FI83959C - Foerfarande foer framstaellning av antibiotiskt aktiva 1-karba-(1-detia) cefalosporinderivat. - Google Patents

Description

1 83959

Menetelmä antibioottisesti aktiivisten l-karba-(1-detia)-kefalosporiinijohdannaisten valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää uusien l-karba(de-5 tia)kefalosporiiniantibioottien, valmistamiseksi. Näitä antibiootteja voidaan käyttää ihmisissä ja eläimissä esiintyvien infektiotautien hoitamiseen.

l-karba(detia)kefalosporiiniantibiooteilla on bi-syklinen rengasrakenne, jota kuvaa seuraava kaava, jossa 10 numerointi noudattaa kefaaminimistössä yleisesti käytettyä järjestelmää.

is 7r\ \ 4

Mukavuussyistä l-karba(1-detia)kefalosporiineja nimite-20 tään tässä 1-karbakefalosporiineiksi tai l-karba-3-kefee- mi-4-karboksyylihapoiksi tai niiden substituenttinume-roinnilla varustetuiksi johdannaisiksi.

Christensen et ai. selostavat US-patenttijulkaisussa 4 226 866 yleisesti 1-karbakefalosporiinien ja nii-25 den 3-asemassa metyylisubstituentin sisältävien johdannaisten valmistusta. Hirata et ai. selostavat GB-hakemus-julkaisussa 2 041 923 menetelmää 3-H- ja 3-halogeeni-l-karbakefalosporiinien valmistamiseksi, kun taas artikkelissa Tetrahedron Letters 24 (1983), nro 44, 4837-4838 30 Hanataka et ai. selostavat menetelmää 3-hydroksi-(±)-l-karbakefalosporiinin valmistamiseksi.

Vaikka monia turvallisia ja tehokkaita antibiootteja, jotka kuuluvat β-laktaamien ryhmään, tunnetaankin ja käytetään kliinisesti, tämän ryhmän tutkiminen jatkuu 35 pyrkimyksinä löytää antibiootteja, joilla on entistä 2 83959 suurempi teho, erityisesti sellaisia mikro-organismeja vastaan, jotka eivät ole herkkiä tunnetuille antibiooteille eli ovat resistenttejä niitä kohtaan.

7B-asyyliamino-l-karba-3-kefeemi-3-karboksyyliha-5 pot, jotka sisältävät 3-asemassa substituenttina karbok-syyliryhmän, karboksyyliryhmäjohdannaisen, ketoryhmän tai substituoidun ketoryhmäjohdannaisen ja niiden esterit ja suolat ovat laajaspektrisiä mikrobien vastaisia yhdisteitä. Keksinnön mukaisesti valmistettuja 1-karbakefalospo-10 riineja sisältävät formulaatiot, jotka ovat käyttökelpoisia gram-positiivisten ja gram-negatiivisten bakteerien ihmisissä ja muissa eläimissä aiheuttamien infektiotautien hoitamiseksi.

Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmis-15 tetaan uusia 1-karba-(1-detia)kefalosporiiniyhdisteitä, joilla on kaava (1)

O R1 H

20 R-C-NH—ΐ0 -C—A (1) C00R2 25 jossa R on tienyylimetyyli, a-aminobentsyyli, a-(t-butyy-lioksikarbonyyliamino)bentsyyli, a-(allyylioksikarbonyy-liamino)bentsyyli, a-araino-3-bentsotienyylimetyyli, a-(allyylioksikarbonyyliamino)-3-bentsotienyylimetyyli, a-30 (4-etyylipiperatsin-2,3-dioni-l-yylikarbonyyliamino)bent- syyli tai tiatsolioksiminoryhmä, jolla on kaava

J7T

35 H^N X0R4 3 83959 jossa R4 on metyyli, bentsyyli, 4-klooribentsyyli, kar-boksimetyyli, 2-(t-butyylioksikarbonyyliamino)etyyli tai 2-aminoetyyli ja jonka 2-aminoryhmä on mahdollisesti suojattu allyylioksikarbonyyli-, t-butyylioksikarbonyyli-5 tai trifenyylimetyyliryhmällä; RL on vety tai metoksi, R2 on vety, difenyylimetyyli, t-butyyli, allyyli, pivaloyy-lioksimetyyli, 2-asetoksietyyli, 1-(isovaleryylioksi)-etyyli, l-(isovaleryylioksi)-3-metyylipropyyli, l-(2-pen-tyylioksikarbonyylioksi)etyyli tai 10 -ch2

V

11 o 15 ja A on metyyli, hydroksi, metoksi, etoksi, butoksi, hek-syylioksi, allyylioksi, bentsyylioksi tai trimetyylisi-lyylietoksi siten että asyloidaan 7-amino-l-karba-(1-de-tia)kefalosporiiniyhdiste, jolla on kaava (4) 20

H

h2n-t—o —C-A (4)

0 T

25 COOR2 jossa Rx, R2 ja A ovat edellä määritellyt, ja mahdollisesti (a) alkoksyloidaan kaavan (1) mukainen yhdiste, 30 jossa Rx on vety, kaavan (1) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa Rx on metoksi, tai (b) esteröidään kaavan (1) mukainen yhdiste, jossa R2 on vety, kaavan (1) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa R2 on muu kuin vety, tai 35 (c) de-esteröidään kaavan (1) mukainen yhdiste, 4 83959 jossa Rj on muu kuin vety, kaavan (1) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa R2 on vety, tai (d) poistetaan kaavan (1) mukaisessa yhdisteessä mahdollisesti oleva aminon suojaryhmä kaavan (1) mukaisen 5 yhdisteen saamiseksi, jossa on vastaava vapaa aminoryhmä.

1- karbakefalosporiinit, joilla on edellä esitetty kaava (1) ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat estävät ihmisille ja eläimille patogeenisten mikro-organismien kasvua ja niitä voidaan käyttää infektio-10 tautien torjuntaan. Keksinnön mukaisella menetelmällä yhdisteet saadaan samassa stereokemiallisessa muodossa, joka on puolisynteettisillä kefalosporiiniantibiooteilla.

Kaavan (1) mukaiset 1-karbakefalosporiinit, joissa R2 on vety, voidaan esteröidä biologisesti labiililla 15 ryhmällä, jolloin muodostuu estereitä, joista muodostuu in vivo antibioottien vapaita happomuotoja. Ollessaan kaavassa (1) biologisesti labiili esteriryhmä R2 on piva-loyylioksimetyyli, 2-asetoksietyyli, l-(isovaleryyliok-si)etyyli, 1-(isovaleryylioksi)-3-metyylipropyyli, l-(2-20 pentyylioksikarbonyylioksi)etyyli tai (5-metyyli-2-okso- 1,3-diokso-4-en-4-yyli)metyylisyklokarbonaattiryhmä, jolla on kaava -CH, j—r^CH3 25 n jy 11 o 1-karbakefalosporiinien biologisesti labiileja es-30 tereitä voidaan käyttää lääkeaineiden esiasteina, ja ne voivat helpottaa antibioottien formulointia ja antamista.

Keksinnön mukaisessa menetelmässä lähtöaineina käytettäviä kaavan (4) mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa käyttäen lähtöaineena 36-(suojattu amino )-46-(2-35 substituoitu etyyli)atsetidin-2-onia, joka vastaa kaavaa li 5 83959 (AA)

- H

R —♦-t—CH2CH2T

5 )·-™ (AA)

QT

jossa R° on jollakin tavanomaisella aminosuojaryhmällä substituoitu aminoryhmä ja T on poistuva ryhmä, kuten bromi, metaanisulfonyylioksi, trifluorimetaanisulfonyyli-10 oksi tai p-tolueenisulfonyylioksi. Atsetidinoni (AA) kon-densoidaan fenyylisulfinyyli- tai fenyylisulfonyylisubs-tituoidun akryylihappoesterin kanssa, joka vastaa kaavaa (BB), 0 0

15 (||)k II

0-S C-A' \ / C (BB)

II

c / \ H C00R2' 20 jossa A' on jäljempänä esitetyn määritelmän mukainen, k on 1 tai 2 ja R2' on karboksyyliryhmää suojaava ryhmä, jolloin saadaan 7B-(suojattu amino)-l-karba-3-kefeemikar-25 boksyylihappoesteri, joka vastaa kaavaa (2): </^\y 30 COORa' (AA):n kondensointi (BB):n kanssa toteutetaan edullisesti jossakin inertissä aproottisessa liuottimes-sa, suurin piirtein vedettömissä olosuhteissa, noin -90 -35 -45 °C:n lämpötilassa ja voimakkaan, ei-nukleofiilisen 6 83959 emäksen ollessa mukana.

Käyttökelpoisia inerttejä aproottisia liuottimia ovat aproottiset orgaaniset liuottimet, esimerkiksi tet-rahydrofuraani, tetrahydropyraani, dioksaani, asetonit-5 riili, dietyylieetteri, dimetyyliformamidi, dimetyyliase- tamidi, 1,2-dimetoksietaani ja muut vastaavat liuottimet. Voidaan käyttää myös sellaisten liuottimien seoksia.

Käyttökelpoisia ei-nukleofiilisiä emäksiä ovat si-lyloidut litiumamidit, kuten bisttriiC^-alkyyli)silyy-10 li]litiumamidit, esimerkiksi bis(trimetyylisilyyli)li- tiumamidi, litiumdi-isopropyyliamidi (LDA), natrium- ja kaliumheksametyylidisilatsidi sekä muut vastaavat emäkset.

Parhaiden tulosten saavuttamiseksi emästä, akryy-15 lihappoesteriä (BB) ja 4-(2-substituoitu etyyli)atsetidi-nonia (AA) käytetään suunnilleen ekvivalenttisina mooli-määrinä.

Kondensaatio toteutetaan lisäämällä ensin kylmään liuokseen, joka sisältää (AA):ta inertissä liuottimessa, 20 ei-nukleofiilinen emäs. Liuosta sekoitetaan kylmässä riittävän pitkään, jotta emäksen ja atsetidinonitypen välisessä reaktiossa muodostuva anioni ehtii syntyä. Yleensä seosta sekoitetaan kylmässä noin 20 minuutista noin yhteen tuntiin. Seuraavaksi kylmään emäksiseen liuokseen 25 lisätään fenyylisulfinyyliakryylihappoesteri (BB) tai liuos, joka sisältää sitä inertissä aproottisessa liuottimessa. Reaktioseosta sekoitetaan lyhyen aikaa kylmässä ja sitten sen annetaan lämmetä hitaasti huoneen lämpötilaan. Pienen määrän (noin 30 mol-%) DMPU:ta (1,3-dimetyy-30 li-3,4,5,6-tetrahydro-2(lH)-pyrimidinonia) lisääminen re- aktioseokseen ennen lämmittämistä tuntuu parantavan tuotteen saantoa. Sekoittamista jatketaan noin 0,5-1 tunti sen jälkeen, kun seos on lämmennyt huoneenlämpötilaan, kondensaation saattamiseksi loppuun.

35 7B-(suojattu amino)-l-karba-3-kefeemikarboksyyli- 7 83959 happoesteri (2) eristetään reaktioseoksesta uuttamalla se johonkin veteen sekoittamattomaan liuottimeen. Liuos haihdutetaan ja reaktiotuoteseos liuotetaan tolueeniin, johonkin melko korkealla kiehuvaan glykolieetteriin, 5 klooribentseeniin tai muuhun inerttiin liuottimeen, jolla on sopiva kiehumispiste ja sitä kuumennetaan yli 85 °C:n, edullisesti yli 100 °C:n, lämpötilassa noin 15 minuutista noin neljään tuntiin fenyylisulfiini- tai fe-nyylisulfonihapporyhmän poistamiseksi. Liuotin poistetaan 10 ja tuote puhdistetaan kromatografisesti sopivaa adsor-benttia, kuten silikageeliä, käyttäen. Toteutettaessa kondensaatio pienessä mitassa tuote voidaan puhdistaa HPLC:n tai preparatiivisen ohutkerroskromatografian avulla.

15 Sen jälkeen 76-(suojattu amino)-l-karba-3-kefee- mikarboksyylihappoesterituotteesta (2) poistetaan suojaus kaavan (4) mukaisten yhdisteen saamiseksi. Viime mainittu yhdiste N-asyloidaan halutulla karboksyylihapolla RC00H tai sen aktiivisella johdannaisella sellaisen yhdisteen 20 aikaansaamiseksi, joka vastaa kaavaa (1), jossa R2 on karboksyyliryhmää suojaava ryhmä.

A':11a on edellä esitetyssä kaavassa (BB) sama merkitys kuin on ilmoitettu edellä kaavassa (1) esiintyvälle ryhmälle A sillä poikkeuksella, että A' ei voi olla 25 hydroksyyli.

Edellä kuvatun syklokondensaation jälkeen kaavan (2) mukainen tuote muutetaan kaavan (1) mukaiseksi yhdisteeksi. Esimerkiksi A':n ollessa muu kuin sellainen ryhmä, joka on ilmoitettu A:n merkitykseksi (kaava 1), A' 30 muutetaan A:ksi, 7-aminoryhmää suojaava ryhmä poistetaan, 7-aminosubstituoitu kaavan (4) mukainen välituote N-asyloidaan halutulla karboksyylihapolla tai sen aktiivisella johdannaisella, jotta saadaan 7-asyyliamino-l-karba-3-ke-feemi, jolla on kaava (1).

35 Suojatun aminoryhmän sisältävä atsetidin-2-oni β 83959 (AA) valmistetaan jäljempänä kaaviossa 1 esitetyllä tavalla imiinin (joka on muodostettu bentsyyliamiinin ja 3-(t-butyylidimetyylisilyylioksi)propionaldehydin välisen reaktion avulla) ja kiraalisen yhdisteen (4S)-fenyyli-5 1,3-oksatsolidin-2-on-3-yyliasetyylikloridi välisellä sykloadditioreaktiolla (vaihe 1). (Tämän kiraalisen yhdisteen valmistusta kuvataan artikkelissa Evans ja Sjogren, Tetrahedron Letters 26 (1985), nro 32, 3783-3786). Imiini muodostetaan kuivassa tolueenissa kuivausaineen, 10 kuten molekyyliseulojen, ollessa mukana tai tislaamalla vettä pois atseotrooppisesti. Kiraalisen oksatsolidino-nyyliasetyylikloridin annetaan sitten reagoida aikaisemmin valmistetun imiinin kanssa metyleenikloridissa, noin -80 - -15 °C:n lämpötilassa ja tertiaarisen amiinin, 15 kuten trietyyliamiinin, ollessa mukana. Sykloadditiotuote (a), N-bentsyyli-38-[(4S)-fenyyli-l,3-oksatsolidin-2-on- 3-yyliasetyyliamino]-48-[2-(t-butyylidimetyylisilyylioksi )etyyli]atsetidin-2-oni, pelkistetään sitten litiumilla t-butyylialkoholia sisältävässä ammoniakissa (vaihe 2) 20 kiraalisen ryhmän ja N-bentsyyliryhmän poistamiseksi, jolloin saadaan 38-amino-48-[2-(t-butyylidimetyylisilyy-lioksi)etyyli]atsetidin-2-oni (b). 38-aminoryhmä suojataan (vaihe 3) jollakin sopivalla ja tavanomaisella ami-noryhmän suojausryhmällä, kuten t-butyylioksikarbonyyli-25 ryhmällä (tBOC). Suojatun aminoryhmän sisältävän atseti- dinonin (c) annetaan reagoida (vaihe 4) jossakin inertis-sä liuottimessa noin O °C:n ja huoneenlämpötilan välillä olevassa lämpötilassa tri(n-butyyli)ammoniumfluoridin kanssa silyylieetterin lohkaisemiseksi ja 3 -(suojattu 30 amino)-4 -(2-hydroksietyyli)atsetidin-2-onin (d) muodos tamiseksi. Hydroksyyliryhmä muutetaan vaiheessa 5 mesy-laatti-, triflaatti- tai tosylaattiesteriryhmäksi (yhdiste e) metaanisulfonyyli-, trifluorimetyylisulfonyyli- tai tolueenisulfonyylikloridilla tertiaarisen amiinin, kuten 35 trietyyliamiinin tai pyridiinin, ollessa mukana. Vaihees- li 9 83959 sa 6 esterin annetaan reagoida asetonissa huoneen lämpötilassa natriumjodidin tai -bromidin kanssa 2-halogeeni-etyyliatsetidin-2-onin (AA) (T = Cl tai Br) muodostamiseksi. Edullisesti menetelmässä kaavaa (2) vastaavien 5 yhdisteiden valmistamiseksi käytetään 2-jodietyyliatseti-dinonia.

10 83959

Kaavio 1 H * f—Y* ^/J-CHsCOC I + +SiO-CH2-CHE-CH=N-CHs-0 | vaihe 1 v H ^ V" M |i ti 10 VNS·-V^CHs-OS^ (a) 0 „ cr che0 vaihe 2 15 Y(b)

f-NH

0 | vaihe 3 T [OHa-O-sf * ( c)

2 0 i-X

c/ υ vaihe 4 '

H H

rvHT^-°h «> 25 (/ vaihe 5

V

H H

R f^CHs-T (e)

>-NH

30 ' <f , I vaihe 6 R°V- z^\ -· XHa-l(Br) (AA)

1 -NH

(/ 35 11 83959

Kaaviossa 1 0 on fenyyli, R° on suojattu amino-ryhmä ja +^Si- on t-butyylidimetyylisilyyli.

Fenyylisulfinyyli- tai fenyylisulfonyylisubstitu-oitu akryylihappoesteri, joka vastaa edellä esitettyä 5 kaavaa (BB), valmistetaan jäljempänä kaaviossa 2 esitetyllä tavalla.

Yleensä fenyylimerkaptoetikkahapon esteri tai fenyyli tiometyylike töni alkyloidaan (vaihe 1) halogeenie-tikkahappoesterillä 3-substituoidun 3-fenyylitiopropio-10 nihappoesterin (aa) muodostamiseksi. (aa):n klooraus (vaihe 2) N-kloorisukkinimidillä hiilitetrakloridi-THF-seoksessa refluksointilämpötilassa tuottaa tulokseksi 3-substituoidun 3-kloori-3-fenyylitiopropionihappoeste~ rin (bb).

15 Vetyhalogenidin lohkaisu (bb):stä (vaihe 3) voi makkaalla ei-nukleofiilisellä emäksellä, kuten DBU:lla, johtaa 3-substituoidun 3-fenyylitioakryylihappoesterin (cc) muodostumiseen molempien geometristen isomeerien seoksena. Kaavaa (1) vastaavien l-karba-3-kefeemiyhdis-20 teiden valmistamiseksi seosta ei tarvitse jakaa erillisiin isomeereihin.

Vaiheessa 4 (cc):n fenyylitioryhmä hapetetaan me-tyleenikloridissa huoneen lämpötilassa tai sen alapuolella jollakin perhapolla, kuten peretikkahapolla, (BB):n 25 aikaansaamiseksi.

Hapetus voidaan toteuttaa inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten metyleenikloridissa. Fenyylisulfinyy-livälituotteita (kaava (BB), k = 1) valmistettaessa on parasta käyttää peretikkahappoa, kun taas fenyylisulfo-30 nyylivälituotteiden (BB), joissa k = 2, valmistamiseen voidaan käyttää m-klooriperbentsoehappoa.

Edullisia välituotteita 1-karbakefalosporiinien valmistuksessa ovat fenyylisulfinyylisubstituoidut välituotteet, jotka vastaavat kaavaa (BB), jossa k on 1.

i2 83S59

Kaavio 2 0-S-CHzI-A' + X-CH2COOR2' 5 vaihe 1 0~\ J“A' f (aa) CH2COOR2' 10 vaihe 2

0-sxf‘J

C—C—A' (bb) ,_ CH2COOR2' 15 vaihe 3 >1 \h 20 Y (cc) C-COORa' h/ vaihe 4

V

N|k j \ Λ-A' (BB) C-COOR2' 30

Kaaviossa 2 0- on fenyyli, X on kloori, bromi tai jodi, R2' on karboksyyliryhmää suojaava esteriryhmä ja A' on jokin niistä ryhmistä, joita A tarkoittaa kaavassa (1), lukuunottamatta kaaviossa 2 esitettyihin reaktiovai-35 heisiin soveltumattomia ryhmiä, esimerkiksi ryhmiä, jot- li i3 83959 ka hapettuvat perhapon vaikutuksesta, kloorautuvat nimenomaisella kloorausreagenssilla, kuten N-kloorisukkinimi-dillä tai eivät sovellu alkylointi- tai dehydrohaloge-nointivaiheisiin. A' on esimerkiksi edellä määritellyn 5 kaltainen A hydroksyyliä, lukuunottamatta. Käsitettäneen, että A':n sisältäessä ryhmän, joka on reaktiokykyinen kaaviossa 2 esitetyn (BB):n valmistuksen olosuhteissa, kyseinen ryhmä voidaan suojata tilapäisesti jollakin tavanomaisella suojaryhmällä, jotta estetään sen osallis-10 tuminen halutun reaktion kanssa kilpailevaan reaktioon.

Eräässä esimerkissä 3-substituoidun akrylaatin (BB) valmistamiseksi kaavion 2 mukaisesti metyylifenyyli-merkaptoasetaatti alkyloidaan t-butyylibromiasetaatilla t-butyyli-3-fenyylitio-3-metoksikarbonyylipropionaatin 15 muodostamiseksi. Diesteri kloorataan N-kloorisukkinimi- dillä ja klooratun tuotteen annetaan reagoida DBU-emäk-sen kanssa, jolloin muodostuu tyydyttymätön diesteri, joka vastaa kaavaa 0 20 \ S C00CH3 \ /

C

II

c / \ H C00-C(CH3)3 25

Diesterin hapetus peretikkahapolla tuottaa tulokseksi vastaavan fenyylisulfinyyliesterin, joka vastaa edellä esitettyä kaavaa (BB), jossa A' on metoksyyli ja R2' on t-butyyli.

30 Edellä esitetty diesteri on monikäyttöinen väli tuote, joka voidaan muuttaa monenlaisiksi muiksi kaavaa (BB) vastaaviksi välituotteiksi. Niinpä t-butyyliryhmä voidaan poistaa selektiivisesti trifluorietikkahapolla (TFA) kylmässä, jolloin muodostuu monoesteri ja vapaa 35 karboksyyliryhmä voidaan esteröidä uudelleen erilaisen i4 83959 sekaesterin muodostamiseksi. Esimerkiksi edellä esitetyn kaavan mukainen metyyli(t-butyyli)sekadiesteri käsitellään TFA:lla, jolloin muodostuu monoesteri, joka vastaa kaavaa 5 0

II

0-S cooch3 \ / c

II

c in 7 \

10 H COOH

Monoesteri esteröidään sitten halutulla esterin muodostavalla ryhmällä, jolloin muodostuu erilainen sekadiesteri. Vapaa happo esimerkiksi esteröidään allyylibromi-15 dilla trietyyliamiinin ollessa mukana, jolloin muodostuu metyyliallyylisekadiesteri, joka vastaa kaavaa 0

II

0-S COOCH3

20 Y

II

C

/ \ H COOCH2-CH=CH2.

25 Myös edellä esitetyn metyyli(t-butyyli)sekadies- terisulfidin metyyliesteriryhmä voidaan poistaa selektiivisesti, jolloin saadaan mono(t-butyyliJesteri ja vapaa karboksyyliryhmä voidaan esteröidä uudelleen, jolloin muodostuu erilainen sekadiesteri. Vaihtoehtoises-30 ti vapaa karboksyyliryhmä voidaan muuttaa joksikin muuksi A:n tarkoittamaksi karboksyyliryhmäjohdannaiseksi ja kyseistä johdannaista voidaan sitten käyttää syklisointi-reaktiossa kaavaa (AA) vastaavan välituotteen kanssa, jolloin muodostuu vastaava l-karba-3-kefeemi, joka vastaa 35 kaavaa (1), jossa R2 on vastaavan kaltainen karboksyyli- li is 83959 ryhmää suojaava ryhmä kuin R2' kaavassa (BB). Metyyli(t-butyy1i)sekadiesteri, joka vastaa kaavaa 0-S COOCH3 \ /

5 C

II

c / \ H C00C(CH3)3 ja joka on valmistettu kaaviossa 2 esitettyjen vaiheiden 10 1-3 mukaisesti, käsitellään siis THF:ssa ekvivalenttisel- la moolimäärällä litiumhydroksidia, jolloin muodostuu mono(t-butyyli)esteri, joka vastaa kaavaa

0-S COOH

15 \ /

C

II

c / \ H C00C(CH3)3 20 Karboksyyliryhmä voidaan esteröidä uudelleen halutulla esterin muodostavalla reagenssilla tai muuttaa joksikin muuksi karboksyyliryhmäjohdannaiseksi, kuten happohalogenidi-, atsidi- tai amidiryhmäksi. Uudelleen-esteröinnin tai karboksyylihappojohdannaiseksi muuttami-25 sen jälkeen tuote hapetetaan perhapolla vastaavaksi fe-nyylisulfinyyli- tai fenyylisulfonyylijohdannaiseksi (BB).

Toisessa esimerkissä 3-substituoidun 3-fenyylisul-finyyliakrylaatin (BB) valmistamiseksi ketoni, fenyyli-30 tioasetoni, alkyloidaan THF:ssa t-butyylibromiasetaatilla ja natriumhydridillä, jolloin saadaan t-butyyli-3-fenyy-litio-4-oksopentanoaatti. Ketoesteri kloorataan THF:ssa N-kloorisukkinimidillä, jolloin muodostuu 3-klooriketo-esteri ja viimeksi mainitusta lohkaistaan vetyhalogeni-35 dia, jolloin muodostuu 3-fenyylitio-4-oksopent-2-enoaat- ie 83959 ti. Tyydyttymätön ketoesteri hapetetaan sitten metyleeni-kloridissa peretikkahapolla (BB):ksi, Jossa A' on metyyli ja R2' on t-butyyli ja Joka vastaa seuraavaa kaavaa: 5 00

5 II II

0-S c-ch3 \ / c

II

c / \ 10 H COO-C(CH3)3.

Eräitä kaavaa (1) vastaavia l-karba-3-kefeemiyh-disteitä voidaan valmistaa muuttamalla l-karba-3-kefoemi, sen jälkeen kun se on muodostettu välituotteiden (AA) ja 15 (BB) välisellä reaktiolla, edelleen johdannaisikseen tai substituoimalla se edelleen. Suojatun aminoryhmän sisältävä 1-karbakefalosporiini, joka vastaa edellä esitettyä kaavaa (2), voidaan myös substituoida, siitä voidaan poistaa suojaus ja se voidaan N-asyloida, kuten alla on 20 esitetty, kaavaa (1) vastaavan yhdisteen aikaansaamiseksi .

Kaava (2) substituutio 25 R°\ /\ Λ/!Χ - 30 LoRs' | suojauksen poisto 7-ami no 35 N-asylointi

Y

Kaava (1) li i7 83959

Esimerkiksi 7S-(suojattu amino)-3-asetyyli-l-kar-ba-3-kefeemikarboksyylihappoesterin, joka vastaa kaavaa 5 R°~I-\ N j? c/~\ f ^ I0OR2' 10 jossa R°:lla ja R2':lla on edellä ilmoitettu merkitys ja joka valmistetaan käyttäen sellaista välituotetta (BB), jossa A' on metyyli, annetaan reagoida bromin kanssa voimakkaan ei-nukleofiilisen emäksen, kuten LDA:n (litiumdi-isopropyyliamidin), ollessa mukana, jolloin muodostuu 3-15 bromiasetyylijohdannainen, joka vastaa kaavaa ύΎ Yj a-N .·—C-CHsBr 20 </ \ / COORa' 3-bromiasetyyliesterin annetaan reagoida 0-, S+ tai N-25 nukleofiilin kanssa 3B-(suojattu amino)-l-karba-3-kefee-mikarboksyylihappoesterin aikaansaamiseksi, viimeksi mainitusta poistetaan suojaus ja se N-asyloidaan, jolloin saadaan yhdiste, joka vastaa kaavaa (1).

Tässä esitetyssä 1-karbakefalosporiinien valmis-30 tuksen selostuksessa ilmaus aminoryhmää suojaava ryhmä tarkoittaa sellaisia aminoryhmien suojausryhmiä, joita B-laktaamialalla tavanomaisesti käytetään aminoryhmän tilapäiseen suojaukseen. Nämä suojausryhmät peittävät aminoryhmän muissa kohdissa molekyyliä toteutettavien 35 reaktioiden ajaksi. Lukuisia aminoryhmien suojausryhmiä ie 83959 tunnetaan ja käytetään yleisesti B-laktaamiantibioottien valmistuksessa. Esimerkkejä sellaisista ryhmistä ovat alkyylioksikarbonyyli- ja aryylioksikarbonyyliryhmät, esimerkiksi etoksikarbonyyli, 2,2,2-trikloorietoksikarbo-5 nyyli, syklopentyylioksikarbonyyli, bentsyylioksikarbo- nyyli, p-nitrobentsyylioksikarbonyyli, t-butyylioksi-karbonyyli ja t-amyylioksikarbonyyli; enamiinisuojatut aminoryhmät, kuten β-ketoestereiden ja aminoryhmän välisissä reaktioissa muodostuvat ryhmät, esimerkiksi metyy-10 lija etyyliasetoasetaatti; 2,4-dinitrofenyylisulfenyyli, asetyyli, klooriasetyyli, diklooriasetyyli, 4-metoksi- 2.3.6-trimetyylibentseenisulfonyyli, trityyli ja muut vastaavat aminoryhmien suojausryhmät.

Suojattu aminoryhmä R° eroaa kaavassa (1) esiinty-15 västä 7-asyyliaminoryhmästä R siinä suhteessa, että ensin mainittua käytetään syntetisoinnin aikana, kun taas jälkimmäinen on osa antibioottiyhdistettä.

Tämän keksinnön avulla aikaansaatavat 1-karbake-falosporiinit muodostavat suoloja, erityisesti farmaseut-20 tisesti hyväksyttäviä myrkyttömiä suoloja, sopivien emäs ten kanssa. 1-karbakefalosporiinin 4-asemassa sijaitsevaan hiiliatomiin liittynyt karboksyyliryhmä voi muodostaa suoloja alkalimetalli- ja maa-alkalimetallihydroksi-dien, -karbonaattien ja -vetykarbonaattien kanssa. Esi-25 merkkejä sellaisista farmaseuttisesti hyväksyttävistä suoloista ovat natrium-, kalium-, kalsium- ja magnesium-suolat. Suoloja voidaan muodostaa myös amiinien, kuten dibentsyyliamiinin, sykloheksyyliamiinin, trietyyli-amiinin, etanoliamiinin, dietanoliamiinin ja muiden vas-30 taavien amiinien, kanssa. Vastaavasti 1-karbakefa- lospo-riinin ollessa substituoitu kahdella karboksyyliryhmäl-lä, saadaan disuoloja tavanomaisin suolanmuo- dostus-menetelmin.

1-karbakefalosporiiniyhdisteet, jotka vastaavat 35 kaavaa (1) ja sisältävät joko 7-asemassa sijaitsevassa li i9 83959 sivuketjussa aminoryhmäsubstituentin, muodostavat myös suoloja sopivien happojen kanssa, jolloin antibiootit saadaan farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina. Esimerkkejä sopivista hapoista ovat kloorivety-, bromive-5 ty-, rikki- ja fosforihappo.

Farmaseuttisesti hyväksyttävät myrkyttömät suolat ovat antibioottiformuloiden valmistuksessa käyttökelpoisia antibioottien muotoja.

Kaavan (1) mukaisia yhdisteitä, joissa R2 on bio-10 logisesti labiili esteriryhmä, valmistetaan tunnetuin menetelmin; esimerkiksi asyylioksimetyyliesteri, kuten ase-toksimetyyliesteri, saadaan antamalla 1-karbakefalospo-riinihapon natriumsuolan reagoida asetoksimetyylihaloge-nidin, esimerkiksi asetoksimetyylibromidin, kanssa. Vaih-15 toehtoisesti voidaan antaa halogenidin, kuten pivaloyyli-oksimetyylijodidin, reagoida vapaan hapon kanssa tertiaa-risen amiinin, esimerkiksi N-metyylimorfoliinin tai tri-etyyliamiinin, ollessa mukana, jolloin muodostuu esteri.

Edullisia biologisesti labiileja estereitä ovat 20 asetoksimetyyli-, pivaloyylioksimetyyli-, ja dioksolen- 2-oni sykiokarbamaattiesteri.

7B-amino-l-karba-3-kefeemiyhdisteet (kaava 4) N-asyloidaan karboksyylihapolla RCOOH tai sen reaktiivisella johdannaisella kaavaa (1) vastaavien yhdisteiden ai-25 kaansaamiseksi. N-asylointi voidaan toteuttaa niillä yleisillä asylointimenetelmillä, joita on käytetty kefa-losporiiniytimien, esimerkiksi 7ACA:n ja 7ADCA:n, N-asy-lointiin. Ytimeen (4) liitetään happo RCOOH esimerkiksi jonkin dehydratoivan aineen, kuten karbodi-imidin, esi-30 merkiksi disykloheksyylikarbodi-imidin, ollessa mukana.

Vaihtoehtoisesti karboksyylihappo voidaan muuttaa reaktiivisen karboksyyliryhmäjohdannaisen sisältäväksi yhdisteeksi ja reaktiivista johdannaista voidaan käyttää N-asyloinnissa. Käyttökelpoisia karboksyylihappojohdannai-35 siä ovat happohalogenidit, happoatsidit, happoanhydridit, 20 83959 aktiiviset esterit, kuten esterit, joita muodostuu reaktiossa etyyli- tai isobutyyliklooriformiaatin kanssa; N-hydroksi-imidit, kuten imidit, joita muodostuu reaktiossa N-hydroksisukkinimidin tai -ftalimidin kanssa; johdannai-5 set, joita muodostuu reaktiossa hydroksibentstriatsolin (HBT) kanssa; sekä muut vastaavat karboksyylihappojohdannaiset. N-asyloinnin aikana karboksyylihapon RCOOH mahdollisesti sisältämät vapaat amino- tai karboksyyliryhmät ovat edullisesti suojatussa muodossa.

10 Edullisia 1-karbakefalosporiineja ovat sellaiset, jotka vastaavat kaavaa (1), jossa A on hydroksyyli, Ci.g-alkoksyyli, C2_6-alkenyylioksi, C2_6-alkynyylioksi tai substituoitu Ci.g-alkoksyyli. Eräs tarkempi ryhmä on sellainen, jossa A on C1.4-alkyyli tai substituoitu C^-al-15 kyyli. Erään kaavaa (1) vastaavien yhdiseiden ryhmän muodostavat vielä 3-amido- tai 3-(substituoitu amido)yhdis-teet, joissa A on aminoryhmä, joka vastaa kaavaa -N(R') (R"), joka on edellä määritellyn kaltainen.

Tässä esitetyt 1-karbakefalosporiinit estävät ih-20 misille ja eläimille patogeenisten mikro-organismien kasvua. Yhdisteet ovat laajaspektrisiä antibiootteja, jotka ovat erityisen tehokkaita gram-positiivisia bakteereita vastaan. Seuraavassa taulukossa 3 on lueteltu edullisten yhdisteiden pienimmät inhibitoriset pitoisuudet (MIC) 25 tyypillisten infektoivien bakteerien tapauksessa.

Il 2i 83959 II NtNiniflooconin ' ' ' , ^

—I O O Q Λ] 1Η ΓΟ-γΗ I ο I

w σ ο ο ο «» — 6 ι I Η ·Η Ό I W ο c Η. .» «. ·. (ϋΓο-π^ε-ΗΛίσα

-Η QJI-HS-.QJEO'UCU

Ρ «Η·Η>ιβ<υ(0Λ·Η(0 2 νο^^ιηηοοπτΗΐΛ 5 Π >Γ o 1ρ -ρ ρ Eä

0) ·—IOOOCNJ Xr-iCXIQJQJfOfO-H

•ρ <Ν ο-ο- η 1 >ιΟρχμ,1-ργ-ι X AJ ^ ^ _ ro c ja fö I <0 1 QJ >1 <0 n> ΙΟΡΧΡΙΟ^ΙΛ^

Λ n ·Η XI (Ο -H I G I (Ο W

Tl in ψ ^ in in in in n Ί1 Tl 2 ·1 2 n H '2 Ή 2 n

ifj Aj ai frt Π3 ä O c fö CO

C -,Η —ι —ι >ί X Ή O CU r-i "H -H -H Λ

<0 rö H. H. G-HOWO-PCU>il-PEP

r· O M αΛ a UM) C -HU) -H K

c >, χι^αοαεχιοωΌΐχ ^ ^ (M^Ln^Lnco^'-o P o itj -h nj ι -h .q x ι -hi ^ rr A :2-2 7.-5 7 7.2 °n 27

O O _j _i X I—I -H ί>ι·Η 1 ΪΗ (O -Ρ X I

CU Jj -Η >ηΉ >-,r-| ,—. >iX 0)(0 O ~

CU ,0 «>1>1+>>|OW-H0Ä+»(O

«o 4j xow>iP>iGX(noiPaj-H

•ö t/)cn (NHMMl/l(NC\|03 OCU-PUJ.Qtn-HOXCUfNie E -P

H C o S in +JftCXIM£J30aiM I OJ

•H pn Q)(Oa)OGO(ÖP-P(ÖGI GO

>ι 7- ε^χιχί'-Λ-ρίοαιχ: >i.-t >ι ι >i I -HI PI ll Η Λ I ·Η III I UJ Ή tn nnn idn nj >, ι 0 CVI N1 I «inCONN Λ £7777 £7 7 £7 § 7,0 Λ 1 Ο Μ O’» >1— O tn >1 QJ >1 p P G X G I C I H dj d Ai M-I >, rö <0 ·Η o -H — -H —. O'-Η -H O I 0) I Λί X EiElflglH-rl+JEJi'fM ^1 1 iH p'p'Lnr-tuimoooo (O ρ (O -h (Ο -h <—i qj (Ο ρ ι ι ι h

τ L lei 04 -H rö -H 4-J -H -P >,TJ Ή li H m H I

• H J h HJ<H J)H dl >, Μϋ O I O H

H 7. >1 ι >ιΌ >|Ό ι H >, I m -H m E

E >,·2· >1 ι >, I Π '— >1^ +J iH -M OJ

Q) i»|«HIIIH|lilD|IJ>i lidl

QJ .-(0 >1— >1^ >i-~ G XI >i— -H >1 -H OH

OH ·π ι—I n|HldHn)QJMHiD4JG +JQJ

aj so cp-h cpxi σ>χι -h m ct>-h o o ox X 04 4J -H +J -Η Ρ -H p +J X -H -p G XI Cl I λ, G<—IQJ1—1(0'—I (Ο O I Ή QJ -H P -H ro m jx -h >,ο >ιΜ >ιχ »η >,o ε m ει I iN — X >ι I >1 I >1 I -P I ΪΡΙ (0X0(0 Ή

— M o rsj PCtHG-HG-HG-HC-Hl-HCUIrH

(0 7 .2 rCi m ajaj'—-QJI Q)l ajEO)-—-OJ0iCLirsl>i H , ,P r, Vj g'4-l(0MH-H‘H-HXIQJM-l(0~'X(0'->l P (ΟΙΛίείβίωίΛΙΟΧίΙ-Ρ

OJ n m -P Q PQ <D Ω 111 Q Ή P p(N+J-H(N QJ

Ό ω G .η Λ e— (O-QJ-QJ—QJ-iO^QJ-l^in

1 rH £ 2 5 3 2c (0ΙΧΙ4-ΙΙΉΙΧΙΧΙ E >i I (O

~ g M-H&M Sot irn^n I -H % & -HP « " 11 11 11 " 11 » « S OH in η ^ .η Φ r-

f pSSS°3xSp ^OOOOOO O

“ 8^8-2(0100^ e e e e e e c c ~ -p oo8olH2HEm φ v ω ω a) u ^ .2 .2 .2 " -2 2 V i jöxja0)wO4)M Tl ΖΪ ^ J2 J2 II J2 17j 5 aaSiXX SP <u V.

^ ^ (ft (H Ij r \ Λ\ ι j Λ ij »C Λ rC rC rC «C pC

+J+J+JtO»-l(OPG _[0 >1 >Ί >1 >1 >1 >1 >, WWtnW^WPnW ^ JJ 3 3 3 3 3 3

o +J+J+J+J+J4-I4J+J

X O-P-P+J-P-P-P +J

X P3(033(0(0(0 2 3 qj+J+J-P-P-P+J 4-) Ή ε<Ρ((ΐ((ΐ(Ρ((ΐ(ηω

P 3QJQJQ)QJQJQ)QJ

(O aEHE-iEHE-tEHEHEH

Eh rH CM

22 8 3 9 5 9 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja kaavan (1) mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää ihmisissä ja eläimissä esiintyvien infektiotautien hoitamiseen farmaseuttisina formulaatioina ihmiselle tai eläimelle an-5 netaan antibioottisesti vaikuttava myrkytön annos yh distettä, joka vastaa kaavaa (1), jossa R2 on vety tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa tai biologisesti labiilia esteriä.

Antibioottisesti vaikuttava määrä on noin 25 mg:n 10 ja noin 2 g:n välillä. Yhdiste, suola tai esteri voidaan antaa yhtenä ainoana annoksena tai useana annoksena vuorokauden mittaan. Hoito voi jatkua viikosta noin 10 vuorokauteen tai pitempäänkin infektion kestosta riippuen. Yksilöllinen annos ja hoito-ohje voi vaihdella sellais-15 ten seikkojen mukaan kuin potilaan paino ja ikä, kulloinenkin aiheuttava organismi, infektion vakavuus, potilaan yleinen terveydentila ja potilaan kyky sietää antibioottia.

1-karbakefalosporiineja voidaan antaa parenteraa-20 lisesti, suun kautta, ihon alle tai peräsuolen kautta.

Kuten muidenkin β-laktaamiantibioottien tapauksessa on asia, kaavan (1) mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää pro-fylaktisesti infektioiden estämiseen infektioille alttiiksi joutumisen jälkeen tai ennen mahdollista infekti-25 oille alttiiksi joutumista, esimerkiksi ennen leikkausta. 1-karbakefalosporiiniantibiootteja voidaan antaa tavanomaisin menetelmin, esimerkiksi kapseleissa, tabletteina, ruiskeina tai laskimoinfuusiona.

Farmaseuttiset formulaatiot sisältävät antibioot-30 tisesti vaikuttavan myrkyttömän määrän 1-karbakefalospo-riinia, joka vastaa kaavaa (1), jossa R2 on vety tai farmaseuttisesti hyväksyttävää myrkytöntä suolaa tai biologisesti labiilia esteriä sekä jotakin farmaseuttista kantaj a-ainetta.

35 Suun kautta annettaviksi soveltuvia formulaatioita li 23 83 959 ovat kapselit, tabletit, pastillit ja nestemäiset suspensiot. Antibiootti tai sen suola tai esteri pakataan kuivan jauheen muodossa oraaliseen käyttöön soveltuviin gelatiinikapseleihin. Antibioottiin voidaan myös sekoit-5 taa ennen pakkaamista jotakin täyteainetta, esimerkiksi stabilaattoria. Kapselit voivat sisältää noin 100-500 mg vaikuttavaa aineosaa yksikköannosformuloiden aikaansaamiseksi .

Tabletteja, jotka sisältävät noin 100-500 mg an-10 tibioottia toi sen suolaa tai esteriä, formuloidaan tavanomaisin keinoin ja ne voivat sisältää lisäksi sideainetta, hajoamista edistävää ainetta, stabilaattoria, hapettumista estävää ainetta jne.

Pikkulapsia ja vanhuksia varten voidaan valmistaa 15 nestemäisiä antibioottivalmisteita. Lapsille tarkoitettuja suspensioita formuloidaan suun kautta annettaviksi soveltuvia antibioottien täyteaineita, kuten suspendoivia aineita, aromiaineita, stabilaattoreita ja vastaavia, käyttäen. Vastaavasti antibioottiliuoksia voidaan formu-20 loida käyttäen liukenemista parantavia aineita, aromiaineita, sokeria, vettä jne. käyttäen.

Ruiskeina annettaviksi soveltuvia parenteraalisia antibioottiformuloita formuloidaan ruiskeina annettavaksi soveltuvaa vettä, Ringerin liuosta, fysiologista suo-25 laliuosta tai glukoosiliuosta käyttäen. Antibiootti voidaan antaa myös tiputusmenetelmällä laskimoon.

Parenteraalista käyttöä varten antibiootti tai sen suola tai biologisesti labiili esteri valmistetaan edullisesti kuivan kiteisen jauheen muotoon tai kylmäkuiva-30 tun jauheen muotoon ja pakataan pieniin lääkepulloihin.

Sellaiset pullot sisältävät kukin noin 100 mg - 2 g antibioottia .

24 83959

Eräässä menetelmän toteutusmuodossa 3/5- (t-butyyli-oksikarbonyyliamino) -4/3- (2-jodietyyli) atsetidin-2-onin annetaan reagoida allyyli-3-fenyylisulfinyyli-3-metoksi-karbonyyliakrylaatin (kaava BB); A' = -OCH^, k = 1, 1 = 5 allyyli) , jolloin saadaan allyyli-3/5-(t-butyylioksikarbo-nyyliamino)-3-metoksikarbonyyli-l-karba(1-detia)-3-kefee-mi-4-karboksylaatti. Viimeksi mainitusta poistetaan suojaus trifluorietikkahapolla ja 3/3-amino-l-karba-3-kefee-mikarboksyylihappoesteri asyloidaan 2-(t-butyylioksikar-10 bonyyliamino)-2-fenyyliasetyylikloridilla, jolloin saadaan allyyli-7/3- (2-t-butyylioksikarbonyyliamino) -2-fenyy-liasetyyliamino)-3-metoksikarbonyyli-l-karba(1-detia)-3-kefeemi-4-karboksylaatti. Viimeksi mainitusta poistetaan aminoryhmää suojaava t-BOC-ryhmä käsittelemällä asyloin-15 tituote 98-%:isella muurahaishapolla, jolloin saadaan allyyli-7/3- (2-amino-2-fenyyliasetyyliamino) -3-metoksi-karbonyyliamino-l-karba(1-detia)-3-kefeemi-4-karboksy-laatti (kava 1) ; R = 0(-aminobentsyyli, R^ = H, A = -OCH^, R2 = allyyli). Poistettaessa allyyliesteriryhmä 20 tunnetuin menetelmin, saadaan vastaava antibioottinen yhdiste vapaana karboksyylihappona (R2 = H).

Seuraavat esimerkit valaisevat tarkemmin keksinnön mukaisia yhdisteitä ja menetelmää niiden valmistamiseksi.

Seuraavilla lyhenteillä on esimerkeissä alla mai-25 nitut merkitykset: BSTFA = bis(trifluorimetyylisilyyli)-trif luoriasetamidi; DBU = 1,8-diatsabisykloZ5.4.0_7undek- 7-eeni; DMF = dimetyyliformamidi; HPLC = suuren erotuskyvyn nestekromatografia; t-BOC = t-butyylioksikarbonyy-li; THF = tetrahydrofuraani; ja J = kytkentävakio (hert-30 seinä, Hz) NMR-spektreissä.

Substituoitujen akryylihappoestereiden valmistus Valmistus 1 2-fenyylisulfinyylimaleiinihapon 1-metyyli(4-t-butyyli)diesteri 35 Liekissä kuivattuun kahden litran pulloon, joka oli huuhdottu typellä ja varustettu tiputussuppilolla ja 25 83959 sekoittajalla ja joka sisälsi bis(trimetyylisilyyli)li-tiumamidia (254,23 iranol) 200 ml:ssa THF ja oli jäähdytetty -42°C:seen, lisättiin liuos, joka sisälsi metyyli-(f enyylimerkaptoasetaattia) (43,33 g, 254,23 itunol) 5 100 ml:ssa THF. Liuosta sekoitettiin kylmässä noin 25 mi nuuttia, ja se siirrettiin putken välityksellä 30 minuutin aikana toiseen pulloon, joka sisälsi t-butyylibromi-asetaattia (51,08 g, 261,86 mmol) 100 ml:ssa THF ja oli myös jäähdytetty -42°C:seen. Reaktioseosta sekoitettiin 10 2,5 tuntia, samalla kun pullon annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos kaadettiin 800 mlraan kylläistä ammoniumkloridin vesiliuosta, ja seokseen lisättiin 1 200 ml etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros uutettiin 300 ml :11a etyyliasetaattia. Uu-15 te yhdistettiin orgaaniseen kerrokseen ja ne kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 80 g raakatuotetta ruskehtavana öljynä. Raakatuote puhdistettiin preparatiivisen HPLCrn avulla, jolloin saatiin 60 g (saanto 79,7 %) tuo-20 tetta, 2-fenyylitiomeripihkahapon 1-metyyli(4-t-butyyli)-diesteriä.

NMR (90 MHz; CDCl^^): 1,3 (s, 9H, t-butyylies-teri-H); 2,9 - 3,0 (m, 2H, CH2:n H); 3,7 (s, 3H, COOCH3>; 3,9 (dd, J = 7 ja 9, 1H, metiini-H) ja 7,2 - 7,5 (m, 2H, 25 fenyyli-H).

Edellä saatu sekadiesterifenyylisulfidituote (60 g, 202,43 mmol) liuotettiin seokseen, joka sisälsi 1 000 ml hiilitetrakloridia, 500 ml THF ja N-kloorisuk-kinimidiä (28,38 g, 212,55 mmol) ja seosta refluksoitiin 30 noin neljä tuntia. Ohutkerroskromatogrammissa, joka ajettiin pienestä osasta reaktioseosta, näkyi yksi päätäplä eikä lainkaan lähtöainetta. Seos haihdutettiin alipaineessa ja jäännökseen lisättiin heksaania. Liukenematon aine erotettiin suodattamalla ja pestiin heksaanilla ja 35 heksaanipesuliuos yhdistettiin heksaanisuodokseen ja heksaani haihdutettiin pois alipaineessa, jolloin 26 8 3 9 5 9 saatiin 67 g 2-kloori-2-fenyylitiomeripihkahapon 1-me-tyyli(4-t-butyyli)diesteriä oranssina öljynä.

Edellä saatu klooridiesteri (67 g, 202,51 mmol) liuotettiin 1 litraan metyleenikloridia ja liuos jäähdy-5 tettiin -78°C:seen. Tähän kylmään liuokseen lisättiin ruiskulla DBU:ta (31,44 g, 206,56 mmol) ja liuos muuttui tummaksi ja sakeni. Kun reaktioseoksesta ajetussa ohut-kerroskromatogrammissa näkyi kaksi päätäplää eikä lainkaan lähtöainetta, reaktioseoksen annettiin lämmetä 1,5 10 tunnin aikana huoneen lämpötilaan. Seos kaadettiin 1 litraan vettä, joka sisälsi 200 ml 1 N suolahappoa ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros puolestaan kaadettiin samanlaiseen HCl:n vesiliuokseen kuin edellä ja orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin magnesium-15 sulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 60 g tuotetta ruskehtavana öljymäisenä kiinteänä aineena. Raakatuote puhdistettiin preparatiivi-sen HPLC:n avulla, jolloin saatiin 47,7 g 2-fenyylitio-maleiinihapon 1-metyyli(4-t-butyyli)diesteriä vaalean-20 keltaisena öljynä, joka jähmettyi, kun sitä seisotettiin jääkaapissa yön yli.

NMR (90 MHz; CDC13, 6); 1,4 ja 1,5 (s, 9H, t-bu-tyyli-H); 3,3 ja 3,6 (s, 3H, COOCH^); 5,4 ja 6,3 (s, 1H, vinyyli-H) ja 7,2 - 7,6 (m, 5H, fenyyli-H).

25 Liuokseen, joka sisälsi edellä saatua maleiini- happodiesteriä (2,32 g, 7,95 mmol) 75 ml:ssa metyleenikloridia ja joka oli jäähdytetty -42°C:seen, lisättiin peretikkahappoa (1,67 g, 8,745 mmol) ja seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseosta sekoi-30 tettiin huoneen lämpötilassa noin yksi tunti ja siihen lisättiin 1,95 g dimetyylisulfidia. Seosta sekoitettiin sulfidin lisäyksen jälkeen 30 minuuttia ja sitten se kaadettiin silikageelikerroksen (150 g) päälle. Kerrosta Pestiin metyleenikloridillä, kunnes kaikki jäljellä ol-35 lut lähtäaine oli suodattunut. Sen jälkeen kerrosta huuhdottiin dietyylieetterillä, kunnes haluttu tuote oli

II

27 83959 suodattunut. Tuotteen eetteriliuos haihdutettiin, jolloin saatiin tuotetta keltaisena öljynä, öljy käsiteltiin kolmesti 200 ml:n erillä tolueenia ja kunkin käsittelyn jälkeen suoritettiin haihdutus alipaineessa. Saatiin 5 1,95 g (saanto 79 %) 2-fenyylisulfinyylimaleiinihapon di- esteriä keltaisena öljynä.

NMR (90 MHz; CDCl^,^): 1,5 ja 1,6 (s, 9H, t-bu-tyyli); 3,6 ja 3,7 (s, 3H, COOCH3); 6,9 ja 7,2 (s, 1H; vinyyli-H) ja 7,1 ja 7,7 (m, 5H, fenyyli-H).

10 Valmistus 2 2-fenyylisulfinyylimaleiinihapon 1-metyyli(4-al- lyyli)diesteri

Valmistuksessa 1 kuvatulla tavalla saatu fenyyli-sulfinyylimaleiinihapon metyyli(t-butyyli)diesteri käsi-15 teltiin 0°C:ssa 8 ml :11a trifluorietikkahappoa t-butyy-liesteriryhmän poistamiseksi selektiivisesti. Viiden minuutin kuluttua reaktioseosta alettiin sekoittaa huoneen lämpötilassa ja sekoitusta jatkettiin kaksi tuntia ja sen jälkeen seos haihdutettiin alipaineessa 45°C:ssa, 20 jolloin saatiin öljy. öljy liuotettiin mahdollisimman pieneen määrään metyleenikloridia ja liuosta laimennettiin heksaanilla, kunnes se muuttui sameaksi. Tuote saostui valkoisena kiinteänä aineena. Emäliuos dekantoitiin eroon kiinteästä tuotteesta, joka pestiin seoksella, jo-25 ka sisälsi 20 % metyleenikloridia heksaanissa. Pesuliuok-set lisättiin emäliuokseen ja ne sijoitettiin jääkaappiin yön ajaksi, jolloin saatiin toinen erä tuotetta. Ensimmäisessä erässä saatiin 2,124 g ja toisessa erässä 900 mg tuotetta (79,6 %) alipaineessa kuivattuna.

30 Edellä esitetyllä tavalla saatu fenyylisulfinyyli- puoliesteri (2,124 g, 8,362 mmol) liuotettiin 8 ml:aan DMF ja liuos jäähdytettiin 0°C:seen. Liuokseen lisättiin ensin allyylibromidia (1,011 g, 8,362 mmol) ja sen jälkeen trietyyliamiinia (1,25 ml, 9,0 mmol) ja seoksen an-35 nettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia; pienestä 28 83959 osasta reaktioseosta ajettu ohutkerroskromatogrammi osoitti, että suurin osa lähtöaineesta oli reagoinut ja siinä esiintyi uusi päätäplä. Erittäin tumma reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 60 ml dietyylieetteriä 5 ja 50 ml vettä. Vesikerros erotettiin ja pestiin 40 ml:lla dietyylieetteriä. Eetterikerrokset yhdistettiin ja pestiin peräkkäin kahdesti 50 ml:n erillä kylläistä natrium-vetykarbonaatin vesiliuosta, kahdesti 50 ml:n erillä kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta, kahdesti 10 50 ml:n erillä 1 N suolahappoa ja kerran 50 ml:lla kyl läistä NaCl-liuosta. Pesty orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta keltaisena öljynä. Tuote liuotettiin 50 ml:aan tolueenia ja liuos haihdu-15 tettiin alipaineessa. Toimenpide toistettiin, jolloin saatiin 1,934 g (saanto 78,6 %) otsikon mukaista tuotetta, allyylimetyylidiesteriä.

NMR (90 MHz; CDC13,£): 3,6 (s. 3H, COOCH3); 4,7 (dm, J = 6, 2H, allyylin CH2) ; 5,2 - 5,5 (m, 2H, allyy-20 H H H

Iin -CH2-C=C ); 5,7 - 6,2 (m, 1H, allyylin -CH2~C=CH2)

H

ja 7,4 - 7,7 (m, 5H, fenyyli-H).

Valmistus 3 25 2-fenyylisulfinyylimaleiinihapon 1-etyyli(4-allyy- li)diesteri

Liuokseen, joka sisälsi 2-fenyylitiomaleiinihapon 1-metyyli(4-t-butyyli)diesteriä (5 g, 16,99 mmol) 100 mlrssa THF, lisättiin litiumhydroksidia (16,99 mmol), 30 ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia. Reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 150 ml vettä ja 300 ml dietyylieetteriä ja vesikerros ja orgaaninen kerros erotettiin. Vesikerros pestiin kahdesti 150 ml:n erillä dietyylieetteriä ja eetteripesuliuos 35 yhdistettiin orgaaniseen kerrokseen ja ne haihdutettiin, jolloin saatiin 2,2 g lähtöainetta, diesteriä. Vesikerros li 29 83959 tehtiin happameksi 17 ml:11a 1 N suolahappoa ja uutettiin 200 ml:n erillä dietyylieetteriä. Uutteet yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 2,7 g mono-5 (t-butyyli)esteriä, 2-fenyylitiomaleiinihapon 4-mono(t-butyyli)esteriä, keltaisena öljynä (saanto 57 %).

Liuokseen, joka sisälsi edellä esitetyllä tavalla saatua fenyylitiopuoliesteriä (8,0 g, 28,551 mmol) DMF:ssa, lisättiin pipetillä etyylijodidia (4,9 g, 31,406 mmol) 10 ja trietyyliamiinia (4,78 ml, 34,261 mmol) ja seosta sekoitettiin yksi tunti huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen reaktioseos kuumennettiin lyhyeksi ajaksi 65°C:n lämpötilaan ja jäähdytyksen jälkeen siihen lisättiin vielä 2,0 ml etyylijodidia 4,0 mlrssa trietyyliamiinia. Seos kuumen-15 nettiin uudelleen lyhyeksi ajaksi 65°C:n lämpötilaan ja jäähdytettiin. Reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 200 ml dietyylieetteriä ja 120 ml vettä. Vesiker-ros erotettiin orgaanisesta kerroksesta, joka pestiin kahdesti 100 ml:n erillä kylläistä natriumvetykarbonaa-20 tin vesiliuosta, kahdesti 100 ml:n erillä 1 N suolahappoa ja kerran 100 ml:11a kylläistä NaCl-liuosta. Sen jälkeen orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 6,51 g fenyylitio(etyyli)(t-butyyli)diesteriä 25 öljynä (saanto 74 %).

NMR (90 MHz; CDC13, 6): 0,9 ja 1,1 (t, J = 7, 3H, C02CH2CH3); 1,4 ja 1,5 (s, 9H, t-butyyli); 3,7 ja 4,1 (q, J = 7, 2H, C02CH2CH3); 5,4 ja 6,2 (s, 1 H, vinyyli-H) ja 7,2 - 7,6 (m, 5 H, fenyyli-H).

30 Etyyli(t-butyyli)diesteriä (6,51 g) käsiteltiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia 9 ml :11a trifluori-etikkahappoa t-butyyliesteriryhmän poistamiseksi selektiivisesti, jolloin saatiin 5,1 g 2-fenyylitiomaleiinihapon 1-monoetyyliesteriä keltaisena öljynä.

35 NMR (90 MHz; CDCl-j, £): 0,9 ja 1,2 (t, J = 7, 3H, C02CH2CH3) ; 3,7 ja 4,1 (q, J = 7, 2H, CC>2CH2CH3) ; 5,4 ja 3o 83959 6,2 (s, 1 H, vinyyli-H); 7,1 - 7,6 (m, 5H, fenyyli-H) ja 8,7 (leveä s, 1H, COOH).

Edellä kuvatulla tavalla saatu hapon puoliesteri (5,1 g, 20,222 mmol) liuotettiin 22 mlraan DMF, liuokseen 5 lisättiin allyylibromidia (3,67 g, 30,333 mmol) ja sen jälkeen trietyyliamiinia (4,8 ml, 34,38 mmol) ja reaktio-seosta sekoitettiin noin 16 tuntia. Seos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 100 ml vettä ja 200 ml dietyylieette-riä ja orgaaninen kerros erotettiin vesikerroksesta. Or-10 gaaninen kerros pestiin kahdesti 100 ml:n erillä kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta, kahdesti 100 ml:n erillä 1 N suolahappoa ja kerran 100 ml:11a kylläistä NaCl-liuosta. Sen jälkeen vesikerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipai-15 neessa, jolloin saatiin 5,5 g (saanto 93,2 %) 2-fenyyli-tiomaleiinihapon 1-etyyli(4-allyyli)diesteriä keltaisena öljynä.

NMR (90 MHz; CDC13,6): 0,9 ja 1,2 (t, J = 7, 3H, -CG2CH3); 3,8 ja 4,1 (q, J = 7, 2H, -CH2CH3); 4,5 ja 4,6 20 (dm, J = 5, 2H, -CH2CH=CH2); 5,1 - 5,4 (m, 2H, -CH2-CH= CO-/ 2 CH-)? 5,5 ja 6,3 (s, 1H, -C=C ); 5,6 - 6,2 (m, 1H; ^ \

H

-CH2-CH-CH2) ja 7,2 - 7,6 (m, 5H, fenyyli).

25 Edellä esitetyllä tavalla valmistettu allyyli- etyylidiesteri (5,52 g, 18,891 mmol) liuotettiin mety-leenikloridiin ja liuos jäähdytettiin noin -42°C:n lämpötilaan. Kylmään liuokseen lisättiin peretikkahappoa (5,04 ml, 26,447 mol) ja seosta sekoitettiin huoneen 30 lämpötilassa noin kaksi tuntia. Lisättiin vielä 2,0 ml peretikkahappoa ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia lisää. Sen jälkeen seokseen lisättiin dimetyylisulfidia (4,85 ml, 66 mmol) ja seosta sekoitettiin vielä 45 minuuttia. Reagoimaton lähtöaine erotet-35 tiin kaatamalla reaktioseos suoraan silikageelin (125 g) päälle ja huuhtomalla lähtöaine silikageelistä li 3i 83959 metyleenikloridilla. Silikageeliä eluoitiin sitten di-etyylieetterillä, kunnes kaikki haluttu sulfoksidi oli huuhtoutunut ulos. Tuotetta sisältävä suodos väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin sulfoksididiesteriä keltai-5 sena öljynä, öljy liuotettiin kuudesti peräkkäin 100 ml:n eriin tolueenia ja tolueeni poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin 3,8 g sulfoksididiesteriä öljynä (saanto 80 %) .

NMR (90 MHz; CDC13, S): 1,1 ja 1,2 (t, J = 7, 3H, 10 -CH2CH3); 4,0 ja 4,1 (q, J = 7, 2H, -CH2CH3); 4,65 ja 4,75 (dm, J = 5, 2H, -CH2-CH=CH2), 5,1 - 5,5 (m, 2H, -CH2-CH=CH2), 5,7 - 6,2 (m, 1H, -CH2-CH=CH2); 6,9 ja 7,1 (s, 1H, C=CH-COO) ja 7,3 - 7,9 (m, 5H, fenyyli).

Valmistukset 4-11 15 Bromisubstituoitu 2-fenyylitiomaleiinihapon 4-(t- butyyli)esteri alkyloitiin vastaavaa menettelytapaa kuin valmistuksessa 3 käyttäen yhdisteellä, joka vastaa kaavaa R2'I, ja hapetettiin sitten kuten valmistuksessa 3, jolloin saatiin yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa: 20

O O

(ll)k II

0-S K C-A’ \ / C (BB)

II

25 Λ H COOR2' 32 83959 rt rt,

« «. S, - 03 O

ÄO- 0103 O ^ “ u o v il rt . n n e

Il v /rt N—· “Εχ “ !5. J. r» no >-) “ in «·· 33 -— ! >-) ~ X π π ^ w XI E rt, o Ό·-η K m - rt~s_/«i wb| ^ «rt “ “““ O rt rt EU U oo ““ίο E03 “*-*.03 _,T3rt toil E m >, Ό M - EO'-ttU ® “ί WC '—/m w cm ^ rt X cm — _ -η _ “w - “XI mm 1 m O/rt> oo oi on /rt /rt o m m cm ,ϊϊ, ^ '03 ' ^ <n| 'CmcmO «. ·» ™L ·. - π

<T <f “ >3- ' 0X031 rt^^E rt CT

X rt r» UU rt· Xi

" “rt · ' ·· CM CM - ' ··»/ ON · U .L

E rt m rt ® 03 IX rt •'M rt M ,1]

‘O rt ► to /-N *0 U O CM | *O nO“ « SR

«i · -x o.L rt u C

- Ό rt /—. ~/rtrt * - i - "1 «m - “O? M ~ X «X MX N'T M /rt rt Ml rt rtmcsm rtu- rt<-*xc rttx.™ rt ί u “ u cm ε ux rt u <r u υ “ *“

Q , rt ·, QXIrt O - (M m .5 Q cm QXX

y U 1 E UU UE £ U ^ XI<T UtOrt o rt rt rt o ON rtrt « Il > rtju- rt m ^ ° m-i „ 1 - · N “ “ “ 2 g'ON g Ό — Xrtxnx x C i ^ x ε tn

Π 53 m “ S “ Χ X «*rt rt X SrtrtrtN

Z 53 oo rt 53 X “ I S3 >—1 - gi3“7 s in

"il CM rt, rt Il E “ ?! X .il ON N XI

M NIVOI N®,rt N I ΐ «1 N | C\l rt N--C0

Z, S'!.· X“CM>, χρ-jrtrt XmTV XO-rtU

X U rt, ro xuc rt - 00 CM “Ne no m “ f? ooX“ o o-h o *.mj - * o x x rt o -.^x UJ on I CM rt O rt I > ON<—i N—/ rt ON ON Ό £ On <T m

CM M CM

X rt, 03 U eo ς_>

, IL X II

'IX = = U X

cni u ,—' cj

X CM UM

IX IX

U O

I i

M

_ X

• u // \ 7

M Tff 03* M

x I II u x · < U · · I U / \ II M II f ·

S3 · X X T T

u i u u I I

t M I I · · CM X CM M \ / X u X X ·

U i U U I

O o o o o

• I I II

Jli j rH i-H i-H

•H

M

φ 'i m no rt oo 6

•H

Ui

W

I! 33 83959

O LO

-M -oo (U (tf — ·|—i 00 -Γ-, - - - * O -rl «.

X r> E S CO O <t o 00 W rt IJ N l t.

- Il -m XI (ö o- ro Ι~- - iO — CJ ·(—i -r—ί ^ E O cO » i - ^' v —' lO lO '—^ <—.

o -<r o -o» s so x

' 00 4-> CM -X *- CJ ~CJ

rt r w ^ O N Ί CM tr

H Λ ^ XI. «M

·· I CM n ·· - » CJ _ ·· Xl~ ^ o ^-sg^sOa: k *o -<r io m <o s—> «m i i <o o i - Γ-. ΓΛ X -H ( -t - - “O CJ “rt “rt « ~ CM X >, M - >-, -p rt /-s n r rt rt X|CM >, t X >,

0 CJ ra - r~^ CJ CJ c CJ CM C

X! O X rt rt Q rr-t r.H Q -rl φ υ u - i » c_i i n > cj - >

•H s—' I ti CMr-t s_r CJ X w (M

4-> XX. X-r X

•H g ' «UU^ XOXsOX XsOX

U S X /—S CM CM ht SlCM rt 32 rt

+J S CO I XIXI I S II S II

,¾ V CJ CJ ·Η rrr r

01 N ~ r-v O O rt N X E T> W N O M

Λ X lO CM I I >, XOSWW

en z x >, s - s-

II U * « c “CM E CM s OM

O s_/KXtH © OT *· X ^ OX- 0\ O I N cg > OS s—< w it Os^Ct

CM

X

a

II

- X - r

CM CJ

X CM

X

0

M

X N

cj ra o «M r-s 2

X ra T

cj X · M cj // \ . I 7. Tl < X I · · o CM -^/ CM X ·

X CJ I

CJ CM CM

«M XX

X O O

CJ I I

0 o o

1 I I

gc| H rt rt

•H

λ; x, p ai os o rt E rt rt

•H

W

W

34 83959

Valmistus 12 t-butyyli-3-fenyylitio-4-oksopentanoaatti

Liuokseen, joka sisälsi l-fenyylitiopropan-2-onia (fenyylitioasetonia) (43,32 g, 260,6 mmol) 400 ml:ssa THF, 5 lisättiin natriumhydridiä (10,424 g, 260,6 mmol; 60-%:ise-na mineraaliöljydispersiona) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa noin 15 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin 20 minuutin aikana t-butyylibromiasetaatti (52,783 g, 270,6 mmol) ja reaktioseosta sekoitettiin noin kaksi tun-10 tia. Reaktioseoksesta ajetussa ohutkerroskromatogrammissa näkyi yksi päätäplä ja kaksi pienempää täplää. Reaktio-seos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 1 000 ml kloroformia ja 800 ml kylläistä ammoniumkloridin vesiliuosta. Kerrokset erotettiin ja vesikerros pestiin kerran 500 15 ml:11a kloroformia. Kloroformipesuliuos yhdistettiin orgaaniseen kerrokseen ja ne kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta keltaisena öljynä. Tuote kiteytyi lisättäessä siihen 300 ml heksaania. Tuote erotettiin 20 suodattamalla ja pestiin pentaanilla. Saatiin 41,4 g tuotetta valkoisina kiteinä (saanto 57 %).

NMR (90 MHz; CDC13, 6): 1,4 (s, 9H, t-butyyli);

H

2,4 (s, 3H, -CO-CH-), 2,7 (dd, J = 18 ja 5, 1H, -C-C0o- j \ 2

25 H H

t-butyyli); 2,9 (dd, J = 18 ja 9, -C-CO„-t-butyyli); I ^

H

4,0 (dd, J = 5 ja 9, 1H, -CH-COCH3= ja 7,2 - 7,4 (m, 5H, fenyyli).

30 Liuokseen, joka sisälsi edellä esitetyllä taval la valmistettua keto(t-butyyli)esteriä (41,5 g, 147,75 mmol) 250 mlrssa THF ja 500 ml:ssa hiilitetrakloridia, lisättiin N-kloorisukkinimidiä (20,72 g, 155,136 mmol) ja seosta kuumenenttiin refluksointilämpötilassa noin 35 2,5 tuntia. Reaktioseos haihdutettiin alipaineessa, jol loin saatiin öljymäistä kiinteää ainetta. Seokseen

II

35 83959 lisättiin heksaania ja kiinteä aine (sukkinimidi) erotettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 46,5 g t-butyyli-3-fenyylitio-3-kloori-4-oksopentanoaattia keltaisena öljynä.

5 NMR (90 MHz; CDC13, 6): 1,4 (s, 9H, t-butyyli); 2,4 (s, 3H, -C0CH3) ; 3,2 (AB, J = 16, 2H, -CH2-CC>2-t-butyyli) ja 7,3 - 7,6 (m, 5H, fenyyli).

Edellä kuvatulla tavalla valmistettu klooriketoes-teri (46,5 g, 147,75 mmol) liuotettiin 250 mitään mety-10 leenikloridia ja liuos jäähdytettiin noin -78°C:n lämpötilaan. Kylmään seokseen lisättiin ruiskulla DBUrta (22,84 g, 150,71 mmol) ja seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan noin kahden tunnin aikana. Tumma reak-tioseos kaadettiin liuokseen, joka sisälsi 100 ml 1 N 15 suolahappoa 500 mltssa vettä. Kerrokset erotettiin ja orgaaninen kerros pestiin uudelleen laimealla suolahapolla. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin magnesium-sulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 42 g raakatuotetta. Tuote puhdistettiin 20 preparatiivisen HPLC:n avulla, jolloin saatiin 32,86 g (saanto 80 %) t-butyyli-3-fenyylitio-4-oksopent-2-enoaat-tia keltaisena kiteisenä aineena.

NMR (90 MHz; CDC13, S): 1,4 ja 1,5 (s, 9H, t-butyyli); 2,0 ja 2,4 (s, 3H, -COCH3); 5,3 - 6,1 (s, 1H, vi-25 nyyli-H) ja 7,2 - 7,6 (m, 5H; fenyyli).

Edellä esitetyllä tavalla valmisettu t-butyyli-(oksopentenoaatti) hapetettiin peretikkahapolla metylee-nikloridissa 42°C:n lämpötilassa, jolloin saatiin 3,43 g (saanto 50,6 %) otsikon mukaista yhdistettä, t-butyyli-30 3-fenyylisulfinyyli-4-oksopent-4-enoaattia, keltaisena öljynä.

Tuotteen NMR-spektri osoitti, että se oli cis- ja trans-isomeerin seos.

NMR (90 MHz; CDC13, 0): isomeeri I: 1,3 (s, 9H, 35 t-butyyli); 2,4 (s, 3H, -COCH3); 7,2 (s, 1H, vinyyli-H) ja 7,4 - 7,8 (m, 5H, fenyyli).

36 83959

Isomeeri II: 1,5 (s, 9H, t-butyyli); 1,9 (s, 3H, -COCHj); 6,6 (s, 1H, vinyyli-H) ja 7,7 - 7,9 (m, 5H, fenyyli).

Valmistus 13 5 Allyyli-3-fenyylitio-4-oksopentanoaatti

Allyyli-3-fenyylitio-4-oksopentanoaatti saatiin valmistusta 12 vastaavalla menettelytavalla.

NMR (300 MHz; CDC13, 5): 1,95 (s, 3H, -¾) ; 4,7 (d, J = 7, 2H, -OCH2CH); 5,3 (d, J = 13, 1H); 5,4 (d, 10 J = 18, 1H); 5,95 (m, 1H); 6,7 (s, 1H) ja 7,5 - 7,8 (m, 5H, C6H5>.

Esimerkki 1 t-butyyli-7/3-butyylioksikarbonyyliamino-3-metok- sikarbonyyli-l-karba(detia)-3-kefeemi-4-karboksy-15 laatti A. 2-/dimetyyli (t-butyyli) silyylioksi_7propioni-happonitriilin valmistus

Liuokseen, joka sisälsi 2-syaanietanolia (7,0 g, 98,48 mmol) 75 mlrssa DMF, lisättiin dimetyyli(t-butyy-20 li)kloorisilaania (16,028 g, 106,36 mmol) ja sen jälkeen imidatsolia (8,17 g, 120 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin noin 15 tuntia ja sitten se kaadettiin seokseen, joka sisälsi 250 ml dietyylieetteriä ja 200 ml 1 N suolahappoa. Eetterikerros erotettiin ja pestiin kahdesti 25 150 ml :11a 1 N suolahappoa. Orgaaninen kerros erotet tiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös laimennettiin 100 ml :11a tolueenia ja liuos haihdutettiin. Tämä menettely toistettiin kolmesti, jolloin saatiin 17,26 g 2-^di-30 metyyli(t-butyyli)silyylioksl/propionihapponitriiliä värittömänä nesteenä (saanto 94,7 %) .

NMR (90 MHz; CDC13,<$): 0,1 (s, 6H, metyyli-H) ; 0,9 (s, 9H, t-butyyli-H); 2,9 (t, J = 6, 2H, CH2CN) ja 3,8 (t, J = 6, 2H, SiO-CH2).

li 37 83959 B. 3-/dimetyyli(t-butyyli)silyylioksi/propionalde-hydi

Liuokseen, joka sisälsi 3-/dimetyyli(t-butyyli)-silyylioksiypropionihapponitriiliä (6,04 g, 32,65 mmol) 5 50 ml:ssa THF ja joka oli jäähdytetty 0°C:n lämpötilaan, lisättiin ruiskulla di-isobutyylialumiinihydridiä (60 mmol 60 ml:ssa THF) ja seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Sen jälkeen kun reaktioseoksesta ajettu ohutker-roskromatogrammi oli osoittanut vain hyvin vähän reagoin-10 tia tapahtuneen, reaktioseosta refluksoitiin muutama minuutti. Sen jälkeen reäktioseos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja kaadettiin seokseen, joka sisälsi 150 ml 1 M viinihappoa ja 200 ml dietyylieetteriä. Tapahtui vähäistä kaasun kehitystä ja seos siirrettiin dietyylieet-15 terin avulla erotussuppiloon. Eetterikerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa. Jonkin verran suspendoitunutta kiintoainetta sisältänyt nestemäinen jäännös laimennettiin heksaanilla, seos suodatettiin ja sakka pestiin hek-20 saanilla. Suodos ja pesuliuokset väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin 3,7 g silyylioksipropionaldehydiä vaaleankeltaisena nesteenä (saanto 60,3 %). NMR-spektri osoitti tuotteen olevan noin 75-%:isesti puhdasta ja sisältävän epäpuhtauksina jonkin verran lähtöainetta ja 25 silanolia.

NMR (90 MHz; CDC13, S)' 0,2 (s, 6H, metyyli-H)? 0,8 (s, 9H, t-butyyli-H); 2,5 (dt, J = 2,5 ja 6, 2H, CH2CO); 3,9 (t, J = 6, 2H) ja 9,5 (t, J = 2,5, 1H, COH).

C. Bentsyyliamiinin ja 3-^climetyyli (t-butyyli) si- 30 lyyliyksi/propionaldehydin muodostama imiini

Liuokseen, joka sisälsi edellä kohdassa B esitetyllä tavalla valmistettua silyylioksipropionaldehydiä (2,5 g, 13,3 mmol) noin 20 ml:ssa tolueenia, lisättiin bentsyyliamiinia (1,16 ml, 10,64 mmol) ja noin 3-4 g 35 4 A:n molekyyliseuloja. Seosta pyöritettiin ajoittain 38 83959 25 minuutin jakson aikana varovasti silyylioksialdehy-din ja bentsyyliamiinin välisen imiinin muodostamiseksi.

D. N-bentsyyli-3/3-/T( 4S) -fenyyli-1,3-oksatsolidin-2-on-3-yyliasetyyliamino.7-4/3-Z’2-dimetyyli (t-5 butyyli)silyylioksietyyli/atsetidin-2-oni

Liuokseen, joka sisälsi (4S)-fenyyli-1,3-oksatso-lidin-2-on-3-yylietikkahappoa (2,2 g, 9,95 mmol) 20 ml:ssa tolueenia, lisättiin oksalyylikloridia (1,45 g, 11,44 mmol). Keltaista liuosta sekoitettiin yksi tunti ja sen 10 jälkeen se haihdutettiin, jolloin saatiin vastaavaa hap-pokloridia keltaisena öljynä. Happokloridi liuotettiin 20 ml:aan metyleenikloridia ja liuos jäähdytettiin noin -78°C:n lämpötilaan. Happokloridiliuokseen lisättiin trietyyliamiinia (2,08 ml, 14,93 mmol) ja liuosta sekoi-15 tettiin huoneen lämpötilassa muutama minuutti. Happokloridiliuokseen lisättiin putken välityksellä edellä kohdassa C kuvatulla tavalla valmistettu imiiniliuos ja reak-tioseoksen annettiin lämmetä hitaasti noin kahden tunnin aikana noin 15-20°C:n lämpötilaan. Sen jälkeen reaktio-20 seos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 30 ml metyleeni-kloridia ja 30 ml 1 N suolahappoa ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 40 ml:11a kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta ja 40 ml:11a vettä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haih-25 dutettiin alipaineessa. Atsetidinoni saatiin punertavana öljynä, öljy käsiteltiin kromatografisesti käyttäen ad-sorbenttina 100 g silikageeliä ja eluenttina seosta, joka sisälsi 35 % etyyliasetaattia heksaanissa. Halutut ja-keet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa vaalean-30 punaiseksi kiinteäksi aineeksi. Kiinteä aine pestiin heksaanilla värin poistamiseksi siitä, jolloin saatiin 1,03 g atsetidinonia valkoisena kiinteänä aineena (saanto 21,5 %).

= +79,2° 35 Massaspektri: 480 (M+), 423 (M+ - t-butyyli) IR: 1750 cm 1 -laktaamikarbonyyli) li 39 83959

Yhdisteen C27H36N2°4S;*· alkuaineanalyysi:

Teoreettinen Todettu C 67,47 67,61 H 8,55 8,78 5 N 5,83 6,03 NMR (90 MHz; CDC13, <$): 0,0 ja 0,25 (2 x s, 6H, metyyli-H); 0,8 (s, 9H, t-butyyli-H); 1,6 (m, 2H, CH2:n H); 3,5 (t, J = 6, 2H, SiOCH2:n H); 3,8 (dt, J = 5 ja 6, 1H, C4-H) ja 7,1 - 7,5 (m, 10H, fenyyli-H).

10 E. 4/3-t-butyylioksikarbonyyliamino-4/3-iT2-dimetyy- li (t-butyyli) silyylioksietyyli_7atsetidin-2-oni 430 ml:aan nestemäistä ammoniakkia lisättiin hek-saanilla pestyä litiumia (2,385 g, 343,71 mmol) ja seosta sekoitettiin noin 20 minuuttia litiumin liuottamiseksi.

15 Litium-ammoniakkiliuokseen lisättiin liuos, joka sisälsi edellä kohdassa D esitetyllä tavalla valmistettua N-bent-syyliatsetidinonia 87 ml:ssa THF ja 8,496 g t-butanolia (10,8 ml, 114,49 mmol) ja seosta sekoitettiin voimakkaasti 50 minuuttia. Seokseen lisättiin metyylialkoholi-to-20 lueeniseosta (87 ml, 1:1) ja sen jälkeen 21,7 ml etikka-happoa. Ammoniakki tislattiin pois ja jäännöksen pH säädettiin arvoon 5 lisäämällä siihen 45 ml etikkahappoa. Konsentraattiin lisättiin 500 ml seosta, joka sisälsi 25 % isopropyylialkoholia kloroformissa ja sen jälkeen 25 300 ml kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta seok sen pH:n säätämiseksi arvoon 9. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros pestiin kahdesti 200 ml:11a seosta, joka sisälsi 25 % isopropyylialkoholia kloroformissa. Pesuliuokset yhdistettiin orgaaniseen kerrokseen ja 30 ne kuivattiin magnesiumsulfatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 9,3 g epäpuhdasta 3/3-amino-4/i-^2-dimetyyli (t-butyyli) silyylioksietyy-li7atsetidin-2-onia. Epäpuhdas 3-aminoyhdiste liuotettiin 50 ml:aan metyleenikloridia ja liuokseen lisättiin 35 8,486 g (8,486 ml, 38,88 mmol) di(t-butyyli)dikarbonaat- tia. Seosta sekoitettiin yön yli ja sen jälkeen se 4o 83959 haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 14,67 g 3/3-t-butyylioksikarbonyyliaminoasylointituotetta. Tuote käsiteltiin kromatografisesti käyttäen adsorbenttina 150 g silikageeliä ja eluenttina etyyliasetaatti-heksaaniseos-5 ta (50:50). Haluttua tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 11,88 g 3/3-t-butyylioksikarbonyyliamino-4-^2-dimetyyli (t-butyy-li)silyylioksietyylij atsetidin-2-onia.

NMR (90 MHz; CDC13#£): 0,0 (s, 6H, metyyli-H); 10 0,8 (s, 9H, t-butyyli-H); 1,4 (s, 9H, t-butyylioksi-H); 1,7 (m, 2H, CH2:n H); 3,6 (t, J = 5, 2H, CH2:n H); 3,9 (m, 1H, C4-H); 5,0 (dd, J = 5 ja 9, 1H, C3-H); 5,5 (d, J = 9, 1H, amidi-H) ja 6,2 (leveä s, 1H, NH).

F . 3/3-t-butyy lioksikarbonyyliamino-4- (2-hydroksi-15 etyyli)atsetidin-2-oni

Liuokseen, joka sisälsi edellä kohdassa E esitetyllä tavalla valmistettua t-butyylioksikarbonyyliamino-atsetidinonia (11,88 g, 34,48 mmol) 12 ml:ssa THF, lisättiin 0°C:ssa tetrabutyyliammoniumfluoridia (10,412 g, 39,5 mmol) ja seosta sekoitettiin noin 1,5 tuntia. Reak-20 tioseos haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta öljynä, öljy suodatettiin silikageelin (100 g) läpi etyyliasetaattia, joka sisälsi 10 % etyylialkoholia, käyttäen. Suodos haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta 25 keltaisena kiinteänä aineena. Kiinteä aine sekoitettiin heksaaniin, ultraäänikäsiteltiin ja suodatettiin, jolloin saatiin 6,28 g 4/1- (2-hydroksietyyli) atsetidinonia valkoisena kiinteänä aineena (saanto 79,5 %). NMR-spek-tri osoitti tuotteen olevan puhdasta cis-isomeeriä.

30 NMR (90 MHz; CDCl3#/3): 1,4 (s, 9H, t-butyyliok- si-H); 1,7 (m, 2H, CH2:n H); 3,0 (leveä s) 3,7 (m, 2H, CH2:n H); 3,9 (m, 1H, C4-H); 5,0 (dd, J = 5 ja 8, 1H, C3-H); 5,8 (d, J = 8, 1H, amidi-H) ja 6,8 (leveä s, 1H, NH).

li 35 4i 83959 G. 3/3-t-butyylioksikarbonyyliamino-^i- (2-metyyli-sulfonyylietyyli)atsetidin-2-oni

Liuokseen, joka sisälsi edellä kohdassa F esitetyllä tavalla valmistettua 2-hydroksietyylisubstiuoitua at-5 setidinonia (6,28 g, 27,424 mmol) seoksessa, joka sisälsi 200 ml kloroformia ja 100 ml dioksaania, lisättiin trietyyliamiinia (11,1 g, 109,7 mmol) ja metaanisulfonyy-likloridia (6,283 g, 54,85 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin yksi tunti ja sen jälkeen se kaadettiin seokseen, 10 joka sisälsi 300 ml metyleenikloridia ja 150 ml kylläistä natriumvetykarbonaattiliuosta. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros pestiin kahdesti 150 ml :11a metyleenikloridia. Pesuliuokset ja orgaaninen kerros yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin 15 ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljymäistä kiinteää ainetta. Kiinteää ainetta trituroitiin di-etyylieetteri-heksaaniseoksen (50:50) kanssa ja seos suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 8,4 g vastaavaa metaanisulfonyylioksijohdannaista.

20 H. 3/3-t-butyylioksikarbonyyliamino-4/J- (2-jodi- etyyli)atsetidin-2-oni

Liuosta, joka sisälsi 8,4 g edellä kohdassa G esitetyllä tavalla valmistettua mesylaattiesteriä (27,3 mmol) 400 ml:ssa asetonia ja natriumjodidia (16,5 g, 110,0 mmol), 25 refluksoitiin neljä tuntia. Lisättiin vielä 2 g natriumjodidia ja seosta refluksoitiin yksi lisätunti. Reaktio-seos haihdutettiin alipaineessa ja jäännökseen lisättiin metyleenikloridia. Liukenematon aine erotettin suodattamalla ja suodos väkevöitiin alipaineessa ruskehtavaksi 30 öljyksi, öljy liuotettiin etyyliasetaatti-heksaaniseok-seen (80:20) ja liuos suodatettiin silikageelin (200 g) läpi. Suodos haihdutettiin, jolloin saatiin 7,65 g tuotetta kellertävänä kiinteänä aineena. Kiinteä aine liuotettiin mahdollisimman pieneen määrään kuumaa etyyliase-35 taattia ja lämmin liuos laimennettiin heksaanilla. Tuote saostui, jolloin saatiin ensimmäisessä erässä 4,9 g 42 83959 2-jodietyyliyhdistettä valkoisena kiinteänä aineena ja toisessa erässä 1,65 g tuotetta (saanto 70,6 %).

NME (90 MHz; CDC13, $): 1,4 (s, 9H, t-butyylioksi-H); 2,1 (m, 2H, CH2:n H); 3,1 (t, J = 5, 2H, CH2I:n H); 5 3,9 (dt, J = 5 ja 7, 1H, C4-H); 5,1 (m, 2H, C4-H ja amidi- H) ja 6,2 (leveä s, 1H, NH).

/«/n5 = +50,65° u -1 IR (CHCl^) : 1770 cm (/J-laktaamikarbonyyli)

Yhdisteen C^qH^IS^O^I alkuaineanalyysi 10 Teoreettinen Todettu C 35,31 35,52 H 5,04 4,74 N 8,24 8,08 I. t-butyyli-7/j-t-butyylioksikarbonyyliamino-3-15 metoksikarbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksy- laatti

Liekissä kuivattuun ja kuivalla typellä huuhdottuun pyöreäpohjäiseen 50 ml:n pulloon lisättiin edellä kohdassa H esitetyllä tavalla valmistettua 2-jodietyyli-20 atsetidinonia (1,0 g, 2,941 mmol) ja THF ja liuos jäähdytettiin noin -78°C:n lämpötilaan. Kylmään liuokseen lisättiin di(trimetyylisilyyli)litiumamidia (2,82 ml, 2,822 mmol) ja seosta sekoitettiin kylmässänoin 30 minuuttia. Sen jälkeen seokseen lisättiin putken välityk-25 sellä 2-fenyylisulfinyylimaleiinihapon 1-metyyli(4-t-bu-tyyli)diesteriä (0,927 g, 2,985 mmol) ja reaktioseosta sekoitettiin noin 10-15 minuuttia. Reaktioseokseen lisättiin 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimidi-nonia ja seoksen annettiin lämmetä hitaasti noin kahden 30 tunnin aikana huoneen lämpötilaan. Reaktioseos sekoitettiin huoneen lämpötilassa noin 45 minuuttia ja se kaadettiin seokseen, joka sisälsi 50 ml ammoniumkloridin vesiliuosta ja 150 ml etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suoda-35 tettiin ja haihdutettiin alipaineessa keltaiseksi öljyksi. öljy käsiteltiin kromatografisesti käyttäen li 43 83959 absorbenttina 100 g silikageeliä ja eluenttina seosta, joka sisälsi 25 % etyyliasetaattia heksaanissa. Haluttua tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 560 mg tuotetta val-5 koisena vaahtona. NMR-spektri osoitti tuotteen olevan noin 80-%:isesti puhdasta. Tuote jatkopuhdistettiin pre-paratiivisilla paksukerroslevyillä (4x2 mm) käyttäen eluenttina seosta, joka sisälsi 25 % etyyliasetaattia heksaanissa, jolloin saatiin 520 mg otsikon mukaista yh-10 distettä, jonka puhtausaste oli noin 90 %.

NMR (90 MHz; CDCl-j, 6): 1,4 (s, 9H, t-butyyli-H) ; 1,5 (s, 9H, t-butyyli-H); 3,7 (s, 3H, COOCH3:n H); 3,9 (m, 1H, C6-H) ja 4,9 - 5,1 (m, 2H, C7-H ja amidi-H). Massaspektri: 396 (M+), 340 (M+ - C^Hg) 15 IR (CDCl^) : 1781 cm ^ (/3-laktaamikarbonyyli)

Yhdisteen C39H2gN207 alkuaineanalyysi:

Teoreettinen Todettu C 57,56 57,63 H 7,12 6,84 20 N 7,07 7,08

Esimerkit 2-8

Esimerkin 1 kohtaa I vastaavassa menettelyssä käytettiin erilaisia kaavaa (BB) vastaavia yhdisteitä, jolloin saatiin yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa (2):

25 H H

Cf \S (2) 30 COOFte' 44 83959 n

Γ- rl _ KO

il O —' rH - - - O K w n - ' - — — - - LD O CC j* 03 — - - WCC - m -~ - - - to -—- c— '—· v s J - — K Λ — U> 03 Kl -4-> t -—' -—»— —· n - CJ 10 3 -— «o CC CC O <o ^>i!C nK K ^ OS ~ I S3 inuuu o cj >i «cc u in u m -h + i <o ^ n n ^ --hi o t! O O cu <* * n s - - CC ICC I -CC - -5 nKI - ----b — - - HCCUU H rl in - O I -Klo H K CC — G rH K ' nOO K +J K O O co <c K o co ΟΊΕ > ·· il ·· - -in ·· -no i ·· O o f o ·· rH r- ~ “"* * 1 ^ Λ ' *

*o E - - «o —K - «o σι - - o to -KIS «o 03 -O

^KK 003 e - K -r K Oh - —Εν - cm es -in n— - - — K (N - no ε — - —ΚΙ

,. «σ> neo ΚΙ n 03 cm neo I 2J + nm O

n r—I r—t^OcO *H CO *> rH *- ** mS H vCO O

rn On N N O CO O - O -- N UCMN-tC— On -I

<u P KK Q It" Q<fn NK P ΚΚΐβ P ro n CJ lOlO O - O - Km O - n cm n <41 CJ-

t! — ' il n --: - - —>n -m n --7 η i m — — -K

ΰ «h « >,<n o. os -K*bs Λ >,η n .η os >.κ χ ε :>. ' ~ ε > _£*, ε λ η - ε >, κ^νι ς j η - <u a >ι|| a JJ >ΚΙ an -E 2 υ-> - m ι -μ 23 a, tj *9 'ο ^ ευ κ - ε -9 ^ ε ιι ε * κ-ιι jS Λ ww N-fvO NOEfl- Ν·^ ό b U ^ Ν I gb S i m m s ^ m § m SS4"* » σ> $ ε - «»o t- -m- - σ> n r- -® £ e- « -σ^Ό ok- - oK -K on-- - oK-'dr-") ok -Λ o o ^ ctiCTi^cm σ' K n ^ ^ ^ σ> en —n 32 o o cm — co

K

O

<N · I CU

S f \ s s - ί I ! v „ a < o V / « cc o e» V KO eu

K I O I K

O CU I CJ

0 K n o

1 O K I

I o

O I

I o

CU

K n -O — «Ms n

K = s K

OS O u cu —

K O

o I

O

o O

OS CQ - = r =

P

H

X

X

lu Φ

s CM CO u* m lO

ω

H

li 45 83959 - - p E * * 03 η ω — * •w ο - '—'•η ε - 03 cm ν * Ε ιο *——* σ' ' LD γη ΚΙ Ε ό m μ X ιλ -X ro »υ*—*— ο Xlo <or* Ο <η * Έ O -U *ο * CM Ο —' I LD ΙΛ Ο I CM »t »· ·* H (N ^ * «* ·* i/i «. m *»·*·* ·· ^ jij «·.

*0 'w'’ PC rH ffi LH LO ‘0~'* S *“ »H S

H ® -N H «O CM 7; nU

*LO πτ}1 - * M -K m « * * ' ^·Λ - * * >,ro U 031 HH g^ «EP5K E «E M nU u *-11 r-l rH *- «H *- tMl 0310 „ Q * Ό X U 2 O Ο i

O O — LO idCO * *0 QO I O

T3 —' CO rH -O * LH CM * CJ * +J *1 * a) 33 -Ό ^ il «h co *-i-» * g 03

•'J OS U CM Ό * 1-)11 OO'D'CM

% | l *w®^ ^ ^ 00 £> * ^ σ> νΌ *03 S n * ίο in M N X ή --03ΛΕΗ 03 W CO * Il

Φ gn >-N EU-Ό N U *— - E O

m § £ *- m *- * mi m*- w * a * DOlm σι g ir» or* λ —σ o o n rH - cm g

o n i 03 -O * * n 0 03 -03 -'U

cno-^tHco i in in ^ tMUHHif- n 03 U n N —* 03 « U 03

N O

03 *-

- U -H

< n ω 03 n U 03

<N U

K N

U 03

N U

X o

O I

0

N

03 0

es II

03 = OS u.

N

m u o 03 = s

•H

M

X

M

O) 6Γ* 00

•H

W

w, 46 83959

Esimerkki 9 7/3-^2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoase- tyyliamino_7-3-metoksikarbonyyli-l-karba-3-kefeemi- 4-karboksyylihappo 5 Liuokseen, joka sisälsi t-butyyli-7/3-t-butyyliok- sikarbonyyliamino-3-metoksikarbonyyli-l-karba-3-kefeemi- 4-karboksylaattia (400 mg, 1,009 mmol) asetonitriilissä, lisättiin p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (391,5 mg, 2,058 mmol) ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 10 2 ¼ tuntia. Reaktioseos kaadettiin 100 ml:aan klorofor mia, joka sisälsi 40 ml kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros pestiin kahdesti 75 ml:n erillä kloroformia. Kloroformi-pesuliuokset ja orgaaninen kerros yhdistettiin, kuivat-15 tiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 7/3-aminosubstituoitua t-bu-tyyliesteriyhdistettä.

7/3-aminoesteri liuotettiin noin 5 ml:aan THF ja liuokseen lisättiin pyridiiniä (159,6 mg, 0,163 ml, 20 2,018 mmo1).

Eri pullossa lisättiin natrium-2-/’2-t-butyylioksi)-karbonyy1iaminotiätsol-4-yyli7-2-metoksi-iminoasetaattiin, joka oli liuotettu 10 ml:aan kuivaa THF, oksalyyliklori-dia (128,1 mg, 1,009 mmol) ja yksi pisara DMF ja seosta 25 sekoitettiin noin kaksi tuntia. Seosta haihdutettiin THF:n poistamiseksi ja happokloridituote kuivattiin alipaineessa.

Liuos, joka sisälsi edellä esitetyllä tavalla valmistettua tiatsolyylioksiminoasetyylikloridia THF:ssa, 30 lisättiin pipetin avulla liuokseen, joka sisälsi 7/3-ami-noesteriä pyridiinissä ja asylointiseosta sekoitettiin 0°C:ssa noin 30 minuuttia. Reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 100 ml etyyliasetaattia ja 50 ml kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta. Orgaaninen 35 kerros erotettiin ja pestiin kahdesti 50 ml:n erillä IN suolahappoa. Orgaaninen kerros kuivattiin il «7 83959 magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 350 mg epäpuhdasta asylointi-tuotetta , t-butyyli-7/3-^2- (t-butyylioksi) karbonyyliamino-tiatsol-4-yyli/-2-metoksi-iminoasetyyliamino-3-metoksi-5 karbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksylaattia. Tuote jatkopuhdistettiin preparatiivisen paksukerroskromatogra-fian avulla silikageelillä päällystetyillä levyillä eluoi-den peräkkäin dietyylieetteri-metyleenikloridiseoksella (35:65), etyyliasetaatti-heksaaniseoksella (75:25) ja 10 dietyylieetteri-metyleenikloridiseoksella (35:65). Saatiin eristetyksi 65 mg puhdistettua tuotetta.

NMR (90 MHz; CDC13, 6): 1,45 (s, 9H, t-butyyli-H); 1,48 (s, 9H, t-butyyli-H); 3,7 (s, 3H, CC>2CH3) ; 4,0 (m, 1H, C6-H); 4,0 (s, 3H, =N-OCH3); 5,6 (dd, J = 5 ja 7, 15 1H, C7-H); 7,0 (s, 1H, tiatsoli-H); 7,8 (leveä d, J = 7, 1H, amidi-H) ja 9,2 (leveä s, 1H, amidi-H).

IR (CHCl3) : 1773 cm ^ (/3-laktaamikarbonyyli)

Edellä esitetyllä menettelytavalla valmistettuun asylointituotteeseen (96 mg, 0,1698 mmol) lisättiin 4 ml 20 98-%:ista muurahaishappoa ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa noin 8-9 tuntia. Reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla noin 1/4 ml:n tilavuuteen. Konsentraat-tiin lisättiin dietyylieetteriä ja seos ultraäänikäsi-teltiin. Eetterisuspensio siirrettiin pipetin avulla 25 sentrifugiputkeen ja sentrifugoitiin. Kiinteä aine erotettiin ja laitettiin sivuun. Eetterisupernatantti väkevöitiin ja saostunut kiinteä aine liuotettiin metano-liin. Lisättiin eetteriä ja eetteriliuos sentrifugoitiin. Kiinteä aine erotettiin kuten edellä ja toimenpi-30 de toistettiin. Kaikki erät kiinteää tuotetta yhdistettiin, jolloin saatiin 40 mg otsikon mukaista yhdistettä, jonka puhtausaste oli HPLC:n perusteella 90,4 %.

NMR (270 MHz; CD-jOD, j) : 3,7 (s, 3H, CC>2CH3) ; 3,8 (m, 1H, C6-H); 5,5 (d, J = 5, 1H, C7-H); 4,0 (s, 3H, 35 =N-CH,) ja 6,8 (s, 1H, tiatsoli-H).

J _i IR (KBr) : 1772 cm (/J-laktaamikarbonyyli) 48 83959

Massaspektri: 424 (M+ + 1), 391 (M+ - CH^OH)

Esimerkki 10 7/3- (2-tienyyliasetyyliamino) -3-metoksikarbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksyylihappo 5 Seosta, joka sisäisti t-butyyli-7/3-t-butyylioksi- karbonyyliamino-3-metoksikarbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksylaattia (180 mg, 0,4541 mmol) ja noin 2 ml tri-fluorietikkahappoa, sekoitettiin noin 0°C:n lämpötilassa kaksi tuntia. Liuokseen lisättiin dietyylieetteriä ja valio koista kiinteää ainetta saostui. Seos siirrettiin sentrifu-giputkeen ja laitettiin sentrifugiin. Supernatantti de-kantoitiin, jäännökseen lisättiin tuoretta eetteriä ja seos ultraäänikäsiteltiin ja sentrifugoitiin uudelleen. Eetteri dekantoitiin ja kiinteä 7/3-amino-3-metoksikarbo-15 nyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksyylihappo liuotettiin seokseen, joka sisälsi 1 ml asetonitriiliä ja 2,5 ml THF ja silyloitiin BSTFA:11a (337 mg, 53 ^ul, 1,31 mmol). Kiinteä ydin liukeni ja liuos jäähdytettiin noin 0°C:n lämpötilaan. Kylmään liuokseen lisättiin pyridiiniä 20 (52 mg, 41 yul, 0,6548 mmol) ja sen jälkeen 2-tiofen- asetyylikloridia (53 mg). Seosta sekoitettiin kylmässä ja se kaadettiin seokseen, joka sisälsi 40 ml dietyylieetteriä ja 20 ml vettä. Seos uutettiin ensin kahdesti 40 ml:n erillä dietyylieetteriä ja sen jälkeen tuote 25 uutettiin seoksesta kloroformilla, joka sisälsi 15 % isopropanolia. Kloroformiuute kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta valkoisena kiinteänä aineena. Tuotetta trituroitiin kolmesti dietyylieetteri-heksaani-30 seoksen kanssa ja se kuivattiin, jolloin saatiin 45 mg otsikon mukaista yhdistettä.

NMR (300 MHz; CDC13, 6): 1/4, 2,0, 2,3 ja 2,8 (m, 4H, Cl-H ja C2-H) ; 3,7 (s, 3H, CC>2CH3) ; 3,8 (s, 2H, tienyyli-CH2:n H); 3,9 (m, 1H, C6-H); 5,4 (m, 1H, C7-H); 35 6,7 (leveä d, 1H, amidi-H) ja 6,9 - 7,3 (m, 3H, tienyy- li-H).

I; 49 83959 IR (KBr) : 17 74 cm * (/3-laktaamikarbonyyli)

Massaspektri: 364 (M+), 332 (M+ - CH^OH)

Yhdisteen cigHigN2°6®i alkuaineanalyysi Teoreettinen Todettu 5 C 52,74 52,53 H 4,43 4,50 N 7,69 7,49 S 8,80 8,62

Esimerkki 11 10 Allyyli-7/3-t-butyylioksikarbonyyliamino-3-metok- sikarbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksylaatti Esimerkin 1 kohdassa I esitettyjä menettelytapoja noudattaen annettiin esimerkin 1 kohdassa H esitetyllä tavalla saadun 3/3-t-butyylioksikarbonyyliamino-4-(2-jo-15 dietyyli)atsetidinonin (2,2 g, 6,474 mmol) reagoida 2-fenyylisulfinyylimaleiinihapon 1-metyyli(4-allyyli)-diesterin (valmistus 2) kanssa, jolloin saatiin 436 mg (saanto 18,24 %) otsikon mukaista yhdistettä kiteisenä heksaanista.

20 NMR (90 MHz; CDC13, S): 1,45 (s, 9H, t-butyyli); 3,7 (s, 3H, C02CH3); 3,8 (m, 1H, C6-H); 4,9 - 5,2 (m, 2H, C7-H ja amidi-H); 4,7 (leveä d, J = 5,5, 2H, CH2~ CH=CH2); 5,2 - 5,5 (m, 2H, -CH2-CH=CH2) ja 5,7 - 6,2 (m, 1H, -CH2-CH=CH2).

25 Esimerkki 12 t-butyyli-7/3~/2-fenyyli-2- (t-butyylioksi) karbo-nyy1ia se tyy1iamino]- 3-me toks ikarbonyy1i-1-karba- 3-kefeemi-4-karboksylaatti

Liuokseen, joka sisälsi esimerkin 1 kohdassa I 30 esitetyllä tavalla valmistettua t-butyyli-3 -t-butyyli-oksikarbonyyliamino-3-metoksikarbonyyli-l-karba-3-kefee-mi-4-karboksylaattia (150 mg, 0,3784 mmol) 2 ml:ssa di-etyylieetteriä, lisättiin liuos, joka sisälsi p-toluee-nisulfonihappomonohydraattia 0,5 ml:ssa etyylialkoholia 35 ja seosta sekoitettiin yksi tunti. Seos väkevöitiin pyö-röhaihduttimessa haihduttamalla, siihen lisättiin 2 ml so 83959 etyylialkoholia ja seos haihdutettiin uudelleen 40°C:ssa. Laimennus etyylialkoholilla ja haihdutus toistettiin kahdesti ja tuote liuotettiin sitten 40 ml:aan kloroformia. Kloroformiliuos lisättiin sen jälkeen 25 ml:aan kylläis-5 tä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta ja seos uutettiin 40 ml:11a kloroformia. Orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 80 mg (saanto 71,43 %) tuotetta (t-butyyli-7/3-amino-3-metoksikarbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksy-10 laattia), josta suojaus oli poistettu, öljynä.

Seokseen, joka sisälsi 7-aminoydintä (80 mg, 0,27 mmol), 2-fenyyli-2-(t-butyylioksi)karbonyyliamino-etikkahappoa (72 mg, 0,2835 mmol) ja pyridiiniä (0,036 ml, 0,447 mmol) ja joka oli jäähdytetty 0°C:seen, lisät-15 tiin fosforioksikloridia (0,028 ml, 0,298 mmol) ja seosta sekoitettiin noin 40 minuuttia. Sen jälkeen seos kaadettiin 60 ml:aan etyyliasetaattia ja liuos pestiin kahdesti 30 ml:n erillä 1 N suolahappoa, kahdesti 30 ml:n erillä kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta ja 20 kerran 30 ml:lla kylläistä NaCl-liuosta. Liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena.

NMR (90 MHz; CDC13, 6): 1,4 (s, 9H, t-butyyli); 25 1,5 (s, 9H, t-butyyli); 3,7 (s, 3H, CC>2CH3) ; 3,8 (m, 1H, C6-H); 6,6 (d, J = 6, 1H, amidi-H) ja 7,4 (s, 5H, fe-nyyli).

IR (CHC13): 1783 cm ^ ^3-laktaamikarbonyyli)

Massaspektri: 529 (M+) 30 Esimerkit 13-27 Käytettiin edellä esimerkeissä 1 ja 2 esitettyjä menettelytapoja kaavoja (AA) ja (BB) vastaavien yhdisteiden väliseen reaktioon, suojauksen poistoon li 5i 83959 R°-ryhmästä ja uudelleenasylointiin, jolloin saatiin yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa: 5 0 lii IX- c/^\/ COOFte 52 83959 _ ' LO - CO E - v LO - - - /~v v— - - - r-i vt li - k — tn CM CO — X -.lO »“J )— Il -CM ae --1

00 — Κ'ί'ί N Ό > Il ·-> 4J U

·*·«*· *-h ·* »> · ►—5 s*/ * cg #l r*- m ro ~\o ^cn x ό /—\ » ^ ro I ^

- " _- ΙΟ »O COX X «Ό h II u II

—· - Γ" en — — -U — — Jj Tl vh o ^

— '—' Ό '—N * 1—I —V Ί ' 1 ' n3" I

-as- o — as - r~- - -

O PJ—' 00 - Mac ^ NS lN σν Γ" - X - X

»u x - e selo vcj i—· -y n - — χχ

-- M Ό U -1 O O (N as MW

tr! "-Ό — — CO lO

“ .J5. - ·· I- •.il £/-1- · · <— U - - LO

— LO —vO CO — ^ — χ X /—, χ -ί LO O

m *C II «O - - — LO U — (O m - H - n KO -j as asooM χ-όγ^· £ - - - cm cm - - ~asiio - - — ^ y, COU» M - * MUnUO «E PJ - - Λ

Zj —· Ό <—I /—1 - Γ- rH O- I—I — - X X — X

Γ] O - — U X W U - - l vO U £ U — X CO

.tj Q X Q co— - Q χ —> Q M w N - (J

Π U'S·— UU — Uvycj-- U·» X liri ' - — CO X — X X /-V —' CM 00 U - - -

% ^ 'M3 __- - — - U CM X O<f NX

m °s ε X x to « e o u x -co i iilo X Σ'—-—- S — - S'— 1 - M S'— - *-3 t'r X— m z — vo g ίο XI g CO - - —

03 r^xx -XII VO - Il U X —. X X - M

N - « β N E U X N OS X O N U X CM U X — SC CM U U X —PJ X CM CO I Xl— pj — Σ S XI - g - g -X| u->

-- Ον U Ό X - X - - - f— O — CM

O X X O —O O OCWXX O X 00 IIO-- es »-* u"> σ> m i 'χ—/ crv «s ' <n σ> ro ·— ^ i n

N

Ä

U

II

<n ä r r r

Q£ CJ

CM

X · u *y % « =? n T g

CJ · · CM

il \// «? ä - X «X u < u i u pj

PJ PJ O X

X Xl u U U pj O I x I o u I o

, I O N N

l^9-2*w iiTIiii I o n n ^-i-io-5-5-5 C^z-ooo-o x_x_Vc>x_xx « V : I V //* \

1 ! ./‘“•n. I I

^V#/ ^ // Ή * O)

• H CO Mf LO VO

(fl »"H *“H r-t I-H

W

I: 53 83959

/—\ *- * s *V

* “ * — Ό X SC

IS £ ^ -1/1- « -Η Ό U Λ m -U Ό lO -Ji «1 r— /—I '—/ - - - ¢4 -1-1 ac w - n k -x ii a-, nj - -—* xssi

Cl - r- 1-) CO VO '-i >1 >vnnicx ON -ί U Γ- W

X II -P « · i- Oil'-' --i ->-> - - -\0 - 3 «33 ι/l /-- --Ii-)

M'S 4-> W ^-- - 4-) ASU - X CO E CO

'—' - ww® OI '—< I O ¢4 - «1 ·—1 - E-T3 O ^osh'-' /—> X r- ίΜ^^Λ tMON- CO I O X - in Oi S 3 - X ^ -- X 1--- » * O U ιΛ il -- CM ^ - CM Γ- O H u S -1 X - I N Ο Λ — CO —' · -nlo Ο--1 σι s SI -'ί •OI-'

·· co ΧΙσ> ·· - I ·· <r - o r- ·· - E --1 X

' O — /—' /—\ - /—v ~ 33 O -i 4—v —' '—1 uo —

4J «O-OvO «O X - Γ- »O CO - CM I - - *OX

O i-' I · -i X II —' e /-— O' i—I ι/l - CO

T3 - X -/—' - -J ö - v · - — 33 - — /v r—

O) Hh -cr ίο «- rt in r— X r- - «-MT®i II

•H 4-1 XXX ι—I E - - I—I w O II CM O /—v I—I E NO1-) -P O - CM O CO CJ '—' W X 0-1-1-) X u·^ »S - •HQE NO Qvi — — n Q —> Ο Γ- - u ΟΊ -xi ο o' ^ o - - <r x οσιχι x -P —^ Ό o - ' — i—i '— v - a1 il n - — <0 - —^ .* n n o s cm r- — «--ν'—'-ox cmo-i-v <d K m o I m X -x x xix - Il pc x x r-

Qj 2 - S /-4 g O H CM -XI X-HCMI-- 1/3 Z CM -- - Z « - Z N -E ΖΉ30Γ- E x m x X --r i3 - >i-r-i - N -3 N -/ N O — X NOE WH3T3 N>i CO - - K /-~S s—-- X I CO 1—t pc I V—✓ ·» -ns-/ pp 4J CO'—' 3C /—'n s « -m x xl X /-v m x 3χ — «

X m vC cm - o - - σ\ X r- m oo Λ ο — X

OO-II- O X O <0 X ox-co-ll- O I O - - CO

σ I 4 o h α tn I -/ n o' co cm o -t i-) r- o' -P i m in o

N

X

o

II

n r = x = x o

CM

X

0 //\ X « If - <0 V S \\} < X N <N m

OX X I

I O O N

ο O X

I I o o ίο m x , 5 I 8 PS = \^/° r> l>

2=· ON N T

T Y x x x z—o 2-0-0-0=0 X g •H + λ; p ω § Γ- 00 O' ο w ^ ~ ~ ^ Η 54 83959 */—s 00 - SS s.

- E mto-r·' '“'e-' .r-s w cj ». /-v - ®. S ~ -S 00 ~ -S -S - Q _ -* S ι-^-ΌΚ'—,—ν S lO SI CO * ii to II S '—o CS ιΛ -H νυ - -> s ε sr 4 5 - s 'T i oo u w oo <t c/i <o - n - i e ~«^iiwu e - *·-> *joo^>kw *> e <f ^ i •—o ei s '—^ - -so a\ S es - S es to cmco - - . - 'Otos ιη n u si * n » ό s «u '—' — - c_) r~~ — -. o'—/ m

^ E 1-1 -O —I CO X -CS

- W ^ r-~ S S i ejio^.

4J "S — ·' Il rt « ^ .. - CM ON S rt

0 CZ 1-1 ** rtrt, 1-3 -X /-»/-s SI rt.rtrt M

xl «o - «O - - χ u tOSCJO-w 01 rt LT) - ·* g £ eS CM rtH O rt H “E £N -*JV_/WX| rt | rt CO C") +j M'—' - ®t COW - U CO - r-N w rt.

h rtH **—v cm i-h en oo o rt-4P-xr~.

U y OO S SI U ITI « o. Il I U^xuiO

JJ Q-UCJ QiONClrt) Q CS 04 r-' rt X U(n dl u rt, - UN SI -/->> 0) W?Ö · W-H---X w ^ -U O S^ (¾ „ -Γ^'-ΓΟ — CO es n o t-ι x

w OS S O S S SrtXxw Slli-rtH

grtrtieSfrt £ »J - ^ ,—. — Z scoesin z /—. rt m w rt rtrtrt- S rt rt - Il . eo-xQxx g N E S to to N U E E rtT rt-3 ,—» N SI CTCS CJ· w || wcMww s i w w m sejwoarto _ Λ1 „ S rt -x = cm «xiin <T rt es vo -to io ^ e o SesmcjOTNrt

Ort-E-rt os^^sscj ου - il o 'Ό O' es - m Ό o' to n n cm w i σ' ι ό- ό i o '_· cm r r 05 ^___ ' j S ^ / - _ u * < = cm r 1 S j u ' ? 3:

VJ

L i1 d* V Vj

L

^ rt rt yj Ϊ U f o P WX >- r^-" I > /A *“* f=\

% ii-P

Mc» v Mos

•H

λ: Λί

Im dl e H rH {S| CO) en es es es

H

55 83959 ·» /--n 04 CO lO 2 ·" '—' * «x « » σ> o m x N E U n ie S - -* mw <->

II w MW ^LO K n SI

•n XI vo ·-< n - u m « mun --- o o in - *- O « ·> - «·Η I «-Λ *J M I 1/1/^ M E'Hr^w - ' 35 · - V—' >i *.

» “ - rl >lSC-m

Γ0 -—v X r-< c\| Ov +-1 <N

*KNK * * · ~ g x oo

i—I i—I CJ r~. v ο -Q - CJ

- M II in I ε M « ·· ►r-wi'-j -X --4-1 wsi^v -Pr-'Eiicj'—'tO us O «3 w ι-j o - X U «O X Ο Ο <-ι

ό I -α —I O' - I

a) »>3· - w - -j- r·" h co · o' - ► X «--il -Μ H MWJ m o ι/i r-ltfl-Xn

•H O CN f) ,Ο U w^>N

μ. Q - in -w - Q CO - -P O ^ - VO M ϋ1ΛΪ “Ό X w CO -\£> 0\ w w -g Λ '—-

Φ Xhi II ·> *· rt O II

a xujrt>--"Ofo »>>->- W E M - Ό. w X « in 2 X " M ·· f'- 2 /“N · ·· C» U X EXh «rt E » N O ccx ux » Q£ N XIX X r-

Xiuwirt^ S xujmw S m 2 Em « > r» * * χ X'-r'. s—> 0 X X -X M (0 O O M -x

01 Π rt ^ N W(J H O' I W »3· <—I

W

m t ~ r

X

CO

X

c_>

CO M

X X

O UJ

< r m n

X X

u u

O M

I X

a 0 N ·=· « ·==· δ—7 x. 5—7 Vc 7 % J' / ty/ i ^ ^ * C> E> +-

-H

X

X

u ω

§ ' <Γ ιΛ VO

m M

ω 56 83959 m

CO * ✓—N

O ·* *cn χ - o m x PS <os s in m «n -"7 o cm i «-i-h Jj o «o E £ S E * S - to w f? r-4 W 3J g ^ v_/

cm i S

fi 3 *n p·cm —9 E ^ - CJ · H , w<fvo JS r-« .

-P Il - /—>

.. ~os ··>!-} S -S

-p /'“N ΪΠ -.,'·'* t—4 f—4

o >θ o\ n w - il S

Π3 S E >-} * 4-1 oo

d) - ~/~s CJ TS 00 II

-H n «I N . « >-) 4-1 HAKISI !_)«] p o U U j .

p Q n «O 'nwtj +J o ~S i Ό- σ\ X) λι ^ <~> u ~<r o> w <U O - •"i II ·» 0-1 K " I K >-)VOl-4 W S ^ CM Z - ^ Ä CO - CM <- -00 sis ε s s -o ^ N O CM ’UOT3S - S CM CM CMW .-( SS - m SISI in u ε h a u in -s o o X3 —o o - «n «o

a\ i w vj i i m '—'O

cm r

S

CO

S

u

< CM

S CJ

0

1 o O CD I

T

x-f

K

X

o

N

X

o * 'H' r> z=· x Ή .* λ; p ai •H es

W

W

li 57 83959

Esimerkki 28 7/3 — (2-fenyyli-2-aminoasetyyliamino) -3-metoksikar-bonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksyylihappo

Suojauksen poistoon edellä esimerkissä 12 esite-5 tyllä tavalla valmistetusta t-butyyliesteristä, jonka aminoryhmä oli suojattu t-BOC:lla, käytettiin seuraavia kolmea menetelmää, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

Menetelmä A - Trimetyylisilyylijodidi 10 Kuivaan liuokseen, joka sisälsi esteriä (82 mg, 0,155 mmol), jonka aminoryhmä oli suojattu, vastatisla-tussa kloroformissa ja jota pidettiin typen alla, lisättiin ruiskulla trimetyylisilyylijodidia (66,6 mg, 0,333 mmol) ja seosta sekoitettiin kaksi tuntia. Osasta reak-15 tioseosta ajetussa ohutkerroskromatogrammissa näkyi yksi päätäplä. Reaktioseos siirrettiin toiseen pulloon, joka sisälsi metyylialkoholia (45 ^ul, 1,0 mmol) ja pyri-diiniä (54 ^ul, 0,666 mmol) metyleenikloridissa ja jota pidettiin 0°C:ssa. Dietyylieetteriä lisättäessä tuote 20 saostui, jolloin muodostui suspensio. Suspensio sijoitettiin sentrifugiputkeen ja sentrifugoitiin. Superna-tantti dekantoitiin ja kiinteä aine liuotettiin mahdollisimman pieneen määrään metyylialkoholia. Lisättiin taas dietyylieetteriä tuotteen saostumiseksi ja suspen-25 sion muodostamiseksi. Edellä esitetty sentrifugointi-ja dekantointimenettely toistettiin kahdesti, jolloin saatiin tuotetta vaaleankeltaisena kiinteänä aineena. Tuote liuotettiin metyylialkoholiin, liuokseen lisättiin 20 ml asetonitriiliä ja tuote haihdutettiin alipai-30 neessa. Liuotus- ja haihdutusmenettely metyylialkoholia ja asetonitriiliä käyttäen toistettiin neljästi, jolloin saatiin 32 mg otsikon mukaista yhdistettä vaaleankeltaisena kiinteänä aineena (saanto 56 %).

Menetelmä B - Muurahaishappo 35 Esimerkissä 12 esitetyllä tavalla saatuun t-bu- tyyliesterin (5,5 mg, 0,0104 mmol), jonka aminoryhmä 58 83959 oli suojattu t-BOC:lla, sekoitettiin 1 ml 98-%:ista muurahaishappoa ja seosta sekoitettiin noin viisi tuntia. Reaktioseoksesta ajetussa ohutkerroskromatogrammissa näkyi yksi päätäplä ja lähtöainetta vastaava täplä puuttui.

5 Seos haihdutettiin alipaineessa 30°C:ssa noin 1/4 ml:n tilavuuteen. Dietyylieetteriä lisättäessä muodostui muodostui kiinteää tuotetta ja seos ultraäänikäsiteltiin. Seos siirrettiin sentrifugiin dietyylieetterin avulla ja sentrifugoitiin. Supernatantti dekantoitiin ja kiinteä 10 aine liuotettiin mahdollisimman pieneen määrään etyylialkoholia. Lisättiin taas dietyylieetteriä kiinteän aineen saostamiseksi, joka kiinteä aine erotettiin sentri-fugoimalla. Toimenpide toistettiin kolmesta ja kiinteä aine siirrettiin metyylialkoholin avulla 25 ml:n pulloon 15 ja seos väkevöitiin haihduttamalla. Lisättiin asetonit-riiliä ja seos haihdutettiin alipaineessa. Menettely toistettiin neljästi käyttäen kullakin kerralla 12 ml asetonitriiliä. Saatiin 2,4 mg otsikon mukaista yhdistettä .

20 Menetelmä C - Toistettiin menetelmän B mukainen menettely muurahaishappoa käyttäen sillä poikkeuksella, että muurahaishapon ja suojatun aminoryhmän sisältävän esterin annettiin reagoida 7,5 tuntia. 105 mg:sta t-bu-tyyliesteriä (0,1983 mmol), joka sisälsi suojatun amino-25 ryhmän, saatiin 40 mg otsikon mukaista yhdistettä, joka isokraattisen HPLCrn perusteella oli 65-%risesti puhdasta.

Esimerkki 29

Allyyli-7/J- (2-fenyyli-2-allyylioksikarbonyyliami-30 noasetyyliamino)-3-metoksikarbonyyli-l-karba-3- kefeemi-4-karboksylaatti

Allyyli-3/3-t-butyylioksikarbonyyliamino-3-metoksi-karbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksylaatti (433 mg, 1,1383 mmol), joka oli valmistettu esimerkin kohdassa I 35 esitetyllä tavalla, liuotettiin noin 8 ml:aan isopro-pyylialkoholia ja liuokseen lisättiin p-tolueenisulfo- li 59 83959 nihappomonohydraattia (223 mg, 1,1724 mmol). Seosta pyöritettiin, kunnes tapahtui liukeneminen ja sen jälkeen se väkevöitiin haihduttamalla pyöröhaihduttimessa 45°C:ssa. Jäännös liuotettiin uudelleen isopropyylialko-5 holiin ja liuos haihdutettiin uudelleen 45°C:ssa. Uudel-leenliuotus- ja haihdutusmenettely toistettiin viidesti, jolloin saatiin Ίβ -aminosubstituoitu allyyliesteriydin kiinteänä aineena. Tuote liuotettiin 10 mlraan kloroformia, ja liuos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 40 ml 10 kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta ja 80 ml kloroformia. Kerrokset erotettiin ja vesikerros uutettiin kahdesti 50 ml:n erillä kloroformia. Uutteet ja orgaaninen kerros yhdistettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, 15 jolloin saatiin 300 mg ydinesteriä kellertävänä öljynä. Ydinesteristä ajetussa ohutkerroskromatogrammissa näkyi yksi täplä.

Ydinesteri liuotettiin noin 2-3 ml:aan kloroformia, liuokseen lisättiin 2-fenyyli-2-allyylioksikarbo-20 nyyliaminoetikkahappoa (281 mg, 1,1952 mmol) ja pyri-diiniä (0,153 ml, 1,8845 mmol) ja seos jäähdytettiin 0°C:seen. Sen jälkeen lisättiin fosforioksikloridia (0,117 ml, 1,26 mmol) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30-40 minuuttia. Reaktioseos kaadettiin 25 100 ml:aan etyyliasetaattia ja liuos pestiin kahdesti 45 ml:n erillä 1 N suolahappoa, kahdesti 45 ml:n erillä kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta ja 50 ml:11a kylläistä NaCl-liuosta. Sen jälkeen liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haih-30 dutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta likaisen valkoisena kiinteänä aineena. Kiinteästä aineesta ajetussa ohutkerroskromatogrammissa näkyi yksi pää-täplä ja heikompi täplä, jolla on pienempi R^-arvo. Kiinteä aine käsiteltiin kromatografisesti käyttäen adsor-35 benttina 20 g silikageeliä ja eluenttina etyyliasetaat-ti-heksaaniseosta (45:55). Kerättiin suuri määrä 60 83959 jakeita ja TLC:n perusteella haluttua tuotetta sisältävät jakeet haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 266 mg otsikon mukaista yhdistettä (saanto 47 %) valkoisena kiinteänä aineena.

5 NMR (90 MHz; CDC13, S): 3,6 (s, 3H, CC>2CH3) ; 3,8 (m, 1H, C6-H); 4,5 ja 4,7 (d, J = 6, 4H, kumpikin -CH2~ CH=CH2); 5,6 - 6,1 (m, 2H, kumpikin -CH2-CH=CH2); 6,1 (d, J = 6, 1H, amidi-H) ja 7,2 (m, 6H, amidi-H + fenyy-li-H).

10 Esimerkki 30 7/3- (2-fenyyli-2-aminoasetyyliamino) -3-metoksikar-bonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksyylihappo Liuokseen, joka sisälsi edellä esimerkissä 29 esitetyllä tavalla valmistettua allyylisuojattua yhdistettä 15 (266 mg, 0,5346 mmol) noin 3 ml:ssa asetonitriiliä, joka sisälsi 1 ml dietyylieetteriä, lisättiin trifenyylifos-fiinia (28 mg, 0,1069 mmol) ja palladiumdiasetaattia (5,25 mg, 0,0214 mmol) ja seosta sekoitettiin 0°C:ssa 10-15 minuuttia. Sen jälkeen kylmään seokseen lisättiin 20 tri(n-butyyli)tinahydridiä (318,9 mg, 1,099 mmol) ja seosta sekoitettiin 20-30 minuuttia sen lämmetessä samalla huoneen lämpötilaan. Seokseen lisättiin pienellä ruiskulla väkevää suolahappoa (1,6 ^ul), joka sai aikaan tuotteen saostumisen valkoisena kiinteänä aineena. Seos 25 laimennettiin 2 ml:11a asetonitriiliä ja 2 ml:11a dietyylieetteriä ja siirrettiin sentrifugiputkeen. Suspensio sentrifugoitiin ja supernatantti dekantoitiin. Valkoinen kiinteä aine pestiin sentrifugoimalla ja de-kantoimalla käyttäen kolmesti 25 ml:n erää asetonitrii-30 li-dietyylieetteriseosta (1:1) ja kolmesti 25:n erää dietyylieetteriä. Kiinteä tuote kuivattiin vakuumiuunissa huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin 165 mg otsikon mukaista yhdistettä likaisen valkoisena kiinteänä aineena (saanto 82,65 %).

35 Edellä saatu tuote puhdistettiin seuraavasti: 15 ml:n sentrifugiputkeen laitettiin 123,5 mg ei 83959 (0,3307 mmol) tuotetta ja siihen lisättiin 3 ml aseto-nitriiliä. Seokseen lisättiin pipetin avulla 1 N suolahappoa ja seosta pyöritettiin, kunnes suurin osa kiinteästä aineesta oli liuennut. Sen jälkeen seos sentrifu-5 goitiin ja kirkas supernatantti erotettiin ei-toivotusta kiinteästä sakasta ja siirrettiin asetonitriilillä huuhtoen toiseen sentrifugiputkeen. Kirkkaaseen liuokseen lisättiin 1,5 N ammoniumhydroksidia, kunnes sen pH saavutti suunnilleen arvoon 4 - 4,5. Liuoksesta erottui 10 kirkas öljy ja emäliuos pipetoitiin pois toiseen sentrifugiputkeen. öljyyn lisättiin 7 ml asetonitriiliä ja öljy jähmettyi. Kiinteä aine pestiin kahdesti 8 ml:n erillä asetonitriiliä ja sentrifugoitiin ja pesuliuokset lisättiin emäliuokseen. Emäliuoksesta saostui toinen erä 15 tuotetta. Ensimmäinen tuote-erä pestiin 8 ml:11a dietyy-lieetteriä ja sentrifugoitiin ja eetteri dekantoitiin. Sen jälkeen kiinteä tuote kuivattiin vakuumiuunissa huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin 92,3 mg ensimmäisen erän ainetta valkoisena kiinteänä aineena. Ensimmäinen 20 erä oli HPLC:n perusteella 87-%:isesti puhdasta. Toinen aine-erä pestiin samalla tavalla, sentrifugoitiin ja kuivattiin vakuumiuunissa huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin 13 mg tuotetta valkoisena kiinteänä aineena. HPLC:n perusteella tuote oli 97-%risesti puhdasta.

25 Myös kolmas, 5 mg:n erä tuotetta saatiin. Erät 1 ja 3 yhdistettiin ja pestiin edellä kuvatulla tavalla, jolloin saatiin kolme seuraavanlaista erää:

Ensimmäinen erä: 84,5 mg (puhtausaste 93 %)

Toinen erä: 13 mg (puhtausaste 98 %) 30 Kolmas erä: 6,0 mg (puhtausaste 95 %)

Edellä saatujen kolmen erän puhtausaste määritettiin isokraattisen HPLC:n avulla.

Puhdistetun tuotteen spektrit olivat seuraavanlaisia : 35 NMR (300 MHz; D20, 6): 1,05, 1,7, 2,2 ja 2,6 (m, 4H, Cl-H ja C2-H) ; 3,7 (s, 3H, CC>2CH3) ; 3,95 (m, 1H, 62 83959 C6-H); 5,2 (s, 1H, fenyyli-CH-NH3+); 5,4 (d, J = 6, 1H, C7-H) ja 7,6 (m, 5H, fenyyli-H).

Massaspektri (FAB): 374 (M + 1), 342 (M+ - OCH,) IR (KBr) : 1771 cm (/J-laktaamikarbonyyli) 5 Esimerkki 31 t-butyyli-7/J-t-butyylioksikarbonyyliamino-3-ase-tyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksylaatti Kuivaan liuokseen, joka sisälsi 3/i-t-butyylioksi-karbonyyliamino-4-(2-jodietyyli)atsetidinonia (1,082 mg, 10 3,18 mmol) 9 ml:ssa THF ja joka oli jäähdytetty -78°C:seen, lisättiin bis(trimetyylisilyyli)litiumamidia (3,08 ml, 3,08 mmol) ja seosta sekoitettiin 15-20 minuuttia. Edellä saatuun jodiatsetidinoniliuokseen lisättiin muutaman minuutin aikana putken välityksellä liuos, joka sisälsi 15 t-butyyli-3-fenyylisulfinyyli-4-oksopent-2-enoaattia (950 mg, 3,23 mmol; valmistus 11) 6 ml:ssa kuivaa THF ja joka oli jäähdytetty -78°C:seen. Reaktioseosta sekoitettiin noin 15 minuuttia, sen jälkeen siihen lisättiin 2,7 ml DMPU:ta ja seoksen annettiin lämmetä hitaasti 20 noin kahden tunnin aikana huoneen lämpötilaan. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa noin 1,5 tuntia, jonka jälkeen se kaadettiin seokseen, joka sisälsi 40 ml kylläistä ammoniumkloridin vesiliuosta ja 100 ml etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivat-25 tiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tuotetta keltaisena öljynä, öljyyn lisättiin tolueenia (100 ml) ja seosta refluksoitiin viisi minuuttia mahdollisesti jäljellä olevien sulfoksidien eliminoimiseksi. Sen jälkeen seos 30 väkevöitiin pyöröhaihduttimessa, jolloin saatiin tuotetta ruskehtavana öljynä, öljy käsiteltiin kromatogra-fisesti käyttäen adsorbenttina 80 g silikageeliä ja eluenttina etyyliasetaatti-heksaaniseosta (40:60). Haluttua tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin ja haih-35 dutettiin alipaineessa, jolloin saatiin vaahtoa. Vaahto liuotettiin refluksointilämpötilassa 80 ml:aan heksaania, n 63 83959 joka sisälsi 2 ml dietyylieetteriä. Liuoksen annettiin jäähtyä hitaasti yön ajan. Tuote kiteytyi liuoksesta, jolloin saatiin 186 mg (saanto 15,9 %) otsikon mukaista yhdistettä valkoisina kiteinä.

5 NMR (90 MHz; CDC13, <5) : 1,4 (s, 9H, t-butyyli) ; 1,5 (s, 9H, t-butyyli); 2,3 (s, 3H, -COCH3); 3,8 (dm, J = 11, 1H, C6-H) ja 5,1 (m, 2H, C7-H ja amidi-H).

Esimerkki 32

Allyyli-^-t-butyylioksikarbonyyliamino-3-etoksi-10 karbonyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksylaatti

Otsikon mukainen yhdiste valmistettiin antamalla 3/S-t-butyylioksikarbonyyliamino-4- (2-jodietyyli) atseti-dinonin (1,13 g, 3,3235 mmol) reagoida kuivassa THF:ssa 2-fenyylisulfinyylimaleiinihapon 1-etyyli(4-allyyli)-15 diesterin (1,035 g), joka oli valmistettu valmistuksessa 3 esitetyllä tavalla, kanssa esimerkin 1 kohdassa I esitettyjä menettelytapoja noudattaen. Raakatuote eristettiin ruskehtavana öljynä ja puhdistettiin kromatografi-sesti käyttäen adsorbenttina 75 g silikageeliä ja eluent-20 tina heksaania, joka sisälsi 30 % etyyliasetaattia. Kerättiin suuri määrä jakeita ja ohutkerroskromatografiän perusteella otsikon mukaista yhdistettä sisältävät ja-keet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 410 mg tuotetta vaahtona. Tuote saatiin kiteise-25 nä liuottamalla vaahto refluksointilämpötilassa 80 ml:aan heksaania, joka sisälsi 3 ml dietyylieetteriä ja antamalla liuoksen seisoa jääkaapissa yön yli. Tuote kiteytyi ja saatiin 285 mg otsikon mukaista yhdistettä (saanto 22 %) .

30 NMR (90 MHz; CDC13, δ): 1,3 (t, J = 7, 3H, C02CH2CH3); 1,4 (s, 9H, t-butyyli-H); 3,9 (dm, J = 11, 1H, C6-H); 4,2 (q, J = 7, 2H, C02CH2CH3); 4,8 (m, 2H, C02CH2-CH=CH2); ja 5,8 - 6,2 (m, 1H, C02CH2-CH=CH2).

Massaspektri: 394 (M+), 338 (M+ - C.H0) -1 4 ö 35 IR (CHC13) : 1782 cm (y3-laktaamikarbonyyli) 64 83959

Yhdisteen ci9H29N2°7 al^uaineanalyysi:

Teoreettinen Todettu C 57,86 57,61 H 6,64 6,71 5 N 7,10 6,86

Esimerkki 33

Allyyli-7/i- (2-fenyyli-2-allyylioksikarbonyyliami-noasetyyliamino)-3-etoksikarbonyyli-l-karba-3-ke-feemi-4-karboksylaatti 10 t-BOC:llä suojatusta ydinallyyliesteristä (272 mg, 0,6897 mmol), joka oli valmistettu esimerkissä 32 esitetyllä tavalla, poistettiin suojaus etyylialkoholissa 45°C:ssa p-tolueenisulfonihappomonohydraatilla, jolloin saatiin allyyli-^-amino-S-etoksikarbonyyli-l-karba-l-15 kefeemi-4-karboksylaattia (203 mg). Ydinesteri asyloi-tiin seuraavasti: Ydinesteri (203 mg, 0,6897 mmol) liuotettiin 2-3 ml:aan metyleenikloridia ja liuos jäähdytettiin 0°C:seen. Kylmään liuokseen lisättiin N-allyylioksi-karbonyylifenyyliglysiiniä (170,4 mg, 0,7242 mmol), py-20 ridiiniä (0,091 ml, 1,142 mmol) ja fosforioksikloridia (0,071 ml, 0,7587 mmol) ja liuosta sekoitettiin kylmässä noin 30-40 minuuttia. Seoksesta ajetussa ohutkerros-kromatogrammissa näkyi yksi tuotetta vastaava päätäplä ja yksi heikompi täplä. Sen jälkeen tuote kaadettiin 25 seokseen, joka sisälsi 80 ml etyyliasetaattia ja 40 ml 1 N suolahappoa. Kerrokset erotettiin ja orgaaninen kerros pestiin kerran 40 ml:11a 1 N suolahappoa, kahdesti 40 ml:n erillä kylläistä natriumvetykarbonaatin vesi-liuosta ja kerran 40 ml:11a kylläistä NaCl-liuosta.

30 Tuotetta sisältävä orgaaninen kerros kuivattiin sitten magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 300 mg tuotetta öljymäisenä kiinteänä aineena. Tuote käsiteltiin kromatografisesti käyttäen adsorbenttina 25 g silikageeliä ja eluenttina 35 etyyliasetaatti-heksaaniseosta (40:60). Tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin alipaineessa, li 65 83959 jolloin saatiin 211 mg (saanto 60 %) otsikon mukaista yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena.

NMR (90 MHz; CDC13, <$) : 1,2 (t, J = 7 , 3H, C02CH2CH3); 3,8 (dm, J = 11, 1H, C6-H); 4,2 (q, J = 7, 5 2H, C02CH2CH3); 4,6 ja 4,8 (dm, J = 9, 4H, C02CH2-CH=CH2); 6,9 (leveä d, J = 7, 1H, amidi-H) ja 7,3 (s, 5H, fenyy- li-H).

Esimerkki 34 l/b- (2-fenyyli-2-aminoasetyyliamino) -3-etoksikarbo-10 nyyli-l-karba-3-kefeemi-4-karboksyylihappo

Liuokseen, joka sisälsi esimerkissä 33 esitetyllä tavalla valmistettua allyyliesteriä (199,2 mg, 0,3894 mmol), joka sisälsi allyylioksikarbonyylillä suojatun aminoryhmän 5 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, joka 15 sisälsi 2 ml dietyylieetteriä, lisättiin trifenyylifos-fiinia (20,4 mg, 0,07788 mmol) ja palladiumdiasetaattia (3,82 g, 0,015576 mmol) ja seosta sekoitettiin noin 20-25 minuuttia. Sen jälkeen reaktioseos jäähdytettiin noin 0°C:n lämpötilaan ja kylmään reaktioseokseen lisät-20 tiin ruiskulla tri(n-butyyli)tinahydridiä (233 mg, 0,8005 mmol), Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin noin 20 minuuttia. Reaktioseokseen lisättiin hitaasti ruiskulla ja samalla sekoittaen väkevää suolahappoa (12 N, 0,0667 ml). Tuote 25 erottui sameasta keltaisesta liuoksesta hienona valkoisena saostumana. Seosta sekoitettiin voimakkaasti muutama minuutti ja sen jälkeen se siirrettiin 40 ml:n sentrifugiputkeen muutaman ml:n avulla asetonitriili-di-etyylieetteriseosta (1:1). Kiinteä aine erotettiin sen-30 trifugoimalla ja emäliuos dekantoitiin. Kiinteä tuote pestiin, seos sentrifugoitiin ja supernatantti dekantoitiin kolmesta 25 ml:n eriä asetonitriili-dietyylieette-riseosta (1:1) käyttäen ja kolmesta 25 ml:n eriä dietyylieetteriä käyttäen. Pesty kiinteä aine kuivattiin vakuu-35 miuunissa huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin 144 mg pestyä otsikon mukaista yhdistettä.

66 83959

Tuote kiteytettiin uudelleen seuraavasti: 144 mg tuotetta lisättiin 40 ml:n sentrifugiputkeen ja siihen lisättiin 3,3 ml asetonitriiliä. Sentrifugiputkeen lisättiin pipetin avulla yksi ekvivalentti 1 N suolahappoa ja 5 putkea pyöritettiin, kunnes suurin osa kiinteästä aineesta oli liuennut. Liukenematon ruskehtava aine sentrifu-goitiin pohjalle ja supernatanttiliuos siirrettiin toiseen 15 ml:n sentrifugiputkeen. Siihen lisättiin pisaroittaan ja putkea samalla pyörittäen ammoniumhydroksidia, 10 kunnes liuoksen pH saavutti arvon 4 - 4,5. Valkoinen tuote kiteytyi liuoksesta, seos sentrifugoitiin ja emäliuos dekantoitiin. Kiinteä aine pestiin kolmesti 7 ml:n erillä asetonitriiliä ja kerran 7 ml:11a dietyylieetteriä ja seos sentrifugoitiin kunkin pesun jälkeen ja pesuliuos 15 lisättiin emäliuokseen. Pesty aine, ensimmäinen erä, kuivattiin vakuumiuunissa huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin 119,8 mg otsikon mukaista yhdistettä. Lisättäessä pesuliuokset emäliuokseen saostui toinen erä tuotetta. Toinen erä pestiin ja sentrifugoitiin käyttäen samaa me-20 nettelytapaa kuin ensimmäisen erän yhteydessä, jolloin saatiin 16,6 mg otsikon mukaista yhdistettä. Kokonaissaanto oli 136,4 mg. Sekä erän 1 että erän 2 puhtausaste oli HPLC:n perusteella yli 97 %.

NMR (300 MHz; D20, 6): 1,25 (t, J = 7, 3H, 25 C02CH2CH3); 1,0, 1,7, 2,15 ja 2,55 (m, 4H, Cl-H ja C2-H); 3,95 (m, 1H, C6-H); 4,2 (q, J = 7, 2H, CC>2CH2CH3) ; 5,2 (s, 1H, fenyyli-CH-NH3+); 5,4 (d, J = 6, 1H, C7-H) ja 7,55 (m, 5H, fenyyli-H).

Esimerkki 35 30 7β-[2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoaset- amido7-3-asetyyli-l-karba(detia)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo

Liuokseen, joka sisälsi allyyli-7/S-t-butyylioksi-karbonyyliamino-3-asetyyli-l-karba(detia)-3-kefeemi-4-35 karboksylaattia (60 mg, 0,1647 mmol) noin 5 ml:ssa etyylialkoholia, lisättiin p-tolueenisulfonihappomonohyd- 67 83959 raattia (32 mg, 0,1679 mmol) ja seos haihdutettiin pyö-röhaihduttimessa 45°C:ssa. Kun ohutkerroskromatogrammis-sa näkyi vain yksi täplä (10 % metyylialkoholia etyyliasetaatissa) , jäännös käsiteltiin kahdesti 6 ml :11a to-5 lueenia ja seos haihdutettiin kummankin käsittelyn jälkeen. Tuotetta, allyyli-7/3-amino-3-asetyyli-l-karba (de-tia)-3-kefeemikarboksylaatin p-tolueenisulfonihapposuo-laa, trituroitiin 3 ml:n kanssa dietyylieetteriä ja se kuivattiin alipaineessa. Saatiin 71,5 mg tuotetta.

10 Liuos, joka sisälsi 2-(allyylioksikarbonyliamino- tiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoetikkahappoa (78,2 mg, 0,274 mmol) 2 ml:ssa metyleenikloridia, jäähdytettiin 0°C:seen ja siihen lisättiin 2-kloori-2,6-dimetoksi- 1,3,5-triatsiinia (48,1 mg, 0,274 mmol) ja N-metyylimor-15 foliinia (0,274 mmol). Seosta sekoitettiin yksi tunti ja siihen lisättiin toinen ekvivalentti N-metyylimorfo-liinia (0,275 mmol) ja sen jälkeen liuos, joka sisälsi allyyli-7/i-amino-3-asetyyli-l-karba (detia) -3-kefeemi-4-karboksylaatin p-tolueenisulfonihapposuolaa (saatu edel-20 lä esitetyllä tavalla) 1 ml:ssa metyleenikloridia. Seosta sekoitettiin 20 tuntia sen lämmetessä samalla huoneen lämpötilaan. Reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 75 ml etyyliasetaattia ja 40 ml 1 N HC1 ja orgaaninen kerros erotettiin, pestiin peräkkäin 40 ml:11a 1 N 25 HC1, kahdesti 35 ml:n erillä vettä ja kahdesti 35 ml:n erillä kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin öljymäinen kiinteä jäännös. Jäännös (150 mg) käsiteltiin kromatografisesti käyttäen adsorbenttina 10 g silikageeliä ja eluenttina etyyli-30 asetaatti-heksaaniseosta (tilavuussuhde 60:40) ja TLC:n perusteella tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin. Saatiin 70 mg N-asylointituotet-ta, a.llyyli.-1/b-[2- (allyylioksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7-3-asetyyli-l-karba(de-35 tia)-3-kefeemi-4-karboksylaattia.

68 83959 NMR (90 MHz; CDCl^, 8)' 2,3 (s, 3H, asetyyli-CH^); 5,2 - 5,5 (m, 4H, -CU2~CH=CH2); 5,6 - 6,2 (m, 3H, -CH-CH=CH2 ja C7-H); 4,7 (m, 4H, -CH2-CH=CH2); 4,0 (m, 4H, =N-OCH2 ja C8-H); 7,0 (s, 1H, tiatsoli-H); 8,0 (d, J = 8, 5 amidi-H) ja 9,9 (bs, 1H, amidi-H).

Liuokseen, joka sisälsi edellä saatua kaksoissuo-jattua 3-asetyyli-l-karba-3-kefeemiä (51 mg, 0,096 mmol) 1 ml:ssa metyleenikloridia ja 1 ml:ssa dietyylieetteriä, lisättiin trifenyylifosfiinia (9,95 mg, 0,38 mmol) ja 10 palladiumdiasetaattia (1,18 mg, 0,005 mmol) ja seosta sekoitettiin noin 15-20 minuuttia. Seos jäähdytettiin 0°C:seen ja siihen lisättiin ruiskulla tri(n-butyyli)ti-nahydridiä (0,1968 mmol). Seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin noin 45 minuuttia. 15 Seokseen lisättiin ruiskulla väkevää HC1 (16,4 ^ul) ja muodostui hieno sakka. Happamaan seokseen lisättiin dietyylieetteriä (noin 8 ml) ja kiinteä aine siirrettiin 15 ml:n sentrifugiputkeen ja sentrifugoitiin. Superna-tantti dekantoitiin, jäännökseen lisättiin 8 ml tuoret-20 ta dietyylieetteriä ja kiinteä aine sentrifugoitiin uudelleen. Menettely toistettiin vielä kolme kertaa ja kiinteä aine kuivattiin alipaineessa, jolloin saatiin 35 mg otsikon mukaista yhdistettä, jonka puhtausaste oli yli 95 % (HPLC).

25 NMR (300 MHz; D20, 6): 1,6, 2,2, 2,4 ja 2,8 (m, 4H, Cl-H ja C2-H); 2,1 (bs, 3H, asetyyli-CH^); 4,0 (m, 4H, =N-OCH3); 5,6 (d, J = 5, 1H, C7-H) ja 7,05 (s, 1H, tiatsoli-H).

IR (KBr) : 1778 cm ^ (/J-laktaamikarbonyyli) 30 Massaspektri; 407 (M+)

Esimerkki 36

Pivaloyylioksimetyyli-^e-(D-fenyyliglysyyliamino)- 3-etoksikarbonyyli-l-karba(1-detia)-3-kefeemi-4-karboksylaatin hydrokloridisuola 35 Liuokseen, joka sisälsi allyyli-7/3-/b-Oi-(t-butyy- lioksikarbonyyliamino)fenyyliasetyyliaminoJ-3-etoksikar-

II

69 83959 bonyyli-l-karba(1-detia)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (250 mg, 0,474 mmol) 3 mlrssa asetonitriiliä ja 2 ml:ssa dietyylieetteriä, lisättiin trifenyylifosfiinia (25 mg, 0,095 mmol) ja palladiumdiasetaattia (5,8 mg, 0,0237 mmol) 5 ja seosta sekoitettiin noin 20 minuuttia. Seos jäähdytettiin 0°C:seen ja siihen lisättiin tri(n-butyyli)tinahyd-ridiä (0,134 ml, 0,49 mmol). Jäähdytyshaude poistettiin ja seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan sekoittaen sitä samalla. Seokseen lisättiin yksi ekvivalentti 10 0,498 ml) 1 N suolahappoa ja tuote, 7/3-^D-ot-(t-butyyli- oksikarbonyyliamino)fenyyliasetyyliamino/-3-etoksikarbo-nyyli-l-karba(1-detia)-3-kefeemi-4-karboksyylihappo, erottui valkoisena saostumana. Laimennettaessa seos 10 ml :11a dietyylieetteriä saostui lisää tuotetta. Tuote 15 erotettiin sentrifugoimalla, pestiin dietyylieetteri-heksaaniseoksella ja kuivattiin. Saatiin 200 mg (saanto 86,6 %) tuotetta.

Tuote (200 mg, 0,410 mmol) liuotettiin 3 ml:aan DMF ja liuokseen lisättiin pivaloyylioksimetyylijodidia 20 (300 mg, 1,23 mmol) ja N-metyylimorfoliinia (1,30 mg, 0,144 ml, 0,144 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli ja sen jälkeen se kaadettiin seokseen, joka sisälsi 50 ml etyyliasetaattia ja 30 ml IN suolahappoa. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin 25 kahdesti 25 ml:n erillä 1 N HC1 ja kerran 30 ml:lla kylläistä natriumvetykarbonaattia, kuivattiin magnesium-sulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. Saatiin 240 mg epäpuhdasta pivaloyylioksimetyyliesteriä. Raakatuote käsiteltiin kromatografisesti käyttäen ad-30 sorbenttina 20 g silikageeliä ja eluenttina etyyliase-taatti-heksaaniseosta (tilavuussuhde 40:60). Tuotetta sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 155 mg (saanto 63 %) pivaloyylioksimetyyliesteriä .

35 Pivaloyylioksimetyyliesteri lisättiin 4 ml:aan trifluorietikkahapon ja metyleenikloridin seosta (1:1) 70 8 3 9 5 9 ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yksi tunti. Liuos haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin di-etyylieetteriin. Kun tuote saostui, eetteri dekantoitiin ja kiinteä aine lisättiin kloroformi-vesiseokseen. Seok-5 sen pH säädettiin arvoon 7 fosfaattipuskurilla ja kloro-formikerros erotettiin ja kuivattiin natriumsulfaatilla. Kuivattu kloroformikerros haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin dietyylieetteriin. Tähän liuokseen lisättiin vetykloridin eetteriliuosta, kunnes suola oli 10 saostunut täydellisesti. Suola erotettiin ja pestiin sentrifugoimalla sekä kiteytettiin uudelleen metyleeni-kloridista laimentamalla liuos heksaanilla. Uudelleen kiteytetty suola pestiin dietyylieetterillä ja kuivattiin. Saatiin 70 mg (saanto 62 %) otsikon mukaista yh-15 distettä likaisen valkoisena kiinteänä aineena.

IR (KBr) : 1783 cm ^ (/3-laktaamikarbonyyli) NMR (360 MHz? CD3CN, 6): 1,2 (s, 9H, t-C^Hg) , 3,85 (m, 1H, C8-H); 4,1 (m, 2H, CH2CH3); 5,8 (s, 2H, -CH~OC(O)-t-butyyli) ja 7,4 - 7,6 (m, 5H, fenyyli-H).

^ 4* 20 Kenttädesorptiomassaspektri: 501 /M (- HCl)^, 502 /M+ + 1 (- HCD7.

Esimerkit 37-73

Seuraavat yhdisteet valmistettiin poistamalla t-butyyliesteriryhmät esimerkin 29 mukaisella menetel-25 mällä tai poistamalla allyyliesteriryhmät ja allyyli-oksikarbonyylisuojausryhmät esimerkin 31 mukaisella menetelmällä. Seuraavat biologisesti labiilit esterit valmistettiin esimerkin 36 mukaista menettelytapaa käyttäen .

30

9 = :A

m- 35 ioOR2 i: 7i 83959

•H

r—i >1 1 >1 » - U3 ·> -y ΙΓ) * · s O r- w*jP \o '-r

Il ~ · Il - X i -'j ® X

j >i n h i i r-· r-- Τ’ ^ i x v, il-1 <n -*-1 χ x » il c>i cr w i - C ' - CJ - - - nna Λ *-> J II w - r- *J .^a θ' νγ^ m i-h · cn ™ x »n x en il '-'^r-.w* Λ Ä ·> - π -3 n CNI i>~> X P it-i + N M 1» *J “ » v m »7 «ino^ —i s-i %_/ r- m w 1 ti ^ . ·- mi Eh i a» m uin· ^ ό w-ό CNJ +* '—' ·*. Γ» ** <Nl ·* r-» O ·*/—n CN ·> 'w/ *» /—> w

- - 4 -Uoo - E - - r- X »SS z-' K

H Ϊ ff X H '-'M sj * 1-1 1-1 σ\ r-- X LO 11 Ό 07 - 1 CM 11 O' 1 - to 07 1 ,, ·· cn -—. x n ·· in „« 17-1/-1 - ·· -n u — im /—s 3 /—7 “ X 1 n x --i^Ji^XOT/—7tö Or-. x υ o ti - to M 1—1 to rt n m N 1 O «OV-/11 II i n

Ό W^-pW 1 11 - W /-7 X 1 l-J /-N

^ i n vO i - -In -o - nj «n /—, x i T1. coin XI o r- co^i o - E o co -x co « r-r-

t: rH - P i || rl «I »E * H h u - X 7 U II

'T U rt i nin ^7 P Χΐίτΐ 7^.5, 07 p II EU 7-1 rt-) H P P π P P π vO P 1 O w t! o ·> il co i « o cc i oi - - u /—. i xl i-ι x - S T-//-N amn ό wx^-mmH-1 t-/co( οου^πχ

S n -O co II W P CO CM n x xl 1 -o m X

rn pc XIX O K X X I XI « P X X I iw U1 rumia in pe p ~ ό ·—7 εινοπ - r~- X <n ci »m X i x 1— co - XX in-7 r- x - -xro - x o co - x r- p ui x n - v N P UXPON N« NXI/7P II NOU)XCNIP.™7£> X I w >3- | s-/ X OPC0CNI-) X I W n Νπ s - s - p xixi S -x * cm - - in I-» r-. cm p p - cn >n p in/- OX-EX-X O II O O O ΐ ΟΧ — 00 II o II s o> m m 7/cm m rl σ7—)πι i i'—' σ' mN - m i mi

CO

SS

P

IN

< X = r

p I

O

iiO

•S '* &| λ S?

°\./°\ 3 S

“ fi > ! I- ->/ -p s a> S U5 : : * ro o

<0 O

X CD

cW8 ± ^ «H , r ·

=*=<5 I I

^-8 XV

T

H +

X

M

P

a) H Γ" 00 07 ui n en en w 72 83959

00 ·. I-H O

v 831- ,rt “ f" n -u Ό ' -π E « «I SIE mw - 33 π - w X χ| - C_3 w o S M , * - o) (N U I Ό o' ^ «a· x o -n >-ι μ χ i in » - ζ - r~ in - υ - -x “ il +? S - Ό El -Χιλή w w r~ ~ ~ w e CO ro 5 Il c-v r- - w ~ - 1-1 cm «-r o >-> x . ox -/-> co -mj λ ·« ι>· -/-V -ro o' w co n uo rt ^ ^ -ί >'C_5^*'X ι-l ^.w X »ö e-» σ' co ι-ι ·> cm u f" ·· co x -x «x · r~ m m ·> ^ ~uo w x o - ^ il j o Klfl - «o >-1 ·—I X Ι-ι XI te «o ι-j ji —O w/-v

4-1 r-c CM O X VvilX

0 ~ “ ~ - MW - - C iflH

Ό co.ro. E -<r E O co 4J ^ ~ oo O rH^Wg W esi W χ > H C_> w - <0 «> CJ 2 X CM X tn 4J i Q in in rtrt to ·η O' Q CO i to w •H O CM -O' X * U-iu~rt M “—' ——i -*. to in X rtrt w* i—i — r·» ro 4-> —1 M U IX « « ^ M PS „ » ~·Η^Η « X X »O ^ Φ 2 . , " rt e—I H SmO'>-h 00 Λ S I CO/—* CO >1 — X i ·* — rt-\

ω ϊ Xl tinx coi-^crOrtX

NCUXl U C II ΝΧ ίίεΛ e, s * j?y .jlsi·:! ^ xuwww . ^ a S rt X X XIXI £* s ^—·/ /—n uo ^ έί 2 o υ o o - - x in o> n x h 00 z O-TOMOOXX OU — —- r- — Il , O'^IOIICMW O' I r-H CO -ί C_> Γ-» l“) co · 5 ./ >

< x = Il I

u m φ

6 V

• I

M

X

w o •-I 10 Λ

-H XT

>1 O

!n -—/

4-1 X

O) O

H N

tn x rl -g γ Λ X -h 0=0 to x rH \ X ^

>1 OO

& V X

h ^,0—0

ä I

rt “ P\n / ^-o o

T

-H ^

M

M

<u

E O ι-l CM

m * * <» ω li 73 83959 κ --

n X -X

Ό M S ui - - no\ · rl - frt -h CT — 55 ^ ^rt ·- *.

'—' il - ja o s u n s e - w X *> ,-. /—n v—' σν - ·*. as m (owgw en -h as · w σ-ι χ - cj * f—| CJ ·* vO Sw/ ·* O '*“'· ΓΠ ·* *J >, *·χ ~ w O co «*oo ^

Ev-/>, -vj «in/-N '—'laslojin ^r-

v—' -ME .—n O X CJ π vO

n 3 ^ « -as ·>»-· o -as

Os · XJ \ g p-r— M x U CO,—v -,-rt -<-h i os 33 v-' U - -m K n*s SS · O μ » (0 00 t~> U U ϊ S Hrv

_, - CM O 00 -(dll -n O CJ f» K

JJ · ,™X -X-nt-3 ·· e- I eMC_> ««-I

x cvno\ . ^ri /-v n -n xl en X «O /-» Ιΰ o- «Ο'-JiH-U-W» jj ΙΟ - O Ti - - -T3 S as O X r- 2 -<N tn χ | /— g r— —' · · >1 >i ! h h il Π eo - cj co co'—' co μ μ «. >-i .Tj H « x S X *N w s « ΓΗ αιηυαυνο^^ u λ E x E - O Q - uo I O N| ~0 r— QvJ|wcmw+tj ΰ U I aslun XI CJ -μ w •o; w to ^-i - cj cj w —i - o - un m S XI X -O -O nJ X rtfrt. -o m ,X XCJ-cnXl^vNr-i Χ —. fs| 'ί II ι/Ί -- UI S i /—s coO · S*h»-h r*- r*- 2 n pj - ** se in ^ S'-η ~ ~ X S Ivo ~ X O - -X >n *

PS NOCJIIECNXIXr-.^ N >, EX ?SOA

ε XlN'-OWCJ'-' χμν—'I—1-—'CMXIin S S NX -o - - S s» xicj xi X cj »o n u -^rtto xi m -—cjcjto

. OUOOrtllNEXJa OI -E — O N CJ

pq oi iv—'sJ-i-jo·—'<rtv_^ ον μ l-ι W I o I

A

/%v co I II

< i t s. V

\ // cj n

• O X

I l o N <0 o

X X I

0 o 1 w

O X

I O -H

m μ X > O >v \_ ίο μ x x ω

CJ-O -H

- e/ i? «x / o - o=o μ \> >, \ 1 & °—° ^ - ? > t ·Ή ; ; a 5—/-=*A 1 y \s // . o “ F> r\,

T

+-

•H

h

CD

e on »i m

rt 'ϊ -J

CO

ω I

74 83959 ε* - - s·/ ,—* s 2 CM ifl >-i -N S viO CM ,rt X -U ΌΟ «

' -r^ CM "·ί O —00 E SI -N

w rt » - <_j /-v siskos O O ^ K i f~ rt, m - n id u O Ml <-ι X -y O - XI «o O v X Ό U ·· i en ► (N x o X _ | „ «O - '.-h - x X /-n E - 'in -U 'CM X 'W E X --1 o w i—i ·ί ε w rt r—I —-e "J* ' Φ CJ ' ' —Ό ' co -H Q Ε ΕίΛ-ί -Ε^ 4J cj 'rt· ^ in ’rt· η ^ ' en en σι en ' σ'» — PC — *. COrtv ' Γ—

M Xi-ieM ' X X MD

Q) 2 ,H rts CJ i-H ' ft ' rH Z «Ί rt

Ui N ^ HKI >^Ä S

X M >, Xlu E X r- f-ι pc S Xl+j O i rt' rt g U i N ' ' 2 O X n X ' O 'I0W 0<J|UX-OTXX mi+jicMin'—'wsrt ω

CO

X

CJ

C N '

X

o 0

N

tO

X

o

X

«N O

05 jN X

O w

0=^/ (0 N

o 'e'

—ϋ I II

V /* O f

S T

N N cp --- x x x T x o—o—z— +- o

, T NO

I J= , 0-5-8 β Γ> +-

•H

M

-X

u

<D

6 \0 r— •H «J· tn ω li v5 83959 μ

O

Ό

<U

rH

μ

•H

M

μ Q) O4

Ui z z fä

•H -H *H

K H W

CO

K

u

P5 M

K x

CJ CJ

·< CM S N

X X

o o

O M

• X

CJ

O

Cs

XX X X

n

X

. o £/==% £/*=\ - 1/° v-/ i “ r> r%. n> "MO) ^Mö) +-

•H

M

M

U

e 00 σ> o -S'» >» m tn ω 76 83959 CM ~ ~ ~ * **. t-H /—/—s ^ -m m o' - *. χ χ X Ό - M -. X CM >-ι μ i-h Ό - r— —CO in ·. - <c 'w' y—\ f_4 #s ~ CO /—> ~ -—*.

- X - --7 -/—s ·> -h *o x w - -π E m -H ^,^-sQ.w 6 >j « β'-’Κ 6 ^ - υ X S ,ίΞ, χ cm m ό — υ ιο <ο CM r- ίο CM χ |ν^ H3 >—ι X ιΟ (0 ΙΟ « CJ Ό U U 4-1 CM - νΟ - -Μ ο -χ +4 ιο -ϊ -V «υ χ ·> ε ^

* /“V Ι-Η ·« »X 0 4* *- •»./’“Ν *0 0> »-H tD ^' fO

>—'XX <β ·- X Γ- Λ r-1 · — ί—I.

<—* »—· η χ μ Κι-- ©^•‘-•-'ΐ —

·· E I «-· <£) αο. I—I Γ-1 E /-s -CQ-rH

'—' - - CQ. . · 0J »/—\ <_J ^-+- .. 33 00 '^-ι- ό h M3 ^ ε χ s^-x f' s 4-) '—' O' II »h «O -s—^ Γ'- ».tn — «Ο ή O' O »» —' o -'oi kuki υ - <o i Ό - cm co E "-ί m uo E o - n-c^Eo di 0-»uo--<ju'iO»Xuro

H CMCN^.T3 CM »in X « CT Νϊ ·Γ> Λ M

4J| Q X '—' · OM Q E 1-) M <N p M C' O' 00 H '-Mr-··'—-(0--(-- · μ -—> <τ uo r— -^ «w r— -h « X uo r- r— --4

4-1 XX- -Xl»-i M uo X M ri μ «εο II — U

,y 2 -1 O) n ® S«-coi|lo4->Xwo-o-+- m Κ)-ιυ··2<Νθ'-)·»··Α:ζισ'··Λί d, · ·* /-'n (L) lo ~ o (Λ „ N E _ - »M N . » » l< ft N MT « X r- μ C4 « χ^-'(βχχω X ^ X X -MW χ -χ - MU.

s ε 'πΗΐηχ g^Hw^^u £ cm m ~x<c •Z ιΛ 's—' LO w {/) ιΛ ιΛ >«—' (Λ

Ο νο 'ί W Ο «"ί in W

•H O »Il MEK Ο — Ξ » ΦΚ m O ^ w - -M (Ö pq co I-I w I—I o N wui u hS tn 'n in o· hi s „ fs.

5 I II „

CM X · · K

< X O 5 V 1 T o O CM '

1 X

0 0 es

«X K X X

O

o

X X g ϊ χ x XX

o-^o-x <- y—i γ-Χ « f—· /* \ . = t=* Q I I C> £c_>) v <_>

•H

λ; |4 <d S -H CM CO ^

•H U0 UO UO LO

ω w

II

77 83959 /—\ - X - « lo cm x cni cm oon» « X O U - *.lO -vXl^v vO CM V CM LO « N U PJ^-s

- ^ rt ^ O t « O X X

^ “ -n «CO r-~ I C_3 ·—I

X .. m m o ·/—v « Λ n f0 esi -—- -csl^ XI MS S ^ -H ·-> -n « χ | »-h «ί.ΗΧ««0 - COX e X U CO § - « .μ υ — - o f- S «m «i o »ra — X ω O X U (S s-t CO I ra n Kj h « «X - 4j w « » ι-h -p

- > « X m mx « »> cm e « ».V

» « X -ΙΛ O CJ — X rt CO W*r^rd «VC rt^10 · * <-HI rrt * « CM P 1 © Il p ^ i-1 « I H li) H - 1

’“Jin-SrH ,g E “ f' «H» -*-v 00. «-S

·· rt E Ν'-1 + ··(-,'—' so '-'t. · --J r~ x w + ·« > ' - ·««r- \ Il S /—* CM II r~ Σ 4j <o σ m ιΛ« S o x m χ «i »o « x υ — o «uo m i os i «/—t i

Ό ««ΟιΟ««Ε>η « o « « E*-0 »\0 N * * g (D

a) OEM «<—- r-~ υ ,-ι o cox u LO O - o σ*χ u o -rt M X CM X «« CM « —-.CO CM r— '—- ·—ι O1 -p O - u <0 «ms Q x « öin q •H V—’ E M CJ /“s I— .. -—- /—·. lO lis ·· '—' /—N CM « r— " h Xrt SCr^-H rt-3-Xr^-P P)H «lONf P X «O -n « P» *1 μ X «XI «- (0 <—I g Χ|Π ^ Il h >! M £ p n χ υ +j Seou-io Ή Su- χ p <L) 35 ·—’X ι/l H -· ys 2wi ---¾ z NU ---¾

CL) O — «/—s Q) « «r~- <u X /-s «/—n <D

en N — CJ «X Is a N vO - /-v X W Q- NO - X X P CU

X-C5CME — «(o X - X X lO CQ « X O X «θ'-r OQ “> S-J X ^ Sört £ cm co r- k J £ ι <r u «ra

·» ·»>—' W W LO s—/ CO

O Ό •»'N 0\V0 w o w o ·* ·* ΙΓ) w odx--iiXrt o ta w tn o X 5 © X E «X ra

CO «3 M rM O o m 2 (O -ri '">»' ^ H * CO (O ’n lO H S

n

X

u m n * se o en o

< M x CM

X u x o o M o

X I

o 0

CM

XX X X

n ^-1 “ A Π>

\ /f M

• I

•H

M

P

ω

Sm vo r-» -I LO LO io

UI

ω 78 83959 «· « CM » Ί · g κ r-- * <-n Il — — H p — ~ «n x '“s « « ·η ~ p x p

X «p oo ·> *·ρρ 6 /—n «.p B

Ό· - - se « «p w X M rtj « m»J <t! - χ p »h « P cm X X r* X td *j χ | « td

“ X ·" <N II 00 JO 10 w CJ CJ P w CJ - CO -P

p n e cj - il '—s -υ xl .v i p n m s—' 'p · MW I") en in · CJ td n r l ^ H (0 ~ X ΙΛ M ^X «N P CM II (0 P · to M UI H U - N •Kim «HO I - CJ . I —

-'«’W 1 ΝΑΌ »vO CJ n CJ CO. I—i « Ό OQ. P

P « O •r~i'w H K O « « . \_/ χ » χ ^ U

cm m ι-j cj cnp oo » χ · .. n a p x ··- O* «ιΛ M ·· ι X M χ p «* -— p p p| P CM X II V PN» u S p 1+ CO no I + «O p CM i-> CO «O Ό -O U Λ CO E E tn « « E 2 p “ X P 'P X I N ·η * Il U “ « w E CO U w

o »p p « » « « « tn XI £ S MW

Ό MM -»t tn Ό p Min »U ID p »i tn PP »oi O

<U PXI - WT3X H » »S O II ·Ν<Ν CJ ».CO p NO O

•H CJ CJ E » wp cjPMNiiPjo^r^cn q cm «» m tn tl R-£|WC'° Q w *»w p cj en x p h cjx x »r·» « cj» » « «r-» ·· np » cj

Ci w cj σι to m »tn w p p e X Ό cm -h p»m h p O "CJ in w M »W cm Ό » ». .. Cl X M p X I · · >-l

M X I CM » X X |CM W X CO P P S XIX CJ p P

JJ ε p»co ε cj m p m p z cj p i m x

Qc Z ·> » (0 MP «- z N »OiMfl P (U en pH) W XppXXnO X p - || ·» » Π3 CJ Cp NX « «CJ ft n en m cj cm n U nen h in ie 'nx ® x cj E χ x tn X XI M 04 « X I X | w CJ rt S I p N U <e ε » cj xixi -p g cj - « « m w tn wen r~~ i cj cj tn x »Xpcrpr^p en o - x tn ©IICJOOX>f» OXCJXXX - «X <5 O X « ε K rt

on ►n li i i w cj ONtnipwcMvocopA en en cm w ι—i S

M

X

CJ

< m r r

X

CJ

o

•H

1—1 !>1

^ X p X

X O <1) o

•rt P -H

Q tn q o

P

d) tn < to <W° ί 1 R r “ K " Π « X ·

•H

a;

M

U

Φ § oo on o w *Λ ^

H

I, 79 83959

M

XI

0 O -r-s 1 rs X i—s — /—s - - ,—s •--«'-is: x x ~ s r-s σ\ x- “ X X “ X r-c CM r-H g LO X CM — ~ - (0Ό

X en en X O - rH wsC M X -H rrt r“s O X -r-M

O' 'ί noo « · o g o; w m —.

“ - XI 00 -H - 00 CM X - XI nl - CM - XX

- n- \o - o -Il 6 E τ ιβυ nJ in Ο X m »-· «o G

« il il E o m x h m ^ »j “'~r « -p m «-h *- o o) M·" >“5 *-r I -1-1 rt (0 r-s. O Ai - UI fö - -μ o (ö “X o u m h id « to - -p CM - -tn -m -X,y -·η r—s CM OO (rt n e ' X At *.*j ό os x il e '-'id i-< X - - i ·· s—'/-v in id •rt '—' — — CM *“3 s—' ,-ι s} φ >sc X CCL ^sS SCO Ή en in i ••ncjtorH'w'. <o <-ios n - - i ..cnm - -o\ m o „ r>n x — o - x Ilo en ccl O r-s - m “ X s. + «O s_/rt!--H+ - en o x ^ u «O *-> -/-s II Ό SO CO S - (B -nio IS 0“ l 2 -r χ f, rt — - X π X II E CO X r-s « — n » rt - i mx neon υ x <t /-s -x <τ i t-i n «dj -orsi gin r^wco-r^ m q m X - e +

tj <-* -r-ι m - σ' -x m o so o ss in » « en on i -xeMOn-z-suS

Jj U r-iE^m--* χοχονοχη-χ « g υ X — r! Q m ^ n in u to O * w r-~ QwO“--^cn T, O CM m rt - « -00 ·. —' — I ^"s - . I—l · s— I CM X r—s Γ". ·

X s_/ » -CO srt M 00 S ·Η CM MrtsOSrt -rt r~ ι-l irt ® - r-. -H

X rrt -1 -sj· χ Sw/ t-ι Le CC -X X rt® .. Lt pC - Il CM O0 rt Vl

,ίΓ g~ CM 1—i - +J S -XU f-sO-TrtsLJ S CM X rt, - || X

U1 £ -h - - so r-, .. ,y g /rtsj mu en A g en oo - X · · AC

Z i—I r—s - r-s - -s CO r-s φ M X | -i—Iti) -UI r—s tl) >S nrs* US SD x L ft N XI -U - nS E U (¾ N η) -M X - tr Oi

M >i ® I CO to X u n.Ill XUEOX'n^'XtO Μ·η « < ids^flfl O

X+JUXIU'-'-XIXtO g NS-1 I rt uni S W w -r-. —' X (0 X 3 cm o rsu s^ m X in m ^ m in > v m xxx m k n ui o ϋ o - -to oo ui o N to rt m n en ui o i o u m ^ irt o cc m o o -x ε - -oc m o - - - n - -cc <3 os *j i i ·η in υ u h g cniMTcM'—'soi-shS tntMtnmnrtosHg // \

T I

< § « v

0 N

X

N O

r—s I

to O

.rt x I

H 8 rrt -p £ v •rt « S V r“ ____ cl .2 o==o to

CC J \ X X

>7 \ 3 : : ξ1 xx - - H ^^J>-0 01 | to \β “ P*\n t/ \r

Oi

X

- . *H

AC

AC

u ω -rt 1-1 cm en

ui no Ό NO

w äo 83959 S ΪΓ S' - - „s ~ ™ ^ ?« v ε „ x ·

^ Ä fW I v lO s—'' . ό » »-H ON

κ^>. o w - - _ - <r *3 x *o 1—1 x I ' as ό 4-1 π - - m § ft -¾ - - n ο ό g *o m x ^ 2 w on § wfnvr^as-^ -π* X * „3 » CO CN SO T| E <N l—) ·— —’ -r—. g - £ <* E U - - · ^ m - - - - J3 in ^ — ·> v—* 04 (0 ,—, r~\ r-H T5 to ·· r-π o «m asua sc x I - -w,o ^ x w ®. - . ‘ou^rtnca r-c,--v w <o ή μιγ)^ I · c\i --o '_« as m +j u π as cn SC co.^ /-n -s ι Ό· - - ‘ .. 5 m n O - vUm-i W, *0 ' 11 «Η Γ /—v - -.

Ό o _rm 1 f- s ^ - -ιη^Λ v «ο-ιno\ •h S >s - - -co I nsiSN -m υ - w -- +j Q O K O il En -hun^ooo „-, o H I rrT ft ^ ft ^ · u i" umoeu ^ ^ cm ΰ m m X λ

Μ ® ε « <N ^ ^-, QXXwcjiooor-S S m r~ X

4ji O ^ U - -K 'f ^ UUU XI Γ" 10 Q -U o I> w CM - X f» i w 04 CM CJ - -1-1.. w<N rj .

ω m -h «won χ - «. o ^ _j - a Ss : * Ji -° ^ ° psox'juxo-'i « -x -x W £ N rt In WHf . Jj Siro 04 P-XIr-N £ SnH X r- 2 - * ·· ,_| 2 -ouu nZ 2 « m H « · N ffl H r·- - z-' CMr-17; XI- - N-rnEm*. £ NXEX--OCJn. N U 00 -00 SS KnwtoKsua^ * eh *“ Λ W '"i 00 X ίβ “ u rH m 1 U m 2 N+^h)

-m - 1,5 w w -on wl); X

o -h co -h q. x to ο γόο --- 5 o u m ότ -

£ ~T -T® ^ « 0 M ~ «j E E X X £ 02 II -X

tnnnini-iu.nHg n i n „'-'wh h g rnii-jn-w

A

I 5

• · U

< v T x 04 rj

X O

O I

• to

0 X

1 0

N

X

0

N

V «

X X

0—0 O' /

XX / X

X X

—a

N t , lO

t-V \ S. V

1/ w lX , i u g

„ ^ ^ vm^X X

> a «A. ~ A —ς i 2 2: N N ·

X X

•H

λ; 0)

B

•rl "i’ 1/) U) Ό vO so ω I: ei 83959 /"n - - S - ιΠ

-- M M CM O' - » CO

K N U ΐ - SI -'-N EK CM

O' V '—' /—n - CJ ΓΗ 33 W' CJ - - —i K K cm cm TS r-- „ - m -j r-ι m « -o σ' κns .h W - -Γ-, V K m - CJ w - e m - - cn m iti co o -'-v a «K M M -.J5, I -X |§ cm κι -I «w ,o - «-< - m <-< · +j -U cj *—' E v - no /-^ >j >-> k k co w ..¾ «ac - -k 15 CJ - CO «.Mj· /-M T-iKICM m M T-i ,-| · ·· i suo «.cn . *o cj υ >—< i ·— ’ <J r— - ^ CM--- CO. >-< to- -in+ - -KN^cooo'-'t, p K-ia^-t^s OKO n cm -n s 0 "Λ 6·ηϊη *-< Μ-ΓΟ^ΟΌ1-)-1 >n CO w SO ^ £ l O i <D ^ - n cj KIK r- q--cm--E™ •H O E θ' Kl O CM I E T OKIE’S u ® .p Q w -u - N |n CmtXvuK'-' ^ H O CM O K O - Q cn O r· 00 '—' «4· I h u E » m—' m 1—1 o «J c- " P ^ - id W-H so - «- - -r«- T] K r-> r—I - -- Li K-C-mJ -O' h " 0) £ „ K E K O p 2 CM II K K ti CL Z -h ^ w ^ - a; s η ·ν t"1 ·> ·· ” CO -H «J 00 (U re) ^ ^-«/—« fl> N ' f' * ft Ν·γ-,~Κ--Κρ£< S >, CM E -£ - (/) K *j ® M » (N ffl “ £ p m «—'^v |J £ —' CJ w [5 3 - *» in m “

On cm O K m O cm cm - o in in “ '0|--K~W(e O' « »K «II ΛΚ “ ΓΠ _jj (MvtCNv^CJ 2 ίΠΝΗΗ>}ΐηνΗ^ • S \

II

< v I o CM o

K I

o 0

1 N

•H - .

I—I tO

>1 X

>1 O

P Μ-Γ

0) X

S V

M N

CN O X

« S V Λ K

>« 0=0 tO

>r \ X

0 o o « Nc x" > o—o

w X

X N

X o N o

to XJ

X ON

. O N X

1 /° 5 I /° \/ γ^ /° <<=· /° /°

N Ζ=· N

\ X

. Ή £ a: λ: p ω E r- co O'

•H VO \0 \Q

w

W

82 83959 - - m r' Γν ϊ h tl tn n n ι-h *. « ’TlΛ w - «. I-) m o\ »3 X rv . * r« «•»-in'-1 ' » _. E » r-i N Ϊ n » · X· +J 2, w ^v « r- W —I » - -—N H»V W'^1 M » CV '2 - m x χ χ e m in X 'n m il 5

N H - N H J MrlOOUiniT S

v » E » -. jj ·» - *. N II V-/ <0

m OM w ™ H (M tn Slh « -H

M l» M - CJ M T * .. — X X ί II ® .. - -o - « -rv uT -»O uT '—- r-; rv uT '—' I X rv 1—1 «OvOfONII I to VO 33 X »il.

— χι-τ m -co. - cm »w - «,cq.,_ -I-I-CJ -O'—- «r-iux vf

M O O - rv w o (Min* S

+r X » X I X -H (Z3- »H »« — tn S ΙΛ N Τ3-·ίΙ Λ -m rvl m ovra-'-'rv-s a-.^r- - mieco ι-χ χσ»ο ϊ m n n · m xluf ,J ¢-1 . N ^ rl (O X -T /-» w <£> ir>

.tl Q ™ V - OV Q-riUUCO

v-h » -uT -/-»»o »—' rv t_J -ex rv ·.

μ rve M Ulf» n σ’ CM — - rv -H

£ X P3,33 W -νχ|Η X XI -v-'ΧΙΌ X h M

n; S XI -* <—· to Suxovr+J

& Z CJ U —I o. X U ·· g <N»i rv I - .. x rTT CM V CM - . x v rv »,—H<1) ^1 NX -»3 Xlio - U N CJ -»3 -x tn lu tn XUX O XX X O E xr-xxa, S i -f - i -mx Siv-H-cMU^xm -V rv v- /—> w m o - -x -x - o »m S - -o tn OXEtOXr»EOi OX-totnXv«(tl xxwtjcviu»—i—i ππηιΟΜΉΝΗε n

X

u

CM

< X r 0 0 rl

XX X

X_ /* "\ g_e/*==*\#_-

1 </ I o7 V-S

0=^ o=z^ X Ψ —* Ψ * Y, \n W' «/ ^ S:

M N

X X

•H

M

M

U

Q) E 1 _ •rl O rl ω tv rv w 83 83959 id r**. ·*/—\

ΙΟ O £ Z

-CM '—'CM

- r-ι vt m - ε χι u -r-ito w ui »in o n s n pi ^ /—s iD ~ »—< ·» Ä Ή LO -o as n cm m <t u ^ e oo as u sc uo - l-ι m - o sc <o - CM pi hu r— —>—I ε - I h (0 o xlu - I-* +j

- c_> o cm n - -M

· E CJ - <0 TS i'-' ·· σι X X to rcJ

/-p'—' I 33 ·πν S Λ, · ^ONwH

«O <T r-1 -- <0 ON CO CM I

m - « - . i-h - XI »m oa^ -cox - x m -' + -«-π - ο e oo w μι-1 « -pi ε υ w x s to /-vO'-^*- 2 0 a --1 ' O «'—''-I-' Q -X \£> -1 -

Ό I - /-ί I m n - m I

a) O - ε Ό -c-n m -10 O -u X h - ε r- H Wciw »autoooif CO 1-1 CM - .—s (J i£> Ί-1 scocsmtu-iim· e cox -H D Xlin CJ NO Ό Q - CO - f~ cr> w '-I U in - CM ·· w^-ng^t_3v£>..

4-1 υ-ΌεΧΙ--·Η co w to r- H

Λί KUnn^u^OH XXISC 33 — <—· VH

Φ El OXi-^4-1 x cj -<in u x 4-1

ft Z - CM 00 I r- A! Z CM <J O CM i-i ·· .V

co - /-s s * un«) x -böI /—> a) NX CO CM CO - -ft N U --3-CJ - l-ift x co x x - on in xox o E « m E CJ - - CM X U Sl'i-l'-'^ra - CM in 1—1 - ΙΛ [β opxi«x - n—. m o - -x -m ω 0 n u - n ε - x j5 oxE®x - x m

nau-U'-'McMS coio^UMinHS

n

X

cj

CM

X w

U X

PM CJ

< X CM

CJ k

CM CJ

X o

u I

0 ο

XX X

«

X

X

N

X

n o x « , <-> x P I ° X w

X

Ή

-V

M

<U

§ CM CO

CO ^ ^ w 84 83959

Esimerkki 74 3-etyyli (4-bentshydryyli) -7/3-allyylioksikarbonyy-liamino-7Ct-metoksi-l-karba-3-kefeemi-3,4-dikarboksylaatti A) 494 mg:n erään 3-etyyli (4-allyyli)-^-butyyli-5 oksikarbonyyliamino-l-karba-3-kefeemi-3,4-dikarboksylaat- tia (1,253 mmol) lisättiin noin 10 ml etanolia ja 241,6 mg p-tolueenisulfonihappomonohydraattia. Sen jälkeen tulokseksi saatu seos haihdutettiin alipaineessa 45°C:ssa. Lisättiin 8 ml lisää etanolia ja seos haihdutettiin kui-10 viin. Tulokseksi saatu tosylaattisuola liuotettiin sitten noin 6 ml:aan CH2Cl2:ta, liuokseen lisättiin N-metyyli-morfoliinia (266,1 mg, 3,631 mmol) ja trifluorietikka-happoanhydridiä (353,5 mg, 0,211 ml, 1,253 mmol) ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Raakatuoteseos kaadettiin 15 sitten seokseen, joka sisälsi 100 ml CH2Cl2:ta ja 40 ml kylläistä NaHCO^-liuosta. Sen jälkeen orgaaninen kerros erotettiin ja uutettiin kerran 40 ml:11a kylläistä NaHCO^n vesiliuosta ja kahdesti 40 ml:lla 1 N HC1. Orgaaninen kerros kuivattiin sitten vedettömällä MgSO^rllä, 20 suodatettiin ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 433 mg (saanto 81 %) 3-etyyli(4-allyyli)-7-trifluo-riasetyyliamino-l-karba-3-kefeemi-3,4-dikarboksylaattia valkoisena kiteisenä aineena.

NMR (90 MHz; CDCl-j, 6): 1,25 (t, J = 7, 3H, 25 -CH2CH3); 1,69 (m, 1H); 2,9 (m, 1H); 3,9 (m, 1H, C6-H); 4,15 (q, J = 7, 2H, -OCH2CH3); 4,6 (bs, 1H); 4,7 (dm, J = 6, 2H, -OCH2CH); 5,05 (d, J = 4, 1H, C7-H) ja 5,8 (m, 1H, -CH=CH2).

B) 380 mg:n erään edellä osassa A saatua yhdis-30 tettä (0,891 mmol) lisättiin 5 ml asetonitriiliä, 3 ml dietyyliesteriä, trifenyylifosfiinia (70 mg, 0,267 mmol) ja palladiumdiasetaattia (10 mg, 0,045 mmol). Viiden minuutin sekoittamisen jälkeen seokseen lisättiin tri(n-butyyli)tinahydridiä (0,30 ml, 1,11 mmol) ja sekoitta-35 mistä jatkettiin 20 minuuttia. Sen jälkeen reaktioseok-seen lisättiin lisää tri(n-butyyli)tinahydridiä (0,27 ml) 85 83959 ja seosta sekoitettiin 10 minuuttia. Reaktioseokseen lisättiin sitten 12 N HC1 ja seos haihdutettiin alipaineessa. Raakatuotteeseen lisättiin 15 ml dietyylieette-riä ja 15 ml heksaania. Tulokseksi saatu seos sentrifu-5 goitiin ja supernatantti dekantoitiin pois. Kiinteä aine pestiin kahdesti dietyylieetteri-heksaaniseoksella (1:1) ja kuivattiin alipaineessa, jolloin saatiin 340 mg (saanto 99 %) etyyli-7/5-trifluoriasetyyliamino-4-karboksi-l-karba-3-kefeemi-3-karboksylaattia.

10 C) Edellä osassa B valmistettuun happoon (391 mg, 1,012 mmol) lisättiin 10 ml asetonitriiliä ja kolmessa erässä difenyylidiatsometaania: 157 mg (0,809 mmol), 20 mg (0,101 mmol) ja 10 mg (0,05 mmol). 30 minuutin sekoittamisen jälkeen reaktioseos väkevöitiin alipaineessa 15 ja käsiteltiin kromatografisesti käyttäen adsorbenttina 40 g silikageeliä ja eluenttina ensin CH2Cl2:ta ja sen jälkeen etyyliasetaattia, jolloin saatiin 383 mg 3-etyy-li (4-bentshydryyli) -7/3-trif luoriasetyyliamino-l-karba- 3-kefeemi-3,4-dikarboksylaattia.

20 NMR (90 MHz; CDCl-j, 5): 1,0 (t, J = 7, 3H, -OCH2CH3); 2,8 (m, 1H); 3,9 (m, 3H, -OCH2CH3 ja C6-H); 5,15 (d, J = 5, 1H, C7-H); 6,0 (s, 1H, -CC^CH02> ja 7,3 (m, 19H, C6H5).

D) Edellä osassa C saatuun diesteriin (63 mg) li-25 sättiin 1 ml CH2Cl2:ta, allyylioksikarbonyylikloridia (15 ml, 0,137 mmol), pyridiiniä (13,5 ^ul) ja dimetyy-liaminopyridiiniä (2 mg). Sen määrä allyylioksikarbonyylikloridia, pyridiiniä ja dimetyyliaminopyridiiniä lisättiin vielä kahdesti 10 minuutin välisekoitusten jälkeen. 30 Viiden lisäminuutin kuluttua reaktioseos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 50 ml etyyliasetaattia ja 20 ml kylläistä NaHC03~liuosta. Orgaaninen kerros erotettiin, uutettiin 20 ml:11a 1 N HC1 ja kuivattiin vedettömällä MgSO^:llä. Sen jälkeen orgaaninen kerros suodatettiin 35 ja haihdutettiin, jolloin saatiin 3-etyyli(4-bentshydryyli) -7/J- (trifluorimetaanisulfonyyli) allyylioksi- 86 83959 karbonyyliamino-l-karba-3-kefeemi-3,4-dikarboksylaattia keltaisena öljynä, jota käytettiin sellaisenaan alla osassa E.

E) Edellä osassa D saatuun yhdisteeseen (70 mg, 5 0,11 mmol) lisättiin 0,9 ml CH2Cl2:ta. Tulokseksi saatu liuos jäähdytettiin -5°C:seen ja siihen lisättiin kolme pisaraa metanolia ja sen jälkeen 17 ^ul trietyyliamiinia. Tulokseksi saatua reaktioseosta pidettiin jääkaapissa kaksi vuorokautta, jonka jälkeen se käsiteltiin sellai-10 senmaan kromatografisesti käyttäen adsorbenttina 3 g si-likageeliä ja eluenttina ensin CH2Cl2:ta ja sen jälkeen etyyliasetaatti-CH2Cl2-seosta (5:95). Haihdutettaessa halutut jakeet saatiin 35 mg raakatuotetta, joka vuorostaan käsiteltiin kromatografisesti ohutkerroslevyillä (20 x 15 20 cm), jotka oli päällystetty 2 mm:n silikageelikerrok- sella, käyttäen eluenttina etyyliasetaatti-CH2Cl2~seos-ta (5:95), jolloin saatiin 20,7 mg otsikon mukaista yhdistettä keltaisena öljynä.

NMR (90 MHz; CDC13, δ): 1,3 (t, J = 7, 3H, 20 -CH2CH3); 2,8 (m, 1H); 3,5 (s, 3H, -OCH3); 3,8 (m, 1H, C6-H); 4,15 (q, J = 7, 2H, -CH2CH3); 4,6 (bd, J = 4, 2H, -OCH2CH); 5,8 (bs, 1H); 7,0 (s, 1H) ja 7,3 (bs, 10H).

Esimerkki 75

Etyyli-7/5-tienyyliasetyyliamino-7Q(-metoksi-4-25 karboksi-l-karba-3-kefeemi-3-karboksylaatti A) Esimerkissä 74 saatuun yhdisteeseen (20,5 mg, 0,0384 mmol) lisättiin 1 ml CH2Cl2:ta, trifenyylifosfii-nia (2,5 mg, 0,0096 mmol) ja palladiumdiasetaattia (0,5 mg, 0,002 mmol). Tulokseksi saatuun liuokseen li-30 sättiin sitten p-nitrofenolia (5,4 mg, 0,038 mmol) ja tri(n-butyyli)tinahydridiä (13 ^ul, 0,046 mmol). Seitsemän minuutin sekoittamisen jälkeen lisättiin lisää tri(n-butyyli)tinahydridiä (6 ^ul). Sen jälkeen tulokseksi saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen ja siihen lisät-35 tiin tienyyliasetyylikloridia (9 ^,ul, 0,0691 mmol), py-ridiiniä (11 ^ul, 0,124 mmol) ja dimetyyliaminopyridiiniä 87 83959 (5 mg). 10 minuutin sekoittamisen jälkeen lisättiin lisää tienyyliasetyylikloridia (9 ^ul) ja pyridiiniä (11 ^ul) . Tulokseksi saatu seos laimennettiin etyyliasetaatilla ja kaadettiin kylläiseen NaHCO^-liuokseen.

5 Orgaaninen kerros erotettiin ja uutettiin kerran 20 ml :11a kylläistä NaHCO^ ja kahdesti 20 ml :11a 1 N HC1. Sen jälkeen orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä MgSO^:llä, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 60 mg ruskeaa öljyä. Raakatuote käsiteltiin kromatografisesti 10 käyttäen adsorbenttina 5 g silikageeliä ja eluenttina etyyliasetaatti-heksaaniseosta (40:60), jolloin saatiin 6 mg otsikon mukaisen yhdisteen bentshydryyliesteriä.

NMR (90 MHz? CDCl^ <5 ) : 0,95 (t, J = 7, 3H, -CH2CH3); 2,7 (m, 1H); 3,35 (s, 3H, -OCH3); 3,6 - 4,0 15 (m, 5H, -CH2CH3, Ci^CON ja C6-H); 6,4 (bs, 1H) ja 6,9 (s, 1H, COgjj0 * ^ +

Massaspektri: 576 (M + 1) B) Edellä osassa A valmistettuun yhdisteeseen (7 mg) lisättiin 0,5 ml kuivaa CH_Cl_:ta kuivan typpiat- 20 z Δ mosfäärin alla. Tulokseksi saatuun liuokseen lisättiin trimetyylisilyylijodidia (2,6 ^ul). Seitsemän minuutin kuluttua reaktioseos laimennettiin 20 ml:11a CH2Cl2:lla ja uutettiin 5 ml :11a kylläistä NaHC03~liuosta. Sen jälkeen vesikerros sijoitettiin pulloon, joka sisälsi iso-25 propanoli-CHCl3~seosta (10:90). Syntyneen seoksen pH säädettiin sitten 12 N HCl:llä arvoon 2. Muodostuneet kaksi kerrosta erotettiin ja vesikerros uutettiin 25 ml :11a isopropanoli-CHCl3-seosta (10:90). CHCl3-kerrokset kuivattiin vedettömällä MgSO.:llä, suodatettiin ja haihdutet-30 4 tiin alipaineessa, jolloin saatiin 3,8 g raakatuotetta. Raakatuote käsiteltiin kromatografisesti käyttäen adsorbenttina 1,5 g silikageeliä ja eluenttina etyyliasetaattia, joka sisälsi 1 % etikkahappoa, jolloin saatiin 2,5 mg otsikon mukaista yhdistettä.

35 NMR (90 MHz; CDC13, 6): 1,3 (t, J = 7, 3H, -CH2CH3); 1,5 (m, 1H); 2,3 (m, 2H); 2,8 (m, 1H); 3,4 88 83959 (s, 3H, -OCH3); 3,9 (s, 2H, CH^CON); 3,95 (m, 1H, C6-H); 4,2 (q, J = 7, 2H, -OCH2CH3); 6,9 - 7,3 (m, 3H, tienyyli-H) ja 8,3 (bs, 1H).

Massaspektri: 408 (M+), 409 (M+ + 1) 5 IR (KBr) :: 1776 cm ^ (/5-laktaamikarbonyyli) .

I:

Claims (2)

15 H2N-t-^ 0 (4) coor2 20 jossa Rl, R2 ja A ovat edellä määritellyt, ja mahdollisesti (a) alkoksyloidaan kaavan (1) mukainen yhdiste, jossa Rx on vety, kaavan (1) mukaiseksi yhdisteeksi, jos- 25 sa Rx on metoksi, tai (b) esteröidään kaavan (1) mukainen yhdiste, jossa R2 on vety, kaavan (1) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa R2 on muu kuin vety, tai (c) de-esteröidään kaavan (1) mukainen yhdiste, 30 jossa R2 on muu kuin vety, kaavan (1) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa R2 on vety, tai (d) poistetaan kaavan (1) mukaisessa yhdisteessä mahdollisesti oleva aminon suojaryhmä kaavan (1) mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa on vastaava vapaa aminoryhmä. 35 91 83959 Förfarande för framställning av en antibiotiskt aktiva l-karba-(1-detia)cefalosporinderivat med formeln 5 (1) O H R-C-NB—I o =-—M. sy—C-A (1)

10. T COOR2 väri R är tienylmetyl, a-aminobensyl, a-(t-butyloxikarbo-nylamino)bensyl, a-(allyloxikarbonylamino)bensyl, a-ami-15 no-3-bensotienylmetyl, a-(allyloxikarbonylamino)-3-benso- tienylmetyl, a-(4-etylpiperazin-2,3-dion-l-ylkarbonylami-no)-bensyl eller en tiazoloximinogrupp med formeln 2° ΐ iP0' XJ k H2N ö n0R4 25 väri R4 är metyl,bensyl, 4-klorbensyl, karboximetyl, 2-(t-butyloxikarbonylamino)etyl eller 2-aminoetyl och vars 2-aminogrupp eventuellt är skyddad med en allyloxikarbo-nyl_» t-butyl-oxikarbonyl- eller trifenylmetylgrupp; R! är väte eller metoxi, R2 är väte, difenylmetyl, t-butyl, 30 allyl, pivaloyloximetyl, 2-acet:oxiet:yl, 1-(isovalerylo- xi)etyl, l-(isovaleryloxi)-3-metylpropyl, l-(2-pentyloxi-karbonyloxi)etyl eller "CH2 35 \/° C tl 0 s2 83959 och A är metyl, hydroxi, metoxi, etoxi, butoxi, hexyloxi, allyloxi, bensyloxi eller trimetylsilyletoxi, k ä n n e -t e c k n a t därav, att man acylerar en 7-amino-l-karba-(1-detia)cefalosporin förening med formeln (4) 5 ίο 0 I C00R2 väri Rx, R2 och A är ovan definierade, och eventuellt 15 (a) alkoxylerar en förening med formeln (1), vari R: är väte, till en förening med formeln (1), vari Ri är metoxi, eller (b) förestrar en förening med formeln (1), vari R2 är väte, till en förening med formeln (1), vari R2 är an- 20 nan än väte, eller (c) deesterifierar en förening med formeln (1), vari R2 är annan än väte, till en förening med formeln (1), vari R2 är väte, eller (d) avlägsnar en aminoskyddsgrupp eventuellt när-25 varande i en förening med formeln (1) för erhällande av en förening med formeln (1) innehällande den motsvarande fria aminogruppen. li