FI71128B - Foerfarande foer framstaellning av 2-(1-pyrrolyl)-4-aminobutan(eller 5-aminopentan) amidderivat vilka foerstaerker hjae rtuskeln samt foerhindrar rytmstoerningar och trombosytkoag ultion - Google Patents

Description

71128

Menetelmä 2-(1-pyrrolyyli)-4-aminobutaani (tai 5-aminopentaani) amidijohdannaisten valmistamiseksi, jotka vahvistavat sydänlihasta sekä ehkäisevät rytmihäiriöitä ja verihiutaleiden kasaantumista .

5

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 2-(1-pyrrolyyli)-4-aminobutaani (tai 5-aminopentaani) amidien valmistamiseksi, joiden kaava on (I) 10 /R2 ?=\ ?1 /*3 N—C-(CH_) —N (I) C0NH2 R4 R2 15 jossa R1 on vety, alempi alkyyli, fenyyli tai 2-pyridyyli, 1*2 on vety tai alempi alkyyli, R3 ja R4, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat alempaa alkyyliä tai sykloheksyyliä, tai R^ ja R4 muodostavat 20 sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, diatsa-1,4-bisyklo/^,3,07non-4-yyli-, morfolino- tai dimetyyli-2,6-piperi-dinoryhmän, ja n on 2 tai 3, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happo-additiosuolojen valmistamiseksi.

"j Tässä keksinnössä alemmalla alkyyliryhmällä tarkoitetaan suoraketjuista tai haarautunutta 1-6 hiiliatomia sisältävää alkyyliryhmää.

Yhdisteet (I) muodostavat mineraali- tai orgaanisten happojen kanssa Huokoisia suoloja. Tällaiset farmaseuttisesti 30 hyväksyttävien happojen avulla muodostetut suolat kuuluvat keksinnön piiriin.

2 71128

Pyrrolijohdannaisia on kuvattu varsinkin DE-patentissa 2 647 368 ja julkaisussa Chemical Abstracts 56679 k voi. 77, 1972. DE-patentissa kuvatut johdannaiset ovat insektisideja. Julkaisussa Chemical Abstracts kuvattu johdannainen on apto-5 kaiini, jonka kaava on

i y— NHCOCHN

W ch3\=J

10 CH3 ja jolla on rytmihäiriöitä vastustava vaikutus.

Substituentin luonteen mukaan yhdisteet (I) voidaan valmistaa jollakin seuraavista menetelmistä.

Kun R^ on vety, yhdisteet (I) voidaan valmistaa kahdella ^ menetelmällä.

Menetelmä A.j

Menetelmän eri vaiheet on esitetty seuraavassa reaktio-kaaviossa: 20 £ooc,h p / R3 / 3

CH^CONH C (CH0) -N -> H0N—CH-(CH0) -N

J \ in 2. , 2 n s.

cooh t00C2H5 4 K4 25 1 2 /¾ /3

-> H_N—CH-(CH,) "N -> H,N CH — (CH,) -N

30 COOCHj έθΝΗ2 \4 3 4 K! · 35 -> N-C-(CH2)n-N (I) (R1 = H) CONH, \R4 3 71128

Yhdiste 1 on valmistettu alkyloimalla asetamidoma-lonihapon etyyliesteri tunnetuilla menetelmillä. Saippuoimalla yhdiste 1 aikalisissä olosuhteissa, saadaan vastaava malonihappo, joka on helppo dekarboksyloida kuumentamalla 5 happamissa olosuhteissa, jolloin saadaan substituoitu voi-happo 2. Tämä esteröidään tunnetulla menetelmällä metyyli-esteriksi 3. Esteri 3 muutetaan vastaavaksi amidiksi 4 säattamalla se reagoimaan ammoniakin kanssa tunnetulla menetelmällä. Lopuksi amidi 4 muutetaan yhdisteeksi (I) kuulo mentamalla sitä Y-diketonin kanssa etikkaha- 0 pon läsnäollessa.

Siinä tapauksessa, että 1*2 = H, yhdiste (I) voidaan valmistaa kuumentamalla amidi 4 2,5-dimetoksi-tetrahydro-furaanin kanssa absoluuttisessa alkoholissa etikkahapon läsnäollessa.

Menetelmä

Menetelmän eri vaiheet on esitetty seuraavassa reak-tiokaaviossa: 20 R, rW ?

Br —(CH0) -CH - COOCH,, HC1 -* N — C — (CH.) -Br 25 NH2 \ C00CH3 R2 5 6 30 pK* H /R3 P=K2 h /3

-> N — C - (CH ) -N -} N — C — (CH ) -N

/ » 2 n / 1 2 n ^=-/ C00CH3 R4 CONH2 Λ X R2 2 7 (I) (Rx = h) 35 71128 4 2-amino-4-bromi-voihapon metyyliesterin hydrokloridi 5 /Tetrahedron, 25, 5971-81 (1969)J muutetaan vastaavaksi pyrrolijohdannaiseksi 6 joko saattamalla se reagoimaan Y-di-ketonin kanssa tai saattamalla se reagoimaan 2,5-dimetoksi-5 furaanin kanssa menetelmässä A^ esitetyllä tavalla.

^R3

Saattamalla amiini IINC reagoimaan yhdisteen 6 R4 kanssa, saadaan yhdiste 7, joka muutettuna amidiksi ammoniakilla antaa yhdisteet (I), (R. = H).

10 1

Menetelmä B

Kun on fenyyliryhmä tai 2-pyridyyliryhmä, yhdisteet (I) valmistetaan seuraavan reaktiokaavion mukaisesti käyttäen lähtöaineena tuotetta 8 R^CH-A, jossa R^ on fenyy- NH~ 15 z liryhmä tai 2-pyridyyliryhmä ja A on jokin haposta johdettu johdannainen paitsi -C=N nitriili tai esteriryhmä -COO-Alk (Alk merkitsee metyyli- tai etyyliryhmää).

20 z*2

R! — CH A ^ \l-CU — A

m2 U( 8 *2 2

25 K R

W 2 «3 1^/ 2 Rj κ*3 A 4 [S= \ c0NH2 \ R2 R2 30 10 (I) (R.^ = fenyyli tai 2-pyri- dyyli) li 35 71128 5

Kuten menetelmissä A^ ja A2 amiiniyhdiste 8 muutetaan vastaavaksi pyrroliyhdisteeksi 9 saattamalla se reagoimaan V-diketonin kanssa tai saattamalla se reagoimaan 2,5-dimetoksi-tetrahydrofuraanin kanssa.

R3 \

Yhdiste 9 alkyloidaan yhdisteellä ^ N-(CH2)n~Hal R4 (Hai tarkoittaa halogeenia) inertissä liuottimessa, kuten tolueenissa jonkin emäksen, kuten natriumhydridin läsnäollessa ja tällöin saadaan yhdiste 10. Yhdisteessä 10 oleva ^ ryhmä A muutetaan amidiryhmäksi. Kun A on nitriiliryhmä, tämä hydrolysoidaan esimerkiksi kuumentamalla natriumhydr-oksidin läsnäollessa vettä ja alkoholia sisältävässä liuoksessa. Kun A on esteriryhmä, tämä muutetaan amidiksi reaktiolla ammoniakin kanssa tai mikäli kysymyksessä on suuren ^ tilan vaativa amiini, -reaktiolla alumiinihydridin ja ammoniakin kompleksisuolan kanssa tetrahydrofuraanissa.

Menetelmä C

Kun on alkyyliryhmä, synteesi tapahtuu seuraavas-sa reaktiokaaviossa esitettyjen eri vaiheiden mukaisesti.

20 N=C N=C R, 25 R, — CH — COOC Hc -* R.C — (CU.) -N.

1 2 5 1, 2 n COOC2H5 4 II. 12

™2 Λ h JS

30 -=» Rj - C - (CHj)^ -» \ - C - (CH2)n-N^ COOC2H5 4 L-C R COOC2H5 4 13 14 35 71128 6

R

(. Rj^ Rj -> N — C— (C!Vn“N>\R (Ri = alkyyli) L=-( CONH_ 4 5 Lähtöaineena käytettävä tuote 11 on OCrisosyanoesteri. Tämän tyyppiset tuotteet ovat tunnettuja ja niitä voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä, etenkin fosgeenin reak- 10 tiolla vastaavien Od-formyyliaminoesterien kanssa. _ • /

Yhdiste 11 alkyloidaan yhdisteellä Hai-(C^)n”N ^ R4 jossakin sopivassa liuottimessa alkalisen aineen läsnäollessa, jolloin päästään yhdisteeseen 12. Tätä käsitellään ha-^5 polla. Käsittelemällä tätä hapolla orgaanisessa liuottimessa, saadaan amiini 13. Tämä puolestaan muutetaan pyrroli-johdannaiseksi 14 edellä esitetyllä tavalla.

Lopuksi yhdisteen esteriryhmä muutetaan amidiksi reaktiolla ammoniakin kanssa tai mieluummin litium-alumii-2Q ni-hydridin ja ammoniakin kompleksisuolan kanssa ja tetra-hydrofuraanissa.

Seuraavat esimerkit valaisevat yhdisteiden (I) valmistusta.

Esimerkki 1 25 Menetelmä 2-(2,5-dimetyyli-l-pyrrolyyli-4-di-isopropyyliamino-butyramidi (CM 7753)

.CH

(I) R. = H; R0 = CH,; R = R = -CH^ ; n = 2 30 1 z J J 4 ^ CH3 1) 2-amino-4-di-isopropyyliamino-voihappo

Keitettiin palautusjäähdyttäen kolmen tunnin ajan seosta, joka sisälsi 17,3 g 2-(2-di-isopropyyliamino-etyy-35 li)asetamidomalonihapon etyyliesteriä ja 4,4 g natriumhydr-oksidia 300 ml:ssa vettä ja 150 ml 96-%:ista etanolia.

7 71128

Haihdutettiin seos kuiviin ja otettiin jäännös talteen 200 ml:aan 2N kloorivetyhappoa ja keitettiin palautusjäähdyttäen viisi tuntia.

Seos jäähdytettiin ja neutraloitiin sitten säätäen 5 pH 7:ään lisäämällä natriumhydroksidiliuosta. Seos haihdutettiin jälleen kuiviin ja jäännös otettiin talteen kloroformiin. Liukenematon natriumkloridi poistettiin suodattamalla ja liuos kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin.

10 Jäännös oli ruskehtava kiinteä aine (11,3 g) ja se käytettiin sellaisenaan seuraavassa toimenpiteessä.

2) 2-amino-4-di-isopropyyliamino-voihapon metyyli- esteri

Lisättiin 30 ml:aan metanolia 22 g tionyylikloridia 15 samalla jäähdyttäen siten, että lämpötila pysyi alle -5°C:ssa, minkä jälkeen lisättiin pieninä annoksina 37,7 g edellä saatua happoa pitäen lämpötila koko ajan alle -5°C:ssa. Lisäyksen päätyttyä seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, minkä jälkeen se kuumennettiin kah-20 deksi tunniksi 40°C:seen. Metanoli poistettiin haihduttamalla ja jäännös otettiin talteen mahdollisimman pieneen määrään vettä. Lisättiin 500 ml eetteriä ja koko ajan samalla sekoittaen kyllästettiin vesifaasi kaliumkarbonaatilla. Eetterifaasi erotettiin ja uutettiin vesifaasi eet-25 terillä. Eetteriuutteet yhdistettiin, kuivattiin ne natrium-sulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin.

Jäännökseksi saatu keltainen neste (13 g) käytettiin sellaisenaan seuraavassa toimenpiteessä.

3) 2-amino-4-di-isopropyyliamino-butyramidi 20 Sijoitettiin jäähauteella jäähdytettyyn autoklaaviin liuos, joka sisälsi 3 g edellä saatua esteriä ja 20 ml absoluuttista etanolia ja annettiin ammoniakkikaasun kuplia siihen yhden tunnin ajan. Suljettiin autoklaavi ja kuumennettiin se 150°C:seen 36 tunniksi.

35 Alkoholi haihdutettiin ja jäännös otettiin talteen veteen ja kloroformiin. Orgaaninen faasi erotettiin ja pestiin se vedellä. Vesifaasit haihdutettiin kuiviin ja jäännös 8 71128 uutettiin kloroformilla. Kloroformiuutteet yhdistettiin ja kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin sitten kuiviin.

Jäännökseksi saatu värillinen neste (1,54 g) käytet-5 tiin puhdistamattomana seuraavassa operaatiossa.

4) CM 7753

Liuotettiin edellä saatu öljy (1,54 g) ja 0,98 g heksaani-2,5-dionia 40 ml:aan etikkahappoa ja kuumennettiin liuos 100°C:seen kolmeksi tunniksi. Liuotin poistettiin 10 haihduttamalla ja jäännös tehtiin alkaliseksi laimealla natriumhydroksidiliuoksella. Seos uutettiin eetterillä, kuivattiin eetterifaasi natriumsulfaatilla ja haihdutettiin sitten kuiviin. Näin saatiin jäykähkö tumma neste, joka puhdistettiin kromatografisesti alumiinioksidipylväällä eluoi-15 den heksaanin ja etyyliasetaatin 70:30-seoksella (tilavuus-suhde) .

Saatiin kellertävä kiinteä aine (1 g), joka kiteytettiin uudestaan isopropyylieetteristä. Lopuksi saatiin värittömiä kiteitä; sp. 71-72°C.

20 Esimerkki 2

Menetelmä Aj 2-(2,5-dimetyyli-l-pyrrolyyli)-4-(1,4-diatsa-bis-syklo/4.3.0/-4-nonyyli)-butyramidi (CM 40018) 25 /R3 (I) R. = H ; R - CH ; - N = N XN- ; n=2 r4 V_/ 1) 2-(2,5-dimetyyli-l-pyrrolyyli)-4-bromi-voihapon 30 metyyliesteri

Kuumennettiin 100°C:seen kolmeksi tunniksi seos, joka sisälsi 30 g 2-amino-4-bromi-voihapon metyyliesterin hydrokloridia, 17,7 g heksaani-2,5-dionia ja 10,6 g vedetöntä natriumasetaattia 500 ml:ssa etikkahappoa. Etikka-35 happo haihdutettiin tyhjössä ja otettiin jäännös sitten talteen veteen ja eetteriin. Eetterifaasi erotettiin ja 9 71128 pestiin peräkkäin vedellä, natriumbikarbonaattiliuoksella ja vielä uudelleen vedellä. Liuos kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin liuotin sen jälkeen kuiviin.

Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikagee-5 lipylväällä eluoiden pentaanin ja etyyliasetaatin 9:i-seok-sella (tilavuussuhde). Haihduttamalla saatiin kiteinen kiinteä aine, joka pestiin petrolieetterillä. Paino 15,1 g; sp. 79°C.

2) 2-(2,5-dimetyyli-l-pyrrolyyli)-4-(1,4-diatsabi-10 syklo/4.3.0/-4-nonyyli) -voihapon metyyliesteri

Keitettiin palautusjäähdyttäen 48 tuntia seosta, joka sisälsi 11 g edellä saatua esteriä ja 10,1 g 1,4 diatsa-bisyklo/*4.3.0/-nonaania 150 ml:ssa tolueenia. Jäähdytyksen jälkeen orgaaninen liuos pestiin vedellä, kuivattiin nat-15 riumsulfaatilla ja haihdutettiin liuotin kuiviin tyhjössä.

Jäännös puhdistettiin kromatografisesti alumiiniok-sidipylväällä eluoiden pentaanin ja etyyliasetaatin 95:5-seoksella (tilavuussuhde).

Näin saatu öljy (9 g) käytettiin sellaisenaan seuraa-20 vassa toimenpiteessä.

3) CM 40018

Suspensioon, joka sisälsi 1,71 g litium-aluminium-hydridiä 100 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania, annettiin kuplia ammoniakkikaasua niin kauan, kunnes saostuminen 25 päättyi. Sen jälkeen lisättiin Selmalla koko ajan sekoittaen 3,19 g edellä saatua esteriä liuotettuna 40 ml:aan tetra-hydrofuraania, ja kuumennettiin seos sitten 55-60°C:seen kolmeksi tunniksi ja 30 minuutiksi. Seos jäähdytettiin sitten jäähauteella ja hydrolysoitiin 40-%:isella natriumhydr-30 oksidiliuoksella. Suodatettiin ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös otettiin talteen kloroformiin ja veteen. Orgaaninen faasi erotettiin ja uutettiin uudelleen kloroformilla. Orgaaniset uutteet yhdistettiin ja kuivattiin natriumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin kuiviin.

35 Kiinteä jäännös kiteytettiin uudelleen etyyliase taatista (1,7 g); sp. 166-167°C.

10 71 128

Esimerkki 3

Menetelmä B

2-fenyyli-2-(1-pyrrolyyli)-4-di-isopropyyliaminobutyr-amidi (CM 7611) 5

// \ CH

(I) R. = —v ) ; R0 = H ; R = R = -CH^ J ; X0 4 ^3 n = 2 1) 2-fenyyli-2-(1-pyrrolyyli)-asetonitriili

Kuumennettiin 100°C:seen kahdeksi tunniksi seos, 15 joka sisälsi 16,85 g 2-amino-2-fenyyli-asetonitriilin hyd-rokloridia, 8,2 g sulaa natriumasetaattia ja 26,4 g 2,5-dimetoksi-tetrahydrofuraania 200 ml:ssa etikkahappoa. Haihdutettiin etikkahappo sitten kuiviin tyhjössä ja otettiin jäännös talteen eetteriin. Saostunut kiinteä aine erotet-20 tiin, minkä jälkeen eetteriliuos pestiin vedellä. Eetteri-liuos kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin eetteri kuiviin.

Jäännös tislattiin erittäin alhaisessa paineessa, kp./0,03 mm Hg: 108,112°C. Tisle kiteytyi, se kiteytettiin 25 uudelleen heksaanista; paino 8 g; sp. 51°C.

2) 2-fenyyli-2-(1-pyrrolyyli)-4-di-isopropyyliamino-butyronitriili

Keitettiin palautusjäähdyttäen kaksi tuntia seosta, joka sisälsi 5,16 g edellä saatua nitriiliä, 1,3 g natrium-30 amidia ja 5,1 g l-kloori-2-di-isopropyyliamino-etaania 150 ml:ssa tolueenia. Jäähdytyksen jälkeen orgaaninen liuos uutettiin laimealla kloorivetyhappoliuoksella. Hapan vesi-faasi erotettiin, tehtiin se alkaliseksi natriumhydroksidil-la ja uutettiin eetterillä. Eetteriliuos kuivattiin ja 35 haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesta silikageelipylväällä eluoiden heksaanin ja etyyliasetaatin 8:2-seoksella (tilavuussuhde).

7112 8

Saatiin 6,35 g haluttua tuotetta, mikä käytettiin sellaisenaan seuraavassa toimenpiteessä.

3) CM 7611

Keitettiin palautusjäähdyttäen viiden tunnin ajan 5 liuosta, joka sisälsi 6,07 g edellä saatua nitriiliä ja 22,5 g kaliumhydroksidia 180 ml:ssa 96-%:ista etanolia ja 45 ml vettä.

Alkoholin haihduttamisen jälkeen jäännös otettiin talteen veteen ja kloroformiin. Orgaaninen faasi erotettiin, 10 kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti alumiiniok-sidipylväällä. Eluoimalla heksaanin ja etyyliasetaatin 8:2-seoksella (tilavuussuhde) eliminoitiin epäpuhtaus ja heksaanin ja etyyliasetaatin 1:1-seoksella (tilavuussuhde) elu-15 oitiin itse tuote.

Kiteyttämällä uudelleen isopropyylieetteristä saatiin värittömiä kiteitä (4,5 g); sp. 103-104°C.

Esimerkki 4

Menetelmä B

20 2-(2-pyridyyli)-2-(1-pyrrolyyli)-4-di-isopropyyli- amino-butyramidi (CM 7954) Q^CH3 ; R2 = H; R3 = R4 = -CH ; n = 2 CH3 1) 2-(2-pyridyyli)-2-(1-pyrrolyyli)-etikkahapon etyy-liesteri

Keitettiin palautusjäähdyttäen kolme tuntia seosta, 30 joka sisälsi 22 g 2-amino-2-(2-pyridyyli)etikkahapon etyy-liesteriä ja 32,3 g 2,5-dimetoksi-tetrahydrofuraania 300 mlrssa absoluuttista etanolia ja 150 ml:ssa etikkahap-poa.

Liuottimet haihdutettiin kuiviin tyhjössä ja jään-35 nös otettiin talteen natriumbikarbonaatin vesiliuokseen.

Tämä uutettiin eetterillä ja kuivattiin eetteriliuos nat-riumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin kuiviin ja jäännös tislattiin alennetussa paineessa; kp/0,01 mm Hg: 115-122°C.

12 71128

Tisle kiteytyi; sp. 75-76°C; paino 11,3 g.

2) 2-(2-pyridyyli)-2-(1-pyrrolyyli)-4-di-isopropyyli-amino-voihapon etyyliesteri

Kuumennettiin 100°C:seen typpikaasukehässä yhdeksi 5 tunniksi ja 30 minuutiksi seos, joka sisälsi 15,65 g edellä saatua esteriä, 3,57 g natriumhydridiä ja 12,4 g 1-kloori- 2-di-isopropyyliamino-etaania 500 ml:ssa vedetöntä toluee-nia.

Jäähdytyksen jälkeen liuos pestiin vedellä, kuivat-10 tiin se natriumsulfaatilla ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti alumiinioksi-dipylväällä. Eluoimalla pentaanin ja etyyliasetaatin 95:5-seoksella (tilavuussuhde), saatiin 17,8 g haluttua tuotetta; sp. 45-47°C.

15 3) CM 7954

Suspensioon, joka sisälsi 1,14 g litiumin ja alumiinin kaksoishydridiä 60 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania, annettiin kuplia ammoniakkikaasua, kunnes kompleksin saostuminen oli päättynyt. Seokseen lisättiin 7,14 g edellä 20 saatua esteriä liuotettuna 40 ml saan tetrahydrofuraania ja pidettiin seos huoneen lämpötilassa 24 tuntia koko ajan sekoittaen.

Hydrolysoitiin lisäämällä 40-%:ista natriumhydrok-sidiliuosta, suodatettiin liukenematon aineosa ja haihdu-25 tettiin tetrahydrofuraani kuiviin. Jäännös otettiin talteen eetteriin, pestiin orgaaninen liuos vedellä, kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin se kuiviin. Jäännös kiteytettiin uudelleen isopropyylieetteristä.

Saatiin värittömiä kiteitä (3,35 g); sp. 128-129°C.

30 Esimerkki 5

Menetelmä C

2-metyyli-2-(1-pyrrolyyli)-4-di-isopropyyli-butyr-amidi (CM 40019) 35 / CH3 (I) R = CH^; R = H; R_ = R. = -CH^ ; n = 2 \ ch3 13 71128 1) 2-isosyano-2-metyyli-4-di-isopropyyliamino-voi-hapon etyyliesteri

Liuotettiin 14,54 g 2-isosyano-propionihapon etyyli-esteriä ja 19,75 g l-kloori-2-di-isopropyyliamino-etaania 5 300 raitaan vedetöntä eetteriä ja 120 raitaan dimetyylisulf- oksidia. Seos jäähdytettiin jäähauteella ja lisättiin pieninä erinä suspensio, joka sisälsi 5,73 g 55-60-%tista natriumhydridiä 90 mltssa vedetöntä eetteriä. Lisäyksen päätyttyä seosta keitettiin palautusjäähdyttäen kaksi tun-10 tia. Seoksen jäähdyttyä se kaadettiin 300 raitaan jäävettä. Orgaaninen faasi erotettiin dekantoimalla ja uutettiin ve-sifaasi kolme kertaa eetterillä. Orgaaniset uutteet yhdistettiin ja pestiin vedellä. Ne kuivattiin natriumsulfaatil-la ja haihdutettiin liuotin kuiviin.

15 Jäännös tislattiin alennetussa paineessa; kp/0,7 mm Hg: 102-106°C; paino 16 g.

2) 2-araino-2-raetyyli-4-di-isopropyyliamino-voihapon etyyliesteri 60 mlraan absoluuttista etanolia, johon oli lisätty 20 1,57 g vettä, annettiin kuplia kloorivetykaasua, kunnes kyllästyminen oli saavutettu.

Liuos jäähdytettiin alle -10°C:seen ja lisättiin siihen 16 g edellä saatua isosyanaattia liuotettuna 18 ml:aan absoluuttista etanolia, minkä jälkeen seoksen annettiin vä-25 hitellen lämmetä huoneen lämpötilaan ja jätettiin se sitten 20 tunniksi seisomaan tähän lämpötilaan. Haihdutettiin liuotin kuiviin tyhjössä ja otettiin jäännös talteen eetteriin. Eetteriliuos pestiin kaliumbikarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella. Vesifaasi erotettiin ja se uutettiin eette-30 rillä. Eetteriuutteet yhdistettiin, kuivattiin kaliumkarbonaatilla ja haihdutettiin liuotin kuiviin.

Saatu öljy (14,75 g) käytettiin sellaisenaan seuraa-vassa toimenpiteessä.

3) 2-metyyli-2-(1-pyrrolyyli)-4-di-isopropyyliamino-35 voihapon etyyliesteri

Keitettiin palautusjäähdyttäen 18 tuntia seosta, joka sisälsi 2 g edellä saatua aminoesteriä ja 2,17 g 2,5- i4 7112 8 dimetoksi tetrahydrofuraania 30 ml:ssa absoluuttista etanolia ja 15 mltssa etikkahappoa. Liuottimet haihdutettiin kuiviin tyhjössä ja jäännös otettiin talteen eetteriin. Eetteriliuos pestiin vedellä ja sitten natriumbikarbonaa-5 tin vesiliuoksella ja uudestaan vedellä. Se kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin liuotin kuiviin. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti alumiinioksidipylvääl-lä.

Eluoimalla pentaanin ja etyyliasetaatin 98:2-seok-10 sella (tilavuussuhde), saatiin 1,1 g haluttua tuotetta.

4) CM 4 0019

Toimittiin esimerkissä 4 kohdassa 3 esitetyn menetelmän mukaisesti käyttäen edellä saatua esteriä ja muuttaen reaktioaika 24 tunnista yhdeksi tunniksi.

15 Samalla käsittelyllä saatiin haluttu amidi saannon ollessa 60 %; sp. 79-80°C /petrolieetteri (kp. 40-65°C)_7.

Esimerkit 6-11

Toimien kuten esimerkeissä 1-5, mutta vaihdellen reagensseja, saatiin alla olevassa taulukossa I esitetyt 20 tuotteet.

Kullekin tuotteelle (I) on ilmoitettu koodinumero, substituenttien luonne, käytetty valmistusmenetelmä ja lopuksi vielä sulamispiste ja kiteytysliuotin.

71128 15

Taulukko 1 _ no Mene- Sp. °C (ki- R1 R2 n R3 R4 telinä teytysliuo- 5______tin) Π /CU ^CH 106-107 (pet- -CH^ 2 -CH^ch -CH^ch B rolieetteri) 0124-125 A (etyyliasetaat ti) 40002 H -CH. 2. -C H, -C0H, A. 88-89 3 25 251 pyylieetteri) ^ CH CH 68-69 7921 H H 2 -CH\ J -CHtT „ A. (heksaani) CH^ CM3 1 ^ eristetty 4002n h -r h 2 » .. λ hydrokloridina, 40020 H C2H5 2 A1 122-124 (metyy- lietyyliketoni) eristetty CH hydrokloridina, 20 40021 -CH2-CH^ 3 H 2 " " C 184-186 (iso- CH^ propanoli) H3°_ eristetty to- 401O5 H -C„3 2 n{~> *, y—' propanoli

25 H3C

eristetty / \ / CH3 fumaraattina 40169 H - -CH3 2 -/ ) -Cl^ 165-166 '—' CH3 (etanoli) 4017 6 H -CH ' 2 -cA CH CH CH ch CH. A eristetty hyd- 110 2 2 3 1 rokloridina, 30 198-199 (iso- propanoli) H CH CH eristetty fu- ,„-,-,0 n ' 3 1 j maraattina, 40178 -C1I3 2 -CH-CH2CH3 -ch-CH2CH3 Αχ 147-148 (aset oni) 35 80-81 (iso- 11 di. ch propyylieet- 40201 -CH3 3 -ch ^ 3 _CH^ 3 A teci "ch3 'cHj 1 95-97 (pentaa- 40261 H -CH3 2 -<^J> 16 71 128

Keksinnön mukaiset tuotteet on tutkittu farmakologisesti eläimillä etenkin niiden ominaisuuksien osoittamiseksi .

Arytmiset ominaisuudet 5 Koemenettely Näiden molekyylien antiarytmistä kykyä on tutkittu ventrikulaarisen arytmian omaavalla mallieläimellä.

Sekarotuisia koiria nukutettiin ja niille asetettiin retrogradisen katetrin avulla metallikierukka sepelvaltimoon.

10 Samanaikaisesti eläimen selkään kiinnitettiin frekvenssiä moduloiva mikrolähetin ja kytkettiin se kahteen prekordi-aaliseen elektrodiin.

Häkkiinsä palautetulla eläimellä ilmenee sitten progressiivinen etummaisen interventrikulaarivaltimon tukos.

15 Näin muodostuu paikallinen ja toispuolinen sydänlihaksen infarkti, joka synnyttää epänormaalin, mutta toistuvan sähköisen vaikutuksen: ventrikulaarinen takykardia.

Lääkkeet annetaan tässä tilassa per os (P.O.) ja te-lemetrinen järjestelmä mahdollistaa distrymian kehittymisen 20 seurannan reaaliaikaisena.

Systolisten sinuskompleksien ja patologioiden laskenta varmistettiin pitävästi elektronisilla menetelmillä.

Näin voitiin kvantifioida tuotteen vaikutuksen laatu ja kesto.

25 Tulokset

Eri tuotteita koskevat tulokset on koottu alla olevaan taulukkoon II.

Ventrikulaarisen takykardian suhteen tutkittujen tuotteiden vaikutus on ilmaistu joko sinusrytmin palautu- 30 misena tai suhteen: epänormaalien kompleksien lukumäärä sinuskompleksien lukumäärä 35 merkittävänä parantumisena.

17 71 1 28

Taulukko II

Tuotteet Annos, mg/kg Eläinten Vaikutus ventrikulaari-nro CM P.O. lukumäärä seen takykardiaan CM 7611 50 3 Sinusrytmin palautuminen 5 tai 70-90-%:inen parantuminen 3-4 tunnissa CM 7753 50 4 Sinusrytmin palautuminen tai 90-%:inen parantuminen 1 h 30 min - 5 h 10 CM 7640 50 1 Sinusrytmin palautuminen tai 90-%:inen parantuminen 90 min aikana

Verihiutaleiden kasaantumista vastustava vaikutus Koemenettely

Verihiutaleiden kasaantumista vastustava vaikutus tutkittiin in vitro ja ex vivo käyttäen Bornin turbidiuret-rista tekniikkaa.

In vitro-kokeissa käytettiin runsaasti verihiutaleita sisältävää plasmaa (PRP), joka oli valmistettu ihmi-20 sen laskimoverestä.

Tutkittavien tuotteiden eri liuokset valmistettiin juuri ennen kokeita. Tuotteita CM 7753, 7611, 7640, 7921, 7954, 40018, 40020 liuotettiin asetoniin pitoisuudella 2 x 10-2M.

25 Tuotteista CM 40169 ja 40178 valmistettiin vesiliuok- . , -3 set, joiden pitoisuus oli 2 x 10 M. 2 yul tuotteiden aset-oniliuosta tai 40 ,ul vesiliuosta inkuboitiin 10 minuutin O ' ajan 37 C:ssa vastaavasti 388 ja 350 ^ul:n kanssa PRP:tä. Tämän inkubointivaiheen jälkeen lisättiin 10 ^ul kollagee-30 niliuosta, jonka pitoisuus oli 40 ^,ul/ml. Vertailunäyttei-siin lisättiin joko 2 ^ul asetonia tai 40 ^ul tislattua vettä.

Ex vivo kokeita suoritettiin paviaanilla ainoastaan tuotteen CM 7753 verihiutaleiden kasaantumista vastustavan 35 vaikutuksen tutkimiseksi. Tässä tapauksessa tuotetta CM

7753 annettiin suun kautta 50 mg/kg/vuorokausi viiden vuorokauden jakson ajan.

ie 71128

Verinäytteet verihiutaleiden kasaantumisen tutkimista varten otettiin ennen tuotteen antamista, kaksi tuntia jakson ensimmäisenä vuorokautena annetun annoksen 50 mg/kg antamisen jälkeen ja kaksi tuntia viidentenä vuorokautena 5 annetun viimeisen annoksen jälkeen.

Verihiutaleiden kasaantuminen kvantitioitiin määrittämällä graafisesti kasaantumisen maksimiamplitudi (AM).

Tulokset on ilmaistu tämän parametrin inhibitiopro-sentteina verrattuna vertailunäytteeseen (100-%:inen kasaan-10 tuminen).

Tulokset

In vitro-tutkimus

Tutkituista tuotteita kahden todettiin erityisen aktiivisesti vastustavan kollageenilla aiheutettua verihiu-15 taleiden kasaantumista. Nämä olivat CM 7640 ja CM 7611 (IC50-arvo arviolta pitoisuudella 30 ^um).

Tuotteet CM 7753 ja 7954 estävät 50 % verihiutaleiden kasaantumisesta suunnilleen 100 ^um:n pitoisuudella. Muista tuotteista CM 40018, 40020, 40169, 40178 ja 7921 20 estävät heikoimmin kasaantumisilmiötä (20-30 %:n inhibitio pitoisuudella 100 ^,um) .

Ex vivo-tutkimus

Ex vivo-olosuhteissa suoritetuissa kokeissa tuote CM 7753 esti erityisen hyvin kollageenillä aiheutettua ve-25 rihiutaleiden kasaantumista.

Neljällä kokeeseen käytetyllä paviaanilla saavutettiin annostuksella 50 mg/kg/vuorokausi suoritetun viiden vuorokauden käsittelyn jälkeen 100 %:n inhibitio. Merkittävä kasaantumista vastustava vaikutus todettiin myös ADP:n 30 suhteen.

Nämä tulokset osoittavat, että keksinnön mukaisilla tuotteilla on voimakas vaikutus kokeellisesti aiheutettuun disrytmiaan ja niillä on merkittävä verihiutaleiden kasaantumista vastustava vaikutus. Tästä syystä tuotteita (I) 35 voidaan käyttää tautien hoidossa ihmisillä sydänlihasta suojaavina aineina iskiasperäisten rytmihäiriöiden ja verihiutaleiden kasaantumisesta aiheutuvien vaivojen hoitoon.

Claims (4)

19 n . 7112 8 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 2-(1-pyrro-lyyli)-4-aminobutaani (tai 5-aminopentaani) amidien valmista-5 miseksi, joiden kaava on (I) R2 u—c-(CH2)n-u <I) 1° —CONH2 \ *2 jossa on vety, alempi alkyyli, fenyyli tai 2-pyridyyli, R2 on vety tai alempi alkyyli,

15 R^ ja R^, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tar koittavat alempaa alkyyliä tai sykloheksyyliä, tai R^ ja R4 muodostavat sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, diatsa-1,4-bisyklo/4,3,O/non-4-yyli-, morfolino- tai dimetyyli- 2,6-piperidinoryhmän, ja 20. on 2 tai 3, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttä vien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jonka kaava on (II) /R3

25 H.N—CH-(CH-) — (II) 2 , 2 n CONH2 ^R4 jossa R^, R4 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan V-diketonin kanssa, jonka kaava on (III) 30 r2—-cch2ch2-r2 (III) Ö jossa R2 tarkoittaa samaa kuin edellä, tai 2,5-dimetoksi-tetrahydrofuraanin kanssa, tai b) yhdiste, jonka kaava on (IV) 35 20 71128 _/R2 C \ ?1 /R3 k-C-iG^in-N. UV) 5 ^==Xr A R4 R2 jossa R1, R2, R3, R4 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä ja A on karboksyylihappojohdannainen, saatetaan reagoimaan ammoniakin tai alumiinihydridin ja mmoniakin kompleksisuolan 10 kanssa, tai c) yhdiste, jonka kaava on (V) =\ ?1 /R3 15 i,_c—(CH2)n-B (V) (=^ CN R4 R2 jossa R^, R2, R3, R^ ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, hydrolysoidaan; 20 ja että saatu kaavan (I) mukainen yhdiste haluttaessa muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi. 21 71128 Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara 2-(1-pyrrolyl)-4-aminobutan (eller 5-aminopentan) amider, 5 med formeln (I) R2 R1 /R3 N-C-<CH2)n-N (D 10 conh2 väri är väte, lägre alkyl, fenyl eller 2-pyridyl, R2 är väte eller lägre alkyl, R^ och R^, vilka kan vara lika eller olika, betecknar lägre alkyl eller cyklohexyl, eller R och 15 R^ bildar med den kväveatom som de är bundna vid, en diaza- 1,4-bicyklo^4,3,0/non-4-yl-, morfolino- eller dimetyl-2,6-piperidinogrupp och n är 2 eller 3, samt deras farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter, kännetecknat därav, att a) en förening med formeln (II)

20 R, H2N-CH-(CH2)n~NC (II) CONH2 ^R4 väri R^, R^ och n har ovan angiven betydelse, omsätts med en 25 '^'diketon med formeln (III) R2-CCH2CH2-R2 (III) O väri R2 har ovan angiven betydelse, eller med 2,5-dimetoxitet-2q hydrofuran, eller b) en förening med formeln (IV) /¾ \ ?1 /*3 N—C—(CH2)n-N (IV) A Ε,> R2