FI84834B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara steroidderivat av androstanserien. - Google Patents

Description

1 84834

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten androstaanisarjan steroidijohdannaisten valmistamiseksi

Keksinnön ala 5 Esillä oleva keksintö koskee bio-orgaanista kemiaa ja tarkemmin määriteltynä androstaanisarjan uusien steroidi johdannaisten (hormonisytostaattisten aineiden) valmistusta, joilla on sekä kasvaimia torjuvaa että hormonaalista aktiviteettia ja jotka ovat käyttökelpoisia lääketie-10 teessä syövän hoitoon ja hedelmöitystä ehkäisevinä aineina .

Keksinnön tausta Tällä alalla tunnetaan eräs androstaanisarjan steroidi johdannainen 2[bis(2-kloorietyyli)aminometyleeni]- 15 5a-androstan-17ö-oli-3-oni-173-asetaatti (katso: S. Bur-stein, H. Ringold, J. Org. Chem., 26, s 3085, 1961) OAc 20 C1CH_CH» ί1 | | 2 2Χχ N c I I _ C1CH2CH2 ^ .: i

25 H

jossa alkyloiva ryhmä on kiinnittynyt hormonin molekyyliin, jolla on androgeenisiä ominaisuuksia. On todettu, että tämä yhdiste ei ole myrkyllinen tutkittuna hiirillä ‘30 6 päivää kestäneen lääkkeenannon jälkeen annosten ollessa 500 mg/kg päivää kohti. Sen kasvaimia torjuvaa vaikutusta ei ole tähän asti selostettu.

Tällä alalla tunnetaan joukko androstaanisarjan steroidijohdannaisia, jotka osoittavat kasvaimia torjuvaa 35 ja hormonaalista aktiviteettia. Näistä johdannaisista voi- 2 84834 daan mainita esimerkkeinä p-di(2-kloorietyyli)aminofenyy-lietikkahapon (kloorifenasyyli) ja steroidi-alkoholien esterit - dehydroepiandrosteroni ja testosteroni. Nämä yhdisteet vaikuttavat kasvaimiin, jotka ovat erittäin 5 herkkiä alkylointiaineille (Walker'in karsinosarkooma Ca-755 hiirillä) sekä eräisiin rintasyöpiin hiirillä ja rotilla (HK, R-13762), jotka syöpäkasvaimet eivät ole oleellisesti herkkiä alkylointiaineille. Nämä yhdisteet ovat vähemmän myrkyllisiä kuin niihin sisältyvä kloorifenasyy-10 li. Vaikkakin kloorifenasyylin optimaaliset terapeuttiset annokset ovat 1-1,5 mg/kg hiirille 5-10 päivän pituisen lääkkeenantoajan, annetaan dehydroepiandrosteronin johdannaista (DEA-sinappi) 15-20 mg/kg suuruisina annoksina samanpituisen lääkitysajan. Yhdiste vaikuttaa kuitenkin myr-15 kyllisesti vaikutusta organismiin, mikä ilmenee neurotok-siteettina, veren imusoluniukkuutena ja kuolioiden aiheina maksassa ja munuaisissa (katso: Soph'ina Z.P., Lagova N.D., Valueva I.M., Kuz'mina Z.V., Shkodinskaya E.N., Khaletsky A.M. Proceedins of the 1st All-Union Conference 20 on Chemiotherapy of Malignant Tumors, Riika, 1968, s 441-443; M. Wall, G. Abernethy, F. Carrol, D. Taylor, J. Med. Chem., 1969, 12, 5, s 810-818; U. Schaeppi, J. Heyman, R. Fleishman, H. Rozenkrants, V. Glievski, R. Phelan, D. Cooney, R. Davis, Canc. Chem. rep., 1973, 3, 41 s 85-95; La-: 25 gova N.D. kirjassa: "Urgent Problems of the Experimental

Chemiotherapy of Tumors", Chernogolovka, 1980, vol. I, sivut 222-225).

Keksinnön kuvatus

Esillä olevan keksinnön tarkoituksena oli aikaan-30 saada uusia androstaanisarjan steroidijohdannaisia, joilla on kasvaimen vastainen ja hormonaalinen aktiviteetti, joka erityisesti keskittyy kohteena oleviin kudoksiin ja näissä kudoksissa alkunsa saaviin kasvaimiin.

Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetut and-. 35 rostaanisarjän steroidijohdannaiset ovat uusia ja tähänas tisessa kirjallisuudessa tuntemattomia.

Il 3 84834

Keksinnön kohteena on uusien steroidijohdannaisten valmistus, joiden yleinen kaava on

H

10 jossa R2 on -OCOCH2C6H4N( CH2CH2C1 )2; - OH, =0; R2 on -OCO(CH2)nC6H4N(CH2CH2X)2, jossa n on 1,3; X = Cl, Br, J; -OH; -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2) ; NHCOCHj 15 R3 = -CH3; -H, sillä edellytyksellä, että R2 ja R2 eivät voi samanaikaisesti tarkoittaa hydroksiryhmää ja R2 ei voi olla oksoryhmä kun R2 on hydroksi ryhmä.

Esillä olevan keksinnön mukaiset androstaanisarjan steroidijohdannaiset (hormonisytostaatit) käsittävät ste- 20 roideina testosteronin metaboliitteja tai niiden synteettisiä analogeja ja ovat 5a-androstaanin estereitä, jotka on substituoitu 2-, 3- ja 17-asemassa.

Keksinnön mukaiset yhdisteet käsittävät amorfisia tai hienokiteisiä jauhemaisia aineita, jotka ovat väril- 25 tään valkoisia tai keltaiseen vivahtavan valkoisia, ja liukoisia orgaanisiin liuottimiin. Yhdisteet ovat stabiileja varastoitaessa niitä pitkän ajan pimeässä lämpötilassa, joka on välillä +5 ja 0°C; valossa ne saavat keltaisen värin.

30 Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat seuraavat: 17S-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-and-rostan-17B-oli-3-oni (I); 17Ö- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyylibutyraatti]-5a-and-- . 35 rostan-17B-oli-3-oni (II); 4 84834 176-[p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a-androstan-176-oli-3-oni (III); 176- [p-di( 2-kloorietyyli ) -aminofenyyli-N-asetyylialanyy-li]-2a-metyyli-5a-androstan-176-oli-3-oni (IV); 5 36-[p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyliasetaatti] -5a-androst- andioli-38,176 (V); 176- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyliasetaatti] -5a-andros-tandioli-36,176 (VI); 176-[p-di(2-bromietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-andros-10 tan-176-oli-3-oni (VII); 176-[p-di(2-jodietyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a-andros-tan-176-oli-3-oni (VIII).

On suositeltavaa käyttää seuraavia androstaani-sarjan steroidijohdannaisia: 15 r'N-1-°C0CH2C6H4N(CH2CH2C1), e JCP^ c t 20 d

f —T~ 0H

iTY " (C1CH2CH2)2NC6H4CII20C0-(V)

H

25 -1-OCOCH2C6H4N (CH2CH2C1) 2 (VI)

"° H

30

Paras tapa keksinnön suorittamiseksi Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet osoittavat huomattavaa kasvaimia torjuvaa ja hormonaalista (sekä androgeenistä että anabolista) aktiviteettia, jonka luonne 35 on riippuvainen näiden yhdisteiden molekyylin hormoniosan

II

5 84834 rakenteesta samoin kuin alkyloivan ryhmän rakenteesta ja sen kiinnittymiskohdasta steroidiin.

Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on eräänä etuna se, että niiden vaikutus keskittyy kohteena 5 oleviin kudoksiin ja niihin muodostuneisiin kasvaimiin, mikä antaa niiden kasvaimia torjuvan vaikutuksen vaikutus-spektrille erityisiä piirteitä verrattuna tunnettuihin hormonisytostaatteihin. Esillä olevan keksinnön mukaisten hormonisytostaattien parenteraalinen (hypodermaalinen) 10 lääkkeenantotapa takaa vähäisemmän myrkyllisyyden ja yhdisteiden biologisen vaikutuksen suuremman orientoitumisen verrattuna suun kautta tapahtuvaan lääkkeenantotapaan, koska tuloksena ei ole molekyylin hajoaminen hormonaalisiin ja erittäin myrkyllisiin alkylointiosiin.

15 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden kas vaimia torjuvaa aktiviteettia on tutkittu lukuisiin kudoksen siirrolla aiheutettujen kiinteiden kasvaimien ja Leukoosien kantoihin hiirillä ja rotilla: nisän adenokar-sinooma Ca-755, Lewis'in keuhkon adenokarsinooma (LL, koh-20 dunkaulakarsinooma SC-5, Walker'in karsinosarkooma W-256, munasarjakasvain OT ja lymfaattinen leukoosi L 1210.

Vertailun vuoksi on tutkittu esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden rinnalla seuraavia aineita: dihydrotestosteroni (5a-androstan-17B-oli-3-oni), dehyd- .....; 25 roepiandrosteroni ja kloorifenasyyli tai sarkolysiinival- miste (B-[p-di-(2-kloorietyyli)aminofenyyli]-a-alaniini-hydrokloridi), jotka sisältyvät useimpien esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden molekyyliin, samoin kuin tunnetut hormonisytostaatit: dehydroepiandrosteronin este-30 ri kloorifenasyylin kanssa (DEA-sinappi) sekä estrasyytti-valmiste (estra-1,3,5(10)-trieeni-3,176-dioli, 3N-[bis-(2-kloorietyyli)]karbamaatti-17-natriumfosfaatti).

Yhdisteitä annettiin eläimille hypodermisesti öljyssä, annoksina, jotka oli laskettu mg:oissa kiloa kohti -- 35 kehonpainoa, 5-10 päivän ajan aikavälein, jotka oli sovi- 6 84834 tettu kyseisten kasvainten tutkimusta silmälläpitäen (24 tai 28 tuntia kasvaimen kudoksensiirron jälkeen). Estra-syyttiä annettiin suunnilleen samalla tavalla NaCl:n 0,9-%:isessa liuoksessa.

5 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden vai kutuksen suuntautuvuuden tutkimiseksi käytettiin spontaanisesti aiheutuneita ja/tai syöpätartunnan aiheuttamia kasvaimia hiirissä ja rotissa, jotka kasvaimet olivat saaneet alkunsa kohteena olevissa kudoksissa. Näissä tapauk-10 sissa käsittely aloitettiin sen jälkeen kun kasvaimet olivat saavuttaneet määrätyn koon, jolloin kasvainten spon-taanisen taantuman mahdollisuus on poissuljettu.

Kasvaimia torjuvan aktiviteetin kriteerit olivat seuraavat: eläimen elinajan piteneminen (EAL, %) ja kiin-15 teiden kasvainten kasvun estyminen (GIT, %).

EAL % = — 100

C

20 jossa T on käsiteltyjen eläimien keskimääräinen elinaika; C - kontrollieläinten keskimääräinen alinaika; GIT % = K~°- 100

K

25 jossa O on kasvaimen keskimääräinen tilavuus (massa) käsiteltyjen eläinten ryhmässä; K on kasvaimen keskimääräinen tilavuus (massa) kontrollieläimissä.

Kasvaimia torjuvan vaikutuksen kriteerit spontaani-30 sesti syntyneiden ja aiheutettujen kasvaimien käsittelys sä olivat seuraavat: eläinten tervehtyminen (%) ja muutos kasvaimen dimensioissa verrattuna niiden alkuperäisiin arvoihin (%).

Tutkimukset suoritettiin on line-hiirille ja niiden 35 ensimmäisen sukupolven hybrideille.

I! 7 84834

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden kasvaimia torjuvan aktiviteetin tutkimuksessa saadut tulokset muutamien kudoksensiirrolla aiheutettujen kasvainten osalta on esitetty seuraavassa taulukossa 1.

5 Taulukko 1

Esillä olevan keksinnön mukaisten androstaanisar-jan steroidijohdannaisten kasvaimia torjuva aktiviteetti

Nro Yhdiste Annos Käsittelypäivät 10 mg/kg kasvaimen kudok- päivä sensiirron jälkeen _1_2_3_4_ 1 17S-[p-di(2-kloorietyyli)- 15 aminofenyyliasetaatti]-5a- androstan-173-oli-3-oni (I) 25-50 2-6 2 173-[p-di-(2-kloorietyyli)-aminofenyylibutyraatti]-5a- androstan-173-oli-3-oni (II) 30-50 2-6 20 3 173-[p-di(2-kloorietyyli)ami- nofenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a-androstan-173-oli-3- oni (III) 10-100 2-6 4 173-[p-di(2-kloorietyyli)- 25 aminofenyyli-N-asetyyli- alanyyli]-2a-metyyli-5a- androstan-17S-oli-3-oni (IV) 10-100 2-6 5 33-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti] -5a-and- 30 rostandioli-33,173 (V) 5-30 2-6 6 173-[p-di(2-kloorietyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a- androstandioli-3S,173 (VI) 5-50 2-6 7 173-[p-di(2-bromietyyli)- 35 aminofenyyliasetaatti]-5a- androstan-173-oli-3-oni (VII) 10-50 2-6 8 84834 _1_2_3_4_ 8 176-[p-di(2-jodietyyli)amino- fenyyliasetaatti]-5a-andros- tan-17B-oli-3-oni (VIII) 25-100 2-6 5 9 Dihydrotestosteroni 10-15 2-6 10 Kloorifenasyyli 1,5-2 2-6 11 Sarkolysiini 2-3 2-6 7 2-6 12 DEA-sinappi 10-15 2-11 10 50 2-6 13 Estrasyytti 100 2-6

Taulukko 1 (jatkoa) 15 Nro Kasvaimen kasvun maksimiehkäisy % Elinajan piteneminen %

Ca-755 LL W-256 Ca-755 L-1210 W-256 1 5_6_7_8_9_10 1 98 66 99 59 41 160 20 71 30 %:n parantuminen 47 3 98 71 122 82 4 96 58 79 82 5 95 66 31 28 25 6 95 60 32 25 7 97 54 8 65 47 9 16 +77 10 33 97 30 11 83 58 32 90 12 10 59 57 13 +6 29 4 35 Merkki "+" tarkoittaa kasvaimen kasvun kiihtymistä li 9 84834

Kuten edellä olevasta taulukosta 1 ilmenee, esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on voimakas kasvaimia torjuva vaikutus useisiin kudoksensiirrolla aiheutettuihin kasvaimiin nähden, mikä todetaan kasvaimen kas-5 vun huomattavana ehkäisynä - 58-99 %:lla ja/tai käsiteltyjen eläinten eliniän pitenemisenä 25-160 %:lla. Erityisen selvästi nähdään esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden edut kysymyksen ollessa tapauksesta Ca-755. Yhdisteet eivät ainoastaan ehkäise Ca-755:n kasvua 65-98 %:Ι-ΙΟ la, vaan myös ne pidentävät eläinten elinikää 31-122 %:1-la. Androstaanisarjan tunnettu hormonisytostaatti, nimittäin DEA-sinappi, samoinkuin estrasyytti eivät ole osoittaneet mitään aktiviteettia tämän kasvaimen suhteen.

Edellä olevasta taulukosta 1 nähdään myös, että 15 esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet eroavat niiden molekyyliin sisältyvistä alkylointiaineista kloori-fenasyylistä ja sarkolysiinistä kasvainten torjuntavai-kutuksen suuruudessa ja laajuudessa samoinkuin myrkyllisyydessä. Tällöin esillä olevan keksinnön mukaisten yh-20 disteiden terapeuttiset annokset vaihtelevat alueella 5-150 mg/kg annettaessa niitä päivittäin 5 päivän aikana, kun taas kloorifenasyylin ja sarkolysiinin siedettävät maksimiannokset samoissa käsittelyolosuhteissa ovat vastaavasti 1,5 ja 3 mg/kg.

25 Seuraavat yhdisteet: 176-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-and-rostan-178-oli-3-oni (I), 38-[p-di-(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstandioli-3B,178 (V) ja 30 178[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-and- rostandioli-36,178 (VI) ovat osoittaneet suurempaa suuntautuvuutta ja eroa tehossa kasvainten suhteen, jotka ovat saaneet alkunsa hormonista riippuvissa kudoksissa, ja joita ovat kudok-35 sensiirrolla aiheutetut kohdunkaulasyöpä CC-5, munasarjan kasvaimet OT samoinkuin aiheutetut ja spontaaniset muna- 10 84834 sarjan kasvaimet ja nisän kasvaimet hiirillä ja rotilla. Samanaikaisesti todettiin edellämainittujen yhdisteiden olevan vähemmän aktiivisia käsiteltäessä eläimiä, joilla oli leukoosi L-1210 (taulukko 1), mikä viittaa niiden vä-5 häisempään alkylointivaikutukseen. Taulukossa 2 olevista tuloksista nähdään, että yhdiste I vaikuttaa vain vähän munasarjakasvaimen OT kasvuun, kun taas yhdiste VI ja erityisesti yhdiste V aikaansaavat tämän kasvaimen kasvun voimakkaan ehkäisyn. Samasta taulukosta käy myös ilmi, 10 että CC-5 ja OT ovat vain vähäisessä määrin herkkiä tai kokonaan epäherkkiä dihydrotestosteronin ja kloorifena-syylin suhteen, samalla kun estrogenosytostaattinen estra-syytti jopa edistää CC-5:n kasvua. Taulukossa 3 esitetyistä tuloksista nähdään selvästi yhdisteiden I, III ja VI 15 edut aikaisemmin tunnettuun androgeeniseen aineeseen tes-tosteronipropionaattiin nähden mitä tulee niiden kasvaimia torjuvaan aktiviteettiin aiheutettuihin ja spontaanisiin munasarjan ja nisän kasvaimiin nähden hiirillä ja rotilla.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden ylei-20 sen myrkkyvaikutuksen tutkimus on osoittanut, että näiden yhdisteiden myrkyllisyys on suhteellisen vähäinen. Hiiret sietävät näiden yhdisteiden 5-kertaisen antamisen annoksina, jotka ovat alueella 5-100 mg/kg. Pääosalla yhdisteitä on huomattava terapeuttisten annosten alue (taulukko 4). 25 Ne aikaansaavat tehokkaan kasvaimia torjuvan vaikutuksen annoksina, jotka eroavat suuruudeltaan 3-10 kertaisesti.

Il il 84834

Taulukko 2

Androstaanlsarjan steroidijohdannaisten kasvaimia Torjuva aktiviteetti kasvaimiin nähden, jotka ovat saaneet alkunsa kohteena olevissa kudoksissa 5

Yhdiste Kasvaimen kasvun Elinajan

maksimiehkäisy % piteneminen % CC-5 OT OT

1_2_3_4_ 10 17Ö-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 176-oli-3-oni (I) 82 37 0 3B[p-di(2-kloorietyyli)aminofe-nyyliasetaatti]-5a-androstan- 15 3β,17β (V) 80 94 25 17β-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- dioli-3B,17β (VI) 79 73 33 17β-[p-di(2-kloorietyyli)amino-20 fenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a- androstan-17B-oli-3-oni (III) 87 97 57 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyli-N-asetyylialanyyli-2a-me-tyyli-5a-androstan-17B-oli-3-oni 25 (IV) 99 92 37

Dihydrostetosteroni 13 54 0

Kloorifenasyyli 35 25 0

Estrasyytti +322 29 0 i2 84834

Taulukko 3

Androstaanisarjän steroidijohdannaisten kasvaimia torjuva vaikutus kohteena olevissa kudoksissa alkunsa saaneiden aiheutet-5 tujen ja spontaanisten kasvainten suhteen

Nro Kasvaimet Kasvaimen dimensioiden pienenemi nen tai sen kasvun kiihtyminen (+) verrattuna dimensioihin ennen 10 käsittelyn alkamista, % 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan-17B-oli-3-oni (I) 15 _1_2_3_ 1 Biskindma'illa aiheutetut hiiren munasarjan kasvaimet Kasvun pysähtyminen 2 Biskindham'illa aiheutetut ro- 20 tan munasarjan kasvaimet 27 3 Spontaaniset hiiren nisän kas- Kasvun pysähtyminen vaimet 4 DMBA'lla aiheutetut nisän kasvaimet rotissa 60 25

Kasvaimen dimensioiden pieneneminen tai sen kasvun kiihtyminen (+) verrattuna dimensioihin ennen käsittelyn alkamista, %

II

i3 84834 3B-[p-di(2-kloori- 17β-[p-di(2-kloori- Testoste- Kont- etyyll)amlnofenyyll- etyyli)aminofenyyli- ronipro- rolli asetaatti]-5a-and- asetaatti]-5a-and- pionaatti rostan-17B-oli-3- rostan-17B-oli-3- 5 oni (V) oni (VI)

Nro 1_4_5_6_7_ 1 7 +256 +21 10 2 64 +32 3 35 24 +33 +88 4 Kasvun py- +280 sähtyminen 15 Taulukko 4

Andros taanisar jän steroidi johdannaisten siedettävät maksimiannokset (MBD) ja terapeuttisten annosten alue (hiiret, 5 kertaa tapahtuva annostus)

Yhdiste mg/kg Terapeutti- 20 MBD set annokset 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 17-oli-3-oni (I) 25 20-25 25 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyylibutyraatti]-5a-androstan-17-oli-oni (II) 50 30 17β-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyli-N-asetyylialanyyli]- 30 5a-androstan-17B-oli-3-oni (III) 100 10-100 17β-[p-di-(2-kloorietyyli)-aminofenyyli-N-asetyyliala-nyyli]-2o-metyyli-5a-and- rostan-17B-oli-3-oni (IV) 100 10-100 l.i 35 3B-[p-di( 2-kloorietyyli )amino- fenyyliasetaatti]-5a-andros- tandioli-3B,17β (V) 30 5-30 i4 84834 (Taulukko 4, jatkoa)

Yhdiste mg/kg Terapeutti- MBD set annokset 5 176-[p-di(2-kloorietyyli)- aminofenyyliasetaatti]-5a- androstandioli-36,176 (VI) 50 10-30 176-[p-di(2-bromietyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a-and-10 rostan-176-oli-3-oni (VII) 50 10-50 176-[p-di(2-jodietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 176-oli-3-oni (VIII) 100 25-100

Kloorifenasyyli 3 1,5-2 15 Sarkolysiini 5 2-3

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden tehon suuntautuvuuden tutkimiseksi kohteena oleviin kudoksiin tutkittiin niiden hormonaaliset ominaisuudet biolo-20 gisten (androgeenisten ja anabolisten vaikutusten) sekä biokemiallisten (spesifinen sitoutuminen dihydrotestoste-ronin ja estradioli 176:n reseptoreihin) kokeiden avulla. Yhdisteiden androgeeninen ja anabolinen aktiviteetti määritettiin vastaavasti eturauhasen ja peräaukon kohottaja-. . 25 lihaksen massan muutoksen avulla kuohituilla nuorilla ro tilla ja ilmaistiin indekseillä (kyseisten elimien suhteellisen massan suhde käsittelyn jälkeen vastaavaan massaan vertailukohteessa, jonka massan oletettiin olevan arvoltaan 1). Dihydrotestosteronin spesifistä sitoutumista 30 reseptoreihin (vapaita kiinnittymiskohtia) tutkittiin normaalien ja etukäteen (2 viikkoa aikaisemmin) kuohittujen rottien ventraalisessa prostatassa, joita rottia oli käsitelty valmisteilla terapeuttisen käsittelyn kuluessa. Dihydrotestosteronin ja estradioli 176:n spesifisen sitoutu-35 misen määritys suoritettiin kudoksen sytosolifraktioissa seostamalla proteiinit protaminosulfaatilla sen jälkeen kun sytosoleja oli inkuboitu [3H]-dihydrotestosteronin ja is 84834 [3H]-estradioli 176:n kyllästyskonsentraatioilla 0°C:n lämpötilassa. Nukleaariset reseptorit määritettiin puhdistettujen ytimien fraktiosta, joka oli etukäteen uutettu 0,4N KCl:lla saostamalla hormonireseptorikompleksi protamino-5 sulfaatilla.

Tulokset, jotka valaisevat esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden androgeenisiä ja anabolisia vaikutuksia esitetään jälempänä taulukossa 5.

Taulukosta 5 nähdään, että pääosalla esillä olevan 10 keksinnön mukaisista androstaanisarjän steroidijohdannaisista on alhainen anabolinen aktiviteetti. Niiden andro-geeninen aktiviteetti riippuu suuressa määrässä yhdisteen hormonaalisen osan rakenteesta. Androgeenisinä aineina ovat yhdisteet I ja III voimakkaampia muihin verrattuna. 15 Yhdisteet I ja III osoittavat myös pisintä androgeenisen vaikutuksen kestoaikaa. Yhdisteen I androgeeninen aktiviteetti on kuitenkin oleellisesti alhaisempi kuin testo-steronipropionaatin (eräs tunnettu androgeeninen aine).

On huomattu, että esillä olevan keksinnön mukaiset 20 androstaanisarjän steroidijohdannaiset sitoutuvat spesifi sesti vastaavien hormonien reseptoreihin. Niinpä yhdiste I sitoutuu dihydrostestosteronin sytoplasmareseptoreihin, jota seuraa keskinäinen vuorovaikutus kromatiinin vastaavien akseptorivyöhykkeiden kanssa sekä normaaleissa ku-25 doksissa (rottien ventraalinen prostata ja kohtu) sekä eläinten että ihmisten kasvaimissa, jotka ovat saaneet alkunsa androgeeneille kohteena olevissa kudoksissa (nisän rauhanen).

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden, ni-30 mittäin yhdisteiden I, V ja VI hormonaaliset ominaisuudet on myös selvästi osoitettu tehossa estradioli 176:n reseptioon ventraalisen prostatan kudoksessa. Tällöin on osoitettu eroavaisuus yhdisteiden välillä. Esimerkiksi koskemattomissa rotissa suureni yhdisteen V antamisen jälkeen 35 [3H]-estradioli 176:n spesifinen sitoutuminen sytosoliin 5- kertaiseksi, kun taas yhdisteen I antamisen jälkeen 10-kertaiseksi. Yhdisteen VI antamisen jälkeen ei havaittu ie 84834 minkäänlaista [3H]-estradioli 176:n spesifistä sitoutumista sytosoliin (se estyi täydellisesti). Näin ollen esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat huomattavasti muuttaneet eläinten herkkyyttä estrogeeneihin nähden.

5 Tarkastelun alaisena olevat yhdisteet I, V ja VI

eroavat myös metabolismin osalta kohteena olevissa kudoksissa androgeenien suhteen. Nämä eroavaisuudet ilmenevät jo andorgeenimetabolismin pääasiallisen entsyymin -5a-re-duktaasin tasolla, samoinkuin 36,3α,6a,7a-hydroksylaasien 10 tasolla.

Mitä tulee kasvaimia torjuvan vaikutuksen, yleisen myrkky- ja hormonivaikutusten laajuuteen samoinkuin meta-bolismiin kohteena olevissa kudoksissa, niin tällöin esillä olevan keksinnön mukaiset androstaanisarjan steroidi-15 johdannaiset eroavat toinen toisistaan. Jokaiselle näistä yhdisteistä on tunnusomaista erittäin yksilölliset biologisen vaikutuksen erityisominaisuudet, minkä vuoksi ne ovat jokainen toisista riippumatta kiinnostavia.

Il i7 84 834

Taulukko 5

Hormonisytostaattien - androstaanisarjan steroidi-johdannaisten androgeenisiä ja anabolisia ominaisuuksia 5

Nro Yhdiste Annos, mg/kg/aikaväli (h) x antokertojen lu- _kumäärä_ 1 178-[p-di(2-kloorietyyli)- 10 aminofenyyliasetaatti]-5a- androstan-178-oli-3-oni (I) 25/24 x 10 2 38-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- 15 dioli-38,178 (V) 20/24 x 10 3 178-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti]-5a-androstan- dioli-38,178 (VI) 20/24 x 10 20 - 4 178-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyyli-N-asetyylialanyyli]-5a-androstan-17B-oli-3-oni (III) 25/24 x 10 50/24 x 10 25 - 5 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino- fenyyli-N-asetyylialanyyli]-2a-metyyli-5a-androstan-17B-oli-3- 25/24 x 10 oni (IV) 50/24 x 10 30 - 6 DEA-sinappi 5/24 x 10 10/24 x 10 7 Dihydrostestosteroni 15/24 x 10 35 - 8 Dehydroepiandrosteroni 0,5/24 x 10 1/24 x 10 9 Testosteronipropionaatti 15/24 x 10 40 - • - 10 Sarkolysiini 2/24 x 10 11 Kloorifenasyyli 1/2 x 10 45 is 84834 (Taulukko 5, jatkoa)

Nro Päiviä käsit- Anabolinen Androgeeninen _telyn jälkeen_indeksi_indeksi_ 14 5 6 5 1 1 2,4 8,5 10 1,3 5,2 2 1 0,9 2,5 10 1,3 2,4 3 1 1,2 2,6 10 10 1,4 1,3 4 1 1,7 2,0 10 1,2 1,1 5 1 2,1 6,2 10 1,3 4,5 15 1 1,7 1,6 10 1,2 0,8 1 2,3 1,5 10 1,6 1,8 6 1 1,3 1,4 20 1 1,2 2,2 7 1 1,6 1,1 10 1,1 0,9 8 1 1,5 1,2 1 1>1 . 25 9 1 2,7 23,9 10 2,1 8,2 10 1 0,8 1,6 11 1 1,0 0,9 30 176-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]- 5a-androstan-176-oli-3-onin (I) hormonaalisen tehon kinetiikan tutkimuksessa on havaittu kiintoisaa säännöllisyyttä: kohteena olevien elinten (eturauhanen, kives, siemen-nesterakkulat) stimuloitumisjakson korvautuminen 1,5 kuu-35 kauden jälkeen niiden voimakkaan estymisen jaksolla, kun taas niissä eläimissä, joille annettiin ainoastaan dihyd-rotestosteronia, palautui edellämainittujen elinten massa

II

I» 84834 normaaliksi tämän jakson päättyessä. Myöskin todettiin yhdisteen I pitkäaikainen ehkäisevä vaikutus kilpirauhaseen urospuolisissa ja naaraspuolisissa rotissa (samalla tavoin dihydrotestosteronin vaikutus), samoinkuin kohtuun ja mu-5 nasarjoihin, niin että näiden elinten massa ei palautunut normaaliksi edes 3 kuukauden kuluttua valmisteen antamisen keskeyttämisen jälkeen. Yhdisteen I aiheuttama tilapäisen "kemiallisen kastraation" vaikutus todettiin naaraspuolisissa rotissa, joilla oli estrogenoaktiivisia munasarja-10 rakkulakasvaimia. Yhdistettä I käyttäen suoritetun terapeuttisen käsittelyn jälkeen rotille luontainen jatkuva naaraan kiima lakkasi. Vatsan avaus ja munasarjojen histo-loginen tutkimus ovat osoittaneet, että kiiman keskeytys tapahtuu tuloksena munasarjojen rakkuloiden umpaankasvusta 15 ja munasarjojen välikudoksen surkastumisesta, mikä on est-rogenoaktiivinen rotissa. "Kemiallisen kastraation" vaikutus on havaittu myös maidonerityksessä rotilla, jotka terapeuttisen käsittelyn jälkeen käytettäessä 17B-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-176-oli-20 3-onia (I) menettivät lisääntymiskykynsä 5-7 kuukaudeksi. Nämä tulokset kuvaavat tämän yhdisteen hedelmöitystä ehkäiseviä ominaisuuksia.

On myös osoitettu, että yhdisteellä I on sitäpaitsi alkyloivia ominaisuuksia. Se häiritsee RNA’n transkriptio-25 ja siirtoprosesseja, aiheuttaa DNA'n rakennevikoja, jotka kuitenkin parantuvat nopeammin normaaleissa soluissa (perna) kuin kasvainten soluissa (sarkooma S-37). Viimemainitut seikat viittaavat kasvaimia torjuvan vaikutuksen se-lektiivisyyteen.

30 Käyttäen yhdistettä I esimerkkinä on tällöin osoi tettu, että hormonisytostaatei11a - esillä olevan keksinnön mukaisilla androstaanisarjan steroidijohdannaisilla on kaksinainen biologinen vaikutusmekanismi. Niillä on sekä alkyloiva että hormonaalinen vaikutus.

35 Keksinnöllisyyden perustelemiseksi FI-patentista 57 114 tunnettujen andosteeniesterijohdannaisten suhteen 20 8 4 8 34 on lisäksi osoitettu, että dihydrotestosteroni ja 5a-and-rostaanidioli-3B,17B (lyhennettynä 3B-dioli), joista syntetisoimat uudet yhdisteet 17B-[p-di(2-kloorietyyli)amino-fenyyliasetaatti-5a-androstan-17B-oli-3-oni (yhdiste I), 5 3B- [p-di( 2-kloorietyyliaminofenyyliasetaatti] -5a-andros- taanidioli-3B,17B (yhdiste V) ja 17B-[p-di(2-kloorietyy-li)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstaanidioli-3B,17B (yhdiste VI) rakentuvat, vaikuttavat eri tavalla 1) androgee-nisiin ja anabolisiin ominaisuuksiin (Taulukko 6); 2) vai-10 kutuksen biokemialliseen mekanismiin - vaikutus DHT:n ja estradioli 17B:n reseptoreihin sitoutumiseen elimessä (Taulukko 7); sekä 3) kasvaimenvastaiseen aktiviteettiin hiiren hormonista riippuvaan munasarjakasvaimeen ja maksa-metastaattiseen nisäsyöpään (Taulukko 8).

I:

Androstaani sarjan steroidi johdannaisten androgeeniset ja anabo liset ominaisuudet 21 84834

Taulukko 6

Yhdiste Annos (mg/kg) Päiviä Anabolinen Androgeeni- aikaväli (h) käsitte- indeksi nen indeksi x antokertojen lyn jäl- lukumäärä keen 176-[p-di(2-kloorietyyli)-aminofenyyli-asetaatti]-5a- androstaani-178- 1 2,4 8,5 oli-3-oni (I) 25/24 x 10 10 1,3 5,2 3B-[p-di(2- kloorietyyli)- aminofenyyli- asetaatti]-5a- androstaanidi- 1 0,9 2,5 oli-38,178 (V) 20/24 x 10 10 1,3 2,4 178-[p-di(2-kloorietyyli)-aminofenyyli-' -äsetaatti ] - 5a- androstaanidioli- 1 1,2 2,6 .:.38,178 (VI) 20/24 x 10 10 1,4 1,3

Androgeeninen ja anabolinen indeksi määritettiin vastaavasti ••-eturauhasen ja peräaukon kohottajaiihaksen massan muutoksesta kastroiduilla nuorilla rotilla (kyseisten elimien suhteellisen massan suhde käsittelyn jälkeen vertailueläimen vastaavaan massaan, jolloin vertailueläimen oletettiin olevan arvoltaan 1).

22 84834

Taulukko 7

Androstaanisarjan stereoidijohdannaisten vaikutus DHT:n ja estradioli 17B:n [E2] reseptoreihin sitoutumiseen rotan eturauhasessa annos (mg/kg) DHT:n reseptorit E2:n reseptorit aikaväli (h) (mol/kg prot. )_(mol/mg prot.) x antokertojen sytoplas- tumai- sytoplas- tumai- lukumäärä maattiset set_maattiset set

Ix CX I C I C I C

Kontrolli-eläimet (ei vaikutusta) 84 0 46 0 25 0 0 0 kloorifenasyyli 1,5/24x5 87 94 61 0 0 531 496 318

Dihydrotesto- steroni 10/24x5 0 0 0 0 0 74 0 99 yhdiste I 25/24x5 32 51 00 257 353 0 339 36-dioliXX 10/24x5 55 37 210 117 0 134 84 52 yhdiste V 20/24x5 0 71 0 0 137 67 0 114 yhdiste VI 20/25 0 0 0 0 0 483 0 133 x I kastroimattomat eläimet C kastroidut eläimet xx 5a-androstaanidioli-3B,178

Taulukko 8 : ; Kloorifenasyyliesterin (DHT) [yhdiste I] ja 3B-diolin [yhdiste V, VI] kasvaimen vastainen vaikutus hormonista riippuviin kasvaimiin .Yhdiste Kasvaimen maksimiesto (eliniän piteneminen) %

Ca - 755 SC - 5 LMMC OT

: I 98(59) 82 41 37 - V 95(32) 80 97 98(25) VI 95(31) 79 81 73(83) li 23 84834

Taulukon 6 mukaan yhdisteiden V ja VI androgeeninen ominaisuus on heikompi kuin yhdisteen I vastaava ominaisuus (androgeeniset indeksit käsittelyn jälkeen 2,5; 2,6; 8,5 vastaavasti.

5 Yhdisteen VI androgeeninen vaikutus on lyhytaikai nen, kun taas yhdisteen I ja V vaikutus ilmenee selvästi jopa 10 päivän kuluttua käsittelystä. Yhdisteillä V ja VI ei käytännöllisesti katsoen ole anabolista vaikutusta (indeksi 0,9 vastaavasti 1,2), kun taas yhdisteen I ko. in-10 deksi on 2,4.

Taulukosta 7 havaitaan yhdisteiden I, V ja VI vaikutuserot DHT:n ja E2:n reseptoreihin tutkituille yhdisteillä käsiteltyjen eläinten eturauhasen sytosoleissa ja tumauutteissa. Kastroimattomilla eläimillä esim. yhdisteet 15 I ja 3B-dioli alentavat 3H-sitoutumisen noin puoleen - noin kolmasosaan ja yhdisteillä V ja VI arvoon O kontrollieläi-miin verrattuna. Ero E2-reseptoreissa on vielä suurempi: annettaessa yhdistettä I kastroimattomille eläimille kasvaa spesifinen sitoutuminen 3HE2-reseptoreihin 10 kertaa 20 kontrollieläimiin verrattuna; annettaessa yhdistettä V on kasvu 5-kertainen ja annettaessa yhdistettä VI on kasvu täysin estynyt. Kysymyksen ollessa kastroiduista eläimistä käyttäytyvät yhdisteet toisella tavalla. Todettiin spesifistä sitoutumista 3H DHT-reseptoreihin annettaessa koe-25 eläimille yhdisteitä I, V, 38-dioli ja kloorifenasyyli, kun taas yhdisteet VI ja DHT estivät sitoutumisen. Kaikki yhdisteet kohottivat voimakkaasti 3HE2:n spesifistä sitoutumista, uusista yhdisteistä varsinkin yhdiste VI. Määritettäessä 3H DHT:n ja 3HE2:n spesifinen sitoutuminen oli 30 uusien androgeeniyhdisten välinen ero vähemmän huomattava, vaikkakin 3HE2:n sitoutumisessa kastroidun rotan prostata-tumauutteessa oli kvantitatiivinen ero. Näin ollen jokainen uusi yhdiste I, V ja VI vaikuttaa spesifisesti 3H DHT:n 3HE2:n sitoutumiseen ja vaikutus riippuu lisäksi sii-35 tä ovatko eläimet kastroituja vai kastroimattomia.

24 8 4 8 34

Taulukosta 7 ilmenee, että yhdisteiden I, V ja VI kasvaimenvastainen vaikutus hormonista riippuviin kasvaimiin on erilainen: yhdisteet V ja VI ovat paljon aktiivisempi kuin yhdiste I munasarjakasvainta vastaan ja yhdiste 5 V on parempi kuin yhdiste V maksametastaattista nisäsyöpää vastaan.

Edellä esitetyn perusteella uusien yhdisteiden kasvaimen vastainen aktiviteetti riippuu niiden steroidiosan - DHT:n ja 3B-diolin rakenteesta. Tämä on osoitettu ohei-10 sissa taulukoissa tutkimalla yhdisteiden androgeenisiä ja anabolisia ominaisuuksia sekä myös biokemiallisin kokein.

Menetelmä androstaanisarjan steroidijohdannaisten valmistamiseksi on yksinkertainen.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden syn-15 teesi suoritetaan noudattaen tunnettua menetelmää saattamalla substituoitu 38,17B-2a-androstaani reagoimaan sy-totoksisen fenyylialkaanihappokloridin kanssa aproottises-sa liuottimessa orgaanisen emäksen läsnäollessa liuottimen kiehumispisteessä 8-24 tunnin ajan ja eristämällä toivot-20 tu tuote preparatiivisen pylväskromatografiamenetelmän avulla tai suorittamalla myöhempi halogeenien substituutio reaktiotuotteessa Br:llä tai J:llä, tai suorittamalla myöhempi ketoryhmän pelkistys reaktiotuotteessa.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden syn-25 teesiä tällä menetelmällä voidaan esittää seuraavan kaavion avulla: ·· ,3-pXlj 2

·" » V*/V H B

A &/ / H

: : - £/ W

"y

: 35 n-TV

c

H

11 25 84834 A. V on -OH; =0-; R2’ = =0-; R3' on -CH3, -H; jolloin Rx’ ja R2' eivät voi samanaikaisesti olla -OH.

B. Rx on -OH; =0-; -OCOCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2; R2 = -OH, -0C0(CH2)nC6H4 -N(CH2CH2C1)2; jossa n on 1 tai 3, 5 -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl)2; R3 on CH3, -H, jolloin R, ja R2 NHCOCH3

eivät samanaikaisesti voi olla -OH ja kun Rx ei voi olla =0 kun R2 on -OH

C. Ri" on -OH, =0, -OCOCH2C6H4N(CH2CH2Cl)2; R2" = -OH, 10 OCO(CH2)nC6H4-N(CH2CH2X)2; jossa n on 1 tai 3; X on Cl, Br, J; -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl)2; R3 on CH3, -H, jolloin R/’ ja NHCOCHj R2" eivät samanaikaisesti voi olla -OH ja Rx ei voi olla =0 kun R2 on -OH.

15 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden syn teesi suoritetaan saattamalla p-di(2-kloorietyyli)aminofe-nyylietikkahappokloridi reagoimaan 5a-androstäänin kanssa, joka on substituoitu 36- tai 176 - tai 2a-asemassa, minkä jälkeen esteröintituotteet pelkistetään natriumboorihyd-20 ridillä tai kloori korvataan bromilla tai jodilla.

Esillä olevan keksinnön ymmärtämiseksi paremmin esitetään seuraavassa joitakin erityisesimerkkejä asian - r'; valaisemiseksi.

Esimerkki 1 25 176-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]- 5a-androstan-176-oli-3-oni (I)

Suspensioon, joka sisältää 30,0 g (0,10 mmol) 5a-androstan-176-oli-3-onia 500 mlrssa kuivaa bentseeniä, lisätään laskettu määrä trietyyliamiinia ja 38,0 g (0,11 30 mmol) p-di(2-kloorietyyli)aminofenyylietikkahappoklori- dia. Saatua seosta sekoitetaan 80°C:n lämpötilassa 24 tuntia ja trietyyliamiinihydrokloridi erotetaan. Bentseeni-liuos pestään KHC03:n vesiliuoksella, H20:lla ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan bentseeniin, lisätään 35 pylvääseen, joka on täytetty Al203:lla, ja eluoidaan bent- 26 84834 seenillä. Bentseenieluaatti haihdutetaan, öljymäisen tuotteen muodossa oleva jäännös kiteytetään eetteristä. Tuotteen saanto on 27,8 g (49,2 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista), sp 99-101°C (eetteri).

5 Saadut arvot %: C 67,85, H 7,89, Cl 12,96. C31H43N03C12. Lasketut arvot %: C 67,89, H 7,84, Cl 12,95.

Esimerkki 2 176- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyylibutyraatti] - 5a-androstan-176-oli-3-oni (II) 10 Tämän yhdisteen valmistus suoritetaan samalla ta valla kuin edellisessä esimerkissä 1 kuvatun yhdisteen synteesi.

Esteröintireaktioon osallistuvat: 5a-androstaani- 176-oli-3-oni ja p-di-(2-kloorietyyliJaminofenyylivoihap-15 pokloridi. Reaktioseosta sekoitetaan 80°C:n lämpötilassa 17 tuntia. Seuraavat käsittelyt suoritetaan edellä esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.

Tuotteen saanto on 45,5 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista, sulamispiste on 100-102°C.

20 Saadut arvot %: C 68,65, H 8,15, Cl 11,98. C33H47C12N03. Lasketut arvot %: C 68,77, H 8,16, Cl 12,32.

Esimerkki 3 176-[p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyli-N-asetyyli- alanyyli]-5a-androstan-176-oli-3-oni (III) 25 Tämän yhdisteen synteesi suoritetaan samalla taval la kuin edellä esimerkissä 1 on selostettu. Esteröintireaktioon osallistuvat 5a-androstan-176-oli-3-oni ja a-N-asetyyliamino-6- [p-di( 2-kloorietyyli ) -amino] fenyylialanii-ni happokloridimetyleenikloridissa.

30 Reaktioseosta sekoitetaan 40°C:n lämpötilassa 9 tun tia.

Seuraavat käsittelyt suoritetaan esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.

Esteröintituote kromatografoidaan piihappogeelillä 35 täytetyssä pylväässä käyttäen eluenttina bentseeni/etyyli- 27 8 4 834 asetaatti (1:1)-seosta. Tuotteen saanto on 14,5 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista.

Saadut arvot %: C 65,87, H 7,72, Cl 11,11. C34H48C12N204. Lasketut arvot %: C 65,94, H 7,75, Cl 11,47.

5 Esimerkki 4 176- [p-di( 2-kloorietyyli )aminofenyyli-N-asetyyli-alanyyli]-2a-metyyli-5a-androstan-176-oli-3-oni (IV) Tämän yhdisteen valmistus suoritetaan samalla ta-10 valla kuin edellä esimerkissä 1 on selostettu.

Esteröintireaktioon osallistuvat 2a-metyyli-5a-and-rostan-176-oli-3-oni ja a-N-asetyyliamino-8-[p-di(2-kloorietyyli )amino]fenyylialaniinihappokloridimetyleeniklori-dissa. Reaktioseosta sekoitetaan 40°C:n lämpötilassa 9 tun-15 tia.

Seuraavat käsittelyt suoritetaan esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.

Esteröintituote kromatografoidaan piihappogeelillä täytetyssä pylväässä käyttäen eluenttina bentseeni/etyyli-20 asetaatti (1:1)-seosta. Tuotteen saanto on 30 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista.

Saadut arvot %: C 66,41, H 7,96, Cl 10,91. C35H50Cl2N2O4. Lasketut arvot %: C 66,34, H 7,96, Cl 11,2.

Esimerkki 5 25 36-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a- androstandioli-36,176 (V) 4,2 g 36-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaat-ti]-5a-androstan-17-onia sekoitetaan 90 ml:n kanssa kuivaa metanolia ja joukkoon lisätään +5°C:n lämpötilassa 0,4 g 30 natriumboorihydridiä, seosta sekoitetaan tunnin ajan, se tehdään happameksi etikkahapolla pH-arvoon 6; liuos haihdutetaan kuiviin, jäännös pestään vedellä ja kuivataan natriumsulfaatin avulla. Bentseeniliuoksesta saadaan 4,0 g amorfista jauhetta. Tuotteen saanto on 95 % (laskettuna 35 lähtöaineena käytetystä ketoyhdisteestä).

28 8 4 8 34

Saadut arvot %: C 67,59, H 8,25, Cl 12,88. C31H45C12N03. Lasketut arvot %: C 67,90, H 8,16, Cl 12,95.

Esimerkki 6 173-[p-di(2-kloorietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5 5a-androstandioli-33,173 (VI) Tämän yhdisteen valmistus suoritetaan samalla tavalla kuin edellä esimerkissä 5 on selostettu.

Pelkistysreaktioon käytetään 173-[p-di(2-kloori-etyyli)-aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-3-onia. Seu-10 raavat käsittelyt suoritetaan esimerkissä 5 kuvatulla tavalla .

Pelkistystuote kromatografoidaan piihappogeelillä täytetyssä pylväässä (bentseeni/etyyliasetaatti (4:1)-seos) kokoamalla fraktiot, jotka sisältävät 3a-0H-isomee-15 riä (Rf 0,41) ja 3B-0H-isomeeriä (Rf 0,33). Toivotun 3-iso-meerin saanto on 67 % laskettuna lähtöaineena käytetystä 3-ketoyhdisteestä.

Saadut arvot %: C 67,54, H 8,26, Cl 13,03. C31H45C12N03. Lasketut arvot %: C 67,59, H 8,25, Cl 12,88.

20 Esimerkki 7 173-[p-di(2-bromietyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-17B-oli-3-oni (VII)

Liuokseen, joka sisältää 3,0 g 173-[p-di(2-kloorietyyli ) aminofenyyliasetaatti] -5a-androstan-173-oli-3-onia 25 40 ml:ssa metyylietyyliketonia, lisätään 5,7 g litiumbro- midia (noin 7-kertainen ylimäärä) ja reaktioseosta kuumennetaan 80°C:n lämpötilassa 35 tuntia. Liuotin haihdutetaan pois ja jäännös liuotetaan bentseeniin. Bentseeniliuos kromatografoidaan alumiinioksidilla täytetyssä pylväässä 30 ja toivottu tuote eristetään öljynä, joka helposti kiteytyy eetteristä. Tuotteen sulamispiste on 106-108°C. Tuotteen saanto on 54 % laskettuna lähtöyhdisteestä. Saadut arvot %: C 58,28, H 6,79, Br 25,09. C31H43Br2N03. Lasketut arvot %: C 58,38, H 6,80, Br 25,08.

11 29 8 4 8 34

Esimerkki 8 173- [p-di( 2-jodietyyli )aminofenyyliasetaatti] -5a-androstan-17fi-oli-3-oni (VIII)

Liuokseen, joka sisältää 5 g 17B-[p-di(2-kloori-5 etyyli)aminofenyyliasetaatti]-5a-androstan-17B-oli-3-onia 50 mlrssa metyylietyyliketonia, lisätään 7,5 g natriumjo-didia (noin 6 kertainen ylimäärä) ja reaktioseosta kuumennetaan liuottimen kiehumispisteessä 72°C:ssa (79,5-80°C). Liuottimen haihdutuksen jälkeen jäännös uutetaan bentsee-10 nillä ja kromatografoidaan alumiinioksidilla täytetyssä pylväässä käyttäen eluenttina bentseeniä. Bentseenieluaa- tista otetaan talteen kiinteä tuote, joka kiteytetään eetteristä. Tuotteen saanto on 3,29 g (48,5 % laskettuna lähtöaineena käytetystä hormonista), sulamispiste on 110-15 112°C.

Saadut arvot %: C 50,70, H 5,87, J 34,07. C31H43J2N03. Lasketut arvot %: C 50,90, H 5,88, J 34,74.

Teollinen soveltuvuus

Androstaanisarjan steroidi johdannaiset ovat käyttö-20 kelpoisia lääketieteen eri aloilla, kuten gynekologiassa ja onkologiassa kasvaimia torjuvina ja hedelmöitystä ehkäisevinä aineina.

Claims (3)

1. 30 84834 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten andros-taanisarjan steroidijohdannaisten valmistamiseksi, joiden 5 yleinen kaava on r-· J R2 10 »rCO^ U) H 15 jossa Rx on -OCOCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2; - OH tai, =0; R2 on -OH -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2; NHCOCH3 -OCO(CH2)nC6H4N(CH2CH2X)2, jossa n on 1 tai 3, ja X on Cl, Br, J; ja R3 on -CH3 tai -H, sillä edellytyksellä, että Rx 20 ja R2 eivät voi samanaikaisesti tarkoittaa hydroksiryhmää ja R3 ei voi olla okso kun R2 on hydroksiryhmä, tunnettu siitä, että a) sellaisen kaavan (i) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Rt on -OCOCH2C6H4N(CH2CH2C1 )2 ja R2 on =0, saate- 25 taan yhdiste, jonka kaava on 30 (2) 1. H 35 jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä, reagoimaan happoklo-ridin kanssa, jonka kaava on li 3i 84834 o II R-C-Cl (3) jossa R on 5 i^CH2- (C1CH2CH2) 2N— 10 tai b) sellaisen kaavan (1) mukaisen yhdisteen saami-15 seksi, jossa Rx on =0 ja R2 on -0C0(CH2 )nC6H4N(CH2CH2Cl )2, saatetaan yhdiste, jonka kaava on 20 n—r°H H 25 jossa R3 tarkoittaa samaa kuin edellä, reagoimaan happoklo-ridin kanssa, jonka kaava on 30 [^>-<c"2>n- (c1ch2ch2>2n— 35 : jossa n tarkoittaa samaa kuin edellä; tai 32 8 4 8 3 4 c) sellaisen kaavan (1) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R2 on -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2 NHCOCH3 saatetaan kaavan (4) mukainen yhdiste reagoimaan a-N-ase-5 tyyliamino-β- [p-di( 2-kloorietyyli )amino] fenyylialaniini-happokloridin kanssa, jonka kaava on NHCOCH3 10 f^j)-CH2cH-C-C1 (C1CH2CH2)2N—0 (5) 15 minkä jälkeen näin saadussa yhdisteessä oksoryhmä tarvittaessa pelkistetään natriumboorihydridillä, ja/tai kun kaavassa (1) radikaalin R2 merkitys on -0C0(CH2)nC6H4N(CH2CH2C1 )2 niin kloori tarvittaessa korvataan bromilla tai jodilla. Il 33 84834 Förfarande för framställning av terapeutiskt an-vändbara steroider av androstanserien, vilka har formeln 5 <1>
2. 10 H väri R3 är -OCOCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2; - OH eller =0; R2 är 15 -OH, -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl)2; NHCOCHj -OCO(CH2)nC6H4N(CH2CH2X)2, väri n är 1 eller 3, och X är Cl, Br eller J; och R3 är -CH3 eller -H, under förbehäll att R3 och R2 icke samtidigt kan beteckna en hydroxigrupp och 20 Rx icke kan vara oxo dä R2 är en hydroxigrupp, känne-t e c k n a t därav, att a) för erhällande av en förening med formeln (1), väri Rx är -OCOCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2 och R2 är =0, omsätts en förening med formeln 25 s » 30 » i ..... H väri R3 har ovan angivna betydelse, med en syraklorid med 35 formeln 34 84834 ? R-C-Cl (3) väri R är 5 (cich2ch2) 2ν— 10 eller b) för erhällande av en förening med formeln (1), 15 väri R3 är =0, och R2 är -0C0(CH2)nC6H4N(CH2CH2C1 )2, orasätts en förening med formeln ... r i H 25 väri R3 har ovan angivna betydelse, med en syraklorid med formeln 30 r^T<CH2>n- (C1CH2CH2)2N— väri n har ovan angivna betydelse; eller il 35 35 84834 c) för erhällande av en förening med formeln (1), väri R2 är -OCOCHCH2C6H4N(CH2CH2Cl )2 NHCOCHj omsätts en förening med formeln (4) med a-N-acetylamino-5 B-[p-di(2-kloretyl)amino]fenylalaninsyraklorid med formeln NHCOCH3
3. 10 J^pC„2iH-f-Cl (cich2ch2)2n—0 15 varefter oxogruppen i den erhällna föreningen vid behov reduceras med natriumborhydrid, och/eller när radikalen R2 i formeln (1) betecknar -OCO(CH2)nC6H4N(CH2CH2Cl )2 dä ersätts kloren vid behov med brom eller jod.