FI79842B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt verksamma 4h-3,1-bensoxazin-4-onderivat. - Google Patents

Description

1 79842

Menetelmä valmistaa terapeuttisesti vaikuttavia 4H-3,1-bents-oksatsin-4-oni-johdannaisia - Förfarande för framställning av terapeutiskt verksamma 4H-3,l-bensoxazin-4-onderivat Tämän keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa terapeuttisesti vaikuttavia 4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni-johdannaisia, joiden kaava I on

R1 O

ID

!3 jossa

Rl on vety tai alempi alkyyli; ja ovat kumpikin toisistaan riippumatta vety, halogeeni, alempi alkyyli, hydroksi, alempi alkoksi, alempi tioalkyyli, -N02, -N(R')2, -NR’COR', -NHCON(R') tai -NHCOOR', edellyttäen, että ainakin yksi ryhmistä R^, R^ ja R^ on muu kuin vety, kun X on NHR tai NR'COR"; ja X on H R'

I I

-N-R, -N-C-R", -AN(R')2 tai -AOR'

O

(A) (B) (C) (D) jossa R on alempi alkyyli, alempi alkenyyli, alempi alkynyyli, 2 79842 C3~Cg sykloalkyyli, joka voi olla substituoitu 1-5 substi-tuentilla, jotka ovat toisistaan riippumatta alempi alkyyli, alempi alkynyyli, alempi alkoksi, amino, halogeeni, nitro, alempi alkyyliamino tai alempi dialkyyliamino, tai fenyyli- C]_~Cg alkyyli, joka voi olla substituoitu fenyylirenkaassa 1- 3 substituentilla, jotka ovat toisistaan riippumatta alempi alkyyli, alempi alkenyyli, alempi alkoksi, amino, halogeeni, nitro, alempi alkyyliamino tai alempi dialkyyli, amino, kukin R' on toisistaan riippumatta vety, alempi alkyyli, alempi alkenyyli tai alempi alkynyyli, jossa tyydyt-tymätön sidos on ainakin yhden hiilen etäisyydellä 0- tai N-atomista; kukin R" on NHR' tai AOR', alempi alkoksi, alempi alkyyli, alempi alkenyyli tai alempi alkynyyli, A on isoleusiini, fenyyliglysiini, väliini, proliini, leusiini, fenyylialaniini tai glysiini tai rakenteellisesti lähellä oleva aminohapporyhmä, mukaan lukien N-alempi-alkyylisubstituoidut johdannaiset tai peptidi, jossa on 2 tai 3 edellä mainittua aminohapporyhmää, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä alempi alkyyliestereitä ja suoloja.

Tämän keksinnön yhdisteet ovat 4H-3,1-bentsoksatsonien 2- amino-substituoidut johdokset, joilla on seuraava rakenne: 0 6rAr^°3

N

8 1 2-amino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ja vastaavat yhdisteet, joissa 2-aminoryhmän kummatkin vetyatomit on korvattu 3 79842 substituentilia, kuten alkyylillä, on kuvattu aikaisemmin; kts. esimerkiksi Monatsch, 95 (3) 950-960 ja US-patentti 3.450.700 (Upjohn Company). Sheehan et ai., J. Org. Chem. 29, 3599-3601, 1964 ja Herlinger, Angew. Chem. 76, 437, 1964 on kuvannut 2-amino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oneja, joissa vain toinen 2-aminoryhmän vetyatomi on korvattu fenyylisubstituen-tilla. Vastaavia yhdisteitä, joissa 2-aminosubstituentti on mono- tai di-metyyli-substituoitu morfolinyyliryhmä, on kuvattu länsi-saksalaisessa patentissa 29 14 915 (BASF). Minkään näistä yhdisteistä ei ole ilmoitettu olevan aktiivinen fysiologisina entsyymi-inhibiitteinä.

Muutamalla 4H-3,l-bentsoksatsin-4-onilla tiedetään olevan entsyymejä inhiboiva aktiivisuus. Teshima et ai. on esittänyt erilaisia 2-alkyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oneja, joiden on ilmoitettu olevan aktiivisia entsyymi-inhibiitteinä (J. Biol. Chem, 257, 5085-5091, 1982), ja 4H-3,l-bentsoksatsin-2,4-dionilla on ilmoitettu olevan jonkin verran entsyymiä inhiboivaa aktiivisuutta (Moorman, A.R., ja Abeles, R.H. J. Amer.

Chem. Soc. 104, 6785-6786, 1982).

Keksinnön kohteena ovat menetelmät, joilla valmistetaan kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä toksittomia estereitä ja suoloja, ovat: a) syklisoidaan kaavan (II) mukainen yhdiste R1

R3 H

4 79842 jossa

Rl, R2, R^ ja X tarkoittavat samaa kuin edellä ja Y on -C(0)0CH3, -C(0)0C2H5, -C(0)0H tai Tl(OC(0)CF3)2, b) yhdiste, jonka kaava on R1 0 jfVS „ - ¥ jossa R^, R2 ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan RNH2 tai AOR’ mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R ja R' tarkoittavat samaa kuin edellä, minkä jälkeen saatu seos erotetaan niin, että saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, ja haluttaessa c) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa

X on -N-R saatetan reagoimaan kaavan R'-N=C=0 mukaisen yhdisteen H

kanssa, jossa R' tarkoittaa samaa kuin edellä kaavan (I) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, jossa

X on -N-C(0)NHR', tai I

H

d) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste, : jossa X on -N-R saatetaan reagoimaan kaavan 0=C=A0R' mukaisen yhdis-l

H

5 79842

teen kanssa, jossa R' tarkoittaa samaa kuin edellä, kaavan (I) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, jossa X on -N-C(0)AOR1, tai H

e) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste muunnetaan suolakseen, f) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukaisen yhdisteen suola muunnetaan vastaavaksi vapaaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi, g) edellä esitetyllä tavalla ssadun kaavan (I) mukaisen yhdisteen happoadditiosuola muunnetaan toiseksi kaavan (I) mukaisen yhdisteen suolaksi, h) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste muunnetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi esterikseen, tai i) edellä esitetyllä tavalla saadun kaavan (I) mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävä esteri muunnetaan vapaaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi.

Tässä yhteydessä käytettynä: "Alempi alkyyli" tarkoittaa 1-8 hiiliatomista haarautunutta tai haarautumatonta hiilivetyketjua mukaan lukien, mutta näihin rajoittumatta, metyyli, etyyli, propyyli, isopropyyli, n-propyyli, butyyli, n-butyyli, sek-butyyli, isobutyyli, pentyyli, heksyyli, oktyyli ja vastaavat.

"Alempi alkoksi" tarkoittaa ryhmää -O-alempi alkyyli, jossa alempi alkyyli tarkoittaa samaa kuin edellä.

6 79842 "Alempi tioalkyyli" tarkoittaa ryhmää -S-alempi alkyyli, jossa alempi alkyyli tarkoittaa samaa kuin edellä.

"Alempi alkenyyli" tarkoittaa 2-8 hiiliatomista haarautunutta tai haarautumatonta tyydyttymätöntä hiilivetyketjua mukaan lukien, mutta näihin kuitenkaan rajoittumatta: etyleeni, 1-hekseeni, 1-buteeni, 2-buteeni, isobutyleeni, 1- penteeni, 1-hekseeni, cis-2-buteeni, trans-2-buteeni, cis-2-penteeni, trans-2-penteeni, 3-metyyli-l-buteeni, 2- metyyli-2-buteeni ja 2,3-dimetyyli-2-buteeni.

"Alempi alkynyyli" tarkoittaa 2-8 hiiliatomista haarautunutta tai haarautumatonta tyydyttymätöntä hiilivetyketjua, joka sisältää hiili-hiili-kolmoissidoksen, mukaan lukien, mutta kuitenkaan näihin rajoittumatta: asetyleeni, propyyni, 1- butyyni, 1-pentyyni, 1-heksyyni, 2-butyyni, 2-pentyyni, 2- metyyli-l-butyyni, 2-heksyyni, 3-heksyyni ja 3,3-dimetyyli- 1-butyyni.

"Valinnaisesti substituoitu alempi sykloalkyyli" tarkoittaa 3- 6 hiiliatomista tyydytettyä hiilivetyrengasta, joka on valinnaisesti substituoitu 1-5 substituentilia valittuna toisistaan riippumatta ryhmästä, johon kuuluvat alempi alkyyli, alempi alkyleeni, alempi alkoksi, amino, halogeeni, nitro, alempi alkyyliamino tai alempi dialkyyliamino. Esimerkkejä alemmasta sykloalkyyliryhmästä ovat syklopropyyli, syklobutyyli, sykloheksyyli, metyylisykloheksyyli, kloori-syklobutyyli.

"Valinnaisesti substituoitu fenyyli-alempi alkynyyli" tarkoittaa fenyylirengasta, joka on kiinnittynyt 1-6 hiiliatomiseen alkyyliketjuun ja joka on valinnaisesti substituoitu 1-3 substituentilia valittuna toisistaan riippumatta ryhmästä, johon kuuluvat alempi alkyyli, alempi alkenyyli, alempi 7 79842 alkoksi, amino, halogeeni, nitro, alempi alkyyliamino tai alempi dialkyyliamino.

"Halogeeni" tarkoittaa fluoria, klooria, bromia ja jodia. "Amino" tarkoittaa ryhmää -NH2.

"Alempi alkyyliamino" tarkoittaa aminoryhmää, joka on substi-tuoitu edellä määritellyllä alemmalla alkyylillä. Esimerkkejä alemmasta alkyyliaminosta ovat metyyliamino, etyyliamino ja n-butyyliamino.

"Alempi dialkyyliamino" tarkoittaa aminoryhmää, joka on subs-tituoitu kahdella alemmalla alkyyliryhmällä. Esimerkkejä "alemmasta dialkyyliaminosta" ovat dimetyyliamino, dipropyyli-amino ja metyylietyyliamino.

"Farmaseuttisesti hyväksyttävät toksittomat alkyyliesterit" tarkoittavat alkyyliestereitä, jotka on muodostettu tämän keksinnön mukaisista kaavojen IB ja ID vapaista hapoista. Ne ovat peräisin haarautuneista tai suoraketjuisista hiilivedyistä, joissa on 1 - 12 hiiliatomia, ja ne on muodostettu 2-amino-substituentin karboksyylihappopäähän.

Tyypillisiä farmaseuttisesti hyväksyttäviä toksittomia alkyyli-esteriryhmiä ovat esimerkiksi metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, t-butyyli-, isoamyyli-, pentyyli-, isopentyyli-, heksyyli-, oktyyli-, nonyyli-, isodekyyli-, 6-metyylidekyyli- ja dodekyyliesterit.

"Farmaseuttisesti hyväksyttävät toksittomat suolat" tarkoittavat tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, jotka säilyttävät emäyhdisteiden biologisen aktiivisuuden ja jotka eivät ole biologisesti tai muulla 8 79842 tavoin ei-toivottuja (esimerkiksi suolat ovat stabiileja).

Tämän keksinnön mukaisista yhdisteistä voidaan muodostaa kahden tyyppisiä suoloja: (1) Epäorgaanisten ja orgaanisten emästen suoloja voidaan muodostaa kaavojen IB ja IB yhdisteistä, joissa on funktionaalisena ryhmänä karboksyylihappo. (2) Happoadditio-suoloja voidaan muodostaa monien tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden funktionaaliseen amiiniryhmään.

Epäorgaanisista emäksistä saatuja farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ovat esimerkiksi natrium-, kalium-, litium-, ammonium-, kalsiuim-, magnesium-, ferro-, sinkki-, kupari-, mangaani (II)-, alumiini-, ferri-, mangaanit III)-suolat ja vastaavat. Erityisen hyvänä pidettyjä ovat ammonium-, kalium-, natrium-, kalsium- ja magnesiumsuolat. Orgaanisista emäksistä saataviin farmaseuttisesti hyväksyttäviin toksittomiin suoloihin kuuluvat primääristen, sekundääristen ja tertiääristen amiinien ja substituoitujen amiinien, mukaan lukien luonnossa esiintyvien substituoitujen amiinien, syklisten amiinien ja emäksisten ioninvaihtohartsien suolat. Tällaisista suoloista ovat esimerkkejä isopropyyliamiini, trimetyyliamiini, dietyyli-amiini, trietyyliamiini, tripropyyliamiini, etanoliamiini, 2-dimetyyliaminoetanoli, 2-dietyyliaminoetanoli, trometa-miini, disykloheksyyliamiini, lysiini, arginiini, histidiini, kafeiini, prokaiini, hydrabamiini, koliini, betaiini, ety-leenidiamiini, glukosamiini, metyyliglykamiini, teobromiini, puriinit, piperatsiini, piperidiini, N-etyylipiperidiini, polyamiinihartsit ja vastaavat. Erityisen hyvänä pidettyjä orgaanisia toksittomia emäksiä ovat isopropyyliamiini, dietyyliamiini, etanoliamiini, piperidiini, trometamiini, disykloheksyyliamiini, koliini ja kafeiini.

Farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja muodostetaan epäorgaanisten happojen, kuten suolahapon, bromivety-hapon, rikkihapon, typpihapon, fosforihapon ja vastaavien 9 79842 kanssa ja orgaanisten happojen kanssa. Näitä orgaanisia happoja ovat esimerkiksi etikkahappo, propionihappo, glykoli-happo, palorypälehappo, oksaalihappo, omenahappo, maloni-happo, meripihkahappo, bentsoehappo, kanelihappo, manteli-happo, metaanisulfonihappo, etaanisulfonihappo, p-tolueeni-sulfonihappo salisyylihappo ja vastaavat.

Glysiiniä lukuunottamatta kaikki alfa-aminohapot sisältävät vähintään yhden asymmetrisen hiiliatomin. Tämän seurauksena ne ovat optisesti aktiivisia ollen joko D- tai L-muodossa tai raseemisena seoksena. Eräät esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan siten valmistaa optisesti aktiivisessa muodossa tai raseemisina seoksina. Esillä oleva keksintö käsittää patenttivaatimuksissa kuvattujen yhdisteiden kaikki optiset isomeerit sekä raseemiset seokset.

Nimitys "eläin (eläimet)" viittaa ihmisiin sekä kaikkiin eläinlajeihin, erityisesti nisäkkäisiin (esimerkiksi koirat, kissat, hevoset, karja, siat jne.), matelijoihin, kaloihin, hyönteisiin ja helminttoihin.

Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä kutsutaan 4H-3,1-bents-oksatsin-4-oneiksi käyttämällä aikaisemmin esitettyä numerointijärjestelmää.

Esimerkiksi kaavan I mukainen yhdiste, jossa X on iropropyyli-amino, R-*- on metyyli ja ja R^ tarkoittavat vetyä, on nimeltään 2-isopropyyliamino-5-metyyli-4H-3,1-bents-oksatsin- 4-oni.

Kaavan I mukainen yhdiste, jossa ryhmällä X on kaava -NR'COR", jossa R' ja R" tarkoittavat kumpikin metyyliä, r! on metyyli ja ja R^ tarkoittavat vetyä, on nimeltään 2-(N-metyyliasetyyliamino)-5-metyyli-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-oni.

10 79842

Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R3-, R2 ja R3 tarkoittavat kukin vetyä ja ryhmällä X on kaava -OAR', jossa A on L-leusiini ja R' on metyyli, on nimeltään N-(5-etyyli-4H- 3,l-bentsoksatsin-4-oni-2-yyli)-L-leusiinimetyyliesteri.

Keksinnön hyvänä pidettyyn aliluokkaan kuuluvat kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R^ on alempi alkyyli, kaikkein parhaiten metyyli tai etyyli. R2 ja R3 voivat, vaikkakaan niiden ei täydy, tarkoittaa vetyä.

Toisen hyvänä pidetyn keksinnön aliluokan muodostavat kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R2 ei ole vety. Näistä kaikkein parhaimpina pidetään yhdisteitä, joissa R2 on alempi alkyyli. Kaikkein parhaiten metyyli tai etyyli, alempi alkoksi, kaikkein parhaiten metoksi, hydroksi, alempi tioalkyyli tai -(N(R')2- Näistä kaikkein parhaimpana pidettyjä R2-substituentteja ovat metyyli, etyyli, metoksi ja amino. R3· ja R3 voivat, vaikkakaan niiden ei täydy, tarkoittaa vetyä.

Hyvänä pidetyn keksinnön aliluoka muodostavat myös kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa sekä R3- että R2 eivät ole vetyjä. Näistä kaikkein parhaimpina pidetään yhdisteitä, joissa R^ on aiempi alkyyli ja R2 on alempi alkyyli, alempi alkoksi, hydroksi, alempi tioalkyyli tai -N(R')2· Näistä pidetään kaikkein parhaimpina niitä kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R3· on metyyli tai etyyli ja R2 on metyyli, etyyli, metoksi tai amino. Tässä aliluokassa R3 on parhaiten vety.

Tällä hetkellä kaikkein parhaimpina pidettyjä keksinnön mukaan saatuja yhdisteitä ovat: n 79842 2-isopropyyliamino-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 5-etyyli-2-isorpopyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 7-asetyyliamino-2-iropropyyliamino-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-oni; 7-amino-2-isopropyyliamino-4H-3,1-bentsoksats in-4-oni; 2-isopropyyliamino-5-metoksi-4H-3,1-bentsoksats in-4-oni; 2-isopropyyliamino-8-metyyli-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni; 7-etyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni; 7-(3-isopropyyliureido)-2-isopropyyliamino-4H-3,1-bents-oksatsin-4-oni; 7.8- dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-oni; 5.8- dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatin-4-oni; 5,7-dimetyyli-2-isorpropyyliamino-4H-3,1-bentoksatsin- 4-oni; 2-n-butyyliamino-5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-8-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-5,7-dimetyyli-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-oni; 2-n-butyyliamino-8-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 7-amino-2-n-butyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-bentsyyliamino-8-metyyli-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-bentsyyliamino-6,7-dimetoksi-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-oni; N-(5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni-2-yyli)-L-leusiinimetyyliesteri; N-(5,7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-leusiinimetyyliesteri; ja N-(5-etyyli-4H-3/l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)—L—leusiini-metyyliester i; 2-isopropyyliamino-5-metyyli-7-metoksi-4H-3,1-bentsoksatsin- 12 79842 4- oni ; 5- etyyli-2-isopropyyliamino-7-metoksi-4H-3,l-bentsoksatsin-4 - ο π i ; 2-isopropyyliamino-5-metyyli-7-amino-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-oni ; 7-amino-5-etyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,1-bentsoksatsin-4 - o n i ; N-(6,7-dimetoksi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-D- fenyyliglysiinimetyyliesteri; N-(5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-D-fenyyli-gly s i in i me t y y 1 ies ten ; N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-4-aminovoihappo; N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyii)-D-fenyyliglysiini-metyyliesteri ; N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-propyyli-L-leusyyli-glysiiniamidi ; • M_(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-E-prolyyli-L-leusiini- :· amidi ; N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)“D-le'Jsiinimetyyli-esteri ; N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-D,L-fenyyliglysiini-metyyliesteri.

Valmistusmenetelmät

Esillä olevan keksinnön mukaiset uudet yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät esterit ja suolat esitetään kaavat la R1 0

(oxS

jossa : on vety tai alempi aikyyli; i3 79842 2 3 R ja R ovat kukin toisistaan riippumatta vety, halogeeni, alempi alkyyli, hydroksi, alempi a 1 k o k s i , alempi tioalkyyli, -NO -N ( R ’ ) -NR ' COR ' , -NHCON(K'),; tai -NHC00R ' , edellyttäen, että ainakin yksi ryhmistä R , R ja R ei ole vety, kun X on NHR tai NR'COR' ' ; ja X on radikaali valittuna ryhmästä, johon kuuluvat:

V T

-N-R, -N-C-R", -AN(R')2 -AOR’ n ia

0 J

(A) (B) (C) (D) jossa • „: R on alempi alkyyli, alempi alkenyyii, alempi alkynyyli, valinnaisesti substituoitu alempi sykloalkyyli, valinnaisesti substituoitu f eny y 1 i - a 1 empi alkyyli; kukin R' on toisistaan riippumatta vety tai alempi alkyyli ; tai alempi alkenyyii tai alempi alkynyyli, jossa tyydyttämätön sidos on vähintään yhden hiilen päässä 0- tai N-atomista; kukin R'' on toisistaan riippumatta R, alempi alkoksi, NHR' tai AOR' ; ja A on aminohappotähde tai peptidi, jossa on 2 - 3 aminohappotähdettä.

A. Yhdisteet, joissa X on NHR (kaava IA)

Keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa X on -NHR (kaavan IA yhdisteet), voidaan valmistaa millä tahansa kolmesta menetelmästä, jotka on esitetty reaktiokaavioissa I ja : II. Alan ammattimies voi helposti tehdä valinnan näiden menetelmien välillä, tavallisesti riippuen lähtöaineiden saatavuudesta.

14 79842

REAKTIDKAAV10 I

81 0 Γ O I A-'Me

2r \ ^A

R . NH

k3 (iv) ; R-NI = C = 0 (V) Ψ

Ft1 0 R1 n ! 7 nh~r ? 0 A / ^ ί I1 r' (III> --· O I UMe --> fAA^OMe 2 A A (Y=H) - 0 ; R l^-c-o «A'V^-b

: R3 k3 H H

-- (II) (VI) v V.

., fs [: f O I >

:-. R2 A \N^XN-R

. 1,3 fc.

(IA) ; Reaktiokaauion I mukaisesti valmistetaan kaavan IA yhdisteet syk 1isoimalla vastaava kaavan VI mukainen ureido-bentsoaatti rikkihapolla. Ureido-bentsoaatti voidaan valmistaa jommalla kummalla kahdesta menetelmästä, riippuen lähtöaineiden saatavuudesta.

Kun kukin R * , ja H3 on vety, voidaan yhdiste UI

2 valmistaa helposti kondensoimalia 2-karbornetoksi fenyy11- is 79842 isosyanaatti (kaava II, jossa Y on vety) sopivan kaavan III mukaisen amiinin kanssa. 2-karbometoksifenyyli-isosya-naatti on helposti saatavissa kaupallisesti, kuten useimmat kaavan III mono-a1 kyy1iamiinitkin.

Yhdisteiden II ja lii kondensointi suoritetaan tarkoituksenmukaisesti saattamalla reaktiokomponentit yhteen inertin orgaanisen liuottimen, kuten eetterin, tetrariydrofuraanin, pentaanin, heksaanin ja vastaavien alifaattisten hiilivetyjen, bentseenin ja tolueenin läsnäollessa. Parhaana pidetty liuotin on tetrahydro furaani. Reaktio tapahtuu huoneen lämpötilassa noin 3 - 48 tunnin aikana, tavallisesti noin 6 tunnissa. Saatu kiinteä aine eristetään ja puhdistetaan tavalliseen tapaan.

Edellistä reaktiota ja jäljempänä kuvattuja reaktioita toteutettaessa voidaan valmiiden yhdisteiden ja välituotteiden eristäminen ja puhdistaminen suorittaa millä tahansa alalia : tunnetulla sopivalla erotus- tai puhdistusmenetelmällä, kuten esimerkiksi suodattamalla, uuttamalla, kiteyttämällä, pylväskromatografisesti, ohutlevykromatografisesti tai paksulevykromatografisesti, suuren suodatuskyvyn neste-kromatografialla tai näiden menetelmien yhdistelmällä. Yksityiskohtaisempia kuvauksia sopivista erotus- ja eristys-menetelmistä voidaan löytää jäljempänä esitetyistä esimerkeistä. Kuitenkin voidaan käyttää myös muita vastaavia erotus- tai eristysmenetelmiä.

Edellä kuvattua menetelmää voidaan käyttää myös kaavan

» 12 UI mukaisten yhdisteiden valmistamiseen, joissa R , R

3 ja R -substituentit tarkoittavat muuta kuin vetyä. Eri tavoilla substituoituja 2-karboksimetoksifenyyli-iso-syanaatti-lähtöaineita voidaan valmistaa saattamalla vastaavasti substituoitu metyyliantranilaatti reagoimaan fosgeenin tai trikloorimetyyliklooriformaatin kanssa kirjallisuudesta tunnetuilla menetelmillä, esimerkiksi N.P. Peet ja S.

Sunder (J. OrqChein. , 39, 1931 (1974). Kaavan II mukaisen substituoidun 2-karboksimetoksifenyyli-isosyanaatin syntee sistä on annettu esimerkki valmistusesimerkissä I.

ie 79842 ei;_______ 2. Kaavan VI mu k aine'n ureido-bentsoaatti voidaan vaihtoehtoisesti valmistaa saattamalla metyyli-2-aminobentsoaatti (kaava IV) reagoimaan kaavan V mukaisen isosyanaattiyhdisteen kanssa käyttämällä E.P. Papadopoulos ' in et ai. kuvaamaa menetelmää (Journal of Heterocyclic Chemistry, 298, 1982), jota on havainnollistettu valmistusesimerkissä V. Eri tavoilla substituoituja metyyli 2-aminobentsoaatteja (metyyli-antra nila a11eja ) on kaupallisesti saatavissa tai ne voidaan valmistaa käsittelemällä vastaava antraniilihappo diatso-metaanilla inertissä orgaanisessa 1iuottimessa, kuten tetrahydrqfuraaniss a tai parhaiten eetterissä noin 0°C:ssa.

Tämä on standardimenetelmä metyyliestereiden muodostamiselle.

" Esimerkki kaavan IV mukaisen yhdisteen valmistamisesta tällä menetelmällä on kuvattu valmistusesimerkissä II.

Eri tavalla substituoituja metyyli 2-aminobentsoaatteja voidaan vai h toe h toisesti valmistaa käsittelemällä vastaava isatoni-anhydridi metunolilla emäksen, kuten natriummetoksidin tai dimetyyliaminopyridiinin läsnäollessa, parhaiten dimetyyli-aminopyridiinin läsnäollessa, kirjallisuudesta tunnetuilla menetelmillä, esimerkiksi M.C. Venuti, Synth esis , 266 ( 1982 ), R.P. Straiger ja E.B. Miller, J. Org. Chem , 24, 1214 (1959). Kaavan V mukainen isosyanaatti on joko saatavissa kaupallisesti tai se voidaan valmistaa saattamalla vastaava amiini reagoimaan fosgeenin tai trikloorimetyylikloorifor-maatin kanssa standardimenetelmillä, kuten menetelmällä, joka on esitetty yksityiskohtaisesti valmistusesimerkissä m.

Jommalla kummalla edellä kuvatulla menetelmällä valmistettu kaavan VI mukainen urea-bentsoaatti syklisoidaan sen jälkeen väkevässä rikkihapossa niin, että saadaan kaavan IA mukaiset yhdisteet. Reaktio tapahtuu huoneen lämpötilassa samalla sekoittaen. Reaktio tapahtuu loppuun noin 1-12 tunnissa, tavallisesti noin 2 1/2 tunnissa. Sen jälkeen reaktioliuos n 79842 kaadetaan jääkylmään emäksiseen liuokseen, kuten natriumbikarbonaattiin tai kaliumbikarbonaattiin, parhaiten natrium-bikarbonaattiliuokseen. Kaavan IA mukainen lopputuote eristetään tämän jälkeen tavanomaisin keinoin.

3. Kaavan IA mukaiset yhdisteet voidaan vaihtoehtoisesti valmistaa reaktiokaaviossa II esitetyllä menetelmällä.

REAKTIQKAAVIQ II

R1 0 R1 Q

! II l [cl --—.-> I c |

R 1 ^H2 O ! \ R2^ N

r5 >3 V-, (νΙΙ) Γ (VIII) { O \ V o^^ci VI/ rnh2 ψ (III) R1 0

<-v-\ AA • :<,Ά ' IM

- r AAAn-r μ \ (IA)

Reaktiokaaviossa II valmistetaan ensin yhdiste VIII, joka on valinnaisesti substituoitu 2-(l-bentsotriatsolyyli)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, käsittelemällä sopivasti substituoitu antruliinihappo (yhdiste VII) noin kahdella mooliekvi-valentilla 1-bentsotriatsoli-karboksyylitiappokloridia is 79842 noin ka li den trietyyiiamiinimooliekvivalentin läsnäollessa inertissä liuottimessa, kuten bentseenissä, tetrahydrofuraanissa tai parhaiten tolueenissa, noin -10 - +10°C:ssa, parhaiten 0°C:ssa, n oi ti 2 - 8 tunnin, parhaiten noin 4 tunnin aikana. Reaktio suoritetaan edullisesti menetelmällä, joka on kuvattu artikkelissa: 1. Butala et ai. , Croatica Chemica Acta, 54:1, ss. 105-108, (1981) ja jota on kuvattu valmistusesimerkissä VII.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseen käytetyt subs tituoidut antra 1iιmhapot (kaava VII) ovat joko kaupallisesti saatavissa tai ne voidaan valmistaa alalla yleisesti tunnetuilla menetelmillä. Kaupallisesti saatavissa olevia antraliinihappoja ovat mm.

3- metyy1i-antranii1ihappo, 4-metyyliantraniilihappo, 5-metyyli-antranii1ihappo, 6-metyy1i-antranii1ihappo, 5-jodi-antranii1ihappo,4-nitro-antranii1ihappo, 4,5-dimetoksi-antraniilihappo. Luettelo kaupallisesti saatavissa olevista : antraniilihapoista on saatavissa julkaisusta: Chem. Sourees- U.S.A., 24. painos, 1983, Directoreis Publishing Company, Inc., Ormond Beach, Florida. Antraniilihapot, joita ei kaupallisesti ole saatavissa, voidaan helposti valmistaa alalla tunnetuilla menetelmillä. Sopivia menetelmiä ovat esimerkiksi: B.R. Baker, et ai . , J. Org. Chem., 17_, 141, (1952) ja L.A. Paquette, et ai., J, Am. Chem. Soc. 99, : 3734, (1981). edellisessä menetelmässä valmistetaan isatiini substituoidusta aniliinijohdoksesta. Antraniilihappo saadaan hapettamalla tämän jälkeen isatiini. Jälkimmäisessä menetelmässä käytetään vastaavan aromaattisen nitrojohdoksen pelkistämistä antranii1ihapoksi. Näitä menetelmiä on edelleen kuvattu valmistusesimerkissa VI.

Sopivan kaavan III mukaisen amiinin reaktio sopivasti substituoidun 2-(l-bentsotriatsolyyli)-4H-3,l-bentsoksatsin- 4- onin (kaava VIII) kanssa suoritetaan tarkoituksenmukaisesti yhdistämällä noin puoli mooliekvivalenttia reaktiokomponent-teja inertin orgaanisen liuottimen, kuten kloroformin, i9 79842 tolueenin tai parhaiten metyleenikloridin läsnäollessa.

Kun muodostunut bentsotriatsoli poistetaan, saadaan tästä reaktiosta substituoitu kaavan IA mukainen 4H-3,1-bents-oksa t s in-4-oni.

0 I! B. Yhdisteet .joissa X on -NR'CR11 (kaava IB)

Seuraavassa reaktiokaaviossa III on esitetty, että keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa X on -NR'COR'' (kaavan IB yhdisteet), valmistetaan vastaavista kaavan IA yhdisteistä jommalla kummalla kahdesta menetelmästä riippuen ryhmän R * ' määritelmästä. Kaavan IB mukaisista yhdisteistä, joissa -j R1' on sama kuin R, käytetään merkintää kaava IB-1 ja kaavan IB mukaisista yhdisteistä, joissa R'' on NHR’ ja AOR', käytetään vastaavasti merkintää kaava IB — 2 ja kaava I B-3 .

ζζ____ 20 79842

REAKTIOKAAVIO III

R1 0 R1 0 Λ J JL 1 J° ^ J (RCO) 0 ^ 1 J I, R3 R [* A · (IA) \ (IB-1) N. 0 = C= AOR ’ R'-N=C=0 \ (XIV) (ix) X.

ψ N.

R1 0 R1 0 J 1 Λ Λ ΧΛ1 fZkA l

R^ Xt XNT XlHR' Rz X XN' xA0R

•'I 1 I

R3 R’ R3 R’ (IB-2) (IB-3)

Edellä olevassa reaktiokaaviossa valmistetaan kaavan IA mukainen haluttu yhdiste osassa A kuvatuilla menetelmillä tai millä tahansa muulla menetelmällä, joka voi siitä käydä ilmi. Kun kaavan IA mukainen yhdiste käsitellään sopivalla anhydridillä ja pyridiinillä katalyyttisen di-metyy1iaminopyridiinimaar an läsnäollessa, se muuntuu vastaavaksi kaavan IB-1 mukaiseksi amidojohdoksekseen. Vaihtoehtoisesti, kun kaavan IA mukaista yhdistettä refluksoidaan inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten bentseenissä, tetrahydrofuraanissa tai esimerkiksi tolueenissa yhdessä kaavan IX mukaisen isosyanaatin kanssa (jossa R1 * on NHR'), muodostuu vastaava urea-johdos eli kaavan IB-2 mukainen 2i 79842 yhdiste (jossa R'' on NHR'). Samalla tavoin kuin kaavan IA mukaista yhdistettä refluksoidaan inertissä orgaanisessa 1iuottimessa, kuten bentseenissä, tetrahydrofuraanissa tai parhaiten tolueenissa yhdessä kaavan XIV mukaisen isosyanaatin kanssa, muodostuu vastaava yhdisteen IA mukainen ureajohdos eli kaavan IB-3 mukainen yhdiste. Kaavan IX ja kaavan XIV isosyanaatit ovat helposti saatavissa kaupallisesti tai ne voidaan valmistaa käsittelemällä vastaava amiinihydrokloridi dikloorimetyy1ik 1ooriformaati1la diok-saanissa noin 50-70°C:ssa, parhaiten 60°C:ssa noin 4 -10, tavallisesti 6 tunnin aikana. Tämä menetelmä suoritetaan seuraavassa artikkelissa esitetyllä menetelmällä: K. Kurita, T. Matsmura ja Y. Ivi/akuren, J. Orq. Chem. 41, 2070, (1976 ).

Sitä on edelleen kuvattu valmistusesimerkeissä III ja " IX.

: C. Yhdisteet, joissa X on — A N(R' ) (kaava IC)

Keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa ryhmällä x on kaava -AN(R') (kaavan IC yhdisteet) valmistetaan reaktiokaavion IV mukaisesti kaavan 11 mukaisesta vastaavasta sopivasti substituoidusta 2-karboksimetoksifenyyii-isosyanaatista: 22 79842 REAKTIOKAAVIO II/ r1 O oi n

ΛΑ» Λ J

2X X °° ^ I ° f? R ji N = c=0 R2'^xV^Xn^''anh U ! 2

R3 13 H

<“> / (XI)

/' I

^./NaOH H2S0^ .: X \/ ·: R1 0 nl n

In ? Q

I il i H

-- /V'OH EDCtBi DDC

;· I o | q -=» I o j " ! N-^ANH2 R2 ύ' Nj^Nanh, i - H c R 3 (XII) (IC) Tässä reaktlokaaviossa valmistetaan kaavan XI mukaiset yhdisteet kondensonnalla valinnaisesti substituoitu kaavan 11 mukainen 2-karboksimetoksifenyyli-isosyanaatti ja kaavan X mukainen am i n o li a p p oa m i d i tai peptidiamidi inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten esimerkiksi tetrahydro-: furaanissa, dimetyy11formamidissa tai tetrahydrofuraani : dimetyyliformamidi-koliuotinsysteemissä. Kaavan X mukaiset aminohappoam idit ovat kaupallisesti saatavissa olevia. Dipeptidiamidit voidaan helposti valmistaa käsittelemällä aminohapon karbobentsyy1ioksijohdos yhdellä mooliekviva-lentilla 1,1 - karbonyy1idi-imidatso 1 ia Huoneen lämpötilassa 1 - 6 tunnin ajan, parhaiten 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Saatu asyyli-imidatsolijohdos saatetaan tämän jälkeen 23 79842 reagoimaan halutun aminohappoamidin kanssa niin, että saadaan dipeptidiamidin karbobentsyy1ioksijohdos . Tämän jälkeen hydrataan dipeptidiamidin karbobentsyylioksijohdos 2 5 % palladiumhydroksidi/hiilellä noin 2,1 - 2,8 kp/cm vetypaineessa , minkä jälkeen eristetään ja kiteytetään uudelleen, jolloin saadaan vastaava dipeptidiamidi. Tämä dipeptidiamidien synteesimenetelmä on kuvattu kirjallisuudessa: Gross ja Meienhofer: The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Academic Press, New York, 1981.

Kaavan X mukaisten dipeptidien synteesiä on edelleen kuvattu valmistusesimerkisaa VIII.

Monia tripuptidejä on saatavissa kaupallisesti ja nämä voidaan helposti muuntaa vastaaviksi peptidiä tn ideiksee n alalla tunnetuilla menetelmillä. Tyypillisiä tällaisia muuntamismenetelmiä on esitetty teoksessa: Greenstein ja Winitz, Chemistry of Amino Acids, osa 2, s. 1110 ja s. 1187 (John Wiley & Sons, Inc., N.Y., 1961). Tetrapeptidejä ja pentapeptidejä voidaan syntetisoida alalla tunnetuilla vakiomenetelmillä. Peptidien synteesiä on parhaiten kuvattu teoksessa: Greenstein & Winitz, ibid. Yksityiskohtainen luettelo n-karbobentsoksi-suojatuista peptideistä on esitetty edellä mainitun viitteen sivuilla 1112-1148. Nämä synteettiset n-karbobentsoksi-suojatut peptidit voidaan helposti muuntaa - peptidiamideiksi ja estereiksi, joilla on vapaa aminopää, hydraamalla katalyyttisestä palladiumhydroksidi/hiilellä. Valmistusesimerkissä VIII on havainnollistettu suojauksen poistamista N-karbobentsoksi-suojatuista peptideistä katalyyttisen hydrauksen avulla.

Saatu kaavan XI mukainen yhdiste eli 1-N-(2-karbometoksi fe-nyyli)-karbamoyyli-aminohappoamidi muunnetaan tämän jälkeen vastaavaksi kaavan 1C mukaiseksi yhdisteeksi jommalla kummalla jäljempänä kuvatulla menetelmällä.

Kun aminohapon tai funktionaalisen peptidyyliryhmän amino-pää (tässä yhteydessä määritelty merkinnällä "A") on N-disubsti- 24 79842 tuoitu aminohappojondos, kaavan IC mukainen yhdiste valmistetaan parhaiten hydrolysoimalla vastaava kaavan XI mukainen yhdiste ja tämän jälkeen de hydra toi malla ja syklisoimalla saatu kaavan XII mukainen yhdiste, Esimerkkejä N-disubsti-tuoiduista aminohappojohdoksista ovat pruliini ja N-metyyli-leusiini. Nämä ovat aminohappojohdoksia, joissa aminohapon N-päässä on funktionaalinen sekundäärinen amiiniryhmä. Erilaisten N-disubstituoitujen aminohappojen synteesi voidaan suorittaa millä tanansa monesta alalla tunnetusta menetelmästä. Kts. esimerkiksi N.L. Benoiton et ai, Can.

J. Chem. , 1915 ( 1973 ); 1968 ( 1971 ); 2562 ( 1973 ), 916 ( 1977 ), sekä Greenstein ja Winitz, Chemistry of the Amino Acids, osa 3, s. 2751 (John Wiley and Sons, New York, 1961).

( Kaavan XI mukaisen yhdisteen hydrolyysi suoritetaan saatta- :· maila tämä reagoimaan noin yhden moo 1ie kviva1entin kanssa : natriumhydroksidia huoneen lämpötilassa noin 4 tunnin - 3 päivän aikana, tavallisesti noin 6 tunnin aikana, jolloin saadaan vastaava kaavan XII mukainen l-N-(2-karboksifenyyli)~ karbamoyy1iamidi. Kaavan XII mukainen happojohdos reagoi sen jälkeen dehydratointiaineen, kuten N,N-disykloheksyyli-karbodi-imidin (DDC) tai parhaiten 1-(3-dimetyy1iaminopro-pyy1i)-3-etyy1ikarbodi-imidin (EDC) kanssa, jolloin saadaan '· kaavan IC mukainen 4H-3,1 -b en t s oksa t s in-4-on i . Tämä reaktio suoritetaan inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten kuivassa tetranydrofuraanissa noin 15 - 40°C:ssa noin 3 - 24 tunnin aikana, tavallisesti noin 6 tunnin aikana. Lopputuote eristetään tavanomaisin keinoin.

Vaihtoehtoisesti, kun "A"-osan amino-pää on primäärinen amiini, kuten tavallisesti on asianlaita, kaavan XI mukainen yhdiste parhaiten syklisoidaan väkevässä rikkihapossa, jolloin saadaan vastaava kaavan IC mukainen 4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni. Reaktio tapahtuu väkevässä rikkihapossa noin 0 - 30°C:ssa, parhaiten noin 25°C:ssa, noin 2 - 12, tavallisesti noin 3 tunnin aikana. Kaavan IC mukainen 25 79842 lopputuote eristetään tämän jälkeen tavanomaisin keinoin.

Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa X on ANH^, voidaan myös valmistaa saattamalla kaavan X mukainen amino-happoamidi tai peptidyyliamidi reagoimaan kaavan VIII mukaisen yhdisteen kanssa, kuten rea ktioka aviossa VI on havainnollistettu ryhmän AOR' suhteen. Tämän reaktion yksityiskohtia on kuvattu osassa D ja esimerkissä VIII.

D. Yhdisteet, joissa X on AOR1 (kaava ID) Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa X on AOR', voidaan valmistaa jommalla kummalla kahdesta menetelmästä, -· kuten on havainnollistettu reaktiokaavioissa V ja VI.

26 79842 REAKTIOKAAVIO \1 R1 0 ! 1

A

° J°x;ä> J>3 1 !

(II) R1 P

AOR' L Jj C0C12

v (XIII) AAv" A)Me I

V I o !

R1 0 XNH2 V

A ii 1 3 A ΆΑ)Μθ R 0 = C = AOR1 O J o ^-ΓΓν)- (XIV) R 2ΆΑΑ ^ AA 0 R ’ I, H ( XV)

H2soA

Ψ R1 0

AA

ini °, ! ^ i a R2'\A\Ny ^AOR’ l* (ID)

Edellä on havainnollistettu, että kaavan ID mukaiset yhdisteet valmistetaan kondensoima1la sopivasti substituoitu kaavan II mukainen 2-karboinetoksifenyyli - isosyanaatti kaavan XIII mukaisen aminohappoesterin tai peptidiesterin suolan kanssa, minkä jälkeen syklisoidaan rιkkinapo1la . Kaavan XIII mukaisia aminohappoestereitä on saatavissa kaupallisesti kuten myös monia di- ja tripeptidiestereitä. Ne, joita ei ole saatavissa, sekä pidemmät tetra- ja penta-aminohappo- 27 79842 esterit voidaan helposti valmistaa yleisesti tunnetuilla ja käytetyillä menetelmillä, esimerkiksi menetelmillä, joita on kuvattu julkaisuissa Greenstein ja Winitz Chemistry of the Amino Acids, osat 1, 2 ja 3, John Wiley and Sons Inc., Neu/ York, 1961; sekä Gross ja Meienhofer: The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology , Academic Press, Net/ York, 1981 Esimerkiksi di-, tri-, tetra- ja pentapeptidit voidaan syntetisoida standardimenetelmillä ja tämän jälkeen muuntaa estereiksi. Kuten jo edellä todettiin tarkasteltaessa kaavan X mukaisten peptidiamidien synteesiä, voidaan N-karbobentsoksi-suojatut peptidit helposti muuntaa vapaiksi amino-päisiksi estereiksi hydraamalla kata lyy111se sti palladiumhydroksidi/hiilellä. Aminohappo- ja peptid iesterit , joita on kaupallisesti saatavissa, ovat saatavissa tavallisesti hydrokloridisuoloina ja näitä käytetään sellaisenaan vastaavien kaavan XIV mukaisten isosyanaattien valmistamiseen. Nämä suolat voidaan helposti muuntaa vapaiksi aminohappoeste-reiksi yhdellä mooliekviva1 enti1la emästä, kuten trietyyliamii-n i a .

Yhdisteiden 11 ja X1I1 reaktio suoritetaan inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten N,N-dimetyy1lformamidissa tai parhaiten tetrahydrofuraanissa huoneen lämpötilassa 3 - 16 tunnin, tavallisesti noin 6 tunnin aikana, kun reaktio on tapahtunut loppuun. Saatu kaavan XV mukainen l-i\-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-aminohappo- tai -peptidyyli-esteri eristetään sen jälkeen tavanomaisin keinoin.

Kaavan XIII mukainen aminohappo- tai peptidyy1 iesteri voidaan vaihtoehtoisesti muuntaa isosyanaatikseen (yhdiste XIV) ja saattaa tämän jälkeen reagoimaan sopivasti substi-tuoidun kaavan IV mukaisen metyy1iantra 1inaatin kanssa niin, että saadaan kaavan XV mukainen yhdiste. Yhdisteen XIII muuntaminen vastaavaksi kaavan XIV mukaiseksi isosyanaatiksi suoritetaan saattamalla aminohappoesteri reagoi- I _________ 28 7 9 8 4 2 maan fosgeenin tai djfosgeenin kanssa alalla yleisesti tunnetuilla menetelmillä, kuten on esimerkiksi kuvannut Patai julkaisussa: The Chemistry of Cyanates and their Thiol Drivatives, osat 1 ja II , John Wiley and Sons, New York, 1977. Tätä menetelmää on havainnollistettu esimerk-kimäisesti valmistusesimerkissä XI. Lisäksi kaupallisesti on saatavissa eräitä kaavan XIV mukaisia isosyanaatteja, kuten glysiinietyy 1 ie sterin isosyanaatti. Kun kaavan XIV mukainen yhdiste saatetaan tämän jälkeen reagoimaan sopivasti substituoidun kaavan IV mukaisen metyy1iantranilaatin kanssa refluksointilämpötilassa tolueenissa tai muussa inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten bentseenissä tai tetrahydro fura anissa noin 10 - 40 tunnin aikana, saadaan kaavan XV mukainen ureido-bentsoaatti. Vastaava kaavan : ID mukainen 4H-3 ,1-be ntsoksats in-4-oni saadaan syklisoimalla tämän jälkeen yhdiste XV väkevässä rikkihapossa. Reaktio : tapahtuu väkevässä rikki h apossa noi n 0 - 30°C:ssa, parhaiten noin 25uC:ssa noin 2 - 12 tunnin, tavallisesti noin 3 tunnin aikana. Kaavan ID mukainen lopputuote eristetään sen jälkeen tavanomaisin keinoin.

Keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa X on AOR', voidaan myös valmistaa saattamalla kaavan XIII mukainen amino-happoesteri tai peptidyyliesteri reagoimaan kaavan VIII mukaisen yhdisteen kanssa reaktiokaaviossa VI esitetyllä tavalla :

RtAKTI0KAAVI0 VI

R1 0 f1 il

! 11 A A

Lθ' Ί ft0RI I o T Ί I 0 1 A N;. (XIII) ^ -X, R2 i N A0R' Ä3 )-\ k3 (VIII) ( O J (10) \_ 29 79842

Kaavan VIII mukainen yhdiste eli valinnaisesti substituoitu 2-(l-bentsotriatsolyyli)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, valmistetaan osassa A kuvatulla tavalla. Yhdisteiden VIII ja XIII reaktio tapahtuu inertissä liuottimessa, parhaiten metyleeni-kloridisssa, noin 0 - 10°C:ssa ja reaktio tapahtuu loppuun noin 3-6 tunnin, tavallisesti noin 3 tunnin kuluessa. Reaktion aikana muodostunut bentsotriatsoli poistetaan selektiivisesti kiteyttämällä uudelleen tolueenista tai flash-kromatograaflsesti si 11k age e 1i11ä käyttämällä eluoin-tiaineena etyyliasetaatti-heksaania tai tavanomaisella pa ksukerrosk routa t ogra f ia 11 a si 1 i ka gee 1111 ä . Tätä kaavan ID mukaisten yhdisteiden valmistusmenetelmää on edelleen havainnollistettu esimerkissä Vili.

Kaavan ID mukaiset yhdisteet, joissa R1 on vety, voidaan : valmistaa edellisissä kappaleissa kuvatulla tavalla. Parhaiten ne kuitenkin valmistetaan seuraavassa reaktiokaaviossa VII esitetyllä menetelmällä.

30 79 842

REAKT I D K A A V 10 VII

H

Me^SiN-SiMe-j AOH;HOT s _^ Me,Si-A-0SiMe3 (XVI) 7 (XVII) R1 0

X I

r' "ΌΜ e (II) Jo j R2X\^>XN = C = 0 Ψ R1 0 R1 0 I !! I : /v\ H2S04 fjCV^OMe

I Oi J 4- I c I

r2"\^\n^\A0H r2 xn>^aoh

l· K3 H

(IB) (XVIII) Tässä reaktiokaaviussa VII saatetaan kaavan XVI mukainen yhdiste, joka on aminohapon tai peptidin paratolueenisu 1-fonihappo (HOTs)-suoia, reagoimaan silylointiaineen, kuten tnmetyylisilyylikloridin tai parhaiten heksametyylidi-silitsaanin kanssa. Paratolueenisulfonihapposuola voidaan valmistaa saattamalla sopiva happo tai peptidi reagoimaan p-tolueenisu 1 fonihapon kanssa liuottimessa, kuten dimetoksi-etaanissa A. Anieta’n ja C. Paloma'n menetelmällä, Synthesis, 1050 (1982). Tätä menetelmää on havainnollistettu esimerkki-mäisesti valmistusesimerkissä XV. Yhdisteiden XVI ja heksa-metyy1 idisi1itsaanin reaktio tapahtuu inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten metyleenikloridissä noin 20 - 3 0 0 C : s s a 3l 79842 noin 1-3 tunnin aikana. Saatu disilyloitu aminohappo tai peptidi (yhdiste XVII) saatetaan sen jälkeen reagoimaan kaavan II mukaisen 2-karbometok sife nyy1i-isosyanaatin kanssa niin, että saadaan kaavan XVIII mukainen yhdiste.

Kun yhdiste XVIII tämän jälkeen syklisoidaan väkevässä rikkihapossa, saadaan vastaava kaavan ID yhdiste, jossa R1 on vety.

E. Vaihtoehtoinen menetelmä valmistaa yhdisteitä, joissa X on NHR, AN(R') ja AOR1 (kaavat IA, IC ja ID) Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa X on NHR, AN(R') tai AOR', voidaan vaihtoehtoisesti valmistaa reaktiokaaviossa VIII esitetyllä menetelmällä: r:: ...___ 32 79842

REAKTIQKAAVΙΟ VIII

R1 ( + R -N = C=0 2,L A (V) \

Rz νΝΗλ X

R3 f (xxxvi) * £ί! *" l> Ϊ ; (xix) r ,.. ") ί 'J j + RNH2 :· v'-n = i:=o (in) jj tai T1(0CCF3)3 (XXXV) {AOR’ *HC1} (XIII) w Ύ

R1 0 R1 P

X JL^ * Tl(O^CF ) -- > PdCl, l<. ' 0 3 2

2K'' A. X < L1Ci· 2X X J

R X * Co) MgO R V X'X

R3 I5 H

(XXI) (XX) Tässä menetelmässä kaavan XIX mukainen fenyyliurea tallium-käsitellään talilumtrifluoriasetaatilla trifluorietikkahapossa ja inertissä J luotti tuessa, kuten tetrahydrofuraanissa tai m etanolissa, falliu rn - reaktio suoritetaan tavallisesti huoneen lämpötilassa käyttämällä yksi ekvivalentti tallium-trifluonasetaattia trifluorietikkahapon 2D-prosenttisesssa liuoksessa tetrahydrofuraanissa 4 tunnin - 2 päivän aikana 33 79842 pimeässä. Normaali reaktioaika on noin 10 - 12 tuntia.

Kaavan XIX mukainen fenyyliurea voidaan helposti valmistaa saattamalla kaavan V tai XXXV mukainen isosyanaatti reagoimaan kaavan III tai XXXVI mukaisen amiinin kanssa. Alan ammattimies voi helposti valita reagenssit riippuen tavallisesti sillä hetkellä saatavissa olevista lähtöaineista. Kaavan XIX mukaisten fenyy1iureoiden synteesiä on kuvattu yksityiskohtaisemmin valmistusesimerkissä XVI.

Tallium-reaktion tapahduttua loppuun eristetään kaavan XX mukainen välituote haihduttamalla liuotin. Jäljelle jäänyt trif1uorietikk ahappo poistetaan aseotropoimalla " dikloorietaanin kanssa alipaineessa. Kaavan XX mukainen puhdistamaton ta 11ium-käsitelty yhdiste karbonyloidaan '; tetrahydrofuraanissa, kun mukana on noin 2 - 2,5, parhaiten :. 2,2 ekvivalenttia 1itiumklorid ia , noin 1 - 1,5, parhaiten I, 2 ekvivalenttia magnesiumoksidia ja noin 0,1 ekvivalenttia palladiumkloridia, 0,5 - 1,5, parhaiten 1 ilmakehän hiilimonoksidin alla. Reaktio tapahtuu tavallisesti 8-16 tunnin, parhaiten 12 tunnin aikana. Kaavan XXI mukainen yhdiste puhdistetaan tavanomaisella pylväskromatografialla ja kiteyttämällä uudelleen.

Vaikkakin muiden aromaattisten yhdisteiden tallium-käsittely on alalla tunnettu (kts. esim. R.C. Larock ja C. A. Fellows, J. Am.Chem.Soc. 104, 1900-1907, 1982 ja J.Qrq.Chem. 45, 363-365, 1980), edellä kuvattu fenyyliurean muuntaminen -f bentsoksatsinoniksi tallium-käsittelyn avulla ja tämän jälkeen suoritettava karbonylointi on uusi synteettinen menetelmä.

F. Kaavojen 1(A), 1(C) ja 1(D) mukaiset yhdisteet, joissa joko R2 tai R3 on NH2, NHC0R ' tai NHC0N(R’)2

Kaavojen 1(A), 1(C) ja 1(D) mukaiset yhdisteet, joissa joko R2 tai R3 on -NH_, -NHC0R ' tai -NHC0N(R') vpidaan 2 2 > 34 79842 aikaisemmin kuvattujen menetelmien lisäksi valmistaa reaktio-kaaviossa IX esitetyllä tavalla, jossa X on -NHR, -AINI(R') tai -AOR ' .

35 79842 »F&KT ΙΟΚΑΑ\Π_0_ϋ ^02CH3 ,.co2h ch2n2 f O H-j-O 1 X-NH2 2 -,· N H ? 2 (XXV) (XXIV)

CCI3COCI

Ψ z ^C02Me

c02Me HX I r I

>C>X S ·;·---o2N^<^““cli 0?N r 'X H j

2 (XXVI) H L

Pd/C

H2 "V o o . ίί jj ^ C)

''OMe H SO HoN-4-J^ 1 Y

i O I o -> 2 -"X

H NX. -..X (XXVIII) : 2 (XXVII) H _ C13C0C(0)C1

2. (R’ )2nH

( R 1 CO ) 2° X\^ 0

: · ϊ r:;rV

-“rtSAjL <>·>Α.....-"Τ'· (XXIX! rt («W) ],H2S°*

Yso« se 79842 r:: ____ i i 0 o 5 ('Γ ^ '· r \ - R' CON--G I ; o I f, I w

! kT >, ij L I

H N (R*

(XXX) H H

(XXXII) - Edellä osoitettiin, että kaavan XXIV mukainen nitro-substi- tuoitu antranii1ihappo voidaan muuntaa diatsometaanilla vastaavaksi metyyliesterikseen. Saatu kaavan XXV mukainen yhdiste reagoi noin 0,6 - 0,8 ekvivalentin kanssa trikloori-metyyliklooriformaattia etyyliasetaatissa niin, että saadaan vastaava karbamoyyiikloridi-johdos. Reaktio suoritetaan huoneen lämpötilassa noin 2 - 4 tunnin aikana. Tämän tyyppiset reaktiot ovat tunnettuja ja niitä on kuvattu kemiallisessa kirjallisuudessa (kts. M. Takaski, T. Junzo, Jpn. Kokai Tokyo Koho, 79 05, 942, 17.1.1979, CA. 91, 56666t). Karbamoyyli-kloridi sammutetaan kolminkertaisella amiiniy1imäärä11ä niin, että saadaan tavanomaisten puhdistusmenetelmien jälkeen kaavan XXVI mukainen urea.

.: Saatu nitroyhdiste (kaava XXVI) hydrataan sen jälkeen 10-pro sen11ise 11a palladium/hiilellä huoneen lämpötilassa noin 2,35 - 3,5 kp/cm vetypaineessa vastaavaksi kaavan XXVII mukaiseksi aminoyhdisteeksi. Hydrausliuotin on tavallisesti etyyliasetaatti tai absoluuttinen etanoli. Siinä tapauksessa, että urea sijaitsee orto-asemassa karbometoksi-ryhmään (kts. kaava XXVII) nähden, syklisoidaan yhdiste väkevässä rikkihapossa niin, että saadaan kaavan XXXVIII mukainen bentsoksatsoni. Syklisoinnin olosuhteet ovat samanlaiset kuin mitä on kuvattu osassa A. Kaavan XXVII mukainen aminoyhdiste voidaan asyloida happoanhydridillä 37 79 8 4 2 kaavan XXIX mukaisiksi yhdisteiksi. Tämä yhdiste syklisoidaan samalla tavoin väkevässä rikkihapossa kaavan XXX mukaiseksi bentsoksatsoniksi.

Kaavan XXVII mukainen aminoyhdiste muunnetaan kaavan XXXI mukaiseksi diureaksi samalla tavoin kuin yhdiste XXV muunnettiin kaavan XXVI mukaiseksi yhdisteeksi. Saatu diurea muunnetaan sen jälkeen bentsoksatsinoniksi (kaava XXXII) rikkihapossa tavalliseen tapaan.

G. Keksinnön mukaiset yhdisteet, joissa R^~ on alkyyli

, O T

(.erityisesti metyyli), R on alempi alkoksi, lv on vety ja X on -NHR , AN(K' ) tai -AOR '

Kaavojen 1(A), 1(C) tai 1(D) yhdisteet, joissa R ^ on alkyyli (erityisesti metyyli, R ^ on alempi alkoksi ja R ^ on H, voidaan aikaisemmin kuvattujen menetelmien lisäksi valmistaa reaktiokaaviossu X esitetyllä Lavalla (R on metyyli tai etyyli) .

38 79842

REAKTIQKAAVΙΟ X

p1 P1 [ 2 ^aHjAlkyylijodidi^ f Γ 2 l ( n -Bu) , NI 7 l HO- 'C02r hmpa -co2r (1) (2)

NaOH

V

R1 R1 ; i

f' ^V^C02R CD I ^y^C02R

b x <-- icT

R2 X C (0) N N "ΌΟ H

(3a) (3) i(CH^) SiN? Ψ q1 R1

Θ.-00οΡ CO?R

> I °J

'-C(3)N Lampo R2 sN=C=0 (3b) (3c) vl· 39 79842

HX Jossa X - -NHR

-AN(R')? -AOR'

V

p1 0 R1

'' π w+ · ,-CO 0R

1/- M H r" V 2 2λΛ,^ Λ <- 21 - j

R ^N' -X N-C(0)-X

i

H

1(A), 1(C) tai (D) (4,)

Yhdiste 1 (jossa R^ on alkyyli) valmistetaan suorittamalla Diela-Alder-reaktio 4-hydroksi-6-a 1 kyy1i-2-pyron in ja dimetyy1 ia setyleenidikarboksy1 a atin välillä 170°C:ssa (kts. Alder, Rickert, Bento, 1354 /1937/). Yhdiste (1) valmistetaan vaihtoehtoisesti myös suorittamalla Diels-Alder-reakt io (E)- ja (Z )-2,4-bis(trimetyy1 isiloksi)-penta~ 1,3-dienin ja dietyyiiasetyleenidikarboksylaatin välillä tolueenin refluksointilämpötilassa. Yhdiste eristetään vakiokeinuin. Yhdiste (1) muunnetaan vastaavaksi alkoksi (erityisesti metoksi)-eetteriksi käsittelemällä noin 1 ekvivalentilla natriumhydridiä, alkyyli (erityisesti metyyli) jodidilla (noin 3 ekvivalenttia) ja te tra-n-butyyl iaminonium-jodidilla (0,2 - 2 ekvivalenttia) tetrahydrofuraanin ja HMPA:n seoksessa 2 - 4 tunnin aikana. Saatu eetteri (2) eristetään alan vakiomenetelmillä. Yhdiste (2) hydrolysoidaan selektiivisesti monohapoksi (3) 2-prosenttisella natriumhyd-roksidilla veden ja alkoholin 1:1 seoksessa 3 tunnin aikana.

Saatu happo (3) puhdistetaan edelleen kiteyttämällä uudelleen ja kuivataan noin 40 - 80°C:ssa, parhaiten noin 60°C:ssa, parhaiten noin B tunnin aikana suurtyhjiössä. Monohappo käsitellään noin 1 ekvivalentilla 1, 1-karbonyyli-di-imidat-solia (GDI) huoneen lämpötilassa noin 30 minuutin aikana 40 79842 argonin alla. Lisätään 10-kertainen ylimäärä trimetyylisilyy-liatsidia jo saatua liuosta refluksoidaan noin 2 tuntia.

Aine (laihdutetaan kuiviin. Lisätään tolueenia ja saatua seosta refluksoidaan 12 tuntia. Liuos jäähdytetään ja lisätään noin 2 ekvivalenttia yhdisteitä N H ^ R , HANiR')^ tai HAOR 1 , joissa R, R' ja A tarkoittavat samaa kuin keksinnön laajimmassa suoritusmuodossa. Saatu tuote (4) eristetään normaalilla kromatograa fise 11 a tekniikalla. Yhdiste (4) muunnetaan yhdisteeksi 1(A), 1(C) tai 1(D) sekoittamalla (4) väkevässä hapossa (esimerkiksi rikkihappo) noin 3 tuntia ja eristämällä tuote vakiokeinoin.

H. Kaavan IA, IC tai ID mukaiset yhdisteet, joissa R^ on alkyyli, R" on vety ia R2 on NH NHCOR 1 tai NHCONtR'),,

Kaavan 1(A), i . L ) ja 1(D) yhdisteet, joissa R^ on alkyyli, R'3 on vety ja k*" on -MH,,, -NHCOR' tai -ISiHC0N(R')9, voidaan aikaisemmin Kuvattujen menetelmien lisäksi valmistaa seuraa-v a s s a reaktio k a,aviossa Xl esitetyllä tavalla: 4i 79842

RF AKT10KAAV 10 XI

R1 r1 r;— p°ci3 jfo H dietyy liamiini 3 N ^ XN0? °2N (10) NH2 2 (11) penlaani-2, 4 - d i 0 n i

N a 0 M e HMPA

kr : χ Ch^G R1 02n^^^3 /

Et3N /' R1 ___C0„E t Reaktio- 1(A) 2 ka av io 1X \ 1(C) ^ 1(D)

Ο,Ν ''NH

2 ( 1A ) . 2 τν:___ 42 79842

Edellä on esitetty, että kaavan 1Q mukainen fenolijohdos, joka on saatavissa joko kaupallisesti tai voidaan helposti valmistaa tunnetuilla vakiomenetelmillä, muunnetaan vastaavaksi kaavan 11 mukaiseksi kloori-yhdisteeksi 0.

Boothroyd'in ja E.K. Clark'in kuvaamalla menetelmällä J. Chem. Soc. , s. 1504, London ( 1953). Kaavan 11 mukainen yhdiste saatetaan sen jälkeen reagoimaan huoneen lämpötilassa noin 10-kertaisen ylimäärän kanssa pentaani-2,4-dionia ja noin 3-4-kertaisen ylimäärän kanssa natriummetoksidia HMPA-liuottimen läsnäollessa, jolloin saadaan 12 mukaista (2-alkyyli-4,6-diniLrofenyyli)-diasetyylimetaania. Kaavan 12 mukainen yhdiste syklisoidaan sen jälkeen väkevässä rikkihapossa noin 100 - 120°C:ssa, parhaiten 110°C:ssa, 1-5, parhaiten 3 tuntia, jolloin saadaan kaavan 13 mukainen 4-alkyyli-6-nitro-antraniili. Tätä menetelmää on kuvattu yksityiskohtaisemmin julkaisussa: I.R. Gambir ja S.S.

Joshi: Indian Chem. Soc. Journal, 41_, ss. 43-46 (1964).

Kun rengas avataan tämän jälkeen käsittelemällä kaavan 13 mukainen antraniili trietyyliamiihilla ja etanolilla refluksointilämpötilassa, saadaan kaavan 14 mukaista etyyli 4-nitro-6-alkyyli-2-ainiriobentsoaattia.

Kaavojen 1(A), 1(0) ja 1(D) yhdisteet valmistetaan kaavan 14 mukaisesta yhdisteestä rea ktiokaavιossa IX esitetyillä menetelmillä korvaamalla kaavan XXV11 mukainen yhdiste kaavan lu yhdisteellä.

Eräät tämän keksinnön mukaiset yhdisteet muodostavat happo-additiosuo 1oja , su. ne yhdisteet, joissa X sisältää emäksisen ryhmän, kuten dia 1 kyy1iaminon, arginiinin, substituoidun arginiinin, guanidiinin tai substituoidun guanidiinin, tai joissa Y on dialkyyliamino. Näissä yhdisteissä voidaan vapaa emäsmuoto muuntaa erilaisiksi happoadditiosuoloiksi käsittelemällä stökiömetrisellä ylimäärällä sopivaa orgaanista tai epäorgaanista happoa, joita ovat esimerkiksi fos forihappo, palorypälehappo, suolahappo tai rikkihappo ja vastaavat. Tyypillisesti liuotetaan vapaa emäs polaariseen orgaaniseen 43 79842 liuottimeen, kuten p-dioksaaniin tai dimetoksietaaniin ja tähän lisätään happoa. Lämpötila pidetään välillä noin 0 ja 50°C. Saatu happoadditiosuola saostuu spontaanisti tai se voidaan poistaa liuoksesta vähemmän polaarisella liuottimena .

Kaavojen 1(A) - 1(D) yhdisteiden happoadditiosuolat voidaan hajottaa vastaavaksi vapaaksi emäkseksi käsittelmällä sopivan emäksen stökiömetrisellä määrällä, kuten kaliumkarbonaatilla tai natriumhydroksidilla, tyypillisesti vesipitoisen liuottimen läsnäollessa ja lämpötiloissa välillä noin 0 - 50°C. Vapaa emäsmuoto eristetään tavanomaisin keinoin, kuten uuttamalla orgaanisella liuottimella.

Keksinnön mukaisten yndisteiden nnppoadditiosuolat voidaan vaihtaa keskenään käyttämällä hyödyksi suolojen erilaisia liukoisuuksia, haihtuvuuksia tai happojen happamuuksia tai käsittelemällä sopivasti kuormitetulla ioninvaihto-hartsilla. Suolojen keksinäinen vaihto voidaan esimerkiksi saada aikaan saattamalla kaavan 1 mukaisten yhdisteiden suola reagoimaan pienen st okiömetrisen ylimäärän kanssa happoa, jolla on alhaisempi pKa kuin lähtösuolan happokompo-: nentilla. Tämä konversio suoritetaan lämpötilassa, joka on noin 0°C:n ja menetelmän väliaineena käytetyn liuottimen kiehumispisteen välillä,

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan yhteenvetona valmistaa siten seuraavilla viimevaiheen menetelmillä: I. Kaavan VI mukainen yhdiste syklisoidaan väkevällä rikkihapolla kaavan IA yhdisteeksi; II. Kaavan III mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan VIII kanssa niin, että saadaan kaavan IA mukainen yndiste; 1

Kaavan IA mukainen yhdiste derivatisoidaan kkavan IB-1 mukaiseksi yhdisteeksi; r:: ....__ 44 79842 IV. Kaavan IA mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan IX mukaisen yhdisteen kanssa niin, että saadaan kaavan 1B-2 mukainen yhdiste; V. Kaavan XII mukainen yhdiste dehydratoidaun de h yd ratoin ti-aineella, kuten EDC:llä tai DDC:llä niin, että saadaan kaavan IC mukainen yhdiste; VI. Kaavan XI mukainen yhdiste syki isoidaan väkevällä rikkihapolla kaavan 1C mukaiseksi yhdisteeksi; VII. Kaavan XV mukainen yhdiste syklisoidaan väkevässä rikkihapossa kaavan ID mukaiseksi yhdisteeksi; XVIII. Kaavan VIII mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan XIII mukaisen yhdisteen kanssa kaavan ID mukaiseksi yhdisteeksi; ja IX. Kaavan XVIII mukainen yhdiste syklisoidaan väkevällä rikkihapolla kaavan ID mukaiseksi yhdisteeksi.

X. Kaavan I mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan hapon sto kiömetrisen ylimäärän kanssa niin, että saadaan farmaseuttisesti hyväksyttävä toksiton happoadditiosuola.

XI. Kaavan XIX mukainen yhdiste XIX tallium-käsitellään ja sen jälkeen kurbunyloidaan niin, että saadaan kaavan XXI mukainen yndiste.

XII. Kaavan XXIX taa kaavan XXXI mukainen yhdiste syklisoidaan väkevällä rikkihapolla niin, että saadaan kaavan XXX tai kaavan XXXII mukainen yndiste.

XIII. Kaavan k mukainen yhdiste syklisoidaan väkevällä rikkihapolla kaavan IA, IC tai ID mukaiseksi yhdisteeksi.

45 79842 Käyttökelpoisuus ja antamistapa Tässä yhteydessä esitettyjen 2-amino-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-onien on havaittu olevan monien erilaisten seriinipro-teaasientsyymien, mukaanlukien ihmisleukosyytin elastaasi, ihmistrombiini, ihmisurokinaasi, sian akrosiini, sian haiman elastaasi, naudan symotrypsiini ja ihmisen ja naudan trypsiini, aktiivisia inhibiit tejä. Koska nämä yhdisteet deasyloivat hitaasti erilaisia substraatteja, niiden uskotaan olevan monien muiden tyyppisten fysiologisten entsyymien, kuten kallikreiinit, plasmiini ja erilaiset plasminogeeni-aktivaattorit , hyödyllisiä inhibiittejä.

Koska entsyymireitit. liittyvät moniin erilaisiin fysiologisiin tiloihin ja tautitiloihin, on tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä monia potentiaalisia terapeuttisia käyttötapoja. Koska ne ovat erittäin voimakkaita ihmisleukosyytin elastaasin inhibiittejä, niillä voidaan esimerkiksi käsitellä ilmapöhöä, aikuisten hengityselinten sLre s sisyndroomaa ja reumatoidista artriittia. Koska ne ovat ihmisen ja naudan trypsiinin aktiivisia inhibiittejä, tämän keksinnön mukaisia 2-amino-4H-3,l-bentsoksatsi-noneja voidaan käyttää haimatulehduksen hoidossa.

Yleisesti sanoen, kun hoidetaan tautitiloja entsyymi-inhibiition avulla, on toivottavaa, että entsyymi-inhibiitti on selektiivinen kyseiselle entsyymille tai entsyymiryhmälle, joka liittyy taudin etenemiseen. Keksinnön tärkeä piirre on siten havainto, että kaavan I mukaiset yhdisteet ovat vahvasti selektiivisiä seriiniproteaasien suhteen verrattuna tioliproteaaseihin.

Viiden kertaluokan eroja on rutiininomaisesti havaittu kaavan I mukaisten yhdisteiden seriiniproteaasien vastaisen inhibiitioaktiivisuuden ja niiden tioliproteaasien vastaisen inhibiitioaktiivisuuden välillä. Tämä on hyvin tärkeä keksinnön etu, joka on odottamatonta, koska tioliproteaasit katalysoivat estereiden ja amidien hydrolyysiä mekanismien kautta, jotka ovat hyvin samankaltaiset kuin seriiniproteaaseilla .

I _____ 46 79842

Hoidettaessa tautitiloja entsyymi-inhibiition avulla on myös toivottavaa, että entsyymi-inhibiitit ovat veressä stabiileja. Tämän keksinnön toinen tärkeä piirre on siten havainto, että kaavan I mukaiset yhdisteet saadaan kestävim-miksi yhdistämällä substituentteja sopivalla tavalla 2 - , 5-, 7- ja/tai 8-asemissa.

Kaavojen IA, IB, IC ja ID mukaisten yhdisteiden on standardi-maisissa laboratoriokokeissa osoitettu inhiboivan monia erilaisia seriiniproteaasientsyymejä, mukaanlukien lhrms-leukosyytin elastaasiu, ihmistrombiinia, ihmisurokinaasia, sian akrosiinia, si a uh a iin an elastaasia, naudan kymotrypsiiniä ja ihmisen ja naudan trypsiiniä. Keksinnön mukaisia yhdisteitä, niiden suoloja, e s t. e r e 11 ä ja/tai niiden farmaseuttisia seoksia voidaan siten käyttää inhiboitaessa, estettäessä tai säädettäessä eläimillä sellaisia fysiologisia tiloja ja tautitiloja, joihin tiedetään seriiniproteaasien liittyvän, tai niitä voidaan käyttää ehkäisyaineina.

Tietämys entsyymien rooleista hyvin erilaisissa taudeissa kasvaa koko ajan. Viimeaikaisia alan kehitystä käsitteleviä review-artikkeleita ovat: "Protein Degradation in Health and Disease", Ciba Foundation Symposium 75, Excerpta Medica, Amsterdam, 1980; "Proteinases in Mammalian Cells and Tissues", A. J. Barrett, toim. North Holland Publishing Company,

Amsterdam, 1977; ja "Proteases and Biological Control", E. Reich, D.B. Rifkin ja E. Shauz, toim. Cold Spring Harbor Laboratory, 1975.

Koetulokset ovat paljastaneet monien entsymaattisten reittien roolit erilaisissa fysiologisissa tiloissa ja tautitiloissa.

Plasminogeenin aktivaattori (PA), joka on eräs seriini-proteaasi, muuntaa plasrninogeenin plasmiiniksi, joka vuorostaan on syynä fibrinolyysiin. latu prosessia voidaan käyttää monissa järjestelmissä, joissa un säädettävä paikallista proteolyysiä, mukaanlukien tulehdukset (J.D. Vassalli, 4? 79842 et ai ) Cell, _θ, 271 /1976 () ja solun kulkeutuminen ja kudosten uudelleenmuodostuminen (J.E. Valinski, Cell, 25, 471 (1981).

PA: n tuotto ja erittyminen korreloi myös eräisiin ihmisten tauteihin, kuten art riittiin (Neats, et ai., Nature /London/, 286, 891, 1980.; Hamilton, et ai. , J Lxp. Med. , 155 , 1702 /1982/) ja transformoitujen fenotyyppien ekspressioon, D.B. Rifkin, et ai . , Proteases and Biological Control, D. Rifkin, E . Reich, E. Shaw, toim. Cold Spring Harbor, 1975, s. 841-847.

Plasminogeenin aktivaattorin (kuten urokinaasi), leukosyytin elastaasin ja/tai lähisukuisten entsyymien osuudesta syöpäsolujen metastaasiin on olemassa huomattavaa näyttöä (Salo, et ai. , Int. J. Cancer, 30, 669-673, 1973; Kao, et ai.,

Biochem. Biophys., Res. Comm., 105, 383-389, 1982; Powers J.C., Modification of Proteins, R.E. Feeney ja J.R. Whitaker, toim. Adv. Chem. Ser. 198, Amer. Chem. Soc., Wash., D.C., s. 347-367, 1982), joka viittaa siihen, että tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä voi olla antimetastaattinen aktiivisuus.

Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden antiparasiittiseen rooliin viittaavia tuloksia on myös olemassa (Aoki, T., et ai . , Mol. Biochem., Parasitol , 13 , 89-97, 1983).

Pulmonaarinen enfyseeina on tauti, jolle on tunnusomaista vähitellen etenevä keuhkon elastisuuden pieneneminen, mikä johtuu keuhkojen elastiinin ja alveolien tuhoutumisesta. Yleisesti ollaan sitä mieltä, että pulmonaariseen emfyseemaan liittyviä keuhkojen parenkyyman tuhoavia muutoksia välittää suurelta osalta hillitsemätön proteolyyttinen aktiivisuus keuhkojen sidekudoksessa. (A. Janoff. Chest, 83, 54-58 /1983/). Monien proteaasien on osoitettu indusoivan emfyseema-vaurioita eläimissä, kun näitä tiputetaan keuhkoihin (V.

Marco, et ai, , Am. Rev. Respir. Dis., 104 , 595-8, 1971; P.D. Kaplan, J. Lab. Clm. Med. , 02 , 349-56 (19 7 3 )) . EEi t y i ses t i ihmisen leukosyytin elastaasin on osoitettu aiheuttavan eläimissä emfyseemaa (A. Janoff, ibid, 115, 461-78 (1977)).

r~ ----- 48 79842

Hamstereilla voidaan elastaasin indusoiman emfyseeman laajuutta merkittävästi vähentää antamalla pro fyla ktisesti elastaasin inhibiittiä (J. Kleinerman, et ai., ibid, Am. Rev. Respir.

Dis. , 121 , 381-7 , 1980).

Leukosyytin elastaasilla ja muilla tulehdusten väliteainei1la näyttää olevan oma osuutensa sellaisissa akuuteissa ja suuririskisissä taudeissa, kuten mln-syndrooma (mucocutaneous lymph node syndrome) (Rieger, et ai., Eur. 3. Pediatr., 140 , 92-97, 1983) ja aikuisten hengityselinten stressisyndrooma (Stockley, R.A., Clinical Science, 64 , 119-126, 1983; Lee, et ai. , N. Eng. J, Med . , 304, 192-196, 1981; Rinaldo, ibid, 301, 900-909, 1982.

Oraaliset antikoagulantit ovat eräitä kaikkein tärkeimmistä lääkkeistä, joilla estetään ja hoidetaan monia erilaisia laskimoiden ja vähemmässä määrin valtimoiden tromboembolisia tauteja (R.A. O'Reilly: The Pharmacological Basis of

Therapeutics", 6. painos, A.G. Goodman, L.S. Goodman, A.

Gilman, toim., 1980). Veren koaguloitumiseen johtavaan sarjareaktloon osallistuvat entsyymit ovat proteaaseja.

Veren koaguloitumisen seurauksena on fibriinin muodostuminen : sen seurauksena, että yli tusina proteiineja vaikuttaa toisiinsa proteolyytListen reaktioiden sarjassa. Näiden proteaasien inhibiition tulisi salvata fibriinin muodostuminen ja siten estää koaguloituminen. Esimerkiksi trombiinin inhibiitio rajoittaa fibriinin muodostumista ja tätä pidetään eräänä tienä tromboemboiiahoitoon.

Tällä hetkellä käytössä olevat antikoagulantit, jotka vaikuttavat hyytymistekijolhin, ei kuitenkaan ole suoraa vaikutusta. Sen vuoksi on seurattava protrombiinia, koska vitamiinin K antagonismisuus vaihtelee henkilöstä henkilöön.

Sen vuoksi tarvitaan suuresti uusia antikoagulantteja, jotka vaikuttavat suoraan. Esimerkiksi keuhkoembolia (PE) on yleinen komplikaatio, joka tavallisesti kohdistuu potilai- 49 79842 siin, jotka on otettu sairaalahoitoon muiden lääketieteellisten tai kirurgisten ongelmien vuoksi (A.A. Sasahara, et ai. , JAMA, 249, 2945 (1983) ja sen viitteet). Diagnosoimattoman ja sen vuoksi hoitamattoman PE:n kuolleisuus on suhteellisen korkea, välillä noin 18 - 35 %. Potilailla, joilla lonkka tai polvi korvataan kokonaan, on erittäin suuri riski siitä, että kehittyy syvä 1 a skimotromboo si, hoitamattomilla potilailla raportoitu esiintymistaajuus on 45 - 70 % (S. Sagar ejt_ ai . , Lance t , _1, 1151 ( 1978 )).

Haimatulehdus on tauti, joka kohdistuu suureen määrään ihmisiä, mukaanlukien potilaat, joilla on akuutti alkoholista johtuva haimatulehdus, akuutti sapen traumaattinen haimatulehdus ja 1 eikkauksenjälkeinen haimatulehdus. Lisäksi havaitaan yhä useammin akuuttia ja kroonista uusivaa haimatulehdusta alkoholismin ollessa runsasta, pelkästään U5A:ssa yli 10.000.000 alkoholistia. Geokes, et ai, on ehdottanut, että akuuttia haimatulehdusta voidaan tehokkaasti hoitaa käyttämällä "trypsiinin, kymotrypsiinin ja elastaasin pieni-molekyylipa inois ia , spesifisiä aktiivisen kohdan inhibiit tejä" , (Am. J. Pathol., 1981, 1Q5_, 31-39).

Prekursoreiden proteolyyttinen lohkeaminen on oleellinen vaihe monien eläinvirusten replikoitumisessa, ja on olemassa huomattavasti näyttöä, että proteaasi-inhibiitit voivat olla tehokkaita virustenvastaisia aineita (Korant, B.D., (1975) "Proteases and Biological Control""). Infulenssa : sisältyy tällaisiin viruksiin (Chirov. O.P. et ai. (1981) iiopor ♦ Virusol, , 677-687). Esimerkiksi Sendai-viruksessa isännän trypsiinimäinen proteaasi on oleellista infek-toitavuudelle (Scheid, A., ja Choppin, P. (1975) "Proteases and Biological Control"). Siten on järkevää olettaa, että tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä saattaa olla merkitystä virustautien parantamisessa.

Akrosiini on ainutlaatuinen seriiniproteaasi , jota on nisäkkäiden siemennesteen a k ruso meissä (L.J.D. Zoneveld (1975) τ~ ^ so 79842 "Proteases and Biological Control", s. 683-706; R.F,.

Parrish, 1 n t . J. biochem. , > 391-393 (1979)). Koska hedelmöittämiseen tarvitaan akrosiiniaktiivisuutta, se on järkevä kohde syntyvyyden säännöstelylle. Akrosiinin inhibiition tiedetään lisäksi estävän hedelmöittymisen (Zaneveld, L.J.D., et ai., ( 1979 ), Biol. Reps. 2_0, 1045-1054), mikä tukee akrosiini-inhibiittien osuutta ehkäisyaineina.

Alustavat seulontakokeet, joilla määritetään entsyymien inhibiitiop otentia a 1i, voidaan suorittaa kaupallisesti saatavissa olevilla entsyymisubstra atei1la , kuten 4-metyyli- 7-aminokumariinin tai 4-nitroaniliinin peptidyyliamideilla. Määritykset suoritetaan sekoittamalla substraatti ja mielenkiinnon kohteena oleva entsyymi sopivaan puskuriin ja seuraamalla spektrofotometrisesti entsyymin inhiboitumis-nopeutta. Reaktionopeutta seurataan jatkuvasti joko fluoresenssin (kumariinlsubstraatit) tai absorbanssin (nitro ani1idi -substraatit) avulla, kunnes saadaan vakiona pysyvä reaktio-nopeus. Sen jälkeen lisätään testattavan yhdisteen liuos sopivassa liuotti luussa, kuten 5-20-nii.liimolaarinen liuos dimetyy1isulfoksldissa ja seurataan fluoresenssin tai absorbanssin kasvua, kunnes saavutetaan uusi vakiona pysyvä nopeus. Tämä toistetaan testattavan yhdisteen useille konsentraatioille ja kyseiseen lausekkeeseen sopiva inhibiitio-vakio lasketaan epälineaarisella regressianalyysillä.

Kaavan 1 mukaiset yhdisteet on testattu tämän tyyppisissä määrityksissä. Niillä on osoitettu olevan merkittävä inhi-biitioaktiivisuus ihmisleukosyytin elastaasia, ihmistrom-biinia, inmisurokinaasia, sian akrosiinia, sian haiman elastaasia, naudan kymotropsiinia ja naudan trypsiiniä vastaan. Testitulosten perusteella eräiden kaavan I mukaisten yhdisteiden on myös osoitettu aktiivisesti inhiboivan makro faagien , syöpäsolujen ja elastaasin aiheuttamaa peruskal-von tuhoamista. Useita näitä määrityksiä on kuvattu yksityiskohtaisemmin seuraavissa esimerkeissä.

Tässä kuvattuja aktiivisia yhdisteitä ja suoloja voidaan 51 79842 antaa minkä tahansa tien kautta, jotka on hyväksytty systeemisestä aktiivisille terapeuttisille lääkkeille. Näitä menetelmiä ovat oraaliset, parentoraa 1iset ja muulla tavoin systeemiset muodot, aerosolimuodot tai tooppiset muodot.

Aiotusta käyttämistavasta riippuen käytetyt seokset voivat olla kiinteässä, puolikiinteässä tai nestemäisessä annostus-muodossa, kuten esimerkiksi tabletteina, lääkepuikkoina, pillereinä, kapseleina, jauheina, nesteinä, aerosoleina, suspensioina tai vastaavana, parhaiten täsmällisten annostusten yksinkertaiseen antamiseen sopivissa yksikköannostusmuodoissa. Seokset sisältävät tavano(naista farmaseuttista kantajaa tai apuainetta ja kaavan IA - ID mukaista aktiivista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ja lisäksi ne voivat sisältää muita lääketieteellisiä aineita, farmaseuttisia aineita, kantajia, apuaineita • jne.

Kiinteitä seoksia varten ovat tavanomaisia toksittomia kiinteitä kantajia esimerkiksi farmaseuttiset laadut seuraa-vista: Mannitoli, laktoosi, tärkkelys, magnesiumstearaatti , natriumsakariini, talkki, selluloosa, glukoosi, sakkaroosi, magnesiumkarbonaatti ja vastaavat. Edellä määritelty aktiivinen yhdiste voi olla formuloitu lääkepuikkoina käyttämällä kantajana esimerkiksi polyalkyleeniglykoleja, esimerkiksi propyleeniglykolia. Nestemäiset farmaseuttisesti annettavat seokset voidaan valmistaa esimerkiksi liuottamalla tai dispergoimalla jne. edellä määritelty aktiivinen yhdiste ja valinnaiset farmaseuttiset apuaineet kantajaan, kuten esimerkiksi veteen, suolaliuokseen, vesipitoiseen dekstroo-siin, glyseroliin, etanoliin ja vastaaviin niin, että muodostuu liuos tai suspensio. Annettava farmaseuttinen seos voi haluttaessa sisältää myös pienehköjä määriä toksittomia apuaineita, kuten kostutusameita tai emulgointiaine11a , pH-puskureita ja vastaavia, esimerkiksi natriumasetaattia, sorbitaanimonolauraattia, trietanoliamiini-natriumasetaattia , trietanoliammo-o 1eaa11ia jne. Alan ammattimiehet tuntevat, 52 7 9 8 4 2 tai ne ovat heille ilmeisiä, tällaisten annostusmuotojen varsinaiset valmistusmenetelmät; esimerkiksi kts. Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 15. painos, 1975. Annettava seos tai formulaatio sisältää kuitenkin niin paljon aktiivista yhdistettä (yhdisteitä), että tämä tehokkaasti lievittää hoidettavan kohteen oireita .

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä pidetään parhaimpana joko oraalista antarnistapaa tai nenän kautta tapahtuvaa (bron-kiaalista) antarnistapaa riippuen hoidettavan taudin laadusta.

Oraalisessa antamistavassa muodostetaan farmaseuttisesti hyväksyttävä toksiton seos lisäämällä mukaan mitä tanansa tavallisesti käytettyä apuainetta, kuten esimerkiksi seuraa-vien aineiden farmaseuttisia laatuja: mannitoli, laktoosi, tärkkelys, magnesiumstearaatti, natriumsakariini, talkki, selluloosa, glukoosi, sakkaroosi, magnesium, karbonaatti ja vastaavat. Tällaiset seokset voivat olla liuoksina, suspensioina, tabletteina, pillereinä, kapseleina, jauheina, hitaasti vapautuvina formulaatioina ja vastaavina. Tällaiset seokset voivat sisältää 1 - 95 % aktiivista ainesosaa, parhaiten 25 - 70 %.

Suun tai nenän kautta tapahtuva antaminen keuhkoihin voidaan myös suorittaa aerosolimuotojen avulla. Aerosolitavassa akviinen ainesosa annetaan parhaiten hienojakoisessa muodossa yhdessä pinta-aktiivisen aineen ja ponneaineen kanssa. Aktiivista ainesosaa on tyypillisesti 0,01 - 20 painoprosenttia, parhaiten 0,04 - 1,0 %.

Pinta-aktiivisten aineiden täytyy luonnollisesti olla toksittomia ja parhaiten liukoisia ponneaineeseen. Tyypillisiä tällaisia aineita ovat 6-22 hiiliatomia sisältävien rasvahappojen esterit tai osittaisesterit, kuten kapronihappo, oktaanihappo, lauriinihappo, palmitiinihappo, steariinihappo, linolihappo, linoleenihappo , oi esteariinihappo ja öljyhappo 53 79842 alifaattisen moniarvoisen alkoholin tai sen syklisen a n h y d -ridin kanssa, kuten esimerkiksi etyleeniglykoli, glyseroli, erytritoli, arabitoli, mannitoli, sorbitoli, sorbitolista saadut heksitolianhydridit (sorbitaaniesterit , joita myydään kauppanimellä "Spans") ja näiden estereiden polyoksietyleeni-ja polyoksipropyleenijohdokset. Voidaan käyttää myös sekaes-tereitä, kuten seka- tai luonnonglyseriä. Parhaina pidettyjä pinta-aktiivisia aineita ovat oleaatit tai sorbitaani, esimerkiksi ne, joita myydään kauppanimillä "Arlacel C" (sorbitaaniseskvioleaatti), "Span 80" (sorbitaanimono-oleaatti) ja "Span 85" (sorbitaanitrioleaatti ). Pinta-aktii-vinen aine voi muodostaa 0,1 - 20, parhaiten 0,25 - 5 painoprosenttia seoksesta.

Loput seoksesta on tavallisesti ponneainetta. Nesteytetyt ponneaineet ovat tyypillisesti kaasuja ympäristön olosuhteissa ja nestemäisiä paineen alla. Eräitä sopivia nestemäisiä ponneaineita ovat alemmat alkaanit, joissa on enintään 5 hiiltä, kuten butaam ja propaani; ja parhaiten fluoratut ja fluoriklooratut alkaanit, esimerkiksi ne, joita myydään kauppanimellä "Freon". Voidaan käyttää myös näiden seoksia.

Aerosolia valmistettaessa täytetään sopivalla venttiilillä varustettu säiliö kyseeseen tulevalla ponneaineella, joka sisältää hienojakoisen aktiivisen ainesosan ja pinta-aktiivisen aineen. Ainesosat pidetään siten korotetussa paineessa, kunnes ne vapautetaan venttiiliä käyttämällä.

Tooppisessa antamistavassa nämä seokset sisältävät tehokkaan määrän tähän luokkaan kuuluvaa yhdistettä seoksena farmaseuttisesti hyväksyttävän toksittoman kantajan kanssa. Seos sisältää tarkoituksenmukaisesti 0,1 - 10 % aktiivista ainesosaa ja loput kantajaa, parhaiten 1 - 2 % aktiviista ainesosaa. Tooppiseen appiikoimiseen sopivissa farmaseuttisissa seoksissa riippuu aktiivisen ainesosan konsentraatio käytetyn yhdisteen aktiivisuudesta sekä hoidettavasta tilasta ja kohteesta. Näiden yhdisteiden tooppiseen applikoi- 54 79842 I____ miseen sopivia kantajia tai lääkkeiden välittäjiä ovat suspensiovoiteet, voiteet, liuokset, emulsiot, liuokset ja vastaavat.

Esimerkiksi sopiva voide, joka on tarkoitettu keksinnön mukaisten yhdisteiden tooppiseen app1ikoimiseen, sisältää 15 - 45 % tyydytettyä rasva-alkoholia, jossa on 16 - 24 hiiliatomia, kuten setyylialkoholia, stearyylialkoholia, behenyy1 ia 1 koho 1 ia ja vastaavaa, ja 45 - 85 painoprosenttia glykoliliuotinta, kuten propyleenigly kolia, polyetyleenigly-kolia, dipropyleeniglykolia ja näiden seoksia. Voide voi myös sisältää 0 - 15 painoprosenttia pehmennintä, kuten polyetyleeniglykolia, 1,2,6-heksaanitriolia, sorbitolia, glyserolia ja vastaavaa; 0 - 15 painoprosenttia kytkentä-ainetta, kuten tyydytettyä rasvahappoa, jossa on 16 - 24 hiiliatomia, esimerkiksi steariini happoa, palmitiinihappoa, beheemihappoa, rasvahappoamidia, esimeriksi oleamidia, palmitamidia, stearamidia, behenamidia ja rasvahapon, jossa on 16 - 24 hiiliatomia, esteriä, kuten sorbitoli-monostearaattia, polyetyleeniglykolimonostearaattia, poly-propyleeniglykolia tai muiden rasvahappojen, kuten öljyhapon ja palmitiinihapon vastaavaa monoesteriä; ja 0 - 20 painoprosenttia penetranttia, kuten dimetyylisulfoksidia tai dime-tyyliasetamidia.

Aktiivisen yhdisteen annettu määrä riippuu luonnollisesti hoidettavasta kohteesta, taudin vakavuudesta, antamistavasta ja hoitavan lääkärin arvioinnista. Tehokas annostus on kuitenkin välillä 1 - 100 my/kg/päivä, parhaiten noin 25 mg/ky/päivä. Keskimäärin 70 ky painavalle ihmiselle tämä olisi 70 my - 7 y päivässä tai parhaiten noin 1,5 g/päivä.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä.

55 79842

UALMlSTUSESIMEKKKi I

A . Kaavan II mukaisen 6-metyy1i-2 - karbometoksifenyy1i- isosyanaatin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistaminen 11 m 1 : a a n kondensoitua fosgeenia 50 m1:s s a etyyliasetaattia lisättiin 5 g un; tyyli 2-amino-3-metyylibentsoaattia -78°C:ssa 10 ml:ssa etyyliasetaattia. Seos lämmitettiin huoneen lämpötilaan ja sen jälkeen refluksoitiin noin 1 tunti 60°C:ssa. Liuoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa 20 tuntia, mihin mennessä muodostui valkoisia kiteitä.

Liuos suodatettiin ja suodos haihdutettiin, jolloin saatiin ruskeaa kiinteätä ainetta, 6-metyy1i-2-karbometoksifenyy1i-isosyanaatti .

NMR: (delta CDC13): 2,3 (s, 3H, Ar-CH^), 3,95 (s, 3H, DCH ) , 7,0-7,A, 7,8 (m, 3H, ArH) . IR: 2250, 1705 cm"1, sp. 55-58°C .

B. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan II mukaiset yhdisteet korvaamalla metyyli 2-amino-3-metyylibentsoaatti muilla sopivasti substituoidui1la metyyliantranilasteilla : 2-karbometoksi-3-metyyli-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-4-metyyli-fenyyli-isusyanaatti; 2-karbometoksi-5-etyyli-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-3-elyyli-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-6-etyyli-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-6-propyyli-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-6-heksyyli-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-3-metoksi-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-A-etoksi-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-3-nitro-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometol<si-3-dimetyyliamino-fenyyli-isosyanaatti; 6-asetamido-2-karbornetoksi-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-6-(N-metyyli-heksaaniamido)-fenyyli-iso- syanaa t ti ; A-bromi-2-karbometoksi-fenyyli-isosyanaatti; 1.,. ____ 56 79842 2-karbometoksi-5-kloori-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-6-fluori-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-3,6-dimetyyli-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-4,5-dimetoksi-feny yli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-3,4,5-trifluori-fenyyli-isosyanaatti; 2-karbometoksi-3-kloori-6-jodi-fenyyli-isosyanaatti ; ja 2-karbometoksi-3-etyyli-3-metyyli-fenyyli-isosyanaatti.

VALMISTUSESIMERKKI II

A. Kaavan IV mukaisten metyyli-2-amino-6-metyylibentsoaatin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistaminen

Liuokseen, joka sisälsi 1,5 mg 2-amino-6-metyylibentsoehappoa eetterissä, lisättiin tipottain 0°C:ssa diatsometaanin liuos eetterissä. Lisäämistä jatkettiin, kunnes TLC-analyysin (40 % etyyliasetunl. titpeirolieetteri) perusteella reaktio oli tapahtunut loppuun (R =u,7). Ylimääräinen diatsometaani tuhottiin lisäämällä liuokseen pieni määrä silikageeliä.

Liuos suodatettiin imulla sintratun lasin läpi. Silikageeli pestiin hyvin eetterillä. Yhdistetyt eetteriuutteet haihdutettiin öljyksi. N M R (delta C D C 1 ^ ) : 2,42 (s, 3 H, C H ), 3,88 (s, 3 H, OCH ), 5,08 (lev. 2H, NH ), 6,6-7,3 (m, 3H, Ar-H). IR: 3479, 3370, 1673, 1603, 1460, 1438 cm-1.

• B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan IV mukaiset yhdisteet korvaamalla 2-amino-6-metyylibentsoehappo muilla substituoiduilla antraniilihapoilla : metyyli 2-amino-3-metyylibentsoaatti, öljynä; metyyli 2-amino-4,5-dimetoksibentsoaatti, puolikiinteänä aineena ; metyyli 2-amino-5-jco;d ibentsoaatti , sp. 84-86°C; metyyli 2-amino-4-nitrobentsoaatti, sp. 155-157°C; ja metyyli 2-amino-6-metoksibentsoaatti, öljynä.

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan IV mukaiset 57 79842 yhdisteet: metyyli 2-amino-6-etyylibentsoaatti; metyyli 2-amino-6-propyylibentsoaatti; metyyli 2-arnino-6-heksyylibentsoaatti ; metyyli 2-amino-3-metoksibentsoaattι; metyyli 2-amino-4-etoksibentsoaatti; metyyli 2-amino-3-nitrobentsoaatti; metyyli 2-amino-6-etyy1iaminobentsoaattι; metyyli 2-arnino-3-dimetyyliaminobentsoautti; metyyli 6-asetamido-2-aminobentsoaatti; metyyli 2-amino-6-(N-metyy1i-heksaaniamido)bentsoaatti; metyyli 2-ainino-4-bromibentsoaa 11 i ; metyyli 2-amino-3-klooribentsoaatti; metyyli 2-amino-6-fluoribentsoaatti; metyyli 2-amino-3,6-dimetyylibentsoaatti; metyyli 2-amino-4,5-dimetoksibentsoaatti; metyyli 2-amino-3,4,5-trifluoribentsoaatti; metyyli 2-amino-3-kloori-6-jodibentsoaatti; ja metyyli 2-amino-6-bromi-5-etyyli-3-metyylibentsoaatti.

VALMI5TU5E5IMERKKI III

A . Kaavan V ja kaavan IX mukaisen bentsyy1i-isosyanaatin ,ja lähisukuisten yhdisteiden valmistaminen

Suspensioon, joka sisälsi 12 g bentsyyliamiinihydroklondia dioksaanissa, lisättiin tipottain 8,3 g trikloorimetyylikloon-formaattia. Suosta kuumenenttiin 8 tuntia 60°C:ssa ja jäähdytettiin. Dioksuani poistettiin alipaineessa. Isosyanaatti-tuote eristettiin tislaamalla tyhjiössä, kp. 6 0 - 6 4 0 C (1 mm Hg). IR: 2260 cm'^; saanto: 6 g.

B. Satua 11a tavoin valmistetaan seuraajat kaavan \l mukaiset yhdisteet korvaamalla bentsyy1iamiinihydrokloridi muilla sopivilla primäärisillä amiineilla: 58 79842 2- fenyylietyyli-isosyanaatti ; 3- fenyylipropyyli-isosyanaatti ; 4- fenyylibutyyli-isosyanaatti ; n-butyyli-isosyanaatti ; isopropyyli-isosyanaatti ; heksyyli-isosyanaatti ; oktyyli-isosyanaatti ; 2-propenyyli-isosyanaatti ; 2-penten-4-ynyyli-iosyanaatti ; syklopropyyli-isosyanaatti ; 4-metyyli-sykloheksyyli-isosyanaatti; 4-dimetyyliaminobentsyyli-isosyanaatti.

VALMISTUSE5IMERKKI IV

A . Kaavan VI mukaisen metyyli 2-(3-sek-butyyliureido)- bentsoaatin ja länisukuisten yhdisteiden valmistaminen 230 mg 2-karbometoksi fenyy1i-isosyanaa11ia (yhdiste II), joka oli valmistettu kuten valmistusesirnerkissä I, ja 0,143 ml sek-butyyliamiinia kuivassa tetrahydroffuraanissa sekoitettiin huoneen lämpötilassa noin 8 tuntia. Liuotin poistettiin alipaineessa ja saatu kiinteä aine kiteytettiin uudelleen eetteristä ja petrolieetteristä, jolloin saatiin metyyli 2-(3-sek-butyyllureido)-bentsoaattia , sp. 123-124°C; 'H NMR : (delta CDCl^); 0,95 (s, 3H, CH3 CH2), l,2(d, 3H, CH CH), 1,5(01, 2 H , CH3 CH2), 3,8 (m, 1H, CH-N), 3,9 (s, 3H, OCH^), 4,6 (leveä s, 1H, CONH-sek-Bu), 6,8, 7,2 (2m, 2H, Ar-H), 8,0, 8,6(2dd, 2h, Ar-H), 10,3 (leveä, 1H, ArNHCO).

Tämän aineen IR-spektrissä oli maksimit: 3280, 1700, 1650, 1600 ja 1585 cm"1.

B. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan VI mukaiset yhdisteet korvaamalla 3-sek-butyy1iamiini kaavan III mukaisella muulla amiinilla: 59 79842 metyyli-2-(3-metyyliureido)-bentsoaatti; metyyli-2-(3-n-heksyyliureaido)-bentsoaatti; metyyli-2-(3-n-oktyyliureido)-bentsoaatti; metyyli-2-(3-bentsyyliureido)-bentsoaatti; metyyli-2-(3-sykloheksyliureido)-bentsoaatti; metyyl1-2-/3-(A-dimetyyliaminobentsyyli )ureido/-bentsoaatii ; metyyli-2-(3-sykloheksyyliureido)-bentsoaattij metyyli 2-/3-(2-fenyylietyyli)-ureido/-bentsoaatti ; metyyli 2-/3-(3-fenyylipropyyli)-ureido/-bentsoaatti ; metyyli 2-/3-(4-fenyylibutyyli)-ureido/-bentsoaatti ; metyyli 2-/3-(5-fenyylipentyyli)-ureido/-bentsoaati ; metyyli 2-/3-(1-fenyy1ietyy1i)-ureido/-bentsoaa11i ; 3_(2-/3-(2-karbometoksifenyyli)-ureido/-etyyli)-indoli; 4- (2-/3-(2-karbometoksifenyyli)-ureido/-etyyli)-imidatsoli; 5- bentsyylioksi-3-(2-/3-(2-karbornetoksifenyyli)-ureido/-etyyli ) -i n d o 1i; 2- (2-/3-(2-karbometoksifenyyli)-ureido/-etyyli)-pyridiini ; 3- (2-/3-(2-karbometoks ifenyyli)-ureido/-etyyli)-pyridiini; N-(2-/3-(2-karbometoksifenyyli)-ureido/-etyyli)-morfoliini; N-(2-/3-(2-karbometoksifenyyli)-ureido/-etyyli)-pyrrolidiini; l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyy1i-piperonyyliamiini ; metyyli 2-/3-(2-metyylibentsyyli)-ureido/-bentsoaatti ; metyyli 2-/3-(4-metyylibentsyyli)-ureido/-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-prapargyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-( 3-furfuryyliureido)-bentsoaatti ; ja metyyli 2-(3-n-butyy1iureido )-bentsoaa11i.

C, Samoilla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan VI mukaiset yhdisteet korvaamalla 2-karbometoksifenyyli-isosyanaatti valmistusesirnerkissä I.B kuvatulla tavalla valmistetulla substituoidulla johdoksella ja käyttämällä samaa tai muuta sopivaa amiinia: metyyli 2-/3-(4-diinetyyliaminobentsyyli)-ureido/-bentsoaatti ; metyyli 6-metyyli-2-(3-vinyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 6-metyyli-2-(3-metyyliureido)-bentsoaatti; Γ“ _________ 60 79842 metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-6-metyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-3-metyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyy1iureido)-6-metoksi-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-6-metyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-6-etyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-etyyliueido)-5-kloori-bentsoaatti; metyyli 2-(3-sykloheksyyliureido)-6-fluori-bentsoaatti; metyyli 2-(3-heksyyliureido)-3-nitro-bentsoaatti; metyyli 4,5-dimetoksi-2-(3-n-propyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 2-(3-sek-butyyliamino)-3,6-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 3-kloori-2-(3-etyyliureido)-4-jodi-bentsoaatti; metyyli 2-(3-pentyyiiureido)-3,4,5-trifluori-bentsoaatti; metyyli 6-bromi-5-etyyli-2-(3-isopropyyliureido)-3-metyyli-bentsoaatti; ja metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-bentsoaattι.

VALM1STUSES1MERKKI V

A. Kaavan VI mukaisten yhdisteiden vaihtoehtoinen valmistustapa Metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-bentsoaatin valmistaminen

Liuokseen, joak sisälsi 13,53 g metyy1 iäntrani laa11ia 12 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin 8,9 ml n-butyyli-isosyanaattia tipottain. Liuosta sekoitettiin 5 1/2 päivää ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin puoleen alkuperäisestä tilavuudestaan ja seostettiin edelleen heksaanilla ja suodatettiin. Molemmat jäännökset yhdistettiin, jolloin saatiin otsikkoyhdistettä valkoisena kiinteänä aineena, sp. 84-85°C; NMR(delta CDCl^): 0,79, 1,02 (m, 3H, CH ) , 1,16-1,76 (m, 4H, CH2CH2), 3,27 (t, 2H, NCH2>, 3,87 (s, 3H, 0CH3), 4,82 (lev. 1H, NH), 6,81-8,59 (m, 4H , ArH), 11,09 (s, 1H, NH).

IR: 3305, 3260, 1708, 1642, 1560 cm-1.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan VI mukaiset yhdisteet korvaamalla n-butyyli-isosyanaatti muilla valmistus-esimerkissä III kuvatulla tavalla valmistetuilla alkyyli-isosyanaateilla: 6i 79842 metyyli 2-(3-metyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-etyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-propyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-bnetsyyliureido)-4-etyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-4-etyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-4-amino-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyy1iureido)-3-metyy1i-bentsoaa11i ; ja metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-6-metoksi-bentsoaatti.

C. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan VI mukaiset yhdisteet korvaamalla metyy1iantrani laa11i muilla sopivasti substituoidui1la metyyli 2-aminobentsoaateilla (valmistettu valmistusesimerkissii II kuvatulla tavalla) ja käyttämällä samoja tai muita sopivia isosyanaatteja, jotka on valmistettu : valmistusesimerkissä III kuvatulla tavalla: metyyli 2-(3-isopropyy1iureido)-3-metyy1i-bentsoaa11i ; metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-6-metyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyiiureido)-6-metoksi-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n~butyyliureido)-6-metyylibentsoaatti ; metyyli 2-(3-bentsyy1iureido)-3-metyy1i-bentsoaa11i ; ja metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-4,5-dimetoksi-bentsoaatti.

D. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan VI mukaiset yhdisteet : metyyli 6-asetamido-2-(3-bentsyy1iureido)-bentsoaa11i ; metyyli 6-asetamido-2-(3-n-butyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 6-asetamido-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-5-jodi-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-5-jodi-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-5-jodi-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-5-n-butyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-5-n-butyyli-bentsoaatti ; metyyli 5-n-butyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-4-kloori-bentsoaatti ; I ___ _ 62 79842 metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-4-kloori-bentsoaatti; metyyli 4-kloori-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-3,5-di-jodi-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-3,5-di-jodi-bentsoaatti; metyyli 3,3-di-jodi-2-(3-isopropyyliureido )-bent®3aatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-4-etyyli-bentsoaatti; metyyli 2-3-(bentsyyliureido)-4-etyyli-bentsoaatti; metyyli 4-etyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-5-metyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-5-metyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-5-metyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-4-metyyli-bentsoaatti ; metyyli 2 - ( 3 - b e n t s y y 1 iureido)-4-rnetyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-4-metyyli-bentsoaatti; metyyli 5-asetarnidu-2-(3-bentsyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 5-asetamido-2-(3-n-butyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 5-asetamido-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-5,6-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-4,6-dimetyyli-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-bentsyyliureido)-3,6-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 2-( 3-bentsyy1iureido)-4,5-dimetyy1i-bentsoaa11i; metyyli 2-( 3-bentsyy1iureido)-3,5-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 2-( 3-bentsyyliureido)-3,4-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-5,6-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-4,6-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido )-3,6-dimetyyli-bentsoaa11i; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-4,5-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-3,5-ditn eit-yyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-3,4-dimetyyli-bentsoaatti; metyyli 5,6-dimetyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 4,6-dimetyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 3,6-dimetyyii-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 4,5-dimetyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 3,5-dimetyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 3,4-dimetyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-butyyliureido)-6-etyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-metyyliuruido)-3-metyyli-bentsoaatti; 63 79842 metyyli 2-(3-etyyliureido)-5-etyyli-bentsoaatti; metyyli 2-(3-n-propyyliureido)-6-propyylibentsoaatti; metyyli 6-heksyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; metyyli 2-(3-heksyyliureido)-3-metoksi-bentsoaatti; metyyli 4-etöksi-2-/3-(2-propenyyliureido)/-bentsoaatti; metyyli 2-^3-syklopropyyliureido)-3-dimetyyliamino-bentsoaatti; metyyli 5-asetamido-2-/3-(4-metyylisykloheksyyli)ureido/-bentsoaatti ; metyyli 2-/3-(4~dimetyyliaminobentsyyli)ureido/-6-fluori-bentsoaatti ; metyyli 2-(3-ii-buLyyliureido)-3,6-dimetyyli-bentsoaatti ; metyyli 4,5-dimetoksi-2-(3-metyy1iureido )-bentsoaa11i ; metyyli 2-(3-etyyliureido)-3,4,5-trifluori-bentsoaatti; metyyli 3-kioori-6-jodi-2-(3-n-propyyliureido)-bentsoaatti ; ja metyyli 5-etyyli-2-(3-isopropyyliureido)-3-metyyli-bentsoaatti;

VALMISTUSESIMERKKI VI

Kaawan VII mukaisten substituoitujen antraniilihappojen valmistus.

A . 4-e t y y 1 iantran i i lihapon .ja 6-e t yy 1 i-ant ra 1 iinihapon valmistus 4-etyyliantraliinihappo ja 6-etyyliantraniilihappo valmistettiin Baker'in menetelmällä, joka on kuvattu julkaisussa J. Qrq,

Chem. , 17, 141, (1932) ja joka on esitetty jäljempänä yksi tyiskohtaisesti .

(i) m-etyyli-alta-isonitroasetanilidin valmistus 5 litran pyöreäpohjäiseen pulloon, joka oli varustettu yläpuolisella sekoittimella ja lauhduttimilla, laitettiin 74,2 g kloraalidihydraattia ja 900 ml vettä. Sen jälkeen tähän liuokseen lisättiin peräkkäin 107,2 9 vedetöntä natrium-sulfaattia, liuos, joka sisälsi 50 g m-etyylianiliinia, 64 79842 2A8 ml vettä ja 42 ml väkevää suolahappoa, ja lopuksi liuos, joka sisälsi 90,0 g hydroksyyliamiinihydrokloridia 412 ml:ssa vettä. Seos kuumennettiin hitaasti 45 minuutin aikana 95°C:een. Sen jälkeen kuumennusvaippa poistettiin ja pullo jäähdytettiin nopeasti huoneen lämpötilaan upottamalla jäähauteeseen. Puhdistamaton is onitroasetani1idi otettiin talteen suodattamalla imun avulla ja pestiin vedellä. Tuote puhdistettiin edelleen seuraavalla menetelmällä: Puhdistamaton isonitroasetanilidi liuotettiin 500 ml:aan 4 M natriumhydrok-sidiliuosta, siirrettiin erotussuppiloon ja pestiin eetterillä (3 x 300 ml). Alkalinen faasi käsiteltiin sen jälkeen hiilellä, suodatettiin seliitin läpi ja tehtiin vahvasti happameksi väkevällä suolahapolla. Saostunut m-etyyli-alfa-isonitroaset-anilidi otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin tyhjiössä, sp. 140-142°C.

(ii) 4-etyylin ja 6-etyyli-isatiinin valmistus 1 litran pyöreäpohjäinen pullo, joka sisälsi 370 ml väkevää rikki ti appoa ja 30 ml vettä, kuumennettiin 60°C:een. m-etyyli-alfa-isonitro a s eta ni1idia (64 g) lisättiin sellaisella ' nopeudella, että lämpötila pysyi välillä 60 ja 65°C. Lisäyksen suorittamisen jälkeen seos kuumennettiin 10 minuutiksi 80°C:een. Sen jälkeen pullo jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja kaadettiin 8-10-kertäiseen tilavuuteen jäitä. Puolen tunnin seisottamisen jälkeen puhdistamaton isatiiniseos otettiin talteen suodattamalla ja pestiin hyvin vedellä. Puhdistamaton uute liuotettiin sen jälkeen noin 300 ml:aan 3M natriuinhydroksidiliuosta kuumentamalla höyryhauteella, käsiteltiin hiilellä ja suodatettiin seliitin läpi. Te (itäessä happameksi pH-arvoon 6-7 väkevällä suolahapolla muodostui kumimaista aientta, joka poistettiin suodattamalla seliitin läpi. Sen jälkeen liuos tehtiin happameksi pH-arvoon 4 ja 4-etyy1i-isätiini otettiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä: Saanto 14,6 g, sp. 128-136°C. Jäähdytetty suodos tehtiin sen jälkeen vahvasti happameksi väkevällä suolahapolla ja otettiin talteen suodattamalla, jolloin 65 79842 saatiin 6-etyyli-i. satiinia: Saanto 16,4 g (28 %), sp. 17i-173°C.

(iii) 2-amino-4-etyylibentsoehapon valmistus 500 ml:n pulloon laitettiin 16t,84 g 6-etyy1i-isatiin ia, joka peitettiin 216 m 1:11a 1,5 M natriumhydroksidiliuosta.

Seos lämmitettiin sekoittaen 5Q°C:een. Kuumentaminen lopetettiin ja liuos käsiteltiin 30-prosenttisella vetyperok-sidiliuoksella (24 ml), .joka lisättiin sellaisella nopeudella, että lämpötila pysyi välillä 50 - 65°C. Seoksen annettiin hitaasti jäähtyä huoneen lämpötilaan, muiKä jälkeen se tehtiin happatrieksi pH-arvoon 4 vako väliä suolahapolla. Saostunut tuote otettiin sen jälkeen taite;en suodattamalla: sp. li7-120°C: saanto 8,93 g.

' ( iv ) 2-amino-6-etyylibentsoehapon valmistus 9,6 g 4-etyy 11-ls a11in ia hapetettiin kohdassa (iii) kuvatulla menetelmällä, jolloin saatiin 7,3 g otsikkoyhdistettä: sp. 99-104°C.

B. Samalla tavoin valmistetaan seunaavat esimerkkimäiset kaavan VII yhdisteet: 5- n-butyy1i-antranii 1 ihappo ; 4-jodi-antraniilihappo; ja 6- jodi-antrami1ihappo.

C. 6-metok siäntanii1ihappo valmistettiin pelkistämällä vastaavat aromaattiset nitroyhdisteet Paquette'n menetelmällä, J. Am. Chem. Sou. , 99, 3734 , ( 1981 ), sp. 71-75°C.

0. Samalla Lavoin valmistetaan suuraavat yhdisteet korvaamalla edellä kappaleessa C käytetty m-dinilro-bentseeni-1 ähtuaine muilla a rom a u t t i s ι 1 La u ι i r o y h d i s t e ι i 1 ä : 66 79842 6-asetyyliamino-antraniilihappo; 5- amino-antraniilihappo; ja 6- amino-antraniilihappo.

VALMISTUSESIMERKKI VII

A. Kaavan Will mukaisen 2-(l-beotsotriatsolyyli)-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Liuos, joka sisälsi 960 mg 6-metyyliantrahiilihappoa 30 ml:ssa kuivaa tolueenia, jossa oli 1,77 ml kuivaa trietyyli-ainiinia, ja jota oli sekoitettu 30 minuuttia, lisättiin 30 minuutin aikana liuokseen, joka sisälsi 2,1 g 1-bentso-triatsolikarboksyylihappokloridia 30 m1:s s a tolueenia, ja sekoitettiin 12 tuntia. Saatu sakka suodatettiin. Suodos pienennettiin puoleen alkuperäisestä tilavuudesta ja saatu kiinteä aine eristettiin suodattamalla. Yhdistetyt jäännökset pestiin vedellä, kuivattiin suurtyhjiössä ja kiteytettiin uudelleen kloroformista, jolloin saatiin 400 mg 2-(l-bentso-triatsolyyli)-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onia, sp. 214-215°C (haj . ) .

B. Samalla tavoin saatiin myös seuraavat kaavan VIII mukaiset yhdisteet korvaamalla 6-metyyliantraniilihappo muilla sopivasti substituoiduilla, vaimistusesimerkissä VI kuvatulla tavalla valmistetuilla substituoiduilla antraniili h apeilla tai substituoimattomall antraniilihapolla: ( 2 - (1-bentsoLria Lsulyyl i ) -411-3 , l-bentuoksdatsin-4-oni , sp. 195-198°C ; ja 2-(l-bentsotriatsolyyli)-5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 15-116°C.

C. Vastaavalla tavalla saadaan seuraavat kaavan VIII mukaiset yhdisteet : 67 79842 2-(1-bentsotriatsolyyli)-7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(l-bentsatriatsolyyli)-7-jodi-4H~3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(l-bentsotriuLsolyyli)-5-jodi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni·,

Ja 2-(l-bentsotriatsolyyli)-5-metoksi-4H-3,l-bentsoksatsin- 4-oni.

VALMISTU5E5IMERKKI Will A . Kaavojen X ja XIII mukaisen N-metyy1i-L-1eusyy1i-L-fenyylialaniiniamidin j a lähisukuisten dipeptidien valmistus

Liuokseen, joka sisälsi 1,28 g CBZ-N-metyylileusiinia 23 ml:ssa kuivaa tetrahydro fura ani a , lisättiin 0,743 g 1,1-karbonyylidi-imidatsolia ja liuosta sekoitettiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Lisättiin liuos, jossa oli 0,75 g fenyylialaniiniamidiu 23 m 1 : s s a kuivaa tetrahydrofuraania, ja seosta s e k o i1 n I. L i i n h u u n e e n lämpötilassa 8 tuntia.

Haihduttamalla liuotin saatiin kiinteätä ainetta, joka jaettiin etyy11a sta atin (100 ml x 2) ja 5-prosen11isen suolahapon (60 ml) kesken. Orgaaninen kerros pestiin riatrium-bikarbonaattiliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin saatiin kiinteätä ainetta, joka hydrattiin palladiumhydroksidiila hiilellä etanolissa 2,35 kp/cm vetypaineessa 12 tunnin aikana. Liuos suodatettiin, haihdutettiin kiinteäksi aineeksi ja kiteytettiin uudelleen kloroformi:heksaanista, jolloin saatiin 800 mg N-metyyli-L-leusyy1i-L-fenyy1ialaniiniamidia, sp. 136-138°C; NMR(delta CDC13): 0,8 (2d, 6H, 2CH3), 1,2 (m, 3H, 4,7 (m, 1H, Phe:n NCH). IRj 3300, 3350, 1675, 1625, 1540 cm-1.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat dipeptidit korvaamalla C0Z-N-metyy1ileusiini ja L-fenyy1 ialaniiniamidi muilla sopivasti suojatuilla aminohappoamideilla tai -estereillä: N-meLyy1i-JeusyyJj-1euslinia mldi, sp. 141-145°C; 68 79842

Leusyy1i-leusiinlamidi, sp. 103-106°C;

Nl-metyylileusyylileusiini-metyyliesteri , sp. 188-189°C; Prolyyli-leusiiniamidi, sp. 121-125°C.

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan X mukaiset peptidiamidit : L-propyyli-L-fenyylialaniiniamidi; valyyli-beta-alaniiniamidi ; ja L-leusyyli-glysiimairiidi .

D. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan Xill mukaiset yhdisteet korvaamalla fenyylialaniiniamidi sopivalla amino- h ap po e s t e r i 11 ä : leusyyli-leusii ni-fn et yy liesteri; p ro 1 y y 1 i 1 e u s 11 n l - e t y y 11 e s t e r i ; glysyyli-glysiini-inetyyliesteri ; ja valyyli-3-aminovoihappo-etyyliesteri.

VALMISTUSESIMERKKI IX

A. Kaavan Xl mukaisen 1-N-(2-karbometoksifenyy1i)-karbamoyy-li-L-prolyyli-L-leusyyliglysiiniamidin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Liuokseen, joka sisälsi 142 mg L-propyyli-L-leusyyligly-siiniamidia, 2 ml kuivaa tetranydrofuraania ja 2 ml kuivaa dimetyyliformamidia, .lisättiin liuos, jossa oli 80 mg 2-kar-bometoksifenyyli-isosyanaattia. Liuosta sekoitettiin 3 päivää, minkä jälkeen liuotin poistettiin alipaineessa.

Jäännös käsiteltiin 10 m1:11a kuumaa etyyliasetaattia ja suodatettiin, jolloin saatiin 150 mg liukenematonta jäännöstä, joka tunnistettiin l-N-(2-karbometoksifenyyii)-karbamoyyli-L-propyy1i-L-leusyy1i-g ly siiniamidiksi : sp. 196-198°C, IR: 3280-3420 (leveä), 1655, 1640, 1610, 1590 cm"1; Ή N M It ( d e 1 t. a DMSO-d ); 0,85 (dd, 6ll , /CM / C H ) ; 1,4-1,7 6 J £ 69 79842 (m, 3H, CHCH2-CH/CH3/2)· 1,78-2,09 (m, 4H, /Pro/CH2-CH2; 3,49-3,71 (m, 5H /Pro/N-CH2 + /Leu/N-CH + /Gly/N-CH2); 3,90 (s, 3H, COOMe); 4,1-4,43 (m, 1H, /Pro/ N-CH) ; 6,89-7,25 (m, 2H Leu-NH, Gly NH)· 7,4-8,55 (m, 4H, Ar-H); 10,38 (s, 1H, Ar-NH).

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan XI mukaiset yhdisteet korvaamalla L-pro 1yy1i-L-1eusyy1iglysiiniamidi muilla N-disubstituoidui1la aminohappo-peptideillä tai amino h appoamideiila: l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-proliiniamidi, sp. 136-138°C; l-N-(2-karbometoksifenyyli)karbamoyyli-L-prolyyli-L-fenyyli-alaniiniamidi, sp. 75-78°C; l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-fenyylialaniini-amidi, sp. 173-174°C; l_N_(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-leusiiniamidi, sp. 145-147qC; l-N-(2-karboinetoksifenyyli)-karbamoyyli-L -prolyy li -L -leusi i-niamidi, sp. 157-160°C; ja l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamcyyli-N-metyyli-L-leu-syyli-L-leusiiniamidi, sp. 72-75°C.

Vastaavalla tavalla valmistetaan seuraavat kaavan XI mukaiset yhdisteet: l-N-(2-karbometoksi-3-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-L-tyrosiiniamidi; l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-valiiniamidi; l-N-(2-karbometoksi-6-metyyli-fenyuyli)-karbamoyyli-L-alaniiniamidi ; l-N-(2-karbometoksi-3-etyyli-fenyyli)-karbamoyyli-glysiini-amidi ; l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-N-metyyli-L-leusyyli-L-prolyyli-L-leusyyli-glysiiniamidi; ja 70 79842 l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-N-metyyli-L-leu- syyii-L-alaninyyli-L-propyyli-L-leusyyli-glysiiniamidi.

VALM1STUSESIMERKKI X

A. Kaavan XII mukaisen 1-N-(2-karboksifenyyli-karbamoyyli-L-prolyyli-L-1eusyy1i-q1ysiiniamidin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-prolyyli-L-leu-syyli-glysiiniamidia (145 mg), joka oli valmistettu edellä valmistusesimerkissä IX kuvatulla tavalla, liuotettiin : 10 ml:aan metanolia. Tähän liuokseen lisättiin 0,33 ml IN natriumhydroksidia ja sen jälkeen sekoitettiin 90 tuntia huoneen lämpötilassa. M etanoli haihdutettiin ja jäljelle jäänyt liuos jaettiin sen jälkeen etyyliasetaatin ja veden kesken. Tekemällä vesikerros happameksi (pH 2) 6 M suolahapolla muodostui sakkaa, joka eristettiin suodattamalla, jolloin saatiin 96 mg l-N-(2-karboksi-fenyyli)-karbamoyyli-L-prolyyli-L-leusyyli-glysiimamidia, sp. 197-198°C; Ή NMR(delta DMS0-d6); 0,88 (dd, 6H, /CH / ; 1,35-1,71 (m, 3H, : CH-CH2-CH/CH3/2; 1,74-2,12 (M, 4H, /Pro/CH2); 3,43-3,75 / (m, 5H, /Pro/ N-CH2 + /Leu/ N-CH + /Gly/-N-CH ); 4,1-4,45 (m, 1H, /Pro/N-CH); 6,90-7,12 (m, 2H, /Leu/ NH, /Gly/ NH) ; 7,38-8,54 (m, 4H, ArH)'lU,82 (s, 1H, CD H); IR: 1662, 1638 -1 1 cm B. Samalla tavoin muunnettiin muut valmistusesimerkissä IX kuvatulla menetelmällä valmistetut 1-N-(2-karbometoksi-fenyyli)-karbamoyyli-aminohappo tai -peptidiamidit seuraaviksi kaavan XII mukaisiksi yhdisteiksi: l_N-(2-karboksifenyyli)-karbamoyyli-L-proliiniamidi, sp. 187-188°C (haj.); l-N-(2-karboksifenyyli)-karbamoyyli-L-prolyyli-L-fenyy1i-alaniiniamidi, sp. 191-192°C; 71 79842 l-N-(2-karboksifenyyli) -karbamoy y 1 i-L-prol yy li-L-leusiini-amidi, sp. 126-130°C; ja l-N-(2-karboksifenyyli)-karbamoyyli-N-metyyli-L-leusyyli-L-leusiiniamidi, sp. 108-112°C.

Samalla tavalla valmistetaan seuraavat kaavan XII mukaiset yhdisteet : l-N-(2-karboksi-3-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-L-tyrosiini-amidi ; l-N-(2-karboksifenyyli)-karbamoyyli-L-valiimamidi; l-N-(2-karboksi-6-metyyli-fenyyli)-karbamoyyii-L-alaniini-am i d i ; l-N-(2-karboksi-3-etyyli-fenyyli)-karbamoyyli-glysiiniamidi; 1-N-(2-karboks i fenyyli)-karbamoyyli-N-metyyli-L-leusyyli-L-prolyyli-L-1eusy yli-glysiiniamidi ; l-N-(2-karboksif'enyyii)-karbamoyyli-N-metyyli-L-leusyyli- L-alaninyyii-L-prolyyli-L-leusyyli-glysiiniamidi.

VALMI5TUSESIMERKKI XI

A . Kaavan XIV mukaisen D,L-leusiin imetyy1iesteri-iso-syanaatin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus 5,03 g L-leusiinimetyyliesterihydrokloridia ja 2,8 g trikloorimetyyliklooriformaattia lisättiin 50 ml:aan kuivaa p-dioksaania. Seosta kuumennettiin 8 tuntia 60°C:ssa ja jäähdytettiin. Kirkas liuos muodostui tässä vaiheessa. Dioksaani poistettiin alipaineessa. Isosyanaatti-tuote eristettiin tyhjötislaamalla; saanto 3:14 g, kp. 88-94°C (1 mm Hg); Ή NMR; (delta CDC13); 0,9-1,0 (2d, 6H, 2CH3), 1,5-1,8 (in, JM, LHOH ); 3,8 (s, 3H, 0CH3), 4,1 (t, 1H, CH-N=C=0). Tämän aineen IR-spektrissä oli seuraavat maksimit: 2260, 1745 cm-1.

B. Seuraavat kaavan XIV mukaiset yhdisteet saatiin samalla menetelmällä korvaamalla le usiin imetyy1 iesteri-hydrokloridi τ~.

72 79842 fenyylialaniinietyy1iesteri-hydrokloridilla tai valiinietyyli-esterihydrokloridillä: fenyy1 ia Ianiinietyy1 iesteri-isosyanaa111; ja valiinietyyliesteri-isosyanaatti.

1/ALM1STUSESIMEHKKI XII

A . Kaavan XV mukaisen 1-N-( 2-karboinetoksi fenyy 1 i )-karbamoyy 1 i-Dl-leusiinimetyyliesterin g a länisukuisten yhdisteiden synteesi .

Liuokseen, joka sisälsi 1,65 g metyyliantranilaattia 10D ml :ssa tolueenia, lisättiin 1,86 g D,L-1eusiinimetyyli- esterin isosyanaattia, joka oli valmistettu valmistus- esimerkissä XI kuvatulla tavalla. Liuos refluksoitiin 24 tuntia. Pieni osa reaktioseoksesta poistettiin joka 6. tunti, haihdutettiin öljyksi ja tästä määritettiin jäljelle jääneen isosyanaatin absorptio 2280 cm_1:ssa.

12 tunnin refluksoinnin jälkeen lisättiin vielä 0,85 ml metyyliantranilaattia. Refluksointia jatkettiin vielä 12 tuntia, minkä jälkeen tolueeni haihdutettiin öljyksi. Jäännös liuotettiin 100 m1 : a a n etyyliasetaattia ja pestiin 2N suo lahappo 1iuo k se 11a ( 200 ml). Ltyy1ia setaa11ikerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sen jälkeen haihdutettiin öljyksi, joka kiteytettiin eetteristä ja petrolieetteristä (30:60). Kiteyttämällä uudelleen saatiin 1,02 q l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-DL-leusiinimetyyliesteriä, sp. 86-88°C . Ή NMR:(delta CDC1 )· 1,0 (d, 6H, 2CH3), 1.6 (m,3H /CH3/2 CHCH ); 3,8, 3,95 (2s, 6H, 2,0CH3), 4.6 (m, 1H, N-CH), 5,1 (leveä, 1H, C0NHCH), 7,0, 7,5 (2m, 2H, ArH) , 8,0, 8,5 (2dd, 2H, ArH), 10,5 (d, 1H,

ArNH). Edellä olevan aineen in frapuna-absorptiossa oli maksimit 3300, 1730, 1600, 1590 cm'1.

B. Bamalla tavalla valmistettiin korvaamalla fenyyliala-niinietyyliesterin isosyanaatti: 73 79842 l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-fenyylialaniini-etyy1iesteri, sp. 104-106°C; Ή NMR:(delta CDCl^); 1,2 (t, 3H, CH3), 3,2 (d, 2H, PhCH^, 3,9 (s, 3H, OCH^, 4,2 (q, 2H, 0CH2 CH^), 4,7 (m, 1H, NCH C02 Et), 5,2 (leveä d, 1H. CONHCH), 7,1, 7,5 (2m, 2H, ArH), 7,3 (m, 5H, PhCH^, 8,0, 8,5 (2dd, 2H, ArH). Infrapunaspektrissä oli seuraavat ominaisuudet: 3310, 1740, 1605, 1665 cm“^.

C. Toimimalla samalla tavalla valmistetaan seuraavat kaavan XV mukaiset yhdisteet korvaamalla muilla aminohappo-isosyanaateilla, jotka oli valmistettu valmistusesimerkin XI mukaisella menetelmällä: l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyliglysiinietyyli-ester i ; l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyylialaniinietyyli-esteri ; ; l-N-(2-karbometoksifenyyli)~karbamayyliarginiinimetyyli- esteri ; l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyliglutamiininappo-dimetyyliesteri; l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbarnoyylityrosiinimetyyli-esteri.

VALMISTU5E5IMERKKI XIII

A . Kaavan XV mukaisen 1-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyy-li-L-isoleusiinimetyyliesterin .ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Suspensioon, joka sisälsi 0,74 g L-isoleusiinimetyyliesteri-hydrokloridisuolaa 25 m1: s e a kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin 0,58 ml trietyy1iamiinia. Suspensiota sekoitettiin 30 minuuttia 0 - 5°C:ssa. Muodostui valkoista sakkaa.

Sen jälkeen lisättiin liuos, joka sisälsi 0,72 g 2-karbometoksi f eny y 1 i -i sosy anaat t i a 200 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania. Liuosta sekoitettiin 6 tuntia huoneen lämpötilassa, τ~ _ 74 79842 minkä jälkeen reaktio oli tapahtunut loppuun TLC-analyysin (30% etyyliasetaatti petrolieetterissä) perusteella.

Liuos haihdutettiin alipaineessa, minkä jälkeen kiinteä jäännös jaettiin etyyliasetaatin (3 x 100 ml) ja veden (100 ml) kesken. Yhdistetty etyyliasetaattiuute kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi, joka kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatista ja petroli-eetteristä, jolloin saatiin 1-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-isoleusiinimetyyliesteriä, sp. 72 - 7 4°C.

Saanto : 720 mg; 'H NMR:(delta CDCl^); 0,9 (d, päällekkäiset piikit, 6 H , 2CH3); 1,1-1,5 (m, 3H, CH CH); 3,8, 3,95 (2 s , 6 H , 2CH 3) ; 4,5 (dd, 1H, CHCO CH ); 5,2 (leveä d, 1H, CoNHCH); 7,0, 7,5 (2m, 2H, A r H) ; 8,0, 8,5 (2dd, 2H,

ArH); 10,4 (leveä s, 1H , ArNHCO). Edellä olevan aineen in frapuna-absorptiospektrissä oli maksimit: 3340, 1725, 1690, 1590 cm-1.

B. Toimimalla samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan XV mukaiset yhdisteet korvaamalla L-isoleusiini-metyy1 ie steri muilla aminohappoesterihydroklorideilla: 1-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-valiinimetyyli-esteri: sp. 88-90°C; IN: 3340, 1725, 1690, 1590 cm-1; Ή NMR: (delta CDCl^; 1,0 (2d, 6H, 2CH3); 2,2 (m, lH, CH); 3,8-3,95 (2s, 6H, 2CH3), 4,5 (dd, 1H, CHCO^H^; 5,3 (leveä d, 1H, CONHCH); 7,0, 7,5 (2m, 2H, ArH); 8,0, 8,5 (2dd, 2 H, ArH); 10,5 (leveä s, 1H, Ar-NH CO).

l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-alaniinietyyli-esteri: sp. 115-116°C; IR: 3320, 1730, 1705, 1645 cm"1; Ή NMR : (de 11 a CDC13): 1,3 (d, 3H, 0CH2CH3); 1,5 (d, 3H, " C H 3) ; 4,25 (q, 2H,‘C02CH2CH3); 4,4 (q, 1H , CHjCH) ; 5,3 (m, 1H, C0NH CH); 7,0, 7,5 (2m, 2H, ArH); 8,0, 8,5 (2dd, 2 H, ArH); 11,3 (m, 1H, Ar-NH).

l_N-(2-karbornetoksifenyyli)-karbamoyyliglysiinietyyli-esteri: sp . 119-121UC; IR: 3300, 1730, 1700, 1650 cm"1; 75 79842 Ή NMR: (del ta CHCl^); 1,3 (t, 3H, CC^CI^CH^); 3,9 (s, 3H, OCH3); 4,1 (d, 2H, NCH2C02Et); 4,25 (q, 2H, C02CH2CH3); 5,3 (m, 1H, CONHCH ); 7,0, 7,5 (2m, 2H, ArH); 8,0, 8,5 (2dd, 2H, ArH); 10,5 (m, 1H, ArNH).

Etyyli l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbafnoyyli-4-amino-butyraatti: sp . 88-90°C; IR: 3300, 1720, 1700, 1650 cm-1; Ή NMR;(delta CDC13): 1,3 (t, 3H, 0CH2CH3); 1,9 (m, 2H, CH2); 2,4 (t, 2H, CH2C02Et); 3,4 (q, 2H, N-CH.^); 3,9 (s, 3H, OCH 3) ; 4,2 (q, 2H, OCH^H^; 4,8 (m, 1H, CONJH-CH2) ; 7,0, 7,5 (2m, 2H, ArH); 8,0, 8,5 (2dd, 2H, ArH); 10,4 (leveä s , 1H , ArNHp .

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat tyypilliset kaavan XV mukaiset yhdisteet: l_N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-beta-alaniini-metyyliesteri ; ja 3-N-bentsyyli-5-N-(2-karbometoksifenyyli)-hydantoiinihappo-etyyliesteri.

VALM1STUSESIMERKKI XIV

A . Kaavan XVI mukaisen L-alani ini-p-tolueenisulfonihappo-suolan ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus L-aianiinia (3 g) lisättiin annoksittain 20 minuutin aikana huoneen lämpötilassa sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 9,6 g p-tolueenisulfoninappoa dimetoksietaanissa. Saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja kuumennettiin 2 tuntia 50°C:ssa. Jäähdytettäessä muodostui sakkaa, joka suodatettiin, jolloin saatiin 6 g L-alaniini-p-tolueeni-sulfonihapposuolaa, sp. 192-193°C (uudelleenkitey-tys: metanoli/DME); IR: 1750 cm-1, Ή NMR (delta D20): 1,52 (d, 3H, CH3); 2,35 (s, 3H, CH3), 4,1 (m, 1H, CH), 7,5 (m, 4H, ArH).

76 79842 B. Samalla tavoin valmistetaan seuraavien yhdisteiden p-tolueenisulfonihapposuolat:

Beta-alaniini ; Väliini ; leusiini ;

Fenyylialaniini; 4-aminovoihappo;

Glysyyli-glysiini ; ja L-leusyyli-4-aminovoihappo.

VALMISTUSESIMERKKI XV

A. Kaavan XVIII mukaisen N-(2-karbometoksifenyyli)-kar-bamoyyli-4-aminovoihapon ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Suspensioon, joka sisälsi 1,24 g va1mi stusesimerkin XIV mukaisella menetelmällä valmistettua 4-aminovoihappo-:* p-1olueeni su 1 fonihapposuolaa 25 ml:ssa kuivaa metyleeni- klöridia, lisättiin 0,89 ml heksametyylidisilatsaania. Liuosta sekoitettiin 1 tunti. Tähän suspensioon lisättiin liuos, joka sisälsi 0,748 q 2-karbometoksi fenyy1i-isosyanaattia 10 mi:ssa kuivaa metyleenikloridia, ja saatua seosta sekoitettiin 5 tuntia. Haihduttamalla liuotin alipaineessa ja sen jälkeen lisäämällä 100 ml vettä ja suodattamalla saatiin kiinteätä ainetta, joka kiteytettiin ; uudelleen etyyliasetaatista. Saanto 620 mg N-(2- karbometoksifenyy1i)-karbamoyy1i-4-aminovoihappoa, sp. 159-160°C.

B. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat tyypilliset kaavan XVIII mukaiset yhdisteet korvaamalla 4-aminovoi-happo-p-tolueenisulfonihapposuola muilla aminonappo-tai peptidyyli-p-tolueenisulfonihapposuoloilla, jotka on valmistettu valmistusesimerkissä XIV kuvatulla tavalla: 77 79842 N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-beta-alaniini ; N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-valiini ; N-(2-karbometoksifenyyli-karbamoyyli)-ieusiini; N-(2-karbometoksifenyyli-karbamoyyli)-fenyylialaniini; ja N-(2-karbometoksifenyyli-karbamoyyli)-L-leusiini-(4-aminovoihappo) .

VALMISTUSES1MERKKI XVI

A . Kaavan XIX mukaisen 3,5-dimetyy1i-(3-isopropyyliureido )-bentseenin ja lähisukuisten fenyyliureoiden valmistus

Liuokseen, joka sisälsi isopropyyliamiinia (5 ml) kuivassa tetrahydrofuraanissa (25 ml), lisättiin 0°C:ssa tipottain liuos, jossa oli 3,5-dimetyy1i-fenyy1i-isosyanaattia (6,4 ml) 25 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania. Liuosta sekoitettiin 16 tuntia ja haihdutettiin öljymäiseksi kiinteäksi aineeksi. Tämä kiinteä aine kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatista, sp. 207-208°C.

B. Toimimalla samalla tavoin valmistettiin seuraavat yhdisteet korvaamalla 3,5-dimetyy1i-isosyanaatti muilla sopivasti substituoidui1la isosyanaateilla ja isopropyy-liamiini muilla sopivilla kaavan V mukaisilla amiineilla: 3.5- dimetyy1i-3-(n-butyy1iureido)-bentseeni, sp. 137°C; 2.3- dimetyy1i-(3-isopropyy1iureido)-bentseeni, sp. 195-196°C; 2.5- dimetyyli-3-(-isopropyyliureido)-bentseeni, sp.

212-213°C; 2.4- dimetyy1i-(3-isopropyy1iureido )-bentseeni, sp. 187-188°C; 4-n-butyyli-(3-isopropyyliureido)-bentseeni, sp. 120-122°C; ja 3-etyyli-(3-isopropyyliureido)-bentseeni, sp. 118-119°C.

Γ" 78 7 9 8 4 2 C . Kaavan XIX mukaisen (3,5-dimetyy1ifenyyli-karbamoyy1i ) - 2-leusiinimetyyliesterin ja lähisukuisten yndisteiden valmistus 1,54 ml trietyyliamiinia lisättiin L-leusiinimetyyliesteri-hydrokloridin (2 g) liuokseen kuivassa tetrahydrofuraanissa. Muodostui valkoista kiinteätä ainetta ja seosta sekoitettiin 1/2 tuntia. Lisättiin tipottain ja samalla jäähdyttäen 3,5-dimetyyli-fenyyli-isosyanaatin (1,35 ml) liuos 10 ml:ssa tetrahydrofuraania. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi. Kiinteä aine jaettiin metyleenikloridin ja veden kesken. Metyleenikloridikerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin Öljyksi, joka kiteytettiin uudelleen metyleenikloridista ja eetteristä, jolloin saatiin (3,5-dimetyylifenyyli-karbamoyyli)-2-leusiinimetyyliesteriä, sp. 10 3-106°C .

D. Toimimalla osassa C kuvatulla tavalla valmistetaan seuraavat kaavan XIX mukaiset yhdisteet korvaamalla 3,5-dimetyy1i-fenyy1i-isosyanaa11i muilla sopivasti substituoi-duiila kaavan XXXV mukaisilla isosyanaateilla ja korvaamalla kaavan XIII mukainen L-leusiiniinetyyliesteri-hydroklo-ridi muilla kaavan XIII mukaisilla aminohappometyyliesteri-suoloilla : (2,3-dimetyylifenyyli-karbamoyyli)-L-leusiinimetyyli-esteri ; (2,5-dimetyylifenyyli-karbamoyyli)-fenyylialaniinietyyli-esteri ; (3,5-dimetoksifenyyli-karbamoyyli)-L-isoieusiinimetyyli-esteri ; (3-metyylifenyyli-karbamoyyli)-valiinimety yli esteri; (3-etyylifenvyli-karbamoyyli)-glysiinietyyliesteri; (2,3-diinetoksi-knrbamoyyii)-alaniinietyyliesteri; (2,5-dimetyyli-karbamoyyli)-fenyyliglysiinimetyyliesteri; 79 79 842 ja (3,5-dimetyyli-karbamoyyli)-L-leusiinimetyyliesteri.

VALMI5TU5ESIMERKKI XVII

A. Kaavan XXVI mukaisen metyyli 4-nitro-2-(3-isop ropyy1i-ureido)-bentsoaatin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Metyyli-4-nitro-2-amino-bentsoaatin (205 mg) liuos etyyliasetaatissa (15 ml) lisättiin tnkloorimetyyliklooriformaatin (103 mg) liuokseen 10 ml:ssa etyyliasetaattia. Liuosta sekoitettiin 1 1/2 tuntia ja reaktio sammutettiin 0,4 ml:lla isopropyy1iamiin ia. Reaktioseos jaettiin etyyliasetaatin ja 5-prosenttisen suolahappoliuoksen kesken. Etyyli-asetaattikerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi. Kiinteästä aineesta poistettiin epäpuhtaudet kiteyttämällä uudelleen eetteristä, jolloin saatiin 4-nitro-2-isopropyyliureido-bentsoaattia, sp. 197-198°C.

B. Samalla tavoin valmistetaan seuraajat kaavan XXVI mukaiset yhdisteet korvaamalla isopropyyliamiini muilla sopivilla amiineilla: metyyli 4-nitro-2-(3-n-butyy1iureido)bentsoaa11i; etyyli 4-nitro-2-(3-isopropyy1iureido)-6-metyy1i-bentsoaatti; ja etyyli 4-nitro-2-(3-isopropyyliureido)-6-etyyli-bentsoaatti.

VALMISTUSESIMERKKI XV111 A. Kaavan XXV11 mukaisen roetyy1i-4-amino-2-(3-isopropyy1i-ureidu)benIsoaatin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Valmistusesimerkissä XVII-A kuvatulla tavalla valmistetun so 79842 metyy1i-4-nitro-2-isopropyy1iureido-bentsoaatin (98 mg) liuokseen etanolissa lisättiin argonin alla spaattelin-kärjellinen 10¾ palladium/hiiltä. Liuos hydrattiin parr'in hydrauslaitteessa 4 tunnin ajan 2,35 kp/cm vetypaineessa, suodatettiin seliitin läpi ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi. Tämä kiteytettiin uudelleen asetoni/hekaani sta, jolloin saatiin 4-amino-2-isopropyyliureidobentsoaattia, sp. 133-135°C. Muuntaminen vastaajaksi 7-amino-2-isopro-pyyliamino-4H-3,l-bentsokatsin-4-oniksi suoritettiin myöhemmässä esimerkissä I-A ja B kuvatulla tavalla.

B. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan XXVII mukaiset yhdisteet lähetämällä muista sopivista kaavan XXVI mukaisista yhdisteistä, jotka on valmistettu valmistus-esimerkissä XVII-B kuvatulla tavalla: metyyli 4-amino-2-(3-n-butyy1iureido ) bentsoaatti ; etyyli 4-amino-6-metyyIi-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; ja etyyli 4-amino-6-etyyli-2-(3-isopropyyliureido)bentsoaatti.

VALMISTUSESIMERKKI XIX

A . Kaavan XXIX mukaisen metyy1i-4-asetyy1 iamino-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Metyyli-4-amino-3-isopropyyliureidobentsoaattia (15 mg), joka oli valmistettu valmistusesimerkissä XVIII kuvatulla tavalla, lisättiin seokseen, jossa oli 3 ml etikkahappo-anhydridiä ja 3 pisaraa pyridiiniä. Liuosta sekoitettiin 2 päivää huoneen lämpötilassa. Liuotin poistettiin alipaineessa. Jäännös jaettiin etyyliasetaatin, veden ja sen jälkeen 6 M suolahapon kesken. Orgaaninen kerros kuivattiin ja haihdutettiin öljymäiseksi kiinteäksi aineeksi. Kiinteä aine kiteytettiin uudelleen eetteristä, jolloin saatiin metyyli-4-asetyyliamino-2(3-isopropyyliureido)-bentsoaattia,

Cl 79842 sp. 153-155°C.

B. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan XXIX mukaiset yhdisteet lähtemällä sen sijaan muista sopivista valmistusesimerkissä XVIII-B kuvatulla tavalla valmistetuista kaavan XXVII mukaisista yhdisteistä tai valmistusesimerkissä XXI kuvatulla tavalla valmistetuista kaavan XIV mukaisista yhdisteistä ja valinnaisesti käyttämällä muita alkyyli-anhydridejä : metyyli 4-asetyyliamino-2-(3-n-butyyliureido)bentsoaatti ; metyyli 4-butanaaliamido-2-(3-isopropyyliureido)bentsoaatti ; metyyli 4-asetyyliamino-6-metyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti ; ja metyyli 4-asetyyliamino-6-etyyli-4-nitro-2-(3-isopropyyli-ureido)bentsoaatti.

VALHISTUSES[MERKKI XX

A . Kaavan XXXI mukaisen 4-ine t y y 1 i-4-( 3-i sop ropy y 1 i-ureido)-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatin .ia lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Valmistusesimerkissä XVIII kuvatulla tavalla valmistetun metyyli-4-amino-2-(3-isopropyyliureido)bentsoaatin (500 mg) liuos etyyliasetaatissa (10 ml) lisättiin trikloori-• metyy1iklooriformaatin (0,157 q) liuokseen 5 ml:ssa etyyli asetaattia. 1 1/2 tunnin kuluttua lisätiin 5 ml n-propyyli-amiinia. Liuos laimennettiin etyyliasetaatilla, uutettiin vedellä, 5-prosenttisella suolahapolla ja pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella. Etyyliasetaattikerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin metyyli-4-(3-propyyliureido)-2-(3-isopropyyli-ureido )bentsoaattia kiinteänä aineena, sp. 94-95°C.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraava yhdiste: 82 79842 metyyli 2-(3-isopropyyliureido)-4-(/pyrrolidino-karbamoyyli/-amino)bentsoaatti, sp. 203,5-204,5°C.

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan XXXI mukaiset yhdisteet korvaamalla metyy1i-4-amino-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti muilla sopivilla kaavan XXVII mukaisilla yhdisteillä, jotka on valmistettu valmistus-esimerkissä XVIII kuvatulla tavalla: metyyli 4-(3-n-butyyliureido)-2-(3-isorpopyyiiureido)-bentsoaatti; metyyli 4-(3-dietyyliureido)-2-(3-n-butyyliureido)- bentsoaatti; metyyli 4-(3-isoprupyyliureido)-6-metyyli-2-(3-isopropyyli-ureido )bentsoaatti; ja metyyli 4-(3-isopropyy1iureido)-6-etyy1i-2-(3-isopropyyli -ureido )-bentsoaatti.

D. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan XXXI mukaiset yhdisteet lähtemällä sen sijaan sopivista kaavan 14 mukaisista yhdisteistä, jotka on valmistettu valmistus-esimerkissä XXI kuvatulla tavalla: etyyli 4-(3-isopropyy1iureido)-6-metyy1i-4-nitro-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti; ja etyyli 4-(3-isopropyyliureido)-6-etyyli-4-nitro-2-(3-isopropyyliureido)-bentsoaatti.

VALMISTUSESIMERKKI XXI

A. Kaavan 14 mukaisen etyyli 2-amino-6-metyyli-4-nitro- bentsoaatin ,ja länisukuisten yhdisteiden valmistus 2-kloori-3,5-dinitrotolueeni valmistettiin 2-hydroksi-3,5-dinitrotolueenrsta 13. Boothroyd'in ja E.R. Clark'in kuvaamalla menetelmällä, J. Chem. 5oc. , s. 1504, London (1953).

83 79842

Saatu klooriyhdiste saatettiin reagoimaan pentaani-2,4-dionin (10-kertäinen ylimäärä) ja natriummetoksidin (3,5-kertäinen ylimäärä) kanssa HMPA:ssa huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin (2-metyyli-4,6-dinitrofenyyli)-diasetyylimetaania, sp. 145-147°C. Tuote eristettiin tavanomaisin keinoin ja syklisoitiin sen jälkeen väkevällä rikkihapolla 3 tunnin aikana 110°C:ssa, jolloin saatiin 4-metyyli-6-nitro-antranii1 ia, sp. 158-160°C. Sen jälkeen refluksoitiin trietyyliamiinan ja etanolin kanssa, jolloin saatiin etyyli 2-amino-6-metyyli-4-nitro-bentsoaattia; IR: 3500, 3490, 1690 cm-1.

B. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan 14 mukaiset yhdisteet lähtemällä muista sopivasti substituoiduista l-alkyyli-2-kloori-3,5-dinitrobentseeneistä: etyyli 2-amino-6~metyyli-4-nitrobentsoaatti; etyyli 2-amino-6-isopropyyli-4-nitrobentsoaatti; ja etyyli 2-amino-6-n-butyyli-4-nitrobentsoaatti.

C. Kaavan 14 mukaiset yhdisteet muunnetaan kaavan I, IC ja ID mukaisiksi yhdisteiksi valmistusesimerkkien XIX ja XX ja esimerkkin XI ja XII menetelmillä.

ESIMERKKI I

A. Kaavan. IA mukaisen 2-sek-butyyliamino-4H-3,l-bents-oksatsin-4-onin ja lähisukuisten yhdisteiden synteesi

Metyyli 2-(3-sek-butyyli-ureido)bentsoaattia (90 mg) liuotettiin 2ml:aan väkevää rikkihappoa. Liuosta sekoitettiin 2 1/2 tuntia ja kaadettiin jääveteen. Jäillä sammutettu seos neutraloitiin nopeasti natriumbikarbonaatin kyllästetyllä liuoksella. Saatu valkoinen sakka suodatettiin, kuivattiin ja kiteytettiin uudelleen eetteristä ja petroli-eetteristä, jolloin saatiin 2-sek-butyy1iamino-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni, sp, 122-123°C; 'H NMR(delta CDCl^): Γ~ 84 79842 1.0 (t, 3Η, CH3CH2); 1,3 (d, 3H, CH^CH); 1,6 (m,2H, CH2); 4.0 (m, 1H, CJi-N); 7,2, 7,6, 8,0 (3m, 4H, ArH). Tämän yhdisteen in frapunaspektri oli maksimikohdissa 3290, 1740, 1633 ja 1600 cm-1.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan IA mukaiset yhdisteet korvaamalla metyyli 2-(3-sek-butyyli-ureido)bentsoaat-ti muilla valmistusesimerkissä IV ja V kuvatulla tavalla valmistetuilla ureidobentsoaateilla : 2-metyy1iamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 203-204°C; 2-etyy 1 iamino-4H-3 ,1-bentsoksatsin-4-oni , sp. 169-170°C; 2-propyy1iamino-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni ; sp. 170-172OCj 2-isopropyy1iamino-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni ; sp. 131-152°C; 2-n-butyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 127-129°C; 2-heksyy1iamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 133-135°C; 2-oktyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 117-120°C; 2-bentsy yl iammo-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-oni , sp. 177-179°C; 2-metyyliamino-5-metyyii-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 192-193°C; 2-isopropyyliamino-8-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 185-187°C; 2-isopropyyliamino-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 197-199UC; ; 2-n-butyyliamino-3-metoksi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 129-131°Cj 2-n-butyyliamino-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 130-132°C; 2-bentsyyliamino-8-metyyli-4H-3,l-bentsoksasin-4-oni, sp. 164-165°C; 2-bentsyyliamino-6,7-dimetoksi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 214-215°C; 2-bentsyyliamino-7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 139-141°C; 2-n-butyyliamino-7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 121-123°C; 2-isopropyy.liamino-7-etyyli-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-oni , 85 79842 sp. 149-150°C ; 2-isopropyyliamino-7-amino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 144-145°C · 2-n-butyyliamino-8-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 107y-109°C; 2-isopropyyliamino-5-metoksi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 131-132°C ;

Samalla tavalla valmistettiin seuraajat kaavan IA mukaiset yhdisteet : 2-(4-dimetyyliaminobentsyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-(2-fenyylietyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-^3-fenyylipropyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(4-fenyylibutyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(5-fenyylipentyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(l-fenyylietyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; N-(2-/N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-amino/-etyyli)- pyrrolidiini ; N-(2-/N-(4H-3,l-bentsok a atsin-4-on-2-yyli)-amino/-etyyli)-morfOliini ; 2-/2-(3-indolyyli)-etyyli/-amino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-/2-(3-bentsyylioksi-3-indolyyli)-etyyli/-amino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-/2-(4-imidatsolyyli)-etyyli/-amino/-4H-3,l-bentsoksatsin- 4-oni ; 2-(/2-(2-pyridyyli)-etyyli/-amino)-4H-3,l-bentsoksatsin- 4-oni ; 2-(/2-(3-pyridyyli)-etyyli/-amino)-4H-3,l-bentsoksatsin- 4-oni ; N- (4H-3 , l-bentsoksatsjjv4-on-2-yyli )-piperonyyliamiini; 2-(2-me tyylibentsyyliamj.no)-4H-3,1-b en tsoksatsin-4-oni; 2- (4-metyylibentsyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 3- usetamido-2-bentsyyliamino-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-oni ; Γ" es 79842 5-asetamido-2-isopropyyJ.iamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 5- asetamido-2-r)-butyyliamino-4H-3, l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-bentsyyliamino-6-jodi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-isopropyyliamino-6-jodi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-6-jodi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-bentsyyliamino-6-n-butyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 6- n-butyyJ.i-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-6-n-butyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-7-kioori-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 7- kloori-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-6,8-di-jodi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-isopropyyliamino-7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-bentsyyliamino-7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-bentsyyliamino-6-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-6-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-isopropyyliamino-6-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-7-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-isopropyyliamino-7-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-bentsyyliamino-7-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 6-asetamido-2-n-butyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 6-asetamido-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 6-asetamido-2-bentsyyliamino-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-om ; : 2-bentsyyliamino-3,6-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-bentsyyliaminu-3,7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-bentsyylia[nino-5 ,8-dimetyyli-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-bentsyyliamino-6,7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-bentsyyliamino-6,8-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-bentsyyiiamino-7,8-dimetyyii-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-5 ,6-dimetyyli-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-n-butyylianiino-5,7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliarnino-5>8-d.imetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-6,7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamir>o-6,8-dimetyyli-4H-3,l-bnetsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliaminu-/,8-dimetyyli-4ll-3,l-buntijokaats.in-4-oni; 3,6-dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 5^7-dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-oni ; 87 79842 5,8-dimetyyli-2-isopropyyiiamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 6.7- dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 6.8- dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 7.8- dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-n-butyyliamino-5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-etyyliamino-6-kloori-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-sykloheksyyliamino-5-fluori-4H-3,l-bentsok aiatsin-4-oni; 2-heksyyl iamino-8-nitro-4H-3 ,l-bentsoksatsin-4-oni; 6,7-dimetoksi-2-n-propyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-sek-butyyliamino-5,8-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 6- kloori-2-etyyliamino-7-jodi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-pentyyliamino-6,7,8-trifluori-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 7- etoksi-2-(2-propenyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 6-bromi-5-etyyli-2-isopropyyliamino-8-metyyli-4H-3,1 -bentsoksatsin-4-oni; 2-syklopropyyliamino-8-dimetyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin- 4- on i ; 2-n-butyyliamino-5,8~dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-etyyliamino-6,7,8-trifluori-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni;

Ja 5- etyyli-2-isopropyyiiamino-3-metyyli-4H-3,1-bentsoksatsin- 4- oni

ESIMERKKI II

Kaavan IA mukaisen 2-n-butyyliamino-3-etyyli-4H-3,1-bents-oksatsin-4-onin .ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus n-butyy1iamiinin vakioliuos valmistettiin lisäämällä 0,5 ml n-butyyliamiinia 10 ml:n mittapulloon, joka sisälsi 10 ml kuivaa metyleenikloridia. 5en jälkeen n-butyyliamii-niliuos (0,85 ml) lisättiin valmistusesimerkissä VII kuvatulla tavalla valmistettuun 2-(1-bentsotriatsolyy1i)- 5- etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oniin (150 mg) 21 mlsssa kuivaa metyleenikloridia ja seosta sekoitettiin 20 minuuttia. TLC-analyysi (20% etyyliasetaatti tolueunissa) osoitti reaktion tapahtuneen loppuun. Sen jälkeen metyleenikloridi Γ 88 79842 poistettiin alipaineessa ja jäljelle jäänyt jäännös kromato-grafoitiin silikageelillä (10% etyyliasetaatti tolueenissa, flash-pylväskromatografia). Kaikki tuotejakeet yhdistettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin kiinteätä ainetta, joka kiteytettiin uudelleen pentaanista. Näin saatiin 40 mg 2-n-butyyliamino-5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin- 4- onia , sp. 136-137°C; IR: 330, 1723-1740 (leveä), 1633, 1590, 1570 cm-1); '1·: NMR(delta CDC13): 1,0 (t, 3H, CH3) ; 1.3 (t, 3 H, CH3); 1,5 (m, 4H , CH^H^; 3,2 (q, 2H, PhCH^); 3.4 (q, 2 H, CJH N H) ; 4,8 (leveä s, 1H, N H); 6,9-7,6 (m, 3H , ArH).

B. Seuraava kaavan IA mukainen yhdiste valmistettiin samalla tavalla koraamalla n-butyy1ia miini isopropyyli-amiinilla: 5- etyyli-2-isopropyyiiamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 138-139°C; IR: 3300, 1725-1750, 1630, 1590, 1570 cm"1); Ή NMR(de 11a CDC13): 1,1 (t, 3H, CH3); 1,2 (d, 6H, 2 C H 3) ; 3,2 (q, 2h, CH2); 4,2 (m, 1H, NCH) ; 4,6 (m, 1H, NH), 6,9-7,6 (m, 3H, ArH).

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan IA mukaiset : yhdisteet korvaamalla 2-(1-bentsotriatselyy1i)-5-etyy1i- 4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni muilla sopivasti substituoiduilla kaavan VIII mukaisilla yhdisteillä, jotka on valmistettu valmistusesimerkissä VII kuvatulla tavalla, ja korvaamalla n-butyyliamiini muilla kaavan III mukaisilla amiineilla: 2-oktyyliamino-7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 5-jodi-2-(2-penten-4-ynyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-syklopropyyliamino-5-metoksi-4H-3,l-bentsoksdatsin-4-oni; 2-allyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni· 2-propargyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-syklopropyylimetyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; ja 89 79842 2-allyyliamino-6-n-butyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni.

ESIMERKKI III

A. Kaavan IB-I mukaisen 2-(N-metyy1iasetyy1iamino)-3-metyy11-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onin ja lähisukuisten yhdisteiden synteesi

Liuokseen, joka sisälsi 200 mg esimerkissä I kuvatulla tavalla valmistettua 2-metyy1iamino-5-metyy1i-4H-3,1-bents-oksatsin-4-onia 20 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin 3 ml etikkanappoanhydridiä, 3 ml pyridiiniä ja 23 mg dimetyy1iaminopyridiiniä. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 päivää. Liuotin poistettiin alipaineessa ja jäljelle jääneet etikkahappoanhydridin ja pyri-diinin hivenmäärät poistettiin muodostamalla aseotrooppi tolueenin kanssa. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatograa-fisesti si 1ikagee1illä (10¾ etyyliasetaatti:petrolieetteri, 30-60°C), jolloin saatiin 210 mg 2-(N-metyyliasetyyli-amino )-3-metyy1i-4H-3,1-bentsoksatsin-4-onia, sp. 108-109°C, Ή NMR: (delta CDUl ); 2,6 (s, 3H, CH3-Ar), 2,8 (s, 3H, CH ), 3,4 (s, 3H, NMe), 7,1-7,8 (m, 3H, Ar-H); IR: 1763, 1690, 1640, 1620, 1600 cm"1.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan IB — 1 mukaiset yhdisteet korvaamalla 2-(metyy1iamino)-5-metyy1i-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni muilla 2-alkyyliamino-4H-3,1-bentsoks^tsin-4-oneilla : 2-(N-metyyliasetyyliamino)-8-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 113-115°C, Ή NMR (delta C0C13): 2,4 (s, 3H, C0CH3), 2,7 (s, 3H, CH3), 3,4 (s, 3H, Ν-0Η?), 7,3, 7,6, 8,0 (3m, 3H, ArH), IR: 1770, 1169, 1630, 1610 cm"1.

2-(N-n-butyyliasetyyliamino)-8-metyyli-4H-3,l-bents-oksatsin-4-oni, sp. 48-49°C, Ή NMR (delta CDClj): 1,0 (t, 3H, CU), 1,2-1,8 (päällekkäiset piikit, 4H, CH2CH2), 90 79842 2,6 (s, 3 H, C0CH3), 4,0 (t, 2H, NCH2), 7,2, 7,8, 8,2 (3m, 3H, ArH). IR: 1770, 1690, 1630, 1600 cm"1.

C. Vastaavasti valmistetaan seuraavat kaavan IB-1 mukaiset yhdisteet : 6-kloori-2-(N-etyyliasetyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-(N-bentsyyliasetyyliamino)-4H-3, l-bentsoksatein-4-oni ; 2-(N-metyyliasetyyliamino)-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4“ oni · 2-(N-isopropyyliasetyyliamino)-8-rnetyyli-4H-3,l-bents- oksatsin-4-oni; 2-(N-isopropyyliasetyyliamino)-5-metyyli-4H-3,l-bents-oksatsin-4-onl; 2-(N-n-butyyliasetyyliamino)-5-metoksi-4H-3,l-bents-oksatsin-4-on i; 2-(N-n-butyyliasatyyliamino-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksastsin- 4-oni ; 2-(N-allyyli-asetamido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(N-propargyyli-bentsamido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(N-metyyli-dodekaaniamido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; ja 2-(N-syklopropyylimetyyli-3-metyylibutaaniamido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni.

ESIMERKKI IV

A. Kaavan IB — 2 mukaisen 2-(3-n-butyy1i-1-metyy1iureido)-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-onin .ja lähisukuisten yhdisteiden synteesi

Liuokseen, joka sisälsi 200 mg esimerkissä II kuvatulla tavalla valmistettua 2-metyyliamino-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-onia 50 ml:ssa kuivaa tolueenia, lisättiin 1 ml n-butyyli-isosyanuaLtia. Liuosta re f1uksoitiin 4 tuntia ja liuotin poistettiin sen jälkeen haihduttamalla alipaineessa.

9i 79842

Lisättiin petrolieetteriä (30-60°C). Saatu valkoinen sakka eristettiin suodattamalla, jolloin saatiin kaavan IB-2 mukaista otsikkoyhdistettä. Emäliuoksesta saatiin lisää lopputuotetta kiteyttämällä useaan kertaan uudelleen eetteri:petrolieetteristä (30-60°C). 2-(3-n-butyyli-1-metyyliureido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni karakterisoitiin seuraavasti: sp. 74-75°C, 'H NMR (delta asetoni-d^): 1,0 (m, 3H, CH ), 1,6 (m, 4H, CH2CH2), 3,4 (m + s, 3H, CH N + N-Me), 7,4, 7,6, 7,8 (3m, 4H, Ar-H); IR: 3240, 1770, 1780, 1605 cm'1.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavojen IB-2 ja 1B-3 mukaiset yhdisteet korvaamalla 2-metyyliamino-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni muilla sopivilla esimerkeissä I ja II kuvatulla tavalla valmistetuilla 2-alkyyliamino-4H-3,1-bentsoksatsin-4-onei11a ja korvaamalla n-butyyli-isosyanaatti muilla vastaavilla kaavan IX ja kaavan XIV mukaisilla isosyanaateilla, jotka on valmistettu valmistusesimerkissä III ja valmistusesimerkissä XI kuvatulla tavalla: 2-(3-n-butyyli-l-etyyliureido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 47 -5 0° C, Ή NMR (delta CDCl^: 1,0 (t, 6H, 2CH3), 1,5 (m, 4H, CH2CH2), 3,4 (q, 2H, Ch^N), 4,0 (q, 2H, CH^), 7,2, 7,7, 8,2 (3m, 4H, ArH). IR: 3200, 1770, 1700, 1600 cm-1.

5-N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-2-isobutyyli-5-N-propyylihydantoiinihappo-metyyliesteri, sp. 77-80°C, Ή NMR (delta CDC1 ): 1,0 (d, 6H, 2CH3), 1,3 (t, 3H, CH3), 1,8 (m, 4H, CH2CH2), 3,8 (s, 3H, 0CH3), 4,2 (q, 2H, CH2N), 4,5 (q, 1H, CHN), 7,4, 7,8, 8,2 (3m, 3H, ArH).

IR: 3180, 1750, 1730, 1710, 1620 cm"1.

2-(3-isopropyyli-l-propyyliureido)-4H-3,l-bentsoksatsin- 4-oni, sp. 114-115°C, Ή NMR (delta CDC13): 1,3 (päällekkäiset piikit, UH, CH3CH2, /CH3/2C), 3,8 (q, 3H, NCH2, NCH), 7,4, 7,9 (2m, 4H, ArH). IR: 3200, 2960, 1770, 92 79842 16 9 0 cm-·'.

C. Vast aa walla tavalla v a 1 in i y 10 t. a a n seuraa vat kaavan IB-2 mukaiset yhdisteet: 2-(3-sykloheksyyli-l-otyyliureido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-0111 ; 2-{3-n-butvyli - I -11 - b u t y y 11 u r u 1 d 0 ;-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-/3-{2-f enyyliety y ii)-1-etyyliureido/-4H-3,1-bentsoksatsin- 4-oni ; 2-/3-(3-fenyyliprupyyli)-l-sykluheksyyliureido/-4H-3,l-bentsoksaLsin-4-ϋπ1; 2-/3-(4-fenyylibutyyli)-l-heksyyliureido/-4H-3fl-bents-oksatsin-4-oni; 2-(3-n-butyyli-l-propyyliureido) -4 H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-(3-metyyli-l-sek-butyyliureido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-(3-etyyli-l-etyyliureido) - 4 H - 3,1-Den tsoksatsin-4-oni; 2-(3-n-propyyli-l-pentyylirueido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2 - ( 3-heksyyli-l-syklopropyyliureido )-5-inetoksi-4H-3,1 -bentsoksatsin-4-om ; ja 2-(, 1 -allyy li-3-isopru pyy liureid 0)-6 - n- butyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-o n1.

ESIMERKKI \l A. Kaavan IC mukaisen N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-un-2-yyl i )-L-prol yy 1 i-L -1 e us y y 1 j q 1 y s 1 in i a mi d in .ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Liuokseen, joka sisälsi 70 mg valmistusesimerkissä X kuvatulla tavalla valmistettua l-N-(2-karboksifenyyli)-karbainuy y 1 i-L-prolyyli-L-1 eusy y 11 gly si iniarnidia 200 ml:ssa kuivaa tetrahydro furaania, lisättiin 46 mg 1-(3-dimetyy1i- 93 79842 aminopropyyli)-3-elyyli-karbodi-imidiä ja sen jälkeen sekoitettiin 46 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuotin haihdutettiin alipaineessa ja jäännös jaettiin etyyliasetaatin ja veden kesken, Ltyyiiasetaattiuute kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sen jälkeen haihdutettiin valkoiseksi kiinteäksi aineeksi, joka kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatista, jolloin saatiin 26 mg N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-prolyyli-L-leusyyli-glysiiniamidia, sp. 199-201°C; Ή NMR (delta CDC13); 1,84 (d, 3H, CJH ) ; 1,91 (d, 3 H , CH ), 1,42-1,03 (m, 3H, CH - Cjj2 - CH/C H / ) ; 1,8-2,50 (m, 4H , /Pro/ CH -CH ), 3,58-3,89 (m, 5H, /Pro/ N-CH2, /Leu/N-CH, / G 1 y / - N - CH_ ) ; 4,25-4,51 (m, 1H, /Pro/ N-CH ) ; 6,27 (lev., 2 H , CONH ; 6,8 (lev., Ill, CONH); 7,01-8,03 (m, 4H, Ar-H); 1R: 3320 cm-1 (lev.), 1759 cm"1.

D. Samalla tavoin valmistettiin kaavan IC mukaiset yhdisteet korvaama 11a 1 — N) — ( 2-karboksi f enyyl i )-karbamoyyli-L-propyy-li-L-leusyy li-glysiiniamidi muilla aminohappoamidei11a ja peptidyy1lamide11la, olka oli valmistettu va1 mιstuses ι-merkin X menetelmällä: N - (4H-3,l-hentsoksatsin-4-on-2-yyli )-l -proliiniamidi ; sp. 174-176UC, Ή NMR (delta DMS(J-d ) ; 2,0 (m, 4H, CH CH ), 3,6 (m, 2 H, LH 2), 4,4 (m, 1H, CH), 7,2, 7,4, 7,8 (3m, 4H, ArH). IX: 3520, 3380, 3200, 1770, 1750, 1680, 1630 cm"1 .

N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-prolyyli-L-fenyyli-alaniiniamidi; sp. 226-227uC, 'H NMR (delta DMSO-d^): 1,8 (m, 4H, CH2CH2), 3,0 (m, 2H, CH Ph), 3,6 (m, 2H, CH ), 4,4 (m, 2 H , 2CH). IR: (Vmax) = 3200, 3280, 3200-3400 (lev.), 1770, 1650, 1600 cm"1.

N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-prolyy1i-L-leusiini-amidi, sp. 205-208°C; NMR (delta CDC1?): 0,78-0,92 (m, (»H, 2CH ), 1,21-1,88 (m, JH, CH CH/CH }/ ) , 1,95-2,49 Γ" 94 79842 (m, 4Η, CH2CH2), 3,64-3,90 (m, 2H, NCH^, 4,33-4,71 (m, 2 H , NCH , NCH ) , 7,08-8,2 (iti, 4H, A γ H) , I R: 3400, 3281, 2950, 1768, 1651, 1621 cm-1.

N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-N-metyyli-L-leusyyli-L-leusiiniamidi, sp. 102-105°C; N MK (delta C D C 1 ^ ) : 0,66-1,05 (m, 12 H , 4 x CH ) , 1,15-1,92 (m, 6H, 2CH2CH), 3,08 (s, 3H, N-CH ), 4,32-4,55 (t, 1H, Leu:n NCH), 5,01-5,22 (t, 1H, Me-L eu:n NCH), 7,08-8,2 (m, 4H, A r H), IR: 3260 (leb.), 2950, 1765, 1670, 1596 cm"1.

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat yhdisteet lähtemällä muista va 1 mistuse slmeik i 11 X mukaisesti valmistetuista glysiinia mideista: N-(4H-3,l-bentsoksatsin-s-on-2-yyli)-N-metyyli-L-leusyyli-L-propyyli-L-ieusyyii-glysiinia midi; N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-N-metyyli-L-leusyyli- L-alaninyyli-L-prolyyli~L-leusyyli-ylysiiniamidi.

ESIMERKKI VI

A. Kaavan IC mukaisen N-(4H-3,l-bentsoksatsin-3-2-yyli)~ fenyylialaniiniamidin ,ia lähisukuisten yhdisteiden valmistus 5 ml väkevää rikkihappoa lisättiin 400 mg:aan l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-fenyylialaniiniamidia (valmistusesimerkki IX). Seosta sekoitettiin 3 tuntia ja kaadettiin etyyliasetaatin ja jääkylmän natriumbikar-bonaattiliuokseo seokseen. Seos uutettiin etyyliasetaatilla neutraloinnin jälkeen. Orgaaninen uute, joka oli kuivattu magnesiumsulfaatilla, haihdutettiin kiinteäksi aineeksi. Kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatti-heksa anista saatiin 250 mg N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-fenyyliala-niiniamidia, sp. 215 - 211> °C. 'H N MK 3,0 (m, 2H, P h C H ^ ) , a,5 (m, 1H, NCH), 7,8-8,2 (päällekkäiset piikit, 9H,

ArH). IK: 3380, 5180, 1750, 1730, 1660, 1640 cm"1.

95 7 9 8 4 2 B. Samalla Lavoin muunnettiin muut l-N-2-(karbometoksife-nyyli )-karburnoyyliamino happo- tai peptidyyliamidit, jotka 011 valmistettu valmistusesimerkissä IX kuvatuilla menetelmillä, seuraaviksi kaavan 1C yhdisteiksi: N - ( 411 - >. l-bentsoksatsin-4 - un -2 - y y 1 .l )-DL - proli iniamidi , sp. 193-194UC ; NMR (delta DMSU-d 2,0 (m, 4H, CH CH0),

6 LL

3,6 (m, 2 H, CH2), 4,4 (m, 1H, CH), 7,2, 7,4, 7,8 (3m, 4H, P h H). 1H: 3400, 3200, 1773, 17bl, 1730, 1680, 1630, 1630, 1600 cm'1.

M-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-an-2-yylj)-leusiiniamidi, sp. 163-165°C, NMR (delta DMS0-d Ϊ, 0,9 (d, 6H, 2CH ) , 1,6

O J

(m, 3 H, CH CH), 4,2 (m, 1H, NCH) , 7,2, 7,6, 7,8 (3m,4H,

PhH) ; IR: 3180-3420 (lev.), 1730, 1660, 1640, 1600 cm"1

Vastaavasti valmistetaan seuraavat kaavan IC mukaiset yhdisteet: N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-ytorisiiniamidi; N-(5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni)-valiiniamidi; N-(8-rnetyyii-4H-3, [-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-alaniim-amidi; ja N-(6-metyyli-4H-3,i-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-cjlysiiniamidi.

LSI MERKKI VII

Kaavan ID mukaisen N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-isoleusiinimeLyy1 ie sLerin ia lähisukuisten yhdisteiden synteesi 12 0 my vai m .istu se ai merkissä XII1 kuvatulia tavalla valmistettua l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L- iso 1eusiinimetyy1 iesteriä liuotettiin 2 ml:aan väkevää rikki ha p p o a ja sekoitettiin 2 tuntia. Reaktioseos kaadettiin dekantterilasnn, jossa oli etyyliasetaattia (200 ml) Γ" 96 79842 ja noin 5 0 g jäitä. Ylimääräisen hapon neutraloimiseksi lisättiin nopeasti kyllästettyä natriumbikarbonaattiliuosta. Seos kaadettiin erotussuppiluon ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen uute kuivattiin magnesiumsu1 faa1111 a, suodatettiin ja sen jälkeen haihdutettiin kiinteäksi aineeksi, joka kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatista ja petrolieettenstä (815 mg), jolloin saatiin otsikkoyhdis-tettä: sp. B6-Ö7°C; Ή NMR(delta CDC1 ): 1,0 (d & t päällekkäiset, 6H, 2CH3); 1,5, 2,0 (2m, 3H, CH2CH2); 3,8 (s, 3H, OCH ), 4,4 (m, 1H, LHCO CH3); 5,4 (leveä s, 1H, NH); 7,2, 7,6, 8,0 (3m 4M, A rH) ; IR: 3320, 1740, 1630, 1600 Ciii'1.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan ID mukaiset yhdisteet korvaamalla l-N-(2-karbometoksifenyyli)-karbamoyyli-L-isoluusiini metyyiiesten muilla 1 - N - ( 2 -karbometoksifenyy J i - karbamoyyiijolidoksilia , jotka oli valmistettu va 1 m ι sLus e s 1 merkkie π X11 ja XIII menetelmillä: N - ( 4 H - 3 , 1 - b e n t s o k s a I s i n - 4 - u i) - 2 - y y 1 l ) - f e i) y y 11 a 1 a n 11 n l -etyyliesteri, öljynä, l K : 5340, 1740-1760, 1635, 1605 cm"1; Ή N M H ( d e 1 L : i L D L 1 ^ j : 1,5 U, 3H, UCH LH ) ; 5,2 (m, 2 H , fJ11C H 2 ) ; 4,2 (q, 2H , ϋ L' H 2 C t ( 3 j ; 4,8 (t, 1H, NCH j ; 5,3 (leveä s, 1H, Nil); 7.2, 7, fa, 8,0 ( 3m , 9H , A r H ) ; N-(4H-3,l-be n tsoksatsin-4-on-2-yyli)-alaniiniety yli esteri, sp. 132-134°C; 1 K: 3340, 1760, 1720, 1630, 1600 cm-1; H NMR(delta CDC13); 1,3 (t, 3H, C02CH2CH3); 1,55 (d, 3 H , C H 3) ; 4,2 (q, 2H, C^CI^CHj): 4,6 (p, 1H, NCH); 5,4, (m, 1H, CONHCH); 7,2, 7,6, 0,1 (3m, 4H, ArH); N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-glysiini-etyyliesteri, sp. 147-148°C; 1R: 3360, 1770, 1720, 1630, 1600 cm"1; Ή NMR(delta C0C13): 1,3 (t, 3H, CO CH CH ); 4,2 (d, 2H, C H 2) ; 4,25 (q, 2H, C02CiH2CH3); 7,2, 7,6, 8,1 (3m, 97 79842 4H, ArH); ityyli N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-4-aminobuty- raatti: sp. 126-127°C; IR: 3320, 1760, 1700, 1630, 1600 cm'1; Ή NMR (delta CDC13); 1,3 (t, 3H, C02CH2g±3); 2,0 (m, 2 H , C H 2) ; 2,4 (m, 2H , CH2C02Et); 3,4 (tn, 2H, N-CH2); 4,2 (q, 2 H, 0£H CH ); 3,2 (m, 1H, NH); 7,2, 7,6, 8,0 (3m, 4H, ArH ) ; M-.(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyliJ-DL-leusiini-metyyli-esteri; sp. 9U-92UL’; IR: 5 300, 1740, 1630, 1600 cm-1; Ή MMR (del L a L'DUl ); 1,0 (d, 60, 2LH7)·, 1,H (in, 3H, CH^H); 3, a (s, 311, U (; 11 Λ ) ; 4,4 (m, 10, LOI 00 CO ; 3,5 (m, 10, NH;; 7,2, 7,6, H,1 ( 3 m, 40, ArH); ja N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-valiini-metyyliesteri öljynä, IR: 3320, 1730, 1630, 1600 cm"1; Ή NMR(delta C 0 C13); 1,0 (dd, 60, 2 C H 3); 2,1 (m, 1H, OH); 3,8, (s, 3H, C02Me); 4,3 (m, 1H, N -C H) ; 5,3 (leveä s, 1H, Nh); 7,2, 7,6, 8,0 (3m, 4H, ArH).

N - ( 4 h — 3 , l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli )-D-fenyyliglysiini-metyyliesteri, sp. 9 5 ° C; N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-DL-fenyyliglysiim-metyy1iesterl, sp. 100-101°C; 2-(3-karbQksipropyyliarnino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 144-146°C ; ja N - (4 H - 3 , 1 - b e n t <·, ak.satsin-4-on-2-yyli )-D-leusiini , metyyli-esteri, sp. 82-83uC.

0. Samalla tavoin saadaan seurasvat yhdisteet korvaam11a 1 _ N - ( 2-k a rboiiie t ok s l fen y y 1 i ) - k a rbamu y y 1 a _l - leus l in ime-tyyliesteri muilla valinistusesimerkin Xlll-C ureidobent-soaateilla : N - ( 4II - 3 , 1 - b o n t s o k s a l s i n - 4 - o n - 2 - y y 1 i ) - N - 0 e n t s y y 11 g 1 y s l i n l -etyyiiester i ; 98 79842 |\j_(4H-3,l-bentsoksutsin-4-on-2-yyii)-beta-alaniini-etyyii-esteri ; N-(5 -in etyyli-4H-_5,l -bent suka a Lsin-4-un-2-yyli)-ar giniini-metyyiiesteri ; i\i - 5 - e t y v 1 i - 4 H - 3 , 1 - u e n t. s o k s a t s i n - 4 - o n - 2 - y y 1 i ) - g 1 u t a a m 1 n a p p o - dietyyli esteri; j e N - ( 8 - m e L y y 11 - 4 H - '5 . i-beiilsoksatsin-ii-on-Z-yyli)-tyrosiini-metyyliesten .

ESIMERKKI mil A. Kaavan ID mukaisen [Si-(5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-leusiinimetyyliesterin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus 0,1 ml kuivaa triet. yyliamiinia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 130 mg L-leusiinimetyyliesterihydrokloridia 300 m1 : s s a kuivaa metyieenikloridia. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, mi n kä jälkeen lisättiin liuos, jossa oli 200 mg 2-(l-bentsotriatsolyyli )-3-metyyli-4H-3,l-bents-oksatsin-4-onia ISO mirssa kuivaa metyieenikloridia. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia, väkevöitiin ja jaettiin etyyliasetaatin ja veden kesken. Etyyliasetaattikerros kuivattiin ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi, joka puhdistettiin paksukerroskromatograafisesti (Whatman 1000 ini.kroniJevyt) (20¾ etyyliasetaatti :tolueeni, R f = 0,8;. Kiteyttämällä uudelleen pentaanista saatiin 40 mg i\-(5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-leusiinimeLyyl.i esteriä (haihduttamalla emäliuos saatiin 40 my puhdistamatunta tuotetta): sp. 127-128°C; Ή NMR:(delta CD C13 > : 1,0 (d, 6H, 2CH3); 1,7 (m, 5H, 2,7 (s, 3 H , Ar-CH 3) ; 3,8 (a, 3H, 0CH ) ; 4,7 (m, 1H, CH CO^e); 3,1 (m, 1H, NH); 6,9-7,6 (m, 3H, ArH9; IR: 3300, 2960, 1750, 1730, 1640, 1395 cm"1.

B. Toimimalla samalla tavoin mutta korvaamalla 2-(l-bentso-triatsolyyli )-5-inetyyli-4H-3 , i-bentsoksatsin-4-oni muilla 99 79842 rengassubstituoiduilla 2-(l-bentsotriatsolyyli)-4H-3,l-bents-oksatsin-4-oneilla valmistettiin : N-(4H-3,l-bentsoksaLsin-4-on-2-yyli)-L-leusiini-meLyyli-esteri: sp. 82-B3°C; 1R: 3300, 1760, 1740, 1630, 1600, 1370 cm"1; 'll N M K : (delta CDC 1 ^) : 1,0 (d, 6H, 2CH3); 1,3 (m, 3H, C H 2 C H ) ; 3,0 (s, 3H, 0CH3) · 4,7 (m, 1H, CH CO^Hj); 5,2 (d, 1H, NH); 7,2, 7,6, 8,0 (3m, 4H, ArH).

N-(5-etyyli-4H-3,l-bentsoksasin-4-on-2-yyii)-L-leusiini~ metyyliesten: sp. 74-75°C; IR: 3280 , 1730-1750, 1640, 1595, 1570 cm"1; Ή NMR:(delta CDC1 ): 1,0 (d, 6H, ZCH ) 1,25 (t, 3 H, C H 3) ; 1,7 (m, 3H, CH2CH); 3,2 (q, 2H, CH2 Ph); 3,8 (s, 3H, 0CH3); 4,7 (m, 1H, CH C02CH3); 5,2 (d, 1H, NH); 7,2 (2m, 2H, ArH); 7,5 (dd, 1H, ArH).

C . Kaavan 1C mukaisen N-(4H-3,1-bentsoksatsin-4-on-2-yy1i ) -N-met ili-L-leusyyli-L-fenyylialaniiniamidin j a lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Liuokseen, joka sisälsi 220 my 2-(i-bentsotriatsolyyli)-4H-3,l-bentsoksatsin-4~onia 50 ml:ssa kuivaa metyleeniklo-ndia, lisät t i in 245 mg N-metyyii-leusyyJi-fenyylialaniini-amidia. Sekoitettiin B tuntia huoneen lämpötilassa, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin ja jäännös puhdistettiin paksukerroskromatograa fisesti si11kagee 1ι1 evy11ä (50¾ etyyliasetaatti-tolueeni). Otsikkoyhdiste saatiin eristämällä täplä, jonka R = 0,28. Kiteytettiin uudelleen etyyliasetaat-ti-pentaanista, saanto 30 mg, sp. 74-76°C; Ή NMR (delta DMS0-d6): 0,9 (t, 6H, 2CH3), 1,6 (m, 3H, CH^H), 2,8 (s, 3H, N-CH3), 3,0 (m,2H, CH2 Ar), IR: 3200-3400 (lev.), 1740-1760 (lev.), 1660-1680 (lev.), 1590 cm"1.

D. Toimimalla samalla tavoin valmistetaan seuraavat yhdisteet korvaamalla N-mctyy1i-1eusyy1i-fenyy1 ia 1 aniiniamidi muilla v a 1 m i s t u s e s ime r k l n Vili d j p e p 1.1 d e ι 1J ä : loo 79842 I. .

N-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-leusyyli-L-1 e u u i i n i a midi; j ;j N - (4 H - 3,l-bentsoksatsin-ä-on-2-yyli )-N-metyyli-L-leusyyli-L-leusiiniamidi.

ESIMERKKI IX

A . Kaavan ID mukaisen 2-(3-karboksipropyy1i-amino )-4H-3,1-bentsoksatsin-4-onin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus 350 mg l-iN-(2-karbometoksifenyyli)-karbanioyyli-4-amino-voihappoa, joka oli v a 1 im o t e L L u vu Im i a L uses imer k in X\1 mukaisesti, liuotettiin väkevään rikkinappoon. Liuosta sekoitettiin tiu o n e e n lämpötilassa 2 tuntia. Reaktioseos kaadettiin nopeasti 500 ml pulloon, joka sisälsi 200 ml etyyliasetaattia ja 10 0 cj jäitä. Pullon sisältöä pyöritettiin nopeasti samalla, kun lisättiin kyllästettyä natriumbikarbonaultiliuosta, jolla vesikerros säädettiin pH-arvoon 4. Molemmat kerrokset erotettiin välittömästi ja vesikerros uutettiin 100 m1:11 a etyyliasetaattia. Yhdsitetty etyyliasetaattiuute kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi. Kiinteä aine kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatista, jolloin saatiin 2-(3-karboksipropyyli-amino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onia, sp. 147-148°C.

B. Samaa tapaa käyttäen valmistetaan seuraavat yhdisteet: 2-(6-karboksiheksanyyli-amino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; 2-(2-karboksi-2-metyyli-etyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; ja M-(4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-leusyyli-4-amino-v o i h a p p o .

101 79842

ESIMERKKI X

Kaavan XXI (IA tai ID) mukaisten 4H-3,l-bentsoksatsin-4-onien valmistus A . 5,7-dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsinoni

Liuokseen, joka sisälsi talliumtrifluoriasetaattia (2,28 q) 2 ml:ssa trifluorietikkahappoa ja 10 ml:ssa kuivaa tetra-hydrofuraania, lisättiin liuos, joka sisälsi valmistusesi-merkin XVI-A mukaisesti valmistettua 3,5-dimetyyli-2-(3-isopropyyliureido)-bentseeniä (0,99 g) 10 in 1 : s s a tetrahydro-furaania. Liuosta sekoitettiin pimeässä 16 tuntia ja haihdutettiin kuiviin. Jäännösöljy aseotropoitiin 1,2-dikloorietaanin kanssa ja haihdutettiin kuiviin. Jäännöstä pumpattiin kuivaksi 1 tunti, jolloin saatiin vastaava kaavan XX mukainen yhdiste.

Jäännöksen liuos tetrahydrofuraanissa (20 ml) lisättiin suspensioon, joka sisälsi 1itiumk1 oridia (0,356 g), palladium-kloridia (124 mg, puhtaus 60 %, Alfa Chemicals) ja magnesium-oksidia (0,338 g) kuivassa tetrahydrofuraanissa (25 ml).

: Pulloa ja sen sisältöä huuhdeltiin hiilimonoksidilla.

Liuosta sekoitettiin pimeässä 16 tuntia 1 ilmakehän hi. il iin o-noksidipaineessa. Reaktioseos suodatettiin seliitin läpi ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös kromatogra foitiin kaksi kertaa silikageelillä (20 % etyyliasetaatti, petrolieetteri, K P = 0,7). luoto kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti: heksaamsta, s p . 215-218°C.

B. Samalla tavoin valmistettiin seuraavat kaavan XXI (IA tai ID) mukaiset yhdisteet korvaamalla 3,5-dimetyyli-2-(3-isopropyy1iureido)-bentseeni muilla kaavan XIX mukaisilla yhdisteillä, jotka on valmistettu valmistusesimerkin XVI mukaisesti: /4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/-L-leusiinimetyyliesteri, 1— 102 79842 sp. 8 2-84°C; 2-n-butyyliamino-5,7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni , sp. 144-147°C; 7,0-dimetyyli-2-isopi'opyyliamino-4IT-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 203-206°C; 5.8- dimetyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 206-207°C; 6.8- dimetyyli-2-isop ropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 203-2 06°C; 3,7-dimetyyli-2-isupropy yliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 215-218°C; N-(5J7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-leusiinl-metyy11e steri, sp. 170-172°C; ja 7-etyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni, sp. 149-150°C.

C. Toimimalla samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan XXI (ID) mukaiset yhdisteet korvaamalla 3,5-dimetyyli-(3-1sopropyy11ureido)-bentseeni muilla sopivilla valmistus-esimerkin XV/I-D mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä: /7,8-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/-L-leusiini-metyyliesteri; /5,8-dimetyyli-4H-3,.l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/-fenyyli-alaniini-etyyliesteri; /5,7-dimetoksi-4H-3>l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/-L-isoleusiini-metyyiiesten; /7-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/-valiini-metyy1iesterl ; /7-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/_glysiini- etyyliesteri; /7,8-dimetoksi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/-alaniini-etyyliesteri; ja /5,7-dimetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-on-2-yyli/-L-leusyyli-L-1eusiini-metyy1 iesteri .

103 79842

ESIMERKKI XI

A. Kaavan XXX11 (IA, IC .ja ID) mukaisen 2-isopropyyliamino- 7-(3-isopropyyliureido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onin ,ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Liuosta, joka sisälsi valmistusesimerkissä XX kuvatulla tavalla valmistettua metyyli 4-(3-isopropyy1iureido ) -2-(3-isopropyyli-ureido )-bentsoaattia (150 mg) 5 ml:ssa väkevää rikkihappoa, sekoitettiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuos lisättiin tipottain nopeasti sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi etyyliasetaattia ja kyllästettyä natnumbikarbonaattiliuosta (1:1, kutakin 60 ml). Liuos uutettiin neutraloinnin jälkeen. Etyyliasetaattikerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kiinteäksi. Kiinteä aine kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti: heksaanista, jolloin saatiin 2-is op ropyy1iamino-7-(3 -isopropyyliureido)-4H-3,i-bentsoksatsin-4-onia, sp. 238-240°C.

B. Toimimalla samalla tavoin valmistettiin seuraava yhdiste: 2-isopropyyliamino-7-(pyrroiidino-karbamoyyliamino)-4H- 3.1- bentsoksatsln~4-oni, sp. 203,5-204,5°C.

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan XXXII mukaiset yhdisteet korvaamalla metyyli-4-amino-2-(3- isopropyy1lureido )-bentsoaa11i muilla sopivilla kaavan XXXI tai kaavan 14 mukaisilla yhdisteillä: 7-(3-propyyliureido)-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-n-butyyliamino-7-(3-dietyyliureido)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-isopropyyliamino-7-(3-isopropyyliureido)-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; ja 2-n-butyyliamino-5-etyyli-7-(3-isopropyyliureido)-4H- 3.1- bentsoksatsin-4-oni .

104 79842

esimerkki XII

A. Kaavan X X V/111 ja XXX (IA, IC ja ID) mukaisen 7-amino-2-isopropyyliamino-4H-3 , l-bentsoksatsin-4-onin ja lähisukuisten yhdisteiden valmistus

Huoneen lämpötilassa sekoitettiin 3 tuntia liuosta, joka sisälsi valmistusesimerkissä XVIII kuvatulla tavalla valmistettua metyyli-4-amino-2-(3-isopropyyiiureido)-bentsoaattia (200 mg) 3 ml:ssa väkevää rikkihappoa. Liuos lisättiin tipottain O-asteisecn nopeasta sekit.ettuun etyyliasetaatin ja kyllästetyn nal.r 1 umb i Karbonaatin liuokseen. Neutraloinnin jälkeen Liuos uuLet !. l in. L L y y 11 a se 1. au t L ι ke r r o s kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi. Kiinteä aine kiteytettiin uudelleen eetteristä (sp.

144-145°C) .

B. toimimalla samalla tavoin valmistettiin seuraava yndiste: 7-asetyyliamino-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin- 4-o n i , sp. 137-238°C.

C. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat kaavan XXX mukaiset yhdisteet lähtemällä muista sopivista kaavan XXIX mukaisista y ti d i s t e i s t ä , jotka on valmsitettu va lmistusesimerkin XIX

mukaisesti : 7-bentsamido-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni; ja 7-butaaniamido-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni.

D. Samalla tavoin valmistetaan seuraavat yhdisteet lähtemällä muista sopivista kaavan XXVII ja kaavan 14 mukaisista yhdisteistä: 7-amino-3-eLyyli-2-i:;opiopyylininino-4H-3,i-bentsoksatsin-4-oni ; 105 79842 7-amino-5-metyyli-2-isopropyyliamino-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni .

ESIMERKKI XIII

2-alkyyliamino-5-alkyyli-7-alkoksi-4H-3.1-bentsoksatsin-4-onin valmistua A. Sinkkikloridia (1 g) lisättiin trietyyliamiiniin (134 ml). Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Lisättiin 2,4-penta-2,4-dionin (25 ml) liuos bentseenissä (300 ml) ja sen jälkeen kloorimetyy1isι1aania (186 ml). Liuosta sekoitettiin yön yli 40°C:ssa.

Liuos jäähdytettiin, laimennettiin eetterillä (2 litraa) ja suodatettiin. Suodos haihdutettiin tyhjiössä, jolloin saatiin ruskeaa jäännöstä. Jäännös tislattiin suurtyöjiössä, jolloin saatiin (E) ja (Z)-2,4-bis(trimetyy1isiloksi ) -penta-1,3-dieniä (kp. 72-74°C, 1,5 mmHg).

B. Refluksoitiin 16 tuntia (E)- ja (Z)-2,4-di(trimetyyli-siloksi)-penta-l,3-dienin (622 q) ja dietyyliasetyleeni-dikarboksylaatin (6,5 g) liuosta tolueenissa (20 ml).

Liuotin poistettiin haihduttamalla. Jaännösöljy laimennettiin 75 m1:11 a tetrahydrofuraania ja 75 m1:11a 3-prosenttista suolahappoliuosta. Seosta sekoitettiin 3 päivää. Tetrahydro-furaani poistettiin alipaineessa. Vesipitoinen jäännös uutettiin etyyliasetaatilla. Etyy1 iasetaa11ikerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi. Tämä öljy puhdistettiin pylväskromatograafisesti (silikageeli, 20% etyyliasetaatti: petrolieetteri). Täplän, joka vastasi Rp-arvoa 0,29 (20¾ etyyliasetaatti:petrolieetteri), määri tettiin olevan dietyyli 3-metyy1i-5-hydroksiftalaatti.

C. Natriumhydridiä (380 mg, 50¾ öljy) lisättiin annoksittain dietyyli 3-moLyy11-5-hydroksifta laatin (2 g) liuokseen τ~ 106 79842 kuivassa tetrahydrofuräänissä (50 ml). Liuosta sekoitettiin 30 minuuttia. Lisättiin metyylijodidia (2 ml), tetra-n -butyyliummoniumjodidia (.45 mg) ja HMPA (5 ml). Liuosta sekoitetLiinm 2 1/2 tuntia huoneen lämpötilassa ja r e f -luksoitiin 1 tunti 6 0 0 C : s s a . Liuotin poistettiin alipaineessa. Öljy jaettiin etyyliasetaatin ja 5 ?ό suoiahappoliuoksen kesken. Etyy1 ia seta a11ikerros pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin saatiin öljyä, joka kromatografoitiin (2 0 ?ό etyyliase-taa11i : petro 11e e11erl ) , jolloin saatiin dietyyli 3-metyyli- 5-metoksi-ftalaattia.

1R: 2980, 1720, 1600 cm-1.

Noudattamalla tätä menetelmää mutta korvaamalla metyylijodidi etyylijodidilla, n-propyylijodidilla tai n-butyylijodidilla saadaan vastaavasti: dietyyli 3-inetyyli-5-eLoksi-ftaiaatti , dietyyli 3-inetyyli-3-n-propoksi-ftalaatti, ja dietyyli J-metyyli-5-n-butoksi-ftalaatti.

‘' D. Dietyyli 3-rnetyyli-5-metoksiftalaatin (1 g) liuosta etanolissa (10 ml) ja natriumhydroksidissa (2%, 10 ml) sekoitettiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Etanoli poistettiin haihduttamalla. Jäännös tehtiin happameksi pH-arvoon 1 6 M suolahapolla. Liuos uutettiin etyyliasetaatilla.

Etyy1 ia s etaa11ikerros käsiteltiin tavalliseen tapaan, jolloin saatiin 2-karboetoksi-3-metyyli-5-metoksi-bentsoe-happoa (380 mg), sp. 142-143°C.

Noudattamalla tätä menetelmää mutta korvaamalla 3-metyyli-5-metok si-fta1a a11i muilla esimerkin XIII osassa C valmistetuilla ftalaateiila saadaan vastaavasti: 2-karboetoksi-3-metyyli-5-etoksi-bentsoenappo, 2-karboe Luksi-5-metyyl i-3-n-prupoks i-beri tsoehappo , ja 107 79842 2-karboetoksi-3-metyyli-5-n-butoksi-bentsoehappo.

E. 2-karboetoksi-3-metyyli-5-metoksi-bentsoehapon (60 m q ) ja 1,1-ka fcbo nyylidi-imidatsolin (40.8 mg) liuosta tetra-hydrofuraanissa (8 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa puoli tuntia. Lisättiin trimetyy1isilyy1 iatsidia (0,2 ml), Aldrich) ja liuosta refluksoiti in 2 tuntia ja annettiin seistä huoneen lämpötilassa 40 minuuttia. Liuotin poistettiin haihduttamalla. Lisättiin tolueenia (5 ml, vedetöntä) ja liuosta refluksoitiin 16 tuntia. Liuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan. Lisättiin isopropyyiiamiinia (1 ml). Liuosta sekoitettiin 30 minuuttia ja haihdutettiin alipaineessa öljyksi. Jäljelle jäänyt öljy jaettiin etyyliasetaatin ja 3-prosenttisen suolahapon kesken. Etyyliasetaattikerros pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Haihduttamalla liuotin saatiin öljyä, joka edelleen puhdistettiin paksukerroskromatograafisesti (20% etyyliase-taatti:petroliuet.teri), jolloin saatiin etyyli 2-(3-iso-propyyliureido)-4-rnetoksi-6-metyyli-bentsoaattia, = 0,3, 44 mg, sp. 148-149°C.

Noudattamalla tätä menetelmää mutta korvaamalla 2-karbo-etoksi-3-metyyli-5-metoksi-bentsoehappo muilla esimerkin XIII osassa D valmistetuilla bentsoehapoilla saadaan vastaavasti : etyyii-2-(3-isopropyyliureido)-6-metyyli-4-etoksi-bentsoaatti, etyyli-2-(3-isopropyyliureido)-6-metyyli-4-n-propoksi-bentsoaatti, ja etyyli-2-(5-isopropyyliureido)-4-n-butoksi-6-metyyli-bentsoaatti , F. Etyyli 2-(i-isopropyyliureido)-4-metoksi-6-met.yyli-bentsoaatin (4;0 mcj) liuosta väkevässä rikkihapossa (3 ml) sekoitettiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuos lisättiin sen jälkeen tipottain 0°C-lämpötilaiseen kyllästetyn natriumbikarbonaattiiiuukseri ja etyyliasetaatin seokseen.

Γ~ 108 79842

Neutraloinnin ja uuttamisen jälkeen etyyliasetaattikerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haindutettiin kiinteäksi aineeksi. Tamil puhdistettiin edelleen paksukerroskromatograafisesti (20¾ etyyliasetaatti :petrolieetteriJ, juliom saatiin 2-isopropyyliamino- 5-metyyli-7-metoksi-4H-3,1-benLsoksatsin-i-onia.

IR: 3430, 1740, 16UU, 1630, 1560 cm-1.

Noudattamalla tätä menetelmää mutta korvaamalla etyyli 2-(3-isopropyyliureido)-4-metoksi-6-metyylibentsoaatti muilla esimerkin Xlll osassa L valmistetuilla etyyli-be ntsoaatei11a saadaan vastaavasti: 2-isopropyyliamino-5-metyyli-7-etoksi-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni ; 2-isopropyyliamino-5-metyyli-7-n-propoksi-4H-3,l-bentso ksastsln-4-o ni ; ja 2- isopropyyliamino-5-metyyli-7-n-butyli-4H-3,l-bentsoksatsin- 4 - o n l .

ESIMERKKI XIV

Vapaan emäksen muuntaminen happoadditiosuolaksi 3- prosenttista kloorivetyä dioksaanissa lisätään kaksinkertainen stokiömetrinen ylimäärä liuokseen·, jossa on 1,0 g 2-isopropyyliamino-5-rnetyyli-4H-3,l-bentsoksatsin- 4- onia 20 m1:s s a dioksaania. Oietyylieetteriä lisätään, kunnes saostuminen on täydellistä. Tuote suodatetaan, pestään eetterillä, kuivataan ilmassa ja kiteytetään uudelleen, jolloin saadaan 2-isopropyy1iamino-5-metyy1i-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni-hydrokloridia.

bamalla tavoin vapaassa emäsmuodossa olevat muut kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan muuntaa happoadditiosuoloiksi käsittelemällä sopivalla hapolla, joita ovat esimerkiksi seuraavat: suolalla μ po, bromivetyhappo, rikkihappo, typpihappo, 109 79842 fosforihappo, etikkahappo, propionihappo, glykoiihappo, palorypälehappo, oksaalihappo, malonihappo, meripihkahappo, omenahappo, maieiinihappo, fumaarihappo, viinihappo, sitruunahappo, beritsoehappo, kanelihappo, manteli ti appo, metaani-sulfonihappo, etaanisulfonihappo, p-tolueenisulfoninappo ja vastaavat.

ESIMERKKI XV

Suolan muuntaminen vapaaksi emäkseksi 1,0 g 2-isopropyyliamino-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni-hydrokloridia suspendoituna 5U ml:aan eetteriä sekoitetaan kaksinkertaisen stökiömetrisen ylimäärän kanssa laimeaa vesipitoista ka 1iumkarbonaa11i11uo sta , kunnes suola on liuennut kokonaan. Sen jälkeen erotetaan orgaaninen kerros, pestään kaksi kertaa vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan, jolloin saadaan 2-isopropyyli-a m i n o - 5 - m e t y y 11 - 4 H - 3 , l-bentsoksatsm-4-onia vapaana emäksenä.

ESIMERKKI XVI

Happoadditiosuolojen suora vai ti to keskenään 2-n-butyyliamino-5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oniasetaattia (1,0 g) liuotetaan 50 ml:aan vettä, joka sisältää stökiömetrisen ekiva1 en11imääran rikkihappoa, ja liuos haihdutetaan kuiviin. Tuote suspendoidaan eetteriin ja suodatetaan, kuivataan ilmassa ja kiteytetään uudelleen metanoli/aseto-nista, jolloin saadaan 2-n-butyyliainino-5-etyyli-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni-sulfaattia.

Esimerkeissä XIII - XX on aktiivinen ainesosa N-(4H-3,1-bentsoksatsin-4-on-2-yyli)-L-prolyyli-L-leusyyli-gly-siiniamidi. Tämä voidaan substituoida muilla kaavan 1 mukaisilla yhdisteillä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla.

HO 79842

ESIMERKKI XVII

2-(3-karbometoksi-propyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4 - o n i n valmistus

Diatsomelaanin liuos eetterissä lisätään tipottain 2-(3-karboksi-propyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onin liuokseen eetterissä. Reaktiota seurataan ohutlevykromatografian avulla (silikageeli, 10¾ etyyliasetaatti petrolieetterissä) reaktion loppumiseen asti. Liuokseen lisätään pieni määrä silikageeliä. Liuoksen annetaan seistä 3 tuntia, minkä jälkeen suodatetaan. Suodos haihdutetaan, jolloin saadaan 2-(3-karbomeLuksi-prop)yliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onia .

Samalla tavoin valmistetaan kaavan (I) mukaisten yhdisteiden estereitä korvaamalla 2-(3~karboksi-propyyliamino)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-oni muilla sopivilla kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä.

ESIMERKKI X V 111

Kaavan (1) mukaisten ytodisteiden suolojen valmistus

Trietyyliamiinia lisätään tipottain 2-(3-karboksi-pro -pyyliamino)-4H-3,l-bent.soksatsin-4-onin liuokseen etyyliasetaatissa. Reaktiota seurataan ohutlevykromatografian avulla (silikageeli, 10¾ etyyliasetaatti petrolieetterissä), kunnes reaktio on tapahtunut loppuun. Liuos haihdutetaan alipaineessa, jolloin saadaan 2-(3-karboksi-propyyliamino)-4H- 3,1-bents o k satsln-4-o nln trietyy1lammoniumsuolaa.

Samalla tavoin voidaan muut sopivat kaavan (1) mukaiset yhdisteet muuntaa vastaaviksi farmaseuttisesti hyväksyttäviksi suoloiksi käsittelemällä sopivalla emäksellä.

in 79842

ESIMERKKI XIX

Kaavan (I) mukaisten vapaiden yhdisteiden valmistus farmaseuttisesti sopivista estereistään 2-(3-karbometoksi-propyyliamin)-4H-3,l-bentsoksatsin-4-onia lisätään 1% natriumiaydroksidiliuokseen. Liuosta sekoitetaan 3 tuntia ympäristön lämpötilassa ja tehdään sen jälkeen happarneksi 6N suolahapolla pH-arvoon 1. Liuos uutetaan etyyliasetaatilla, joka kuivataan magnesiumsulfaatilla ja kuivataan kiinteäksi aineeksi.

Tämä kiinteä aine lisätään väkevään rikkihappoon, sekoitetaan ympäristön lämpötilassa 3 tuntia ja kaadetaan sen jälkeen nopeasti sekoitettuun etyyliasetaatin ja kyllästetyn vesipitoisen natriumbikarbonaatin seokseen 0°C:ssa. Uuttamisen jälkeen etyy1 ia setaa11ifaasi kuivataan magnesiumsulfaatilla ja kuivataan, jolloin saadaan 2-(3-karboksipropyyliamino)-4 H - 3,l-bentsoksatsin-4-onia.

Samalla tavoin voidaan muita sopivia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä valmistaa farmaseuttisesti hyväksyttävistä estereistään.

ESIMERKKI XX

Ainesosat ?*»f» tablettla -- kohti, mg_

Aktiivinen ainesosa 25 maissitärkkelys 20 laktoosi, spray-kuivattu 153 magnesiumstearaatti 2

Edellä olevat ainesosat sekoitetaan hyvin ja puristetaan yksittäisiksi jakoura11isiksi tableteiksi.

’ Γ“ 1« 79842

ESIMERKKI XXI

Määrä tablettia

Ainesosa t . , - kohti, mg_

Aktiivinen ainesosa 100 laktoosi, spray-kuivattu 148 magnesiumstearaa111 2

Edellä olevat ainesosat sekoitetaan ja laitetaan kovakuoriseen g e 1 a 111 n i k a p s e 11 i n .

ESIMERKKI XXII

Määrä tablettia

Ainesosat kohti, mg_ . ; Aktiivinen ainesosa 200 mais s11ärkke 1 ys 50 laktoosi 145 ; magne s i um s t ea r a a 111 5

Edellä olevat ainesosat sekoitetaan hyvin ja puristetaan yksittäisiksi jakoura11isiksi tableteiksi.

ESIMERKKI XX111 Määrä tablettia

Ainesosat kohti, mg_

Aktiivinen ainesosa 108 laktoosi 15 mais sitärkk e 1ys 25 rnagnesiumstearaatti 2

Edellä olevat ainesosa I. s a e k o 111· I. a an ja laitetaan kovakuoriseen gelatiini kapse liin.

1X3 79842

ESIMERKKI XXIV

Määrä tablettia

Ainesosat kohti, mg_

Aktiivinen ainesosa 150 laktoosi 92

Edellä olevat ainesosat sekoitetaan ja laitetaan kovakuoriseen gelatiini kapseliin.

ESIMERKKI XXV

Valmistetaan pH-arvoon 7 puskuroitu injisoitava valmiste, jolla on seuraava koostumus:

Ainesosat

Aktiivinen ainesosa 0,2 g KE^PO^-puskun (0,4 M liuos) 2 ml KOH (1 N) q.s. pH 7:ään vesi (tislattu, steriili) q.s. 20 ml:aan

ESIMERKKI XXVI

Valmistetaan oraalisuspensio, jolla on seuraava koostumus: Ainesosat

Aktiivinen ainesosa 0,1 g fumaarihappo 0,5 g natriumklorldi 2,0 g metyyliparabeeni 0,1 g rakeistettu sokeri 25,5 g sorbitoli (7U?i liuos) 12,85 g

Veegum K (Vanderbilt Co.) 1>0 g makuaineet 0,035 ml Γ" 79842 114 väriaineet O , 5 m g tislattu vesi q.s. 100 ml:aan

ESIMERKKI XXVII

Tooppinen formulaatio

Ainesosat £

Aktiivinen yhdiste 0,2-2

Span 60 2

Twee n 60 2

Mineraaliöljy 5

Vaseliini 10

Metyy1iparabeeni 0,15

Propyyliparabeeni 0,05 BHA (buLyioitu hydruksimusoli) 0,01 vesi q.s.100

Vettä lukuunottamatta yhdistetään kaikki edellä olevat ainesosat ja kuumennetaan sekoittaen 60°C:eeri. Sen jälkeen lisätään 60°C:ssa riittävä määrä vettä voimakkaasti sekoittaen ainesosien etnulyoirmseksi ja tämän jälkeen lisätään 100 g:aan tarvittava vesi.

ESIMERKKI XXVIII

Ihmisleukosyytin elastaasin inhibiitiomääritys 1. Entsyymi

Viitteet: Barrett, A.J. (1981), Methods in Enzymoloqy , 8UC, 581-588

Engelbrecht, et ai. , ( 1982 ), Z. Physiol.

Chem., 363, 305-315.

Terveeltä lahjoittajalta saatiin tuoreita ihmisleukosyytteja, jotka pakastettiin ja pidettiin -75°C:ssa käyttöön asti.

115 79842

Entsyymi valmistettiin noudattamalla edellä mainittuja menetelmiä: Solut pestiin suolaliuoksessa ja homogenisoitiin, kun mukana oli 1 M NaCl ja 0,1% Brij 35 (Sigma Chemical C., n:o P-1254). Sentrifugoitiin ja väkevöitiin dialysoimalla polyetyleeniglykolia (molekyylipaino 20.000) vasten, minkä jälkeen materiaali kr omatografoitiin Sephacryl S-300 (Pharmacia) hartsilla. Aktiiviset jakeet yhdistettiin, väkevöitiin kuten edellä ja kromatografoitiin affini-teettigeeli11ä, joka muodostui Sepharose CL-4B hartsiin kiinnitetystä naudankeuhkon trypsiini-inhibiitistä. Aktiiviset jakeet yhdistettiin, väkevöitiin kuten edellä niin, että se oli aktiivisen elastaasin suhteen noin 0,3 -mikro (notaarista ja pakastettiin 1 m 1:n tasaosim -75°C:ssa käyttöön asti.

2 . Substraatti

Metoksisukkinyyli-L-alanyyli-L-alanyyli-L-prolyyli-L-va1yy1i-N-metyy1i-kumariiniamidi saatiin Peninsula Laboratories (San Carlos, Kalifornia) laboratoriosta. Valmistettiin 1 mM liuokset dimetyylisuklfoksidissa ja pidettiin käyttöön asti 4°C:ssa.

3. Inhibiitit Määritettävät kaavan I mukaiset yhdisteet liuotettiin dimetyylisulfoksidiin niin, että saatiin 5, 10 tai 20 mM perusliuokset, joita voidaan tarvittaessa laimentaa edelleen.

4. Määrityspuskuri

Puskurin koostumus oli: 25 mM N-2-hydroksietyyiipi-peratsiini-N-2-etaanisulfonihappo, IM natriumkloridi, 0,1% paino/tilavuus Brij 35, pH 7,8.

5 . Menetelmä 116 79842

Perkin-Elrner Model 650-40 fluoresenssispektrofotometri asetettiin seuraavasti: ratio-model, eksikaatio 370 nm, emissio 460 nm, täyden asteikon lukema 1, 5 tai 10 yksikköä, kyvettikammio termostoitu 25uC:een. Niillä kaavan I mukaisilla yhdisteillä, jotka itse ovat fluoresoivia, eksikaation aallonpituus voi valinnaisesti olla 390 nm interferenssin minimoimiseksi. 2,U ml: aan määntyspuskuria fluore-senssikyvetissä lisätään sekoittaen 5 mikrolitraa substraattia 20 mikrolitraa entsyymiä. Fluoresenssin muutos tallennetaan strip chart-piirtunlle ja mitataan inhiboimaton alkunopeus, joka tyypillisesti on 0,8 yksikköä minuutissa. Noin 2 minuutin tällaisen tallentamisen jälkeen lisätään sekoittaen inhibiitti (perusliuosta 0,5 - 20 mikrolitraa) ja jatketaan tallentamista. Reaktiota seurataan, kunnes saavutetaan uusi vakionopeus. Tämä toimenpide toistetaan useille (4-6) inhibiittikonsentraatioille. Tiedot - substraattikonsentraa-tiotaulukko, inhibiitin konsentraatio ja havaitut reaktio-nopeudet - sovitetaan sopivaksi lausekkeeksi pienimmän neliösumman regressioanalyysillä.

117 79842 T aulukko

χ L

xkcx.

l· R1 R2 R3 X PK.* etyyli H H i-propyyliNH 9,03 etyyli H H n-butyyli NH 8,38 metyyli H H i-propyyli NH 8,36 metyyli metyyli H i-propyyli NH 8,23 metyyli H H n-butyyli NH 7,71 H H H NH2GlyLeuPro 7,68 H H H NH2LeuPro 7,67 H II H D-PhGly OMe 7,56 H H H D-LeuOMe 7,A3 H etyyli H i-propyyli NH 6,74 H H metyyli i-propyyli NH 6,23 H NH asetyyli H i-propyyli NH 6,83 pK^ = -iog^0(K^), jossa K.. on 50?ί inhibiitioon tarvittu konsentraatio (mooleissa)

ESIMERKKI XXIX

Naudan trypsiinin inhibiιtiomääritys 1. Entsyymi

Trypsiini (tyyppi III) saatiin Sigma Chemical Company'lta.

Siitä tehtiin 0,23 rncj/ml liuos 1 mM suolahapossa ja pidettiin kayttööna s Li A u E:s s a.

Γ" 118 79842 2. Substraatti 7-(glutaryyli-L-fenyylialaniiniamido)-4-metyylikumariini saatiin Sigma-yhtiöltä ja siitä tehtiin 10 mM konsentraatio 1:1 asetonitnilirdimetyylisulfoksidissa.

3. Inhibiitit

Kuten esimerkissä XXVili.

4. Määrityspuskun Määrityspuskurin koostumus oli: 25 mM M-2-hydroksietyyli-piperatsiini-N-2-etaanisulfonihappo, 0,1 M kaliumkloridi, pH 7,8.

5. Menetelmä

Kuten esimerkissä XXViil.

119 79842

Taulukko R1 0 X Ao R1 R2 R X pK.* 3 ^ l etyyli H ii i-propyyli NH 7,27 etyyli H H n-butyyliNH 7,41 metyyli metyyli H i-propyyli NH 6,43 H H H D-PhGlyOMe 7,19 H H H DL-PhGlyOMe 7,02 H H H D-LeuOMe 6,80 H H H Syk.loheksyyli NH 6,58 metyyli H H i-propyyli NH 6,42 H H H bentsyyliNH 6,42 H etyyli H i-propyyliNH 5,60 H H metyyli bentsyyliNH 6,22 H metyyli metyyli i-propyyli NH 6,61 H II H L-LeuOMe 6,33 H H H NH2GlyLeuPro 6,22 H H H pOHPhEt NH 5,53 p K ^ = -log (K^), jossa K on 50¾ inhibiitioon tarvittu konsentraatio (mooleissa) 120 79842

ESIMERKKI XXXIII

Yhdisteiden stabi i 1 isuuden määrittäminen kokoplasmassa

Ihmisen sitraa11ikasite 11yä kokoplasmaa saatiin paikallisesta veripankista ja pidettiin käyttöön asti pakastettuna -70°C:ssa. Bentsoksatsinonia (10 mM perusliuoksesta dimetyyli-sulfoksidissa) lisättiin 3 7 0 C : s s a plasmaan 5 0 m M loppukon-sentraatioon ja inkubointia jatkettiin 3 7 0 C : s s a . Tämän jälkeen otettiin eri aikoina näytteet ja laimennettiin viisinkertaisesti seokseen, jonka koostumus oli 20mM kaliumfosfaatti, u,14 M natriumkloridi, 3¾ paino/tilavuus Brij 3 3 (Oigma Chemical Company), pH 7,4, ja tämän liuoksen fluoresenssi mitat!imm 343 nm:ssä (eksikaatio) ja 429 nm : ssä (emissio). Fluoresenssin intensiteetti on verrannollinen jäljelle jääneen bentsoaksatsinonin konsentraatioon. Nämä tulokset sovitettiin epälineaarisella iterointitek-niikalla ensimmäisen kertaluokan eksponenttilausekkeiksi, jolloin saatiin puo 1iintumisajat plasmassa.

Bentsoksatsinonien, jotka ovat heikosti tai ei lainkaan fluoresoivia, asemesta käytettiin vaihtoehtoisesti korkea-painenestekromatografiaa (HPLC). Edellä esitetyistä plasman inkubaatioliuoksista otettiin näytteet ja laimennettiin 1:1 (tilavuus/tilavuus) aseto nitrii1i11ä, sekoitettiin pyörresekoittimessa ja sentrifugoitiin. Supernatantista lnjisoitiin 10 mikrolitraa HPLC-kromatograa fiin ja kroma-tografoitiin 5 mikronin RP-18 (käänteisfaasi) kolonnissa (9% asetonitriili, 10% vesi (tilavuus/tilavuus)) detektointi-absorbanssin ollessa 340 nm. Retentioajat ja konsentraatiot määritettiin vertaamalla standardeihin. Bentsoksatsinoni-piikkien integroidut pinta-alat ιnkubaatioaikaa vasten käsiteltiin kuten edellä puoliintumisaikojen saamiseksi.

121 79842

Taulukko 81 0 ΛΛ

1 ° I

o A. A.

H ^v' ^Ssl 1 2 1 1/21 R 11 «, X in.

3 minuuttia H H H QABA 480 metyyli metyyli H i-propyyli NH 327 metyyli H H i-propyyli NH 194 H metyyli metyyli i-propyyli NH 114 etyyli H H i-propyyliNH 98 metyyli metyyli H LeuOMe 98 metyyli H H n-butyyliNH 62 etyyli H H n-butyyliNH 58 H H metyyli i-propyyli NH 54 H etyyli H 1-propyyliNH 38 Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä annettiin rotille 200 mg/kg annoksena 17 päivää ilman mitään haitallista vaikutusta .

Claims (5)

122 79842

1. Menetelmä valmistaa terapeuttisesti vaikuttavia 4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni-johdannaisia, joiden kaava I on R1 0 , . R3 jossa Rl on vety tai alempi alkyyli; ja r3 ovat kumpikin toisistaan riippumatta vety, halogeeni, alempi alkyyli, hydroksi, alempi alkoksi, alempi tioalkyyli, -N02, -N(R')2, -NR'COR', -NHCON(R') tai -NHCOOR' , edellyttäen, että ainakin yksi ryhmistä R^-, R^ ja R^ on muu kuin vety, kun X on NHR tai NR'COR"; ja X on H R' I I -N-R, -N-C-R", -AN(R1)o tai -AOR' Il Z 0 (A) (B) (C) (D) jossa R on alempi alkyyli, alempi alkenyyli, alempi alkynyyli, C3-C6 sykloalkyyli, joka voi olla substituoitu 1-5 substi-tuentilla, jotka ovat toisistaan riippumatta alempi alkyyli, alempi alkynyyli, alempi alkoksi, amino, halogeeni, nitro, alempi alkyyliamino tai alempi dialkyyliamino, tai fenyyli-Ci-C6 alkyyli, joka voi olla substituoitu fenyylirenkaassa 1-3 substituentilla, jotka ovat toisistaan riippumatta 123 79842 alempi alkyyli, alempi alkenyyli, alempi alkoksi, amino, halogeeni, nitro, alempi alkyyliamino tai alempi dialkyyli, amino, kukin R' on toisistaan riippumatta vety, alempi alkyyli, alempi alkenyyli tai alempi alkynyyli, jossa tyydyt-tymätön sidos on ainakin yhden hiilen etäisyydellä 0- tai N-atomista; kukin R" on NHR' tai AOR', alempi alkoksi, alempi alkyyli, alempi alkenyyli tai alempi alkynyyli, A on isoleusiini, fenyyliglysiini, väliini, proliini, leusiini, fenyylialaniini tai glysiini tai rakenteellisesti lähellä oleva aminohapporyhmä, mukaan lukien N-alempi-alkyylisubstituoidut johdannaiset tai peptidi, jossa on 2 tai 3 edellä mainittua aminohapporyhmää, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä alempi alkyyliestereitä ja suoloja, tunnettu siitä, että a) syklisoidaan kaavan (II) mukainen yhdiste 4^· R·3 H jossa R1, R2, R3 ja X tarkoittavat samaa kuin edellä ja Y on -C(0)0CH3, -C(0)0C2H5, -C(0)0H tai T1(0C(0)CF3)2, b) yhdiste, jonka kaava on r2 Ö 124 79842 jossa R1, ja tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan RNH2 tai AOR' mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R ja R' tarkoittavat samaa kuin edellä, minkä jälkeen saatu seos erotetaan niin, että saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, ja haluttaessa c) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X on -N-R saatetan reagoimaan kaavan R'-N=C=0 mukaisen yhdisteen H kanssa, jossa R* tarkoittaa samaa kuin edellä kaavan (I) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, jossa X on -N-C(0)NHR', tai H d) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X on -N-R saatetaan reagoimaan kaavan 0=C=A0R' mukaisen yhdisti teen kanssa, jossa R' tarkoittaa samaa kuin edellä, kaavan (I) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, jossa X on -N-C(O)AOR', tai H e) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste muunnetaan suolakseen, f) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukaisen yhdisteen suola muunnetaan vastaavaksi vapaaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi, g) edellä esitetyllä tavalla ssadun kaavan (I) mukaisen yhdisteen happoadditiosuola muunnetaan toiseksi kaavan (I) mukaisen yhdisteen suolaksi, 125 79842 h) edellä esitetyllä tavalla saatu kaavan (I) mukainen yhdiste muunnetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi esterikseen, tai i) edellä esitetyllä tavalla saadun kaavan (I) mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävä esteri muunnetaan vapaaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa r! on alempi alkyyli.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X on -NHR.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on isopropyyli, on metyyli, ja R^ ja R^ ovat molemmat vety, eli yhdiste on 2-isopropyyliamino-5-metyyli-4H-3,1-bentsoksatsin-4-oni, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

5. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on n-butyyli, R^ on metyyli ja R^ ja R^ molemmat ovat vetyjä, eli yhdiste on 2-n-butyyliamino-5-metyyli-4H-3,l-bentsoksatsin- 4-oni, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 126 79842