FI76555B - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-1- alkanol och 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-4-metyltio- smoersyraderivat. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-1- alkanol och 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-4-metyltio- smoersyraderivat. Download PDFInfo
- Publication number
- FI76555B FI76555B FI821736A FI821736A FI76555B FI 76555 B FI76555 B FI 76555B FI 821736 A FI821736 A FI 821736A FI 821736 A FI821736 A FI 821736A FI 76555 B FI76555 B FI 76555B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- acid
- benzyl
- mercaptopropionylamino
- product
- mmol
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C319/00—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides
- C07C319/14—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides of sulfides
- C07C319/20—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides of sulfides by reactions not involving the formation of sulfide groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C59/40—Unsaturated compounds
- C07C59/58—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
- C07C59/64—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C327/00—Thiocarboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C57/52—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen
- C07C57/58—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C57/52—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen
- C07C57/58—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings
- C07C57/60—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms containing halogen containing six-membered aromatic rings having unsaturation outside the rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Neurology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
1 76555
Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 2-(2-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-1-alkanoli- ja 2-(2-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4-metyylitio-voihap-pojohdannaisten valmistamiseksi 5
Keksintö koskee menetelmää uusien 2-(2-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-1-alkanoli- ja 2-(2-bentsyyli-3-metyylimerkaptopropionyyliamino)-4-metyylitio-voihappojohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaavat ovat 10 C , 15 HSsv0Y%^ICH2)n"s"Rl 1 0 ch2oh 20
X
I h R ,
HV^^k^(CH2,n-s-R II
25 T f» 0 ch2oh HSvv/y^y^<CH2) 2SC"3 111
° COOH
35 2 76555 ja
IV
H O COOH
10 jossa X on vety, (C^-Cg)alkoksi tai kloori, R on vety tai (C1-C3)alkyyli, n on 1-4 ja R1 on (C1-C3)alkyyli.
Näillä yhdisteillä on edullinen vaikutus keskushermosto järjestelmään (CNS) ja ne ovat käyttökelpoisia anal-15 geettisina tai kouristusta estävinä aineina tai sellaisten sairauksien hoidossa, joissa endogeeniset enkefalii-nipitoisuudet ovat normaaleja pienemmät. Aktiviteetin oletetaan johtuvan näiden yhdisteiden kyvystä inhiboida en-kefalinaasia, dipeptidyyli-karboksipeptidaasia, joka spe-20 sifisesti lohkaisee enkefaliinin Gly^-Phe^-sidoksen. En-kefaliinit määritellään yhdisteiksi, jotka välittävät signaaleja keskushermostojärjestelmässä. Enkefaliinien inhibiittoreilla on käyttökelpoinen CNS-aktiviteetti.
Julkaisusta Nature 288, pp. 286-288 (1980) on tun-25 nettua, että N-(2-bentsyyli-3-merkaptopropionyyli)glysii-ni ("thiorphan") on spesifinen enkefalinaasin inhibiittori. Tällä yhdisteellä on ilmoitettu olevan analgeettinen (antinosiseptinen) aktiviteetti hiireen nk. kuumalevy-hyp-pykokeessa mutta ei nk. häntä-vetokokeessa.
30 US-patenttijulkaisussa 4 046 889 kuvataan laajaa yh disteryhmää, jonka kaava on
Rd f f I-fCH) q 35 Ra-S-(CH>p-C„-CO-N-1^ 3 76555 jossa
Ra on H tai R^CO;
Rb ja Rc ovat H, alkyyli tai fenyylialkyyli?
Rd on H, OH tai alkyyli; 5 Re on OH, alkoksi tai NH2;
Rf on alkyyli, fenyyli tai fenyylialkyyli; p on 0, 1 tai 2; ja q on 1-3, Näiden yhdisteiden on ilmoitettu olevan käyttökel-10 poisia angiotensiiniä muuttavan entsyymin inhibiittoreina, joita voidaan käyttää hypotensiivisinä aineina. Mainitussa julkaisussa edulliset yhdisteet on määritelty laajasti, so. yhdisteet, joissa Rb ja Rc tarkoittavat muuta kuin fenyyli-alkyyliä, ja erikoisen edullisia yhdisteitä ovat proliini-15 johdannaiset (so. q = 2, R^ = H). Eräästä tähän ryhmään kuuluvasta yhdisteestä, jonka kaava on n 20 HSCHj/g^ N/
COOH
käytetään nimitystä kaptoprili ("captopril").
25 Nyt on havaittu, että kaavojen I, II, III ja IV mu kaiset ovat enkefalinaasi-entsyymin inhibiittoreita ja siten käyttökelpoisia analgeettisina ja kouristusta estävinä aineina.
Kaavojen III ja IV mukaiset yhdisteryhmät käsittävät 30 myös ko. yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävät katio-nisuolat. Sellaisia suoloja ovat alkalimetallisuolat, esim. natrium- ja kaliumsuolat, maa-alkalimetallisuolat kuten kalsium- ja magnesiumsuolat, aluminiumsuolat, ammoniumsuo-lat, ja suolat orgaanisten emäksien, esim. amiinien kanssa, 35 kuten bentsatiinin (N,N'-dibentsyylietyleenidiamiini), ko-liinin, dietanoliamiinin, etyleenidiamiinin, meglumiinin 4 76555 (N-metyyliglukamiini), benetamiinin (N-bentsyylifenetyyli-amiini), dietyyliamiinin, piperatsiinin ja trometamiinin (2-amino-2-hydroksimetyyli-l,3-propaanidioli) kanssa. Muita suoloja, esim. disykloheksyyliamiini-suolaa, joita ei 5 yleensä pidetä farmaseuttisesti hyväksyttävinä, voidaan myös käyttää eristämistä, puhdistamista tai testausta varten.
Kaavojen I, II, III ja IV mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa siten, että 10 (a) yhdiste, jonka kaava on
QL
(XIII)
H O
20 jossa X tarkoittaa samaa kuin edellä ja P on rikin suoja-ryhmä, liitetään yhdisteeseen, jonka kaava on
R
HÄ^iCH^n-S-R1 (XIV)
25 I
ch2oh jossa R, n ja R1 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai yhdisteeseen, jonka kaava on 30 h2Nsv.(ch2)2sch3 7"Ή , , (XV) COOR2 35 5 76555 jossa R on karboksyylin suojaryhmä, ja saadut diastereo-isomeerit erotetaan ja hydrolysoidaan tai saadut diastereo-isomeerit hydrolysoidaan ja erotetaan, tai (b) yhdiste, jonka kaava on „ '4r" joissa kaavoissa P ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, liitetään kaavan (XIV) tai (XV) mukaiseen yhdisteeseen ja 15 saatu yhdiste hydrolysoidaan; ja haluttaessa saatu kaavan (III) tai (IV) mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi kationisuo-laksi.
Menetelmävaihtoehdossa a) sopiva rikin suojaryhmä 20 on esim. bentsoyyli tai asetyyli, joka poistetaan selektiivisesti myöhemmällä solvolyysivaiheella.
Kaavan XIII mukaisen hapon liittäminen kaavan XIV mukaiseen amiiniin suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla käyttämällä olennaisesti ekvimolaarisia määriä happoa ja 25 amiinia saannon maksimoimiseksi ja alkoholin mahdollisen asyloitumisen minimoimiseksi. Esillä olevassa tapauksessa erikoisen sopiva liittämistapa on yksinkertaisesti muuttaa happo happokloridiksi ylimäärällä happokloridia muodostavaa reagenssia (esim. oksalyylikloridia, sulfonyyliklori-30 dia) inertissä, alhaalla kiehuvassa liuottimessa kuten me-tyleenikloridissa. Lämpötila ei ole kriittinen, mutta lämpötila 20-50°C on edullinen (kohtuullista painetta vaaditaan alueen ylärajalla käytettäessä metyleenikloridia liuottimena). Happokloridi eristetään vapaaksi liuottimes-35 ta ja ylimäärästä reagenssia haihduttamalla tyhjössä, liuotetaan uudelleen inerttiin liuottimeen ja lisätään hitaas- 6 76555 ti aminoalkoholin liuokseen, jossa on ainakin yksi mooli-ekvivalentti tertiääristä amiinia kuten trietyyliamiinia tai N-metyylimorfoliinia. Lämpötila ei ole kriittinen; esim. 0-50°C on sopiva. Lämpötila alueen alapäässä on edul-5 linen. Jos synteesissä käytetty happo on raseeminen, on yleensä mahdollista erottaa saadut diastereoisomeerit (epi-meerit) fraktioivalla kiteytyksellä tai kromatografisilla standardimenetelmillä. Vaihtoehtoisesti diaesteroisomeerit voidaan erottaa mainitulla tavalla sen jälkeen kun suoja-10 ryhmä on poistettu. Kun halutaan ainoastaan toinen diaste-reoisomeeri on edullista käyttää tarkoitukseen sopivaa kiraalista happoa lähtöaineena (menetelmävaihtoehto b). Kaikissa tapauksissa suojaryhmä P poistetaan selektiivisesti tunnetuilla solvolyysi-menetelmillä, joissa yleensä käy-15 tetään voimakasta emästä vedessä ja/tai alkoholissa, mahdollisesti inertin, sekoittuvan orgaanisen liuottimen läsnäollessa. Edullinen suoritusmuodon mukaan asyylitioyhdis-teen annetaan reagoida ainakin yhden mooliekvivalentin kanssa natriummetoksidia vedettömässä metanolissa. Yleensä 20 ei käytetä enempää kuin 20 %:n mooliylimäärä metoksidia.
Lämpötila ei ole kriittinen (esim. 0-50°C on hyvin sopiva); sopivasti käytetään ympäristön lämpötilaa.
Lähtöaineina käytettävät raseemiset hapot saadaan helposti kondensoimalla tiokarboksyylihappo sopivan 3-fenyy-25 li-2-metyleenipropionihapon kanssa: & & 30 — A^oh 'MV"1
• HO
35 Näiden happojen kiraaliset muodot saadaan haluttaes sa muodostamalla suoloja kiraalisen amiinin (esim. d-(2+)- 7 76555 ol-metyylibentsyyliamiini) kanssa, minkä jälkeen fraktioiva kiteytys sinänsä tunnetulla tavalla diastereoisomeeristen suolojen erottamiseksi.
Esillä olevassa synteesissä tarvittavat chiraliamino-5 alkoholit (XIV) ovat useissa tapauksissa kaupallisesti saatavissa. Vaihtoehtoisesti ne saadaan kiraalisten happojen esteröinnillä ja hydridi-pelkistyksellä tai kirjallisuudessa esitetyillä menetelmillä seuraavasti:
R R
10 HN___ ^(CH,) -S-R1 ™v*<^*CH2,i>"s-r1 HN\,ujr<CH2,n"s"Rl 2 " -»>H -» f* COOH COOR ch20h 15 jolloin R, n ja R1 merkitsevät samaa kuin edellä. Vaihtoehtoisesti kiraalinen aminoalkoholi saadaan tavanomaisella optisten isomeerien jakamismenetelmällä käyttäen ki-raalista amiinia happo-vaiheessa tai kiraalista happoa happo-, esteri- tai alkoholi-vaiheessa.
20 Kaavojen (III) ja (IV) mukaiset karboksyylihapot valmistetaan samalla tavoin liittämällä suojattu merkapto-happo (XIII) L-metioniini-esterin XV kanssa.
Kaavassa XV R on karboksylin suojaryhmä, joka poistetaan hydrolyysillä. Tähän tarkoitukseen sopii hyvin yk-25 sinkertaisin mahdollisin esteri, so. R = metyyli. Liittäminen suoritetaan edellä kaavojen XIII ja XIV mukaisten yhdisteiden yhteydessä kuvatulla tavalla. Kuitenkin tässä tapauksessa voidaan haluttaessa käyttää ylimäärää happoklo-ridia (tai hapon muuta sopivaa aktivoitua muotoa), koska 30 alkoholiryhmä ei ole läsnä aminoesterissä. Edellä esitetyt huomautukset, jotka koskevat diastereoisomeerien erottamista tai kiraalisten happojen käyttämistä lähtöaineina päte-vät hyvin myös tässä tapauksessa. Suojaryhmät P ja R poistetaan samoin solvolyysillä, yleensä samanaikaisesti käyt-35 täen ainakin kahta ekvivalenttia voimakasta emästä. Erikoisen sopivaa on suorittaa hydrolyysi käyttäen pientä yli- 8 76555 määrää vesipitoista natriumhydroksidia veteen sekoittuvassa inertissä liuottimessa, esim. alemmassa alkoholissa tai 1,2-dimetoksietaanissa.
Kaavojen (III) ja (IV) mukaisten yhdisteiden farma-5 seuttisesti hyväksyttävät kationisuolat valmistetaan helposti antamalla happomuotojen reagoida sopiva emäksen, tavallisesti yhden ekvivalentin kanssa yhteisliuottimessa. Tyypillisiä emäksiä ovat natriumhydroksidi, natriummetoksi-j di, natriumetoksidi, natriumhydridi, kaliummetoksidi, 10 magnesiumhydroksidi, kalsiumhydroksidi, ammoniumhydroksidi, bentsatiini, koliini, dietanoliamiini, etyleenidiamiini, meglumiini, benetamiini, dietyyliamiini, piperatsiini ja trometamiini. Suola eristetään väkevöimällä kuiviin tai lisäämällä ei-liuotinta. Eräissä tapauksissa suolat voi-15 daan valmistaa sekoittamalla hapon liuos muun kationisuo-lan (esim. natrium-etyyliheksanoaatin, magnesiumoleaatin) liuoksen kanssa, käyttämällä liuotinta, jossa haluttu ka-tionisuola saostuu, tai voidaan muulla tavalla eristää väkevöimällä ja/tai lisäämällä ei-liuotinta. Kun suolaa, 20 jota ei yleensä pidetä farmaseuttisesti hyväksyttävänä, käytetään eristämistä tai puhdistamista varten, se voidaan helposti muuttaa vapaaksi happomuodoksi tekemällä suolan vesiliete tai -liuos happameksi, uuttamalla veteen sekoittamattomaan orgaaniseen liuottimeen ja haihduttamalla.
25 Kaavojen I, II, III ja IV mukaisia yhdisteitä on tutkittu in vitro enkefalinaasi-entsyymia inhiboivan vaikutuksen määräämiseksi. Entsyymin valmistamiseksi pikkuaivot (minus cerebellum) poistettiin Sprague-Dawley CD urosrotista (Charles River Breeding Laboratories, Inc., 30 Wilmington, MA; 200-250 g) kaulan katkaisun jälkeen. Kudos homogenisoitiin (Polytron, Brinkmann Instruments, Inc., Westbury, NY) 30 tilavuudessa (paino/til.) jääkylmää 50 mM Tris-HCl tris(hydroksimetyyli)metyyliamiinihydrokloridia, Fisher Scientific Co., Fair Lawn, NJ) pH 7,7 puskuria.
35 Homogenisaatti sentrifugoitiin käyttäen 50 000 x g 15 minuuttia. Saatu pelletti suspendoitiin uudelleen ja sentri- 9 76555 fugoitiin kolme lisäkertaa edellä kuvatulla tavalla. Mem-brani-pelletti dispergoitiin 15 tilavuuteen 50 mM Tris-HCl pH 7,7 puskuria, joka sisältää 1 % Triton X-100 (Rohm ja Haas, Philadelphia, PA) ja viljeltiin 37°C:ssa 45 minuut-5 tia. Kun oli sentrifugoitu käyttäen 100 000 x g 60 minuuttia liuenneet entsyymit pakastettiin 2 ml:n erissä (tätä valmistetta voidaan säilyttää 3 kuukautta).
Inhibiittoreiden tutkimiseksi enkefalinaasin inhi-boinnin suhteen kolminkertaisia seoksia, jotka sisältävät 10 90 mikrolla 50 mM Tris-HCl pH 7,7 puskuria, joka sisälsi puromysiinidihydrokloridia (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), 3,2 mM; 200 mikrolla liukoiseksi tekevää puskuria (entsyymivalmistuksen viimeisestä vaiheesta); 5 mikrolia inhibiittoria (eri väkevyyksiä liuotettuna veteen); 200 15 mikrolia entsyymiä; ja 5 mikrolia 3H-leusiini-enkefaliinia (26,8 Ci/mmoolia, New England Nuclear, Boston, MA), 144 mM, inkuboitiin 1 tunti 37°C:ssa 1,8 ml:n polyetyleeniput-kissa (Beckman Microfuge tubes, Beckman Instrumens, Inc., Palo Alto, CA). Yksi sarja kontrolliputkia sisälsi keitet-20 tyä entsyymiä (kuumennettu 100°C:ssa 10 minuuttia) sokea-koetta varten. Reaktio keskeytettiin keittämällä putkia 10 minuuttia ja sen jälkeen sentrifugoitiin 1 minuutti Beckman Microfuge sentrifugissa. Käytettiin 10 mikrolin määrä kutakin supernataattia täplätutkimusta varten ohutkerros-kro-25 matografia-levyllä (TLC) (silikageeli, 60, 20 x 20 cm, E. Merck, Darmstadt, Saksa) käyttäen 1-8 näytettä levyä kohti. 10 mikrolia standardiseosta, joka sisälsi 0,4 mg/ml tyro-siinia (tyr, Mann Research Laboratories, Inc., New York, NY), 1 mg/ml. L-tyrosyyliglysiiniä (tyr-gly Sigma), 1 mg/ml. 30 L-tyrosyyliglysiiniä (tyr-gly-gly, Sigma) ja 1 mg/ml. leu-siinienkefaliinia (leu-E, Calbiochem-Behring Corp., La jolla, CA) käytettiin täplätutkimusta varten kunkin inku-bointiseos-täplän huipulla samoin kuin erikseen kullakin levyllä vyöhyke-identifioimisen selvittämiseksi.
10 76555
Levyt kuivattiin ja pantiin peitettyihin lasisäiliöi-hin tasapainoitettuna 100 ml:11a isopropanoli:etyyliasetaatti: 5 % etikkahappoa (2:2:1). TLC-levyjen kehittämisen jälkeen erotetut tuotteet tehtiin näkyviksi suihkuttamalla 5 ninhydriini:asetoni-liuoksella (0,5 %, paino/til.) ja kuumentamalla 10 minuuttia 100°C:ssa tyhjöuunissa. Standardi-markkerien Rf-arvot olivat: tyr, 0,33; tyr-gly, 0,20; tyr-gly-gly, 0,13; leu-E, 0,47. Radioaktiiviset täplät identifioitiin lisätyillä markkereina ja kaavittiin nes-10 tetuikepulloihin, joihin lisättiin 1 ml etanolia ja sen jälkeen 10 ml Aquasol-2 (New England Nuclear). Pulloja säilytettiin yli yön ja radioaktiivisuus laskettiin nes-tetuikelaskimessa. Tyr-tyr-gly-muodostus perustuu erotukseen, joka saadaan kun kokonaismäärästä minuuttia kohti 15 tässä TLC-vyöhykkeessä vähennetään vastaava arvo, joka saadaan käyttämällä keitettyä entsyymiä (sokeakoe). Aktiviteetti ilmoitetaan inhiboivana molaarisena väkevyytenä (IC5Q, M), joka inhiboi entsyymin aktiviteettia 50 % normaalista arvosta. Eri yhdisteellä saadut tyypilliset tu-20 lokset on esitetty taulukossa I verrattuna samassa kokeessa käytettyyn tiorfaniin.
Taulukko I Enkefalinaasin esto 25 Yhdiste
I/II/III/IV X R n R1 IC5g, M
I H H 2 CH3 4f8 χ 10-7 II H H 2 CH3 9,6 x 10"6 III - - - - 9,1 x 10~9 IV - - - - 7 x 10"8 -"Triorfaani"- 1,5 x 10“8 11 76555
Kaavojen I, II, III ja IV mukaisten yhdisteiden anal-geettisen aktiviteetin määräämiskokeessa käytettiin kemiallista nosiseptiivistä ärsykettä, eli tutkittiin esto-vaikutus vatsan venytyskokeessa fenyylibentsokinonin (PBQ) 5 annostamisen jälkeen. Käytettiin Carworth CF-1 hiirikantaa sen perusteella että tämä kanta reagoi erittäin selvästi venytykseen. Käytettävien eläinten annettiin paastota 15-16 tuntia ennen kokeen aloittamista. Annospitoisuutta kohti käytettiin 15 hiirtä (5 ryhmissä), jotka painavat 10 11-15 g. Yhdisteitä annosteltiin suun kautta tai ihonalai sesti. Lääkkeen esikäsittelyäjät olivat 1 tunti (suun kautta) ja 20 minuuttia (s.c.). Hiiripariin injektioitiin 2 mg/kg PBQ:ta i.p. ja ne pantiin laatikoihin (28 x 18 x 24 cm), joita pidettiin 40°C:ssa termostaattisesti sääde-15 tyn vesihauteen avulla. 5 minuutin kuluttua eläimiä tarkkailtiin 5 minuutin ajan ja merkittiin muistiin reaktioiden lukumäärä eläintä kohti vatsavenytyksessä. Venytyksen katsottiin edustavan vatsan jaksottaista kutistumista, ta-karaajan ojennusta, lantion kiertymistä tai selkälihas-20 kouristusta (hiiren vatsa koskettaa häkin pohjaa ja laahaa pitkin häkin pituutta). Analgeettisen vaikutuksen aste laskettiin vääntelehtimisten vähenemisenä verrattuna kontrollieläimiin, joille suoritettiin koe samana päivänä (MPE-%). Kaavojen I, II, III ja IV mukaisilla yhdisteillä 25 saadut tyypilliset tulokset on esitetty taulukossa II.
Tämä koe osoittaa yhdisteiden kliinistä käyttökelpoisuutta analgeettisinä aineina.
12 76555
Taulukko II
Esto-% (% MPE) vatsavenytyksessä fenyylibentsoki-nonin antamisen jälkeen 5 Yhdiste Annos (s.c., I/II/III/IV X R n r£ %MPE mq/kq)_ I H H 2 CH3 100 320 69 233 | 23 170 ! 10 I 4-OCH3 H 2 CH3 62 320 I 4-C1 H 2 CH3 86 320 II H H 2 CH3 (a) 320 II 4-OCH3 H 2 CH3 46 320 II 4-C1 H 2 CH3 75 320 15 III - - 57 160 IV - - - - 48 160 (a) Mitään merkittävää aktiviteettia ei todettu tällä an- i nospitoisuudella.
20 Uusien yhdisteiden kouristusta estävä aktiviteetti määritettiin tutkimalla Charles Rivers, Swiss CD kanta, urospuolisia hiiriä, joiden oli annettu paastota 18 tuntia ennen koetta. Hiiriryhmiä käsiteltiin koeyhdisteiden an-nospitoisuuksien alueella ja 1 tuntia myöhemmin annettiin 25 maksimaalinen sähkökouristusisku (ECS) 0,2 sekunnin ajan määrässä 50 mA, 60 Hz sarveiskalvon läpi menevillä elektrodeilla. Sähköärsykkeen antamisen jälkeen kutakin hiirtä tarkkailtiin 10 sekuntia takaraajan mahdollisen jänteyttä-vän kouristuksen toteamiseksi. Kaikilla kontrollihiirillä 30 oli sellaisia kouristuksia. Tulokset on esitetty yhteenvetona taulukossa III. Maksimaalisen ECS:n salpaus on tavanomainen laboratoriokoe kouristusta estävän aineen kliinisen käyttökelpoisuuden toteamiseksi ja tunnetut kouristusta estävät lääkkeet osoittavat aktiviteettia tässä ko-35 keessa. Edelleen on todettava että tiorfaani oli inaktiivinen vieläpä paljon suuremmalla annoksella.
13 76555
Taulukko III
Enkefalinaasi-inhibiittoreiden kouristusta estävä vaikutus annettaessa maksimaalinen sähkökouristus-isku (ECS) hiirelle 5
Yhdiste ED50 I/II/III/IV X R n R1 (s.c., roq/kq) I H H 2 CH3 178 III - - - - 74,1 10 IV - - - 140,8 tiorfaani >320
Enkefalinaasi-estovaikutuksensa ja analgeettisten ominaisuuksiensa perusteella hydroksi-johdannaiset (kaavat 15 I ja II) ovat käyttökelpoisia analgeettisina aineina, so. käytettäväksi kivun lieventämiseksi, kun taas happojohdannaiset enkefalinaasia ja kouristusta estävien ominaisuuksiensa perusteella ovat kliinisesti käyttökelpoisia kouristusten estämiseksi.
20 Kaavojen I, II, III ja IV mukaiset yhdisteet voidaan formuloida erilaisiksi farmaseuttisiksi valmisteiksi, jotka sisältävät ko. yhdistettä yksinään tai yhdistelmänä farmaseuttisen kantajan, kuten inertin kiinteän laimennus-aineen, vesipitoisen liuoksen tai erilaisten ei-myrkyllis-25 ten orgaanisen liuottimien kanssa, tai annosmuodoiksi kuten gelatiinikapseleiksi, tableteiksi, jauheiksi, pastilleiksi, siirapeiksi, injektoitaviksi liuoksiksi ja senkaltaisiksi. Sellaisiin kantajiin kuuluvat vesi, etanoli, gelatiinit, latkoosi, tärkkelykset, kasvisöljyt, vaseliini, 30 gumit, glykolit, talkki, bentsoyylialkoholit ja muut tunnetut lääkeaineiden kantajat. Haluttaessa nämä farmaseuttiset valmisteet voivat sisältää lisäaineita, kuten säilön- 14 76555 täaineita, kostutusaineita, stabiloimisaineita, voiteluaineita, absorptioaineita, puskuriaineita ja isotoonisia aineita.
Kaavojen I, II, III ja IV mukaisia yhdisteitä voi-5 daan antaa esim. suun kautta, laskimonsisäisesti, lihaksensisäisesti tai ihonalaisesti.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1
Metyyli-2S-(3-asetyylitio-2R-bentsyylipropionyyli-10 amino)-4-metyylitiobutyraatti ja metyyli-2S-(3-asetyylitio-2S-bentsyylipropionyyli-amino)-4-metyylitiobutyraatti
Tiolietikkahappoa (10,65 g, 140,0 millimoolia) lisättiin 2-bentsyyliakryylihappoon (10,0 g, 62,0 millimoo-15 lia) ja saatua liuosta kuumennettiin 90°C:ssa typpiatmos-fäärissä 1 tunti, jolloin silikageeli-TLC (eetteri eluant-tina) osoitti että reaktio oli olennaisesti päättynyt (Rf = 0,3 - tuote; Rf = 0,6 - lähtöaine). Reaktioseos jäähdytettiin ja ylimäärä tiolietikkahappoa poistettiin 20 tyhjössä. Jäännös atseotropoitiin kerran bentseenin kanssa, trituroitiin kolmesti heksaanin kanssa ja dekantoi-tiin tiolietikkahapon viimeisten jälkien poistamiseksi. Jäljelle jäänyt punainen öljy liuotettiin heti metyleeni-kloridiin (25,0 ml) ja käsiteltiin oksalyylikloridilla (21,8 25 g, 170,0 millimoolia). Liuosta kuumennettin 40°C:ssa typpi-atmosfäärissä 1 tunti, jolloin kaasun kehittyminen oli päättynyt. Reaktioseos jäähdytettiin, haihdutettiin tyhjössä ja atseotropoitiin kerran bentseenin kanssa. Jäännös liuotettiin metyleenikloridiin (25,0 ml) ja lisättiin pi-30 saroittain 0,5 tunnin aikana kylmään (0°C) sekoitettuun seokseen, jossa oli L-metioniini-metyyliesteri-hydroklori-dia (75,0 ml) ja trietyyliamiinia (14,51 g, 140,0 millimoolia) . Lisäyksen päätyttyä reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä, jolloin 35 TLC (eetteri) osoitti reaktion päättyneen (Rf = 0,48, 0,51 - tuotteet, Rf = 0,3 lähtöaine). Reaktioseos pestiin is 76555 2N kloorivetyhapolla (2 x 25,0 ml), vedellä (1 x 25,0 ml) ja kyllästetyllä natriumbikarbonaatilla (1 x 25,0 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saa-5 tiin 25,0 g otsikoitujen tuotteiden seosta öljynä. Tuote-seos erotettiin kahdeksi isomeeriksi paine-nestekromato-grafian avulla käyttäen 7,5 g näyteseosta ja eluoimalla y paineessa 2,5 kg/cm 25 mm x 1000 mm kolonnissa 20 prosenttisella eetteri/heksaanilla, 25 prosenttisella eetteri/ 10 heksaanilla ja 30 prosenttisella eetteri/heksaanilla. Tämä prosessi toistettiin kunnes koko seos oli erotettu. Tällöin saatiin metyyli 2S-(3-asetyylitio-2S-bentsyyli propionyy-liamino)-4-metyylitiobutyraatti; 4,1 g (17,3 % saanto) värittömiä kiteitä, sp. 68-70°C eetteri/heksaanista (1:1); 15 Analyysi laskettu yhdisteelle C18H2504NS2: C 56,37; H 6,57 %; N 3,65. Löydetty: C 56,19; H 6,26 %; N 3,64. ja metyyli-2S-(3-asetyylitio-2R-bentsyylipropionyylianu.no)- 4-metyylitiobutyraatti: 5,4 g (22,8 % saanto) värittömiä 20 kiteitä; sp. 65-67°C eetteri/heksaanista (1:1).
Analyysi laskettu yhdisteelle C18H2504NS2: C 56,37; H 6,57; N 3,65 Löydetty: C 56,48; H 6,35; N 3,68.
Esimerkki 2 25 2S-(2R-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4- metyylitiovoihappo ja 2S-(2S-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4-metyylitiovoihappo
Edellisessä esimerkissä saatujen esterien tuote-30 seosta (18,82 g, 49,0 millimoolia) 1,2-dimetoksietaanissa (72,0 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpiatmosfää-rissä. Lisättiin 2N natriumhydroksidia (55,0 ml, 110 millimoolia) ja saatua seosta sekoitettiin 1 tunti, jolloin silikageeli-TLC (9:1 kloroformi/etanoli) osoitti reaktion 35 päättyneen (Rf 0,2 - tuote; Rf 0,75 - lähtöaine). 1,2-di-metoksietaani poistettiin tyhjössä ja jäännös tehtiin hap- 16 76555 pameksi 2N kloorivetyhapolla pH-arvoon 2. Jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 100 ml) ja yhdistetyt uutteet kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Kuivattu liuos väkevöitiin, jolloin saatiin 16,4 g raakaa öljyä 5 tuotteena, öljy kromatografoitiin käyttäen 350 g silika-geeliä (230-400 meshia) ja eluoiden kloroformilla ja sitten 1 prosenttisella etanoli/kloroformilla ja lopuksi 2 prosenttisella etanoli/kloroformilla. Tuote eristettiin kahden otsikoidun isomeerin seoksena: 3,4 g (21 % saanto) 10 kiteistä tuotetta, sp. 130-2°C. Kiteyttämällä etyyliasetaatista saatiin 2,3 g puhdasta tuotetta,
Analyysi laskettu yhdisteelle ci5H21°3NS2: C 55,02; H 6,46; N 4,28 Löydetty: C 54,66; H 6,18; N 4,25.
15 Esimerkki 3
Disykloheksyyliammonium-2S-(2R-bentsyyli-3-merkapto-propionyyliamino)-4-metyylitiobutyraatti Metyyli-2S-(3-asetyylitio-2R-bentsyylipropionyyli-amino)-4-metyylitiobutyraatin (0,5 g, 1,3 millimoolia) 20 liuosta 1,2-dimetoksietaanissa (1,9 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä. Lisättiin 2N natriumhydrok-sidia (1,3 ml, 2,6 millimoolia) ja saatua liuosta sekoitettiin 1 tunti ja seurattiin TLC:llä kuten edellisessä esimerkissä. 1,2-dimetoksietaani poistettiin tyhjössä ja 25 jäännös tehtiin happameksi 2N kloorivetyhapolla pH-arvoon 2. Hapan liuos uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 15 ml) ja yhdistetyt uutteet kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Kuivattu liuos väkevöitiin, jolloin saatiin 484 mg raakatuotetta öljynä, öljytuote muutettiin disykloheksyyli-30 amiinisuolaksi eetterissä, jolloin saatiin 479 mg (72 % saanto) tuotetta, sp. 152-5°C. Kiteyttämällä uudelleen iso-propanolista saatiin 171 mg puhdasta tuotetta, sp. 164-7°C. Analyysi laskettu yhdisteelle C15H2i03NS2 Löydetty: C 63,51; H 8,35; N 5,30.
17 76555
Esimerkki 4 2S-(2S-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino-4-metyylitiovoihappo ja disykloheksyyliamiini-suola 5 Edellisen esimerkin mukaisella menetelmällä metyyli- 2S-(3-asetyylitio-2S-bentsyylipropionyyliamino)-4-metyyli-tiobutyraatti (1 g) muutettiin 939 mgsksi otsikoitua tuotetta öljynä, öljy kromatografoitiin 20 g: 11a silikageeliä (230-400 meshia) eluoiden eetterillä, jolloin saatiin 716 10 mg (84 % saanto) puhdasta otsikoitua tuotetta kirkkaana öljynä. 565 mg öljyn näytettä muutettiin disykloheksyyli-amiini-suolaksi eetterissä, jolloin saatiin 565 mg tuotetta, sp. 136-141°C. Kiteyttämällä uudelleen bentseenistä saatiin 428 mg tuotetta, 140-3°C.
15 Analyysi laskettu yhdisteelle Ci5H2l°3NS2*ci2H23N: C 63,74; H 8,72 N 5,51 Löydetty: C 63,96; H 8,58 N 5,29.
Esimerkki 5 2S(3-bentsoyylitio-2R-bentsyylipropionyyliamino)-4-20 metyylitio-l-butanoli ja 2S-(3-bentsoyylitio-2S-bentsyylitiopropionyyliamino)- 4-metyylitio-l-butanoli 2-bentsyyli-3-bentsoyylitiopropionihapon (4,44 g, 14,8 millimoolia) liuosta metyleenikloridissa (25,0 ml) 25 sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpiatmos f äärissä. Lisättiin oksalyylikloridia (9,3 g, 73 millimoolia) ja saatua liuosta kuumennettiin 40°C:ssa 1 tunti, jolloin kaasun kehittyminen päättyi. Reaktio jäähdytettiin, haihdutettiin tyhjössä ja atseotropoitiin kerran bentseenin kanssa happokloridin 30 saamiseksi. Se liuotettiin metyleenikloridin (25,0 ml) ja lisättiin pisaroittain 0,5 tunnissa kylmään (0°C) sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2S-amino-4-metyylitio-l-buta-nolia (2,0 g, 14,8 millimoolia) metyleenikloridissa (50,0 ml) ja trietyyliamiinissa (1,65 g, 16,0 millimoolia). Li-35 säyksen päätyttyä reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä. Reaktiota seurattiin 18 76555 TLC:llä (silikageelii) käyttäen 9:1 kloroformisetanolia ja tunnin kuluttua reaktio oli päättynyt (Rf 0,55 - tuotteet; Rf 0,40 - lähtöaine). Reaktioseos pestiin 2N kloori-vetyhapolla (2 x 25 ml), vedellä (1 x 25,0 ml) ja kylläs-5 tetyllä natriumbikarbonaatilla (1 x 25,0 ml). Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja vä-kevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin 5,4 g (87 % saanto) tuotetta, sp. 95-97°C. Kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatista saatiin analyyttinen näyte otsikoituja sekatuot-10 teitä, sp. 104-107°C.
Analyysi laskettu yhdisteelle C22H27®3^®2: C 63,28; H 6,52; N 3,35 Löydetty: C 63,24; H 6,32; N 3,25.
Esimerkki 6 15 2S-(2R-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4- metyylitio-l-butanoli ja 2S-(2S-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4-metyylitio-l-butanoli
Edellisen esimerkin otsikoitujen sekatuotteiden (4,5 20 g, 10,8 millimoolia) liuosta vedettömässä metanolissa (50,0 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpiatmosfäärissä. Lisättiin annoksittain kiinteätä natriurametoksidia (0,7 g, 12,96 millimoolia) 10 minuutin aikana. Saatua liuosta sekoitettiin ja reaktiota seurattiin TLC:n (sili-25 kageeli) avulla käyttäen 9:1 kloroformi:etanolia; tunnin kuluttua reaktio oli päättynyt (Rf 0,35, 0,30 - tuotteet,
Rf 0,40 - lähtöaine). Sitten reaktioseos haihdutettiin tyhjössä. Jäännös tehtiin happameksi 2N kloorivetyhapolla pH-arvoon 2 ja uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 25,0 ml). Yh-30 distetyt uutteet kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin 4,98 g raakaa tuoteseosta öljynä. Tuoteseos kromatografoitiin 150 g:11a silikageeliä (230-400 meshia) käyttäen kloroformia eluanttina, jolloin saatiin kaksi isomeeriä: 2S-(2R-bents-35 yyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4-metyylitio-l-butanoli, 0,564 g (16 % saanto) värittöminä kiteinä, sp. 118-120°C eetteri/petr. eetteristä; 19 76555
Analyysi laskettu yhdisteelle C15H23O2NS2:
Laskettu: C 57,47? H 7,40; N 4,47 Löydetty: C 57,48? H 7,42? N 4,52. ja 2S-(2S-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4-metyyli-5 tio-l-butanoli, 0,6 g (17 % saanto) värittöminä kiteinä sp. 67-9°C eetteri/heksaanista.
Analyysi laskettu yhdisteelle c15h23°2ns2: C 57,47? H 7,40; N 4,47 Löydetty: C 57,43? H 7,20; N 4,42.
10 Esimerkki 7 2S-/3-bentsoyylitio-2R-(p-klooribentsyyli)propio-nyyliamino/-4-raetyylitio-l-butanoli ja 2S-/3-bentsoyylitio-2S-(p-klooribentsyyli)propio-nyyliamino/-4-metyylitio-l-butanoli 15 3-bentsoyyli-2-(p-klooribentsyyli)propionihappoa (6,34 g, 18,9 millimoolia) ja oksalyylikloridia (6,5 g, 4,5 ml, 51,6 millimoolia) 40 ml:ssa metyleenikloridia kuumennettiin 40°C:ssa 1 tunti. Reaktioseos jäähdytettiin ja haihdutettiin kuiviin ja atseotropoitiin bentseenin kans-20 sa vastaavan happokloridin saamiseksi. 2S-amino-4-merkapto-1-butanoli (2,56 g, 18,9 millimoolia) ja trietyyliamiini (2,76 ml, 19,8 millimoolia) yhdistettiin 50 ml:ssa metyleenikloridia ja jäähdytettiin 0°C:seen. Saatu happokloridi liuotettiin 10 ml:aan metyleenikloridia ja lisättiin pisa-25 roittain jäähdytettyyn liuokseen. Reaktioseos lämmitettiin huoneen lämpötilassa, sekoitettiin 16 tuntia, sitten pestiin peräkkäin kahdella 25 ml:n erällä 2N kloorivetyhappoa, 25 ml:11a vettä ja 25 ml:11a kyllästettyä natriumbikarbonaattia, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, 30 suodatettiin, haihdutettiin kuiviin ja jäännös kiteytettiin eetterin kanssa, jolloin saatiin 6,69 g otsikoituja isomeerejä seoksena; sp. 116-121°C? ir (KBr) 1645, 1659 cm-*. Haihduttamalla emäliuos saatiin lisää 1,6 g vähemmän puhdasta tuotetta.
20 76555
Esimerkki 8 2S-/2R-(p-klooribentsyyli)-3-merkaptopropioninyyli-amino/-4-metyylitio-l-butanoli ja 2S-/2S-(p-klooribentsyyli)-3-merkaptopropionyyliami-5 no/-4-metyylitio-l-butanoli
Edellisen esimerkin otsikoidut sekayhdisteet (6,67 g, 14,76 millimoolia) solvolysoitiin esimerkin 6 mukaisesti, jolloin saatiin 6,27 g otsikoitujen isomeeristen yhdisteiden seosta. Ensiksi mainittu otsikoitu isomeeri (2,0 g) 10 kiteytyi suoraan kun seos otettiin eetteriin, sp. 152-154°C. Kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatista saatiin 1,2 g (sp. 154-155°C) ja toinen saanto 0,37 g.
Analyysi laskettu yhdisteelle C22H26®3^^NS2: C 51,78; H 6,37; N 4,03 15 Löydetty: C 52,34; H 6,13; N 4,01.
Ensimmäisen isomeerin kiteyttämisestä saatu eetteri-emä-liuos haihdutettiin kuiviin (4,2 g) ja kromatografoitiin n MPLCillä paineessa 4,9 kg/cm Brinkmann 25 x 1000 mm:n kolonnissa kloroformin ollessa eluanttina. Toisen isomeeri-20 sen tuotteen fraktiot otettiin talteen ja haihdutettiin kuiviin. Kiteyttämällä eetteristä saatiin 0,5 g toiseksi mainittua isomeeriä, sp. 89-91°C. Kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatti/heksaanista saatiin 354 mg ensimmäisenä saantona (sp. 90-92°C) ja 145 mg toisena saantona.
25 Analyysi laskettu yhdisteelle C22H26°3C^NS2: C 51,78; H 6,37; N 4,03 Löydetty: C 52,06; H 6,25; N 4,05.
Esimerkki 9 2S-/3-bentsoyylitio-2R-(p-metoksibentsyyli)propio-30 nyyliamino/-4-metyylitio-l-butanoli ja 2S-/3-bentsoyylitio-2S-(p-metoksibentsyyli)propio-nyyliamino/-4-metyylitio-l-butanoli 3-bentsoyylitio-2-(p-metoksibentsyyli)propionihappo (6,6 g, 0,02 moolia) liuotettiin 20 ml:aan metyleeniklori-35 dia. Lisättiin oksalyylikloridia (4,8 ml, 0,055 moolia) ja seosta kuumennettiin 40°C:ssa 1 tunti. Saatu happokloridi 2i 76555 eristettiin haihduttamalla öljyksi ja atseotropoimalla kerran bentseenin kanssa. Happokloridi liuotettiin uudelleen 10 mlraan metyleenikloridia ja lisättiin pisaroittain kylmään (0°C) liuokseen, jossa oli 2S-amino-4-metyylitio-l-5 butanolia (2,7 g, 0,02 moolia) ja trietyyliamiinia (3,0 ml, 0,0215 moolia) 30 ml:ssa metyleenikloridia. Sen jälkeen kun oli sekoitettu 16 tuntia huoneen lämpötilassa pestiin reaktioseos perättäin 25 ml:n erillä IN kloorivetyhappoa, vettä ja kyllästettyä natriumbikarbonaattia, kuivattiin 10 vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 7,1 g raakatuotetta. Se kromato-garfoitiin MPLC:llä (silikageeli, 25 x 1000 mm:n kolonni, 4,2 kg/cm2) käyttäen 10 prosenttista etanolia kloroformissa eluanttina, jolloin saatiin otsikoitujen tuotteiden seos 15 /4,3 g; Rf 0,16 (eetteri); sp. 88-92°C/. Reaktiomenetelmä toistettiin lukuunottamatta sitä että raakatuote tritu-roitiin heksaanin kanssa, jolloin saatiin pienempi saanto (1,88 g, sp. 84-87°C).
Esimerkki 10 20 2S-/3-merkapto-2S-(p-metoksibentsyyli)propionyyli- amino/-4-metyylitio-l-butanoli ja 2S-/3-merkapto-2R-(p-metoksibentsyyli)propionyyli-amino/-4-metyylitio-l-butanoli
Edellisen esimerkin otsikoidut sekaisomeerit (5,69 g, 25 12,7 millimoolia) solvolysoitiin esimekrin 6 mukaisesti, jolloin saatiin 5,9 g raakatuotetta haihduttamisen jälkeen. MPLC Brinkmann silikageelillä (230-400 meshia) kloroformin ollessa eluanttina antoi erotetut otsikoidut isomeerit. Saatiin vähemmän polaarisen, ensinnä otsikoidun isomeerin 30 puhtaat fraktiot /1,2 g; vahaa; m/e 342; Rf 0,42 (19:1 kloroformi:etanoli)/, seka-fraktiot (0,4 g) ja polaarisem-pi, toiseksi otsikoitu isomeeri /1,2 g; Rf 0,25 (19:1 kloroformi:etanoli); sp. 130-134°C/.
Toinen isomeeri kiteytettiin etyyliasetaatista (162 mg, 35 sp. 138-140°C).
22 76555
Analyysi laskettu yhdisteelle C16H25N03S2: C 55,95; H 7,34? N 4,08; m/e 343.
Löydetty: C 56,16; H 6,89? N 4,08; m/e 343.
Lähtöaineiden valmistus 5 Esimerkki I
p-kloorifenyylimetyleenimalonihappo
Typpiatmosfäärissä malonihappo (jauhettu, 20 g, 0,192 moolia) sekoitettiin asetyylikloridin (15 g, 0,192 moolia) kanssa ja kuumennettiin 65°C:seen Ö1jyhaluteella.
10 Lisättiin p-klooribentsaldehydiä (21,6 g, 0,163 moolia) ja seos kuumennettiin edelleen 80°C:seen. Saatiin keltainen, hitaasti paluujäähdytettävä liuos, johon saostui runsaasti kiinteätä ainetta. Seos jäähdytettiin ja tuote otettiin talteen suodattamalla, suspensoitiin veteen, sekoitettiin 15 5 minuuttia ja suodatettiin, jolloin saatiin otsikoitu tuo te (21,1 g, 61 % saanto, sp. 215°C, hajosi).
Esimerkki II
p-metoks i fenyy1imetyleenimalonihappo
Edellisen esimerkin mukaisella menetelmällä p-metok-20 sibentsaldehydi (21 g, 0,154 moolia) muutettiin otsikoiduksi tuotteeksi (10,0 g, 58 % saanto).
Esimerkki III
p-klooribentsyylimalonihappo p-kloorimetyleenimalonihappo (71,1 g) 600 ml:ssa 25 etyyliasetaattia hydrattiin käyttäen (10 % Pd/C (3 g) Paar- n ravistimessa paineessa 3,5 kg/cm siihen saakka kunnes olennaisesti 1 ekvivalentti vetyä oli kulunut. Katalyytti otettiin talteen suodattamalla ja emäliuos haihdutettiin kuiviin tyhjössä. Jäännös trituroitiin heksaanin kanssa, 30 jolloin saatiin 69 g (90 %) otsikoitua tuotetta.
Esimerkki IV
p-metoksibentsyylimalonihappo
Esimerkin II mukainen tuote (15 g) 325 ml:ssa etyyliasetaattia hydrattiin käyttäen 1 g 50 % Pd/C edellisen esi-35 merkin mukaisesti. Saatiin 9,8 g otsikoitua tuotetta.
23 7 6 5 5 5
Esimerkki V
2-(p-klooribentsyyli)akryylihappo Esimerkin III mukainen tuote (35 g, 0,153 moolia) yhdistettiin 20 ml:n kanssa vettä, sekoitettiin 5 jäähauteella ja lisättiin pisaroittain 25 % vesipitoista dimetyyliamiinia pH-arvoon 7,5 saakka. Lisättiin toinen erä malonihappoa (35 g) ja riittävästi vettä liuoksen saamiseksi. Lisättiin vesipitoista formaldehydiä (35 ml, 36 %) ja sekoitetun liuoksen annettiin lämmetä vähitellen 10 huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin 17 tuntia. Välituotteena saatu dimetyyliaminometyloitu tuote otettiin talteen suodattamalla ja imukuivattiin osittain (108 g märkänä) . Märkä välituote yhdistettiin 500 ml:n kanssa vettä ja kuumennettiin höyryhauteella 2 tuntia, jona aikana 15 hiilidioksidin kehittyminen oli silmiinpistävä. Reaktio-seos jäähdytettiin, pH säädettiin arvoon 2,0 käyttäen 6N kloorivetyhappoa ja saostunut otsikoitu tuote otettiin talteen suodattamalla (35,3 g, sp. 95-96°C).
Esimerkki VI
20 2-(p-metoksibentsyyli)akryylihappo
Esimerkin IV mukainen yhdiste (25 g, 0,111 moolia) yhdistettiin 25 mlsn kanssa vettä ja pH säädettiin arvoon 7,3 käyttäen 25 % vesipitoista dimetyyliamiinia. Liuos jäähdytettiin jää-asetoni-hauteella, lisättiin 25 lisää malonihappoa (25 g) ja seosta sekoitettiin liuoksen muodostumiseen saakka. Lisättiin formaldehydiä (35 ml, 36 % vedessä). Seosta sekoitettiin lyhyen ajan jää-aseto-ni-hauteessa ja sitten lämmitettiin huoneenlämpötilaan. Saostunut otsikoitu tuote otettiin talteen suodattamal-30 la (21 g, 49 % saanto).
24 7 6 5 5 5
Esimerkki VII
3-bentsoyylitio-2-(p-klooribentsyyli)propioni- happo
Liuosta, jossa oli 2-(p-klooribentsyyli)akryyli-5 happoa (3,93 g, 22 millimoolia) ja tiobentsoehappoa (2,6 ml, 20 millimoolia) 40 ml:ssa metyleenikloridia, kuumennettiin paluujäähdyttäen 16 tuntia. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin ja tuote kiteytettiin heksaanis-ta (4,5 g). Lisää tuotetta saatiin haihduttamalla hek-10 saani-emäliuos ja kromatografoimalla jäännös (7,1 g) 200 g:11a silikageeliä (230-400 meshia) käyttäen kloroformia eluanttina: 1,8 g, sp. 111-114°C.
Esimerkki VIII
3-bentsoyylitio-2-(p-metoksibentsyyli)propioni-15 happo
Esimerkissä VII kuvatun menetelmän mukaan annettiin 2-(p-metoksibentsyyli)akryylihapon (3,84 g, 20 millimoolia) reagoida tiobentsoehapon kanssa otsikoidun tuotteen saamiseksi olennaisesti kvantitatiivisena saan-20 tona /6,61 g, 0,48 (eetteri)/.
Esimerkki IX
3-bentsoyylitio-2-bentsyylipropionihapon optinen hajoittaminen
Raseeminen 3-bentsoyylitio-2-bentsyylipropionihap-25 po (10 g) liuotettiin 150 ml:aan eetteriä ja lisättiin hitaasti 4,24 g:aan (35 millimoolia) d-(+)-alfa-metyylibentsyyliamiinia, jolloin saatiin 14 g suolaa ^alfa^gg (C = 1, CHClg) + 3,46^7· Kahdesti uudelleen-kiteyttämisen jälkeen metyleenikloridi-heksaanista saa-30 tiin 3 g suolaa, joka sisälsi pääosan 2(S)-isomeeriä ^alfa^gg (C = 1, CHClg) - 21,2^7. Edelleen kiteytettäessä isopropyylialkoholista saatiin 1,56 g 2(S)-isomeerin suolaa ^noin 90 % 2 (S)-isomeeria7, ^alfaj?gg (C=l, CHClg) - 25 °J, sp. 131-133°. Vapaa happo (noin 90 % \ 35 25 7 6 5 5 5 2(S)-isomeeriä/ vapautettiin liuottamalla veteen, lisäämällä 2N HCl:ää ja uuttamalla tuote etyyliasetaattiin, Kuivaamalla magnesiumsulfaatilla ja väkevöimällä saatiin vapaa 2(S)-happo värittöminä kiteinä, sp. 64-67°, 5 alfaj?89 <C = 1, CHCI3) - 36,39°.
Kytkemällä L-metioninolin kanssa ja poistamalla suojaus saatiin vallitsevasti esimerkin 6 mukainen 2S-(2S-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4-metyyli-tio-l-butanoli.
10
Claims (6)
1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 2-(2-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-1-alkanoli- ja 5 2-(2-bentsyyli-3-merkaptopropionyyliamino)-4-metyylitio- voihappojohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaavat ovat 10 ιλ^ι Jch2>„-s-r1 8T X ch2oh (I) 15 X. HS^YY (ii) ch2oh 25
30 UH ? 2SCH3 (III)
0 COOH 35 ja ] X 27 7 6 5 5 5
5 JL Jl Jch2) 2sch3 (iv) COOH 10 joissa X on vety, (¢^-03)alkoksi tai kloori, R on vety tai (Cj-c ) alkyyli, n on 1-4 ja R1 on (^-03) alkyyli, tunnettu siitä, että (a) yhdiste, jonka kaava on " PS OH (XIII) 20 jossa X tarkoittaa samaa kuin edellä ja P on rikin suoja-ryhmä, liitetään yhdisteeseen, jonka kaava on R 25 (CH2)n-S-R1 (XIV) pH ch2oh jossa R, n ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä, tai 30 yhdisteeseen, jonka kaava on h2n (ch2)2sch3 ρΈ cW <XV> 35 28 7 65 5 5 jossa on karboksyylin suojaryhmä, ja saadut diastereoiso-meerit erotetaan ja hydrolysoidaan tai saadut diastereo-isomeerit hydrolysoidaan ja erotetaan, tai (b) yhdiste, jonka kaava on .. "4^" "Λ” joissa kaavoissa P ja X tarkoittavat samaa kuin edellä, liitetään kaavan (XIV) tai (XV) mukaiseen yhdisteeseen ja 15 saatu yhdiste hydrolysoidaan; ja haluttaessa saatu kaavan (III) tai (IV) mukainen yhdiste muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi kationisuolaksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I tai II mukai- 20 nen yhdiste, jossa n on 2, R* on metyyli, R on vety ja X on p-kloori, p-metoksi tai vety.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan III tai IV mukainen yhdiste, jossa X on vety. 76555
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US26475281 | 1981-05-18 | ||
| US06/264,752 US4329495A (en) | 1981-05-18 | 1981-05-18 | Enkephalinase enzyme inhibiting compounds |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI821736A0 FI821736A0 (fi) | 1982-05-17 |
| FI76555B true FI76555B (fi) | 1988-07-29 |
| FI76555C FI76555C (fi) | 1988-11-10 |
Family
ID=23007448
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI821736A FI76555C (fi) | 1981-05-18 | 1982-05-17 | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-1- alkanol och 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-4-metyltio- smoersyraderivat. |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4329495A (fi) |
| EP (1) | EP0066956B1 (fi) |
| JP (1) | JPS57193450A (fi) |
| KR (1) | KR860001549B1 (fi) |
| AR (1) | AR231279A1 (fi) |
| AT (1) | ATE8881T1 (fi) |
| AU (1) | AU529511B2 (fi) |
| CA (1) | CA1179368A (fi) |
| DE (1) | DE3260531D1 (fi) |
| DK (1) | DK160711B (fi) |
| ES (2) | ES512278A0 (fi) |
| FI (1) | FI76555C (fi) |
| GR (1) | GR75496B (fi) |
| HU (1) | HU188058B (fi) |
| IE (1) | IE53226B1 (fi) |
| IL (1) | IL65799A (fi) |
| IN (1) | IN158365B (fi) |
| NO (1) | NO153768C (fi) |
| NZ (1) | NZ200639A (fi) |
| PH (1) | PH18206A (fi) |
| PL (1) | PL138043B1 (fi) |
| PT (1) | PT74913B (fi) |
| YU (1) | YU42468B (fi) |
| ZA (1) | ZA823386B (fi) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4432972A (en) * | 1981-08-03 | 1984-02-21 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Phosphonamidate compounds |
| US4401677A (en) * | 1981-10-09 | 1983-08-30 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Enkephalinase inhibitors |
| US4474795A (en) * | 1981-10-09 | 1984-10-02 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Enkephalinase inhibitors |
| US4474799A (en) * | 1981-10-09 | 1984-10-02 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Enkephalinase inhibitors |
| JPS58140065A (ja) * | 1982-02-10 | 1983-08-19 | Meito Sangyo Kk | メルカプトベンジル脂肪酸誘導体類及びその製法 |
| FR2540498B1 (fr) * | 1983-02-07 | 1986-02-14 | Roussel Uclaf | Nouveaux medicaments derives d'amides d'acide mercaptoacetique et de l'acide 3-mercaptopropionique et les compositions pharmaceutiques les renfermant |
| FR2540495B1 (fr) * | 1983-02-07 | 1986-02-14 | Roussel Uclaf | Nouveaux derives de o-mercaptopropanamide et de ses homologues, leur procede de preparation, leur application comme medicaments, les compositions les renfermant et les nouveaux intermediaires obtenus |
| FR2556721B1 (fr) * | 1983-12-14 | 1986-05-16 | Roussel Uclaf | Nouveaux derives de o-mercaptopropanamide d'o amino-acides, leur procede de preparation, leur application comme medicaments et les compositions les renfermant |
| FR2559770B1 (fr) * | 1984-02-20 | 1986-10-24 | Roussel Uclaf | Nouveaux derives de n-alkyl-o-mercaptopropanamide, leurs procedes de preparation, leur application comme medicaments, les compositions les renfermant et les nouveaux intermediaires obtenus |
| US4929641B1 (en) * | 1988-05-11 | 1994-08-30 | Schering Corp | Mercapto-acylamino acid antihypertensives |
| EP0254032A3 (en) * | 1986-06-20 | 1990-09-05 | Schering Corporation | Neutral metalloendopeptidase inhibitors in the treatment of hypertension |
| EP0566157A1 (en) | 1986-06-20 | 1993-10-20 | Schering Corporation | Neutral metalloendopeptidase inhibitors in the treatment of hypertension |
| US4801609B1 (en) * | 1987-03-27 | 1993-11-09 | Mercapto-acylamino acid antihypertensives | |
| US5262436A (en) * | 1987-03-27 | 1993-11-16 | Schering Corporation | Acylamino acid antihypertensives in the treatment of congestive heart failure |
| AU4056389A (en) * | 1988-08-24 | 1990-03-23 | Schering Corporation | Mercapto-acylamino acid antihypertensives |
| US4879309A (en) * | 1988-09-27 | 1989-11-07 | Schering Corporation | Mercapto-acylamino acids as antihypertensives |
| ZA902661B (en) * | 1989-04-10 | 1991-01-30 | Schering Corp | Mercapto-acyl amino acids |
| FR2652087B1 (fr) * | 1989-09-15 | 1993-10-15 | Bioprojet Ste Civile | Derives d'amino-acides, leur procede de preparation et leurs applications therapeutiques. |
| US5599951A (en) * | 1989-09-15 | 1997-02-04 | Societe Civile Bioprojet | Amino acid derivatives, the process for their preparation and their applications to therapy |
| US5407960A (en) * | 1989-12-22 | 1995-04-18 | Schering Corporation | Mercaptocycloacyl aminoacid endopeptidase inhibitors |
| PT97669A (pt) * | 1990-05-17 | 1992-02-28 | Schering Corp | Processo para a preparacao de derivados dissulfureto de mercaptoacilamino-acidos |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4046889A (en) * | 1976-02-13 | 1977-09-06 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Azetidine-2-carboxylic acid derivatives |
| US4053651A (en) * | 1976-05-10 | 1977-10-11 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Compounds and method for alleviating angiotensin related hypertension |
| GB2074571B (en) * | 1980-04-11 | 1984-02-15 | Wellcome Found | Alpha-benzyl-substituted amides |
| FR2480747A1 (fr) * | 1980-04-17 | 1981-10-23 | Roques Bernard | Derives d'acides amines et leur application therapeutique |
-
1981
- 1981-05-18 US US06/264,752 patent/US4329495A/en not_active Expired - Lifetime
-
1982
- 1982-03-30 IN IN263/DEL/82A patent/IN158365B/en unknown
- 1982-05-11 AT AT82302387T patent/ATE8881T1/de active
- 1982-05-11 EP EP82302387A patent/EP0066956B1/en not_active Expired
- 1982-05-11 DE DE8282302387T patent/DE3260531D1/de not_active Expired
- 1982-05-13 NO NO821595A patent/NO153768C/no unknown
- 1982-05-13 GR GR68139A patent/GR75496B/el unknown
- 1982-05-13 HU HU821506A patent/HU188058B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-05-14 AR AR289397A patent/AR231279A1/es active
- 1982-05-14 CA CA000402956A patent/CA1179368A/en not_active Expired
- 1982-05-14 PH PH27313A patent/PH18206A/en unknown
- 1982-05-14 PL PL1982236425A patent/PL138043B1/pl unknown
- 1982-05-17 PT PT74913A patent/PT74913B/pt unknown
- 1982-05-17 IE IE1168/82A patent/IE53226B1/en unknown
- 1982-05-17 JP JP57082977A patent/JPS57193450A/ja active Granted
- 1982-05-17 ZA ZA823386A patent/ZA823386B/xx unknown
- 1982-05-17 IL IL65799A patent/IL65799A/xx unknown
- 1982-05-17 NZ NZ200639A patent/NZ200639A/en unknown
- 1982-05-17 DK DK221182A patent/DK160711B/da not_active Application Discontinuation
- 1982-05-17 AU AU83759/82A patent/AU529511B2/en not_active Ceased
- 1982-05-17 FI FI821736A patent/FI76555C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-05-17 ES ES512278A patent/ES512278A0/es active Granted
- 1982-05-17 YU YU1042/82A patent/YU42468B/xx unknown
- 1982-05-17 KR KR8202139A patent/KR860001549B1/ko active
-
1983
- 1983-02-09 ES ES519668A patent/ES8403107A1/es not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI76555B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-1- alkanol och 2-(2-bensyl-3-merkaptopropionylamino)-4-metyltio- smoersyraderivat. | |
| KR910002948B1 (ko) | 5-리포옥시제나제의 저해제로서 신규한 페놀 티오에테르 | |
| EP0214639B1 (en) | Hydroxamic acid based collagenase inhibitors | |
| EP0184550B1 (de) | 5-Amino-4-hydroxyvalerylamid-Derivate | |
| US5208255A (en) | Thioester enantiomeric compounds and their therapeutic uses | |
| EP0018549B1 (en) | Tetrahydroisoquinoline compounds, process for preparing them and pharmaceutical compositions containing them | |
| EP0082088B1 (fr) | Nouveaux dérivés d'aminoacides, et leur application thérapeutique | |
| EP0095163B1 (en) | 2-oxo-imidazolidine compounds, a process for preparing the same and a pharmaceutical composition | |
| KR960004858B1 (ko) | 프롤리날 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약제학적 조성물 | |
| US4748160A (en) | Angiotensin converting enzyme inhibitors and their formulation and use as pharmaceuticals | |
| EP0274453A2 (fr) | Nouveaux composés à activité d'inhibiteurs de collagénase, procédé pour les préparer et compositions pharmaceutiques contenant ces composés | |
| JPS6121226B2 (fi) | ||
| SK282529B6 (sk) | Merkaptoalkanoylový a acylmerkaptoalkanoylový derivát oxazepínu, tiazínu a tiazepínu, spôsob jeho výroby, medziprodukt na jeho výrobu a farmaceutický prípravok, ktorý ho obsahuje | |
| US4320057A (en) | Aryl--pyrrolo--thiazepin--diones and aryl--piperidino--thiazepin--diones | |
| RU2042663C1 (ru) | Производные бензола и их соли | |
| FR2473042A1 (fr) | Nouveaux derives de piperazinone utiles notamment comme intermediaire de synthese des derives de l'enkephaline, et leur preparation | |
| FR2515182A1 (fr) | Nouveaux produits derives de l'acide 3-amino 2-oxo azetidine 1-sulfamique, leur procede de preparation, leur application comme medicaments et les produits intermediaires necessaires a leur preparation | |
| US4500467A (en) | Benzoylthio compounds, their preparation and their use as drugs | |
| JPH04210966A (ja) | 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 | |
| PL198827B1 (pl) | ω-Amidy N-arylosulfonyloaminokwasów, sposób ich wytwarzania, środek farmaceutyczny i zastosowanie ω-amidów N-arylosulfonyloaminokwasów | |
| SU1272982A3 (ru) | Способ получени производных пролина или их фармацевтически приемлемых солей | |
| Senokuchi et al. | New orally active enkephalinase inhibitors: their synthesis, biological activity, and analgesic properties | |
| JP2005522523A (ja) | ヒドロキシフェニル誘導体、その製造方法及びそれを含む薬学的組成物 | |
| US4290952A (en) | Aryl-1-mercaptoalkanoylproline and homoproline derivatives | |
| US4352753A (en) | 3-[[(2,3-Dihydro-1H-indol-2-yl)carbonyl]thio]propanoic (and acetic) acids as intermediates |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: PFIZER INC. |