CN109663132B - 一种新型抗癌药物纳米制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种新型聚合物材料组合物，其特征在于，所述组合物包括活性物质和乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物。本发明还涉及制备该组合物的方法，以及其在制备药物中的用途。

Description

一种新型抗癌药物纳米制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，特别涉及一种新型聚合物药物组合物制剂，所述组合物包括活性物质和乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物。

背景技术

高分子载体是随着药物学研究、生物材料科学和临床医学的发展而新兴的给药技术。低分子药物具有疗效高、使用方便等优点，但同时也存在很大副作用。通常，低分子药物通过口服或注射进入人体内，代谢速度快，半衰期短，缺乏选择性。高分子载体是指本身没有药理作用、也不与药物发生反应的高分子，其作为药物的载体，依靠与药物之间微弱的氢键结合形成，或者通过缩聚反应将低分子药物连接到聚合物主链上。其中高分子材料作为低分子药物的传递系统。

用高分子材料作为小分子药物的载体可以增加药物的作用时间，提高药物的选择性并降低小分子药物的毒性。近期迅速发展的是微米和纳米尺度的高分子载体，这类高分子载体可有效的将药物分子分散到其中，利用载体的各种响应方式，实现药物的输送和控制释放。

其中，纳米粒给药系统(Nanoparticles-based drug delivery systems)是将纳米技术和纳米材料应用于药学领域产生的，它以纳米粒(Nanoparticles，NP)作为药物载体的一种药物输送体系。纳米粒是一类由高分子物质组成的固态胶体粒子，粒径大小介于10-1000nm，可分散在水中形成近似胶体溶液。由于纳米粒作为药物载体性质上的独特性和优越性，其已成为国内外医药学的重要研究方向。

用于制备纳米粒制剂的辅料多为高分子可降解聚合物。聚酯类是迄今为止研究最多，应用最广的生物可降解高分子材料，常用的有聚乳酸(PLA)、聚羟基乙酸(PGA)、聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)和聚己内酯(PCL)等。

虽然现有技术中已有一些高分子材料可供制备纳米粒，但是现有技术中的材料尚存在诸多缺陷，因此本领域对新的可用于制备纳米粒的高分子材料还有迫切需要。

发明内容

本发明的一个方面提供了一种组合物，所述组合物包括活性物质和乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物。

乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物

本领域技术人员可以根据实际需要选择所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的种类以及所具有的性质。

在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物是乙二醇/1,2-丁二醇/乳酸聚合物、乙二醇/1,3-丁二醇/乳酸聚合物、乙二醇/1,4-丁二醇/乳酸聚合物或其混合物。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物是无规共聚物、交替共聚物、嵌段共聚物或接枝共聚物。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物是嵌段共聚物。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物是两嵌段共聚物或三嵌段共聚物。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物是聚乙二醇/聚丁二醇/乳酸两嵌段共聚物、乙二醇/聚丁二醇/聚乳酸两嵌段共聚物、聚乙二醇/丁二醇/乳酸两嵌段共聚物或者聚乙二醇/聚丁二醇/聚乳酸三嵌段共聚物。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物是聚乙二醇/聚丁二醇/聚乳酸三嵌段共聚物。

在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物中的端部聚乙二醇是经过修饰的。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物中的端部聚乙二醇被修饰成了聚乙二醇单甲醚(mPEG)。

在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物具有如式I、式II或式III所示的结构：

其中a选自1-3000，b选自1-1500，c选自1-1500，R₁、R₂和R₃各自独立的选自H和C₁-C₃烷基。

在一些实施方式中，a为1-2500、1-2000、1-1500、1-1200、1-1000、1-800、1-600、1-500、1-400、1-300、1-200、1-180、1-170、1-160、1-150、1-140、1-130、1-120、1-118、1-110、1-100、1-90、1-80、1-70、1-60、1-50、3-2500、5-2000、8-1500、10-1200、11-800、12-500、13-300、15-200、16-180、16-150、16-140、16-120、20-100、25-80、30-70、35-70、35-60、35-55、35-50、40-50、42-47或45。在一些实施方式中，b为1-1200、1-1000、1-800、1-600、1-500、1-400、1-300、1-200、1-180、1-170、1-160、1-150、1-140、1-130、1-120、、1-118、1-110、1-100、1-90、1-80、1-70、1-60、1-50、3-1500、5-1200、8-1000、10-800、10-600、10-500、10-300、10-200、10-180、10-150、10-140、10-120、10-110、10-100、10-80、10-70、10-60、10-50、10-40、10-30、10-25、12-25、15-25、18-22或20。在一些实施方式中，c为1-1200、1-1000、1-800、1-600、1-500、1-400、1-300、1-200、1-180、1-170、1-160、1-150、1-140、1-130、1-120、、1-118、1-110、1-100、1-90、1-80、1-70、1-60、1-50、3-1500、5-1200、8-1000、10-800、10-600、10-500、10-300、10-200、10-180、10-150、10-140、10-120、10-110、10-100、10-80、10-70、10-60、10-50、10-40、10-30、10-25、10-20、12-18、13-17或15。

在一些实施方式中，R₁、R₂和R₃各自独立的选自H和CH₃。

在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的分子量为0.1K-300K。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的分子量为0.1K-280K、0.1K-250K、0.1K-200K、0.1K-180K、0.1K-150K、0.1K-120K、0.1K-100K、0.1K-80K、0.1K-60K、0.1K-50K、0.1K-40K、0.1K-30K、0.1K-25K、0.1K-22K、0.1K-20K、0.1K-18K、0.1K-16K、0.1K-15K、0.1K-14K、0.1K-13K、0.1K-12K、0.1K-10K、0.1K-8K、0.1K-7K、0.1K-6K、0.1K-5K、0.1K-4K、0.3K-300K、0.5K-300K、0.8K-300K、1K-300K、1.2K-300K、1.2K-250K、1.2K-200K、1.2K-150K、1.2K-100K、1.2K-80K、1.2K-60K、1.2K-50K、1.2K-30K、1.2K-20K、1.2K-18K、1.2K-16K、1.2K-15K、1.2K-14K、1.2K-12K、1.2K-11K、1.2K-10K、1.2K-8K、1.2K-6K、1.2K-5K、1.2K-4K、0.5K-150K、0.6K-100K、0.8K-80K、1K-50K、1.5K-40K、1.6K-30K、1.7K-20K、2K-16K、2.5K-14K、3K-13K、3K-12K、3K-10K、3K-8K、3K-6K、或3K-5K。

本申请中所述的分子量可以是重均分子量或数均分子量。可以使用本领域常用的方法来检测分子量，例如通过光散射法、超速离心沉降速度法、凝胶色谱法或核磁共振法进行检测。

在一些实施例中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物中乙二醇、丁二醇和乳酸重复单元的摩尔比例为1:5:5-6:1:1。在一些实施方式中，所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物中乙二醇、丁二醇和乳酸重复单元的摩尔比例为1:4:4-6:1:1、1:3:3-6:1:1、1:2:2-6:1:1、1:1:1-6:1:1、2:1:1-6:1:1、3:1:1-6:1:1、4:1:1-6:1:1、5:1:1-6:1:1、1:5:5-5:1:1、1:5:5-4:1:1、1:5:5-3:1:1、1:5:5-2:1:1、1:5:5-1:1:1、1:5:5-1:2:1、1:5:5-1:3:1、1:4:4-4:1:1、1:3:3-3:1:1、1:2:2-3:1:1或1:1.3:1.3-2.5:1:1。

本申请的共聚物可以用阴离子活性聚合方法、阳离子活性聚合方法或者缩聚方法制备出来。可选的，本申请的共聚物可能通过先制备聚乙二醇-聚丁二醇共聚物，然后用这个共聚物作为大分子引发物进而制备聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸三嵌段共聚物。示例性制备本申请聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸三嵌段共聚物的方法如下：

组合物

在一些实施方式中，本申请的组合物为固体制剂。在一些实施方式中，所述组合物为纳米颗粒。在一些实施方式中，所述组合物是干燥的纳米颗粒。在一些实施方式中，所述组合物是冻干的纳米颗粒。本申请使用的术语“纳米颗粒”和“纳米粒”在本申请中互换使用，包括小于500nm的任何粒子，例如可以呈晶体态存在或者呈胶束态存在。

在一些实施方式中，所述纳米粒的粒径在10-500nm。所述纳米颗粒的粒径在10-400nm、10-300nm、10-250nm、10-200nm、10-150nm、10-120nm、10-100nm、10-90nm、20-90nm、30-90nm或40-90nm。在一些实施方式中，所述纳米颗粒的粒径在10-100nm。可以使用本领域常用的方法测量粒径，例如扫描电镜法、光散射法。在一些实施方式中，使用光散射法检测粒径。在一些实施方式总，使用激光动态散射仪检测粒径。

本申请的纳米粒具有可接受的分散系数。在一些实施方式中，本申请纳米粒的分散系数不大于0.3、0.2、0.19、0.18、0.17、0.16、0.15、0.14、0.13、0.12或0.11。在一些实施方式中，本申请纳米粒的分散系数为0.1-0.2。

本领域技术人员知晓，可以对本申请组合物进行进一步的修饰。在一些实施方式中，可以对本申请的组合物进行进一步的包衣，例如，进行缓释或控释包衣。在一些实施方式中，可以在本申请组合物的表面修饰靶向基团(例如，抗体、配体、特定底物等)或者其他的高分子以进一步改善申请组合物的靶向性或其他动力学参数，或者用于对本申请组合物进行示踪。

本领域技术人员知晓，除了活性物质与乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物之外，所述组合物还包括药学上可接受的其他成分。在一些实施方式中，所述其他成分包括表面活性剂。所述表面活性剂可以是阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或非离子表面活性剂。在一些实施方式中，所述其他成分包括冻干保护剂，包括但不限于乳糖、甘露糖、右旋糖酐、蔗糖和甘氨酸。在一些实施方式中，所述其他成分包括溶液，包括但不限于氯化钠溶液，葡萄糖溶液、PBS缓冲液、乙醇溶液等。

本申请所使用的术语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和或剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或与合理的利益/风险比相对称的其他问题和并发症，并有效用于既定用途。

本申请的组合物适于通过任何合适的途径给药，例如通过口服(包括口腔或舌下)、直肠、鼻、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或者真皮下注射或输注)途径。在一些实施方式中，本申请的组合物用于胃肠外给药。在一些实施方式中，本申请的组合物用于静脉输注给药。

活性物质

本领域技术人员可以根据实际需要选择适合的活性物质。在一些实施方式中，所述活性物质是疏水性物质。

本申请所使用的术语“疏水性物质”指的是在25℃在100g水中该物质的可溶解质量小于1g、0.1g、0.01g、1mg或0.5mg。

在一些实施方式中，所述活性物质选自抗肿瘤药物、抗生素药物、心血管药物、抗糖尿病药物和非甾体抗炎药物。本申请的活性物质的示例性例子可以是：抗肿瘤药物，例如紫杉醇、多烯紫杉醇、卡巴他赛、5-氟尿嘧啶、依托泊苷、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、六甲三聚氰胺、甲氨碟呤、甲环亚硝脲、去甲长春花碱、替尼泊苷、高三尖杉酯碱、羟喜树碱等；抗生素药物，例如氯霉素、红霉素、依托红霉素、琥乙红霉素、麦迪霉素、交沙霉素、克拉霉素、罗他霉素、磺胺嘧啶、甲氧苄氨嘧啶、呋喃妥因、利副平、利福昔明、异丁呱利福霉素、氨苯砜、醋氨苯砜、眯康唑等；心血管药物，如硝苯地平、尼卡地平、尼群地平、尼伐地平、桂利嗪、呱克昔林、吗多明、洋地黄毒甙、地高辛、毛花甙丙、去乙酰毛花甙、普罗帕酮、胺碘酮、硝酸甘油、戊四硝酯、环扁桃酯、烟酸生育酚酯等；抗糖尿病药物，例如甲苯黄丁脲、格列本脲、格列吡嗪等；非甾体抗炎药物，例如氯马撕汀、赛庚啶、苯噻啶、酮替芬、曲尼司等。上述各具体药物的结构可以参见各国家或地区的药品管理部门批准的药品说明书，例如中国食品药品监督管理局、美国食品药品监督管理局、日本药品与医疗器械管理局或者欧洲药品管理局批准的那些。

在一些实施方式中，所述活性物质是紫杉醇及其衍生物。在一些实施方式中，所述活性物质是紫杉醇、多西他赛或卡巴他赛(7Β,10Β-二甲氧基多西紫杉醇)及其衍生物。

本申请所涉及的化合物包括该化合物的盐、酯、内消旋体、外消旋体及其异构体。本申请所述的异构体包括顺反异构体和旋光异构体。

本申请所使用的术语“衍生物”是指母体化合物分子中的原子或原子团被其他原子或原子团取代所形成的化合物。紫杉醇的衍生物包括但不限于紫杉醇的丁二酸和戊二酸衍生物、磺酸盐衍生物、氨基酸衍生物、磷酸盐衍生物、有机酸酯和碳酸酯衍生物、N-甲基吡啶盐、聚乙二醇衍生物、聚甲基丙烯酸衍生物、聚谷氨酸或聚天门冬氨酸衍生物。

组分比例

本领域技术人员可以根据实际需要选择活性物质同聚合物的比例。在一些实施方式中，组合物中所述活性物质与乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的质量比是0.01-1。在一些实施方式中，组合物中所述活性物质与乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的质量比是0.02-1、0.03-1、0.04-1、0.05-1、0.06-1、0.08-1、0.09-1、0.1-1、0.2-1、0.3-1、0.4-1、0.5-1、0.6-1、0.7-1、0.8-1、0.9-1、0.01-0.9、0.01-0.8、0.01-0.7、0.01-0.6、0.01-0.5、0.01-0.4、0.01-0.3、0.01-0.2、0.01-0.1、0.01-0.09、0.01-0.08、0.01-0.07、0.01-0.06、0.01-0.05、0.01-0.04、0.01-0.03、0.01-0.02、0.03-0.9、0.04-0.6、0.04-0.5、0.04-0.2、0.04-0.1、0.04-0.09、0.04-0.08、0.04-0.07、0.04-0.06或0.04-0.05。

本申请的优势

不希望受理论的束缚，本申请的乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物作为基质将活性物质包裹于其中，并且形成球状颗粒及其他形状颗粒。与活性物质的非纳米粒剂型或用其它高分子材料制成的纳米粒剂型相比，使用乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物作为基质成分具有如下一个或多个优势：1、防止活性物质析出；2、获得粒径更小的颗粒；3、单分散性更好；4、制备方法更加简便；5、包封率更高；6、有更优异的靶向作用；7、更长的循环时间；7、更高的药效；8、更高的活性物质负载量。

制备方法的步骤

本发明的另一个方面提供了一种制备本发明组合物的方法。

在一些实施方式中，制备本发明组合物的方法包括如下步骤：(a)将乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物和活性物质用有机溶剂溶解；(b)将有机相加到水相溶液中以形成油水混合物；(c)减压除去所述油水混合物中的所述有机溶剂。

在一些实施方式中，所述方法还进一步包括步骤(d)干燥步骤(c)的产物。本领域技术人员可以根据具体情况选择适合的干燥方式，例如冷冻干燥，喷雾干燥等。在一些实施方式中，所述步骤(d)中的所述干燥是通过冷冻干燥完成的。

本领域技术人员可以根据活性物质的溶解性和制备工艺的需要来选择适合的有机溶剂。在一些实施方式中，所述有机溶剂包括四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基亚砜、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺或其混合物。在一些实施方式中，所述有机溶剂是丙酮。

在一些实施方式中，所述步骤(b)还包括使用低剪切力处理所述油水混合物。

本申请所述的低剪切力可以是通过搅拌、剪切或均质提供的，条件是剪切力不高于1000rmp、800rmp、700rmp、600rmp、500rmp、400rmp或300rmp机械搅拌提供的剪切力。在一些实施方式中，所述低剪切力是搅拌。在一些实施方式中，所述低剪切力是机械搅拌。在一些实施方式中，搅拌的速度为100-1000rmp、100-800rmp、100-700rmp、100-600rmp、100-500rmp或100-400rmp。

在一些实施方式中，所述有机相和水相的比例为1:10-20:1、1:10-18:1、1:10-15:1、1:10-12:1、1:10-10:1、1:10-8:1、1:10-5:1、1:10-3:1、1:10-2:1、1:10-1:1、1:8-1:1、1:6-1:1、1:4-1:1、1:3-1:1、1:2.5-1:1、1:2-1:1、1:8-20:1、1:6-20:1、1:4-20:1、1:2-20:1、1:1-20:1、2:1-20:1、4:1-20:1、5:1-20:1、8:1-20:1、10:1-20:1、15:1-20:1、1:18-20:1、1:8-15:1、1:6-12:1、1:5-10:1、1:4-8:1、1:3-5:1、1:3-2:1、1:3-1:1、1:2.5-1:1.5、1:2.3-1:1.8或1:2.1-1:1.9。

本申请所述的减压可以通过本领域的任何适合的方式进行，例如，旋转蒸发、减压干燥等。在一些实施方式中，通过减压旋转蒸发除去有机溶剂。在一些实施方式中，减压旋转蒸发的真空度低于0.6个大气压、0.5个大气压、0.4个大气压、0.3个大气压、0.2个大气压、0.1个大气压。在一些实施方式中，减压旋转蒸发的真空度为0.1-0.6个大气压、0.1-0.5个大气压、0.1-0.4个大气压、0.1-0.3个大气压或0.1-0.2个大气压。

包封率

可以使用本领域常用的方法测量包封率，例如葡聚糖凝胶、超速离心法或透析法。在一些实施方式中，使用透析法测量包封率。

在一些实施方式中，本申请方法制得的组合物的包封率不低于75％、80％、83％、85％、87％、89％、90％、92％、93％、94％或95％。

制药用途、疾病治疗方法和治疗用途

本申请一方面涉及本申请的所述的组合物在制备用于缓解、治疗或预防疾病的药物中的用途。

本申请再一方面涉及本申请的组合物用于缓解、治疗或预防治病的用途。

本申请另一方面涉及一种缓解、治疗或预防疾病的方法，包括向需要其的客体使用有效量的本申请的组合物。

在某些实施方式中，所述疾病是癌症。

对某种疾病或症状的“缓解”、“治疗”或“预防”包括预防或减轻某种状况，降低某种状况兴起或发展的速度，减少发展出某种状况的风险，预防或延迟与某种状况相关的症状发展，减少或终止与某种状况相关的症状，产生某种状况的完全或部分的逆转，治愈某种状况，或以上的组合。

本申请中使用的术语“有效量”是指，可以实现客体的疾病或症状，或者可以预防性地抑制或防止疾病或症状发生的药物的量。有效量可以是将客体的一种或多种疾病或症状缓解到一定程度的药物的量；可以将那些跟疾病或症状成因相关的一种或多种生理或生物化学参数部分或完全恢复到正常的药物的量；和/或可以降低疾病或症状发生的可能性的药物的量。

本申请中提供的组合物的有效剂量依赖于本领域公知的多种因素，例如体重、年龄、过往病史、目前正在接受的治疗、对象的健康状况和药物相互作用的强度、过敏、超敏和副作用，以及给药途径和疾病发展的程度。本领域熟练人员(例如医生或兽医)可根据这些或其它条件或要求相应降低或升高剂量。

在某些实施方式中，本申请提供的组合物可在治疗有效剂量约0.01mg/kg到约100g/kg之间给药(例如，约0.01mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg、约200mg/kg、约500mg/kg、约1g/kg、约5g/kg、约10g/kg、约20g/kg、约50g/kg、约70g/kg、约90g/kg或约100g/kg)。某一特定剂量可分为多次间隔给药，例如每天一次、每天两次或更多、每月两次或更多、每周一次、每两周一次、每三周一次、每月一次或每两月或更多月一次。在某些实施方式中，给药剂量可随治疗进程变化。例如，在某些实施方式中，初始给药剂量可比后续给药剂量高。在某些实施方式中，给药剂量在治疗进程中根据给药对象的反应进行调整。

给药方案可通过调整达到最优反应(例如，治疗响应)。例如，可进行单剂量给药或在一段时间分多个分隔的剂量给药。

本发明的另一个方面涉及乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物在制备用于治疗疾病的药物中的用途。

本发明的再一个方面涉及一种制备药物的方法，所述方法包括混合活性物质和乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物。

附图说明

图1是载紫杉醇的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒(实施例1)的粒径分布图。

图2是与泰素相比的载紫杉醇的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒(实施例1)的体外释放曲线。

图3是与泰素相比的载紫杉醇的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒(实施例1)的药动学曲线。

图4是载DiR的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒(实施例1)的活体成像图。

图5是体内药效试验中的荷瘤裸鼠肿瘤和体重随注射后时间的变化图。该试验包括三组，分别是阴性对照(PBS)、阳性对照泰素(TAX)和载紫杉醇的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒(实施例1)。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

除另有明确表示，本实施例使用的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物是获得自加拿大先进聚合物材料公司的如式I所示的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物。

实施例1：载紫杉醇的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒的制备

称取40mg聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物(单元数a＝45，b＝20，c＝15)和8mg紫杉醇，溶于5mL丙酮溶剂中作为有机相，将10mL水作为水相，将有机相以5ml/min的速度滴入水相中，在300rmp机械搅拌下形成浅蓝色的纳米粒，搅拌10min后转移到旋转蒸发仪中，真空-0.1MPa下旋转蒸发30min以去除丙酮，得到稳定的紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸纳米粒溶液。

使用激光动态散射仪检测粒径，平均粒径为40.32±2.8nm，分散系数为0.178。所得纳米粒的粒径分布图如图1所示。

实施例2：载紫杉醇的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒的制备

称取40mg聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物(单元数a＝113，b＝50，c＝40)和8mg紫杉醇，溶于5mL乙腈溶剂中作为有机相，将10mL水作为水相，将有机相以5ml/min的速度滴入水相中，在300rmp机械搅拌下形成浅蓝色的纳米粒，搅拌10min后转移到旋转蒸发仪中，真空-0.1MPa下旋转蒸发30min以去除乙腈，得到稳定的紫杉醇乙二醇-丁二醇-乳酸纳米粒溶液。

实施例3：其他聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒的制备

使用与实施例1和实施例2的类似方法，使用紫杉醇、多烯紫杉醇或卡巴他赛作为活性物质，使用不同的式I所示的乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物(包括(a＝17，b＝16，c＝10)，(a＝17，b＝20，c＝8)，(a＝17，b＝22，c＝10)，(a＝45，b＝10，c＝8)，(a＝45，b＝15，c＝10)，(a＝45，b＝20，c＝12)，(a＝45，b＝23，c＝15)，(a＝45，b＝25，c＝20)，(a＝50，b＝70，c＝10)，(a＝68，b＝22，c＝12)，(a＝68，b＝27，c＝20)，(a＝113，b＝90，c＝28))，并且调整不同的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物同活性物质的比例(包括5:1、10:1、20:1和30:1)，来制备纳米粒。在上述条件下均应能够制备出粒径小于100纳米、粒径分布均匀并且包封率大于70％的纳米粒，具体数据省略。

实施例4：载紫杉醇聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸纳米粒的稳定性研究

将实施例1、实施例2和实施例3制备的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒加0.9％氯化钠注射稀释至紫杉醇含量为l mg/ml，并混匀。将样品置于25℃和4℃恒温箱中，观察样品析出的情况。

经观察发现：跟其他实施例相比，实施例1制备的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒稳定性最好，在25℃条件下可稳定48小时以上，4℃条件下可稳定36小时以上。

实施例5：纳米粒包封率的测定方法

采用高效液相色谱测紫杉醇的含量：色谱柱：Hypersil ODS2(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈：水(50、50，v/v)；紫杉醇的检测波长227nm，流速1.0ml/min；进样量20μL。分别取浓度为0.25-50μg/ml的紫杉醇标准品溶液，按照色谱条件进行测试，以峰面积对紫杉醇浓度进行曲线拟合，建立回归方程。

将得到的纳米粒混悬液先2000r/min低速离心10min去掉没有包进去的药物结晶，再在10000r/min高速离心30min，去除上清液，然后用高纯水复溶再加入同等体积的乙腈破乳，将破乳得到的溶液按照色谱条件测定紫杉醇的含量。同时取未经任何处理的纳米粒混悬液加同样体积的乙腈破乳，按照HPLC条件测紫杉醇的含量：

包封率(％)＝纳米粒包封的药物的量/投入药物总的量×100％。

实施例6：体外释放实验

采取透析袋扩散法进行体外释放实验，具体操作方法如下：将实施例1制备的纳米粒(紫杉醇浓度1mg/ml)用蒸馏水稀释至10mL，取1mL作为零点，剩余9mL置于透析袋中，扎紧透析袋。将透析袋放入50mL PBS缓冲液(pH7.4，含0.2％吐温-80)，在37℃，100r/min的摇床中振荡透析，于不同时间点取透析袋外PBS液1.0mL并同时补充空白释放介质1.0mL。将各取样点样品加入1.0mL乙腈，混合均匀后，进样分析，测定各取样点中的紫杉醇含量，计算累积释放百分率，制作了释放曲线。所得到的释放曲线如附图2所示。结果显示，本发明所制备的载紫杉醇的纳米粒在体外模拟的生理条件下，紫杉醇的释放速度比市售紫杉醇慢很多，这说明本发明所制备的紫杉醇复合纳米粒与市售注射液相比具有药物缓释的特性

实施例7：药动学试验

取SD大鼠8只，体重250±20g，随机分为两组，分别注射泰素和实施例1制备的载紫杉醇的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸嵌段共聚物纳米粒的水溶液(PTX浓度＝1mg/ml)。每只大鼠尾静脉注射2ml后，于5min、15min、30min、1小时、2小时、4小时、7小时和24小时眼眶取血0.5ml置于肝素管中。4000rmp离心10min后取血浆200μL置于离心管中，加入内标50μL，涡旋混匀。加入350μL乙腈，涡旋混匀2min，13000rmp离心10min，取上清转移过膜装入进样瓶，使用HPLC分析。

绘制血浆紫杉醇药物浓度经时变化曲线(参见附图3)，并计算了主要的血浆药动学参数。结果显示，本发明所制备的载紫杉醇的纳米粒和市售紫杉醇注射液在相同剂量下经静脉途径给予大鼠，前者有显著高的血浆药物浓度和AUC，紫杉醇在体内清除率显著降低，消除半衰期延长。结果反映了本发明所制备的载紫杉醇的纳米粒相比市售注射液具有优越的稳定性和独特的体内释药特性。

实施例8：活体成像实验

在制备纳米粒的过程中，加入DIR染料(代替原药)制备成载DIR的聚乙二醇-聚丁二醇-聚乳酸纳米粒(DIR-PM)，DIR的浓度为100μg/mL。取A549荷瘤老鼠，分别尾静脉注射200μl DIR-PM溶液，分别在注射给药后2小时、8小时和24小时麻醉裸鼠，对荷瘤老鼠进行活体成像仪荧光拍摄。最后处死裸鼠，即时摘取心肝脾肺肾瘤等脏器组织，进行活体成像仪荧光拍摄。荧光拍摄的激发波长为730nm，发射波长为790nm，曝光时间为1min，并且进行X光拍摄，曝光时间30s。使用软件KodakMI In Vivo Fx Pro处理图像，将荧光图像与X光图像进行叠加，增加伪彩，根据X光图片位置统计内脏器的荧光分布情况。得到裸鼠的各组织活体成像如图4所示。

实施例9：药效学试验

雄性BALB/c裸小鼠腹侧皮下接种5×10⁷个A549细胞。约两周以后，荷瘤鼠肿瘤平均体积达150mm³以上时，将35只荷瘤小鼠按肿瘤体积随机分层分组，分别为：PBS组、Taxol(10mg/kg)和实施例1制备的纳米粒，静脉给药，每隔3天给一次药，共计3次。实验期间，隔天测定动物肿瘤体积(体积＝ab²/2，a、b分别为肿瘤的长和宽)和裸鼠体重。比较各自对抑制肿瘤生长的有效性，结果如图5所示，同等剂量实施例1制备的纳米粒的肿瘤抑制率优于市售紫杉醇注射液。

Claims (23)

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括活性物质和乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物，其中所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物具有如式I所示的结构：

其中a、b和c表达单元数，a为13-300，b为10-300，c为10-300，R₁选自H和C₁-C₃烷基。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其中所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的分子量为1.2K-100K。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其中所述组合物为纳米颗粒。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，其中所述纳米颗粒的粒径在10nm-500nm。

5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，其中所述纳米颗粒的粒径在10nm-300nm。

6.权利要求1的组合物，其特征在于，所述活性物质为疏水性物质。

7.权利要求1的组合物，其特征在于，所述活性物质选自抗肿瘤药物、抗生素药物、心血管药物、抗糖尿病药物和非甾体抗炎药物。

8.权利要求1的组合物，其特征在于，所述活性物质是紫杉醇或其衍生物。

9.权利要求1的组合物，其特征在于，所述活性物质是紫杉醇、多西他赛或卡巴他赛。

10.权利要求1的组合物，其特征在于，其中所述活性物质与乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的质量比是0.01-1。

11.权利要求1的组合物，其特征在于，其中所述活性物质与乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物的质量比是0.05-0.2。

12.一种制备权利要求1-11任一项所述的组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物和活性物质用有机溶剂溶解；

(b)将有机相加到水相溶液中以形成油水混合物；

(c)减压除去所述油水混合物中的所述有机溶剂。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)还包括使用低剪切力处理所述油水混合物。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述低剪切力是搅拌。

15.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述方法还进一步包括步骤(d)干燥步骤(c)的产物。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述步骤(d)中的所述干燥是通过冷冻干燥完成的。

17.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂包括四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、二甲基亚砜、丙酮、N,N-二甲基甲酰胺或其混合物。

18.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述有机相和水相的比例为1:10-20:1。

19.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述有机相和水相的比例为0.5:1-2:1。

20.权利要求1-11中任一项所述的组合物在制备用于缓解、治疗或预防疾病的药物中的用途。

21.权利要求20中所述的用途，所述疾病是癌症。

22.乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物在制备用于缓解、治疗或预防疾病的药物中的用途，其中所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物具有如式I所示的结构：

其中a、b和c表达单元数，a为13-300，b为10-300，c为10-300，R₁选自H和C₁-C₃烷基。

23.一种制备药物的方法，其特征在于，所述方法包括混合活性物质和乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物，其中所述乙二醇/丁二醇/乳酸聚合物具有如式I所示的结构：

其中a、b和c表达单元数，a为13-300，b为10-300，c为10-300，R₁选自H和C₁-C₃烷基。

Images