FI59104C - Saosom mellanprodukt vid framstaellning av 3-desacetoxi-cefalosporiner anvaendbar med 3-exometylen substituerad cefalosporinfoerening - Google Patents

Description

"ÖCmH ΓβΊ KUULUTUSJULKAISU

draTg *·* (11) UTLÄCGN I NOSSKRI FT 5 91 O 4 C M5V Patentti myönnetty 10 C6 1931 ' Patent neddelat ^ (51) Kv.ik.3/int.a.3 e 07 D 501/14 SUOMI —FINLAND (21) Ptt«nttlh«k«mti« —P»*«nt«n»6k»Ur.t 763278 (22) HakumlspUvi— Aiweknlnpdag 27.10.78 (23) Alkuptlvt—GlhighMsdtg 25-02.72 (11) Tulkit JulklMktl — Bllvlt offumllg 27.10.78

Patentti- ia raklsterihallltufl .... ........... . .,_ \ . ^ (44) Nihtivtl(*lp«Kxi ja kuuLJulktJsun pvm. —

Petant- och raglttantyralaan Anaekan utiagd och uti.»krift«n puuicand 27.02.81 (32)(33)(31) Fyydutqr utuolkeue—Buglrd priorltat 25-02.71 USA(US) 1189U1 (71) Eli Lilly and Company, 307 East McCarty Street, Indianapolis,

Indiana U6206, USA(US) (72) Robert Raymond Chauvette, Indianapolis, Indiana, USA(US) . (7M Oy Kolster Ab (5^) Δ^-desasetoksi-kefalosporiinien valmistuksessa välituotteena käytettävä 3-eksometyleenillä substituoitu kefalosporiiniyhdiste -S&som mellanprodukt vid framställning av A^-desacetoxi-cefalospori-ner användbar, med 3-exometylen substituerad cefalosporinförening (62) Jakamalla erotettu hakemuksesta 500/72 (patentti 57^19) -Avdelad frän ansökan 500/72 (patent 57*+19) Tämä keksintö kohdistuu uusiin 3-eksometyleenillä substituoituihin kefalos- poriiniyhdisteisiin, joita voidaan käyttää välituotteena valmistettaessa 3 . ......

δ -desasetoksi-kefalosporuneja, ja joiden kaava on NH. _/1\

^7 6f 2 I

0β-CH2 C00R1 jossa kaavassa on vetyatomi, p-nitrobentsyyli- tai p-metoksibentsyyliryhmä tai farmaseuttisesti hyväksyttävä kationi.

2 591 04

Kefalosporiini-antibioottien kefeemi-nimistösysteemin mukaan (ks. Morin et ai. J. Am. Chem. Soc., 8i+, 3^+00 (1962)), 7~ADCA:ta nimitetään 3-metyyli-7-amino-4?-

O

kefeemi-^-karboksyylihapoksi, jossa merkitsee hiili-hiilikaksoissidoksen endo-syklistä asemaa. 7-aminodesasetoksikefalosporaanihappo on käyttökelpoinen välituote valmistettaessa desasetoksikefalosporaanihappoantibiootteja. Esimerkiksi asyloimalla 7-ADCA seka-anhydridireaktiossa tert.-butyylioksikarbonyylillä (t-BOC) suojatulla D-fenyyliglysiinillä metyyliklooriformiaattia käyttäen ja poistamalla sen jälkeen t-BOC-ryhmä saadaan 7~(',t‘D-aminofenyyliasetamido)desasetoksikefalos-poraanihappoa, jota tavallisesti nimitetään kefaleksiiniksi. Tunnetaan myös muita käyttökelpoisia kefalosporiinivälituotteita, joissa hiili-hiilikaksoissidos sijait-see 2-asemassa (Δ ) kefeemirenkaassa, esimerkiksi 7-asyyli-A -kefeemi-i4-karboksyy-lihappoestereitä, joita on esitetty US-patentissa 3 536 705 ja J. Org. Chem., 35 2U29 (1970). Kuitenkaan keksinnön mukaisia kefaami-rakenteisia yhdisteitä, joissa siis on eksosyklinen kaksoissidos (ks. kaava I) ei alalla aikaisemmin ole esitetty.

"Farmaseuttisesti hyväksyttävä kationi" tarkoittaa alkalimetallikationia, kuten litium-, natrium- ja kaliumkationia ja maa-alkalikationeja, kuten kalsium-ja magnesiumkationia ja sinkkikationia.

Kaavan I mukaiset uudet yhdisteet, joissa on vetyatomi, voivat esiintyä amfoteerisessa muodossa; myös tämä muoto kuuluu käsillä olevan keksinnön suoja-piiriin .

Uudet 3-eksometyleenillä substituoidut kefalosporiiniyhdisteet ovat yleensä voimakkaasti kiteisiä yhdisteitä, jotka liukenevat useissa tapauksissa parem- 3 min veteen kuin vastaavasti substituoidut 3-metyyli-<J -kefeemi-^-karboksyylihapot 3 (desasetoksikefalosporaanihapot). Päinvastoin kuin 3-metyyli-<ar-kefeemi-U-karbok- syylihapoilla, 3-eksometyleenillä substituoiduilla kefalosporiineilla ei esiinny 3 absorptiota 2β0 mp.:n alueella ultraviolettispektrissä, mutta kuten 3-metyyli-4 -kefeemiyhdisteillä, niillä esiintyy absorptiota infrapuna-alueella noin 1790 cm ^ kohdalla, siis /3-laktaamikarbonyyliryhmälle tyypillisellä alueella 3-metylee-nillä substituoitujen kefalosporiinien ydinmagneettinen resonanssispektri osoittaa allyylityyppisen vedyn liittyneen C^-hiileen ja kahden vinyylisen vedyn liittyneen hiilisubstituenttiin C^-hiilessä; nämä ominaisuudet ovat yhtäpitäviä tässä esitetyn 3-eksometyleenillä substituoidun kefaami-l*-karboksyylihapon rakenteen kanssa.

3 59104

Uudet 3-eksometyleenillä substituoidut kefalosporiinit valmistetaan pelkistämällä T-amino-A^-kefeemi-U-karboksyylihappo tai esteri, jonka kefeemiytimen 3-hiili on substituoitu ryhmällä -CH^-S-R^» jossa R^ merkitsee hiilivetyryhmää, tai SO^ M+-ryhmällä, jossa M+ on metallikationi.

Kaavan I mukaisia 3-eksometyleenillä substituoituja kefalosporiineja valmistetaan 3-substituoidusta metyylikefalosporiinistä.

Kaavan III mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan vedyn kanssa pelkistävissä olosuhteissa joko katalyyttisesti hydraamalla tai kemiallisesti pelkistämällä kaavan I mukaisten 3-eksometyleenikefalosporiinin saamiseksi. Pelkistävää korva-usreaktiota esittää seuraava yleinen yhtälö: H-"~j---Oi . H-H-j.......

1-K ^1_CH2-S-R2 .!-N J=£H2 0 T o7 Ύ COORt C00R-,

III I

jonka reaktiokaavoissa R^:n ja R^:n merkitys on sama kuin edellä. Reaktio luonnehditaan tässä pelkistäväksi korvausreaktioksi, jossa käytetyissä pelkistävissä olosuhteissa ryhmä S - Rg poistetaan muodostamalla eksosyklinen kaksoissidos kefaami-renkaan 3-asemaan. Ryhmä SR^ on poistuva ryhmä, joka irtoaa käytetyissä pelkistävissä olosuhteissa.

Pelkistävä korvausreaktio suoritetaan johtamalla kaasumaista vetyä reak-tioseokseen metallisen hydrauskatalysaattorin läsnäollessa tai reaktiivisen metalliparin, amalgamoidun metallin tai metallin ja hapon yhdistelmän avulla muodostuvalla vedyllä dimetyyliformamidin läsnäollessa. Pelkistävä korvausreaktio voidaan suorittaa myös +2-arvoisilla kromisuoloilla.

Pelkistävä korvausreaktio suoritetaan katalyyttisissä hydrausolosuhteis-sa liuottamalla 3“Substituoitua metyylikefalosporaanihappoa tai sen esteriä tai kationisuolaa sopivaan liuottimeen ja hydraamalla liuos vetypaineen ollessa noin 105 ja noin 3500 kPa:n välillä. Hydraus voidaan suorittaa noin 5 ja 65°C:n välillä olevassa lämpötilassa ja edullisesti noin 25~^5°C:ssa.

Tehokkaisiin hydrauskatalysaattoreihin kuuluvat perusmetallikatalysaatto-rit, kuten nikkeli ja koboltti, edullisesti Raney-tyyppiä olevat aktivoidut katalysaattorit, kuten Raney-nikkeli ja Raney-koboltti sekä jalometallikatalysaat-torit, kuten platina, palladium ja rodium. Suositeltava hydrauskatalysaattori on Raney-nikkeli.

11 59104

Katalyyttinen pelkistys voidaan suorittaa erilaisissa liuottimissa. Yleensä voidaan käyttää vettä tai mitä tahansa muuta liuotinta, joka ei reagoi lähtöaineiden kanssa, ja edullisesti voidaan käyttää sellaista, joka ei itse pelkisty. Esimerkiksi metanoli, etanoli, isopropanoli, dimetyyliformamidi, dioksaani ja tetra-hydrofuraani joko sellaisenaan tai veteen sekoitettuina ovat sopivia liuottimia. Jos 3-substituoitua metyylikefalosporiinia käytetään suolana, vain vettä voidaan käyttää liuottimena.

Hydrauksen annetaan jatkua noin 2k tuntia edullisella lämpötila-alueella, vaikkakin jonkin verran korkeammissa lämpötiloissa reaktio etenee nopeammin.

Pelkistävä korvausreaktio voidaan suorittaa myös alalla hyvin tunnetuissa kemiallisissa pelkistysolosuhteissa, jolloin käytetään muodostuvaa vetyä tai helposti hapettuva metallisuola toimii pelkistävänä aineena. Kemiallisiin pelkisti-miin, joita voidaan käyttää käsillä olevassa valmistusmenetelmässä, kuuluvat metallinen sinkki sopivan hapon läsnäollessa, alumiiniamalgaama ja hapettuvien metallien suolat, esimerkiksi kromikloridi, kromibromidi ja kromiasetaatti.

Kemiallinen pelkistys suoritetaan vesiliuoksessa, joka sisältää dimetyyli-formamidia (DMF) tai dimetyyliasetamidia (DMA), ja tarvittaessa määrätyn 3-subs-tituoidun metyylikefalosporiinin liukoisuuden parantamiseksi voidaan käyttää li-säliuottimena veteen sekoittuvaa eetteriä. Sopivia lisäliuottimia ovat esim. tetrahydrofuraani ja dioksaani.

Pelkistys suoritetaan minkä tahansa edellä mainitun kemiallisen pelkisti-men kanssa 6-2h tunnin kuluessa noin 0-60°C:n lämpötilassa. Edullinen reaktio-lämpötila osoittautuu olevan noin 15°C:n ja i+5°C:n välissä.

Kun amalgamoitua metallia käytetään pelkistävässä korvausreaktiossa, käytetään liuotinseosta, joka sisältää vettä, alkoholia, kuten etanolia ja dimetyy-liformamidia. Jos sinkkiä tai metalliparia käytetään, sopiva liuotinseos sisältää vettä, veteen sekoittuvaa lisäliuotinta, kuten tetrahydrofuraania, dimetyy-liformamidia ja happoa, kuten muurahaishappoa.

Käsillä olevan menetelmän edullinen kemiallinen pelkistin on sinkki hapon läsnäollessa. Sinkin kanssa käytettäviin happoihin kuuluvat laimeat mineraa-lihappojen vesiliuokset, kuten 0,5~5 #:iset suolahappo- ja rikkihappoliuokset tai karboksyylihappo, jonka pKa on pienempi kuin b,0, kuten muurahaishappo, klooratut etikkahapot, kuten mono-, di- tai trikloorietikkahappo. Suositeltava happo on muurahaishappo.

Kuten edellä on mainittu, kemiallinen pelkistys suoritetaan dimetyylifor-mamidin tai dimetyyliasetamidin läsnäollessa. Käytettävän DMF:n tai DMA:n määrä ei ole kriittinen edellyttäen, että sitä on läsnä katalyyttinen määrä, joka vastaa vähintään noin yhtä painoprosenttia käytetyn pelkistiraen määrästä. On kuitenkin edullista käyttää eräissä tapauksissa suurempia määriä DMF:ää tai DMA:ta 5 59104 lähtöaineen liukoisuuden parantamiseksi.

Kemiallista pelkistintä käytetään edullisesti ylimäärin. Esimerkiksi suositeltavaa pelkistintä, sinkkiä, käytetään 2...10-kertaista ylimäärää.

Vastaavasti pelkistimen kanssa käytettävää happoa käytetään edullisesti ylimäärin.

Pelkistävä korvausreaktio voidaan suorittaa 3-substituoidulle metyylikefa-losporiinille sen ollessa vapaana happona tai sen suolana tai esterinä. Jos kar-boksyylihapon suojaryhmä on kuitenkin hapan labiili esteri- tai anhydridiryhmä ja käytetään edullista kemiallista pelkistysainetta, sinkkiä, muurahaishapon läsnäollessa, labiilissa esteri voi hajota, jolloin muodostuu kaavan I mukaista 3-metyleenikefaamia vapaana happona.

Jos kaavassa III tarkoittaa karboksyylihappoa suojaavaa esteriryhmää, kuten p-metoksibentsyyliä, ja hydraus suoritetaan Raney-nikkelillä, esteriryhmä pysyy oleellisesti muuttumattomana. pelkistävän korvausreaktion· aikana. Vastaava tulos saadaan, jos käytetään sinkkiä ja muurahaishappoa. Jos kuitenkin palladiumia käytetään sellaisenaan tai tukiaineen kanssa hydräuskatalys&attorina, substituoi-dun bentsyylin kanssa, voi tapahtua esteriryhmän huomattavaa hydrogenolyysiä erikoisesti silloin, kun pelkistävä korvausreaktio suoritetaan korkeahkoissa lämpötiloissa.

Vastaavasti haluttaessa valmistaa kaavan I mukaista 3-metyleenikefaami-U-karboksylaattia, jossa R1 on karboksyylihappoa suojaava ryhmä, jolla on taipumusta hajota pelkistävässä korvausreaktiossa, voidaan ensin valmistan, suojaamatonta 3-metyleenikefaami-i+-karboksyylihappoa, 3-metyleenikefaami-U-karboksyylihapon pelkistävän korvausreaktion jälkeen reaktiotuote voidaan eristää ja suojata sitten halutulla esteriryhmällä esteröimällä tai sm seka-anhydridi etikka- tai pro- pionihapon kanssa voidaan valmistaa sinänsä tunnettujen menetelmien avulla. Esi- 3 merkiksi 3-etoksitionokarbonyylitiometyyli-7~amino-^ -kefeemi-^-karboksyylihappo, joka on saatu annettaessa 7_aminokefalosporaanihapon (7ACA) reagoida etyyliksan-taatin kanssa, voidaan hydrata Raney-nikkelin läsnäollessa, jolloin saadaan 3-metyleeni-7~aminokef aarni-1*-karboksyylihappoa. Kefaamihappo esteröidään sitten tunnettujen menetelmien aVulla kaavan I mukaisen halutun esterin saamiseksi .

Kaavan III mukaisissa yhdisteissä, joissa merkitsee ryhmää -SO^ M+, tapahtuu pelkistävä korvausreaktio katalyyttisissä hydrausolosuhteissa, edullisesti Raney-nikkelin läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan I mukaista 3-metyleenikefaamia tyydyttävin saannoin. Jos kuitenkin pelkistävä korvausreaktio suoritetaan happamissa pelkistysolosuhteissa, kuten esimerkiksi sinkillä muurahaishapon ja dimetyyliformamidin läsnäollessa, muodostuu vain vähäisiä määriä 3-metyleenikefaa-mi-U-karboksyylihappoa tai sen esteriä.

6 59104

Valmistettaessa kaavan I mukaisia B-metyleeni-T-aminokefaami-^-karboksyyli- happoja, estereitä ja suoloja edellä esitetyn pelkistävän korvausreaktion avulla . . 3 muodostuu tavallisesti sivutuotteina vastaavia isomeerisia 3-metyyli-7~amino-A - kefeemi-t-karboksyylihappoja, estereitä tai suoloja ja eräissä tapauksissa vastaa- o vaa 3-metyyli-4i -kefeemi-isomeeria.

3

Pelkistystuoteseos, joka sisältää 3-metyleenikefaamia ja 3-metyyli-A - ja 2 Δ -kefeemihappoja, estereitä tai suoloja, voidaan fraktioida kromatografisesti sopivalla absorbentilla erillisiksi isomeerisiksi pelkistystuotteiksi. Kromatografisia absorbentteja, kuten piihappogeeliä ja alumiinioksidia voidaan käyttää komponenttien erottamiseen. Vaihtoehtoisesti pelkistystuoteseos voidaan fraktioida vastaaviksi isomeereikseen fraktioivan uudelleenkiteytyksen tai preparatiivisen ohutkerroskromatografian avulla sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti.

Tämän keksinnön mukaisilla 3-metyleenikefalosporiineilla on verrattain alhainen antimikrobinen aktiivisuus. Ne ovat kuitenkin arvokkaita välituotteita valmistettaessa desasetoksikefalosporiini-antibiootteja, joilla on voimakas antimikrobinen aktiivisuus.

3-eksometyleenillä substituoitujen kefalosporiinien muuttaminen isomeroi-3 maila 3-metyyli-7-amino-A -kefeemi-U-karboksyylihapoiksi on esitetty oheisessa yksinkertaistetussa reaktiokaaviossa

1JH_--N ^ HH,·-,- ------N

2 i -^ 2 | j M 1=CHq J_________M —chr

/““γ' Y

C00R·, C00R·, jossa R^ merkitsee samaa kuin edellä.

Isomerointi suoritetaan sekoittamalla 3-metyleenikefaamihappoa tai sen esteriä, joka on valmistettu 3-substituoidusta metyylikefalosporiinihaposta tai esteristä pelkistävällä korvausreaktiolla, aproottiseen liuottimeen, jolla on suuri dielektrisyysvakio, ja voimakkaasti emäksiseen tertiääriseen orgaaniseen amiiniin. Aproottisilla liuottimilla, joita voidaan käyttää isomerointiprosessis-sa, on suuri dielektrisyysvakio; tällaisia ovat esimerkiksi dimetyylisulfoksidi, dimetyyliasetamidi ja dimetyyliformamidi. Edullisesti käytetään dimetyyliaset-amidia (DMA).

Amiinia käytetään edullisesti ylimäärin 3-metyleenikefaamiyhdisteen määrään verrattuna, mutta pienempikin määrä riittää tarvittavaan isomeroitumiseen. Useissa tapauksissa isomerointi etenee tyydyttävästi lisättäessä reaktioseokseen 7 59104 muutamia tippoja amiinia katalysaattoriksi.

Isomerointi suoritetaan edullisesti huoneen lämpötilassa, ja sen on havaittu etenevän nopeasti noin 20°C:n ja 35°C:n välisellä lämpötila-alueella. Isome-rointiseosta sekoitetaan kuitenkin tavallisesti huoneen lämpötilassa noin 12 tuntia, jotta kaksoissidos isomeroituisi täydellisesti ekso-asemasta endoaseraaan.

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat arvokkaita välituotteita valmistettaessa desasetoksikefalosporiiniantibiootteja, esimerkiksi kefaleksiiniä.

Erikoisen käyttökelpoinen kaavan I mukainen yhdiste valmistettaessa 7~ aminodesasetoksikefalosporaanihapporunkoa on 3-eksometyleenillä substituoidun 7-aminokefaami-l+-karboksyylihapon trimetyylisilyyliesteri (R.j = trimetyylisilyyli ). Tällöin 3-metyleeni-7-aminokefaami-l+-karboksyylihapon ja asetonitriilin suspensioon lisätään sekoittaen trimetyylisilyloivaa ainetta, kuten N-(trimefcyylisi-lyyli)asetamidia tai bis-trimetyylisilyyliasetamidia trimetyylisilyyliesterin muodostamiseksi. Esterin muodostuessa saadaan liuos. Tämän jälkeen lisätään tertiääristä orgaanista amiinia, kuten trietyyliamiinia kaksoissidoksen isomeroimiseksi ekso-asemasta endo-asemään, jolloin saadaan 7~ADCA:n trimetyylisilyyliesteri-liuos. Liuos laimennetaan vedellä, ja sen pH säädetään arvoon noin 3,5 7-ADCA:n trimetyylisilyyliesterin hydrolysoimiseksi, jolloin muodostuu 7-ADCA:n kiteinen sakka.

7-ADCA suodatetaan erilleen, ja sen jälkeen se voidaan asyloida halutulla asyyliryhmällä, esimerkiksi aminoryhmällä suojatulla fenyyliglysiiniasyyliryhmäl-lä antibioottisena aineena käytettävän kefaleksiinin saamiseksi.

Vaihtoehtoisesti asylointi voidaan suorittaa 7~ADCA:n trimetyylisilyyli-esterille in situ minkä jälkeen kefaleksiinin trimetyylisilyyliesteri otetaan talteen. Esteri hydrolysoidaan vedellä, jolloin saadaan kefaleksiiniä. 7~ADCA:n asylointi aminosuojatulla fenyyliglysiinillä, esimerkiksi (N-(t-butyylioksi-karbonyyli)-ryhmällä suojatulla fenyyliglysiinillä voidaan suorittaa sinänsä tunnettujen asylointimenetelmien mukaisesti. Vastaavasti 7~ADCA:n ja kefaleksiinin trimetyylisilyyliesterien hydrolyysi suoritetaan sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat tarkemmin tätä keksintöä (esimerkki 2 kuvaa lopputuotteen valmistusta).

Esimerkki 1 3 11 g (31 mmol) 3-etoksitionokarbonyylitiometyyli-7-amino-A -kefeemi-l+-kar-boksyylihapon natriumsuolaa liuotettiin 260 ml:aan 5-/J:ista natriumbikarbonaatti-liuosta, liuokseen lisättiin 1+0 ml etanolia, ja näin muodostunutta liuosta hyd-rattiin 12 tuntia huoneen lämpötilassa 3,2 atm vetypaineessa käyttämällä 66 g Raney-nikkeliä katalysaattorina. Reaktioseos suodatettiin katalysaattorin erottamiseksi, ja suodos jäähdytettiin jäähauteessa sekä tehtiin happameksi pH arvoon 8 59104 3,5 väkevällä suolahapolla. Saostunut reagoimaton lähtöaine (n. 2,2 g) suodatettiin erilleen, ja suodos haihdutettiin tyhjössä pieneen tilavuuteen. Raaka reaktiotuote saostui konsentraatista, minkä jälkeen se suodatettiin. Raaka reaktio-tuote kiteytettiin vedestä, jolloin saatiin **,5 g (85~i?:inen saanto) puhdasta 3-eksometyleenillä substituoitua 7-aminokefaami-U-karboksyylihappoa.

Tuotteen ydinmagneettisessa resonanssispektrissä dimetyylisulfoksidissa Dg oli seuraavat signaalit (7-arvot): 6,h9 {g, 2H, H^), 5,k6 (d, Ui, CgH), 5,07 (s, 1H, C^H), *+,80 (leveä s, 3H, CH^ ja C^H) ja U,13 (leveä s, puuttui DgOtn läsnäollessa).

Massaspektrissä oli huippu kohdassa 21U m/e, tämä vastasi yhdistettä CqH^qN^O^S, jonka laskettu molekyylipaino oli 21U,2.

Infrapunaspektrissä oli huiput kohdissa 5,65 (β-laktaami) ja 6,1 (kar-boksylaatti)

Yhdisteen CgH^N^O^S alkuaineanalyysi: teoria: C i+U,85 H U,70 N 13,08 havaittu: C **5,12 H *+,73 N 13,11

Vastaavalla tavalla valmistettiin p-metoksibentsyyli-7-amino-3_eksomety-leenikefaami-**-karboksylaatti ja p-nitrobentsyyli-7-amino-3-eksometyleen.ikefaami-**-karboksylaatti. Molemmat yhdisteet eristettiin ja karakterisoitiin hydroklori-disuolana ja p-tolueenisulfonihapposuolana (tosylaattisuolana).

P-metoksibentsyyli-7~amino-3-eksometyleenikefaarai-**-karboksylaa.ttihydro-kloridin karakterisointi:

Alkuaineanalyysi, laskettu kaavalle CgH^Nj^OySCl: teoreettinen: C 51,82; H 5,16; N 7,55 löydetty: C 51,65; H 5,0U; N 7,72

Sulamispiste >165 C (haj.), kiteytetty metyleenikloridista, etanolista ja dietyylieetteristä.

NMR (ΤβΟ Mc, DMSO-d) ^6,^+7 (s, 2H, C-2H2), 6,23 (s, 3H, p-OC^), 5,12 (d, 1H, C-6H), l*,9-**,6 (m, 6H2, C-**H, esteri CH2, C-3 CH2, ja C-7H), ja 2,86 (q., UH, aromaattinen H) p-metoksibentsyyli-7-amino-3-eksometyleenikefaami-*+-karboksylaatti-p-tolueenisulfonaatin karakterisointi:

Alkuaineanalyysi, laskettu kaavalle ^23^26N2^7^2: teoreettinen: C 5**,53; H 5,17; N 5,53 löydetty: C 5*+,33; H 5,05; N 5,*+7 NMR (A60 Mc, DMSO-dg) ^7,69 (s, 3H, p-CHg), 6,Ul (2d, 2H, C-2 Η?), 6,23 (s, 3H, p-OCHg), 5,0 (d, 1H, C-6H), **,85-*+,55 (m, 6, C-*+H, esteri CH2, C-3 CH2 ja C-7H), ja 3,2-2,2 (2 q, 8H, aromaattinen H).

9 59104 p-nitrobentsyyli-7-amino-3-eksometyleenikefaami-U-karboksylaattihydrokIori-d.in karakterisointi:

Alkuaineanalyysi, laskettu kaavalle C, ,-H, xN-O^SCl: 151035 teoreettinen: C U6,69; H U,18; N 10,89 löydetty: C U6 ,U0; H U,20; N 10,62 NMR (A60 Mc, DMS0-d6) ^6,3U (ABq, 2H, C-2 H0), U ,9Ö (d, 1H, C-6l(), h ,7~h ,k (m, 6h, C-1+H, esteri CH^, C-3 CH^, ja C-7H), ja 2,0 (q, kli, aromaattinen H). Sulamispiste 160-176 C (haj.)» kiteytetty metyleenikloridista, etanolista ja dietyylieetteristä.

p-nitrobentsyyli-7-amino~3~eksometyleenikefaajni-^-karboksylaatti-p-toluee-nisulfonaatin karakterisointi:

Alkuaineanalyysi, laskettu kaavalle C22H23N3°8S2: teoreettinen: C 50,66; H 14,1+5; N 8,06 löydetty: C 50,1+1; H 1+,51; N 7,86 NMR (Τ6θ Mc, DMSO-dg)T7,70 (s, 3H, p-CHg), 6,39 (s, 2H, C-2 Hg), 1+,98 (d, 1H, C-6H), 1+,7-1+,3 (m, 6h, C-l+H, esteri CHn, C-3 CH„, ja C-JH), ja C. C.

2,95-1,68 (2q, 8H, aromaattinen H).

Sulamispiste 11+5~1820C (haj.), kiteytetty etyyliasetaatista ja etanoli/ dietyylieetteristä.

Esimerkki 2

Suspensioon, joka muodostui 1 g:sta 3-metyleeni-7-aminokefaami-l+-karbok-syylihappoa ja 20 ml:sta asetonitriiliä, lisättiin hyvin sekoittaen 3 g N-(tri-metyylisilyyli)asetamidia. Muodostuneeseen liuokseen lisättiin 3 tippaa trietyy-liamiinia, ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Reak-tioliuos laimennettiin vedellä, ja liuoksen pH säädettiin arvoon 3,5 suolahapolla. Reaktiotuote, 3-metyyli-7-amino-A8-kefeemi-l+-karboksyylihappo (7-ADCA) muodostui kiteisenä saostumana happamesta reaktioliuoksesta.