DK162393B - Polysvovlsyreestere af bis-hexonsyreamider og derivater deraf samt fremgangsmaade til fremstilling af samme - Google Patents

Description

i

DK 162393 B

Opfindelsen angår hidtil ukendte polysvovlsyreestere af bis-hexonsy-reamider og derivater deraf med den generelle formel I:

c Γ O

5 11 R*0—C H2 — C H(OX)— C H(0 R2)—C H(0 X)—C H(OX)—C—N(R3) A (1)

Ji 1 2 hvor enten begge radikalerne R og R uafhængigt af hinanden beteg- 1 2

10 ner X, eller det ene af radikalerne R og R betegner X, og det andet betegner et radikal med formlerne II-VII

ch2ox 15 xo / °v { (Π)

Η OX

20 CHjOX

XO λ °x H

ηΤϊΑ 25 H ox

CHjOX

H /-0 V (.V, 30 K ox ox/1 k }

XO \l [/ H

Η H

CHjOX

35 H A °\ H

^ /H \ ( ) (V)

f\ OX OX/V

xo \i_μ/

Η H

DK 162393 B

2 ch2ox ch2ox , ίΛ~\ϊ Ϊ/Kj xoX^/^o- VjA o ... <V"

Η ΟΧ Η OX

Jffl 10 - - - Γ ch2ox

CH2OX H y-O

· - i/H \r°— (vn) Γ

i\ox h/I

X0\_J/ Η H OX

15

H OX

hvor X i formlerne I-VII samtidig eller uafhængigt af hinanden betegner et hydrogenatom eller en -SOgH-gruppe, hvor mindst ét X 20 betegner en -SOgH-gruppe, m er 0, 1 , 2, 3, 4, 5 eller 6, A i formel I betegner: 25 a) et mættet uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, b) et mættet, uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende 30 fra 2 til 12 carbonatomer, som er afbrudt af 1 eller 2 -S-, -S(0)n~, -S-S-, eller 0 tt -C-NH-grupper, hvor det i tilfældet med et uforgrenet alkyleradikal, af den nævnte art, som er afbrudt af en -S-, -S(0) - eller _ 4 n -S-S-gruppe, kan være substitueret med en eller to -COgR -grupper, c) et mættet uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, som er afbrudt af op til 5 -0- eller 5 -NR -grupper,

3 DK 162393B

d) et mættet uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, som er substitueret med et eller to -COgR^-radikaler, eller 5 e) et -CH2-B-CH2-radikal, hvor B betegner et cykl oal kyl en- eller arylenradikal, f) radikalet -0-0 eller 15 g) en enkeltbinding, n er 1 eller 2, λ a p* R , R4 og Ra betegner samtidig eller uafhængigt af hinanden et 20 hydrogenatom eller et Cj-Cg-alkylradikal, samt deres salte med uorganiske eller organiske baser.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse repræsenterer 25 aktive forbindelser, som besidder nyttige farmakologiske egenskaber, som det er vist nedenfor.

Følgende kommentarer knytter sig til de forskellige substituenter eller radikaler (i de forskellige anførte formler), som er nævnt i 30 forbindelse med den foreliggende opfindelse:

De hexonsyrer, som ligger til grund for de foreliggende polysvovl-syreestere, har den generelle formel VIII

35 R10-CH2-CH(0H)-CH(OR2)-CH(OH)-CH(OH)-C02H (VIII) 12 hvor R og R har den ovenfor anførte betydning. Disse hexonsyrer kan være til stede i D-formen, L-formen eller i form af racemater, fortrinsvis hovedsagelig i deres naturlige form.

DK 162393 B

4

Eksempler på disse hexonsyrer er allonsyre, altronsyre, galacton-syre, gluconsyre, gulonsyre, idonsyre, mannonsyre og talonsyre, fortrinsvis galactonsyre, gluconsyre, gulonsyre og mannonsyre. Yderligere eksempler er derivater af disse hexonsyrer, som på 5 oxygenatomerne i 4- eller 6-stillingen er glycosidisk forbundet med et radikal R eller R med formlerne II-VII, hvor X betegner hydrogen. Bindingen her kan være ar- eller ^-glycosidisk. Radikalerne II-V er galactopyranosyl- og mannopyranosylradikal er. Radikalerne VI og VII er gi ucopyranosyl radikal er (i det tilfælde hvor m = 0) og 10 ar(l-*-4)- eller 0(1-4)-forbundne oligogl ucopyranosyl radikal er (når m = 1-6). Indekset mi formlerne VI og VII står fortrinsvis for 0 eller 1. De saccharidenheder, som er forbundet med hexonsyren, er almindeligvis til stede i D-formen. Eksempler på hexonsyre med den generelle formel VIII, som er substitueret med radikalerne med formlerne 15 II-VII, er giucopyranosylgiuconsyrer, giucopyranosylmannonsyrer, giucopyranosylgal actonsyrer, galactopyranosylgiuconsyrer, mannopyranosyl gi uconsyrer, mannopyranosylmannonsyrer og oligogiucopyranosyl-giuconsyrer. Lactobi onsyre (4-0-0-D-galactopyranosylgiuconsyre), genti obionsyre, mel i bionsyre (6-0-ar-D-galactopyranosylgiuconsyre) , 20 mannobionsyre, cell obionsyre (4-0-0-D-glucopyranosylgiuconsyre) og mal tobionsyre (4-0-a-D-glucopyranosylgiuconsyre) og også mal totri-onsyre og cellotrionsyre foretrækkes i forbindelse med den foreliggende opfindelse.

25 Eksempler på saltdannende baser er tri al kylaminer indeholdende fra 1 til 6 carbonatomer i alkylenheden, såsom trimethyl amin, triethyl-ami n, tripropyl amin, tributyl amin, tripentyl amin og trihexyl ami η.

Der foretrækkes trimethyl amin, triethyl amin og tributylamin.

30 Eksempler på fysiologisk acceptable uorganiske og organiske safte er ammonium-, lithium-, natrium-, kalium-, magnesium-, calcium- og aluminiumsalte samt salte med ethanol amin, triethanolamin, morpho-lin, pyridin og piperidin. Der foretrækkes natrium-, kalium-, calcium-, aluminium- og ethanolaminsalte.

35

Eksempler på de mættede uforgrenede eller forgrenede alkylenradi-kaler indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, og som repræsenterer gruppe A, er ethyl en, tri-, tetra-, penta-, hexa-, hepta-, octa-, nona-, deca-, undeca- og dodecamethylen og også methyl ethyl en,

DK 162393 B

5 methyl propyl en, methyl butyl en, methyl pentylen og dimethylethylen.

Der foretrækkes ethylen, tri-, tetra-, hexa-, nona- og dodecame-thylen og også methylethylen og methylpentyl en.

5 Eksempler på arylenradikalet B i den for A betegnende gruppe -CH2B-CH2- er phenylen, naphthylen, anthrylen, phenanthrylener og fluorenylener. I denne forbindelse foretrækkes ortho-, meta- og para-phenylenradikaler.

10 Eksempler på cykloalkylenradikalet B i den for A betegnende gruppe -CH2-B-CH2- er cyclopentylen, cyclohexylen, cycloheptylen og cyclo-octylen, hvor 1,3- og 1,4-cyclohexylen foretrækkes.

Hvis det mættede uforgrenede eller forgrenede alkylenradikal i c 15 gruppe A er afbrudt med en -0- eller -NR -gruppe, er det fortrinsvis med én eller to af disse.

Specifikke eksempler på alkylenradikaler, som repræsenterer gruppe A ifølge definitionen, er grupper afledt fra nedenstående α,ω-di-20 aminer: hn-(ch2)2-nh

I I

ch3 ch3 25 co2R4 H2N-CH-(CH2)4-NH2 30 4 4

Enantiomerer af lysin (R = H) og estere heraf (R = Cj-Cg-alkyl).

Indeholdende S-atomer: 35 R402C-HC(NH2)-CH2S-CH2-(NH2)CH-C02R4 4 4

Diastereomerer af lanthionin (R = H) og estere (R = Cj-Cg-alkyl) r4o2c-hc(nh2)-(ch2)x-s-s-(ch2)x-(nh2)ch-co2r4

DK 162393 B

6 4 4

Diastereomerer af cystin (x = 1, R = H) og estere (R = C^-Cg-al- kyl) 4 4

Diastereomerer af homocystin (x = 2, R = H) og estere (R = Cj-Cg-5 al kyl) H02C-CH(NH2)-(CH2)2-S-CH2-CH(NH2)-C02H Diastereomerer af cystathionin 10

Indeholdende NH-qrupper: H2N(-CH2-CH2-NH)x-CH2-CH2-NH2 x = 1 di ethylentriamin x = 2 tri ethylentetramin 15 x = 3 tetraethylenpentamin H2N-(CH2)2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)2-NH2 1,9-di ami no-3,7-di azanonan H2N- (CH2)3-NH- (CH2) 2-NH- (CH2)3-NH2 1,10.-di ami no-4,7-di azadecan H2N-(CH2)g-NH-(CH2)g-NH2 bis-(6-aminohexyl)amin 20 H2N-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH-(CH2)3-NH2 spermin H2N-(CH2)4-NH-(CH2)3-NH2 spermidin H2N-(CH2)3-NH-(CH2)2-NH-(CH2)3~NH2 l,ll-diamino-4,8-diazaunde- can 25 Indeholdende 0 atomer: H2N-(CH2)2~0-(CH2)2NH2 bis-(2-aminoethyl)ether.

Gruppe A kan fortrinsvis betegne følgende radikaler: 30 35

DK 162393 B

7 —ch2 5 ; <^>CHl- -CH!^ -0-CH=0 CH2— —CH—CHj— CH2— CH2— co2r4 10 —CH—CH2—S —CH2—CH— Hvor p - 1 eller 2 I I 4 co2r4 co2r4 —(CH^—S—S—(CH^— —(CH^—O—(CH^—O—(CH^— 15 —(CH^—NH—(CHJj— —(CH^—NH — C—(CH^—CNH—(CH^— II » o o 20

Eksempler på Cj-Cg-alkyl radikal er af grupperne R3, R* og R5 er methyl, ethyl, n-propyl, n-butyl, n-pentyl, n-hexyl, isopropyl, isobutyl, tertiær-butyl, neopentyl, hvor methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, tertiær-butyl og n-butyl foretrækkes.

25

Den foreliggende opfindelse angår også en fremgangsmåde til fremstilling af polysvovl syreestere af bis-hexonsyreamider med den generelle formel I, hvilken fremgangsmåde omfatter, at bis-hexonsyreamider med den generelle formel IX: 30 Γ o

II

R'O — C H2— C H(0 H)— CHiOR2)— C H(OH)—CH(OH)—C—NCR3) A (IX) J2 35 12 3 hvor R , R , R og A har den ovenfor anførte betydning, men hvor X i formlerne II til VII betegner hydrogen, omsættes med et sulfaterende middel i et aprot opløsningsmiddel, og at de således opnåede produkter omdannes til de tilsvarende salte under anvendelse af en

DK 162393 B

8 uorganisk eller organisk base. Forbindelserne med den generelle formel IX opnås analogt til fremgangsmåder, der er kendt fra litteraturen (f.eks. F. Scholnick, P.E. Pfeffer, J. Dairy Sci. 63 (3), 471 (1980); W.N. Emmerling, B. Pfannemiiller, Starch 33 (6), 202 5 (1981)). For at fremstille bi s-aldonamiderne med den generelle

formel IX får lactoner af aldonsyrerne med den generelle formel VIII

lov til at omsættes i et opløsningsmiddel med en diaminoforbindelse 4 4

R HN-A-NHR . Lactonerne kan benyttes både på 1,4-1actonformen med den generelle formel X og også på 1,5-lactonformen med den generelle 10 formel XI

o /° / c 15 [^O—CH2— CH(OH)]CH I (X) ^CH(OH) CH(OH)

O

/ o—c / \ 20 (R/OCHzJCH CH(OH) (XI) \ / (R20)CH-CH(0H) 25 Forbindelserne med de generelle formler X og XI opnås ved eliminering af vand fra hexonsyren VIII. Hexonsyrerne kan opnås ved fremgangsmåder, der er kendt inden for litteraturen (se f.eks. W.N. Emmerling, B.. Pfannemiiller, Starch 33 (6), 202 (1981); R. .Schaffer, .

H.S. Isbell, J. Am. Chem. Soc. 81, 2178 (1959), H.W. Diehi et al., 30 Carbohydrate Research 38, 364 (1974)), ved elektrokemisk eller hypohalitoxidation af de tilsvarende aldoser. For at fremstille bis-hexonsyreamider med den generelle formel IX benyttes der 2 mol hexonsyrelacton pr. mol diaminoforbindelse. Passende opløsningsmidler til reaktionen er methanol, ethanol, ethylenglycol, dimethyl-35 sulfoxid, dimethyl formamid eller N-methylpyrrol idon. Der foretrækkes dimethyl formamid. Reaktionstiderne er fra flere timer til dage, fortrinsvis mellem 5 og 8 timer. Reakti onstemperaturerne ligger på mellem stuetemperatur og kogepunkterne for de respektive opløsningsmidler, fortrinsvis mellem 40 og 80°C. Hexonsyreamiderne

DK 162393 B

9 krystalliserer enten ud af reaktionsopløsningen eller kan præcipi-teres ved at tilsætte et organisk opløsningsmiddel. Til dette formål er methanol, ethanol, isopropanol eller acetone, fortrinsvis isopro-panol egnet.

5

Bis-hexonsyreamiderne med den generelle formel IX er beskrevet i beskrivelsen til DE patentansøgning nr. 37 34 853.1 med samme ansøger og samme ansøgningsdato, hvilken beskrivelse medtages heri ved denne henvisning.

10

For at fremstille de foreliggende forbindelser med den generelle formel I opløses eller suspenderes bis-hexonsyreamidet med formlen IX i et aprot opløsningsmiddel. Pyridin, dimethyl formamid, dimethyl-acetamid, N-methylpyrrol idon osv. er egnede, hvor dimethyl formamid 15 foretrækkes.

Blandingen opvarmes til temperaturer mellem 20 og 100°C, fortrinsvis mellem 30 og 70eC, og der tilsættes et sulfaterende middel. Eksempler på disse er chlorsulfonsyrer, svovl tri oxid, oleum eller 20 ether- eller aminsvovl tri oxidkomplekser. Der benyttes fortrinsvis svovltrioxidkomplekser med trimethyl amin, triethylamin og pyridin.

For at opnå polysvovl syreestere af bis-hexonsyreamider med den generelle formel I, hvori hvert X betegner en -SOgH-gruppe, benyttes 25 der 1 til 2 ækvivalenter sulfaterende middel, fortrinsvis 1,4-1,7 ækvivalenter for hver hydroxylgruppe, som er i stand til esterifleering.

Forbindelser, hvori nogle X betegner hydrogenatomer og de andre -30 -SOgli-grupper, opnås når det sulfaterende middel benyttes i subækvi-valente mængder. Mængden af sulfaterende middel udvælges alt afhængigt af, hvor stort svovlindholdet i produktet skal være. Der foretrækkes mængder på mellem 0,5 og 1 ækvivalent sulfaterende middel pr. hydroxylgruppe, der kan esterifi ceres. Reaktionsblandingen 35 omrøres i fra 1 til 24 timer ved temperaturer på mellem 20 og 100°C.

Ud fra de således opnåede polysulfatforbindel ser med den generelle formel I, hvori X betegner -SOgH, hvilke også kan være til stede som saltet af aminen af det benyttede aminsvovl tri oxidkompleks, opnås de korresponderende salte af de uorganiske baser ved at tilsætte disse

DK 162393 B

10 baser eller deres uorganiske salte. Hydroxiderne og acetaterne af alkalimetallerne og alkaliske jordartsmetaller anvendes fortrinsvis i forbindelse med den foreliggende opfindelse. Salte af fysiologisk acceptable organiske baser opnås ved enten at anvende et svovl tri-5 oxidkompleks af disse baser ved sul fateringsreaktionen eller ved at behandle det alkaliske jordartsmetalsalt eller al kalimetal saltet med en kationbytter på syreform og efterfølgende neutralisere den sure svovlsyrehemiester med den organiske base. Isoleringen af forbindelserne ifølge opfindelsen foregår almindeligvis ved præcipitation fra 10 reaktionsopløsninger eller fra vandige opløsninger under anvendelse ....... af organiske opløsningsmidler. Egnede organiske opløsningsmidler er methanol, ethanol, isopropanol eller acetone, fortrinsvis methanol.

Forbindelserne kan oprenses ved gentagen præcipitation fra vandige 15 opløsninger under anvendelse af ovennævnte opløsningsmidler og ved behandling med aktivt trækul eller hydrogenperoxid. Almindeligvis er de derved opnåede produkter blandinger med et mere eller mindre højt indhold af forbindelser, hvori alle hydroxyl grupperne er esterifi-ceret med sulfatradikaler, og af forbindelser, hvis hydroxylgrupper 20 kun er delvis sul fateret alt afhængig af den benyttede mængde sulfaterende middel. De opnåede blandinger kan eventuelt adskilles til produkter med et ensartet indhold af sulfatradikaler ved hjælp af forskellige adskillelsesprocedurer. Adskillelsen kan foregå ved hjælp af forskellige fysiske adskillelsesprocesser, såsom f.eks.

25 fraktionspræcipitation, gel kromatografi, ionbytningskromatografi eller affinitetskromatografi, HPLC eller elektroforetiske processer.

Der foretrækkes fraktionspræcipitation. Der fremstilles f.eks. en vandig opløsning af produktblandingen, og der tilsættes én til fire gange mængden af et organisk opløsningsmiddel. Vandblandbare 30 opløsningsmidler, såsom methanol, ethanol, isopropanol, acetone eller tetrahydrofuran er egnede, og methanol foretrækkes. Det således opnåede præcipitat får lov til at bundfældes. Almindeligvis koncentreres de forbindelser, som har et højt sulfatindhold, i præcipitatet, og. de med et lavt sulfatindhold i supernatantopløs-35 ni ngen. Forbindelser med et defineret antal sulfatgrupper opnås ved gentagen fraktionspræcipitation af præcipitaterne eller superna-tanterne.

I en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge den

DK 162393 B

11 foreliggende opfindelse fremstilles forbindelserne med formlen I ud fra hexonsyrer med formlen VIII uden isolering af det nødvendige mellemprodukt.

5 I den forbindelse fremstilles der en vandig opløsning af de frie hexonsyrer VIII ved hjælp af en kationbytter ud fra alkalimetalsalte eller alkaliske jordartsmetalsalte af hexonsyrerne VIII, der er syntetiseret kommercielt eller ved hjælp af fremgangsmåder, der er kendt fra litteraturen (f.eks. W.N. Emmerling, B. Pfannemiiller, 10 Starch 33 (6), 202 (1981); R. Schaffer, H.S. Isbell, J. Am. Chem.

Soc., 81, 2178 (1959), H.W. Diehi et al., Carbohydrate Research 38, 364 (1974)) og denne koncentreres væsentligt. De lactoner, som svarer til hexonsyrerne VIII, fremstilles derpå in si tu uden isolering ved eliminering af vand. Til dette formål opløses resten, som 15 generelt repræsenterer en vandholdig blanding af hexonsyrer og lacton, i et højtkogende opløsningsmiddel. Eksempler på højtkogende opløsningsmidler er dimethyl sul foxid, dimethyl formamid, N-methyl-pyrrolidon, dimethoxymethylether osv., hvor dimethyl formamid foretrækkes. Et andet lavtkogende opløsningsmiddel, som kan danne en 20 azeotrop med vand, tilsættes derpå. Egnede opløsningsmidler er f.eks. n-pentan, n-hexan, cyclohexan, benzen, osv., hvor n-hexan foretrækkes. Vand elimineres derpå kvantitativt fra hexonsyrerne i en vandseparator. Det lavtkogende ekstraheringsmiddel afdestilieres dernæst, og den lacton, som er tilbage i det resterende højtkogende 25 opløsningsmiddel, omsættes derpå uden isolering med diaminofor-bindelsen. Reaktionstemperaturerne ligger på mellem 20 og 120eC, fortrinsvis mellem 50 og 80eC. Blandingen omrøres over et tidsrum på fra 3 til 24 timer, fortrinsvis fra 3 til 8 timer. Uden isolering af de resulterende bis-hexonsyreamider bringes disse til omsætning med 30 et sulfaterende middel i samme reaktionsbeholder. Reaktionsbetingelser og isolering og oprensning af produkterne er beskrevet i de forudgående nævnte fremgangsmåder.

Forbindelser med den generelle formel I er farmakologisk anvendelige 35 forbindelser. De udviser anti thrombose- og anti-inflammationsegenskaber. Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse er derfor egnede til behandling af en hel række rheumatiske sygdomme og til profylakse og terapi af vene- og arteriel thrombose. Opfindelsen angår derfor også et medikament til mennesker og veterinær

DK 162393 B

12 anvendelse. Der foretrækkes anvendelse til mennesker.

Antithromboseaktiviteten af forbindelserne ifølge opfindelsen er navnlig overraskende.

5

Hidtil er heparin primært blevet anvendt til profylakse af thrombose. Heparin er et mucopolysaccharid, der isoleres fra dyrevæv, navnlig svineileum (Thomas, D.P., (1981) i "Clininics in Haematology, udg. 10, side 443-458, Saunders Comp. Ltd., 1981). Ud over 10 heparin udviser andre naturligt forekommende mucopolysaccharider, såsom dermatansulfat eller heparansulfat, også antithromboseegen-skaber (Rosenberg, R.D., Rosenberg, J.S., (1984), J. Clin. Invest.

74> 1-6; Sie, P., Ofosu, F., Hernandez, F., Buchanan, M.R., Petitou, M., Boneu, B. (1986) Br. J. Haematol. 64» 707-714). Fra beskrivelsen 15 til DE-PS 3.118.588 kendes der f.eks. også et halvsyntetisk chon-droitinpolysulfat, hvilket bl.a. udviser antithromboseegenskaber.

Der anvendes imidlertid kun heparin terapeutisk. For nylig er flere lavmolekylære hepariner blevet udviklet til klinisk anvendelse. I disse tilfælde er det forbindelser, der kan opnås ud fra heparin ved 20 forskellige kemiske eller enzymatiske depolymeriseringsprocesser (Thomas, D.P., Merton, R.E., (1982) Thrombos. Res. 28, 343-350; Walenga, J.M., Fareed, J., Petitou, M., Samana, M., Lormeau, J.C.,

Choay, J. (1986) Thrombos. Res. 43, 243-248; Koller, M., Schoh, U., Buchmann, P., Largiadér, F., von Felten, A., Frick, P.G. (1986) 25 Thrombos. Haemostas. 56» 243-246).

En ulempe ved heparinerne og de lavmolekylære hepariner er, at de er af naturlig oprindelse (hidrører fra f.eks. dyr). Der er derfor en lille mængde antigen tiT stede hidrørende fra dyrevævet, hvilket kan 30 føre til anafylakti ske reaktioner, såsom en mindskelse af thrombo-cytantaller, thrombose og emboli. Disse bieffekter er selvfølgelig forholdsvis sjældne, men kan være alvorlige og klinisk vanskelige at styre.

35 I modsætning hertil er forbindelserne ifølge opfindelsen fuldstændig syntetiske og derfor fri for dyreantigen.

En anden væsentlig mere hyppig komplikation ved profylakse af thrombose med heparin og lavmolekylær heparin er forekomsten af

DK 162393 B

13 blødninger. Forbindelser, som medfører mindre blødninger sammen med tilsvarende antithrombosevirkning, kan derfor repræsenterer en væsentlig terapeutisk fordel.

5 Der blev udført flere farmakologiske forsøg for at afprøve forbindelserne ifølge opfindelsen for antithrombosevirkning og anti-inflammatorisk virkning.

1. Fibrinolvseacceleration 10

Dannelsen af en klinisk manifesteret (forholdvis stor) thrombosus kan forhindres på forskellige måder. På en måde kan de faktorer, som er involveret i dannelse af den primære thrombose, såsom blodplade-aggregering eller blodkoagulationssystemet, elimineres. På den anden 15 side kan opløsning af den primære thrombosus fremmes ved forstærket endogen fibrinolyse. En forstærkelse af endogen fibrinolyse kan også tjene til at opløse allerede klinisk manifesterede thrombi igen. En forbindelses fibrinolytiske virkning har således stor betydning ved profylakse og terapi af thrombose. Den fibrinolytiske virkning af 20 forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse blev bestemt ved det nedenfor beskrevet forsøg. Forsøget er en svag modifikation af en fremgangsmåde, der er kendt inden for litteraturen, til bestemmelse af den fibrinolytiske virkning (Kluft, C. (1979) Thromb.

Haemostas. 41, 365-383).

25

Fibrinolvseforsøq

Fibrinolyse blev bestemt ved hjælp af plasminogenholdige fibrin-plader.

30

Petriskåle med en diameter på 9 cm blev foropvarmet til 40°C, og 3 ml af en 2% fibrinogenopløsning (Behringwerke, Marburg) i vand, 1 ml plasminogenopløsning, 2 CTA/ml (Behringwerke, Marburg), 3 ml af en 1% agaroseopløsning (Serva, Heidelberg) in 50 mM TRIS/HC1, pH 7,8, 1 35 og 1 ml af en opløsning af 15 U/ml thrombin (Behringwerke, Marburg) i vand blev afpipetteret i skålene under hvirvlen. Efter afkøling af pladerne blev brønde med en diameter på 5 mm udstandset.

0,1 ml Plasma (human standardplasma, Behringwerke, Marburg), 0,8 ml

DK 162393 B

14 vand og 0,1 ml opløsning af forsøgsforbindelsen i forskellige koncentrationer blev inkuberet i 10 min ved 37°C. Efter tilsætning af 0,9 ml 0,025% eddikesyre blev blandingen inkuberet i 5 min ved 4eC og efterfølgende centrifugeret i 5 min ved 2.000 g. Præcipitatet 5 blev taget op i 0,1 ml puffer (20 mM TRIS/HC1, 100 mM NaCl, 2,7 mM EDTA, pH 7,8).

0,02 ml Af denne opløsning og 0,005 ml 14,3 mM flufenaminsyreopløs-ning (Sigma, Taufkirchen) i puffer blev afpipetteret i påførings-10 brøndene på fibrinpladerne. Efter 24 timer ved 37°C blev lyseringene .../...jålt,,jned _pla.n1meter. Arealet af. lyseringene minus lysearealerne uden tilsætning af forbindelsen tjener som et mål for øgningen af fibro-lysesaktiviteten.

15 Resultater: Resultaterne er anført i nedenstående tabel.

2

Forbindelse ifølge eksempel Fibrinolvse ved 2 ua/ml (mm 1 23 21,6 20 19,2 20 24 17,8

Heparin 14,8 2. Blodkoaaulationshæmning 25 Hæmning af blodkoagulation kan måles på simpel måde ved hjælp af den aktiverede delvise thromboplasti ntid aPTT. Denne giver oplysning angående den generelle hæmning af det aktiverede koagulati onssystem.

For at mindske forekomsten af blødninger ønskes der en så lav hæmning af blodkoagulation som mulig.

30

Koaaulationsforsøa. aPTT

0,1 ml Plasma og 0,1 ml Panthromtin® (Behringwerke, Marburg) blev inkuberet ved 37°C i 2 min, og der blev tilsat 0,1 ml 25 mM CaClg-35 opløsning. Koagulationstiden blev målt i et Schnitger & Gross koagulometer. Der blev udført 5 individuelle bestemmelser med midlet pr. koncentration. Der blev anvendt heparin indeholdende 175 U/mg fra firmaet Pharmaindustrie som standard.

DK 162393 B

15

Forlængelsen af koagulationstiden omdannes til heparinenheder ved hjælp af en kalibreringskurve. Idet kalibreringskurverne ikke er parallelle vælges forlængelsen på 150% af blindværdien som referencepunkt.

5

Resultater: I nedenstående tabel er anført heparinenhederne af forbindelserne ifølge opfindelsen.

Forbindelse ifølge eksempel U/ma 10 23 30,9 25 5,85 20 42,1 24 14,1 31 10,2 15 34 15,1

Heparin 175

Fragmin 64,5 (Lavmolekylvægtig heparin) 20 3. Påvirkning på blødninostid

Et lille stykke hale med en længde på ca. 2 mm blev skåret af rotter. Tidsrummet indtil blødningen var stoppet blev bestemt.

Forsøgsforbindelsen i forskellige koncentrationer eller fysiologisk 25 saltopløsning (kontrol) blev givet til dyrene 5 min før blødnings-forsøget. Der blev afprøvet grupper med 12 dyr. Forlængelsen af blødningstiden i forhold til kontrollen blev udtrykt i procent.

Forlængelse af blødningstid 30 Forbindelse ifølge eksempel _{%}_

Dosis (mg/kg) 0,25 0,5 2 20 - 5,1 35,1 35 Heparin 55,4 120 4. Anti-inflammatorisk virkning

Ved inflammatoriske processer frigøres store mængder reaktive

DK 162393 B

16 oxygenforbindelser, heriblandt superoxidradikaler og hydroxyl radikaler, fra phagocyter (polymorfonukleare leucocyter og makrofager).

Disse radikaler er involveret i vævsødelæggelse. Forbindelser, som hæmmer radikal dannelsen i leucocyter, er derfor af stor terapeutisk 5 interesse med hensyn til styring af inflammationer (Flohé, L,

Giertz, H., Beckmann, R. (1985) i "The Pharmacology* of inflammation", 5. udg. (Bonta, I. et al., eds.) side 255-281, Elsevier, Amsterdam-New York).

10 Radikal dannelsen med leucocyter kan måles ved at bestemme den

Luminol-potentierede kemi luminescens i helblod (Peter, M, et al (1985), Chi. Forum 85 (Stelzner, F., eds), side 81-84, Springer Verlag, Berlin).

15 Forsøg med anti-inflammatorisk virkning

Forsøgsforblindelser blev opløst i PBS, og der blev fremstillet seriefortyndinger i PBS. €00 jal PBS, 100 β] Opløsning af forsøgsforbindelsen, 100 jal zymosansuspension (100 mg/rol) ©g 100 jal citrat-20 behandlet kaninblod blev afpipetteret i kuvetter, som var egnede til et 1.251 luminometer fra LKB. Målingen blev påbegyndt ved at ti 1 - _3 sætte 100 jal 10 M Lumi nol opløsning. Kemi luminescensen blev målt hver 5. min i løbet af 90 min for hver prøve. Der blev bestemt den maksimale kemilumini seens. En prøve uden forsøgsforbindelse blev 25 anvendt som referenceværdi. En prøve uden tilsætning af zymosan blev anvendt som en blindværdi. Der blev udført tre uafhængige bestemmelser pr. forbindelse. Beregning af restkemiluminiscencen udføres ifølge formlen: 30 CLmax (forbindelse) - CLmax (blind) ^ ^ CLmax <ref> - CLmax <blind>

Koncentrationer til 50% CL-hæmning (IC50-værdier) kan opnås fra en 35 semilogaritmisk afbildning af restkemiluminiscens mod logaritmen til koncentrationen.

5

DK 162393 B

17

Resultat: Hæmningen af Lumi nol-potentieret CL med forbindelser ifølge opfindelsen er anført i nedenstående tabel.

Forbindelse ifølge eksempel ICgQ (øg/ml) 23 225 25 155 10 20 540 24 220 31 170

Indomethacin 240 15 Den foreliggende opfindelse angår også farmaceutiske præparater, som indeholder én eller flere aktive forbindelser ifølge opfindelsen, eller som omfatter én eller flere aktive forbindelser ifølge opfindelsen sammen med ikke-toksiske, inerte, farmaceutisk egnede exci-pienser.

20

Ikke-toksiske, inerte, farmaceutiske egnede excipienser betyder faste, halvfaste eller væskeformige fortyndingsmidler, fyldstoffer eller formulationshjælpemidler af enhver type.

25 Foretrukne farmaceutiske præparater, som kan nævnes, er tabletter, drageer, kapsler, piller, granula, suppositorier, opløsninger, suspensioner og emulsioner, pastaer, salver, geler, cremer, lotioner, pulvere, spay og aerosoler. j 30 Tabletter, drageer, kapsler, piller og granula kan indeholde den aktive forbindelse (forbindelser) sammen med almindelige excipien- |

ser, såsom (a) fyldstoffer og strækmidler, f.eks. stivelser, lactose, saccharose, glucose, mannitol og siliumoxid, (b) bindemidler, f.eks. carboxylmethyl cel lul ose, alginater, gelatine, polyvinyIpyrro-35 lidon, (c) fugtgivende midler, f.eks. glycerol, (d) disintegrerings- I

midler, f.eks. agar-agar, calciumcarbonat og natriumbicarbonat, (e) I

opløsningsforsinkende midler, f.eks. paraffin, og (f) absorptions- ! accelererende midler, (g) befugtningsmidler, f.eks. cetyl al kohol, glycerolmonostearat, (h) adsorptionsmidler, f.eks. kaolin og

18 DK 162393 B

bentonit, og (i) smøremidler, f.eks. talkum, calciumstearat og magnesiumstearat samt faste polyethylenglycoler eller blandinger af forbindelserne nævnt under (a) til (i).

5 Tabletterne, drageerne, kapslerne, pillerne og granulaet kan tilvejebringes med almindelige belægninger om nødvendigt indeholdende opacificerende midler, f.eks. sukker, belægningslak, og kan også være sammensat således, at de om nødvendigt frigør den aktive forbindelse (forbindelser) med en forsinkelse, kun eller fortrinsvis 10 i en bestemt del af tarmkanalen, i hvilket tilfælde der f.eks. kan anvendes polymere forbindelser og vokser som omsluttende materialer.

Om nødvendigt kan den aktive forbindelse (forbindelser) være til stede i mikroindkapslet form sammen med ét eller flere af ovennævnte 15 excipienser.

Ud over den aktive forbindelse (forbindelser) kan suppositorier indeholde de almindelige vandopløselige eller vanduopløselige excipienser, f.eks. polyethylenglycoler, fedtstoffer, f.eks. kokos-20 nøddefedtstof og højere estere (f.eks. C14-alkohol med C16-fedtsyrer eller blandinger af disse forbindelser).

Salver, pastaer, cremer og geler kan indeholde de sædvanlige excipienser ud over den aktive forbindelse (forbindelser), f.eks.

25 animalsk og vegetabilske fedtstoffer og derivater heraf, vokser, paraffiner, emulgeringsmidler, stivelser, tragacanth, cellulosede-rivater, polyacrylater, polyethylenglycoler, silikoner, bentonit, talkum, siliciumoxid og zinkoxid eller blandinger af disse forbindelser.

30

Spray og pulvere kan ud over den aktive forbindelse (forbindelser) indeholde de sædvanlige excipienser, f.eks. lactose, talkum, siliciumoxid, aluminiumhydroxid, calciumsilicat og polyamidpulver eller blandinger af disse forbindelser. Spray kan eventuelt indeholde de 35 sædvanlige drivmidler, f.eks. chlorfluorcarbonhydrider.

Opløsninger og emulsioner kan-ud over den aktive forbi-ndelse-(forbindelser) indeholde de sædvanlige excipienser, såsom opløsningsmidler, sol ubi li seringsmi dl er og emulgeringsmidler, f.eks. vand,

ig DK 162393 B

ethyl al kohol, isopropyl al kohol, ethylcarbonat, ethylacetat, benzyl-alkohol, benzylbenzoat, propyl englycol, 1,3-butylenglycol, olier, navnlig bomuldsfrøolie, jordnøddeolie, cashewnøddeolie, majskimolie, olivenolie, castorolie og sesamolie, glycerol, glycerolformat, 5 polyethylenglycoler og fedtsyreestere af sorbitan eller blandinger af disse forbindelser.

Til parenteral indgivelse kan opløsningerne og emulsionerne også være til stede i steril og blodisotonform.

10

Suspensioner kan ud over den aktive forbindelse (forbindelser) indeholde de sædvanlige excipienser, såsom væskeformige fortyndingsmidler, f.eks. ethylalkohol, propylenglycol, suspensionsmidler, f.eks. ethoxylerede isostearylalkoholer, polyoxyethylensorbitol og 15 sorbitanestere, mi krokrystal 1 i nsk cellulose, al uminiummetahydroxid, bentonit, agar-agar eller tragacanth eller blandinger af disse forbindelser.

Formulationsformerne kan også omfatte farvestoffer, konserverings-20 midler og også duftforbedrende og smagsforbedrende tilsætningsmidler, f.eks. pebbermynteolie og eukalyptusolie samt sødemidler, f.eks. saccharin.

De terapeutisk aktive forbindelser bør fortrinsvis være til stede i 25 ovennævnte farmaceutiske præparater i koncentrationer på fra ca. 0,1 til 99,5 vægtprocent, fortrinsvis fra 0,5 til 95 vægtprocent af den samlede blanding.

Ovennævnte farmaceutiske præparater kan også indeholde yderligere 30 farmaceutisk aktive forbindelser ud over de aktive forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse.

Fremstilling af ovennævnte farmaceutiske præparater foregår på sædvanlig måde ved hjælp af kendte fremgangsmåder, f.eks. ved at 35 blande de aktive forbindelser med excipienserne.

Den foreliggende opfindelse angår også anvendelse af de aktive forbindelser ifølge opfindelsen samt farmaceutiske præparater, der indeholder én eller flere aktive forbindelser, inden for human og

DK 162393 B

20 veterinær medicin til profylakse, bedring og/eller helbredelse af ovennævnte sygdomme.

De aktive forbindelser eller farmaceutiske præparater kan admini-5 streres lokalt, oralt, parenteralt, rektalt og/eller som en aerosol, fortrinsvis parenteral.

Det har generelt vist sig fordelagtigt at indgive den aktive forbindelse (forbindelser) i samlede mængder på fra 0,1 til ca. 100, 10 fortrinsvis fra 0,5 til 50 mg/kg legemsvægt hver 24. time, hvis det er passende i form af flere individuelle doser, til opnåelse af de ønskede resultater.

Det kan imidlertid være nødvendigt at afvige fra de nævnte doser alt 15 afhængig af individet og dettes legemsvægt, naturen og sværheden af sygdommen, præparattypen og indgivelsesmåden for medikamentet samt også det tidsrum eller interval, hvormed indgivelsen foregår. Det kan i nogle tilfælde være tilstrækkeligt at behandle med mindre end ovennævnte mængde af aktiv forbindelse, hvorimod ovennævnte mængde 20 af aktiv forbindelse i andre tilfælde må overstiges.

Nedenstående eksempler illustrerer yderligere opfindelsen.

Udoanosforbindelse 1 25 N.N'-1.3-propandiv1bis-D-gluconamid 7,13 g D(+)-giucono-1,5-1 acton Blev opløst i 40 ml aminfrit dimethyl formamid, og der blev tilsat 1,67 ml 1,3-diaminopropan.

30 Blandingen blev derpå opvarmet til 60°C og omrørt i 5 timer. Det resulterende præcipitat blev frafiltreret, vasket med methanol og tørret. Der blev opnået 7,96 g af et hvidt pulver.

Smeltepunkt: 165-173eC

IR (KBr): v = 3540, 2960, 2915, 2890, 1660, 1537, 1100, 1040 cm’* 35 21

DK 16 2 3 9 3 B

^-NMR (D20): 5 1,76 (d, 2H, 6,5 Hz); 3,30 (t, 4H, 6,5 Hz); 3,4-4,0 (m, 8H); 4,09 (m, 2H); 4,30 (d, 2H, 3Hz); 4,70 (HgO, intern standard).

5 Udqangsforbindelse 2 N. N'-1.12-dodecandivlbis-D-qluconanrid 7,1 g D-glucono-l,5-lacton Blev suspenderet i 90 ml dimethylforma-10 mid, der blev tilsat 4,0 g 1,12-diaminododecan og blandingen blev omrørt i 5 timer ved 60°C. Efter afkøling blev blandingen omrørt i O, 3 1 methanol, og det faste stof blev indvundet og vasket med methanol. Det faste stof blev derpå suspenderet i 1 N HC1, omrørt i 1 time ved stuetemperatur, og det faste stof blev igen indvundet og 15 vasket med vand, acetone og endelig med diethylether. Der blev opnået 9,9 g af et hvidt pulver.

Smeltepunkt: 192-195°C

20 IR (KBr): v = 2920, 2850, 1630, 1550, 1085, 1027 cm"1 ^-NMR (DMSO-dg): δ 0,7-1,8 (m, 20H); 3,06 (m, 4H); 3,25-3,75 (m, 8H); 3,75-4,2 (m, 4H); 4,40 (S, 10H); 7,51 (t, 2H, 5,5 Hz); intern standard: tetramethylsilan.

25

Udqangsforbindelse 3 N.Ν'-1.3-propandi vi bi s-Γ4-O-fl-D-qalactopvranosvl-D-qluconamidl 30 395,4 g Calciumiactobionat blev opløst i 1,2 1 vand, og opløsningen blev behandlet i 1 time med 0,7 1 Lewatit S 100 (H+-form) ved en batch-proces. Blandingen blev sugefiltreret, og udbytningsmaterialet blev vasket med 2x11 vand. De kombinerede eluater blev koncentreret væsentlig under vakuum. Den glaslignende rest blev derpå 35 opløst i 800 ml ami nfrit di methyl formamid, der blev tilsat 800 ml n-hexan, og blandingen blev opvarmet til kogning i en vandseparator under kraftig omrøring. Efter at vandadskillelsen var fuldstændig blev n-hexanen afdestilleret, der blev tilsat 43 ml 1,3-diamino-propan og blandingen blev omrørt i 7 timer ved 63°C. Blandingen blev

DK 162393 B

22 derpå omrørt i 5 1 i sopropanol, og det faste stof blev i ndvundet og vasket med 1 1 i sopropanol. Efter tørring blev der opnået 350 g af et hvidt fast stof. For at opnå oprensning blev dette opløst i 2 1 vand. Opløsningen blev behandlet i 1 time med 100 ml Lewatit S 100 5 (H+-form), derpå med 100 ml Amberlyst A 21 (0H“-form). Efter frysetørring blev titel forbindel sen opnået i ren form.

Smeltepunkt: 125-132'C

10 IR (KBr): v = 2930, 1645, 1550, 1080 cm"1 ^-NMR (D20): δ 1,75 (dt, 2H, 6 Hz); 3,27 (t, 4H, 6 Hz); 3,4-4,1 (m, 20H); 4,15 (t, 2H, 3 Hz); 4,39 (d, 2H, 3 Hz); 4,54 (d, 2H, 7 Hz); 4,70 (H20, intern 15 standard) 13C-NMR (D20): 530,79; 38,99; 63,73; 64,65; 71,30; 73,12; 73,74; 74,14; 74,50; 75,06; 75,18; 77,99; 83,71; 106,10; 176,84; intern standard: CHgOH δ 51,56.

20

Udqanqsforbindelse 4 N,Ν'-1,6-hexandi vi bi s-Γ4-0-fl-D-qalactopyranosvl-D-qluconami dl 25 17,0 g Lactobion-1,5-1 acton blev suspenderet i 100 ml aminfrit dime thyl formamid, der blev tilsat 2,9 g 1,6-diaminohexan og blandingen blev omrørt i 6 timer ved 80eC. Efter afkøling blev blandingen filtreret, og filtratet blev rørt ud i 1 1 di ethyl ether. Det delvis olieagtige praecipitat blev opløst i 50 ml vand og behandlet med 80 30 ml ionbyttter (Merck 4765, H+-form). Blandingen* blev filtreret og efter frysetørring blev der opnået 19,5 g farveløst pulver, der sønderdelte fra 175°C under brunfarvning.

IR: v = 2930, 2860, 1645, 1548, 1080 cm-1' ^-NMR (D20): δ 1,0-1,8 (m, 8H); 3,25 (t, 4H, 5,5 Hz); 3,3-4,1 (m, 20H); 4,15 (t, 2H, 3 Hz); 4,38 (d, 2H, 3 35

DK 162393 B

23

Hz); 4,55 (d, 2H, 7 Hz); 4,70 (H20); intern standard: 3-trimethylsi Tyl propansulfonsyre-Na- salt 5 13C-NMR (D20): 8 28,19; 30,89; 41,63; 63,68; 64,64; 71,25; 73,06; 73,72; 74,12; 74,96; 75,18; 77,97; 83,61; 106,08; 176,42; intern standard: CHjOH 8 51,54.

Udaanosforbindelse 5 10 N,Ν'-1,12-Dodecandi vi bi s-Γ4-0-fl-D-qalactoovranosvl-D-aluconamidl 40,8 g Lactobion-l,5-1acton blev suspenderet i 150 ml aminfrit dimethyl formamid, der blev tilsat 12,0 g 1,12-diaminododecan og 15 blandingen blev omrørt i 6 timer ved 60*C. Blandingen blev dråbevis under omrøring sat til 1,5 1 isopropanol. Præcipitatet blev vasket med isopropanol og opløst i 250 ml vand. Opløsningen blev først behandlet med 20 ml syreionbytter (Lewatit S 100), dernæst med en basisk ionbytter (Merck 4767). Efter frysetørring blev der opnået 20 35,0 g af et farveløst pulver.

Smeltepunkt: 79-81°C

IR: v = 2920, 2850, 1645, 1550, 1080 cm'1 25 2H-NMR (D20): 8 0,8-1,9 (m, 20H); 3,24 (t, 4H, 5,5 Hz); 3,4-4,1 (m, 20H); 4,17 (t, 2H, 3 Hz); 4,38 (d, j 2H, 3 Hz); 4,55 (d, 2H, 7 Hz); 4,68 (HgO, intern standard) ! 30 13C-NMR (D20): 8 29,02; 31,36; 31,70; 41,86; 63,64; 64,69; 71,20; 73,08; 73,72; 74,17; 75,03; 75,20; 77,97; 83,72; 106,12; 176,24; intern standard: CH^OH 8 51,56.

35

DK 162393 B

24

Udgangsforbindelse 6 Ν,Ν' -1,9-Nonandi vi bi s- r4-0-fl-D-qal actoDvranosyl-D.-qluconam4dt 5 Fremstilling og oprensning var analog med den for udgangsforbindelse 5. Der blev opnået 15,0 g af titel forbindel sen ud fra 15,0 g lacto-bion-l,5-lacton og 3,47 g 1,9-diaminønonan.

IR: v = 2930, 2860, 1660, 1545, 1080 cm"1 10 !H-NMR (D20): 8 0,9-1,8 (m, 14H); 3,20 (t, 4H, 5,5 Hz); 3,3-4,1 (m, 20H); 4,15 (t, 2H, 3 Hz); 4,38 (d, 2H, 3 Hz); 4,55 (d, 7 Hz); 4,68 (H20, intern standard).

15

Udgangsforbindelse 7 N, Ν' -1,12-Dodecandi vi bi s-Γ4-0-fl-D-qlucopyranosvl-D-qluconamidl..

20 2,04 g Cellobion-l,5-lacton (H.W. Diehi et al., Carbohydr. Res. 38, 364 (1974)) blev omsat med 0,60 g 1,12-diaminododecan på tilsvarende måde, som ved fremstilling af udgangsforbindelse. S, og der blev opnået 0,60 g af titel forbi ndel sen.

25 IR: v = 2925, 2850, 1645, 1545, 1075, 1040 cm"1 ^-NMR (D20): 8 0,7-1,9 (m, 20H); 3,0-4,6 (m, 30H); 4,68 (H20 intern standard).

30 Udgangsforbindelse 8 N.Ν'-1.12-Dodecandi vi bi s-R-O-a-D-glucopyranosvl-D-qluconamidl 20,0 g Calciummal tobionat (W.N. Emmerling, B. Pfannemuller, Starch 35 33» 202, (1981) blev omsat med 1,12-diaminododecan på tilsvarende måde, som ved fremstilling af udgangsforbindelse 3, og der blev opnået 17,8 g af produktet.

DK 162393 B

25 IR: v = 2925, 2850, 1650, 1545, 1145, 1075, 1030 -1 cm ^-NMR (D20): 8 0,7-1,9 (m, 20H); 3,20 (t, 4H, 5,5 Hz); 5 3,3-4,4 (m, 24H); 5,15 (d, 2H, 3 Hz); 4,68 (HgO, intern standard)

Udqangsforbindelse 9 10 N.Ν' -1.12-Dodecandi vi bi s-Γ6-Q-tt-D-qlucopvranosvl-D-qluconamidl 3,96 g Kaliummel i bi onat (Sigma Chemie) blev omsat med 1,00 g 1,12- diaminododecan på tilsvarende måde, som ved fremstilling af udgangsforbindelse 3, og der blev opnået 3,3 g af titel forbindel sen.

15

Smeltepunkt: 114-123°C

IR (KBr): v = 2925, 1855, 1645, 1550, 1150, 1080, 1030, 980 cm"1 20 ^-NMR (D20): 8 0,8-1,8 (m, 20H); 3,20 (m, 4H); 3,4-4,2 (m, 22H); 4,29 (d, 2H, 3 Hz); 4,95 (s, 2H); 4,68 (HgO, intern standard).

25 Udqangsforbindelse 10 N.Ν'-1.3-Propandivi bi s-(6-0-Oi-D-qalactopvranosvl-D-qluconamidl

Fremstillingen var analog med fremstillingen af udgangsforbindelse 30 9. Der blev opnået 3,0 g af produktet ud fra 3,96 g kaliummel i bi onat og 0,37 g 1,3-diaminopropan.

Smeltepunkt: 90-96°C

35 IR (KBr): v = 2925, 1645, 1550, 1152, 1080, 1030, 975 cm"1 ^-NMR (D20): 8 1,76 (dt, 2H, 6,5 Hz); 3,30 (t, 4H, 6,5 Hz); 3,4-4,2 (m, 22H); 4,33 (d, 2H, 3 Hz); 4,96 (s, 2H); 4,70 (H20, intern standard)

DK 162393 B

26 13C-NMR (D20): 6 30,73; 38,96; 63,75; 70,94; 74,13; 71,90; 72,12; 73,06; 73,52; 74,52; 75,97; 100,99; 176,91 5 Udgangsforbindelse 11 N.N'-tt.tt'-m-Xvlendi vi bis-Γ4-0-fl-D-qalactopyranosvl-D-qluconamidl

Hvis 17,0 g lactobion-l,5-lacton og 3,3 ml 3-(aminomethyl)benzylamin 10 blev anvendt ved fremgangsmåden til fremstilling af udgangsforbindelse 5, blev der på tilsvarende måde opnået 12,2 g af titelforbindelsen som et farveløst pulver.

IR: v = 2920, 1665, 1545, 1080 cm"1 15 - ^-NMR (D20): S 3,3-4,6 (m, 30H); 4,68 (HgO); 7,24 (m, 4 H).

Udqanqsforbindelse 12 20 N.N/-4.4/-Dicvclohexvlmethandiv1bis-r4-0-g-D-qalactopyranosvl-D-qlu-conamidl

Fremstilling og oprensning ud fra 17,0 g lactobion-1,5-1 acton og 5,3 g 4,4'-diaminodicyclohexylmethan var analog med fremgangsmåden til 25 fremstilling af udgangsforbindelse 5.

Udbytte: 21,3 g IR: v = 2930, 2850, 1645, 1545, 1080 cm"1 30 ^-NMR (D20): δ 0,6-2,2 (m, 20H); 3,2-4,6 (m, 28H); 4,68 (H20).

Udqanqsforbindelse 13 35 N.N'-1.6-(3.4-Dithiahexandivi bi si-4-0-g-D-qalactopyranosvl-D-qlucon-amid 6,9 ml Tri ethylamin blev ved stuetemperatur sat til 17,0 g

27 DK 162393 B

lactobion-1,5-1 acton og 5,63 g cystamindi hydrochloric! i 50 ml aminfrit DMF, og blandingen blev efterfølgende omrørt i 6 timer ved 60’C. Den blev derpå præcipi teret under anvendelse af 500 ml ethanol, og praecipitatet blev yderligere behandlet som ved 5 fremstilling af udgangsforbindelse 5. Der blev opnået 13,2 g hvidt pulver.

IR: v = 2925, 1650, 1545, 1080 cm-1 10 ^-NMR (D20): 8 2,90 (t, 4H, 6 Hz); 3,2-4,1 (m, 24H); 4,16 (t, 2H, 3 Hz); 4,38 (d, 2H, 3 Hz); 4,55 (d, 2H, 7 Hz); 4,68 (H20, intern standard).

Udaanasforblndelse 14 15 N,N, -l,7-(4-Azaheptandiv1bis)-4-0-/?-D-qalactoDvranosvl-D-aluconamid 17,0' g Lactobion-1,5-1 acton blev suspenderet i 100 ml aminfrit dimethyl formamid, 2,28 ml bis-(3-aminopropyl)amin blev tilsat ved 20 stuetemperatur og blandingen blev omrørt i 10 timer. Den blev derpå omrørt i 4 timer ved 40°C og filtreret. Filtratet blev rørt ud i 900 ml acetone, og der blev opnået 23,0 g hvide krystaller efter acetonevask og tørring. Disse blev opløst i 80 ml vand og præci pi teret under anvendelse af 900 ml acetone. Det delvis olieagtige præcipitat 25 blev opløst i 150 ml vand, filtreret og frysetørret. Udbytte: 16,5 g· IR: v = 2920, 1650, 1545, 1080 cm"1 30 2H-NMR (D20): 8 1,82 (dt, 4H, 6 Hz); 2,91 (t, 4H, 6 Hz); 3,30 (t, 4H, 6 Hz); 3,45-4,6 (m, 26H); 4,68 (H20).

Udqanqsforbindelse 15 35 N,N'-1.12-(4,9-Di oxadodecandi vi bi si-4-0-/?-D-qalactopyranosvl-D-qlu- conamid

Fremstilling og oprensning var analog med fremgangsmåden til fremstilling af udgangsforbindelse 5. Der blev opnået 18,9 g af

DK 162393 B

28 titel forbindel sen ud fra 17,0 g lactobion-1,5-1 acton og 5,1 g 1,12-diamino-4,9-dioxadodecan.

^-NMR (D20): δ 1,4-2,0 (m, 8H); 3,1-4,1 (m, 32H); 4,6 (t, 2H, 5 3 Hz); 4,38 (d, 2H, 3 Hz); 4,55 (d, 2H, 7 Hz).

Udaanqsforbindelse 16 N.Ν'-Dimethyl-N.N'-1,2-ethandi vi bi s-(4-Q-fl-D-galactopyranosvl-D-glu-10 conamidl

Fremstilling og oprensning var analog med fremgangsmåden til fremstilling af udgangsforbindelse 5. Der blev opnået 3,0 g af titel forbindel sen ud fra 3,40 g lactobion-1,5-1 acton og 0,44 g 15 N,N'-dimethylethylendiamin.

Smeltepunkt: 125-133°C

IR (KBr): v = 2930, 1640, 1400, 1075 cm-1 20 ^-NMR (D20): δ 2,99, 3,16 (2s, 6H); 3,3-4,3 (m, 28H); 4,49 (d, 2H, 7 Hz); 4,68 (HgO, intern standard).

Udqangsforbindelse 17 25 N.N'-l.S-f1-EthoxvcarbonvlIpentandi vi bi s-f 4-0-fl-D-qalactopyranosvl-D-qluconamid 2,47 g Lysinethylesterdihydrochlorid blev suspenderet i 40 ml 30 aminfrit dimethyl formamid, der blev tilsat 3,0 ml triethylamin og blandingen blev omrørt i 15 min. Der blev derpå tilsat 6,8 g lactobion-1,5-lacton, og blandingen blev opvarmet til 60°C og omrørt i 1 dag. Den blev derpå filtreret, og filtratet blev rørt ud i 400 ml isopropanol. Præcipitatet blev indvundet, opløst i 60 ml dimethyl-35 formamid og igen præcipiteret under anvendelse af 300 ml isopropanol. Præcipitationen blev gentaget, og præcipitatet blev vasket med isopropanol og di ethyl ether, og der blev således opnået 4,05 g af et hvidt pulver.

29 DK 162393 B

Smeltepunkt: 106eC

IR: v = 2930, 1735, 1655, 1550, 1075 cm"1 5 ^-NMR (D20): 8 1,25 (t, 3H, 7 Hz); 1,2-2,2 (m, 6H); 3,25 (t, 2H, 5,5 Hz); 3,4-4,6 (m, 29H); 4,68 (H20, intern standard).

Eksempel 1 10

Decanatrium-N.N'-l,3-propandivlbis-(2.3.4.5.6-penta-0-su1fo-D-qlu- conamid) 4,30 g N,N'-l,3-Propandiylbis-D-gluconamid (udgangsforbindelse 1) 15 blev suspenderet i 50 ml tør di methyl formamid og opvarmet til 40°C, og dernæst blev 23,9 g pyridinsvovltrioxidkompleks tilsat under omrøring. Efter nogle få minutter udfældede produktet i form af pyridiniumsaltet som en olie. Efter 1 time fik blandingen lov til at afkøles, og supernatantopløsningen blev afdekanteret. Olien blev 20 opløst i 50 ml vand og bragt til pH = 10 under anvendelse af 6 N natriumhydroxidopløsning. Opløsningen blev bragt til 90 ml under anvendelse af vand og udrørt i 350 ml af en 1% natriumacetatopløsning. Præcipitatet blev vasket med methanol og tørret. Der blev opnået 18,6 g farveløst pulver. Dette blev opløst i 186 ml vand. 227 25 ml Methanol blev rørt ud i opløsningen, og den fik lov til at stå i 15 timer. Supernatanten blev afdekanteret fra den aflejrede olie, og sidstnævnte blev tritureret med methanol. Præcipitationen blev gentaget indtil titel forbi ndel sen var ren. ! 30 Sønderdeling fra 190eC under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2960, 1670, 1555, 1250, 1073, 1045, 1019, 770 cm"1 35 ^-NMR (D20): 8 1,87 (dt, 2H, 7 Hz); 3,36 (dt, 4H, 7 Hz); 3,9-4,6 (m, 4H); 4,8-5,4 (m, 8H); 4,68 (H20, intern standard) [a]2Q = +26,2 (c = 5 i HgO)

DK 162393 B

30

Grundstofanalyse:

Beregnet: N 22,10% S 1,93% 5 Fundet: N 22,29% $ 1,83% 13C-NMR (D20): S 29,97; 39,69; 69,06; 77,68; 78,10; 78,39; 79,65; 171,33; intern standard: CHgOH S 51,56.

10 Eksempel 2

Decanatrium-N.N'-1.12-dodecandivlbis-i2.3.4.5.6-penta-D-sulfo-D-alu- conamid) 15 5,60 g N,N'-l,12-Dodecandiylbis-D-gluconamid (udgangsforbindelse 2) blev omsat med 25,5 g pyridi nsvovl tri oxidkompleks på tilsvarende måde som i eksempel 1, og der blev opnået 20,5 råprodukt. Det rene produkt blev opnået ved gel kromatografi af en vandig opløsning på Sephadex G 25-søjle. Efter frysetørring blev der opnået et farveløst 20 pulver, som sønderdel te mellem 175 og 1898C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2930, 2855, 1665, 1555, 1250, 1072, 1042, 1010 cm-1 25 ^-NMR (D20): δ 1,0-1,9 (m, 20H); 3,32 (m, 4H); 4,2-4,6 (m, 4H); 4,9-5,3 (m, 8H); 4,68 (HgO, intern standard) 13C-NMR (D20): 8 28,72; 30,52; 31,02; 42,30; 69,22; 77,67; 30 78,34; 78,65; 79,91; 171,09; intern standard CHjOH δ 51,56.

Eksempel 3 35 Hexadecanatrium-N,N/-1.3-propandivlbis-r2.3.5.6-tetra-0-su1fo-4-0-(- 2,3,4.6-tetra-0-sulfo-fl-D-qalactopvranosvlI-D-oluconamidl 79,1 g Calciumlactobionat blev opløst i 240 ml vand, og opløsningen blev behandlet med 240 ml Lewatit S 100 (H+-form). Ionbytteren blev

31 DK 162393 B

vasket under anvendelse af 3 x 200 ml vand og de kombinerede opløsninger blev koncentreret så meget som muligt. Den glaslignende rest blev opløst i 700 ml aminfrit dimethyl formamid og opvarmet til kogepunktet med 600 ml n-hexan i en vandseparator. Efter at vandse-5 parationen var fuldstændig blev n-hexanen afdampet og der blev sat 7,7 g 1,3-diaminopropan i 50 ml dimethyl formamid til opløsningen ved stuetemperatur. Efter omrøring i 5 timer ved 60°C fik blandingen lov til at afkøles til ca. 30°C og blev fortyndet med 460 ml dimethyl-formamid, og 400 g pyri di nsvovl tri oxidkompleks blev hurtigt tilsat i 10 portioner under omrøring. Blandingen blev omrørt i 1 time ved mellem 40 og 45eC og fik lov til at afkøle. Supernatanten blev dekanteret fra den af lejrede olie og denne blev opløst i 500 ml vand, og opløsningen blev justeret til pH = 10 under anvendelse af 30% natriumhydroxidopløsning. Blandingen blev tilsat vand til et volumen 15 på 1,5 1 og udrørt i 4,5 1 af en 1% methanol i sk natriumacetatopløsning. Præcipitatet blev omrørt med 1 1 methanol, sugefiltreret og tørret. Der blev opnået 250 g gulligt pulver. Dette blev opløst i 2 1 vand, 250 ml 30% hydrogenperoxid blev tilsat og blandingen blev omrørt i 1 time ved 45°C. Efter afkøling blev den neutraliseret og 20 tilsat vand indtil 2,5 1. Opløsningen blev udrørt i 3,06 1 methanol og fik lov til at stå i 15 timer. Supernatanten blev dekanteret fra den aflejrede olie, og sidstnævnte blev tritureret med methanol.

Efter tørring blev der opnået 188,5 farveløst pulver.

Præcipitationsproceduren blev gentaget fire gange, og der blev 25 tilsidst opnået ca. 50 g af den rene titelforbindelse som et farveløst pulver, der blev brunt fra 172°C under sønderdeling og som ikke smeltede under 250eC.

IR (KBr): v = 2965, 1665, 1552, 1250, 1055, 1020, 927, 820 30 cm"1 ^-NMR (D20): S 1,82 (t, 2H, 6,5 Hz); 3,35 (t, 4H, 6,5 Hz); 3,9-4,4 (m, 8H); 4,4-4,8 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,8-5,4 (m, 10H) 13C-NMR (D20): δ 30,31; 39,77; 68,36; 68,92; 74,22; 77,49; 77,79; 78,39; 78,76; 80,15; 103,55; 171,76; intern standard: CHgOH δ 51,56 35 32

DK 162393 B

[<*]% = +13,3° (c = 5 i H20)

Grundstofanalyse: 5 Beregnet: N: 1,17% S: 21,49%

Fundet: N: 1,16% S: 21,61%

Eksempel 4 10

Pentadecanatrium-pentadeca-O-sulfo-N.Ν'-1.3-oropandi vi bi s(4-Ο-θ-Ρ-qalactopyranosvl-D-aluconamid) 3,77 g NjN'-ljS-Propandiylbi s(4-0-^-D-galactopyranosyl-D-gluconamid) 15 (udgangsforbindelse 3) blev opløst i 60 ml tør di methyl formamid, og 13,5 g pyridinsvovltrioxidkompleks blev tilsat i portioner ved 40°C under omrøring. Efter 1 time blev blandingen behandlet som i eksempel 1, og der blev opnået 10,3 g gulligt sulfatholdigt råprodukt.

Dette blev opløst i 90 ml vand, 10 ml 30% hydrogenperoxid blev 20 tilsat og blandingen blev omrørt i 1 time ved 45°C. Efter afkøling blev der irørt 230 ml methanol, og blandingen fik lov til at stå i 15 timer. Supernatanten blev dekanteret fra den aflejrede olie, og sidstnævnté blev tritureret under anvendelse af methanol, og der blev opnået 6,72 g sulfatfrit produkt (med et svovlindhold på 25 20,6%). Dette blev opløst i 67 ml vand, 82 ml methanol blev irørt og blandingen fik lov til at stå 15 timer. Supernatanten blev dekanteret fra den bundfældende olie, og yderligere 74 ml methanol blev irørt. Efter 15 timer blev olien isoleret, og der blev udført fraktionel krystallisation flere gange som beskrevet ovenfor, indtil 30 titel forbindel sen var ren. Der blev opnået 0,53 g farveløst pulver, som sønderdel te fra 180°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2960, 1660, 1550, 1250, 1055, 1020, 930, 820 cm"* *H-NMR (D20): δ 1,87 (t, 2H, 6 Hz); 3,42 (t, 4H, 6 Hz); 3,9-4,5 (m, 8H); 4,5-4,85 (m+-H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,85-5,3 (m, 10H) 35

DK 162393 B

33 13C-NMR (D20): 8 30,53; 39,79; 68,46; 69,11; 72,28; 74,36; 74,56; 77,43; 77,88; 78,14; 78,49; 79,03; 79,61; 79,84; 80,43; 103,45; 171,82; 172,61; intern standard: CH30H δ 51,56 5

Grundstofanalyse:

Beregnet: N 1,23% S 21,04% 10 Fundet: N 1,21% S 20,91%

Eksempel 5

Hexadecamorpho1inium-N.N/-1.3-propandiv1bis-r2,3.5.6-tetra-0-su1fo-15 4-0-f2,3.4.6-tetra-Q“Sulfo-8-D-qalactoDvranosvll-D-qluconamidl

En opløsning af 1,76 g af natriumsaltet fra eksempel 3 blev behandlet i 15 min med 16 ml Lewatit S-100 (H+-form), ionbytteren blev frafiltreret, og der blev sat 1,03 g morpholin til filtratet. Efter 20 frysetørring blev der opnået 2,40 g gulligt pulver. Sønderdeling fra 120°C, og sortfarvning ved 210eC.

IB (KBr): v = 2950, 2780, 1665, 1563, 1450, 1426, 1250, 1097, 1015, 925, 893, 868, 810 cm'1 25 !H-NMR (D20): 6 1,82 (dt, 2H, 6,5 Hz); 3,15 (m, 64H); 3,35 (m, 4H); 3,90 (m, 64H); 4,0-4,4 (m, 8H); 4,4-4,8 (m, +H20-signal ved 4,70 som intern standard); 4,8-5,4 (m, 10H).

30

Eksempel 6

Hexadecanatrium-N,N/-l,6-hexandivlbisr2.3.5.6-tetra-0-sulfo-4-0-f2.- 3.4.6-tetra-0-sulfo-#-D-qa1actopvranosv1l-D-qluconamidl 35 16,3 g N,N'-l,6-Hexandiylbis(4-0-/J-D-galactopyranosyl-D-gluconamid) (udgangsforbindelse 4) blev omsat med 75,0 g pyridinsvovltrioxidkom-pleks analogt med eksempel 1. Efter første præcipitation blev der opnået 56,9 g af et gulligt pulver, der blev oprenset som i eksempel

DK 162393 B

34 20. Ca. 15 g af den rene titel forbi ndel se blev tilsidst opnået i form af et farveløst pulver, der sintrerede fra 120T.

Sønderdeling fra 170°C under brunfarvning.

5 IR (KBr): v = 2930, 2860, 1655, 1550, 1250, 1055, 1020, 928, 810 cm"1 *H-NMR (D20): 8 1,1-1,9 (m, 8H); 3,37 (m, 4H); 3,9-4,5 (m, 10 8H); 4,5-4,85 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,85-5,3 (m, 10H) 13C-NMR (D20): 8 28,42; 30,74; 42,17; 68,56; 69,01; 74,39; 77,20; 77,80; 78,37; 78,94; 80,47; 103,21; 15 171,27; intern standard: CHgOH s 51,56 [a]2o - +9,9 (c - 5 i H20).

Eksempel 7 20

Hexadecanatrium-N.N/-1.9-nonandivlbisr2.3.5.6-tetra-Q-sulfo-4-0-(2,- 3.4.6-tetra-O-sulfo-fl-D-oalactopyranosvl)-D-oluconami dl

Fremstilling og oprensning svarede til eksempel 6. Der blev opnået 25 45,0 g råprodukt ud fra 15,0 g N,N'-l,9-nonandiylbis(4-0-/J-D-galac- topyranosyl-D-gluconamid) (udgangsforbindelse 6) og 63,0 g pyridin-svovltrioxidkompleks. Efter oprensning: 10,5 g farveløst pulver.

Sønderdeling mellem 192-210°C under brunfarvning.

30 IR (KBr): v = 2935, 2860, 1665, 1555, 1250, 1057, 1020, 925, 815 cm'1 ^-NMR (D20): 8 0,9-1,9 (m, 14H); 3,29 (t, 4H, 6,5 Hz); 35 3,8-4,45 (m, 8H); 4,45-4,8 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,8-5,4 (m, 10H) 13C-NMR (D20): 8 28,77; 30,83; 31,09; 31,32; 42,19; 68,69; 68,99; 74,46; 77,12; 77,79; 78,33; 78,93; 80,51;

35 DK 162393 B

103,11; 121,21; intern standard: CH30H S 51,56

Eksempel 8 5 Hexadecanatrium-N.N/-1.12-dodecandivlbisr2.3.5.6-tetra-0-su1fo-4-0-f2.3.4.6-tetra-0-su1fo-fl-D-qalactODvranosv1l-D-aluconamidl

Fremstilling og oprensning var analog med eksempel 6. Der blev opnået 13,30 g råprodukt ud fra 4,23 g N,N'-l,12-dodecandiylbis(4-10 0-j8-D-galactopyranosyl-D-gluconamid) (udgangsforbindelse 5) og 19,1 g pyri ndi nsvovl trioxidkompleks. Efter oprensning: blev der opnået 3,5 g ren titel forbi ndel se som farveløst pulver.

Sønderdeling mellem 188-198eC under brunfarvning.

15 IR (KBr): v = 2940, 2880, 1665, 1555, 1250, 1055, 1020, 930, 820 cm"1 ^-NMR (D20): S 0,9-1,9 (m, 20H); 3,35 (t, 4H, 6,5 Hz); 20 3,9-4,5 (m, 8H); 4,5-4,8 (m, +H20-signal ved 4,70 som intern standard); 4,8-5,4 (m, 10H) 13C-NMR (D20): S 28,74; 30,80; 31,09; 31,44; 42,18; 68,76; 68,96; 74,50; 77,08; 77,80; 78,29; 78,94; 80,51; 25 103,07; 171,19; intern standard: CH^OH δ 51,56.

Eksempel 9

Hexadecanatrium-N.N'-l.12-dodecandivi bisΓ2,3.5.6-tetra-O-sulfo-4-0-30 (2.3.4.6-tetra-0-sulfo-g-D-olucopvranosv11-D-oluconamid 0,68 g Råprodukt eller 0,10 g rent produkt blev opnået ud fra 0,34 g Ν,Ν'-1,12-dodecandiylbi s(4-0-/J-D-glucopyranosyl-D-gluconamid) (udgangsforbindelse 7) og 1,12 g pyridinsvovltrioxidkompleks på 35 tilsvarende måde som i eksempel 6. Sønderdeling 148-159eC under brunfarvning.

IR (KBr): v =2930, 2855, 1670, 1560, 1250, 1070, 995, 935, 800 cm’1 36

DK 162395 B

1H-NMR (D20): 8 0,8-1,8 (m, 20H); 3,30 (m, 4H); 3,7-4,8 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,8-5,3 (m, 10H) 5 13C-NMR (D20): 8 28,92; 30,95; 31,32; 31,64; 42,34; 69,20; 70,12; 75,57; 77,44,; 77,67; 77,85; 79,33; 79,41; 79,97; 81,08; 102,53; 171,27; intern standard: CH^OH 8 51,56.

10 Eksempel 10

Hexadecanatri um-N.N'-1,12-dodecandivi bi s Γ2.3.5.6-tetra-0-su!fo-4-0-(2.3.4.6-tetra-Q-sulfo-ft-D-qlucopvranosvll-D-aluconamidl 15 47,5 g Råprodukt eller 3,0 g rent produkt blev opnået ud fra 12,8 g Ν,Ν'-1,12-dodecandiylbi s(4-0-a-D-glucopyranosyl-D-gluconamid) (udgangsforbindelse 8) og 64,6 g pyrindinsvovl tri oxidkompleks på tilsvarende måde, som i eksempel 6. Sønderdeling fra 175 til 189°C under brunfarvning.

20 IR (KBr): v = 2930, 2860, 1660, 1560, 1250, 1000, 943, 805 -i cm ^-NMR (D20): 8 1,0-1,9 (m, 20H); 3,27 (m, 4H); 4,0-4,82 (m, 25 +signal for H20 ved 4,68 som intern standard); 4,82-5,25 (m, 10H); 5,52 (d, 2H, 3 Hz) 13C-NMR (D20): 8 28,84; 30,69; 31,15; 31,47; 42,41; 68,51; 69,29; 71,95; 76,14; 76,82; 77,91; 78,30; 30 78,44,; 79,98; 98,93; 171,27.

Eksempel 11

Hexadecanatrium-N.Ν'-1.12-dodecandivi bisT2.3.4.5-tetra-0-sulfo-6-Q-35 (2.3.4.6-tetra-O-sulfo-a-D-aalactoovranosvl1-D-αΙuconamid! 9,7 g Råprodukt eller 3,4 g rent produkt, som sintrer ved 57°C, blev opnået på tilsvarende måde, som i eksempel 6, ud fra 3,30 g N,N'- 1,12-dodecandiyl bi s (6-0-0!-D-gal actopyranosyl -D-gl uconamid)

37 DK 162393 B

(udgangsforbindelse 9) og 14,9 g pyridinsvovltrioxidkompleks.

Sønderdeling fra 182°C under brunfarvning.

5 IR (KBr): v = 2930, 2855, 1650, 1555, 1250, 1050, 1027, 830 cm’1 ^-NMR (D20): δ 1,0-1,9 (m, 20H); 3,25 (m, 4H); 3,9-4,4 (m, 8H); 4,4-4,8 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern 10 standard); 4,8-5,25 (m, 10H); 5,38 (d, 2H, 3 Hz) 13C-NMR (D20): δ 28,72; 30,58; 31,03; 31,34; 42,30; 69,14; 69,77; 70,66; 74,51; 74,92; 77,91; 78,21; 78,49; 78,93; 80,75; 99,12; 171,26; intern standard; 15 CH3OH δ 51,56.

Eksempel 12

Hexadecanatrium-N.N/-1.3-propandivlbisr2.3.4.5-tetra-0-sulfo-6-0-20 (2.3.4.6-tetra-O-sulfo-tt-D-qalactoovranosvl)-D-gluconamidl 0,96 g Råprodukt eller 0,50 rent produkt blev opnået ud fra 0,34 g N,N'-1,3-propandiylbi s(6-0-a-D-galactopyranosyl-D-gluconami d) (udgangsforbindelse 10) og 2,0 g pyridinsvovltrioxidkompleks på 25 tilsvarende måde, som i eksempel 6.

Sønderdeling fra 168°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 1640, 1550, 1250, 1050, 1025, 830 cm'1 30 ^-NMR (D20): δ 1,85 (t, 2H, 6,5 Hz); 3,35 (t, 4H, 6,5 Hz); 3,9-4,4 (m, 8H); 4,4-4,8 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,8-5,25 (m, 10H); 5,36 (d, 2H, 3 Hz) 13C-NMR (D20): δ 30,13; 39,84; 69,17; 69,86; 70,74; 74,53; 74,97; 78,00; 78,17; 78,37; 79,00; 80,81; 99,18; 171,70; intern standard: CH^OH δ 51,57.

35 38

DK 162393 B

Eksempel 13

Hexadecanatrium-N.NA-tt.o;/-m-xv1endivlbisr2.3.5.6-tetra-0-su1fo-4-0“ f 2,3.4.6-tetra-O-sulfo-fl-D-galactoovranosvl)-D-gluconamidl 5 28,0 g Råprodukt eller 5,3 g rent produkt blev opnået ud fra 12,0 g N,N'-α,α'-m-xylendiylbi s(4-0-jS-D-galactopyranosyl-D-gluconami d) (udgangsforbindelse 11) og 58,8 g pyridinsvovltrioxidkompleks på tilsvarende måde, som i eksempel 6. Sønderdeling fra 157°C under 10 brunfarvning.

IR (KBr): v = 2960, 1660, 1550, 1250, 1055, 1020, 930, 815 •i cm 15 *H-NMR (D20): δ 3,9-4,85 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,85-5,4 (m, 10H); 7,38 (s, 4H) 13C-NMR (D£0): δ 45,51; 68,63; 69,15; 74,42; 77,24; 77,67; 77,91; 78,49; 79,08; 80,70; 103,29; 128,15; 20 128,86; 131,64; 140,80; 171,88; intern standard: CH30H δ 51,56

Eksempel 14 25 Hexadecanatri um-N.Ν'-4.4'-dievelohexvlmethandi vi bi s-Γ2.3.5.6-tetra- O-sulfo-4-Q-(2.3.4.6-tetra-Q-sulfo-fl-D-qalactopyranosvl1-D-aluconami dl 70.7 g Råprodukt eller 15,2 g rent produkt, der sintrerede fra 30 120eC, blev opnået på tilsvarende måde, som i eksempel 6, ud fra 25.7 g N,Ν' -4,4' -dicycl ohexylmethandiylbi s (4-0-y3-D-gal actopyranosyl-D-gl uconamid) (udgangsforbindelse 12) og 114,7 g pyridinsvovltrioxidkompleks.

35 Sønderdeling fra 180°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2930, 2860, 1660, 1550, 1250, 1055, 1020, 928, 815 cm"1 39

DK 162393 B

^-NMR (D20): 8 0,6-2,4 (m, 20H); 3,65 (m, 2H); 3,9-4,5 (m, 8H); 4,5-4,85 (m, +H20-signal ved 4,68 som intern standard); 4,85-4,4 (tn, 10H) 5 13C-NMR (D20): 8 30,18; 30,36; 30,75; 34,09; 44,40; 46,20; 49,45; 52,33; 68,27; 68,75; 74,35; 77,80; 78,41; 78,68; 79,49; 104,09; 170,61; intern standard: CH3OH 8 51,56 10 [tt]°0 = +10,0 (c = 5 i H20)

Eksempel 15

Hexadecanatrium-N,N/-1.6-f3.4-dithiahexandiv1bisl-r2<3,5«6-tetra-0-15 sulfo-4-Q-(2.3.4.6-tetra-O-sulfo-fl-D-aalactopyranosvl1-D-aluconamidl 38,0 g Råprodukt og 8,5 g rent produkt blev opnået ud fra 11,2 g N,M'-l,6-(3,4-dithiahexandiylbis)4-0-;3-D-galactopyranosyl-D-glucona-mid (udgangsforbindelse 13) og 53,4 g pyridinsvovltrioxidkompleks på 20 tilsvarende måde, som i eksempel 6.

Sønderdeling fra 163°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2965, 1665, 1550, 1250, 1055, 1015, 930, 810 25 cm"* *H-NMR (D20): 8 2,96 (t, 4H, 6,5 Hz); 3,69 (m, 4H); 4,0-4,47 (m, 8H); 4,45-4,8 (m + H20 signal ved 4,68 som int. std.); 4,8-5,3 (m, 10H) 30 13C-NMR (D20): 8 38,72; 41,06; 68,68; 69,05; 74,48; 77,40; 77,87; 78,46; 80,46; 103,48; 171,86; int. std.

CH30H 8 51,56 35 5 40

DK 162393 B

Eksempel 16

Hexadecanatri um-N,N'-1.7-(4-azaheptandivi bi s 1 - Γ2.3 ♦ 5.6-tetra-0-su1fo-4-0-(2,3.4,6-tetra-0-sulfo-g-D-qalactoovranosvl1-D-aluconamid! 15,4 g Råprodukt og 2,2 g rent produkt blev opnået ud fra 11,0 g Ν,Ν'-1,7-(4-azaheptandiylbis)-4-0-j3-D-galactopyranosyl-D-gluconamid (udgangsforbindelse 14) og 50,0 g pyridinsvovltrioxidkompleks på tilsvarende måde, som i eksempel 6.

10 Sønderdeling fra 165°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2960, 2925, 2855, 1650, 1550, 1250, 1055, 1020, 927, 820 cm-1 15 ^-NMR (D20): δ 2,98 (m, 2H); 3,17 (t, 4H, 7 Hz); 3,44 (t, 4H, 6Hz); 3,9-4,4 (m, 8H); 4,4-4,85 (m + HgO-signal som int. std. ved 4,68); 4,85-5,3 (m, 10H) 20 13C-NMR (D20): 8 28,11; 39,08; 48,12; 68,65; 69,24; 74,45; 76,94; 77,93; 78,46; 79,09; 80,71; 103,13; 172,06 25 Eksempel 17

Hexadecanatri um-N.N'-1♦12-(4.9-di oxadodecandi vi bi s1-Γ2.3.5♦6-te-tra-0-sulfo-4-O-(2.3♦4.6-tetra-0-sulfo-fl-D-oalactopvranosvl)-D-olu- conamidl 30 37,1 g Råprodukt og 9,3 g rent produkt, der sintrede fra 120°C, blev opnået ud fra 18,2 g N,N/-l,12-(4,9-dioxadodecandiylbis)-4-0-j3-D-galactopyranosyl-D-gluconamid (udgangsforbindelse 15) og 59,0 g pyridinsvovl trioxidkompleks på tilsvarende måde, som i eksempel 6.

35 Sønderdeling fra 170°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2960, 2880, 1665, 1555, 1250, 1055, 1022, 928, 815 cm-1 41

DK 162393 B

*H-NMR (D20): & 1,64 (m, 4H); 1,88 (t, 4H, 6,5 Hz); 3,0-3,9 (m, 12H); 3,9-4,45 (m, 8H); 4,45-4,8 (m + H20 signal som int. std. ved 4,68); 4,8-5,3 (m, 10H) 5 13C-NMR (D20): δ 27,82; 30,78; 39,02; 68,64; 69,01; 70,54; 72,96; 74,44; 77,02; 77,79; 78,33; 78,94; 80,52; 103,10; 171,45; int. std.: CH^OH S 51,56 [»]“ = +9,0 (c - 5 i H20) 10

Eksempel 18

Hexadecanatrium-N.N/-1.2-ethandivlbis-r2,3.5.6-tetra-0-sulfo-4-0-(2.3.4.6-tetra-0-sulfo-6-D-galactopvranosvl1-D-gluconamid 15 8,2 g Råprodukt og 1,2 g rent produkt blev opnået ud fra 2,50 g N,N'-dimethyl-Ν,Ν'-1,2-ethandiyl-bi s(4-0-/f-D-galactopyranosyl-D-glu-conamid) (udgangsforbindelse 16) og 12,4 g pyridi nsvovl tri oxidkompleks på tilsvarende måde, som i eksempel 6.

20 Sønderdeling fra 188 til 200°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2970, 1650, 1250, 1015, 930, 815 cm'1 25 ^-NMR (D20): δ 3,0-4,0 (m med s vd 3,35; 10H); 4,0-4,7 (m, 14H; 4,70 (HgO, int. std.); 4,9-5,4 (m, 10H); 5,54 (d, 2H, 4 Hz) 13C-NMR (D20): δ 38,96; 48,25; 68,36; 69,25; 74,17; 75,11; 30 77,26; 77,73; 78,00;78,45; 78,76; 79,80; 103,35; 171,25; int. std.: CH3OH δ 51,56 35

Eksempel 19 42

DK 162393 B

Hexadecanatri um-N. N' -1.5- (1 -ethoxvcarbonvl 1 pentandi vlbisl-r2.3.5.6-tetra-O-sulfo-4-Q-(2.3.4.6-tetra-Q-sulfo-fl-D-qalactoDvranosvl)-D-5 qluconamid 8,7 g Råprodukt og 1,2 g rent produkt, der sintrede fra 60°C, blev opnået ud fra 3,6 g N,N'-l,5-(l-ethoxycarbonyl)pentandiyl-bis(4-0-/i-D-galactopyranosyl-D-gluconamid) (udgangsforbindelse 17) og 15,8 g 10 pyridinsvovl tri oxidkompleks på tilsvarende måde, som i eksempel 6.

Sønderdeling fra 161°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 1730, 1650, 1550, 1250, 1055, 1020, 930, 810 15 cm"1 ^-NMR (D20): S 1,0-2,2 (m, 9H, med t ved 1,31, 7 Hz); 3,30 (m, 2H), 3,9-4,8 (m med H20-signal ved 4,68 som int. std.); 4,8-5,3 (m, 10H); 20 13C-NMR (D20): S 15,94; 29,68; 30,54; 33,17; 41,87; 55,93; 65,19; 68,23; 68,53; 69,04; 74,36; 77,33; 79,81; 78,45; 78,80; 79,61; 80,47; 103,36; 103,99; 171,39; 171,65; 176,12 25

Udqanqsforbindelse 18 N.N'-l,3-ProDandivlbis-D-qu1onamid 30 3,56 g D-gulon-γ-Ιacton og 0,84 ml 1,3-diaminopropan blev opløst i 40 ml dimethyl formamid, og blandingen blev omrørt i seks timer ved 60°C. Blandingen blev dernæst udrørt i 200 ml isopropanol og præci-pitatet blev vasket med isopropanol og diethylether. Det faste stof blev opløst i 20 ml dimethyl formamid og præcipiteret igen under 35 anvendelse af 200 ml isopropanol. Præcipitatet blev opløst i vand og frysetørret. Der blev opnået 2,2 g farveløst pulver.

Smeltepunkt: 49-54°C under sintring, 168°C under sønderdeling

DK 162393 B

43 IR (KBr): v = 2930, 2890, 1645, 1545, 1440, 1080 cm'1 ^-NMR (D20): 8 1,74 (dt, 2H, 6,5 Hz); 3,27 (t, 4H, 6,5 Hz); 5 3,45-4,05 (m, 10H); 4,23 (d, 2H, 6 Hz); 4,68 (H20, int. std.) 13C-NMR (D20): 8 30,65; 39,02; 65,13; 72,64; 74,69; 75,00; 75,12; 176,78; int. std. CH3OH 8 51,56 10

Udoanosforbindelse 19.

N.N'-1.2-ProDanediv1bis-D-ga1actonamid 15 4,1 g Af titelforbindelsen blev opnået som et farveløst pulver på tilsvarende måde som udgangsforbindelse 18 ud fra 7,12 g D-galacton-•y-1 acton og 1,48 g 1,2-diaminopropan.

Smeltepunkt: 183-193°C under sønderdeling og brunfarvning.

20 IR (KBr): v = 2940, 1656, 1552, 1109, 1055, 1044, 1028, 865 cm"1 ^-NMR (Dz0): 8 1,18 (d, 3H, 6 Hz); 3,1-4,6 (m, 15H); 4,68 25 (H20, int. std.) 13C-NMR (D20): 8 19,64; 19,77; 46,16; 47,87; 48,10; 65,90; 71,93; 72,64; 73,49; 177,75; 178,42; 178,54 30 Udqanqsforbindelse 20 N,N'-1.4-Butandivlbis-L-mannonamid 2,4 g Af titel forbi ndel sen blev opnået som farveløst pulver på 35 tilsvarende måde, som i eksempel 1, ud fra 3,56 g L-mannon-γ-Ιacton og 0,90 g putrescin. Sønderdeling fra 181-188°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2955, 2925, 2855, 1643, 1555, 1231, 1098, 1043, 1031, 880, 740, 640 cm"1 5

DK 162393 B

44 ^-NMR (D20): S 1,58 (m, 4H); 3,30 (m, 4H); 3,75 (in, 8H); 4,02 (d, 2H 7 Hz); 4,26 (d, 2H, 7 Hz); 4,68 (H20 int. std.) 13C-NMR (D20): δ 28,42; 41,38; 65,67; 72,58; 72,76; 73,43; 75,19; 177,09

Udaanosforbindelse 21 10 N.N'-Dilactobionovlhydrazin 6,1 g Råprodukt blev opnået på tilsvarende måde, som udgangsforbindelse 18, ud fra 6,8 g lactobion-l,5-lacton og 0,5 ml hydrazinhy-15 drat. Søjlekromatografi over Fractogel TSK HW 40S gav det rene produkt som et farveløst pulver efter frysetørring.

Eksempel 20 20 Decanatrium-N.N,-1.3-proDandivlbis(2.3.4.5.6-penta-0-su1fo-D-gulon-amidl 9,8 g Råprodukt eller 6,4 g rent produkt blev opnået som et farveløst pulver på tilsvarende måde, som i eksempel 1, ud fra 2,2 g 25 N,N'-l,3-propandiylbis-D-gulonamid (udgangsforbindelse 18) og 12,3 g pyri di nsvovl tri oxi dkompleks.

Sønderdeling fra 185°C under brunfarvning.

30 IR (KBr): v = 2960, 1675, 1555, 1250, 1070, 1010, 925, 805 -1 cm ^-NMR (D20): δ 1,85 (m, 2H); 3,34 (m, 4H); 4,52 (d, 4H, 3,5

Hz); 5,07 (m, 6H); 5,34 (d, 2H, 3,5 Hz); 4,68 35 (H20, int. std.) 13C-NMR (D20): δ 30,05; 39,62; 68,78; 76;28; 76,41; 77,78; 80,14; 171,15; int. std. CH3OH δ 51,55 45

DK 162393 B

Eksempel 21 5

Decanatrium-N,N'-1.2-propandiv1bis(2,3,4,5,6-penta-0-sulfo-D-qa1act- onamid) 13,0 g Råprodukt eller 9,8 g rent produkt blev opnået som et farveløst pulver på tilsvarende måde, som i eksempel 1, ud fra 3,3 g N,N'-l,2-propandiylbis-D-galactonamid (udgangsforbindelse 19) og 19,5 g pyridinsvovltrioxidkompleks.

10 Sønderdeling fra 191°C under brunfarvning.

IR (KBr): v = 2970, 1665, 1550, 1250, 1065, 1040, 1007, 900 cm"* 15 *H-NMR (D20): 8 1,26 (d, 3H, 6,5 Hz); 2,9-4,3 (m, 3H); 4,3-4,6 (m, 4H); 4,68 (H20, int. std.); 4,8-5,3 (m, 8H) 13C-NMR (D20): 8 19,20; 45,94; 46,15; 47,61; 69,07; 78,42; 20 78,86; 79,90, 170,84; 171,03; 191,93 int. std.

CH3OH 8 51,57

Eksempel 22 25 Decanatrium-N.N'1.4-butandivlbis(2.3.4.5.6-Denta-Q-sulfo-D-mannona-midl . _ 10r5 g.Råprodukt eller 7,2 g rent produkt blev opnået som et farve løst pulver på tilsvarende måde, som i eksempel 1, ud fra 2,5 g 30 N,N'-l,4-butandiylbis-L-mannonamid (udgangsforbindelse 20) og 14,1 g pyridinsvovltrioxidkompleks.

Sønderdeling fra 180°C under brunfarvning 35 IR (KBr): v = 2960, 2930, 2850, 1670, 1555, 1250, 1075, 1010, 925 cm"1 1H-NMR (D20): 8 1,65 (m, 4H); 3,31 (m, 4H); 4,43 (m, 4H); 4,8-5,08 (m, 4H); 5,15 (m, 4H); 4,68 (H20, int.

DK 162393B

46 std.) 13C-NMR (D20): 5 27,98; 41,62; 69,15; 78,81; 79,36; 79,75; 170,93; int. std. CH3OH S 51,55 5

Eksempel 23

Hexadecanatrium-N.N'-bisT2,3,5.6-tetra-0-su1fo-4-0-(2.3.4.6-tetra-O-sulfo-fl-D-qalctopvranosvl)-qluconovllhydrazin 10 17,5 g Råprodukt eller 7,3 g rent produkt blev opnået på tilsvarende måde, som i eksempel 1, ud fra 6,0 g N,N'-dilactobionoylhydrazin (udgangsforbindelse 21) og 33,7 g pyridinsvovl trioxidkompleks.

15 Eksempel 24 5,000 kg Hexadecanatrium-N,N,-l,3-propandiylbis[2,3,5,6-tetra- 0-sulfo-4-0-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-Ø-D-galactopyranosyl)-D-glucon-amid] blev som tør forbindelse opløst under omrøring i 40 1 injek-20 ti onsvand. Efter justering af opløsningens pH til 7,5 med fortyndet natriumhydroxidopløsning blev den tilsat injektionsvand indtil 50,00 1 og filtreret gennem et membranfilter med en porestørrelse på 0,2 Mm. Opløsningen blev affiltreret under aseptiske betingelser til ampuller på 1 ml, og disse blev forseglet.

25 30 35

Claims (4)

1. Polysvovlsyreestere af bis-hexonsyreamider og derivater deraf, kendetegnet ved, at de har den generelle formel I 5 O R‘0—CH2—CH(OX)— CHCOR2)—CH(OX)— CH(OX)— C—N(R3)-— A (I) J2 10 1 2 hvor enten begge radikalerne R og R uafhængigt af hinanden beteg- 1 2 ner X, eller det ene af radikalerne R og R betegner X, og det andet betegner et radikal med formlerne II-VII 15 ch2ox xo / °\ ( n )β (Π) l\ οχ η Λ H\[ Y H

20. OX CHjOX

25 XO / °v H ζ H N (ID) h\oxh/^ ' Η OX

30 CHjOX H/l·0 \ox οχ/β (IV) XO \| Y H

35. H

48 DK 162393 B ch2ox i/h \ V > (V> [\ ox ox/ „ 1 J

5 XO\| / Η H CHjOX Γ CH2OX H A ° Η H A ° H 10 /" N k'1 N (vi) Χ(Γ\0ΧΗ/Λ,_0--i\OXH/1—o-- Η OX H OX _ J #71

15. CH2OX CH2OX h A-0 H L0 γ°— ^ l\ ox h A X(Kl_..l/ Η H OX 20 H OX hvor X i formlerne I-VII samtidig eller uafhængigt af hinanden betegner et hydrogenatom eller en -S03H-gruppe, hvor mindst ét X betegner en -SO-H-gruppe, 25 -3 m står for 0, 1, 2, 3, 4, 5 eller 6, A i formlen I betegner: 30 a) et mættet uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, b) et mættet, uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, som er afbrudt af 1 eller 2 -S-, -S(0) -, 35 n -S-S-, eller 0 II -C-NH-grupper, hvor det i tilfældet med et uforgrenet alkyleradikal, af den nævnte art, som er afbrudt af en -S-, -S(0)n- eller -S-S-gruppe, kan være substitueret med en eller to -C02R4-grupper, DK 162393 B c) et mættet uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, som er afbrudt af op til 5 -0- eller 5 -NR -grupper, 5 d) et mættet uforgrenet eller forgrenet alkylenradikal indeholdende fra 2 til 12 carbonatomer, som er substitueret med et eller to -C02R4-radikaler, eller e) et -CHg-B-CHg-radikal, hvor B betegner et cykl oal kyl en- eller 10 arylenradikal, f) radikalet 15 eller g) en enkeltbinding, 20 n er 1 eller 2, 3 4 5 R , R og R betegner samtidig eller uafhængigt af hinanden et hydrogenatom eller et Cj-Cg-alkyl radikal, samt salte heraf med 25 uorganiske eller organiske baser.

2. Fremgangsmåde til fremstilling af polysvovlsyreestere af bis-hexonsyreamider og derivater deraf med formlen I ifølge krav 1, kendetegnet ved, at bis-hexonsyreamider med den generelle 30 formel IX 0 1 2 11 3 [R10-CH9-CH(0H)-CH(0R^)-CH(0H)-CH(0H)-C-N(R,i)^—A (IX) 2 35 12 3 hvor R , R , R og A har de i krav 1 anførte betydninger, men hvor X i formlerne II til VII imidlertid betegner et hydrogenatom, på i og for sig kendt måde omsættes med et sulfaterende middel i et aprot „ DK 162393 B opløsningsmiddel, og at de derved opnåede produkter eventuelt omdannes til de tilsvarende salte under anvendelse af en uorganisk eller organisk base.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at hexonsyrer med den generelle formel VIII ^0-0Η2-0Η(0Η)-CH(0R2)-CH(OH)-CH(OH)-C02H (VIII) 12 10 hvor R og R har de i krav 1 anførte betydninger, men hvor X i formlerne II til VII imidlertid betegner et hydrogenatom, i hvert tilfælde omdannes til bis-hexonsyreamiderne med den generelle formel IX uden at isolere et mellemprodukt og omsættes til opnåelse af deres polysvovlsyreestere. 15

4. Medikamenter, kendetegnet ved, at de indeholder en eller flere forbindelser med den generelle formel I ifølge krav 1, sammen med almindelige excipienser og hjælpemidler. 20 25 30 35