FI113049B - (R)-7-(aryylisubstituoitu)-8,9-dihydro-8-alkyyli-5-(4-aminofenyyli)-7-H-1,3-dioksolo[4,5-h] [2,3]bentsodiatsepiini- tai (R)-7-(aryylisubstituoitu)-8,9-dihydro-8-alkyyli-5-(4-nitrofenyyli)-7-H-1,3-dioksolo [4,5-h] [2,3] -bentsodiatsepiiniyhdiste - Google Patents

Description

113049 (R)-7-(aryylisubstituoitu)-8,9-dihydro-8-alkyyli-5-(4-ami -nofenyyli)-7-H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiatsepiini-tai (R)-7-(aryylisubstituoitu)-8,9-dihydro-8-alkyyli-5-(4-nitrofenyyli)-7-H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]-bentsodiatse-5 piiniyhdiste

Keksinnön ala

Keksintö koskee uusia dihydro-2,3-bentsodiatse-piinijohdannaisia, niitä sisältäviä farmaseuttisia koos-10 tumuksia ja niiden käyttöä AMPA-reseptoriantagonisteina.

Keksinnön tausta US-patenttijulkaisussa 4 835 152, EP-patenttiha- kemuksessa Al-0 492 485 ja kansainvälisessä PCT-patent- tihakemuksessa WO 92/11 262 kuvataan tiettyjä dihydro-2,3-15 bentsodiatsepiinijohdannaisia, joilla on keskushermosto vaikutuksia, erityisesti lihasta relaksoivaa ja kouristuksia estävää aktiivisuutta, samoin kuin masennusta estävää ja Parkinsonin taudin vastaista aktiivisuutta. Näiden yhdisteiden rakenne/aktiivisuussuhteita käsitellään jul-20 kaisussa: Tarnawa et ai.; Bioorganic and Medicinal Che mistry; Letters, voi. 3, no. 1, s. 99 - 104, 1993. Yhdis-. teiden, joissa on asetyyli-, propionyyli- tai N- metyylikarbamoyyliryhmä bentsodiat sepiinirenkaan 3-ase-;* massa, kuvataan olevan tehokkaimpia, ja niiden, joissa on *' 25 bentsoyyli- tai fenyyliasetyyliryhmä, kuvataan kuuluvan vähiten tehokkaisiin.

Hämmästyttävällä tavalla on keksitty, että määrä-: tyillä dihydro-2,3-bentsodiatsepiineilla, joissa on aro maattinen ryhmä kiinnittyneenä suoraan bentsodiatsepii-;V. 30 nirenkaan 3-asemaan ja p-aminofenyyliryhmä kiinnittyneenä t t ,··*, 1-asemaan, on voimakas kouristuksia estävä aktiivisuus.

• · • » ·

Keksinnön yhteenveto • * · *. Keksintö aikaansaa yleisen kaavan I mukaisen yh- ’·"· disteen: » » * ! i * 1 » 2 113049

H

* R

(Yjft

Aryyli (I) jossa R on vety tai Ci-io-alkyyli; 5 X on aromaattinen ryhmä fenyyli, tienyyli, furyyli, pyri-dyyli, imidatsolyyli, bentsimidatsolyyli, bentsotiatsolyy-li tai ftalatsinyyli, joka on substituoimaton tai substi-tuoitu yhdellä tai usealla ryhmällä halogeeni, hydroksi, syaani, nitro, Ci-6-alkyyli, C3-6-sykloalkyyli, Ci-4-alkoksi, 10 karboksi, Ci-6-alkoksikarbonyyli, asetyyli, formyyli, kar-boksimetyyli, hydroksimetyyli, amino, aminometyyli, mety-leenidioksi ja/tai trifluorimetyyli; ja "Aryyli" on p-nitrofenyyli, p-aminofenyyli tai p-(suojattu amino)fenyyli; 15 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan.

.· Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus '1 Kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa "aryyli" on p-nitrofenyyli, ovat käyttökelpoisia välituotteina valmis-tettaessa kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa "aryyli" on - « 1 20 p-aminofenyyli.

t I

,·;·. R on Cx-3-alkyyliryhmä, esimerkiksi metyyli.

» 1 · X:n merkityksistä 2-pyridyyliryhmä on erityisen ,, . edullinen.

< 1 · • ·1 Yleisen kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmis- < 1 · *...· 25 taa syklisoimalla yleisen kaavan VIII mukaista yhdistettä 4 · t i » • » 1 * » ί 1 » 1 · ' · fill1 > · · » » » 3 113049

Aryy 1 i (VIII) jossa Z on poistuva atomi tai ryhmä, jolloin saadaan ylei-10 sen kaavan I mukainen yhdiste, minkä jälkeen haluttaessa muutetaan kaavan I mukainen yhdiste toiseksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai muodostetaan farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Symbolin Z edustama poistuva atomi tai ryhmä voi 15 olla esimerkiksi halogeeniatomi tai organosulfonyy- lioksiryhmä, tai se voi muodostua in situ vastaavasta kaavan VIII mukaisesta yhdisteestä, jossa Z on hydroksi.

Symbolin Z erityisiä arvoja, kun se on halogeeni-atomi, ovat kloori ja bromi.

20 Symbolin Z edustama organosulfonyylioksiryhmä voi olla esimerkiksi Ci-4-alkaanisulf onyylioksiryhmä, tri- ' *[: fluorimetaanisulfonyylioksiryhmä tai fenyylisulfonyylioksi ryhmä, jossa fenyyliryhmä on substituoimaton tai sub- < » stituoitu 1 tai 2 substituentilla, jotka ovat toisistaan 25 riippumatta Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, halogeeni, nitro .!** ja/tai halogeeni-Ci-4-alkyyli. Erityisiä symbolin Z arvoja ovat metaanisulfonyylioksi, fenyylisulfonyylioksi, p-tolu-* ’ eenisulfonyylioksi ja p-nitrofenyylisulfonyylioksi.

Edullisesti Z on organosulfonyylioksiryhmä.

: .* 30 Kun Z on halogeeniatomi tai organosulfonyylioksi- ryhmä, syklisointi suoritetaan edullisesti emäksen läsnä .*, : ollessa, joka on alkalimetallihydroksideja, esimerkiksi • · · > · "Ml » · him I · tl» t · * ♦ tl» 4 113049 natrium- tai kaliumhydroksidia; alkalimetallikarbonaatte-ja, esimerkiksi natrium- tai kaliumkarbonaatteja; alkali-metallihydridejä, esimerkiksi natrium- tai kaliumhydri-diä; ja alkalimetallialkoksideja, esimerkiksi litium-, 5 natrium- tai kalium-t-butoksideja. Menetelmä suoritetaan sopivasti lämpötilassa alueella -30 - 100 °C, edullisesti 0 - 50 °C. Sopivia liuottimia ovat mm. alkanolit, kuten metanoli tai etanoli, ja eetterit, kuten tetrahydro-furaani.

10 Kaavan VIII mukainen yhdiste, jossa Z on poistuva atomi tai ryhmä, voidaan muodostaa in situ siten, että kaavan VIII mukainen yhdiste, jossa Z on hydroksyyliryhmä, saatetaan reagoimaan triaryylifosfiinin kanssa atsido-dikarboksylaattiesterin läsnä ollessa. Reaktio on 15 analoginen hyvin tunnetulle Mitsunobu-reaktiolle. Triaryylifosfiini on edullisesti trifenyylifosfiinia, ja atsodikarboksylaattiesteri on dietyyliatsadikarboksy- laattia. Menetelmä suoritetaan sopivasti lämpötilassa alueella -30 - 100 °C, edullisesti -10 - 50 °C. Sopivia 20 liuottimia ovat mm. eetterit, kuten tetrahydrofuraani.

Ymmärretään, että tässä tapauksessa symbolin Z edustama j ‘ : poistuva ryhmä on triaryylifosfonyylioksiryhmä, kuten :***: trif enyylif osf onyylioksi .

Kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa aryyli on 25 p-aminofenyyli, voidaan valmistaa syklisoimalla kaavan

* I

;·, VIII mukaisen yhdisteen, jossa aryyli on p-nitrofenyyli, * I » p-aminofenyyli tai p-(suojattu amino) fenyyli, minkä * · · * · · * jälkeen, mikäli välttämätöntä, (a) pelkistetään p-nitrofenyyliryhmä, jolloin i · t : 30 saadaan p-aminofenyyliryhmä, tai ',,,· (b) suojauksenpoistokäsitellään p-(suojattu ami- no) fenyyliryhmä, jolloin saadaan p-aminofenyyliryhmä.

Nitroryhmä p-nitrof enyyliryhmässä voidaan pelkis- » · . tää tekniikan alalla tunnetulla menetelmällä, esimerkiksi 35 tavalla, joka kuvataan julkaisussa EP-A1-492 485. Täten se :,,,· voidaan pelkistää reaktiolla hydratsiinin tai hydratsii- 5 113049 nihydraatin kanssa Raney-nikkellikatalysaattorin läsnä ollessa. Vaihtoehtoisesti se voidaan pelkistää reaktiolla vedyn, muurahaishapon, ammoniumformiaatin, trialkyyli-ammoniumformiaatin, kuten trietyyliammoniumformiaatin, tai 5 alkalimetalliformiaatin, kuten natriumformiaatin tai kaliumformiaatin kanssa, ryhmän VIII metallikatalysaat-torin, kuten Pd/C:n läsnä ollessa. Sopivia liuottimia ovat mm. alkoholit, kuten metanoli, etanoli tai isopropanoli, ja eetterit, kuten tetrahydrofuraani tai asetoni.

10 Pelkistys voidaan suorittaa sopivasti lämpötilassa alueella -10 - 120 °C.

p-(suojattu amino)fenyyliryhmässä oleva suojaryhmä voidaan poistaa tavanomaisella tavalla. Esimerkiksi Ci-6-alkanoyyliryhmä voidaan poistaa hydrolysoimalla mineraali- 15 hapon, esimerkiksi suolahapon läsnä ollessa.

Yleisen kaavan VIII mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa monivaiheisella menetelmällä alkaen metyleenidiok-sifenyyliketonijohdannaisesta. Tämä prosessi käsittää alla esitetyt vaiheet.

20 a) Aikaansaadaan kaavan II mukaisen yhdisteen mää rä:

·'·· (ID

I I I

> I I

'·’ ’ b) pelkistetään kaavan II mukainen yhdiste asym metrisesti, jolloin saadaan kaavan III mukainen yhdiste: i · · : V 30 * · $ 113049

O

c) saatetaan kaavan III mukainen yhdiste reagoimaan aryylialdehydiyhdisteen kanssa, jolla on kaava aryyli-CHO, jolloin saadaan kaavan IV mukainen isokromaaniyhdiste:

Aryyli 10 1 (IV) d) saatetaan kaavan IV mukainen yhdiste reagoimaan hapetusreagenssin kanssa, jolloin saadaan kaavan V mukainen yhdiste:

Aryyli 0H

20 (V) e) saatetaan kaavan V mukainen yhdiste reagoimaan > · hydratsiinijohdannaisen kanssa, jolla on kaava H2NNHX, joi- • ♦ ’ loin saadaan kaavan VI mukainen yhdiste: • 1 · 25 :-i: Ja 30 Aryyl i x

H

(VI) » · ‘ \ f) saatetaan kaavan VI mukainen yhdiste reagoimaan * · « ! · (i) sulfonyylihalogenidireagenssin ja emäksen kanssa, jol- * 1 i’1· 35 loin muodostuu välituotesulfonaatti, minkä jälkeen saate- 7 113049 taan tulokseksi saatu sulfonaatti reagoimaan vahvan emäksen kanssa; tai (ii) suoralla Mitsunobu-syklisoinnilla, jossa kaavan VIII mukainen yhdiste muodostuu in situ, sitten syklisoituu suoraan, jolloin saadaan kaavan I 5 mukainen yhdiste.

Edulliseen menetelmään liittyy ketonin varhainen kiraalinen pelkistys alkoholiksi. Substituentteja lisätään monivaiheisessa menetelmässä bentsofuusioidun pyraani-renkaan sulkemiseksi, ennen kuin lisätään hydratsiini-10 reagenssia renkaan avaamiseksi ja välttämättömien typpi-komponenttien lisäämiseksi. Lopuksi sekundäärinen rengas suljetaan lisäämällä vahvaa emästä, ja yhdiste pelkistetään halutun yhdisteen muodostamiseksi.

Edullisimmin kiraalinen pelkistysvaihe on alku-15 vaihe kaavan I mukaisten yhdisteiden synteesissä ketoneista. Kiraalinen pelkistys voidaan suorittaa käyttämällä erityisiä kemikaaleja tai edullisesti alla kuvattuja biologisia aineita käyttämällä. Stereokemian asettaminen varhain menetelmässä on edullista ja sallii 20 myöhempien vaiheiden suorittamisen suhteellisen enan-tiomeerisesti puhtaalla materiaalilla. Tämä sekä lisää : * : suoritustehoa että parantaa enantiomeeristä puhtautta.

Menetelmän ensimmäiseen vaiheeseen liittyy lähtö-aineen (edullisesti 3,4-metyleenidioksifenyyliasetoni-,*··, 25 johdannaisen) kiraalinen pelkistys, jolloin muodostuu 1,2- metyleenidioksibentseenin käytännöllisesti katsoen enan- • I t "... tiomeerisesti puhdasta alkoholi j ohdannaista. Muodostunut » · · ·’ ’ enantiomeeri on edullisesti alkoholin (S)- tai ( + )- stereoisomeeriä. Edullisinta lähtöaineyhdistettä on 3,4-: .* 30 metyleenidioksifenyyliasetoni.

Vaihtoehtoisesti aloitusvaiheeseen voi liittyä .*. : 1,2-metyleenidioksibentseenin halogeeni j ohdannaisen yhdis- • * » » · iii>: täminen enantiomeerisesti rikastetun epoksidin kanssa.

. Tästä on myös tuloksena 1,2-metyleenidioksibentseenin "·”* 35 hyvin enantiomeerisesti rikastuneen alkoholi j ohdannaisen » · ;,t>: muodostuminen.

8 113049

Kiraalisen pelkistysalkuvaiheen suorittamiseen käytetty materiaali voi olla joko kemiallista tai edullisesti biologista. Biologisten aineiden tapauksessa edullisia aineita ovat pelkistävät entsyymit, jolloin 5 edullisimpia ovat Zygosaccharomyces-ryhmän hiivat. Muita biologisia aineita, joita voidaan käyttää, ovat mm.: Pichia fermentans, Endomycopsis fibuligera, Nematospora coryli, Saccharomyces sp., Candida famata, Saccharomyces pastorianus, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces 10 uvarum, Candida utilis, Saccharomyces globosus, Kluyveromyces dobzhansk, Kluyveromyces laetis, Candida albicans, bakers' yeast, Zygosaccharomyces rouxii,

Lactobacillus acidophilus, Aureobasidium pullulans,

Mortierella isabellina, Rhizopus oryzae, Kloeckeva 15 javanica, Hanseniaspora valbyensis, Octosporomyces octospori, Candida guilliermondi, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Torulopsis taboadae, Torulopsis ethanolitolerans, Torulopsis ptarmiganii, Torulopsis sonorensis, Trigonopsis variabilis, Torulopsis enokii, 20 Torulopsis methanothermo, SAF-pikahiiva, inaktivoitu "ashland"-hiiva, Candida boidinii, Candida blankii ja "Red I ' > Star" -hiiva.

Alkuvaiheessa muodostunut haluttu välituote on 1,2-metyleenidioksibentseenin alkoholisubstituoitu sukulai-25 nen, jolloin edullisin sukulainen koostuu (S)-a-metyyli- 1,3-bentsodioksoli-5-etanolista.

I | ·

Sitten alkuvaiheessa muodostunut haluttu väli- t t · tuoteyhdiste alistetaan Pictet-Spengler-reaktiolle, joka aikaansaa bentsodiatsepiinihiiliainesosien konvergentin : ,· 30 fuusioitumisen. Edullista suosittavaa reagenssia on p- nitrobentsaldehydi, vaikka voidaan käyttää muita ammat- : timiesten tuntemia reagensseja, kuten asetaaleja. Edul- * « > #>i>; lisiä välituotteita ovat dihydrobentsopyraanit, jolloin . edullisinta yhdistettä on 7,8-dihydro-7-metyyli-5-(4-nit- **"· 35 rofenyyli)-5H-1,3-dioksolo-bentso[b]pyraani.

i I

* » 9 113049

Sitten dihydrobentsopyraanisukulainen hapetetaan C5-asemaan, jolloin saadaan yleisen kaavan V mukaista hemiketaalijohdannaista

Aryy1i OH

10 (V)

Edullisia hapetusreagensseja ovat mm. kaliumpermanganaatti, DDQ (2,3-dikloori-5,6-syaani-l,4-bentsokinoni) tai vastaavat, jolloin edullisinta ainetta on natriumhydroksi-din ja ilman yhdistelmä.

15 Sitten C5-hemiketaali saatetaan reagoimaan kaavan H2NNHX mukaisen hydratsidijohdannaisen kanssa hapon läsnä ollessa kaavan VI mukaisen hydratsonivälituotteen muodostamiseksi. Reaktio suoritetaan sopivasti keittämällä palautusjäähdyttäen aromaattisessa tai proottisessa 20 liuottimessa. Tässä vaiheessa bentsopyraanirengas avautuu siten, että hydratsonikomponentti kiinnittyy Cs-hiileen.

Hydratsonijohdannainen muutetaan halutuksi bentso- • t diatsepiinirenkaaksi molekyylinsisäisen alkyloinnin kaut- • » ta. Tämä toteutetaan yhdellä useista mahdollisista mene-• * · u t 1 .·, 25 telmistä. Ensimmäisessä menetelmässä lisätään seosta,

jossa on kaavan YSCkX* mukaista sulfonyylihalogenidi-reagenssia, jossa Xa on halogeeniatomi, kuten kloori, ja Y

• * · ’·* ’ on orgaaninen ryhmä, kuten Ci-4-alkaanisulfonyyli, trifluo- rimetyylisulfonyyli tai fenyylisulfonyyli, jossa fenyy- • · t i ’,· 30 liryhmä on substituoimaton tai substituoitu yhdellä tai ttt kahdella substituentilla, jotka ovat toisistaan riip-: pumatta Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, halogeeni, nitro tai halogeeni-Ci-4-alkyyli (esimerkiksi, metaanisulfonyyliklo- • · . ridi) ja emästä, kuten tertiääristä amiinia (esimerkiksi, 35 trietyyliamiini) , jolloin muodostuu kaavan VII mukaista : sulfonaattivälituotetta 10 113049 ö—s—y

5 / N

Aryyli / \

H X

(VII)

Sitten sulfonaatti muutetaan 8,9-dihydro-7H-2,3-10 bentsodiatsepiinisukulaiseksi lisäämällä vahvaa emästä, edullisimmin alkalimetallihydroksidia, kuten natrium-hydroksidia, alkalimetallialkoksidia, kuten natrium- tai kalium-tert-butoksidia, alkalimetallikarbonaattia, kuten kaliumkarbonaattia, tai alkalimetallihydridiä, kuten 15 natriumhydridiä. Mahdollisesti reaktio voidaan suorittaa faasinsiirtokatalysaattorin, kuten tetrabutyyliammonium-bromidin, läsnä ollessa.

Vaihtoehtoisesti kaavan VI mukainen yhdiste voidaan muuttaa kaavan VIII mukaiseksi yhdisteeksi, jossa 20 Z on halogeeniatomi, esimerkiksi, kaavan VI mukainen yhdiste voidaan saattaa reagoimaan imidatsolin, • · | ' : trifenyylifosfiinin ja bromin kanssa, jolloin saadaan ·*·': kaavan VIII mukainen yhdiste, jossa Z on bromiatomi.

• »

Tulokseksi saatu kaavan VIII mukainen yhdiste voidaan 25 sitten syklisoida samalla menettelytavalla, jota • · käytettiin kaavan VIII mukaiselle yhdisteelle, jossa Z on * i · organosulf onyylioksiryhmä.

• * · '·’ * Edullisesti käytetään kaavan VIII mukaista yhdis

tettä, jossa Z on organosulfonyylioksiryhmä (kaavan VII

• » · i ’.· 30 mukaista yhdistettä vastaten) .

* » » :,,,ϊ Erääseen toiseen menetelmään liittyy Mitsunobu- .·. : syklisointi, joka on yksivaiheinen menetelmä, josta

• S

>i((. saadaan p-nitrof enyylibentsodiatsepiinivälituote .

. Kun halutaan kaavan I mukaista yhdistettä, jossa 35 aryyli on p-aminofenyyli, ja on valmistettu kaavan IV mukainen yhdiste, jossa aryyli on p-nitrofenyyli, voidaan 11 113049 nitroryhmä pelkistää menetelmän missä hyvänsä vaiheessa. Edullisesti se pelkistetään menetelmän vaiheen e) tai f) jälkeen.

Nitroryhmä voidaan pelkistää lisäämällä vetykaasua 5 tai vetylähdettä katalysaattorin läsnä ollessa. Edullista vetylähdettä on kaliumformiaatti, tai muu formiaattisuola (kuten ammoniumformiaatti), jolloin edullista katalysaattoria on palladiummetallin ja aktiivihiilen yhdistelmä. Pelkistysvaihe on ammattimiesten hyvin tuntema.

10 Edulliset menetelmät voidaan esittää yhteenvetona seuraavilla kaavioilla edullisimman tuotteen tuottamiseksi .

Kaavio I

“ <xnrt<xn:hCogrh a b c Aryyli 20

0^ R R

Aryyl i 0H Aryyl i /\

**·* H X

.···. 25 D E

• t » l « • » • i # < » • * · * * » * · k * · » • · • *

» I

4 · I I • » » 4 4# • | » • t * « * * k » » uin # · % » > i * 1 » i2 113049

Kaavio I (jatkoa) JL JL oh

5 O

Aryyli

H

E

10

1 I

°^PY^yr N.

Aryyli ^ x 15 h / \ 20

Br :···: <XX^-X <ΧϊΓ\ :*,·. V n u

•VV 25 Q H

’···' °2n H->N

s ·\ /' '

H

•‘•'j 30

•; /N—X

35 yJ

ΝΗχ i3 1 13049

Kaaviossa I menetelmän alkuvaiheeseen liittyy biologisten aineiden, edullisimmin Zygosaccharomyces rouxiin, lisääminen ketonin pelkistämiseksi halutuksi alkoholiksi. Reaktioseokseen voidaan lisätä sopiva määrä adsorbentti-5 hartsia, kuten AD-7:ää, XAD-7:ää, HP2MGL:ää (verkkoutettu-ja polymetakrylaatteja yhtiöstä Rohm & Haas), HP20:tä (po-lystyreenistä), tai SP207:ää (bromattua polystyreeniä yhtiöstä Mitsubishi), organismin kuoleman estämiseksi ja alkoholin adsorboimiseksi sen muodostuessa. Voidaan käyttää 10 myös muita vastaavia hartseja.

Kaavio II

Kaaviossa II menetelmän alkuvaiheeseen liittyy aryylihalogenidijohdannaisen, kuten 4-bromi-l,2-(metylee-20 nidioksi)bentseenin, saattaminen reagoimaan alkalimetalli- hiilivedyn (sek-butyylilitium on edullista) ja enantiomee-risesti puhtaan epoksidin kanssa. Edullista on (S)-(-)- » i ! propyleenioksidi. Vaihtoehtoisesti voidaan aryylihaloge- * · *. ; nidi muuttaa ensin Grignard-reagenssiksi reaktiolla mag- * * · 25 nesiumin kanssa, saattaa sitten reagoimaan enantiomeeri- * · ’·** sesti puhtaan epoksidin kanssa kupari (I) jodidin tai kata- ‘ " lysaattorin läsnä ollessa. Sekä kaaviossa I että kaaviossa V : II kohteena on bentsodiatsepiinirenkaan C8-atomin stereo- kemian määrääminen mahdollisimman aikaisin. Molempien kaa- 30 vioiden on havaittu toteuttavan tämän kohteen, ja niillä on muodostettu enantiomeerisesti rikastettuja (ee) alkoho- , leja, jotka ovat 98-%:isella puhtausalueella.

» » » * ; Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on keksitty olevan * * * » · kouristusta estävää aktiivisuutta testissä, joka on kuvat-35 tu julkaisussa: J. David Leander; Epilepsia, 33(3), 573 - * ^ t 14 113049 57 6, 1992. Esimerkiksi esimerkin 23 yhdisteen on keksitty tuottavan EDso-arvon 3,2 mg/kg. Esimerkin 17 yhdisteellä on keksitty olevan tässä testissä erityisen suuri teho.

Menetelmässä kouristuksien hoitamiseksi nisäkkääl-5 lä annetaan tehokas määrä kaavan I mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa.

Uskotaan, että keksinnön kaavan I mukaiset yhdisteet ovat kiihottavien aminohappojen AMPA-reseptoriala-tyypin antagonisteja. Menetelmässä kiihottavien amino-10 happojen AMPA-reseptorien salpaamiseksi nisäkkäillä vähentynyttä kiihottavan aminohapon neurotransmissiota vaativalle nisäkkäälle annetaan farmaseuttisesti tehokas määrä kaavan I mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa.

15 Käsitettä "farmaseuttisesti tehokas määrä" käy tetään tässä edustamassa keksinnön mukaisen yhdisteen määrää, joka pystyy salpaamaan kiihottavien aminohappojen AMPA-reseptorin. Annettu yhdisteen erityinen annos määräytyy tietysti tapaukseen liittyvistä erityisistä 20 seikoista, mukaan lukien annetusta yhdisteestä, antorei-tistä, erityisestä hoidettavasta tilasta, ja vastaavista seikoista. Yhdisteitä voidaan antaa eri reittejä, mukaan ·*·*; lukien oraalista, rektaalista, transdermaalista, sub- .V. kutaanista, laskimonsisäistä, lihaisensisäistä tai ,···, 25 intranasaalista reittiä. Vaihtoehtoisesti yhdisteitä • » voidaan antaa jatkuvalla infuusiolla. Tyypillinen päi- väännös sisältää noin 0,01 - 30 mg/kg keksinnön mukaista ·’’ aktiivista yhdistettä. Edulliset päiväannokset ovat noin 0,05 - 24 mg/kg, edullisemmin noin 0,1 - 20 mg/kg.

: ’.· 30 Erilaisten fysiologisten toimintojen on osoitettu » » » :,t>* olevan kiihottavan aminohapon neurotransmission liiallisen ,·. : tai epäsopivan stimuloinnin vaikutuksen kohteena. Keksin- * » * » * i i i i i * » «

• I

15 113049 nön kaavan I mukaisilla yhdisteillä uskotaan olevan kyky hoitaa tähän tilaan liittyviä erilaisia neurologisia häiriöitä, joita ovat mm. akuutit neurologiset häiriöt, kuten aivojen puutokset sydämen ohitusleikkauksen ja 5 oksastuksen, halvauskohtauksen, aivojen hapenpuutteen, selkäydinvamman, päävamman, synnytyksenaikaisen hypoksian, sydänpysähdyksen ja hypoglykeemisen hermojen vaurioitumisen jälkeen. Kaavan I mukaisilla yhdisteillä uskotaan olevan kyky hoitaa erilaisia kroonisia neurologisia 10 häiriöitä, kuten Alzheimerin tautia, Huntingtonin tanssitautia, amyotrofista lateraaliskleroosia, AIDS:in aiheuttamaa tylsistymistä, silmävauriota ja verkkokalvon sairautta, ja idiopaattista ja lääkkeiden aiheuttamaa Parkinsonin tautia. Menetelmissä näiden häiriöiden 15 hoitamiseksi sitä tarvitsevalle potilaalle annetaan tehokas määrä kaavan I mukaista yhdistettä.

Keksinnön kaavan I mukaisilla yhdisteillä uskotaan myös olevan kyky hoitaa nisäkkäillä erilaisia muita neurologisia häiriöitä, jotka liittyvät glutamaatti-20 toimintahäiriöön, mukaan lukien lihaskouristuksia, kouris tuksia, migreenipäänsärkyjä, virtsanpidätyskyvyttömyyttä, psykoosia, lääketoleranssia ja lääkkeestävierotusta, ·*·*; ahdistuneisuutta, oksetusta, aivojen turvotusta, kroonista » » .·.·. kipua ja tardiivia dyskinesiaa. Kaavan I mukaiset .···. 25 yhdisteet ovat käyttökelpoisia myös kipulääkkeinä. Näiden • · häiriöiden hoitoon tarkoitetuissa menetelmissä sitä • · • · ·

tarvitsevalle potilaalle annetaan tehokas määrä kaavan I

• » · ·’ * mukaista yhdistettä.

Edullisesti keksinnön mukaiset yhdisteet formuloi- • · · i V 30 daan ennen antoa. Sen vuoksi keksinnön eräänä toisena nä- I I t kökantana on farmaseuttinen koostumus, joka sisältää kaa-X : van I mukaista yhdistettä ja farmaseuttisesti hyväksyttäisi vää laimennusainetta tai väliainetta. Keksinnön mukaiset . farmaseuttiset formulaatiot valmistetaan tunnetuilla me-

• I

16 113049 nettelytavoilla hyvin tunnettuja ja helposti saatavia valmistusaineita käyttämällä. Keksinnön mukaisten koostumusten valmistuksessa aktiivinen väliaine sekoitetaan tavallisesti väliaineen kanssa, tai laimennetaan väliaineella, 5 tai suljetaan väliaineen sisään, joka voi olla kapselin, pussin, paperin tai muun astian muodossa. Kun väliaine toimii laimennusaineena, se voi olla kiinteää, puolikiin-teää tai nestemäistä materiaalia, joka toimii aktiivisen valmistusaineen vehikkelinä, täyteaineena tai väliaineena. 10 Koostumukset voivat olla tablettien, pillerien, jauheiden, pastillien, pussien, kapselien, eliksiirien, suspensioiden, emulsioiden, liuosten, siirappien, aerosolien tai salvojen muodossa, jotka sisältävät esimerkiksi enintään 10 paino-% aktiivista yhdistettä, pehmeä- tai kovakuoris-15 ten gelatiinikapselien, peräpuikkojen, steriilien injisoi-tavien liuosten, ja steriilien pakattujen jauheiden muodossa .

Joitakin esimerkkejä sopivista väliaineista, täyteaineista ja laimennusaineista ovat mm. laktoosi, dekst-20 roosi, sakkaroosi, sorbitoli, mannitoli, tärkkelykset, kumi, akaasia, kalsiumfosfaatti, alginaatit, traganttikumi, • gelatiini, kalsiumsilikaatti, mikrokiteinen selluloosa, polyvinyylipyrrolidoni, selluloosa, vesisiirappi, metyy- • · liselluloosa, metyyli- ja propyylihydroksibentsoaatt i, 25 talkki, magnesiumstearaatti ja mineraaliöljy. Lisäksi for- • » ;·, mulaatiot voivat sisältää voiteluaineita, kostutusaineita, • «· emulgoimisianeita ja suspendoimisaineita, säilöntäaineita,

« t I

* makeutusaineita, tai aromiaineita. Keksinnön mukaiset koostumukset voidaan formuloida aikaansaamaan aktiivisen φ · · • · · • .* 30 valmistusaineen nopean, jatkuvan tai viivästetyn vapautu- misen, sen jälkeen kun se on annettu potilaalle alalla hyvin tunnettuja menetelmiä käyttämällä.

Edullisesti koostumukset formuloidaan yksikköan- • nosmuotoon kunkin annoksen sisältäessä noin 5-5 000 mg, * * 35 edullisemmin noin 25-3 000 mg, aktiivista valmistusai- 17 113049 netta. Edullisin yksikköannosmuoto sisältää noin 100 - 2 000 mg aktiivista valmistusainetta. Käsite "yksikköannosmuoto" viittaa fysikaalisesti erilliseen yksikköön, joka soveltuu yksikköannoksiksi ihmiskohteille ja muille 5 nisäkkäille kunkin yksikön sisältäessä aktiivisen materiaalin ennalta määrätyn määrän, jonka on laskettu tuottavan halutun terapeuttisen vaikutuksen, sopivan farmaseuttisen väliaineen yhteydessä. Seuraavat formulaatioesimer-kit ovat vain kuvaavia, eikä niitä ole tarkoitettu 10 keksinnön suoja-alaa millään lailla rajoittaviksi. Formulaatio 1

Kovakuorisia gelatiinikapseleita valmistetaan seu-raavia valmistusaineita käyttämällä: 15 Määrä (mg/kapseli)

Aktiivinen valmistusaine 250 Tärkkelys, kuivattu 200 20 Magnesiumstearaatti 10

Yhteensä 460 mg

Edellä olevat valmistusaineet sekoitetaan ja täy- λ tetään kovakuorisiin gelatiinikapseleihin määrät 460 mg.

• · ) 25 Formulaatio 2 * 1 a

Valmistetaan tabletti seuraavia valmistusaineita *...1 käyttämällä: • · • 1 · Määrä ( > t 30 (mg/tabletti) 1 ‘ : Aktiivinen valmistusaine 250 • 1

Selluloosa, mikrokiteinen 400 • >

Piidioksidi, savutettu 10 • · : 35 Steariinihappo 5

Yhteensä 665 mg • » • tila • · · • · * 1 · 18 113049

Komponentit sekoitetaan, ja puristetaan tablettien muodostamiseksi, jotka painavat kukin 665 mg.

Formulaatio 3

Valmistetaan aerosoliliuosta, joka sisältää seu-5 raavat komponentit: paino-%

Aktiivinen valmistusaine 0,25 10 Etanoli 29,75

Ponneaine 22 70,00 (klooridifluorimetaani)

Yhteensä 100,00 15 Aktiivinen yhdiste sekoitetaan etanolin kanssa, ja seos lisätään osaan ponneaine 22:ta, joka on jäähdytetty -30 °C:seen, ja siirretään käyttölaitteeseen. Vaadittava määrä syötetään sitten ruostumattomasta teräksestä valmistettuun astiaan, ja laimennetaan ponneaineen loppuosalla. 20 Sitten venttiiliyksiköt sovitetaan astiaan.

Formulaatio 4 * Valmistetaan seuraavalla tavalla tabletteja, jotka sisältävät kukin 60 mg aktiivista valmistusainetta: * » • « 1 • 1 ."h 25 Aktiivinen valmistusaine 60 mg * 1 » ;·. Tärkkelys 45 mg

Mikrokiteinen selluloosa 35 mg * · i

Polyvinyylipyrrolidoni 4 mg

Natriumkarboksimetyylitärkkelys 4,5 mg « 1 » : ·1 30 Magnesiumstearaatti 0,5 mg • 1 ·

Talkki 1 mg j Yhteensä 150 mg • » i ( ( i »

Aktiivinen valmistusaine, tärkkelys ja selluloosa tmi ' 1 35 ajetaan nro 45 mesh US-verkon läpi, ja sekoitetaan läpiko- » i » • t 19 113049 taisin. Polyvinyylipyrrolidonin liuos sekoitetaan tulokseksi saatujen jauheiden kanssa, jotka sitten ajetaan nro 14 mesh US-verkon läpi. Näin tuotetut rakeet kuivataan 50 °C:ssa, ja ajetaan nro 18 mesh US-verkon läpi. 5 Natriumkarboksimetyylitärkkelys, magnesiumstearaatti ja talkki, jotka on aikaisemmin ajettu nro 60 mesh US-verkon läpi, lisätään sitten rakeisiin, jotka sekoittamisen jälkeen puristetaan tabletointikoneella, jolloin saadaan tabletteja, jotka painavat kukin 150 mg.

10 Formulaatio 5

Valmistetaan seuraavalla tavalla kapseleita, jotka sisältävät kukin 80 mg lääkettä:

Aktiivinen valmistusaine 80 mg 15 Tärkkelys 59 mg

Mikrokiteinen selluloosa 59 mg

Magnesiumstearaatti 2 mg

Yhteensä 200 mg 20 Aktiivinen valmistusaine, selluloosa, tärkkelys ja magnesiumstearaatti sekoitetaan, ajetaan nro 45 verkon lä-;*·*; pi, ja täytetään kovakuorisiin gelatiinikapseleihin määrät • V. 200 mg.

* · . ’.', Formulaatio 6 • · · 25 Seuraavalla tavalla voidaan valmistaa peräpuikkoja, .!*' jotka sisältävät kukin 225 mg aktiivista valmistusainetta: t · • i · » * » » > · ’·' * Aktiivinen valmistusaine 225 mg

Tyydyttyneet rasvahappoglyseridit 2 000 mg ! ’,· 30 Yhteensä 2 225 mg * · * · t I » ,·[ ; Aktiivinen valmistusaine ajetaan nro 60 mesh US- • * · ! verkon läpi, ja suspendoidaan tyydyttyneisiin rasvahappo- * · , glyserideihin, jotka on aikaisemmin sulatettu minimaalista “· “ Ϊ 35 välttämätöntä lämpöä käyttämällä. Sitten seos kaadetaan * » 20 113049 peräpuikkomuottiin, jonka nimelliskapasiteetti on 2 g, ja annetaan jäähtyä.

Formulaatio 7

Valmistetaan seuraavalla tavalla suspensioita, 5 jotka sisältävät kukin 50 mg lääkettä 5 ml:n annosta kohden:

Aktiivinen valmistusaine 50 mg

Natriumkarboksimetyyliselluloosa 50 mg 10 Siirappi 1,25 ml

Bentsoehappoliuos 0,10 ml

Aromi tarpeen mukaan Väri tarpeen mukaan

Puhdistettu vesi yhteensä 5 ml:aan 15 Lääke ajetaan nro 45 mesh US-verkon läpi, ja sekoitetaan natriumkarboksimetyyliselluloosan ja siirapin kanssa tasaisen tahnan muodostamiseksi. Bentsoehappoliuos, aromi ja väri laimennetaan pienellä määrällä vettä, ja 20 lisätään sekoittaen. Sitten lisätään riittävästi vettä vaaditun tilavuuden tuottamiseksi.

' l Formulaatio 8 : Seuraavalla tavalla voidaan valmistaa laskimon-.V. sisäistä formulaatiota: • t « 25 - • i I I t ;·, Aktiivinen valmistusaine 100 mg • » *

Mannitoli 100 mg « I | ' 5 N natriumhydroksidi 200 ml

Puhdistettu vesi yhteensä 5 ml:aan • · » : .· 30 *»»

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

.‘· ! Esimerkki 1 * I I • · (S) -o-metyyli-1,3-bentsodioksoli-5-etanolin • · > synteesi ’ ' 35 1 ekvivalentti 3,4-metyleenidioksifenyyliasetonia,

* * I

·,,,· 0,45 ekvivalenttia dinatriumfosfaattia, 0,03 ekvivalenttia 21 113049 fosforihappoa, 12,5 tilavuutta AD-7-hartsia ja 5,8 tilavuutta vettä sekoitettiin yhteen, ja sekoitettiin 15 - 60 minuutin ajan 20 - 25 °C:ssa. Lisättiin 2,27 ekvivalenttia glukoosia, ja Z. rouxii ATCC 14462:ta määrä 1,5 g märkää 5 solutahnaa/g ketonia (ts. 0,375 g/g kuivalta pohjalta). Tämä seos laimennettiin vedellä 25 tilavuuteen, ja sekoitettiin sitten varovasti 33 - 35 °C:ssa 8-16 tuntia.

Seos suodatettiin 100 mesh (~150 pm) ruostumattomasta teräksestä valmistetulla verkolla, ja verkolla pysynyt hart-10 si pestiin 25 tilavuudella vettä, joka oli jaettu 4 erilliseen osaan. Tuote, joka oli adsorboitunut hartsiin, de-sorboitiin sitten hartsista 25 tilavuudella asetonia. Sitten asetoni/tuoteliuos stripattiin kuiviin tyhjössä, jolloin saatiin otsikkovälituote keltaisena, keskinkertaisen 15 viskositeetin omaavana öljynä. In situ -saanto oli 97 -100 %, kun taas eristetty saanto oli 85 - 90 %. Tehokkuus oli 80 - 95 %, ja EE on 100 %.

Esimerkki 2 (5RS,7S)-7,8-dihydro-7-metyyli-5-(4-nitrofenyyli)-20 5H-l,3-dioksolo[4,5-G][2]bentsopyraanin synteesi

Edellä oleva välituote liuotettiin 4,64 tilavuuteen tolueenia, suodatettiin hyflolla, ja pestiin 1,55 tilavuudella tolueenia. Lisättiin 1,05 ekvivalenttia p- ,nitro-bentsaldehydiä ja 1,05 ekvivalenttia konsentroitua » * · 25 suolahappoa ja seosta kuumennettiin 55 - 65 °C:seen ja ,1" sekoitettiin 1 tunti. Sitten suoritettiin liuottimen t · • ” vaihto 33,3 kParssa (250 mmHg) korvaten tolueenin « · · *·* * 12,4 tilavuudella seosta, jossa oli 93 % isopropanolia ja 7 % vettä. Tilavuus tämän liuotinvaihton aikana vaihteli • ' · 30 välillä 11 - 14 tilavuutta, ja lopullinen tilavuus oli ~ll tilavuutta. Seos jäähdytettiin 0-10 °C:seen ja / . sekoitettiin 1 tunti. Neulamaiset tuotteen kiteet suoda- • · > ’ | tettiin ja pestiin kahdesti 1,85 tilavuudella isopropanolia ja kuivattiin tyhjössä 50 - 60 °C:ssa. Otsikko- 35 yhdisteen in situ -saanto oli 95+%, kun taas eristetty saanto oli 87 - 93 %. Tehokkuus oli 99+%, ja EE oli 100 %.

22 113049

Esimerkki 3 (S)-α-metyyli-l,3-bentsodioksoli-5-etanolin vaihtoehtoiset synteesit 3,47 grammaa 4-bromi-l,2-(metyleenidioksi)bentsee-5 niä liuotettiin 100 ml:aan tetrahydrofuraania -78 °C:ssa, lisättiin sitten 13,9 ml 1,3 M sek-butyylilitiumia syklo-heksaanissa aryylihalogenidin käyttämiseksi alle 30 minuutissa. Lisättiin ruiskulla 1,00 g (S)-(-)-prop-yleenioksidia 2 ml:ssa THF:ää, ja liuosta sekoitettiin 10 45 minuutin ajan. Sitten liuos lämmitettiin 23 °C:seen 16 tunniksi. Reaktioseos kaadettiin 3 M ammoniumklo- ridiliuokseen ja tuote eristettiin uuttamalla etyyliasetaatilla. Yhdistetyt uutteet kuivattiin magnesium- sulfaatilla, suodatettiin florisilin läpi ja konsent-15 roitiin kiertohaihduttimella. Jäljelle jäänyt öljy puhdistettiin silikageelikromatografialla ja eluoitiin heksaanin ja dietyylieetterin 50:50-seoksella, jolloin saatiin 1,40 g (45 %) alaotsikon välituotetta. Pchem: [Oi] 365 +117,2 ° (c 1,0, CHC13) TLC Rf = 0,26 (50:50 20 heksaani:eetteri); IR (CHCI3) 3598, 3012, 2973, 2887, 1490, 1249, 1041 cm"1; 13C-NMR (CDC13) d 147,75, 146, 19, 132,26, 122,27, 109,68, 108,30; massaspektri, m/z (FD, M+) f·'. 180; Analyysi laskettu C10H12O3: lie: C, 66,65; H, 6,71.

,V. Saatu: C, 66, 42; H, 6,66.

» » · 25 Esimerkki 4 * » ..*! ’ (5RS, 7S) -7,8-dihydro-7-metyyli-5- (4-nitrofenyyli) - ^ S · ‘.,. 5H-1,3-dioksolo [4,5-G] [2]bentsopyraanin vaihtoehtoinen * * synteesi 244 g p-nitrobentsaldehydiä lisättiin liuokseen, ; V 30 jossa oli 300 g esimerkin 1 biokatalysoidussa pelkis- tysvaiheessa muodostunutta välituotetta 4,45 l:ssa tolu-: eenia. Lisättiin tipoittain 166,5 ml konsentroitua suola- ’t ! happoa 15 - 20 minuutin aikana ja tulokseksi saatua seosta • t kuumennettiin 60 °C:seen 2,5 tunnin ajan. Seos jääh- ’·"· 35 dytettiin huoneenlämpötilaan ja konsentroitiin kierto- » » · :>it: haihduttimella. Lisättiin 3 1 etanolia ja seos konsent- 23 113049 roitiin kiinteäksi aineeksi. Lisättiin toinen 3 litran erä etanolia ja seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan. Suspensiota jäähdytettiin yön yli ja kiteinen tuote eristettiin suodattamalla imupullolla. Suodatinkakku pestiin eta-5 nolilla ja kuivattiin sitten tyhjöuunissa 40 - 60 °C:ssa, jolloin saatiin 450 g (86 %) likaisenvalkoista kiinteää ainetta, jonka määritettiin olevan edellä olevan alaotsikon optisesti aktiivisen välituotteen isomeerien seosta. P chem: [a] 365 + 55 0 (c 0,4, CHCI3) .

10 Esimerkki 5 (5RS,7S)-7,8-dihydro-7-metyyli-5-(4-nitrofenyyli)-5H-l,3-dioksolo[4,5-G][2]bentsopyraani-5-olin synteesi 350 g esimerkin 4 isomeeristä välituotetta lisättiin liuokseen, jossa oli 731 ml dimetyylisulfoksidia ja 15 2 923 ml dimetyyliformamidia. Seos jäähdytettiin lämpöti laan 8 - 12 °C ja seoksen läpi ajettiin paineilmaa. Lisättiin yhdessä erässä 117,5 ml 50-%:ista natrium- hydroksidin vesiliuosta, ja tulokseksi saatua seosta sekoitettiin 4,5 tunnin ajan. Reaktioseos lisättiin 20 kanyylillä 30 - 60 minuutin aikana 8,25 Iraan sekoitettua IN suolahappoliuosta 10 - 15 °C:ssa. Tulokseksi saatu : sakka suodatettiin, ja pestiin 3 1:11a vettä, sitten ·' *; kuivattiin ilmassa vakiopainoon (384 g) . Märkää kakkua käytettiin esimerkissä 6 enempää kuivaamatta. P chem: .···, 25 Arvot mitattu isomeerien 3:1-seoksesta. TLC Rf = 0,19 (75:25 heksaani: etyyliasetaatti) ; IR (CHCI3) 3605, 3590, 3015, 3000, 2960, 2910, 1608, 1522, 1484, 1352, 1240, 1042 ’·’ * cm-1; 1H-NMR (CDCI3, 300 MHz) δ (pääasiallinen isomeeri) 8,16 (d, 2H, J = 6,9 Hz), 7,73 (d, 2H, J = 6,9 Hz), 6,55 : 30 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 5,86 (s, 1H) , 5,83 (s, 1H) , 4,38 ·'*]·' (m, 1H) , 2,70 (m, 2H) , 1,39 (d, 3H, J = 6,3 Hz); δ : (vähäisempi isomeeri) 8,27 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 7,90 (d, ^ j 2H, J = 8,6 Hz), 6,87 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 6,03 (s, 1H), , 6,02 (s, 1H) , 3,95 (m, 1H) , 2,7 (peittynyt, m, 2H) , 1,24 ’*“· 35 (d, 3H, J = 6,1 Hz); massaspektri, m/z (FD, M+) 329; > < » 24 113049

Analyysi laskettu Ci7Hi5N06: lie: C, 62,01; H, 4,59; N, 4,25. saatu C, 62,22, H, 4,79; N, 4,29.

Esimerkki 6 (5RS,7S)-7,8-dihydro-7-metyyli-5-(4-nitrofenyyli)-5 5H-1,3-dioksolo[4,5-GJ[2]bentsopyran-5-olin synteesi 15 g esimerkin 4 välituotetta (johdettu Z. rouxii -välitteisestä ketonipelkistyksestä) liuotettiin liuokseen, jossa oli 75 ml dimetyylisulfoksidia ja 75 ml dime-tyyliformamidia. Liuos jäähdytettiin 7-9 °C:seen ja il-10 mastettiin sitten 40-%:isella hapella typessä. Lisättiin 7,62 g 50-%:ista natriumhydroksidia vedessä ja tulokseksi saatua seosta sekoitettiin 3-4 tuntia. Reaktio päätettiin ja pitäen lämpötila < 12 °C:ssa lisättiin 120 ml tolueenia, sen jälkeen seosta, jossa oli 45 ml vettä ja 15 10 ml suolahappoa. Faasit erotettiin ja orgaaninen kerros pestiin 75 ml:11a 10-%:ista natriumtiosulfaatin vesi- liuosta. Orgaaninen kerros, joka sisälsi alaotsikon välituotteen, siirrettiin seuraavaan vaiheeseen.

Esimerkit 7-9 20 0,5 ml pakastettua hiivasuspensiota, joka sisälsi taulukon 1 mikro-organismia, lisättiin 50 ml:aan hiiva-mallas-väliainetta 250 ml:n pullossa. Kun oli ravisteltu 48 tuntia, lisättiin 1,0 ml viljelmää vielä 50 ml: aan vä-liainetta ja ravisteltiin vielä 48 tuntia. Lisättiin 3,4- • * * .···, 25 metyleenidioksifenyyliasetonia lopulliseen konsentraa- tioon 10 g/1 yhdessä 1 ml:n kanssa 10-%:ista glukoosia.

• » ·

Viljelmiä inkuboitiin ja ravisteltiin 24 tuntia, sitten • i * ’·’ * analysoitiin HPLC:llä esimerkin 1 kiraalisen alkoholi- välituotteen läsnäolon suhteen.

• · » • » * * • »iti 25 113049

Taulukko 1

Mikro- Konver-

Esim. organismi Lähde sio-% % EE

7 Candida famata (C.f.) ATCC 0,0 ---- 5 26418 8 Zygosaccharomyces (Z.r.) ATCC 77,8 99,5 rouxii 14462 9 Mortierrela (M.i.) NRRL 1,7 94,3 isobellina 1557 10

Esimerkki 10 (S)-1-[(4-nitrofenyyli)-[5-[4-(2-hydroksipropyy-li)-1,2-metyleenidioksifenyyli]]]-2-fenyylidiatsaanin synteesi 15 Liuokseen, jossa oli esimerkin 5 tuotetta (1,30 g) 20 ml:ssa etanolia, lisättiin fenyylihydratsiinia (0,45 grammaa). Tulokseksi saatu liuos kuumennettiin kiehumaan palautusjäähdyttäjällä 12 tunniksi. Seos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja laimennettiin dikloorimetaanilla ja 20 pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin kiertohaihduttimella. Jäännös puhdistettiin 'J; silikageelikromatografiällä (50-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa), jolloin saatiin 1,52 g otsikkoyhdisteen 1:1-,··, 25 iso-meeriseosta (91 %). TLC Rf 0,43 (50 % EtOAc/heksaani) ; 1H-NMR (CDC13, 300 MHz) δ 8,17 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,70 (m, 3H), 7,31 (m, 2H) , 7,14 (m, 2H) , 6,94 (m, 1H) , 6,59 (d, ’·’ : 1H, J = 9 Hz), 6,08 (m, 2H) , 3,93 (m, 1H) , 2,41 (m, 2H) , 1,10 (2d, 3H, J = 6,3 Hz) .

: .· 30 Esimerkki 11 _·' (S) -1- [ (4-nitrofenyyli) - [5- [4- (2-hydroksipropyy- , , : li)-1,2-metyleenidioksifenyyli]]]-2-(2-pyridyyli)diatsaa- j nin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 5 tuotetta (1,68 g) ; 35 25 ml:ssa etanolia, lisättiin 2-hydratsinopyridiiniä (0,70 : : grammaa). Tulokseksi saatua seosta kuumennettiin palautus- 26 113049 jäähdyttimellä 24 tunnin ajan. Liuos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja konsentroitiin kiertohaihduttimella. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin magnesium-5 sulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin kiertohaihduttimella. Jäännös puhdistettiin silikageelikromatografiällä (50-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa), jolloin saatiin 1,30 g otsikkoyhdistettä (61 %) . ^-NMR (CDC13, 300 MHz) δ 8,17 (dd, 2H, J = 1,8, 7 Hz), 8,07 (m, 1H), 7,74 (m, 3H), 10 7,51 (m, 1H), 6,98 (d, 1H, J = 7), 6,83 (m, 1H), 6,59 (d, 1H, J = 4 Hz), 6,05 (dd, 2H, J = 1,3, 8 Hz), 3,84 (m, 1H), 2,40 (m, 2H), 1,06 (d, 3H, J = 6,1 Hz).

Esimerkki 12 (S)-1-[4-nitrofenyyli)-[5-[4-(2-hydroksipropyyli)-15 1,2-metyleenidioksifenyyli]]]-2-(1-ftalatsinyyli)diatsaa- nin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 5 välituotetta (3,78 g) 50 ml:ssa etanolia, lisättiin natriumbikarbonaattia (0,8 g) ja hydralatsiinihydrokloridia (2,2 g). Tulok-20 seksi saatua heterogeenistä seosta kuumennttiin palautus-jäähdyttimellä 12 tunnin ajan. Seos jäähdytettiin huoneen-·]: lämpötilaan ja seos kaadettiin nopeasti sekoitettuun jää- veteen (50 - 100 ml) . Seosta sekoitettiin 30 min ajan ja tulokseksi saatu sakka eristettiin suodattamalla. Orans-,··. 25 sinvärinen kiinteä aine pestiin vedellä ja pienellä erässä .!*’ eetteriä. Kiinteää ainetta kuivattiin tyhjöuunissa lämpö- *,,, tilassa 60 °C 72 tunnin ajan, jolloin saatiin 4,3 g halut-

·’ ’ tua tuotetta (80 %) isomeerien seoksena (noin 9:1). 1H-NMR

(CDCI3, 300 MHz, pääasiallinen isomeeri) δ 10,7 (br s, Ϊ 30 1H) , 8,20 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,98 (m, 2H) , 7,84 (d, 2H, J = 9 Hz), 7,65 (m, 3H) , 6,91 (s, 1H) , 6,49 (s, 1H) , 6,05 .·! : (s, 2H) , 3,99 (m, 1H) , 3,92 (br s, 1H) , 2,60 (dd, 1H, J = • · > 2, 14 Hz), 2,17 (dd, 1H, J = 10, 14 Hz), 1,11 (d, 3H, J = 6 Hz) .

t t 27 1 13049

Esimerkki 13 (R)-7-fenyyli-8,9-dihydro-8-metyyli-5-(4-nitrofen-yyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiatsepiinin synteesi 5 Liuokseen, jossa oli esimerkin 10 tuotetta (0,64 g) 6 ml:ssa dikloorimetaania jäähdytettynä 0 °C:seen, lisättiin trietyyliamiinia (0,24 g), sen jälkeen metaanisulfonyylikloridia (0,2 g). 0,5 tunnin kulut tua seos lämmitettiin huoneenlämpötilaan ja laimennettiin 10 dikloorimetaanilla. Liuos pestiin peräkkäin 1 N HCl:llä, vedellä ja kylläisellä natriumbikarbonaatilla. Orgaaninen liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin oranssinväristä kiinteää ainetta (0,81 g). Osa kiinteästä aineesta (0,66 g) liuo-15 tettiin 6 ml:aan tetrahydrofuraania ja jäähdytettiin 0 °C:seen. Lisättiin yhdessä erässä litium-t-butoksidia (0,2 g). 0,5 tunnin kuluttua liuos laimennettiin etyyli asetaatilla ja pestiin sitten peräkkäin kylläisellä ammoniumkloridilla, vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen 20 liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin silikageeli-kromatografialla (60-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa), ; ·*; jolloin saatiin 0,28 g otsikkoyhdistettä (51 %). TLC Rf =

0,81 (60-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa); 1H-NMR

25 (CDCls, 300 MHz) 8,20 (dd, 2H, J = 2,3, J = 9,4 Hz), 7,78 >'·[' (dd, 2H, J = 2,3, J = 9,3 Hz), 7,3 (m, 4H) , 6,95 (m, 1H) , 6,74 (s, 1H), 6,58 (s, 1H) , 5,97 (s, 2H) , 4,93 (m, 1H) , 3,13 (dd, 1H, J = 2,6, J = 14,4 Hz), 2,83 (dd, 1H, J = 7,0, 14,4 Hz), 1,10 (d, 3H, J = 6,5 Hz); 13C-NMR (CDC13, : .· 30 75 MHz) δ 148,5, 148,4, 148,0, 147,1, 146,2, 144,1, 134,8, J 129,8, 129,1, 126,8, 123,5, 121,2, 116,3, 109,6, 109,3, ; ’ ; 101,6, 61,9, 39,5, 18,9.

» » > · » » » 2β 113049

Esimerkki 14 (R)-7-(2-pyridyyli)-8,9-dihydro-8-metyyli-5-(4-nitrofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiatsepii-nin synteesi 5 Liuokseen, jossa oli esimerkin 11 tuotetta (0,452 grammaa) 5 mlrssa dikloorimetaania, jäähdytettynä lämpötilaan 0 °C, lisättiin trietyyliamiinia (0,17 g), sen jälkeen metaanisulfonyylikloridia (0,15 g). 0,5 tunnin kuluttua seos lämmitettiin huoneenlämpötilaan ja lai-10 mennettiin dikloorimetaanilla. Liuos pestiin 15 ml: n erillä suolaliuosta (2x) ja vettä (2x). Orgaaninen liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin kiertohaihduttimella, jolloin saatiin keltaista kiinteää ainetta (0,594 g). Osa keltaisesta kiin-15 teästä aineesta (0,45 g) liuotettiin 6 ml:aan tetra- hydrofuraania ja jäähdytettiin 0 °C:seen. Lisättiin yhdessä erässä litium-t-butoksidia (0,13 g). 0,75 tunnin kuluttua seos lämmitettiin huoneenlämpötilaan ja sekoitusta jatkettiin 3 tunnin ajan. Seos laimennettiin 20 etyyliasetaatilla. Tulokseksi saatu liuos pestiin kylläisellä ammoniumkloridiliuoksella, vedellä ja ·’: suolaliuoksella. Liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin ;V. silikageelikromatografiällä (60-%:inen EtOAc heksaanien ,·*·. 25 seoksessa), jolloin saatiin 0,25 g otsikkoyhdistettä .Γ’ (68 %) . TLC Rf = 0,81 (60-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa); 1H-NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 8,23 m, 3H) , 7,76 v ' (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,58 (m, 1H), 7,50 (m, 1H), 6,80 (m, 1H) , 6,75 (s, 1H) , 6,54 (s, 1H) , 5,97 (m, 2H) , 5,82 (m, il 1 : 30 1H) , 3,19 (d, 1H, J = 14,4 Hz), 2,88 (dd, 1H, J = 6,9, 14,5 Hz), 1,05 (d, 3H, J = 6,3 Hz); 13C-NMR (CDC13, 75 MHz) . I δ 158,1, 148,5, 148,4, 147,2, 147,1, 146, 0, 143,5, 137,6, » j 135,5, 129,9, 126,6, 123,5, 116,0, 111,0, 109,8, 109,7, 101,6, 57,7, 39,2, 18,8.

l : f I

29 113049

Esimerkki 15 (R)-7-(1-ftalatsinyyli)-8,9-dihydro-8-metyy1i-5-(4-nitrofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiatsepii-nin synteesi 5 Liuokseen, jossa oli esimerkin 12 otsikkoyhdistettä (0,26 g) ja trietyyliamiinia (0,083 g) 15 ml:ssa dikloori-metaania, lisättiin liuos, jossa oli metaani- sulfonyylikloridia (0,07 g) 2 ml:ssa dikloorimetaania. Lisättiin vielä metaanisulfonyylikloridia (0,07 g) ja 10 trietyyliamiinia (0,08 g) reaktion loppuun saattamiseksi. Orgaaninen liuos pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin sitten natriumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin. Jäljelle jäänyt öljy liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin IN NaOH:lla (3x). Orgaaninen liuos kuivattiin 15 natriumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin 0,33 g oranssinväristä nestettä. Jäännös liuotettiin 10 ml:aan tetrahydrofuraania ja lisättiin litium-t-butoksidia (0,087 g). Tulokseksi saatua liuos sekoitettiin yön yli. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla 20 ja pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja kon-' sentroitiin. Jäännös puhdistettiin silikageelikromato- grafialla (4:1:1 heksaanien seos, asetoni, kloroformi), jolloin saatiin 0,11 g otsikkoyhdistettä (45 %) keltaisena 25 kiinteänä aineena ja 0,05 g vastaavaa eliminointituotetta (21 %). TLC Rf = 0,22 (50-%;inen EtOAc heksaanien seoksessa); 1H-NMR (CDC13, 500 MHz): δ 9,25 (s, 1H) , » * # v * 8,19 - 8,16 (m, 3H) , 7,90 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,82 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 7,76 - 7,73 (m, 3H), 6,89 (s, 1H), 6,69 : V 30 (s, 1H) , 6,05 (d, 2H, J= 3,8 Hz), 5, 97 - 5,94 (m, 1H) , 3,32 (dd, 1H, J = 3,8, 14,4 Hz), 2,88 (dd, 1H, J = 5,2, .0 : 14,4 Hz), 1,31 (d, 3H, J = 6,3 Hz); 13C-NMR (CDC13, 125 MHz): δ 157,73, 153,32, 149,39, 148, 94, 148,22, 146,68, 145,98, 136,04, 131,93, 131,66, 130,06, 129,66, 35 126,93, 126,79, 126, 73, 123,88, 123,55, 110,28, 109, 16, :’j 102,09, 63,20, 39,33, 19, 35.

30 1 13 0 4 9

Esimerkki 16 (R)-7-fenyyli-8,9-dihydro-8-metyyli-5-(4-aminofen-yyli)-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiatsepiinin synteesi 5 Liuokseen, jossa oli esimerkin 13 tuotetta (0,24 g) 15 ml:ssa iso-propanolia, lisättiin 10-%:ista Pd/C:tä (100 mg), sen jälkeen liuos, jossa oli kaliumformiaattia (0,13 g) 0,5 ml:ssa vettä. 1,5 tunnin kuluttua lisättin vielä kaliumformiaattia (0,80 g). 4 tunnin kuluttua reak-10 tioseos suodatettiin piimään läpi ja konsentroitiin. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, joka sitten pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin kierto-haihduttimella. Jäännös puhdistettiin silikageelikromato-15 grafialla (33-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa). Keltainen kiinteä aine liuotettiin etanoliin ja konsentroitiin (2x) , sitten kuivattiin tyhjöuunissa 50 °C:ssa 12 tunnin ajan, jolloin saatiin 0,135 g otsikkoyhdistettä (61 %). TLC Rf = 0,33 (33-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa); sp. 20 118 - 119 °C; MS (FD+), m/z 371; XH-NMR (CDC13, 300 MHz) δ 7,6 (dd, 2H, J = 1,8, J = 6,7 Hz), 7,24 (m, 2H), 7,02 (d, 2H, J = 7,8 Hz), 6,77 (m, 2H) , 6,70 (m, 2H) , 6,61 (s, 1H) , 5,98 (d, 1H, J = 1,3 Hz), 5,91 (d, J = 1,3 Hz), 4,8 (m, 1H), 3,89 (br s, 2H) , 2,74 (m, 2H) , 1,24 (d, 3H, J = .·*, 25 6,2 Hz); 13C-NMR (CDC13, 75 MHz) δ 166, 8, 149,2, 148,4, ;·" 148,3, 145, 9, 135, 4, 130,8, 128,8, 128,7, 127,9, 118,6, 115,3, 114,5, 109,3, 108,2, 101,3, 64,5, 40,1, 16, 16.

i t t ’ Esimerkki 17 (R)-7-(2-pyridyyli)-8,9-dihydro-8-metyyli-5-(4- • · · : .· 30 aminofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]lbentsodiatsepii- t 1 t *...· nin synteesi : Liuokseen, jossa oli esimerkin 14 tuotetta (0,17 g) • » 10 mlrssa iso-propanolia, lisättiin 10-%:ista Pd/C:tä • · (0,9 g), sen jälkeen liuos, jossa oli kaliumformiaattia *

» I * 11 I

* * 35 (0,09 g) 0,5 mlrssa vettä. Lisättiin vielä kaliumfor- > ) » » 1 31 113049 miaattia (0,05 g) 1 tunnin kuluttua. 2 tunnin kuluttua reaktioseos suodatettiin piimään läpi ja konsentroitiin. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, joka sitten pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin 5 magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin kiertohaihduttimella. Jäännös puhdistettiin silikageeli-kromatografiällä (50-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa). Keltainen kiinteä aine liuotettiin etanoliin ja konsentroitiin (2x), sitten kuivattiin tyhjöuunissa 50 °C:ssa 10 12 tunnin ajan, jolloin saatiin 0,12 g otsikkoyhdistettä (75 %) . TLC Rf = 0,6 (50-%:inen EtOAc heksaanien seoksessa); sp. 128 - 130 °C; MS (FD+) , m/z 372; 1H-NMR (CDC13, 300 MHz) δ 8,17 (m, 1H), 7,61 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,46 (m, 1H), 6,97 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 6,80 (s, 1H), 6,75 15 (d, 2H, J = 9,0 Hz), 6,68 (m, 2H) , 5,98 (d, 1H, J = 1,3 Hz), 5,92 (d, 1H, 1,3 Hz), 5,50 (m, 1H) , 3,92 (br s,

2H), 2,78 (m, 2H) , 1,26 (d, 3H, J = 6,4 Hz); 13C-NMR

(CDCI3, 7 5Mz) δ 167,1, 159, 4, 148,6, 148,4, 147,2, 145, 8, 137,0, 136,0, 130,9, 128,2, 127,8, 114,4, 113,7, 110,5, 20 109,4, 108,5, 101,3, 63,0, 39,6, 17,3.

Anal, laskettu C22H20N4O2: lie: C, 70,95; H, 5,41; N, 15,04.

·\· Saatu: C, 70,76; H, 5,71; N, 14,93 *: Esimerkki 18 (R) -7- (1-ftalatsinyyli) -8,9 - dihy dr o - 8 -me tyy 1 i - 5 - (4-25 aminofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiatse-piinin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 15 tuote (0,11 g) • » • 20 ml:ssa iso-propanolia, lisättiin 10-%:ista Pd/C:tä (0,053 g), sen jälkeen liuos, jossa oli kaliumformiaattia : .* 30 (0,073 g) < 0,5 ml:ssa vettä. Lisättiin vielä kalium- formiaattia kolmessa erässä 6 tunnin aikana. Seosta ; sekoitettiin yön yli, suodatettiin piimään läpi ja konsentroitiin kiertohaihduttimella. Jäännös liuotettiin . etyyliasetaattiin ja pestiin vedellä ja suolaliuoksella.

* 35 Orgaaninen liuos kuivattiin natriumsulfaatilla, suoda-tettiin ja konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin silika- 32 113049 geelikromatografiällä (gradientti: 1:1 kloroformi: etyyli asetaatti, sitten 1:4 kloroformi:etyyliasetaatti). Eristetty materiaali liuotettiin etanoliin ja konsentroitiin, sitten liuotettiin kloroformi/heksaaniin ja konsent-5 roitiin. Keltaista kiinteää ainetta kuivattiin tyhjö-uunissa 55 °C:ssa 18 tunnin ajan, jolloin saatiin 75,3 mg otsikkoyhdistettä (73 %). Keltaista kiinteää ainetta, sp. 230 °C (hajoaa); TLC Rf = 0,2 (50-%:inen kloroformi etyyliasetaatissa); 1H-NMR (CDCI3, 500 MHz): δ 9,05 (s, 10 1H) , 8,00 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,76 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,71 - 7,68 (m, 1H), 7,65 - 7,62 (m, 1H), 7,53 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,87 (s, 1H) , 6,80 (s, 1H) , 6,65 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 6, 00 - 5, 95 (m, 2H) , 5,70 - 5,66 (m, 1H) , 4,35 - 3,80 (br s, 2H) , 3,00 (dd, 1H, J = 6,1, 13,8 Hz), 2,72 15 (dd, 1H, J = 7,9, 13,8 Hz), 1,47 (d, 3H, J = 5,9 Hz); 13C- NMR (CDCI3): δ 170,32, 157,34, 149,64, 149,07, 147,15, 146,39, 136,16, 131,28, 130,85, 129,49, 128,71, 126,86, 126,67, 126,37, 123,26, 114,84, 109,33, 108,84, 101,80, 64,88, 39,54, 17,82.

20 Esimerkki 19 (S)-a-metyyli-1,3-bentsodioksoli-5-etanolin vaih- 1 · toehtoinen synteesi

Suspensioon, jossa oli magnesiumlastuja (17 g) 50 >*. ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin tipoittain liuos, "·, 25 jossa oli 5-bromi-l,3-bentsodioksolia (93,6 g). Kun lisäys oli suoritettu loppuun, seos laimennettiin 250 ml:11a tetrahydrofuraania ja tulokseksi saatua seosta sekoi- • · * ' tettiin yön yli. 13 ml liuoksesta (0,78 M) siirrettiin pyöreäpohjäiseen kolviin, joka sisälsi kupari(I)jodidia I .* 30 (0,12 g). Tulokseksi saatu seos jäähdytettiin -50 °C:seen ,· ja lisättiin hitaasti liuos, jossa oli (S) -(-)-propy- . . leenioksidia 3 ml:ssa tetrahydrofuraania, sitten sekoi- ,.tettiin 10 minuutin ajan. Seos laimennttiin eetterillä.

, Eristetty orgaaninen faasi pestiin vedellä ja suola- ' ’ 35 liuoksella. Vesipohjainen pesuliemi uutettiin eetterillä ' / (2x) ja yhdistetyt orgaaniset liuokset kuivattiin 33 113049 magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin silikageelikromatografiällä (50-%:inen eetteri pentaanissa), jolloin saatiin 1,66 g haluttua tuotetta (91 %). Kiraalinen HPLC-analyysi osoit-5 ti, että materiaalin optinen puhtaus oli 98,3 %.

Esimerkki 20 (R)-7-(2-bentsotiatsolyyli)-8,9-dihydro-8-metyy1i- 5-(4-nitrofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiat-sepiinin synteesi 10 Liuokseen, jossa oli esimerkin 5 tuote (1,00 g) 25 mlrssa etanolia, jossa oli useita tippoja konsentroitua HCl:ää, lisättiin 2-hydratsinobentsotiatsolia (0,63 g).

Tulokseksi saatu liuos kuumennettiin kiehumaan palautus-jäähdyttäjällä 12 tunniksi. Seos jäähdytettiin huoneen-15 lämpötilaan ja liuotin haihdutettiin. Jäännös uutettiin etyyliasetaatilla ja pestiin suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin kiertohaihduttimella. Osa jäännöksestä (1,0 g) liuotettiin 25 ml:aan dikloorimetaania ja jääh-20 dytettiin lämpötilaan 0 °C. Sitten lisättiin erissä trietyyliamiinia (1,0 ml) ja metaanisulfonyylikloridia (0,58 ml) usean tunnin aikana. Kun oli sekoitettu yön yli '**: huoneenlämpötilassa, seos pestiin peräkkäin IN HClrllä, suolaliuoksella, IN NaOH:lla ja suolaliuoksella. Orgaa-**. 25 ninen liuos kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin ruskeaa öljyä (1,15 g). Osa öljystä (0,95 g) liuotettiin 350 ml:aan etanolia ja t t ·’ ’ jäähdytettiin lämpötilaan 0 °C. Lisättiin yhdessä erässä natriumhydroksidiliuosta (0,09 ml, 19M). 0,75 tunnin ' ,· 30 kuluttua liuos haihdutettiin. Jäännös uutettiin etyyli- asetaatilla ja pestiin sitten peräkkäin vedellä, suo-, : laliuoksella, kylläisellä natriumbikarbonaatilla ja , j suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin natrium- . sulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin. Jäännös puh- t 35 distettiin silikageelikromatografiällä (25-%:inen heksaa-nien seos kloroformissa), jolloin saatiin 0,69 g 34 113049 otsikkoyhdistettä. TLC Rf = 0,37 (25-%:inen CHCI3 hek- saanien seoksessa) ; keltaista kiinteää ainetta, sp. 259, 4 - 260,6; 1H-NMR (CDC13, 500 MHz): δ 8,30 (d, 2H, J= 8,7 Hz), 7,83 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 7,71 (d, 2H, J = 5 8,3 Hz), 7,37 (t, 1H, J = 7,9 Hz), 7,20 (t, 1H, J = 7,4 Hz), 6,82 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 6, 06 - 6, 04 (m, 2H) ,

5,69 - 5,66 (m, 1H), 3,37 (d, 1H, J = 14,8 Hz), 2,97 (dd, 1H, J = 6,1, 14,8 Hz), 1,25 (d, 3H, J = 6,6 Hz); 13C-NMR

(CDCI3, 125MHz): δ 170,15, 152,88, 149,66, 148,12, 10 147,19, 146,76, 146,14, 135,63, 133,25, 130,52, 126,17, 125,83, 123,91, 122,92, 121,29, 120,94, 110,58, 110,52, 102,21, 62,36, 39, 02, 19,28; IR (KBr, cm'1): 1506, 6 (s), 1483,2 (s), 1441,0 (m), 1389,9 (m), 1335,9 (s), 1270,3 (m), 1233,6 (m), 1189,3 (m), 1110,2 (m), 1034,0 (m), 15 1012,8 (m), 910,5 (m), 866,2 (m), 851,9 (s), 754,3 (s), 692,5 (m); massaspektri (FD) , m/z 458,0.

Esimerkki 21 (R)-7-(2-bentsotiatsolyyli)-8,9-dihydro-8-metyyli- 5- (4-aminofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodiat-20 sepiinin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 20 tuotetta (0,55 g) ’ : 300 ml:ssa iso-propanolia ja 25 ml:ssa dimetyylifor- mamidia, lisättiin 10-%:ista Pd/C:tä (250 mg), sen jälkeen liuos, jossa oli kaliumformiaattia (0,30 g) 1,0 ml:ssa . ··. 25 vettä. Lisättiin vielä kaliumf ormiaattia (1,50 g) » · ;]’ 5 erässä 5 tunnin aikana. Kun oli sekoitettu yön yli, < t * reaktioseos suodatettiin piimään läpi ja konsentroitiin.

I I · ‘ Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, joka sitten pestiin vedellä ja kylläisellä natriumbikarbonaatilla. Orgaaninen : .· 30 liuos kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja konsentroitiin kiertohaihduttimella. Jäännös puhdistettiin ·.: silikageelikromatografiällä (4/2/1 kloroformi/heksaanien seos/ EtOAc) , jolloin saatiin 0,31 g haluttua tuotetta . (62 %) . TLC Rf = 0,35 (4/2/1 kloroformi/heksaanien » '· 35 seos/EtOAc);keltaista kiin-teää ainetta, s. geeliytyy 145 /J °C: ssa; 1H-NMR (CDC13, 500 MHz) : δ 7,68 - 7,59 (m, 4H) , 35 113049 7,32 - 7,29 (m, 1H) , 7,12 - 7,09 (m, 1H) , 6,83 (s, 1H) , 6, 75 - 6,72 (m, 2H) , 6,69 (s, 1H) , 6,01 (m, 2H) , 5,46 - 5.42 (m, 1H), 3,97 (s, 2H), 3,02 (dd, 1H, J = 4,6,

14,1 Hz), 2,86 (dd, 1H, J = 9,9, 14,1 Hz), 1,40 (d, 3H, J

5 = 6,3 Hz); 13C-NMR (CDC13, 125 MHz): δ 170,42, 165, 62, 153,45, 149,57, 149,43, 146,50, 135,97, 132,97, 131,68, 127.57, 127,54, 126,07, 121,86, 121,25, 120,13, 114,75, 110.58, 109,43, 101,98, 66,86, 39,31, 18,43; IR (KBr, cm'1): 1619,5 (m), 1605,4 (m), 1510,5 (s), 1484,4 (s), 10 1442,9 (s), 1379,3 (m), 1273,2 (m), 1235,6 (m), 1172,9 (m), 1036,9 (m), 752,3 (m), 726,3 (m); massaspektri (FD), m/z 428,0.

Esimerkki 22 (R)-7-(2-bentsimidatsolyyli)-8,9-dihydro-8-metyy-15 li-5-(4-nitrofenyyli)-7H-l,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodi- atsepiinin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 5 tuotetta (1,79 g, 5.43 mmol) 20 ml:ssa etanolia, lisättiin 2-hydratsino-bentsimidatsolia (0,96 g, 6,51 mmol). Tulokseksi saatua 20 ruskeaa suspensiota kuumennettiin palautusjäähdyttimellä ja 30 minuutin kuluttua lisättiin 3 tippaa konsentroitua 1 1 ♦ HCl:ää. 3 tunnin kuluttua tummaan, punaiseen reaktio-seokseen lisättiin vielä 3 tippaa konsentroitua HCl:ää. t Seosta kuumennttiin palautusjäähdyttimellä päiviä, sitten 25 jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja jaettiin etyyli- 1 * asetaatin ja NaHCC>3:n kylläisen vesiliuoksen välillä. Orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin > < » ’ (Na2S04) ennen kuin konsentroitiin kiertohaihduttimella.

Jäännös kiteytettiin etyyliasetaatista, sitten liuotettiin

I 1 I

‘ .* 30 etyyliasetaattiin ja etanoliin ja pestiin 0,5 M HCl:llä,

NaHC03:n kylläisellä vesiliuoksella, sitten suola-. : liuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin Na2S04:llä, suo- , datettiin, haihdutettiin lähes kuiviin, sitten kitey tettiin 50 ml:sta etyyliasetaattia, jolloin saatiin 876 mg * 35 (S)-1-[(4-nitrofenyyli)-[5-[4-(2-hydroksipropyyli)-1,2- •, metyleenidioksifenyyli]]]-2-(2-bentsimidatsolyyli)diatsaa- 36 113049 nia. Erä tulokseksi saadusta kuivatusta kiinteästä aineesta (800 mg, 1,75 mmol) liuotettiin 40 ml:aan tetra-hydrofuraania. Lisättiin trifenyylifosfiinia (551 mg, 2,10 mmol) ja tulokseksi saatu liuos jäähdytettiin 5 jäävesi/NaCl-hauteella. Lisättiin tipoittain 8 minuutin aikana liuos, jossa oli di-isopropyyliatsodikarboks- ylaattia (430 ml, 2,18 mmol) 5 ml:ssa tetrahydrofuraania ja tulokseksi saatua tummaa liuosta sekoitettiin 30 minuutin ajan, sitten jaettiin etyyliasetaatin ja 10 suolaliuoksen välillä. Orgaaninen kerros kuivattiin

Na2S04:llä, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin oranssinväristä öljyä, joka puhdistettiin silikageeli- kromatografiällä (40 % etyyliasetaattia heksaanien seoksessa), jolloin saatiin 688 mg otsikkoyhdistettä. 1H-NMR 15 (CDC13, 300 MHz) δ 1,20 (d, 3, J = 8); 3,00 (dd, 1, J = 6, 15); 3,34 (d, 1, J = 15); 5,72 (m, 1); 6,02 (d, 2, J = 3); 6,50 (s, 1), 6,79 (s, 1); 7,18 (m, 2); 7,32 (d, 1, J = 8); 7,60 (d, 1, J = 8); 7,72 (d, 2, J = 9); 8,30 (d, 2, J = 9); 9,18 (s, 1) .

20 Esimerkki 23 (R)-7-(2-bentsimidatsolyyli)-8,9-dihydro-8-metyy-,· li-5-(4-aminofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5-h][2,3]bentsodi- ‘ ; atsepiinin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 22 tuotetta (669 mg, ; ", 25 1,52 mmol) 20 mlrssa absoluuttista etanolia N2-vaipan ,, alla, lisättiin 10-prosenttista Pd/C:tä (335 mg), sen .. jälkeen liuos, jossa oli kaliumf ormiaattia (461 mg, f » t 5,48 mmol) 0,5 ml:ssa vettä. 1 tunnin kuluttua reaktioseos suodatettiin seliittikerroksen läpi ja konsentroitiin 1 t t ' .* 30 kiertohaihduttimella. Kiinteä jäännös jaettiin etyyli- ,,· asetaatin ja veden välillä ja orgaaninen kerros pestiin . j suolaliuoksella ja kuivattiin Na2SC>4:llä. Liuotin pois- tettiin kiertohaihduttimella ja jäännös puhdistettiin silikageelikromatografiällä (40-%:inen heksaanien seos ’ ‘ 35 etyyliasetaatissa), jolloin saatiin 478 mg (76,5 %) otsik- koyhdistettä. MS (FD+) = 411. IR: 1623, 1543, 1486 cm"1.

37 113049 1H-NMR (CDC13, 300 MHz) δ 1,29 (d, 3, J = 7); 2,82 (dd, 1, J = 10, 14); 3,02 (dd, 1, J = 4, 14); 3,96 (s, 2); 5,46 (m, 1); 6,00 (d, 2, J = 8); 6,71 (m, 4); 7,08 (m, 2); 7,30 (s, 1); 7,52 (m, 3); 9,00 (s, 1).

5 Esimerkki 24 (R)-7-(2-metoksikarbonyylitien-3-yyli)-8,9-di-hydro-8-metyyli-5-(4-nitrofenyyli)-7H-1,3-dioksolo[4,5h]- [2,3]bentsodiatsepiinin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 5 tuotetta (3,52 g, 10 10,70 mmol) 28 mlrssa etanolia, lisättiin metyyli-3- hydratsinotiofeeni-2-karboksylaattia (2,01 g, 11,67 mmol) ja tulokseksi saatu liuos kuumennettiin kiehumaan palautusjäähdyttäjällä. Yunnin kuluttua lisättiin 3 tippaa konsentroitua HCl:ää ja edelleen tunnin kuluttua 15 reaktioseoksen annettiin jäähtyä lähelle huoneenlämpötilaa ja jaettiin etyyliasetaatin ja 0,2M HCl:n välillä. Orgaaninen kerros pestiin 0,1M HClrllä, kylläisellä

NaHCOarn vesiliuoksella, sitten suolaliuoksella ja kuivattiin Na2S04:llä. Liuotin poistettiin kiertohaih-20 duttimella, jolloin saatiin 4,67 g oranssinväristä kiinteää ainetta. Osa kiinteästä materiaalista (2,086 g, y 4,33 mmol) liuotettiin N2:n alla 60 ml:aan tetrahyd- rofuraania ja kirkas, oranssinvärinen liuos jäähdytettiin y. j äävesi/NaCl-hauteella. Liuokseen lisättiin trietyyli- 25 amiinia (845 ml, 6,06 mmol), sen jälkeen metaani-

sulfonyylikloridia (445 ml, 5,64 mmol). 90 minuutin kulut-tua reaktio sammutettiin 25 ml: 11a vettä ja jaettiin ·' * etyyliasetaatin kanssa. Orgaaninen kerros pestiin IM

HCl:llä, sitten suolaliuoksella ja kuivattiin Na2S04:llä.

: 30 Liuotin poistettiin kiertohaihduttimella, jolloin saatiin ,,,·* 2,464 g kiinteää ainetta. Osa kiinteästä aineesta , : (2,088 g, 3,73 mmol) liuotettiin N2: n alla 40 ml:aan 1 y k (i| tetrahydrofuraania ja liuos jäähdytettiin jäävesi- . hauteessa. Lisättiin litium-t-butoksidia (328 mg, » 35 4,10 mmol) ja reaktiota sekoitettiin 21 tuntia. Lisättiin ytoinen osa litium-t-butoksidia (33 mg, 0,41 mmol) ja 38 113049 2 tunnin kuluttua reaktio sammutettiin 20 ml :11a kylläistä NH4Cl:n vesiliuosta. Seos uutettiin etyyliasetaatilla ja orgaaninen kerros pestiin IM HCl:llä, 1:1-seoksella, jossa oli NaHCCbra ja suolaliuosta ja suolaliuoksella, sitten 5 kuivattiin Na2SC>4:llä. Liuotin poistettiin kiertohaih-duttimella ja jäännös puhdistettiin silikageelikroma-tografialla, jolloin saatiin 1,043 g otsikkoyhdistettä. 1H-NMR (CDC13, 300 MHz): δ 1,10 (d, 3, J = 7); 2,72 (dd, 1, J = 9, 14); 3,06 (dd, 1, J = 5, 14); 3,76 (s, 3); 5,12 10 (m, 1); 6,00 (d, 2, J = 6); 6,55 (s, 1); 6,87 (s, 1); 7,40 (m, 2); 7,79 (d, 2, J = 9); 8,21 (d, 2, J = 9).

Esimerkki 25 (R)-7-(2-metoksikarbonyylitien-3-yyli)-8,9-di-hydro-8-metyyli-5-(4-aminofenyyli)-7H-1,3-dioksolo-15 [4,5-h][2,3]bentsodiatsepiinin synteesi

Liuokseen, jossa oli esimerkin 24 tuotetta (794 mg, I, 71 mmol) 16 ml:ssa absoluuttista etanolia ja 3 ml asetonia N2:n alla, lisättiin 10-%:ista Pd/C:tä (400 mg), sen jälkeen liuos, jossa oli kaliumformiaattia (513 mg, 20 6,10 mmol) 1 ml:ssa H20:ta. 50 minuutin kuluttua seos suodatettiin seliittikerroksen läpi ja konsentroitiin ‘ : kiertohaihduttimella. Jäännös jaettiin etyyliasetaatin ja Λ"; veden välillä ja orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin Na2S04:llä. Liuotin poistettiin kierto-25 haihduttimella ja jäännös puhdistettiin silikageelikro- ih ·

matografiällä (1:1 etyyliasetaatti:heksaamien seos), jolloin saatiin 682 mg haluttua lopputuotetta. 1H-NMR

* * · v * (CDCI3, 300 MHz): δ 1,13 (d, 3, J = 6); 2,62 (dd, 1, J = II, 15); 2,78 (dd, 1, J = 6, 13); 3,70 (s, 3); 3,88 (s, : 30 2); 5,15 (m, 1); 5,95 (d, 2, J = 15); 6,65 (m, 3); 6,88 : (s, 1); 7,35 (d, 1, J = 6); 7,48 (m, 3).

Claims (8)

1. 39 113049 1. (R)-7-(aryylisubstituoitu)-8,9-dihydro-8-alkyy-li-5-(4-aminofenyyli)-7-H-l,3-dioksolo[4,5—h][2,3]bentso- 5 diatsepiini- tai (R)-7-(aryylisubstituoitu)-8,9-dihydro-8-alkyyli-5-(4-nitrofenyyli)-7-H-l, 3-dioksolo[4,5-h] [2,3]-bentsodiatsepiiniyhdiste, jolla on yleinen kaava (I) H f R \ N Aryyli 15 (I) jossa R on Ci-3-alkyyli, X on fenyyli, 2-pyridyyli, 1-ftalatsinyyli, 2-bentsotiat-solyyli, 2-bentsimidatsolyyli tai 2-metoksikarbonyyli-tien-3-yyli ja 20 "aryyli" on p-nitrofenyyli tai p-aminofenyyli, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
2. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että aryyli on p-aminofenyyli. V,
3. 3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen yhdiste, ,···, 25 tunnettu siitä, että R on metyyli. > ·
4. 4. Minkä tahansa edellisen patenttivaatimuksen > > · *,,, mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että X on * · ’·’ * fenyyli, 2-pyridyyli tai 1-ftalatsinyyli.
5. 5. (R)-7-(2-pyridyyli)-8,9-dihydro-8-metyyli-5-(4- • · » : *.· 30 aminofenyyli)-7H-1,3-dioksolo [4,5-h] [2,3] bentsodiatsepiini ί%ιιί tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. ,*, ; 6. Farmaseuttinen koostumus, tunnettu sii- ! tä, että se sisältää patenttivaatimuksen 1 mukaista . yhdistettä yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän laimen- » '·’ < 35 nusaineen tai väliaineen kanssa. • · * · 40 113049
6. 6. Farmaceutisk komposition, kännetecknad av »li·» att den innehäller en förening enligt patentkrav 1 till-sammans med ett spädningsmedel eller ett medium. I I * I 42 113049
7. 7. Användning av en verksam mängd av föreningen enligt patentkrav 1 för framställning av ett läkemedel sorti är lämpligt för behandling av konvulsioner hos ett dägg-djur som behöver sadan värd.

   7. Vaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen tehokkaan määrän käyttö lääkeaineen valmistamiseksi, joka soveltuu kouristuksien hoitamiseksi nisäkkäällä, joka tarvitsee tällaista hoitoa.

   8. Vaatimuksen 1 mukaisen yhdisteen tehokkaan määrän käyttö lääkeaineen valmistamiseksi, joka soveltuu AMPA-reseptorien salpaamiseksi nisäkkäällä, jotka tarvitsee sellaista hoitoa. i · * · > · i « ‘•.SI» » » I 41 113049 1. (R)-7-(arylsubstituerad)-8, 9-dihydro-8-alkyl-5- (4-aminofenyl) -7-H-l, 3-dioxolo[4,5-h][2,3]bensodiazepin-5 eller (R)-7-(arylsubstituerad)-8,9-dihydro-8-alkyl-5-(4-nitrofenyl) -7-H-l, 3-dioxolo[4,5h][2,3]bensodiazepin-förening med den allmänna formeln (I) \ * \ N \

   15 Aryl (I) där R är Ci-3-alkyl, X är fenyl, 2-pyridyl, 1-ftalazinyl, 2-bensotiazolyl, 2- bensimidazolyl eller 2-metoxikarbonyltien-3-yl och 20 "aryl" är p-nitrofenyl eller p-aminofenyl, eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav. ·. 2. Förening enligt patentkrav 1, kännetecknad • ·. av att aryl är p-aminofenyl. ! 3. Förening enligt patentkrav 1 eller 2, kanne- 25 tecknad av att R är metyl. • ’ 4. Förening enligt nägot av de föregäende patent- ‘ kraven, kännetecknad av att X är fenyl, 2-pyridyl el ler 1-ftalazinyl. j \· 5. (R)-7-(2-pyridyl)-8,9-dihydro-8-metyl-5-(4-ami- : : 30 nofenyl)-7-H-l, 3-dioxolo[4,5-h][2,3]bensodiazepin eller ett . farmaceutiskt godtagbart salt därav.
8. 8. Användning av en verksam mängd av föreningen enligt patentkrav 1 för framställning av ett läkemedel som är lämpligt för blockering av AMPA-receptorer hos ett däggdjur som behöver sadan värd. * i 1 • t » · • » » • It • · » • > • · • · 1 • < » • t » I I • | liiti * · t