FI118918B - CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö valmistettaessa lääkettä - Google Patents

Description

118918 CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö valmistettaessa lääkettä - Användning-en av en CD40-reseptorbindar vid framställning av ett läkemedel Tämän keksinnön kohteena on CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö valmis-5 tettaessa lääkettä epiteelisolujen lisääntymisen estämiseksi tai epiteelisolujär-jestelmien karsinoomien hoitamiseksi ja neoplastisten epiteelisolujen alttiuden tehostamiseksi antineoplastisella lääkeaineella indusoitua apoptoosia vastaan.

Epiteelisolujärjestelmien karsinoomia tiedetään voitavan hoitaa antineoplasti-10 silla aineilla, joiden tarkoituksena on indusoida apoptoosi. Tällaisista aineista esimerkkejä ovat sytokiinit ja kasvutekijät, kuten kasvainkasvutekijä βι (TCF-βι), anti-Fas ja tuumorinekroositekijä-α (TNF-a) ja muut antineoplastiset aineet, kuten interferoni-y (IFN-γ), cis-platiini, mitomysiini C, syklofosfamidi, aktinomysiini D, doksorubisiini, vinkristiini, etoposidi, 5-fluorourasiili, metot-15 reksaatti ja säteilytysagenssit. Jatkuvasti yhä kuitenkin tarvitaan muita lääkeaineita epiteelisolujärjestelmien karsinoomien hoitoon ja/tai tehostamaan olemassa olevien antineoplastisten aineiden vaikutusta.

·:· Esillä olevan keksinnön ensimmäisen osan kohteena on CD40-reseptorin sito- • « · · ' 20 van aineen käyttö epiteelisolujen lisääntymisen estämiseen tai epiteelisolujär-jestelmien karsinoomien hoitamiseen tarkoitetun lääkkeen valmistamiseen.

• · • · · • ·· • ♦ • · ·* 1 Esillä olevan keksinnön toisen osan kohteena on CD40-reseptorin sitovan ai- • · · neen käyttö valmistettaessa lääkettä, jolla tehostetaan neoplastisten epitee-25 lisolujen alttiutta antineoplastisella lääkkeellä indusoidulle apoptoosille.

• · • ·· • · · • · * * ]·* Esillä olevan keksinnön kolmannen osan kohteena on CD40-reseptorin sitovan • · *".* aineen käyttö yhdistelmänä CD40:n indusorin kanssa epiteelisolujen lisäänty- * · misen estämiseen tai epiteelisolujärjestelmien karsinoomien hoitamiseen.

* · · : ·* 30 • · · » · • · • · · 2 118918

Esillä olevan keksinnön neljännen osan kohteena n CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö yhdistelmänä antineoplastisen lääkkeen kanssa epiteelisolujär-jestelmien karsinoomien hoitamiseen.

5 Antineoplastinen aine voi olla valittu tunnetuista sytokiineista ja kasvutekijöistä, kuten seuraavista: kasvainkasvutekijä βι (TGF-pi), anti-Fas ja tuumorine-kroositekijä-α (TNF-a) ja muut antineoplastiset aineet, kuten interferoni-γ (IFN-γ), cis-platiini, mitomysiini C, syklofosfamidi, aktinomysiini D, doksorubi-siini, vinkristiini, etoposidi, 5-fluorourasiili, metotreksaatti ja säteilytysagenssit. 10 Tätä antineoplastista ainetta annetaan tavallisesti annos, joka on yhdenmukainen tälle aineelle suositellun määrän kanssa.

CD40:n indusori voi olla γ-interferoni (IFN-γ), tuumorinekroosifaktori-a (TNF- a) tai mikä tahansa muu tunnettu CD40:n ekspression indusori. Tätä CD40:n 15 indusoria annetaan tavallisesti annos, joka on yhdenmukainen tälle kyseiselle indusorille suositellun määrän kanssa.

CD40 on 50-kDa tyypin 1 glykoproteiini, joka kuuluu hermosolujen kasvuteki-·:· jän/tuumorinekroositekijän reseptoreiden (NGF-R/TNF-R) perheeseen ja joka : V: 20 ekspressoituu B-lymfosyyttien pinnalla (kts. Noelle et ai., Immunol. Today, 13,431-433, 1992; ja Smith et ai., Cell, 76,959-962,1994). Sekä normaaleil- • · V*: la että neoplastisilla B-soluilla, jotka herkästi menevät tai jotka ajetaan apop- ·· • ♦ toosiin CD40:n sitoutuminen toimii tehokkaana pelastussignaalina (eloonjään- • · ♦ tisignaalina), joka osittain välittyy Bcl-2:n ekspression up-regulaation kautta ;.t 25 (kts. Liu et ai., Nature, 342,929-931,1989). Tämä vaikutus osoitettiin alku- • ·· aan käyttämällä ligandia jäljitteleviä monoklonaalisia vasta-aineita (mAb) ja • 4 [il myöhemmin vaikutus varmistettiin rekombinantti-ligandilla (CD40L) (kts. Noel- • · *]\* le et ai., supra).

• * • · · • * · 30 Lisäksi tiedetään, että sekä CD40 että Bcl-2 ekspressoituvat normaaleissa ty- • · 1 viepiteelisoluissa ja lukuisissa eri karsinoomissa, mukaanlukien munasarjan, 3 118918 nenänielun, keuhkojen ja rinnan karsinoomissa (kts. Young et ai., Int. J. Cancer, 43, 786-794,1989; ja Hockenbery et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 88, 6961-6965,1991). Nämä tutkimukset viittaavat siihen, että CD40-reitti voi olla aktiivinen karsinoomissa, ja että seurauksena ollut Bcl-2:n ekspressio voi suo-5 jata näitä kasvaimia apoptoottiselta solukuolemalta, mukaanlukien tavanomaisessa syövän kemoterapiassa käytettyjen sytotoksisten lääkkeiden indusoimal-ta kuolemalta (kts. Dive et ai., Semin. Cancer Biol, 3,417-427,1992). CD40:n ja Bcl-2:n ekspression rajoittuminen kerrostuneen, suomumaisen epiteelin lisääntyvään tyviosaan on lisäksi osoitus tämän reitin mahdollisesta osuudesta 10 normaalin kasvun säätelyssä ja epiteelisolujen erilaistumisen apoptoottisessa prosessissa.

Edellä olevan valossa oli yllättävää havaita, että vastoin kuin B-soluilla tehdyissä tutkimuksissa CD40:n stimulointi joko alkuperältään normaaleissa tai 15 neoplastisissa soluissa sai aikaan kasvun pysähtymisen ja lisäsi alttiutta anti-neoplastisella aineella indusoidulle apoptoosille.

CD40:n sitovista aineista esimerkkeinä voidaan käyttää ligandia jäljitteleviä ·:. monoklonaalisia vasta-aineita, kuten esimerkiksi G28.5 (hybridoma, joka on «··· 20 saatavissa tallennusnumerolla HB-9110 American Type Tissue Culture Collec- « » tion-kokoelmasta, Rockville, Maryland, USA), S2C6 (Paulie et ai, Cancer Imm-munology and Immunotherapy, 20,23-28, 1985) ja CD40-ligandien luonnossa ·· : **· esiintyvät tai rakennetut muodot, joista eräs esimerkki on CD40L CD40L on »·« *·*: TNF:n kanssa homologinen 39-kDa-tyypin II integraalinen kalvoproteiini, joka .. 25 voidaan indusoida T-solujen päällä sen jälkeen, kun ne on aktivoitu T-solujen • « [·... reseptorin kautta (kts. Clark 8i Ledbetter, Nature, 367,425-428,1994).

• « CD40-CD40L-pari on osa laajenevasta perheestä, joka muodostuu TNF-R/TNF- • · • · perheisiin pohjautuvista keskinäisvaikutteisista reseptoriligandi-molekyyleistä, • · jotka osallistuvat sellulaariseen aktivointiin ja apoptoosin säätelyyn kohdeso- : *: 30 luissa (Smith et ai., supra).

4 118918 CD40:n sitovat aineet voidaan antaa intravenöösinä, subkutaanina tai intrape-ritoneaalisena ruiskeena tai infuusiona tai ne voidaan injisoida suoraan kas-vainkohtaan puhdistetussa tai humanisoidussa muodossa. CD40:n annosmäärä riippuu siitä, onko se monoklonaalinen vasta-aine tai CD40L, ja voi olla mik-5 rogrammojen - milligrammojen alueella.

Farmaseuttisesti hyväksyttävät kantajat (laimentimet, apuaineet jne.), joita käytetään CD40:n sideaineen kanssa, voivat olla valitut mistä tahansa tämän tyyppisille lääkkeille tunnetuista kantajista. Niiden valinta riippuu mm. anta-10 niistävästä. Injisoitavan seoksen valmistamista varten voi kantaja esimerkiksi olla valittu alkaen yksinkertaisista preparaateista, kuten ihmisen seerumialbu-miinia sisältävästä fosfaattipuskuroidusta suolaliuoksesta aina monimutkaisempiin liuoksiin, kuten soluviljelyalustoihin asti.

15 Esillä olevaa keksintöä kuvataan seuraavassa yksityiskohtaisemmin seuraavis-sa esimerkeissä viitaten mukaan liitettyihin piirustuksiin, joissa:

Kuvio 1 esittää 48 tunnin anti-CD40 mAb G28.5-hoidon vaikutusta muna-.:. sarjakarsinoomasolulinjan A2780 kasvuun; arvot ovat kolmen mää-

• •M

:V: 20 rityksen keskiarvoja kolmesta erillisestä kokeesta eloonjäännin pro- ·:· sentuaalisena laskuna hoitamattomiin kontrolleihin verrattuna.

···· • · • ♦ · • ♦· • · ** : *·· Kuvio 2 osoittaa, että 2780CP-solulinjan 24 tunnin esi-inkubointi 150 U/ml *·« ** IFN-y:n kanssa aiheuttaa solukasvun 26 % laskun, kun mukana on .. 25 2 pg/ml G28.5 mAb:a.

• · • ·· ··· it : [·[ Kuvio 3 esittää ajan ja G28.5 mAb:n konsentraation vaikutusta EJ-virtsa- • · ***\ rakko-karsinoomasolulinjan solujen kasvuun.

• *

I* I

: 30 Kuvio 4 esittää anti-CD40 mAb:n vaikutusta rotta-l/CD40-transfektantin • · *···* (CI.8) kasvuun.

5 118918

Kuvio 5 esittää G28.5 mAb:n ja 5μΜ cis-platiinin yhdistelmän sytotoksisuu-den tehostumista munasarjakarsinoomasolulinjassa A2780; sytotok-sisuus on mitattu 48 tunnin MTT-menetelmällä ja arvot ovat kolmen 5 määrityksen keskiarvoja kolmesta erillisestä kokeesta eloonjäännin prosentuaalisena laskuna käsittelemättömiin kontrolleihin verrattuna.

Kuvio 6 esittää cis-platilnilla indusoidun sytotoksisuuden tehostumista EJ-10 virtsarakkokarsinoomasolulinjassa inkuboitaessa 48 tuntia 2 pg/ml G28.5 mAb:n kanssa.

Kuvio 7 esittää rotta-1/CD40 CI.8-solujen ja 1 pg/ml G28.5 mAb:n yhteis-inkuboinnin vaikutusta cis-platiinin eri konsentraatioihin; arvot ovat 15 kolmen määrityksen keskiarvoja kolmesta erillisestä kokeesta.

Kuvio 8 esittää 48 tunnin CD40L-hoidon vaikutusta munasarjakarsinooma- solulinjan A2780 kasvuun; arvot ovat kolmen määrityksen keskiar- ... voja kolmesta erillisestä kokeesta eloonjäännin prosentuaalisena :·*:·*. 20 laskuna hoitamattomiin kontrolleihin verrattuna.

• · · • · ··· *

IlM

Kuvio 9 esittää ajan ja CD40L:n konsentraation vaikutusta EJ-virtsarakko- vt * f·.. adenoomakarsinoomasolulinjan solujen kasvuun.

• · ·

• « I

• · · 25 Kuvio 10 esittää CD40L:n vaikutusta rotta-l/CD40-transfektantin (CI.8) kas- ·· • **’ vuun.

I»· « · • I • · « · ·

Kuvio 11 esittää cis-platiinilla indusoidun sytotoksisuuden tehostumista 0-virtsarakkokarsinoomasolulinjassa inkuboitaessa 48 tuntia 100 U/ml

Fv 30 CD40L:n kanssa.

• · · · • « ·*· 6 118918

Esimerkki 1

Soluviljelmä 5 Ihmisen munasarjakarsinoomasolulinjaa A2780 ja sen cis-platiinille resistenttiä 2780CP-johdannaista (kts. Masuda et ai., Cancer Res., 50,1863-1866,1990), EJ-virtsarakkokarsinoomasolulinjaa (tallennusnumero 85061108, European Collection of Animal Cell Cultures, Porton Down, UK) ja rotta-l-fibroblasteja (Lania et ai., Virology, 101, 217-232,1980) ylläpidettiin keskeyttämättä RPMI 10 1640-alustassa (GIBCOBRL Life technologies Ltd, Paisley, Skotlanti), jota oli täydennetty 10 % FCS:lla (vasikansikiöseerumi - ICN Flow, Thane, Oxfordshire, Englanti), 2 mM glutamiinilla, ja penisilliini (1000 U/ml) ja streptomysiini (1 mg/ml)-antibiooteilla (Sigma Co. Ltd, Poole, Dorsete, Englanti) 37 °C:ssa 5 % C02-atmosfäärissä.

15 CD40:a ekspressoivat rotta-l-fibroplastit muodostettiin elektroporoimalla CD40:n ekspressointivektori (noudattamalla Stamenkovic'in et ai. kuvaamaa menettelyä, EM BO J., 8,1403-1410,1989) sopivan, lääkkeelle resistentin pUC LTR neo-plasmidin kanssa suhteessa 10:1. Rotta-l-solujen stabiilit, CD40:a M»· 20 ekspressoivat transfektantit eristettiin pitkäaikaisen Geneticin G418-antibioo- • · tille altistamisen jälkeen, jolloin lääkkeelle resistenttien solujen yksittäiset pe- !.**; säkkeet otettiin talteen ja näitä viljeltiin erikseen yksittäisinä pesäkkeinä. Näyt- ·« : '·· teitä näistä transfektanteista on tallennettu 10.11.1995 Budapestin sopimuk-

• M

:·: ** sen mukaisesti tallennusnumerolla 951110100 European Collection of Cell Cul- .. 25 tures-kokoelmaan, Centre for Applied Microbiology and Research, Salisbury, • · **...’* Wiltshire SP4 OJG, Iso-Britannia.

• · • * • · · ··· • · ***\ CD40:n ekspressio edellä annetuissa solulinjoissa vahvistettiin FACS-analyysillä käyttämällä anti-CD40-vasta-aine, G28.5 mAb:a. Lyhyesti kerrottuna solut • · · :t'·' 30 otettiin talteen trypsi noi nti käsittelyn jälkeen, pestiin fosfaattipuskuroidussa • # ’**·* suolaliuoksessa (PBS) ja suspendoitiin uudelleen 0,5 pg/ml G28.5 mAb:aan.

7 118918

Soluja inkuboitiin 1 tunti 4 °C:ssa, minkä jälkeen ne pestiin PBS:ssa ja sus-pendoitiin uudelleen FITC-konjugoitu vuohen anti-hiiri IgG:n (Sigma Chemical Co. Ltd, Poole, Dorset, Englanti) 1:50 laimennokseen. Soluja inkuboitiin edelleen 30 minuuttia 4°C:ssa, minkä jälkeen ne pestiin ja suspendoitiin lopuksi 5 uudelleen 1-prosenttiseen paraformaldehydiin ennen FACS-standardianalyysiä.

Solujen käsittely ja solukasvun määrittäminen

Solujen lisääntymisen inhibitio arvioitiin käyttämällä Mossman'in kolorimetristä 10 menetelmää (kts. Mossman, J. Immunol. Meths., 65, 55-63, 1983). Lyhyesti kerrottuna solut saatettiin normaaliin solusykliin maljaamalla ne yön ylitse 96-kaivoiselle levylle. Sen jälkeen lisättiin G28.5 mAb:n eri konsentraatioita ja näiden vaikutus solujen kasvuun arvioitiin sopivan ajan jälkeen (48, 72 tai 96 tuntia) lisäämällä 20 μΙ Sigma'lta saatua 5 mg/ml MTT:a (3-(4,4-dimetyyli-15 tiatsol-2-yyli)-2,5-difenyylitetratsoliumbromidi) PBS:ssa. Soluja inkuboitiin edelleen 5 tuntia 37 °C:ssa, näin muodostuneet formatsaanikiteet liuotettiin dimetyylisulfoksidiin ja optinen tiheys (O.D.) mitattiin 550 nm aallonpituudella Becton Dickinson Multiscan-laitteella. Uusissa koesarjoissa solut käsiteltiin 2 tuntia eri cis-platiini-konsentraatioilla yhdessä G28.5 mAb:n kanssa tai ilman ···· ;v. 20 tätä. Sen jälkeen solut pestiin kaksi kertaa PBS:ssa ja 200 pl:lla tuoretta alus- • · ··· taa, joka sisälsi G28.5 mAb:a. Solujen kasvu määritettiin 48 tunnin kuluttua ·«·· käyttämällä MTT-menetelmää edellä kuvatulla tavalla.

·· • · ♦ ·· ·«· :.J: Anti-CD40 mAb:n vaikutus karsinoomasolujen kasvuun 25 **

Tutkimuksen kohteena oli anti-CD40 mAb G28.5:n vaikutus A2780, 2780CP ja • ♦ **:** EJ-karsinoomasolulinjojen sekä CD40 rotta-l-transfektantin (rotta- 1/CD40 CI.8) solujen kasvuun. G28.5 mAb aiheutti 10 pg/ml optimikonsentraatiossa \ * munasarjasolulinjan A2780 eloonjäännin 29-prosenttisen laskun verrattuna • · · ! V 30 kontrolliin 48 tunnin käsittelyn jälkeen (kuvio 1).

··· t · t · «I· 8 118918

Kun cis-platiinille resistentti 2780CP~solulinja käsiteltiin samanlaisissa olosuhteissa G28.5 mAb:lla, mitään vaikutusta ei havaittu. Tämä johtui luultavasti CD40:n ekspression alhaisesta tasosta tässä solulinjassa. Kuitenkin, kun 2780CP-solulinja käsiteltiin 24 tunnin ajan 150 U/ml γ-interferonilla (IFNy) ja 5 sen jälkeen inkuboitiin 10 pg/ml G28.5:n kanssa, eloonjäänti laski noin 22 %, mikä oli yhtäpitävä y-interferonin aiheuttaman CD40:n induktion kanssa (kuvio 2) . Samanlaisia CD40:n aktivoitumisvaikutuksia havaittiin EJ-virtsarakkokarsi-noomasolulinjalla (kuvio 3). G28.5 mAb:n vaikutus EJ-solulinjaan riippuu sekä ajasta että konsentraatiosta. Suurin vaikutus oli 96 tunnin kohdalla, jolloin 10 käsittely 2 pg/ml G28.5:lla aiheutti eloonjäännin 27-prosenttisen laskun (kuvio 3) .

CD40:n vaikutuksen spesifisyys tutkittiin käyttämällä transfektoidun CD40:n ekspressoivia rotta-l-fibroplasteja. CD40:n stimulointi G28.4 mAb:lla inhiboi 15 solujen kasvun, kuten käy ilmi kuviosta 4.48 tunnin inkubointi 2 pg/ml G28.5 mAb:lla indusoi tutkitussa transfektantissa (klooni 8) solujen kasvun 22-pro-senttisen laskun (kuvio 4).

CD40:n aktivoinnin aiheuttama cis-platiinilla indusoidun solukuoleman tehos-

MM

20 tuminen • · · • · M« ···« ϊ\ϊ Edellä annettujen solulinjojen käsittely G28.5 mAb:lla tehosti syövänvastaisten • ’·· lääkkeiden, kuten cis-platiinin sytotoksista vaikutusta. Altistaminen 10 pg/ml • · · v : G28.5 mAb:lle lisäsi A2780-solulinjassa 5 pM cis-platiinin soluja tappavan te- 25 hon 46 - 61 % (kuvio 5), mikä on tilastollisesti merkitsevä vaikutus. Samanlai- • · siä tuloksia saatiin El-solulinjalla, joka oli käsitelty 5 pM cis-platiinilla 2 pg/ml T G28.5 mAb:n läsnäollessa (kuvio 6).

·#· • · • · ···

Myös rotta-1/CD40 CI.8-solulinjan käsittely 1 pg/ml G28.5 mAb:lla tehosti cis- ·· · : Y* 30 platiinin sytotoksista vaikutusta siirtämällä IC50-arvo 6 pM:sta (+/-0,9) 4,2 ft·· :···: pM:aan (+/-0,3), mikä merkitsee 1,6-1,8-kertaista herkkyyden kasvua lääk- 9 118918 keelle (kuvio 7). Mitään vaikutusta ei havaittu parentaaleissa transfektoimat-tomissa rotta-l-soluissa).

Esimerkki 2 5

Soluviljelmä Käytetty soluviljelmätekniikka oli sama kuin mitä edellä on kuvattu esimerkissä 1.

10

Solujen käsittely ja solujen kasvun määrittäminen

Solujen lisääntymisen inhibitio arvioitiin käyttämällä Mossman'in kolorimetristä menetelmää (Mossman, J. Immunol. Meths. 65, 55-63, 1983). Lyhyesti kerrot-15 tuna solut saatettiin normaaliin solusykliin maljaamalla ne yön ylitse 96 kaivon levylle. Sen jälkeen lisättiin eri CD40L-konsentraatioita (CD40:n sitovan ligan-din rakennettu liukoinen muoto (Immunex Research and Development Corporation, 51 University Street, Seattle, Washington, USA) ja määritettiin näiden vaikutus solujen kasvuun sopivan ajan jälkeen (48,72 tai 96 tuntia) lisäämällä ···· 20 20 pi Sigma'lta saatua 5 mg/ml MTT:a (3-(4,4-dimetyylitiatsol-2-yyli)-2,5-dife- • · Ψ nyylitetratsoliumbromidi) PBS:ssa. Soluja inkuboitiin edelleen 5 tuntia 37 °C:ssa, näin muodostuneet formatsaanikiteet liuotettiin dimetyylisulfoksidiin ja : *·· optinen tiheys (O.D.) mitattiin 550 nm aallonpituudella Becton Dickinson Mul- ··· : tiscan-laitteella. Toisessa koesarjassa solut käsiteltiin 2 tunnin ajan eri cis-pla- 25 tiinikonsentraatioilla CD40L:n kanssa tai ilman sitä. Sen jälkeen solut pestiin • · kaksi kertaa PBS:ssa ja 200 μΙ CD40L:lla sisältävällä tuoreella alustalla. 48 • · T tunnin kuluttua solujen kasvu määritettiin käyttämällä MTT-menetelmää edellä *·♦· *···* kuvatulla tavalla.

• * ·· · : ·: • ft • · 10 118918 CD40L:n vaikutus karsinoomasolujen kasvuun

Tutkimuksen kohteena oli CD40L:n vaikutus A2780, 2780CP ja EJ-karsinoo-masolulinjojen sekä CD40 rotta-1-transfektanti (rotta-l/CD40 CI.8) solujen 5 kasvuun. 100 U/ml CD40L aiheutti munasarjasolulinjan A2780 eloonjäännin 36-prosenttisen laskun 48 tunnin käsittelyn jälkeen (kuvio 8). CD40L:n vaikutus EJ-solulinjaan riippuu sekä ajasta että konsentraatiosta suurimman vaikutuksen ollessa 96 tunnin kohdalla, jolloin käsittely 100 U/ml CD40L:lla laski eloonjääntiä 43 % (kuvio 9).

10 CD40:n vaikutuksen spesifisyys tutkittiin käyttämällä transfektoidun CD40;n ekspressoivia rotta-1 -fibroplasteja. CD40:n stimulointi CD40L:lla inhiboi solujen kasvun, kuten käy ilmi kuviosta 10. 48 tunnin inkubointi 100 U/ml CD40L:lla indusoi tutkitussa transfektantissa (klooni 8) 28 % laskun (kuvio 15 10).

CD40:n aktivoinnin aiheuttama cis-platiinilla indusoidun solukuoleman tehostuminen M» ··>! 20 Solukuolema tehostui (kuvio 11), kun EJ-karsinoomasolulinjaa käsiteltiin 7,5 • · ·:· μΜ cis-platiinilla 100 U/ml CD40L:n läsnä ollessa.

• · • ♦ · • ·♦ • ♦ ·· • * • ·· ·* • * « ♦ ♦ Σ ·· • ♦ : ·· *·· : : ·»· ·♦· : : ··· • · ·· ·

:V

M» : : ··*

Claims (6)

118918

1. CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö valmistettaessa lääkettä epiteelisolujen lisääntymisen estämiseksi tai epiteelisolujärjestelmien karsinoomien hoita- 5 miseksi.

2. CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö valmistettaessa lääkettä neoplastis-ten epiteelisolujen alttiuden tehostamiseksi antineoplastisella lääkeaineella indusoitua apoptoosia vastaan. 10

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö yhdessä CD40:n indusorin kanssa.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen CD40-reseptorin sitovan aineen käyttö 15 yhdisessä antineoplastisen lääkeaineen kanssa.

5. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 4 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että CD40-reseptorin sitova aine on valittu ligandia jäljittelevistä monoklonaalisista vasta-aineista ja CD40-ligandien luonnossa esiintyvistä tai rakennetuista muo- ···· 20 doista. • · · • · ··· ·«··

6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että :'*♦· CD40-reseptorin sitova aine on valittu G28.5:sta (talletusnumero HB-9110 0': (ATTC)) ja CD40L:sta. 25 4# • ♦ • ·· 4·* • « • · ··· 4 44« : : 444 4 4 4 4 44 4 4 4 4 4 4 4 4 444 4 4 4 4 444 12 118918