CZ20002635A3

CZ20002635A3 - Syntetické polysacharidy, způsob jejich přípravy a farmaceutické kompozice, které je obsahují

Info

Publication number: CZ20002635A3
Application number: CZ20002635A
Authority: CZ
Inventors: Johannes Basten; Cornelia Dreef-Tromp; Pierre-Alexandre Driguez; Philippe Duchaussoy; Jean-Marc Herbert; Maurice Petitou; Boeckel Constant Van
Original assignee: Sanofi-Synthelabo; Akzo Nobel N. V.
Priority date: 1998-01-19
Filing date: 1999-01-13
Publication date: 2000-12-13
Also published as: KR100513196B1; PE20000269A1; BRPI9907025B8; US6528497B1; BR9907025B1; HUP0102009A1; CN1165550C; CN1288470A; PT1049721E; PL202802B1; SA99191113B1; ES2168000T3; FR2773804B1; EP1049721A1; DZ2709A1; CA2317465A1; SK10782000A3; AR013019A1; HUP0102009A3; DE69900718D1

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nových syntetických polysacharidů, které mají antikoagulační a antithrombotickou farmakologickou aktivitu heparinu.

Dosavadní stav techniky c .

Heparin patří do skupiny glykosaminoglykanů (GAG), což jsou heterogenní přírodní sulfatované polysacharidy.

Heparinové prostředky jsou směsi řetězců obsahujících řadu monosacharidových jednotek v počtu od 10 do 100 nebo více. Tato heterogenita molekulové velikosti je doprovázena strukturní heterogenitou, což platí nejen o povaze základních monosacharidů ale i o substituentech, které nesou (L. Rodén; The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosaminoglycans, vydal Lennarz W.J., Plenům Press, New York a Londýn, strany 267-371, 1980).

Každá skupina přírodních GAG má obecně několik farmakologických účinků. Všechny jsou kombinovány v prostředcích, které lze získat z přírodních produktů. Tak mají například hepariny a heparan-sulfáty antithrombotickou aktivitu, která je spojená se současným působením na několik koagulačních faktorů.

Heparin katalyzuje (zejména přes antithrombin III (AT III)) inhibici dvou enzymů, které se účastní kaskády srážení krve, tj. faktoru Xa a faktoru Ha (nebo thrombinu) . Prostředky obsahující hepariny s nízkou molekulární hmotností (LMWHS) obsahují řetězce tvořené 4 až 30 monosacharidy a působí na faktor Xa selektivněji než na thrombin.

Některé syntetické oligosacharidy, zejména ty popsané v patentové přihlášce EP 84999, selektivně inhibují, přes antithrombin III, faktor Xa bez jakéhokoliv účinku na thrombin.

Je známo, že inhibice faktoru Xa vyžaduje vazbu heparinu na AT III přes antitňrombinovou vazebnou doménu (ABD) a že inhibice faktoru Ha (thrombin) vyžaduje vazbu na AT III přes ABD, a na thrombin přes hůře definovanou vazebnou doménu (TBD).

Syntetické oligosacharidy korespondující s ABD heparinu jsou známé a vykazují antithrombotickou aktivitu při žilní thrombose. Tyto sloučeniny jsou popsané v patentové přihlášce EP 529,715 a EP 621,282 a v patentu CA 2,040,905.

Účinnost těchto oligosacharidů při prevenci tepenné thrombosy je ale zmařena jejich neschopností inhibovat thrombin.

Syntéza heparinových glykosaminoglykanů schopných inhibice thrombinu přes aktivaci AT III je popsána patentové přihlášce PCT/FR 97/01344.

Tato patentová přihláška popisuje nové biologicky aktivní polysacharidové deriváty. Zejména jsou to antikoagulanty a antithrombotika. Dále, protože se tyto polysacharidy získávají syntézou, je možné selektivně modifikovat jejich strukturu a zejména odstranit nežádoucí sulfátové substituenty, které se účastní interakce s některými bázickými proteiny, jako je faktor krevních destiček 4 (PF4), který se uvolňuje během aktivace destiček, což vede ke značné neutralizaci heparinu v oblasti sraženiny. Tak lze získat polysacharidy, které jsou účinnými antithrombotickými a antikoagulačními činidly a které mohou dále odolat in vivo působení proteinů, jako je PF4, které neutralizují účinek heparinu zejména na thrombin.

• ·

Bylo dokázáno, že zejména tyto sulfatované a alkylované polysacharidy mohou být v závislosti na uspořádání alkylových skupin a sulfátových skupin vniklém při tvorbě uhlovodíkového skeletu silnými antithrombotickými a antikoagulačními činidly.

Obecněji bylo objeveno, že je možné při výstavbě polysacharidových sekvenci přesně modifikovat GAG aktivitu za účelem získání velmi aktivních produktů, které mají vlastnosti heparinu.

Ale použití některých produktů popsaných v patentové přihlášce PCT/FR 97/01344 v humánní medicíně může být obtížné, zejména pokud mají dlouhý poločas života. Při prevenci nebo léčení thrombosy výše uvedenými produkty musí být obnovena nebo udržována tekutost krve a současně se musí bránit indukci krvácení. Vitální povaha s tím spojených funkcí je taková, že je výhodné použít (za účelem udržení této rovnováhy) pouze sloučeniny, které mají krátký poločas života a se kterými se lépe pracuje.

Důvodem k tomu je dobře známý fakt, že u léčených pacientů se může při jakékoliv nehodě spouštět krvácení. Také může být nezbytné u léčeného pacienta provést chirurgický zákrok. I z těchto různých důvodů je vhodné použít sloučeniny s krátkým poločasem života.

Poločas života syntetických polysacharidů podle předkládaného vynálezu byl stanoven u krys, kde bylo neočekávaně pozorováno, že je ovlivněn strukturou molekuly a zejména ABD domény TBD (thrombinová vazebná doména) a spacerem.

• ···· · · ··· · ·· »· · · · · · · · ·

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se tak týká nových syntetických polysacharidů, které mají podobnou strukturu jako sloučeniny popsané v patentové přihlášce PCT/FR 97/01344, ale které mají specifické vlastnosti. Příčinou toho je, že tyto sloučeniny mají neočekávané poločas života vyloučení (určený pomocí anti-Xa aktivity po intravenózním podání krysám) kratší než 1,5 hodiny.

Tyto sloučeniny jsou hexadekasacharidy obsahující tři odlišné sekvence: sulfatovanou pentasacharidovou sekvenci DEFGH, nesulfatovanou heptasacharidovou sekvenci Z (MN) ₃ a sulfatovanou tetrasacharidovou sekvenci VWXY.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou syntetické polysacharidy v kyselé formě a jejich farmaceuticky upotřebitelné soli s farmaceuticky upotřebitelnými kationty, jejichž aniontová forma koresponduje s jedním ze vzorců (I), (II), (III), (IV) a (V) níže:

9 • 999 • 9

Aktivní struktury podle vynálezu

= CH3 c/>

Λ

O

Vynález zahrnuje polysacharidy v jejich kyselé formě nebo ve formě jakékoliv jejich farmaceuticky upotřebitelné soli. V kyselé formě jsou skupiny -C00 a -S0₃' přítomny jako skupiny COOH a -SO₃H.

Výraz „farmaceuticky upotřebitelná sul polysacharidu podle předkládaného vynálezu se týká polysacharidu, ve kterém je jedna nebo několik skupin -C00' a/nebo -S0₃' iontově vázána k farmaceuticky upotřebitelnému kationu kovu. Výhodné soli podle předkládaného vynálezu jsou ty, kde je kation vybrán z kationtú alkalických kovů, výhodněji Na⁺ nebo K*.

Předkládaný vynález se také týká způsobu přípravy polysacharidu podle předkládaného vynálezu.

Tento způsob v principu využívá di- nebo oligosacharidové synthony připravené tak, jak je uvedeno dříve v literatuře. Odkazujeme zejména na patentové přihlášky EP 300,099, EP 529,715, EP 621,282 a EP 649,854 a na práci C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, strany 1671-1690. Tyto synthony se pak spolu spojují za vzniku plně chráněného prekurzoru hexadekasacharidu podle předkládaného vynálezu, ze kterého se pak selektivně odstraní chránící skupiny a sulfatuje se za vzniku hexadekasacharidu podle předkládaného vynálezu.

Ve výše uvedené spojovací reakci reaguje „donor di- nebo oligosacharidu aktivovaný na svém anomerním uhlíku s „akceptorem di- nebo oligosacharidu obsahujícím volnou hydroxylovou skupinu.

Hexadekasacharidy podle předkládaného vynálezu lze syntetizovat následující sekvencí operací, která se týká sacharidových jednotek uvedených ve vzorci (I) výše.

• ···· fefe ···· fefe fefe • fe fe fefe · fefefefe • fe fefefe fefefe· • · «··· fefefe·· • fe fefefe ···· • fefefe fefe fe fefe fefe

Nejdřív se připraví chráněné prekurzory GH, pGH (který má v poloze 4' alkoholovou skupinu) a chráněný prekurzor EF, pEF (jehož anomerní atom uhlíku je aktivován). Intermediáty pGH a pEF spolu reagují za vzniku EFGH. Z polohy 4 nereduktivní koncové jednotky se pak odstraní chránící skupina za vzniku prekurzoru pEFGH.

Paralelně se stejným způsobem připraví prekurzor pYZ(MN) ₃D části YZ(MN)₃D (jejíž anomerní atom uhlíku je aktivován).

Tetrasacharid pEFGH pak reaguje s pYZ(MN) ₃D za získání YZ (MN) ₃DEFGH. Nereduktivní koncová jednotka se odehrání za získání prekurzoru pYZ (MN) ₃DEFGH.

Paralelně se připraví prekurzor pVWX látky VWX.

Reakce mezi pVWX a pYZ (MN) ₃DEFGH tak poskytne přímý prekurzor hexadekasacharidu, který se odehrání a sulfatuje za získání očekávaného hexadekasacharidu.

Odborníkům v této oblasti je zřejmé, že je k dispozici několik syntetických strategií (v závislosti na vybraném akceptoru a donoru) . Například je možné připravit donor VWXYZ (MN) ₃D a spojit jej s látkou EFGH za účelem získání prekurzoru požadovaného hexadekasacharidu. Odkázat se lze na výše uvedené reference a na práci Monosacharides, Their chemistry and their roles in natural products, P.M. Collins a R.J. Ferrier, J. Wíley & Sons, 1995 a na práci G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu byly podrobeny biochemickým a farmakologickým testům, které ukázaly, že mají navíc velmi výhodné vlastnosti jako produkty popsané v patentové přihlášce PCT/FR 97/01344.

• ··*· 99 ···· ·· ·· • * · 9 · 9 ···· • · · 9 · · · 9 * 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 9 99 99

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu, které se selektivně váží na AT III s afinitou stejnou nebo větší než heparin, mají antikoagulační a antithrombotické vlastnosti, které jsou lepší než u heparinu.

Všeobecná antithrombotická aktivita produktů vzorce (I). až (V) byla hodnocena po intravenózním nebo podkožním podání u krys, v modelu žilního městnání krve a indukce s thromboplastinem způsobem popsaným J. Reyersem a .dalšími v práci Thrombosis Research, 1980, 18, 669-674, a v modelu tepenné thrombosy tvořeném výhybkou implantovanou krční tepnu a krční žílu u krys, jak popsal Umetsu a další, Thromb. Haemost., 1978, 39, 74-83. V těchto dvou experimentálních modelech je ED_S0 sloučenin podle předkládaného vynálezu alespoň stejného řádu nebo menší než -u jiných již známých syntetických heparinoidů (ED₅₀ mezi 1 a 50 nmol/kg). Sloučeniny podle předkládaného vynálezu tak mají zejména výhodnou specifičnost působeni a zejména výhodnou antikoagulační aktivitu.

Kvůli své biochemické a farmaceutické aktivitě jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu velmi výhodnými léčivy. Jejich toxicita je zcela kompatibilní s tímto použitím. Zároveň jsou velmi stabilní, a proto zejména vhodné jako aktivní složky farmaceutických specialit.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu nejsou dále neutralizovány vysokými dávkami kationtových destičkových proteinů jako PF4, které se uvolňují při aktivaci destiček během procesu thrombosy. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou tak nejvýhodnějš£ pro léčení a prevenci thrombosy tepenného nebo žilního původu.

*444 44 44·4 44 44 • 4 · · 4 4 4444

4 44 4 4444

4 44 44 44 44 4 · 444 ····

4444 444 4444

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu lze použít při různých patologických stavech následujících po modifikaci homeostasy koagulačního systému způsobených poruchami kardiovaskulárního a cerebrovaskulárního systému, jako jsou thromboembolické poruchy spojené s arteriosklerozou a diabetem, jako je nestálá angína, mrtvice, restenosa po angioplastice, endarterioktomie, instalace endovaskulární protézy; nebo thromboembolické poruchy spojené s rethrombosou po thrombolyse, infarkt, demence ischemického původu, s poruchami periferních tepen, s haemodialysou, s aurikulární fibrilací nebo během použití aorto-koronární můstkové vaskulární protézy. Tento produkt podle předkládaného vynálezu lze dále použít pro léčení nebo prevenci thromboembolických patologických stavů žilního původu jako je plicní embolismus. Produkty podle předkládaného vynálezu lze použít pro prevenci nebo léčení thrombotických komplikací vzniklých během chirurgického zákroku nebo v souvislosti s jiným patologickým stavem jako je rakovina a bakteriální nebo virová infekce. V případě použití během instalace protézy může sloučenina podle předkládaného vynálezu pokrýt protézu a tak ji učinit kompatibilní s krví. Zejména se sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou vázat na intravaskulární protézy. V tomto případě . mohou být volitelně chemicky modifikovány zavedením vhodných ruček na nereduktivním nebo reduktivním konci, jak popisuje patentová přihláška EP 649,854.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu lze také použít jako pomocné látky během endařterioktomie prováděné porézními balónky.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou velmi stabilní a proto zejména vhodné pro ustavení aktivní složky léčiva.

	9«	···*	·«	·«
·· ·	•	•	•	9	9	•	•
• 9	♦	•	•	•	•	•	*
							•
• ·	•	•	•	•	•	•	•
··· ·	··		♦		··	·<

Proto lze sloučeniny podle předkládaného vynálezu použít pro přípravu léčiv k léčení výše uvedených chorob.

V jiném aspektu vynálezu je tak jeho předmětem farmaceutický prostředek obsahující jako aktivní složku syntetický polysacharid definovaný výše.

Vynález se výhodně týká farmaceutických prostředků obsahujících jako aktivní složku sloučeninu podle předkládaného vynálezu ve formě kyseliny nebo jedné z jejich farmaceuticky upotřebitelných solí, popřípadě v kombinaci s jedním nebo několika inertními a odpovídajícími přísadami. Obecně lze polysacharidy podle předkládaného vynálezu použít při léčení patologických stavů spojených s poruchami koagulace.

V každé jednotce dávky je aktivní složka přítomna v množství vhodném pro konkrétní denní dávku. Obecně se každá dávková jednotka upraví odpovídajícím způsobem podle konkrétní dávky a způsobu podávání, například jako tablety, želatinové kapsule apod., sáčky, ampule, sirupy apod.,. kapky, transdermální nebo sliznicové náplasti tak, že uvedená jednotka dávky obsahuje od 0,1 do 100 mg aktivní složky, výhodně 0,5. až 50 mg.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu lze také použít v kombinaci s jednou nebo několika dalšími aktivními složkami, které jsou vhodné pro požadovanou terapii, jako například antithrombotická činidla, antikoagulanty, činidla proti agregaci krevních destiček jako je například dipyridamol, aspirin, tiklopidin, klopidogrel nebo antagonisté glykoproteinového komplexu Ilb/IIIa.

Farmaceutické prostředky jsou formulovány pro podávání savcům včetně člověka za účelem léčení výše uvedených chorob.

• · · · • · · · • · · *

Takto získané farmaceutické prostředky jsou výhodně v různých formách jako například roztoky pro injekce nebo nápoje, cukrem potažené tablety, běžné tablety nebo želatinové kapsule. Výhodnou formou jsou roztoky pro injekce. Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu jsou zejména vhodné pro preventivní nebo akutní léčení chorob cévních, stěn jako je arteriosklerosa, hyperkoagulabilita například po chirurgickém zákroku nebo na nádoru nebo po deregulaci koagulace způsobené bakteriálními, virovými nebo enzymatickými aktivátory. Dávkování se může lišit v rámci široké škály v závislosti na věku pacienta, hmotnosti, zdravotním stavu, povaze a závažnosti potíží a také způsobu podávání. Dávkování zahrnuje podání jedné nebo několika dávek 0,1 mg až 100 mg za den, výhodně 0,5 až 50 mg za den, a to intramuskulárně nebo podkožně, kontinuálně nebo v pravidelných intervalech.

Předmětem předkládaného vynálezu jsou tak také farmaceutické prostředky, které obsahují jako aktivní složku jednu z výše uvedených sloučenin popřípadě v kombinaci s další aktivní složkou. Tyto prostředky jsou upraveny tak, aby je bylo možné podávat do trávicí soustavy nebo mimo trávicí soustavu.

*

Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu pro perorální, podjazykové, podkožní, intramuskulární, intravenózní, transdermální, sliznicové, lokální nebo rektální podávání se podávají lidem nebo zvířatům jako jednotková dávka s aktivní složkou smíchanou se standardními farmaceutickými přísadami. Vhodné jednotkové formy pro podávání zahrnují perorální formy jako tablety, že.latinové kapsule, prášky, granule a perorální suspenze nebo roztoky, podjazykové a ústní formy, podkožní, intramuskulární, intravenózní, intranasální a oční formy a rektální formy.

• · ·· · · ♦ ···· • » · · · ···

Když se připravuje pevný prostředek ve formě tablet, smíchá se. hlavní aktivní složka s farmaceutickým nosičem jako je želatina, škrob, laktosa, stearan hořečnatý, mastek, arabská guma apod. Tablety lze potahovat sacharosou nebo jinými vhodnými materiály nebo alternativně je lze upravit tak, že mají dlouhodobou nebo zpožděnou aktivitu a že plynule uvolňují předem stanovené množství aktivní složky.

Želatinové kapsule se získají smícháním aktivní složky s ředidlem a nalitím získané směsi do kapsulí z měkké nebo tvrdé želatiny.

Prášky, které se dispergují ve vodě, nebo granule mohou obsahovat aktivní složku ve směsi s disperzním, suspenzním nebo zvlhčujícím činidlem jako je polyvinylpyrrolidon, a se sladidly nebo příchutěmi.

Pro rektální podávání se připravují čípky, které vyrábí z pojiv, která tají při teplotě rekta, například z kakaového másla nebo polyethylenglykolu.

Pro parenterální, intranasální nebo oční podávání se používají vodné suspenze, isotonické roztoky šalinu nebo roztoky pro sterilní injekce, které obsahují farmakologicky kompatibilní disperzní činidla a/nebo zvlhčující činidla například propylenglykol nebo butylenglykol.

Pro podávání přes sliznici múze být aktivní složka ve formě směsi s promotérem jako je žlučová sůl, hydrofilní polymer jako například hydroxypropylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, hydroxyethylcelulosa, ethylcelulosa, karboxymethylcelulosa, dextran, polyvinylpyrrolidon, pektiny, škroby, želatina, kasein, akrylové kyseliny a estery a jejich kopolymery, vinylové

polymery nebo kopolymery, vinylalkoholy, alkoxypolymery, polyethylenoxidové polymery, polyethery nebo jejich směsi.

Aktivní složka .může být i ve formě mikrokapsulí, popřípadě s jednou nebo několika přísadami nebo nosiči.'

Aktivní složka může být i ve formě komplexu s cyklodextrinem například α, β, nebo γ-cyklodextrinem, 2-hydroxypropyl^-cyklodextrin nebo methyl-β-cyklodextrinem.

Aktivní složka může být také uvolňována z balónků, které ji obsahují nebo z endovaskulárních roztahovačů zavedených do cév. Farmakologická účinnost aktivní složky není ovlivněna.

Výhodnou cestou podávání je podkožní způsob.

Následující způsoby, přípravy a schémata ilustrují syntézy různých intermediátů, které jsou vhodné pro získání polysacharidů podle předkládaného vynálezu.

Dále jsou použity následující zkratky:

TBDMS: t-butyldimethylsilylová skupina,- Lev: levulinoylová skupina; Bn: benzylová skupina; Bz: benzoylová skupina; TLC: tenkovrstvá chromatografie; Olm: trichloracetimidoylová skupina; LSIMS: kapalinová hmotnostní spektrometrie sekundárního iontu; ESIMS: elektron-sprejová ionizační hmotnostní spektrometrie; TMS: trimethylsilylová skupina; TSP: trimethylsilyltetradeuteriopropionát sodný; Tf: triflát; MS: molekulová síta; PMB: p-methoxybenzylová skupina; MP: p-methoxyfenylová skupina; TS: tosylová skupina; ET: ethylová skupina; Ph: fenylová skupina; Me: methylová skupina; Ac: acetylová skupina.

Dowex®, Sefadex®, Chelex® a Toýopearl® jsou registrované ochranné známky.

• φ φ · · φ · · · φ φ φ φφφ φ · φ · • Φ «φφφ φφφφφ φ φ φ φφ φφφφ φφφ · φφφ φφφφ

Ve způsobech, přípravách a příkladech popsaných níže se obecné postupy katalytického spojení imidátů, štěpení levulinových esterů, katalytické spojení thioglykosidů, zmýdelnění, methylace a selektivní odstranění chránící skupiny z p-methoxybenzylové skupiny, odstranění chránící skupiny a sulfatace oligo- a polysacharidů hydrogenolýzou benzylesteru nebo etherů, zmýdelnění esterů nebo sulfatace, provádí pomocí obecných postupů s příslušnými intermediáúy.

Příklady provedení vynálezu

Dále jsou pouze pro ilustraci uvedeny příklady syntézy sloučenin podle předkládaného vynálezu.

···· • · · · • φ

Schéma 1 - Syntéza pentasacharidu 9

0Μ« • φ • · φ φ φ φ φ ·

Příprava 1

Ethyl-Ο- (2,3-di -o-benzoyl-4,6-O-benzyliden-a-D-glukopyranosyl) (1-+4)-2,3,6-tri-O-benzoyl-l-thio-fi-D-glukopyranosid (2)

K roztoku 16,7 g sloučeniny 1 (35,2 mmol) (J. Westman a M. Nilsson, J. Carbohydr. Chem., 1995, 14 (7), 949-960) ve 202 ml pyridinu chlazenému na 0 ?C se po kapkách během 20 minut přidá

24,5 ml benzoylchloridu (211 mmol) . Reakční směs se 20 hodin míchá při teplotě místnosti; podle tenkovrstvé chromatografie je konverze 5 0 %. Směs se zředí vodou a dichlormethanem. Po extrakci se organická fáze promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší síranem hořečnatým a zahustí. Zbytek reaguje s benzoylchloridem postupem popsaným výše. Surový produkt se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 22 g sloučeniny 2.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,80, silikagel, 9/1 (objemový poměr) toluen/ethanol

Příprava 2

O- (2, 3-Di-O-benzoyl-4, 6-O-benzyl iden-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O— (2,3,6- tri -O-benzoyl -β-D-glukopyranosyl) - (1—+4) -1, 6-anhydro2, 3-di -O-methyl -β-D-glukopyranosa (4)

Směs 1,05 thioglykosidu 2 (1,05 mmol), 200 mg sloučeniny 3 (1,05 mmol) (Jeanloz a další, J. Org. Chem. 1961, 26, 39393944) a 1,1 g práškových molekulových sít 4A se v 18 ml toluenu míchá v atmosféře dusíku po dobu 15 minut. Směs se pak ochladí na -20 °C a přidá se čerstvě připravený roztok 1,11 mmol N-jodsukcinimidu a 1,25 mmol trifluormethansulfonové kyseliny v 6 ml směsi 1/1 (objemový poměr) dichlormethan/dioxan. Po 10 mi-

«·· · ·· · · • · · » · · · • · · · · · * • · · · · · · · • · · · · · · ·· · ·· ·· nutách se červená reakční směs zfiltruje, zředí dichlormethanem, extrahuje, důkladně promyje 10% roztokem thiosíranu sodného, 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší síranem hořečnatým a pak zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatograf icky čistí na silikagelu za získání 1,25 g sloučeniny 4>

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,55, silikagel, 4/6 (objemový poměr) heptan/ethylacetát

Příprava 3

O- (4, 6-O-Benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0- (β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -1,6-anhydro-2, 3-di-0-methyl-fi-D-glukopyranosa (5)

Do roztoku 1,24 g sloučeniny 4 (1,11 mmol) v 7 ml směsi 1/1 (objemový poměr) methanol/dioxan se přidá 50 mg t-butoxidu draselného. Směs se míchá 1 hodinu a pak se přidá dalších 50 mg t-butoxidu draselného. Směs se pak míchá dalších 60 minut a pak se neutralizuje pryskyřicí Dowex® 50WX8 H⁺, zfiltruje se a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu a získá se 665 mg sloučeniny 5 ve formě oleje.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf=0,50, silikagel, 85/15 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 4

O- (4,6-O-Benzyliden-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) O- (2,3,6-tri - O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -1, 6-anhydro2,3-di-0-methyl-β-D-glukopyranosa (6)

K chlazenému (5 °C) roztoku 660 mg sloučeniny 5 (1,1 mmol) v 8 ml suchého tetrahydrofuranu se v dusíkové atmosféře přidá • · · · fe· ···· • · · fefefefe fefe · · « · · • fefe fefe fefe · • fefe fefefefe fefe fe fefe fefe

387 mg hydridu sodného (9,65 mmol) . Pak se po kapkách přidá 0,51 ml methyljodidu (8,22 mmol) a směs se míchá 20 hodin při teplotě místnosti.· Přebytek hydridu sodného se odstraní methanolem a směs se nalije do 50 ml směsi vody a ledu. Po extrakci ethylacetátem (3x20 ml) se organická fáze promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a zahustí za získání 690 mg sloučeniny 6.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,25, silikagel, 95/5 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 5

O- (2,3 -Di -O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0-(2, 3, 6-tri-Omethyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -1,6-anhydro-2, 3-di - O-methyl β-D-glukopyranosa (7)

690 mg sloučeniny 6 (1,03 mmol) se rozpustí v 7,3 ml 80% octové kyseliny a míchá se 20 hodin při teplotě 40 °C. Směs se zahustí ve vakuu odpaří s toluenem. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu, eluce směsí 8/1/1 dichlormethan/ethylacetát/methanol, a získá se 569 mg sloučeniny 7.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,40, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 6

O- (6-O-Benzoyl-2, 3-di -O-methyl -α-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0(2, 3, 6-tri-0-methyl-fi-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -1, 6-anhydro-2, 3di-O-methyl-β-D-glukopyranosa (8)

227 mg 1 -benzyloxy-lH-benzotriazolu (1,05 mmol) a 1,15 mmol triethylaminu (1,15 mmol) se přidá k roztoku 560 mg sloučeniny

• ΦΦΦ (0,96 mmol) v dichlormethanu a směs pak míchá 20 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se pak zředí dichlormethanem a promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří do sucha. Zbytek se chromatografíčky čistí na silikagelu a získá se 600 mg sloučeniny 8.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,50, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 7

O- (2, 3-Di-O-benzoyl-4, 6-O-benzyliden-a-D-glukopyranosyl)(l->4) -0-,(2,3,6-tri-O-benzoyl -β-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (6O-benzoyl -2, 3-di -O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-94) -0- (2,3,6- . tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1—94) -1, 6-anhydro-2, 3-di-Omethyl^-D-glukopyranosa (9)

Sloučenina 8 se převede na sloučeninu 9 postupem popsaným při přípravě sloučeniny 4. Spojovací reakce se provede při tepote °C.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,50, silikagel, 2/8 (objemový poměr) heptan/ethylacetát.

9

9999

Schéma 2 - Syntéza heptasacharidu 14

• Φ ···· a · φ φ · · • · » • 9 9 ··*·

Φ · ·

Φ· ··

Příprava 8

Ο- (4, 6-O-Benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1—>4) -Ο- (β-D-glukopyranosyl) - (1—>4) -Ο- (2, 3-di-O-methyl-α-D-glukopyranosyl) (1->4) -Ο- (2,3,6-tri-0-methyl-fi-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -1,6anhydro-2, 3-di -O-methyl -β-D-glukopyranosa (10)

Sloučenina 9 se převede na sloučeninu 10 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 5.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf 0,35, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 9

O- (4, 6-O-Benzyliden-2, 3-di -O-methyl -ά-D-glukopyranosyl) - (l—>4) O- (2,3, 6-tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -0-(2,3,6-tri O-methyl -α-D-glukopyranosyl) - (l->4) -0-(2,3, 6 -tri-O-methyl-β-Dglukopyranosyl) -1,6-anhydro-2, 3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosa (11)

Sloučenina 10 se převede na sloučeninu 11 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 6.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,50, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol.

Příprava 10

O- (2, 3 -Dř-O-methyl - α-D-glukopyranosyl) - (l->4) -O- (2,3, 6-tri -0methyl-fi-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (2, 3,6-tri-O-methyl-a-Dglukopyranosyl)- (1-+4)-0-(2,3, 6-tri-O-methyl-β-D-gluko23

pyranosyl) - (l->4) -1, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl -β-D-glukopyranosa (12)

Sloučenina 11 se převede na sloučeninu 12 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 7.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,35, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 11

0- (6-0-Benzoyí-2, 3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0(2,3,6-tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0- (2,3,6-tri-Omethyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2, 3,6-tri-O-methyl-β-Dglukopyranosyl) - (1-44) -1, 6-anhydro-2, 3 - di-O-methyl-β-Dglukopyranosa (13) '

Sloučenina 12 se převede na sloučeninu 13 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 8.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf 0,40, silikagel, 7,0/1,5/1,5 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 12

O-(2,3-Di-0-benzoyl-4, 6-O-benzyliden-a-D-glukopyranosyl)(1-44) -0- (2, 3,6-tri-0-benzoyl^-D-glukopyranosyl)~ (1-44) -O- (6O-benzoyl-2, 3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2, 3, 6tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -0- (2,3,6-tri-O-methylα-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0- (2, 3,6- tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-44) -1, 6-anhydro-2, 3-di -O-methyl-β-D-glukopyranosa (14) ·· ·· • · · · ♦ · ·

A · A AAA· ···· • A A···

Kondenzační reakce sloučeniny 13 s disacharidem 2 se provede postupem popsaným při přípravě sloučeniny 9 za získání, sloučeniny 14.

1:

»»·· ·· ···· ·· ··

Schéma 3 -syntéza nonasacharidu 19

99

9 9 · 9 9 · • 9 9 9 · 9 *

9 9 9 9 99 9

9 9 99 9 99 9

999 9 99 9 99 99

9999

Příprava 13

O- (4, 6-O-Banzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (β-D-glukopyranosyl) - (1—>4) -O- (2, 3 - di -O-methyl -a-D-glukopyranosyl) - (1-44) O- (2,3, 6-tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3,6 -tri O-methyl-α-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3,6-tri -O-methyl -β-Dglukopyranosyl) - (1-44) -1, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl -β-Όglukopyranosa (15)

Sloučenina 14 se převede na sloučeninu 15 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 5.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf 0,60, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 14

O- (4, 6-O-Benzyliden-2, 3 -di-O-methyl-α-D-glukopyranosyl) - (1-44) O-(2,3,6-tri-O-methyl -β-D-glukopyranosyl)- (1-44) -[O-(2,3, 6-tri O-methyl-a—D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (2,3, 6-tri-O-methyl-β-Dglukopyranosyl) - (1-44) ]₂-l, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl-β-ΰglukopyranosa (16)

Sloučenina 15 se převede na sloučeninu 16 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 6.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,70, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 15

O- (2,3 -Di -O-methyl -α-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3,6-tri-0methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1-44) - [O- (2,3, 6-tri-O-methyl-a-D27

• 4444	•V 4444	44	44
4 ·	4 4 4	4 4 4	•
* ·	4 4·	4 4 4	4
			4
4 4	4 4 4	4 4 4	•
44 4	44 4	44	4 4

glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ]₂-l, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosa (17)

Roztok 5,05 g sloučeniny 16 (2,0 mmol) v 50 ml 80% octové kyseliny se míchá 20 hodin při teplotě 40 °C. Směs se zahustí ve vakuu a odpaří se s toluenem. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a extrahuje se vodou. Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem a organická fáze se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a odpaří do sucha za získání 2,68 g sloučeniny 17.

Příprava 16

O- (6-O-Benzoyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O(2,3,6- tri - O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) - [O- (2,3., 6-tri -0methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (2,3, 6-tri-O-methyl-β-Dglukopyranosyl) -(1—+4) /₂-l, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl-β-Dglukopyranosa (18)

Sloučenina 17 se převede na sloučeninu 18 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 8.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,80, silikagel, 7,0/1,5/1,5 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 17

O- (2,3 -Di -O-benzoyl -4, 6-O-benžyliden-a-D-glukopyranosyl) (1-+4) -O- (2, 3 , 6- tri -O-benzoyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (60-benzoyl-2, 3-di -O-methyl - α-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0- (2,3,6tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) - [O- (2,3, 6-tri-O-methyl28 • ·

a-D-glukopyranosyl) - (1—44) -O- (2,3,6-tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-44) ]₂-l, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl-β-Dglukopyranosa (19)

Směs 1,97 g thioglykosidu 2 (2,0 mmol, 3,5 ekvivalentu), 0,86 g heptásacharidu 18 (0,57 mmol) a práškových molekulových sít 4A ve 22 ml toluenu se míchá v atmosféře dusíku po dobu 15 minut. Pak se po kapkách přidá při teplotě místnosti čerstvě připravený roztok 496 mg N-jodsukcinimidu (2,2 mmol) a 0,808 mmol trifluormethansulfonové kyseliny (0,808 mmol) ve 12 ml směsi l/l (objemový poměr) dichlormethan/dioxan. Po 10 minutách se reakční směs zfiltruje, zředí dichlormethanem, extrahuje se, promyje 10% roztokem thiosíranu sodného a 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 1,09 g sloučeniny 19.

Tenkovrs.tvá chromatograf ie: Rf = 0,80, silikagel, 6/2/2 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

• · · ·

Schéma 4 - Syntéza nonasacharidu 25

Příprava 18

O- (4, 6-O-Benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (β-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (2, 3 -di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) (1-44) -O- (2,3, 6- tri -O-methyl -o-D-glukopyranosyl) - [ (1-44) -O(2,3, 6-tri-O-methyl-α-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3,6-tri-0methyl-fi-D-glukopyranosyl) ]₂- (l->4) -1,6-anhydro-2, 3-di-Omethyl -β-glukopyranosa (20)

Sloučenina 19 se převede na sloučeninu 20 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 5.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,25, silikagel, 5,0/2,5/2,5 (objemový poměr)/v toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 19

O- (4, 6-0-Benzyliden-2, 3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) O- (2, 3, 6 -tri-O-methyl^-D-glukopyranosyl) - (l—>4) - [O- (2, 3, 6-triO-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0- (2,3,6-tri-O-methyl-fi-Dglukopyranosyl) - (1-44) ]₃-l, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl-β-Dglukopyranosa (21)

Sloučenina 20 se převede na sloučeninu 21 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 6.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,50, silikagel, 6/2/2 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 20

O- (2, 3 -Di -O-methyl - α-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2, 3,6-tri-Omethyl^-D-glukopyranosyl) - (l->4) - [O- (2,3, 6-tri -O-methyl-a-D• · • · • · · · • · · · glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3, 6 -tri - O-me thy 1-β-D-glukopyráno syl) - (1-44) ]₃-l, 6-anhydro-2, 3-di-O-methyl -β-D-glukopyranosa (22)

Sloučenina 21 se převede na sloučeninu 22 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 7.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,20, silikagel, 6/2/2 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 21

0- (6-0-Benzoyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1—44) -O(2,3,6- tri -O-methyl -β—D-glukopyráno syl) - (1—44) - [0- (2,3,6-tri -0methyl-α-D-glukopyranosyi) - (1—44) -O- (2,3,6-tri -O-methyl -β— gl ukopyranosyl) - (1 —44)]₃-l, 6- anhydro-2,3 -di-0-me thyl -β-D glukopyranosa (23)

Sloučenina 22 se převede na sloučeninu 23 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 8.

Příprava 22

0-(6-0-Benzoyl-4-0-levuoyl-2, 3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0- (2, 3, 6-tri-0-methyl-fi-D-glukopyranosyl) (1—44) - [O- (2, 3, 6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O(2,3,6- tri -O-methyl -β-D - glukopyranosyl) - (1—44) ] ₃-l, 6-anhydro2, 3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosa (24) mg hydrochloridu 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (0,25 mmol), 29 mg levulové kyseliny (0,25 mmol) a 4 mg dimethylaminopyridinu (0,033 mmol) se přidá k roztoku 320 mg sloučeniny 23 (0,167 mmol) v 1 ml dioxanu. Reakční směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti v atmosféře dusíku. Pak se přidá dichlormethan a voda a po extrakci se promyje organická fáze vodou, vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 312 mg sloučeniny 24.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf 0,50, silikagel, 6/2/2 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 23

O- (6-O-Benzoyl-4-O-levuoyl -2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) (1-44) -O- (2,3, 6- tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1-44) -[O(2,3,6- tri -O-methyl - a-D - glukopyranosyl) - (1-44) - O- (2,3,6-tri -0methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-44) ] ₃-l, 6-di-O-acetyl-2, 3-di -Omethyl-a, β-D-glukopyranosa (25)

Roztok 312 mg sloučeniny 24 (0,155 mmol) se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti ve směsi 2,25 ml acetanhydridu, 50 μΐ octové kyseliny a 0,14 ml trifluoroctové kyseliny. Po přidání 10 ml toluenu se směs zahustí a odpaří s toluenem (3x10 ml). Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 324 mg sloučeniny 25.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,65, (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol silikagel, 6/2/2 • · · · • · • · · ·

Schéma 5 - Syntéza nanosacharidu 27 25

▼

Příprava 24

0- (6-0-Benzoyl-4-0-levuoyl-2,3-di -O-methyl -a-D-glukopyranosyl) (l—>4) -O- (2, 3,6-tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl) - (l—>4) - [O(2, 3,6-tri-O-methyl-a-D-gl.ukopyranosyl) - (l—>4) -O- (2, 3,6-tri-0methyl -β-D-glukopyranosyl) - (l->4) ]₃-6-O-acetyl-2, 3-di -O-methyl a, β-D-glukopyranosa (26)

Roztok 324 mg sloučeniny 25 (0,153 mmol) a 22,3 μΐ morfolinu (0,256 mmol) ve 2 ml toluenu se 4 hodiny míchá při teplotě 35 °C. Pak se přidá dalších 22,3 μΐ morfolinu a reakční směs se míchá 20 hodin při teplotě 35 °C. Směs se pak rychle ochladí vodou, extrahuje se dichlormethanem, organická .fáze se důkladně promyje 0,IN chlorovodíkovou kyselinou a vodou, vysuší a odpaří do sucha. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 280 mg sloučeniny 26.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,45, silikagel, 6/2/2 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 25

Trichloracetimidát O-(6-O-Benzoyl-4-O-levuoyl-2,3-di-O-methylα-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (2, 3, 6-tri-0-methyl-fi-Dglukopyranosyl) - (l->4) - [O- (2, 3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (2, 3,6- tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ] ₃6-0-acetyl-2, 3-di -O-methyl -a,β-D-glukopyranosy (27) μΐ trichloracetonitrilu (0,39 mmol) á 4,7 mg uhličitanu česného se přidá do roztoku 138 mg sloučeniny 26 (0,066 mmol) v

1,5 ml dichlormethanu. Směs se míchá 2 hodiny, pak se zfiltruje, zahustí a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 152 mg imidátu 27. '

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,35, silikagel, 8/1/1 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol • · · ·

Schéma 6 - Syntéza disacharidu 33

Methyl-O- (4, 6-0-isopropyliden-3-0-methyl-a-L-idopyranosyl(1-+4) -2, 6-di -O-benzyl -3 -O-methyl -a-D-glukopyranosid (29)

2,5 g sloučeniny 28 (3,53 mmol; M. Petitou a další, J. Med. Chem. 1997, 40, 1600) se nechá reagovat stejným způsobem jako při syntéze látky 5. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu (2/1 cyklohexan/ethylacetát) za získání 2,1 g látky 29 (98 %) .

• · 4 · · · · · · · · · · • · · · · · · · • 4 4 4 4 4 · · 4 4 4 4 ·

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,32, silikagel, 2/1 (objemový poměr) cyklohexan/ethylacetát

I.

Příprava 27

Me thyl-O- (4, 6-0-i sopropyl i den-2, 3-di-0-me thyl - a-L - i dopyranosyl (1-+4) -2, 6-di-0-benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosid (30)

2,0 g sloučeniny 29 (3,3 mmol) se nechá reagovat stejně jako při syntéze sloučeniny 6. Zbytek se chromatografický čistí na silikagelu (5/1 cyklohexan/ethylacetát) za získání 1,83 g sloučeniny 30 (89 %).

Tenkovrstvá chromatografie: Rf =0,38, silikagel, 5/2 (objemový poměr) cyklohexan/ethylacetát

Příprava 28

Methyl-O- (2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyl - (l->4) -2, 6-di -0benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosid (31)

K roztoku 1,76 g sloučeniny 30 (2,84 mmol) v 16 ml dichlormethanu se přidá 3,14 ml vodného 70% roztoku trifluoroctové kyseliny. Po 50 minutách se reakční směs zředí dichlormethanem a pak promyje vodou do neutrální reakce. Organická fáze se pak vysuší síranem sodným, zfiltruje a pak zahustí. Zbytek se chromatografický čisti na silikagelu za získání 1,45 g sloučeniny 31 (88 %).

[a] ²⁰D = + 10 (c = 1,0, dichlormethan) .

Příprava 29

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyluronová kyselina)(1—>4)-2, 6-di-0-benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosid (32)

4· 4444

3,3 mg 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxidu, 4 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 22 mg bromidu draselného (22 mg) a 29 mg tetrabutylamoniumchloridu se přidá k roztoku 1,16 g sloučeniny 31 v 6 ml dichlormethanu. Směs se ochladí na 0 °C a během 15 minut se přidá směs 4,4 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, 2,2 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 5 ml 1,3M roztoku chlornanu sodného. Směs se míchá 1 hodinu, pak se zředí vodou a' extrahuje se třikrát dichlormethanem. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje- a odpaří do sucha za získání 1,34 g surové sloučeniny 32.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,22, silikagel, 10/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol.

Příprava 30

Methyl -O- (benzyl-2, 3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyluronát) (l—>4) -2, 6-di-O-benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosid (33)

Sloučenina 32 se v.atmosféře dusíku rozpustí v 11 ml N,N-dimethylformamidu. Pak se přidá 0,67 g hydrogenuhličitanu draselného a 1,07 ml behzylbromidu a směs se míchá 90 minut. Pak se přidá ethylacetát a voda a po extrakci se organická fáze zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 0,99 g sloučeniny 33.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,58, silikagel, 1/4 (objemový poměr) toluen/diethylether » 4 4 4

4« 99 ·«

• ·

Schéma 7 - Syntéza tetrasacharidu 36

MeO HO

OAc COOBn MeO. OBn OM« COOBn ACO ^0Bn

Příprava 31

Methyl-0-(benzyl-4-0-levuoyl-2,3-di-0-methyl-β-D-glukopyranosyluronát- (l->4) -O·, (3, 6-di -O-acétyl-2-0-benzyl -α-D-glukopyra nosyl) - (l->4) -O- (benzyl-2, 3-di -0-methyl -a-L-idopyranosylu.ronát) - (l->4) -2, 6-di-0-benzyl-3-0-methyl-a-D-glukopyranosid (35) • · · · •0 ···· • ·

274 mg sloučeniny 34 (0,31 mmol; M. Petitou a další, J. Med. Chem., 1997, 40, 1600) a 200 mg sloučeniny 33 (0,29 mmol) v 10 ml toluenu se nechá reagovat v přítomnosti 220 mg molekulových sít při teplotě -20 °C s t-butyldimethylsilyltrifluormethansulfonátem (0,15 ml 1M roztoku v toluenu). Směs se míchá 10 minut, pak se neutralizuje hydrogenuhličitanem sodným, zfiltruje se a zahustí. Zbytek se chromatografioky čistí na silikagelu za získání 334 mg sloučeniny 35 (80 %).

[a] ²⁰d = +31 (c = 0,76, dichlormethan)

Příprava 32

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosyl-uronát)(1—>4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-α-D-glukopyranosyl)(1—>4) -O- (benzyl -2,3 -di - O-methyl-cc-L - idopyranosyluronát) (1—>4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosid (3 6)

308 mg sloučeniny 35 (0,22 mmol) se rozpustí ve 43 ml směsi toluen/ethanol (1/2) a pak se přidá 101 mg hydrazinacetátu (5 ekvivalentů) . Směs se míchá 45 minut, pak se zahustí a pak se zbytek chromatografíčky čistí na silikagelu za získání 162 mg sloučeniny 36 (89 %).

[cc]²°_d = +29 (c = 1,05, dichlormethan)

9

9 • · · 9 9 «

• · • · • · • · · · ·· ···· • · · • · · • · · • · · ·# · ·· • 9

Schéma

- Syntéza polysacharidu 38 s

o

O >

O

O X φφφφ • φ φφφφ

Příprava 33

Methyl-Ο-(6-0-benzoyl-4-0-levuoyl-2, 3-di-O-methyl-α-D-glukopyranosyl) - (1-94) -O- (2,3, 6-tri-O-methyl -β-D-glukopyranosyl) (1—94) - [O- (2, 3,6- tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-94) -O(2, 3, 6-tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1—94) ] ₃-0- (6-0-acetyl2, 3-di -O-methyl -α-D-glukopyranosyl) - (1—94) -O- (benzyl-2, 3-di-0methyl-fi-D-glukopyranosyluronát) - (1—94) -0- (3,6-di-0-acetyl-2-0benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1—94) -O- (benzyl-2, 3 - di-O-methyl-aL-idopyranosyluronát- (1—94) -2, 6-di -O-benzyl-3 -O-methyl-a-Dglukopyranosid (37)

177 mg imidátu 27 (76,6 pmol) a 201 mg akceptoru 36 (0,15 mmol)

I ' ve 2,8 ml směsi 2/1 diethylether/dichlormethan se nechá reagovat s 11,5 μΐ 1M roztoku t-butyldimethylsilyltrifluormethansulfonátu v dichlormethanu jako při syntéze sloučeniny 35. Sloučenina se čistí na chromatografické koloně Sephadex® LH-20 ve směsi 1/1.dichlormethan/ethanol a pak na koloně silikagelu ve směsi 3/0,5/1 toluen/aceton/ethanol a nakonec na koloně silikagelu ve směsi 3/2 diisopropylether/ethanol za získání 116 mg derivátu 37 (44 %) .

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,31, silikagel, 3/0,5/0,4 (objemový poměr) diisopropylether/aceton/ethanol.

Příprava 34

Methyl -0-(6-O-benzoyl-2,3-di-o-methyl-α-D-glukopyranosyl)(1—94) -O- (2, 3, 6-tri -O-methyl-fi-D-glukopyranosyl) - (1—94) - [0(2,3, 6- tri -O-methyl -α-D-glukopyranosyl) - (1—94) -O- (2,3,6-tri-Omethyl -β-D-glukopyranosyl) - (1—94) ] ₃-O- (6-O-acetyl-2, 3 -di-O-

	• ···· ·· ··♦* ·» ·· ·· · 1 · · .· »··» • · · · · · · · ·
42	• · ··· · · · · ··· · ·· · ·· ··

methyl-a-D-gluko-pyranosyl) - (1-+4) -O- (benzyl-2,3-di-O-methyl-/3D-glukopyranosyluronát) - (l—>4) -O- (3, 6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-aD-glukopy ráno syl) - (l->4) -O- (benzyl-2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyluronát- (1—^4) -2, 6-di -O-benzyl -3-O-methyl - a-D-glukopyranosid (38)

110 mg sloučeniny 37 (0,032 mmol) se převede na 95 mg sloučeniny 38 (89 %) postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 36.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,32, silikagel, l/l (objemový poměr) toluen/aceton

9« 99«· »99 9

9« 99 • 9 9··

9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 ·

Schéma 9

- Syntéza trisacharidu 43

η «* ···· • · · ♦ ♦ · <··· ·

• · * · • ·* · • · · • · · • · * · • »· ·· ··

Příprava 35

O-(2,3,4,6-Tetra-0-acetyl-a-D-glukopyranosyl)- (1-+4) -O-(2,3, 6tri-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl)- (1-+4) -1,2, 3, 6-tetra-O-acetylβ-D-glukopyranosa (40) g komerčně dostupné maltotriosy (13,9 mmol) se po částech přidá k suspenzi '7 g octanu sodného (85 mmol) v 70 ml acetanhydridu při teplotě 155 °C. Po 15 minutách se roztok ochladí a nalije do 700 ml směsi vody a ledu. Po extrakci ethylacetátem se organická fáze promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a zahustí za získání 13,1 g sloučeniny 40.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,53, silikagel, 7/3 (objemový poměr) dichlormethan/ethylacetát

Příprava 36

Ethyl-O- (2,3,4, 6-tetra-O-acetyl -α-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -0(2, 3, 6-tri-O-acetyl-α-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -2, 3, 6-tri-Oacetyl-l-thio-fi-D-glukopyranosid (41) g sloučeniny 40 (13,5 mmol) se rozpustí v 80 ml toluenu. Pak se v dusíkové atmosféře přidá 1,97 ml ethanthiol (26,9 mmol) a 13,7 ml 1M roztoku diethyletherátu. fluoridu boritého v toluenu. Směs se míchá 60 hodin, pak se zředí vodou a dichlormethanem a extrahuje se. Organická fáze se promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a. vodou, vysuší, zfiltruje a zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 8,6 g sloučeniny 41.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,60, silikagel, 7/3 (objemový poměr) dichlormethan/ethylacetát • ·

Příprava 37

Ethyl-O- (a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (a-D-gluko-pyranosyl) (1-+4) -l-thio-fi-D-glukopyranosid (42)

Sloučenina 41 se převede na sloučeninu 42 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 5.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,80, silikagel, 13/7/1,6/4 (objemový poměr) ethylacetát/pyridin/octová kyselina/voda

Příprava 38

Ethyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-glukopyranosyl)- (1-+4) -0(2,3,6- tri-O-benzoyl -α-D-glukopyranosyl) - (1-+4)-2,3,6- tri -0benzoyl-1 -thio-fi-D-glukopyranosid (43)

Sloučenina 42 se převede na sloučeninu 43 postupem popsaným pro přípravu sloučeniny 2.

• ·' · · · • · ♦ »« ·

Příprava 39 ·

Methyl -O- (2,3, 4, 6-tetra-O-benzoyl -a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0(2,3, 6-tri -O-benzoyl - a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0-(2,3,6- tri - 0benzoyl-β-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (6-O-benzoyl-2, 3-di-Οπή? thyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0-(2,3, 6 -tri-O-methyl -β-Dglukopyranosyl) - (1—44) - (O- (2, 3, 6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3, 6- tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) (1—44) ] ₃-0- (6-0-acetyl-2, 3 -di -O-methyl - α-D-glukopyranosyl) (1-44) -O- (benzyl-2,3 -di-O-methyl-fi-D-glukopyranosyluronát) (1—44) -O- (3, 6-di -0-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranosyl- (1—44) O- (benzyl-2, 3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronát) - (1-44) -2,6di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glukopyranosid (44)

170 mg thioglykosidu 43 (106,7 μιηοΐ) a 90 mg akceptoru 38 (27 μιηοΐ) se spojí postupem popsaným pro sloučeninu 4. Produkt se nejdříve čistí chromatografií na Sephadex® LH 20 (eluce směsí 1/1 dichlormethan/ethanol), a pak chromatografií na koloně silikagelu (eluce směsí 12/10 (objemový. poměr) cyklohexan/aceton) za získání 89,5 mg '(68 %) sloučeniny 44.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,43, silikagel, (12/10 (objemový poměr) cyklohexan/aceton)

Příprava 40

Methyl-O- (2, 3, 4, 6 - tetra-O-benzoyl - α-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0(2, 3, 6-tri-O-benzoyl-a-D-glukopyranosyl) - (1—44) -O- (2, 3, 6-tri-0benzoyl-β-D-glukopyranosyl) - (1—44) -O- (6-0-benzoyl-2, 3-di-Omethyl-a-D-gluko-pyranosyl- (1-44) -O- (2, 3, 6-tri-O-methyl-β-Dglukopyranosyl) - (1—44) - [0- (2, 3, 6-tri-O-methyl-a-D-gluko···· · · ···· · ·

C · · · ' * 99 · ,· · » · · · · * pyranosyl- (1-+4) -O- (2,3,6 -tri-O-methyl-^-D-gluko-pyranosyl) (1 —+4) ]₃-0-(6-0-ace tyl-2,3-di-O-me thyl - α-D-gl ukopyranosyl (1-+4) -O- (2,3-di-O-methyl^-D-glukopyranosyluronová kyselina) (1-+4) -O- (3,6-di-O-acetyl-α-D-glukopyranosyl- (1-+4) -O- (2, 3-diO-methyl-α-L-idopyranosyluronová kyselina) - (1-+4) -3-O-methyl-a— D-glukopyranosid (45)

Roztok 80 mg sloučeniny 44 (0,0163 mmol) v 3 ml octové kyseliny se nechá reagovat v přítomnosti 160 g 10% paladia na uhlí s vodíkem při tlaku (10 Pa resp. 10 bar). Po filtraci se roztok zahustí a poskytne sloučeninu 45, která se použije v následujícím kroku bez dalšího čištění.

Příprava 41

Methyl-0- (a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (α-D-gluko-pyranosyl) (1-+4) -O- (β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0- (2, 3-di-O-methyl-a-Dglukopyranosyl) - (1-+4) -0- (2,3,6-tri-0-methyl-fi-D-glukopyranosyl) - (1-+4) - [O- (2, 3, 6-tri-O-methyl-α-D-glukopyranosyl) - (1-+4) O- (2, 3, 6 - tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ] ₃-O- (2, 3-di-Omethyl -a-D-glukopyranosyl) - (1—+4) -O- (2,3 -di -O-methyl -β-Dglukopyranosyluronová kyselina) - (1—+4) -0- (α-D-gluko-pyranosyl) (1-+4) -O- (2, 3-di -O-methyl - α-L-idopyranosyluronová kyselina) (1-+4) -3 -O-methyl-a-D-glukopyranosid (46)

K 72 mg sloučeniny 45 (0,016 mmol) se přidá směs 2,8 ml methanolu (2,8 ml) a 069 ml ,5N.. roztoku hydroxidu sodného. K roztoku esteru v methanolu (150 ml/mmol) se přidá vodný 5M roztok hydroxidu sodného v takovém množství, aby byla výsledná koncentrace hydroxidu sodného na konci přidání 0,5 M. Po 2,5 hodině se přidá voda a směs se prolije přes kolonu Sephadex® G-25 (1,6 • · · · · · · ···· ·· ··

9 9 9 4 9 9 4 9 ·

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 4 9 9 9 4 9 9 9

9 4 9 9 9 9 9 9

9 4 9 9 · · 9 4 4 x 115 cm), eluce vodou. Vymytý roztok se zahustí a prolije přes kolonu Dowex® 50H⁺ (2 ml) a lyofilizuje se. V tomto stadiu se pomocí NMR potvrdí, že byly odstraněny všechny chránící skupiny. V případě potřeby se produkt znovu podrobí hydrogenaci a/nebo hydrolýze. Tím se získá 34 mg sloučeniny 46 (68 % ve dvou krocích)..

AAAA

A A A A • AAAA

A A i» A

A A A A A

A A A A

Schéma 11 - Příprava disacharidu 54

• φφφφ φφ φφφφ φφ ·· • · · · φ · · φ · · • · · · · φφφφ • · φφφ* · φ · φ · φ φ φφφ φφφφ φφφφ φφφ φφ φφ

Příprava 42

Methyl-0-4,6-Ο-benzyliden-2-Ο-benzyl-a-D-glukopyranosid (43) g komerčně dostupné sloučeniny 47 se rozpustí v 858 ml N,N-dimethylformamidu a 50,5 ml benzylbromidu. Roztok se ochladí na teplotu 10 °C a po kapkách se za míchání přidá 20% vodný roztok hydroxidu sodného. Po 1 hodině se reakční teplota zvýší na 20 °C. a směs se míchá dalších 20 hodin. Roztok se pak nalije do směsi vody, ledu a toluenu a extrahuje se. Organická, fáze se zahustí a surový produkt se čistí krystalizaci za získání 30,0 g sloučeniny 48 popsané J.M. Kůsterem a dalšími v článku Justus Liebigs Ann. Chem. 1975, 2179-2189.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,60, silikagel, 7/3 (objemový poměr) toluen/ethylacetát

Příprava 43

Methyl-0-4,6-0-benzyliden-2-0-benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosid (49)

26,4 g sloučeniny 48 se rozpustí ve 211 ml N, N-dimethylformamidu a ochladí se na 5 °C. Pak se v atmosféře dusíku přidá.

3,2 g hydridu sodného a pak po kapkách 11,3 g jodmethanu. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti, pak se zředí ethylacetátem, promyje se dvakrát vodou a zahustí, za získání 28 g surové sloučeniny 49 popsané v práci M. Petitou a další v J. Med. Chem. 1997, 40, 1600-1607.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,70, silikagel (7/3 (objemový poměr) toluen/ethylacetát) • ·· ·

9 ····

Příprava 44

Methyl-0-2-O-benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosid (50) g sloučeniny 49 se rozpustí v 468 ml methanolu a pak se přidá 1,35 g β-toluensulf onové kyseliny a směs se míchá 20 hodin při teplotě 20 °C. Směs se zředí toluenem a zahustí. Zbytek se chromatografický čistí na silikagelu a získá se 21 g sloučeniny 50.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,07, silikagel (6/4 (objemový poměr) toluen/ethylacetát)

Příprava 45

Methyl O-2-O-benzyl-3, 6-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (51)

11,8 g sloučeniny 50 se rozpustí v dusíkové atmosféře ve 160 ml dichlormethanu. Pak se při teplotě místnosti přidá 7,0 g trimethyloxoniumtetrafluorborátu a 10,6 g 2,6-di-t-butyl-4-methylpyridinu. Po 2 hodinách se směs nalije do směsi vody a ledu a extrahuje se dichlormethanem. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a zahustí. Zbytek se chromatografický čistí na silikagelu za získání 10,1 g sloučeniny 51.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,25, silikagel (7/3 (objemový poměr) toluen/ethylacetát).

Příprava 46

Ethyl-2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-methyl-1 -thio-a-L-idopyranosa (52)

48,4 g 1,2,4,6-tetra-0-acetyl-3-0-methyl-a-L-idopyranosy (připravené podle postupu pro její perbenzoylovaný analog náhradou

• · ·· ·	9 ·	9 9 9 9	• ·	99
9· 9	9	9 9	9	9	9	9
9 9	9	9 9	9	9	9	9
						9
9 9	•	9 9	9	9	9	9
• 99 ·	9 9	•	· 9		• 9

benzoylchloridu acetanhydridem; Jaura a další, Bio. Med. Chem. Lett, 1992, 2, 897-900) se rozpustí v 175 ml toluenu. Pak se v atmosféře dusíku přidá 20 ml ethanthiolu a 134 ml etherátu fluoridu boritého (1M roztok v toluenu). Směs se míchá 1 hodinu, pak se přidá 400 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se míchá 1 hodinu. Pak se nalije do ethylacetátu a organická.fáze se promyje dvakrát vodou a zahustí. Zbytek se chromatografíčky čistí na silikagelu za získání 29,6 g sloučeniny 52.

Tenkovrstvá.chromatografie: Rf =0,45, silikagel (6/4 (objemový poměr) toluen/ethylacetát).

Příprava 47

Methyl-O- (2, 4,6-tri-0-acetyl-3-0-methyl-a-L-idopyranosyl) (1-+4) -2-0-benzyl -3,6-di -O-methyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (53) .

10,1 g sloučeniny 51 a 16,0 g sloučeniny 52 se rozpustí ve 304 ml toluenu v atmosféře dusíku. Po přidání práškových molekulových sít (4A) se reakční směs ochladí na teplotu -20 °C a po kapkách se v atmosféře dusíku přidá čerstvě připravený 0,1M roztok 10,1 g N-jodsukcinimidu a 0,80 ml trifluormethansulfonové kyseliny ve směsi l/l (objemový poměr) dioxan/dichlormethan. Po 10 minutách se reakční směs zfiltruje a promyje důkladně vodným thiosíranem sodným a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se zahustí a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 21,1. g sloučeniny 53.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,30, silikagel (6/4 (objemový poměr) toluen/ethylacetát).

• AAAA AA AAAA ·· AA * · A · · · AAAA

A A AAA AAAA

AA AAA AAAA

AAAA AA A AA AA

Příprava 48

Methyl-O- (3-0-methyl-a-L-idopyranosyl) - (1—>4) -2-O-benzyl-3,6di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (54)

21,1 g sloučeniny 53 se rozpustí v 295 ml směsi methano1/dioxan (1/1;. objemový poměr) a přidá se t-butoxid draselný. Po 30 minutách se směs neutralizuje pryskyřicí Dowex® 50WX8 v H⁺formě a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatograf icky čistí na silikagelu za získání 12,7 g sloučeniny 54.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,08, silikagel (3/7 (objemový poměr) toluen/ethylacetát) · ···· ·· ···· ·· ·· • · * 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 • · · · · 9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 9 99 99

Schéma 12 - Příprava tetrasacharidu 62

Γ 6l :R«Lev k*-62:R«H • ···· ·· ···* ·· ·· • · · · · · 9 9 9· • · 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9-9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 9 99 99

Příprava 49

Me thyl -O-(4,6-0-i sopr opyl i den-3-O-me thyl - a-L - i dopyranosyl) (1-+4) -2-O-benzyl-3, 6-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (55)

12,7 g sloučeniny 54 se v dusíkové atmosféře rozpustí v 67 ml tetrahydrofuranu. Pak se přidá 19 ml 2,2-dimethoxypropanu a β-toluensulfonová kyselina a směs se míchá 16 hodin při teplotě místnosti. Směs se pak zředí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se ethylacetátem, organická fáze se odpařením zbaví rozpouštědla a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získáni 10,4 g sloučeniny 55.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,35, silikagel (1/1 (objemový poměr) toluen/ethylacetát).

Příprava 50

Methyl-O-(4,6-0-isopropyliden-2, 3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyl) - (1-+4) -2-O-benzyl-3,6-di -O-methyl -a-D-glukopyranosid (56)

10,4 g sloučeniny 55 se rozpustí ve 140 ml tetrahydrofuranu a ochladí se na 10 °C. Pak se v atmosféře dusíku přidá 1,3 8 g hydridu sodného (60% disperze v oleji) a 1,84 ml jodmethanu. Po 4 hodinách se přebytek hydridu sodného rozloží methanolem a směs se extrahuje dichlormethanem a zahustí. Zbytek se chromatograf icky čistí na silikagelu za získání 11,1 g sloučeniny 56.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,55, silikagel (95/5 (objemový poměr) toluen/ethylacetát).

• · + ·· 94 4444 ·· ··

4 · · 4 4 4 44 4 • 4 944 9449

4 4499 4444 9

994 4 444

4444 44 4 44 «4

Příprava 51

Methyl-Ο- (2, 3-di -O-methyl-a-L-idopyra.nosyl) - (1-+4) -2-0-benzyl3,6-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (57)

11,1 g sloučeniny 56 se rozpustí ve směsi.7/3 (objemový poměr) octová kyselina/voda a směs se míchá přes noc. Pak se dvakrát odpaří s toluenem a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 9,2 g sloučeniny 57.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,09, silikagel (1/1; objemový poměr) toluen/ethylacetát).

Příprava 52

Methyl-O-(2, 3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyluronoyá kyselina)(1-+4) -2-0-benzyl-3,6-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (58)

K roztoku 4,7 g sloučeniny 57 ve 28 ml dichlormethanu se přidá 13 mg 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxidu, 16 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného,. 88 mg bromidu draselného a 117 mg tetrabutylamoniumchloridu. Směs se ochladí na 0 °C a během 15 minut se přidá směs 17,8 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, 8,8 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 20 ml 1,3M roztoku chlornanu sodného. Směs se míchá 1 hodinu, pak se. zředí ethylacetátem, promyje se nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří do sucha za získání 3,5 g surové sloučeniny 58.

Tenkovrstvá chromatografié: Rf = 0,14, silikagel·, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol φφφφ φφ φφφφ

ΦΦ φφ φφ φ φ φ < φ φ φ φ • φ · · · φ φ · · • φ φφ φ · φ φ φ ·· · φ φ φφφ φφφφ •ΦΦΦ φφ φ φφ φφ

Příprava 53

Methyl-O- (benzyl-2,3-di-0-methyl-a-L-idopyranosyluronát) (l->4) -2-0-benzyl-3,6-di-O-methyl-a-D-glukopyrano.sid (59)

3,5 g sloučeniny 58 se v atmosféře dusíku rozpustí ve 29 ml Ν,Ν-dimethylformamidu. Pak se přidá 1,76 g hydrogenuhličitanu draselného a 2,85 ml benzylbromidu a směs se míchá 4 hodiny. Pak se přidá ethylacetát a voda a po extrakci se organická fáze zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 3,4 g sloučeniny 59.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,43, silikagel, 4/6 (objemový poměr) toluen/ethylacetát

Příprava 54

Methyl-O- (benzyl-4-O-levuoyl-2, 3-di -O^methyl -β-D-glukopyranosyluronát) - (l—>4) -O- (3 -O-acetyl -2-O-benzyl -5-0-methyl -a-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (benzyl-2, 3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronát) - (l—>4) -2 -O-benzyl-3,6-di-o-methyl-a-D-glukopyranosid (61)

Směs 0,53 g sloučeniny. 59 a 1,0 g sloučeniny 60 se odpaří v přítomnosti toluenu a v atmosféře dusíku rozpustí v 16,2 ml dichlormethanu. Po přidání práškových molekulových sít se směs ochladí na teplotu -20 °C. Pak se míchá 15 minut a pak se přidá 15 molárních % (vzhledem ke sloučenině 60) trimethylsilyltrifluormethansulfonátu. Po 15 minutách se přidá vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Po odfiltrování molekulových sít se filtrát zředí dichlormethanem, promyje vodou, zahustí a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 0,75 g sloučeniny 61.

·· ·* « · · · · β · ·

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 · • 9 9 9 9 9 9 9

9 ♦· 9 99 99 ···· •4 ··<·

Rf 0,45, silikagel (3/7 (objemový'poměr) toluen/ethylacetát).

Příprava 55

Methyl-O- (benzyl-2, 3-di -O-methyl -β-D-glukopyranosyluronát) (1-+4) -O- (3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-O-methyl-α-D-glukopyranosyl) (1-+4) -0- (benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronát) (1-+4) -2-O-benzyl-3, 6-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (62)

0,74 g sloučeniny 61 se rozpustí v 3,0 ml pyridinu a při teplotě místnosti se přidá směs 4,1 ml octově kyseliny a 0,47 ml hydrátu hydrazinu ve 3,0 ml pyridinu. Směs se míchá 9 hodin a pak se přidá dichlormethan a voda. Organická fáze se oddělí a důkladně promyje l,0N roztokem kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, pak se zahustí a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za. získání 0,66 g sloučeniny 62.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,25, silikagel (98/2 (objemový poměr) dichlorme-than/methanol) .

Níže uvedený tetrasacharid 68 se připraví stejným postupem podle reakčního schématu 13 níže, vychází se z disacharidu 55.

• · · 9 · 9 ··· • · • 9

9 9 • 9- ·

»* « > » 9

9 9 9 • 9 9 9 ·· ·

9« ··

Schéma 13 - Příprava tetrasacharidu 68

• · · ·

9

Schéma 14

Příprava disacharidu 75

• · · · • ·

Příprava 56

Methyl-2 -O-benzyl -4,6-di -O-benzyliden-3 -Ο-β-methoxy-benzyl-a-Dglukopyranosid (69)

26,4 g sloučeniny 48 se rozpustí ve 211 ml N,N-dimethylformamidu a ochladí na a ochladí na teplotu 5 °C. Pak se v atmosféře dusíku přidá 2,5 g hydridu sodného a pak po kapkách 13,3 g 4methoxybenzylchloridu. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti, pak se zředí ethylacetátem, dvakrát promyje vodou a zahustí za získání 40,7 g sloučeniny 69.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,80, silikagel, 7/3 (objemový poměr) toluen/ethylacetát

Příprava 57

Methyl -2-O-benzyl -3 -Ο-β-methoxybenzyl-a-D-glukopyranosid (70)

34,9 g sloučeniny 69 se rozpustí v 60% vodné octové kyselině a míchá se 4 hodiny při teplotě 60 °C. Směs se zředí toluenem a zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 26,4 g sloučeniny 70.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf 0,07, silikagel, 7/3 (objemový poměr) toluen/ethylacetát

Příprava 58

Methyl-2 -O-benzyl -3 - Ο-β-methoxybenzyl -6-O-methyl -a-D-glukopyranosid (71)

26,4 g sloučeniny 70 se v atmosféře dusíku rozpustí v 263 ml dichlormethanu. Pak se při teplotě místnosti přidá 11,6 g trimethyloxoniumtetrafluorborátu a 17,4 g 2,6-di-t-butyl-4-methyl63 • ·

pyridinu. Po 4 hodinách se směs nalije do směsi vody a ledu a extrahuje se dichlormethanem. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 18,5 g sloučeniny 71.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,25, silikagel, 7/3 (objemový poměr) toluen/ethylacetát

Příprava 59

Methyl-O- (2, 4, 6-tri-0-acetyl-3-0-methyl-a-L-idopyranosyl) (1—44) -2-O-benzyl-3 - 0 -/3-methoxybenzyl -6 -O-methyl-a-D-glukopyranosid (72)

17,5 g sloučeniny 71 a 28,2 g sloučeniny 52 (28,2 g) se v atmosféře dusíku rozpustí v 525 ml toluenu. Po přidání molekulových sít 4A se reakční směs ochladí na teplotu -20 °C. Pak se za plynulého zavádění dusíku po kapkách přidá čerstvě připravený 0,1M roztok 17,4 g N-jodsukcinimidu a 1,38 g trifluormethansulfonové kyseliny ve směsi l/l (objemový poměr) dioxan/dichlormethan. Po 10 minutách se červená reakční směs zfiltruje a důkladně promyje vodným thiosíraném sodným a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se zahustí ve vakuu a získá se 30,0 g sloučeniny 72.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,45, silikagel, 8/2 (objemový poměr) dichlormethan/ethylacetát

Příprava 60

Methyl-O- (3-0-methyl-a-L-idopyranosyl) - (1-44) -2-O-benzyl-3-O-P~ methoxybenzyl -6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (73)

9 9 9 • 9 • « 9 9 99 99 99 9

9 9 9 9 9 99 9

9999 99 · 99 99

30,0 g sloučeniny 72 se rozpustí ve 460 ml směsi 1/1 (objemový poměr) methanol/dioxan a přidá se t-butoxid draselný. Po 15 minutách se směs neutralizuje pryskyřicí Dowex® 50WX8H* a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 17,4 g sloučeniny 73.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,25, silikagél 95/5 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 61

Me thyl -O-(4,6-O-i sopropyl i den -3-0-me thyl - a-L - i dopyranosyl) (1 -44 )-2-0-benzyl -3-O-β-methoxybenzyl -6-0-me thyl -a-D-gluko pyranosid (74)

17,4 g sloučeniny 73 (17,4 g) se atmosféře dusíku rozpustí v ml N,N-dimethylformamidu. Pak se přidá 26 ml 2,2-dimethoxypropanu a β-toluensulfonová kyselina a směs se pak míchá 30 minut. Směs se zředí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak extrahuje ethylacetátem. Po odpaření rozpouštědla se získá 19,7 g sloučeniny 74.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,45, silikagel, 95/5 (objemový poměr) dichlormethan/methanol

Příprava 62

Me thyl-O-(4,6-O-isopropyli den-2,3-di-O-methyl-a-L- idopyranosyl) - (1-44) -2-0-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (75)

18,5 g sloučeniny 74 se rozpustí ve 24,4 ml N,N-dimethylformamidu a ochladí se na teplotu 0 °C. Pak se v atmosféře dusíku přidá 1,47 g hydridu sodného (60% disperze v oleji) a 2,36 ml jodmethanu. Po 1 hodině se přebytek hydridu sodného rozloží • · · · • · • · • ·

methanolem a směs se extrahuje dichlormethanem a zahustí získání 20,0 g sloučeniny 75.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,85, silikagel, 95/5 mový poměr) dichlormethan/methanol.

se za (obj e··· ·

Schéma 15

Syntéza disacharidu 60

M*O UvO

M«O OM«

kUO ^OM«

O»*· / WH

COOBn O _Ac0>^ \_Bn φ · · · · · • · φ · • · 9 9 * · 9 9 9· • Ο · · * 9 9 9 · « 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 · ·· · ·

Příprava 63

Methyl-O-(4,6-Ο-isopropyliden-2,3-di-O-methyl-a-Lidopyranosyl) - (1->4) -2-0-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (76)

18.4 g sloučeniny 75 se rozpustí v 838 ml dichlormethanu a 168 ml vody. Pak se přidá 7,1 g. 2,3-dichlor-5,6-dikyano1,4-benzochinonu a směs se míchá 18 hodin při teplotě 4 °C. Pak se nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se a extrahuje se dichlormethanem. Zahuštění.organické fáze poskytne 12,7 g sloučeniny 76.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,40, silikagel, 95/5 (objemový poměr) dichlormethan/methanol.

Příprava 64

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-2, 3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyl) - (1-+4) -2, 3-di -O-benzyl -6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (77)

10.5 g sloučeniny 76 se rozpustí ve 178 ml suchého N,N-dimethylformamidu a pak se v atmosféře dusíku ochladí na 0 °C.

Pak se přidá 1,91 g hydridu sodného (60% disperze v oleji) a pak po kapkách 3,3 ml benzylbromidu. Po 3 0 minutách se reakce ukončí a přebytek hydridu sodného, se rozloží methanolem. Přidá se voda a směs se extrahuje dvakrát ethylacetátem. Odpaření rozpouštědla poskytne 13,6 g sloučeniny 77.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,50, silikagel, l/l (objemový poměr) toluen/ethylacetát.

• 4

4·· 4 4 « 4 4 · 4 44

4 4 4 * · · ·

44 4 4 4 4 ·

4 4 4 4 44 44 4 • 4 44 4 44 «

444 4444

Příprava 65

Methyl-O- (2,3-di -o-methyl - a-L-idopyranosyl) - (1-44) -2, 3-di -Obenzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (78)

Sloučenina 77 se rozpustí ve směsi 77/33 (objemový poměr) octová kyselina/voda a míchá se přes noc. Směs se dvakrát odpaří s toluenem a zbytek se chromatograficky čisti na silikagelu za získání 11,5 g sloučeniny 78.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,09, silikagel, l/l (objemový poměr) toluen/ethylacetát. Rf = 0,68, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol.

Příprava 66

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranosyluronová kyselina)(1—44) -2, 3-di-0-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (79) mg 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidyloxidu, 40 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (40 ml), 218 mg bromidu draselného a 289 mg tetrabutylamoniumchloridu (289 mg) se přidá k roztoku .11,6 g sloučeniny 78 v 60 ml dichlormethanu. Směs se ochladí na teplotu 0 °C a během 15 minut se přidá 44 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, 21,8 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a . 50 ml chlornanu sodného (1,3M roztok). Směs se míchá 1 hodinu, pak se zředí vodou a extrahuje (třikrát) dichlormethanem. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje se a odpaří do sucha za získání 13,4 g surové sloučeniny 79.

Tenkovrstvá chromatograf ie.: Rf = 0,14, silikagel, 9/1 (objemový poměr) dichlormethan/methanol.

• 9 · · • · • · 9 ·

9

Příprava 67

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-a-D-idopyranosyluronát)(1—44) -2, 3-di -O-benzyl-6-O-methyl -a-D-glukopyranosid (30)

Sloučenina 79 se v dusíkové atmosféře rozpustí ve 110 ml N,N-dimethylformamidu. Pak. se přidá 6,7 g hydrogenuhličitanu draselného a 10,7 ml benzylhromidu a směs se míchá 90 minut. Pak se přidá ethylacetát a voda a po extrakci se organická . fáze zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 9,9 g sloučeniny 80.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,43, silikagel, 4/6 (objemový poměr) toluen/ethylacetát.

Příprava 68

Methyl-O- (benzyl-2,3-di -O-methyl -β-D-glukopyranosyluronát) (1—44) -2, 3-di -O-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyřanosid (81)

9,9 g sloučeniny 80 se rozpustí v 300 ml methanolu a v atmosféře dusíku se zahřívá k varu. Pak se po kapkách přidá 65,2 ml 1M roztoku methoxidu sodného v methanolu a směs se míchá a zahřívá k varu další 3 hodiny. Pak se ochladí na teplotu místnosti, přidá se 22,2 ml IN roztoku hydroxidu sodného a směs se míchá dalších 90 minut. Po neutralizaci pryskyřicí Dowex® 50WX8H* a filtraci se směs zahustí. Čistý produkt se 'rozpustí ve 192 ml N,N-dimethylformamidu a v atmosféře dusíku se přidají molekulová síta. Pak se přidá 3,2 g hydrogenuhličitanu draselného a 4,8 ml benzylhromidu a směs se míchá 5 hodin. Po přidání ethylacetátu a vody a extrakci se oddělí fáze a organická se zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 6,19 g sloučeniny 81 a 1,88 g výchozí sloučeniny 80.

·· ··4· • 4

444 4 • 4 4 4 4 4 4

4 4 4 4 4

4444 44

4 4 4 4 4 ···· ·’ ‘

Tenkovrstvá chromatografie: Rf ,= 0,55, silikagel, 4/6 (objemový poměr) toluen/ethylacetát.

Příprava 69

Methyl-O- (benzyl-4-0-levuoyl-2, 3-di -O-methyl -β-D-glukopyranosyluronát) -(1-+4) -2, 3-di -O-benzyl -6-O-methyl -a-D-glukopyranosid (82)

6,2 g sloučeniny 81 se rozpustí ve 40 ml dioxanu. Pak se přidá

2.1 g levulové kyseliny, 3,75 g dicyklohexylkarbodiimidu a 0,2 g 4-dimethylaminopyridinu a směs se míchá 2 hodiny v atmosféře dusíku, pak se přidá 95 ml diethyletheru a odfiltruje se vzniklá sraženina. Filtrát se promyje vodným hydrogensíraném draselným, vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a zahustí. Krystaližace ze směsi ether/heptan poskytne 6,2 g sloučeniny

82.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf =0,26, silikagel, 95/5 (objemový poměr) dichlormethan/aceton.

Příprava 70

O— (Benzyl-4-0-levuoyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosyluronát) - (1-+4)-1, 3-di-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-a,β-Dglukopyranosa (83)

6.1 g sloučeniny 82 se v atmosféře dusíku rozpustí ve 256 ml acetanhydridu a ochladí na teplotu -20 °C. Pak se během 30 minut po' kapkách přidá směs 4,9 ml kyseliny sírové ve 49 ml acetanhydridu. Po- 60 minutách se přidá octan sodný v takovém množství, aby pH směsi bylo neutrální. Pak se přidají ethylacetát a voda a organická fáze se zahustí. Zbytek se chro• 9··· ·» 9999

99

9 99 9 99··

9 999 999·

9 9 999 9999 9

999 9999

999 9 99 9 99 ·· matograficky čistí na silikagelu za získání 4,2 g sloučeniny

83.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,24, silikagel, 8/2 (objemový poměr) dichlormethan/ethylacetát

Příprava 71

O - (Benzyl -4-0-1 evuoyl-2, 3-di-0-me thyl -β-D-gl ukopyranosyl uronát) - (1—/4) -3 -O-acetyl -2-0-benzyl -.6-O-methyl-a, β-D-glukopyranosa (84)

4,2 g sloučeniny 83 se rozpustí ve 42 ml tetrahydrofuranu a přidá se 4,1 ml piperidinu. Směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Pak se přidá ethylacetát a směs se promyje 0,5N chlorovodíkovou kyselinou. Organická fáze se zahustí a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 3,2 g sloučeniny 84.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,33, silikagel, l/l (objemový poměr) dichlormethan/ethylacetát.

Příprava 72

Trichloracetimidát O-(benzyl-4-O-levuoyl-2,3-di-O-methyl-a-Dglukopyranosyluronát) - (1-44) -3 -O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methylβ-D-glukopyranosy (60)

1,59 g sloučeniny 84 se v atmosféře dusíku rozpustí v suchém dichlormethanu. Přidá se 1,1 ml trichloracetonitrilu a 72 mg uhličitanu česného a směs se míchá 1 hodinu. Uhličitan česný se odfiltruje a filtrát se zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 1,57 g sloučeniny 60.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,60, silikagel, 3/7 (objemový poměr) toluen/ethylacetát.

··· 9

9· «909 ·· 99

Schéma 16 - Syntéza tetrasacharidu 86 + 80

Příprava 73

Methyl-O-(benzyl-4-0-levuoyl-2,3-di-O-methyl- β—D-glukopyranosyluronát) - (l—>4) -O- (3 -O-acetyl-2-0-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (benzyl-2,3 -di -O-methyl -α-L-idopyranosyl uronát) - (l—>4) -2, 3 -di -0-benzyl-6-O-methyl -a-D-glukopyranosid (85)

Směs 300 mg sloučeniny 80 a 455,6 mg sloučeniny 60 se odpaří s toluenem a v atmosféře dusíku se rozpustí v 6 ml dichlormethanu. Po přidání molekulových sít 4A se směs ochladí na fefe · fefe · fe··· • · ··· ···· fefe fefefe fefefefe fefefe · fefe fe fefe ·· teplotu -20 °C a míchá se 20 minut. Pak se přidá 15 % molárních (vzhledem ke sloučenině 60) trimethylsilyltrifluormethansulfonátu a po 10 minutách se směs neutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po odfiltrování molekulových sít se filtrát zředí dichlormethanem, promyje vodou, zahustí a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získaní 560 mg sloučeniny 85.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,50, silikagel, 3/7 (objemový poměr) toluen/ethylacetát.

Příprava 74

Methyl-O- (benzyl-2, 3-di-0-methyl-fi-D-glukopyranosyluronát) (1-+4) -O- (3 -0-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) (1-+4) -O- (benzyl-2·, 3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronát) (1 —+4 )-2,3-di-o-benzyl - 6 -O-me thyl - α-D-gl ukopyranosid (86)

532,6 mg sloučeniny 85 se. rozpustí v 1,9 ml pyridinu a při teplotě místnosti se přidá směs 2,4 ml octové kyseliny a 0,3 ml hydrátu hydrazinu v 1,9 ml pyridinu. Směs se míchá 9 minut a pak se přidá dichlormethan a voda. Organická fáze se oddělí a důkladně promyje 0,1M chlorovodíkovou kyselinou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, zahustí se a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 451 mg sloučeniny 86.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,45, silikagel, 3/7 (objemový poměr) toluen/ethylacetát.

·· ···· ·«· · • · • ·

1,6-Anhydro-4 -0-β—methoxyfenyl-2-Ο-tosyl -β-D-gluko-pyranosa (88)

Směs 20 g epoxidu 87 (67 mmol; M. Cerny a další, Collect. Czech. Chem. Commun, 1961, 26, 2542) a 33,3 g β-methoxyfenolu (268 mmol) se v atmosféře argonu zahřívá na teplotu 90 °C. Když je směs kapalná, přidá se po částech 0,3 g chloridu hlinitého (2,35 mmol). Směs se míchá 30 minut a pak se ochladí zpět na teplotu místnosti, zředí se 600 ml dichlormethanu, neutralizuje • ΦΦ φ ·· ··· φφφ φ φφφ φ φφφ φ φφ φ φφ φφ se 0,5 ml triethylaminu, promyje se 120 ml 1M vodného roztoku hydroxidu sodného, 3x60 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, 50 ml vodného 10% roztoku hydrogensíranu draselného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se pak vysuší síranem sodným, zfiltruje a zahustí. Zbytek se čistí srážením z etheru a chromatograficky na silikagelu za získání 19,4 g sloučeniny 88 (69 %) .

Tenkovrstvá chromatografie: Rf 0,37, silikagel, 6/1 (objemový poměr) dichlormethan/ethylether

Příprava 76

1,6-Anhydro-4-0-β-methoxyf enyl -3-0-methyl -2-0- tosyl -β-D-glukopyranosa (89)

K roztoku 3,36 g sloučeniny 88 (7,95 mmol) v 8 ml suchého

N,N-dimethylformamidu se přidá 54 ml methyljodidu (954 mmol) a

18.4 g oxidu stříbrného (79,5 mmol). Směs se míchá 16 hodin, zfiltruje se přes křemelinu, zředí 300 ml ethylacetátu, promyje 3x100 ml vody, vysuší síranem sodným, zfiltruje, zahustí a zbytek se- chromatograficky čistí na silikagelu za získání 3,23 g sloučeniny 89 (80 %) .

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,36, silikagel, 2/3 (objemový poměr) cyklohexan/ethylether

Příprava 77

1,6 -Anhydro -4-0- β-me thoxyf enyl -3-0-me thyl -2- O-benzoyl -β-D mannopyranosa (90) '

27.4 g sloučeniny 89 (62,7 mmol) se rozpustí ve 315 ml N,N-dimethylformamidu. Pak se přidá 341 g tetrabutylamoniumbenzoátu (940 mmol) a roztok se 3 hodiny zahřívá na teplotu 150 °C. Po

Φ ♦···	ΦΦ	ΦΦΦΦ	ΦΦ
φ ·	Φ	φ Φ	Φ	a	•
φ ·	Φ	φ Φ	Φ	«	Φ
φ Φ φφ Φ	Φ ΦΦ	φ · Φ	Φ φ Φ	a	a

ochlazení na teplotu místnosti se směs zředí ethylacetátem (300 ml), promyje vodou do neutrální reakce, vysuší a zahustí. Zbytek odpovídající sloučenině 90 se přímo použije v dalším kroku.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,53, silikagel, 10/1 (objemový poměr) dichlormethan/ethylether

Příprava 78

1.6- Anhydro-4-0^-methoxyfenyl-3-0-methyl-fi-D-mannopyranosa (91)

K,roztoku výše uvedené surové sloučeniny 90 v 540 ml směsi dichlormethan/methanol (1/1) se přidá 13,5 g methoxidu sodného (250 mmol) . Směs se 1 hodinu míchá, pak se zředí 500 ml dichlormethanu a promyje 3% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a vodou. Po vysušení, filtraci a zahuštění se zbytek chromatograficky čistí na silikagelu za získání 10,5 g sloučeniny 91 (59 % ve dvou krocích).

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,29, silikagel, l/l (objemový poměr) toluen/ethylether

Příprava 79

1.6- Anhydro -2-O-ben zyl -4-0- β-τη eth oxy fenyl-3-O-methyl -β-D -mannopyranosa (92)

K roztoku 9,8 g sloučeniny 91 (34,6 mmol) ve 180 ml N,N-dimethylformamidu se přidá 6,2 ml benzylbromidu (51,9 mmol) a pak při teplotě 0 °C 1,16 g 95% hydridu sodného (48,4 mmol). Směs se míchá 16 hodin, při teplotě 0 °C se přidají 3 ml methanolu a reakční směs 'se zředí 200 ml ethylacetátu. Pak se promyje vodou,' vysuší, zfiltruje a zahustí. Zbytek odpovídající slou• 4 • 444« • · · • ♦ • » • · ♦ 44 4 r* 4*4* • 4 4 «44

4 4

4 cenině 92 se přímo použije bez dalšího čištění v následujícím kroku. Na silikagelu se ale izoluje analytická frakce: [a] ²⁰D = -49 (c = 0,73, dichlormethan).

Příprava 80

1, 6-Anhydro-2-0-benzyl-3-O-methyl-β-D-mannopyranosa (93)

Výše uvedená surová sloučenina 92 se rozpustí v 311 ml směsi tetrahydrofuran/voda (17/1) a při teplotě 0 °C se přidá 76 g dusičnanu ceričitoamonného· (138 mmol). Směs se míchá 30 minut, pak se zředí 1 litrem dichlormethanu a pak promyje vodným 2% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak vodou. Po vysušení, filtraci a zahuštění se zbytek chromatograficky čistí na silikagelu za získání 6,63 g sloučeniny 93 (72 % ve dvou krocích) .

[a]²⁰D = -68 (c = 1,02, dichlormethan) .

Nonasacharid 94 uvedený níže se připraví z monosacharidu 93 reakční sekvencí jako u nonasacharidu 24 z monosacharidu 3.

• ···· φφ · • · φφ ···· φφφ ·· · • Φ φφ • · β · • φ · φ • * · φ • φ φ · *· ··

Schéma 18 - Syntéza nonasacharidu 96

Příprava 81

Ο-(6-0-Benzoyl-4-0-levuoyl-2,3-di-o-methyl-a-D-glukopyranosyl)(1—94) -0- (2, 3,6-tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1—94) - [O(2, 3, 6 -tri-O-methyl-α-D-glukopyranosyl) - (1-94) -O- (2, 3, 6-tri-Omethyl-β-D-glukopyranosyl) - (1-94) ]₃-l, 6-anhydro-3-O-methyl-β-Dmannopyranosa (95)

K roztoku 759 mg sloučeniny 94 (0,36 mmol) v 3,3 ml směsi dichlormethan/1-butanol (1/2) se přidá 109 mg 5% palladia na uhlí. Směs se míchá 16 hodin v atmosféře vodíku (10⁶ Pa résp.

bar) při teplotě 55 °C, pak se zfiltruje a zahustí. Sloučenina 95 se použije v následujícím kroku bez dalšího čištění a charakterizace.

Příprava 82

0- (6-0-Benzoyl-4-0-levuoyl-2, 3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O- (2,3, 6-tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (l—>4) [O- (2,3,6 -tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0-(2, 3,6-triO-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ]₃-l, 6 -anhydro-2-O-benzoyl3-O-methyl-β-D-mannopyranosa (96)

K roztoku 726 mg sloučeniny 95 (0,36 mmol) v 5,4 ml bezvodého pyridinu se přidá 62 μΐ benzoylchloridu (0,54 mmol) a 9 mg dimethylaminopyridinu (0,073 mmol). Směs se míchá 2 hodiny při teplotě 60 °C a pak se ještě.jednou přidá stejné množství benzoylchloridu a po 35 minutách se roztok zahustí, zbytek se rozpustí v dichlormethanu,. promyje vodným 10% roztokem hydrogensíranu draselného, vodným 2% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organická fáze se vysuší síranem sodným, zfiltruje a zahustí. Zbytek.se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 684 mg sloučeniny 96 (90 %. ve dvou krocích) .

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,5, silikagel, 1/1 (objemový poměr) toluen/aceton ···· ·· • · · · ' • » · · «

Schéma 19 - Syntéza nonasacharidu 99 se

M*Q

O ,QAc

OAc OBz

M«O O ,OH 'OAc OBl

O ,am 'OAc OQz

Příprava 83

0- (6-0-Benzoyl-4-0-levuoyl-2, 3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)(1-44) -O- (2,3, 6- tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-44) - [O(2,3, 6-tri -O-methyl - α-D-glukopyranosyl) - (l-*44) -O- (2,3, 6-tri -Omethyl-β-D-glukopyranosyl) - (1—44) ] ₃-l, 6 -di-O-acetyl-2-Obenzoyl - 3.-0-methyl - a, β-D-mannopyranosa (97)

657 mg sloučeniny 96 (0,31 mmol) se nechá reagovat se směsí

4,5 ml acetanhydridu, 100 μΐ octové kyseliny (100 pl) a 0,19 ml trifluoroctové kyseliny jako v příkladu 23. Zbytek se chromato• · • · · ·

•9 · 99 99 graficky čistí na silikagelu za získáni 432 mg sloučeniny 97 (92 %) .

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,53, silikagel, l/l (objemový poměr) toluen/aceton

Příprava 84

Ó- (6-O-Benzoyl -4-0-1 evuoyl -2,3-di-O -me thyl - a-D-gl ukopyranosyl) (1-+4) -0— (2,3,6-tri-O-methyl-fi-D-glukopyranosyl) - (1-+4) - [O(2,3,6-tri-O-methyl -a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (2,3, 6-tri-0methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ] ₃-6-O-acetyl -2-O-benzoyl-3 -O- . methyl -a,β-D-mannopyranosa (98)

Připraví se roztok 382 mg sloučeniny 97 (0,17 mmol) a 736 μΐ benzylaminu (6,74 mmol) v 6 ml tetrahydrofuranu a míchá se 5 hodin. Směs se nalije na led a .po extrakci ethyletherem se organická fáze důkladně promyje 3% chlorovodíkovou kyselinpu a vodou, vysuší a zahustí. Zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 241 mg sloučeniny 98.

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,37, silikagel, 6/2/2 (objemový poměr) toluen/ethylacetát/ethanol

Příprava 85

Trichloracetimidát O- (6-0-benzoyl-4-0-levuoyl-2,3-di-O-methylα-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0- (2,3, 6 -tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -[O-(2,3, 6- tri-O-methyl-α-D-glukopyranosyl)(1-+4) -O- (2,3, 6-tri -O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ] ₃-6-0acetyl -2-O-benzoyl-3 -O-methyl -a, β-D-mannopyranosy (99)

K roztoku 241 mg sloučeniny 98 v 2,2 ml dichlormethanu se přidá 57 μΐ trichloracetonitrilu (0,56 mmol) a 58 mg uhličitanu ces82 něho. Směs se míchá 1 hodinu, zfiltruje se, zahustí a zbytek se chromatograficky čistí na silikagelu za získání 221 mg imidátu 99 (56 % ve dvou krocích).

v

Tenkovrstvá chromatografie: Rf = 0,19, silikagel, 3/2 (objemový poměr) cyklohexan/aceton

Příklad 1

Sodná sůl methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)(1—44) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -0(2,3, 6-tri-0-sulfo-fi-D-glukopyranosyl) - (1—44) -O- (2, 3-dí-Omethyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1—44) -O- (2,3,6-tri-omethyl -β-D-g lukopyráno syl) - (1-44) - [O- (2,3,6-tri-O-methyl-a-Dglukopyráno syl) - (1-44) -O- (2,3,6-tri-0-methyl^-D-glukopyranosyl) - (1-44) ]₃-O- (2, 3-di-O-methyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) (1—44) -0- (2,3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosyluronová kyselina) (1—44) -0- (2, 3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3di-O-methyl-a-L-idopyranosyluronová kyselina) - (1-44) -3-O-methyl-2, 6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu (I) mg hexadekasacharidu 46 (11 gmol) se rozpustí v 1 ml

Ν,Ν-dimethylformamidu. Pak se přidá 180 mg komplexu oxid sírový/triethylamin (0,89 mmol) a směs se míchá 20 hodin při teplotě 55 °C. K roztoku 5 mg/ml sulfatované sloučeniny v

Ν,Ν-dimethylformamidu se pak přidá 5 mol/mol hydroxylových skupin komplexu triethylamin/oxid sírový. Po 1 hodině při teplotě 55 °C se roztok nanese na kolonu.Sephadex® G-25 (1,6 x

115 cm) a vymývá se 0,2M roztokem chloridu sodného. Frakce obsahující produkt·se zahustí a zbaví soli na stejné koloně za vymývání vodou. Po lyofilizaci se získá 47 mg sloučeniny I (87 %) ve formě bílého prášku.

• φφφφ φ φ φφφφ φ φ ·· • Φ φ φφ φ φφφφ • · φ < ♦ φφφφ φ φ φφφφ φφφ.φφ φ φ φ φ φ φφφφ φφφφ φ· · φφφφ [α] ²⁰d = +65 (c = 1,0 voda) .

Příklad 2

Sodná sůl methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) (1—94) -O- (2, 3,6-tri -O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1—94) -0(2, 3, 6-trí-0-sulfo-fi-D-glukopyranosyl) - (1-94) -O- (2, 3-di-0methyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-94) -O- (2,3, 6-tri-0methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1-94) - [O- (2,3,6-tri-O-methyl-a-Dglukopyranosyl) - (1—94) -O- (2,3, 6-tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl) - (1—94) ] ₃-O- (2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) (1—94) -O- (2, 3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosyluronová kyselina) (1—94) -O- (6-O-methyl-2, 3 -di -O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-94) O- (2, 3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronová kyselina) - (1—94) 3, 6-di -O-methyl-2-O-sul fo-a-D-glukopyranosidu (II)

Příklad 3

Sodná sůl methyl-O-(2, 3,4, 6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) (1-94)-0- (2, 3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-94) -0(2, 3, 6-tri-0-sulfo-β-D-glukopyranosyl) - (1—94) -O- (2, 3 -di-Omethyl -6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1—94) -0-(2,3, 6- tri - Omethyl^-D-glukopyranosyl) - (1-94) - [O- (2, 3, 6-tri-O-mothyl-a-Dglukopyranosyl) - (1-94) -O- (2, 3, 6-tri-0-methyl-fi-D-glukopyranosyl) - (1—94) ]₃-O- (3-O-methyl-2, 6-di-O-sulfo-a-D-mannopyránosyl) (1—94) -O- (2,3-di -o-methyl -β-D-glukopyranosyluronová kyselina) (1—94) -O- (6-0-methyl-2,3-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-94) O- (2, 3-di -O-methyl-α-L-idopyrangsyluronová kyselina) - (1-94) -6 O-methyl-2,3-di-O-sulfo-a-D-glukopyranosid (III) • ··· · ·· • · 9 · · • ♦ · ♦

Příklad 4

Sodná sůl methyl-0-(2,3,4,6-tetra-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)~ (1-+4) -O- (2, 3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (l—>4) -O(2, 3,6-tri-0-sulfo-/3-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O-(2,3-di-Omethyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (2,3,6-tri-Omethyl-β-D-glukopyranosyl) - (l—>4) - [0-(2,3,6-tri-O-methyl-a-Dglukopyranosyl) - (1-+4) -O- (2,3, 6-tri-0-methyl^-D-glukopyrano~. syl) - (1-+4) ]₃-O- (3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-mannopyranosyl)(1-+4) -O- (2, 3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosyluronová kyselina)(1-+4) -0- (6-O-methyl-2,3-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) O- (2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronová kyselina) - (1-+4) 3, 6-di-0-methyl-2-0-sulfo-a-D-glukopyranosidu . (IV)

Příklad 5

Sodná sůl methyl-0- (2, 3,4, 6-tetra-O-sulfó-a-D-glukopyranosyl) (1-+4) -O- (2, 3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl), - (1-+4) -O(2,3, 6-tri - O-sulfo-β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0- (2, 3 -di-Omethyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -0-(2,3,6-tri-0me thy 1 -β-D-glukopyrano syl) - (1-+4) - [0- (2,3,6-tri-O-methyl-a-Dglukopyranosyl) - (1-+4) -0- (2,3, 6-tri-O-methyl -β-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ] ₃-O- (2, 3-di-O-meťhyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) (1-+4) -0- (2, 3-di-O-methyl-β-D-glukopyranosyluronová kyselina)(1-+4) -O- (6-0-methyl-2.,3-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) 0- (3-0-methyl-2-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronová kyselina) (1-+4)-3,6-di-0-methyl-2-0-sulfo-a-D-glukopyranosidu (V)

Sloučeniny příkladů 2 až 5 se připraví podobným spojením příslušných tetrasacharidů -s příslušnými nonasacharidy a pak • · · · · · · · · · · · · * β 9 · 9 · ♦ · · • · · · · » · · • · · · · · · ·· ·

spojením s trisacharidem 41 nebo 43 (jako popisuje příprava 36 nebo 38). Následuje obvyklé odchráně.ní a sulfatační reakce.

V případě příkladu 2 je použitý tetrasacharid popsán v přípravě 55 (sloučenina 62) a použitý nonasacharid popsán v přípravě 25 (sloučenina 27) .

V případě příkladu 3, je použitý tetrasacharid popsán v přípravě 74 (sloučenina 86) a použitý nonasacharid popsán v přípravě 85 (sloučenina 99).

V případě příkladu 4, je použitý tetrasacharid popsán v přípravě· 55 (sloučenina 62) a použitý nonasacharid popsán v přípravě 85 (sloučenina 99).

V případě příkladu 5, je použitý tetrasacharid sloučeninou 68 a použitý nonasacharid je popsán v přípravě 25 (sloučenina 27).

Tabulka I ^H-NMR (D₂0, 4,80 ppm) δ H-l protonů (ppm) : jednotka 1 = jednotka s redukujícím koncem jednotka 16 = jednotka s neredukujícím koncem

Jednotka	Příklad 2	Příklad 3	Příklad 4	Příklad 5
1	5,08	4,68	5,07	5,08
2	4,93	5,02	5,02	4,93
3	5,37	5,41	5,43	5,37
5	5,49	5,57	5,48	5,57
6	4,66	4,71	4,65	4,70
7, 9, 11	5,67	5,67	5,68	5,67
4, 8, 10, 12	4,39-4,49	4,39-4,49	4,37-4,47	4,39-4,39
13	5,61	5,61	5,60	5,61.
14	4,8	4,94	4,93	4,93
15	5,59	5,59 .	5,59	5,59
16	5,69	5,69	5,69	5,68

Tabulka II

Molekulový pík metodou „elektronsprejové ionizace negativního iontu (ESI)

Příklad	Vzorec	Vypočteno	Nalezeno
2	^129^224^123^15	4304,1	4304,5
3	^127^22θ0ΐ34$ΐ7	4436,2	4436,2
4	^C128^H222°131^S16	4370,1	4370,4
5	(-I28H222O131S16	4370,1	4370,5

• 9999 • 9	9	99 9·· •	9 99 9 9 9 9
• 9	9	9 9	9 9 9
9 9	•	9 ·	9 9 9
99 ©		• 9 ·	99

PATENTOVE NÁROKY

Claims

1. Syntetický polysacharid v kyselé formě a ve formě jeho farmaceuticky upotřebitelné soli, jehož aniontová forma odpovídá jednomu ze vzorců I až V z následujících vzorců:

so₄• 4 · 4

R’ = CHj R² = SO₃89 ····

9 9 9 99· • 9 fr » 9 « » 9 9 « »· ···· <

·· · » · · 4 » · ♦ «

2. Polysacharid . podle nároku 1 ve formě sodné nebo draselné soli.

3. Polysacharid podle nároku 1 a 2, kterým je sodná sůl methyl0-(2,3,4,6-tetra-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(l-»4) -0-(2,3,6tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(1->4) -0-(2,3,6-tri-0-sulfoβ-D-glukopyranosyl) - (1—>4) -O- (2,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-a-Dglukopyranosyl)- (1—>4) -0-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glukopyranosyl)- (1—>4)·-[0-(2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)(1—>4) -0- (2,3,6-tri-0-methyl-P-D-glukopyranosyl) - (1—>4) ] ₃-0(2,3-di-O-methyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(1—>4) -O- (2,3di-O-methyl-β-D-glukopyranosyluronová * kyselina)- (l->4) -0(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(1—>4) -0-(2,3-di-Omethyl-α-L-idopyranosyluronová kyselina)-(1—>4) -3-0-methyl2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu.

4. Farmaceutické kompozice, vyznačující se tím, že jako aktivní složku obsahují polysacharid podle kteréhokoliv nároku 1 až 3 ve formě soli s farmaceuticky upotřebí telnou bází nebo v kyselé formě, v kombinaci nebo ve směsi s inertní, netoxickou, farmaceuticky upotřebitelnou přísadou.

5. Farmaceutická kompozice podle nároku 4 v jednotkové dávkové formě, vyznačující se tím, že jev ní aktivní složka smíchána s alespoň jednou farmaceutickou přísadou.

6. Farmaceutická kompozice podle nároku 5, vyznačující se tím, že v každé dávkové jednotce obsahuje 0,1 . až 100 mg aktivní složky.

7. Farmaceutická kompozice podle nároku 6, vyznačující se tím, že v každé dávkové jednotce obsahuje 0,5 až 50 mg aktivní složky.

9« 9··· • 999

99 99

9 · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

999 99 99 9

9 9 9 9 * 9 9

99 9 99 99

8. Použití polysacharidů podle kteréhokoliv nároku 1 až 3 pro přípravu léčiva vhodného pro léčení patologických stavů spojených s poruchami srážení krve.

9. Použití polysacharidů podle kteréhokoliv nároku 1 až 3 pro přípravu léčiva vhodného pro léčení a prevenci onemocnění kardiovaskulárního a cerebrovaskulárního systému, thromboembolických onemocnění spojených s arteriosklerosou. a diabetem nebo thromboembolických onemocnění spojených s rethrombosou po thrombolyse, s infarktem, s demencí ischemického původu, s poruchami periferních artérií, s hemodialysou nebo s aurikulárními fibrilacemi nebo alternativně během použití aortokoronární můstkové vaskulární protézy.

10. · Použití podle nároku 9, přičemž se připravené léčivo použije při prevenci nebo léčení thromboembolických chorob.

11. Použití podle nároku 10, přičemž se připravené léčivo použije při prevenci nebo léčení nestabilní angíny, mrtvice, restenosy po angioplastice, endarterektomii nebo instalaci endovaskulární protesy.