FI110408B - Menetelmä rakennetta antavan matriisin käsittävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä rakennetta antavan matriisin käsittävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI110408B FI110408B FI935314A FI935314A FI110408B FI 110408 B FI110408 B FI 110408B FI 935314 A FI935314 A FI 935314A FI 935314 A FI935314 A FI 935314A FI 110408 B FI110408 B FI 110408B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- matrix
- saponin
- process according
- cholesterol
- eller
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
- A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/70—Nanostructure
- Y10S977/773—Nanoparticle, i.e. structure having three dimensions of 100 nm or less
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/70—Nanostructure
- Y10S977/778—Nanostructure within specified host or matrix material, e.g. nanocomposite films
- Y10S977/779—Possessing nanosized particles, powders, flakes, or clusters other than simple atomic impurity doping
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/902—Specified use of nanostructure
- Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
- Y10S977/915—Therapeutic or pharmaceutical composition
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/902—Specified use of nanostructure
- Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
- Y10S977/918—Immunological
Description
110408
Menetelmä rakennetta antavan matriisin käsittävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi - Förfarande för fram-ställning av en farmaceutisk komposition omfattande en strukturgivande matris 5 Tämä keksintö koskee menetelmää farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, joka koostumus käsittää rakennetta antavan matriisin partikkeleita kantajana, johon on yhdistetty farmaseuttisesti aktiivinen aine, joilla partikkeleilla on 10 rengasmainen perusrakenne, joka voi muodostaa pallomaisia nanopartikkeleita, erityisesti kooltaan 30-50 nm olevia partikkeleita.
Mikrometrin kokoa olevien kolloidisten partikkelien käyttö farmaseuttisina kantajina lääkkeen antamismuodon erilaisis-15 sa muodoissa on ollut monien tutkimusten kohteena viime vuosikymmeninä. Viime aikoina on onnistuttu myös tuottamaan osista koostuvia nanopartikkeleita ja osoitettu, että niillä on suuret mahdollisuudet helpottaa mukaantuotujen lääk-keiden talteenottoa.
t • · •*2P Kolloidisten partikkelien laskimonsisäisessä antamistavassa • · ; %·% ne saadaan takaisin eri elimissä riippuen partikkelien • · · koosta ja pintaominaisuuksista. Keuhkokapillaarit pyydystä- *,.* vät partikkelit, joiden halkaisija on suurempi kuin 7 μιη.
*·’ * Retikuloendoteelijärjestelmä (RES) eliminoi tehokkaasti 25 partikkeleita, joiden koko on 100 nm - 5 μια, pääasiallises- ti maksa. Tämä on hyvin nopea prosessi, joka normaalisti antaa partikkeleille veressä lyhyemmän puoliintumisajan ;·. kuin 1 min. Eliminaationopeus voi alentua voimakkaasti, jos .···. partikkelien pintaa modifioidaan sillä, että se on ainei- * · “30 den, jotka tekevät sen hydrofiiliseksi, peittämää.
.···. Partikkelit, jotka ovat pienempiä kuin 100 nm, voivat teo- t t reettisesti, ellei RES eliminoi niitä nopeasti, lähteä 2 110408 suuresta verenkierrosta aukkojen kautta, jotka ovat endo-teelissä, joka reunustaa verisuonien sisäpintaa. Mainitut aukot ovat erikokoisia erilaisissa hiussuoniverkostoissa. Haiman, suolien ja munuaisten endoteelissä on täten 50-60 5 nm aukot, kun taas maksan, pernan ja luuytimen endoteelissä on noin 100 nm aukot. Tietyissä kasvaimissa verisuonilla uskotaan myös olevan läpäisevämpää endoteeliä, täten sallien nanokokoa olevien partikkelien kulkea kasvainkudokseen. Äskettäin on myös havaittu, että nanopartikklelit voivat 10 tunkeutua suolien limakalvoon, miksi niitä olisi mahdollis ta käyttää saamaan hyvä absorptio lääkkeille, jotka ovat heikonlaisesti liukenevia, suun kautta tapahtuvan annon jälkeen.
Farmaseuttiset kantajat, jotka ovat ruiskutettavien nano-15 partikkelien muodossa, ovat sen takia olleet erittäin kiin nostavia, etenkin lääkkeiden antamiseksi kasvaimiin ja lääkkeiden pidentyneen vapautumisen takia ja että on mahdollisuus vaikuttaa lääkkeen jakaantumiseen kehossa laski-monsisäisen injektion jälkeen.
’"2D Vaikka on tutkittu suuri joukko erilaisia materiaaleja suh- . teessä matriisimateriaalin käyttöön hiukkasista koostuviksi farmaseuttisiksi kantajiksi, on vain muutamia, jotka ovat *r : osoittautuneet hyödyllisiksi nanometrin kokoisiin partikke- : leihin, so. tietyt liposomit, lipoproteiinit, etenkin ti- v'25 heydeltään alhaiset plasman lipoproteiinit (LDL) ja muuta mat polymeeriset materiaalit, pääasiallisesti polyalkyyli-syaanoakrylaatti.
Mainittujen tunnettujen hiukkasista koostuvien nanokanta-• *·· jien käyttöön liittyy kuitenkin monia ongelmia. RES eli- minoi liposomit nopeasti ja ne ovat lisäksi helposti sär-kyviä ja mikä saa aikaan liposomiformulaatioita, jotka ovat epästabiileja ja vaikeita käsitellä. LDL on artikkeli, jota 3 110408 on riittämättömästi, mitä uutetaan verestä. Lisäksi vain erittäin hydrofobisia lääkkeitä voidaan liittää mukaan ilman että ensin muunnetaan esilääkkeeksi. RES eliminoi polymeeriset farmaseuttiset kantajat ja saadaan lisäksi laajas-5 sa kokojakaumassa, mikä tekee mukaan liitettyjen lääkkeiden vapautumisen kontrollin vaikeammaksi.
Morein et ai kuvaavat WO 90/03184:ssä iscom-matriisin, joka koostuu kompleksista vähintään yhden lipidin, kuten kolest-roli, ja yhden tai useamman saponiinin välillä käytettäväk-10 si immunomoduloivana aineena. Tällä matriisilla, jolla on luonteenomainen iscom-matriisi, so. avoin pallomainen rakenne, jonka halkaisija on noin 40 nm, mikä on muodostunut rengasmaisista alayksiköistä, joiden halkaisija on noin 12 nm, sanotaan olevan adjuvanttivaikutusta ja on tarkoitettu 15 käytettäväksi yhdessä yhden tai useamman antigeenin kanssa.
Samassa hakemuksessa on osoitettu myös, että saponiinit Quil A:ssa, kaarnan uute, tai Quillaja saippuayrtti molina, voidaan jakaa erilaisiin aineisiin, muun muassa B2, B3 ja B4b, joista jotkin osoittavat adjuvanttivaikutusta ja muut 2θ rakenteen, joka antaa vaikutuksen. Nature, voi 308, nro.
·;·· 5958, s. 457-460 (1984), Morein et ai kuvaavat ensimmäisen ·.*. kerran immunostimuloivan kompleksin, joita nyt merkitään : .*. yleisesti iscomeiksi, joita on muodostunut antigeenideter- minanttien, joissa on hydrofobiset alueet, ja glykosidien, '.J25 kuten triterpeenisaponiinit ja etenkin Quil A, jolla on ad- • juvanttivaikutusta, välille ja jotka antavat immunogeenisen vaikutuksen, joka on 10-100 kertaa korkeampi kuin antigee-*: nin ja Quil A:n normaalin seoksen.
Nyt on yllättäen osoittautunut olevan mahdollista käyttää *ti3*0 saman tyyppistä partikkelia, kuin on aikaisemmin käytetty '··’ adjuvanttina, kantajana lääkkeiden antamiselle. Keksinnön mukaisesti lääkettä kantavassa partikkelissa ei ole anti- , 110408 4 geeniä tai antigeenisiä determinantteja ja täytyy, jos siten todistettu, olla immunologisesti inertti. Lisäksi pitäisi adjuvanttiosan yleensä käytettynä farmaseuttisena kantajana olla minimoitu; kantajan käyttö adjuvanttikompo-5 nentin kanssa ei kuitenkaan ole poissuljettua edellyttäen, että ei ole sivuvaikutuksia. Voi kuitenkin olla tärkeää, että adjuvanttikomponentti poistetaan proteiinin tai peptidin tyyppisten lääkkeiden yhteydessä, koska niillä saattaisi olla epitooppeja aloittamassa tai stimuloimassa im-10 muunivasteeseen.
Adjuvantti viittaa ideaalisesti aineeseen, jota voidaan käyttää lisäämään immunologista vastetta toiseen aineeseen ilman että aloitetaan immunologista vastetta itseensä. Lisäksi tässä yksityiskohtaisessa esityksessä 15 matriisi = kantaja viittaa rakenteeseen, joka antaa komp leksin yhden tai useamman saponiinin ja kolesterolin välille, mikä myös lisäksi mahdollisesti sisältää muita lipidejä, jotka voivat olla immunologisesti inerttejä tai immu-nostimuloivia riippuen saponiineista, joita on mukana, jol- ‘"20 la on rengasmaisten alayksikköjen muodostama pyöreiden na- • · nopartikkeleiden muoto, : matriisi, jossa ei ole adjuvanttia viittaa immunologises- ti inerttiin matriisiin, • · · ·’ * iscorn viittaa matriisiin + antigeeniin, immunostimuloiva 25 kompleksi, jolla on sama partikkelirakenne kuin matriisil- \! la, delfa viittaa matriisiin + lääkkeeseen, lääkettä kantava I I * : " partikkeli, jolla on sama rakenne kuin matriisilla.
• · • · Tämä keksintö koskee menetelmää farmaseuttisen koostumuksen » · *,,30 valmistamiseksi, joka koostumus käsittää rakennetta antavan ·** matriisin partikkeleita kantajana, johon on yhdistetty far- 5 110408 maseuttisesti aktiivinen aine, joilla partikkeleilla on rengasmainen perusrakenne, joka voi muodostaa pallomaisia nanopartikkeleita, erityisesti kooltaan 30-50 nm olevia partikkeleita, jolloin rakennetta antava matriisi on komp-5 leksi, joka on muodostettu yhdestä tai useammasta saponii- niaineosasta, jolla ei ole adjuvanttivaikutusta, ja kolloidisessa muodossa olevasta sterolista, jossa menetelmässä farmaseuttisesti aktiivinen aine sekoitetaan saponiiniaine-osaan tai -aineosien ja sterolin kanssa farmaseuttisesti 10 aktiivisen aineen yhdistämiseksi matriisiin.
Edullisen suoritusmuodon mukaisesti matriisissa on myös yksi tai useampia lipidejä, etenkin fosfolipidejä.
Kantajapartikkeleilla on edullisesti 35-42 nm koko, erityisesti noin 40 nm.
15 Käyttämällä kantajapartikkelia saavutetaan seuraavaa: - kapea partikkelin kokojakauma, jolla on merkitystä lääkkeen antamisessa, jotta saadaan hyvä toistettavuus ja yhte- ··· näinen annos; - pidentynyt kesto verenkierrossa johtuen hydrofiilisestä 2D pinnasta; • · • · · · j’.'; - suuri stabiilius 110408 6
Kyseessä olevia saponiineja kompleksin muodostamista varten on jokainen rakennetta muodostava saponiini, jossa on hydrofobiset alueet, kuten ne, jotka on kuvattu teoksessa R. Tschesche ja Wulf, Chemie Organischer Naturstoffe, toim. W.
5 Herz, H. Grisebach, G. W. Kirby, osa 30 (1973). Erityisen kiinnostavia ovat hyvin pooliset saponiinit, edullisesti pooliset triterpeenisaponiinit, kuten poolinen happo bis-desmosiidi, esim. saponiiniuute Quillajakaarnasta. Puhtaat saponiinit ilman adjuvanttivaikutusta ovat erityisen edul-10 lisiä, kuten aineet, jotka on saatu WO 90/03184 mukaisesti
Quillaja Saponaria Molinan uutteesta, jossa on 8-11 hiili-hydraattiryhmää, so. B4b, jonka molekyylipaino on 1862 ja mahdollisesti B2, jonka molekyylipaino on 1988. Saponiini-fraktiot LT 15 ja LT 17 on saatu samasta uutteesta vaihto-15 ehtoisella menetelmällä, joka perustuu preparatiiviseen pylväskromatografiamenetelmään, jossa käytetään samanlaisia kromatografisia olosuhteita kuin analyyttisessä ohutlevyme-netelmässä, joka on kuvattu WO 90/03184:ssä.
Sterolin lisäksi on edullista että matriisissa on myös yksi •20 tai useampia lipidejä. Esimerkkinä lipideistä voidaan mai- nita rasvat ja rasva-aineet, kuten triglyseridit tai tri- ··.·. glyseridien seos, jossa on rasvahappoja, joissa on 50 asti . ! hiiliatomeja, esim. voihappo, kapronihappo, kapriinihappo, » 1 · kapryylihappo, lauryylihappo, myristiinihappo, palmitiini- • · · t · if215 happo, steariinihappo, arakishappo, beheenihappo, lignose- • · · ’·’ ’ riinihappo tai tyydyttymättömät rasvahapot, joissa on 30 asti hiiliatomeja, kuten heksadekeenihappo, tyydyttymättö-mät hydroksirasvahapot; glyserolieetterit, vahat, so. kor-keampien rasvahappojen ja yksiva-lenssisten alkoholien βει 1, 3 0 terit; fosfolipidit kuten glyserolifosfaattien johdannai- [... set, kuten fosfatiidihappojen johdannaiset, so. lesitiini, ‘I’ sefaliini, inositolif osf atidit, sf ingosiini johdannaiset, 7 110408 joissa on 14, 15, 16, 17, 18, 19 tai 20 hiiliatomia; glyko-lipidit, isoprenoidit, sulfolipidit, karotenoidit, steroidit, sterolit, kolestanoli, kaprostanoli, fytosterolit, esimerkiksi stigmasteroli, sitosteroli, mykosterolit, esi-5 merkiksi ergosteroli, sappihapot esimerkiksi sappihappo, desoksikoolihappo, kenodesoksikoolihappo, litokoolihappo, steroidiglykosidit, vitamiini A:n esterit tai sen seokset. Erityisen edullisia ovat fosfolipidit, kuten fosfatidyli-etanoliamiini, fosfatidylikoliini.
10 On tietenkin toivottavaa, että lähtöyhdisteillä, joita käy tetään valmistamaan kantajapartikkeleita, on mahdollisimman alhainen toksisuus. Johtuen sen stabiiliudesta osoittaa muodostunut matriisi kuitenkin normaalisti melkoisesti alhaisempaa toksisuutta kuin mukana olevien komponenttien 15 summa.
Kuten edellä mainittiin, on delfan rakenne identtinen matriisin rakenteen kanssa. Negatiivisesti värjätyn elektronimikroskopian avulla ilmenee avoin pallomainen rakenne, jon- . ka halkaisija on 30-50 nm, erityisesti 35-42 nm, joka on • · « "20 tehty yhdestä tai useammasta rengasmaisesta yksiköstä, joi den läpimitta on 10-12 nm. Liitteenä olevissa elektronimik- roskopiakuvissa 1, 3 ja 6 nähdään erilaiset kantajamatrii- ; sit, joita voidaan käyttää keksinnön mukaisesti farmaseut- • * : tisesti aktiivisten aineiden antamiseen. Kuviot 2, 4, 5 ja 7 osoittavat vähemmän hyvin kuvattuja komplekseja ja kuvio 8 osoittaa kuvatun CoQ10-delfan. Tästä voidaan nähdä, että : kaikki kantajamatriisit, samoin kuin lääkettä kantava par- • » · • » .···, tikkeli osoittaa samaa säännöllistä rakennetta kohtalaisen kapealla kokovälillä.
."3.0 Tyypillinen delfa koostuu kolesterolista, yhdestä tai use- ämmästä saponiinikomponentista, kuten B4b tai B4b:n ja B2:n • ·’ seoksesta, farmaseuttisesti aktiivisesta aineesta ja lipi- distä, normaalisti fosfolipidi. Sellaisessa tyypillisessä delfassa, jonka partikkelikoko on 30-50 nm, on molekyyli-35 suhde saponiini:kolesteroli:fosfolipidi:lääke 1:(0,1-10):- (0-10):(0-10):(0,1-50), missä saponiiniosamäärä koostuu 10- „ 110408
O
100 % B4b:stä ja jäljelle jääneestä B2:sta ja mahdollisesti muista saponiineista. Normaalilla delfalla on molekyyli-koostumus 1:1:0,5:0,5, saponiinien ollessa B4b.
Matriisin tai delfan, jossa on sen kokoisia rengasmaisia 5 partikkeleita, joiden läpimitta on 10-12 nm, valmistamisek si, voidaan eri komponenttien saponiini:kolesteroli:fosfo-lipidi välistä suhdetta muuttaa.
Rakennetta antava matriisin, jota käytetään kantajana, samoin kuin delfa, voidaan valmistaa WO 90/03184:n mukaisesti 10 liuottamalla tai siirtämällä sterolin kolloidiseen muotoon liuottimessa, lisäämällä saponiinia tai saponiineja ja mahdollisia lisäksi tulevia lisäaineita, etenkin farmaseuttisesti aktiivinen aine, ja sitten liuotin poistetaan tai konsentraatiota vähennetään ja kompleksi siirretään liuok-15 seen, missä sen komponentit eivät ole liukoisia, esimerkik si vesipitoinen liuos. Tämä voidaan tehdä affiniteettikro-matografiällä, geelisuodatuksella tai sentrifuugauksella, ultrasuodatuksella, dialyysillä, elektroforeesilla tai . haihduttamalla liuotin tai alentamalla liuottimen pitoi- « · · “ΊΟ suutta laimentamalla. Matriisi ja delfa, vastaavasti, puh distetaan sitten ylimäärästä sterolia ja saponiineja, esimerkiksi geelisuodatuksella tai sentrifugoimalla tiheysgra- • » : dientin läpi. Liuottavana aineena voidaan käyttää deter- • · · • *.>' genttiä, kuten ei-ioninen tai ioninen, kuten kationinen tai :.*2S anioninen tai amfoteeri-ioninen detergentti, kuten zwitter- gentti tai detergentti, joka perustuu sappihappoon, jota ;’.j käytetään ylimäärin. WO 90/03184:ssä mainitaan tyypillisiä
» I
esimerkkejä. Liuottava aine poistetaan olosuhteissa, joi-• » » ( loin farmaseuttisesti aktiivisella aineella on riittävästi > 3*0 hydrofobisia ominaisuuksia ollen integroitunut muodostunee- seen delfakompleksiin. Jotkut pinta-aktiiviset aineet hel- jv; pottavat melkoisesti matriisin muodostumista. Ne koostuvat ,···. biologisista membraanilipideistä, joilla on poolinen pää- » » ryhmä ja ei-poolinen alifaattinen ketju, esimerkiksi fos-35 fatidyylikoliini (negatiivisesti varautunut) ja fosfati- dyylietanoliamiini (positiivisesti varautunut). Liuottava 9 110408 aine voi olla myös liuotin itsessään, kuten alkoholit, orgaaniset liuottimet tai pienet amfifaattiset molekyylit, kuten heptaani-1,2,3-trioli, heksaani-1,2,3-trioli, etikka-happo tai trifluorietikkahappo. Edullisesti voidaan käyttää 5 etyylialkoholia, dioksaania, eetteriä, kloroformia, aseto nia, bentseeniä, etikkahappoa, hiilidisulfidia, MEGA-10:tä (N-dekanoyyli-N-metyyliglukamiini) ja β-oktyyliglukosidia.
Yleensä on tarpeellista poistaa liuottava aine matriisista, mikä voidaan tehdä esimerkiksi dialyysillä, ultrasuodatuk-10 sella, haihdutuksella tai pylväskromatografisella teknii kalla. Tietyissä tapauksissa voi myös olla mahdollista sen jälkeen, kun on sidottu kyseessä oleva farmaseuttisesti aktiivinen aine, laimentaa saatu lääke, jossa on partikkeleita, pitoisuuteen, joka antaa fysiologisesti hyväksyttävän 15 liuoksen.
Keksinnön mukaisesti lääkettä kantava partikkeli voidaan valmistaa liittämällä farmaseuttisesti aktiivinen aine kan-tajamatriisiin hydrofobisella vuorovaikutuksella matriisi-. kompleksin, kuten edellä, muodostumisen aikana, mutta myös • aa *"2p kantajamateriaalin muodostumisen jälkeen. Farmaseuttisesti [ / aktiivinen aine voi hydrofobisen vuorovaikutuksen lisäksi • · olla liittynyt kantajamatriisiin kemiallisella kytkennällä : sinänsä tunnetulla tavalla sopivaan toiminnalliseen ryh- • V mään, joka on integroitu aikaisemmin muodostuneeseen mat- :^25 riisiin.
. . Esimerkkinä toiminnallisista ryhmistä, jotka sopivat sito- » · a maan farmaseuttisesti aktiivisen aineen, voidaan mainita * * ·;·* -NH2, ~SH, -COOH, -OH. Lukuisia kytkemisryhmiä ja -menetel- i miä on kuvattu Journal of Immunological Methods, 59 (1983), a ;’‘3^9 129-143, 289-299; teoksessa Methods of Enzymology, nidos
I t I
93, s. 280-333; ja teoksessa Analytical Biochemistry 116, t · » s. 402-407 (1981) .
» a
Farmaseuttisesti aktiiviset aineet, joita voidaan liittää kantaj amatriisiin, voivat olla vaihtelevia koostumukseltaan 35 tai kooltaan. Ne liitetään joko yksittäisinä yksikköinä tai 10 110408 muiden molekyylien yhdistelmänä. Sitominen voi tapahtua hydrofobisen vuorovaikutuksen keinoin tai kovalenttisella sidoksella. Esimerkkinä voidaan mainita suuret glykoprote-iinit, joiden molekyylipaino on 400 kd:iin asti ja oligo-5 peptidit joidenkin muutamien aminohappojen kanssa, jotka voidaan sitoa hydrofobisella vuorovaikutuksella. Myös luonnolliset proteiinit, triterpenoidit ja flaviinit, jne. voidaan liittää hydrofobisella vuorovaikutuksella. Tiettyjä aineita, esimerkiksi joukko proteiineja, poly- ja oligopep-10 tidejä voidaan liittää hydrofobisella vuorovaikutuksella sen jälkeen kun hydrofobisia alueita on altistettu erilaisilla denaturoivaa luonnetta olevilla käsittelyillä. Ei-hydrofobisia molekyylejä voidaan liittää delfa-kompleksei-hin kovalenttisilla sidoksilla mukaan liitettyihin lipofii-15 lisiin komponentteihin, esimerkiksi fosfatidyylietanoli- amiini tai kovalenttiset sidokset sokeriin, aldehydiin, jne.
Voidaan myös muodostaa farmaseuttinen koostumus, joka koostuu lääkettä kantavista partikkeleista, kuten edellä yhdes-30 sä farmaseuttisesti hyväksyttävän apuaineen kanssa. Monia II»· tavanomaisia farmaseuttisia apuaineita, jotka normaalisti ··.·. ovat osana eri tyyppisissä lääkkeissä, voidaan käyttää.
• Delfa-partikkelit voidaan suspendoida esimerkiksi vesipi- • · · toisiin liuoksiin tai kylmäkuivata formulaatioihin. Esi- < » i ’.25 merkkejä lääkkeiden tyypeistä, joissa on delfa, voidaan ’·’ mainita seuraavaa: * injektionesteet, injektio- ja infuusioaineet ja siirrän- • i .1··. näistabletit ruoansulatuskanavan ulkopuolista antamista • varten i > r · • · · :"‘3;0 1 "liuokset", geelit, voiteet ja ihovoiteet paikallista an- tamista varten kapselit, tabletit, rakeet ja seokset annettaviksi suun kautta.
11 110408
Delfan pitoisuus lääkkeiden eri formulaatioissa voi vaihdella riippuen mukana olevista lääkkeistä ja antotavasta. Normaalisti 1 ml tai 1 g farmaseuttista formulaatiota voi sisältää 0,01-100 mg delfaa.
5 Lääkettä kantavaa partikkelia, delfaa, voidaan käyttää far maseuttisten aineiden suun kautta tapahtuvassa ja ruoansulatuskanavan ulkopuolisessa antotavassa. Lisäksi delfaa voidaan käyttää farmaseuttisten aineiden, jotka on tarkoitettu systeemiseen vaikutukseen, paikalliseen antamiseen, 10 esimerkiksi silmän, nenän ja ihon kautta. Myös erittäin vä häisessä määrin liukoisia farmaseuttisia aineita voidaan liittää delfaan. Esimerkki aineesta, joka on äärettömän vaikea liuottaa, on koentsyymi Q10, samoin kuin nifedipiini, joita ei tällä hetkellä ole saatavilla markkinoilla injek-15 tionesteinä johtuen niiden liukoisuusominaisuuksista. On muita aineita, jotka ovat vaikeita liuottaa kortikostero-idien ja steroidihormonien ryhmissä. Lisäksi on joitakin sytostaatteja, esimerkiksi etoposidi, jotka ovat heikosti liukenevia.
• « · ••£»0 Delfaa voidaan käyttää myös lääkkeiden, joilla on lyhyt biologinen puoliintumisaika, ruoansulatuskanavan ulkopuo-" liseen antamiseen. Nämä täytyy antaa antamalla toistettuja :.· : ruiskeita, koska suun kautta tapahtuva antaminen on mahdo- • ’ i ton johtuen entsymaattisesta hajoamisesta. Mainittujen ; '£p lääkkeiden pitkäaikainen vapautuminen delfapartikkelista tekisi mahdolliseksi harvemmat ruiskeet. Esimerkkeinä far-: maseuttisesti aktiivisista aineista voidaan mainita insu- .···. liini, kasvuhormoni, kalsitoniini, GHRH (growth-hormone- releasing hormone, kasvuhormonia vapauttava hormoni) .
t | » .“3p Toinen edullinen alue käytettäväksi mainituille lääkettä kantaville partikkeleille on ruoansulatuskanavan ulkopuoli- i · « sen kohteen kontrolloimaa lääkkeiden antamista, etenkin sy-*·* tostatiikka.
Lääkettä kantavassa partikkelissa, delfassa, komponentit 35 voivat olla osa useista yhdistelmistä erilaisten molekyy- 12 110408 lien kanssa ja tässä yhteydessä on osoitettu, että mukana olevat komponentit on liitetty mukaan testatuilla soluilla (makrofaagit ja solut solulinjasta Wehei 110). Immunofluo-resenssillä ja elektronimikroskopialla on ollut mahdollista 5 seurata kompleksia soluun, koska vastaavan proteiinin mi- sellit on hajotettu. Sen mukaisesti tämä tarkoittaa, että delfapartikkelit ovat hyvin stabiileja. Sisäänotto ja kuljetus injektiokohdasta on nopeaa ja keksinnön mukaiseen matriisiin sitoutuneet komponentit kuljetetaan eri elimiin, 10 kuten esimerkiksi laskuputki imukudoselimiin. Sen jälkeen, kun on annettu vatsaontelon sisäisesti löytyy pernasta verrattain suuri määrä komponentteja. Muita elimiä ovat sydän, maksa, sappi, perna, munuaiset, virtsajohdin ja virtsarakko, keuhkot. Erilaisten komponenttien yhdistäminen yhteen 15 ja samaan partikkeliin saattaa merkitä synergismiä, koska eri komponenteilla saattaa olla erilaiset tehtävät; yksi komponentti saattaa esimerkiksi käyttää maalitauluna tiettyä elintä tai solutyyppiä tai liman läpitunkeutumiseen ja toinen komponentti voi vaikuttaa soluun. Yksi ja sama solu, 20 johon on tarkoitus vaikuttaa, voi ottaa sisään komponentit « sellaisessa kompleksissa.
• ·
Kantajamatriisia, samoin kuin samalla lailla muodostunutta • · . ! delfaa, karakterisoidaan sillä, että ei vasta-aineen välit- • * · );*/ tämä immuniteetti (AMI) eikä solun välittämä immuniteetti ♦ · · • 25 (CMI) kehity siinä mukana olevia komponentteja vastaan.
V ‘ Koska kantajamatriisia vastaan ei kehity immuunivastetta, voidaan sitä käyttää kantajana erilaisille lääkkeille tois-! ‘.j tetuissa tapauksissa ilman immunologisia reaktioita estäen esimerkiksi liman tunkeutumisen paikallisessa käytössä esi-..30 merkiksi nenään, limakalvoon tai suun kautta tai estää ad- * I · sorptiota ja kantajan tai deltan ja siihen liitettyjen t » ;· lääkkeiden lisähajoamista organismissa ruoansulatuskanavan j ulkopuolisessa käytössä. Täten voidaan välttää immunologi- siä reaktioita, jotka aiheuttavat sekundäärisiä vaikutuk-35 siä.
13 110408
Farmaseuttisen koostumuksen rakentamiseksi voidaan tarjota testipakkaus, joka koostuu rakennetta antavan matriisin partikkelien erillisistä pakkauksista, mahdollisesti yhdessä pinta-aktiivisten aineiden kanssa ja farmaseuttisesti 5 hyväksyttävä apuaine.
Keksintöä kuvataan lisää seuraavilla rakennetta antavan matriisin ja lääkettä kantavien partikkelien valmistus- ja käyttöesimerkeillä viittaamalla liitteenä oleviin piirroksiin.
10 Kuvio 1 osoittaa noin 200 000 suurennuksena elektronimik- rokuvan kantajamatriisista, kuten on valmistettu esimerkissä 2 Quil A:sta, kolesterolista ja fosfatidyylietano-liamiinista;
Kuvio 2-4 osoittaa noin 75 000 suurennuksena elektronimik-15 rokuvan kolmesta muusta kantajamatriisista, jotka onvalmis- tettu esimerkin 3 mukaisesti Quil A:sta ja kolmesta erilaisesta sterolista, se tarkoittaa stigmasterolia, β-sitoste- t rolia ja lanosterolia; • · · I · • · ... Kuvio 5-7 osoittaa noin 75 000 suurennuksena elektronimik- • · • i . 20 rokuvan kolmesta muusta kantajamatriisista, jotka on vai- • · t mistettu kuten esimerkissä 3 Quil A:sta, fosfatidyylikolii- ( i i • *' nista ja yhdestä stigmasterolista, β-sitosterolista ja la- i * < V ’ nosterolista vastaavasti; ; Kuvio 8 osoittaa noin 75 000 suurennuksena elektronimik- • * » t » ,"25 rokuvan delfapartikkeleista, joissa on CoQ10, joka on vai- * ’’ mistettu esimerkin 5 mukaisesti; t *
Kuvio 9 osoittaa noin 75 000 suurennuksena elektronimik-
• I
« « * s.\ rokuvan delfapartikkeleista, joissa on amfoterisiini i · · « ·
I I
lii * * I ♦ » · » 30 14 110408 B:tä, joka on valmistettu esimerkin 6 b) mukaisesti;
Kuvio 10 koskee eri fraktioiden absorbanssia ja lukemia, jotka on saatu analysoitaessa kuviossa 9 esitettyjä del-5 fapartikkeleita;
Kuvio 11 osoittaa noin 75 000 suurennuksena elektronimik-rokuvan delfapartikkeleista, joissa on amfoterisiini B:tä, joka on valmistettu esimerkin 6 d) mukaisesti; ja 10
Kuvio 12 koskee eri fraktioiden absorbanssia ja lukemia, jotka on saatu analysoitaessa kuviossa 11 esitettyjä del-fapartikkeleita.
15 Seuraavissa esimerkeissä nro. 1-4 koskevat kantajapartik- keleiden, joihin haluttu lääke voidaan kytkeä kovalentti-sesti, valmistamista; nro. 5-6 koskee delfapartikkeleiden suoraa valmistamista, se tarkoittaa partikkeleita, joissa lääke on liitetty matriisiin hydrofobisella vuorovaiku-20 tuksella; ja nro. 7-8 koskee delfapartikkeleiden valmis tamista, joissa lääke on kovalenttisesti kytketty kanta-jamatriisiin.
Esimerkki 1 .,.25 Delfakantaia 9 H ) ( • · | 1 t ; ' : Kantaja ei-hydrofobisille lääkkeille valmistetaan seuraa- * vasti. lOOO μΐ lipidiseosta, joka koostuu 10,0 mg:sta ko- * » t # {V. lesterolia (+ 3H-kolesterolin vähäisistä määristä), 10,0 * i ,30 mg:sta fosfatidylietanoliamiinia ja 200 mg:sta MEGA-10:tä (N-dekanoyyli-N-metyyliamiini) H20:ssa, sekoitetaan 500 . mg:n kanssa LT15:ta (saponiinifraktio, joka saatiin
Karlshamns Lipidteknik ABrstä, Tukholma, Ruotsi), liuo- < « » ’ tettiin H20:een (10 % w/w) ja tilavuus säädettiin 5-10 ml
:3¾ PBSrllä (0,02 M fosfaatti-puskuroitu suolaliuos, 150 mM
;"· NaCl, pH 7,4). Seosta inkuboidaan ravistelijassa 4-24 h ennen kuin se analysoidaan 5x5 1 PBSrää vastaan (ympäröi- i i i V > t « · t » 15 110408 vä lämpötila 24-48 h, sen jälkeen +4°C:ssa).
Muodostuneet kantajakompleksit puhdistetaan ylimääräisestä materiaalista sakkaroosigradientissa, 10-50 % w/w, 18 5 h, 400 000 rpm (roottori TST 41,14), 10°C. Gradientti tyhjennetään alhaalta 17 fraktioon, jotka analysoidaan kantajapartikkeleihin nähden (3H-kolesteroli ja elektronimikroskopia, EM) alla olevan taulukon 1 mukaisesti. Fraktiot, joissa oli kantajapartikkeleita, kerättiin ja 10 mukana olevien komponenttien tarkka määrä (kolesteroli,
fosfatidylietanoliamiini ja saponiini) määritetään. Kanta japartikkelit voidaan konsentroida esimerkiksi pelle-toimalla (18 h, 40 000 rpm (TST 41.14), 10°C). Pelletoitu kantaja liuotetaan vaadittuun, esimerkiksi 10 mg/ml pi-15 toisuuteen, sopivassa puskurissa ja varastoidaan +4°C
lämpötilassa (1 kk) tai -70°C (pitkäaikainen varastointi), kunnes käytetään.
Taulukko l 20 _
Fraktio nro. Kolesteroli Partikkelit (cpm) (EM) I 30 - .25 2 20 - * 3 27 - 4 41 - : V 5 246 + · 6 11807 +++++ ;V30 7 6802 ++++ 8 2577 +++ 9 968 ++ 10 570 + II 471 ( + ) .35 12 329 13 275 : i 14 197 16 110408 15 139 16 315 17 576 5
Sama vaikutus saadaan, jos LT 15 korvataan LT 15:n ja LT 17:n seoksella.
Esimerkki 2 10 Delfa-kantaiat
Kantaja ei-hydrofobisille lääkkeille valmistetaan seuraavasti. 1000 μΐ lipidiseosta, joka koostuu 10,0 mg:sta kolesterolia (+ 3H-kolesterolin vähäisistä määristä), 15 10,0 mg:sta fosfatidylietanoliamiinia ja 200 mg:sta MEGA- 10:tä (N-dekanoyyli-N-metyyliglukamiini) H20:ssa, sekoitetaan 500 mg:n kanssa Quil A:ta (Spikosid, Iscotec, Lu-leä), liuotettiin H20:een (10 % w/w), tilavuus säädettiin 5-10 ml PBSrllä (0,02 M fosfaatti-puskuroitu suolaliuos, 20 150 mM NaCl, pH 7,4). Seosta inkuboidaan ravistelijassa 4-24 h ennen kuin se analysoidaan 5x5 1 PBS:ää vastaan (ympäröivä lämpötila 24-48 h, sen jälkeen +4°C:ssa). Kanta japartikkelit voidaan konsentroida, analysoida ja varastoida esimerkin 1 mukaisesti. Analyysien tulos anne-25 taan taulukossa 2 alla.
Taulukko 2 t i i r l t ; ' $0 Fraktio nro. CPM (3H-kolesteroli) EM (matriisirakenne) * » · 1 59 2 54 3 71 •35 4 2562 ++ : : 5 22801 +++ : 6 44101 +++ 17 110408 7 17900 +++ 8 5717 +++ 9 2394 ++ 10 1471 + 5 11 970 12 732 13 513 14 676 15 408 10 16 353 17 690
Kuvio 1 osoittaa 200 000 kertaisena suurennuksena frakti-15 on 5 kantajamatriisin, niin. kokoa 30-50 nro halkaisijal taan olevia pallomaisia yhdistyskomplekseja, jotka ovat muodostuneet rengasmaisesta perusrakenteesta, joiden halkaisija on noin 10 nm.
20 Sama vaikutus saavutetaan, jos Quil A:n sijasta käytetään 250 mg kumpaakin B2:ta ja B4b:tä tai 500 mg puhdasta B4b: tä.
Esimerkki 3 25 Delfa-kantaiat I ·
Kantajamatriisi ei-hydrofobisille lääkkeille valmistetaan kuten esimerkissä 2 sekoittamalla 100 μΐ liuosta, joka I i koostuu 1,0 mgrsta stigmasterolia ja 20 mgrsta MEGA-10:tä t · · ; ' $0 HzO:ssa 5,0 mg:n kanssa Quil A:ta.
• · »
Seosta inkuboidaan ravistelijassa 4-24 h ennen kuin se analysoidaan PBS:ää vastaan (ympäröivä lämpötila 24-48 h, sen jälkeen +4°C:ssa). EM varmistaa että kantajakomplek-•35 sit ovat muodostuneet. Muodostuneet kompleksit puhdiste taan sakkaroosigradientissa 10-50 % w/w 18 h 40 000 rpm : · (roottori TST 41,14) 10°C:ssa tai sedimentoimalla 20 % 18 110408 w/w sakkaroosin läpi 18 h 40 000 rpm (roottori TST 41,14) 10°C:ssa. Sedimentoidut kompleksit liuotetaan PBS:ään.
Kuvio 2 osoittaa 75 000 suurennuksessa saadun perusrakenteen, tässä osittain yhdistyneenä.
5
Jos edellä olevassa esimerkissä oleva stigmasteroli korvataan β-sitosterolilla, saadaan monomeerikantajapartik-keleita, joilla on rengasmainen perusrakenne (10-12 nm), kuten kuviossa 3 osoitetaan. Jos stigmasteroli sen sijaan 10 korvataan lanosterolilla, saadaan perusrakenne toisena yhdistyneenä muotona kuvion 4 mukaisesti.
Jos Quil A tässä esimerkissä korvataan LT 15:llä tai LT 15:n ja LT 17:n seoksella, saadaan samanlaiset rakenteet.
15
Esimerkki 4 Delfa-kantaiat
Valmistettu kantajamatriisi ei-hydrofobisille lääkkeille 20 on esimerkin 2 mukaisesti 100 pl:sta liuosta, joka koos tuu 1,0 mg:sta stigmasterolia, 1,0 mg:sta fosfatidyliko-liinia ja 20 mg:sta MEGA-10:tä H20:ssa 5,0 mg:n kanssa Quil A:ta. Seosta inkuboidaan ravistelijassa 4-24 h ennen kuin se analysoidaan 5x5 1 PBS:ää vastaan (ympäröivä läm-25 pötila 24-48 h, sitten +4°C:ssa). Tosiasia, että kantaja- kompleksit ovat muodostuneet, varmistetaan EM:llä. Muo- t · , dostuneet kompleksit puhdistetaan sakkaroosigradientissa ; 10-20 % w/w 18 h 40 000 rpm (roottori TST 41,14) 10°C:ssa '··' · tai sedimentoimalla 20 % w/w sakkaroosin läpi 18 h 40 000 t « « : 30 rpm (roottori TST 41,14) 10°C:ssa. Sedimentoidut komplek- : sit liuotetaan PBS:ään. Kuvio 5 osoittaa 75 000 kertaise na suurennuksena saadun kennomaisen rakenteen.
Jos toisaalta edellä olevassa esimerkissä oleva stigma-“35 steroli korvataan β-sitosterolilla, saadaan pallomaisia ’ kantajapartikkeleita kuvion 6 mukaisesti, joilla on sa manlainen rakenne kuten kuviossa 1 osoitetaan. Jos stig- 19 110408 masteroli sen sijaan korvataan lanosterolilla, saostuu pääosa materiaalista, katso kuvio 7.
Nämä esimerkit osoittavat, että testatuista steroleista 5 stigmasterolit edustavat "parasta" valmistetta, se tar koittaa läpinäkyvää liuosta ilman saostumista fosfolipi-din puuttuessa. Lanosteroli ja β-sitosteroli aikaansaavat vähemmän saostumista EM-valokuvassa osoitettujen kompleksien lisäksi. Kun lisättiin fosfolipidiä, liuos lanoste-10 rolin ja stigmasterolin kanssa, vastaavasti, tuli opali- soivaksi, mikä osoittaa, että suuri osa materiaalista ei muodosta mitään kompleksia Quil A:n kanssa. B-sitosteroli toisaalta muodosti hyvin kuvatun matriisin Quil A:n ja fosfolipidin kanssa.
15
Esimerkki 5 CoO.„-delfa 2 mg CoQ10:tä liuotetaan noin 25 μΐ-.aan kloroformia ja se-20 koitetaan 400 μ1:η kanssa lipidiseosta, joka koostuu 4,0 mg:sta kolesterolia (+ 3H-kolesterolin vähäisistä määristä), 4,0 mg:sta fosfatidylikoliinia ja 80 mg:sta MEGA-10:tä H20:ssa. Kloroformi haihdutetaan varovaisella typ-pi-pulputuksella samalla sekoittaen voimakkaasti seosta.
25 Lämpötila pidetään 25-35°C. Kun kloroformi on poistettu, • · •*\ lisätään 10 mg Quil A:ta (Spikosid) liunneena H20:hon (10 % w/w), tilavuus säädetään 2 ml:ksi PBS:llä [fosfaatti-puskuroitu (0,02 M), 150 mM NaCl, pH 8,4]. Seosta inku-.· ; boidaan ravistelijassa 2-4 h (pimeässä) ennen kuin se ; ',30 dialysoidaan 3x5 1 PBS:ää vastaan (pimeässä, ympäröivä . :: lämpötila).
Muodostuneet CoQ10-kantajakompleksit puhdistetaan ylimää-räisestä materiaalista sakkaroosigradientissa, 10-50 % •35 w/w, 18 h, 400 000 rpm (roottori TST 41,14), 10°C. Gra- : : dientti tyhjennetään alhaalta 17 fraktioon, joista jokai- : nen analysoidaan CoQ10:een (A330) ja delfapartikkeleihin 20 110408 nähden (3H-kolesteroli ja elektronimikroskopia) alla olevan taulukon 1 mukaisesti. Fraktiot, joissa oli CoQ10-del-fa, kerättiin ja CoQ10:n tarkka konsentraatio määritetään. 3H-kolesteroli määritetään ottamalla 50 μΐ näytteitä jo-5 kaisesta gradientin fraktiosta, sekoittamalla 4 ml tui- kenestettä (optiphase Hisafe II, Pharmacia-LKB) ja laskettiin 60 sek β-laskimessa (Rackbeta, LKB). Tulos nähdään taulukossa 3 alla.
10 Taulukko 3
Fraktio- CPM 3H- A330 (CoQ10) EM (matriisi- nro. kolesteroli rakenne) 15 1 22 0,055 2 23 0,056 3 32 0,053 4 30 0,081 5 25 0,080 20 6 1410 0,149 + 7 12120 0,653 +++ 8 9624 0,397 +++ 9 3600 0,167 ++ 10 1513 0,124 + ,25 11 1578 0,289 + « * 12 1023 0,382 ( + ) 13 507 0,357 i 14 408 0,213 : 15 437 0,384 j'' 30 16 275 0,499 T: 17 294 1,225 > · * ···. Kuvio 8 osoittaa 1:75 000 suurennuksena elektronikuvan .35 delfarakenteesta, joka saatiin fraktiossa 7, 30-50 nm, : · samanlainen kuin kuvion 1 valokuvassa.
21 110408
Sama tulos saadaan, jos Quil A:n sijasta käytetään 5 mg kumpaakin B2:ta ja B4b:tä.
Esimerkki 6 5 Amfoterisiini B delfa
Jotta valmistetaan amfoterisiini B delfapartikkeleita, liuotettiin 1 mg amfoterisiini B:tä 75 pl:aan DMSO:ta ja sekoitetaan 10 a) 2 mg kumpaakin kolesterolia ja fosfatidylikoliinia ja sekoitettiin 10 mg:n kanssa B4b:tä (LT 15); b) 3 mg kumpaakin kolesterolia ja fosfatidylikoliinia ja sekoitettiin 15 mg:n kanssa B4b:tä (LT 15); c) 2 mg kumpaakin kolesterolia ja fosfatidylikoliinia ja 15 sekoitettiin 8 mg:n kanssa B4b:tä (LT 15) ja 2 rag:n kans sa B2:ta (LT 17); tai d) 3 mg kumpaakin kolesterolia ja fosfatidylikoliinia ja sekoitettiin 12 mg;n kanssa B4b:tä (LT 15) ja 3 mg;n kanssa B2;ta (LT 17); 20 lml:n tilavuudessa PBS:ää. Tehtiin kompleksit ja ana lysoitiin, kuten esimerkissä 1 on kuvattu.
Fraktioista, jotka saatiin sakkaroositiheysgradientti- sentrifugaatiossa, analysoitiin kolesteroli (cpm), absor- 25 banssi 405 nm:ssä (amfoterisiini B) ja rakenne (EM) ja * * osoitettiin, että amfoterisiini B liittyi tehokkaasti * ' delfapartikkeleihin. Vain LT 15;n ja amfoterisiini B;n
• käyttö tuottaa jonkin verran aggregoitunutta delfaa, LT
III 17-lisäys auttoi antamaan ei-aggregoituneita partikkelei- :'*3t0 ta.
• * · » · ·
Kuvio 9 osoittaa amfoterisiini B;n delfapartikkeleiden, jotka on valmistettu edellä olleen menetelmän b) mukaan, » * elektronimikrokuvan noin 75 000 suurennuksena; '135
Kuvio 10 osoittaa graafisen kuvion absorbanssista ja las-kuista, vastaavasti, jotka saatiin amfoterisiini B;n del- i * > 22 110408 fapartikkeleiden, jotka on valmistettu edellä olleen mainitun menetelmän b) mukaan, erilaisten fraktioiden analyysistä; 5 Kuvio 11 osoittaa amfoterisiini B:n delfapartikkeleiden, jotka on valmistettu edellä olleen menetelmän d) mukaan, elektronimikrokuvan noin 75 000 suurennuksena;
Kuvio 12 osoittaa graafisen kuvion absorbanssista ja las-10 kusta, vastaavasti, jotka saatiin amfoterisiini B:n del fapartikkeleiden, jotka on valmistettu edellä olleen mainitun menetelmän d) mukaan, erilaisten fraktioiden analyysistä.
15 Suurempi osuus LT 17:ää antaa kasvaneen määrän alayksi köitä (10-12 nm), jotka graafisessa kuviossa kuviossa 12 voidaan nähdä toisena piikkinä.
Esimerkki 7 20 LHRH-delfa LHRH (luteinizing hormone releasing hormone, "luteini- soivan hormonin vapautumista säätelevä hormoni") konju- goidaan kantajamatrlisiin konjugaation periaatteiden mu- 25 kaisesti kysteiinin kautta maleidoheksanoyyli-N-hydrok- * · sisukkiini-imidiesterin (MHS) avulla, jonka Lee et ai ‘ ' ovat kuvanneet, Molecular Immunology, voi. 17 sivut 749- ; 756 (1980).
t « » ; *30 Peptidi pelkistetään seuraavasti. 1 mg peptidiä liuote- ;’j‘; taan 400 μΙζΆΆΠ 0,1 M natriumfosfaattipuskuria pH 8,0.
Lisätään 250 x moolinen ylimäärä ditiotreitolia (DTT) ja seosta inkuboidaan ympäröivässä lämpötilassa 30-60 min.
-.1 Peptidi erotetaan DTT:stä geelisuodatuksella Sephadex G- * * » ’.35 10:ssä (Pharmacia, Uppsala), joka on tasapainotettu N2- ':kyllästetyllä 0,1 M natriumfosfaattipuskurilla, josta on ·:··: ilma poistettu, pH 6,66, jossa on 0,1 M EDTA.
> i t I * 23 110408
Esimerkin 2 mukainen kantajamatriisi MHS-modifioidaan seuraavasti: 2,0 mg kantajaa 450 piissä 0,1 M natriumfos-faattipuskuria, pH 6,66, sekoitetaan 10-100 x moolisen 5 ylimäärän kanssa MHS:ää (50 piissä DMS0:ta) fosfatidyy- lietanoliamiinin matriisissa. Reaktioseosta sekoitetaan kevyesti ympäröivässä lämpötilassa 1 h. Ylimäärä MHS:ää ja muita reaktiotuotteita poistetaan geelisuodatuksella Sephadex G-250:ssä (Pharmacia, Uppsala), joka on tasapai-10 notettu N2-kyllästetyllä 0,1 M natriumfosfaattipuskuril- la, josta on ilma poistettu, pH 6,66, jossa on 0,1 M ED-TA. Liuos, jossa on pelkistynyt peptidi, sekoitetaan MHS-aktivoidun kantajan kanssa peptidien 5 x moolisena ylimääränä fosfatidylietanoliamiiniin. Konjugaation annetaan 15 jatkua sekoittamisen aikana 18-24 h.
LHRH-delfa puhdistetaan ylimääräisestä materiaalista sak-karoosigradientissa, 10-50 % w/w, 18 h, 400 000 rpm (TST 41,14), 10°C. Gradientti tyhjennetään alhaalta 17 frakti-20 oon, joista jokainen analysoidaan LHRHihon ja delfapar- tikkeleihin nähden (3H-kolesteroli ja elektronimikroskopia). Fraktiot, joissa oli LHRH-delfapartikkeleita, kerättiin ja pitoisuus määritetään.
25 Esimerkki 8 * < f 24 110408 lektronimikroskopia), katso taulukko 4 alla ja biotiinin suhteen. Fraktiot, joissa oli biotiini-delfapartikkelei-ta, kerättiin ja määrä määritetään.
5 Taulukko 4
Fraktio nro CPM (3H-kolesteroli) EM (matriisirakenne) I 45 10 2 22 3 41 4 24 5 1314 + 6 14993 ++ 15 7 26315 +++ 8 8239 ++ 9 3644 ++ 10 1704 + II 1024 20 12 673 13 523 14 321 15 230 16 170 25 17 154 > * ΠΊ ‘Keräymästä, joka koostuu fraktioista 5-10, analysoidaan ; biotiini ELISA:ssa.
t : » * i
Vuohi:hiiri anti-biotiini (monoklonaalinen) 10 g/ml 50 i * * * mM:ssa karbonaattipuskurissa, pH 9,6, 4°C yön yli.
\ * » ; Laimennustestit (keräymä ja ei-biotinyloitu matriisi): V3*5 1/50, 1/150, 1/450 jne. PBS Tween:ssä (0,05 %), 1 h, ym- ,·Ί päröivä lämpötila, ravistelijassa.
> ; i 25 110408
Konjugaatti: avidiini-HPR (piparjuuriperoksidaasi) 1/2000 PBS Tween:ssä (0,05 %), 1 h, ympäröivä lämpötila, ravisteli jassa.
5 Kehitys: TMB (tetrametyylibentsidiini) 0,10 mg/ml ja H202 (0,006 %) 0,1 M asetaatissa, pH 6,0.
Taulukko 5 10 Lairaennustesti ABS (keräymä) ABS (kontrollimatriisi) 1/50 1,997 0,097 1/150 2,107 0,078 1/450 1,874 0,106 15 1/1350 1,201 0,099 1/4050 1,816 0,100 1/12150 0,206 0,089 1/36450 0,096 0,090 1/109350 0,103 0,115 20 _
Seuraavat testit osoittavat lääkkeen jakaantumisen kehossa annettaessa deltan avulla keksinnön mukaisesti.
25 Biologiset testit osoittamaan, että kantaja on iramunolo- aisesti inertti LT 15 I · · | ; LT 15 on Quil A:n fraktio, josta on kulutettu adjuvantti i » · ;;*30 loppuun, mikä on saatu Karlshamns Lipidteknik AB:stä.
* · ’ Tavanomainen saponiiniadjuvantti, kuten Quil A, mahdol listaa immuunivasteen antigeeniin, kun sekoitetaan anti-: ’ : geenin kanssa ennen esim. ihonalaista injektiota. Jotta :‘£‘5 varmistetaan, että LT 15:sta (joka on hyvin samanlainen B4b-valmisteen kanssa) on kulutettu adjuvanttiaktiiviset saponiinit, suoritettiin seuraava testi adjuvanttiaktii- 26 110408 visuutta varten hiirissä.
Kolme viiden hiiren ryhmää immunisoitiin 1 μg:lla prote-iinimisellejä, jotka oli tehty influenssaviruksen glyko-5 proteiineista (Lövgren et ai 1987) plus: a) 10 μg LT 15
b) 10 μg Quil A
c) suolaliuos 10 Kaksi viikkoa sen jälkeen, kun hiiret oli immunisoitu, niistä kerättiin veri ja seerumista määritettiin vasta-aineet virusproteiineja vastaan (standardi ELISA-tek-niikka, joka käyttää mikrotiinilevyjä, jotka on päällystetty antigeenillä ja kaupallisella entsyymi-konjugoidul-15 la kanin anti-hiiri valmisteella hiiren immunoglobulii- nien havaitsemiseksi). Alla taulukossa 6 nähdyt tulokset osoittavat, että LT 15, samoin kuin pelkkä suolaliuos ei mahdollistanut vasta-aineen vastetta proteiinimisellejä vastaan verrattuna Quil A-valmisteeseen, joka ei ollut 20 loppuun käytetty.
Taulukko 6
Ryhmä Vasta-aineen määrä (mielivaltainen yksikkö) 25 _ a) 714+-397 » b) 1055+-347 .! C) 800+-367 i · :·δό I · * : Erilaiset biotiini-kantaiat V : Biotiinin antaminen hiirelle käyttämällä erilaisia kanta jia. Jotta vahvistetaan, että kantajamatriisi on immuno-logisesti inertti, kun käytetään lääkekantajana, tehtiin :’$§ vertaileva testi biotiinin kanssa, jota annettiin biotii- ' . ni-delfana ja immunologisesti aktiivisten kantajien kans sa. Hiiret injektoitiin ihonalaisesti biotiinilla, jota 27 110408 immunologisesti aktiiviset kantajat kantoivat - iscom ja miselli vastaavasti - jossa oli pintaproteiineja influenssaviruksesta. Sen jälkeen, kun hiiret oli immunisoitu 3 Mg:11a kantaja-biotiinia, oli niillä korkea (iscom) tai 5 keskikorkea (miselli) seerumitiitterit biotiinia vastaan.
8 viikkoa myöhemmin hiirille annettiin "immunisoivan aineen lisäannos" biotiini-delfa-partikkeleiden kanssa. 2 viikkoa myöhemmin otettiin seeruminäytteet ja vasta-aineiden määrää biotiinia vastaan verrattiin ennen ja jäl-10 keen biotiini-delfa-partikkeleiden antamista. Injektoi tiin kontrolliryhmä eläimiä biotiini-delfalla kummassakin tapauksessa. Kuten ilmenee taulukosta 7, ei biotiini-del-fan antamisella ollut vaikutusta vasta-aine-vasteeseen biotiinia vastaan, ei edes niissä tapauksissa, kun eläi-15 met oli ensisijaisesti immunisoitu biotiinia vastaan, joka oli liittynyt immunologisesti aktiiviseen kantajaan.
Sen jälkeen kun oli vahvistettu aktiivisella kantajalla, kohosivat seerumitiitterit biotiinia vastaan 5-10 kertaisesti (ei näy taulukossa 7).
20
Taulukko 7
Primäärinen Sekundäärinen antaminen antaminen 25 _
Biotiini- Vasta-aine- Biotiini- Vasta-aine- formulaatio vaste bio- formulaatio vaste biotii- tiinia vastaan nia vastaan * · :.3Ö Biotiini 2999+467 Biotiini 3101±317 • iskom (1824-3781) delfa (2301-3476) v : (33 hiirtä) (11 hiirtä)
Biotiini 973±470 Biotiini 850-486 /35 miselli (291±1971) delfa (398-1978) • (33 hiirtä) (11 hiirtä) 5 28 110408
Biotiini 59+13 Biotiini 49±5 delfa (42-89) delfa (42-57) (34 hiirtä) (11 hiirtä)
CoO,„-delfan autoaradioarafia hiiressä
Delfa-partikkelit valmistettiin 1 mg:11a CoQ10:tä, 2 mg: 11a 3H-koleterolia, 2 mg:11a fosfatidylikoliinia, 10 mg: 11a MEGA-10:tä ja 10 mg: 11a LT 15:ta 1 ml H20-tilavuudes-10 sa esimerkin 5 mukaisesti. Fraktiot 5-7 kerättiin ja ko- lesterolisisältö määritettiin 3H-aktiivisuuden avulla o-levan 0,73 mg kolesterolia/ml. CoQ10-sisältö arvioitiin < 0,1 mg/ml.
15 4 naarashiirtä injektoitiin ihonalaisesti kaulaan 0,4 ml:11a edellä ollutta seosta. Hiiret uhrattiin ja leikattiin autoradiografiaa varten 15 min, 2 h, 6 h ja 24 h kuluttua.
20 24 h kuluttua oli partikkeleita yhä läsnä injektiokohdas- sa, mikä osoittaa, että kolesteroli on liittynyt partikkeleihin. Verrattuna vapaan kolesterolin antamiseen, havaittiin korkeat kolesterolitasot maksassa ja veressä; silti enemmän keuhkoissa; ja vielä enemmän pernassa, luu-25 ytimessä ja paikallisissa imusuonielimissä. Havaittiin että taso veressä kohosi jatkuvasti 24 h:iin asti.
« · · · · ,, , Tästä voidaan päätellä, että kolesteroli on pääasiassa * « * : ·' partikkeliin sitoutunut; jos injektoidaan puhdasta koles- t * • i t •30 terolia, on lisämunuaisen kuoressa kolesterolipitoisuut- : ,· ta.
» « *
CoO.„:n antaminen hiirelle >*': Isopreeniketjun pituus Coentsyymi Q:ssa (CoQ) vaihtelee ,'35 eri eläinlajeissa. CoQ9:ssä on täten 9 isopreeniyksikköä • t ketjussa ja CoQ10:ssä on 10 yksikköä. Ihminen tuottaa vain * · « » »
CoQ10:tä, kun taas rotta ja hiiri tuottavat noin 95 %
« t I t I
III
• · 29 110-408
CoQ9:ää ja 5 % CoQ10:tä. Johtuen alhaisesta endogeenisestä CoQi0-pitoisuudesta, valittiin hiiri kokeeseen seuraavassa testissä: 5 15 NMRI-hiirtä (naaraspuolisia) 19,20 g + 0,90 g injek toitiin ihonalaisesti 14,6 μg:lla CoQ10-delfaa (0,8 mg/ kg), joka oli B2+B4b:n kanssa Quil A:n sijasta esimerkin 5 mukaisesti, s.o. 0,2 ml formulaatiota, jossa on 73 μg/ ml CoQ10:tä. T=0, 0,5, 1, 3, 5 ja 8 h otettiin verinäyt-10 teet ja T= 0, 0,5, 3 ja 8 h elimet myös poistettiin (sy dän, maksa, munuaiset ja perna). Jotta mitataan endogee-ninen taso, 6 (hiiren) kontrolliryhmä injektoitiin tyhjillä delfakomplekseilla, s.o. vain kantajat vastaavana määränä. Tästä ryhmästä otettiin verinäytteet ja elimet T 15 = 0,5 ja 7 h. Vertailuna otettiin myös seerumi ja elimet 3 ei-käsitellystä hiirestä. Veri sentrifugoitiin ja plasma ja elimet pidettiin -20°C lämpötilassa kunnes analysoitiin. CoQlt):n kemialliset analyysit suoritettiin nes-tekromatografiällä P-0 Englundin kuvaaman menetelmän mu-20 kaan, J. Chromatogr. 425 (1988), 87-97. Elinnäytteet ho mogenisoitiin Potter-S homogenisaattorilla 10 tilavuudessa 1-propaania, jossa oli sisäinen standardi. Nestefaasi injektoitiin nestekromatografiin. Kemialliset analyysit osoittivat CoQ10-sisällön kasvua seerumissa ja sydämessä, 25 katso taulukko 8. Jotta analysoidaan kolesteroli, sekoi tetaan näyte, 1 ml, nestefaasista 8 ml:n kanssa tuikenes-' tettä (Orphphase Hisafe II, Pharmacia LKB) ja lasketaan | ' 2000 sek β-laskimessa (Rackbeta, LKB). Mitattaessa radio- * * » ·* =’ aktiivisuutta elinnäytteissä (3H-kolesteroli) rekisteröinti tiin selvästi erotettava radioaktiivisuus vain maksanäyt- •’/ teissä.
* * * I t *
Kokeesta voidaan päätellä seuraavaa: * koska CoQ10-osa lisääntyy jatkuvasti seerumissa 8 h ja ,35 mahdollisesti pidempään, RES ei ole eliminoinut välittö- • mästi delfa-komplekseja ‘ ‘ * delfa-partkkelin oletetaan jakavan CoQ10:n sydämelle,
. M > I
f · > 30 110408 koska CoQ10 on taipuvainen lisääntymään sydämessä ilman vastaavaa, löydettyjen kompleksien koleterolin lisääntymistä * delfa-kompleksit ja/tai mukana oleva kolesteroli eli-5 minoidaan todennäköisesti maksan kautta, mikä osoitti korkeimman radioaktiivisuuden asteen.
10 15 * t t rt t I M 1 I 4 » t 1 ? J (
> f I
• * I
* t f
« I
I f f I » « > » · » » » » s f * * I t » I ( »
t I
• » I
* > I
110408 -η ^^•ΗΗΜίηιηοοο σιοοοοσιΐη^π β β nion^roHM'CMOj Ηη·^«)Ησ>οοη Ρ \ ΟΟΟΟΟΟΟΟΟ ΟΟΟΟΟι—ΙΗΗ ί-ί tT> “-“-'•“'•'•'“•r 0)¾ ΟΟΟΟΟΟΟΟΟ οοοοοοοο 0)
Ui οοοοοοοοοοοοοοοοοοο ΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΓΜΟΟΟΟΟ C O' otontM^ri^raiNnHconiiiNW'fcooi ö t5> HOHHHor^o^rsiinHHcyior^int^cyi >1 j. fNJ-^CNJrHHH^H^H^HH ^ ^
Ui ΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟ o3 Cr inHinvooHrocoo'i'^j'ovoHmoh'inr^
Ui \ OOOHt^^OOr^OCN^t^OHOOOOOHO
,¾ ^J1 S«.h,SSSKSV^NK^^<h<k.SKV
(d i corMcniooaojcnoaronnogrororocNjcMforo 2
H
M p 0)
Ui -h Cp οοοοοοοοοοοοοοοοοοο td\ οοοοοοοοοοοοοοοοοοο 3 j. ιησίΓ^οοιΠΗίη'ίοιηοιηοίΝΓ^οοοοΗ
Π Sk,k,ki.KSSSK>>SKSS»>S>hSS
0 HOCPi—IOi—lOr-IOi—ItNiOOHOOr-IrHi—I
2 rl rl rHi—I t—l r-l r-li—IrHrHrHr-I ip ιΗ ι—I ι—I rH t—I
(0 ΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟ G Cp r^orvjcM^iMr-.r^Lnor^ooooinro^oo
P \ r^HooioootyiCMCNntvinooorjHoocN
' j (¾¾ wjp'VOior^oor't^r^rvcovoiNpvrv.cooot^oo : \ ’ f0 , . M in tn in o o o intninooooooo ;;; ·Η ΐ «''•''•»•lii '·· c O O O f·- P- Ι-- ΟΟΟΗΗΗΟΟΟΙΤ) * ' >1 >1 >1 -p -p -p
• ' · rH rH r—I
<D 0) 0)
00 —v -P -P P
• -H -H -H
... O p Ui Ui Ui :-:,¾ -P ·> - 1· 1> - :(d :t0 :(Ö Λί c.....,¾ ,¾ ,¾
0 -H O
• · ί H P ,¾ -H -H -H
• 0 -HO — (D <D 0) • fö -HP oHCNm^tnor^cocp
ι·,>· EH ffi G tHCNCO^LOVOr^COCPi—It—I tH <—I f—I (—I i—It—li—li—I
·’ ί ir> o tn o
; H H N
110408 ίο n ιο ΰ n CO t? o «o o
ι-l CM CM CM CM
O O O O O
o o o o o o o o o o
h Cl io 10 CO
fc*. *» LOHOtTC"-'i* M* M* o o o o o
LO M* CM CO CM
dl N O O N
k. k. ^ k. S
Γ0 CO *3* co rg rs] ro o o o o o
O ID O O O
h σ» φ oo oo
^ K k» k> S
1—I 0Ί !—I t—i 1—t
rH rH rH rH
o o o o o
^ <i (Tl h (M
CM H o H
h CO CO h ! o o o o o ! " · LO LO 00 00 00 I » » O H CM Π tl·
CM CM CM CM CM
• _ ‘ ·' lO
Claims (12)
1. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, joka koostumus käsittää rakennetta antavan matriisin partikkeleita kantajana, johon on yhdistetty farmaseuttisesti ak-5 tiivinen aine, joilla partikkeleilla on rengasmainen perus rakenne, joka voi muodostaa pallomaisia nanopartikkeleita, erityisesti kooltaan 30-50 nm olevia partikkeleita, tunnettu siitä, että rakennetta antava matriisi on kompleksi, joka on muodostettu yhdestä tai useammasta saponiiniaineosasta, jolio la ei ole adjuvanttivaikutusta, ja kolloidisessa muodossa olevasta sterolista, ja että farmaseuttisesti aktiivinen aine sekoitetaan saponiiniaineosaan tai -aineosien ja sterolin kanssa farmaseuttisesti aktiivisen aineen yhdistämiseksi matriisiin.
2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att matrisen även omfattar en eller flera andra lipider, speciellt fosfolipider. 1TÖ408
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että matriisi myös käsittää yhden tai useamman muun lipidin, erityisesti fosfolipidejä.
3. Förfarande enligt patentkrav 1 eller 2, kannetecknat av att de sfäriska partiklarna har en storlek av cirka 35-42 nm.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pallomaisten partikkelien koko on 35-42 nm. ' I · ’ " 20 4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu t · i . * · siitä, että pallomaisten partikkelien koko on noin 40 nm.
4. Förfarande enligt patentkrav 3, kännetecknat av att de 5 sfäriska partiklarna har en storlek av cirka 40 nm.
5. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-4, kännetecknat av att sterolen är kolesterol.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että steroli on kolesteroli. t » · * 6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että saponiiniaineosa on yksi tai useampi saponiineista B4b, B2, LT15 tai LT17.
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen menetelmä, » · : tunnettu siitä, että matriisi on muodostettu kolesterolista ja saponiinista B4b tai LT15, mahdollisesti yhdessä sapo- 30 niinin B2 tai LT17 kanssa ja lisäksi sisältää fosfolipidin. I I 110408
8. Jonkin patenttivaatimuksista 2-7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fosfolipidi on fosfatidyylietanoli-amiini tai fosfatidyylikoliini.
9. Jonkin patenttivaatimuksista 1-8 mukainen menetelmä, 5 tunnettu siitä, että farmaseuttisesti aktiivinen aine on yhdistetty matriisiin kovalenttisilla tai hydrofobisilla sidoksilla.
10. Jonkin patenttivaatimuksista 1-9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että farmaseuttisesti aktiivinen aine on
10 CoQ10.
11. Jonkin patenttivaatimuksista 1-9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että farmaseuttisesti aktiivinen aine on amfoterisiini B.
12. Jonkin patenttivaatimuksista 1-11 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että saponiini ja kolloidisessa muodossa oleva steroli sekoitetaan keskenään ennen farmaseuttisesti aktiivisen aineen lisäämistä. t » · i · • «m» • * · • t • « • .*. 1. Förfarande för framställning av en farmaceutisk kompo- • » * · ;\20 sition omfattande partiklar av en strukturgivande matris • · ♦ » t som en bärare tili vilken har förenats en farmaceutiskt ak- • · · tiv substans, vilka partiklar har en ringformig basstruktur , , som kan bilda sfäriska nanopartiklar, speciellt med en s » t '·]' storlek av 30-50 nm, kännetecknat av att den strukturgivan- • · ">25 de matrisen är ett komplex bildat av en eller flera sapo- Γ’,, ninkomponenter, vilka icke har adjuvanteffekt, och en ste- ·*”» rol i kolloidal form, och att en farmaceutiskt aktiv sub- * · ' tlk stans blandas med saponinkomponenten eller -komponenterna ti» • och sterolen för att förena den farmaceutiskt aktiva sub- * t > • · ‘...30 stansen tili matrisen.
6. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-5, kännetecknat av att saponinkomponenten är en eller flera av saponi- 10 nerna B4b, B2, LT15 eller LT17.
7. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-6, kännetecknat av att matrisen är bildad av kolesterol och saponin B4b eller LT15, möjligen i kombination med saponin B2 eller LT17, och ytterligare omfattar en fosfolipid. 15
8. Förfarande enligt nägot av patentkraven 2-7, känneteck nat av att fosfolipiden är fosfatidyletanolamin eller fos-fatidylkolin. I·»
·;··· 9. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-8, känneteck- nat av att den farmaceutiskt aktiva substansen är förenad : .2.0 tili matrisen medelst kovalenta eller hydrofoba bindningar. • · * • · · · I I
· • · ♦ • ·* 10. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-9, känneteck- f M · nat av att den farmaceutiskt aktiva substansen är CoQ10.
.·. : 11. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-9, känneteck- • * · ..." nat av att den farmaceutiskt aktiva substansen är amfoteri- • · '12*5 cin B.
• ♦ * ,*·*, 12. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-11, känne- • · · • tecknat av att saponinen och sterolen i kolloidal form • · · • .* blandas med varandra före tillsatsen av den farmaceutiskt • » · ·...· aktiva substansen.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9101665 | 1991-05-31 | ||
| SE9101665A SE502569C2 (sv) | 1991-05-31 | 1991-05-31 | Användning av en immunologiskt inert matris av en sterol och saponiner som kan bilda sfäriska nanopartiklar med snäv storleksfördelning som läkemedelsbärare, partiklar, komposition samt kit |
| SE9200367 | 1992-06-01 | ||
| PCT/SE1992/000367 WO1992021331A1 (en) | 1991-05-31 | 1992-06-01 | Pharmaceutical carrier |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI935314A FI935314A (fi) | 1993-11-29 |
| FI935314A0 FI935314A0 (fi) | 1993-11-29 |
| FI110408B true FI110408B (fi) | 2003-01-31 |
Family
ID=20382906
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI935314A FI110408B (fi) | 1991-05-31 | 1993-11-29 | Menetelmä rakennetta antavan matriisin käsittävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5603958A (fi) |
| EP (1) | EP0587659B1 (fi) |
| JP (1) | JPH07500084A (fi) |
| KR (1) | KR100227302B1 (fi) |
| AT (1) | ATE152620T1 (fi) |
| AU (1) | AU680807B2 (fi) |
| CA (1) | CA2103447C (fi) |
| DE (1) | DE69219600T2 (fi) |
| ES (1) | ES2103946T3 (fi) |
| FI (1) | FI110408B (fi) |
| NO (1) | NO306539B1 (fi) |
| SE (1) | SE502569C2 (fi) |
| WO (1) | WO1992021331A1 (fi) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6699885B2 (en) | 1996-01-04 | 2004-03-02 | The Curators Of The University Of Missouri | Substituted benzimidazole dosage forms and methods of using same |
| US6645988B2 (en) | 1996-01-04 | 2003-11-11 | Curators Of The University Of Missouri | Substituted benzimidazole dosage forms and method of using same |
| US5840737A (en) | 1996-01-04 | 1998-11-24 | The Curators Of The University Of Missouri | Omeprazole solution and method for using same |
| US6489346B1 (en) | 1996-01-04 | 2002-12-03 | The Curators Of The University Of Missouri | Substituted benzimidazole dosage forms and method of using same |
| EP1304041B8 (en) * | 1996-07-08 | 2005-06-01 | Idemitsu Kosan Co., Ltd. | Feed composition for poultry |
| SI1037634T1 (sl) * | 1997-12-08 | 2006-02-28 | Altana Pharma Ag | Peroralna dajalna oblika, ki obsega inhibitor protonske crpalke (npr. pantoprazol) |
| US6326507B1 (en) * | 1998-06-19 | 2001-12-04 | Trustees Of Dartmouth College | Therapeutic compounds and methods of use |
| JP2002527367A (ja) * | 1998-10-14 | 2002-08-27 | コグニス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | ナノスケールのステロールおよびステロールエステルの使用 |
| JP4974414B2 (ja) * | 1999-05-13 | 2012-07-11 | ワイス・ホールディングズ・コーポレイション | アジュバント混合製剤 |
| US7435755B2 (en) * | 2000-11-28 | 2008-10-14 | The Trustees Of Dartmouth College | CDDO-compounds and combination therapies thereof |
| US7713942B2 (en) | 2001-04-04 | 2010-05-11 | Nordic Vaccine Technology A/S | Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides |
| JP2004528321A (ja) * | 2001-04-04 | 2004-09-16 | ノルディック ワクチン テクノロジー アクティーゼルスカブ | ステロールおよびサポニンを含むポリヌクレオチド結合複合体 |
| US20040126900A1 (en) * | 2001-04-13 | 2004-07-01 | Barry Stephen E | High affinity peptide- containing nanoparticles |
| EP1465615B1 (en) * | 2002-01-15 | 2012-08-01 | Trustees of Dartmouth College | Tricyclic-bis-enone derivatives and methods of use thereof |
| EP1511468A1 (en) * | 2002-06-10 | 2005-03-09 | Elan Pharma International Limited | Nanoparticulate sterol formulations and sterol combinations |
| JP2006503072A (ja) * | 2002-10-02 | 2006-01-26 | ノルディック ワクチン テクノロジー アクティーゼルスカブ | ワクチン接種用組成物 |
| US8993599B2 (en) | 2003-07-18 | 2015-03-31 | Santarus, Inc. | Pharmaceutical formulations useful for inhibiting acid secretion and methods for making and using them |
| PL1718283T3 (pl) | 2004-01-22 | 2013-08-30 | Univ Miami | Miejscowe preparaty koenzymu Q10 i sposoby ich zastosowania |
| CN100339083C (zh) * | 2004-02-24 | 2007-09-26 | 范敏华 | 一种黄体酮液体胶囊及其制备方法 |
| US8906940B2 (en) | 2004-05-25 | 2014-12-09 | Santarus, Inc. | Pharmaceutical formulations useful for inhibiting acid secretion and methods for making and using them |
| US8815916B2 (en) | 2004-05-25 | 2014-08-26 | Santarus, Inc. | Pharmaceutical formulations useful for inhibiting acid secretion and methods for making and using them |
| CN100398151C (zh) * | 2005-02-18 | 2008-07-02 | 浙江大学 | 人参皂甙纳米微粒及其制备方法和用途 |
| US20110098177A1 (en) * | 2006-03-28 | 2011-04-28 | Novus International Inc. | Methods and compositions of plant micronutrients |
| US20080015218A1 (en) * | 2006-07-12 | 2008-01-17 | Novus International Inc. | Antioxidant combinations for use in ruminant feed rations having a fat source |
| US8691843B2 (en) * | 2006-07-12 | 2014-04-08 | Novus International, Inc. | Antioxidant combinations for use in ruminant feed rations |
| EP2094651A1 (en) * | 2006-11-17 | 2009-09-02 | Trustees Of Dartmouth College | Synthesis and biological activities of new tricyclic-bis-enones (tbes) |
| EP2094242A4 (en) * | 2006-11-17 | 2009-12-23 | Novus Int Inc | IN A MATRIX EMBEDDED COMPOSITIONS WITH ORGANIC ACIDS AND FATTY ACIDS |
| US8299046B2 (en) * | 2006-11-17 | 2012-10-30 | Trustees Of Dartmouth College | Synthetic triterpenoids and tricyclic-bis-enones for use in stimulating bone and cartilage growth |
| US20080119552A1 (en) * | 2006-11-17 | 2008-05-22 | Novus International Inc. | Matrix-embedded compositions having organic acids and fatty acids |
| US8921340B2 (en) | 2006-11-17 | 2014-12-30 | Trustees Of Dartmouth College | Methods for using synthetic triterpenoids in the treatment of bone or cartilage diseases or conditions |
| EP2094278B1 (en) * | 2006-11-20 | 2017-04-05 | Duecom | Use of lipid containing particles comprising quillaja saponins for the treatment of cancer |
| AU2008228764B2 (en) | 2007-03-22 | 2014-05-08 | Berg Llc | Topical formulations having enhanced bioavailability |
| CN101790305A (zh) * | 2007-07-03 | 2010-07-28 | 诺华丝国际股份有限公司 | 可发酵碳水化合物水平低的仔猪饲料配给 |
| WO2009023845A2 (en) * | 2007-08-15 | 2009-02-19 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Combination therapy with synthetic triterpenoids and gemcitabine |
| US8404714B2 (en) * | 2008-01-04 | 2013-03-26 | Novus International, Inc. | Combinations to improve animal health and performance |
| MX2010007610A (es) | 2008-01-11 | 2010-12-14 | Reata Pharmaceuticals Inc | Triterpenoides sinteticos y metodos de uso en el tratamiento de enfermedad. |
| WO2009126764A1 (en) | 2008-04-11 | 2009-10-15 | Cytotech Labs, Llc | Methods and use of inducing apoptosis in cancer cells |
| AU2009237578C1 (en) | 2008-04-18 | 2014-12-04 | Reata Pharmaceuticals, Inc. | Antioxidant inflammation modulators: oleanolic acid derivatives with saturation in the C-ring |
| US8071632B2 (en) * | 2008-04-18 | 2011-12-06 | Reata Pharmaceuticals, Inc. | Antioxidant inflammation modulators: novel derivatives of oleanolic acid |
| MX339476B (es) | 2008-04-18 | 2016-05-27 | Reata Pharmaceuticals Inc | Compuestos que incluyen un nucleo farmaceutico antiinflamatorio y sus metodos de uso. |
| PL2271658T3 (pl) * | 2008-04-18 | 2017-05-31 | Reata Pharmaceuticals, Inc. | Przeciwutleniające modulatory zapalenia: c-17 homologowane pochodne kwasu oleanolowego |
| NZ588710A (en) | 2008-04-18 | 2012-12-21 | Reata Pharmaceuticals Inc | Antioxidant inflammation modulators: oleanolic acid derivatives with amino and other modifications at C-17 |
| EP2309860B1 (en) * | 2008-07-22 | 2014-01-08 | Trustees of Dartmouth College | Monocyclic cyanoenones and methods of use thereof |
| KR20180018833A (ko) | 2009-05-11 | 2018-02-21 | 베르그 엘엘씨 | 외대사 변환인자, 다차원 세포내 분자 또는 환경 영향인자를 사용하여 종양성 장애를 치료하는 방법 |
| US20110020914A1 (en) * | 2009-07-24 | 2011-01-27 | Novus International Inc | Methods for enhancing growth of organisms in an aqueous growth medium |
| SG183508A1 (en) * | 2010-03-12 | 2012-10-30 | Berg Pharma Llc | Intravenous formulations of coenzyme q10 (coq10) and methods of use thereof |
| ES2762451T3 (es) | 2011-04-04 | 2020-05-25 | Berg Llc | Tratamiento de tumores del sistema nervioso central con coenzima Q10 |
| PE20140628A1 (es) | 2011-06-17 | 2014-05-30 | Berg Llc | Composiciones farmaceuticas inhalables |
| ES2673957T5 (es) | 2011-10-03 | 2021-12-15 | Croda Int Plc | Nanopartículas, procedimiento para la preparación y utilización de las mismas como portadoras de moléculas anfipáticas o hidrofóbicas en el campo de la medicina, incluyendo el tratamiento del cáncer, y compuestos de tipo alimentario |
| US8921419B2 (en) | 2012-05-08 | 2014-12-30 | Trustees Of Dartmouth College | Triterpenoids and compositions containing the same |
| BR112015025424A2 (pt) | 2013-04-08 | 2017-07-18 | Berg Llc | tratamento de câncer usando terapias de combinação de coenzima q10 |
| AU2014315186B2 (en) | 2013-09-04 | 2020-02-27 | Berg Llc | Methods of treatment of cancer by continuous infusion of coenzyme Q10 |
| CN110198718B (zh) | 2016-11-08 | 2023-01-10 | 里亚塔医药控股有限责任公司 | 使用甲基巴多索隆或其类似物治疗阿尔波特综合征的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3775783D1 (de) * | 1986-01-14 | 1992-02-20 | Nederlanden Staat | Verfahren zur herstellung immunologischer komplexe und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzung. |
| EP0368992B1 (en) * | 1988-05-31 | 1995-02-15 | Biotechnology Australia Pty. Ltd. | Actions of hormones |
| NZ230747A (en) * | 1988-09-30 | 1992-05-26 | Bror Morein | Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina |
| US5077057A (en) * | 1989-04-05 | 1991-12-31 | The Regents Of The University Of California | Preparation of liposome and lipid complex compositions |
| GB8919819D0 (en) * | 1989-09-01 | 1989-10-18 | Coopers Animal Health | Complexes having adjuvant activity |
-
1991
- 1991-05-31 SE SE9101665A patent/SE502569C2/sv not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-06-01 CA CA002103447A patent/CA2103447C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-06-01 AU AU19251/92A patent/AU680807B2/en not_active Ceased
- 1992-06-01 KR KR1019930703641A patent/KR100227302B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-06-01 JP JP4511348A patent/JPH07500084A/ja active Pending
- 1992-06-01 WO PCT/SE1992/000367 patent/WO1992021331A1/en active IP Right Grant
- 1992-06-01 DE DE69219600T patent/DE69219600T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-06-01 EP EP92911403A patent/EP0587659B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-06-01 AT AT92911403T patent/ATE152620T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-06-01 ES ES92911403T patent/ES2103946T3/es not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-11-29 FI FI935314A patent/FI110408B/fi active
- 1993-11-29 NO NO934315A patent/NO306539B1/no not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-05-31 US US08/455,403 patent/US5603958A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69219600T2 (de) | 1997-10-02 |
| US5603958A (en) | 1997-02-18 |
| CA2103447A1 (en) | 1992-12-01 |
| NO934315D0 (no) | 1993-11-29 |
| SE9101665D0 (sv) | 1991-05-31 |
| WO1992021331A1 (en) | 1992-12-10 |
| DE69219600D1 (de) | 1997-06-12 |
| AU1925192A (en) | 1993-01-08 |
| JPH07500084A (ja) | 1995-01-05 |
| AU680807B2 (en) | 1997-08-14 |
| EP0587659A1 (en) | 1994-03-23 |
| KR100227302B1 (ko) | 1999-11-01 |
| SE502569C2 (sv) | 1995-11-13 |
| ATE152620T1 (de) | 1997-05-15 |
| FI935314A (fi) | 1993-11-29 |
| CA2103447C (en) | 1999-03-16 |
| SE9101665L (sv) | 1992-12-01 |
| EP0587659B1 (en) | 1997-05-07 |
| ES2103946T3 (es) | 1997-10-01 |
| FI935314A0 (fi) | 1993-11-29 |
| NO934315L (no) | 1994-01-26 |
| NO306539B1 (no) | 1999-11-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI110408B (fi) | Menetelmä rakennetta antavan matriisin käsittävän farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi | |
| Shao et al. | Angiopep-2 modified PE-PEG based polymeric micelles for amphotericin B delivery targeted to the brain | |
| US6589943B2 (en) | Formulation of amphiphilic heparin derivatives for enhancing mucosal absorption | |
| US20180104330A1 (en) | Nanoparticles, Composed of Sterol and Saponin From Quillaja Saponaria Molina Process for Preparation and Use Thereof as Carrier for Amphipatic of Hydrophobic Molecules in Fields of Medicine Including Cancer Treatment and Food Related Compounds | |
| US20110130580A1 (en) | Use of buckysome or carbon nanotube for drug delivery | |
| JP7443230B2 (ja) | ポリシアル酸および／またはその他のポリマーを含む薬物送達のシステムおよび方法 | |
| Ma et al. | A highly stable norcantharidin loaded lipid microspheres: preparation, biodistribution and targeting evaluation | |
| WO2016015522A1 (zh) | 脂肪酸结合型白蛋白-药物纳米粒子冻干制剂及制备方法 | |
| KR20110039798A (ko) | 난용성 약물의 전달을 위한 고밀도지단백 나노입자의 제조방법 | |
| WO2007078879A2 (en) | Lipopeptide compositions and methods of use thereof | |
| AU583402B2 (en) | Method for the production of a macromolecular carrier loaded with a biologically active substance | |
| EP0634926A1 (en) | Composition for therapeutic or diagnostic use, process for its preparation and its use | |
| KR20070012219A (ko) | 용해성, 흡수성 및 투과성을 향상시키기 위한 용제를함유하는 약물 제제 | |
| WO2011120339A1 (zh) | 牛蒡苷元的微乳制剂 | |
| JP6772282B2 (ja) | 抗癌薬の新規ナノ製剤及びその製造方法 | |
| JP2004528366A (ja) | 両親媒性ヘパリン誘導体の粘膜吸収を増加させるための製造方法 | |
| JP3779744B2 (ja) | 単糖誘導体または単糖誘導体を含有する脂肪乳剤 | |
| JPS5857321A (ja) | 抗癌剤 | |
| CN109663132B (zh) | 一种新型抗癌药物纳米制剂及其制备方法 | |
| Samy et al. | Complement activation assay and invivo evaluation of silymarin loaded liver targeting liposome | |
| EP3364953B1 (en) | Novel liposomal formulation for the oral hepatic delivery of drugs | |
| CN106389332A (zh) | 一种长循环的氧化石蒜碱有机酸复合物新制剂 | |
| Madhusudhan et al. | Improved oral absorption of carbamazepine from 1-O-alkylglycerol stabilized o/w nanoemulsions | |
| Rogers et al. | Alternative methods of drug delivery |