhden tai useamman edellä mainitun täyteaineen kanssa.

Suppositorit voivat aktiivisen yhdisteen/aktiiviSten yhdisteiden lisäksi sisältää tavanomaisia vesiliukoisia tai veteen liukenemattomia täyteaineita, esimerkiksi po1yety1eenig 1ykoleja, rasvoja, esim.

kaakaorasvaa ja korkeampia estereitä (esim. C, -alkoholia C,_-ras- 14 16 vahapon kera tai näiden aineiden seoksia).

Voiteet, tahnat, kreemit ja geelit voivat sisältää tavanomaisia täyteaineita aktiivisen yhdisteen/aktiivisten yhdisteiden lisäksi, esimerkiksi eläin- ja kasvirasvoja ja niiden johdannaisia, vahoja, parsi fiineja, emu 1gaattoreita, tärkkelystä, traganttia, selluloosa-johdannaisia, po 1 yakry l aat t.ej a, po 1 yet y 1 een i g I yko 1 e j a, stlikoneja, bentoniitteja, talkkia, pii- ja sinkkioksidia tai näiden aineiden seciksi a.

Sumutteet ja jauheet voivat sisältää tavanomaisia täyteaineita aktiivisen yhdisteen/ aktiivisten yhdisteiden lisäksi, esimerkiksi laktoosia, talkkia, piidioksisia, alumiinihydroksidia, ka1 si urnsi1ikaattia ja po1 yarnidijauhetta tai näiden seoksia. Sumutteet voivat lisäksi sisältää tavanomaisia ponneaineita, esimerkiksi k 1 oor i -f 1 uor i h i i 1 i -vetyjä.

Liuokset ja emulsiot voivat sisältää tavanomaisia täyteaineita, kuten liuottimia, liukoisuutta edistäviä aineita Ja emulgaattoreita, esimerkiksi vettä, etyylialkoholia, isopropyy1iaikohotia, etyylikarbo-naattia, etyyliasetaattia, bentsyy1iaikoholia, bentsyy1ibentsoaattia, propy1eenig1 yko 11 a, 1,3-butyleentglykolia, öljyjä, erityisesti puu-vi11ansiemenö1jyö, maapähkinäöljyä, acajoupähkinäö1Jyä, maissialkio-öljyä, oliiviöljyä, risiiniöljyä, ja seesamöljyä, glyserolia, glyse- li 19 891 73 ro 1 i f omaa 1 i a, po1yety1eeniglyko1eja ja sorbitaanin rasvahappoasie-reitä tai näiden aineiden seoksia aktiivisen yhdisteen/aktiivisten yhdisteiden lisäksi.

Parenteraalista 1ääkkeenantoa varten liuokset ja emulsiot voivat olla myös steriilissä ja ver i - i soton i sessa muodossa.

Suspensiot voivat sisältää tavanomaisia täyteaineita kuten nestemäisiä laimenteita, esimerkiksi etyylialkoholia, propy1eenig 1yko1ia, suspendoivia aineita, esimerkiksi etoksiloituja isostearyy1ia1koho-leja, polyoksietyleenisorbitoi ia ja sorbitaanin estereitä, mikroki-teeistä selluloosaa, a 1umiinimetahydroksidia, bentonii11ia, agar-agaria tai traganttia tai näiden aineiden seoksia aktiivisen yhdisteen/aktiivisten yhdisteiden lisäksi.

Mainitut seostusmuodot voivat myös sisältää väriaineita, säilöntäaineita ja myös hajua ja makua parantavia lisäaineita, esimerkiksi piparminttu- ja eukaIyptusö1jyä ja makeutusaineita, esimerkkinä sakkani i n 1 .

Terapeuttisesti aktiivisia yhdisteitä tulisi edullisimmin olla edellä mainituissa lääkevalmisteissa n. 0,9-99,5 painoprosentin väkevyyksinä, edullisesti 0,5-95 paino-%, seoksen kokonaispainosta.

Edellä mainitut lääkevalmisteet voivat sisältää myös muita lääkkeel-Jispsti aktiivisia yhdisteitä keksinnön mukaisten aktiivisten yhdiste! den Ii säksi.

Fdellä esitettyjen lääkevalmisteiden valmistaminen tapahtuu tavanomaisella tavalla käyttäen tunnettuja menetelmiä, esimerkiksi sekoittamalla aktiivinen yhdiste täyteaineisiin.

Esillä olevan keksinnön piiriin kuuluu myös keksinnön mukaisten aktiivisten yhdisteiden käyttö ja myös sellaisten lääkevalmisteiden käyttö, jotka sisältävät yhtä tai useampaa aktiivista yhdistettä, humaani- ja eläinlääkinnässä edellä mainittujen sairauksien ennalta ehkäisyyn, parannukseen ja/tai hoitoon.

Aktiiviset yhdisteet tai lääkevalmisteet voidaan antaa paikallisesti, oraalisesti, parentereraalisesti, rektaa1isesti ja/tai aerosolina, edu1li sesti parentereraal1sest i.

20 891 73

On yleensä osoittautunut edulliseksi antaa aktiivista yhdistettä/ aktiivisia yhdisteitä kokonaismäärin, jotka ovat n. 0,1- n. 100, edullisesti 0,3-50 mg/kg ruumt inpelnoa kerran vuorokaudessa, sopivissa tapauksissa useampana yksittäleannoksena haluttujen tulosten saavuttamiseksi .

Voi kuitenkin olla tarpeen poiketa mainitusta annostuksesta riippuen hoidettavan henkilön tyypistä ja ruumiinpainosta, taudin luonteesta ja ankaruudesta, valmisteen tyypistä ja lääkkeen antotavasta sekä myös ajasta ja aikavälistä, jonka kuluessa lääkkeenanto tapahtuu. Niinpä joissakin tapauksissa voidaan tulla toimeen pienemmällä kuin edellä mainitulla aktiiviseen määrällä, kun taas toisissa tapauksissa edellä mainittu määrä aktiivista yhdistettä täytyy ylittää.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä edelleen, mutta ne eivät millään tavalla rajoita sen piiriä.

2i 89173

Esimerkki 1 N fl-i,3-propaanidiylbis-D-glukonamidi 7,13 g D(*)-glukono-1,5-laktonia liuotetaan 40 ml:aan amiinitonta dimetyyIiformamidia ja lisätään 1,67 ml l,3-diaminopropaania. Seosta lämmitetään sitten 60 »Cleen Ja sekoitetaan 5 tuntia. Tulokseksi saatava sakka suodatetaan pois, pestään metanolilla ja kuivataan. Saadaan 7,96 g valkoista jauhetta.

Su 1 am j sp i s t e.‘ 165... 173 “C

IR (KBr): v = 3540, 2960, 2915, 2890, 1660, 1537, 1100, 1040 cm-* 4H-NMR (Da0): i 1,76 <d, 2H, 6,5 Hz)f 3,30 <t, 4H, 6,5 Hz)J 3,4-4,0 (m, 8H>t 4,09 im, 2H)5 4,30 id, 2H, 3 Hz 1 f 4,70 (H,0, kv. std.)

Esimerkki 2 Ν.Ν·-1.12-dodekaanidtYlbis-D-qlukonamidi 7,1 g D-glukono-1,5-1aktonia suspendoidaan 90 mltssa dimetyylitormamidia, 4,0 g 1,12-diaminododekaania lisätään ja seosta sekoitetaan 5 tuntia 60 «Cissa. Jäähdytyksen jälkeen seos sekoitetaan 0,3 litraan metanolia, ja kiinteä aine kerätään ja pestään metanolilla. Kiintoaine suspendoidaan sitten 1 N HCltään, sekoitetaan 1 h huonelämmässä, ja kiintoaine kerätään jälleen ja pestään vedellä, asetonilla ja viimeksi dietyy1ieetteri11ä. Saadaan 9,9 g valkoista j auhetta.

Sulamispiste: 192 ... 195 ec

Liukenematon jäänne: v « 2920, 2850, 1630, 1550, 1085, (KBr) 1027 cm'*

*H-NMP < DMSO-d^) : δθ, 7-1,8 (m, 20H)} 3,06 (m, 4HM

3,25-3,75 im, 8H)J 3,75-4,2 im, 4H)J 4,40 (S, lOH)| 7,51 it, 2H, 5,5Hz)J kv. std.: tetrametyyI lei lääni

Esimerkki 3

N.N’-1,3-oroDaanidivlbis-|T4-O-p -D-ga i aktopvranosv 1 i - D-glukonamid Q

22 8 9 1 73 "395,4 g ka 1 sium1aktobionaattia liuotetaan 1,? litraan vettä ja liuosta käsitellään 1 h 0,7 litralla lewatlt S lOOiaa IH*-Tnuotnl panosprosessina. Seos suodatetaan imusuodatukseI1 a ja vaihtaja pestään 7 kertaa 1 litralla vettä. Yhdistetyt eluaatit väkevöidään olennaisesti tyhjössä. Las 1nka1 tainen jäännös liuotetaan sitten 800 mitään amiinitonta dimetyy1itörmänidιa, Joukkoon lisätään 800 ml n-heksaania ja seos kuumennetaan kiehuvaksi vedenerottimessa voimakkaasti hämmentäen. Kun vedenerottaminen on saatu päätökseen, n-heksaani tislataan pois, 43 m! 1,3-diaminopropaania lisätään ja seosta sekoitetaan 7 tuntia 63 «*Clssa. Sitten seos sekoitetaan hämmentäen 3 litraan isopropano1ia ja kiintoaine kerätään ja pestään 1 litralla isopropanolia. Kuivaamisen jälkeen saadaan 350 g valkoista kiinteää ainetta. Puhdistamist a varten tämä liuotetaan 2 litraan vettä. Liuosta käsitellään 1 h ajan 100 milliä Lewatit S tOOlaa IH*-muoto>, sitten 100 milliä Amberlyst A 211llä <0H--muoto). Pakastuskuivauksen jälkeen saadaan otsikon mukainen yhdiste puhtaassa muodossa.

Sulamispiste! 125...132 °C

IR (KBr)l v = 2930, 1645, 1550, 1080 cw* 1H-NMR (Da0)l J 1,75 (dt,2H, iHz ) ? 3,27 <t, 4H, 6 Hz) I 3, -4,1 (m, 20H>? 4,15 it, 2H, 3Hz)5 4,3 id, 2H, 3 Hz)J 4,54 <d, 2H, 1 Hz)1 4,70 (HaO, kv. std.) (Da0)1 3 30,79J 38,99? 64,65; 71,30? 73,125 73,74? 74,14? 74,50? 75,065 75,18? 77,99; 83,715 106,10? 176,84 kv. std.l CH30H S 51,36

Esimerkki 4 N.N*- 1.6-heksaan i d1vlbi s-|T4-0- -D-oalaktopyranosvl 1-P-qlukonamidrj 17,0 g laktobiono-1,5-1aktonia suspendoidaan lOO mlissa amiinitonta d i metyy1iformami dia, 2,9 g 1,6-diaminoheksaania lisätään ja seosta sekoitetaan 6 tuntia 80 -Clssa. Jäähdyttämisen jälkeen seos suodatetaan ja suodata hämmennetään 1 litraan dietyy1ieetteriä. Osittain öljymäinen saoste liuotetaan 50 ml laen vettä ja käsitellään 80 ml ioni vaihtimel1 a (Merck 4765, H»-muoto). Seos suodatetaan ja lyofi1isoinnin jälkeen saadaan 19,5 g väritöntä jauhetta, joka hajoaa 23 8 9 1 73 173 -Cista värittyen ruskaksi.

IR: v * 2930, 2860, 1643, 1548, 1080 cur* T1TH-NMR (DaO): ^ 1,0-1,8 (m, 8H)? 3,25 <t, 4H, 5,5 Hz > ? 3,3-4,1 <m, 20H>? 4,15 it, 2H, 3 Hz) 5 4,38 (d, 2H, 3 Hz )( 4,55 id, 2H, 7 Hz)5 4,70 (Ha0) kv. std.: 3-trimetyy1isi1yy1ipropaani-sulfonihapon Na-euola 13-C-NMR (Da0>: % 28, 19? 30,89? 41,63? 63,68? 64,64? 71,25? 73,06? 73,72? 74,12? 74,96? 75,18? 77,97? 83,61? 106,08? ' 176,42 kv. std.1 CH3OH % 51,54

Esimerkki 5 N.N’-l.12-dodekaanidiyIbis-C4-0- -D -galaktoDvranosvl1-D-glukonamid t3 40,8 g laktoblono-1,3-laktonia suspendoidaan 150 ml:ssa amiinit.onta dimetyy11formamidia, 12,0 g 1,12-d1 aminodekaania lisätään ja seosta sekoitetaan hämmentäen 6 tunnin ajan 60 "Cissa. Seos lisätään tipoittain sekoittaen hämmentämällä 1,3 litraan isopropano1ia. Sakka pestään isopropano1i11 a ja liuotetaan 250 mitään vettä. Liuos käsitellään ensin 20 milliä hapanta ionivaihtajaa (Lewatit S lOO) , sitten emäksisellä ionivaihtajai 1 a (Merck 4767). Li0+i1isoinnin jälkeen saadaan 35,0 g väritöntä jauhetta.

Sulamispiste: 79...81 ec 1R1 v = 29?o, 2850, 1645, 1550, 1080 cm~‘ 1 .

H-NMP CDaOll 00,8-1,9 im, 20H1? 3,24 (t, 4H, 5,5Hz)? 3,4-4,1 (m, 20H)? 4,17 (t, 2H, 3Hz>? 4,38 (d, 2H, 3HZ)? 4,55 (d, 2H, 7Hz>? 4,68 (H*0, kv. std.) 1' C-NMR (Da0): ^ 29,02, 31,36? 31,70? 41,86? 63,64? 64,69? 71,20? 73,08? 73,72? 74,17? 75,03? 75,20? 77,97? 83,72? 106,12? 176,24? kv. std. CH3OH ä 51,56

Esimerkki 6

N.N*-1.9-nonaan i d ivlbls-C4-0- -D-ga 1 akt oovranosv 1i-D-g1 ukon am i d i'J

24 89 1 73 '/slmietaitiinef. j a puhdietamjnen oval esimerkin 5 kansaa analogisia.

15.0 g otsikko-yhdistettä saadaan 15,0 grammasta 1 aktob l ono-1,5-1 akt on i a ja 3,47 grammasta 1,9-d i anti nononaan i a .

tr: v s 2930, 7860, 1660, 1545, 1080 cm-» 'h-NMR <Da0l: ϊθ,9-1,8 (m, 14H>? 3,20 (t, 4H1, 5,5 Hz > ! 3,3-4,1 (m, 20H > j 4,15 ft, 2H, 3 Hz>5 4,38 f d, ?H, 3 Hz)? 4,55 (d, 7 H2 > ? 4,68 (HaO, kv. std.)

Esimerkki 7 N_.N’ -1 . 12-dodekaanidl vlbis-(4-0-B-D-g1ukopyranosv1i-D-glukonamidi) 2,04 g sei 1obiono-1,5-1aktonia (H.W. Diehl et ai., Carbohydr. Res.

38, 364 (1974)) saatetaan reagoimaan 0,60 grammalla 1,12-diaminododekaania analogisesti esimerkin 5 kanssa ja saadaan 0,60 g ot s i k k oyhd istettä.

IKI V * 2925, 2850, 1645, 1545, 1075, 1040 cm"4 lH-NMP <Da0): ^0,7-1,9 (m, 20 H)? 3,0-4,6 (m, 30 H)? 4,68 (HaO kv. std.)

Esimerkki 8 N.N*-1.12-dodekaanidlvlbis-(4-0- -D-qlukopvranosvli-D-glukonamidi> i$ 20.0 g kaisiummaltobionaattia <W. N. Emmerling, B. Ptannemuller,

Starch 33, 202, (1981)1 saatetaan reagoimaan analogisesti esimerkin 3 mokaan 1,12-diaminododekaanin kanssa ja saadaan 17,8 g tuotetta.

IKT v = 2925, 2850, 1650, 1545, 1145, 1075, 1030 cm"1 *H-NMR (Da0>: $ 0,7-1,9 (m, 20H)? 3,20 (t, 4H), 5,5Hz); 3,3-4,4 (m, 24H1J 5,15 <d, 2H, 3Hz1? 4,68 (H^o, kv. std.) li

Esimerkki 9 25 89173 N, N*-1,12-dodekaanidiv1bis-|*6-0 - pc’-p-qai akt opyranosv 1 i ) -D-glukonamidi^ 3.96 g kaitummelibionaattia (Sigma Chemie) saatetaan reagoimaan 1,00 gin kanssa 1,12-diaminododekaania analogisesti esimerkin 3 mukaisesti ja saadaan 3,3 g otsikkoyhdistettä.

Sulamispiste: 114-123 “C

IR (KBr>: v = 2925, 1855, 1645, 1550, 1150, 1080, 1030, 980 cm-1

lH-NMR (D*0): ^0,8-1,8 (m, 20H)} 3,20 (m, 4H)S

3,4-4,2 (m, 22H>J 4,29 (d, 2H, 3Hz) } 4,95 (s, 2H)5 4,68 (H*0, kv. std.)

Esimerkki lO

N.N*-1.3-propaani d1ylbi s-(6-0-0(-0-93 1 aktonvranosy 1 i -D-glukonamidi )

Valmistus on analoginen esimerkin 9 kanssa. 3,0 g tuotetta saadaan 3.96 grammasta ka 1iumme1ibionaattia ja 0,37 grammasta 1,3-diaminopropaania.

Sulamispiste: 90-96 "C

IR (KBr): Vs 2925, 1645, 1550, 1152, 1080, 1030, 975 cm"1 4h-NMR (DaO): S1»76 (dt, 2H, 6,5Hz)} 3,30 (t, 4H, 6,5Hz)} 3,4-4,2 (m, 22H>5 4,33 (d, 2H, 3Hz)f 4,96 (S, 2H){ 4,70 (Ha0, kv. std. ) ^C-NMR (0*0): ^ 30,73} 38,96} 63,75} 70,94} 74,13} 71,90} 72,12} 73,06} 73,52} 74,52} 75,97} 100,99} 176,91

Esimerkki li f.. | m - oC -m-key f »en idivlbls- M.n-^-n-oa1aktonvranosvli-D-g1ukpamtdil 26 891 73

Jos 17 g laktobiono-1,3-laktonia ja 3,3 ml 3-(aminometyy1i»bensyy1iamiinia käytetään esimerkin 3 mukaisessa menetelmässä, silloin saadaan 12,2 g otsi kkoyhd i stet t.ä samalla tavalla kuin väritöntä jauhetta.

tr: v =2920, 1665, 1545, 1080 cm-*

lH-NMR (DaO): ^3,3-4,6 (m, 30HIJ 4,68 (Ha0)J

7,24 (m, 4H>

Esimerkki 12 N.N *-44 *-d javkloheksvvlimetaanldivlbis-^4-O-^-D-ga1akt opvranosv1i-D-g1ukonamid ij 17,6 gramman 1aktobiono-i,5-1aktonia ja 3,3 gramman 4,4·-diami nodisyk1oheksyyIimetaanin valmistus ja puhdistus ovat analogisia esimerkin 5 kanssa.

Saanto: 21,3 g TR: v = 2930, 2830, 1643, 1080 cm“l 1H-NMR (DaO): ^0,6-2,2 (m, 20H)f 3,2-4,6 (m, 28H) 4,68 (HaO)

Esimerkki 13 N.N’-1.6-(3.4-dltlaheksaan idlvlbis)-4-O-ft-D-gaiaktopvranosyl1-D-g1ukonamid1 6,9 ml trietyy1iamiinia lisätään huone1 ämmässä 17,0 grammaan 1aktobiono-1,5-1aktöni a ja 3,63 grammaan kystamiinid1hydroklorid1 a 50 ml:aan amiinitonta DMF:ää ja seosta hämmennetään sen jälkeen 6 tuntia 60 "Clssa. Sitten se säestetään käyttäen 500 ml etanolia ja sakka käsitellään edelleen kuten esimerkissä 5. Saadaan 13,2 g valkoista j auhetta.

TR: v * 2925, 1650, 1545, 1080 cm“^

lH-NMR CDa0>: ^2,90 Ct, 4H, 6Hz) J 3,2-4,1 (m, 24H) J

4,16 (t, 2H, 3H7>! 4,38 (d, 2H, 3Hz)| 4,55 (d, 2H, 7Hz){ 4,68 (HaO, kv. std.) I,

Esimerkki 14 27 89173 N.N*-1.7-t4-atsaheotaanid 1vihi s)-4-0-fl-D-galaktopyranoiv11-D-g1ukonamidi 17,0 g 1aktoblono-1,3-1aktonia suspendoidaan 100 mllasn ami initonta d i met yy 11 törmäni i d 1 a, 2,28 ml b 1 a-(3-ami nopropyy 1 i > ami i rt i a lisätään huone 1 ämmässä ja seosta hämmennetään 10 tuntia. Sitten sitä sekoitetaan 4 tuntia 40 «Cissa ja suodatetaan. Suodate hämmennetään 900 mliaan asetonia ja saadaan 23,0 g valkoisia kiteitä asetonilla pesun ja kuivauksen Jälkeen. Ne liuotetaan 80 mliaan vettä ja seostetaan käyttäen 900 ml asetonia. Osittain öljymäinen saoste liuotetaan 150 mliaan vettä, suodatetaan ja 1ioti1isoidaan. Saanto: 16,3 g.

IRI v * 2920, 1630, 1543, 1080 cm** lH-NMR (DaO)I £ 1,82 (dt, 4H, 6 Hz)» 2,91 <t, 4H, 6Hz >| 3,30 (t, 4H, 6Hz)) 3,45-4,6 im, 26H>? 4,68 (Ha0>

Esimerkki 15 N. Ν'-1.12-<4.9-dioksadodekaanid 1vlbis>-4-Q-p»-D-qa 1 aktopyranosvl 1-D-gl ukonami d i

Valmistus ja puhdistus ovat esimerkin 3 kanssa analogisia. 18,9 g oteikkoyhdistettä saadaan 17,0 grammasta Iaktobiono-1,5-1aktonia ja 5,1 grammasta 1,12-diamino-4,9-dioksadodekaania.

Ih-NMB tDaH): δ 1,4-2,0 (m, 8H)} 3,1-4,1 im, 32H)5 4,6 it, 2H, 3Hz > » 4,38 id, 2 H, 3Hz) » 4,33 td, 2H, 7Hz>

Esimerkki 16 N.N*-dimetvvli-N.N’-l.Z-etaanidlvlbis- i4-0-ft>-D-ga1aktopyranosy11-D-glukonami d i)

Valmistus ja puhdistus esimerkin 3 kanssa analogisia. 3,0 g 0tsikkoyhdistettä saadaan 3,40 grammasta la£tobiono-l,5-Iaktonia ja 0,44 grammasta N,N'-dimetyleenidiaminta.

sulamispiste: 125...133 **C

28 8 9 1 73 IR <KBr>: v * 2930, 1640, 1400, 1075 cm-i *H-NMR (Da0>: $2,99, 3,16, <2s, 6H)5 3,3-4,3 <m, 28H)i 4,49 fd, 2H, 7Hz>f 4,68 *HaO, kv . 5td . >

Esimerkki 17 N.N’-1.5-(1-etoksikarboksyyli) pentaanid 1v1bis-p-O-ft-D-ga 1 aktopyranosy1 i -D-ql vkonawl d ij 2,47 g 1ysitn1etyyliesterin d 1 hydrokI orid1a suspendoi daan 40 ml:aan ami initonta dimetyy1i+ormamid1 a, lisätään 3,0 ml trietyy1iamiinia ja seosta hämmennetään 15 minuuttia. Sitten lisätään 6,8 g 1 aitobiono-1,5-1aktonia Ja seos kuumennetaan 60 “Cieen ja sekoitetaan l pv. Sitten se suodatetaan ja suodatetta hämmennetään 400 ml:aan isopropanolia, Sakka kerätään, liuotetaan 60 nilaan dimetyy1iformamidia ja seostetaan jälleen käyttäen 300 ml isopropanolia. Seostaminen toistetaan, sakka pestään isopropano1i11 s Ja d1etyy11eetteri11ä ja näin saadaan 4,05 valkoista jauhetta.

Sulamispiste: 106 eC

IR: v = 2930, 1735, 1655, 1550, 1075 rm_i *H-NMR <Da0>: $1,25 <t, 3H, 7Hz>$ 1,2-2,2 (m, 6H)5 3,25 (t, 2H, 5,5Hz), 3,4-4,6 (m, 29H); 4,68 CHa0, kv. std.)

Esimerkki 18

Dekanatr i um N.N * -1.3-Dropaan idivlbis-Qg.3.4.5.6-oenta-0-sulfo-D-glukonamidrj

Suspendoidaan 4,30 g N,N’-1,3-propaanidiyItais-D-g1 akananidia 50 ml :aan kuivaa d i met yy 1 i törmän i d i a ja kuumennetaan 40 *»c:een ja 23,9 g pyridiinirikkitrioksidikompleksia lisätään hämmentäen. Muutaman minuutin kuluttua tuote saostuu pyridiniumsuolan muodossa öljynä. Tunnin kuluttua seoksen annetaan jäähtyä ja supernatantti liuos dekantoidaan pois. öljy liuotetaan 50 nilaan vettä ja nostetaan pH-arvoon pH a 10 käyttäen 6 N natriumhydroksldi1iuosta. Valmistetaan liuos 90 ml laan käyttäen vettä Ja hämmentäen 350 mitään 1 X vahvuista natriumasetaatti1iuosta. Sakka pestään metanolilla Ja kuivataan. Saadaan 18,6 g väritöntä jauhetta. Tämä liuotetaan 186 mi:ssa vettä.

29 8 9 1 73

Liuokseen hämmennetään 227 ml metanolla ja sen annetaan seista 15 tuntia. Supernatantti dekantoidaan eroon laskeutuneesta öljystä ja se trlturoidaan metanol111a. Säestämistä toistetaan, kunnes otsikkoyhdiste on puhdasta.

Hajoaminen 190 "Clsta, väritys ruskeaksi.

tKBr): v » 2960, 1670, 1550, 1250, 1073, 1045, 1019, 770 cm*1 ^H-NMR <OaO): 11,87 idt, 2H, 7Hz»} 3,36 <dt, 4H, 7Hz > ? 3,9-4,6 (m, 4H1} 4,8-5,4 im, 8H> 5 4,68 <HzO kv. std.)

CoiJ°mo * +26,2 ie = 3 HaOissa)

Alkuaineanalyysi: laskennallinen: N 22,10 X S 1,93 %

havaittu: N 22,29 X S 1,83 X

^C-NMR (DsO>: $ 29,97} 39,69? 69,061 77,68J 78,101 78,391 79,651 171,331 kv. std.: CH30H S 51,56

Esimerkki 19

Dekamtrium N.N’ -1. 12-dodekaanidlvlbis-£5?.3.4.S.6-oenta-D-su1 fo-D-glukonami d 3,60 g N,N’-1,2-dodekaan1dly1bis-D-glukonamidia saadaan reagoimaan 25,5 g pyrid 11ni-r1 kkitrioksid1kompleksin kanssa analogisesti samoin kuin esimerkissä 18 ja saadaan 20,5 g raakatuotetta. Puhdasta tuotetta saadaan geelikromatografoimalla vesiliuosta Sephadex 8 25 kolonnilla. Pakastekulvauksen jälkeen saadaan väritöntä jauhetta, joka hajoaa lämpötilassa 175 ... 189 "C saaden ruskean värin.

IR fKBr): v « 2930, 2853, 1665, 1535, 1250, 1072, 1042, 1010 cm *H-NMR (DaO): 31,0-1,9 (m, 20H)? 3,32 im, 4H)1 4,2-4,6 im, 4H)j 4,9-5,3 im, 8H) } 4,68 tHaO, kv. std.> ;3c-NMR iDaO): 3 28,72» 30,52? 31,02{ 42,30? 69,22? 77,67? 78,34? 78,65? 79,91? 171,09? kv. std. CHaOH 3* 31,56 30 89 1 73

Esimerkki 20

Heksadekanatrium N.N*-1.3-Prc.r>»«nidivlbi»-f2.3.4.5.6-tetra-0-sulfo-4-0-t2.3.4.3.6-tetra-0-sa1 fo-ft-P-qalaktopyranqsy1i >-D-glukonamidi3 79,1 g kalsiumlaktobionaattia liuotetaan 240 ml:ssa vettä ja liuosta käsitellään 240 milliä Lenat it S lOOiaa iH*-muotol. Tonivaihdin pestään käyttäen 3 kertaa 200 ml vettä Ja yhdistetyt liuokset konsentroidaan niin pitkälle kuin mahdollista. Lasimainen jäännös liuotetaan 700 ml:aan amiinltonta dimetyy1iformam1dia Ja kuumennetaan kiehuvaksi 600 ml :11a n-heksaania veslerottel1jassa. Kun vesierottelu saadaan loppuun, n-heksaani haihdutetaan pois ja 7,7 g 1,3-d i am 1 nopropaan i a lisätään 50 ml:ssa d imetyy I i -f ormam i d i a liuokseen huonelämpötilassa. Kun on sekoitettu 5 tuntia 60 “Clssa, seos saa jäähtyä n. 30 «Cleen ja se laimennetaan 450 ml:11a rtimetyy1itormaraidia, ja 400 g pyridiinirikkitrioksidin kompleksia lisätään nopeasti annoksittain hämmentäen. Seosta sekoitetaan 1 tunti 40-45 "C:s5* Ja annetaan jäähtyä. Supernatantti aine dekantoidaan pois kerääntyneestä öljystä ja tämä liuotetaan 300 ml:aan vettä ja liuos asetetaan happamuusarvoon pH = 10 käyttäen 30 X vahvuista n*triumhydroksidi1iuosta. Liuos on valmistettu veden kanssa 1,5 litran astiaan ja se sekoitetaan 4,5 litraan 1 Xlsta met ano 1inatriumasetaatti1iuosta. Saoste sekoitetaan 1 litraan met.anolia, suodatetaan pois imemällä ja kuivataan. Saadaan 230 g kellahtavaa jauhetta. Tämä liuotetaan 2 litraan vettä, lisätään 250 ml 30 %:n vahvuista vetyperoksidia ja seosta sekoitetaan 1 tunti 45 •C:ssa. Jäähdyttämisen Jälkeen se neutraloidaan Ja siitä muodostetaan 2,5 litraa käyttäen vettä. Liuosta sekoitetaan 3,06 litraan metanolia ja sen annetaan seistä 15 tuntia. Supernatantti aine dekantoidaan pois laskeutuneesta öljystä ja jälkimmäinen trituroidaan metanolilla. Kuivaamisen jälkeen saadaan 188,S g väritöntä jauhetta.

Saostamismenetelmä toistetaan neljä kertaa ja lopuksi saadaan n. 50 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena, joka muuttuu ruskeaksi 172 BC:sta eteenpäin hajoamisella eikä sula alle 250 "C:n. jr (KBr): v * 2965, 1665, 1552, 1250, 1055, 1020, 927, 820 cm~^

Ah-NMR (DaO>: /l,82 it, 2H, 6,5Hz>f 3,35 it, 4H, 6,5Hz)| 3,9-4,4 im, 8H> } 4,4-4,8 (m, +H*0 merkki arvolla 4,68 kuten kv. std. 1 { 4,8-5,4 im, 10H) 13C-NMR {0*0)1 <$30,31} 39,77} 68,36} 68,92} 74,22} li 31 89173 77,49J 77,795 78,395 78,765 80,15J 103,555 171,765 kv. std.: CH»0H δ 51,56 [ti = 13,3« (c = 5 Ha0:ssa>

Alkuaineanalyysi : 1 ask. : N: 1,17 % St 21,49 % havaittu: N: 1,16 % S: 21,61 %

Esimerkki 21

Pentadeknatrium pentadeka-O-sulfo-N.N*-1.3-prop aan i d i v 1 b t sjj4-Q- ft -D-Qalaktoovranosv li-D-glukonamidr} 3,77 g N,N'- 1,3-propaanidiylbis<4-0-/3-D-galaktopyranosy1i-D-g1ukonamid1 a ) liuotetaan 60 ml:aan kuivaa dimetyy1iformamidia ja 13,5 g pyridiinirikkitrioksidikomp1 ekeia lisätään annoksittain 40 “Cisse sekoittaen Jatkuvasti. 1 tunnin Jälkeen seosta käsitellään kuten esimerkissä 18 Ja saadaan 10,3 g kellahtavaa, sulfaattia sisältävää raakatuotetta. Tämä liuotetaan 90 mllaan vettä, lisätään 10 ml 30 %:n vahvuista vetyperoksidia ja seosta sekoitetaan 1 tunti 45 eC!ssa. Jäähdyttämisen Jälkeen siihen sekoitetaan 230 ml metanolia ja seos saa seistä 15 tuntia. Supernatantti aine dekantoidaan pois laskeutuneesta öljystä, tämä trituroidaan metanolln kera ja saadaan 6,72 g sulfaatitonta tuotetta (jossa rikkipitoisuus on 20,6 X). Tämä liuotetaan 67 mllaan vettä, 82 ml metanolia lisätään Joukkoon sekoittaen Ja seos saa seistä 15 tuntia. Supernatantti aine dekantoidaan pois laskeutuneesta öljystä ja joukkoon lisätään sekoittaen vielä 74 ml metanolia. öljy eristetään 15 tunnin kuluttua ja fraktiokiteytystä toistetaan sen kanssa useita kertoja, kunnes otsikon mukainen sekoitus on puhdas. Saadaan 0,53 g väritöntä jauhetta, joka hajoaa 180 **C:sta muuttuen ruskean väriseksi.

1R < KBr): v = 2960, 1660, 1550, 1250, 1055, 1020, 930, 820 cm"* *H-NMR (Da0) : &1,87 (t, 2H, 6Hz) 5 3,42 <t, 4H, 6Hz > 5 3,9-4,5 (m, 8H)| 4,5-4,85 (m ♦ Ha0 merkki arvolla 4,68 kuten kv. std.>5 4,85-5,3 (m, 10H) 13 C-NMR fDaO): l>30,335 39,795 68,465 69, 1 15 72,285 32 89 1 73 74,36? 74,36? 77,43? 77,88? 78,14? 78,49? 79,03? 79,61? 79,84? 80,43? 103,43? 171,82? 172,61? kv. std.: CH30H ^ 51,36

A 1kuaineanalyysi · lask.: N 1,73 X S 21,04 X

havaittu: N 1,21 X S 70,91 X

Esimerkki 22

HeksadekamorfOliini N.N * -1.3-propaan idiylbts-fc.3-5.6-tetra-0-sul»o-4-0-(2.3.4.6-tetra-Q-suHo-ft -D-galaktopvranosy 11) -D-glukonamid ij

Natriumsuola 1iuosta 1,76 g esimerkistä 20 käsitellään 13 minuuttia 16 ml :11a Lewatit S-t00:aa iH^-muoto), ionivaihdin suodatetaan pois ja 1.03 g mor-fol i inia lisätään suodat teeseen . L i 0+i 1 i soi nn i n jälkeen saadaan 2,40 g kellahtavaa jauhetta. Hajoaminen 120 "C:sta ja värjäytyminen mustaksi 210 *C lämpötilassa.

IR (KBr): v = 2930, 2780, 1663, 1363, 1430, 1426, 1230, 1097, 1013, 923, 893, 868, 810 cm-i ^H-NMR <D»0>: δ 1,82 idt, 2H? 6,5Hz)? 3,13 (m, 64H>? 3,33 (m, 4H)? 3,90 (m, 64H1? 4,0-4,4 im, 8H>? 4,4-4,8 (m, * Ha0 sign kohdassa 4,70 kuten kv. std.)? 4,8-5,4 (m, 10H)

Esimerkki 23

Heksadekanatrium N.N*-1.6-heksaanldivlblsr2.3.3.6-tetra-0-sulto-4-0-<2.3.4.6-tetra-0-sulfo-/4>-D-qalakto-ovranosv1i)-D-glukonamid O

16.3 g N,N * - 1,6-heksaanidiylbts(4-0-$ -D-galaktopyranosyIi-D-glukonamidia) annetaan reagoida 75,0 g pyr1dlini-rikkidioksid1komp1eksln kanssa esimerkin 18 kanssa analogisesti. Ensimmäisen säästämisen jälkeen saadaan 56,9 g kellahtavaa jauhetta. Lopuksi saadaan n. 13 g puhdasta, otsikon mukaista yhdistettä värittömän jauheen muodossa, joka sintraantuu alkaen 120 "C lämpötilassa.

il 33 89 1 73

Hajoaminen alkaen 170 *C lämpötilassa, värin muuttuminen ruskeaksi. IR (KBr): v * 2930, 2860, 1655, 1250, 1055, 1020, 928, 810 cm-* *H-NMR (DaO>: 5 1,1-1,9 (m, 8H > ? 3,37 (m, 4H>? 3,9- 4,5 (m, 8H); 4,5-4,85 (m t Ha0 signaali arvolla 4,68 kuten kv. std.»} 4,85-5,3 (m, 10H) ^-NMR <DaO>: 5 28,42? 30,74? 42,17? 68,56? 69,01? 74,39? 77,20? 78,37? 78,94? 80,47?

103,21? 171,27? kv. std. CH3OH

S 51,56 £^.7Bao = +9,9 <c « 5 HaO:ssa)

Esimerkki 24

Heksadekanatrium N.N*-1.9-nonaanldivlbis^2.3.5.6-tetra-O-sulfo-4-0-(2.3.4,6-tetra-O-su1 to-ft -D-galaktopyranosy11)-D-glukonamidffi

Valmistus ja puhdistus ovat esimerkin 23 kanssa analogisia. 45,0 g raakatuotetta saadaan 15,0 grammasta N,N’-1,9-no-naan tdiylbis<4-0-/3 -D-galaktopyranosy1i-D-g1ukonami dia) ja 63,O grammasta pyridiini-rikkitr 1 oksid1komp1eksia. Puhdistamisen jälkeen: 10,5 g väritöntä jauhetta.

Hajoaminen lämpötilojen 192-210 "C välillä, värjääntvminen ruskeaksi IR (KBr): v = 2935, 2860, 1665, 1555, 1250, 1057, 1020, 925, 815 cm"* ^H-NMR (DaO): Jo,9-1,9 (m, 14H)? 3,29 <t, 4H, 6,5H2>? 3.8- 4,45 (m, 8H>? 4,45-4,8 (m + Ha0-signaali kohdassa 4,68 kuten kv. std.)? 4.8- 5,4 (m, lOH) ^C-NMR (DaO): ^ 28,77? 30,83? 31,09? 31,32?42,19? 68,69? 68,99? 74,46? 77,12? 77,79? 78,33? 78,93? 80,51? 103,11? 121,21 kv. std.J CHaOH, δ 51,56

Esimerkki 25

Heksadekanatrium N.N * -1.12-dodekaanidiy1bis^23.5.6- 34 89173 tetra-O-Sulfo-4-O-12.3.4,6-tetra-0-sulf o-/3>-P-gaiaktopyranoayli)-D-glukonamid ij

Valmistu* ja puhdistaminen esimerkin 23 kanssa analoginen. 13,30 g raakatuotetta saadaan 4,23 grammasta N, N'- 1,12-dodekaan idiylbis<4-0-jS -D-galaktopyranosy1i-D-glukonamidia) ja 19,1 grammasta pyridiinirikkitrioksidikomp1eksia. Puhdistamisen jälkeen saadaan 3,5 g puhdasta otsikkoyhdistetta värittöminä j auheena.

Hajoaminen lämpötila-arvoilla 188-198 »C, jolloin värjääntyminen ruskeaksi.

IP < KBR1 ! v «= 2940, 2880, 1665, 1555, 1250, 1055, 1020, 930, 820 cm"* ^H-NMR (Da0):So,9-l,9 <m, 20H1J 3,35 <t, 4H, 6,5H*>? 3,9-4,5 (m, 8H>? 4,5-4,8 (m, +H*0-signaali kohdassa 4,70 kuten kv. std.)| 4,8-5,4 (m, 10H) 13C-NMR *DaO>: b 28,74} 30,801 31,441 42,181 68,761 68,961 74,501 77,081 77,801 78,29} 78,941 80,51} 103,07} 171,19 kv. std.: CHsOH 6 51,56

Esimerkki 26

Heksadekanatr1um N.N *-1.12-dodekaanidiv1b1 s ^2.3.5.6-tPtra-O-su1 fo-4-O-<2.3.4.6~tetra-Q-su1 fo- -D-gluko-pvranosv lli-D-ol ukon am i d ij O, 68 g raaka— tai 0,10 g puhdasta tuotetta saadaan 0,34 grammasta N,N*-t,12-dodekaanidly Ibis(4-0- -D-glukopyranosy1i-D- glukonamidia) ja 1,12 grammasta pyridiinirikkitrioksidikomp1eksia analog t sest i es imerk i n 23 mukaan.

Hajoaminen lämpötilassa 148-159 "C ja värittyminen ruskeaksi.

IR (KBr): v * 2930, 2855, 1670, 1560, 1250, 1070, 995, 935, 800 cm *H-NMR (0*01: O,8-1,8 (m, 20H)} 3,30 (m, 4H)} 3,7-4,8 <m ♦ HaO-signaall kohdassa 4,68 kv. std.>i 4,8-5,3 (m, 10H) 1-NMR <Da0>: 28,925 30,95? 31,32? 31,64? 42,34? 69,20? 70,12? 75,57? 77,44? 77,67?

Il 35 8 9 1 73 77,855 79,33; 79,41? 79,97? 81,08?

102,53? 171,27? kv. std.: CH3OH

I 51,56

Esimerkki 27

Heksadekanatr1 um N. N* -1 , 12-dodekaan 1 d ivlbis^.3.W- <*-tet ra-O-su1 f0-4-0-(2.3.4.6-tetra-O-SU1 f o-ft -Q-gluko-pyranosvli-D-glukonaraidiJ

47,5 g raaka- tai 3,0 g puhdasta tuotetta saadaan 12,8 grammasta N,N’-l,12-dodekaanid lylbis <4-0-(b-D-glukopyranosy1i-D-g1ukonamldia) ja 64,6 grammasta pyr1diinirikkitrioksid1komp1eksia analogisesti esimerkin 23 kanssa.

Hajoaminen lämpötilassa 175-189 «C, värjöäntyminen ruskeaksi.

IR (KBr): v = 2930, 2860, 1660, 1560, 1250, 1000, 943, 805 cm~l *H-NMR (D»0): 1,0-1,9 (m, 20H>? 3,27 (m, 4H)? 4,0-4,82 (m, signaali Ha0:1 le kohdassa 4,68 kv. std.)? 4,82-5,25 (m, 10H>? 5,52 <d, 2H, 3Hz) /·’ "C-NMR <D*0>: 28,84? 30,69? 31,15? 31,47? 42,41? 68,51? 69,29? 71,95? 76,14? 76,82? 77,91? 78,30? 78,44? 79,98? 98,93? 171,27

Esimerkki 28

He k sade kana tr i um N. N * - 1 . 12-dodekaan idivlbisp.3.4.5-tetra-0-sul-fo-6-0-<2.3.4.6-tetra-0-sulto- ^-D-galakto-ovranosv 1 i > -D-glukonamidtJ

9,7 g raaka- tai 3,4 puhdasta tuotetta, joka sintroituu 57 “C lämpötilassa, saadaan analogisesti esimerkin 23 kanssa 3,30 grammasta N,N’- 1,12-dodekaanidiylbis(6-0- o^“D-galakto-pyranosy1i-D-glukonamidia) ja 14,9 grammasta pyridi inirikkitrioksidikomp1eksia.

Hajoaminen alkaen lämpötilasta 182 «*C ja vär j ään tyrni nen ruskeaksi.

IR (KBr): v = 2930, 2855, 1650, 1555, 1250, 1050, 36 891 73 1027, 830 cm-ί *H-NMR (DaO): $1,0-1,9 (m, 20H)) 3,23 (m, 4H); 3,9-4,4 (m, 8H)5 4,4-4,8 tm ♦

Ha°"s ignaali kohdassa 4,68 kv. std.); 4,8-5,25 (m, 10H> » 3,38 (d, 2H, 3Hz > ^C-NMR (Da0): ^ 28,72) 30,58) 31,03) 31,34) 42,30) 69,14) 69,77) 70,66) 74,31) 74,92) 77,91) 78,21) 78,49) 78,93) 80,73) 99,12) 171,26) kv, std.: CHaOH S 31,36

Esimerkki 29

Heksadekanatrium N.N’-1.3-propaanldivlbisp.3.4.5-tetra-O-su 1 f 0-6-0- (2.3.4.6-tetra-Q-su 1 -fo- Ql-D-galaktopyrano-sy1i >-D-glukonamidiJ

0,96 g raakaa tai 0,30 9 puhdasta tuotetta saadaan 0,34 grammasta N, N’ - 1,3-propaan idiylbis(6-0-ad-D-galak topyranosy1i-D-glukonamid i a) ja 2,0 grammasta pyridiinirikkitrioksidikompleksia esimerkin 23 mukaan analogisesti.

Hajoaminen alkaen 1 fempot i l asta 168 **C, vSr j ääntymi nen ruskeaksi.

IR (KBr): v * 1640, 1330, 1250, 1030, 1025, 830 cm-i 4h-NMR (DaO): 1,85 (t, 2H, 6,5Hz>) 3,33, (t, 4H, 6,3Hz)) 3,9-4,4 (m, 8H)J 4,4-4,8 (m ♦ HaO-signaali kohdassa 4,68 kv. std.)) 4,8-5,75 (m, 10H)) 3,36 (d, 2H, 3Hz) ^-NMP (naO>: $ 30, 13) 39,84) 69, 17) 69,86) 70,74) 74,33) 74,97) 78,00) 78,17) 78,37) 79,00) 80,81) 99,18) 171,70) kv. std.: CH3OH % 51,37

Esimerkki 30

Heksad ekan atrium N.N* -m-ksyleenidlylbis[2.3.5.6-

tetra-Q-sulfo-4-0-(2.3.4.6-tetra-0-su1fo-/3 -D-galakto-pvranosvl i ) -D-g 1 ukonamidCJ

28,0 g raaka- tai 3,3 g puhdasta tuotetta saadaan 12,0 grammasta N, N’ - σν, ot,’-m-ksyleenidiylbisf4-0-£$ -D-gal ak topyranosy l i -D-glukonamid i a) ja 58,8 grammasta pyridiinirikkitrioksidikomp1eksia analogisesti li 37 89 1 73 esimerkin 23 mukaan.

Hajoaminen alkaen lämpötilasta 157 *»c, värJSSnlyminen ruskeaksi.

IR <KBr>: v * 2960, 1660, 1550? 1250, 1055, 1020, 930, 815 cm“* ^H-NMR <Dgoi: & 3,9-4,85 <m + H^O-slgnaali kohdassa 4,68 kv. std.), 4,85-5,4 <m, 10H>? 7,38 (s, 4H 1 C-NMR (DaO): & 45,51? 68,63? 69, 155 74,42? 77,24? 77,67? 77,91? 78,49? 79,08? 80,70? 103,29? 128,15? 128,86? 131,64?

140,80? 171,88? kv. std. CH^OH

^ 51,56 38 891 73

Esimerkki 31

Heksadekanatr iunt N. N* -4. 4 ' -d i svk 1 oheksvv 1 imetään id ivlbis-£2. 3.5.6-tetra-0-sulfo-4-0- <2.3.4.6-tetra-0-su1 fo-ft-D-qalaktopyraiioavl 1) -D-glukonamidiJ

70,7 g raaka- tai 13,2 g pahdasta tuotetta, joka sintraantuu alkaen lämpötilasta 120 “C, saadaan analogisesti esimerkin 23 mukaan 25,7 grammasta N,N*-4,4'-d isyk toheksyylimetäänid iy1bis-(4-0-(3 -D-galaktopyranosy1i)-D -glukonamidia) ja 114,7 grammasta pyridiinirikkitrioksidikomp1eksia. Hajoaminen lämpötilasta 180 “C, värJääntyminen ruskeaksi.

IR (KBr>: v * 2930, 2860, 1660, 1330, 1250, 1055, 1020, 928, 815 cm"* ^H-NMR (Da0i: 50,6-2,4 (m, 20H)1 3,63 (m, 2H>5 3,9-4,5 (m, 8H)J 4,3-4,83 (m ♦ Ha0-signaali arvolla 4,68 kv. std.M 4,83-4,4 (m, 10H) ^C-NMR <Da0>: ^30,18} 30,36J 30,75} 34,09; 44,40; 46,201 49,45} 52,33} 68,27} 68,75} 74,35} 77,80} 78,41} 78,68} 79,49}

104,09} 170,61} kv. std. CHa0H

3 51,56 f oi ) DT,o = +10,0 (c = 3 HaO:ssa>

Esimerkki 32

Heksadekanatrlum N.N’- 1.6-(3.4-ditlaheksaanidivlbis)-p.3.5.6-tetra-0-sulfo-4-0-<2.3.4.6-tetra-0-sulto-Λ -D-oalaktopyranosy11)-D-g 1 ukonam 1 d ij 38,0 g raakaa ja 8,5 g puhdasta tuotetta saadaan 11,2 grammasta N,Ν’-1,6-<3,4-ditiaheksaanidiylbis)4-O-/0 -D-galaktopyranosy1i-D-glukon amidia ja 53,4 grammasta pyridiinirikk 11rioksidikomp1eksia analogisesti esimerkin 23 mukaan.

Hajoaminen lämpötilasta 163 «c, värjääntyminen ruskeaksi.

XR (KBr>: v * 2965, 1665, 1350, 1250, 1053, 1015, 930, 810 CM»-* *H-NMR (Da0): ^2,96 (t, 4H, 6,5Hz>} 3,69 (m, 4H>1

Il .

39 89 1 73 4,0-4,47 «m, 8H)S 4,45-4,3 <m ♦ H*0-signaali arvolla 4,68 kv. std.)f 4,8-5,3 (m, 10H> '»C-NMR <D*0>: ^38,72} 41,06! 68,68| 69,05} 74,48} 77,40} 77,87} 78,46} 80,46}

103,48} 171,86} kv.std. CH3OH

B 31,56

Esimerkki 33

Heksadekanatriuro N.Ν’-1.7-14-atsaheptaanldlvlbis)-|2.3.5.6-tetra-Q-sulfP-4-0-<2.3.4.6-tetra-O-su1*0-/>-D-gal aktopyranosy 11 1 -D-glukqnamld (J.

15,4 g raakaa ja 2,2 g puhdasta tuotetta saadaan 11,0 grammasta N,N'-1,7-(4-atsaheptaanidiyIbis)-4-0-(0 -D-galaktopyranosy1i-D-glukonam idia Ja 50,0 grammasta pyr1d11 n 1r1 kkitrioksidikomp1eksia analogisesti esimerkin 23 mukaan.

Hajoaminen lämpötilasta 165 -C, värjaantyminen ruskeaksi.

IP (KBr): v = 2960, 2925, 2855, 1650, 1550, 1250, 1055, 1020, 927, 820 cm"*

^H-MMR <Da0>: 2,98 (m, 2H>! 3,17 (t, 4H, 7Hz > J

3,44 ft, 4H, 6Hz>! 3,9-4,4 (m 8H>» 4,4-4,85 (m ♦ HaO-signaali kv. std.

arvolla 4,68)! 4,85-5,3 (m, 10H) 1« ^C-NMR (DaO): 28,11} 39,08} 48,12} 68,65} 69,24} 74,45} 76,94} 77,93} 78,46} 79,09} 80,71} 103,13} 172,06

Esimerkki 34

Heksadekanatrium Ν.Ν·-1.12-<4.9-dioksadodekaanidivlbis)-[2.3.5.6-tetra-0-sulfo-4-0-(2.3.4.6-tetra-0-sulfo-fi-D-ga1aktoovranosv11)-D-qlukonamidlJ

37,1 g raakaa ja 9,3 g puhdasta tuotetta, joka sintraantuu lämpötilassa 120 “C, saadaan 18,2 grammasta N,N’-1,12-(4,9-d ioksadodekaanid iyIbis)4-0-fJ-D-galaktopyranosy1i-D-gluk onamidia ja 59,0 grammasta pyridi1 nirikkitrioksidikompleksia 40 891 73 esimerkin mukaan.

Hajoaminen lämpötilasta 170 “C, värjääntyrninen ruskeaksi.

IP (KBr): v „ 2940, 2880, 1665, 1555, 1250, 1055, 1022, 928, 815 cm

iH-NMR <Da0)I S 1,64 <m, 4H>» 1,88 (t, 4H, 6,5Hz)J

3,0-3,9 im, 12H), 3,9-4,45 im, 8HM 4,45-4,8 im ♦ Hao-signaali arvolla 4,68 kv. std.M 4,8-5,3 im, 10H) /^C-NMR iDaO>: S 27,821 30,78, 39,025 68,641 69,011 70,54} 72,96{ 74,44, 77,02J 77,795 78,335 78,94; 80,525 103,10; 171,455 kv. std.: CH30H 5 51,56 /jAjeao * +9,0 <c * 5 H»0 ssa»

Esimerkki 35

Heksadekanatr 1 um N. N* -dimetvy 1 i -N. N* -1.2-et.aaMdlyltotS~ [2.3.5.6-tetra-0-sulto-4-0-12.3.4.6-tetra-0-s_ulto-Q.- D-galaktoovranosyli)-D~q^konam^dt~^ 8,2 g raakaa ja 1,2 g puhdasta tuotetta saadaan 2,50 grammasta N,N’-d imetyv1i-N,N’- 1,2-etaan1diy1bisi4-0-&-D-ga1aktopyranosy1i-D-glu konam i d i a > ja 12,4 grammasta pyrid1inirikk 1 trioksidikomp1eksia esimerkin 23 mukaan.

Hajoaminen lämpötilasta 188-200 -C, värjääntyminen ruskeaksi.

XR (Kbr): V » 2970, 1650, 1250, 1015, 930, 815 cm-1 1h-NMR <Da0>: ^3,0-4,0 im s:n kanssa arvolla 3,35; 10H1J 4,0-4,7 im, 14H)| 4,70 (HaO, kv. std.M 4,9-5,4 im, 10H); 5,54 (d, 2H, 4Hz> /^C-NMR (Da0): 5 38,965 48,25; 68,36| 69,255 74,175 75,115 77,265 77,73; 78,00; 78,45? 78,765 79,805 103,35; 171,25; kv. std.: CH-.OH, 5 51,56 4i 89173 gTlmtrkki 36

Heksadekanatrlum N.N’-1.5-q-etQk«lRarbQnyvmpen-taanldlylbti(2.3.3.6-tetra-0-»ulfo-4-Q-(2.3,4,6- tetra-Q-sul-fo-^> -D-qalaktopyranosy 11 )-D-glukonamldrj 8,7 g raakaa ja 1,7 g puhdasta tuotatte, joka sintraantuu alkaen lämpötilasta 60 mc, saadaan 3,6 grammasta N,N’-l,5- ( 1-et oks i karbonyy11)pentaani d iyIbi s (4-0-(¾ -D-galaktopyranosy--D-glukonamidia) Ja 13,8 grammasta pyridiinirikkitrioksidikomp1eksis esimerkin 23 mukaan.

IR (KBr>: v » 1730, 1630, 1330, 1230, 1053, 1020, 930, 810 Cf* aH-NMR (D,0)t 51,0-2,2 (m, 9H, ttn kanssa kohdassa 1,31, 7Hz1I 3,30 (m, 2H)? 3,9-4,8 (m HaO-signaali1 la kohdassa 4,68 kv. std.>5 4,8-5,3 (ra, 10H) C-NMR <Da0>: S 15,94? 29,68? 30,34? 33,17? 41,87? 33,93? 63,19? 68,23? 68,53? 69,04? 74,36? 77,33? 79,81? 78,43? 78,80? 79,61? 80,47? 103,36? 103,99? 171,39? 171,63? 176,12 esimerkki 37 N.N*- 1.3-prooaanid1vlbls-D-gulonamldl g P-g>i 1 ono- y-1 ak ton i a ja 0,84 ml 1,3-d i am i nopropaan i a liuotetaan 40 mltssa dimetyyIitormamidia ja seosta sekoitetaan 6 tuntia lämpötilassa 60 “C. Sitten sekoitus lisätään sekoittaen 200 mitään isopropanolia ja saoste pestään 1sopropanol111· ja dietyy1ieetter111ä. Kiinteä aine liuotetaan 20 mitään dimetyy1ttormamidia ja saostetaan uudelleen käyttäen 200 ml isopropano1ia. Saoste liuotetaan veteen ja pakastekuivataan. Saadaan 2,2 g väritöntä jauhetta.

Su 1 am i spistet sintrautuu 49-54°C, 168°C, jossa hajoaminen IR (KBrli v * 2930, 2890, 1645, 1545, 1440, 42 89 1 73 1080 cm *H-MMR (DaOir 51,74 tdt, 2H, 6,5Hz); 3,27 (t, 4H, 6,5Ηζ>; 3,45-4,05 (m, tOH); 4,23 (d, 2H, 6Hz): 4,68 <Ha0, kv.

std . ) ^C-NMR (DaO): 530,65; 39,02; 65,13} 72,64; 74,69; 75,00f 75,12} 176,78; kv. std.

CH3OH 51,56

Esimerkki 38 N.N*-1.2-propaan i d i vIbi s-D-galaktonami d1 4, 1 g otsikkoyhdistett& värittöminä jauheena saadaan analogisesti esimerkin 37 mukaan 7,12 grammasta D-galaktono-T-1aktonia ja 1,48 grammasta 1,2 diaminopropaania. Sulamispiste: 183-193 "C, hajoaminen ja vSrjääntymtnen ruskeaksi.

IR < KBr): v = 2940, 1656, 1552, 1109, 1055, 1044, 1028, 865 cm“l

^H-NMR (Da0); S1»18 <d» 3H» 6Hz>} 3,1-4,6 <m, 15H)S

4,68 (HaO, kv. std.) C-NMR <Da0>: G 19,64; 19,77, 46,16} 47,87f 48,10; 65,90} 71,93} 72,64; 73,49; 177,75} 178,42} 178,54

Esimerkki 39 NN*- 14-bu taan i d iv1b1s-L-mannonami di 2,4 g otsikkoyhdistettä saadaan värittömänä Jauheena analogisesti esimerkin 18 mukaan 3,56 grammsta L-mannono-T~1aktonia ja 0,90 grammasta putreskiinia.

Hajoaminen 1ämptttί1asta 181-188 eC, vÄrjÄÄntyrninen ruskeaksi.

IR (KBr): v = 2955, 2925, 2855, 1643, 1555, 1231, 1098, 1043, 1031, 880, 740, 640 cm *H-NMR <Da0>: S 1,58 (m, 4H)} 3,30 (m, 4H>f 3,75 li 43 89 1 73 on, ΘΗ)I 4,02 <d, 2H, 7Hz>J 4,26 <d, 2H, 7Hz > i 4,68 <Η*θ kv. etd.) /5 ., # C-NMR (OaO): y 28,42f 41,38; 63,67; 72,38; 72,76; 73,43; 75,19; 177,09

Esimerkki 40 N.N*-d11aktobIonov 1i hydratsi1n1 6,1 g raakaa tuotetta saadaan analogisesti esimerkin 37 mukaan 6,a grammasta 1aktobiono-1,5-1aktonla Ja 0,3 mllsta hydratsiinihydraattia. Pylväskromatograti Practogel TSK HW 40S:n poikki antaa puhtaan tuotteen värittömänä jauheena pakastekuivauksen Jäi keen.

Esimerkki 41

Dekanatrium N.N*-1.3-nropaanid1vlbi s(2.3.4.5.6-penta-0-su1to-D-guIoniamidi 9,8 g raakaa Ja 6,4 g puhdasta tuotetta värlttömänän jauheena saadaan analogisesti esimerkin 18 mukaan 2,2 grammasta N,N’-l,3-propaanidiyIbis-D-guloniamidia ja 12,3 grammasta pyridi inirikkitrioksidikompleksia.

Hajoaminen lämpötilasta 183 "C, värjääntyminen ruskeaksi.

IR (KBr>: v » 2960, 1673, 1533, 1230, 1070, 1010, 923, 805 cm-1 iH-NMR <Da0>: S 1,83 On, 2H); 3,34 On, 4H); 4,32 (d, 4H, 3,5Hz)f 3,07 On, 6H>; 3,34 (d, 2H, 3,3Hz >1 4,68 (HaO, kv. std.» ÖC-NMR <DaO): £ 30,03; 39,62; 68,781 76,28; 76,411 77,78; 80,14; 171,13; kv. std.

CH30H 5 31,33

Esimerkki 42

Decanatrium N.N’-1.2-propaan1d1v1bis(2.3.4.5.6-penta-O-sulfo-D-galaktonamldi) 44 891 73 13,0 g raakaa tai 9,8 g puhdasta tuotetta virittämän* jauheena saadaan analogisesti esimerkin 18 mukaan 3,3 grammasta N,N’-1,2-propaani d i y I b is-D-galaktonamid1 a ja 19,5 grammasta pyr id i in i ri kk i tr ioks id ikompleksia.

Hajoaminen lämpötilasta 191 mC, värjÄintyrninen ruskeaksi.

1R (KBr): v = 2970, 1665, 1550, 1250, 1065, 1040, 1007, 900 cm-1 AH-NMR <Da0>: ^1,26 <d, 3H, 6,5Hz)l 2,9-4,3 (m, 3H); 4,3-4,6 (m, 4H>{ 4,68 (HaO, kv. std.)J 4,8-5,3 (m, 8H)

^C-NMR (Da0): ^19,201 45,941 46,15J 47,61J

69,07» 78,421 78.36J 79.90J 170,841 171,031 191,93 kv. std. CH*0H S 51,57

Esimerkki 43

Dekanatrium N.Ν’-1.4-butaanid ty1bis <2.3.4.5.6-penta-0-su11o-L-mannonami d i) 10,5 g raakaa tai 7,2 g puhdasta tuotetta värittömäni jauheena saadaan analogisesti esimerkin 18 mukaan 2,5 grammasta N,N’- 1,4-butaanidiy1bis-L-mannonamidia ja 14,1 grammasta pyr idt inirikkitrioksidi kompleks i a.

Hajoaminen lämpötilasta 180 eC, värjääntyminen ruskeaksi.

IR (KBr): v * 2960, 2930, 2850, 1670, 1555, 1250, 1075, 1010, 925 cm'1 lH-MMR (Da0>: $ 1,65 (m, 4H)5 3,31 (m, 4H11 4,43 (m, 4H)J 4,8-5,08 (m, 4H>1 5,15 (m, 4H)1 4,68 (Ha0, kv. std.)

^C-NMR (Da0)! % 27,981 41,625 69,151 78,81J

79,365 79,751 170,93} kv. Std.

CH*0H S 51,55

Esimerkki 44

Heksadekanatr ium N. N* -bis (2.3.5.6-tetra-0-suI-f Q- 45 89173 4-0-(2.3.4.6-tetra-O-sulfo- (S-D-g*1aktoovranoivIi-glukonovlithydraUitni 17,S g raakaa tai 7,5 g pahdasta tuotatte saadaan analogisesti esimerkin 18 mukaan 6,0 grammasta N,N'-di1aktobionoylhydratsi inia ja 33,7 grammasta pyridiinirikk 1 trioksidin kompleksia.

Esimerkki 45 5,000 kg heksadekanatrlum N,N’-l,3-propaanid iylbts(2,3,5,6-tetra-0-su1to-4-0-(2,3,4,6-tetra-0-su l+o- φ-D-galaktopyranosy1i>-D-glukonamidia) kuivana aineena liuotetaan sekoittamalla 40 litraan vettä ruiskutusta varten. Sen jälkeen kun liuoksen pH on säädetty happamuuteen pH=7,5 netr1umhydroksidiIiuos1aimenteel1 a, siitä tehdään 50,00 litraa vettä ruiskutukseen Ja suodatetaan membraan1suodattimen läpi, jonka huokoskoko on 0,2 ft m. Liuos suodatetaan pois aseptisissa olosuhteissa 1 mi:n ampulleihin ja nämä suljetaan tiiviisti.

Claims (12)

1. 46 891 73
2. 1. Analogiamenetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten bis-aldonamidien polyrikkihappoestereiden ja niiden johdannaisten valmistamiseksi, tunnettu siitä, että bis-aldonamidien polyrikkihappoesterit ja niiden johdannaiset ovat yleisen kaavan I 0 [R10-CH2-CH(OX)-CH(OR2)-CH(OR3)-CH(OX)-C-N(R4) —j-j- A (I) mukaiset, jossa kaavassa joko kaikki radikaalit R1, R2 ja R3 toisistaan riippumatta edustavat x:ää, tai kaksi radikaaleista R1, R2 ja R3 edustavat x:ää ja kolmas edustaa jotakin kaavojen II-VII mukaista radikaalia, CH2OX X0J— o _ vj>r H ΓΠ H H OX (II) CHgOX W—°\H & H I (III) H OX CHgOX h)t0 _ (iv) (oxj) XO I-' H H H 47 891 73 CH2OX fr xo ΓΊ H H (V) CH2OX ch2ox Λ.-O H _Hy-O H "" C_h)L_o__-o-- H ΟΧ H OX Jm (VI) CH2OX CH OX HJ o |/h- \-o-- \ox M L I | H -m XO H H 0X H ΟΧ (VII) x kaavoissa I - VII samanaikaisesti tai riippumatta toisistaan tarkoittaa vetyatomia tai ryhmää -S03H, jossa ainakin yksi x edustaa ryhmää -S03H, m edustaa numeroa 0, 1, 2, 3, 4, 5 tai 6, A kaavassa I edustaa suoraketjuista tai haaroittunutta, tyydytettyä alkeeniradikaalia, jossa on 2-22 hiiliatomia, joka on valinnaisesti substituoitu yhdellä tai useammalla radikaalilla -C02R5, ja tämän alkeeniradikaalin keskeyttää valinnaisesti enintään 5 ryhmää 0 II -O-, -S-, -S-S-, -S(0)n-, -C-NH- tai/ja -NR6 tai sykloalkyleeni- tai aryleeniradikaalia, tai 48 89 1 73 A edustaa yksinkertaista sidosta tai radikaalia —O-^-O” n on 1 tai 2, R4, R5 ja R6 samanaikaisesti tai toisistaan riippumatta tarkoittavat vetyatomia tai jotain (^-Cg-alkyyliradikaalia ja niiden epäorgaanisten tai orgaanisten emästen kanssa muodostamia suoloja, siten että yleinen kaavan IX 0 [ R10-CH2-CH (OH) -CH (OR2) -CH (OR1) -CH (OH) -C-N (R4) -fy A (IX) missä R1, R2, R1, R4 ja A merkitsevät samaa kuin yleisessä kaavassa I, mutta x kaavoissa II-VII edustaa vetyatomia, mukaisia bis-aldonamideja saatetaan reagoimaan sulfatoivan aineen kanssa aproottisessa liuottimessa ja näin saadut tuotteet muunnetaan valinnaisesti vastaaviksi suoloiksi käyttäen epäorgaanista tai orgaanista emästä.
3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että jokaisessa tapauksessa, eristämättä väliaineita, yleisen kaavan VIII R10-CH2-CH(OH)-CH(OR2)-CH(OR1)-CH(OH)-C02H (VIII) missä R1, R2 ja R1 merkitsevät samaa kuin patenttivaatimuksessa 1, ja missä x kaavoissa II-VII edustaa vetyatomia, mukaiset aldonihapot, muunnetaan yleisen kaavan IX mukaisiksi aldonamideiksi ja saatetaan reagoimaan niiden polyrikki-happoestereiden saamiseksi. Patenttivaatimuksen 1 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että kaavoissa I-VII jokainen x edustaa ryhmää -S03H. 49 891 73
4. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että kaavoissa I-VII ainakin puolet x-ryhmistä edustavat -S03H-ryhmää.
5. 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että R2 ja R3 edustavat x:ää.
6. 6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että R1 tarkoittaa radikaalia III tai radikaalia VI, jossa m = 0.
7. 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että R1 ja R3 edustavat x:ää.
8. 8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että R2 tarkoittaa radikaalia II tai radikaalia VI, jossa m = 0, tai radikaalia VII, jossa m = 0.
9. 9. Jonkin patenttivaatimuksista 5-8 mukainen analogiamenetelmä, tunnettu siitä, että A kaavassa I tarkoittaa polymetyleeniradikaalia -(CH2)p-, jossa p = 2 ... 22.
10. 10. Jonkin patenttivaatimuksista 5-8 mukainen analo giamenetelmä, tunnettu siitä, että A kaavassa I tarkoittaa polymetyleeniradikaalia -(CH2)p-, jossa p = 2 ... 12.
11. 11. Jonkin patenttivaatimuksista 5-8 mukainen analo giamenetelmä, tunnettu siitä, että A kaavassa I edustaa suoraketjuista alkeeniradikaalia, jossa on 2-22 hiiliatomia, jonka ketjun voivat keskeyttää ryhmät 0 -O-, -S-, -S-S-, -S(0)n-, -C-NH- ja/tai -NR6, missä n ja R5 merkitsevät samaa kuin patenttivaatimuksessa 1.
12. 12. Jonkin patenttivaatimuksista 9-11 mukainen analo giamenetelmä, tunnettu siitä, että A kaavassa I on substi- so 89173 tuoitu yhdellä, kahdella useammalla radikaalilla -C02R5, missä R5 merkitsee samaa kuin patenttivaatimuksessa 1. Il . si 89173