FI87580B - Enzymatiskt foerfarande foer framstaellning av dextrossirap - Google Patents
Enzymatiskt foerfarande foer framstaellning av dextrossirap Download PDFInfo
- Publication number
- FI87580B FI87580B FI852248A FI852248A FI87580B FI 87580 B FI87580 B FI 87580B FI 852248 A FI852248 A FI 852248A FI 852248 A FI852248 A FI 852248A FI 87580 B FI87580 B FI 87580B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- enzyme
- weight
- bacillus megaterium
- maltodextrin
- glucoamylase
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/20—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an exo-1,4 alpha-glucosidase, e.g. dextrose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/837—Bacillus megaterium
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
1 87580
Entsymaattinen menetelmä dekstroosisiirapin valmistamiseksi Tämä keksintö koskee entsymaattista menetelmää 5 dekstroosisiirapin valmistamiseksi, joka siirappi sisältää yli 96 paino-% dekstroosia, maltodekstriinin vesipitoisesta dispersiosta. Erityisesti kuvataan polysakkaridien, kuten tärkkelyksen tai osittain hydrolysoidun tärkkelyksen entsymaattista konversiota alfa-amylaasiaktiivisuutta 10 omaavan entsyymin avulla.
Amylaasit ovat tärkeä hiilihydraattiryhmä ja niillä on laajaa teollista käyttöä. Niille on luonteenomaista kyky hydrolysoida alfa-D-glukosidisidosta tärkkelysyhdis-teissä, ja kaupallisesti niiden pääasiallinen käyttötar-15 koitus on tärkkelyksenkäsittelyteknologiassa. Tärkkelys, joka on polysakkaridi, jonka molekyylipaino on huomattava, voidaan hydrolysoida alfa-amylaasin avulla polysakkarideiksi, joiden molekyylipaino on alhaisempi ja joissa on jopa kymmenen monosakkaridiyksikköä. Tällaista entsyymiä 20 kutsutaan "nesteyttäväksi" entsyymiksi, koska lohkaistes- saan tärkkelysmolekyylin se muuttaa nestemuotoon tärkke-lyssuspension tai paksun tärkkelyspastan. Muut amylaasit katalysoivat erilaisia hydrolyyttisiä toimintoja, esimerkiksi beta-amylaasi katalysoi hydrolyysiä tärkkelys-, gly-25 kogeeni- tai dekstriinimolekyylien ei-pelkistävissä päissä lohkaisten pois maltoosimolekyylin, kun taas glukoamylaasi katalysoi glukoosin poistumista samojen poly- tai oligosakkaridien ei-pelkistävistä päistä.
Alfa-amylaasiaktiivisuutta osoittavia entsyymejä 30 saadaan erilaisista luonnonlähteistä, esim. homeista, sie nistä ja bakteereista, ja erilaisista organismeista saadut entsyymit, vaikkakin niillä on alfa-amylaasiaktiivisuutta ja ne kykenevät katalysoimaan hydrolyyttisiä reaktioita, joita yleensä katalysoivat alfa-amylaasit, eroavat olosuh-35 teiden osalta, joissa ne toimivat, erityisesti lämpötila- 2 87580 ja pH-olosuhteiden osalta, ja teollisessa käytännössä tällaiset erot voivat olla tärkeitä.
EP-hakemusjulkaisussa 81 300 578.2 on kuvattu mm. menetelmä entsyymien valmistamiseksi, joilla on amylaasi-5 aktiivisuutta, geneettisesti muunnetuista mikro-organismeista. Hakemuksessa kuvataan joitakin mikro-organismeja, jotka luovuttavat geneettisesti muunnettuihin mikro-orga-nismeihin geenejä, jotka ilmaisevat erilaisia entsyymejä, jotka osoittavat amylaasiaktiivisuutta. Yksi tällainen 10 luovuttava mikro-organismi, jota esitetään EP-hakemusjulkaisussa 81 300 578.2 on Bacillus megaterium, vaikka tästä mikro-organismista valmistetulla entsyymillä ei kuvata olevan mitään ominaisuuksia, jotka erottaisivat sen muista amylaasiaktiivisuutta osoittavista entsyymeistä, joita 15 kuvataan voitavan valmistaa em. EP-julkaisun menetelmällä. Nyt on kuitenkin havaittu, että Bacillus megateriumista saatavalla entsyymillä, jolla on alfa-amylaasiaktiivisuut-ta, on ominaisuuksia, jotka tekevät sen erityisen käyttökelpoiseksi tietyissä teollisissa sovellutuksissa.
20 Keksintö koskee siten entsymaattista menetelmää dekstroosisiirapin valmistamiseksi, joka siirappi sisältää yli 96 paino-% dekstroosia, maltodekstriinin vesipitoisesta dispersiosta. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että maltodekstriini pH-arvossa 4,5 - 8,0 saa-25 tetaan kosketukseen glukoamylaasi-entsyymin ja mikro-organismista Bacillus megaterium, NCIB 11568, saadun a-amylaa-siaktiivisuutta omaavan entsyymin kanssa, jolloin gluko-amylaasia käytetään määränä 0,05 - 0,40 paino-% maltodekstriiniä kuiva-aineesta laskettuna ja mikro-organismis-30 ta Bacillus megaterium saatua entsyymiä käytetään määränä 0,02 - 10,0 yksikköä 1 g maltodekstriiniä kuiva-aineesta laskettuna.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetty entsyymi kykenee katalysoimaan erilaisen koostumuksen omaavien po-35 lysakkaridien konversiota. Näin ollen, vaikka sen pää- 3 87580 asiallinen kaupallinen käyttö on tärkkelyksen tai tärkkelyksen osittaista hydrolysaattien konversio monosakkari-diksi tai polysakkarideiksi, joilla on alhaisempi molekyy-lipaino, se katalysoi myös pullulaanin konversiota, jol-5 loin tuote on miltei kokonaan trisakkaridi panoosi. Toisin kuin muut entsyymit, joilla on alfa-amylaasiaktiivisuutta, Bacillus megaterium -entsyymi katalysoi myös syklodekst-riinien hydrolyysiä tuotteeksi, joka koostuu pääasiassa dekstroosista, maltoosista ja maltotrioosista.
10 Käytettäessä tärkkelysteknologiassa, Bacillus mega- teriumista saatavaa, amylaasiaktiivisuutta osoittavaa entsyymiä voidaan käyttää tavanomaisten alfa-amylaasin katalysoimien hydrolyyttisten reaktioiden aiheuttamiseen, esim. nestemäisen tärkkelyksen tuotantoon. Entsyymin eri-15 tyisen merkittävä käyttö on kuitenkin menetelmässä, jossa valmistetaan dekstroosisiirappeja tärkkelyksestä tai tärk-kelyshydrolysaateista, jossa menetelmässä hydrolyysireak-tiota katalysoi glukoamylaasi, koska on havaittu, että reaktio-olosuhteet voidaan valita siten, että Bacillus 20 megateriumin entsyymiä ja glukoamylaasia voidaan käyttää yhdessä, samaan aikaan samassa liuoksessa. Erityisesti Bacillus megateriumin alfa-amylaasiaktiivista entsyymiä voidaan lisätä tavanomaiseen sokeroimisreaktioon, jossa syötteenä on maltodekstriini tai nesteytetty tärkkelys ja 25 hydrolyyttinen entsyymi, glukoamylaasi, jolla on seuraavia odottamattomia etuja: a) Annetulla määrällä glukoamylaasia sokeroitumis-aikaa voidaan vähentää tai annetulla sokeroitumisajalla käytettävän glukoamylaasin määrää voidaan vähentää.
- 30 b) Prosessin syötössä voidaan käyttää korkeampaa liuenneiden kiinteiden aineiden konsentraatiota (jopa 10 paino-% enemmän) tuotteen saamiseksi, jolla on sama dekst-roosikonsentraatio. Vaihtoehtoisesti ja samanaikaisesti voidaan normaalista tehtaan syötöstä tai syötöstä, jossa 35 on hiukan suurempi liuenneiden kiinteiden aineiden määrä, 4 87580 valmistaa tuote, jolla on suurempi dekstroosikonsentraatio (kasvanut 0,5-1 paino-%) ja alhaisempi oligomeerikonsen-traatio (DPn alentunut 0,2 paino-%:iin; jolloin DP vastaa "dekstroosipolymeeriä" ja "n" polymeerin dekstroosiyksi-5 köiden lukumäärää).
c) "Alkoholin sameus", kuten myöhemmin kuvataan, vähenee. "Alkoholin sameus" osoittaa oligomeerikomponent-tien pitoisuutta sokeroitumistuotteessa.
Menetelmä, jossa käytetään glukoamylaasia ja Bacil-10 lus megateriumia yhdessä, suoritetaan edullisesti lämpöti lassa, joka on välillä 40 - 65 °C, edullisemmin välillä 55 - 60 °C. pH on edullisesti välillä 4,5 - 5,5, edullisemmin noin 5. Yleisesti, mitä alhaisempi on pH, sitä alhaisempi on käytetty lämpötila ja päinvastoin. Maltodekst-15 riinisyöttö voi sisältää 20 - 40 paino-% liuenneita kiinteitä aineita, erityisesti 25 - 35 paino-% liuenneita kiinteitä aineita. Käytettävä glukoamylaasimäärä on sopivasti 0,05 - 40, edullisesti 0,10 - 0,20 paino-% kuiva-aineen painosta, ja Bacillus megaterium -entsyymin määrä 20 edullisesti 0,02 - 10,0, edullisemmin 0,1 - 2,0 yksikköä/-gramma kuivapainoa. Saatava tuote voi sisältää yli 96 paino-% dekstroosia, edullisesti yli 97 %, erityisesti yli 97,5 paino-% dekstroosia.
Bacillus megateriumin amylaasiaktiivisen entsyymi-25 konsentraation ilmaiseminen yksikköinä/gramma kuivapainoa on tavanomaista käytäntöä entsyymiteknologiassa ja välttämätöntä, koska entsyyminäytteillä voi olla erilaisia aktiivisuuksia riippuen esimerkiksi niiden puhtaudesta jne. Annetun näytteen aktiivisuus määritetään PHADEBAS- testil-30 lä, jossa käytetään kaupallisesti saatavaa testivälineis-töä, ja joka perustuu entsyymin vapauttaman väriaineen voimakkuuden arviointiin huolellisesti kontrolloiduissa olosuhteissa. Jos entsyymin aktiivisuus on täysin tuntema-ton, näytteet laimennetaan ensin vedellä laimennussarjak-35 si, jotka testataan sitten alla kuvatulla menetelmällä sen 5 87580 laimennuksen löytämiseksi, joka testiolosuhteissa antaa sellaisen väriaineen optisen tiheyden, joka on sopiva kvantitatiiviseen määritykseen. Sitten testi toistetaan tässä konsentraatiossa verraten kontrollinäytteeseen.
5 Yksityiskohtaisesti, 200 μΐ laimennettua näytettä pannaan koeputkeen ja sekoitetaan 4 ml kanssa puskuri-liuosta. Kontrollinäyte koostuu 200 pirsta demineralisoi-tua vettä ja 4 mlrsta puskuriliuosta. Puskuriliuos käsittää natriumasetaattia (20 mM) ja kalsiumkloridia (2 mM), 10 säädettynä pH 5 reen. Sitten lisätään PHADEBAS-tabletti kuhunkin näytteeseen, näytettä sekoitetaan 10 sekuntia ja se pannaan hyvin sekoitettuun vesihauteeseen, jossa sitä pidetään 55 °C lämpötilassa 15 minuuttia. PHADEBAS-tabletti sisältää väriaineen ja puskurin, ja kahden puskurisystee-15 min vaikutuksena saadaan lopullinen pH 6,3 testiliuokses-sa.
15 minuutin ajanjakson kuluttua reaktio lopetetaan lisäämällä 1 ml 0,5 molaarista natriumhydroksidia, ja näytettä sekoitetaan, ennen kuin sitä sentrifugoidaan noin 20 1 500 grssä 5 minuuttia tai suodatetaan. Näytteen adsor- banssi mitataan sitten 620 nmrssa demineralisoituun veteen verrattuna käyttäen 1 cm kyvettiä. Kontrollinäytteen ad-sorbanssi vähennetään näytteestä testissä ja amylaasin aktiivisuusyksiköt määritetään yksikköinä litraa kohti 25 PHADEBAS-standardikäyrästä. Arvo yksikköinä litraa kohti voidaan sitten muuntaa yksiköiksi/gramma kuivapainoa.
Yhtä hyvin kuin korkean dekstroosipitoisuuden siirapeissa Bacillus megaterium-entsyymiä voidaan myös käyttää parantamaan tällaisten siirappien laatua, kun ne on jo ; 30 saatu. Erityisesti tällaisten siirappien "alkoholinsameut-ta" voidaan vähentää saattamalla ne kosketukseen entsyymin kanssa yllä annetuissa pH- ja lämpötilaolosuhteissa menetelmässä, jossa käytetään glukoamylaasi/Bacillus megate-rium-entsyymi-kombinaatiota. "Alkoholinsameutta" voidaan 35 vähentää sellaiseen tasoon, että myöhemmällä käsittelyllä ioninvaihtajilla se voidaan poistaa kokonaan.
6 87580
Keksintöä kuvataan nyt edelleen seuraavien esimerkkien avulla. Esimerkeissä käytetty laite koostui sarjasta 500 ml erlenmeyerpulloja, jotka on asetettu ravistuskehyk-selle termostaattisesti kontrolloidussa vesihauteessa.
5 Yleisesti syöttö käsitti 500 ml maltodekstriiniliuosta, jossa oli 0,02 molaarista natriumasetaattia puskurina stabiilin pH:n ylläpitämiseksi. Liuos sisälsi myös 80 mg Ca+* litrassa (kalsiumkloridin muodossa). pH:n alkusäätö suoritettiin etikkahapolla, ja entsyymit lisättiin reaktion 10 aloittamiseksi. Reaktion pH:ta valvottiin mittaamalla liuoksen pH mittarilla kahdesti päivässä ja lisäämällä natriumhydroksidia, jos pH oli laskenut. 100 ml näyte otettiin myös 24 tunnin välein, entsyymi(t) denaturoitiin keittämällä 30 minuuttia, ja denaturoitu liuos suodatet-15 tiin. Suodatetun näytteen dekstroosipitoisuus määritettiin sitten korkeapainenestekromatografiällä, ja haluttaessa suoritettiin alkoholisameustesti.
"Alkoholisameutta” mitataan seuraavasti: a) pannaan näyte 100 ml pulloon siten, että siinä 20 on 0,91 g liuenneita kiinteitä aineita (mitattu refrakto- metrillä), b) lisätään demineralisoitua vettä niin, että läsnäolevan veden kokonaismäärä on 3,39 g, c) lisätään 27 ml etanolia, jonka puhtaus on 25 99,8 %, d) keitetään sekoittaen ja palautusjäähdyttäen 9-10 minuuttia, e) jäähdytetään juoksevan veden alla ja f) mitataan optinen tiheys 578 nanometrin kohdalla 30 4 cm kennossa.
Esimerkeissä käytetty glukoamylaasi oli OPTIDEX L 150, jota toimittaa Miles-Kali Chemie (OPTIDEX on tavaramerkki).
35 7 87580
Esimerkki 1
Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta saadun alfa-amylaasiaktiivisen entsyymin vaikutus 18 DE maltodekstriinin glukoamylaasin katalysoimaan hydrolyysiin dekstroo-5 siksi.
Syöttöliuos sisälsi 25 paino-% liuenneita kiinteitä aineita ja lämpötila pidettiin 55 °C:ssa. Hydrolyysi yksin glukoamylaasin kanssa suoritettiin tälle reaktiolle tavanomaisessa pH 4,2:ssa. Kun Bacillus megaterium- entsyymiä 10 lisättiin, pH nostettiin arvoon 5,0 . Seuraavassa taulukossa 1 esitetään tuotteen dekstroosipitoisuudet 48 tunnin jälkeen.
Taulukko 1
Glukoamylaasi Bacillus megaterium -entsyymi Dekstroosipi-15 paino-% yksikkö/g toisuus ______paino-%_ 0,10 - 95,0 0,14 - 95,9 0,10 1,5 96,6 20 0,13 1,5 96,8
Esimerkki 2
Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta saadun alfa-amylaasiaktiivisen entsyymin vaikutus 18 DE maltodekstriinin glukoamylaasin katalysoimaan hydrolyysiin dekstroo-25 siksi, kun liuenneiden kiinteiden aineiden määrää liuoksessa nostetaan.
Hydrolyysi suoritettiin 60 °C lämpötilassa ja pH 5:ssä. Lisätyn glukoamylaasin määrä oli 0,075 paino-% ja Bacillus megaterium-entsyymin 1,5 yksikköä/g. Tulokset on 30 esitetty taulukossa 2.
s 87580
Taulukko 2
Liuenneet kiinteät Aika Dekstroosipitoisuus aineet % w/w_tunteina_paino-% 15 48 95,6 5 15 96 97,9 25 48 94,0 25 96 97,0 35 48 91,6 35 96 95,7 10
Esimerkki 3
Bacillus megaterium NCIB nro 11 568:sta saadun alfa-amylaasiaktiivisen entsyymin vaikutus 18 DE maltodekstriinin glukoamylaasin katalysoimaan hydrolyysiin 15 dekstroosiksi 60 °_C lämpötilassa ja vaihtelevilla glukoamy-laasikonsentraatioilla.
Liuos sisälsi 25 paino-% liuenneita kiinteitä aineita, pH oli 5, ja Bacillus megaterium -entsyymin kon-sentraatio oli 1,5 yksikköä/g. Tulokset 72 tunnin kuluttua 20 esitetään seuraavassa taulukossa 3.
Taulukko 3
Glukoamylaasi Dekstroosipitoisuus paino-%_____ paino-% ________ 0,10 97,2 25 0,08 96,9 0,05 93,1
Esimerkki 4
Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta saadun alfa-amylaasiaktiivisen entsyymin vaikutus 12 DE maltodekst-30 riinin glukoamylaasin katalysoimaan hydrolyysiin 55 !C lämpötilassa ja vaihtelevissa pH-arvoissa.
Koesarjassa käytetty puskuri oli 0,1 molaarista natriumasetaattia, glukoamylaasikonsentraatio oli 0,15 paino-% ja Bacillus megaterium-entsyymin konsentraatio oli 35 1,5 yksikköä/g. Tulokset 48 tunnin kuluttua on esitetty taulukossa 4.
9 87580
Taulukko 4 pH Dekstroosipitoisuus paino-% 4,6 96,0 4,8 96,6 5 5,0 96,8 5,2 96,4 5,4 96,1
Esimerkki 5
Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta saatavan alfa-10 amylaaslaktiivisen entsyymin vaikutus 18 DE maltodekstriinin glukoamylaasin katalysoimaan hydrolyysiin 55 °C lämpö-tilassa .ja pH 5:ssä, vaihtelevilla glukoamylaasi- ja Bacillus megaterium-entsyymimäärillä.
Tulokset on esitetty allaolevassa taulukossa 5.
15 Taulukko 5
Glukoamylaasi paino-%__0,10 0,075__0,05 0,04 0,03
Bacillus megat, 20 entsyymiyksi- köitä/g 0,75 1,5 0,75 1,5 1,5 3,0 6,0 6,0
Aika 25 (tunteja) 72 72 96 96 96 96 96 96
Dekstroosi- pitoisuus, paino-% 97,1 97,0 97,5 97,3 97,3 96,7 95 ,8 93,1 30 Esimerkki 6
Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta saadun alfa-amylaasiaktiivisen entsyymin vaikutus alfa-syklodekstrii-nin hydrolyysiin.
Reaktioliuos sisälsi 15 % liuenneita kiinteitä ai-35 neita, ja se pidettiin 60 °C lämpötilassa ja pH 6:ssa, ja 10 87580 läsnä oli vaihtelevia määriä Bacillus megaterium -entsyymiä. Tulokset 240 tunnin kuluttua on esitetty allaolevassa taulukossa 6.
Taulukko 6 5 Bacillus megateriumin Dekstroosipitoisuus konsentraatio, yksiköitä/g_paino-%_ 15 44,8 30 77,7
Esimerkki 7 10 Vertaileva koe käyttäen kaupallisesti saatavaa alfa-amylaasia yhdessä glukoamylaasin kanssa
Reaktio-olosuhteet olivat samat kuin esimerkissä 1, paitsi että syöttöliuos sisälsi 32 paino-% liuenneita kiinteitä aineita. Tulokset 96 tunnin kuluttua on esitetty 15 taulukossa 7 ja ne osoittavat, että toisin kuin alfa-amy-laasiaktiivinen entsyymi, joka on saatu Bacillus megate-riumista, kaupallinen alfa-amylaasi ei edistä parannusta glukoamylaasihydrolyysiä edes 96 tunnin kuluttua.
Taulukko 7 20 0,18 paino-% glukoamy- laasia sekä ___
Glukoamylaasi 0,18 paino-%___A__B_ . . Dekstroosia ' ; 25 tuotteessa, · paino-%_______93,7__93, 6__94,3 "· Alkoholi sameus 0,240 0,490 0,043 | A = 5,6 yksikköä/g kaupallisesti saatavaa alfa-amylaasia • : : 30 B = 1,5 yksikköä/g alfa-amylaasiaktiivista entsyymiä
Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta.
Esimerkki 8
Dekstroosisiirappinäyte, joka oli valmistettu glu-koamylaasilla katalysoidulla hydrolyysillä, sisälsi 95,8 35 paino-% dekstroosia ja sen alkoholisameus oli 1,550.
li 87580 Näyte jaettiin kahtia ja eriä käsiteltiin 55 °C:ssa ja pH 5,0:ssa (a) Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta saadulla alfa-amylaasiaktiivisella entsyymillä ja (b) kaupallisesti saatavalla alfa-amylaasilla. Käsittelyn tulok-5 set on esitetty taulukossa 8.
Taulukko 8
Alfa-amylaasiaktiivinen Kaupallisesti saatava entsyymi Bacillus mega- alfa-amylaasi _teriumista_ 10 0,25 u/g 0,5 u/g 0,075 u/g 0,15 u/g 0,3 u/g
Dekst- roosi 95,5 95,3 95,7 95,5 95,3
Alkoho- lisa- 15 meus 0,176 0,045 1,410 1,380 1,240 U/g = yksikköä/gramma Esimerkki 9
Pullulaaniliuosta, jossa oli 5 paino-% liuenneita 20 kiinteitä aineita, käsiteltiin 55 °C lämpötilassa ja pH 5,6:ssa 24 tuntia 50 yksiköllä/g Bacillus megaterium NCIB 11 568:sta saadun alfa-amylaasiaktiivisen entsyymin kuiva-ainetta. 24 tunnin kuluttua pullulaani oli muuttunut 98 paino-%:iseksi pannoosiksi.
: 25
Claims (8)
1. Entsymaattinen menetelmä dekstroosisiirapin valmistamiseksi, joka siirappi sisältää yli 96 paino-% deks-5 troosia, maltodekstriinin vesipitoisesta dispersiosta, tunnettu siitä, että maltodekstriini pH-arvossa 4,5 - 8,0 saatetaan kosketukseen glukoamylaasi-entsyymin ja mikro-organismista Bacillus megaterium, NCIB 11568, saadun a-amylaasiaktiivisuutta omaavan entsyymin kanssa, 10 jolloin glukoamylaasia käytetään määränä 0,05 - 0,40 paino-% maltodekstriiniä kuiva-aineesta laskettuna ja mikro-organismista Bacillus megaterium saatua entsyymiä käytetään määränä 0,02 - 10,0 yksikköä/g maltodekstriiniä kuiva-aineesta laskettuna.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lämpötila on välillä 40 -65 °C.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lämpötila on välillä 55 - 20 60 °C.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siltä, että pH on 4,5 - 5,5.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pH on noin 5,0. •25
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen me netelmä, tunnettu siitä, että maltodekstriinin vesipitoinen dispersio sisältää 20 - 40 paino-%, edullisesti 25-35 paino-% maltodekstriiniä kuiva-aineesta laskettuna .
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen me netelmä, tunnettu siitä, että glukoamylaasia käytetään määränä 0,10 - 0,20 paino-% maltodekstriniistä kuiva-aineesta laskettuna.
8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukainen me- 35 netelmä, tunnettu siitä, että mikro-organismista Bacillus megaterium saatua entsyymiä käytetään määränä 0,1 - 2,0 yksikköä/g maltodekstriiniä kuiva-aineesta laskettuna. i3 8 7580
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB848414272A GB8414272D0 (en) | 1984-06-05 | 1984-06-05 | Enzymatic hydrolysis |
| GB8414272 | 1984-06-05 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI852248A0 FI852248A0 (fi) | 1985-06-05 |
| FI852248L FI852248L (fi) | 1985-12-06 |
| FI87580B true FI87580B (fi) | 1992-10-15 |
| FI87580C FI87580C (fi) | 1993-01-25 |
Family
ID=10561933
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI852248A FI87580C (fi) | 1984-06-05 | 1985-06-05 | Enzymatiskt foerfarande foer framstaellning av dextrossirap |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4650757A (fi) |
| EP (1) | EP0164933B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0644873B2 (fi) |
| CN (1) | CN85104505A (fi) |
| AT (1) | ATE65546T1 (fi) |
| AU (1) | AU585860B2 (fi) |
| BR (1) | BR8502682A (fi) |
| CA (1) | CA1240630A (fi) |
| DE (1) | DE3583542D1 (fi) |
| DK (1) | DK165843C (fi) |
| ES (1) | ES8608583A1 (fi) |
| FI (1) | FI87580C (fi) |
| GB (1) | GB8414272D0 (fi) |
| IE (1) | IE58260B1 (fi) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4962026A (en) * | 1986-09-15 | 1990-10-09 | Enzyme Bio-Systems, Ltd. | Process for the production of panosyl derivatives |
| DE4001611C1 (fi) * | 1990-01-20 | 1991-02-28 | Skw Trostberg Ag, 8223 Trostberg, De | |
| DE4029287A1 (de) * | 1990-09-14 | 1992-03-19 | Sueddeutsche Kalkstickstoff | Verfahren zur herstellung von cholesterinreduziertem eigelb |
| FI905402A (fi) * | 1990-11-01 | 1992-05-02 | Alko Ab Oy | Oligosackaridblandning och foerfarande foer dess efterbehandling. |
| US5384047A (en) * | 1993-01-22 | 1995-01-24 | Refractron Technologies Corporation | Filter dryer body |
| CN101938913A (zh) * | 2008-02-04 | 2011-01-05 | 诺维信公司 | 营养性饮料 |
| US20110091938A1 (en) * | 2009-10-20 | 2011-04-21 | Grain Processing Corporation | Starch Hydrolysis |
| ES2556985T3 (es) | 2011-01-11 | 2016-01-21 | Capsugel Belgium Nv | Nuevas cápsulas duras que comprenden pululano |
| CA3059527A1 (en) | 2017-04-14 | 2018-10-18 | Capsugel Belgium Nv | Pullulan capsules |
| BR112019021396A2 (pt) | 2017-04-14 | 2020-04-28 | Capsugel Belgium Nv | processo para fabricação de pululano |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1203623A (en) * | 1967-10-14 | 1970-08-26 | M G Syrups Ltd Ab | Production of fermentable syrups |
| US3888738A (en) * | 1973-10-31 | 1975-06-10 | Hayashibara Kabushiki Kaisha | Method for purifying cyclodextrin-producing enzymes |
| NZ183818A (en) * | 1976-04-19 | 1980-05-08 | Cpc International Inc | Heat -and acid-stable alpha-amylase and process for converting starch to a starch hydrolysate |
| US4284722A (en) * | 1978-08-16 | 1981-08-18 | Cpc International Inc. | Heat and acid-stable alpha-amylase enzymes and processes for producing the same |
| ZA81424B (en) * | 1980-02-15 | 1982-02-24 | Cpc International Inc | Genetically engineered microorganisms for massive production of amylolytic enzymes and process for preparing same |
| IL61982A (en) * | 1980-02-15 | 1984-01-31 | Cpc International Inc | Genetically engineered microorganisms for massive production of amyloytic enzymes and process for preparing same using the corresponding recombinant dnas containing amylase coding genes |
-
1984
- 1984-06-05 GB GB848414272A patent/GB8414272D0/en active Pending
-
1985
- 1985-05-17 DE DE8585303493T patent/DE3583542D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-17 EP EP85303493A patent/EP0164933B1/en not_active Expired
- 1985-05-17 AT AT85303493T patent/ATE65546T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-05-23 US US06/737,310 patent/US4650757A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-05-30 AU AU43133/85A patent/AU585860B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-06-04 BR BR8502682A patent/BR8502682A/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-06-04 ES ES543861A patent/ES8608583A1/es not_active Expired
- 1985-06-04 DK DK251585A patent/DK165843C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-06-04 IE IE139585A patent/IE58260B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-06-05 FI FI852248A patent/FI87580C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-06-05 JP JP60120734A patent/JPH0644873B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-05 CA CA000483213A patent/CA1240630A/en not_active Expired
- 1985-07-30 CN CN85104505A patent/CN85104505A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU585860B2 (en) | 1989-06-29 |
| EP0164933B1 (en) | 1991-07-24 |
| DK251585A (da) | 1986-02-03 |
| ES8608583A1 (es) | 1986-06-16 |
| ES543861A0 (es) | 1986-06-16 |
| IE58260B1 (en) | 1993-08-25 |
| IE851395L (en) | 1985-12-05 |
| JPH0644873B2 (ja) | 1994-06-15 |
| FI852248L (fi) | 1985-12-06 |
| DK251585D0 (da) | 1985-06-04 |
| CN85104505A (zh) | 1987-03-11 |
| GB8414272D0 (en) | 1984-07-11 |
| DK165843C (da) | 1993-06-21 |
| JPS6119498A (ja) | 1986-01-28 |
| CA1240630A (en) | 1988-08-16 |
| EP0164933A3 (en) | 1987-04-15 |
| DK165843B (da) | 1993-01-25 |
| DE3583542D1 (de) | 1991-08-29 |
| FI87580C (fi) | 1993-01-25 |
| BR8502682A (pt) | 1986-02-12 |
| EP0164933A2 (en) | 1985-12-18 |
| US4650757A (en) | 1987-03-17 |
| FI852248A0 (fi) | 1985-06-05 |
| ATE65546T1 (de) | 1991-08-15 |
| AU4313385A (en) | 1985-12-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4316956A (en) | Fermentation process | |
| CA1282724C (en) | Enzymatic hydrolysis of granular starch directly to glucose | |
| JPH0740952B2 (ja) | 清澄化された澱粉加水分解物の製造方法およびそれに用いるのに適当な新規の酵素組成物 | |
| JPS5918040B2 (ja) | 粒状澱粉の可溶性水解物への変換方法 | |
| DE2538322A1 (de) | Verfahren zur herstellung von dextrose unter verwendung von immobilisierten enzymen | |
| FI87580B (fi) | Enzymatiskt foerfarande foer framstaellning av dextrossirap | |
| US4734365A (en) | Process for liquefying starch | |
| US3535123A (en) | High de starch hydrolysate syrups and method of preparation | |
| CA1340727C (fr) | Procede de production de polysaccharides | |
| JPS62500422A (ja) | 熱安定性β−アミラ−ゼ | |
| Kuo et al. | Process characteristics of hydrolysis of chitosan in a continuous enzymatic membrane reactor | |
| GOYAL et al. | Regulation of dextransucrase productivity of Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512F by the maintenance media | |
| JPS6318480B2 (fi) | ||
| EP0405283A2 (en) | Novel thermoduric and aciduric pullulanase enzyme and method for its production | |
| Achi et al. | Production of a raw starch saccharifying amylase by Bacillus alvei grown on different agricultural substrates | |
| EP0573536B1 (fr) | Xylanase, souches de bacillus productrices de xylanase et leurs utilisations | |
| JPS6258983A (ja) | 高発酵度ビ−ルの製造法 | |
| Pashova et al. | Physiological aspects of immobilised Aspergillus niger cells producing polymethylgalacturonase | |
| US4121974A (en) | Preparation of retrogradation-resistant starches with immobilized amylases | |
| US3047471A (en) | Method of refining amyloglucosidase | |
| FR2504360A1 (fr) | Procede pour preparer des sirops de glucose/fructose a partir d'hydrolysats d'amidon non raffines | |
| Cheetham et al. | Studies on dextranases: Part III. Insolubilization of a bacterial dextranase | |
| KR910009161B1 (ko) | 동시당화 및 발효공정에 의한 에탄올의 제조방법 | |
| JPS63283593A (ja) | プルランの製造方法 | |
| Su et al. | A novel method for continuous production of cyclodextrins using an immobilized enzyme system |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: CPC INTERNATIONAL INC. |