FI111223B - Immuuniterapeuttinen käyttö - Google Patents

Description

111223

Immuuniterapeuttinen käyttö i Tämän keksinnön kohteena on immuuniterapeuttisten aineiden käyttö lääkkeiden valmistamiseksi, jotka lääkkeet viivästyt-5 tävät tai estävät kasvaimien kasvua tai leviämistä.

Alalla on esitetty, että immuunijärjestelmä kykenee estämään tai viivästyttämään kasvaimien kasvua ainakin eräissä tapauksissa, ja eräät tutkimukset näyttävät tukevan tätä käsitystä. Niinpä Coley [W.B. 1894 "Treatment of Inoperable Malignant Tulo mours with Toxins of Erysipelas and the Bacillus prodigiosus" (pahanlaatuisten kasvaimien, joita ei voida leikata, käsittely ruusutaudin (erysipelas) ja Bacillus prodigiosus:in toksiineilla] on kuvannut immuuniterapeuttisen menetelmän, joka näyttää tehoavan rajoitetusti mesodermistä (keskialkiolehti) alkunsa 15 saaneisiin kasvaimiin siten, että siinä indusoidaan tuberkuloosia vastaan kohdistetussa Koch:in immuunihoidossa indusoidun mekanismin kaltainen nekrotisoiva mekanismi. Tämän jälkeen useimmissa lähestymistavoissa syövän immuunihoidon toteuttamiseksi on pyritty saamaan aikaan Cooleyn eräissä tapauksissa 20 aikaansaaman kudosnekroosin kaltainen nopea kudosnekroosi.

Olemassa on tunnetusti T-auttajasolujen vähintään kaksi kyp-symistapaa, joista käytetään lyhenteitä THl ja TH2. Ensiksi mainittu liittyy interleukiini 2:n (IL2), gamma-interferonin (gamma-IFN) ja sytotoksisten T-solujen (CTL) muodostumiseen, 25 vasta-ainetuotannon vähenemiseen sekä TH2-solujen tuotantoa vaimentavaan säätelyyn. Viimeksi mainittu tuottaa IL4:ää, IL5:tä, voimistaa vasta-ainetuotantoa sekä vaimentaa THl-solu-jen muodostumista. Koch:in ilmiön, jonka todennäköisesti Coley:n toksiini indusoi, oletetaan johtuvan kypsien TH1+TH2-v*·· 30 solujen seoksesta.

Ollaan todettu, että olemassa on kahteen eri luokkaan kuuluvaa immuunireaktiivisuutta, joita voidaan käyttää hyväksi kasvaimien hallitsemiseksi, ja jotka kummatkin voidaan saada aikaan Bacillus Calmette-Guerin-rokotteella (BCG). Yksi mekanismi on 35 2 111223 kudosta tuhoava, ja esimerkkinä siitä voidaan mainita Koch:in ja Coley:n immuunihoito sekä kasvaimen immuunihoito TNFa:lla, ja tähän mekanismiin liittyy todennäköisesti sytokiinin välittämää kudosvauriota tulehduskohdissa, jotka on aiheutettu 5 asianmukaisesti T-soluista riippuvalla Koch:in ilmiöllä. Tämä mekanismi vaikuttaa tehoavan mesodermistä alkunsa saaneisiin kasvaimiin. Toinen mekanismi, joka perustuu itse kasvainsolujen immunologiseen tunnistukseen, saattaa tehota mitä tahansa alkuperää oleviin kasvaimiin. Epäsuora osoitus ei-spesifiseen 10 THl:een perustuvan, kasvaimia torjuvan mekanismin olemassaolosta on saatu yhdistelmä-DNA-teknisen interleukiini 12:n, joka on tehokas THl-indusoija, onnistuneesta käytöstä kokeellisissa syöpäsairauksissa.

15 Oletetaan, että mykobakteerit, mikäli niitä käytetään tavalla, jossa vältetään Koch:in ilmiön indusoituminen, voivat panna alkuun rasituksen alaisten autologisten solujen tunnistuksen lämpöshokkiproteiinin (HSP) epitooppien ja muiden, erittäin hyvin muuttumattomana pysyneen sekvenssin käsittävien proteiinien 20 epitooppien välityksellä, mikä johtaa täten kasvainsolujen selektiiviseen tuhoutumiseen. Olemme vetäneet sen johtopäätöksen, että aikaisemmin BCG-immuunihoidossa saavutettu vaihteleva menestys johtui siitä, ettei alalla ymmärretty sitä, että BCG pyrkii tehostamaan jo alkuunpantua vastekuviota, mikä todetaan 25 tutkimuksista, joissa on selvitetty sen kykyä suojata tuberku-: loosilta ja lepralta.

Kun BCG:tä käytetään rokotteena mykobakteereiden aiheuttamia sairauksia (sekä tuberkuloosi että lepra) vastaan, sen vaikutu-30 kset vaihtelevat suuresti, ja sillä eri tutkimuksissa aikaansaatu suoja vaihtelee 80 %:sta 0 %:iin. Näin ollen on merkittä-*. vää, että heti syntymän jälkeen annettu BCG näyttää yleensä suojaavan lapsuusiän leukemioilta vain niissä maantieteellisissä paikoissa, joissa se suojaa myös tuberkuloosilta (Grange JM, 35 Stanford JL, BCG-vaccination and cancer. Tubercle. (1990); 71: 61-64). Toisin sanoen se suojaa molemmilta tiloilta niissä paikoissa, joissa sen aikaansaama vaste mykobakteerin antigeeneil- 3 111223 le ei ole kudosta nekrotisoiva ja joissa tämä vaste ei ole Koch:in ilmiö.

^ Monien kasvainsolujen pinnalla voi olla rasitusproteiinien ja 5 muiden hyvin muuttumattomana pysyneiden proteiinien bakteriomi-meettisiä hiilihydraattiantigeenejä ja -epitooppeja, jotka liittyvät luokan 1 ja luokan 2 suureen histokompatibiliteetti-kompleksiin (MHC). Sellaisissa olosuhteissa, joihin liittyy voimakasta vasta-ainetuotantoa, alunperin bakteeriperäisiä so-10 kereita vastaan kehitetyt anti-hiilihydraatti-vasta-aineet, jotka ovat mahdollisesti IgA-tyyppiä, saattavat peittää kas-vainsolut ja suojata niiden pinnalla olevat komponentit solun immuunihyökkäyksiltä.

15 Kuten olemme osoittaneet kansainvälisessä patenttihakemuksessamme PCT/GB93/00463, mykobakteerilla M. vaccae toteutettu im-muunihoito indusoi pääasiassa THl-vastekuvion aktivoitaessa makrofaageja gamma-IFN:11a, ja vain vähistä vasta-aineen tuotantoa. Tällaisten THl-vasteiden tiedetään tehostavan CTL-solu-20 jen muodostumista. Vasta-ainetuotannon selvä heikkeneminen yhdistettynä CTL-solujen suurentuneeseen lukumäärään paljastaa kasvainsolut siten, että niihin voivat hyökätä sekä makrofaa-git, jotka ovat aktivoituneet sen jälkeen, kun ne ovat sitoutuneet kasvainsolun pinnalla oleviin bakteriomimeettisiin soke-25 reihin, että CTL-solut, jotka tunnistavat luokkaan 1 kuuluvassa : MHC-kompleksissa esiintyviä, rasitusproteiinin sekä muiden hy vin muuttumattomana säilyneiden proteiinien epitooppeja. Oletetaan, että Koch:in ilmiöstä johtuva, kudosta nekrotisoiva mekanismi saadaan tukahtumaan suureksi osaksi käyttämällä M^_ 30 vaccae-bakteerista saatua valmistetta.

Näin olleen voidaan odottaa, että M. vaccae:11a toteutettu im- \ muunihoito tehoaa kasvaimiin, jotka ovat saaneet alkunsa meso-dermistä, endodermistä (sisäalkiolehti) ja ektodermistä (ulko-35 ketto), mukaan lukien rintasyöpä ja keuhkoputkien syöpä, estäen tai viivästyttäen näiden kasvaimien kasvua tai leviämistä.

4 111223

Niinpä esillä olevassa·keksinnössä saadaan aikaan Mycobacterium vaccae-bakteerista saatujen, antigeenisten ja/tai immuunisääte-levien materiaalien käyttö sellaisen lääkkeen valmistamiseksi, jota lääkettä voidaan käyttää kasvaimien kasvun viivästyttämi-5 seksi tai estämiseksi. Tätä materiaalia voidaan antaa kohteelle kasvaimen kasvun tai leviämisen viivästyttämiseksi tai estämiseksi riittävänä määränä.

Keksinnön mukainen hoitava aine käsittää tarkoituksenmukaisesti ja näin ollen edullisesti kuolleita M. vaccae- soluja, edulli-10 simmassa tapauksessa soluja, jotka on tapettu autoklavoimalla. Tämä immuuniterapeuttinen aine käsittää enemmän kuin 108 mikro-organismia/ml laimenninta, edullisesti 108-10n tapettua M. vaccae-mikro-organismia millilitrassa laimenninta. Keksinnön piiriin kuuluu myös M. vaccae-bakteerista saatu antigeeninen 15 ja/tai immuunisäätelevä materiaali, jota voidaan käyttää kasvaimen kasvua tai leviämistä viivästyttävässä tai estävässä hoidossa. Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa.

Laimennin voi olla pelkästään pyrogeenitonta, injektoitavaksi 20 sopivaa suolaliuosta tai boraattipuskuria, jonka pH on 8,0.

Laimentimen tulisi olla steriiliä. Sopiva boraattipuskuri on:

Na2B4O,.10H2O 3,63 g : H3B03 5,25 g

NaCl 6,19 g 25 Tween 0,0005 %

Tislattu vesi yhdeksi litraksi.

Edullinen M. vaccae-kanta on lyhenteellä R877R tunnettu kanta, joka on eristetty keski-Ugandan Lango-alueelta saaduista muta-näytteistä (J.L. Stanford ja R.C. Paul, Ann. Soc. Beige Med.

30 Trop. , 1973, 5,3., 141-389). Tämä kanta on pysyvä karkea muunnos ja se voidaan tunnistaa kuuluvaksi M. vaccae-bakteereihin biokemiallisten ja antigeenisten arviointien perusteella (R. Boni-cke, S.E. Juhasz., Zentr. albl. Bakteriol. Parasitenkd. Infection skr. Hry. Abt. 1, Orig., 1964, 192, 133).

5 111223 R877R-kanta on talletettu kantakokoelmaan National Collection of Type Cultures (NCTC) Central Public Health Laboratory, Colindale Avenue, London NW9 5HT, Iso-Britannia, 13. helmikuuta 1984 talletusnumerolla NCTC 11659.

5 * Tämän immuuniterapeuttisen aineen valmistamiseksi M. vaccae- mikro-organismia voidaan kasvattaa sopivalla kiinteällä alustalla. Edullinen on muokattu Sauton:in nestemäinen alusta (S.V. Boyden ja E. Sorkin, J. Immunol. 1955, 75, 15) , joka on jähme-10 tetty agarilla. Kiinteä alusta sisältää edullisesti 1,3 % aga-ria.

Alustaa, johon on siirrostettu näitä mikro-organismeja, inku-boidaan aerobisissa olosuhteissa, jotta nämä mikro-organismit 15 voisivat kasvaa, yleensä 32 °C:ssa 10 vuorokauden ajan. Organismit otetaan talteen, sitten ne punnitaan ja suspendoidaan laimentimeen. Tämä laimennin voi olla puskuroimatonta suolaliuosta, mutta se on edullisesti puskuroitu boraatilla ja se sisältää pinta-aktiivista ainetta kuten tuotetta Tween 80, ku-20 ten edellä on kuvattu. Suspensio laimennetaan siten, että saadaan 100 mg mikro-organismia/ml. Suspensiota laimennetaan edelleen käyttämällä edullisesti boraatilla puskuroitua suolaliuosta siten, että suspensio sisältää 10 mg (märkäpaino) mikro-organismeja millilitrassa laimenninta. Sitten suspensiota voidaan 25 annostella 5 ml:n moniannospulloihin. Vaikka pulloissa olevat . mikro-organismit voidaankin tappaa säteilyttämällä niitä esi merkiksi 60koboltti-säteilyllä käyttäen 2,5 megaradin annosta, tai millä tahansa muulla tavalla, esimerkiksi kemiallisesti, niin nämä mikro-organismit tapetaan kuitenkin edullisesti auto-30 klavoimalla, esimerkiksi 10 psi:n (noin 0,69 bar) paineessa 10 minuutin aikana (115-125 °C). Ollaan todettu, että autoklavoin-nilla saadaan tehokkaampi valmiste kuin säteilyttämällä.

, Tätä immuuniterapeuttista ainetta annetaan yleensä injektoimal- 35 la sitä alueella 0,1-0,2 ml olevana, edullisesti 0,1 ml:n tilavuutena ihon sisään. Yksittäinen annos sisältää yleensä 107 -1010 tapettua M. vaccae-mikro-orqanismia. Potilaille annetaan 6 111223 edullisesti yksittäisannos, joka sisältää 108-109 tapettua M. yaccae-organismia. Tämä annos voidaan kuitenkin myös toistaa, potilaan tilasta riippuen.

5 Vaikka tätä immuuniterapeuttista ainetta annetaankin yleensä ihon sisään injektoimalla, niin kuitenkin myös muita antamis-tapoja, esimerkiksi suun kautta tapahtuvaa antamista voidaan käyttää.

10 Tämän keksinnön piiriin kuuluu myös menetelmä kasvaimen kasvun tai leviämisen viivästyttämiseksi tai estämiseksi, jossa menetelmässä kasvaimesta kärsivälle kohteelle annetaan Mycobacterium vaccae-bakteerista saatua antigeenistä ja/tai immuuni-säätelevää materiaalia sellaisena määränä, joka riittää saamaan 15 aikaan tehokkaan immuunivasteen kasvaimen kasvun tai leviämisen viivästyttämiseksi tai estämiseksi.

Edullista ja keksinnön mukaista on se, että käytetään useampia kuin yhtä M. vaccae-kantaa. ja/tai että tähän hoitavaan ainee-20 seen sisällytetään muita mykobakteeriperäisiä komponentteja. Myös tuberkuliinia voidaan sisällyttää.

Tämä hoitava aine voi myös sisällyttää BCG- (Bacillus Calmette-Guerin-) -rokotetta, erityisesti rokotteen pakastekuivattua 25 muotoa sen vaikutuksen tehostamiseksi.

I f

Hoitava aine voi sisältää muitakin aineosia kuten apuaineita, säilöntäaineita, stabilisaattoreita, jne. Se voidaan toimittaa steriilin injektoitavan nesteen muodossa tai steriilissä pakas-30 tekuivatussa muodossa, joka saatetaan nestemäiseen muotoon ennen käyttöä.

M. vaccae-bakteeria voidan käyttää sellaisenaan, tai tästä organismista saatua uutetta tai fraktioitua osaa voidaan käyttää 35 keksinnön mukaisten hoitavien aineiden valmistamiseksi.

Keksintöä havainnollistetaan edelleen seuraavilla esimerkeillä.

7 111223

Esimerkki 1 M. vaccae-orctanismia kasvatetaan kiinteällä alustalla, joka on 1,3 %:lla agaria jähmetettyä muokattua Sautonrin alustaa. Tähän 5 alustaan siirrostetaan mikro-organismeja ja niitä inkuboidaan ' 10 vuorokautta 32 °C:ssa, jotta mikro-organismit voisivat kas vaa. Sitten mikro-organismit otetaan talteen ja ne punnitaan ja suspendoisaan laimentimeen siten, että saadaan 100 mg mikro-organismeja/ml laimenninta. Sitten tätä suspensiota laimenne-10 taan edelleen puskuroidulla suolaliuoksella siten, että saatu suspensio sisältää 10 mg (märkäpaino) mikro-organismeja/ml laimenninta, ja suspensio annostellaan 5 ml:n moniannospulloihin. Tämän jälkeen näitä eläviä mikro-organismeja sisältäviä pulloja autoklavoidaan 10 minuuttia 10 psi:n (noin 0,69 bar) paineessa 15 mikro-organismien tappamiseksi ja keksinnön mukaisen immuuni-terapeuttisen aineen aikaansaamiseksi, jota voidaan (toivottaessa) laimentaa edelleen käyttöä varten.

Tätä immuuniterapeuttista ainetta voidaan antaa ihon sisäisellä 20 injektiolla edellä kuvatulla tavalla.

Esimerkki 2

Mj_vaccae-injektioita annettiin monille kasvainpotilaille.

25 Eräät saadut tulokset on esitetty seuraavassa: «

Rinnan karsinooma l) Vietnamilaisen kansanterveyslaitoksen, National Institute of Hygiene and Epidemiology, Hanoi, Vietnam, jossa on käynnissä 30 lukuisia sellaisia tutkimuksia, joissa toteutetussa immuunihoi-dossa käytetään mycobacterium vaccae-bakteeria. eräälle työn-’·: tekijälle kehittyi rintasyöpä kainalossa esiintyvine etäpesäk- keineen. Sen jälkeen, kun potilaan syöpä oli poistettu leikkaamalla, hänelle suositeltiin BCG-immuunihoitoa. Koska potilas 35 oli nähnyt muitakin tällaista hoitoa saavia potilaita, hän ei ollut innostunut BCG:stä, vaan hän pyysi, että häntä hoidettaisiin M. vaccae-bakteerilla. Potilaalle annettiin 109 tapettua 8 111223 M. vaccae-bakteeria sisältävä standardi-injektio, minkä jälkeen hän on voinut ainakin 3 vuotta hyvin eikä hänessä ole todettu muita kasvaimia.

2) Muutaman viikon kuluessa siitä, kun 50 vuoden ikäiselle nai-5 selle oli annettu M. vaccae-iniektio sitkeän hilsetystaudin (pityriasis) hoitamiseksi, hänen rinnassaan todettiin kyhmy rutiinina toteutetullaa mammografialla. Kudosnäyte osoitti tämän kasvaimen pahanlaatuiseksi ja se kyhmy poistettiin leikkaamalla. Histopatologisessa tutkimuksessa todettiin selvää pouka-10 mien histiosyyttiverisyyyttä kainalon imusolmukkeiden ympärillä, joissa imusolmukkeissa ei esiintynyt kasvainta. Noin 9 kuukautta myöhemmin hilsetystauti ilmaantui uudestaan ja potilaalle annettiin toinen M. vaccae-annosr jolloin hilsetystauti lieveni lähes välittömästi. Potilaassa ei todettu minkäänlaisia 15 merkkejä etäpesäkkeistä 21 kuukautta kasvaimen poistamisen jälkeen.

3) Hieman yli 70-vuotiaan naisen rinnasta oli poistettu kasvain useita vuosia sitten. Hän oli kärsinyt niveltulehduksesta (arthritis) johtuvista selkäkivuista useiden vuosien ajan, ja 20 hänelle oli annettu M. vaccae-iniektio tämän vaivan lievittämiseksi. Vain vähän aikaan tämän jälkeen selkärangan röntgentutkimuksessa todettiin lukuisia vaurioita, jotka oletettiin kasvaimen etäpesäkkeiksi, ja hänelle suositeltiin sädehoitoa. Kahdeksan viikon kuluttua hän meni saamaan sädehoitoa ja toiste-25 tussa röntgentutkimuksessa ei todettu jälkiäkään etäpesäkkeis-tä; sädehoidosta luovuttiin. Kahden ja puolen vuoden kuluttua hän voi hyvin eikä kasvaimet olleet uusiutuneet.

4) 55 vuoden ikäisen yleislääkärin 2 vuorokauden pituinen sai-30 raskertomus oletettiin rinnan akuutiksi paiseeksi. Rintaan tehty viilto osoitti massan hyvin nopeasti kasvavaksi karsinoomak-si, jonka etäpesäkkeitä oli jo kainaloissa. Karsinooma poistet- ♦ tiin välittömästi ja M. vaccae-injektio annettiin välittömästi sairaalasta pääsyn jälkeen. Kaksi muuta injektiota annettiin 3 35 kuukauden välein. Leikkaushaava parani hyvin ja vuoden kuluttua potilaassa ei todettu mitään näyttöä etäpesäkkeistä, vaikka pelkona olikin ollut sairauden nopea eteneminen.

♦ 9 111223 5) 50 vuoden ikäisessä sairaanhoitajassa, joka oli valittanut lantiokivusta vuoden ajan, diagnostoitiin rinnassa esiintyvästä kasvaimesta peräisin olevia etäpesäkkeitä luussa. Potilas parani hyvin ensimmäisen M. vaccae-iniektion jälkeen, hän siesi 5 hyvin kemoterapiaa ja hänelle annettiin toinen M. vaccae-iniek-' tio. Potilas voi hyvin.

Keuhkojen kasvaimet 1) 55-vuotiaassa naisessa ilmaantui lokakuussa 1993 hengästy-10 neisyyttä, jonka todettiin johtuvan useista keuhkoissa esiintyvistä kasvaimista, joita ei voitu leikata. Nämä kasvaimet oletettiin tuntemattoman primäärikasvaimen etäpesäkkeiksi. Potilaalle annettiin syöpätautilääkärin suostumuksella M. vaccae-injektio ja kemoterapia ja sädehoito käynnistettiin. Potilas 15 selvisi näistä hoidoista huomattavan vähin sivuvaikutuksin, eikä potilas halunnut toista M. vaccae-iniektiota. jota ehdotettiin hänelle 6 kuukauden kuluttua. Kymmenen kuukautta lääkärikäynnin jälkeen hänen tilansa huononi, kemoterapiaa muutettiin, mutta potilaalle annettiin huono ennuste. Toinen M. vac-20 cae-injektio annettiin lokakuun alussa 1994, minkä jälkeen potilaan tila parani ja hänelle on annettu kaksi lisäinjektiota, yksi joulukuussa 1994 ja toinen 1. maaliskuuta 1995. Tämä potilas ei ole ainoastaan voinut odotettua paljon paremmin, vaan hän on myös osallistunut vaivoitta 20 kemoterapiaan.

25 . Muut pahanlaatuiset kasvaimet * 1) Pahanlaatuisesta sekakudoskasvaimesta (teratooma) johtuvasta, loppuvaiheen sairaudesta kärsivälle 30-vuotiaalle hammaslääkärille annetttiin M. vaccae-injektio juuri ennenkuin 30 hänet lähetettiin kotiin kuolemaan. Hänessä todettiin paranemisen merkkejä ensimmäisen tai toisen vuorokauden aikana ja kolmen viikon kulutua näkyvien kasvaimien koko oli pienentynyt ja hän söi jälleen ensimmäisen kerran useaan viikkoon.

( 2) 36 vuoden ikäisen naisen mahaan kehittyi adenokarsinooma 35 Helicobacter pvlori-bakteerin aiheuttaman infektion seurauksena muodostuneen haavauman ympärille. Hänessä todettiin lukuisia t 10 111223 leviäviä etäpesäkkeitä kemoterapiasta huolimatta. Hän on saanut ensimmäisen M. vaccae-iniektion. ja tarkoituksena on jatkaa näitä injektioita 2 kuukauden välein.

5 HIV-virukseen liittyvät kasvaimet 1) Potilaalle, joka sairasti AIDS:in varhaista vaihetta, ja jossa esiintyi lukuisia Kaposi-sarkoomia, annettiin M. vaccae-injektio maarraskuussa 1993. Hänessä ei ole kehittynyt muita kasvaimia ja jo olevissa kasvaimissa esiintyy häviämisen merk- 10 kejä. Toinen M. vaccae-iniektio annettiin joulukuussa 1994 sen jälkeen, kun potilaassa oli kehittynyt HIV-virukseen liittyviä sekundäärisiä infektioita. Hänelle on tarkoitus antaa toistuvia M. vaccae-iniektioita aina 2 kuukauden välein.

2) Potilaalle, jolla ei ollut lähes lainkaan CD4+-soluja, mutta 15 jossa esiintyi ilmeisiä merkkejä AIDS:sista, annettiin M. vaccae-iniektio kesäkuussa 1994, ja muutamaa viikkoa myöhemmin hänen pohkeessaan todettiin pieni Kaposi-sarkooma, jonka halkaisija oli noin 0,5 cm. M. vaccae-iniektioita annettiin edelleen 2 kuukauden välein ja maaliskuussa 1995 potilaassa ei to- 20 dettu muita sairaalloisia kohtia eikä alkuperäisen sairaan kohdan koon suurenemista.

3) 48 vuoden ikäiselle miehelle, jonka suu-nielu-alueessa (oropharynx) esiinty lukuisia karsinoomapesäkkeitä, annettiin M. vaccae-injektio kesäkuussa 1949 ja lisäinjektioita annettiin 2 25 kuukauden välein. Maaliskuuhun 1995 mennessä kasvaimet eivät uusiutuneet enää lainkaan.

t

Edellä esitetyt kuvaukset tukevat kasvaimien hoitamista M. vac-cae-bakteerilla. M. vaccae:n käyttöön ei ole liittynyt minkään-30 laisia sivuvaikutuksia, vaan se on jopa saattanut lievittää kemoterapien toksisia vaikutuksia ainakin kahdessa näistä poti-laista. Nämä varhaiset käytännön havainnot tukevat teoreettisia odotuksia ja ne ovat arvokkaan kasvaimia torjuvan aktiivisuuden ensimmäinen näyttö.

35 11 111223

Esimerkki 3

Alustava koe toteutettiin Balb/C-hiirillä, jotka altistettiin v hiiren maitorauhasessa esiintyvän karsinoomakannan MM3 soluil- 5 le.

Kolme 10 hiirestä muodostuvaa ryhmää altistettiin 107 MM3-so-lulle. Yhden viikon kuluttua ensimmäiseen ryhmään injektoitiin 107 M♦ vaccae-organismia. toiselle ryhmälle annettiin 109 WL_ 10 vaccae-organismia ja kolmas ryhmä toimi vertailuna. Eläimet tapettiin 40 vuorokautta altistuksen jälkeen ja niistä tutkittiin kasvaimen kehittyminen.

Ryhmä 1 Ryhmä 2 Ryhmä 3 15 107 M. vaccae- lo9 M. vaccae- vertailu organismia organismia

Kehittyneet 165 kasvaimet 20 p=0,056

Ei kasvaimia 985 *

P

Claims (5)

111223

1. Användning av döda celler av Mycobacterium vaccae-bakterien 20 för tillverkning av ett läkemedel som är användbart för att fördröja eller förhindra tillväxt eller spridning av tumörer.

1. Mycobacterium vaccae-bakteerin kuolleiden solujen käyttö kasvaimien kasvun tai leviämisen viivästyttämiseksi tai estämiseksi käyttökelpoisen lääkkeen valmistamiseksi.

2. Användning enligt patentkrav 1, kännetecknad av att M. vaccae-cellerna avdödats genom autoklavering.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että ' M. vaccae-solut on tapettu autoklavoimalla.

3. Användning enligt patentkrav 1 eller 2, kännetecknad av att 25 M. vaccae härletts frän stammen som deponerats hos National ^ Collection of Type Cultures (NCTC) Central Public Health Labo ratory, Colindale Avenue, London NW9 5HT, Storbritannien, den 13. februari 1984, med deponeringsnurnmer NCTC 11659. 111223

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että M. vaccae on saatu kannasta, joka on talletettu kantakoko-elmaan National Collection of Type Cultures (NCTC) Central

10 Public Health Laboratory, Colindale Avenue, London NW9 5HT, Iso-Britannia, 13. helmikuuta 1984 talletusnumerolla NCTC 11659.

4. Användning enligt nägot av de föregaende patentkraven, kännetecknad av att läkemedlet omfattar frän 107 tili 1010 M. Vaccae-mikrooraanismer per dos. ν'

4. Jonkin edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen käyttö, tunnettu siitä, että lääke käsittää 107-1010 M. vaccae -mikro-organismia annosta kohden.

5. Jonkin edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen käyttö, tunnettu siitä, että kasvain on rinnassa tai keuhkoputkissa esiintyvä kasvain.

5. Användning enligt nägot av de föregaende patentkraven, 5 kännetecknad av att tumören är en bröst- eller bronkiell tumör.