FI86429C - Ett foerbaettrat foerfarande foer framstaellning av s-oxidderivat av pristinamycin iib. - Google Patents

Description

1 86429

Parannettu menetelmä pristinamysiinin IIB S-oksidijohdannaisten valmistamiseksi

Esillä oleva keksintö koskee uutta menetelmää pris-5 tinamysiinin IIB S-oksidi-johdannaisten valmistamiseksi.

EP-patenttihakemuksessa n:o 191 662 esitetään yleiskaavan (I * ) mukaisia pristinamysiinin IIB S-oksidi-johdannaisia o 10 J<

Il 1 o o CH* (:11) cws R-S0-^\sS “-0

15 V

jossa symboli R on joko typpeä sisältävä heterosyklinen 4-7 rengasjä-20 sentä sisältävä radikaali, jossa mahdollisesti on lisäksi yksi tai useampi muu heteroatomi, joka voi olla typpi, happi tai rikki sulfoksidi- tai sulfonimuodossa, ja se voi mahdollisesti olla substituoitu alkyyliradikaalilla, tai 2-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliketju substi-25 tuoituna yhdellä tai kahdella radikaalilla, joka voi olla : fenyyli, sykloalkyyliamino tai N-alkyyli-N-sykloalkyyli- amino, jossa on 3-6 rengasjäsentä, alkyyliamino, dialkyy-liamino tai dialkyylikarbamoyylioksi (kahden viimeksi mainitun radikaalin alkyyliosat voivat mahdollisesti muodos-30 taa tyydytetyn tai tyydyttämättömän 4-7-jäsenisen hetero-syklin, joka mahdollisesti sisältää myös toisen heteroato-. . min, joka voi olla typpi, happi tai rikki sulfoksidi- tai sulfonimuodossa, sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, ja ne voivat mahdollisesti olla substituoitu-:*·*: 35 ja alkyyliradikaalilla), tai substituoitu yhdellä tai 2 86429 useammalla typpeä sisältävällä 4-7-jäsenisellä heterosyk-lillä, joka mahdollisesti sisältää 1 tai 2 muuta hetero-atomia, joka voi olla typpi, happi tai rikki sulfoksidi-tai sulfonimuodossa, ja lisäksi se voi mahdollisesti olla 5 substituoitu alkyyliradikaalilla, mainittujen heteroato-mien ollessa sitoutuneina pääketjuun hiiliatomin välityksellä, vähintään yhden yllä mainitussa alkyyliryhmässä olevan substituoivan ryhmän ollessa typpiryhmä, joka voi muodostaa suoloja, 10 tai radikaali (l-metyyli-2(S)-pyrrolidinyyli)-me tyyli, mainittujen alkyliradikaalien ollessa suorat tai haarautuneet, ja sisältäen, ellei muutoin mainita, 1-10 hiiliatomia, näiden isomeerimuotoja tai näiden seoksia, kuten myös näiden additiosuoloja happojen kanssa sekä näi-15 den valmistusta.

Kun R on heterosykli, niin se voidaan valita esim. seuraavien joukosta: 3-atsetidinyyli, 3-pyrrolidinyyli, 3-tai 4-piperidyyli tai 3- tai 4-atsepinyyli.

Kun R on heterosyklialkyyli, niin heterosykli voi-20 daan valita esim. edellä esitettyjen joukosta tai seuraavien joukosta: 2-atsetidinyyli, 2-pyrrolidinyyli, 2-pipe-ridyyli, 2-atsepinyyli, piperatsinyyli, 2-alkyylipiperat-sinyyli, kinolyyli, isokinolyyli tai imidatsolyyli.

Kun R on dialkyyliamino tai dialkyylikarbamoyyli-25 oksi, jonka alkyyliosat muodostavat heterosyklin yhdessä sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, niin tämä heterosykli voidaan valita esim. seuraavien joukosta: 1-atsetidinyyli, 1-pyrrolidinyyli, piperidino, 1-atse-pinyyli, morfolino, tiomorfolino sulfoksidina tai sulfoni-30 na, 1-piperatsinyyli, 4-alkyylipiperatsin-l-yyli, N-alkyy- lihomopiperatsin-l-yyli, 1-imidatsolyyli.

FI-patenttihakemus 873 015 koskee menetelmää sulfo-nien valmistamiseksi käyttämällä lähtöaineena vastaavia sulfoksideja; mainittu FI-patenttihakemus ei koske mene-35 telmää sulfoksidien valmistamiseksi.

3 b 6 4 2 9

Nyt on todettu, että yleiskaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa hapettamalla kaiiummonopersulfaatin avulla yleiskaavan (II) mukainen pristinamysiini IIB, sen suola tai suojattu johdannainen.

5 Keksinnön kohteena on parannettu menetelmä yleis kaavan (I) mukaisten pristinamysiinin IIB S-oksidijohdan-naisten valmistamiseksi ,ο J o o CH> V0 so^S/ R 0 (I)

i c H-C-CH-NC

10 l I \ r1r2 r4 jossa

Rj ja R2 merkitsevät vetyatomia tai metyyli- tai 20 etyyliradikaalia, R3 merkitsee vetyatomia tai alkyyliradikaalia, joka sisältää 1-3 hiiliatomia, R4 merkitsee alkyyliradikaalia, joka sisältää 1-4 hiiliatomia, tai sykloheksyyliradikaalia, ' 25 tai R4 ja R2 muodostavat yhdessä niiden atomien kanssa, joihin ne ovat kiinnittyneet, tyydytetyn 5-jäseni-sen renkaan, tai R4 muodostaa R3:n kanssa tyydytetyn 5- tai 6-jäsenisen renkaan, 30 isomeerimuodoissaan tai näiden seoksina, sekä näi den happoadditiosuolojen valmistamiseksi, hapettamalla pristinamysiinin IIB johdannainen (tai sen suola), jonka yleiskaava on (II) 35 4 o o <+ ά y I yR3 <“) h-c-ch-n.

* ‘ \ r1r2 R4 10 jossa R3, R2, R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä, siten että kun R3 ja R4 muodostavat rikkipitoisen heterosyklin, rikkiatomi voi olla sulfidi-, sulfoksidi- tai sulfonimuo-dossa, jonka jälkeen mahdollisesti erotetaan saadun tuot-15 teen isomeerit, ja mahdollisesti muutetaan saatu tuote hapon avulla suolaksi. Menetelmälle on tunnusomaista, että hapetus suoritetaan kaliummonopersulfaatilla.

Kaliummonopersulfaatilla tarkoitetaan seosta, joka sisältää sekä kaliumsulfaattia että hapanta kaliumsulfaat-20 tia, kuten US-patenttijukaisussa 2 802 722 on esitetty, ja jota myydään tuotenimellä Oxone®.

Reaktio suoritetaan vedessä tai veden ja alkoholin seoksessa (esimerkiksi vesi-metanoli) tai veden ja kloori-pitoisen liuottimen seoksessa (esimerkiksi vesi-dikloori-25 -metaani) lämpötilassa joka vaihtelee välillä -60° ja 25°C.

Kun käytetään yleiskaavan (II) mukaista pristina-mysiini IIB johdannaista suolamuodossaan, käytetään orgaanisilla tai mineraalihapoilla muodostettuja suoloja, edullisesti trifluorietikkahapon, viinihapon, etikkahapon, : 30 bentsoehapon, kloorivedyn tai rikkihapon suoloja.

Kaliummonopersulfaatti valmistetaan US-patentti-julkaisussa 2 802 722 esitetyn menetelmän mukaisesti.

Yleiskaavan (II) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa EP-patenttihakemuksessa n:o 191 662 esitetyn menetel-. 35 män mukaisesti. Ei ole ehdottoman tarpeellista eristää 5 86429 yleiskaavan (II) mukaista pristinamysiinin IIB johdannaista keksinnön mukaisen menetelmän toteuttamiseksi.

Tällä menetelmällä saadut yleiskaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan puhdistaa tunnettuja menetelmiä käyt-5 täen, esimerkiksi kiteyttämällä, kromatografiällä tai perättäisillä mitoilla happamassa tai emäksisessä ympäristössä. Alan asiantuntija, joka tuntee synergistiinien herkkyyden emäksisessä ympäristössä, ymmärtää "emäksisellä ympäristöllä" ympäristöä, joka on juuri tarvittavan emäk-10 sinen, jotta perusyhdiste vapautuu happoadditiosuolastaan, s.o. ympäristö, jonka pH ei ylitä arvoa 8.

Yleiskaavan (I) mukaisten yhdisteiden isomeerit voidaan erottaa kaikkia tunnettuja menetelmiä käyttäen. Käytetään edullisesti kromatografiaa tai HPLC (korkeapai-15 nenestekromatografiaa).

Keksinnön mukaisella menetelmällä tuotetut yleiskaavan (I) mukaiset yhdisteet omaavat anti-bakteerista aktiivisuutta gram-positiivisia bakteereja (stafylokokkeja, streptokokkeja, pneumokokkeja, enterokokkeja) sekä 20 gram-negatiivisia bakteereja (hemofiilus-bakteereja, gonokokkeja, meningokokkeja) vastaan. Lisäksi niillä on se etu, että ne voidaan liuottaa veteen, yleensä suolamuo-dossa, terapeuttisesti käyttökelpoisina annoksina ja että ne synergistisellä vaikutuksella lisäävät pristinamysiinin 25 Ix, virginiamysiinin S tai EP-patenttihakemuksessa n:o 191 662 esitettyjen liukoisten johdannaisten anti-bakteerista vaikutusta.

Lisäksi keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettuja yleiskaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan käyt-30 tää yleiskaavan (III) mukaisten pristinamysiinin IIB sulfo-nijohdannaisten valmistamiseksi: 6 06429 o

11 0 H

c o*. R.s-6/ 0 (o)2 (III) jossa R merkitsee samaa kuin edellä, jotka ovat aktiivisia 10 antimikrobisina aineina ja joilla on myös synergistinen vaikutus ryhmän I pristinamysiineihin.

Yleiskaavan (III) mukaisten pristinamysiinin IIB sulfonijohdannaisten valmistus suoritetaan hapettamalla yleiskaavan (I) mukaista pristinamysiinin IIB johdannais-15 ta EP-patenttihakemuksessa n:o 191 662 esitetyissä olosuhteissa.

Keksinnön mukaisella menetelmällä on se etu, että se on helppo suorittaa ja mahdollistaa puhtaamman tuotteen saannin, vastaavan sulfoniyhdisteen tapauksessa kä-20 sittely viimeisessä vaiheessa on helpompaa, tai että riski lähtöaineen hajoamiselle on pienempi ja varsinkin riski yleiskaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamisessa.

Keksinnön mukaisesti valmistetaan erityisesti yhdisteitä, joissa ryhmä - 25 -CH-CH-N. on 2 - 4 hiiliatomia sisältävä alkyyli- I I \ 1

Ri R2 R4 radikaali, joka on substituoitu yhdellä tai kahdella ryhmällä, joka tai jotka on valittu seuraavien joukosta: fe-30 nyyli, sykloalkyyliamino tai N-alkyyli-N-sykloalkyyliami-no, joka on 5- tai 6-jäseninen, 1-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliamino, dialkyyliamino (jonka alkyyliosat sisältävät 1-3 hiiliatomia tai muodostavat yhdessä sen typpi-atomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, tyydytetyn, 5-35 tai 6-jäsenisen heterosyklin, tai on 5- tai 6-jäseninen ? 86429 typpipitoinen heterosykli, joka voi olla substituoitu 1 -4 hiiliatomia sisältävällä alkyyliryhmällä, jolloin vähintään yksi alkyyliketjun substituenteista on typpeä sisältävä substituentti, joka voi muodostaa suoloja, ja jol-5 loin vähintään yksi tämän ketjun substituenteista on 1-tai 2-asemassa.

Täten saadut yleiskaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa suoloiksi.

Esimerkkeinä farmaseuttisesti hyväksyttävistä suo-10 loista voidaan mainita erityisesti mineraalihappojen ad-ditiosuolat, kuten hydrokloridit, hydrobromidit, sulfaatit, nitraatit, fosfaatit, tai orgaanisten happojen addi-tiosuolat, kuten asetaatit, propionaatit, sukkinaatit, maleaatit, fumaraatit, metaanisulfonaatit, p-tolueenisul-15 fonaatit, isotionaatit, sitraatit, tartraatit tai näiden yhdisteiden substituoidut johdannaiset.

Seuraavassa taulukossa on esitetty tulokset vertailukokeista, joissa esimerkkien 1 - 4 ja 6 - 11 yhdisteiden saantoja on verrattu EP-hakemuksesta 191 662 esimerkistä 3 20 tunnetun yhdisteen saantoon, jonka esimerkin 3 yhdiste on ainoa esimerkki, jonka lopputuotteen puhtaus on verrattavissa esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden puhtauteen. Tuloksista ilmenee, että jokseenkin kaikissa tapauksissa isomeerien ja A2 saannot sa-25 moinkuin isomeerin A2 saannot ovat suuremmat ja jopa huomattavasti suuremmat kuin EP-patentin mukaisella menetelmällä saatu saanto. Esillä olevan hakemuksen esimerkin 5 tapauksessa ei voitu suorittaa vertailua, koska menetelmä toteutettiin lähtemällä suoraan pristinamysiini IA:sta vä-30 lituotesulfidia eristämättä. Esillä olevan keksinnön etuna on näin ollen isomeerin Ax ja A2 sekä yksinään saadun isomeerin A2 saannon kasvaminen. Uuden menetelmän hyvänä puolena on lisäksi, että reaktio suuntautuu isomeerin A2 muodostumiseen ja se, että saadaan puhtaampia lopputuotteita, 35 jolloin vältytään jälkeenpäin kromatografoimalla suoritet- 8 86429 tavista puhdistusoperaatioista. Esillä olevan keksinnön mukainen menetelmä on sitäkin vähemmän ilmeinen, kun kirjallisuuden perusteella olisi ilmeistä, että kaliummono-persulfaatin käyttö hapettimena ei sallisi sulfidien muut-5 tua sulfosideiksi ilman että molekyylin muu osa muuttuu.

li 9 86429

Vertailukoetulokset

Esimerkin Lähtöaine Saatu yhdiste Saanto nro (g) (g) % 1 13 g 9,9 g 70,5 % (isomeeri A) (isomeeri A2 85 % (Ax + A2) isomeeri Aj 10 %) 61,3 % (A2) 2 3g 2,4 g 72,5% (isomeeri A) (isomeeri A2 88 % (AL + A2) isomeeri A2 6 %) 67,9 % (A2) 3 3,2 g 2,2 g 61,7 % (A2) (isomeeri A) (isomeeri A2 80 %) 4 2g 1,5 g 70,2% (isomeeri A) (isomeeri A2 90 % (Ar + A2) isomeeri A: 10 %) 66.5 % (A2) 6 50 g 31 g 57,5 % (isomeeri A2 85 % (At + A2) isomeeri A2 10 %) 51.5 % (A2) 111 7 2 g 1,6 g 69,7% : : (isomeeri A) (isomeeri A2 90 % (A2 + A2) .. . isomeeri A2 10 %) : V 61,9 % (A2) :V; 8 6 g 1,7 g 24,9 % (A2) (isomeeri) (isomeeri A2 90 %) 9 25, 5 g 11,3 g 43,4% (A2) (isomeeri A2) 10 S6429

Esimerkin Lähtöaine Saatu yhdiste Saanto nro (g) (g) % 5 10 9/1 9 3,4 g 35,7 % (A2) (isomeeri A) (isomeeri A2) 11 g 9,7 g 63,4 % (A,) (isomeeri A) (isomeeri A2) 10 EP 191 662 53,2 g 10,9 g S 32,2 % (isomeeri A < 75 %) (isomeeri A2 60 % (A: + A2) esimerkki 3 isomeeri Ax 15 %) + 5 g 28,2 % (isomeeri A2) (A2 koko- 15 naan)

Seuraavat ei-rajoittavat esimerkit kuvaavat, miten keksintö voidaan toteuttaa käytännössä. Esimerkeissä kuvatut NMR-spektrit esittävät kaikille kaavan (I) mukaisille 20 tuotteille yhteiset yleisominaisuudet sekä jokaisen tuotteen erityisominaisuudet substituenttiryhmien mukaan. Esimerkeissä mainitaan ainoastaan vaihtuvista radikaaleista johtuvat erityisominaisuudet. Yleiskaavan (I) mukaisten yhdisteiden kaikki protonit on numeroitu seuraavan kaavan • -. 25 mukaisesti: o

·* 11 ^0H

*. 32 L 3 10 r w33 L·5 O

CH.^ A5 λ n CH3 . ; CH, t-0» ·.* ^R3

R - -SO-CH-CH-NK

i V I I \ ... 35 Rx R2 R4 11 86429

Ellei muutoin mainita, kaikki spektrit on mitattu 250 MHz:ssä deuterokloroformissa; kemialliset siirtymät ilmoitetaan ppm:nä verrattuna tetrametyylisilaanin signaaliin. Seuraavassa lyhenteitä: 5 s = singletti d = dubletti t = tripletti mt = multipletti m massiivinen 10 dd = dubletin dubletti dt = tripeltin dubletti ddd * dubletin dubletin dubletti dddd * dubletin dubletin dubletin dubletti

On ymmärrettävä, että eri isomeerit on luokiteltu 15 mielivaltaisesti NMR-analyysissa todettujen kemiallisten siirtyimen mukaisesti.

Isomeereiksi A2 ja A2 kutsutaan niitä yleiskaavan (I) mukaisia isomeerejä, joiden ominaisuudet ovat seuraa-vat: 20 noin 1,7 (s, -CH3 kohdassa 33); noin 3,8 (s, >CH2 kohdassa 17)? <5 (d, -H27) isomeeri A2 tai >5 (d, -H27) isomeeri Aj; noin 5,50 (suuri d, -H13); noin 6,20 (d, -Hu); noin 6,6 (>NH kohdassa 8); 28 (s, -H20).

. ·*· Isomeereiksi Bx ja B2 kutsutaan ne yleiskaavan (I) .· ·. 25 mukaisia isomeerejä, joiden ominaisuudet ovat seuraavat: .···. noin 1,5 (s, -CH3 kohdassa 33); noin 3,7 ja 3,9 (2d, >CH2 kohdassa 17); noin 4,8 (mt, -H13); <5 (d, -H27) isomeeri B2 tai >5 (d, -H27) isomeeri Bx; noin 5,70 (rajalla AB; -Hn ja -H10); noin 7,7 (>NH kohdassa 8); noin 7,8 (s, 30 -H20).

Isomeeriksi A kutsutaan sitä yleiskaavan (II) mukaista isomeeriä, jonka NMR-ominaisuudet ovat identtiset yllä esitettyjen yleiskaavan (I) mukaisten isomeerien ja A2 arvojen kanssa, kun kohdassa 27 olevan H arvo on: 35 4,7 (d, J < 1 Hz).

i2 86429

Isomeeriksi B kutsutaan sitä yleiskaavan (II) mukaista isomeeriä, jonka NMR-ominaisuudet ovat identtiset yllä esitettyjen yleiskaavan (I) mukaisten isomeerien Bx ja B2 arvojen kanssa, kun kohdassa 27 olevan H arvo on: 5 4,6 (d, J > 2,5 Hz).

Esimerkki 1

Liuokseen, joka sisälsi 13 g 26-(2-dietyyliamino-etyyli)tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) suspensiona 170 cm3:ssa tislattua vettä, lisättiin 15 min aikana 10 0 °C:ssa 40 cm3 vesiliuosta, joka sisälsi 8,1 g Oxone®.

Saatua seosta sekoitettiin 30 min 0 °C:ssa, jonka jälkeen lisättiin 1,3 g mustaa NORIT SX ULTRA ja pieni määrä nat-riumtiosulfaattia. Sekoitettiin 30 min 20 °C:ssa, jonka jälkeen suspensio suodatettiin Celitern läpi ja huuhdel-15 tiin 50 cm3:11a tislattua vettä. Liuoksen pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia ja pestiin 3 kertaa 100 cm3:11a dikloorimetaania. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin, väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30 20 °C:ssa, jolloin saatiin 9,9 g kirkasta beigen väristä kiinteää ainetta, joka sisälsi 85 % 26-(2-dietyyliaminoetyy-li)sulfinyyli-pristinamysiiniä IIB (isomeeri A2), 10 % isomeeriä Aj ja 5 % 26-(2-dietyyliaminoetyyli)sulfonyyli-pristinamysiiniä IIB.

25 Kiteinen 26-(2-dietyyliaminoetyyli)-sulfinyyli- pristinamysiini IIB voidaan tuottaa seuraavalla tavalla:

Yllä saatu kiinteä aine (5 g) otettiin 13 cm3:iin asetonitriiliä. Liuotettiin kuumentaen, jonka jälkeen lisätään 10 cm3 eetteriä ja kiteet irrotettiin kaapimalla. 30 Kiteet suodatettiin, pestiin eetterillä ja kuivattiin alipaineessa (270 Pa) 20 °C:ssa. Täten saatiin 3,9 g 26-(2-dietyyliaminoetyyli)sulfinyyli-pristinamysiiniä IIB (isomeeri A2: 85 %, isomeeri A^ 15 %) valkoisina kiteinä, joiden sulamispiste on 116 °C.

35 13 86429 NMR-spektri (isomeeri A2) 1,03 (t, -N(CH2CH3)2) 1.75 (s, -CH3 kohdassa 33) 2.05 ja 2,55 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 5 2,45 ä 2,70 (mt, -N(CH2CH3)2) 2,70 ä 3,10 (mt, -SCH2-CH2-) 0 2.75 (mt, H en 4) 2,92 ä 3,10 (mt, >CH2 kohdassa 15) 10 3,22 (mt, H kohdassa 26) 3.82 (s. >CH2 kohdassa 17) 4,81 (d, H kohdassa 27) 5.5 (d, H kohdassa 13) 6,19 (d, H kohdassa 11) 15 6,50 (dd, >NH kohdassa 8) 6,58 (dd, H kohdassa 5) 8,12 (s, H kohdassa 20) NMR-spektri (isomeeri Ax) 20 1,04 (t, -N(CH2CH3)2) 1,69 (s, -CH2 kohdassa 33) 2 ä 2,3 (mt, >CH2 kohdassa 25) 2.60 (mt, >N-CH2-CH3) 2.7 ä 2,95 (mt, -S(0)-CH2-CH2-N) 25 2,7 (mt, H kohdassa 4) 2,86 ja 3,04 (2dd, >CH2 kohdassa 15) 3,28 (mt, H en 26) 3,78 (AB-systeemi, >CH2 kohdassa 17) 5,25 (d, H kohdassa 27) 30 5,4 (d, H kohdassa 13) 6,15 (d, H kohdassa 11) 6.60 (dd, H kohdassa 5) 6.83 (dd, >NH kohdassa 8) 8.08 (s, H kohdassa 20) 35 i4 86429 26-(2-dietyyliaminoetyyli)tiopristinamysiini IIB voidaan valmistaa kuten US-patenttijulkaisussa 4 590 004 on esitetty.

Esimerkki 2 5 Liuokseen, joka sisälsi 3 g 26-(2-dietyyliamino- etyyli)tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) suspensiona 30 cm3 tislattua vettä ja 6 cm3 etanolia sisältävässä seoksessa, lisättiin 10 min -5 °C:ssa 10 cm3 vesiliuosta, joka sisälsi 1,9 g Oxone®. Saatua seosta sekoitettiin 10 min, 10 jonka jälkeen reaktioseos pestiin 2 kertaa 20 cm3:11a di-kloorimetaania. Vesifaasin pH-arvo säädettiin arvoon 7 lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia, jonka jälkeen uutettiin 4 kertaa 50 cm3:11a dikloorimetaania. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suo-15 datettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 40 °C:ssa. Täten saatiin 2,4 g valkoista kiinteää ainetta, joka sisälsi 26-(2-dietyyliaminoetyyli)sulfinyyli-pris-tinamysiiniä IIB (isomeeriä A2: 88 %, isomeeriä A^ 6 %) ja 6 % 26-(2-dietyyliaminoetyyli)sulfonyylipristinamysiiniä 20 HB. Saadun tuotteen NMR-arvot ovat identtiset esimerkin 1 tuotteen arvojen kanssa.

Esimerkki 3

Liuokseen, joka sisälsi 3,2 g 26-[1-dietyyliamino-2(R)-propyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeriä A: 87 %, 25 B: 13 %) liuotettuna 48 cm3: iin metanolia, lisättiin varovasti -30 °C:ssa 32 cm3 tislattua vettä, joka sisälsi 1,65 9 Oxone®. Pidettiin 30 min -30 °C:ssa ja 15 min -40 °C:ssa, jonka jälkeen lisättiin 30 cm3 tislattua vettä ja 3 g mustaa NORIT SX ULTRA. Seosta sekoitettiin 30 min 20 °C:ssa, 30 suodatettiin Celite:n läpi ja huuhdeltiin 50 cm3:11a tislattua vettä. Vesifaasi pestiin 2 kertaa 100 cm3:11a etyyliasetaattia, ja sen jälkeen 50 cm3:11a etyylieetteriä, ennenkuin pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia, jonka jälkeen uutettiin 2 kertaa 250 • - 35 cm3:11a dikloorimetaania. Orgaaniset faasit pestiin 50 is 8 6 429 cm3:lla tislattua vettä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa. Täten saatiin 2,4 g erittäin kirkasta keltaista marenkia, jota ravisteltiin 40 cm3:ssa pentaani-di-5 etyylieetteriseosta (50:50 tilavuutena laskettuna). Suoda tuksen jälkeen kuivattiin alipaineessa (270 Pa) 20 °C:ssa, ja saatiin 2,2 g 26-[l-dietyyliamino-2(R)-propyyli]sulfi-nyyli-pristinamysiiniä IIB (isomeeriä A2: 80 %) valkoisena rikkonaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 10 140 °C.

NMR-spektri 1,02 (t, -N(CH2-CH3)2)

S H

l,34(d, /\/ ) 15 0 C - CH2 - N(C2H5) ch3 1.72 (s, -CH3 kohdassa 33) 2,01 ja 2,55 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 2,45 - 2,70 (mt, 1H de -CH2-N(CH2-CH3) ja 20 -N(CH2-CH3)2) 2,90 (mt, 1H de -CH2-N(CH2CH3)2) 2,76 (mt, H kohdassa 4) 2,88 ja 3,08 (2dd, >CHX kohdassa 15) 3 (mt, -S-CH-) 25 ί CH3 3.73 (mt, H kohdassa 26) 3,80 (s, >CH2- kohdassa 17) 4,92 (iso s, H kohdassa 27) 5,42 (d, H kohdassa 13) 30 6,15 (d, H kohdassa 11) 6,55 (dd, H kohdassa 5) 6,70 (dd, >NH kohdassa 8) 8,06 (s, H kohdassa 20) 26-[l-dietyyliamino-2(R)-propyyli]tiopristina-35 mysiini llB voidaan tuottaa seuraavalla tavalla: ie 86429 10,5 g pristinamysiiniä IIft suspensiona sisältävään metanoliin (200 cm3) lisättiin -30 °C:ssa typen alla 3,2 cm3 l-dietyyliamino-2(R)-tiolipropaania. Sekoitettiin 18 tunnin ajan -30 °C:ssa, jonka jälkeen lisättiin 2 5 cm3 metyyliakrylaattia ja sekoitettiin 1 tunti. Lisättiin 200 cm3 tislattua vettä, kaliumin hapanta sulfaattia, kunnes pH-arvo oli 4 -10 °C:ssa, jonka jälkeen lisättiin 10 g mustaa N0RIT SX ULTRA. Ravisteltiin 30 min 0 °C:ssa, jonka jälkeen seos suodatettiin Celite:n läpi ja pestiin 150 10 cm3:11a tislattua vettä. Vesifaasi pestiin 100 cm3:11a etyyliasetaattia, 100 cm3:11a etyylieetteriä, jonka jälkeen pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä kiinteää natrium-karbonaattia. Uutettiin 200 cm3:11a dikloorimetaania, jonka jälkeen orgaaninen faasi pestiin 100 cm3:11a vettä, kuivat-15 tiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa. Saatu kiinteä aine trituroitiin 100 cm3:ssa etyylieetteriä, suodatettiin sintterilasin läpi ja kuivattiin alipaineessa (270 Pa) 20 °C:ssa. Täten saatiin 3,35 g 26-[l-dietyyliamino-2(R)-pro-20 pyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeriä A: 85 %, isomeeriä B: 15 %) kirkkaana beigen värisenä kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 130 °C.

NMR-spektri (isomeeri A) 1,03 (t, N(CH2CH3)2) 25 v

]-N

1/32 (d, s

\ H

. 30 I N(CH2CH3)2 C—3 1,72 (s, -CH3 kohdassa 33) 1,88 ja 2,10 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 35 2,55 (mt, -N(CH2CH3)2) 17 86429 2,45 ja 2,60 (2mt, -CH2-N(CH2CH3)2) 2.78 (mt, H kohdassa 4) 2,92 ja 3,10 (2dd, >CH2 kohdassa 15) 3 (mt, -S-CH-) 5 CH3 3.52 (mt, H kohdassa 26) 3,82 (s, >CH2 kohdassa 17) 4.79 (iso s, H kohdassa 27) 5,49 (d, H kohdassa 13) 10 6,13 (d, H kohdassa 11) 6,32 (m, >NH kohdassa 8) 6.52 (dd, H kohdassa 5) 8,13 (s, H kohdassa 20) 15 (isomeeri B) 1 (t, -N(CH2CH3)2

N-N

20 1'34 <d' \ - 'j N(CH2CH3)2 ch3 .. 25 1,50 (s, -CH3 kohdassa 33) 2.05 ja 2,5 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 2.5 (mt, >N-CH2-CH3) 2,44 ja 2,55 (2mt, -CH2-N(CH2CH3)2) 2,62 (mt, H kohdassa 4) 30 2,74 ja 3,10 (2dd, >CH2 kohdassa 15) 3,01 (mt, -S-CH-) . . CH3 3,69 ja 3,89 (2d, >CH2- kohdassa 17) 3,74 (mt, H kohdassa 26) : 35 4,01 (d, J = 2,5, H kohdassa 27) is 86429 4,80 (AB systeemi, H kohdassa 13 ja H kohdassa 14) 5,65 (d, H kohdassa 11) 6,60 (dd, H kohdassa 5) 7,71 (mt, >NH kohdassa 8) 5 7,80 (s, H kohdassa 20) l-dietyyliamino-2(R)-tiolipropaani voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Suspensioon, joka sisältää 34,2 g litium- ja alu-miniumhydridiä 1600 cm3:ssa etyylieetteriä, lisättiin tip-10 pa kerrallaan 1 tunnin 20 min aikana 137,5 g (R)-N,N-di-etyyli-2-merkapto-propionamidia liuotettuna 500 cm3:iin etyylieetteriä. Reaktioseos pidettiin tämän jälkeen 2 tuntia noin 0 °C:ssa. Lisättiin 40 cm3 tislattua vettä, siten ettei seoksen lämpötila noussut yli 20 °C, jonka jälkeen 15 lisättiin 29,4 cm3 5N soodaa ja 133 cm3 tislattua vettä. Reaktioseos suodatettiin ja suodoksen pH säädettiin arvoon 8 lisäämällä 70 cm3 etikkahappoa. Saatu seos suodatettiin uudestaan, huuhdeltiin 3 kertaa 300 cm3:11a etyylieetteriä, jonka jälkeen suodos kuivattiin natriumsulfaatilla, 20 suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) noin 30 °C:ssa. Saatiin keltainen öljy, joka puhdistettiin tislaamalla alipaineessa (1,3 kPa). Täten saatiin 101 g l-dietyyliamino-2(R)-tiolipropaania värittömänä öl-. jynä (kp.13kPa = 55-56 °C; [a]30 = -37,1° (c = 4,8, :: 25 ch3oh)).

(R)-N,N-dietyyli-2-merkapto-propionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 5N soodaliuokseen (517 cm3), joka pidettiin 20 °C:s-sa, lisättiin 30 minuutin ajan 105 g (R)-N,N-dietyyli-2-30 tioasetyyli-propionamidia 600 cm3:ssa etyylieetterissä.

Reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia 30 min noin 20 °C:ssa. Vesifaasi erotettiin dekantoimalla.

Vesifaasin pH säädettiin tämän jälkeen arvoon 5-6 lisäämällä varovaisesti 140 cm3 etikkahappoa. Saatu seos 35 uutettiin 300 cm3:lla dikloorimetaania, sitten 200 cm3:lla i9 8 6 429 dikloorimetaania, yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) noin 30 °C:ssa. Täten saatiin 78,6 g (R)-N,N-dietyyli-2-merkapto-propionamidia violetin väri-5 senä öljynä ( [a] 30 = -21,1° (c = 3,8; CH30H)).

(R) -N,N-dietyyli-2-tioasetyyli-propionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 72,6 g tioetikkahapon kaliumsuolaa suspensiona sisältävään 300 cm3:iin etanolia lisättiin 88,3 g (S)-N,N-10 dietyyli-2-kloori-propionamidia liotettuna 150 cm3: iin etanolia. Reaktioseosta kuumennettiin 2 tuntia noin 60 °C:ssa, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (130 Pa) noin 50 °C:ssa. Saatu jäännös otettiin 500 cm3:iin dikloorimetaania, sekoitettiin pestiin 300 cm3:11a tislattua vet-15 tä, 300 cm3:11a 10-% kaliumbikarbonaattiliuosta ja 300 cm3:11a tislattua vettä. Orgaaninen faasi dekantoitiin, kuivattiin natriumsulfaatilla ja 1 g:11a 3S-mustaa, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) noin 30 °C:ssa. Saatu jäännös tislattiin alipaineessa (17 20 Pa). Täten saatiin 105,5 g (R)-N,N-dietyyli-2-tioasetyy- li-propionamidia vaaleankeltaisena öljynä (kp.17 Pa = 105-107 °C; [a]30) +156° (c = 18,1; CHC13)).

(S) -N,N-dietyyli-2-kloori-propionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: - 25 Liuokseen, joka sisälsi 175,2 g (S)-2-kloori-pro- pionyylikloridia 900 cm3:ssa kloroformissa 0 °C:ssa, lisättiin 480 cm3 dietyyliamiinia 1 tunnin aikana. Reaktioseok-seen lisättiin 400 cm3 tislattua vettä ja 300 cm3 dikloorimetaania. Orgaaninen faasi dekantoitiin, pestiin 300 cm3:l-30 la 2N kloorivetyhappoa sisältävää vesiliuosta ja 400 cm3:l-la tislattua vettä. Orgaaninen faasi kuivattiin natrium-sulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) noin 30 °C:ssa. Saatu jäännös tislattiin alipaineessa (17 Pa). Täten saatiin 161,9 g (S)-N,N-di-35 etyyli-2-kloori-propionamidia värittömänä öljynä (kp.17Pa = 83-85 °C; [a]30 = +39° (c = 10,5; CHC13) ).

20 ö 6 4 2 9 (R)- ja (S)-2-kloori-propionyylikloridit voidaan valmistaa julkaisussa S-C.J. FU, S.M. BIRNBAUM ja J.P. GREENSTEIN, J.Am.Chem.Soc., 76, 6054 (1954) esitetyn menetelmän mukaisesti.

5 Esimerkki 4

Liuokseen, joka sisälsi 2 g 26-[l-dietyyli-2(S)-propyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) 30 cm3:ssa metanolia, lisättiin 30 min aikana -60 °C:ssa 20 cm3 1,01 g Oxonew sisältävää vesiliuosta. Saatua suspensiota 10 sekoitettiin 30 min -60 °C:ssa ja 16 tuntia -20 °C:ssa. Tämän jälkeen lisättiin 0,2 g Oxone® liuotettuna 5 cm3:iin vettä ja sekoitettiin 30 min -20 °C:ssa. Reaktioseos laimennettiin 100 cm3:lla vettä, lisättiin 0,5 g mustaa NORIT SX ULTRA, sekoitettiin 15 min, suodatettiin Celitern läpi 15 ja huuhdeltiin 3 kertaa 5 cm3:11a vettä. Vesifaasi uutettiin 3 kertaa 50 cm3:11a etyyliasetaattia, säädettiin pH-arvoon 7 lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia, kyllästettiin natriumkloridilla ja pestiin 3 kertaa 50 cm3:11a dikloorimetaania.

20 Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin magne siumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa. Täten saatiin valkoinen ma-renki, jota sekoitettiin 20 cm3:ssa dietyylieetteriä. Saatu kiinteä aine suodatettiin, kuivattiin alipaineessa (270 25 Pa) 20 °C:ssa, jolloin saatiin 26-[l-dietyyliamino-2(S)-propyyli]sulfinyyli-pristinamysiini IIB valkeana kiinteänä aineena (isomeeri A2: 90 %, isomeeri At: 5 %), jonka sulamispiste oli 130 °C ja jonka NMR-arvot ovat identtiset alla olevan esimerkin 5 tuotteen arvojen kanssa.

30 26- [ l-dietyyliamino-2( S) -propyyli] tiopristinamysii- ni IIB (isomeeri A) voidaan saada seuraavalla tavalla: 200 cm3:iin metyleenikloridi-metanoliseosta (50:50 tilavuuksien suhteen), johon oli liuotettu 10,5 g pris-tinamysiiniä IIA, lisättiin -20 °C:ssa typen alla 3,2 g 1-35 dietyyliamino-2(S)-tiolipropaania. Sekoitettiin 70 tuntia -20 °C:ssa, jonka jälkeen reaktioseos väkevöitiin kuivaksi 2i 86429 alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa, jonka jälkeen se otettiin 100 cm3:iin etyyliasetaattia. Saatu liuos pestiin 100 cm3:11a 0,2N hapanta kaliumsulfaattia sisältävää vesiliuosta. Vesifaasi dekantoitiin ja pestiin 3 kertaa 100 cm3:11a 5 etyyliasetaattia. Orgaaninen faasi pestiin 50 cm3:11a tislattua vettä, jonka jälkeen vesifaasit yhdistettiin, pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä 2 g kiinteää natriumbikarbonaattia ja pestiin ensin 100 cm3:11a, sitten 2 kertaa 50 cm3:11a dikloorimetaania. Viimeiset orgaaniset faasit yh-10 distettiin, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa. Saatu kiinteä aine ravisteltiin 150 cm3:ssa etyylieetteriä, suodatettiin ja huuhdeltiin 3 kertaa 10 cm3:ssa eetteriä. Täten saatiin 9,2 g beigen väristä kiinteää ainetta, joka 15 kiteytettiin 20 cm3:sta asetonitriiliä. Suodatettiin, kuivattiin 20 °C:ssa alipaineessa (270 Pa) ja saatiin 2,3 g 26-[1-dietyyliamino-2(S)-propyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) valkoisina kiteinä, joiden sulamispiste oli 128 °C.

20 NMR-spektri 1,04 (t, -N(CH2CH3)2) \

1,39 (d, S H

J^^^N(C2H5)2 25 CH3 1,73 (s, -CH3 kohdassa 33) 1,90 ja 2,13 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 2,4-2,7 (mt, -CH2-N(CH2CH3)2) 30 2,78 (mt, H kohdassa 4) 2,93 ja 3,12 (2dd, >CH2 kohdassa 15) 3,02 (mt, -S-CH-) l~ CH3 3,55 (mt, H kohdassa 26) 35 3,84 (s, >CH2 kohdassa 17) 4,81 (iso s, H kohdassa 27) 22 86429 5,49 (d, H kohdassa 13) 6,15 (d, H kohdassa 11) 6,30 (m, >NH kohdassa 8) 6,53 (dd, H kohdassa 5) 5 8,13 (s, H kohdassa 20) l-dietyyliamino-2(S)-tiolipropaani voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Suspensioon, joka sisälsi 42,6 g litium- ja alu-miinihydridiä 1500 cm3:ssa etyylieetteriä, lisättiin tippa 10 kerrallaan 1 tunnin 20 min ajan 171 g (S)-N,N-dietyyli-2-merkapto-propionamidia liuotettuna 500 cm3:iin etyylieetteriä. Reatkioseos pidettiin tämän jälkeen 2 tuntia 30 min palautuskeitossa ja jäähdytettiin noin 0 °C:seen. Tämän jälkeen lisättiin 49,8 cm3 tislattua vettä siten, että 15 seoksen lämpötila ei noussut yli 20 °C, jonka jälkeen lisättiin 36,6 cm3 5N soodaa ja 166 cm3 tislattua vettä. Reaktioseos suodatettiin, suodoksen pH säädettiin arvoon 8 lisäämällä 70 cm3 etikkahappoa. Saatu seos suodatettiin uudestaan, suodos kuivattiin natriumsulfaatilla, suoda-20 tettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) noin 30 °C:ssa. Saatiin keltainen öljy, joka puhdistettiin tislaamalla alipaineessa (1,3 kPa). Täten saatiin 100 g 1-dietyyliamino-2(S)-tioli-propaania värittömänä öljynä (kP-i.3kP« = 55-56 °C; [a]30 = +39,6° (c = 5,6, CH30H)).

25 (S)-N,N-dietyyli-2-merkapto-propionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 1100 cm3 5N soodaliuosta pidettiin 20 °C:ssa ja siihen lisättiin 30 min aikana 223 g (S)-N,N-dietyyli-2-tio-asetyyli-propionamidia 1000 cm3:ssa etyylieetteriä. Reak-30 tioseosta sekoitettiin 20 tuntia noin 20 °C:ssa. Vesifaasi erotettiin dekantoimalla, pestiin 3 kertaa 250 cm3:11a etyylieetteriä. Vesifaasin pH säädettiin arvoon 5 lisäämällä 280 cm3 etikkahappoa. Saatu seos uutettiin ensin 500 cm3:11a, sitten 2 kertaa 250 cm3:11a dikloorimetaania, yh-35 distetyt orgaaniset faasit kuivattiin natriumsulfaatilla hiilimustan läsnäollessa, suodatettiin ja väkevöitiin kui- 23 8 6 429 vaksi alipaineessa (2,7 kPa) noin 30 °C:ssa. Täten saatiin 171,7 g (S)-N,N-dietyyli-2-merkapto-propionamidia viole-tinvärisenä öljynä ([a]j;0 = +20,7° (c = 3, CH3OH)).

(S)-N,N-dietyyli-2-tioasetyyli-propionamidi voi-5 daan valmistaa seuraavalla tavalla:

Suspensioon, joka sisälsi 16 g tioetikkahapon ka-liumsuolaa 70 cm3:ssa etanolia, lisättiin 20 g (R)-N,N-dietyyli-2-kloori-propionamidi liuotettuna 30 cm3:iin etanolia. Reaktioseosta kuumennettiin tämän jälkeen noin 55 10 °C:ssa 2 tunnin ajan ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (130 Pa) noin 60 °C:ssa. Saatu jäännös trituroitiin 300 cm3:11a dikloorimetaania ja pestiin 200 cm3:11a tislattua vettä. Orgaaninen faasi dekantoitiin, kuivattiin natrium-sulfaatilla, suodatettiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 15 noin 30 °C:ssa. Saatu jäännös tislattiin alipaineessa (17 Pa). Täten saatiin 22 g (S)-N,N-dietyyli-2-tioasetyyli-propionamidia vaalenakeltaisena öljynä (kp.17Pa = 105 -107 °C; [a] 30 = -169° (c = 10, CHC13).

(R)-N,N-dietyyli-2-kloori-propionamidi voidaan val-20 mistaa seuraavalla tavalla:

Liuokseen, joka sisälsi 87,7 g 2-kloori-propionyy-li(R)-kloridia 600 cm3:ssa kloroformia 20 °C:ssa, lisättiin 153 g dietyyliamiinia 1 tunnin ajan. Reaktioseos pestiin 500 cm3:11a tislattua vettä, 3 kertaa 500 cm3:11a IN 25 kloorivetyhappoa ja 500 cm3:11a tislattua vettä. Orgaaninen faasi kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) noin 30 °C:ssa. Saatu jäännös tislattiin alipaineessa (17 Pa). Täten saatiin 43 g (R)-N,N-dietyyli-2-kloori-propionamidia värit-30 tömänä öljynä (kp.17 Pa = 75-80 °C; [a]30 = -43,3° (c = 10; CHC13)).

Esimerkki 5

Suspensioon, joka sisälsi 63 g pristinamysiiniä IIA 630 cm3:ssa metanolia, lisättiin typen alla -38 °C:ssa 30 35 min aikana 17,6 g (S)-l-dietyyliamiini-2-tioli-propaania. Sekoitettiin 20 min ja lisättiin -38 °C:ssa 150 cm3 tis- 24 86429 lattua vettä, jonka jälkeen lisättiin 30 min aikana 410 cm 33,6 g Oxone sisältävää vesiliuosta. Saatua suspensiota sekoitettiin tunnin ajan -38 °C:ssa, lisättiin 1,2 g natriumtiosulfaattia, suodatettiin 20 °C:ssa sintterilasin 5 läpi ja pestiin 3 kertaa 200 cm3:11a tislattua vettä. Vesi-faasiin lisättiin 20 g mustaa NORIT SX ULTRA, sekoitettiin 30 min, suodatettiin Celitern läpi ja suodos pestiin 3 kertaa 200 cm3:11a tislattua vettä. Liuoksen pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä 15 g kiinteää natriumbikarbonaattia, 10 jonka jälkeen pestiin 3 kertaa 500 cm3:11a dikloorimetaa-nia. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin natrium-sulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa. Saatiin 55 g beigen väristä marenkia, jota sekoitettiin 500 cm3:ssa etyylieetteriä. 15 Suodatettiin, pestiin 3 kertaa 50 cm3:11a etyylieetteriä, kuivattiin alipaineessa (270 Pa) 20 °C:ssa ja saatiin 46,6 g valkoista kiinteää ainetta, joka liuotettiin 150 cm3:aan dikloorimetaani-metanoli-seosta (98:2 tilavuuksien suhteen), jonka jälkeen lisättiin 4 cm3 etikkahappoa. Tämä 20 liuos puhdistettiin "flash"-kromatografiällä (eluointiai-ne: dikloorimetaani-metanoli 98:2 tilavuuksien suhteen) ja kerättiin 100 cm3:n fraktiot. Väkevöitiin alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa ja saatiin 36 g kiinteää ainetta, joka liuotettiin 400 cm3:iin tislattua vettä, johon oli lisätty 25 6,5 g hapanta kaliumsulfaattia. Liuos pestiin 4 kertaa 500 cm3:11a etyyliasetaattia, pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä 5 g kiinteää natriumbikarbonaattia, jonka jälkeen uutettiin ensin 200 cm3:11a, sitten 2 kertaa 150 cm3:11a dikloo-rimetaania. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin 30 magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30 °C:ssa, jolloin saatiin 33,8 g beigen väristä marenkia, jota sekoitettiin 300 cm3:ssa etyylieetteriä. Suodatettiin ja eristettiin 29,3 g 26-[l-dietyyliamino-2-propyyli]sulfinyyli-pristinamysiiniä IIB 35 (isomeeri A2) vaaleankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste Oli 140 °C.

25 86429 NMR-spektri (isomeeri A2) 1.05 (t, -N(CH2-CH3)2) | CHj 1,27 (d, OS ^ ) 1,74 (s, -CH3 kohdassa 33) 2.10 (mt, 1H ryhmässä >CH2 kohdassa 25) 2,45 - 2,70 (mt, 1H ryhmässä >CH2 kohdassa 25, 10 1H ryhmässä >CH2-N( CH2CH3 )2, -N(CH2CH3)2) 2,80 (mt, H kohdassa 4) 2,88 (mt, 1H ryhmässä >CH2-N( CH2CH3 )2) 2,90 ja 3,15 (2dd, >CH2 kohdassa 15) 3.06 (mt, -S-CH-)

ψ I

15 0 CH3 3,41 (mt, H kohdassa 26) 3,83 (s, >CH2 kohdassa 17) 4,77 (iso s, H kohdassa 27) 5,50 (d, H kohdassa 13) 20 6,20 (d, H kohdassa 11) 6,55 (mt, >NH kohdassa 8) 6,63 (dd, H kohdassa 5) 8.11 (s, H kohdassa 20)

Esimerkki 6 25 Liuokseen, joka sisälsi 50 g 26-(2-dietyyliamino- etyyli)tiopristinamysiiniä IIB liuotettuna 200 cm3:iin di-kloorimetaania ja 250 cm3:iin tislattua vettä, lisättiin 0 °C:ssa 20 min ajan 30,7 g Oxone® liuotettuna 140 cm3:iin tislattua vettä. Sekoitettiin 10 min, jonka jälkeen dekan-30 toitiin orgaaninen faasi, vesifaasi pestiin 100 cm3:11a dikloorimetaania, jonka jälkeen pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä 120 cm3 kyllästettyä natriumbikarbonaattiliuos-ta. Vesifaasi pestiin 5 kertaa 100 cm3:11a dikloorimetaania säädettäessä pH arvoon 7 lisäämällä joka pesuun natriumbi-35 karbonaattia. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi 26 86429 alipaineessa (2,7 kPa) 40 °C:ssa. Täten saatiin 31 g 26-(2-dietyyliamino-etyyli)sulfinyyli-pristinamysiiniä IIB (isomeeriä A2: 85 %, isomeeriä Aa: 10 %) kirkkaana beigen värisenä jauheena, jonka ominaisuudet ovat identtiset esi-5 merkin 1 tuotteen arvojen kanssa.

Esimerkki 7

Liuokseen, joka sisälsi 2 g 26-(1-dietyyliamino-2(S)-propyyli)tiopristinamysiiniä IIB (isomeeriä A) 30 cm3:ssa etanolia ja 20 cm3:ssa vettä, lisättiin vähitellen 10 0°C:ssa 0,08 cm3 väkevää rikkihappoa, jonka jälkeen lisättiin 0,9 g Oxone® liuotettuna 10 cm3:iin tislattua vettä. Saatua liuosta sekoitettiin 4 tuntia 20°C:ssa. Tämän jälkeen lisättiin kiinteää natriumbikarbonaattia, jotta saavutettiin pH-arvo 4 ja sekoitettiin 2 vuorokautta 20°C:ssa. 15 Tämän jälkeen lisättiin 25 cm3 tislattua vettä, 2 g mustaa NORIT SX ULTRA. Seos suodatettiin Celiten läpi, huuhdeltiin 20 cm3:11a dikloorimetaania, jonka jälkeen pH säädettiin arvoon 7 käyttäen kiinteää natriumbikarbonaattia.

Vesifaasi dekantoitiin ja pestiin kaksi kertaa 25 20 cm3:11a dikloorimetaania. Orgaaniset faasit kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineesssa (2,7 kPa) 40°C:ssa.

Täten saatiin 1,6 g beigen väristä kiinteää ainetta, joka sisälsi 80 % 26—(l-dietyyliamino-2(S)-propyyli)-25 sulfinyyli-pristinamysiinia IIB (isomeeriä A2), 10 % isomeeriä Ax ja 10 % lähtöaineena käytettyä rikkiä, ja jonka ominaisuudet ovat identtiset esimerkissä 4 esitetyn yhdisteen kanssa.

Esimerkki 8 30 Liuokseen, joka sisälsi 6 g 26-(1-dietyyliamino- 2(S)-propyyli)tiopristinamysiiniä IIB (isomeeriä A) 20 cm3:ssa tislattua vettä ja 90 cm3:ssa metanolia -30°C:ssa, lisättiin 0,25 cm3 väkevää rikkihappoa, jonka jälkeen lisättiin varovaisesti 2,7 g Oxone® liuotettuna 10 cm3:iin 35 tislattua vettä. Saatua sameaa liuosta sekoitettiin -30°C:ssa tunnin ajan. Tämän jälkeen seos suodatettiin Ce-

II

27 8 6 429 liten läpi. Suodoksen pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia ja pestiin 3 kertaa 50 cm3:11a dikloorimetaania. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöi-5 tiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa.

Saatua kiinteää ainetta sekoitettiin 20 cm3 etyyliasetaattia ja 70 cm3 etyylieetteriä sisältävässä seoksessa, suodatettiin ja pestiin 50 cm3:11a etyylieetteriä. Täten saatiin 4,6 g kirkkaan beigen väristä kiinteää ainetta, 10 joka puhdistettiin "flash" -kromatografiällä (eluointiai-ne: etyyliasetaatti-metanoli, 90:10 tilavuuksien suhteen), ja kerättiin 15 cm3 fraktiot. Fraktiot 47-54 väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saatiin 1,7 g 26-(l-dietyyliamino-2(S)-propyyli)sulfinyyli-pristi-15 namysiiniä IIB (isomeeriä A2), joka sisälsi 10 % lähtöaineena käytettyä rikkiä, jonka ominaisuudet ovat identtiset esimerkissä 4 esitetyn tuotteen kanssa.

Esimerkki 9

Liuokseen, joka sisälsi 2,5 g 26-(2-dietyyliamino-20 2(S)-propyyli)tiopristinamysiiniä IIB 350 cm3:ssa etano lia, lisättiin -30°C:ssa 200 cm3 tislattua vettä, jonka jälkeen lisättiin varovaisesti 15,1 g Oxone® liuotettuna 70 cm3:iin tislattua vettä. Sekoitettiin 1 tunti 30 min -30°C:ssa, jonka jälkeen lisättiin 3,7 g natriumtiosulfaat-25 tia liuotettuna 20 cm3:iin vettä. Reaktioseos kaadettiin tämän jälkeen 400 cm3: iin tislattua vettä ja 200 cm3: iin dikloorimetaania, ja pH säädettiin arvoon 7 lisäämällä natriumbikarbonaattia. Orgaaninen faasi dekantoitiin ja vesifaasi pestiin 3 kertaa 200 cm3:11a dikloorimetaania. 30 Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Täten saatiin 24 g kirkkaan keltaista kiinteää ainetta, joka puhdistettiin "flash" -kromatograf iällä (eluointi: kloroformi-metanoli, 90:10 tilavuuk-35 sien suhteen). Fraktiot 23-28 (tilavuus 50 cm3) väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jonka jälkeen 28 8 6429 saatiin keltainen marenki, jota sekoitettiin 100 cm3:ssa etyylieetteriä, suodatettiin ja kuivattiin alipaineessa (90 Pa) 20°C:ssa. Täten saatiin 11,3 g 26-(2-dietyyliamino-2(S)-propyyli)sulfinyylipristinamysiiniä IIB (isomeeriä A2) 5 kirkkaan keltaisena jauheena, jonka sulamispiste oli 128°C. NMR-spektri ( 0 N(CH2CH3)2 1,1 (mt, -CH2CH3 ja S-CH2-C^^ ) cf ^CH3 10 1,77 (s, -CH3 kohdassa 33) 2 (mt, 1H de -CH2- kohdassa 25) 2,30 ä 2,7 (mt, 1H de -CH2- kohdassa 25, CHj-CH, -N^ , 1H de -S0-CH2-) 15 CH2-CH3 2,97 (mt, 1H du -SO-CH2-) 2,78 (mt, >CH- kohdassa 4) 2,92 et 3,10 (2dd, -CH2- kohdassa 15) 3,13 (mt, >CH- kohdassa 26) 20 3,50 (mt, >N-CH-) 3,81 (s, -CH2- kohdassa 17) 4,77 (d, >CH- kohdassa 27) 5,52 (d, =CH- kohdassa 13) 6,18 (d, =CH- kohdassa 11) 25 6,48 (mt, -NH- kohdassa 8) 6,57 (dd, =CH- kohdassa 5) 8,12 (s, =CH- kohdassa 20) 26-(2-dietyyliamino-2( S)-propyyli )tiopristinamysii-ni IIB (isomeeri A) voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 30 Typen alla olevaan liuokseen, joka sisälsi 31,5 g pristinamysiiniä IIÄ 230 cm3:ssa metanolia ja 70 cm3:ssa kloroformia, lisättiin -40°C:ssa 10 g 2-dietyyliamino-(S)-propaanitiolia liuotettuna 50 cm3:iin kloroformia. Sekoitettiin 4 vuorokautta -40°C:ssa, jonka jälkeen seos väke-35 vöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 35°C:ssa, jonka jälkeen saatua kiinteää ainetta sekoitettiin 500 cm3:ssa li 29 66429 etyylieetteriä, suodatettiin ja sekoitettiin uudestaan 300 cm3:ssa dietyylieetteriä. Suodatettiin, jonka jälkeen kiinteä aine kuivattiin (90 Pa) 20°C:ssa ja puhdistettiin "flash" -kromatografiällä (eluointiaine: kloroformi-meta-5 noli, 90:10 tilavuuteen nähden) ja kerättiin 100 cm3 fraktiot. Fraktiot 18-30 väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jonka jälkeen saatiin 26,6 g 26-(2-dietyyliamino-2(S)-propyyli)tiopristinamysiiniä II„ kirkkaan keltaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 10 110°C.

NMR-spektri: H N (CH2CH3 ) 2 1,05 (mt, CH3-CH2- ja -S-CH2-C^ ) ^CHj 15 1,72 (s, -CH3 kohdassa 33) 1,95 ä 2,10 (mt, -CH2- kohdassa 25) CH2—CHa 2,50 (mt, -N^ ) ^CH2-CH3 20 2,60, 2,87 et 3,04 (mt, -S-CH2-CH<) 2,77 (mt, >CH- kohdassa 4) 2,9 et 3,10 (2dd, -CH2- kohdassa 15) 3,35 (mt, >CH- kohdassa 26) 3,82 (s, -CH2- kohdassa 17) 25 4,7 (d, =CH- kohdassa 27) 5,47 (d, =CH- kohdassa 13) 6,15 (d, =CH- kohdassa 11) 6,46 (m, -NH- kohdassa 8) 6,54 (dd, =CH- kohdassa 5) 30 (2-dietyyliamino-(S)-propaanitioli voidaan valmis taa seuraavalla tavalla:

Liuokseen, joka sisälsi 39 g 2-dietyyliamino-(S)-isotio-uronium-propyyli-dihydrokloridia 140 cm3:ssa etyylieetteriä, lisättiin 59,4 cm3 5N soodaliuosta. Sekoitettiin 35 30 min typen alla, dekantoitiin vesifaasi ja pestiin 3 kertaa 150 cm3:11a etyylieetteriä. Orgaaniset faasit yhdis- 30 8 6 4 2 9 tettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu neste tislattiin 78°C:ssa 2,7 kPa paineessa, ja saatiin 10,6 g 2-dietyyliamino-(S)-propaanitiolia värittömänä nes-5 teenä (sisälsi 6 % 1-dietyyliaminopropaanitiolia) [α]£0 = +32 ± 0,6 (c = 0,943; etanoli).

2-dietyyliamino-(S)-isotio-uronium-propyyli-dihyd-rokloridi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Liuokseen, joka sisälsi 18,2 g tioureaa 80 cm3:ssa 10 N,N-dimetyyliformamidia, lisättiin 130°C:ssa 45 g 2-dietyy-liamino-l-kloori-(S)-propaani-hydrokloridia liuotettuna 150 cm3:iin N,N-dimetyyliformamidia. Pidettiin 5 min 130°C:ssa, jonka jälkeen liuos jäähdytettiin. Saadut kiteet suodatettiin, pestiin etyylieetterillä ja kuivattiin ali-15 paineessa (90 Pa) 20°C:ssa. Täten saatiin 39 g 2-dietyyli-amino-isotio-uronium-(S)-propyyli-dihydrokloridia valkoisina kiteinä, joiden sulamispiste oli 209°C [a]30 = -2,6 (c = 1; etanoli).

2-dietyyliamino-l-kloori-(S)-propaani-hydrokloridi 20 voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 110 cm3:iin tionyylikloridia lisättiin 2°C:ssa 50 g 2-dietyyliamino-(S)-propanoli-hydrokloridia pienin erin. Saatua liuosta kuumennettiin 4 tunnin ajan 60°C:ssa. Ylimäärä tionyylikloridia poistettiin tislaamalla alipainees-25 sa (90 Pa), jonka jälkeen lisättiin 250 cm3 etyylieetteriä saatuun jäännökseen. Saatu kiinteä aine suodatettiin, huuhdeltiin 300 cm3:11a etyylieetteriä ja kiteytettiin uudestaan 150 cm3:sta metyyli-isobytyyliketonia. Suodatettiin, pestiin etyylieetterillä ja saatiin 45,6 g 2-dietyy-30 liamino-l-kloori-( S)-propaani-hydrokloridia valkoisina ki teinä, joiden sulamispiste oli 103°C [a]p° = 0 (c = 0,7; etanoli).

2-dietyyliamino-(S)-propanoli-hydrokloridi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 35 Suspensioon, joka sisälsi 18,23 g litiumhydridiä ja alumiinia 2000 cm3:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin 20 31 86429 min aikana 48,66 g N-asetyyli-N-etyyli-2-amino-(S)-propa-nolia liuotettuna 300 cm3:iin tetrahydrofuraania. Reaktio-seos pidettiin tämän jälkeen 4 tuntia palautuskeitossa, jonka jälkeen jäähdytettiin 0°C:seen. Tämän jälkeen lisät-5 tiin varovaisesti 22 cm3 tislattua vettä, 16 cm3 5N soodaa ja 72 cm3 tislattua vettä. Sekoitettiin 1 tunti 20°C:ssa, jonka jälkeen seos suodatettiin Celiten läpi. Suodos väke-vöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, otettiin 300 cm3:iin dikloorimetaania, kuivattiin magnesiumsulfaa-10 tiliä, suodatettiin, väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saatiin 42,45 g kirkkaan keltaista liuosta, joka tislattiin alipaineessa. Täten saatiin 26,56 g 2-dietyyliamino-(S)-propanolia värittömänä liuoksena. (Kp. x kPa = 55,5°C).

15 Saatiin 31,41 g 2-dietyyliamino-(S)-propanoli- hydrokloridia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste oli 98°C, lisäämällä 40,5 cm3 4,9 N kloorivety-happoa etyylieetterissä 136 cm3:iin asetonia liuotettua, yllä saatua tuotetta ja suodattamalla saadut kiteet.

20 [<x]d° * +20,7 (c * 1; etanoli).

N-asetyyli-N-etyyli-2-amino-(S)-propanoli voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Liuokseen, joka sisälsi 9,15 g N-etyyli-2-amino- (S)-propanolia 100 cm3:ssa dikloorimetaania, lisättiin 13,7 25 cm3 trietyyliamiinia 0°C:ssa, jonka jälkeen lisättiin 45 min aikana 7,1 cm3 asetyylikloridia. Kun lisäys oli tehty, annettiin lämpötilan nousta 20°C:seen. Reaktioseos laimennettiin 100 cm3:11a vettä, pH säädettiin arvoon 9 lisäämällä natriumkarbonaattia, jonka jälkeen pestiin 2 kertaa 200 30 cm3:11a dikloorimetaania. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saatiin 9,54 g keltaista liuosta, joka tislattiin 108 ± 2°C:s-sa alipaineessa (26,3 Pa). Täten saatiin 6 g väritöntä 35 liuosta, joka sisälsi noin 80 % N-asetyyli-N-etyyli-2-ami- 32 86429 no-(S)-propanolia ja 20 % vastaavaa diasetyylijohdannaista (käytettiin sellaisenaan synteesin jatkossa).

N-etyyli-2-amino-(S)-propanoli voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 5 Suspensioon, joka sisälsi 81 g litium- ja alumiini- hydridiä 4000 cm3:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin 0°C:ssa 227 g 2-asetyyliamino-(S)-etyylipropionaattia liuotettuna 800 cm3:iin tetrahydrofuraania 45 min aikana. Kun lisäys oli suoritettu annettiin lämpötilan nousta 20°C:seen, jonka 10 jälkeen seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 5 tunnin ajan. Jäähdytettiin 0°C:seen, jonka jälkeen lisättiin varovaisesti 97 cm3 tislattua vettä, 72 cm3 5N soodaliuosta ja lopuksi 320 cm3 tislattua vettä. Seos suodatettiin 20°C:ssa Celiten läpi. Suodos väkevöitiin kuivaksi alipaineessa 15 (2,7 kPa) 30°C:ssa, otettiin 500 cm3:iin dikloorimetaania, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saatiin 143 g keltaista liuosta. Tislattiin alipaineessa (460 Pa) 57°C:ssa, jonka jälkeen saatiin 90,8 g N-etyyli-2-ami-20 no-(S)-propanolia värittömänä liuoksena, [a]30 = +45,4 (c = 1,48; etanoli).

2-asetyyliamiini-etyylipropionaatti voidaan valmistaa käyttäen julkaisussa J.P.Wolff III et ai., Biochemistry 2, 493 (1963) esitettyä menetelmää.

25 Esimerkki 10

Toimittiin kuten esimerkissä 9, paitsi että lähtöaineina käytettiin 9,1 g 26-[N-metyyli-N-sykloheksyyli-1-amino-2(S)-propyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) ja 5,1 g Oxone®, jolloin saatiin 8,3 g beigen väristä 30 kiinteätä ainetta, joka puhdistettiin, "flash"-kromatogra-foimalla (eluointiaine : etyyliasetaatti-metanoli tila vuussuhteessa 90:10) ottamalla talteen 20 cm3 fraktioita. Sen jälkeen kun oli haihdutettu kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa fraktiot 32-70 ja ravisteltu saa-35 tua kiinteätä ainetta etyylieetterissä, saatiin 3,4 g 26- 33 86 429 [N-metyyli-N-sykloheksyyli-l-amino-2(S)-propyyli]sulfi-nyylipristinamysiiniä IIB (isomeeri A2) vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, sp. noin 140°C.

NMR-spektri (400 MHz) 5 1-1,3 ja 1,5 ä 1,85 (2mt, CH2 sykloheksyyli) 1,27 (d, 'y ) tS - I ^- o ch3 ch3 1,76 (s, -CH3 kohdassa 33) 10 2,09 ja 2,55 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 2,31 (s, >N-CH3) 2,37 (mt, CH sykloheksyyli) 2,55 ja 2,90 (2dd, >N-CH2-) 2,78 (mt, H kohdassa 4) 15 2,92 ja 3,16 (2dd, CH2 kohdassa 15) 3 (mt, -S-CH <) t 3,41 (d leveä, H kohdassa 26) 3,83 (s, >CH2 kohdassa 17) 20 4,78 (s, H kohdassa 27) 5,48 (d, H kohdassa 13) 6,18 (d, H kohdassa 11) 6,53 (dd, NH kohdassa 8) 6,60 (dd, H kohdassa 5) 25 8,10 (s, H kohdassa 20) 26-[N-metyyli-N-sykloheksyyli-l-amino-2(S)-propyy-li]pristinamysiini IIB (isomeeri A) voidaan valmistaa seu-raavalla tavalla:

Toimittiin kuten esimerkissä 4 valmistettaessa 26-30 [N-dietyyliamino-2(S)-propyyli]tiopristinamysiiniä IIB

(isomeeri A), paitsi että käytetty seos oli metanolikloro-formi tilavuussuhteessa 70:30 ja että lähtöaineet olivat 5,9 g N-metyyli-N-sykloheksyyli-l-amino-2(S)-propaanitio-lia, jolloin saatiin 48 tunnin kuluttua lämpötilan oltua 35 -30°C 10,6 g 26-[N-metyyli-N-sykloheksyylil-amino-2(S)-pro- 34 8 6 429 pyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) beigen värisenä kiinteänä aineena, sp. noin 160°C.

NMR-spektri: 1-1,35 (mt, >CH2 sykloheksyyli) 5 1,55-1,8 (mt, >CH3 sykloheksyyli) 1,36 (d, -S-CH-Nc) CH3 1,72 (s, -CH3 kohdassa 33) 1,90 ja 2,10 (2mt, >CH3 kohdassa 25) 10 2,31 (s, >N-CH3) 2,40 (mt, -*CH sykloheksyyli) 2,5-2,6 (2dd, >N-CH2-) 2,77 (mt, -H kohdassa 4) 2,95 ja 3,13 (2dd, >CH2 kohdassa 15) 15 3,05 (mt, -SCH-) 3,56 (mt, -H kohdassa 26) 3.82 (s, >CH2 kohdassa 17) 4.82 (s, leveä, -H kohdassa 27) 5.48 (d, -H kohdassa 13) 20 6,17 (d, -H kohdassa 11) 6.48 (mt, >NH kohdassa 8) 6,54 (dd, -H kohdassa 5) 8,13 (s, -H kohdassa 20) N-metyy1i-N-sykloheksyyli-1-amino-2(S)-propaani-25 tioli voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Suspensioon, joka sisälsi 15,7 g litiumaluminium-hydridiä 850 cm3:ssa etyylieetteriä, lisättiin tipoittain 1 h 30 min aikana 79,34 g N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-mer-kapto-(S)-propionamidia liuotettuna 200 cm3:iin etyylieet-30 teriä. Reaktioseosta keitettiin palautusjäähdyttäen 2 h ajan ja jäähdytettiin sitten noin 0°C:seen. Sitten lisättiin 45 cm3 tislattua vettä siten, että lämpötila ei ylittänyt 20°C; sen jälkeen lisättiin 45 cm3 5N natriumhydrok-sidia ja 150 cm3 tislattua vettä. Reaktioseoksen pH säädet-35 tiin arvoon 8 lisäämällä 40 cm3 etikkahappoa. Saatu seos 35 86429 suodatettiin, suodos dekantoitiin ja vesifaasi pestiin 4 kertaa 400 cm3:llä etyylieetteriä. Eetterifaasit yhdistettiin, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) noin 5 30°C:ssa. Saatiin keltainen Öljy, joka puhdistettiin tis laamalla alennetussa paineessa (1,3 kPa). Tällöin saatiin 37 g N-metyyli-N-sykloheksyyli-l-amino-2(S)-propaanitiolia värittömänä öljynä, kp. 0 2 kPa = 110-113°C; [a]30 = +27,2° (c - 2,4 CHC13).

10 N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-merkapto-( S )-propion- amidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Liuokseen, joka sisälsi 89,76 g N-metyyli-N-syk-loheksyyli-2-asetyylitio-(S)-propionamidia 85 cm3:ssa meta-nolia, lisättiin 13°C:ssa typpiatmosfäärissä 80 cm3 10N 15 natriumhydroksidivesiliuosta. Reaktioseosta sekoitettiin 3 h ajan 40°C:ssa, reaktioseos haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa), jäännös liuotettiin 200 cm3:iin tislattua vettä ja pestiin 2 kertaa 200 cm3:llä etyylieetteriä. Sen jälkeen dekantoitiin ja vesifaasin pH säädet-20 tiin arvoon 5 lisäämällä hitaasti 30 cm3 etikkahappoa. Saatu seos uutettiin 3 kertaa 100 cm3:llä kloroformia. Orgaaniset faasit yhdistettiin, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) noin 30°C:ssa. Tällöin saatiin 80,54 g N-me-25 tyyli-4-sykloheksyyli-2-merkapto-(S)-propionamidiaöljynä, [a] o° = + 24,5 (c = 1,1 CH3CI3).

N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-asetyylitio-(S)-pro-pionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Suspensioon, joka sisälsi 56,2 g merkaptoetikka-30 hapon kaliumsuolaa 200 cm3:ssä etanolia, lisättiin 80 g N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-kloori-(R)-propionamidia liuotettuna 60 cm3:iin etanolia. Reaktioseosta kuumennettiin noin 69°C:ssa 2 h 45 min ajan ja sitten haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa (130 Pa) 40°C:ssa. Jäännös tri-35 turoitiin 300 cm3:n kanssa dikloorimetaania, suodatettiin 36 86429 ja pestiin 2 kertaa 300 cm3:llä tislattua vettä, sitten 300 cm3:llä KHC03:n 10-%:ista vesiliuosta ja sen jälkeen vielä 300 cm3:llä tislattua vettä. Orgaaninen faasi dekantoitiin, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutet-5 tiin kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) noin 30°C:ssa. Tällöin saatiin 90,6 g N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-asetyy-litio-(S)-propionamidia kellertävän oranssinvärisenä öljynä, [a]30 = -97,8° (c = 1 CHC13).

N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-kloori-(R)-propionami-10 di voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Liuokseen, jonka lämpötila pidettiin -4°C:n ja +2°C:n välillä ja joka sisälsi 70,7 g 2-kloori-(R)-pro-pionyylikloridia 320 cm3:ssä kloroformia, lisättiin 294 cm3 N-metyyli-N-sykloheksyyliaminia 1 h aikana. Reaktioseos 15 pestiin 250 cm3:llä tislattua vettä, 3 kertaa 250 cm3:llä kloorivetyhapon IN vesiliuosta, sitten 4 kertaa 250 cm3:llä tislattua vettä. Orgaaninen faasi kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) noin 30°C:ssa. Jäännös tislattiin alennetussa 20 paineessa (135 Pa). Tällöin saatiin 80,45 g N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-kloori-(R)-propionamidia värittömänä öljynä, kp o 13 kPa = 125°C; [a]30 = -34° (ilman liuotinta).

Esimerkki 11

Toimittiin kuten esimerkissä 9, paitsi että läh- 25 töaineena käytettiin 14,4 g 26-[l-di-isopropyyliamino- 2(S)-propyyli]pristinamysiiniä IIB (isomeeri A) ja 8,2 g 0

Oxone , jolloin saatiin 14,1 g beigenväristä kiinteätä ainetta, joka puhdistettiin "flash”-kromatografoimalla (eluointiaine : etyyliasetaattimetanoli tilavuussuhteessa 30 90:10) ottamalla talteen 20 cm3:n fraktioita. Fraktiot 62- 81 haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saatiin keltainen kiinteä aine, jota ravisteltiin etyylieetterissä, minkä jälkeen suodatettiin ja kuivattiin 20°C:ssa alennetussa paineessa (270 kPa). Täl-35 löin saatiin 9,7 g 26-[l-di-isopropyyliamino-2(S)-propyy- 37 8 6 4 2 9 li]sulfinyylipristinamysiiniä IIB (isomeeri A2) keltaisena kiinteänä aineena, sp. noin 120°C.

NMR-spektri 1 (mt, -CH3 isopropyyli) 5 1,24 (d,XS-|H-CH2-N<) 0* CH3 1,74 (s, -CH3 kohdassa 33) 2 ja 2,53 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 2,67 ja 2,84 (2mt, >N-CH2-) 10 2,77 (mt, -H kohdassa 4) 2,87 (mt, -S-CH<) £ 2,85-3,05 (mt, -N(-CH<)2 0 1H >CH2 kohdassa 15) 3,15 (dd, 1H >CH2 kohdassa 15) 15 3,37 (d leveä, -H kohdassa 26) 3,81 (s, >CH2 kohdassa 17) 4,65 (s, leveä, -H kohdassa 27) 5,51 (d, -H kohdassa 13) 6,20 ((d, -H kohdassa 11) 20 6,64 (dd + mt, -H kohdassa 5 ja >NH kohdassa 8) 8,11 (s, -H kohdassa 20) 26-[l-di-isopropyyliamino-2(S)-propyyli]tiopristin-amysiini IIB (isomeeri A) voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 25 Toimittiin kuten esimerkissä 4 valmistettaessa 26- [l-dietyyliamino-2(S)-propyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) paitsi, että liuotinseoksena käytettiin meta-noli-kloroformiseosta tilavuussuhteessa 80:20 ja lähtöaineina 20 g pristinamysiiniä IIA ja 8,88 g 1-di-isopropyy-30 liamino-2(S)-propaanitiolia. Tällöin saatiin, sen jälkeen kun lämpötila oli pidetty -30°C:ssa 48 h ajan, vaalean bei-genvärinen kiinteä aine, jota ravisteltiin 150 cm3:ssä etyylieetteripentaaniseosta (tilavuussuhde 50-50), minkä jälkeen suodatettiin ja kuivattiin 20°C:ssa alennetussa 35 paineessa (270 Pa). Tällöin saatiin 16,8 g 26-[1-di-iso- 38 8 6 429 propyyliamino-2(S)-propyyli]tiopristinamysiiniä IIB (isomeeri A) vaalean beigenvärisenä kiinteänä aineena, sp. noin 140°C.

NMR-spektri (400 MHz) 5 1 (mt, -CH3 isopropyyli) 1,39 (d, -S-CH-CH2-N^*Ns )

CH3 Y

1,75 (s, -CH3 kohdassa 33) 1,93 ja 2,15 (2mt, >CH2 kohdassa 25) 10 2,41 ja 2,68 (2dd, >N-CH2-) 2,82 (mt, -H kohdassa 4) 2,96 (mt, -S-CH<) 3 ja 3,15 (2dd, >CH2 kohdassa 15) 3,05 (mt, -N(-CH<)2) 15 3,57 (mt, -H kohdassa 26) 3.88 (s, >CH2 kohdassa 17) 4.88 (s leveä, -H kohdassa 27) 5,57 (d, -H kohdassa 13) 6,17 (d, -H kohdassa 11) 20 6,35 (mt, >NH kohdassa 8) 6,65 (dd, -H kohdassa 5) 8,15 (s, -H kohdassa 20) l-di-isopropyyliamino-2(S)-propaanitioli voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 25 Toimittiin kuten esimerkissä 10 valmistettaessa N- metyyli-N-sykloheksyyli-l-amino-2(S)-propaanitioli, paitsi että lähtöaineina käytettiin 48 g N,N-di-isopropyyli-2-merkapto-(S)-propionamidia ja 10,16 g litiumaluminium-hydridiä. Reaktioseos tislattiin alennettussa paineessa 30 (225 Pa), jolloin saatiin 24,1 g 1-di-isopropyyliamino- 2(S)-propaanitiolia värittömänä öljynä, kp. 235 Pa = 69°C; [a]*0 = -24,2° (c = 1,3 CHC13).

N,N-di-isopropyyli-2-merkapto-(S)-propionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 35 Toimittiin kuten esimerkissä 10 valmistettaessa N- metyyli-N-sykloheksyyli-(S)-propionamidi, paitsi että läh-

II

39 86 429 töaineina käytettiin 61,62 g N,N-di-isopropyyli-2-asetyy-litio-(S)-propionamidia ja 55 cm3 10 N natriumhydroksidive-siliuosta. Tällöin saatiin 48 g N,N-di-isopropyyli-2-mer-kapto-(S)-propionamidia punaisena öljynä, [a] „°= +5,6° 5 (c = 1, CHC13). Tämä käytettiin sellaisenaan seuraavassa reaktiossa.

N, N-di-isopropyyli-2-asetyylitio- ( S )-propionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimittiin kuten esimerkissä 10 valmistettaessa N-10 metyyli-N-sykloheksyyli-2-asetyylitio-(S)-propionamidi, paitsi että lähtöaineina käytettiin 46,8 g merkaptoetikka-hapon kaliumsuolaa ja 65,01 g N,N-di-isopropyyli-2-kloori-(R)-propionamidia. Tällöin saatiin 70,53 g N,N-di-isopro-pyyli-2-asetyylitio-(S)-propionamidia keltaisena öljynä, 15 [a]30 = -91,7° (c = 2, CHC13).

N,N-di-isopropyyli-2-kloori-(R)-propionamidi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimittiin kuten esimerkissä 10 valmistettaessa N-metyyli-N-sykloheksyyli-2-kloori-(R)-propionyyli, paitsi 20 että lähtöaineina käytettiin 73,6 g 2-kloori-(R)-propion-yylikloridia 350 cm3:ssä kloroformia ja 166 cm3 di-isopro-pyyliamiinia. Tällöin saatiin 64,5 g N,N-di-isopropyyli-2-kloori-(R)-propionamidia värittömänä nesteenä, kp. 18 Pa = 71°C; [α]ο° = 73° (ilman liuotinta).

25

Claims (3)

1. 40 86429 Parannettu menetelmä yleiskaavan (I) mukaisten pristinamysiinin IIB S-oksidijohdannaisten valmistamiseksi 5 0 V o o CH’ V° 10 CH’ R 0 (I) H-C-CH-N Z
2. 1 I \ R1R2 R4 15 jossa Rj ja R2 merkitsevät vetyatomia tai metyyli- tai etyyliradikaalia, R3 merkitsee vetyatomia tai alkyyliradikaalia, joka sisältää 1-3 hiiliatomia,
3. 20 R4 merkitsee alkyyliradikaalia, joka sisältää 1-4 hiiliatomia, tai sykloheksyyliradikaalia, tai R4 ja R2 muodostavat yhdessä niiden atomien kanssa, joihin ne ovat kiinnittyneet, tyydytetyn 5-jäseni-sen renkaan, 25 tai R4 muodostaa R3:n kanssa tyydytetyn 5- tai 6- jäsenisen renkaan, isomeerimuodoissaan tai näiden seoksina, sekä näiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi, hapettamalla pristinamysiinin IIB johdannainen (tai 30 sen suola), jonka yleiskaava on (II) 35 41 86429 V”^'AU , *3 (II> h-c-ch-n. 1 » \ R1R2 r4 10 jossa Rlf R2, R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä, siten että kun R3 ja R4 muodostavat rikkipitoisen heterosyklin, rikkiatomi voi olla sulfidi-, sulfoksidi- tai sulfonimuo-dossa, jonka jälkeen mahdollisesti erotetaan saadun tuotteen isomeerit, ja mahdollisesti muutetaan saatu tuote 15 hapon avulla suolaksi, tunnettu siitä, että hapetus suoritetaan kaliummo-nopersulfaatilla. 42 86429 Ett förbättrat förfarande för framställning av S-oxidderivat av pristinamycin IIB med den allmänna formeln 5 (I) 0 JK. _CH ^ ΝΙ-Γ CH, J CH, L .0 1. o o 3 ^ 10 ch .1 JL I * J VTT CH, SO-A^ '° (I, H-C-CH-N C I I \ r1r2 r4 15 där Rx och R2 betecknar en väteatom eller en metyl- el-ler etylradikal, R3 betecknar en väteatom eller en alkylradikal med 20 1-3 kolatomer, R4 betecknar en alkylradikal med 1-4 kolatomer eller en cyklohexylradikal, eller R4 och R2 tillsammans med de atomer, med vilka de är bundna, bildar en mättad 5-ledad ring, 25 eller R4 tillsammans med R3 bildar en mättad 5- el ler 6-ledad ring, i form av isomerer eller blandningar därav, samt syraadditionssalter därav, genom oxirerande av ett derivat av pristinamycin 30 IIB med den allmänna formeln II (eller ett sait därav) 35 li 43 864 29 5 'ν' 0 0 CH> V° CH I JL » . T Ύ 0 n'TT CH, 1J 1-0 • I R3 HD h-c-ch-n^ RiR? r. 10 1 2 4 där Rx, R2, R3 och R4 betecknar sanuna som ovan, sä att dä R3 och R4 bildar en svavelhaltig heterosyklisk ring, kan sva-velatomen vara i sulfid-, sulfoxid- eller sulfonform, var-15 efter eventuellt separareras isomererna av den erhällna föreningen och eventuellt omvandlas den erhällna produkten till ett salt med en syra, kännetecknat därav, att oxideringen utförs medelst kaliummonopersulfat.