FI111725B - Menetelmä 3-deoksioligosakkaridien valmistamiseksi - Google Patents

Description

111725

Menetelmä 3-deoksioligosakkaridien valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on menetelmiä terapeuttisesti käyttökelpoisten 3-deoksioligosakkaridien valmis-5 tamiseksi.

Hepariini on glykosaminoglykaaniperheen polysakkaridi, joka on tunnettu hyytymistä estävistä ominaisuuksistaan. Tiedetään (I. Björk ja U. Lindahl "Molecular and Cellular Biochemistry" (1982), Dr. W. Junk Publishers -10 Hollanti) että veren hyytyminen on monimutkainen fysiolo

ginen tapahtuma. Tietty ärsyke, kuten kosketusaktivointi ja kudostekijät käynnistävät veriplasmassa läsnäolevien hyytymistekijöiden peräkkäisen aktivoitumissarjan. Riippumatta ärsykkeen luonteesta lopulliset vaiheet ovat 15 identtisiä: aktivoitu tekijä X (Xa) aktivoi tekijän II

(tunnettu myös protrombiinina), joka aktivoidussa muodossaan (tekijä Ha, tunnettu myös trombiinina) aiheuttaa liukoisen fibrinogeenin osittaisen proteolyysin, mikä vapauttaa liukenematonta fibriiniä, joka on verihyytymän 20 pääaineosa.

Normaaleissa fysiologisissa olosuhteissa hyytymis-tekijöiden aktiivisuutta säätelevät proteiinit, kuten an-j ’ Γ titrombiini III (AT III) ja hepariini kofaktori II (HC II), :Y: joita myös on läsnä plasmassa. AT III:lla on inhiboivaa .;··· 25 aktiivisuutta moniin hyytymistekijöihin ja erityisesti tekijöihin Xa ja Ha.

Tekijöiden Xa tai Ha inhibitio koostuu täten edullisista tavoista, joilla saavutetaan hyytymistä estävää ja ,, , antitromboottista aktiivisuutta, koska nämä kaksi tekijää • ·* 30 ovat osallisina kahdessa viimeisessä koagulointivaiheessa, i t jotka vaiheet ovat riippumattomia käynnistävästä ärsyk- • keestä.

I I · ·

Pentasakkaridi, jolla on kaava: % · » i · * 111725 2 COO' Γ °SQ3 J_ο Γ PSOj' _0 r-OSOj-

^—0—0^0803'^.—0—yV^OH

NHR OH NHSO3- OSO3- NHSO3* 5 (1) R = -COCHj (2) r = -so; edustaa hepariinin minimisekvenssiä, joka vaaditaan AT 10 111:n sitoutumiseen. Tämä yhdiste (R = -SO;) saatiin n.

kymmenen vuotta sitten kemiallisella kokonaissynteesillä (P. Sinay et ai. Carbohydrate Research (1984), 132 C5).

Tämän jälkeen on monia synteettisiä oligosakkarideja valmistettu kemiallisella kokonaissynteesillä ja niiden 15 antitromboottisia ja hyytymistä estäviä aktiivisuuksia on kuvattu kirjallisuudessa.

Patentti EP-0 084 999 kuvaa johdannaisia, jotka koostuvat uroni- (glukuroni- tai iduroni-) haposta ja glu-kosamiini monosakkaridiyksiköistä ja joilla on edullisia 20 antitromboottisia ominaisuuksia. Hydroksyyliryhmäsubsti- tuenttien lisäksi nämä yhdisteet sisältävät N-sulfaatti-. ,·. ryhmiä ja N-asetyyliryhmiä ja joissakin tapauksissa ano- meeriset hydroksyyliryhmät korvataan metoksiryhmillä.

* * . . Hakemus EP-0 165 134 kuvaa myös synteettisiä oli- 25 gosakkarideja, joilla on antitromboottista aktiivisuutta.

Nämä yhdisteet koostuvat uronihaposta ja glukosamiini monosakkaridiyksiköistä ja sisältävät O-sulfaatti- tai * O-fosfaattiryhmiä. Uronihappojen ja glukosamiinien johdan naisia, jotka sisältävät O-sulfaattiryhmän glukosamiini- '.· 30 yksikön 3-asemassa, on myös kuvattu hakemuksessa EP- : 0 301 618. Näillä yhdisteillä on parannettuja anti-trom- boottisia ja hyytymistä vastustavia ominaisuuksia. Patent-tihakemus EP-0 454 220 kuvaa uronihappojen ja glukoosin johdannaisia, joissa on 0-alkyyli- tai O-sulfaattiryhmiä ’.· 35 substituentteina. Näillä jälkimmäisillä yhdisteillä on 111725 3 myös antitromboottisia ja hyytymistä estäviä ominaisuuksia .

Sulfatoituja glykosamiiniglykanoidijohdannaisia, joissa N-sulfaatti-, N-asetaatti- tai hydroksyylifunktio-5 naaliset ryhmät on korvattu alkoksi-, aryylioksi-, aral-kyylioksi- tai O-sulfaattiryhmillä, on myös kuvattu hakemuksessa EP-0 529 715. Näillä yhdisteillä on edullisia hyytymistä vastustavia ominaisuuksia. Ne ovat myös sileän lihaksen solujen lisäkasvun inhibiittoreita.

10 Oligosakkaridit ja erityisesti pentasakkaridit, jotka ovat analogeja hepariinin minimisekvenssille, jota vaaditaan AT III:n sitoutumiselle, kuvataan julkaisussa Angew. Chem. Int. Ed. Engl. (1993), 32 (3), sivut 434 - 436. Nämä yhdisteet sisältävät glukuronihappo- tai glukoo-15 siyksiköitä, joissa hydroksyyliryhmät on korvattu O-sul-faatti- tai O-metyyliryhmillä.

Nyt on yllättäen havaittu, että korvaamalla yksi tai useampi hydroksyyliradikaali tai 0-alkyyli- tai O-sul-faattiryhmä asemassa 3 vetyatomeilla yhdessä tai useammassa 20 sakkaridiyksikössä, saadaan oligosakkarideja, joilla on edullisia biologisia ominaisuuksia. Tämän keksinnön yhdis- • · · teet poikkeavat muista kirjallisuudessa kuvatuista syn-

II I

I ’,· teettisistä heparinoideista johtuen niiden uusista raken- teista ja niiden tehokkaista ja odottamattomista biologi-*:1 * * 25 sista ominaisuuksista. Keksinnön yhdisteet ovat 3-deoksi- J· oligosakkarideja, joilla on hyvin korkeaa tekijää Xa vas- . tustavaa aktiivisuutta ja hyvin suuri affiniteetti AT III:n suhteen. Lisäksi keksinnön yhdisteet absorboituvat hyvin .. . ruoansulatuskanavan alueella. Täten näitä tuotteita voidaan 30 antaa oraalisesti.

Tämän keksinnön kohteena on erityisemmin menetelmä : : : terapeuttisesti käyttökelpoisten yhdisteiden valmistami- seksi, joilla on kaava: f i 4 111725 & _ Λ-0 / \ΛΛ / \ /coo V~Y (i) x^2 y y 5 R1 OSO3· R3 jossa X on -OSOj-radikaali, radikaali, jolla on kaava A R-0 (A), 10 radikaali, jolla on kaava B f— OSOi (B) 15 R7*\Je y—° R5

tai radikaali, jolla on kaava C

20 ϋϋ0 r-OSg3’

RjQW^Rg —0 I*·.': r8 R5

• / 25 Y on radikaali, jolla on kaava D

••Ml 1— R12 / °\ (D) o~Aj11 / R13 V 30 OSO3· , ·, R on haarautunut tai haarautumaton alkyyliradikaa- » · · *;* · li, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, *;·’ Rlf R3, R5, R7, R8, R10, R12 ja R13, jotka voivat olla 35 samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin hydroksyyliradikaa- 5 111725 li, haarautunut tai haarautumaton alkoksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, tai -OSOj-radikaali, R2, R4, Rö, R9 ja Rh, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin vetyatomi, hydroksyyliradikaali, 5 haarautumaton tai haarautunut alkoksiradikaali, jossa on 1-6 hiiliatomia, tai -OSOj-radikaali, edellyttäen, että vähintäin yksi läsnäolevista subs-tituenteista R2, R4, Rö, R9 tai Rn on vetyatomi, farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen tai vas-10 taavien happojen muodossa.

Tämän jälkeen termiä "monosakkaridiyksikkö" käytetään kuvaamaan glykosidiyksikköä: 0“ riippumatta substituenteista, jotka ovat sitoutuneet tähän yksikköön asemissa 2, 3 tai 5.

20 Mitä tulee radikaaleihin B, C ja D, sidos tarkoittaa joissakin tapauksissa, että konfiguraatio, jossa hiili on • i « sitoutunut substituenttiin tämän sidoksen kautta, voi olla • · » • ’,· R ja joissakin tapauksissa S.

• · Tämän keksinnön yhdisteet ovat 3-deoksisakkaridi-·;*·· 25 johdannaisia.

Täten ainakin yhden monosakkaridiyksiköistä, joista keksinnön yhdisteet muodostetaan, on vastattava 3-deoksi-monosakkaridin rakennetta.

.. . Tästä johtuen kaavassa I vähintäin yhden substi- 30 tuenteista R2, R4, Rö, R9 tai Ru on oltava vetyatomi.

Kaavan I yhdisteet, joissa R2 on vetyatomi, ovat • keksinnön edullisia tuotteita.

» » · · Tämän keksinnön edullisia yhdisteitä ovat myös kaa-van I yhdisteet, joissa X on kaavan (B) radikaali tai kaa- • · · • ·’ 35 van (C) radikaali.

• * 6 111725 Nämä yhdisteet vastaavat seuraavia kaavoja Ia ja Ib: r 080¾- j°° o r-OM,' 0 r-*1| \y —ο-Λ?Γ x ^**w13 (I*) «s *1 oeo,· R» oeo*· r oso." f°° r- oso,* _ r*Ri2 y—0 /-\ i—o3 y—o κ-ν y—o /i—°\j~\ /—°v R,° Nj· *vJV*· 'y—x}a y (Ib) «» Rs *1 OSO,’ »S 0e0j‘ 10 joissa Ri, R2, R3, R4/ R5, Rö» R7, Rs, R9, Rio, R11, R12 ja R13 ovat kuten kaavassa I on määritetty.

Kaavan Ia yhdisteet ovat erityisen edullisia.

Kaavan I yhdisteet ja erityisesti ne, joilla on 15 kaavat Ia ja Ib, joissa:

Ri, R3, Rs, R7, Rs, Rio ja R13, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin haarautumaton tai haarautunut alkoksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, tai -OSO3-radikaali, 20 R2, R4, R6 ja R9, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin vetyatomi tai haarautunut tai haa-rautumaton alkoksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, • R11 on vetyatomi, haarautunut tai haarautumaton ai-• ly: koksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, tai ·:··; 25 -OSOj-radikaali, • j. edellyttäen, että ainakin yksi läsnäolevista subs- tituenteista R2, R4, R6, R9 tai Ru on vetyatomi, ja R12 on hydroksyyliradikaali tai -OSCh-radikaali, ... ovat keksinnön edullisia yhdisteitä.

30 Etusija on annettu erityisemmin kaavan I yhdisteille ja erityisesti niille, joilla on kaavat Ia ja Ib, joissa: : r2 ja R6 ovat vetyatomi, • * * t r3, Rh ja R12 ovat -0S03-radikaali ja

Ri3 on haarautunut tai haarautumaton alkoksiradikaa- • 35 li, jossa on 1 - 6 hiiliatomia.

7 111725

Etusijalla ovat myös erityisesti kaavan I yhdisteet ja erityisesti ne kaavojen Ia ja Ib yhdisteet, joissa al-koksiradikaali on metoksiradikaali.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle kaavan I mukaisten 5 yhdisteiden valmistamiseksi on tunnusomaista, että yhdiste, jolla on kaava II

CO°P4 0p3 10 X*' ^ y^0^2” y^°^NH (II) -Γ f ecu R1* OP! 3 j ossa X' on klooriasetoksiradikaali, levulinyylioksiradi-15 kaali, radikaali, jolla on kaava A, radikaali, jolla on kaava Bi 20 (B1) «S* · · < · · • * · • *.· tai radikaali, jolla on kaava Ci • < • · · 25 9°°p« __oP5 ;:l:; f'w' /^~° (c,>

Re' Rs’ 30 1 > 1 » * » j : : Pi, P2, P3 ja Ps, jotka voivat olla samoja tai eri- laisia, ovat kukin suojaryhmä, kuten asyklinen asyyliradi-kaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, edullisesti asetyylira-• \ 35 dikaali, aromaattinen asyyliradikaali, edullisesti bent- » * « > t 8 111725 soyyliradikaali, 2-alkenyyliradikaali, jossa on 2 - 7 hiiliatomia, edullisesti allyyliradikaali, tai bentsyyliradi-kaali, P4 ja ?6, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, 5 ovat kumpikin suojaryhmä, kuten alkyyliradikaali, jossa on 1-6 hiiliatomia, edullisesti metyyliradikaali, tai bent-syyliradikaali,

Ri', R5' ja Rs' , jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin haarautunut tai haarautumaton alkok-10 siradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, asyklinen asyy-lioksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, edullisesti asetoksiradikaali, aromaattinen asyylioksiradikaali, edullisesti bentsoyylioksiradikaali tai 2-alkenyylioksiradi-kaali, jossa on 2 - 7 hiiliatomia, edullisesti allyyliok-15 siradikaali, R7' ja Rio', jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kuten Ri':lle on määritetty tai ne voivat olla klooriasetoksiradikaali tai levulinyylioksiradikaali, ja R2' , Rö' ja R9', jotka voivat olla samanlaisia tai 20 erilaisia, ovat kukin vetyatomi tai ne ovat kuten Ri':lle on määritetty, • » · "d·* saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on * · · i ’.· kaava III: • » · ♦ « · *··· 25 _λ Γ“*12

• · λ-O J_O

/ COOP7\f \ / \ / cIa?11’ yw'Ri3’ ctn> H0V_/ r3 OP8

> * I

1 » 30 jossa * t P7 on kuten kaavassa II P4:He on määritetty, it:’| Pe on kuten kaavassa II Piille on määritetty, r4 ' ja Rh', jotka voivat olla samanlaisia tai eri-laisia, ovat kuten kaavassa II R2':lle on määritetty ja 1 » 1 : ·; 35 » I · t ( 9 111725 R3*, R12* ja R13’, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kuten Reille on määritetty kaavassa II, yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava IV: 5 COOP4 0P3

Rl’ 0P1 R3* 10 jossa X', Pj, P2, p3, p4, Rj· ja R2' ovat kuten kaavassa II on määritetty, P7, R3’ ja R/ ovat kuten kaavassa III on määritetty ja 15 Y' on radikaali, jolla on kaava D2: r-R12’ y>MR13< (D-j)

20 I

0P8 jossa P8, Rn', R12' ja R13' ovat kuten kaavassa III on mää-• ritetty, 25 ja tämän jälkeen altistetaan joko katalyyttiselle hydraukselle, sitten saippuoinnille ja sulfatoinnille, tai ensin saippuoinnille, sitten sulfatoinnille ja tämän jäi-; keen katalyyttiselle hydraukselle, tai ensin katalyytti selle hydraukselle, sitten sulfatoinnille ja tämän jälkeen 30 saippuoinnille, antamaan kaavan I yhdisteet.

Edellä kuvattu menetelmä on keksinnön edullinen menetelmä. Kuitenkin kaavan I yhdisteet voidaan valmistaa muilla tunnetuilla sokerikemiaan liittyvillä menetelmillä, ja erityisesti saattamalla monosakkaridi, joka sisältää 35 suojaryhmiä, kuten T. W. Green on kuvannut julkaisussa 10 111725

Protective Groups in Organic Synthesis (Wiley, N.Y. 1981), hydroksyyliradikaalien kohdalla ja, missä tarkoituksenmukaista, karboksyyliradikaalien kohdalla, mikäli niitä esiintyy, reagoimaan toisen suojatun monosakkaridin kanssa 5 muodostamaan disakkaridi, joka tämän jälkeen saatetaan reagoimaan toisen suojatun monosakkaridin kanssa muodostamaan suojattu trisakkaridi, josta on mahdollista saada suojattu tetrasakkaridi, sitten suojattu pentasakkaridi ja tämän jälkeen suojattu heksasakkaridi ("vaiheittainen" 10 lähestymistapa).

Suojatuista oligosakkarideista (tetra-, penta- ja heksasakkaridi) poistetaan tämän jälkeen suojaus ja, mikäli tarkoituksenmukaista, sulfatoidaan tai ensin poistetaan osittain suojaus, sitten sulfatoidaan ja tämän jälkeen 15 poistetaan suojaus, antamaan kaavan I yhdisteitä.

Nämä menetelmät ovat tunnettuja hiilihydraattike-miassa ja niitä ovat kuvanneet erityisesti G. Jaurand et ai. julkaisussa Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 897 - 900, J. Basten et ai. jul-20 kaisussa Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 901 - 904, J. Basten et ai. julkaisussa Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters ,;'! (1992), 2 (nro 9), sivut 905 - 910 ja M. Petitou ja C. A.

’ ; A. van Boeckel julkaisussa "Chemical Synthesis of heparin • ‘ 25 fragments and analogues", sivut 203 - 210 - Progress in ‘ ’ the Chemistry of Organic Natural Products, julk. Springer

Verlag Vienna - N.Y. (1992).

Kaavan II yhdisteet, kun X* on kaavan Bj radikaali, voidaan valmistaa saattamalla monosakkaridi, jonka anomee-30 rinen hiili on aktivoitu, kuten yhdiste, jolla on kaava V: rop5

: ; , h-O

R7· w/r6· SC2H5 (V) 35 I.

r5 11 111725 jossa P5, R5', R6' ja R7' ovat kuten kaavassa B on määritetty, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava VI: 5 COOP4 I-0 H0-^y (VI> 10 Rl’ op1 jossa R1', R2', Pj, P2 ja P, ovat kuten kaavassa II on määritetty, antamaan täten yhdiste, jolla on kaava VII:

i-QPj CC.0P4 |-O

<v»> 20 R5' 0P1 jossa . P5, R5', R6' ja R7' ovat kuten kaavassa V on määri- ! tetty, ja

Rj*, R2', Pj, P2 ja P4 ovat kuten edellä on määritet-’ , 25 ty kaavassa II, • t · < · T. Peters et ai:in menetelmän mukaisesti julkaisusta Can. J. Chem. (1989), 67, sivut 491 - 496 ja G. H.

V : Veenemanin ja J. H. van Boomin menetelmän mukaisesti jul kaisusta Tetrahedron Letters (1990), 31, sivut 275 - 278.

; ' : 30 Käsittelemällä tätä yhdistettä tunnettujen menetel- , ' ; mien mukaisesti (R. Schmidt, Angew. Chem. Int. julk. Eng- . \ lanti (1986), 25, (3), sivut 212 - 235) ja erityisesti asetolyysillä, käsittelemällä bentsyyliamiinilla ja sitten

> I

; ’ triklooriasetonitriilillä, saadaan kaavan II yhdisteet, ; ' ; 35 joissa X' on kaavan Bj radikaali.

12 111725

Joidenkin kaavan VII yhdisteiden valmistusta ja erityisesti yhdisteiden, joissa R2’ ja R6' ovat kuten Rj'ille on määritetty, eivätkä sisällä vetyatomia, ovat kuvanneet J. Basten et ai. (Bioorganic and Medicinal Che-5 mistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 905 - 910).

Kaavan VII yhdisteet voidaan myös valmistaa saattamalla yhdisteet VI reagoimaan muiden aktivoitujen mono-sakkaridien, esimerkiksi yhdisteiden kanssa, joilla on kaava V: 10 Γ^5

Ry’w^Rg· Br (V) R5’ 15 3 jossa P5, R5', R6' ja R7' ovat kuten kaavassa V on määritetty.

Kaavan V yhdisteet, joissa R6' on kuten Rj/tlle on 20 määritetty ja jotka eivät sisällä vetyatomia, ovat tunnettuja yhdisteitä, joita ovat kuvanneet M. Petitou ja C. A.

. ·, A. van Boeckel julkaisussa "Chemical Synthesis of heparin • t fragments and analogues", sivut 203 - 210 - Progress in *. ! the Chemistry of Organic Natural Products, julk. Springer 25 Verlag Vienna - N.Y. (1992).

M M «

Kaavan V yhdisteet, joissa R6' on vetyatomi, voidaan ··>; saada kaavan VIII yhdisteestä: * * · r— OBz i V 30 BzOw<^_^>SC2H5 (Vili) i 0Bz jossa Bz on bentsoyyliradikaali.

13 111725

Kaavan VIII yhdiste valmistetaan 3-deoksi-S-D-ribo-heksopyranoosista (valmistettu T. V. Rajanbabun menetelmällä, kuten on kuvattu julkaisussa J. Org. Chem. (1988), 53, sivut 4522 - 4530), jota on käsitelty bentsoyyliklori-5 dilla emäksisessä orgaanisessa liuottimessa. Näin saatua yhdistettä käsitellään etaanitiolilla antamaan kaavan VIII yhdisteet.

Kaavan VI yhdisteet, joissa R2' on vetyatomi, voidaan myös saada kaavan VIII yhdisteestä, joka saatetaan 10 reagoimaan 1,6:2,3-dianhydro-B-D-mannopyranoosin kanssa, antamaan yhdiste, jolla on kaava IX: pOBz _0 » ΒζοίνΖ/Γ'iXa)1 <IX> OBz jossa Bz on bentsoyyliradikaali.

Tätä yhdistettä käsitellään sitten voimakkaalla 20 emäksellä antamaan 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-6-D-ribo-heksopyranosyyli)-B-D-mannopyranoosi, yhdiste, jolla ; on kaava X:

* I

* ' I-O

^ ” XXXX " oh

Kaavan X yhdisteestä käyttäen tavallisia menetelmiä : ,· 30 [G. Jaurand et ai. Bioorganic and Medinical Chemistry Let- ters (1992), 2 (nro 9), sivut 897 - 900; J. Basten et ai.

: . , Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro ,··, 9), sivut 901 - 904; J. Basten et ai. Bioorganic and ’ Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 905 - 35 910; M. Petitou ja C. A. A. van Boeckel "Chemical Synthe- 14 111725 sis of heparin fragments and analogues" sivut 203 - 210 -Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, julk. Springer Verlag Vienna - N.Y. (1992)] saadaan yhdisteet, joilla on kaava XI: 5 COOP* _ )-°\Λ -0 ° p9° —/ y o /0p2 / (χ|) 10 R1' OP, jossa v, P1# P2 ja P4 ovat kuten kaavassa VII on määritetty ja P9 on levulinyyliradikaali tai klooriasetyyliradi- 15 kaali.

Kaavan XI yhdiste käsitellään sitten hydratsiinilla antamaan kaavan VI yhdisteet, joissa R2' on vetyatomi.

Kaavojen IX, X ja XI yhdisteet ovat uusia tuotteita ja muodostavat myös osan tätä keksintöä.

20 Kaavan VI yhdisteet, joissa R2':lla on R1':lle an netut määritykset eivätkä ole vetyatomi, voidaan saada samalla tavalla käyttäen lähtöaineina suojattuja glukoosi-.!'! johdannaisia, jotka ovat aktivoituja niiden anomeerisessä • s · \ hiilessä, kaavan VIII yhdisteiden asemesta. Tällaisten ' ·’ 25 yhdisteiden valmistusta ovat kuvanneet M. Petitou ja C. A.

• · * · · * * A. van Boeckel julkaisussa "Chemical Synthesis of heparin fragments and analogues", sivut 203 - 210 - Progress in ·'_·* ·" the Chemistry of Organic Natural Products, julk. Springer

Verlag Vienna - N.Y. (1992). Samat tekijät kuvaavat myös 30 kaavan IX yhdisteiden analogien valmistusta, jotka sisäl- . . tävät suojatun hydroksyyliradikaalin asemassa 3.

, *, Kaavan II yhdisteet, kun X* on radikaali, jolla on : : : kaava Cla: • * 1 > 15 111725 COOPg OP5

Rio'w^JV~ V—o <C1>> 5 Re' Rs' jossa R5', R6', Re', R9', R10', P5 ja P6 ovat kuten kaavassa Cx on määritetty, 10 voidaan saada saattamalla yhdiste, jolla on kaava VI reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava XIIa: COOPe OPs

Y—O ^ JZ—O

15 R10’w<^R9' V y^°^NH (X,,a) T Λ f ecu *β' Rs' jossa R5', R6', Rg’, Rg’, R10’, P5 ja P6 ovat kuten kaavassa Ci on määritetty, 20 antamaan kaavan XHIa yhdiste:

COOPg QPS COOP 4 ___Q

Rio'w<^u· y / \Ys97 y (»"·) 25 Re' R5* R1* 0R1 » • · jossa R5', R6', Rg', R9', R10’, P5 ja P6 ovat kuten kaavassa ·/· · Cx on määritetty ja

Ri', R2', Pj, P2 ja P4 ovat kuten kaavassa II on mää-j'>‘; 30 ritetty.

Kaavan XHIa yhdisteitä käsitellään sitten kuten on esitetty yhdisteelle VII, antamaan kaavan II yhdisteet, ·· · joissa X’ on kaavan Cla radikaali.

Kaavan XIIa yhdisteet, kun R9' on vetyatomi, saadaan !*·'; 35 yhdisteistä, joilla on kaava XIV: 111725 16 COOPe R,l'\ <xiv> 5 r8' R5' jossa

Rs', Rö', Re'/ Rio' ja Ρβ ovat kuten kaavassa Ci on määritetty, altistamalla asetolyysille, suojauksen poistolle ja 10 sitten triklooriasetonitriilikäsittelylle. Kaavan XIV yhdisteet voidaan saada kaavan X yhdisteistä menetelmällä, jota on kuvattu kaavan XI yhdisteille.

Kaavan Xlla yhdisteet, kun R^ on kuten Ri':lle on määritetty eikä sisällä vetyatomia, valmistetaan 1,6:2,3-15 dianhydro-4-O-(β-D-glukopyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi- johdannaisista käyttäen edellä kuvattua menetelmää. 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(β-D-glukopyranosyyli)-β-D-mannopy-ranoosijohdannaiset ovat tunnettuja tuotteita, joita ovat kuvanneet J. Basten et ai. julkaisussa Bioorganic and Me-20 dicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 905 - 910.

Kaavan II yhdisteet, kun X' on radikaali, jolla on • kaava Cib: • t ·:·! 25 _ OP5 R1 °'o <cib> ... Re' n,· so < · jossa | Rs', Re1, Re', Rg', Rio', P5 ja Pe ovat kuten kaavassa

Ci on määritetty, voidaan saada saattamalla yhdiste, jolla on kaava : ·' 35 Xllb: i7 111725 ο Γορ5 R’°'KfT7\Xg7 ><V“H oaib)

5 I · I , CCU

3 r8 R5’ 3 jossa R5', R6’, R8’, R9', R10', P5 ja P6 ovat kuten kaavassa Cj on määritetty, 10 reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava VI, antamaan yhdisteet, joilla on kaava Xlllb: _op5 coop4 R ' ^/coop.N/^ / —o i 15 10 °νΛ5ί_/~0 \i—/ / {x,,,b) R#' R5’ R,· OP, jossa

Ri' > R2\ R5' ^ Re’, Re' - «9’, Rio', Pi, P2/ P4/ P5 ja P6 ovat kuten kaavassa XIIla on määritetty.

20 Kaavan XIIIb yhdisteitä käsitellään sitten kuten on esitetty kaavan XHIa yhdisteille, antamaan kaavan II yh- . disteet, joissa X' on radikaali, jolla on kaava Clb.

Kaavan XIIb yhdisteet, kun R9' on vetyatomi, voidaan *.; saada kaavan X yhdisteistä. Tämä yhdiste muutetaan yhdis- ’·*·’ 25 teeksi, jolla on kaava XV: • ·

i ’/ 30 OH

, menetelmän mukaisesti, joka vastaa Ichikawa et ai:in ku- *;· · vaarnaa julkaisusta Carbohydrate Research (1988), 172, si- ’··' vut 37 - 64.

< » > ♦ * ( ! » 1 » * 18 111725 Tästä yhdisteestä käyttäen tunnettuja menetelmiä, joita ovat kuvanneet G. Jaurand et ai. julkaisussa Bioor-ganic and Medicinal Chemistry Letters (1992) 2, (nro 9), sivut 901 - 904, J. Basten et ai. Bioorganic 5 and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 901 - 904; J. Basten et ai. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 905 - 910; M.

Petitou ja C. A. A. van Boeckel "Chemical Synthesis of heparin fragments and analogues" sivut 203 - 210 10 Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, julk. Springer Verlag Vienna - N.Y. (1992)] saadaan yhdisteet, joilla on kaava XVI: 15 (XVI)

»v «V

jossa R5', R6', R8', R10' ja P6 ovat kuten kaavassa XIIb on 20 määritetty.

Tämän jälkeen nämä yhdisteet altistetaan asetolyy- , ·, sille ja käsitellään sitten bentsyyliamiinilla ja trikloo- ·.riasetonitriilillä antamaan kaavan Xllb yhdisteet.

» 1 ; Kaavan XIIb yhdisteet, joissa R9' ei ole vetyatomi, ·, 25 mutta on kuten R1':lle on määritetty, voidaan saada samal- «III· la tavalla.

·-·! Lukuisat välituotteet, jotka mahdollistavat kaavan * Xllb yhdisteiden aikaansaamisen, joissa R5', R6', R8', R10', P5 ja P6 ovat kuten kaavassa ^ on määritetty ja R,1 on ku-30 ten on määritetty Rj/rlle eikä ole vetyatomi, ovat tunnet-tuja tuotteita ja niiden valmistusta ovat kuvanneet G.

, , Jaurand et ai. julkaisussa Bioorganic and Medicinal

Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9) sivut 897 - 900.

1 i 19 111725

Kaavan II yhdisteet, kun X1 on radikaali, jolla on kaava A, ja R2' on vetyatomi, voidaan saada kaavan X yhdisteestä, joka muutetaan yhdisteeksi, jolla on kaava XVII:

h3c/ OH

10 Kaavan XVII yhdistettä käsitellään joko natrium- bentsylaatilla ja sitten asyloidaan tai käsitellään aral-kyylihalidilla, edullisesti bentsyylibromidilla tai 2-al-kenyylihalidilla, edullisesti allyylibromidilla, käsitellään sitten natriumbentsylaatilla ja tämän jälkeen asyloi- 15 daan antamaan yhdisteet, joilla on kaava XVIII: """ 20 HjC „,· op, . jossa Rj1, P2 ja P2 ovat kuten kaavassa II on mää- • · 1 ritetty.

Kaavan XVIII yhdisteitä käsitellään sitten happo-• 25 väliaineessa antamaan kaavan XIX yhdisteet:

·;· I OH I-O

lv 30 «V op, ,

t I

; jossa Rj', P2 ja P2 ovat kuten kaavassa II on mää- ritetty.

» t

Kaavan XIX yhdisteet altistetaan sitten selektiivi- 35 selle silyloinnille asemassa 6', käsitellään levuloosihap- 20 1 1 17 2 5 poanhydridillä, hapetetaan Jones olosuhteissa ja esteröi-dään käyttäen alkyylihalidia, poistetaan levulinyyliradi-kaali ja alkyloidaan hapossa tai neutraalissa väliaineessa antamaan kaavan II yhdisteet, joissa X' on radikaali, jol-5 la on kaava A ja R2' on vetyatomi.

Samalla tavalla voidaan saada kaavan II yhdisteet, kun X' on kaavan A radikaali ja R2':lla on sama määritys kuin Rj'jlla. Välituotteita, joita tarvitaan näiden yhdisteiden valmistamiseksi, on kuvattu kirjallisuudessa ja 10 erityisesti niitä ovat kuvanneet J. Basten et ai. julkaisussa Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 905 - 910 ja C. A. A. van Boeckel et ai. julkaisussa J. Carbohydrate Chem. (1985), 4. s. 293.

Kaavan III yhdisteet, kun R4* on vetyatomi, voidaan 15 valmistaa yhdisteistä, joilla on kaava XX: 20 R · ' R3 OP8 , \ jossa • < y *t R3', Ru' ja P7, P8 ovat kuten kaavassa III on mää- \ ritetty ja ' , 25 P10 on levulinyyliradikaali tai klooriasetyyliradi- t < · « kaali.

" Kaavan XX yhdisteet altistetaan asetolyysille, kä- V * siteitään sitten bentsyytiamiinilla, saatetaan reagoimaan

Vilsmeierin reagenssin kanssa, käsitellään alkoholilla 30 hopeakarbonaatin läsnäollessa ja tämän jälkeen altistetaan hydratsiinikäsittelylle antamaan kaavan III halutut yhdisteet (R4' = H).

Kaavan III yhdisteet, kun R4':lla on sama määritys kuin Railia, ovat tunnettuja yhdisteitä. Tällaisten yhdis-35 teiden valmistusta on kuvattu kirjallisuudessa (J. Basten 21 111725 et ai. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 905 - 910).

Edellä kuvattu menetelmä mahdollistaa keksinnön yhdisteiden saamisen suolojen muodossa. Vastaavien happo-5 jen saamiseksi keksinnön yhdisteet suolojen muodossa saatetaan kosketukseen kationinvaihtohartsin kanssa happomuo-dossa.

Keksinnön yhdisteet happojen muodossa voidaan sitten neutraloida emäksellä antamaan haluttu suola.

10 Kaavan I yhdisteiden suolojen valmistamiseksi voi daan käyttää mitä tahansa epäorgaanista tai orgaanista emästä antamaan farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja kaavan I yhdisteiden kanssa.

On edullista käyttää natrium-, kalium-, kalsium-15 tai magnesiumhydroksidia. Kaavan I yhdisteiden natrium- ja kalsiumsuolat ovat edullisia suoloja.

Kaavan I yhdisteillä, jotka ovat tämän keksinnön kohteena, on edullisia farmakologisia ja biokemiallisia ominaisuuksia. Niillä on erityisesti korkeaa tekijää Xa 20 vastustavaa aktiivisuutta ja suuri affiniteetti AT III:n suhteen, . Kuten edellä on mainittu, koagulointitapahtumassa tekijä Xa aktivoi protrombiinin trombiiniksi, mikä aiheut-’ · ·t taa liukoisen fibrinogeenin proteolyysin vapauttaen liu- 25 kenemattoman fibriinin, joka on verihyytymän pääaineosa. Täten tekijän Xa inhibitio on edullinen tapa hyytymistä estävän ja antitromboottisen aktiivisuuden aikaansaamisek-‘ si.

Keksinnön tuotteiden tekijää Xa vastustava (anti-: 30 Xa) aktiivisuus arvioitiin pH-arvossa 8,4 menetelmän mu kaisesti, jota ovat kuvanneet Teien A. N. ja Lie M. julkaisussa Thrombosis Research (1977) 10, sivut 399 - 410, ja osoitettiin, että keksinnön tuotteilla on Xa:ta vastustavaa aktiivisuutta, joka on yhtä suuri tai suurempi kuin : 35 jo tunnetuilla synteettisillä heparinoideilla.

22 1 11725

Kaavan I yhdisteiden affiniteetti AT III:n suhteen määritettiin spektrofluorometrisesti olosuhteissa, joita D. Atha et ai. ovat kuvanneet julkaisussa Biochemistry (1987) 26, sivut 6454 - 6461. Koetulokset osoittivat, että 5 keksinnön yhdisteillä on hyvin suuri affiniteetti AT III:n suhteen.

Lisäksi kaavan I yhdisteiden antitromboottinen ko-konaisaktiivisuus määritettiin rotissa laskimon salpaus-mallilla ja tromboplastiinin induktiolla menetelmän mukai-10 sesti, jota ovat kuvanneet J. Reyers et ai. julkaisussa Thrombosis Research (1980), 18, sivut 669 - 674. Keksinnön yhdisteiden ED50 on vähintäin samaa suuruusluokkaa tai pienempi kuin muiden jo tunnettujen synteettisten heparinoi-dien. Keksinnön yhdisteillä on täten erityisen edullinen 15 spesifinen hyytymistä estävä ja antitromboottinen vaikutus.

Tulokset, jotka on saatu erilaisissa farmakokineet-tisissä tutkimuksissa keksinnön tuotteilla, osoittavat, että ne absorboituvat erittäin hyvin ja että niiden puo-20 liintumisaika on pitkä. Tämä mahdollista yksittäisen päivittäisen antomuodon käytön hoidossa.

. ,·, Nämä tutkimukset osoittivat myös, että kaavan I

! tuotteet, jotka ovat tämän keksinnön kohteena, absorboitu- *. ; vat ruoansulatusalueen kautta annettavina määrinä, jotka '· ·] 25 eivät ole haitallisia käytettäväksi ihmisen hoidossa. Kek sinnön yhdisteet ovat täten hyödyllisiä farmaseuttisten " * koostumusten valmistamiseksi, joita voidaan antaa sekä ·’ ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti että oraalisesti.

Kaavan I yhdisteillä on hyvin alhainen myrkylli-30 syys; niiden toksisuus on täysin yhteensopiva niiden käy-tön kanssa lääketuotteina.

Keksinnön yhdisteille voi myös löytyä sovellutuksia sileän lihaksen solujen lisäkasvun hoidossa, koska on * ·· osoitettu, että niillä on inhiboivaa vaikutusta, joka on 23 1 1 1725 huomattavasti suurempi kuin hepariinin vaikutus sileän lihaksen solujen kasvulle.

Keksinnön yhdisteet ovat myös aktiivisia verisuonten kehittymiselle ja ovat hyödyllisiä joidenkin retrovirusten 5 aiheuttamien tulehdusten hoidossa.

Lisäksi tämän keksinnön yhdisteillä on myös hermosäikeitä suojaavaa ja regeneroivaa vaikutusta.

Keksinnön yhdisteet ovat hyvin stabiileja ja tämän mukaisesti ne ovat erityisen sopivia muodostamaan lääke-10 tuotteiden vaikuttavat aineosat.

Farmaseuttiset koostumukset, jotka sisältävät vaikuttavana aineosana kaavan I yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, valinnaisesti yhdessä yhden tai useamman inertin ja sopivan täyteaineen kanssa, 15 ovat edullisesti eri muodoissa, kuten esimerkiksi injektoitavina tai nieltävinä liuoksina, rakeina, tabletteina tai kovina gelatiinikapseleina. Injektoitavat liuokset ovat edullisia farmaseuttisia annosmuotoja.

Farmaseuttiset koostumukset, jotka sisältävät vai-20 kuttavana aineosana vähintäin yhtä kaavan I yhdistettä tai yhtä sen suoloista, ovat erityisen hyödyllisiä verisuonen-seinämän sairauksien hoidossa tai ennaltaehkäisyssä, kuten • valtimon haurauskovetustaudin ja valtimon kovetustaudin : : : hoidossa tai ennaltaehkäisyssä ja hyperkoagulaatiotilojen, ·;·· 25 joita esiintyy esimerkiksi kirurgisten toimenpiteiden jäl- .:. keen, kasvaimien kehittymisen tai hyytymishäiriöiden yh- teydessä, joita aiheuttavat bakteeri-, virus- tai entsy-maattiset tekijät, ennaltaehkäisyssä tai hoidossa.

. Annos voi vaihdella laajalla alueella potilaan iän, 30 painon ja terveyden tilan mukaan, sairauden vakavuuden ja » » luonteen ja myös antoreitin mukaan. Tämä annos käsittää • yhden tai useamman annoksen antamisen, n. 0,5 mg - -h 1 000 mg päivässä, edullisesti n. 1 - 100 mg päivässä,

» I

• »

M * M

24 1 1 1725 esimerkiksi n. 20 mg päivässä, lihaksensisäisesti tai ihonalaisesti, epäsäännöllisesti tai tasaisin väliajoin tai 200 mg:n tai 1 000 mg:n päivittäisenä annoksena oraalista reittiä.

5 Nämä annokset voidaan luonnollisesti säätää kullekin potilaalle havaittujen tulosten ja etukäteen tehtyjen verianalyysien perusteella. Ihonalainen antomuoto on edullinen tapa.

Keksintöä kuvaavat seuraavat esimerkit.

10 Valmistusmenetelmät

Valmistusmenetelmä I

Etyyli-2,4,6-tri-0-bentsoyyli-3-deoksi-l-tio-D-ribo-heksopyranosidi (kaavan VIII yhdiste)

Vaihe A

15 1,2,4,6-tetra-0-bentsoyyli-3-deoksi-B-D-ribo-hekso- pyranoosi 66 mmol 3-deoksi-l,2:5,6-di-O-isopropylideeni-D-ribo-heksofuranoosia (T. V. Rajanbabu, J. Org. Chem.

(1988), 53, sivut 4522 - 4530) kuumennettiin neljä tuntia 20 60 °C:ssa, liuotettuna seokseen, jossa oli vettä ja eta nolia Dowex-happohartsin läsnä ollessa, antamaan 3-deoksi-: D-riboheksopyranoosi. Haihdutettiin kuiviin ja kuivattiin ·*·'; sitten haihduttamalla pyridiinin läsnä ollessa.

.V. Saatu siirappi liuotettiin sitten 150 ml:aan pyri- 25 diiniä ja 356 mmol bentsoyylikloridia lisättiin. Jätettiin • · sekoittumaan huoneenlämpötilaan kolmeksi tunniksi, haihdu-tettiin kuiviin, laimennettiin dikloorimetaanilla, pestiin *** ’ vedellä ja kiteytettiin etyyliasetaatissa antamaan 7,66 g 1,2,4,6-tetra-0-bentsoyyli-3-deoksi-h-D-ribo-heksopyranoo-i *.·’ 30 siä.

Saanto: 30 % t

: .·, Sulamispiste: 164 °C

[a]^0 = +1 ° (C = 1,33 CH2Cl2:ssa) t · » • · 25 1 117 2 5

Vaihe B

4,51 mmol edeltävässä vaiheessa saatua yhdistettä liuotettiin vedettömään tolueeniin ja sitten lisättiin argonin ilmakehässä 20 °C:ssa 9,03 mmol etaanitiolia.

5 4,51 mmol booritrifluoridia liuotettuna etyylieet- teriin lisättiin ja jätettiin sekoittumaan kolmeksi tunniksi. Vesipesun jälkeen haihdutettiin kuiviin ja siirapin muodossa saatu jäännös puhdistettiin piimaapylväässä. Täten saatiin 1,64 g etyyli-2,4,6-tri-0-bentsoyyli-3-deoksi-10 1-tio-D-ribo-heksopyranosidia a- ja β-anomeerien seoksena.

Tätä yhdistettä käytettiin ilman jatkopuhdistusta. Saanto: 70 %.

Valmistusmenetelmä II

Etyyli-2,4,6-tri-0-bentsyyli-3-deoksi-l-tio-D-ribo-15 heksopyranosidi (kaavan V yhdiste) 5,82 mmol valmistusmenetelmässä I saatua yhdistettä liuotettiin seokseen, jossa oli metanolia ja dikloorime-taania (1:1 tilav./tilav.). 0,90 mmol natriummetanolaattia lisättiin. Reaktioseos jätettiin sekoittumaan kolmeksi 20 tunniksi 20 °C:seen ja neutraloitiin sitten käyttäen Dowex-happohartsia (AG 50 WX2). Suodatettiin ja haihdutet-: tiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 18 ml:aan vedetöntä di- metyyliformamidia ja sitten lisättiin 0 °C:ssa 19,7 mmol natriumhydridiä ja 17,0 mmol bentsoyylibromidia. Jätettiin 25 sekoittumaan kahdeksi tunniksi ja sitten lisättiin 34,1 mmol metanolia.

·;·; Reaktioliuottimet haihdutettiin ja puhdistettiin ’ piimaapylväässä antamaan 2,12 g otsikkotuotetta anomeerien seoksena.

; ' ; 30 Saanto: 76 %.

,s 111725 2 6

Valmistusmenetelmä III

1,6:2,3-dianhydro-4-0-(2,4,6-tri-0-bentsoyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi (kaavan IX yhdiste) 5 G. H. Veenemanin ja J. H. van Boomin menetelmän mukaisesti julkaisussa Tetrahedron Lettters (1990) 31, sivut 275 - 278, 8,53 mmol valmistusmenetelmässä I saatua tuotetta ja 7,25 mmol 1,6:2,3-dianhydro-B-D-mannopyranoosia liuotettiin 20 °C:ssa 220 ml:aan tolueenia molekyyli-10 seulojen ja 21,3 mmol N-jodisukkiini-imidiä läsnä ollessa ja sitten lisättiin tipoittain 1,7 mmol 0,04 M trifluori-metaanisulfonihappoliuosta, Reaktioväliaine jätettiin sekoittumaan 2,5 tunniksi, suodatettiin ja puhdistettiin piimaapylväässä antamaan 3,07 g 1,6:2,3-dianhydro-4-0-15 (2,4,6-tri-0-bentsoyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksapyranosyy- li)-β-D-mannopyranoosia.

Kiteytettiin etyyliasetaatin ja heksaanin seoksessa (90:10 tilav./tilav.).

Saanto: 65 %

20 Sulamispiste: 153 °C

[a]p° = -12 ° (C = 1,10 CH2C12) « i ·

Valmistusmenetelmä IV

• ·' 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-B-D-ribo-heksopyra- nosyyli)-β-D-mannopyranoosi (kaavan X yhdiste) 25 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(2,4,6-tri-0-bentsoyyli-3- deoksi-h-D-ribo-heksopyranosyyli) -β-D-mannopyranoosi de- : bentsoyloitiin käyttäen natriummetanolaattia antamaan 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-β-D-ribo-heksopyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi.

.··*, 30 Saanto: 95 % [a]p° = -46 0 (C = 1,02 CH30H:ssä) t i * 27 1 1 17 2 5

Valmistusmenetelmä V

3-0-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0-(bent-syyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyliuro-naatti)-B-D-glukopyranoosi (kaavan VI yhdiste) 5 Tämä yhdiste valmistettiin 1,6:2,3-dianhydro-4-0- (3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyli)-B-D-mannopyranoosis-ta, valmistusmenetelmässä IV kuvatusta yhdisteestä, käyttäen menetelmää, joka vastaa M. Petitoun ja C. A. A. van Boeckelin kuvaamaa julkaisussa " Chemical Synthesis of 10 heparin fragments and analogues" sivut 203 - 210 - Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, julk. Springer Verlag Vienna - N.Y. (1992), ja erityisesti: 1,6:2,3-dianhydro-4-0- (3-deoksi-4,6-0-isopropylideeni-B-D-ribo-heksapyranosyyli)-B-D-mannopyranoosin muodostus, 15 reaktio natriumbentsylaatin kanssa, asetylointi, isopropy-leeniradikaalin poistaminen käyttäen etikkahappoa, sily-lointi, reaktio levuloosihappoanhydridin kanssa, Jones olosuhteiden mukainen hapettaminen, esteröinti käyttäen bentsyylibromidia ja sitten käsittely hydratsiinilla.

20 Eri vaiheet on esitetty seuraavassa.

Vaihe A

» · I-OH I-o O-1 I-o K,

. OH 0H

ν’ 1,5 mmol p-tolueenisulfonihappoa (kamferisulfoni- happoa voidaan myös käyttää) ja 250 mmol 2,2-dimetoksipro-30 paania lisättiin tipoittain argonin paineessa liuokseen, jossa oli 1,6:2,S-dianhydro^-O-iS-deoksi-B-D-ribo-hekso-pyranosyyli )-B-D-mannopyranoosia dimetyyliformamidissa (5 mmol 35 ml:ssa). Jätettiin sekoittumaan 2,5 tunniksi ja sitten lisättiin 1,8 mmol trietyyliamiinia. Laimennettiin 35 dikloorimetaanilla, pestiin vedellä, kuivattiin vedettö- 28 1 11725 mällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin antamaan 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-4,6-0-isopropylideeni-B-D-ribo-heksopyranosyyli)-B-D-mannopyra-noosi. Tätä yhdistettä käytettiin seuraavassa vaiheessa 5 ilman puhdistusta.

Saanto: 81 %.

Vaihe B

I OH OBn

OH

25 mmol natriumbentsylaattia (1 M liuos bentsyyli-15 alkoholissa) lisättiin 5,0 mmol:iin vaiheessa A saatua yhdistettä. Kuumennettiin 110 eC:seen 30 minuutiksi, jäähdytettiin, neutraloitiin käyttäen Dowex-happohartsia (AG 50 WX2), suodatettiin ja bentsyylialkoholi poistettiin haihduttamalla tyhjössä. Jäännös puhdistettiin piimaapyl-20 väässä käyttäen tolueenin ja asetonin seosta (3:1 tilav./-tilav.) eluenttina. Haluttu tuote saatiin siirapin muodos- . sa.

• 1 ·

f Vaihe C

• * · • * • ·

25 ? ]—O I—0° (CH3co)2o/DMAP / 1 O J—O

; : : oh OBn OAc 0Bn 30 4,90 mmol vaiheessa B saatua yhdistettä liuotettiin ,·*. 22 ml:aan dikloorimetaania, jäähdytettiin 0 eC:seen ja 19,6 mmol etikkahappoanhydridiä, 1,96 mmol 4-dimetyyliami- • · f ; nopyridiiniä ja 9,81 mmol trietyyliamiinia lisättiin. Se- » 1 koitettiin huoneenlämpötilassa 45 minuuttia. Metanolia 35 lisättiin ja sekoittamista jatkettiin vielä 30 minuuttia.

I | » * » ί »

I I

29 1 117 2 5

Sitten reaktioväliaine laimennettiin dikloorimetaanilla, pestiin vesipitoisella KHS04-liuoksella ja sitten vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin antamaan haluttu tuote siirapin muodossa. 5 Sitten puhdistettiin piimaapylväässä käyttäen tolueenin ja asetonin seosta (9:1 tilav./tilav.) eluenttina.

Saanto: 85 %.

Vaihe D

10 ?~~Uo pö ' s? O Ac OBn o Ac OBn 15 4,11 mmol edeltävässä vaiheessa saatua yhdistettä liuotettiin 2,2 ml:aan 1,1-dikloorietaania ja 123 ml vesipitoista etikkahappoliuosta (70-%:inen) lisättiin. Sekoittamista jatkettiin 35 minuuttia 50 °C:ssa. Väkevöitiin, tolueenia lisättiin ja haihdutettiin antamaan haluttu tuo-20 te siirapin muodossa. Puhdistettiin piimaapylväässä käyttäen sykloheksaanin ja asetonin seosta (1:1 tilav./tilav.) t eluenttina.

• · t .!'! Saanto: 90 %.

• · ·

Vaihe E

25 pOtBDMS J—O

f s»_q^ 30 O Ac OBn 0Ac 0Bn • | , 3,61 mmol vaiheessa D saatua yhdistettä liuotettiin ·;; 3,3 ml:aan dikloorimetaania ja 1,42 mmol 4-dimetyyliamino- • · '···* pyridiiniä, 10,82 mmol trietyyliamiinia ja 5,41 mmol tert- 35 butyylidimetyylisilyylikloridia lisättiin. Jätettiin se- 30 111725 koittumaan n. yhdeksi tunniksi 20 °C:ssa, sitten lisättiin 43 ml vedetöntä dikloorimetaania ja 10,8 mmol levuloosi-happoanhydridiä. Jätettiin sekoittumaan kahdeksi tunniksi, sitten lisättiin 150 ml dikloorimetaania, pestiin ensin 5 vesipitoisella KHS04-liuoksella ja sitten vesipitoisella NaHSCh-liuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaa-tilla, suodatettiin ja haihdutettiin kunnes saatiin ruskea siirappimainen aine.

Tuotetta käytettiin kuten seuraavassa vaiheessa on 10 osoitettu.

Vaihe F

COOH

« Jy\J$ -=£ * I I O Ac OBn 0 Ac OBn 2,51 g edeltävässä vaiheessa saatua siirappia liuotettiin 26 ml:aan asetonia, jäähdytettiin 0 °C:seen ja 20 sitten lisättiin 9,56 mmol kromitrioksidia ja 4,2 ml 3,5 M rikkihappoliuosta.

: Jätettiin sekoittumaan huoneenlämpötilaan neljäksi • · · ;*·*; tunniksi. Sitten lisättiin 250 ml dikloorimetaania, pestiin • i vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, 25 suodatettiin ja haihdutettiin kunnes saatiin ruskea sii-t. rappimainen aine.

i

’!!! Vaihe G

• > · * 3-O-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0-(bent-syyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-levulinyyli-B-D-ribohekso- » · « : ,· 30 pyranosyyliuronaatti)-β-D-glukopyranoosin (kaavan XI yh- I t ; diste) valmistus • > I I ® J— o J— o h 3S — X/ML·/ 1 I O Ac OBn O Ac OBn 31 111725 2,15 g edeltävässä vaiheessa saatua tuotetta liuotettiin 22 ml:aan vedetöntä dimetyyliformamidia ja argonin paineessa lisättiin 7,22 mmol kaliumbikarbonaattia ja 10,83 mmol bentsyylibromidia. Jätettiin sekoittumaan kolmeksi 5 tunniksi, 0,5 ml metanolia lisättiin ja sekoittamista jatkettiin yksi tunti huoneenlämpötilassa. Reaktioväliaine laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kunnes saatiin ruskea siirappi. Kokonais-10 saanto vaiheissa E, F, G: 81 %.

Vaihe H

COOBn _o COOBn I----- O

L..VO f | QAC ΟΒΠ OAc OB n 3,61 mmol 3-O-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-20 0-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-levulinyyli-5-D- ribo-heksopyranosyyliuronaatti)-β-D-glukopyranoosia, vai-heessa G saatua yhdistettä, liuotettiin 13 ml: aan pyridii-

tl I

• V niä. Jäähdytettiin 0 °C:seen ja 18,1 mmol hydratsiinia : lisättiin [1 M liuos pyridiinin ja etikkahapon seoksessa •: · 25 (3:2 tilav./tilav.)] . Reaktioseosta sekoitettiin 15 mi- ·;. nuuttia huoneenlämpötilassa. Väkevöitiin, dikloorimetaania lisättiin, pestiin vesipitoisella KHSOi-liuoksella, sitten • 1 t vedellä ja tämän jälkeen vesipitoisella NaHCCb-liuoksella .. , ja taas uudestaan vedellä. Kuivattiin natriumsulfaatilla, 30 suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin antamaan ruskea sii- rappi. 3-O-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0-(bent- : : : syyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-5-D-ribo-heksopyranosyyliuro- naatti)-β-D-glukopyranoosi puhdistettiin piimaapylväässä » 1 1 käyttäen sykloheksaanin ja asetonin seosta (2:1 tilav./ti- t t > ’ 35 lav. ) eluenttina.

32 11 17 2 5

Saanto: 86 % [α]£° = -78 8 (C = 0,7 CH2C12:ssa).

Valmistusmenetelmä VI

0-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-levulinyyli-5 B^D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti) - (1-+4) -3,6-di-0-asetyy- li-2-0-bent syyli-D-glukopyranosyyli) triklooriasetimidaatti (kaavan XlIa yhdiste) Tämä yhdiste valmistettiin 3-O-asetyyli-l,6-anhyd-ro-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-10 levulinyyli-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti )-B-D-gluko-pyranoosista, valmistusmenetelmässä V kuvatusta yhdisteestä, tunnettujen menetelmien mukaisesti ja erityisesti ase-tolyysillä, anomeerisellä suojauksen poistolla ja muodostamalla imidaatti. Eri vaiheet on esitetty seuraavassa.

15 Vaihe A

COOBn _0 COOBn ,-OAo

LaavO Γ LaavO | I

20 o/te OBn OAc 0Bn , 1,02 mmol:iin valmistusmenetelmässä V saatua tuo- tetta lisättiin 102 mmol etikkahappoanhydridiä ja 10,2 * » · • mmol trifluoriasetamidia. Seosta sekoitettiin kaksi tuntia ’·'** 25 argonin paineessa. Haihdutettiin kunnes saatiin ruskea • 1 siirappimainen aine ja se puhdistettiin piimaapylväässä käyttäen sykloheksaanin ja etyyliasetaatin seosta (2:3 ::: tilav./tilav.) eluenttina.

Vaihe B

• 30 f0001’ rOAc fOOBn r OAc ;S ο^>°η L««vo' f ' ' | LmvO [ | ·,,,· OAc OBn OAc OBn

MM

33 11 17 2 5 1,52 mmol edeltävässä valheessa saatua yhdistettä liuotettiin dikloorimetaaniin ja 57,9 mmol bentsyyliamii-nia lisättiin. Jätettiin sekoittumaan neljäksi tunniksi huoneenlämpötilaan ja sitten -20 °C:seen yön yli. Etyyli-5 eetteriä lisättiin ja pestiin 1 N vesipitoisella vetyklo-ridihappoliuoksella. Uutettiin dikloorimetaanilla, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kunnes saatiin ruskea siirappimainen aine. Puhdistettiin pii-maapylväässä käyttäen tolueenin ja asetonin seosta (5:1 10 tilav./tilav.) eluenttina.

Vaihe C

fOOBn rOAc ?OOBn rOAe X5 Q0U©“°" L.evo' [ [ L“ev° I | cc O Ac OBn OAc OBn s Käytettiin 0,246 mmol edeltävästä vaiheesta saatua disakkaridia liuotettuna dikloorimetaaniin. Lisättiin 20 0,39 mmol kaliumkarbonaattia ja 1,23 mmol triklooriaseto- nitriiliä argonin paineessa. Jätettiin sekoittumaan 16 . ·. tunniksi, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin. 0-(bent- syyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-levulinyyli-B-D-ribo-hek- • * *. ! sopyranosyyliuronaatti)-(1-+4)-3,6-di-0-asetyyli-2-0-bent- • · ’25 syyli-D-glukopyranosyyli)triklooriasetimidaatti saatiin * « » · anomeerien seoksen muodossa.

: Saanto: 62 % (kokonaissaanto)

v * Valmistusmenetelmä VII

1,6:2,3-dianhydro-4-0- (3-deoksi-a-D-ribo-heksopyra-30 nosyyli)-β-D-mannopyranoosi (kaavan XV yhdiste - gluko- ja ido-seos)

Vaihe A

1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-6-ido-B-D-ribo-hek-sopyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi I': 35 Liuokseen, jossa oli l,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-de- ·:·'* oksi-B-D-ribo-heksopyranosyyli ) -β-D-mannopyranoosia 34 1 1 17 2 5 (22,81 mmol) 400 ml:ssa seosta, jossa oli dikloorimetaania ja asetonitriiliä, lisättiin 68,43 mmol trifenyylifosfii-nia, 68,43 mmol imidatsolia ja 29,65 mmol jodia. Jätettiin sekoittumaan 70 °C:seen neljäksi tunniksi. Liuos haihdu-5 tettiin ja näin saatu siirappi puhdistettiin sitten pii-maapylväässä käyttäen dikloorimetaanin ja asetonin seosta (10:1 tilav./tilav.) liuottimena. Täten saatiin 1,6:2,3-dianhydro-4-O-(3-deoksi-6-ido-B-D-ribo-heksopyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi.

10 Saanto: 72 %.

Vaihe B

23,4 mmol 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-6-ido-L-D-ribo-heksopyranosyyli)-β-D-mannopyranoosia liuotettiin 150 ml:aan metanolia ja 42 mmol natriummetylaattia liuo-15 tettiin metanoliin (1 M). Seosta kuumennettiin yhdeksän tuntia 80 °C:ssa, jäähdytettiin ja puhdistettiin Sephadex LH-20 -pylväässä eluoiden dikloorimetaanin ja metanolin seoksella (1:1 tilav./tilav.). Täten saatiin l,6:2,3-di-anhydro-4-O-(3-deoksi-5,6-heksometyleeni-5-D-ribo-hekso-20 pyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi. 13,3 mmol tätä yhdistettä liuotettiin 100 ml:aan tetrahydrofuraania ja lisättiin ; tipoittain 20 °C:ssa 54,4 mmol diboraania liuotettuna tet- rahydrofuraaniin. Jätettiin sekoittumaan kahdeksi tunniksi ja sitten lisättiin 65,28 mmol etanolia. Jätettiin sekoit-

• t I

25 tumaan yhdeksi tunniksi ja sitten lisättiin 24 ml 3 M

• » , natriumhydroksidiliuosta ja 24 ml 30-%:ista vetyperoksi- * p t diliuosta. Kuumennettiin 50 °C:seen, neutraloitiin Dowex-*·' ’ happohartsilla (AG 50 WX4) ja haihdutettiin kuiviin anta maan 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-a-D-ribo-heksopyrano-* '·’ 30 syyli)-β-D-mannopyranoosi gluko- ja idodisakkaridien : : (1:6,25) seoksen muodossa.

35 1 1 1725

Valmistusmenetelmä Vili 3-0-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0- (bent-syyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-levulinyyli-a-L-lykso-hek-sopyranosyyliuronaatti)-B-D-glukopyranoosi (kaavan XVI 5 yhdiste) 3-0-asetyyli-l, 6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0-(bent-syyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-levulinyyli-a-L-lykso-hek-sopyranosyyliuronaatti)-8-D-glukopyranoosi valmistettiin valmistusmenetelmässä VII kuvatusta yhdisteestä käyttäen 10 standardimenetelmiä [G. Jaurand et ai. (Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 897 -900); J. Basten et ai. (Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 (nro 9), sivut 901 - 904); J. Basten et ai. (Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters (1992), 2 15 (nro 9), sivut 905 - 910)] ja erityisesti muodostetaan kaksi vastaavaa 4’,6'-isopropylideeniä, gluko- ja ido-iso-meerit erotetaan ja puhdistetaan piimaapylväässä, saatetaan reagoimaan natriumbentsylaatin kanssa, asetyloidaan, isopropylideeniradikaali poistetaan, silyloidaan selektii-20 visesti, saatetaan reagoimaan levuloosihappoanhydridin kanssa, hapetetaan Jones olosuhteissa ja esteröidään käyttäen bentsyylibromidia.

• · .! Saanto: 45 % • * *. Eri vaiheet on annettu seuraavassa.

• *

* ‘ 25 Vaihe A

I-o I-o . · OH--p \f\ / \ DMF o-P \Γ\ / \ „.L/Wi/

; 30 I I

OH HO

» , 3,6 mmol 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-a-D-ribo- · heksopyranosyyli )-B-D-mannopyranoosia liuotettiin 25 ’ ml:aan dimetyyliformamidia ja 21,64 mmol dimetoksipropaa- *': 35 nia ja 3,96 mmol p-tolueenisulfonihappoa lisättiin (kamfe- 36 1 1 1725 rlsulfonihappoa voidaan myös käyttää). Jätettiin sekoittumaan yhdeksi tunniksi 30 minuutiksi ja 5,94 mmol trietyy-liamiinia lisättiin. Väkevöitiin kunnes saatiin siirappi ja puhdistettiin piimaapylväässä käyttäen seosta, jossa 5 oli tolueenia ja etyyliasetaattia (2:3 tilav./tilav.) eluenttina.

Saanto: 70 %

Vaihe B

HO OH OBn 15 6,81 mmol:iin vaiheessa A saatua yhdistettä lisät tiin 89,7 mmol natriumbentsylaattia liuotettuna bentsyyli-alkoholiin (IM). Kuumennettiin 110 eC:ssa sekoittaen yksi tunti. Sitten laimennettiin 200 ml:11a dikloorimetaania, tämän jälkeen neutraloitiin käyttäen Dowex-happohartsia 20 (AG 50 WX4), suodatettiin ja haihdutettiin tyhjössä antamaan ruskea siirappi. Puhdistettiin piimaapylväässä käyttäen dikloorimetaanin ja asetonin seosta (10:1 tilav./ti- • t · lav. ) eluenttina.

• ' Saanto: 85 %

v.: 25 Vaihe C

:· .—o J—O (ch3co),o/dmap a—o J—O

^ i/ 30 OH OBn 0Ac OBn 5,76 mmol vaiheessa B saatua yhdistettä liuotettiin dikloorimetaaniin ja 3,92 mmol 4-dimetyyliaminopyridiiniä, 72,27 mmol trietyyliamiinia ja 65,7 mmol etikkahappoanhyd-35 ridiä lisättiin. Jätettiin sekoittumaan huoneenlämpötilaan 37 1 117 2 5 kahdeksi tunniksi 30 minuutiksi, sitten lisättiin 100 ml dikloorimetaania, pestiin 10 %:isella vesipitoisella KHS04-liuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatil-la ja suodatettiin sitten.

5 Näin saatu siirappi väkevöitiin ja puhdistettiin piimaapylväässä käyttäen dikloorimetaanin ja asetonin seosta (10:1 tilav./tilav.) eluenttina.

20 [a]p = -102 0 (C = 1,37 CH2Cl2:ssa)

Vaihe D

10 o O Ac OBn OAc OBn 15 5,74 mmoltiin vaiheessa C saatua yhdistettä lisättiin 25 ml 70-%:ista vesipitoista etikkahappoliuosta. Kuumennettiin 80 °C:ssa kuusi tuntia. Väkevöitiin haihduttamalla tolueenin läsnä ollessa antamaan keltainen jauhe.

20 Vaihe E

. I-o . o J—o I n00*'»»·®* :=:=: -1ry^Ö o e HO>-f ’-/ <c,He),M Uno f | v*”* I 1 arc OAe OBn OAc OBn ♦ · . I-Q DMAP: 4-dimetyyliaminopyridilni Bn: bantayyli radlkaal1 A-O ) O i tBDHSCI: tert-butyylidlmatyyliailyyli Ke: aaetyyllradlkaall ; ; ΑϊΟΟΒι\OAc J BnBr: bentsyylibromldi Lev: levulinyyliradikaali gQ ^ \ ^ Y ../ Lev02: levuliinihappoanhydridi tBDMSI: tert-butyylidimetyyli- OAc OBn DMF: dimetyyliformamidi allyyliradikaali Käyttäen edeltävässä vaiheessa saatua tuotetta edettiin kuten valmistusmenetelmässä V vaiheissa E, F ja G 35 on kuvattu antamaan 3-0-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyy- 38 111725 li-4-0-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-4-0-levulinyyli-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti)-β-D-glukopyranoosi. Kokonaissaanto: 59 %

Valmistusmenetelmä IX

5 Metyyli-3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-4-0-(bent- syyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-a-L-lykso-heksopyranosyyliuro-naatti)-fl-D-glukopyranosidi (kaavan III yhdiste)

Valmistusmenetelmässä VIII.saatu disakkaridi asety-loitiin, käsiteltiin bentsyyliamiinilla, saatettiin rea-10 goimaan Vilsmeierin reagenssin kanssa ja sitten metanolin kanssa hopeakarbonaatin läsnä ollessa. Sitten saatua yhdistettä käsiteltiin hydratsiinilla antamaan metyyli-3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-4-0- (bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti) -β-D-glukopyra-15 nosidi. Eri vaiheet on esitetty seuraavassa:

Vaihe A

|-O Γ OAc OAc OBn OAc OBn ·'·’ 102 mmol etikkahappoanhydridiä ja 10,2 mmol tri- : ,· fluorietikkahappoa lisättiin 1,02 mmolriin disakkaridia, 25 joka oli saatu vaiheessa VIII, ja kuumennettiin 50 eC:ssa : kaksi tuntia argonin paineessa. Sitten haihdutettiin kun- ·;· nes saatiin ruskea siirappi ja puhdistettiin kuten valmis- j': tusmenetelmässä VI vaiheessa A on kuvattu antamaan haluttu tuote.

v. 30 Saanto: 92 %

Vaihe B

r OAc Γ OAc

35 Lmv0 Γ Γ L“*VO f I

OAc OBn OAc OBn • » 39 1 1 17 2 5 1,52 mmol valheessa A saatua yhdistettä liuotettiin vedettömään etyylieetteriin ja 57,9 mmol bentsyyliamiinia lisättiin. Edettiin kuten valmistusmenetelmän VI vaiheessa B on kuvattu antamaan haluttu tuote.

5 Saanto: 79 %.

Vaihe C

Γ r O Ac „ ‘SS jSa£V.

0Ae OB" O Ac ien

Vilsmeierin reagenssi valmistettiin sekoittamalla 0 eC:ssa 2,15 mmol bromia ja 2,15 mmol trifenyylifosfiinia 15 5 ml:ssa dimetyyliformamidia. Valkoinen sakka suodatettiin pois argonin paineessa ja 0,269 mmol vaiheessa B saatua tuotetta lisättiin, liuotettiin 15 ml:aan vedetöntä di-kloorimetaania ylläpitäen sama lämpötila. Reaktioseos jätettiin sekoittumaan kahdeksi päiväksi huoneenlämpötilaan. 20 Laimennettiin sitten dikloorimetaanilla, pestiin 0 °C:iseksi jäähdytetyllä vedellä kunnes saavutettiin . \ pH-arvo 6, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja väkevöitiin kunnes saatiin siirappi. Puhdistettiin piimaa-.1 pylväässä käyttäen seosta, jossa oli dikloorimetaania ja '25 etyylieetteriä (5:1 tilav./tilav.).

Saanto: 77 %.

Vaihe D

r OAc r OAc l 30

LaevO “T *““T *TC L*,V° '“j OAc OBn OAc OBn

Sekoitettiin 0,46 ml metanolia, 0,34 mmol hopeakar-35 bonaattia ja 150 mg kalsiumsulfaattia 3 ml:ssa dikloorime- „ 111725 40 taania yhdeksi tunniksi argonin ilmakehässä 0 °C:ssa. 0,227 mmol vaiheessa C saatua yhdistettä liuotettiin 8 mitään dikloorimetaania. Tämä liuos lisättiin reaktio-seokseen ja jätettiin sekoittumaan 20 ®C:seen 20 tunniksi. 5 Suojattiin valolta. Sitten laimennettiin dikloorimetaanil-la, suodatettiin ja väkevöitiin antamaan metyyli-3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-4-0-( bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deok-si-4-0-levulinyyli-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti) -β-D-glukopyranosidi siirapin muodossa. Puhdistettiin piimaa-10 pylväässä käyttäen seosta, jossa oli dikloorimetaania ja etyylieetteriä (5:1 tilav./tilav.) eluenttina.

Saanto: 75 % [a]p° = +27 e (C = 1,18 CH2Cl2:ssa)

Vaihe E 15 Γ OAc rOAc ^ f3 ho^P<^CH3 OAc OBn OAc OBn 20 0,276 mmol edeltävässä vaiheessa saatua tuotetta 2 ml:ssa pyridiiniä jäähdytettiin 0 °C:seen ja 1,38 ml 1 M hydratsiinihydraattiliuosta seoksessa, jossa oli pyridii-; niä ja etikkahappoa (3:2 tilav./tilav.) lisättiin. Sitten *·’’1 25 reaktioseos väkevöitiin, metyleenikloridia lisättiin, pes tiin vesipitoisella KHS04-liuoksella, kuivattiin vedettö-mällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin kun-· nes saatiin siirappimainen aine. Puhdistettiin piimaapyl- väässä käyttäen seosta, jossa oli dikloorimetaania ja 30 etyylieetteriä (3:1 tilav./tilav. ).

Saanto: 87 % . \ [a]?° = +10 ° (C = 0,99 CH2Cl2:ssa)

* 1 · U

» 41 111725

Valmistusmenetelmä X

O- (2,4,6-tri-0-bentsyyli-3-deoksi-a-D-ribo-heksopy-ranosyyli) - (1-+4) -O- (bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti)- (1-+4)-3-0-asetyyli-l,6-5 anhydro-2-0-bentsyyli-B-D-glukopyranoosi (kaavan VII yhdiste) 2,03 mmol etyyli-2,4,6-tri-0-bentsyyli-3-deoksi-l-tio-D-ribo-heksopyranosidia (valmistusmenetelmä II) ja 1,69 mmol 3-0-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0-10 (bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyy- liuronaatti)-B-D-glukopyranoosia (valmistusmenetelmä V) liuotettiin dikloorimetaaniin ja 20 °C:ssa lisättiin hiukan molekyyliseuloja, sitten 5,07 mmol hopeatrifluorime-taanisulfonaattia ja 1,52 mmol bromia. Sekoittamista jat-15 kettiin 45 minuuttia ja reaktioseos suodatettiin sitten, pestiin vedellä ja haihdutettiin kuiviin.

Puhdistus piimaapylväässä antoi halutun tuotteen. Saanto: 35 %.

Valmistusmenetelmä XI

20 O-(6-0-asetyyli-2,4-di-0-bentsyyli-3-deoksi-a-D- ribo-heksopyranosyyli) - (1-+4) -0- (bentsyyli-2-0-asetyyli-3-. deoksi-B-D-riboheksopyranosyyliuronaatti)-(l-»4)-3,6-di-0- ; . t asetyyli-2-0-bentsyyli-B-D-glukopyranosyylitriklooriaset- imidaatti (kaavan II yhdiste) ’ 25 0,51 mmol valmistusmenetelmässä X saatua yhdistettä liuotettuna seokseen, jossa oli trifluorietikkahappoa ja ·’·' etikkahappoanhydridiä, altistettiin asetolyysille, käsi- v : teltiin sitten bentsyyliamiinilla etyylieetterissä ja tä män jälkeen triklooriasetonitriilillä dikloorimetaanissa j ‘ 30 kaliumkarbonaatin läsnä ollessa antamaan haluttu tuote.

Saanto: 50 %.

» * I

s * + 42 111725

Esimerkki 1

Metyyli-O-(3-deoksi-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-ribo-heksopyranosyyli) - (1—>4) -O- (3-deoksi-2-0-sulfo-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti) - (1—>4) -O- (2,3,6-tri-0-sulfo-a-5 D-glukopyranosyyli) - (1—>4) -O- (3-deoksi-2-0-sulfo-<x-L- lykso-heksopyranosyyliuronaatti) - (1—>4) -2,3,6-tri-O-sulfo-β-D-glukopyranosiditridekakis natriumsuola Vaihe Ά

Metyyli-O-(6-0-asetyyli-2,4-0-bentsyyli-3-deoksi-10 a-D-ribo-heksopyranosyyli) - (1—>4) -O- (ben.tsyyli-2-O-aset- yyli-3-deoksi-B-D-riboheksopyranosyyliuronaatti)- (1—>4) -O-(3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-o-D-glukopyranosyyli)-(1—>4)-O-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-a-L-lykso-hekso-pyranosyyliuronaatti) - (1—>4) -0-3,6-di-0-asetyyli-2-0-15 bentsyy1i-β-D-glukopyranosidi 0,121 mmol valmistusmenetelmässä XI kuvattua yhdistettä ja 0,093 mmol valmistusmenetelmässä IX kuvattua yhdistettä liuotettiin 3,2 ml:aan dikloorimetaania. Jäähdytettiin -20 °C:seen molekyyliseulojen läsnä ollessa ja 20 argonin ilmakehässä ja 0,470 ml liuosta, jossa oli trime-tyylisilyylitrifluorimetaanisulfonaattia dikloorimetaa- : nissa lisättiin. Sekoittamista jatkettiin -20 °C:ssa yksi * > · tunti, sitten reaktioväliaine suodatettiin, pestiin vedel-

• I

lä, haihdutettiin ja puhdistettiin Sephadex LH-20 -pyi- • 1 · 25 väässä käyttäen seosta, jossa oli dikloorimetaania ja me-, tanolia (1:1 tilav./tilav.) liuottimena ja sitten piimaa- pylväässä käyttäen sykloheksaanin ja etyyliasetaatin seos-’·’ ta (3:2 tilav./tilav.) liuottimena, antamaan haluttu tuo te .

I · i IV 30 Saanto: 62 %.

: Vaihe B

•’1 0,052 mmol edeltävässä vaiheessa saatua tuotetta • » 1 ' liuotettiin seokseen, jossa oli dikloorimetaania (0,43 ml) * » ;1 ja metanolia (1,7 ml). Sitten lisättiin 85 mg 10-%:ista 35 palladium/hiiltä ja seos jätettiin neljäksi tunniksi 43 1 1 17 2 5 20 °C:seen heikossa vetypaineessa. Suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin antamaan metyyli-0-(6-0-asetyyli-3-deoksi-α-D-ribo-heksopyranosyyli)- (l-»4) -0-2-0-asetyyli-3-deoksi-β-D-ribo-heksopyranosyyliuronihappo)-(l->4)-0-(3,6-di-0-5 asetyyli-a-D-glukopyranosyyli)-(l-»4)-O-(2-0-asetyyli-3- deoksi-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronihappo) - (l->4) -3,6-di-O-asetyyli-B-D-glukopyranosidi. Tämä yhdiste liuotettiin 0,96 ml:aan etanolia, jäähdytettiin 0 °C:seen ja sitten lisättiin 0,30 ml 5 M natriumhydroksidia. Jätettiin se-10 koittumaan 0 °C:seen viideksi tunniksi ja puhdistettiin Sephadex G-25 -pylväässä käyttäen vettä eluenttina. Haihdutettiin kuiviin antamaan metyyli-0-(3-deoksi-a-D-ribo-heksopyranosyyli)-(l->4)-0-(3-deoksi-B-D-riboheksopyrano-syyliuronihappo) - (l->4) -0- ( α-D-glukopyranosyyli ) - (l->4 ) -0-15 (3-deoksi-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronihappo-( l->4)-B-D- glukopyranosidi.

Tämä yhdiste liuotettiin 5 ml:aan dimetyyliformami-dia, haihdutettiin kuiviin, liuotettiin sitten uudestaan argonin ilmakehässä 2,6 ml:aan vedetöntä dimetyyliformami-20 dia. 302 mg rikkitrioksidi/trietyyliamiini kompleksia li sättiin sitten ja sekoittamista jatkettiin 20 tuntia 55 °C:ssa. Reaktioväliaine jäähdytettiin, 491 mg natrium-bikarbonaattia liuotettiin veteen ja jätettiin sekoittu- • *’ maan kolmeksi tunniksi.

25 Puhdistettiin Sephadex G-25 -pylväässä käyttäen * · vettä liuottimena, lyofilisoitiin sitten antamaan metyyli- 0-( 3-deoksi-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-ribo-heksopyranosyyli )-; : (l-*4 )-0-( 3-deoksi-2-0-sulfo-B-D-ribo-heksopyranosyyliuro- naatti)-(1^4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli)-'. . 30 (1^4)-0-(3-deoksi-2-0-sulfo-a-L-lykso-heksopyranosyyliuro- naatti )-(1^4)-2,3,6-tri-0-sulfo-B-D-glukopyranosiditri-dekakis natriumsuola.

t · | I··’ : Saanto: 65 %.

[ot]« +25 ° (C = 0,52 H20:ssa) - panos 1 35 ·’ ’ 20 .....; = ° ^ = H20:ssa) - panos 2 44 1117 2 5

Protoni ydinmagneettiresonanssispektri: (500 MHz, liuotin D20) 4,78 ppm Jl-2: 7,3 Hz; H'l; 5,22 ppm, Jl'-2'; 1,8 Hz; H"1: 5,26 ppm, Jl"-2": 3,5 Hz; H"'l: 4,78 ppm, Jl",-2"': 5 5,4 Hz; H"": 5,16 ppm, 3,3 Hz.

Esimerkki 2

Metyyli-0-(3-deoksi-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-ribo-hek-sopyranosyyli) -(1-+4)-0-(3-deoksi-2-0-sulfo-B-D-ribo-hekso-pyranosyyliuronaatti) - (l-»4) -0- (2,3,6-tri-0-sulf o-a-D-glu-10 kopyranosyyli)-(l->4)-0-(3-deoksi-2-0-metyyli-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti)- (l-*4)-2,3,6-tri-0-sulfo-B-D-glukopyranosididodekakis natriumsuola Tämä yhdiste valmistettiin 0-(6-0-asetyyli-2,4-di-O-bentsyyli-3-deoksi-a-D-ribo-heksopyranosyyli ) - (l->4) -O-15 (bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyy- liuronaatti) - (l->4) -3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-D-glu-kopyranosyylitriklooriasetimidaatista ja metyyli-3,6-di-O-asetyyli-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli-2-0-metyyli-3-deok-si-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti) -B-D-glukopyrano-20 sidista esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti. Me tyyli-3, 6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli-2-O-: metyyli-3-deoksi-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti )-B-D- ;·.·. glukopyranosidi valmistettiin l,6:2,3-dianhydro-4-0-(3- ,· ·, deoksi-fi-D-riboheksopyranosyyli)-B-D-mannopyranoosista * · ] 25 menetelmissä VII, VIII ja IX kuvattujen menetelmien mukai sesti .

[a]p° = +25 ° (C = 0,48 vedessä)

Protoni ydinmagneettiresonanssispektri; (500 MHz, liuotin D20) 30 Hl; 4,82 ppm Jl-2: 4,2 Hz; H'l: 5,08 ppm, Jl'-2': 1,0 Hz; H"1; 5,27 ppm, Jl"-2": 3,7 Hz; H"'l: 4,76 ppm, 01^-2^: ; ;·, 7,7 Hz; H"": 5,15 ppm, Jl""-2"": 3,5 Hz.

* i 45 1 117 2 5

Esimerkki 3

Metyyli-0-(3-deoksi-2,4-di-0-metyyli-6-0-sulfo-a-D-riboheksopyranosyyli) - (l-*4) -0- (3-deoksi-2-0-sulf o-B-D-ri-boheksopyranosyyliuronaatti) - (l-»4) -0- (2,3,6-tri-0-sulfo-a-5 D-glukopyranosyyli) - (l-*4) -O- (3-deoksi-2-0-sulfo-a-L-lykso- heksopyranosyyliuronaatti)-(l-»4)-2,3,6-tri-0-sulfo-B-D-glukopyranosidiundekakis natriumsuola Tämä yhdiste valmistettiin 0-(6-0-bentsyyli-2,4-di-O-metyyli-3-deoksi-a-D-ribo-heksopyranosyyli)-(l->4)-0-10 (bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyy- liuronaatti )-(l-*4)-3, 6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-D-glu-kopyranosyyli triklooriasetamidaatista ja metyyli-3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti) -fi-D-glukopy-15 ranosidista esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti.

0-( 6-0-bentsyyli-2,4-di-0-metyyli-3-deoksi-a-D-ribo-hekso-pyranosyyli)-(l->4 )-0-( bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-B-D-riboheksopyranosyyliuronaatti) - (l->4) -3,6-di-0-asetyyli-2- 0- bentsyyli-D-glukopyranosyyli triklooriasetimidaatti val- 20 mistettiin etyyli-6-0-bentsyyli-2,4-di-0-metyyli-3-deoksi- 1- tio-B-D-riboheksopyranosidista ja 3-0-asetyyli-l,6-an- . hydro-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi- ; ·, ·, β-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti)-β-D-glukopyranoosista . · valmistusmenetelmässä X kuvatun menetelmän mukaisesti.

• * 20 25 [αί[) = ° (C = 0,6 vedessä)

Protoni ydinmagneettiresonanssispektri; (500 MHz, liuotin : ; D20) : Hl: 4,77 ppm Jl-2: 5,0 Hz; ΗΊ; 5,22 ppm, Jl'-2': 2,2 Hz; H" 1: 5,24 ppm, Jl”-2": 3,7 Hz; H’"l: 4,76 ppm, Jl,”-2" Γ ! 30 7,5 Hz; H"": 5,10 ppm, Jl""-2"": 3,6 Hz.

t * 46 1 1 17 2 5

Esimerkki 4

Metyyli-O- (3-deoksi-4-0-metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-ribo-heksopyranosyyli)-(l-*4)-0-(3-deoksi-2-0-sulfο-β-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti) - (l-»4) -0- (2,3,6-tri-0-sul-5 fo-a-D-glukopyranosyyli) - (l-»4) -O- (3-deoksi-2-0-sulfo-a-L- lykso-heksopyranosyyliuronaatti) - (l-*4 )-2,3,6-tri-0-sulfo-g-D-glukopyranosididodekakis natriumsuola Tämä yhdiste valmistettiin esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti valmistusmenetelmässä IX kuvatusta 10 yhdisteestä ja 0-(2,6-di-0-bentsyyli-4-0-metyyli-3-deoksi-α-D-ribo-heksopyranosyyli) - (l-»4) -O- (bentsyyli-2-0-asetyy-li-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti) - (l-»4 )-3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-D-glukopyranosyyli trikloori-asetimidaatista. Jälkimmäinen trisakkaridijohdannainen 15 valmistettiin etyyli-2,6-di-0-bentsyyli-4-0-metyyli-3-de- oksi-l-tio-D-ribo-heksopyranosidista ja valmistusmenetelmässä V kuvatusta yhdisteestä valmistusmenetelmissä X ja XI kuvatuilla menetelmillä.

[a]p° = +22 ° (C = 0,54 vedessä).

20 Protoni ydinmagneettiresonanssispektri; (500 MHz, liuotin D20) . Hl: 4,78 ppm Jl-2: 5,1 Hz; H'l: 5,22 ppm, Jl,-2': 2,6 Hz;

Hnl: 5,27 ppm, Jln-2": 3,9 Hz; H" Ί: 4,75 ppm, ji"'-2"': 7,9 Hz; H"": 5,11 ppm, Jl""-2"": 3,5 Hz.

• · » 25 Esimerkki 5

Metyyli-0-(3-deoksi-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-ribo-hek-sopyranosyyli) - (l->4) -O- (3-deoksi-2-0-metyyli-B-D-ribo-hek-·.· sopyranosyyliuronaatti)-(l-»4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-o-D- glukopyranosyyli) - (l->4) -0- (3-deoksi-2-0-metyyli-a-L-lykso-30 heksopyranosyyliuronaatti)-(l-»4)-2,3,6-tri-0-sulfo-B-D- glukopyranosidiundekakis natriumsuola Tämä yhdiste valmistettiin metyyli-3, 6-di-0-asetyy-li-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli-2-0-metyyli-3-deoksi-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti)-β-D-glukopyranosidista ‘i 35 ja 0-(6-0-asetyyli-2,4-di-0-bentsyyli-3-deoksi-a-D-ribo- 47 1117 2 5 heksopyranosyyli) - (l->4) -0- (bentsyyli-2-0-metyyli-3-deoksi- β-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti)-(l->4) -3,6-di-0-asetyy- li-2-0-bentsyyli-D-glukopyranosyyli triklooriasetimidaa- tista esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti. Trisak- 5 karidi, jota käytettiin lähtöaineena, valmistettiin 3-0- asetyyli-1,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli-2-0-me- tyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti)-B-D- glukopyranoosista ja valmistusmenetelmässä II kuvatusta yhdisteestä valmistusmenetelmissä X ja XI kuvattujen mene- 10 telmien mukaisesti.

20 [a]p = +20 ° (C = 0,39 vedessä).

Protoni ydinmagneettiresonanssispektri; (500 MHz, liuotin D20)

Hl: 4,83 ppm Jl-2: 3,0 Hz; ΗΊ: 5,11 ppm, Jl'-2’: 2,0 Hz; 15 H"1: 5,31 ppm, Jl"-2": 3,3 Hz; H"'l: 4,68 ppm, Jl,"-2,,,: 7,7 Hz; H”": 5,18 ppm, Jl""-2"": 3,2 Hz.

Esimerkki 6

Metyyli-0-(3-deoksi-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-ribo-hek-sopyranosyyli) - (l-»4) -0- (3-deoksi-2-0-metyyli-B-D-ribo-hek-20 sopyranosyyliuronaatti)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D- glukopyranosyyli) - (l-»4) -0- (3-deoksi-2-0-sulfo-o-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti)-(l-»4)-2,3,6-tri-0-sulfo-B-D-.i‘,' glukopyranosididodekakis natriumsuola ; Tämä yhdiste valmistettiin esimerkissä 1 kuvatun 25 menetelmän mukaisesti 0-( 6-0-asetyyli-2,4-di-0-bentsyyli- * 3-deoksi-a-D-ribo-heksopyranosyyli )-(l->4 )-0-(bentsyyli-2- 0-metyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti)-- (l-»4)-3, 6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-D-glukopyranosyyli triklooriasetimidaatista ja valmistusmenetelmässä IX kuva-30 tusta yhdisteestä.

[a]= +30 0 (C = 0,40 vedessä).

Protoni ydinmagneettiresonanssispektri; (500 MHz, liuotin 020)

Hl: 4,77 ppm Jl-2: 5,0 Hz; H' 1: 5,20 ppm, Jl'-2': 2,5 Hz; ;‘-'i 35 H"l: 5,27 ppm, Jl"-2": 4,0 Hz; H"'l: 4,67 ppm, 31^-2^: 8,0 Hz; H"": 5,14 ppm, Jl""-2"": 3,5 Hz.

48 1 1 1725

Esimerkki 7

Metyyli-0-(3-deoksi-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-ribo-hek-sopyranosyyli) - (l-»4) -O- (3-deoksi-2-0-metyyli-B-D-ribo-hek-sopyranosyyliuronaatti)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-5 glukopyranosyyli)-(l-»4)-0-(3-0-metyyli-2-0-sulfo-a-L-ido- pyranosyyliuronaatti) -(l-»4)-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-gluko-pyranosididodekakis natriumsuola Tämä yhdiste valmistettiin esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti 0-(6-0-asetyyli-2,4-di-0-bentsyyli-10 3-deoksi-a-D-ribo-heksopyranosyyli) -(l-*4)-O- (bentsyyli-2- 0-metyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti)-(l->4)-3, 6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-D-glukopyranosyyli triklooriasetimidaatista ja metyyli-2,3,6-tri-0-bentsyyli- 4-0-(bentsyyli-2-0-bentsyyli-3-0-metyyli-a-L-idopyranosyy-15 liuronaatti)-a-D-glukopyranosidista. Jälkimmäinen yhdiste valmistettiin M. Petitoun ja C. A. A. van Boeckelin menetelmän mukaisesti julkaisusta "Chemical synthesis of heparin fragments and analogues" sivut 203 - 210 - Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, julk. Springer 20 Verlag Vienna - N.Y. 1992.

[a]p° = +46 0 (C = 0,58 vedessä)

Protoni ydinmagneettiresonanssispektri; (500 MHz, liuotin D20) \ ! Hl: 5,10 ppm Jl-2: 3,0 Hz; H'l: 5,10 ppm, Jl'-2': 5,0 Hz; 25 H"1: 5,48 ppm, Jl"-2": 3,60 Hz; H"'l: 4,68 ppm, Jl",-2"':

1 ! t t I

7,5 Hz; H"": 5,16 ppm, Jl""-2"": 3,6 Hz.

Esimerkki 8

Metyyli-0-(3-deoksi-2,4-di-0-sulfo-B-D-ribo-hekso-pyranosyyliuronaatti) - (l-*4) -0- (2,3,6-tri-0-sulf o-a-D-glu-30 kopyranosyyli)-(l-+4)-0-(3-deoksi-2-0-sulfo-8-D-ribo-hekso-pyranosyyliuronaatti)-(l-»4)-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glu-kopyranosyyli)-(l->4)-0-(3-deoksi-2-0-sulfo-a-L-lykso-hek-sopyranosyyliuronaatti) - (l->4) -2,3,6-tri-0-sulfo-B-D-gluko-pyranosidiheksadekakis natriumsuola i 35 Tämäyhdistevalmistettiin0-(bentsyyli-2-0-asetyy- li-3-deoksi-4-0-levulinyyli-B-D-ribo-heksopyranosyyliuro- 49 1 1 1725 naatti )-(l-»4 )-3, 6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyyli-D-glukopy-ranosyyliJtriklooriasetimidaatista (valmistusmenetelmä VI) ja 3-0-asetyyli-l,6-anhydro-2-0-bentsyyli-4-0-(bentsyyli- 2-0-asetyyli-3-deoksi-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti) -5 β-D-glukopyranoosista (valmistusmenetelmä V). Saattamalla nämä kaksi yhdistettä reagoimaan esimerkissä 1 vaiheessa A kuvatuissa olosuhteissa saatiin seuraava yhdiste:

Ote OBn OAo OBn

Saanto: 64 %.

15 Näin saatu tuote altistettiin asetolyysille valmis tusmenetelmässä VI vaiheessa A kuvatun menetelmän mukaisesti ja sitten käsiteltiin bentsyyliamiinilla valmistusmenetelmässä VI vaiheessa B kuvatuissa olosuhteissa ano-meerisen hydroksyylin vapauttamiseksi. Sitten saatu vas-20 taava imidaatti saatettiin reagoimaan triklooriasetonit-riilin kanssa kaliumkarbonaatin läsnä ollessa valmistusmenetelmässä VI vaiheessa C kuvatun menetelmän mukaisesti.

Jälkimmäinen tuote saatettiin reagoimaan seuraavien : yhdisteiden kanssa: metyyli-3,6-di-0-asetyyli-2-0-bentsyy- 25 li-4-0-(bentsyyli-2-0-asetyyli-3-deoksi-a-L-lykso-hekso-’:": pyranosyyliuronaatti)-β-D-glukopyranosidi (valmistusmene- :· telmälX), metyyli-0-(3-deoksi-2,4-di-0-sulfo-B-D-ribohek- : ;'j sopyranosyyliuronaatti )-(l->4)-0-( 2,3,6-tri-O-sulfo-a-D- glukopyranosyyli)-(l->4)-0-(3-deoksi)-2-0-sulfo-B-D-ribo-: ·, ·. 30 heksopyranosyyliuronaatti) - (l-»4) -0- (2,3,6-tri-0-sulfo-a-D- , · · · t glukopyranosyyli) - (l->4) -O- (3-deoksi-2-0-sulf o-a-L-lykso- heksopyranosyyliuronaatti )-(l-»4 )-2,3,6-tri-O-sulfo-B-D-:.· · glukopyranosidi, heksadekakis natriumsuola.

< t 50 11 1725

Protoni ydirunagneettiresonanssispektri; (500 MHz, liuotin D20)

Hl: 4,78 ppm Jl-2: 7,0 Hz; H'1: 5,22 ppm, Jl'-2': 1,9 Hz; H"l: 5,25 ppm, Jl"-2": 3,5 Hz; H"'1: 4,79 ppm, Jl",-2"': 5 5,6 Hz; H"": 5,31 ppm, Jl-2: 3,50 Hz; H""': 4,80 ppm, J!""’-2""': 5,9 Hz.

Claims (13)

111725 51

1. I ^ t , 1. jossa Ri, R2, R3a R4, Rs^ R61 Rs/ R9/ Rioa Riu R12 ja R13 ovat kuten patenttivaatimuksen 1 kaavassa I on määritetty. » t · 56 111725

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava: 5 c°°' j-osog*

10 R1 0S03' R3 jossa kaavassa X on -0SC>3-radikaali, radikaali, jolla on kaava A 15 R-0 (A) , radikaali, jolla on kaava B I—- OSO-a 20 Ry^Rs^A-o (B) r5 tai radikaali, jolla on kaava C ' \ 25 " : |OQ pOS03~ ;r: Rio--x(r9 °/Λi_/hb y~o R8 R5 • 30 Y on radikaali, jolla on kaava D I— Ri 2 / °\ (°>

35 O......\*V. /RH OSO3" „ 111725 52 R on haarautunut tai haarautumaton alkyyliradikaa-li, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, Ri, R3, R5, R7, Rs , Rio, R12 ja R13, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin hydroksyyliradikaa-5 li, haarautunut tai haarautumaton alkoksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, tai -OSOs-radikaali, R2, R4, R6, R9 ja Rh, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin vetyatomi, hydroksyyliradikaali, haarautumaton tai haarautunut alkoksiradikaali, jossa on 10 1-6 hiiliatomia, tai -OSOi-radikaali, edellyttäen, että vähintäin yksi läsnäolevista substituenteista R2, R4, Rö, R9 tai Rn on vetyatomi, farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen tai vastaavien happojen muodossa, tunnettu siitä, että yhdiste, 15 jolla on kaava II co°p4 0p3 1X^2" >vnh 1111

20 N \ N I CCI3 Ri' op1 . jossa • · · X' on klooriasetoksiradikaali, levulinyylioksi- \ radikaali, radikaali, jolla on kaava A, radikaali, jolla • · · *. 2 5 on kaava Bi • · j-0_p5 ‘ Ry'w^^g1 --O : 7 30 Rs’ . *. tai radikaali, jolla on kaava Ci 1 * * ? oooPe ; " -'XyiXV» “ R8' R5' „ 111725 Pi, P2, P3 ja P5, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, ovat kukin suojaryhmä, kuten asyklinen asykliradi-kaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, edullisesti asetyylira-dikaali, aromaattinen asyyliradikaali, edullisesti bent-5 soyyliradikaali, 2-alkenyyliradikaali, jossa on 2 - 7 hiiliatomia, edullisesti allyyliradikaali tai bentsyyliradi-kaali, P4 ja Pö, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, ovat kumpikin suojaryhmä, kuten alkyyliradikaali, jossa on 10 1-6 hiiliatomia, edullisesti metyyliradikaali, tai bent- syyliradikaali, Ri', R5' ja Re', jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin haarautunut tai haarautumaton alkok-siradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, asyklinen asyyli-15 oksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, edullisesti asetoksiradikaali, aromaattinen asyylioksiradikaali, edullisesti bentsoyylioksiradikaali, tai 2-alkenyylioksiradi-kaali, jossa on 2 - 7 hiiliatomia, edullisesti allyyliok-siradikaali,

20 R7' ja Rio', jotka voivat olla samanlaisia tai eri laisia, ovat kuten Ri':lle on määritetty tai ne voivat ; olla klooriasetoksiradikaali tai levulinyylioksiradikaali, ia • 1 R2' , Rö' ja R9', jotka voivat olla samanlaisia tai I I » 25 erilaisia, ovat kukin vetyatomi tai ne ovat kuten Ri':lle t S I » » > 4 on määritetty, ***: saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava III: » : : : Ra' OP0 ;*‘ jossa : : 35 P7 on kuten kaavassa II P4tlle on määritetty, 111725 54 P8 on kuten kaavassa II Piille on määritetty, IV ja Rn', jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kuten kaavassa II R2':lle on määritetty ja FV, R12' ja R13', jotka voivat olla samanlaisia tai 5 erilaisia, ovat kuten Ri'ille on määritetty kaavassa II, yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava IV: COOP4 OP3 ίο x' Rr O p1 r3· j ossa X', Pi, P2, P3, P4, Ri' ja R2' ovat kuten kaavassa 15. ii on määritetty, P7, R3' ja R4' ovat kuten kaavassa III on määritetty ja Y' on radikaali, jolla on kaava Di: 20 1—R1 2* y/ °\ , (Di) 0—\Ri 1' 13 Γν OPg I · I • t · 25 jossa t M ‘ · Pe, Rn', R12' ja R13' ovat kuten kaavassa III on määritetty, V ' ja tämän jälkeen altistetaan joko katalyyttiselle hydraukselle, sitten saippuoinnille ja sulfatoinnille, tai t » * ' : 30 ensin saippuoinnille, sitten sulfatoinnille ja tämän jäl- I : keen katalyyttiselle hydraukselle, tai ensin katalyytti- , selle hydraukselle, sitten sulfatoinnille ja tämän jälkeen * 1 t saippuoinnille, antamaan kaavan I yhdisteet; tai saatetaan monosakkaridi, joka sisältää suojaryhmiä 35 hydroksyyliradikaalien kohdalla, ja mikäli tarkoituksenmu- 111725 55 kaista, karboksyyliradikaalien kohdalla, mikäli niitä on, reagoimaan toisen suojatun monosakkaridin kanssa muodostamaan disakkaridi, joka tämän jälkeen saatetaan reagoimaan toisen suojatun monosakkaridin kanssa muodostamaan suojat-5 tu trisakkaridi, josta on mahdollista saada suojattu tet-rasakkaridi, sitten suojattu pentasakkaridi ja tämän jälkeen suojattu heksasakkaridi, joista tetra-, penta- tai heksasakkarideista poistetaan tämän jälkeen suojaus ja, mikäli tarkoituksenmukaista, sulfatoidaan tai ensin pois- 10 tetaan suojaus osittain, sitten sulfatoidaan ja tämän jälkeen poistetaan suojaus kokonaan.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava Ia: 15 OBO,· J°°'o |— O SO 3 1 0 Γ1Λ% °-\?<°° f (ia) Rj R, OSOj· Rs osos 20 jossa Ri, R2, R3, R4, R5, Rö, R7, R11, R12 ja R13 ovat kuten . .·. patenttivaatimuksen 1 mukaisessa kaavassa I on määritetty. • « I

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, • · *.! tun nettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla • · ’ 25 on kaava Ib: mi» • · I M ... COO· oso.· f001 r-°soj· n r112 ; ; > 1,_0 C_0S )-0 Γ\ / —0 3 /1-/-°v ’ 0-Λ53 / V"i» (|b) ... R, N (, 11 0S0»· 0e°S’ : 30

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa Ri, R3, Rs, R7, Re, Rio ja R13, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin haarautumaton tai haa-5 rautunut alkoksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia tai -OSO3-radikaali, R2, R4, R6 ja Rg, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin vetyatomi tai haarautunut tai haarautumaton alkoksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia,

10 R11 on vetyatomi, haarautunut tai haarautumaton alkoksiradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, tai -OSO3-radikaali, edellyttäen, että ainakin yksi läsnäolevista subs-tituenteista R2, R4, Rö, R9 tai Rn on vetyatomi, ja 15 R12 on hydroksyyliradikaali tai -OSO^-radikaali.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa R2 on vetyatomi.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa R2 ja R6 ovat vetyatomi, . R3, R11 ja R12 ovat -OSCh-radikaali ja R13 on haarautunut tai haarautumaton alkoksiradi- kaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan metyyli-O-(3- ·->' deoksi-2, 4,6-tri-O-sulfo-a-D-ribo-heksopyranosyyli) - : (1_>4)-O-(3-deoksi-2-0-sulfo-h-D-riboheksopyranosyyliuro- naatti)- (1—>4) -O-(2,3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyyli)- ; ' : 30 (1—>4)-O-(3-deoksi-2-0-sulfo-a-L-lykso-heksopyranosyy- : "liuronaatti)-(1—>4 )-2,3, 6-tri-0-sulfo-B-D-glukopyranosidi , tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat emästen ’ · ' kanssa, · * metyyli-O-(3-deoksi-2,4-di-0-metyyli-6-0-sulfo-a- : 35 D-ribo-heksopyranosyyli) - (1—»4) -O- (3-deoksi-2-0-sulfo-B-D- t 111725 57 ribo-heksopyranosyyliuronaatti)- (1—>4 ) -0-(2,3,6-tri-0-sul-fo-a-D-glukopyranosyyli)- (1_>4) -0-(3-deoksi-2-0-sulfo-a-L-lykso-heksopyranosyyliuronaatti)-(1—>4) -2, 3, 6-tri-0-sulfo-β-D-glukopyranosidi, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttä-5 vät suolat emäksen kanssa, tai metyyli-0-(3-deoksi-4-0-metyyli-2,6-di-0-sulfo-a-D-ribo-heksopyranosyyli)- (1—>4) -0-(3-deoksi-2-0-sulfo-B-D-ribo-heksopyranosyyliuronaatti)-(1—>4) -0-(2,3, 6-tri-0-sul-fo-a-D-glukopyranosyyli) - (1—>4) -0- (3-deoksi-2-0-sulfo-a-L-10 lykso-heksopyranosyyliuronaatti)-(1—>4) -2,3, 6-tri-0-sulfo- β-D-glukopyranosidi sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat emäksen kanssa.

8. 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(2,4,6-tri-0-bentsoyyli- 3-deoksi-5-D-ribo-heksopyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi, 15 yhdiste, jolla on kaava IX:

20 OBz . jossa Bz on bentsoyyliradikaali. Γ,·.

9. 1,6:2,3-dianhydro-4-0-(3-deoksi-fi-D-ribo-hekso- • · pyranosyyli)-β-D-mannopyranoosi, yhdiste, jolla on kaava 25 X: i:i - ; * : 30 OH < I 111725 58

10. Yhdisteet, joilla on kaava XI: COOP4 5 R1’ OP^ tunnettuj a siitä, että Ri' on haarautunut tai haarautumaton alkoksiradi-10 kaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, asyklinen asyylioksi-radikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, edullisesti asetok-siradikaali, aromaattinen asyylioksiradikaali, edullisesti bentsoyylioksiradikaali tai 2-alkenyylioksiradikaali, jossa on 2 - 7 hiiliatomia, edullisesti allyylioksiradikaali, 15 Pi ja P2, jotka voivat olla samanlaisia tai erilai sia, ovat kumpikin suojaryhmä valittuna ryhmästä asyklinen asyyliradikaali, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, edullisesti asetyyliradikaali, aromaattinen asyyliradikaali, edullisesti bentsoyyliradikaali, 2-alkenyyliradikaali, jossa on 20 2-7 hiiliatomia, edullisesti allyyliradikaali, tai bent- syyliradikaali, , ,·, P4 on suojaryhmä valittuna ryhmästä alkyyliradikaa- # « · . li, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, edullisesti metyyliradi- ; kaali, tai bentsyyliradikaali, ja *’’! 25 P9 on levulinyyliradikaali tai klooriasetyyliradi- kaali. 1 * » I 4 I 59 1 1 1725