FI75157C - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt vaerdefull 3-(2-metoxi-fenoxi)-3-metyl-benso-2,4- dioxacyklohexanon. - Google Patents

Description

1 75157

Menetelmä valmistaa farmakologisesti aktiivista 3-(2-metoksi-fenoksi)-3-metyyli-bentso-2,4-dioksasykloheksanonia FÖrfarande för framställning av farmakologiskt värdefull 3-(2-metoxi-fenoxi)-3-metyl-benso-2,4-dioxacyklohexanon

Keksinnön kohteena on menetelmä valmistaa farmakologisesti aktiivista 3-(2-metoksi-fenoksi)-3-metyyli-bentso-2,4-dioksa-sykloheksanoni, jonka kaava on od+.xp1 CH3 OCH3 jolle menetelmälle on tunnusomaista se, että asetyylisalisyylihapon kloridia, guajakolia ja pyridiiniä saatetaan reagoimaan moolisuhteessa 1:1:1 inertin orgaanisen liuottimen läsnäollessa.

Reaktio suoritetaan edullisesti inerteissä orgaanisissa liuot-timissa, kuten esimerkiksi metyleenikloridissa.

Kaavan I mukaisella uudella yhdisteellä (jäljempänä NMR 693) on merkittäviä farmakologisia ominaisuuksia, esim. voimakkaampi antitussiivinen aktiivisuus kuin kodeiinilla ja anti-inflamma-toorinen vaikutus, joka on käytännöllisesti katsoen sama kuin asetyylisalisyylihapolla, ja antipyreettinen aktiivisuus, joka on vain hieman alhaisempi kuin asetyylisalisyylihapolla. Nämä suotuisat biologiset ominaisuudet yhdessä sen kanssa, että yhdisteellä ei ole lainkaan mitään mahaa vaurioittavaa vaikutusta ja lähes olematon toksisuus (sekä akuutti, subakuutti että krooninen), tekevät tämän yhdisteen täysin siedettäväksi plastisella tasolla ja siten erityisen sopivaksi oraaliseen ja rektaaliseen antamistapaan.

2 75157

FARMAKGKINETIIKKA JA METABOLIA

Tutkimuksia on suoritettu sekä in vitro että in vivo. In vitro-kokeet ovat osoittaneet, että MR 693 hydrolysoituu entsymaattisesti asetyylisalisyylihapoksi ja guajakoliksi. Esteraasiaktiivisuudeltaan voimakkaiksi elimiksi osoittautuivat keuhkot ja munuaiset. Koska yhdisteellä MR 693 ei ole mitään ionisoituvaa funktionaalista ryhmää, se on erittäin lipofiili-nen, ja sen voidaan olettaa kulkevan erittäin helposti suoliston epiteelin läpi.

In vivo kokeet ovat vahvistaneet, että keksinnön mukainen yhdiste, joka oraalisen antamisen jälkeen absorboituu suurimmalta osaltaan sellaisenaan, hydrolysoituu asetyylisalisyylihapoksi, salisyylihapoksi ja guajakoliksi. Salisyylihappo ja sen asetyylijohdos joutuvat systeemiseen kiertoon ja erittyvät virtsan kanssa. Sitä vastoin guajakoli absorboituu pääasiassa pre-systeemissä siihen; se joutuu keuhkoihin imusuonten kautta ja poistuu hengitysteiden kautta.

Yhdisteen MR 693 antamisen jälkeen keuhkoissa havaitut salisyylihapon ja asetyylisalisyylihapon konsentraatiot ovat osoittautuneet korkeammiksi kuin nämä konsentraatiot plasmassa ja maksassa. Näin ollen voidaan olettaa, että guajakolin selvä pulmonaarinen tropismi merkitsee myös salisylaattien suhteellisesti parempaa pulmonääristä tropismia.

ANTITUSSIIVINEN AKTIIVISUUS

Marsuilla on suoritettu kokeita indusoimalla yskä sitruuna-happoa ero soli1la. Yhdisteen MR 693 tehokkuutta on tutkittu antamalla tätä yhdistettä oraalisesti ja intraperitoneaalisesti ja käyttämällä vertailuyhdisteenä kodeiinia, so. yleisesti tunnettua ja laajalti käytettyä antitussiivista ainetta.

Saaduista tuloksista, jotka on koottu seuraavaan taulukkoon 1, voidaan vetää seuraavat johtopäätökset: 3 75157 - oraalinen antamistapa 500 mg/kg annoksella MR 693 pienentää selvästi yskäkohtausten määrää verrattuna kontrolleihin. Tämä aktiivisuus on parempi kuin kodeiinin oraalisella 25 mq/kq annoksella samoissa olosuhteissa.

- intraperitoneaalinen antamistapa MR 693:11a on erinomainen aktiivisuus myös tätä tietä annettaessa. Annostuksella 100 mg/kq on yskänkohtausten havaittu pienentyneen 100 % verrattuna kotro1leihin , kun taas kodeiini, jota annettiin intraperitoneaalisesti 12,5 mq/kq, pienensi yskäkohtauksia 93 %.

TAULUKKO 1

Sitruunahappoaerosolilla indusoitu yskätesti marsuilla: Yhdisteen MR 693 ja kodeiinin antitussiivinen aktiivisuus

Yhdiste Annos Antamistapa Yskänkohtausten (mg/kg) esto-?i MR 693 500 os 84,3 100 i.p. 100,0

Kodeiini 25 os 76,7 12,5 i.p. 93,7

MAHAA VAURIOITTAVA AKTIIVISUUS

Rotille, joita oli paastotettu vähintään IB tuntia, annettiin oraalisesti yhdistettä MR 693 ja vertailuyhdisteenä asetyyli-salisyylihappoa. Kuuden tunnin kuluttua kokeen alkamisesta rotat tapettiin ja mahat avattiin ja niistä tutkittiin mahan limakalvossa mahdollisesti olevat vauriot.

4 75157

Seuraavassa taulukossa 2 on esitetty saadut tulokset ilmoitettuina vaurioiden keskimääräisenä halkaisijana (mm:nä): Tulokset osoittavat selvästi, että keksinnön mukaisen yhdisteen siedettävyys mahatasolla on täydellinen päinvastoin kuin asetyyli salisyylihapolla.

TAULUKKO 2

Yhdisteen MR 693 ja asetyylisalisyylihapon mahaa vaurioittava aktiivisuus rotilla oraalisen antamistavan jälkeen

Yhdiste Annos Vaurioiden keskimää- (mg/kg os) räinen halkaisija (mm)

Kontrollit - 0,1 +_ 0,1 MR 693 100 0 400* 0

Asetyylisali- syylihappo 250 3,7 + 0,8 *

Ekvimolaariset annostukset ANTI-INFLAMMATORINEN AKTIIVISUUS

Yhdisteen MR 693 a nti-inflammatoris ia ominaisuuksia on tutkittu rotilla karrageenilla indusoidussa edeematestissä antamalla keksinnön mukaista yhdistettä oraalisesti ja käyttämällä yhtä suuri moolimäärä asetyylisalisyylihappoa vertailuyhdisteenä.

Saadut tulokset osoittavat selvästi, että MR 693 selvästi pienentää edeemaa ja että tämä pienentyminen on käytännöllisesti katsoen samalla tasolla kuin vertailuyhdisteellä. Tulokset on koottu seuraavaan taulukkoon 3.

Il 5 75157 TAULUKKO 3

Karrageenilla indusoitu edeematesti rotilla: Yhdisteen MR 693 ja asetyylisalisyylihapon anti-inflammatorinen aktiivisuus ekvimolaaris illa annostuksilla

Yhdiiste Annos (mg/kg os) E de emän es to-?0 MR 693 400 30

Asetyylisali- syylihappo 250 33

ANTIPYREETTINEN AKTIIVISUUS

Tätä aktiivisuutta on tutkittu rotilla hiivan avulla indusoidussa hypertermia-testissä. Vertailuaineena käytettiin jälleen asetyylisalisyylihappoa ekvimolaarisena annostuksena.

Seuraavaan taulukkoon 4 kootut tulokset osoittavat, että yhdisteellä MR 693 on merkittävä antipyreettinen aktiivisuus. Tämä aktiivisuus on vain hieman alhaisempi kuin asetyylisalisyylihapolla.

TAULUKKO 4

Hiivalla indusoitu hypertermia-testi rotilla: Yhdisteen MR 693 ja asetyylisalisyylihapon antipyreettinen aktiivisuus ekvimolaarisella annostuksella

Yhdiste Annos (mg/kg os) Esto-?i MR 693 400 86

Asetyylisalisyy- lihappo 250 103 6 75157 TOKSISUUS Akuutti toksisuus

Hiirillä ja rotilla on suoritettu akuutin toksisuuden testejä antamalla keksinnön mukaista yhdistettä oraalisesti ja intraperitoneaalisesti. Kuten seuraajassa taulukossa 5 annetuista tuloksista voidaan havaita, voidaan yhdistettä MR 693 pitää toksisuudeltaan erittäin vähäisenä yhdisteenä.

TAULUKKO' 5

Yhdisteen MR 693 akuutti toksisuus hiirillä ja rotilla eläinlaji Antamistapa ^50 m9/,<9

Hiiri os / 3000

Rotta os y 3000 i.p. 1730

Subakuutti toksisuus

Rotilla ja koirilla on suoritettu subakuutin toksisuuden tutkimuksia antamalla yhdisettä MR 693 oraalisesti neljä peräkkäistä viikkoa.

Huomioonotetut parametrit ovat seuraavat: - käyttäytyminen - kuolleisuus - painon kasvu - hematologiset arvot - hematokemialliset arvot - glykosuria, pro teiiniuria, albumiiniuria ja hematuria - autoptinen tutkimus n 7 75157 - pääelinten paino - pääelinten histologinen tutkimus; kummassakaan tapauksessa ei voitu havaita mitään muutoksia tai epämuodostumia, jotka olisi voitu katsoa johtuvan keksinnön mukaiselle yhdisteelle suoritetusta käsittelystä.

Krooninen toksisuus

Rotilla on suoritettu kroonisen toksisuuden tutkimuksia antamalla yhdistettä MR 693 oraalista tietä 24 peräkkäistä viikkoa sekä koirilla antamalla keksinnön mukaista yhdistetä oraalisesti ja rektaalisesti myös 24 viikkoa.

Huomioonotetut parametrit ovat seuraavat: - yleistila - käyttäytyminen - kuolleisuus - hemaattinen yleisrakenne - veren biokemiallinen tutkimus - glykosuria, proteiiniuria, hematuria, albumiiniuria - autoptinen tutkimus - pääelinten paino ja histoloqinen kontrolli; mitään muutoksia tai erityisesti merkittäviä anatomo-pato-logisia tiloja ei kuitenkaan havaittu. Maha-suolitiehyeen tutkiminen ei myöskään osoittanut mitään limakalvojen muu-toks ia.

Tera toqenees i

Teratogeneesitutkimuksia on suoritettu rotilla ja kaniineilla, jotka on käsitelty oraalisesti yhdisteellä MR 693 koko tiineyden kestoajan. Tutkimukset, joissa kohteena oli: - tiineiden naaraiden määrä - kuolleiden naaraiden määrä - ruumiinpaino alussa/ruumiinpaino lopussa (emojen) 75157 o - sikiöiden kokonaismäärä - eloonjääneiden sikiöiden keskimääräinen määrä - kuolleiden sikiöiden kokonaismäärä - re-absorptioiden kokonaismäärä - eloonjääneiden sikiöiden keskimääräinen paino - mahdolliset epämuodostumat ovat osoittaneet, että käsittely yhdisteellä MR 693 ei ole aiheuttanut mitään muutoksia. Itse asiassa ei ole havaittu somaattisia eikä luuston epämuodostumia eikä myöskään mitään muutoksia eloonjääneiden jälkeläisten määrässä.

FARMASEUTTISET SEOKSET

Keksinnön mukaista yhdistettä voidaan antaa oraalisesti tai rektaa lisesti. Erilaisia farmaseuttisia seoksia ovat es imerkiks i: tabletit ja kapselit, jotka sisältävät 0,5 g aktiivista ainesosaa 5,0 % jha 3,3 % (paino) suspensiot lääk epuikot, jotka sisältävät 1,2 ja 0,5 g aktiivista ainesosaa.

9 75157

ESIMERKKI

a) Asetyylisalisyylihapon kloridi valmistettiin kiehuttamalla 3 tuntia happoa ja tionyylikloridia, haihduttamalla ylimääräinen tionyylikloridi ja tislaamalla saatu jäännös tyhjiössä (150°C/3o mm Hg^·

Saanto: 50 - 70 % teoreettisesta.

Saatua kloridia säilytettiin 18 tuntia 0 - 4°C:ssa.

b) Liuokseen, joka sisälsi 709 g (3,57 moolia) kohdassa a) saatua asetyylisalisyylihapon kloridia ja 685 ml metyleeni-kloridia, lisättiin 442 g (3,67 moolia) guajakolia. Saatua seosta jäähdytettiin ulkoapäin vesihauteella, minkä jälkeen lisättiin tipottain 282 g (3,57 moolia) pyridiiniä, jolloin lämpötila pidettiin samalla 20 - 25°C:ssa. Lisäyksen jälkeen sekoittamista jatkettiin noin 1 tunti, minkä jälkeen seoksen annettiin seistä 16 tuntia.

Seos pestiin useita kertoja vedellä, orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja lopuksi haihdutettiin alipaineessa. Saatu keltainen jäännös kiteytyi hitaasti. 48 tunnin kuluttua se otettiin pieneen määrään etanolia. Saatu seos suodatettiin ja kiteet pestiin. Kiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 291 g kaavan I mukaista yhdistettä, sp. 70 - 74°C.

Alkuaineanalyysi vastaa ehdotettua rakennetta, joka on myös vahvistettu kristallograafisin tutkimuksin: MK 693 (empiirinen kaava C16H14O5; mol.paino = 286,29)

Kiteytyy ortotrombisessa systeemissä, avaruusryhmä Pbca.

ιη 75157 ίο

Kideparametrit ovat: a = 9,968(3), b = 23,808(4), c = 11,668(2)Ä, V = 2769(2)A^. Ne on määritetty pienemmän neliösumman analyysillä 50 heijastuksen sin2p· - arvoista. Mittaukset on tehty automaattisella diffraktiometrillä CAD4 (Nonius) käyttämällä Mo K OC-säteilyä (λ= 0,71069 Ä) grafiittisen monokromaattorin avulla. Kiteen 8 molekyylillä laskettu tiheys on 1,373 g/cm; kokeellinen arvo (kelluminen K2Hgl4-liuoksessa on 1,370 g/cm.

Lähes pallomaisella kiteellä (halkaisija noin 0,28 mm) on mitattu 2377 intensiteettiä käyttämällä samaa diffrakto-metriä ja omega-skannaustekniikkaa muuttuvalla nopeudella. Kolmen standardi-intensiteetin jaksottainen kontrolli ei ole osoittanut mitään kiteen huonontumista. Tulokset on korjattu Lorentz- ja polarisaatio-kerroin; absorptiokorjaus ei ole ollut tarpeen [p(Mo K«) = 1,1 cm~l]

Rakenne (kts. kuvio 1) on ratkaistu suorilla menetelmillä.

247 parametrit (mittakerroin, sekundäärinen ekstentiokerroin, koordinaatit ja termiset anisotropiakertoimet 16 C:lle ja 50:lie, koordinaatit ja isotrooppiset B-kertoimet 14 H:lie) lopullinen selvittäminen on suoritettu täydellisellä pienemmän neliösumman matriisimenetelmällä peräkkäisinä sykleinä laskettuna 2055:stä intensiteetiltään positiivisesta heijastuksesta. Minimoitu määrä on ollut £w (F0-Fc)2, painolla w 4FQ2/Ö< 2 (po) 2 .

Lopullinen varianssi-indeksi R = (£||Fol - Fc1!/£Fo) on 0,069 laskettuna selvityksessä käytetystä 2055:stä heijastuksesta; painoindeksi Rw on 0,036 [1662 refleksille F^> ci(F2), r- ja Rw-arvot ovat vastaavasti 0,048 ja 0,035].