FI115527B

FI115527B - Kasvisterolijohdannaisten käyttö ja niitä sisältäviä tuotteita

Info

Publication number: FI115527B
Application number: FI982246A
Authority: FI
Inventors: Erkki Paatero; Jarkko Helminen; Ulf Hotanen; Matti Hautala; Jani Jokiranta
Original assignee: Upm Kymmene Oyj
Priority date: 1998-10-16
Filing date: 1998-10-16
Publication date: 2005-05-31
Also published as: EP1123307A1; WO2000023461A1; FI982246A; AU6343499A; FI982246A0

Description

115527

KASVISTEROLIJOHDANNAISTEN KÄYTTÖ JA NIITÄ SISÄLTÄVIÄ TUOTTEITA

Keksinnön tausta

Keksintö liittyy steroleihin ja erityisesti kasvisterolien hydrofiilisiin 5 johdannaisiin. Keksintö koskee näiden kasvisterolijohdannaisten käyttöä sekä niitä sisältäviä ainekoostumuksia.

Kasviperäisillä steroleilla ja eräillä sterolijohdannaisilla on monia kiinnostavia ominaisuuksia ja käyttökohteita, erityisesti lääketieteessä. Näillä yhdisteillä on todettu olevan terapeuttisia vaikutuksia mm. rasva-10 aineenvaihduntaan, sydämen, munuaisten ja eturauhasen toimintaan, tulehduksiin sekä eräisiin syöpäsairauksiin. Erityisen kiinnostava käyttökohde on kasvisteroleiden käyttö veren kolesterolitason alentamiseen. Esimerkiksi β-sitosterolin kolesterolia alentava vaikutus on tunnettu jo 1950-luvulta lähtien. Vaikutus perustuu siihen, että β-sitosteroli estää kolesterolin imeytymisen suo-15 listossa. Tämän takia β-sitosterolia on käytetty jo kymmeniä vuosia veren kolesterolia alentavana lääkevalmisteena ja luontaistuotteena. β-Sitosterolin ohella β-sitostanolilla on havaittu olevan samanlaisia ja jopa edullisempia ominaisuuksia. Näiden yhdisteiden ja yleensä kasvisterolien käytön suurin ongelma on kuitenkin niiden niukkaliukoisuus öljyihin ja rasvoihin ja täydellinen liu-20 kenemattomuus veteen.

Steroleiden sisältämän hydroksyyliryhmän ansiosta sterolit voivat muodostaa estereitä esim. rasvahappojen, karboksyylihappojen, karboksyyli-happoanhydridien tai karboksyylihappokloridien kanssa. Valmistamalla tällaisia ;;· esterijohdannaisia on pyritty modifioimaan steroleiden öljy-, rasva- ja vesi- 25 liukoisuutta.

* > . Öljyihin/rasvoihin liukenevuutta on parannettu vaihtoesteröimällä kasvisteroleja rasvahappojen kanssa. Esimerkiksi WO-julkaisussa 92/19640 I » · (Raision Margariini Oy) on kuvattu kolesterolia alentava aine, joka sisältää β-sitostanolin rasvahappoesteriä tai tällaisten rasvahappoestereiden seosta.

30 Koostumuksessa käytetty β-sitostanolirasvahappoesteri on valmistettu vaih-toesteröintireaktiolla käyttäen lähtöaineena mm. rapsiöljyn metyyliesteriä ja si-tostanolia. Tällä tavalla kasvisterolien vesiliukoisuutta ei saada kuitenkaan pa-: rannetuksi.

EP-patenttijulkaisussa 0 007 474 B1 (Roecar Holdings) steroleiden 35 vesiliukoisuutta on pyritty parantamaan muodostamalla steroliglykosidien di- ja trihemiestereitä, esim. di- ja trisukkinaatteja, ja niiden suoloja. Nämä steroli- 2 115527 johdannaiset on valmistettu steroliglykosidin ja karboksyylihappoanhydridin reaktiolla. Yhdisteiden ilmoitetaan olevan terapeuttisesti aktiivisia mm. tulehdusten torjunnassa ja syöpälääkkeinä. Näillä yhdisteillä on kuitenkin se haittapuoli, että ne eivät ole stabiileja vesiliuoksissa ja lisäksi niiden valmistusmenetelmäs-5 tä johtuen yhdisteet eivät aina välttämättä ole täysin myrkyttömiä.

Keksinnön lyhyt selostus

Keksinnön tavoitteena on siten löytää uusia koostumuksia, jotka sisältävät myrkyttömiä ja luonnossa esiintyvistä yhdisteistä muodostuvia kasvi-10 sterolijohdannaisia, jotka ovat hydrofiilisiä ja siten paremmin liukenevia polaarisiin liuoksiin, kuten alkoholiliuoksiin ja erityisesti vesiliuoksiin. Keksintö koskee myös kasvisterolijohdannaisten uutta käyttöä. Keksinnön tavoitteet saavutetaan käytöllä ja tuotteella, joille on tunnusomaista se, mitä sanotaan itsenäisissä patenttivaatimuksissa. Keksinnön edulliset suoritusmuodot ovat epäitse-15 näisten patenttivaatimusten kohteena.

Kasvisteroleiden hydrofiilisyyttä ja vesiliukoisuutta on parannettu es-teröimällä kasvisteroli, kuten β-sitosteroli, hedelmähapon, esim. sitruunahapon kanssa, jolloin saatiin hydrofiilinen kasvisterolin ja hedelmähapon esteri. Näin saadut tuotteet ovat myrkyttömiä ja jo valmiiksi monissa elintarvikkeissa esiin-20 tyvistä kasviperäisistä yhdisteistä koostuvia, joten ne soveltuvat erittäin hyvin lääke- ja elintarvikekäyttöön. Termillä ’’hydrofiilisyys” tarkoitetaan esillä olevan keksinnön yhteydessä keksinnön mukaisesti käytettävän yhdisteen kykyä muodostaa vetysidoksia ympärillä olevan liuoksen kanssa ja siten yhdisteen ' · * taipumusta liueta paremmin kuin yhden OH-ryhmän sisältävän sterolimolekyy- 25 Iin.

: / *. Keksinnön yksityiskohtainen selostus :Y; Keksinnön kohteena on sterolijohdannaisen käyttö lisäaineena ai- nekoostumuksissa, jotka on valittu kosmetiikkatuotteista ja polymeereistä ja 30 jolloin sterolijohdannainen on kasvisterolin ja hedelmähapon esteri.

Kasvisteroleilla tarkoitetaan esillä olevan keksinnön yhteydessä kasviperäisiä steroleita (mukaan lukien näiden tyydyttyneet muodot, stanolit) jotka ovat kasveista eristettävissä. Näihin kuuluvat myös steroidiprekursoreista | synteettisesti valmistetut kasvisterolien tyyppiset sterolit. Keksinnön mukaisis- : 35 sa steroleissa sterolin OH-ryhmä on edullisesti steroidirungon 3-asemassa, » ·- * 3 115527 edullisesti lisäksi β-asemassa. Steroidirungon numerointi on esitetty seuraa-vassa: ς Γη 131 16

CD

jl 14 1 15 P ίΐο 8j

A B

k Ä 10

Kasvisteroleihin kuuluvat esim. kaikki puuperäiset sterolit. Tällaisia puuperäisiä steroleita löytyy tyypillisesti esim. sellunkeiton neutraalifraktiosta, ja niitä ovat esim. β-sitosteroli ja kampesteroli, sekä näiden tyydyttyneet muodot β-sitostanoli ja kampestanoli, sekä stigmasteroli. Näiden puuperäisten ste-15 rolien rakenteet on esitetty seuraavassa: / , HO j

: H

‘‘ β-Sitostanoli * t < v·: ^ rn*

; HO

’: 20 . β-Sitosteroli 4 115527 HO !

H

Kampestanoli 10 15

HO

Kampesteroli 20 ^ iffi' 25

HO

Stigmasteroli 30 Muita sopivia kasvisteroleja ovat lisäksi esim. ergosteroli, desmos- teroli, sargasteroli, brassikasteroli ja fukosteroli sekä näiden tyydyttyneet muodot. Näiden yhdisteiden rakenne on esitetty seuraavassa: I 35 5 115527 5

HO

Ergosteroli ίο

HO

15

Desmosteroli / 20

HO

25

Sargasteroli * ho 35 ‘ , Fukosteroli 6 115527 5

HO

Brassikasteroli 10 Erityisen edullisesti kasvisteroli on β-sitosteroli, stigmasteroli tai β- sitostanoli.

Hedelmähapoilla tarkoitetaan esillä olevan keksinnön yhteydessä orgaanisia karboksyylihappoja, jotka ovat hedelmistä ja vastaavista eristettävissä. Näihin kuuluvat myös vastaavat synteettisesti tai biokemiallisesti, erityi-15 sesti entsymaattisesti valmistettavissa olevat hedelmähapot. Keksinnön mukaisesti käytettävät hedelmähapot ovat tyypillisesti hydroksikarboksyylihappo-ja. Erityisen edullisia ovat a-hydroksikarboksyylihapot (sisältävät hydroksyyli-ryhmän karboksyyliryhmän viereisessä hiiliatomissa). Keksinnön mukaisesti käytettävät hydroksikarboksyylihapot ja α-hydroksikarboksyylihapot ovat tyy-20 pillisesti tyydyttyneitä, alifaattisia karboksyylihappoja, edullisesti alempia ali-faattisia karboksyylihappoja. Termi ’’alempi” tarkoittaa tässä yhteydessä sellaisia karboksyylihappoja, jotka sisältävät korkeintaan 10 hiiliatomia, erityisen edullisesti korkeintaan 6 hiiliatomia. Hapot ovat täten edullisesti C2-C10-:.i,; karboksyylihappoja, erityisen edullisesti C2-C6-karboksyylihappoja. Hapot voi- ..; j' 25 vat olla mono-, di- tai trikarboksyylihappoja, edullisesti trikarboksyylihappoja, ja ne voivat sisältää useamman kuin yhden hydroksyyliryhmän. Tyypillisiä kek-sinnön mukaisesti käytettäviä α-hydroksikarboksyylihappoja ovat sitruunahap-: y; po, omenahappo, viinihappo, maitohappo ja glykolihappo.

Silloin kun yhdisteen hedelmähappo-osa sisältää useamman kuin 30 yhden karboksyylihapporyhmän (di- ja trikarboksyylihapot), muodostuneen . steroliesterin jäljelle jäänyt vapaa karboksyylihapporyhmä tai vapaat karbok- y.’ syylihapporyhmät voivat olla esterinä, vapaana happona tai suolana. Esteri on • 1 ‘y’ tällöin edullisesti alkyyliesteri, edullisesti alempi alkyyliesteri (CyC^- j alkyyliesteri), kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliesteri (iso- tai n-propyyli). Suola 35 on edullisesti alkali- tai maa-alkalimetallisuola, erityisen edullisesti kalium- tai ' , natriumsuola.

; ; f I I

7 115527

Keksinnön mukaisesti käytettäviä kasvisterolihedelmähappoesterei-tä voidaan valmistaa esteröimällä kasvisteroli ja hedelmähappo vaihtoesteröin-tireaktiolla.

Vaihtoesteröintireaktiossa lähtösteroli vaihtoesteröidään hedelmä-5 hapon esterin kanssa, jälkimmäisen ollessa tyypillisesti alkyyliesterin, edullisesti alemman alkyyliesterin (C-i-C-io-alkyyliesterin), kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliesterin muodossa. Propyyliesteri voi olla n-propyyliesteri tai isopropyy-liesteri.

Seuraavassa on esitetty esimerkkinä β-sitostanolin vaihtoesteröinti-10 reaktio trimetyylisitraatin kanssa, jolloin lopputuotteena saadaan β-sitostanolin ja trimetyylisitraatin monoesteri:

H

/ - °

. , -O

15 Vaihtoesteröinti suoritetaan tyypillisesti 50 - 230 °C:n, edullisesti • 120 - 180 °C:n lämpötilassa. Reaktio suoritetaan tyypillisesti alipaineessa, edullisesti 1 - 900 mbarin paineessa, käyttäen inerttiä suojakaasua, kuten typ- 8 115527 peä. Reaktio voidaan suorittaa myös joko pelkässä alipaineessa tai suojakaa-sussa.

Vaihtoesteröinti suoritetaan katalyytin läsnäollessa, joka on edullisesti alkalimetallialkoksidi eli alkalimetallin ja alkoholin yhdiste, erityisesti ka-5 liummetoksidi, kaliumetoksidi, kalium-n-propoksidi, kalium-i-propoksidi, kalium-i-butoksidi, kalium-n-butoksidi, kalium-t-butoksidi, natriummetoksidi, natrium-etoksidi, natrium-n-propoksidi, natrium-i-propoksidi, natrium-n-butoksidi tai nat-rium-t-butoksidi. Katalyyttiä käytetään tyypillisesti 0,05 - 5,0 p-% lähtöaineiden kokonaismäärästä.

10 Vaihtoesteröinnissä toisena lähtöaineena käytetty hedelmähappo on edullisesti alkyyliesterin, edullisesti alemman alkyyliesterin (C1-C10-alkyyliesterin) muodossa. Hedelmähappojen alkyyliestereitä on kaupallisesti saatavilla, mutta niitä voidaan myös valmistaa tunnetuilla esteröintimenetelmil-lä esteröimällä hedelmähappo esimerkiksi metanolilla, etanolilla tai propanolil-15 la (n- tai i-propanolilla), jolloin saadaan vastaavasti hedelmähapon metyyli-, etyyli-ja propyyliestereitä.

Hedelmähappojen alkyyliestereiden kiehumispisteet ovat yleensä yli 200 °C. Tämän takia vaihtoesteröinnissä voidaan käyttää yli 200 °C:n lämpötiloja. Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa myös alle 100 °C:n 20 lämpötiloissa. Edullinen vaihtoesteröinnissä käytetty lämpötila on kuitenkin 120- 180 °C.

Vaihtoesteröintireaktiossa vapautuu alkoholia, jonka poistaminen reaktioseoksesta parantaa saantoa. Tämän takia reaktio suoritetaan tyypilli-sesti alipaineistetussa reaktorissa inertissä suojakaasussa. Myös pelkällä ali-25 paineella tai vihaavalla suojakaasulla on mahdollista poistaa muodostuva al-:\i koholi reaktioseoksesta. Suojakaasuna käytetään edullisesti typpeä, ja paine voi olla 1 - 900 mbar.

» ·

Vaihtoesteröinti voidaan suorittaa ilman liuotinta tai liuottimessa.

• · · • ·

Sopivia liuottimia ovat reaktiossa inertit liuottimet, kuten heksaani, syklohek-30 saani ja tolueeni. Edullisesti yhdisteitä valmistetaan ilman liuotinta sulareaktio-, na tai hedelmähapon esterin toimiessa sterolien liuottimena.

Vaihtoesteröinti voidaan suorittaa panos- tai jatkuvatoimisessa re-aktorissa. Reaktio suoritetaan edullisesti sekoitusreaktorissa.

Keksinnön mukaisesti käytettäviä yhdisteitä voidaan valmistaa vaih-35 toesteröintireaktiolla miedoissa reaktio-olosuhteissa vaarattomilla ja myrkyttö-* . millä tai myrkyttömiksi hajoavilla kemikaaleilla. Hedelmähappojen, kuten sit- 9 115527 ruunahapon havaittiin yllättäen pysyvän stabiilina käytetyissä reaktio-olosuhteissa.

Kun lähtöaineena käytetty hedelmähappo on alkyyliesterin muodossa, vaihtoesteröinnissä muodostuu sterolin ja hedelmähapon esteri, jossa 5 hedelmähapon mahdolliset vapaat karboksyylihapporyhmät (di- ja trikarbok-syylihappojen tapauksessa) ovat alkyyliesterinä. Tällainen alkyyliesterimuoto liukenee sellaisenaan estereihin ja hedelmähappoöljyihin. Alkyyliesterimuoto sopii siten käytettäväksi sellaisenaan tuotteissa, jotka sisältävät hedelmähap-pojen estereitä ja hedelmähappoöljyjä.

10 Edellä mainitun, alkyyliesterin muodossa olevan sterolihedelmä- happomonoesterin liukoisuutta voidaan edelleen parantaa saippuoimalla yhdisteen alkyyliesteriryhmät alkalimetallisuolamuotoon. Saippuointi voidaan suorittaa emästä, kuten natriumhydroksidia tai kaliumhydroksidia sisältävässä liuottimessa. Sopivia liuottimia ovat alkoholit ja hiilivetyliuottimet. Sopivia alko-15 holeja ovat esim. etanoli, propanolit ja butanolit, ja sopivia hiilivetyliuottimia esim. heksaani, sykloheksaani ja tolueeni. Alkalisuolamuodossa olevalla yhdisteellä on erityisen hyvä liukoisuus vesiliuoksiin ja muihin polaarisiin liuoksiin.

Alkalisuolamuodossa olevan sterolin ja hedelmähapon monoesterin suolaryhmät voidaan edelleen muuttaa vapaiksi hapoiksi. Tämä tehdään hap-20 pohydrolyysillä, jossa voidaan käyttää homogeenista happoa (esim. mineraali-happoa tai suolahappoa) tai heterogeenistä happoa (esim. ioninvaihtohartsia, kuten vahvaa kationinvaihtohartsia).

Keksinnön mukaisesti käytettäviä yhdisteitä voidaan myös valmis-\i.: taa suoraesteröimällä hedelmähappoja sterolien kanssa. Suoraesteröinti voi- 25 daan suorittaa sulareaktiona tai liuottimessa. Katalyyttinä voidaan käyttää joko :\! homogeenista happokatalyyttiä (kuten mineraalihappoa tai p-tolueeni- sulfonihappoa) tai heterogeenista happokatalyyttiä (kuten sulfonoitua polysty- • · reenidivinyylibentseeniä).

Keksinnön mukaisesti käytettäviä yhdisteitä voidaan myös valmis-30 taa esteröimällä steroleita karboksyylihappoja reaktiivisempien happokloridien . tai happoanhydridien ja itse sterolien välisten asylointireaktioiden avulla.

t

Keksintö koskee myös kosmetiikkatuotteita ja polymeerejä, jotka sisältävät kasvisterolien ja hedelmähappojen estereitä tai niiden seoksia. Tuot-teet voivat sisältää lisäksi yhtä tai useampaa hedelmähappoa ja/tai niiden al-: 35 kyyliestereitä, edullisesti alempia alkyyliestereitä.

10 115527

Kosmetiikkatuotteet voivat olla esimerkiksi meikkejä, ihorasvoja ja -voiteita.

Polymeerit ovat tyypillisesti biohajoavia polymeerejä, joissa steroli-johdannaiset vaikuttavat biohajoavuutta parantavina aineina.

5 Seuraavat esimerkit valaisevat keksinnön mukaisesti käytettävien yhdisteiden valmistusta.

Esimerkki 1

Valmistettiin sitruunahapon ja puuperäisen kasvisterolin esteri (kas-10 visteroliesteriseos) vaihtoesteröintireaktiolla seuraavasti:

Reaktoriin panostettiin 50,1 g kasvistanoliseosta (sisältää 91,9 p-% β-sitostanolia ja 5,7 p-% kampestanolia, valmistaja UPM-Kymmene Oyj, Lappeenranta) ja 450,2 g sitruunahapon trietyyliesteriä eli trietyylisitraattia (kaupallinen laatu, puhtaus > 98 p-%). Reaktorin typpihuuhtelu ja lämmitys aloitettiin.

15 Sekoitus käynnistettiin ja sekoitusnopeus säädettiin arvoon 350 kierrosta / min. Reaktoriin imettiin lievä alipaine 800 mbar, minkä jälkeen lämpötila nostettiin 150 °C:seen. Reaktioseosta lämmitettiin 45 min ennen katalyytin lisäämistä. Lisättiin katalyytiksi natriumetoksidia (0,102 g). Katalyytin lisäyksen jälkeen reaktiota jatkettiin 6,5 tuntia. Katalyytti hajotettiin lisäämällä reaktioseok-20 seen vettä, ja reagoimaton kasvistanoli uutettiin heksaanilla. Saatiin tuote, joka sisälsi haluttua reaktiotuotetta ja trietyylisitraattia. Reaktiotuote oli β-sitostanolin ja trietyylisitraatin esteri, jossa yksi sitruunahapon happoryhmistä muodostaa esterin β-sitosterolin kanssa ja kaksi muuta ovat etyyliesterin muo-dossa. Reaktiotuote sisälsi myös pieniä määriä vastaavaa kampestanolieste-25 riä.

Reaktiotuotteen ja trietyylisitraatin seos saippuoitiin etanolisessa :*·,· KOH-liuoksessa. Saippuoitu seos liukeni erittäin hyvin vesiliuoksiin.

Saippuoimaton lopputuote analysoitiin massaspektrometrillä käyttä- en suoraa ionisaatiota. Analyysitulokset osoittivat, että tuote koostuu yhdis- 30 teestä, jonka massaluku on 644-648. Tämä vastaa β-βΐ^^ηοΙΐη/β^ΚοβίβΓοΙΐη . . ja trietyylisitraatin monoesteriä (sitruunahapon kaksi vapaata karboksyyliryh- mää etyylimuodossa). Tuote sisälsi myös pieniä määriä vastaavaa kampes- '···' tanoliesteriä.

» i\\ Näin saadun tuotteen hydrofiilisyys ja vesiliukoisuus oli huomatta- 35 vasti parantunut.

• * · 11 115527

Esimerkki 2

Valmistettiin sitruunahapon ja puuperäisen kasvisterolin esteri (kasvisteroliesteriseos) vaihtoesteröintireaktiolla seuraavasti:

Toisena reaktiokomponenttina käytetty trimetyylisitraatti valmistettiin 5 sitruunahaposta ja metanolista 40 °C:ssa käyttäen katalyyttinä Amberlyst 15 -kationinvaihtohartsia (Rohm & Haas, USA). Reaktioaika oli 24 h, jonka jälkeen katalyytti ja metanoli poistettiin reaktioseoksesta.

Vaihtoesteröintiä varten reaktoriin panostettiin 41 g kasvistero-liseosta (sisälsi 36 p-% β-sitostanolia, 52 p-% β-sitosterolia, 7 p-% kampeste-10 rolia ja lisäksi pieniä määriä kampestanolia ja stigmasterolia), valmistaja UPM-Kymmene Oyj, Lappeenranta) ja 23 g edellä valmistettua trimetyylisitraattia. Reaktio suoritettiin typpisuojakaasussa 160 °C:ssa. Reaktioaika oli 8 h ja se-koitusnopeus 500 kierrosta / min. Katalyyttinä käytettiin 0,2 g natriumetoksidia. Lopputuote analysoitiin massaspektrometrilla käyttäen suoraa ionisaatiota, jol-15 loin massaspektrissä havaittiin molekyylipiikki, jonka massaluku oli 616 - 620. Tämä vastaa β-sitosterolin ja trimetyylisitraatin esteriä, jossa yksi sitruunahapon happoryhmistä muodostaa esterin β-sitosterolin kanssa ja kaksi muuta ovat metyyliesterin muodossa. Tuote sisälsi myös vastaavaa β-sitostanoliesteriä sekä pieniä määriä vastaavia kampesteroli-, kampestano-20 li-ja stigmasteroliestereitä.

Myös tämän esimerkin mukaisen tuotteen hydrofiilisyys ja vesiliukoisuus oli parantunut.

·.·,· Esimerkki 3 25 Vastaavalla tavalla vaihtoesteröintireaktiolla voidaan valmistaa myös puuperäisten steroleiden omenahappo-, viinihappo-, maitohappo- ja gly-kolihappoestereitä. Samalla tavalla voidaan valmistaa ergosterolin, desmoste-rolin, sargasterolin, brassikasterolin ja fukosterolin sitruunahappoestereitä se-, ·:·, kä omenahappo-, viinihappo-, maitohappo- ja glykolihappoestereitä.

30

Alan ammattilaiselle on ilmeistä, että tekniikan kehittyessä keksin-nön perusajatus voidaan toteuttaa monin eri tavoin. Keksintö ja sen suoritusmuodot eivät siten rajoitu yllä kuvattuihin esimerkkeihin, vaan ne voivat vaih-: ’ ·, * della patenttivaatimusten puitteissa.

* * *

Claims

115527

1. Sterolijohdannaisen käyttö lisäaineena ainekoostumuksissa, jotka on valittu kosmetiikkatuotteista ja polymeereistä, tunnettu siitä, että sterolijohdannainen on kasvisterolin ja hedelmähapon esteri.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että kasvisteroli on steroli, jonka OH-ryhmä on steroidirungon 3-asemassa, edullisesti β-asemassa.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että kasvisteroli on puuperäinen steroli.

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 3 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että kasvisteroli on β-sitosteroli, β-sitostanoli, kampesteroli, kampestanoli tai stigmasteroli.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että kasvisteroli on β-sitosteroli tai β-sitostanoli.

6. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen käyttö, tun nettu siitä, että hedelmähappo on hydroksikarboksyylihappo.

7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että hedelmähappo on a-hydroksikarboksyylihappo.

8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että 20 α-hydroksikarboksyylihappo on sitruunahappo, omenahappo, viinihappo, maitohappo tai glykolihappo.

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että : α-hydroksikarboksyylihappo on sitruunahappo.

10. Kosmetiikkatuote, tunnettu siitä, että se sisältää jossakin IMI : 25 patenttivaatimuksessa 1 - 9 määriteltyä sterolijohdannaista tai niiden seosta.

.·. · 11. Polymeeri, tunnettu siitä, että se sisältää jossakin patent- • * I tivaatimuksessa 1 - 9 määriteltyä sterolijohdannaista tai niiden seosta. t I · • I • · * • * » • · » * » · t I t · » f · · • * * * · » k · I · » ,3 "552?