FI83975B - Foerfarande och reagens foer specifik bestaemning av hdl-kolesterolhalt i serum. - Google Patents
Foerfarande och reagens foer specifik bestaemning av hdl-kolesterolhalt i serum. Download PDFInfo
- Publication number
- FI83975B FI83975B FI863752A FI863752A FI83975B FI 83975 B FI83975 B FI 83975B FI 863752 A FI863752 A FI 863752A FI 863752 A FI863752 A FI 863752A FI 83975 B FI83975 B FI 83975B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cholesterol
- bile acid
- mmol
- serum
- reagent
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 21
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 117
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 claims abstract description 21
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 14
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000006395 oxidase reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract 7
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical group 0.000 claims abstract 4
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- -1 bile acid derivative salt Chemical class 0.000 claims description 12
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 9
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 9
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 229960000878 docusate sodium Drugs 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 7
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- CTTJWXVQRJUJQW-UHFFFAOYSA-N 2,2-dioctyl-3-sulfobutanedioic acid Chemical compound CCCCCCCCC(C(O)=O)(C(C(O)=O)S(O)(=O)=O)CCCCCCCC CTTJWXVQRJUJQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N azane;7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulfonic acid Chemical compound N.OS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 abstract 1
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 26
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 26
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 7
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 5
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N (e)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazine Chemical compound C1=CC=C2S\C(=N\N)N(C)C2=C1 PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 4
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 3
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical class OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001448 anilines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXLXSOPFNVKUMU-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioctoxy-1,4-dioxobutane-2-sulfonic acid Chemical compound CCCCCCCCOC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCCCCCCCC OXLXSOPFNVKUMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGZXYZZHXXTTJN-UHFFFAOYSA-N 2,3-dichlorobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1Cl ZGZXYZZHXXTTJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFAOATPOYUWEHM-UHFFFAOYSA-N 2-(6-methylheptyl)phenol Chemical compound CC(C)CCCCCC1=CC=CC=C1O NFAOATPOYUWEHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVVXXHVHGGWWPE-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)benzoic acid Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1C(O)=O DVVXXHVHGGWWPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 2-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Cl ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTYZJYSZOUXZEO-UHFFFAOYSA-N 3,4,5-tribromo-2-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(Br)=C(Br)C(Br)=C1O VTYZJYSZOUXZEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 101100162705 Caenorhabditis elegans ani-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100491335 Caenorhabditis elegans mat-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000008620 Cholesterol Assay Methods 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 238000008470 HDL Cholesterol Assay Methods 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylaniline Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1 JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N Taurocholic acid Chemical class OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)C1(C)C(O)C2 WBWWGRHZICKQGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108010069201 VLDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 241000179532 [Candida] cylindracea Species 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 229940008126 aerosol Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- GGCLNOIGPMGLDB-GYKMGIIDSA-N cholest-5-en-3-one Chemical compound C1C=C2CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 GGCLNOIGPMGLDB-GYKMGIIDSA-N 0.000 description 1
- NYOXRYYXRWJDKP-UHFFFAOYSA-N cholestenone Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 NYOXRYYXRWJDKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical class C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 229940048961 cholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical class C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L disodium;2,2-dioctyl-3-sulfobutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCCCCC(C([O-])=O)(C(C([O-])=O)S(O)(=O)=O)CCCCCCCC YHAIUSTWZPMYGG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011545 laboratory measurement Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical class C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 description 1
- 239000001008 quinone-imine dye Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N taurocholic acid Chemical class C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-GIHLXUJPSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
1 83975
Menetelmä ja reagenssl seerumin HDL-kolesterolipitoisuuden spesifiseksi määrittämiseksi
Seerumin (tai plasman) kokonaiskolesterolipitoisuuden laboratoriomittaus on jo pitkään ollut vakiintunut käytäntö ateroskleroosi- tai sydäninfarktiriskin diagnosoinnissa. Diagnoosin tekoa on viime vuosina voitu parantaa mittaamalla lisäksi "high density lipoprotein"-jakeeseen sitoutunut kolesteroli (HDL-kolesteroli).
Laajat kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet, että seerumin kohonnut kokonaiskolesterolipitoisuus (maitiaishiukkasiin, VLDL:ään ("very low density lipoproteins"), LDL:ään ("low density lipoproteins") ja HDLrään sitoutunut vapaa ja rasvahapoilla esteröitynyt kolesteroli) johtaa kohonneeseen sydäninfarktiriskiin, kun taas toisaalta seerumin HDL-kolesterolipitoisuuden ja ateroskleroottisten verisuonimuutosten vaaran välillä on kääntäen verrannollinen suhde (ks. esim.
B.G. Assmann Lipidstoffwechsel und Atherosklerose, Schattau-er-Verlag, Stuttgart 1982).
Kokonaiskolesterolipitoisuuden määrittämiseen on ollut käytettävissä jo noin 15 vuoden ajan yksinkertaisia, mutta kuitenkin hyvin tarkkoja täysin entsymaattisia menetelmiä, jotka voidaan suorittaa sekä käsin että melko hyvin myös automaattisesti ilman hankalia näytteenkäsittelytoimenpiteitä, ja jotka tavallisesti noudattavat seuraavaa reaktiokaa-viota: kolesteroli- 1) kolesteroliesteri + H2O esteraasi y kolesteroli + rasvahappo 2) kolesteroli + (¾ kolesterolloksidaasi^ ^“tadesten-S-cni + H2O2
Kolesteroli osoitetaan joko muodostuneen vetyperoksidin avulla, mielellään kolorimetrisesti, erityisesti liittämällä peroksi-daasin katalysoimalla hapetuksella fenoli tai fenoli- tai ani- 2 83975 liinijohdannainen 4-aminoantipyriiniin, jolloin syntyy väriltään punaisen ja violetin välillä vaihteleva kinoni-imiini-väriaine ("Trinderin reaktio"), tai muodostuneen kolestenonin avulla tai yhtälössä 2) käytetyn hapen avulla. Nämä määritysmenetelmät ovat tuttuja alan ammatti-ihmisille, ks. esim. DE-hakemusjulkaisut 22 24 132 ja 25 06 712.
Tämän reaktiosysteemin tai analyysireagenssin oleellinen tunnusmerkki on pinta-aktiivisten aineiden läsnäolo, joita ovat erityisesti ei-ioniset alkyyli- tai alkyyliaryylipolyetyleeni-oksidieetterit mahdollisesti sappihapposuolojen, kuten natrium-kolaatin kanssa, joka toimii lisäksi liuotusaineena ilman, että koliiniesteraasi omaisi hydrolysoivaa vaikutusta.
Koliiniesteraaseina käytetään tällöin mielellään mikrobeista peräisin olevia entsyymejä.
Seerumin HDL-kolesterolipitoisuus määritetään samalla periaatteella, mutta tätä ennen pitää seerumista poistaa yhdessä tai useammissa menetelmävaiheissa muut kolesterolipitoiset lipopro-teiinipartikkelit (maitiaishiukkaset, VLDL ja LDL).
Näiden lipoproteiinin erottamiseen käytetään ennen kaikkea ultrasentrifugointia, elektroforeesia tai erilaisia saostusme- netelmiä, kuten immunosaostusta tai saostusta fosfovolframiha- 2+ 2 + polla ja Mg -ioneilla, dekstraanisulfaatilla ja Mg -ioneilla tai hepariinilla ja Mn2+-ioneilla tai polyetyleeniglykolilla (ks. esim. Ärztl. Lab. 29, 107-114 (1983), Clin. Chem., 31, 252-256 (1985).
Tähän tarvittavien lisälaitteistojen lisäksi vaativat nämä erotusmenetelmät huomattavasti aikaa ja henkilökuntaa, mikä vaikeuttaa rutiininomaista HDL-kolesterolimääritystä tai tekee sen kalliiksi kliinisissä laboratorioissa.
Koska seerumin kokonais- ja myös HDL-kolesterolimäärityksellä on suhteellisen suuri diagnostinen merkitys, on erittäin tärkeätä, että käytettävissä on menetelmä ja reagenssi, jotka 3 83975 ί mahdollistavat HDL-kolesterolin ja seerumin kokonaiskolesterolipitoisuuden määrittämisen yhdestä näytteestä ilman näytteelle tehtäviä ennakkokäsittelyjä.
Näin ollen esillä olevan keksinnön tarkoituksena on tehdä mahdolliseksi seerumin tai plasman HDL-kolesterolipitoisuu-den määrittäminen ilman, että sitä ennen pitäisi erottaa näytteestä LDL-kolesteroli, VLDL-kolesteroli ja maitiaishiukkasko-lesteroli. Vielä toinen keksinnön tarkoitus on tarjota edellä mainitun kaltainen menetelmä, jolla samalla voidaan määrittää seerumin tai plasman kokonaiskolesterolipitoisuus.
Keksintö tarjoaa menetelmän seerumin tai plasman HDL-kolesterolin spesifiseksi määrittäiseksi, jossa menetelmässä suoritetaan inkubointi kolesterolinosoitussysteemin kanssa, joka sisältää kolesterolioksidaasia ja kolesteroliesteraasia puskuroidussa vesipitoisessa väliaineessa, ja mitataan kolesterolioksidaasi-reaktion tuote tai hapenkulutus, ja menetelmälle on tunnusomaista se, että inkuboidaan seerumia tai plasmaa suoraan, ilman että esim. erotetaan muut kolesterolipitoiset lipoprote-iinit sappihapon suolan tai sappihapon johdannaisen suolan tai dioktyylisulfosukkinaatin (Aerosol R0T) läsnäollessa ja sen jälkeen suoritetaan ensimmäinen mittaus, jonka jälkeen lisätään ei-ioninen, polyetyleenioksidiryhmiä sisältävä pinta-aktiivinen aine tai sekundäärinen alkaanisulfonaatti, inkuboidaan uudestaan ja suoritetaan toinen mittaus, jolloin ensimmäisen ja toisen mittauksen välinen erotus ilmoittaa HDL-koleste-rolimäärän. Keksinnön muut oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa.
Keksintö perustuu siihen yllättävään havaintoon, että tietyt pinta-aktiiviset aineet tekevät mahdolliseksi vain maitiais-hiukkasten, VLDL:n ja LDL:n sisältämän kolesterolin reagoinnin kolesteroliesteraasin ja kolesterolioksidaasin kanssa niin, että on mahdollista antaa näiden kolesterolijakeiden reagoida pois mainittujen entsyymien kanssa ensimmäisessä inkubointivaiheessa ja vasta toisessa inkubointivaiheessa saattaa HDL-kolesteroli reagoimaan sen seurauksena, että 4 83975 läsnä on ei-ionista, polyetyleenioksidiryhmiä sisältävää pinta-aktiivista ainetta tai sekundääristä alkaanisulfo-naattia. Näin on mahdollista määrittää yhdestä ainoasta näytteestä joko ensin maitiaishiukkasten, VLDL:n ja LDL:n sisältämä kolesteroli ja sen jälkeen erikseen HDL-koleste-roli niin, että yhdellä kertaa saadaan selville sekä kokonaiskolesterolipitoisuus että HDL-kolesterolipitoisuus, tai saattaa maitiaishiukkasten, VLDL:n ja LDL:n sisältämä kolesteroli ensin reagoimaan pois ilman määritystä ja vasta sen jälkeen mitata pelkkä HDL-kolesterolipitoisuus. Ensimmäisessä tapauksessa antaa ensimmäisen ja toisen inkuboinnin jälkeen saadun mittausarvon erotus HDL-kolesterolimäärän ja toisen inkuboinnin jälkeen saatu mittausarvo antaa yksinään kokonaiskolesterolimäärän. Toisessa tapauksessa, jossa määritetään pelkkä HDL-kolesteroli, lisätään ensimmäisen inkuboinnin ajaksi fenolia, fenolijohdannaista tai aniliinia sekä peroksidaasia, mutta ei lisätä aminoantipyriiniä, MBTH:ta eikä MBTH-S:ää. Tällöin reagoi yhtälön 2 mukaisesti syntynyt vetyperoksidi ilman värinmuodostusta. Vasta suoritettaessa toista inkubointia 4AAP:n, MBTH:n tai MBTH-S:n läsnäollessa, muodostuu väri, joka on HDL-pitoisuuden suora mitta. Tämän menetelmävaihtoehdon mukaan tarvitaan HDL-määritykseen siis vain yksi mittaus.
Näin ollen on keksinnön mukainen menetelmä edullista suorittaa käyttämällä sellaista kolesterolin osoitussysteemiä, jossa mitataan kolesterolioksidaasireaktion 2 tuotteena syntynyt vetyperoksidi värinmuodostuksen avulla. Vastaavat väriä synnyttävät systeemit, jotka soveltuvat vetyperoksidin osoittamiseen, ovat tuttuja alan ammatti-ihmisille. Etusijalle asetetaan ns. Trinderin systeemi, joka koostuu fenolista tai fenolijohdannaisista tai substituoiduista aniliineista, 4-aminoantipyriinistä ja peroksidaasista. Sopivia fenoleja tai fenolijohdannaisia ovat ennen kaikkea fenoli, kloorifenoli, trijodi- tai tribromihydroksibentsoehappo ja dikloorifeno-lisulfonihappo. 4-aminoantipyriinin tilalla voidaan käyttää esimerkiksi 3-metyyli-2-bentsotiatsolinoni-hydratsonia (MBTH) li 5 83975 ja sen sulfonoitua johdannaista (MBTHS) mielellään yhdessä substituoidun aniliinin, kuten dimetyylianiliinin, dimetyy-liaminobentsoehapon, N-etyyli-N-B-sulfoetyyli-m-toluidiinin tai N-etyyli-N-8-hydroksietyyli-m-toluidiinin kanssa, jotka kaksi viimeksi mainittua yhdistettä ovat osoittautuneet hyviksi myös 4-aminoantipyriinin kanssa käytettyinä.
Koliiniesteraaseina tulevat kysymykseen mikrobiperäiset ko-liiniesteraasit, kuten esimerkiksi Candida cylindraceasta saatu ja erityisesti haiman entsyymi.
Sappihapoista ja sappihappojohdannaisista voidaan mainita kolihapon, deoksikolihapon, litokolihapon, taurokolihapon, glykolihapon, deoksiglykokolihapon ja deoksitaurokolihapon ja koleiinihappojen aikaiimetalli- tai magnesiumsuolat. Natriumkolaatti asetetaan etusijalle. Vaihtoehtoisesti voidaan myös käyttää natriumdioktyylisulfosukkinaattia (Aero-sol OT). Havaittiin, että nämä pinta-aktiiviset aineet avaavat vain maitiaishiukkaset, VLDLrn ja LDL:n, joissa on paljon lipidiä ja suhteellisen vähän proteiinia, jolloin näiden sisältämä kolesteroli pääsee osallistumaan entsymaat-tiseen reaktioon.
HDL-jakeen sisältämä kolesteroli saatetaan entsymaattiselle määritykselle alttiiksi käyttämällä ei-ionista, polyetyleeni-oksidiryhmiä sisältävää pinta-aktiivista ainetta, kuten ei-ionista alkyyli- tai alkyyliaryyli-polyetyleenioksidieetteriä, esimerkiksi n-dodekyylipolyetyleeniglykolieetteriä (Thesit ), ® iso-tridekanolipolyetyleenioksidieetteriä (Genapol x-80), ® iso-oktyylifenolipolyetyleenioksidieetteriä (Triton X-100). Voidaan myös käyttää anionisia sekundäärisiä alkaanisulfo- naatteja, joita on saatavissa esimerkiksi kauppanimellä ®
Hostapur AT. Nämä HDL:n vapauttavat pinta-aktiiviset aineet on edullista lisätä metanolin, etanolin, n-propanolin tai isopropanolin kanssa. Propanoli asetetaan etusijalle. Alkoholimäärä on mielellään 0,05 - 2 %. Tämä ja kaikki muut pi-toisuustiedot perustuvat reaktioseoksen loppupitoisuuteen.
6 83975
Sappihapposuolaa tai sappihappojohdannaisen suolaa lisätään mielellään sellainen määrä, että loppupitoisuudeksi tulee 0,2 - 20 mmol/1. Nämä pitoisuudet voidaan kuitenkin alittaa tai ylittää tutkittavasta näytteestä riippuen. Dioktyylisul-fosukkinaatin kohdalla pätee sama.
Toisen pinta-aktiivisen aineen eli siis ei-ionisen, polyety-leenioksidiryhmiä sisältävän pinta-aktiivisen aineen tai alkaanisulfonaatin edullinen pitoisuus on 0,02 - 2 %. Näytteestä riippuen voidaan myös nämä pitoisuudet ylittää tai alittaa.
Muuten käytetään reaktiossa samoja pH-arvoja, puskurisystee-mejä ja entsyymimääriä kuin ennestään tunnetuissa kolesterolin määrityksissä.
Keksintö koskee lisäksi reagenssia seerumin HDL-kolesteroli-pitoisuuden spesifiseksi määrittämiseksi, joka reagenssi sisältää kolesteroliesteraasia, kolesterolioksidaasia ja puskuria ja jolle reagenssille on tunnusomaista se, että valmis vesiliuos sisältää 0,1-10 yksikköä/ml kolesteroliesteraasia, 0,05 - 10 yksikköä/ml kolesterolioksidaasia, 20 - 500 mmol/1 puskurointiainetta pH 6,0 - 8,0, 0,2 - 20 mmol/1 sappihapposuolaa tai sappihappojohdannaisen suolaa tai dioktyylisulfosukkinaattia ja näistä erillään 0,02 - 2 % ei-ionista, polyetyleenioksidiryhmiä sisältävää pinta-aktiivista ainetta tai sekundääristä alkaanisulfo-naattia sekä mahdollisesti 0,05 - 2 % korkeintaan 3 hiiliatomia sisältävää alkoholia.
Ensimmäisen toteutustavan mukaisesti sisältää keksinnön mukainen reagenssi 0,05 - 20 yksikköä/ml peroksidaasia, 0,2 - 20 mmol/1 fenolia tai aniliinia ja mahdollisesti 0,02 - 5 % polyetyleeniglykolia ja/tai 0,05 - 2 % n-pro-panolia.
7 83975
Edullinen keksinnön mukainen reagenssi sisältää 0,02 - 2 yksikköä/ml kolesteroliesteraasia, 0,05 - 0,5 yksikköä/ml kolesterolioksidaasia, 1-5 yksikköä/ml peroksidaasia, 50 - 200 mmol/1 kaliumfosfaattipuskuria pH 6,5 - 7,0, 1,4 - 10 mmol/1 fenolia tai fenolijohdannaista, 1-5 mmol/1 sappihapposuolaa tai sappihappojohdannaisen suolaa tai dioktyylisulfosukkinaattia ja mahdollisesti näistä erillään 0,2-2 mmol/1 4-aminoantipyriiniä ja muista aineosista erillään, lukuunottamatta mahdollista 4-aminoantipyriiniä, 0,5 - 5,0 % ei-ionista, polyetyleenioksidiryhmiä sisältävää pinta-aktiivista ainetta tai sekundääristä alkaanisulfonaat-tia ja mahdollisesti 0,1 - 0,5 % n-propanolia ja 0,5 - 5,0 % poly-etyleeniglykolia.
Toisessa toteutustavassa ovat mainitut reaktion aineosat kantaja-aineen päällä tai siihen imeytettyinä. Kantaja-aineena voidaan käyttää imukykyistä tai turpoamiskykyistä tai kalvonmuodostukseen kykenevää kantaja-ainetta, esimerkiksi testiliuskoissa käytettyä kantaja-ainetta, kuten paperia, ja vastaavia kuitumateriaaleja, kuten teepussipaperia. Tällöin voivat reaktion aineosat olla jaettuina useiden toisiinsa kosketuksessa olevien kantaja-aineiden kesken.
Keksinnön mukaisella menetelmällä saavutetaan se, että HDL:n sisältämä kolesteroli on määritettävissä suoraan tarvitsematta sitä ennen erottaa pois muitakolesterolia sisältäviä lipoproteiinijakeita. Tämä merkitsee määritysmenetelmän oleellista helpottumista ja yksinkertaistumista.
Keksintöä valaistaan seuraavilla esimerkeillä.
Käytettyjen lyhenteiden merkitykset ovat seuraavat: CHOD = kolesterolioksidaasi CHOL-esteraasi = kolesteroliesteraasi POD = peroksidaasi β 83975 4-AAP = 4-aminoantipyriini PEG 6000 = polyetyleeniglykoli 6000 TRA = trietanoliamiini
Esimerkki 1 a) Perusreagenssi: K-fosfaatti 0,1 mol/1 pH 6,7 3 mM Na-kolaatti 0,8 mM 4-AAP CHOD 1,2 U/ml 1,4 mM fenoli CHQL. esteraasi 0,5 U/ml 0,1 % PEG 6000 POD 3 U/ml b) ftyöhemmän käynnistyksen reagenssi: TRA-puskuri 0,05 m pH 7,1 10 % Ihesit 10 % propanoli c) Kokeen suoritustapa: Aallonpituus: 546 nm
Lämpötila: 25°C
Mittaus 25°C:ssa reagenssitaustaa vasten Ryvetteihin, joiden kerrospaksuus on 10 nm, pipetoidaan: Näyte Reagenssitausta (RLW) perusreagenssi 2,00 ml 2,00 ml näyte 0,02 ml vesi - 0,02 ml 10 (-30) minuutin inkubointi, sitten mitataan näytteen E reagenssi-taustan (RLW) E^:tä vastaan (= E^ myöherrmän käynnistyksen reagenssi 0,02 ml 0,02 ml inkuboidaan vielä vähintään 10 minuuttia, sitten mitataan näytteen E2 reagenssitaustan (RLW) E2:ta vasten (= E2) d) Laskenta:
Laskenta tapahtuu käyttämällä seerumistandardia, jonka kokonaiskolesteroli- ja HDL-kolesterolipitoisuus tunnetaan.
Seerumistandardia käsitellään, kuten näytettä.
9 83975 Δ E^näyte c/kokonaiskolesteroli7 (mg/dl) = c . , ,. x- standardi Δ E2Standardi (Δ E„ -Δ EJ näyte c/ax-kolesteroll7 (ng/dl) = cstandaral x _____ (Δ e2 -Δ E^) standardi
Esimerkin mukaisessa kokeessa vaiheittain etenevä värinmuo-dostus on esitetty kuviossa 1 ajan funktiona.
Esimerkki 2 a) Perusreagenssi: Kuten esimerkissä 1, mutta ilman 4-AAP:tä b) Myöhennän käynnistyksen rea- genssi: Kuten esimerkissä 1, mutta sisältää li säksi 80 mM 4-AAP:tä c) Kokeen suoritustapa: Aallonpituus: 546 nm
Läirpötila: 25°C
Mittaus 25°C:ssa reagenssitaustaa vasten Ryvetteihin, joiden kerrospaksuus on 10 im, pipetoidaan: Näyte Reagenssitausta (RLW) perusreagenssi 2,00 ml 2,00 ml näyte 0,02 ml vesi - 0,02 ml 10 (-30) minuutin inkubointi, myöhennän käynnistyksen reagenssi 0,02 ml 0,02 ml inkuboidaan vähintään 10 minuuttia, sitten mitataan näytteen E reagenssitaustan (KLW) E:tä vasten (= ΔΕ) 10 83975 d) Laskenta:
Laskenta tapahtuu käyttämällä seerumistandardia, jonka kokonaiskolesteroli- ja HDL-kolesterolipitoisuus tunnetaan. Seerumistandardia käsitellään, kuten näytettä.
c/HCL-kolesteroli7 (ng/dl) = cstandaItJ1 x sS^ardi
Kuviossa 2 verrataan toisiinsa eri ihmisseerumeille tehtyjä HDL-kolesterolimäärityksiä, joissa määritys on suoritettu sekä keksinnön mukaisella menetelmällä että fosforivolframihappo-magnesiumsulfaattisaostusmenetelmällä. Menetelmien vertailu antaa regressiokäyräksi Y = -0,907 + 1,019 X ja korrelaatio-kerroin on 0,814.
Kun noudatetaan esimerkin 1 mukaista menetelmää, saadaan vastaavanlaiset tulokset.
Claims (12)
1. Menetelmä seerumin tai plasman HDL-kolesterolin spesifiseksi määrittämiseksi siten, että suoritetaan inkubointi kolesterolinosoitussysteemin kanssa, joka sisältää koleste- 5 rolioksidaasia ja kolesteroliesteraasia puskuroidussa vesipitoisessa väliaineessa, ja mitataan kolesterolioksidaasi-reaktion tuote tai hapenkulutus, tunnettu siitä, että inku-boidaan seerumia tai plasmaa suoraan, ilman että esim. erotetaan muut kolesterolipitoiset lipoproteiinit, sappiha-10 pon suolan tai sappihapon johdannaisen suolan tai dioktyy-lisulfosukkinaatin läsnäollessa ja sen jälkeen suoritetaan ensimmäinen mittaus, jonka jälkeen lisätään ei-ioninen, polyetyleenioksidiryhmiä sisältävä pinta-aktiivinen aine tai sekundäärinen alkaanisulfonaatti, inkuboidaan uudestaan 15 ja suoritetaan toinen mittaus, jolloin ensimmäisen ja toisen mittauksen välinen erotus ilmoittaa HDL-kolesterolimäärän.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kolesterolin osoitussysteemiä, jossa 20 saadaan aikaan väri kolesteroliesteraasireaktion tuotteena syntyneen vetyperoksidin avulla.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että värinmuodostukseen käytetään kromogeenisystee- 25 miä, jossa on fenolia tai aniliinia ja 4-aminoantipyriiniä sekä peroksidaasia.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen menetelmän muunnos, tunnettu siitä, että ensimmäisessä inkuboinnissa on läsnä 30 a) sappihapposuolaa tai sappihappojohdannaisen suolaa tai dioktyylisulfosukkinaattia, b) fenolia tai aniliinia ja c) peroksidaasia, ja tämän inkuboinnin jälkeen lisätään ei-ionista, polyety-35 leenioksidiryhmiä sisältävää pinta-aktiivista ainetta tai sekundääristä alkaanisulfonaattia ja 4-aminoantipyriiniä, inkuboidaan uudestaan ja mitataan muodostunut väri.
5. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukai nen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetty kolesterolies- teraasi on saatu haimasta. i2 83975
6. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukai nen menetelmä, tunnettu siitä, että sappihapposuolan tai sappihappojohdannaisen suolan tai dioktyylisulfosukkinaatin pitoisuudeksi tulee 0,2 - 20 mmoolia/1.
7. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukai nen menetelmä, tunnettu siitä, että ei-ionisen, polyety-leenioksidiryhmiä sisältävän pinta-aktiivisen aineen tai sekundäärisen alkaanisulfonaatin pitoisuudeksi tulee 0,02 - 2 %. 15
8. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reaktio suoritetaan pH-alueella 6,0 - 8,0.
9. Minkä tahansa edellä olevan patenttivaatimuksen mukai nen menetelmä, tunnettu siitä, että reaktioväliaineeseen lisätään 0,05-2%l-3 hiiliatomia sisältävää alkoholia.
10. Reagenssi seerumin tai plasman HDL-kolesterolipitoisuu- 25 den spesifiseksi määrittämiseksi, joka reagenssi sisältää kolesterolioksidaasia, puskuria ja kolesteroliesteraasia, tunnettu siitä, että reagenssi koostuu vähintään kahdesta sekoittumattomasta yksittäisreagenssista, joista ensimmäisessä on testin loppukonsentraatiosta laskettuna 30 0,1-10 yksikköä/ml kolesteroliesteraasia, 0,05 - 10 yksikköä/ml kolesterolioksidaasia, 20 - 500 mmoolia/1 puskurointiainetta pH 6,0 - 8,0, 0,2 - 20 mmoolia/1 sappihapposuolaa tai sappihappojohdannaisen suolaa tai dioktyylisulfosukkinaattia; 35 ja toisessa on testin loppukonsentraatiosta laskettuna 0,02 - 2 % ei-ionista, polyetyleenioksidiryhmiä sisältävää pinta-aktiivista ainetta tai sekundääristä alkaanisulfonaat-tia i 13 83975 sekä mahdollisesti 0,05 - 2 % korkeintaan 3 hiiliatomia sisältävää alkoholia.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että ensimmäinen yksittäisreagenssi sisältää 0,05 - 20 yksikköä/ml peroksidaasia, 0,2 - 20 mmoolia/1 fenolia, fenolijohdannaista tai anilii-nia, ja mahdollisesti 0,02 - 5 % polyetyleeniglykolia, ja toinen yksittäisreagenssi mahdollisesti 0,05 - 2 % n-propanolia.
11 83975
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että ensimmäinen yksittäisreagenssi sisältää 0,05 - 0,5 yksikköä/ml kolesterolioksidaasia, 0,2-2 yksikköä/ml peroksidaasia, 1-5 yksikköä/ml kolesteroliesteraasia, 50 - 200 mmoolia/1 kaliumfosfaattipuskuria pH 6,5 - 7,0, 1,5 - 10 mmoolia/1 fenolia tai fenolijohdannaista, 1-5 mmoolia/1 sappihapposuolaa tai sappihappojohdannaisen suolaa tai dioktyylisulfosukkinaattia, ja mahdollisesti 0,1 - 0,5 % polyetyleeniglykolia, ja toinen yksittäisreagenssi 0,05 - 0,5 % ei-ionista, polyetyleenioksidiryhmiä sisältävää pinta-aktiivista ainetta tai sekundääristä alkaanisulfonaat-tia, ja mahdollisesti 0,1 - 0,5 % n-propanolia ja/tai polyetyleeniglykolia, ja jompikumpi yksittäisreagenssi sisältää mahdollisesti 0. 2-2 mmoolia/1 4-aminoantipyriiniä.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853533288 DE3533288A1 (de) | 1985-09-18 | 1985-09-18 | Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung von hdl-cholesterin im serum |
| DE3533288 | 1985-09-18 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI863752A0 FI863752A0 (fi) | 1986-09-17 |
| FI863752A FI863752A (fi) | 1987-03-19 |
| FI83975B true FI83975B (fi) | 1991-06-14 |
| FI83975C FI83975C (fi) | 1991-09-25 |
Family
ID=6281297
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI863752A FI83975C (fi) | 1985-09-18 | 1986-09-17 | Foerfarande och reagens foer specifik bestaemning av hdl-kolesterolhalt i serum. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4851335A (fi) |
| EP (1) | EP0218127B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0616720B2 (fi) |
| KR (1) | KR890003948B1 (fi) |
| AT (1) | ATE48649T1 (fi) |
| AU (1) | AU574931B2 (fi) |
| DE (2) | DE3533288A1 (fi) |
| DK (1) | DK445986A (fi) |
| ES (1) | ES2001417A6 (fi) |
| FI (1) | FI83975C (fi) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE448324B (sv) * | 1985-09-27 | 1987-02-09 | Pharmacia Ab | Sett vid immunkemisk bestemning av lipoproteiner och apolipoproteiner |
| US5221623A (en) * | 1986-07-22 | 1993-06-22 | Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. | Use of bacterial luciferase structural genes for cloning and monitoring gene expression in microorganisms and for tagging and identification of genetically engineered organisms |
| DE3636851A1 (de) * | 1986-10-29 | 1988-05-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung des cholesterins der hdl-fraktion |
| EP0378395B1 (en) * | 1989-01-13 | 1996-08-14 | Robert Q. Maines | Method of measuring cholesterol, diagnosing vascular disease, and raising HDL cholesterol levels |
| US5135716A (en) * | 1989-07-12 | 1992-08-04 | Kingston Diagnostics, L.P. | Direct measurement of HDL cholesterol via dry chemistry strips |
| FI901703A (fi) * | 1990-04-04 | 1991-10-05 | Elomit Oy | Foerfarande foer bestaemmande av kliniskt relevanta metaboliter. |
| US5344571A (en) * | 1992-02-18 | 1994-09-06 | University Of Texas System Board Of Regents | Method for separating isoanalytes and measuring analytes in fluids |
| JP2653755B2 (ja) * | 1994-03-08 | 1997-09-17 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
| JP2600065B2 (ja) * | 1994-03-08 | 1997-04-16 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
| EP0764848A4 (en) * | 1995-03-20 | 2001-04-11 | Kyowa Medex Co Ltd | METHOD FOR QUANTIFYING CHOLESTEROL IN LOW DENSITY OR VERY LOW DENSITY LIPOPROTEIN |
| US5776719A (en) * | 1997-07-07 | 1998-07-07 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5989845A (en) * | 1996-04-05 | 1999-11-23 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US6040151A (en) | 1998-03-10 | 2000-03-21 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| WO1997040376A1 (fr) * | 1996-04-22 | 1997-10-30 | Iatron Laboratories, Inc. | Procede specifique de dosage du cholesterol des lphd et composition utilisee pour le dosage. |
| JP3193634B2 (ja) | 1996-05-29 | 2001-07-30 | 第一化学薬品株式会社 | Ｌｄｌコレステロールの定量方法 |
| CA2246308C (en) * | 1996-12-09 | 2008-11-18 | Denka Seiken Co., Ltd. | Method for quantifying cholesterol in high-density lipoprotein |
| JPH1156395A (ja) * | 1997-08-27 | 1999-03-02 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | コレステロールの定量法 |
| AU2003301324A1 (en) * | 2002-10-16 | 2004-05-04 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method and reagent for measuring cholesterol in high-density lipoproteins |
| JP4498143B2 (ja) * | 2002-10-16 | 2010-07-07 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法および試薬 |
| TWI372783B (en) * | 2005-04-27 | 2012-09-21 | Kyowa Medex Co Ltd | A process for measuring the cholesterol in high density lipoprotein |
| CN100365409C (zh) * | 2005-06-01 | 2008-01-30 | 王贤理 | 一种测定低密度脂蛋白胆固醇的试剂及制备方法 |
| GB0609494D0 (en) * | 2006-05-12 | 2006-06-21 | Oxford Biosensors Ltd | HDL cholesterol sensor using specific surfactant |
| GB0609493D0 (en) * | 2006-05-12 | 2006-06-21 | Oxford Biosensors Ltd | Cholesterol sensor |
| WO2008087895A1 (ja) * | 2007-01-15 | 2008-07-24 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 高密度リポ蛋白中コレステロール測定方法およびその試薬 |
| JP2014030393A (ja) * | 2012-08-03 | 2014-02-20 | Denka Seiken Co Ltd | 高密度リポ蛋白（ｈｄｌ）中のコレステロールの定量方法 |
| US9670525B2 (en) | 2012-08-31 | 2017-06-06 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for measuring cholesterol in high-density lipoprotein |
| CN115247161B (zh) * | 2021-09-14 | 2024-06-25 | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 | Genapol X-080用于提高胆固醇酯酶活性的应用和方法 |
| CN114216871B (zh) * | 2021-12-15 | 2024-02-02 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 用于胆固醇试剂盒中替代胆酸钠的复合稳定剂 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4164448A (en) * | 1973-12-07 | 1979-08-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Activation of cholesterol oxidase for cholesterol assay |
| US4184921A (en) * | 1976-03-25 | 1980-01-22 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for determining cholesterol |
| US4275152A (en) * | 1977-02-03 | 1981-06-23 | Eastman Kodak Company | Hydrolysis of protein-bound cholesterol esters |
| US4205521A (en) * | 1977-03-21 | 1980-06-03 | Victoria Torres | Decorative clock |
| US4105521A (en) * | 1977-09-21 | 1978-08-08 | Helena Laboratories Corporation | Clinical procedure for measuring lipoprotein cholesterols |
| US4226713A (en) * | 1978-04-24 | 1980-10-07 | Goldberg Jack M | Diagnostic agents |
| US4414326A (en) * | 1978-04-24 | 1983-11-08 | Goldberg Jack M | Diagnostic agents |
| EP0006822B1 (fr) * | 1978-07-04 | 1982-10-13 | Laboratoires Goella | Procédé et ensemble de réactifs pour le dosage du cholestérol sérique |
| DE3276390D1 (en) * | 1981-09-10 | 1987-06-25 | Intermedicat Gmbh | Method for the selective extracorporeal precipitation of low-density lipoproteins from serum or plasma |
| FR2513766B1 (fr) * | 1981-09-28 | 1985-09-13 | Biomerieux Sa | Procedes et reactifs de separation selective des lipoproteines de faible densite ldl et de quantification de leurs composants |
| DE3208253A1 (de) * | 1982-03-08 | 1983-09-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur spezifischen bestimmung des cholesterins der ldl-fraktion im serum |
| DE3369792D1 (en) * | 1982-04-02 | 1987-03-19 | Ivan Endre Modrovich | Improved time-stable liquid cholesterol assay compositions |
-
1985
- 1985-09-18 DE DE19853533288 patent/DE3533288A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-08-14 AU AU61163/86A patent/AU574931B2/en not_active Ceased
- 1986-09-05 ES ES8601650A patent/ES2001417A6/es not_active Expired
- 1986-09-16 US US06/908,031 patent/US4851335A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-09-17 FI FI863752A patent/FI83975C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-09-17 DK DK445986A patent/DK445986A/da unknown
- 1986-09-17 KR KR1019860007833A patent/KR890003948B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-09-18 AT AT86112875T patent/ATE48649T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-09-18 DE DE8686112875T patent/DE3667492D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-09-18 EP EP86112875A patent/EP0218127B1/de not_active Expired
- 1986-09-18 JP JP61218274A patent/JPH0616720B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK445986A (da) | 1987-03-19 |
| FI863752A (fi) | 1987-03-19 |
| ES2001417A6 (es) | 1988-05-16 |
| KR870003205A (ko) | 1987-04-15 |
| FI863752A0 (fi) | 1986-09-17 |
| AU6116386A (en) | 1987-03-19 |
| DE3667492D1 (de) | 1990-01-18 |
| DE3533288A1 (de) | 1987-03-26 |
| JPH0616720B2 (ja) | 1994-03-09 |
| EP0218127A1 (de) | 1987-04-15 |
| JPS6269999A (ja) | 1987-03-31 |
| ATE48649T1 (de) | 1989-12-15 |
| DK445986D0 (da) | 1986-09-17 |
| EP0218127B1 (de) | 1989-12-13 |
| US4851335A (en) | 1989-07-25 |
| KR890003948B1 (ko) | 1989-10-13 |
| FI83975C (fi) | 1991-09-25 |
| AU574931B2 (en) | 1988-07-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI83975B (fi) | Foerfarande och reagens foer specifik bestaemning av hdl-kolesterolhalt i serum. | |
| US6794157B1 (en) | Methods for fractional quatification of cholesterol in lipoproteins and quantification reagents | |
| US20160177371A1 (en) | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same | |
| EP1813680B1 (en) | Compositions for lipase activity determination and method of determining activity | |
| US8178311B2 (en) | Multiple quantification of cholesterol in low density lipoprotein | |
| AU2010200171A1 (en) | Method of measuring lipid in specific lipoprotein | |
| CA2337559C (en) | Method and reagent for determination of cholesterol in remnant-like particles | |
| EP2108961B1 (en) | Dry analytical element for measurement of high density lipoprotein cholesterol | |
| BR112014025875B1 (pt) | Método de medição | |
| US5780239A (en) | Method for the determination of cast in urine | |
| US5559003A (en) | Assay method for biological components | |
| KR101924663B1 (ko) | Hdl 소분획 중의 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트 | |
| JP2001286297A (ja) | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 | |
| JP2000287700A (ja) | 試料中のリパーゼ活性値、コレステロール濃度、中性脂肪濃度の測定方法。 | |
| EP4428243A1 (en) | Reagent composition and kit | |
| AU2015202990B2 (en) | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same | |
| JP2600065C (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |