FI65253B - Foerfarande foer framstaellning av antibakteriellt verksamma 9-aminodeoxi-clavulansyraderivat - Google Patents

Description

RSrTI ΓΒΐ miKUULUTUSJULKA,su ,COC7 jjgSjft lBJ ( ) UTLÄGGNI NGSSKRIFT 6525 3 C (45) '-r.w i = - --7 10 04 193¾ patent rreiielat ^ y ^ (51) K*.ik.3/int.a.3 C 07 D 498/04 SUOM I — FI N LAN D (21) Ptt*nttlh«k*flHi* —P»t««»i»etcnln| 781201 (22) Hmk*mt*pihri—AmBknlngadag 19.0U.78 (23) AlkupUvt —GIMgh*t*daf 19. OU. 78 (41) Tullut JulklMkal — Bllvlt offwitlig 23.10. JÖ

Patentti- j* rekisterihallituf /44^ NlhtiMUcripanon jm kuuLJulkaliun pvm. — on 1? flo

Patent- och registerstyrelsen AwMm uttagd och uti.«krtft«n pubikarad 3 (32)(33)(31) Pyydetty etuotkeu* —Begird priority 22. OU. 77 O6.09.77, 02.12.77, 23.12.77 Iso-Britannia-Storbritannien(GB) 1676U/77, 37072/77, 50229/77, 53866/77 (71) Beecham Group Limited, Beecham House, Great West Road, Brentford,

Middlesex, Iso-Britannia-Storbritannien(GB) (72) Irene Stirling, Reigate, Surrey, Brian Peter Clarke, Kingsvood, Surrey, Iso-Britannia-Storbritannien(GB) (7*0 Berggren Oy Ab (5*0 Menetelmä bakteerinvastaisesti vaikuttavien 9-aminodeoksi-klavulaani-happojohdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av antibakteriellt verksamma 9-aminodeoxi-clavulansyraderxvat

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää bakteerinvastaisesti vaikuttavien 9-aminodeoksi-klavulaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava

H

N

_V/Ox .CH^-NH-CH -R

I W (II)

J-N~V

O \ co2a tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, jossa A on vetyatomi tai alkyyliryhmä, joka voi olla subs-tituoitu alkoksilla, fenyylillä, bentsoyylillä tai bentsyyliok-silla, jolloin fenyyliryhmät voivat olla substituoidut halogeenilla, nitrolla tai alkoksilla, ja on vetyatomi, 1-5 hiili-atomia sisältävä alkyyliryhmä, 1-5 hiiliatomia sisältävä hydrok-sialkyyliryhmä, tai fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla fluorilla, kloorilla, alkyylillä, alkoksilla, hydroksilla tai alkanoyyliaminolla.

2 65253

Suomalaisessa patenttihakemuksessa n:o 762895 (ks. myös BE-patent-tia n:o 847044 ja DE-hakemusjulkaisua n:o P 2646003.7) on esitetty mm. sellaiset yhdisteet, joilla on kaava H /CH2X1 I >=* xch2x o'

co2H

ja niiden esterit, jossa kaavassa X^ on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-5 hiiliatomia, alkenyyliryhmä, jossa on 2-5 hiiliatomia, hydroksialkyyliryhmä, jossa on 1-5 hiiliatomia ja mahdollisesti substituoitu fenyyliryhmä, ja X2 on mahdollisesti substitu-oitu fenyyliryhmä, ja tällaisten yhdisteiden on esitetty olevan bakteereja tappavia aineita ja β-laktamaasi-inhibiittoreita.

Kaavan II mukaiset yhdisteet ovat arvokkaita β-laktamaasi-inhi-biittoreita, jotka vahvistavat penisilliinien ja kefalosporiinien tehokkuutta, ja niillä on myös sellaisinaan bakteereja tappavia ominaisuuksia. Keksinnön mukaisesti valmistetuilla kaavan II mukaisilla yhdisteillä on osoittautunut olevan huomattavasti paremmat farmakologiset ominaisuudet kuin edellä esitetyn kaavan I mukaisilla yhdisteillä.

Kaavan II mukaiset yhdisteet voivat esiintyä amfoteerisessa muodossa, jolla on kaava H\ © νγ^Ο CH2-NH2~CH2-R1 I (iia) f—'"~\ 0 co2 ® jossa merkitsee samaa kuin kaavassa II. Nämä amfoteeriset yhdisteet ovat erityisen edullisia, koska ne ovat yleensä kiteisiä ja niillä on suurempi stabiilisuus kuin aikaisemmin esitetyillä β-laktamaasi-inhibiittoriamiineilla, kuten sellaisilla, joilla on kaava I.

Kaavan II mukaisten yhdisteiden esterit voivat esiintyä vapaan emäksen muodossa tai happoadditiosuolan muodossa.

3 65253

Erityisen edullisia ryhmiä ovat metyyli-, etyyli-, hydroksi-metyyli-, 2-hydroksietyyli-, isopropyyli- ja fenyyliryhmät.

Eräs sellainen kaavan (II) mukainen yhdiste, jolla on osoittautunut olevan erittäin hyvä synergistinen aktiivisuus in vivo, on sellainen, jolla on kaava H' -=v ^/0 ch2-nh-ch2^J> (iv) )—νλ

C02H

Tämä yhdiste kykenee parantamaan penisilliinien, kuten ampisil-liinin tai amoksisilliinin, sekä kefalosporiinien tehokkuutta erilaisia gram-negatiivisten bakteerien β-laktamaasia muodostavia kantoja vastaan, kuten Klebsiella aerogenes, Escherichia coli, Proteus mirabilis yms., ja erikoisesti gram-positiivisten bakteerien, kuten Staphylococcus aureus β-laktamaasia muodostavia kantoja vastaan annosteltuna oraalisesti ja erikoisesti injektion muodossa. Kaavan IV mukaisilla yhdisteillä on myös edullisen alhainen akuuttinen myrkyllisyys, esim. yhtään kuolemantapausta ei eläimissä ole voitu todeta annosteltaessa tätä synergististä ainetta terapeuttisissa määrissä. Lisäksi tällaiset yhdisteet ovat tehokkaita kun niitä käytetään yksinään käsiteltäessä infektioita, jotka aiheutuvat Staphylococcus aureuksen β-laktamaasia muodostavista, samoin kuin β-laktamaasia muodostamattomista kannoista. Niinpä esimerkiksi kaavan IV mukainen yhdiste on todettu tehokkaammaksi kuin ampisilliini, kloksasilliini tai kefatsoliini käsiteltäessä määrättyjä infektioita, jotka aiheuttaa Staphylococcus aureus Russell.

Edullisia ryhmiä A ovat esim. metyyli, metoksimetyyli, bentsyyli ja 4-metoksibentsyyli.

Kaavan II mukaisten yhdisteiden esterit voivat haluttaessa esiintyä happoadditiosuolojensa muodossa. Se happo, jota käytetään suolan muodostamiseksi, on sopivimmin farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola. Sopivia farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja ovat mm. sellaisten epäorgaanisten ja orgaanisten happojen, kuten kloorivety-, fosfori-, rikki-, metaani- 4 65253 sulfoni-, tolueenisulfoni-, sitruuna-, etikka-, maito-, viini-, propioni-, meripihka-, yms. suolat. Sopivimmin happoadditiosuola muodostetaan kiinteäksi ja edullisesti kiteiseen kiinteään muotoon.

Kaavan II mukaisissa yhdisteissä kiteinen muoto voi olla solva-toitu, esim. hydratoitu.

Kaavan II mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa siten, että a) hydrataan yhdiste, jolla on kaava

Hv z' ch2-Ri Λγ/Ο ch2-n (X)

I \=/ CH -R

)—N 0 '' co2a jossa A ja merkitsevät samaa kuin kaavassa II, tai A merkitsee hydraamalla poistettavissa olevaa esteriryhmää, ja R? on fenyyli-ryhmä, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla fluorilla, kloorilla, alkyylillä, alkoksilla, hydroksilla tai al-kanoyyliaminolla, tai b) hydrataan yhdiste, jolla on kaava H CO-O-CH-R^ \ / '

/ CH„-N

' \=/ XCH--R (XI) o co2a jossa A, R^ ja merkitsevät samaa kuin kaavassa X, ja haluttaessa esteröidään menetelmällä a) tai b) saatu amfoteerinen yhdiste kaavan II mukaisten esterien saamiseksi, ja haluttaessa uutetaan saatu tuote farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Tässä yhteydessä termi "hydraamalla poistettavissa oleva esteri-ryhmä" tarkoittaa esteriryhmää, joka hydrattaessa lohkeaa niin, että muodostuu peruskarboksyylihappo.

Hydraus suoritetaan tavallisesti transitiometallikatalyytin läsnäollessa.

5 6525 3

Katalyyteistä olemme pitäneet edullisimpana palladiumia, jota voidaan käyttää esim. hiilellä, bariumsulfaatilla, kalsiumkarbonaa-tilla yms. olevan palladiumin muodossa.

Edullisin katalyytti on hiilellä oleva palladium (nimitetään joskus puuhiilellä oleva palladium), jolloin palladiumin määrä on esimerkiksi 5, 10, 20 tai 30 %. Mitä suurempi palladiumpitoisuus katalyytissä on, sitä alhaisempaa katalyytin kokonaispainoa voidaan käyttää, jolloin vältetään mahdolliset tuotteen hiileen absorboitumisesta aiheutuvat haitat.

Reaktiossa voidaan käyttää vedyn alhaista, kohtalaista tai korkeata painetta, esim. 1-6 ilmakehää. Käytetyn katalyytin sisältäessä alhaisemman palladium-prosenttimäärän (esim. 5 tai 10 %) saadaan yleensä halutun tuotteen parempia saantoja käytettäessä vetypai-netta noin 3-5 ilmakehää, esimerkiksi noin 4 ilmakehää. Käytetyn katalyytin sisältessä suuremman prosenttimäärän palladiumia (esim. 20 tai 30 %), voidaan halutun tuotteen hyviä saantoja saada myös käytettäessä vedyn alhaista tai kohtalaista painetta, esimerkiksi 1-2 ilmakehää. Olemme todenneet sopivaksi käyttää vedyn atmosfääristä tai hieman sen ylittävää painetta yhdessä suuremman palladiumpa toi suuden omaavan katalyytin kanssa.

Reaktio suoritetaan tavallisesti kohtuullisessa lämpötilassa, esimerkiksi 0-30°C, ja edullisesti 12-25°C. Yleensä on sopivaa suorittaa reaktio ympäristön lämpötilassa.

Sopivia liuottimia hydrauksen suorittamiseksi ovat etanoli, n-pro-panoli, isopropanoli, tetrahydrofuraani, dioksaani, etyyliasetaatti tai tällaisten liuottimien seokset tai tällaiset liuottimet veden läsnäollessa. Eräs edullinen liuotin on vesipitoinen tetrahydro-furaani. Eräs toinen edullinen liuotin on isopropanolin, tetrahydrof uraanin ja veden seos.

Kun on substituoitu fenyyliryhmä, niin tällöin R? on sopivasti samalla lailla substituoitu fenyyliryhmä tai substituoimaton fenyyliryhmä .

Kaikkein sopivimmin R^ on fenyyliryhmä.

65253

On edullista suorittaa hydrausreaktio käyttäen kaavan X mukaisen yhdisteen hydraamalla poistettavissa olevaa esteriä niin, että hydrauksessa muodostuu kaavan II mukainen vapaa happo. Tällainen hydrausreaktio tapahtuu ainakin osittain kaavan X mukaisen vapaan hapon välityksellä. Edullisia hydraamalla poistettavissa olevia estereitä ovat bentsyyli-, metoksibentsyyli-, nitrobentsyyli-(esimerkiksi p-nitrobentsyyliesteri), klooribentsyyli- ja bromi-bentsyyliesterit. Erittäin sopivia hydraamalla poistettavissa olevia estereitä ovat bentsyyli- ja p-metoksibentsyyliesterit.

Kun hydraus suoritetaan käyttäen kaavan XI mukaisia estereitä, on edullinen esteri C^_4-alkyyliesteri, erikoisesti metyyli- ja etyyliesteri.

Tuote voidaan yleensä erottaa reaktioseoksesta suodattamalla pois kiinteät aineet (katalyytti, joka on pestävä hyvin tuotteen poistamiseksi) ja haihduttamalla sitten pois liuotin, edullisesti alipaineessa, jolloin saadaan raakatuote. Lisäpuhdistus voidaan toteuttaa käyttämällä sellaisia tavanomaisia menetelmiä kuin kroma-tografiaa selluloosapatsaassa tai jotain muuta kiinteässä faasissa tapahtuvaa elutoimista käyttäen C^_^-alkanolia, mahdollisesti veden ja mahdollisesti myös tetrahydrofuraanin läsnäollessa. Haihdutettaessa yhdistetyt aktiiviset fraktiot (identifioidaan vesipitoisen kaliumpermanganaattisuihkun avulla, tie) saadaan haluttu yhdiste puhtaassa muodossa. Haluttu yhdiste saadaan tavallisesti kiteisessä muodossa (ellei se ole suolaa muodostamaton esteri). Hankaamista etanolin, isopropanolin yms. C^_(j-alkanolin tai jonkin muun tavanomaisen liuottimen, kuten ketonin, eetterin tai esterin tai jonkin muun tavanomaisen liuottimen (esimerkiksi 1-6 hiiliatomia ja so-pivimmin 1-4 hiiliatomia sisältävän) kanssa voidaan myös käyttää kiteytymisen edistämiseksi. Uudelleenkiteyttämistä etanolista yms. voidaan myös käyttää. Tällaisissa menetelmissä käytetty liuotin voi edullisesti olla kostea.

Amfoteerisia yhdisteitä voidaan saada suursaantoreaktioista lisäämällä C^_4~alkanolia, kuten kylmää etanolia tai sen kaltaista, raakatuotteeseen.

Alhaisemman saannon antavien reaktioiden raakatuote voi sisältää huomattavasti epäpuhtauksia niin, että voi olla edullista pestä 65253 raakatuote liuottamalla se veteen sekoittamattomaan orgaaniseen liuottimeen ja uuttamalla sitten veteen. Vesifaasin haihduttaminen, joka tapahtuu edullisesti suurtyhjössä, aikaansaa sitten puhtaamman tuotteen, joka voidaan puhdistaa edelleen haluttaessa edellä kuvatulla tavalla.

Kaavan II mukaisten yhdisteiden estereillä, jotka eivät ole suola-muodossa, on taipumus olla öljymäisessä muodossa niin, että usein käsiteltävyyden mukavuuden kannalta on edullista muuttaa ne kiinteiksi happoadditiosuoloiksi esimerkiksi reaktion avulla yhden happo-ekvivalentin kanssa. Vaihtoehtoisesti voidaan kaavan X tai XI mukaisen yhdisteen esteri, jota ei voida poistaa hydraamalla, hydrata 1 ekvivalentin happoa läsnäollessa, eli tällaiset esterit voidaan hydrata niiden happoadditiosuolojen muodossa.

Kaavan II mukaiset yhdisteet voidaan hydrata niiden happoadditio-suolojen muodossa voimakkaan hapon avulla, mutta tämä ei ole edullinen keksinnön mukaisen menetelmän toteuttamismuoto.

Kaavan II mukainen amfoteerinen yhdiste voidaan muuttaa vastaavaksi kaavan II mukaiseksi esteriksi liuottamalla tai suspendoi-malla liuottimeen, kuten dimetyyliformamidiin, heksametyylifos-foramidiin, dikloorimetaaniin, etyyliasetaattiin tai johonkin muuhun ei-esteröityvään liuottimeen ja esteröimällä siinä. Sopivat lämpötilat tällaista reaktiota varten ovat alueella noin 0-25°C. Sopivia esteröimisreagensseja ovat mm. reaktiokykyiset halogenidit ja niiden ekvivalentit alkyylioksoniumsuolat yms.

Käytettäessä sellaista reagenssia kuin reaktiokykyistä jodidia, kloridia, bromidia, tosylaattia, mesylaattia tai vastaavaa yhdistettä, on muodostunut suola yleensä sopiva käytettäväksi keksinnön mukaisessa seoksessa. Vaihtoehtoisesti tämä suola voidaan muuttaa vapaaksi emäkseksi tai joksikin muuksi suolaksi. Alkyylioksonium-suolaa käytettäessä on edullista muuttaa saatu tetrafluoriboraatti vapaaksi emäkseksi tai joksikin muuksi suolaksi. Erilaiset edellä mainitut suolat voidaan muuttaa vapaaksi emäkseksi neutraloimalla, esimerkiksi saattamalla suolan vesiliuos kosketuksiin orgaanisen faasin kanssa, neutraloimalla suola, lisäämällä emästä ja uuttamalla vapautunut amiini orgaaniseen faasiin. Tämä amiini voidaan suolata sitten uudelleen saattamalla reagoimaan jonkin sopivan hapon, 65253 8 esimerkiksi kuivan orgaanisen liuottimen kanssa. Yleensä on edullista, ettei tässä menetelmässä käytetä enempää kuin 1 ekvivalenttia happoa. Alunperin muodostettu suola voidaan muuttaa vaihtoehtoiseksi suolaksi käyttämällä ioninvaihtomateriaalia, esimerkiksi johtamalla suolan vesiliuos anioninvaihtokerroksen lävitse, joka on halutun suolan muodossa, esimerkiksi kloridina.

Suolat voidaan tavallisesti saada kiinteässä muodossa liuottamalla selvästi polaariseen orgaaniseen liuottimeen (kuten etanoliin, tetra-hydrofuraaniin yms.) ja seostamalla sitten käyttäen ei-polaarista liuotinta, kuten dietyylieetteriä, sykloheksaania yms.

Kaavan II mukaisten yhdisteiden esterien suoloja voidaan normaalisti saada kiteisessä muodossa tavanomaisilla menetelmillä, kuten hankaa-malla (tai kiteyttämällä tai kiteyttämällä uudelleen) sopivan orgaanisen liuottimen, kuten eetterin, asetonin, asetonitriilin, tetra-hydrofuraanin yms. avulla.

Kaavan II mukainen esteri voidaan myöskin valmistaa saattamalla kaavan II mukaisen hapon happoadditiosuola reagoimaan alkoholin kanssa kondensaatiota edistävän aineen läsnäollessa.

Sopivia kondensaatioita edistäviä aineita, joita voidaan käyttää tässä menetelmässä, ovat karbodi-imidit, kuten disykloheksyyli-karbodi-imidi, ja niiden vastaavat kemialliset ekvivalentit.

Happoadditiosuola voidaan muodostaa in situ tai se voi olla esimuo-dostettu. Käytetty happo on tavallisesti voimakas happo, kuten metaanisulfonihappo, p-tolueenisulfonihappo yms. tai trifluori-etikkahappo yms.

Reaktiot toteutetaan normaalisti inertisessä orgaanisessa liuotti-messa. Kun muodostettu esteri on nestemäisen alkoholin esteri, on sopivaa käyttää tätä alkoholia liuottimena tai liuotinjärjestelmän osana. Esteröiminen toteutetaan yleensä kohtuullisessa lämpötilassa, kuten 0-35°C, esimerkiksi noin 10-25°C. Reaktio suoritetaan sopivasti ympäristön lämpötilassa.

Kaavan XI mukainen esteri voidaan valmistaa esteröimällä kaavan XI mukainen happo tai sen suola.

9 65253

Sopiviiranin tämä esteröiminen suoritetaan saattamlla kaavan XI mukaisen hapon suola reagoimaan reaktiokykyisen halogenidin tai sen kemiallisen ekvivalentin kanssa.

Sopivia kaavan XI mukaisen hapon suoloja ovat litium-, natrium-, kalium- yms. suolat. Sopivia esteröimisaineita ovat reaktiokykyi-set kloridit, bromidit, jodidit, happoanhydridit, tosylaatit, mesylaatit yms.

Esteröiminen voidaan toteuttaa tavanomaisessa orgaanisessa liuot-timessa, kuten asetonissa, dimetyyliformamididssa yms. Reaktio toteutetaan tavallisesti tavanomaisessa lämpötilassa, kuten 0-35°C, esim. 10-25°C. Reaktio toteutetaan tavallisesti ympäristön lämpötilassa.

Kaavan XI mukainen happo voidaan myös esteröidä suorittamalla reaktio alkoholin kanssa kondensaatiota edistävän reagenssin, kuten karbodi-imidin, esimerkiksi disykloheksyylikarbodi-imidin tai sen kemiallisen ekvivalentin, läsnäollessa. Tällaiset reaktiot voidaan toteuttaa olosuhteissa, jotka ovat samanlaisia kuin edellä kuvatut kysymyksen ollessa samantyyppisistä reaktioista, jotka suoritetaan käyttäen kaavan II mukaisen hapon happoadditiosuolaa.

Kaavan XI mukainen happo tai sen suola voidaan valmistaa saattamalla kaavan II mukainen happo tai sen suola reagoimaan sellaisen yhdisteen kanssa, jolla on kaava y-co-o-r7 (XII) jossa kaavassa on määritelty kaavan X yhteydessä ja Y on helposti korvattavissa oleva ryhmä.

Edullisia ryhmiä Y ovat klooriatomi ja kemiallisesti ekvivalent-tiset atomit tai ryhmät, kuten bromiatomi tai OR^-ryhmä yms.

Eräs edullinen kaavan XII mukainen yhdiste on bentsyyliklorofor-maatti.

Reaktio voidaan toteuttaa tavanomaisissa asyloimisolosuhteissa, esimerkiksi ei-asyloituvassa orgaanisessa Liuottimessa, kuten 65253 10 asetonissa, happoa sitovan aineen, kuten litiumbikarbonaatin natriumkarbonaatin, kaliumkarbonaatin yms. läsnäollessa tavanomaisessa lämpötilassa, kuten 10-30°C, esim. noin 0-10°C.

Olemme todenneet sopivaksi toteuttaa asylointi käyttäen kaavan II mukaisen hapon suolaa- kuten alkalimetallisuolaa, ja erikoisesti litiumsuolaa.

Kaavan (X) mukaisia välituotteita voidaan valmistaa menetelmillä, jotka on kuvattu suomalaisessa patenttihakemuksessa n:o 762895, tai vastaavilla menetelmillä.

Kaavan II mukaisia uusia yhdisteitä voidaan nimetä deoksiklavu-laanihapon johdannaisiksi, jolla hapolla on kaava H. 9 O . yCH3 6 15 ty==/ (XIII) 7 O/ 8 0 ' \ co2h Täten tässä järjestelmässä aminosubstituentti on kiinnittyneenä 9-hiiliatomiin.

Keksinnön mukainen menetelmä soveltuu seuraavien yhdisteiden valmistukseen: 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(2-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(3-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(4-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(4-hydroksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(3-hydroksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(4-hydroksi-3-metoksibentsyyli) auninodeoksiklavulaanihappo 9-N-(3-hydroksi-4-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(2-fluoribentsyyli) auninodeoksiklavulaanihappo 9-N-(3-fluoribentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(4-fluoribentsyyli) auninodeoksiklavulaanihappo 9-N-(2-me tyy1ibentsyy1i)aminodeoks iklavulaanihappo 9-N- (3-metyylibentsyyli) auninodeoksiklavulaanihappo 652 5 3 9-N-(4-metyylibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(2 - asetamidobentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(3 - asetamidobentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(4 - asetamidobentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(4-propionamidobentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(4-klooribentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N- (2-hydroksietyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-etyyliaminodeoksiklavulaanihappo 9-N-(2-hydroksipropyyli)aminodeoksiklavulaanihappo 9-N-propyyliaminodeoksiklavulaanihappo.

Keksinnön mukaisesti voidaan myöskin valmistaa edellä olevien yhdisteiden estereitä, jotka esterit voivat olla happoadditio-suolojen muodossa. Sopivia estereitä ovat mm. seuraavat: metyyli, etyyli, metoksimetyyli, bentsoyylimetyyli, bentsyyli ja 4-metoksibentsyyli.

Kaavan II mukaisia yhdisteitä voidaan sisällyttää farmaseuttisiin seoksiin. Kaavan II mukainen yhdiste voi olla seoksessa ainoana terapeuttisena aineena tai yhdessä muiden terapeuttisten aineiden, kuten penisilliinin tai kefalosporiinin, kanssa. Käytettäessä myös penisilliiniä tai kefalosporiinia aikaansaadaan huomattavia etuja, koska saadulla seoksella on parantunut tehokkuus (synergistisyys).

Sopivia penisilliinejä, joita voidaan käyttää seoksissa, ovat bentsyylipenisilliini, fenoksimetyylipenisilliini, karbenisilliini, atsidosilliini, propisilliini, ampisilliini, amoksisilliini, epi-silliini, tikarsilliini, syklasilliini, pirbenisilliini, atslo-silliini, metslosilliini, selbenisilliini ja muut tunnetut penisilliinit ja niiden esiyhdisteet, kuten niiden in vivo hydrolysoituvat esterit, kuten ampisilliinin, bentsyylipenisilliinin tai amoksisilliinin asetoksimetyyli-, pivaloyylioksimetyyli-, a-etoksikarbonyylioksietyyli- tai ftalidyyliesterit, ja penisilliinien aldehydi- ja ketoniadditiotuotteet, jotka sisältävät 6-a-aminoasetamidi-sivuketjun (kuten hetasilliinin, metampisilliinin ja amoksisilliinin analogiset johdannaiset) tai karbenisilliinin ja tikarsilliinin α-esterit, kuten niiden fenyyli- tai indanyyli-α-esterit.

05253 12

Sopivia kefalosporiineja, joita voidaan käyttää seoksissa, ovat mm. kefatritsiini, kefaloridiini, kefalotiini, kefatsoliini, kefaleksiini, kefasetriili, kefalomandoli-naftaatti, kefapiriini, kefardiini, 4-hydroksikefaleksiini, kefaparoli, kefaglysiini ja muut tunnetut kefalosporiinit tai niiden esiyhdisteet.

Tällaisia yhdisteitä käytetään usein suolan, hydraatin yms. muodossa.

Erittäin edullisia penisilliinejä, joita voidaan käyttää seoksissa, ovat ampisilliini, amoksisilliini, karbenisilliini ja tikarsillii-ni. Näitä penisilliinejä voidaan käyttää farmaseuttisesti sopivina suoloina, kuten natriumsuolana. Vaihtoehtoisesti voidaan ampisil-liiniä tai amoksisilliiniä käyttää amfoteeristen hienojen osasten muodossa (yleensä ampisilliinitrihydraattina tai amoksisilliini-trihydraattina) injektoitavissa suspensioissa, esim. siten kuin edellä on kuvattu keksinnön mukaisesti yhdisteestä puheen ollessa.

Edullisin penisilliini, jota voidaan käyttää synergistisessä seoksessa, on amoksisilliini, esim. sen natriumsuola tai trihydraatti.

Erittäin sopivia kefalosporiineja, joita voidaan käyttää seoksissa, ovat kefaloridiini ja kefatsoliini. Tällaisia kefalosporiineja voidaan käyttää farmaseuttisesti sopivan suolan, esim. natrium-suolan muodossa.

Käytettäessä kaavan II mukaista yhdistettä yhdessä kefalosporiinin tai penisilliinin kanssa, voi sen suhde penisilliiniin tai kefalo-sporiiniin vaihdella laajoissa rajoissa, esim. alueella 10:1-1:10, kuten noin 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 tai 1:6 (p/p puhtaasta vapaasta antibiootista laskettuna). Suun kautta annosteltavat seokset, jotka sisältävät keksinnön mukaista yhdistettä, sisältävät tavallisesti suhteellisesti enemmän synergististä ainetta kuin vastaavat injektoitavat seokset, esim. suhde suun kautta nautittavassa seoksessa voi olla noin 3:1-1:1, kun taas vastaavassa injektoitavassa seoksessa suhde voi olla noin 1:1-1:3 (keksinnön mukainen yhdiste penisilliini tai kefalosporiini).

Keksinnön mukaisen yhdisteen määrä kussakin annosyksikkömuodossa on tavallisesti välillä 25 ja 100 mg ja tavanomaisimmin välillä i 13 65253 50 ja 500 mg, esimerkiksi noin 62,5, 100, 125, 150, 200 tai 250 mg. !

Edellä kuvattuja seoksia voidaan käyttää käsiteltäessä infektioita esim. hengitysteissä, virtsateissä ja ihmisten pehmeissä kudoksissa, sekä nautakarjan mastitista käsiteltäessä.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä annostellaan tavallisesti 50-1000 mg vuorokaudessa, mutta tavanomaisimmin 100-750 mg, esimerkiksi 1-6 annoksena, ja kaikkein tavallisimmin 2, 3 tai 4 annoksena.

Penisilliiniä tai kefalosporiinia on synergistisessä seoksessa tavallisesti läsnä suunnilleen määrä, jossa sitä voidaan sopivasti käyttää, ja tämä määrä on yleensä noin 62,5-1000 mg annosta kohden, tavallisesti noin 125, 250 tai 500 mg annosta kohden.

Tavallisesti käsiteltävä infektio aiheutuu jostain kannasta j

Staphylococcus aureus, Klebsiella aerogenes, Escherichia coli,

Proteus sp. yms. Se organismi, jonka oletamme olevan kaikkein helpoimmin käsiteltävissä keksinnön mukaisen yhdisteen bakteereja tehokkaasti tappavalla määrällä, on Staphylococcus aureus.

Muita mainittuja organismeja voidaan helpoimmin käsitellä käyttämällä synergistisesti tehokasta määrää keksinnön mukaista yhdistettä ja penisilliiniä tai kefalosporiinia. Näiden aineosien annostelu voi tapahtua erikseen, mutta yleensä pidämme edullisempana käyttää sellaista seosta, joka sisältää sekä synergis-tistä ainetta että penisilliiniä tai kefalosporiinia.

Seuraavassa kuvataan välituotteiden valmistamista (valmistusesi- !

merkit 1-17, 22 ja 23 kuvaavat kaavan X mukaisten välituotteiden J

valmistamista ja valmistusesimerkit 18-21 kuvaavat näiden välituotteiden valmistuksessa lähtöaineena käytettävien yhdisteiden valmistamista) ja keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamista (esimerkit 1-36). Jäljempänä olevat koetulokset (demonstraatiot 1-3) kuvaavat keksinnön mukaisten yhdisteiden aktiivisuutta.

14 6 5 2 5 3

Valmistusesimerkki 1

Bentsyyli-9-(N-bentsyyli-N-2-hydroksietyyli)aminodeoksiklavula-naatti

Klavudieenibentsyyliesteriä (0,5 g) asetonitriilissä (10 ml) jäähdytettiin lämpötilaan 0°C, lisättiin N-bentsyyli-2-hydroksietyyli-amiinia (0,36 g) ja reaktioseosta sekoitettiin 2 1/2 tuntia. Lisättiin etyyliasetaattia (100 ml) ja seos haihdutettiin pieneen tilavuuteen. Jäännöstä käsiteltiin patsaskromatograafisesti käyttäen elutoimisaineena etyyliasetaattia. Tuotteella, joka erotettiin alhaisella saannolla, oli seuraava ip-spektri (nestekalvo) 3400 (leveä, -OH), 1800 (β-laktaami C=0), 1740 (esteri C=0), 1700 (C=C), 1695 cm ^ (aromaattiset protonit).

Valmistusesimerkki 2 p-Metoksibentsyyli-9-(N-bentsyyli-N-2-hydroksietyyli) aminodeoksi-klavulanaatti p-Metoksibentsyyli-triklooriasetyyliklavulanaattia (5,37 mM) kuivassa dimetyyliformamidissa (75 cm3) käsiteltiin lämpötilassa -10°C N-bentsyyli-N-2-hydroksietyyliamiinilla (1,55 cm·*) ja sekoitettiin tässä lämpötilassa 5 h. Seos kaadettiin etyyliasetaattiin (150 cm*) ja pestiin vedellä (3 x 100 cm ), kuivattiin ja haihdutettiin öljyksi (0,38 g); Rf (SiC^/etyyliasetaatti:sykloheksaani; 1:1) = 0,13 v(kalvo) 3400, 1810, 1750, 1620 cm-1.

Valmistusesimerkki 3

Bentsyyli-9-(N-bentsyy1i-N-etyyli)aminodeoksiklavulanaatti Bentsyylitriklooriasetyyliklavulanaattia (9,2 mM) kuivassa dimetyyliformamidissa (30 cm·*) käsiteltiin lämpötilassa -60°C N-bentsyyli-etyyliamiinilla (2,74 cm ) ja sekoitettiin 3 1/2 h tässä lämpötilassa. Seos kaadettiin etyyliasetaattiin (150 cm*) ja pestiin vedellä (3 x 100 cm·*) , kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljyä (4,43 g). Rf (SiC>2/etyyliasetaatti: sykloheksaani; 1:1) 0,3; v(kalvo) 1804, 1750 cm”^.

Valmistusesimerkki 4

Bentsyyli-9-(N-bentsyyli-N-isopropyyli)aminodeoksiklavulanaatti Klavudieenibentsyyliesteriä (0,5 g) asetonitriilissä (10 ml) jäähdytettiin jäävedessä. Lisättiin N-isopropyylibentsyyliamiinia (0,39 g; 1,3 moolia) samalla sekoittaen. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin 3 h. Lisättiin |i 65253 etyyliasetaattia (100 ml) ja liuos haihdutettiin alhaiseen tilavuuteen tyhjössä. Jäännöstä käsiteltiin patsaskromatograafisesti piioksidigeelin avulla käyttäen elutoimisaineena sykloheksaania ja etyyliasetaattia. Tuote elutoitiin reagoimattoman dieenin poistamisen jälkeen.

Valmistusesimerkki 5

Bentsyyli-9-(N,N-dibentsyyli)aminodeoksiklavulanaatti Bentsyylidiklooriasetyyli-klavulanaattia (0,8 g) liuotettiin kuivaan dimetyyliformamidiin ja jäähdytettiin lämpötilaan 0°C, käsiteltiin dibentsyyliamiinilla (768^ul; 0,004 moolia) kuivassa dime-tyyliformamidissa (4 ml) 15 minuutin kuluessa ja lämpötila pidettiin arvossa 0°C. Saatua keltaista liuosta sekoitettiin lämpötilassa 0° 2 1/2 tuntia ja huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Lisättiin etyyliasetaattia (100 ml) ja liuos pestiin vedellä (3 x 25 ml), kuivattiin ja haihdutettiin, öljy puhdistettiin nopean asteettaisen eluu-tion avulla piioksidigeelissä käyttäen elutoimisliuottimena etyyli-asetaatti/sykloheksaania (saanto 0,33 g). (SiOj/etyyliasetaatti: sykloheksaani 1:1) = 0,76. v(kalvo) 1810, 1755, 1700; 6(CDC13) 2,80 (1H, d, J 16 Hz, 68-CH) 3,05 (2H, d, J 7 Hz, 9-CH2), 3,17-3,37 (1H, m, 6a-CH) 3,32 (4H, s, 2 x NCH2CgH5) , 4,59 (1H, t, J 7 Hz, 8-CH), 4,90 (1H, s, 3-CH), 5,03 (2H, s, OCH2C6H5) 5,57 (1H, d, J 3 Hz, 5a-CH), 7,20 (15H, s, 3 x CgHg).

Valmistusesimerkki 6

Bentsyyli-9-(Ν,Ν-dibentsyyli)aminodeoksiklavulanaatti Klavudieenibentsyyliesteriä (271 mg) kuivassa asetonitriilissä (4 ml) käsiteltiin lämpötilassa 0°C dibentsyyliamiinilla (197 mg) kuivassa asetonitriilissä (2 ml) 5 minuutin kuluessa. Reaktioseosta sekoitettiin lämpötilassa 0°C 2 tuntia ja huoneen lämpötilassa vielä 2 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin vedellä, kuivattiin, haihdutettiin ja fraktioitiin piioksidigeelillä, jolloin saatiin haluttu tuote, joka puhdistettiin kromatograafisesti.

Valmistusesimerkki 7

Bentsyyli-9-/TT-bentsyyli-N- (dl- 2 -hydroks ipr opy y 1 i|7 am i nod eok s ik 1 a -vulanaatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (0,8 g) kuivassa dimetyyli-formamidissa (20 ml) jäähdytettiin lämpötilaan 0°C ja siihen lisät 65253 16 tiin hitaasti liuos, jossa oli dl-l-bentsyyliamino-propan-2-olia (0,65 g) kuivassa dimetyyliformamidissa. Sekoittamista jatkettiin 4 tuntia lämpötilassa 0°C. Muodostui polaarisempi aineosa (ohut-kerroskromatografia), sitä käsiteltiin valmistustavassa 5 kuvatulla tavalla ja se puhdistettiin kromatograafisesti halutun tuotteen saamiseksi (0,16 g).

Valmistusesimerkki 8

Bentsyyli-9-/N-bentsyyli-N- (dl-2-hydroksipropyylij_7aminodeoksi-klavulanaatti

Bentsyylitriklooriasetyyliklavulanaattia (2,5 g; 5,8 mm) kuivassa dimetyyliformamidissa (50 cm·*) käsiteltiin lämpötilassa -10° N-bent-syyli-N-(dl-2-hydroksipropyyli)amiinilla (1,9 ekvivalenttia) dimetyyliformamidissa (20 cm^) tipottain. Reaktioseosta sekoitettiin lämpötilassa -10° 4 1/2 tuntia, se kaadettiin kylmään (0°) etyyliasetaattiin ja orgaaninen kerros pestiin sitten vedellä (5 x 75 cm^). Kuivaamisen jälkeen johdettiin etyyliasetaattiliuos halkaisijaltaan 1/2 x 2 1/2 cm:n piioksidigeelipatsaan lävitse ja elutoitiin etyyli-asetaatilla (75 cm ) siksi, kunnes eluaatti ei enää värjäytynyt.

O

Etyyliasetaattiliuos uutettiin laimealla etikkahapolla (3 x 50 cm ), vesipitoiset uutteet yhdistettiin ja niitä käsiteltiin natriumbikarbonaatilla tuoreen etyyliasetaatin (80 cm^) läsnäollessa samalla voimakkaasti sekoittaen siksi, kunnes vesifaasin pH-arvo oli 8. Etyyliasetaattifaasi kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin tuote keltaisena öljynä (700 mg). R^ (SiC^/etyyliasetaatti: sykloheksaani 1:1) = 0,28; toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla; vmafcs U®r) 3410 (leveä), 1795, 1740, 1700 cm"1; ö/TCD3)2C07 0,98 (3H, d, J 6 Hz, CHCH-j) , 2,28, 2,30 (2H, 2 x d, J 6 Hz, NCH2-CH(OH)), 2,91, 2,94 (1H, 2 x d, J 17 Hz, 68-CH), 3,15 (2H, d, J 7 Hz, 9-CH2), 3,2-3,9 (5H, m, NCH2C6H5> -CH2CH(OH)CH3, 6a-CH, CHOH), 4,72 (1H, t, J 7 Hz, 8-CH), 5,06 (1H, s, 3-CH).

Valmistusesimerkki 9

Bentsyyli-9-N-bentsyyli-N-(4-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavula-naatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (4,8 g; 12 mM) dimetyyliformamidissa (50 ml) lämpötilassa 0° käsiteltiin N-bentsyyli-N-4-metoksibentsyyliamiinilla (5,2 g; 1,9 ekvivalenttia) tipottain. Reaktioseosta sekoitettiin lämpötilassa 0° 1 tuntia ja sitten lämpötilassa 20° 5 tuntia. Reaktioseos kaadettiin sitten kylmään (0°) 65253 17 etyyliasetaattiin ja orgaaninen kerros pestiin vedellä (3 x 75 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (5 x 75 ml). Etyyliasetaattifaasi kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 6,6 g värillistä öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafisesti piioksidi-geelissä ja elutoitiin etyyliasetaatti-sykloheksaanilla 1:1. Fraktiot, jotka sisälsivät otsikossa mainitun yhdisteen, otettiin talteen ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin bentsyyli-9-/N-bentsyyli-N-(4-metoksibentsyyli) amino7deoksiklavlanaattia (2,24 g) värittömänä öljynä. Rf (Si02/etyyliasetaatti:sykloheksaani 1:1) = 0,70.

v(kalvo) 1805, 1750, 1690, 1610, 1510, 1300, 1250, 1175, 740, 700 cm ^.

6(CDC13) 2,87 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) , 3,10 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,33 (1H, dd, J 17 Hz ja 3 Hz, 6a CH), 3,38, 3,43 (4H, 2 x s, NCH2C6H5 ja NCH2C6H4OCH3), 3,70 (3H, s, OCH3), 4,71 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 5,00 (1H, s, 3 CH), 5,10 (2H, s, OCH2C6H5), 5,51 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 6,75 (2H, d, J 8 Hz, aromaattiset, orto-metoksyyli), 7,09-7,20 (12 H, m, aromaattiset, meta-metoksyyli ja 2 x CgH^).

Valmistuaesimerkki 10

Bentsyyli-9-/N-bentsyyli-N-(4-fluoribentsyyli27aminodeoksiklavula-naatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanattia (8,5 g; 21 mM) dimetyyli- formamidissa (75 cm^) käsiteltiin lämpötilassa 0° tipottain N- bentsyyli-N-4-fluoribentsyyliamiinilla (8,1 g; 1,9 ekvivalenttia).

Reaktioseosta sekoitettiin lämpötilassa 0° 1 tunti ja lämpötilassa 20° 5 tuntia. Reaktioseos kaadettiin kylmään (0°) etyyliasetaat-3 tiin (150 cm ) 3a orgaaninen kerros pestiin sitten vedellä (3 x

O O

75 cm ) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (4 x 75 cm ). Etyyliase-taattifaasi kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 10 g värillistä öljyä. 3 g tätä raakatuotetta käsiltetiin kromatograaf isesti piioksidigeelillä ja elutoitiin etyyliasetaatti-syklo-heksaanilla 1:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin bentsyyli-9-/N-bent syy li-N- (4-f luoribentsyyli2_7aminodeoksiklavula-naattia (1 g) värittömänä öljynä. Rf (Si02/etyyliasetaatti:sykloheksaani; 1:1) = 0,70, toteaminen suoritettiin käyttäen kaliumper-manganaattisuihkua.

v(kalvo) 1805, 1750, 1690, 1508, 1305, 1220, 820, 740, 700 cm"1.

6 (CDC13) 2,90 (1H, d, J 17 Hz, 6β CH), 3,09 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 65253 18 3,38 (1H, dd, J 17 Hz ja 3 Hz, 6a CH) , 3,39, 3,42 (4H, 2 x s, NCM2“C6H5 3a NCH2C6H4F), 4,70 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 5,02 (1H, s, 3-CH), 5,12 (2H, s, OCH^CgHs), 5,54 (1H, d, J 3 Hx, 5a CH), 6,80 7,25 (14H, m, 2 x CH2C6H5, ja CH2CgH4F).

Valmistusesimerkki 11

Bentsyyli-9-/N-bentsyyli-N-(4-metyylibentsyylil7a^inodeoksiklavula-naatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (8,5 g; 21 mM) dimetyyli-formamidissa (75 cm·^) käsiteltiin lämpötilassa 0° N-bentsyyli-N-(4-metyylibentsyyli)amiinilla (8,40 g; 1,9 ekvivalenttia), joka lisättiin tipottain, ja tämän jälkeen sekoitettiin 1 tunti lämpötilassa 0° ja 3 tuntia lämpötilassa 20°. Reaktioseos kaadettiin kylmään (0°) etyyliasetaattiin (150 cm3) ja orgaaninen faasi pestiin vedellä (3 x 75 cm ) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (4 x 75 cm·3) . Etyyli-asetaattifaasi kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 11 g värillistä öljyä. 1 g tätä raakatuotetta käsiteltiin kromato-graafisesti piioksidigeelillä ja elutoitiin etyyliasetaatti:syklo-heksaanilla 1:1. Fraktiot, jotka sisälsivät otsikossa mainitun yhdisteen, otettiin talteen ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 250 mg (25 %) väritöntä öljyä. Rf (Si02/etyyliasetaatti:syklo-heksaani 1:1) = 0,70, toteaminen suoritettiin kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla. Muita fraktioita, jotka sisälsivät otsikossa mainittua yhdistettä noin 80 %:n puhtaudessa, otettiin myös talteen, saanto 0,6 g.

v(kalvo) puhtainta tuotetta: 1805, 1750, 1690, 1510, 1495, 1450, 1300, 1230, 1175, 1120, 1080, 1040, 1020, 965, 890, 800, 740, 700 cm 3.

6(CDC13) 2,28 (3H, s, -CgH4CH3), 2,88 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH), 3,10 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,35 (1H, dd, J 17 Hz ja 3 Hz, 6a CH), 3,42 (4H, s, NCH2C6H5 ja NCH2CgH4CH3), 4,71 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 5,00 (1H, s, 3 CH), 5,10 (2H, s, OCH2CgH5), 5,52 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 6,95 - 7,27 (14 H, m, 2 x CH2C6H5 ja CH2CgH4CH3).

Valmistusesimerkki 12

Bentsyyli-9-/N-bentsyyli ~{4-bentsoksi-3-metoksibentsyyli)bentsyyli/-aminodeoksiklavulanaatti

Bentsyylidiklooriasetyyli-klavulanaattia (1,9 g; 4,7 mM) kuivassa dimetyyliformamidissa (50 cm^) käsiteltiin lämpötilassa 0°C N-bent- 19 65253 syyli-N(4-bentsoksi-3-metoksibentsyyli) amiinilla (3 g; 1,9 ekvivalenttia) , jota lisättiin tipottain. Reaktioseosta sekoitettiin lämpötilassa 0°C 1 tunti ja sitten lämpötilassa 20°C 5 tuntia. Reak-tioseos kaadettiin sitten kylmään (0°) etyyliasetaattiin ja orgaaninen kerros pestiin vedellä (3 x 75 cm3) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (5 x 75 cm3). Etyyliasetaattifaasi kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafisesti piioksidigeelillä ja elutoitiin etyyli-asetaatti-sykloheksaanilla 1:1. Fraktiot otettiin talteen, jolloin saatiin otsikossa mainittu yhdiste. Raakatuote haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin bentsyyli-9-/N-bentsyyli-N-(4-bentsoksi-3-metoksibentsyylij_7aminodeoksiklavulanaattia (0,1 g) värittömänä öljynä. Rf (Si02/etyyliasetaatti:sykloheksaani 1:1) = 0,70. v(kalvo) 1800, 1750, 1675, 1590, 1510, 1450, 1380, 1300, 1260, 1225, 1160, 1140, 1080, 1015, 805, 740, 700 cm"1.

&(CDC13) 2,90 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) , 3,03 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,37 (1H, dd, J 17 ja 3 Hz, 6a CH), 3,37, 3,42 (6H, 2 x s, NCH2C6H5 ja NCH2C6H3 OCH3, OCH2C6H5), 3,80 (3H, s, OCH3), 4,72 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 5,01 (1H, s, 3 CH), 5,54 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 6,70- 7,34 (18H, m, 3 x C^CgHg ja 2 protonia orto-asemassa CH2:n suhteen ch2(c6h3)(och3)och2c6h5.

Valmistusesimerkkl 13

Bentsyyli-9-/N-(4-bentsyylioksibentsyyli)-N-bentsyyli/-aminodeoksi-klavulanaatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (7,2 g; 18 mil) kuivassa dimetyyliforraamidissa (75 cm3) käsiteltiin lämpötilassa 0° N-(4-bentsoksibentsyyli)-N-bentsyyliamiinilla (1,9 ekvivalenttia) ja sekoitettiin lämpötilassa 0° 3 tuntia, kaadettiin sitten etyyliase-

O

taattiin (150 cm ) ja pestiin vedellä (5 x 50 cm3) ja suolaliuok-

O

sella (3 x 50 cm ), kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafisesti piidioksidilla ja elutoitiin etyyliasetaatti/sykloheksaanilla 1:1. Fraktiot otettiin talteen ja ne sisälsivät otsikossa mainittua yhdistettä (toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla). R^ (Si02 etyyliasetaatti/-sykloheksaani 1:1) = 0,81. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin öljyksi, jolloin saatiin noin 70 % puhdasta materiaalia = 2,7 g, ja puhtaat fraktiot otettiin talteen spektroskooppista käsittelyä varten.

65253 20 v(kalvo) 1800, 1745, 1690, 1600, 1595, 1510, 1450, 1380, 1300, 1230, 1170, 1129, 1080, 1045, 1020, 830, 740, 700 cm-1; ö(CDCl3) 2,87 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) , 3,09 (2H, d, J 7 Hz 9 CH2), 3,33 (2H, dd, J 17 Hz ja 3 Hz, 6a CH), 3,37, 3,42 (4H, 2 x s, NCH2C6H5 ja NCH2C6H4OCH2C6H5), 4,70 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 4,97 (3H, leveä S, C6H4OCH2C6H5 ja 3 CH), 5,10 (2H, S, C02CH2C6H5), 5,51 (1H, d, J 3Hz, 5a -CH), 6,80 (2H, d, J 9 Hz aromaattiset protonit orto-ase-massa bentsyylioksin suhteen), 7,0 - 7,30 (17 H, m, N-CH2CgH5, OCH2CgH5, C02CH2CgH5, aromaattiset protonit meta-asemassa bentsyylioksin suhteen).

Valmistusesimerkki 14

Bentsyyli-9-/ (N-3,4-dimetoksibentsyyli) -N-bentsyyliamino7~cleoksi-klavulanaatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (6,56 g; 16 mM) kuivassa dimetyyliformamidissa (50 cm3) käsiteltiin lämpötilassa 0° N-(3,4-dimetoksibentsyyli)-N-bentsyyliamiinilla (8 g; 1,9 ekvivalenttia) 30 cm3:ssä dimetyyliformamidia ja sekoitettiin 2 tuntia lämpötilassa 0° ja sitten 2 tuntia lämpötilassa 10°. Seos kaadettiin sitten kylmään etyyliasetaattiin (150 cm3) ja pestiin vedellä (5 x 50 cm3) 3 ja kyllästetyllä suolaliuoksella (5 x 50 cm ), kuivattiin (vedettömällä magnesiumsulfaatilla) ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljymäistä tuotetta 10,1 g. 1,2 g tätä raakatuotetta käsiteltiin kromatograafisesti piioksidigeelillä, elutoitiin etyyliase-taatti/sykloheksaanilla 1:1. Otsikossa mainittua yhdistettä olevat fraktiot otettiin talteen. = 0,74 (Si02/etyyliasetaatti:syklo-heksaani 1:1) todettiin kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,35 g öljymäistä tuotetta, v(kalvo) 1804, 1750, 1690, 1510, 1480, 1305, 1260, 1235, 1175, 1155, 1145, 1120, 1030, 1015, 807, 740, 700 cm"1.

6(CDCI3) 2,91 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH), 3,12 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,38 (1H, dd, J 17 Hz ja 3 Hz, 6a -CH), 3,39, 3,43 (4H, 2 x s, 2 x NCH2), 3,83 (6H, S, 2 x OCH3), 4,73 (1H, dt, J 7 Hz ja < 1 Hz, 8 CH), 5,01 (1H, d, J < 1 Hz, 3~CH), 5,12 (2H, s, OCH2C6H5), 5,55 (1H, d, J 3 Hz, 5a -CH), 6,73-6,83 (3H, m, aromaattiset protonit orto-asemassa CH2:n suhteen), 7,23 (10H, m, 2 x CgH^-) .

Valmistusesimerkki 15

BentsyyH-9-/N-(4-asetyyliaminobentsyyli)-N-bentsyyli/aminodeoksi-klavulanaatti 65253

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (4,4 g; 11 mM) kuivassa dimetyyliformamidissa (50 cm^) käsiteltiin lämpötilassa 0° N-(4-asetamidobentsyyli)bentsyyliamiinilla (5,3 g; 1,9 ekvivalenttia)

O

20 emeissä dimetyyliformamidia, ja tämä lisättiin tipottain samalla sekoittaen. Sekoittamista jatkettiin 4 tuntia lämpötilassa 0°, seos 3 kaadettiin etyyliasetaattiin (200 cm ) ja pestiin vedellä (5 x 50 cm3) ja suolaliuoksella (3 x 50 cm3), kuivattiin (vedetön magnesium-sulfaatti) ja haihdutettiin vaahtomaseksi aineeksi. Tätä raakatuo-tetta käsiteltiin kromatograafisesti piidioksidilla, elutoitiin etyyliasetaatti-sykloheksaanilla 1:1 ja vähitellen pelkällä etyyliasetaatilla. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen (toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla). (Si02/etyyliasetaatti-sykloheksaani 1:1) = 0,30. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaahto-maista tuotetta 2,51 g. v(Nujol Mull) 3300, 1800, 1745, 1690, 1665, 1600, 1530, 1510, 1450, 1410, 1370, 1310, 1260, 1170, 1120, 1040, 1015, 740, 700 cm-1. δ(CDCI3) 2,10 (1H, S, CH3CONH), 2,91 (1H, d, J 17 Hz, 6B CH) , 3,10 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,37 (1H, dd, J 17 ja 3 Hz, 6a CH), 3,40, 3,43 (4H, 2 x s, 2 x NCH2), 4,69 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 4,98 (1H, s, 3 CH), 5,11 (2H, s, C02CH2C6H5) , 5,33 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 7,12-7,41 (15H, m, 2 x C6H5, CH2C6H4 -P-NHCOCH3, CONH).

Valmistusesimerkki 16

Bentsyyli-9-/N-(2-fluoribentsyyli)-N-bentsyyli7aminodeoksiklavula-naatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (8 gj 0,02 M) kuivassa dimetyyliformamidissa (100 cm^) käsiteltiin lämpötilassa 0° lisäämällä tipottain N-(2-fluoribentsyyli)bentsyyliamiinia (1,9 ekviva-

O

lenttia) dimetyyliformamidissa (30 cm ) ja sekoitettiin 4 tuntia lämpötilassa 0° ja sitten 2 tuntia lämpötilassa 20°. Seos kaadettiin

O

etyyliasetaattiin (200 cm ) ja pestiin vedellä (4 x 50 cm3) ja kyl-

O

lästetyllä suolaliuoksella (5 x 50 cm^), kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin öljyksi, saanto 10 g. 2 g tätä raakatuotetta käsiteltiin kromatograafisesti piidioksidilla ja elutoitiin etyyliasetaatti/syklohekftaanilla (1:2). Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen. R^ (Si02/etyyliase-taatti-sykloheksaani 1:1) on = 0,78 (toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla). Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljyä, saanto 0,4 g.

65253 22 v(kalvo) 1800, 1745, 1690, 1490, 1450, 1305, 1230, 1180, 1120, 1045, 1020, 760, 700 cm”1. δ(CDC13) 2,94 (1Η, d, J 17 Hz, 6β CH) , 3,13 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,41 (1H, dd, J 17 ja 3 Hz, 6a CH), 3,50, 3,55 (4H, 2 x s, 2 x NCH2), 4,75 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 5,02 (1H, s, 3 CH) , 5,14 (2H, s, CC^CH-gCgHg) , 5,58 (1H, d, J 3 Hz, 5a - CH), 6,94 - 7,47 (4H, m, CHgCgH^F), 7,24, 7,26 (10 H, 2 x s, 2 x CH2C6H5) .

Valmistueesimerkki 17

Bentsyyli-9-/N-(2-metoksibentsyyli)-N-bentsyyli/aminodeoksiklavula-naatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (21 mM) kuivassa dimetyyli-

O

formamidissa (70 cm ) käsiteltiin lämpötilassa 0° N-2-metoksibent-syyli-N-bentsyyliamiinilla (1,9 ekvivalenttia) dimetyyliformamidis-sa (30 cin ) ja sekoitettiin 3 1/2 tuntia lämpötilassa 0° ja sitten 1 1/2 tuntia lämpötilassa 20°. Seos kaadettiin etyyliasetaattiin 3 3 (200 cm ) ja pestiin vedellä (5 x 50 cm ) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (5 x 50 cm·*) , kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljymäinen tuote, 13 g. 5 g tätä raakatuotetta käsiteltiin kromatograafisesti piidioksidilla ja alutoitiin etyyliasetaatti:sykloheksaanilla (1:1). Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen. (Si02:etyyli-asetaatti:sykloheksaani 1:1) = 0,74. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljyä 1,2 g. v(kalvo) 1805, 1745, 750, 700 cm”1. 6(CDCl3) 2,93 (1H, s, J 17 Hz, 6β CH), 3,17 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,40 (1H, dd, J 17 ja 3 Hz, 6a CH), 3,54. 3,57 (4H, 2 x s, 2 x NCH2), 3,75 (3H, s, OCH3), 4,86 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH) , 5,02 (1H, s,~3 CH) , 5,14 (2H, s,-C02CH2CgH5), 5.57 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 6,75 - 7,45 (14H, m, 2 x CH2CgH5, CH2CgH4OCH3).

Valmlstugesimerkki 18

Bentsyylitriklooriasetyyliklavulanaatti

Bentsyyliklavulanaattia (5,78 g; 20 mmoolia) kuivassa metyleeni-kloridissa (100 ml) jäähdytettiin lämpötilaan -30°C ja käsiteltiin pyridiinillä (1,61 ml). Triklooriasetyylikloridia (2,23 ml; 20 mmoolia) kuivassa metyleenikloridissa (10 ml) lisättiin sitten tipottain 10 minuutin kuluessa. 10 minuutin pituisen seisottamisen jälkeen lämpötilassa -30°C kaadettiin reaktioseos laimeaan kloorivetyhap-poon (100 ml; 2 M). Orgaaninen faasi pestiin vedellä, natriumbikarbo-naattiliuoksella, suolaliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin, joi- 23 6525 3 loin tuote saatiin öjynä, 7,81 g (90 %). vmakg (kalvo) 1800, 1750 ja 1680 cm-1.

Valmistusesimerkki 19

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaatti

O

Bentsyyliklavulanaattia (20,2 g; 70 mM) dikloorimetaanissa (100 cmJ) käsiteltiin kuivalla pyridiinillä (1 ekvivalentti) ja jäähdytettiin lämpötilaan -20°. Sitten lisättiin tipottain diklooriasetyyliklori- 3 dia (10,3 g; 1 ekvivalentti) dikloorimetaanissa (20 cm ) ja reaktio-seosta sekoitettiin 20 min. Seos pestiin vedellä (5 x 100 cm ) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (5 x 100 cm ), kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin tyhjössä öljyksi, saanto 27,5 g (98 %). v(kalvo) 1800, 1745, 1690, 1295, 1170, 1120, 1085, 1042, 1020, 1000, 955, 890, 815, 742, 700 cm-1. δ (CDCl-j) 3,05 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) , 3,50 (1H, dd, J 17 ja 3 Hz, 6a CH), 4,82 (3H, s, 8 CH ja 9 CH2), 5,10 (1H, s, 3 CH), 5,17 (2H, s, CHjCgH^ , 5,70 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 5,90 (1H, s, CHCl2), 7,32 (5H, s, CH^gHg).

Valmistusesimerkki 20

Bentsyylimonoklooriasetyyliklavulanaatti

Bentsyyliklavulanaattia (2,51 g; 8,7 mmoolia) liuotettiin metyleeni-kloridiin (30 ml) ja käsiteltiin pyridiinillä (0,775 ml; 9,60 mmoolia) huoneen lämpötilassa. Reaktioseos jäähdytettiin lämpötilaan -30° ja siihen lisättiin tipottain 10 minuutin kuluessa klooriase-tyylikloridia (0,69 ml; 8,7 mmoolia) metyleenikloridissa (10 ml). Sekoittamisen jälkeen lämpötilassa -30°C 10 minuutin ajan kaadettiin reaktioseos laimeaan kloorivetyhappoon ja uutettiin metyleeni-kloridilla. Orgaaninen faasi pestiin peräkkäin laimealla kloorivety-hapolla, natriumbikarbonaattiliuoksella, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Haihdutettaessa tyhjössä saatiin vaaleankeltaista öljyä, joka oli homogeenista t.1.c.-määräyksen perusteella, 3,10g. vmaks (CHC13) 1803, 1755, (br) ja 1700 cm-1).

Valmistusesimerkki 21 Metyylidiklooriasetyyliklavulanaatti

Metyyliklavulanaattia (1,03 g; 4,8 mM) dikloorimetaanissa (30 cm·*) käsiteltiin pyridiinillä (1 ekvivalentti) ja jäähdytettiin lämpötilaan -20°, käsiteltiin sitten diklooriasetyylikloridilla (1 ekvi- 2 valentti) ja sekoitettiin 10 min. Liuos pestiin vedellä (2 x 50 cm )

, O

ja kyllästetyllä suolaliuoksella (5 x 50 cm ), kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin tyhjössä öljyksi, 1,31 g.

65253 24 v(kalvo) 1805, 1750, 1690, 1300, 1240, 1165, 1045, 1010, 960, 890, 820 cm"1. 6(CDC13) 3,08 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) , 3,51 (1H, dd, 17 ja 3 Hz, 6a CH), 3,77 (3H, s, C02CH3), 4,85 (3H, s, 8 CH ja 9 CH2), 5,08 (1H, s, 3 CH), 5,72 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 5,91 (1H, s, CHC12).

Valmistuseslmerkki 22

Metyyli-9-/N-(4-asetamidobentsyyli)-N-bentsyyli7aminodeoksiklavu-lanaatti

Metyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (1,25 g; 3,86 mM) dimetyyli-formamidissa (30 cm^) käsiteltiin lämpötilassa 0° N-(4-asetamidobentsyyli) -bentsyyliamiinilla (1,9 ekvivalenttia) ja sekoitettiin 4 tuntia, kaadettiin etyyliasetaattiin (200 cm ) ja pestiin vedellä (5 x 50 cm^) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (5 x 50 cm^), kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin tyhjössä öljyksi. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafisesti piioksidilla, elutoitiin etyyliasetaatti-sykloheksaanilla 1:1, joka muutettiin vähitellen puhtaaksi etyyliasetaatiksi. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen, (Si02/etyyliasetaatti) = 0,60. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy-mäinen tuote, saanto 0,61 g. v(kalvo) 3300 (leveä), 1800, 1750, 1690, 1670, 750, 700 cm"1. v(KBr) (3650-3150), 1800, 1750, 1690, 1665, 1600, 1530, 1515, 1412, 1370, 1312, 1265, 1240, 1200, 1180, 1120, 1010, 745, 700 cm"1.

6(CDC13) 2,13 (3H, s, COCH-j) , 2,95 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) , 3,14 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,41 (1H, dd, J = 17 ja 3 Hz, 6a CH), 3,48, 3,52 (4H, 2 x s, 2 x NCH2), 3,73 (3H, s, C02CH3), 4,74 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 4,97 (1H, s, 3 CH), 5,57 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 7,17-7,45 (9H, m, CH2C6H5 ja CH2C6H4NHCOCH3).

Valmistusesimerkki 23

Bentsyyli-9-N-bentsyyli-N-(4-hydroksi-3-metoksi-bentsyyli)amino-deoksiklavulanaatti

Bentsyylidiklooriasetyyliklavulanaattia (4,07 g; 10,2 mM) dimetyyli-formamidissa (75 cm^) käsiteltiin lämpötilassa 0° N-bentsyyli-N-(4-hydroksi-3-metoksibentsyyli)amiinilla (4,7 g; 1,9 ekvivalenttia) dimetyyliformamidissa (20 cm ) tipottain, ja sekoitettiin lämpötilassa 0° 1/2 tuntia ja sitten lämpötilassa 20° 1 1/2 tuntia. Reak-

O

tioseos kaadettiin sitten etyyliasetaattiin (200 cm ) ja orgaaninen faasi pestiin vedellä (3 x 75 cm^) ja kyllästetyllä suolaliuoksella 65253 25 (4 x 75 cm^) . Etyyliasetaattifaasi kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä vaahtoa. Tätä vaahtoa käsiteltiin kromatograafisesti piidioksidigeelillä ja elutoitiin etyyliasetaatti-sykloheksaanilla 1:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 2,32 g (44 %) väritöntä öljyä. (Si02/etyyliasetaatti:syklohek- saani 1:1) = 0,66; toteaminen suoritettiin kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkua käyttäen. v(kalvo) 3500 leveä, 1800, 1750, 1695, 1610, 1602, 1512, 1450, 1430, 1380, 1302, 1270, 1230, 1180, 1155, 1120, 1080, 1032, 1015, 820, 800, 750, 700 cm"1. 6(CDCl3) 2,85 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH), 3,10 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2), 3,31 (1H, dd, J 17 ja 31 Hz, 6a CH), 3,35, 3,41 (4H, 2 x s, NCH2C6H5 ja NCH2C6H3 (OH, OCH3)), 3,74 (3H, s, 0CH3), 4,80 (1H, t, J 7~Hz, 8 CH), 5,00 (1H, s, 3-CH), 5,09 (2H, s, OCH2C6H5), 5,25 (1H, leveä s, vaihtuu D20-CgH3 (OH, OCH3):n kanssa, 5,51 TlH, d, J 3 Hz, 5a CH), 6,71 - 6,78 (3H, m, triubstituoidussa fenyyliryhmässä olevat protonit) , 7,20 (10 H, leveä s, 2 x CH2C6H5).

Esimerkki 1 9-N-(2-hydroksietyyli)aminodeoksiklavulaanihappo p-Metoksibentsyyli 9-/N-bentsyyli-N-(2-hydroksietyyli)7aminodeoksi-klavulanaattia (0,38 g) etanolissa ja tetrahydrofuraanissa (1:1) (100 cm1) hydrattiin 10 %:sella hiilellä olevalla palladiumilla (0,15 g) 23 tuntia. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja kirkas suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä öljyä.

Tämä öljy liuotettiin etyyliasetaattiin (100 cm1) ja uutettiin vedellä (50 cm1). Vesipitoinen uute haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaaleankeltaista öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograa-fisesti selluloosapatsaassa, elutoitiin butanoli/propan-2-oli/vedel-lä 7:7:5. Fraktiot, jotka sisälsivät ainoastaan ötskossa mainittua yhdistettä, otettiin talteen, (Si02 butanoli:propan-2-oli:vesi 7:7:6) = 0,20, toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla. Yhdistetyt fraktiot, jotka sisälsivät ainoastaan 9-N-(2-hydroksietyyli)aminodeoksiklavulaanihappoa, haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin valkoista, kiinteätä ainetta, (50 mg); δ(D20) 3,1. (1H, d, J 17 Hz, 68-CH), 3,05-3,17 (2H, m, NCH2CH2OH), 3,57 (1H, dd, J 17 Hz ja 3 Hz, 6a-CH), 3,70-3,84 (4H, m, NCH2CH2OH, 9-CH2), 4,80 (1H, t, J 8 Hz, 8 CH), 4,99 (1H, s, 3-CH), 5,76 (1H, d, J 3 Hz, 5α-CH). /CH3CN:a käytettiin sisäiseen vertailuun, δ CH3CN = 2,007; v(KBr) 3000-3600, 1785, 1620 cm-1.

26 65253

Esimerkki 2 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappo

Bentsyyli-9-(N,N-dibentsyyliamino)deoksiklavulanaattia (0,43 g) 3 3 etanolissa ja tetrahydrofuraanissa 1:1 (75 cm ), jossa oli 1 cm vettä, hydrattiin 5 %:sen hiilellä olevan palladiumin (0,43 g) oi- Λ lessa katalyyttinä. Hydraus suoritettiin paineessa 4 kp/cm 5 tunnin kuluessa. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja kirkas suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä öljyä. Tämä öljy

O

liuotettiin etyyliasetaattiin (80 cm ) ja pestiin vedellä (3 x 30 cm ). Yhdistetyt vesiuutteet haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaaleankeltaista öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafisesti selluloosapatsaassa, se elutoitiin butanoli/propan-2-oli/vedellä 4:4:1. 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa sisältävät fraktiot otettiin talteen ja toteaminen suoritettiin käyttäen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkua, (Si02 kutanoli/ProPan-2~ oli/vesi 7:7:6) = 0,45. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin kiinteä aine. Tämä kiinteä aine pestiin etanolilla ja kuivattiin sitten, jolloin saatiin 9-N-bentsyyliam.inodeoksikla- ---· vulaanihappoa (36 mg). v(KBr) (3680-3150), (3100-2900), (2900-2300), 1800, 1694, 1610, 1460, 1400, 1305, 1190, 1020, 895, 755, 700 cm"1? 6(D20 + 5 % DMSO D-6), 3,13 (1H, d, J 17 Hz, 6a-CH), 3,62 (1H, bd, J 17 Hz, 6ct-CH) , 3,77 (2H, d, J 8 Hz, 9-¾) , 4,22 (2H, s, CI^CgHg) , 4,84 (1H, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,01 (1H, s, 3-CH), 5,77 (1H, bs, 5a-CH), 7,48 (5H, s, CgHg).

Keksinnön mukainen yhdiste saatiin hienoina neulasina (so. kiteisessä muodossa). Kiteinen 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappo on tavallisesti väritön. Tuotteen kemiallinen analyysi osoitti, että kiteet sisälsivät vettä.

Esimerkki 3 9-N-etyyliaminodeoksiklavulaanihappo

Bentsyyli-9- (N-bentsyyli-N-etyyli) aminodeoksiklavulanaattia /-),44 g, saatu bentsyylitriklooriasetyyliklavulanaatin (3 g) reagoidessa 2 ekvivalentin kanssa N-bentsyylietyyliamiinia/ etanolissa ja tetra- o o hydrofuraanissa 1:1 (100 cm ) hydrattiin 1 cm vettä läsnäollessa 10 %:sen hiilellä olevan palladiumin (1 g) ollessa katalyyttina.

Hydraus toteutettiin 16 tunnin kuluessa ilmakehän paineessa. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja kirkas suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljymäinen tuote. Tämä öljy liuotettiin I; 65253 27 3 "3 etyyliasetaättiin (100 cm ) ja uutettiin vedellä (3 x 40 cm-3) .

Yhdistetyt vesipitoiset uutteet haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaaleankeltaista öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafi-sesti selluloosapatsaassa ja elutoitiin butanoli/propan-2-oli/ve-dellä 4:4:1. 9-etyyliaminodeoksiklavulaanihappoa sisältävät fraktiot otettiin talteen, (SiC>2 butanoli/propan-2-oli/vesi 7:7:6) = 0,17, toteaminen tapahtui kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 9-N-etyyliaminodeoksiklavulaanihappoa värittömänä, kiteisenä, kiinteänä aineena (saanto 13 % bentsyylitriklooriasetyyliklavulanaatis-ta) v(KBr) (3700-3250), (3200-2900), (2900-2600), (2600-2400), 1790, 1695, 1625, 1460, 1400, 1305, 1190, 1120, 1045, 1020, 900, 800, 745 cm-1; δ(D20) 1,22 (3H, t, J 7 Hz, -CH2CH3), 2,89-3,20 (3H, m, -CH2CH3 ja 68-CH), 3,57 (1H, leveä d, J 17 Hz, 6a-CH), 3,68 (2H, d, J 8 Hz, 9-¾) , 4,78 (1H, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,00 (1H, s, 3-CH), 5,73 (1H, leveä s, 5a-CH).

Esimerkki 4 9-N-(dl-2-hydroksipropyyli)aminodeoksiklavulaanihappo Bentsyyli-9-/N-bentsyyli-N(dl-2-hydroksipropyyli]_7aminodeoksiklavu-

O

lanaattia (3,5 mM) etanolissa 3a tetrahydrofuraanissa 1:1 (75 cm ), jossa oli 1 cm^ vettä, hydrattiin 10 %:sella hiilellä olevalla pal-ladiumkatalyytiliä (0,9 g). Hydraus suoritettiin ilmakehän paineessa 21 tunnin kuluessa. Ohutkerroskromatografiässä esiintyi yksi suurempi läikkä arvossa (Si02/butanoli:propan-2-oli:vesi 7:7:6) = 0,24. Toteaminen suoritettiin kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja kirkas suo-dosa haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy. Tämä öljy liuotettiin etyyliasetaattiin (100 cm^) ja uutettiin vedellä (3 x 50 3 cm ). Yhdistetyt vesiuutteet haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaaleankeltaista öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafi~ sesti selluloosapatsaassa ja elutoitiin butanoli/propan-2-oli/ve-dellä 4:4:1. Talteen otettiin fraktiot, jotka sisälsivät 9-/N-(dl- 2-hydroksipropyyli^/aminodeoksiklavulaanihappoa, R^ (SiC^/butanoli: propan-2-oli:vesi 7:7:6) = 0,24. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 9-N-(dl-2-hydroksipropyyli)aminodeoksi-klavulaanihappoa värittömänä öljynä 12 %:n saannolla. δ(D2O) 1,21 (3H, d, J 6 Hz, -CH2CH(OH)CH3) , 2,7-3,2 (3H, m, 68-CH, CH^CH (OH) CH-j) , 3,57 (1H, leveä d, J 17 Hz, 6ot-CH) , 3,76 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2) , 3,83-4,21 (1H, m, -CH2CH (OH) CH-j) , 4,80 (1H, t, J 8 Hz, 8-CH), 5,01 (1H, s, 3-CH), 5,75 (1H, leveä s, 5a-CH).

28 65253 I Esimerkki 5 9-(4-fluoribentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo i Bentsyyli-9-N-bentsyyli-N-(4-fluoribentsyyli)aminodeoksiklavula- naattia (7 g noin 50 %:sesti puhdasta materiaalia) 100 cmJ:ssa tetrahydrofuraani-etanolia (50 %) plus 4 cm^ vettä hydrattiin pai-neessa 4 kp/cm 21 tuntia 4 g:n hiilellä olevaa palladiumia (10 %) läsnäollessa. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja kirkas suodos haihdutettiin värittömäksi öljyksi. Tämä öljy liuotettiin etyyli-asetaattiin (80 cm3) ja uutettiin vedellä (3 x 30 cm ). Yhdistetyt vesiuutteet haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä Öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafisesti selluloosapatsaassa ja elutoitiin butanoli/propan-2-oli/vedellä 4:4:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen (toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla, (Si02/butano-li/propan-2-oli/vesi 7:7:6) = 0,63. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin väritöntä materiaalia, joka kiteytyi lisättäessä etanolia ja jäähdytettäessä. Kiteet pestiin kylmällä (0°C) etanolilla ja kuivattiin, jolloin saatiin 9-(4-fluoribentsyyli) aminodeoksiklavulaanihappoa (367 mg), v(KBr) (3700-3120), (3120-2900), (2900-2650), (2650-2500), (2500-2300), 1805, 1695, 1580, 1515, 1470, 1410, 1340, 1303, 1283, 1230, 1185, 1165, 1045, 1008, 992, 895, 858, 835, 773 cm-1.

Esimerkki 6 9-N-(4-metyylibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo Bentsyyli-9-N-bentsyyli-N-(4-metyylibentsyyli)aminodeoksiklavula- 3 naattia (106 g, puhtaus noin 50 %) 100 cm :ssa tetrahydrofuraani- o 2 etanolia (50 %) plus 4 cm vettä hydrattiin paineessa 4 kp/cm 21 tuntia 5 g:n hiilellä olevaa palladiumia (10 %) läsnäollessa. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja kirkas suodos haihdutettiin tyhjössä värilliseksi öljyksi. Tätä öljyä käsiteltiin kromatograafi-sesti selluloosalla ja elutoitiin butanoli/propan-2-oli/vedellä 4:4:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja tutkittiin kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla, (Si02 butanoli/propan-2-oli/vesi 7:7:6) = 0,60. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljyä, johon lisättiin etanolia. Jäähdytettäessä muodostui väritön, kiteinen, kiinteä aine. Se erotettiin suodattamalla, pestiin kylmällä etanolilla ja kuivattiin, jolloin saatiin 85 mg amfoteerista 9-N-(4-metyylibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappoa hienoina kiteinä.

29 6525 3 (KBr) (3670-3150), (3150-2870), (2870-2500), (2500-2250), 1790, 1690, 1590, 1460, 1395, 1300, 1195, 1110, 1035, 1015, 1000, 990, 940, 892, 805, 748, 555, 485, 435 cm-1.

Esimerkki 7 9-N-(4-metoksibentsyyli) amiriodeoksiklavulaanihappo Bentsyyli-9-N-bentsyyli-N-(4-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavula- 3 naattia (1,4 g) 100 cm :ssa tetrahydrofuraani-etanolia (50 %) plus •5 2 2 cmJ vettä hydrattiin paineessa 4 kp/cm 21 tuntia 1 g:n hiilellä olevaa palladiumia (10 %) läsnäollessa. Reaktioseos suodatettiin "Celiten" lävitse ja suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä vaahtoa. Tätä vaahtoa käsiteltiin kromatograafisesti selluloosapatsaassa ja elutoitiin butanoli-isopropanoli-vedellä 4:4:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen. Rf (Si02/butanoli-isopropanoli-vesi 7:7:6) = 0,60, toteaminen suoritettiin kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla. Nämä fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin väritön jäännös. Hangattaessa jäännöstä kylmän etanolin kanssa saatiin kiinteätä amfoteerista 9-N-(4-metoksibentsyyli)-aminodeoksiklavulaanihappoa hienoina kiteinä (33 mg).

v(KBr) (3600), (3500-3150), (3150-2880), (2880-2780), (2780-2680), (2680-2520), (2520-2250), 1790, 1695, 1600, 1517, 1470, 1400, 1305, 1255, 1200, 1184, 1125, 1030, 995, 950, 900, 840, 820, 767, 760, 575, 545, 445 cm-1.

Esimerkki 8 9-N-(4-hydroksi-3-metoksibentsyyli)-aminodeoksiklavulaanihappo Bentsyyli-9-N-(4-bentsoksi-3-metoksibentsyyli)bentsyyliaminodeoksi-klavulanaattia (0,7 g, suunnilleen 50 %:sesti puhdasta materiaalia)

O O

tetrahydrofuraani-etanolissa (50 %), 50 cm , plus 2 cm vettä, hyd-rattiin paineessa 4 kp/cm 15 tuntia 0,5 g:n hiilellä olevaa palladiumia (10 %) läsnäollessa. Reaktioseos suodatettiin "Celiten" lävitse ja suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä öljyä. Tämä öljy liuotettiin etyyliasetaattiin (50 cm3) ja uutettiin vedellä (2 x 25 cm3). Yhdistetyt vesiuutteet haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä vaahtoa. Tätä vaahtoa käsiteltiin kromatograafisesti selluloosapatsaassa ja elutoitiin butanoli/-propan-2-oli/vedellä 4:4:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 9-N-(4-hydroksi-3-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaani- 30 65253 happoa valkoisena kiinteänä aineena (30 mg). Rf (Si02/butanoli-propan-2-oli-vesi 7:7:6) = 0,56. PMR-spektri vastasi haluttua tuotetta.

Esimerkki 9 9-N-(4-hydroksi-3-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo Bentsyyli-9-N-(4-hydroksi-3-metoksibentsyyli)bentsyyliaminodeoksi- 3 klavulanaattia (2,27 g) 80 cm :ssa tetrahydrofuraani-etanolia (50 %) 3 2 plus 2 cm vettä hydrattiin paineessa 4 kp/cm 6 tuntia 2 g:n hiilellä olevaa palladiumia (10 %) läsnäollessa. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja kirkas suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaaleankeltaista vaahtoa. Tähän vaahtoon lisättiin meta- 3 nolia (5 cm ) ja sitten tähän liuokseen lisättiin kuivaa asetonia 3 (70 cm ) ja saatu saostettu valkoinen kiinteä aine erotettiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saanto oli 0,88 g. 0,83 g tätä raakaa materiaalia käsiteltiin kromatograafisesti selluloosalla ja elutoitiin butanoli/propan-2-oll/vedellä 4:4:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältävät fraktiot otettiin talteen ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin valkoista kiinteätä ainetta. Sitten lisättiin propan-2-olia (20 cm ) ja tämän jälkeen metanolia (10 cm ) ja liuos jäähdytettiin (0°C). Kiteinen tuote erotettiin suodattamalla ja pestiin kylmällä (0°) metanolilla ja kuivattiin, jolloin saatiin 9-N-(4-hydroksi-3-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaani-happoa hienoina kiteinä (102 mg). Rf (Si02/butanoli-propan-2-oli-vesi 7:7:6) = 0,60.

Esimerkki 10 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappo

Bentsyyli-g-N^-^ii-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia (13 g) liuotet-tiin 60 cmJ:in tetrahydrofuraania plus 50 cm :in vesipitoista pro-pan-2-olia (H20: IPA = 2:5). Tähän lisättiin 6 g hiilellä olevaa palladiumia (10 %), joka oli ennakolta pesty vedellä (niin, että 2 suodos oli neutraali). Reaktioseosta hydrattiin paineessa 4 kp/cm 6 1/2 tuntia, suodatettiin "Celiten" lävitse (suodoksen pH 5,37) ja pestiin tetrahydrofuraanin vesiliuoksella (50 %; 150 cm ) ja tämän 3 jälkeen vesipitoisella etanolilla (50 %; 200 cm ). Lopullisesta pesusta saatu suodos otettiin talteen erikseen ja haihdutettiin, jolloin saatiin valkoista kiinteätä ainetta. Siihen lisättiin etanolia (20 cm3) ja jäähdytettiin (0°), suodatettiin sitten ja pestiin jääkylmällä etanolilla ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 9-N- 31 65253 bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa hienojakoisena, kiteisenä, kiinteänä aineena (0,32 g). Pääsuodos haihdutettiin ja lisättiin 3 etanolia (50 cm ), jolloin tapahtui nopea kiteytyminen. Kiinteä aine erotettiin suodattamalla ja pestiin jääkylmällä etanolilla ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavu-laanihappoa vaaleana, kiteisenä, kiinteänä aineena (1,57 g). Suo-dos haihdutettiin jälleen, mutta tässä tapauksessa lisättiin eta-nolia (50 cm ). Jäähdytettäessä saatiin hienoja kiteitä, jotka erotettiin suodattamalla ja pestiin jääkylmällä metanolilla ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaani-happoa hienona, kiteisenä, kiinteänä aineena (0,25 g). Kokonaissaanto oli 2,14 g (olettamalla, että dibentsyyliaminoyhdisteen puhtaus oli 90 %, oli saanto 30 %).

Värjäytynyt jäännös haihdutettiin ja liuotettiin uudelleen etanoliin.

^ -s Tämä liuos johdettiin 180 cm x 4 1/2 cm:n selluloosapatsaaseen ja 3 elutoitiin osittain etanolilla (50-70 cm ) ja sitten butanoli/iso-, propanoli/vedellä 4:4:1. Pääasiallisesti ainoastaan 9-N-bentsyy4.d^-aminodeoksiklavulaanihappoa sisältävät fraktiot otettiin talteen ja haihdutettiin ja lisättiin metanolia. Halutun yhdisteen saadut hienot kiteet erotettiin suodattamalla ja pestiin kylmällä metanolilla, jolloin tuotetta saatiin lisää 67 mg.

Vmaks (nu3ol> 3620, 3540, 3400 leveä, 3200 leveä, 2800-2500, 2500-2300, 1810, 1690, 1610, 1575, 1395, 1185, 1145, 1115, 1080, 1060, 1040, 1030, 1015, 1005, 990, 945, 895, 865, 850, 815, 790, 755, 700 cm

Cu Ka-säteilytys, 36 kV, 26 mA, tutkimisnopeus 1/2° 20/min, tutkittu alue 33° -> 20° 20: Heijastumat seuraavilla kulmilla 20: 11.5, 13,5, 15,2, 15,8, 16,4, 17,25, 18,2 (leveä), 19,5, 21,0, 21,8, 22,5, 23,1, 24,1, 24,3, 25,2, 25,5, 26,0, 27,5 28,4, 28,9, 29.6, 32,6, (tärkeimmät heijastumat alleviivattu).

Esimerkki 11 9-N-(4-hydroksibentsyyli)-aminodeoksiklavulaanihappo Bentsyyli-9-N-(4-bentsoksibentsyyli)bentsyyliaminodeoksiklavula- 3 naattia (4 g, puhtaus noin 50 %) tetrahydrofuraanissa (60 cm ) ja vesipitoisessa propan-2-olissa (50 % 50 cm ) hydrattiin paineessa 2 4 kp/cm 6 1/2 tuntia 2 g:n hiilellä olevaa palladiumia (10 %) läsnollessa. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja katalyytti pes- 65253 32 o tiin vesipitoisella etanolilla (200 cmJ). Suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin värillistä vaahtoa. Vaahto liuotettiin etanoliin (10 cm^) ja lisättiin kuivaa eetteriä (100 cm^), saatu sakka erotettiin suodattamalla ja kuivattiin, liuotettiin pieneen tilavuusmäärään etanolia ja käsiteltiin kromatograafisesti selluloosassa, elutoitiin etanolilla (60 cm^) ja sitten butanoli/propan- 2-oli/vedellä (4:4:1). Talteen otettiin fraktiot, jotka sisälsivät otsikossa mainittua yhdistettä (toteaminen kaliumpermanganaatin vesisuihkun avulla), (Si02/butanoli/propan-2-oli/vesi 7:7:6) = 0,67. Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljymäinen tuote, josta hankaamisen jälkeen kylmän metanolin kanssa saatiin 9-N-(4-hydroksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappoa hienoina kiteinä (4,7 mg).

v(nujoi mull) 3575, 3350, 3175, 1780, 1695, 1620, 1580, 1520, 1310, 1200, 1125, 1105, 1075, 1050, 1020, 1005, 985, 895, 840, 750, 720 cafl.

Esimerkki 12 9-N-(3,4-dimetoksibentsyyli)aminodeoksiklavulanaatti Käytettäessä edellä olevien esimerkkien mukaisia menetelmiä saatiin hydrattaessa bentsyyli-9-N-(3,4-dimetoksibentsyyli)aminodeoksikla-vulanaattia amfoteerista 9-N-(3,4-dimetoksibentsyyli)aminodeoksi-klavulanaattia.

Esimerkki 13 9-N-(4-asetamidobentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo Bentsyyli-9-N-(4-asetamidobentsyyli)bentsyyliaminodeoksiklavula-

O O

naattia (0,9 g) tetrahydrofuraanissa (50 cm ) ja vedessä (10 cm ) hydrattiin ilmakehän paineessa 0,3 g:n hiilellä olevaa palladiumia (10 %) läsnäollessa 40 min. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse ja katalyytti pestiin vesipitoisella tetrahydrofuraanilla (1:1 3 3 100 cm ) ja vesipitoisella etanolilla (1:1 150 cm ). Kirkas suodos haihdutettiin tyhjössä, lisättiin etanolia (20 cm ) ja jäähdyttämisen jälkeen erotettiin värittömät kiteet suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 9-N-(4-asetamidobentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappoa (309 mg). Suodos haihdutettiin tyhjössä, jonka jälkeen lisättäessä kylmää metanolia saatiin vielä otsikossa mainittua yhdistettä (37 mg). Rf (Si02/butanoli-propan-2-oli-vesi 7:7:6) = 0,45, toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla.

\> (Mujol mull) (3600-3440), 3380, (3350-3200), 3180, 3120, 2720, (2670-2520), 2450, (1805-1785), 1690, 1670, 1600, 1530, 1310, 33 6 5 2 5 3 1200, 1110, 1070, 1050, 1035, 1020, 1000, 990, 940, 895, 840, 750 cm”1.

δ (D20/DMS0) 2,01 (3H, s, CH£CNH) , 2,88 (1H, d, J 17 Hz, 6 8CH), 3,38- 3,53 (3H, m, 6a CH, 9 CH2) , 3,95 (2H, s, NCH2) , 4,61-4,75 (2H, m, 3 CH, 8 CH), 5,62 (1h7 leveä s, 5a CH), 7730-7,56 (4H, ABq, J 9 Hz, CH2C6H4-p-NHCOCH3).

Esimerkki 14 9-N-(2-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappo

Bentsyyli-9-N-(2-metoksibentsyyli)bentsyyliaminodeoksiklavulanaat- 3 tia (8 g raakatuotetta) tetrahydrofuraanissa (100 cm ) ja vedessä (10 cm ) hydrattiin 10 %:sen hiilellä olevan palladiumin (1 g) läsnäollessa ilmakehän paineessa 1 1/2 tuntia. Seos suodatettiin ja katalyytti pestiin vesipitoisella tetrahydrofuraanilla (100 cm ), suodos haihdutettiin tyhjössä, jäännökseen lisättiin etyyliasetaat- o 3 tia (150 cm ) ja sitten pestiin vedellä (2 x 75 cm ). Yhdistetyt vesipitoiset uutteet haihdutettiin tyhjössä vaahdoksi (3 g). Tämä vaahto käsiteltiin kromatograafisesti selluloosapatsaassa ja elu-toitiin butanoli/propan-2-oli/vedellä 8:8:1. Otettiin talteen sellaiset fraktiot, jotka sisälsivät otsikossa mainittua yhdistettä,

Rf (Si02/butanoli/propan-2-oli-vesi 7:7:6) 0,60 (toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla). Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä. Kylmän etanolin lisäämisen jälkeen muodostui värittömiä kiteitä, nämä kiteet erotettiin suodattamalla ja pestiin kylmällä etanolilla ja kuivattiin, jolloin saatiin 9-N-(2-metoksibentsyyli)aminodeoksiklavulaanihapoa (140 mg). v(Nujol mull) (3320-3220), (2750-2100), 1800, 1685, 1610, 1300, 1260, 1185, 1120, 1085, 1070, 1055, 1030, 1020, 1005, 935, 900, 775, 755, 745 cm"1.

Esimerkki 15 9-N-(2-fluoribentsyyli)aminodeoksiklavuTaanihappo

Bentsyyli-9-N-(2-fluoribentsyyli)bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia (0,35 g) tetrahydrofuraanissa (30 cm ) ja vedessä (3 cm ) hydrattiin 30 %:sen hiilellä olevan palladiumin (40 mg) läsnäollessa ilmakehän paineessa 4 tuntia. Sitten lisättiin vielä samaa katalyyttiä (40 mg) ja vedyllä hajottamista jatkettiin 15 tuntia. Seos suodatettiin ja katalyytti pestiin vesipitoisella etanolilla (50 cm^) ja haihdutettiin tyhjössä. Lisättäessä kylmää etanolia saatiin 9-N-(2-fluoribentsyyli)aminodeoksiklavulaanihappoa värittömänä, kitei-

* A

ί 34 65253 senä, kiinteänä aineena (47 mg) , Rf (Si02/butanoli-propan-2-oli-vesi 7:7:6) = 0,51 (toteaminen kaliumpermanganaatin vesiliuoksen suihkun avulla). v(KBr), (3680-3140), (3140-2880), (2880-2500), (2500-2200), 1785, 1694, 1615, 1496, 1457, 1380, 1308, 1240, 1193, 1110, 1043, 1020, 900, 865 cm-1, <5 (D20) 3,05 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) , 3,54 (1H, dd, J 17 ja 3 Hz, 6a CH) , 3,72 (2H, d, J 7 Hz, 9 CH2) , 4,23 (2H, s, NCI^CgH^F) , 4,77 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH) , 4,95 ! (1H, s, 3 CH), 5,70 (1H, d, J 3 Hz, 5a CH), 7,05-7,48 (4H, m, CH2C6H4F).

Esimerkki 16

Karboksimetyyli-g-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti Bentsyylioksikarbonyylimetyyli-9-N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia (279 mg) liuotettiin tetrahydro-furaaniin (20 ml) ja veteen (2 ml) ja hydrattiin normaalilämpötilas-sa ja paineessa 10 %:sen hiilellä olevan palladiumin avulla. Reaktion päättymisen jälkeen (todettiin tlc-analyysillä) erotettiin ka-talyytti suodattamalla, pestiin hyvin vesipitoisella tetrahydrofu-raanilla ja yhdistetyt suodokset haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin karboksimetyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia. Jäännöstä hangattiin asetoni/eetterin kanssa, jolloin saatiin karb-oksimetyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia valkoisena kiinteänä aineena, joka erotettiin suodattamalla ja kuivattiin eksi-kaattorissa. v β]ς8 (nujol) 1795, 1745, 1690, 1610 cm-1.

Esimerkki 17

Metyyli-9-N-(4-asetamidobentsyyli)aminodeoksiklavulanaatti-vety(L)-malaatti

Metyyli-9-N-(4-asetamidobentsyyli)bentsyyliaminodeoksiklavulanaat-tia (0,5 g) tetrahydrofuraanissa (15 cm ) ja vedessä (5 cm ) hydrattiin ilmakehän paineessa 2 1/2 tuntia 0,1 g:n hiilellä olevaa palladiumia (30 %) ja maleiinihapon (0,155 g; 1 ekvivalentti) läsnäollessa. Seos suodatettiin ja katalyytti pestiin tetrahydrofuraa-

O

nin vesiliuoksella (10 cm ). Suodos haihdutettiin tyhjössä öljyksi. Tämä öljy liuotettiin etanoliin (10 cm^) ja sitä hangattiin eetterin kanssa, jolloin saatiin kiinteätä ainetta. Tämä kiinteä aine pestiin eetterillä ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin metyyli-9-N-(4-asetamidobentsyyli)aminodeoksiklavulanaatti-vety-L-malaattia kiinteänä aineena (343 mg), v(Nujol) 1800, 1745, 1690, 1670, 1600 cm 65253 35

Esimerkki 18

Metoksimetyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (162 mg) dimetyyliform-amidissa (10 ml) käsiteltiin lämpötilassa 20° klooridimetyylieette-rillä (42 ml; 1 ekvivalentti) ja sekoitettiin 4-5 minuuttia (kun tlc-arvoissa ei ollut enää muutoksia). Tässä vaiheessa liuos sisältää metoksimetyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihapon hydro-kloridia (R^, HCl-suola; 0,8 SiC^rlla käyttäen butanolirpropanoli: vettä 7:7:6). Seos kaadettiin etyyliasetaattiin (100 ml) ja veteen (50 ml) ja sitä sekoitettiin voimakkaasti samalla kun lisättiin kiinteätä natriumbikarbonaattia pH-arvoon 9,5. Orgaaninen faasi pestiin vedellä (6 x 50 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (3 x 50 ml), kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin, jolloin saatiin metoksimetyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaat-tia öljymäisenä tuotteena (154 mg). (R^, Si02/etyyliasetaatti, 0,17). vmakg (kalvo) = 3325 (leveä), 1800, 1750, 1700, 745, 705 cm-1.

Esimerkki 19

Metoksimetyyli-9-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti-hydrokloridi 9-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (0,4 g) dimetyyliformami-dissa (15 ml) käsiteltiin huoneen lämpötilassa klooridimetyylieet-terillä (1 ekvivalentti) ja sekoitettiin 5 minuuttia ja haihdutettiin sitten tyhjössä, jolloin saatiin öljymäistä tuotetta. Tämä öljy liuotettiin etanoliin (5 ml) ja lisättiin tipottain dietyyli-eetteriin (250 ml) samalla voimakkaasti sekoittaen. Saatu sakka erotettiin suodattamalla, pestiin kuivalla dietyylieeterillä ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin metoksimetyyli-9-bentsyyli-aminodeoksiklavulanaattihydrokloridia valkoisena, kiinteänä aineena (320 mg).

v(Nujoi) 2800-2460, 2460-2300, 1800, 1750, 1695, 750, 700 cm"1, δ(CD^OD) arvoihin sisältyy: 3,10 (1H, d, J 17 Hz, 68-CH), 3,43 (3H, s, OCH3) , 3,74 (2H, d, J 7 Hz, 9-¾) , 4,15 (2H, s, CH2C6H5) , 5,27 (2H, s, CH2OCH3), 5,77 (1H, d, J 3 Hz, 5a-CH), 7,40 (5H, s, ch2c£5) .

Esimerkki 20

Etyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti

Suspensiota, jossa oli 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (576 mg) metyleenikloridissa (20 ml), käsiteltiin trietyyliokso-niumtetrafluoriboraatin (380 mg) liuoksella metyleenikloridissa 65253 36 (20 ml) ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia siksi, kunnes tlc-arvoissa ei esiintynyt muutoksia. Liuotin poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin etyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavula-naattitetrafluoriboraattia. Tämä jäännös liuotettiin vesipitoiseen natriumbikarbonaattiin (noin 1 ekvivalentti) ja uutettiin metyleeni-kloridilla (2 x 20 ml). Orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella (20 ml), kuivattiin (vedetön magnesiumsulfaatti) ja haihdutettiin, jolloin saatiin etyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia öljynä (250 mg). = 0,2 Si02:lla käytettäessä etyyliasetaattia.

Vmaks (kalvo) = 3300 (leveä) , 1800, 1745, 1695 cm”1.

Esimerkki 21

Bentsyylioksimetyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattihydro- kloridi 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (288 mg) liuotettiin kuivaan dimetyyliformamidiin (15 ml) huoneen lämpötilassa ja tähän liuokseen lisättiin bentsyylioksiraetyylikloridia (157 mg) dimetyyliformami-dissa (1 ml). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa vielä 4 tuntia (tie:n avulla todettiin, että reaktio oli päättynyt) ja liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännös liuotettiin asetoniin, suodatettiin "Celiten" lävitse ja lisättiin kuivaa eetteriä. Jäähdytettäessä ja hangattaessa erottui bentsyylioksimetyyli-9-N-bentsyyli-aminodeoksiklavulanaatti-hydrokloridi kiteisenä ja otettiin talteen suodattamalla (220 mg). = + 15,6° (1,0; MeOH) ; v , (nujol) — — , maks 2725 (b), 1795, 1766, 1700 cm ; vmakg (KBr) 2940 (b), 2700-2840 (b), 1795, 1767, 1698 cm”1; S(CD3OD) 3,08 (1H, d, J 17 Hz, 66-CH), 3,57 (1H, dd, J 3,5 ja 17 Hz, 6a-CH), 3,68 (2H, leveä d, 9 CH~) , + ^ 4,11 (2H, s, , 4,69 (2H, s, peittää vesihuippu, CH2OCH2C6H5), 4,85 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 5,23 (1H, s, 3-CH), 5,38 (2H, s, C02CH20), 5,71 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 7,23 (5H, s, aromaattinen -H), 7,37 (5H, s, aromaattinen -H).

Esimerkki 22 4-nitrobentsyylioksimetyyli-9-N-bentsyyl·iaminodeoksiklavulanaatti- hydrokloridi 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (0,4 g) kuivassa dimetyyli-

O

formamidissa (15 cm ) käsiteltiin huoneen lämpötilassa 4-nitro-bentsyylioksimetyylikloridilla (1 ekvivalentti) ja sekoitettiin 7 min. Liuotin haihdutettiin tyhjössä ja lisättiin asetonia (20 cm^) ja tämän jälkeen kevytpetrolia (80-100°) ja dietyylieetteriä 37 6 5 2 5 3 (1:1 200 cm ), seosta jäähdytettiin yli yön ja saatu kiinteä aine erotettiin suodattamalla ja pestiin eetterillä. Kuivattaessa tyhjössä saatiin 4-nitrobentsyylioksimetyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksi-klavulanaatti-hydrokloridia valkoisena, kiinteänä aineena (0,41 g).

Rj (SiC^/etanoli:kloroformi 1:4) = 0,58. (kalvo) 1805, 1755, 1700 cm-1. δ(DMSO) 3,15 (1H, d, J 17 Hz, 68 CH) 3,62 (1H, dd, J 17 ja 3 Hz, 6-a-CH) 3,5 (2H, leveä m, 9-CH2), 4,03 (2H, leveä s, terävä s ravistamisen jälkeen D20:n kanssa, NCH2CgH^), 4,86 (2H, s, CH20CH2C6H5N02), 4,96 (1H, t, J 7 Hz, 8 CH), 5,37 (1H, s, 3 CH), 5,45 (2H, s, CH20CH2C6H4N02), 5,70 (1H, d, J 3 Hz, 5a-CH), 7,27- 7,60 (7H, m, CH2CgH^ ja protonit meta-asemassa nitrobentsyylin nitroryhmien suhteen), 8,12 (2 H, d, J 9 Hz, protonit orto-asemassa nitrobentsyylin nitroryhmien suhteen), 9,72 (2H, leveä s, muuttuu D20:n vaikutuksesta, NI^ ).

Esimerkki 23 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanlhappo-p-tolueenisulfonaatti 9-N-bentsyyliammodeoksiklavulaanihappoa (288 g) suspendoitiin bentsyylialkohollin (15 ml) ja lisättiin p-tolueenisulfonihappoa (190 mg) otsikossa esitetyn yhdisteen muodostamiseksi.

Esimerkki 24

Bentsyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklaVulanaatti-p-tolueenisulfonaatti Disykloheksyylikarbodi-imidiä (206 mg) lisättiin esimerkistä 23 saatuun liuokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yli yön. Liuos johdettiin piioksidigeelipatsaaseen ja saatua tuotetta elutoitiin erilaisilla kloroformi/etanoli-seoksilla lopuksi suhteessa 10:1. Otsikossa mainittu yhdiste saatiin valkoisena kiinteänä aineena hangattaessa asetoni/eetterin kanssa, v maks (nujol) 1810, 1750, 1700 cm-1.

Esimerkki 25

Etyyli-S-H-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti-p-tolueenisulfonaatti 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (288ng) suspendoitiin etanoliin (15 ml) ja p-tolueenisulfonihappoon (190 mg) happoadditio-suolan muodostamiseksi. Liuokseen lisättiin disykloheksyylikarbodi-lmidiä (206 mg) ja reaktioseosta sekoitettiin useita tunteja huoneen lämpötilassa. Liuotin poistettiin ja tuote puhdistettiin pat-saskromatografiän avulla piioksidigeelillä ja elutoitiin butanoli/-propan-2-oli/vedellä 4:4:1. Otsikossa mainittua yhdistettä sisältä 38 6 5 2 5 3 vät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin. Lisättäessä jäännökseen etanolia ja eetteriä saatiin tuote valkoisena kiinteänä aineena, joka erotettiin suodattamalla ja kuivattiin, v (Nujoi mull) 1810, 1750, 1700 cm 1.

Esimerkki 26

Fenasyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti-hydrobromidi 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (288 mg) dimetyyliformami-dissa (15 ml) käsiteltiin fenasyylibromidilla (199 mg) ja saatua liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1 1/2 tuntia. Dimetyyli-formamidi haihdutettiin tyhjössä, jäännöstä käsiteltiin kromatograa-fisesti piioksidigeelillä ja otsikossa mainittu yhdiste elutoitiin kloroformi/etanolilla 10:1. Haihdutettaessa fraktiot, jota seurasi hankaaminen asetoni/eetterin kanssa, saatiin haluttu suola vaaleankeltaisena kiinteänä aineena. vmajcs (KBr) 1798, 1755, 1698 cm-1.

Esimerkki 27

Fenasyyli-9-N-bentsyyliamlnodeoksiklavulanaatti-hydrojodidi Fenasyylibromidia (199mg) liuotettiin asetoniin (2 ml) ja tähän lisättiin natriumjodidin (1,1 ekvivalenttia) liuos asetonissa (2 ml). Tällöin tapahtui välitön natriumbromidin saostuminen. Kun seostaoli sekoitettu 10 minuuttia, erotettiin sakka suodattamalla ja suodos lisättiin 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihapon (288mg) suspensioon dimetyyliformamidissa (15 ml). Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia ja liuotin poistettiin. Fraktioitaessa raakatuote piioksidigeelillä ja elutoitaessa kloroformi:etanolilla 10:1, saatiin otsikossa mainittu yhdiste. Edelleenkäsittely ja tuotteen hankaaminen asetoni/eetterin kanssa antoi sellaisen tuotteen, jonka muodosti vaaleankeltainen kiinteä aine. (nujol) 1800, 1750, 1695 cm”*,

Esimerkki 28

Litium-9-N-karbobentsoksi-N-berttsyyliaminodeoksiklavulanaatti 9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihappoa (1,15 g) dimetyyliformami-dissa (20 ml), joka sisälsi 1 ekvivalentin litiumbikarbonaattia (544 mg; 10,8 ml; 5 %:nen liuos) käsiteltiin lisäämällä tipottain liuos, jossa oli bentsyylikloroformaattia (684ng) asetonissa (10 ml) lämpötilassa 0°. Reaktioseosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 1 tunti. Liuotin poistettiin ja jäännöstä hangattiin asetoni/eette-rillä , muodostunut valkoinen kiinteä litium-9-N-karbobentsoksi-N- 65253 39 bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti erotettiin suodattamalla ja kuivattiin eksikaattorissa tyhjössä (1,6 g). Rf (Si09:n-butanoli:iso-propanoli:vesi 7:7:6), = 0,66; / α/β = + 28,3° (C=l,6; vesi);

vmaks (nu7ol> 1778, 1682, 1620 cm-1, 6((CD3)2 SO) 2,68 (1H, d, J

17.5 Hz, 68-CH), 3,42 (1H, dd, peittää vesihuippu, 6a-CH), 3,8 (2H, d, J 7,5 Hz, 9-CH2), 4,32 (2H, s, NCH2C6H5), 4,52 (2H, m, 3-CH ja 8-CH), 5,07 (2H, s, N.CO.O.CH2), 5,52 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 7,21 (5H, s, aromaattinen -H), 7,28 (5H, s, aromaattinen -H).

t

Esimerkki 29

Metyyli-9-N-karbobentsoksi-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti Litium-9-N-karbobentsoksi-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia (428 mg) liuotettiin dimetyyliformamidiin (10 ml) ja lisättiin metyylijodidia (710 mg). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Liuotin poistettiin ja jäännöstä käsiteltiin kro-matograafisesti piioksidigeelillä ja elutoitiin etyyliasetaatti:syk-loheksaanilla (1:1). Otsikossa mainittu yhdiste saatiin liuottimen haihduttamisen jälkeen värittömänä öljynä (244 mg). R^ (etyyliase-taatti-sykloheksaani; 1:1) = 0,75; /fa7^°= + 13,21° (C=l,12; MeOH); vmaks (kalvo) 1805, 1750, 1690 cm'1; δ(CDC13) 2,86 (1H, d, J 17,5 Hz, 68-CH), 3,42 (1H, dd, J 17,5 ja 3 Hz, 6a-CH), 3,72 (3H, s. C02CH3), 3,96 (2H, d, J 7,5 Hz, CH.CH2N), 4,44 (2H, s, NCH2Ph), 4,67 (1H, bt, J 7,5 Hz, CHCH2), 4,94 (1H, d, J 1,5 Hz, 3-CH), 5,16 (2H, s, C02CH2Ph), 5,53 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 7,22, 7,3 (10 H, 2 x s, Ar-H).

Esimerkki 30

Etyyli-9-N-karbobentsoksi-N-bentsyyliamlnodeoksiklavulanaattl Etyylijodidia (780 mg) lisättiin liuokseen, jossa oli litium-9-N-karbobentsoksi-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia (428 mg) dime-tyyliformamidissa (10 ml), joka sisälsi noin 2 tippaa vettä. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 7 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä käsiteltiin kromatograafisesti piioksidigeelillä. Tuote erotettiin elutoimalla etyyliasetaatti:syklohek-saanilla 1:1 ja se saatiin liuottimen haihduttamisen jälkeen värittömänä öljynä (307 mg). R- (etyyliasetaatti:sykloheksaani; 1:1) = 0,78; Ζ~α7ο = 9,6° (C=l,38; MeOH); Vmaks (kalvo) 1802, 1745,

1695 cm"1; 6(CDC13) 1,25 (3H, t, J 8 Hz, CH2CH3), 2,86 (1H, d, J

17.5 Hz, 68-CH) , 3,41 (1H, dd, J 17,5 Hz ja 3 Hz, 6a-CH), 3,96 (2H, d, J 8 Hz, CHCH2n) , 4,17 (2H, q, J 8 Hz, CH£H3) , 4,43 (2H , s, 65253 40 NCH2-C6H5), 4,92 (1H, d, J 1,5 Hz, 3-CH), 4,67 (1H, bt, J 8 Hz, 8- CH) , 5,17 (2H, s, CO.O.CH2C6H5), 5,53 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 7,23, 7,30 (10 H, 2 x s, Ar-H).

Esimerkki 31

Metyyli-g-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti-vety-L-malaatti Metyyli-9-N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyyliaminodeoksiklavuia-naattxa (218 mg) tetrahydrofuraanissa (15 ml) ja vedessä (1 ml) hydrattxxn normaalxpaxneessa L-malexxnihapon (67 mg) ja 10 %:sen hxxlellä olevan palladxumxn (73 mg) läsnäollessa 2 tuntxa. Katalyyt-tx poxstettxxn suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuiviin. Hangattaessa propan-2-oli/eetterillä saatiin otsikossa mainittu suola vaikeahkona kiinteänä axneena. vmaks (nujol) 1800, 1745, 1695, 1625 cm-1.

Esimerkki 32

Etyylx-9-N-bentsyylxaroxnodeoksxklavulanaatti-vety-L-malaattx Liuosta, jossa oli etyyli-9-N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyylx-amxnodeoksiklavulanaattia (140 mg) ja L-maleiinihappoa (42 mg) tet-rahydrofuraanissa (15 ml) ja vedessä (1 ml), hydrattiin 10 %:sen hiilellä olevan palladiumin (45 mg) läsnäollessa normaalipaineessa 2 tuntia. Katalyytti erotettiin suodattamalla, pestiin vedellä ja suodos haihdutettiin. Hangattaessa jäännöstä propan-2-oli/eetterin kanssa saatiin tuote vaaleana, kiinteänä aineena. vmaks (nujol) 1800, 1745, 1695, 1630 cm-1.

Esimerkki 33

Bentsyylioksikarbonyylimetyyll-g-N-bentsyyliokslkarbonyyli-N- bentsyyliammodeoksiklavulanaatti 9- N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyyliaminodeoksiklavulaanihapon litiumsuolaa (428 mg) suspendoitun dimetyyliformamidiin (15 ml) ja lisättiin 3 tippaa vettä. Saatuun liuokseen lisättiin bentsyyli-bromiasetaattia (343 mg) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Ohutkerroskromatografiässä todettiin, että reaktio oli tapahtunut täydellisesti, jonka jälkeen liuotin poistettiin, jäännöstä käsiteltiin kromatograafisesti puoksidigeelillä ja elutoitun etyyliasetaatti/sykloheksaanilla (1:1). Yhdistetyt fraktiot haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin väritöntä öljyä (384 mg). Rf (Si09: etyyliasetaatti:sykloheksaani, 1:1) = 0,71; — —20 1 4 / 9L/Q = + 12,2° (C = 1,16; MeOH) ; vmaks (kalvo) 1805, 1750 (b) , 6 5 2 5 3 41 1705 (sh), 1690 m-1; 6(CDC13) 2,86 (1H, d, J 17,5 Hz, 68-CH), 3,38 (1H, dd, J 17,5 ja 3 Hz, 6a-CH), 3,94 (2H, d, J 8 Hz, 9-CH2). 4,44 (2H, s, NCH2Ph) , 4,65 (2H, s, C02CH2CC>2) , 4,74 (1H, bt, peittää osittain signaaliarvossa 4,65), 5,04 (1H, d, J, 1,5 Hz, 3-CH), 5,15 (4H, s, NC02CH2Ph ja CH2C02CH2Ph), 5,52 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 7,22, 7,29 (15 H, 2 x s, aromaattinen -H).

Esimerkki 34 2-hydroksietyyli-9-N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyyliaminodeoksi-klavulanaattl 2-jodietanolia (860 mg) lisättiin liuokseen, jossa oli litium-9-N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaattia (428 x mg) dimetyyliformamidissa (15 ml) ja vedessä (3 tippaa). Liuospa ' sekoitettiin 14 tuntia huoneen lämpötilassa ja liuotin poistettiin, jäännös puhdistettiin patsaskromatografiän avulla pii5kSidigeeliä käyttäen ja elutoitiin etyyliasetaatti/sykloheksaanl11a 1:1. Tuote saatiin väirttömänä öljynä. (Si02retyyliasetäatti/sykloheksaani 1:1) = 0,29; vmakg (kalvo) 1800, 1745, 1700 cm-1.

Esimerkki 35

Metyyli-9-N-bentsyyliamlnodeokslklavulanaatti-vetysukkinaattl Metyyli-9-N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyyliaminodeoksiklavula-naattia (109 mg) liuotettiin tetrahydrofuraani/metanoliin (10 ml) ja hydrattiin normaalipaineessa 10 %:sen hiilellä olevalla palladiumilla (38 mg) meripihkahapon (29,5 mg) läsnäollessa. Katalyytti erotettiin suodattamalla ja liuotin haihdutettiin, jolloin tuote saa- • 1 tiin hartsimaisena aineena, (kalvo) 1800, 1740, 1695, 1615 cm

Esimerkki 36

Metyyli-9-N-bentsyyliaminodeoksiklavulanaatti-vety-L-tartraatti Metyyli-9-N-bentsyylioksikarbonyyli-N-bentsyyliaminodeoksiklavula-naattia (87 mg) tetrahydrofuraanissa (10 ml) ja vedessä (1 ml) hydrattiin ilmakehän paineessa (+)-viinihapon (30 mg) ja 10 %:sen hiilellä olevan palladiumin (30 mg) läsnäollessa 1/2 tuntia. Seos suodatettiin "Celiten" lävitse, katalyytti pestiin vedellä ja suodos haihdutettiin kuiviin. Hangattaessa jäännöstä asetoni/eetterillä saatiin tuote valkoisena kiinteänä aineena, v , (nujol) 1797,

1743, 1700, 1620 cm”1. S

Demonstraatio 1 Aktiivisuus in vitro

Pelkästään ampisilliinin ja esimerkkien yhdisteiden 1 ^ug/ml ja 5 yug/ml liuosten MIC-arvot määrättiin mikrotitrausmenetelmällä. Tulokset olivat seuraavat.

42 65253 m m + · oo o n* n

•H

ιΗ rH CO (N 03 ID rH rr OO 00 Ο σ' + iH ro υ m • frH W Id oooo o ooo o oooo o ooo + moino o m in in

ArsArvi cn ΛΛΝ m m + **

(0 Ν' O CO CN N< C0 N N

P · H

-P ft C CD co 0 C in H CO rH m CN CN rH cn m «> <φ :(0 (0 3 + cn voro o <ncn

3 CD I—I I—I CO

to ad .μ σι «Ο -P o oo <—I (0 p oo •H (¾ u C-P oooooooo 3 CO o oooo o ooo rV -h + motno o mmm g* Λ CN Λ M CN Λ Λ Λ

in CD

EC in 'S’ CM VO 00 (N CN

\ ϊο in »·>»« *· r—I rH m - ' tJi CO + r—I O VO i—I o

P ΓΟ Γ0 I-H

\ rH O - ' ~· ε r" \ w

0 O' (Q

> 3 rH to in

U \ rH 0) rH VO CN rH rH CN in rH

i0 m (D ρ t—I » v v v s h ^ ^ 1 HQ) h- m m vo m m vo cn m

U * »O' rH

H rH Xi 0

S E <D U

\ rH Q) C O' « (d

H P

3 \ OOOO O OOO

H rH O OOOO O OOO

•h + m o m o rH mmm H ^ A Λ H Λ A Λ

h E

w \ •H tT*

ft P mrHrH Ν' CN rH rH

£ \ H-ooio o oo

Ο 10 rH ·· * % » » * I

P rH OO Ο O OO

U 0) v V

O CO V

O cn oo H oo

Op m ο cn vo id moo O ÖQ rH ^ k » >. v

rH + OOOO O OOO

>1 W Λ 3 ft CD 3 Vt -P 3 m mmm cn (0 - o o o

O CN O CN O O CN CN CN

+ ίο m vd m m id id ic A Λ Λ

d) I

(di (d h co Vh o rH +j

0) ·· M -O

O E C 1 (d •ph rH cn m ν' 3 «j mr^m

co cn :cd h g rH

H a) -P p id

3 cn hj rH

Λ 3 H (d 3 >h -p >; a > 1.

65253 43

Aktiivisuus xn vivo

Keksinnön mukaisten yhdisteiden synergistinen vaikutus eläimissä määrättiin antamalla samanaikaisesti esimerkin 2 mukaista yhdistettä ja amoksisillnniä (natnumsuolana) koe-eläimille, jotka oli in-fektoitu kannalla E. coli JT 39. Tämä mikro-organismi aikaansaa huomattavia määriä β-laktamaasia, joka hajottaa amoksisilliiniä pienentäen täten sen bakteereja tappavaa tehokkuutta in vivo. Annettaessa esimerkin 2 mukaista yhdistettä koe-eläimille samanaikaisesti amok-sisilliinin kanssa mahdollistetaan kuitenkin β-laktamaasin salpaa-misen avulla amoksisilliinin bakteereja tappavan aktiivisuuden hyvä tehokkuus. Seuraavat tulokset saatiin kun amoksisilliiniä pelkästään tai yhdessä esimerkin 2 mukaisen yhdisteen tai natriumklavulanaatin kanssa annettiin subkutaanisesti hiirille, jotka oli infektoitu kannalla E. coli JT 39:

Koeyhdlsteet CP5Q (mg/kg x 2)

Natnumamoksisilliini, pelkästään 200

Natriumamoksisilliini + 2 mg/kg _ _ esimerkin 2 mukaista yhdistettä '

Natriumamoksisilliini + 1 mg/kg β _ esimerkin 2 mukaista yhdistettä '

Natriumamoksisilliini + 2 mg/kg l4 ς natnumklavulanaattia '

Natriumamoksisilliini + 1 mg/kg __ natriumklavulanaattia (Natriumamoksisilliini valmistettiin liuottamalla amoksisilliini-trihydraattia natriumkarbonaatti/natriumbikarbonaatti-puskuriin).

Esimerkin 2 mukainen yhdiste oli myös tehokas suojattaessa amoksi-silluniä kannan E. coli JT 39 muodostamalta β-laktamaasilta in vivo kun sitä annettiin oraalisesti, mutta se oli vähemmän tehokasta painoyksikköä kohden kuin subkutaanisesti annosteltaessa.

Esimerkin 2 mukaisen yhdisteen ei todettu aikaansaavan myrkyllisiä vaikutuksia näiden kokeiden aikana.

Demonstraatio 2

Synergistisen tehokkuuden osoittaminen

Seuraavat keskimääräiset CD^Q-arvot saatiin amoksisilliinille kun 65253 44 läsnä oli määrättyjen esimerkkien mukaisia yhdisteitä ja annostelu suoritettiin subkutaanisesti 1 ja 5 tuntia kannan E. coli JT 39 avulla aikaansaadun peritoneaalisen infektion jälkeen.

Koe 1 CD50

Amoksisilliini, pelkästään 1000 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 2 mukainen yhdiste 2 mg/kg 4,5 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 2 mukainen yhdiste 1 mg/kg 6,3 mg/kg x 2

Amoksislliini + esimerkin 7 mukainen yhdiste 2 mg/kg 6,4 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 7 mukainen yhdiste 1 mg/kg 7,5 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 9 mukainen yhdiste 2 mg/kg 4,5-8 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 9 mukainen yhdiste 1 mg/kg 12 mg/kg x 2

Kefatsoliini, pelkästään 10,5 mg/kg x 2

Koe 2 m - ^50

Amoksisilliini, pelkästään 1000 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 6 mukainen yhdiste 2 mg/kg 3,1 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 6 mukainen yhdiste 1 mg/kg 8 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 2 mukainen yhdiste 2 mg/kg 4,5 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 2 mukainen yhdiste 1 mg/kg 8,5 mg/kg x 2

Koe 3 rD

- ££>5o

Amoksisilliini, pelkästään 1000 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 13 mukainen yhdiste 2 mg/kg 4,4 mg/kg x 2

Amoksisilliini + esimerkin 2 mukainen yhdiste 2 mg/kg 5,8 mg/kg x 2 65253 45

Koe 4 Tässä kokeessa infektio aikaansaatiin kannalla E. Coli E 124 intraperitoneaalisesti. Vertailuyhdisteenä käytetty dibentsyyli-aminodeoksiklavulaanihappo tunnetaan FI-patenttihakemuksesta 76 2895.

—50

Amoksisilliini, pelkästään 1000 mg/kg x 2

Amoksisilliini + dibentsyyliamino- deoksiklavulaanihappo 5 mg/kg 200 mg/kg x 2

Amoksisilliini + bentsyyliaminodeoksi-klavulaanihappo (esim. 2) 5 mg/kg 5,6 mg/kg x 2

Demonstraatio 3

Antibakteerisen tehokkuuden osoittaminen

Hiiriä infektoitiin kannalla Staphylococcus aureus Russell (reisi-vamma, 0,2 ml) ja tämän jälkeen annettiin subkutaanisesti 1, 3 ja 5 tuntia infektoimisen jälkeen koeyhdisteen liuosta. Saatiin seu-raavat tulokset:

Yhdiste Annostus (mg/kg) Suoja-(%) 9-N-bentsyyliaminodeoksi- klavulaanihappo 5 69,8 10 89,7 20 99,3 9-N-p-metoksibentsyyliamino- deoksiklavulaanihappo 5 28,0 10 80,8 20 87,6

Kloksasilliini 20 61,6 50 91,7

Kefatsoliini 20 39,0 50 71*2 9-N-bentsyyli-aminodeoksiklavulaanihapon LD^^-arvo hiirissä on suurempi kuin 1000 mg/kg intraperitoneaalista injektiota käytettäessä ja suurempi kuin 500 mg/kg subkutaanista annostelua käytettäessä.

46 65253

Synergistisen tehokkuuden osoittaminen

Hiiriä infektoitiin intermuskulaarisesti reiteen kannalla Staphylococcus aureus Russell ja tämän jälkeen annettiin sub-kutaanisesti 1, 3 ja 5 tuntia infektoitumisen jälkeen koeyhdis-teen liuosta. Vertailuyhdisteenä käytetty dibentsyyliaminodeok-siklavulaanihappo tunnetaan FI-patenttihakemuksesta 76 2895. Saatiin seuraavat tulokset:

Yhdiste/kombinaatio Suoja-%

Amoksisilliini 50 mg/kg, pelkästään 0

Amoksisilliini 50 mg/kg + dibentsyyliamino-deoksiklavulaanihappo 1 mg/kg 0

Amoksisilliini 50 mg/kg + dibentsyyliamino-deoksiklavulaanihappo 5 mg/kg 77

Amoksisilliini 50 mg/kg + bentsyyliamino-deoksiklavulaanihappo 0,5 mg/kg 57

Amoksisilliini 50 mg/kg + bentsyyliamino-deoksiklavulaanihappo 1 mg/kg 62

Amoksisilliini 50 mg/kg + bentsyyliamino-deoksiklavulaanihappo 5 mg/kg 85

I

Claims (5)

65253 47

1. Menetelmä bakteerinvastaisesti vaikuttavien 9-aminodeoksi-klavulaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava H \ V \==/ (II) )-N-Y 0 \ C02A tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, jossa A on vetyatomi tai alkyyliryhmä, joka voi olla subs-tituoitu alkoksilla, fenyylillä, bentsoyylillä tai bentsyyliok-silla, jolloin fenyyliryhmät voivat olla substituoidut halogeenilla, nitrolla tai alkoksilla, ja on vetyatomi, 1-5 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 1-5 hiiliatomia sisältävä hydroksialkyy-liryhmä, tai fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla fluorilla, kloorilla, alkyylillä, alkoksilla, hydrok-silla tai alkanoyyliaminolla, tunnettu siitä, että a) hydrataan yhdiste, jolla on kaava H, /CH2'R1 _V/0 ch2~n (X) I /=/ CH2-R7 A— N O ' co2a jossa A ja R^ merkitsevät samaa kuin kaavassa II, tai A merkitsee hydraamalla poistettavissa olevaa esteriryhmää, ja R? on fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla fluorilla, kloorilla, alkyylillä, alkoksilla, hydroksilla tai alkanoyyliaminolla, tai b) hydrataan yhdiste, jolla on kaava 65253 48 H C0-0-CH2R7 \^0 CH9-fT (XI) W 2 ^Ch2-Ri /)-N-/ O C02A jossa A, ja merkitsevät samaa kuin kaavassa X, ja haluttaessa esteröidään menetelmällä a) tai b) saatu amfoteerinen yhdiste kaavan II mukaisten esterien saamiseksi, ja haluttaessa maitetaan saatu tuote farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 9-N-bentsyyli-amino-deoksiklavulaanihapon valmistamiseksi, tunnettu siitä, että ryhmä R^ on lähtöaineen kaavassa X tai XI fenyyli-ryhmä.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 9-N-(2-hydroksi-etyyli)-amino-deoksiklavulaanihapon valmistamiseksi, tunnet-t u siitä, että ryhmä R^ on lähtöaineen kaavassa X tai XI hydr-oks imetyy1iryhmä.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 9-N-etyyliamino-deoksiklavulaanihapon valmistamiseksi, tunnettu siitä, että ryhmä R^ on lähtöaineen kaavassa X tai XI metyyliryhmä.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 9-N-(4-metyyli-bentsyyli)-aminodeoksiklavulaanihapon valmistamiseksi, tunnettu siitä, että ryhmä R^ on lähtöaineen kaavassa X tai XI 4-metyylifenyyliryhmä.