FI107255B - O-[4-(4-pyridyyli)butyyli]-N-butyylisulfonyyli-(L)-tyrosiini, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö vastaavan O-[4-(4-piperidinyyli)butyyli]johdannaisen valmistamiseksi - Google Patents

Description

107255 O- [4- (4-pyridyyli)butyyli] -N-butyylisulfonyyli- (L) -tyro-siini, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö vastaavan O- [4- (4-piperidinyyli) butyyli] johdannaisen valmistamiseksi 5

Keksinnön tausta US-patenttihakemuksessa, sarjanumero 750 647, haettu 30.8.1991, (= FI-hakemusjulkaisu 914534, julk.

28.3.1992) kuvataan fibrinogeenireseptorin antagonisteja 10 ja menetelmiä fibrinogeenireseptorin antagonistien valmistamiseksi. Erityisesti valmistetaan kaavan ho2 cr "''Inhs o2 n- Bu mukainen yhdiste 11-vaiheisen menetelmän mukaisesti, joka menetelmä käsittää potentiaalisesti vaarallisen NaH/DMF:n 20 muodostumisen eetterin muodostamiseksi, mikä vaati kromatografisen puhdistamisen.

Singerman et ai. . J. Heterocvclo Chem. (1966), 3, 74, kuvaavat menetelmän 4-(4-pyridinyyli)butyylikloridin valmistamiseksi, jossa menetelmässä tarvitaan kuusi vai-. 25 hetta. Keksinnön mukaisessa menetelmässä tarvitaan vain yksi vaihe tämän yhdisteen valmistamiseksi.

Solar et ai. . J. Orq. Chem. (1966), 31., 1996, ku vaavat tyrosiinin O-alkyloinnin. N-sulfonyloidun tyrosii-nin selektiiviselle O-alkyloinnille, joka kuvataan tässä 30 hakemuksessa, ei ole ennakkotapauksia.

Keksinnön yhteenveto

Keksintö liittyy synteesiin kaavan /=\^,nhso2e4 35 R1-CCH2)nrO—yT |

COjH

• · i 2 107255 raukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jossa kaavassa R1 on kuusijäseninen tyydyttynyt tai tyydyttymätön hetero-syklinen rengas, joka sisältää yhden tai kaksi heteroato-mia, jossa heteroatomit ovat N tai NR6, jossa R6 on H tai 5 Cno-alkyyli, m on kokonaisluku 2 - 6, ja R4 on aryyli, C^Q-alkyyli tai C4.10-aralkyyli.

Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus

Keksinnön kohteena on yhdiste, jolla on kaava 10 co2h ssJjAS//'',iNHS02C4H9 15 ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

Farmaseuttisesti hyväksyttävä suola on edullisesti hydrokloridisuola.

Keksinnön kohteena on myös menetelmä edellä maini-20 tun yhdisteen ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suo lojen valmistamiseksi, jossa menetelmässä yhdisteelle, jolla on kaava j

H C02H

25 1^A^X«nhso2c4h9 suoritetaan fenoli-O-alkylaatio kaavan 3 0 Q2 mukaisen yhdisteen kanssa vesipitoisessa aikaiihydroksi-dissa voimakkaasti polaarisessa aproottisessa liuottimes-35 sa.

3 107255

Edullisessa suoritusmuodossa fenoli-O-alkylaatio suoritetaan voimakkaasti polaarisessa aproottisessa liuot-timessa, joka on 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimidinoni tai metyylisulfoksidi, 3 N KOH:ssa noin 5 65 °C:n lämpötilassa.

Keksinnön kohteena on -lisäksi yhdisteen

C02H

*vs;!iik_^-'''NHS02C*H3 10 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan käyttö ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi hydraamalla selektiivisesti edellä mainittu yhdiste, jolla on kaava 15 Ν/=ν^'^°γ^ι ^ ^ (f -Ί NHSO2C4H9 20 tai vastaava farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Keksinnön mukainen yhdiste on täten käyttökelpoinen lähtöaineena edellä kuvatussa käyttösovelluksessa.

Keksintö liittyy monivaiheiseen menetelmään N-(n- · butyylisulfonyyli)-O-[4-(4-piperidyyli)butyyli]tyrosiinin 25 valmistamiseksi, jolla on kaava „ j ...

L· n

s—1 H 11 O

Λ · · 4 107255 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi. Yhdisteet (I) ovat fibrinogeenireseptorin antagonisteja.

Tämä monivaiheinen menetelmä yhdisteiden (I) val-5 mistamiseksi käsittää seuraavat vaiheet: a)

1) BSTFA

H°-<\ //} ~-7-- ^ CO,- 2) pyr/R4S02Cl ±u 3) vesip. KHSO^ 0-1) „0 /=W^H502R4 15 N—' co2h ¢1-2) jossa tyrosiini tai tyrosiinijohdannainen (1-1) altiste-20 taan bistrimetyylisilyylitrifluoriasetamidin (BSTFA) vä-littämälle sulfonylaatiolle, käyttämällä R4S02Cl:a, jossa R4 on n-butyyli, asetonitriilissä, jolloin saadaan vastaava sulfonamidi (1-2), 25 b) , 1) nBuLi .

P -ch3 -- R1CCH2)„C1 2) BrCCHj^jCl 0-3) (1-4) 30 metyloitu R1 (1-3) saatetaan reagoimaan nBuLi:n kanssa er-nen tukahduttamista suoraketjuisella alkyyliryhmällä, jossa on Br toisessa päässä ja Cl toisessa päässä, jolloin saadaan R1(CH2)mCl (1-4) , jossa R1 on pyridyyli ja m on 4, 35 • · « 5 107255 ho_^V--sv^,nhsosr4 + RtCCHz)nFl COjH ¢1-4) Ä r’cch2)„ -r&f*”0* -* N—' co2h

Liuotin C1-5) 10 (1-2) lisätään (1-4):ään ja altistetaan fenoli- O-alkylaatiolle alkalihydroksidissa, edullisesti 3 N KOH:ssa, polaarisissa aproottisissa liuottimissa, sellaisissa kuten 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimi-dinoni (DMPU), metyylisulfoksidi (DMSO), N-metyyli-pyrro- 15 lidinoni (N-MP), 1,3-dimetyyli-2-imidatsolidinoni (DMEU), tetrametyyliurea (TMU) tai Ν,Ν-dimetyyliasetamidi (DMA), edullisesti voimakkaasti aproottisissa liuottimissa, sellaisissa kuten DMPU tai DMSO, edullisemmin DMSO, edullisesti noin 65 °C:ssa.

20 Selektiivinen hydraus saadaan aikaan käyttämällä

Pd/C:tä etikkahapossa: tt=\—rm Ί 0_/^=V'V'wlsc*K‘ '5 Pd/c.

25 t h acoh t 2) HC1 HN^)-C CH2 ) m- o—

C02H

30 HCl jossa R4 on n-butyyli ja m on 4.

Synteesissä käytetään trimetyylisilyyliryhmiä väliaikaisena suojauksena, joka mahdollistaa selektiivisen • · 6 107255 sulfonyloimisen suorittamisen synteesissä, jossa käytetään yhtä astiaa, käyttäen itse L-tyrosiinia.

Synteesissä käytetään edullisesti 1) 4-pikoliinia piperidiinin latenttina muotona, 5 mikä eliminoi suojaryhmän tarpeen kolmella hiiliatomilla, ja jaetun homologin muodostamista 3-bromi-l-klooripropaa-nin kanssa 4-pikolyylilitiumin kautta, 2) (L) -tyrosiinin väliaikaista bis-Ο,Ο' -silylointia BSTFA:11a, minkä avulla aikaansaadaan selektiivinen N-suI- 10 fonylaatio n-BuS02Cl: 11a, jolloin saadaan sulfonamidia korkealla saannolla ja vapaana rasemoitumiselta, yhdessä vaiheessa, 3) selektiivistä korkeasaantoista fenyylieetterrn muodostamista käyttämällä yksinkertaista reagenssia, ves:.- 15 pitoista alkaaliemästä (NaOH tai KOH, edullisesti 3 N KOH), DMPU:ssa (1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H -pyrimidinoni) tai DMSOrssa, ja 4) pyridiinirenkaan selektiivistä hydrausta tyro-siinirenkaan läsnäollessa käyttämällä Pd/C:tä etikkahapos- 20 sa.

Keksinnön mukaisessa synteesissä käytetään halpo;a lähtöaineita ja reagensseja, ja sillä vältetään tekniikan tason menetelmävaiheet, joissa käytetään potentiaalisesti vaarallisia NaH/DMF-seoksia eetterin muodostumisen indu-25 soimiseksi, mikä vaati kromatografisen puhdistuksen. Tämän keksinnön mukaisessa synteesissä ei tarvita mitään tällaista kromatografista puhdistamista.

Esimerkki 1

Valmistettiin seuraava

i.i \ CO I

hd2ct ''*jhso2 —/ ^ 35 yhdiste. Neljä menetelmävaihetta on esitetty alla: . · · 7 107255

Valhe 1 5 1)BSTFA ^3δ10ν^Ν

xx — XX

10 -02C^"""NH3* Μ^ίΟ,Ο

HO

2) pyr/n-BuS02Cl jT

3) 15%KHS04 Ί H02 C NH-S02( n- Bu) B4% 2 20 Vaihe 2 . σ — [cr- 2) Br(CH2)3Cl 3) HCl XX 3 VaPaa emäs 30 92% 4 HC1-suola 1072^5

8 I

Vaihe 3 5

1 ) 3N KOH, DM5O 65°C

+ 3 2) Kiteytykset 80% x 77% ” cr^tx 4 H02 C '^////// NH- S 02 ζ n- Bu) 15

Vaihe 4

1 )H2Pd/C, Ac OH

4 --- 2) vesip. HC1 94 % 20 HN^

HCl J

H2° 5 H02C-^Xnh-S02 : 25 2 ί e 9 107255

Vaihe 1: N-n-BuS02- (L) -tyrosiini (2) 50 l:n neljäkaulaista, pyöreäpohjaista pulloa, joka oli varustettu mekaanisella sekoittajalla, lauhduttimellä, typen syöttökohdalla, HCl-trapilla, lämmitysyksiköllä ja 5 lämpömittarianturilla, puhdistettiin typellä yön yli ja sen jälkeen se ladattiin (L)-tyrosiinilla (1040 g, 5,74 mol) 1, CH3CN:lla (20,8 1), N,O-bis-trimetyylisilyyli-tri-fluorimetyyliasetamidilla (3103 g, 12,054 mol). Suspensiota kuumennettiin 85 °C:sta - lievään palautusjäähdytysläm-10 potilaan 2 tunnin ajan. Saatu kirkas liuos, joka 41 NMR:n perusteella oli* pääasiallisesti O,0'-bis-trimetyylisilyy-li- (L) -tyrosiinia, jäähdytettiin 40 °C:seen, ja pyridiiniä (544,84 g, 6,888 mol) ja n-BuS02Cl:a (989,0 g, 6314 mol) lisättiin hitaasti 30 minuutin aikana. Reaktioseosta sei-15 sotettiin sen jälkeen 70 °C:ssa 3 tuntia ja huoneenlämpö-tilassa 14 tuntia. Melkein kaikki liuotin poistettiin pa-noskonsentroijassa ja saatu öljymäinen jäännös käsiteltiin 15 %:isella KHS04:lla (20,8 1) ja sekoitettiin voimakkaasti 1 tunnin ajan. Seos uutettiin i-propyyliasetaatilla (3 x 20 6,2 1). Yhdistetty orgaaninen kerros käsiteltiin Ecosorb™ S-402:lla (3,12 kg) ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Ecosorb™ poistettiin suodattamalla ja suodoskakku pestiin i-propyyliasetaatilla (4,2 1). Suodos haihdutettiin kuiviin ja saatu keltainen öljy liuotettiin kuumaan . 25 EtOAc:iin (45 - 50 °C, 1,25 1). Heksaania (3,74 1) lisät tiin hitaasti sekoitettuun liuokseen ja saatua lietettä sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Kiinteä aine kerättiin suodattamalla ja suodoskakku pestiin EtOAc/hek-saanilla (0,2 1/1,89 1). Vakuumissa kuivauksen jälkeen 30 saatiin 1457 g (84 %) 2:ta valkoisena kiinteänä aineena.

HPLC-koe: 99,6 A%, RT = 7,55 min; Zorbax RX-C8-pylväs, 4,6 mm x 25 cm ID, 220 nm, 1,5 ml /min, lineaarinen gra-dientti 10 - 90 % A:ta 10 minuutin aikana, A = CH3CN, 10 107255 B = 0,1 %:inen vesipitoinen H3P04. Sp. 125 - 126,5 °Z, [a] 25d = -25,2° (c 0,80, MeOH) , MS (El) m/z 301 (M+) 1H NMR (CD3OD) δ 0,81 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,24 (m, 2H), 1,45 (m, 2H) , 2,61 (t, J=7,9 Hz, 2H) , 2,73 (A ABX:stä, JM = 5 13,8 Hz, JH = 9,8 Hz, 1H) , 3,07 (B ABXrstä, JBA=13,8 Hz,

Jbx=4,7 Hz, 1H) , 4,07 (X ABX:stä, JXA=9,8 Hz, JXB=4,7 Hz, 1H) , 6,72 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 7,10 (d, J=8,4 Hz, 2H) .

13C NMR (CD3OD) δ 13,9, 22,5, 26,5, 39,1, 54,1, 59,5, 116,3, 129,2, 131,6, 157,5, 175,3.

i 10 Analyysi: Laskettu C13H1905SN: lie : C 51,81, H 6,35, N 4,65, S 10,64 Saatu: C 51,73, H 6,28, N 4,60, S 10,82.

Vaihe 2: 4-(4-pyridinyyli)butyylikloridi HCl-suola (4) 15 4-(4-pyridinyyli)butyylikloridin valmistuksessa oli tarpeellista kuumentaa 4-pikoliinia ja n-BuLi:a 40 °C:ssa 2 tuntia, jotta saataisiin aikaan täydellinen n-BuLi:n kulutus. Jos ei kuumenneta, osa reagoimattomasta n-BuLi:sta transmetalloituu 3-bromi-l-klooripropaanin 20 kanssa, jolloin saadaan n-butyylibromidia, joka sitten reagoi 4-pikolyylilitiumin kanssa, jolloin saadaan 4-per-tyylipyridiiniä. Päinvastainen 4-pikolyylilitiumin lisääminen 3-bromi-1-klooripropaaniin £ -65 °C:ssa oli kriittistä, jotta vältettäisiin bis-alkylaatiotuotteen, 1,5-. 25 bis-(4-pyridinyyli)pentaanin, muodostuminen. Täydellinen THF:n ja veden poistaminen olivat tärkeitä HC1-suolan tasaiselle muodostumiselle, koska THF reagoi HCl:n kanssa, jolloin saadaan 4-klooributanolia, joka lisää HCl-suolan liukoisuutta ja alentaa sen saantoa, ja veden läsnäolo 30 tekee HCl-suolan suodattamisesta hyvin vaikeaa johtuen hydraatin kumimaisesta luonteesta. Kun nämä varovaisuus-toimenpiteet otettiin huomioon, valmistettiin 4-(4-pyridinyyli) butyylikloridihydrokloridisuola (4) 92 %:isella saannolla ja 98 %:isella puhtaudella.

• · 11 107255 22 l:n neljäkaulaista pyöreäpohjäistä pulloa, joka oli varustettu mekaanisella sekoittajalla, lauhduttimellä, lisäyssuppilolla, jossa oli sivuhaara, ja lämpömittari-anturilla, puhdistettiin typellä yli yön. THF:a (4,1 1) ja 5 4-pikoliinia (838,2 g, 9,0 mol) lisättiin ja erä jäähdytettiin ^ -70 °C:seen. n-butyylilitiumia (7,02 1, 1,41 M) heksaanissa lisättiin hitaasti pitäen samalla sisäinen lämpötila i -50 °C:ssa.

Lisäämisestä kului noin 1 tunti, kunnes saatiin 10 oranssinvärinen liuos, jossa oli vähän saostumaa. Kun reaktio suoritettiin 0 °C:ssa, havaittiin merkittävä saannon pieneneminen ja epäpuhtauksien muodostumisen lisääntyminen .

Kuiva jäähaude poistettiin ja erän annettiin läm-15 metä huoneenlämpötilaan ja sitten kuumennettiin 40 45 °C:ssa 2 tuntia.

Kuumentaminen 40 - 45 °C:ssa oli optimaalinen lämpötila 4-pikoliinin täydellisen litioimisen suorittamiseksi ilman hajoamista. Ilman tätä lämmitystä reagoimaton 20 n-BuLi transmetalloitui 3-bromi-l-klooripropaanin kanssa, jolloin saatiin 1-n-butyylibromidia. Se reagoi sitten 4-pikolyylilitiumin kanssa, jolloin saatiin 4-pentyylipy-ridiiniä, jota ei voitu erottaa halutusta tuotteesta. Kuumentaminen korkeammassa lämpötilassa johti merkittävään 25 hajoamiseen.

THF:a (4,1 1) lisättiin 4-pikolyylilitiumlietteen liuottamiseksi, jolloin saatiin voimakkaan oranssinvärinen liuos. Erä jäähdytettiin 0 °C:seen, jonka jälkeen se lisättiin varovasti polypropyleeniletkun kautta käyttäen 30 pneumaattista pumppua -75 °C:iseen 3-bromi-l-klooripropaa nin liuokseen THF:ssa (1,5 1) kuivassa 50 l:n kolmekaulai-' sessa pyöreäpohjaisessa pullossa, joka oli varustettu me kaanisella sekoittajalla, typen syöttökohdalla ja poisto-kohdalla ja lämpömittarianturilla samalla pitäen sisäinen 35 lämpötila £ -65 °C:ssa.

• • · 12 107255 4-pikolyylilitiumin ja 3-bromi-l-klooripropaanin reaktio oli eksoterminen. Oli erittäin kriittistä pitää sisäinen lämpötila alle -65 °C:ssa, jotta vältettäisiin halutun tuotteen reaktio 4-pikolyylilitiumin kanssa 1,5-5 bis-(4-pyridinyyli)pentaanin muodostumiseksi. Lisääminen vei noin 2 tuntia.

Erän annettiin vähitellen lämmetä 0 °C:seen yli yön ja sitten se työstettiin lisäämällä 9 1 vettä, sekoittamalla 10 minuuttia, erottamalla kerrokset ja uuttamalla 10 vesipitoinen kerros i-propyyliasetaatilla (5 1). Yhdistetyt orgaaniset kerrokset konsentroitiin vakuumissa 40 °C:ssa kolmannekseen alkuperäisestä tilavuudesta panos-konsentroi jassa, johon oli sovitettu kaksi ylimääräisiä trappia säiliön ja sisäisen vakuumilinjan väliin, sitten 15 lisättiin i-propyyliasetaattia (6 1) ja taas konsentroitiin kolmannekseen alkuperäisestä tilavuudesta.

THF:n ja veden täydellinen poistaminen i-propyyll-asetaattiatseotroopilla oli kriittistä HCl-suolan tasaiselle muodostumiselle. THF reagoi HCl:n kanssa, jolloin 20 saadaan 4-klooributanolia, joka lisää HCl-suolan liukoisuutta ja alentaa sen saantoa. Veden läsnäolo antaa kumi-maisen kiinteän aineen, joka tekee HCl-suolan suodattamisesta hyvin vaikeaa.

Erä jäähdytettiin -10 °C:seen ja käsiteltiin sen . 25 jälkeen liuoksella, jossa oli 9,0 moolia HCl:ää 3 l:s;3a i-propyyliasetaattia.

HC1 i-propyyliasetaatissa valmistettiin päivää ennen kuplittamalla HCl-kaasua i-propyyliasetaatti:Ln -10 °C:ssa kunnes 9,1 moolia HCl:a oli kerääntynyt (painon 3 0 suhteen) ja säilytettiin huoneenlämpötilassa. HCl:n häv:.ö oli noin 1 %. HCl:n lisääminen erään oli eksoterminen. Lämpötila nousi +35 °C:seen.

1 tunnin sekoittamisen jälkeen muodostunut liete siirrettiin polypropyleeniletkun kautta käyttäen pneumaat-35 tista pumppua typellä täytettyyn suljettuun karkeaan suo- • ♦ 13 107255 datinsuppiloon, joka oli laitettu vakuumiin. Kiinteä aine pestiin useita kertoja THF:lla (4,5 1 kokonaistilavuus) ja kuivattiin typpivirralla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1710,4 g (92 %) 4:ää valkoisena kiinteänä aineena.

5 HPLC-koe: 98 % ala; RT = 2,40 min; Zorbax RX-pylväs, 4,6 mm x 25 cm ID, 220 nm, 1,5 ml/min, isokraattinen 50 % / 50 % A/B, A = CH3CN, B = 0,01 M dekaanisulfonihapon natriumsuola 0,1 %:isessa vesipitoisessa H3P04:ssa. 4-piko-liinille RT = 1,7 min.

10 Sp. 119 - 120,5 °C, MS(CI) m/z 169 (M+ - HC1) .

1H NMR (CD3OD) δ 1,79-2,00 (m, 4H) , 3,01 (t, J=7,3 Hz, 2H) , 3,36 (t, J=6,1 Hz, 2H), 8,00 (d, J=6,7 Hz, 2H), 8,75 (d, J=6,7 Hz, 2H) , 13C NMR (CD3OD) δ 28,1, 33,0, 36,1, 45,3, 128,6, 142,2, 15 166,1;

Analyysi: Laskettu C9H13NC12:lie: C 52,45, H 6,36, N 6,80, Cl 34,40.

Saatu: C 52,22, H 6,40, N 6,51, Cl 34,11.

Vaihe 3: Fenyylieetteri 5:n muodostaminen 20 KOH:n välittämmässä kytkentäreaktiossa ureapohjai- set liuottimet (DMPU, DMEU, TMU) ja DMSO antoivat parhaat koesaannot, 85 - 96 %. DMA ja N-MP antoivat koesaannot hiukan päälle 80. DMPU:n havaittiin olevan optimaalinen liuotin minimoimaan bisalkyloidun tuotteen muodostumista . 25 (1 %), kun taas DMSO antoi suurimman määrän bisalkyloitua tuotetta (2 %).

>« t 14 107I>55 H0 5 * fTYv^cl HOC^'^NH-SOjCn-Bu) N'^' 2 1 HC1 3

3N KOH, 75°C

10 Liuotin N‘^T

H02C ^"""NH-S02( n- Bu) 15 ho2c S02( n- Bu)

Kehitettiin suora eri s tysmene telinä kytkentätuot-20 teelle, jolla menetelmällä vältettiin metyleenikloridin suuri käyttö uuttamiseen. Vedellä laimennetun reaktioseoh-sen Ecosorb-käsittely ja suodattaminen, jota seurasi pH:n säätö sen isoelektriseen pisteeseen (pH 4,8) tarjosivet raakatuotteen 80 %:isen saannon 93 - 95 A %:isella puhtai-25 della. Seuraava pH:n säätö (pH 5,5) ja kaksi huuhtelua 10 %:isessa AcOH/vedessä poistivat reagoimattoman n-BuS0:;-Tyr:n ja bis-epäpuhtauden, jolloin saatiin 99+ A %:ise>n puhdasta beigenväristä kiinteää ainetta 77 %:isella eris-tyssaannolla. Jos bis-epäpuhtautta on yhä läsnä ei-hyväl·:-30 syttävä määrä (>0,1 A %), pitäisi suorittaa vielä huuhtelu 10 %:isessa AcOH/vedessä. Vaihtoehtoisesti pH voidaan säntää 5,5:een mieluummin kuin pH 4,8:aan Ecosorb-käsittelyn ja suodattamisen jälkeen, niin että tuotteen saostaminch ja n-BuS02-Tyr:n eliminoiminen yhdistetään samaan vaihee-35 seen. Tämä eliminoi yhden eristyksen.

15 107255

Eetterin muodostaminen ja puhdistaminen

Vaihe 3a: 50 l:n neljäkaulaiseen, pyöreäpohjaiseen pulloon, joka oli varustettu mekaanisella sekoittajalla, lauhdutti-5 mella, typen syöttökohdalla ja lämpömittarianturilla, ladattiin N-n-butaanisulfonyyli-(L)-tyrosiinia (1386,3 g, 4,6 0 mol), 4- (4-pyridinyyli)-butyylikloridi.HC1:a (1137,8 g, 5,52 mol) ja DMSO:ta (16,56 1). Voimakkaasti sekoittaen lisättiin 3 N:ista vesipitoista KOH:a (5,52 1, 10 16,56 mol) 15 minuutin aikana.

3 N:n vesipitoisen KOH:n sekoittaminen loppuosan kanssa materiaalia oli hiukan eksoterminen. Lämpötila pidettiin välillä 30 - 40 °C tämän operaation ajan käyttämällä jäähdytysvettä.

15 Kaliumjodidia (7,64 g, 46,0 mmol) lisättiin, ja seosta kuumennettiin 65 °C:ssa 24 tunnin ajan ja 60 °C:ssa 12 tunnin ajan (tai kunnes reaktio oli 95 %:isesti mennyt loppuun arvioituna HPLC-analyysillä). Huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen seos laimennettiin 0,25 N NaOH:lla 20 (46 1) ja uutettiin kerran t-butyylimetyylieetterillä (23 1). Vesipitoinen kerros käsiteltiin Ecosorb S-402:lla (2,0 kg) ja Nuchar SA:lla (150 g) ja saatua seosta (~67 1) sekoitettiin mekaanisesti 1 tunti. Seos suodatettiin kar-keahuokoisen sintterilasisuppilon läpi ja suodoskakku pes-. 25 tiin 69 1:11a Dl-vettä. Yhdistetty suodos ("136 1) laitet tiin 200 l:n astiaan, joka oli varustettu pH-mittarian-turilla ja mekaanisella sekoittimella. Voimakkaasti sekoittamalla lisättiin NaCl:a (2,5 kg), sekoitettiin 30 minuuttia ja sen jälkeen lisättiin 50 %:ista vesipitoista 30 etikkahappoa (~4 1), kunnes pH oli 4,80, ja sekoittamista jatkettiin 2-3 tuntia.

pH oli alussa noin 13,3. Kun pH oli lähellä 4,8:aa muodostui hiukan ruskeaa, kumimaista ainetta yhdessä bei-genvärisen kiinteän aineen kanssa. Tarvittiin pidentynyttä 16 107255 sekoitusaikaa täydelliseksi muuttumiseksi kiteiseksi aineeksi. Jos pH on alle 4,8, tulisi lisätä laimeaa NaOHru.

Saatu liete suodatettiin karkeahuokoisen sintterl-lasisuppilon läpi ja kakku pestiin 23 1:11a Dl-vettä. Rau-5 ka tuote kuivattiin 40 °C:ssa sisäisessä vakuumissa positiivisessa typen paineessa 20 tuntia, jolloin saatiin 1599 g (80 %) seosta, jossa oli ruskeaa ja beigenväristä kiinteää ainetta, jonka paino-%-puhtaus oli 95 %.

Pääasialliset epäpuhtaudet ovat tyrosiini-lähtöaine 10 (0,75 A %) ja bisalkyloitu tuote (2,75 A %) . Emäliuoksct ja pesuliuokset yhdistettyinä sisälsivät noin 10 % tuotetta LC-analyysillä. HPLC-koe: tuote 5, 96 % ala, RT = 6,76 min, tyrosiini 1, RT = 7,66 min, bis-alkyloitu tuote , RT = 6,20 min; Zorbax RX-C8-pylväs, 4,6 mm x 25 cm II·, 15 220 nm, 1,5 ml/min, lineaarinen gradientti 10 - 90 % A: ta 10 minuutin aikana, A = CH3CN, B = 0,1 %: inen vesipitoinen h3po4.

Vaihe 3b:

Kiinteä aine puhdistettiin edelleen 99,4 A%:n puh-20 tauteen seuraavilla menetelmillä.

Molempien epäpuhtauksien poistaminen tässä vaiheessa on kriittistä ennen aineen altistamista hydraukselle, koska hydratut bis-epäpuhtaus ja tyrosiini 1 ovat äärimmäisen vaikeita poistaa.

. 25 50 l:n RB-pulloon, joka oli varustettu lämpömitta- rianturilla ja lisäyssuppilolla, laitettiin raaka 5 (1,50 kg, 3,45 mol) ja 0,25 N NaÖH:a (19,33 1, 4,83 mol). Kiinteän aineen täydellisen liuottamisen jälkeen varovasti kuumentamalla 60 - 70 °C:ssa muutaman minuutin ajan lisät -30 tiin 0,25 N NaHC03:a (4,83 1, 1,21 mol). Liuos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja pH säädettiin 7:ksi lisäämällä hitaasti 1 N HCl:a (~2,65 1). Liuoksen pH laskettiin edelleen 5,5 reen lisäämällä hitaasti 0,5 N HCl:a (~5,10 1) . Sekoittamista jatkettiin 1 tunti, jonka jälkeen liete suo -35 datettiin karkean suppilon läpi, joka oli päällystetty • · • ; « 17 107255 "shark"-kalvopaperilehdellä ja polypropyleenityynyllä (10 μπι) ja kakku pestiin DI-H20:llä (10 1) . Kiinteä aine kuivattiin sisäisessä vakuumissa typpisuihkussa, jolloin saatiin 1,42 kg beigenväristä kiinteää ainetta.

’ 5 Tämä käsittely poisti suurimman osan tyrosiini l:tä. Tässä vaiheessa näytteen tulisi sisältää £0,1 ala-%:a l:tä. Peräkkäiset huuhtomiset 10 %:isessa Ac0H/H20:ssä poistivat bis-alkyloidun epäpuhtauden. Kiinteän lietteen suodatusta käyttämällä M-huokoista sintterilasisuppiloa ei 10 suositella johtuen äärimmäisen matalasta virtausnopeudesta. C-huokoista sintterilasisuppiloa ei tulisi käyttää johtuen vähäisestä läpimenosta.

Kiinteä aine suspendoitiin 10 %:iseen etikkahappoon vedessä (1 g/ 15 ml) ja kuumennettiin höyryllä 80 °C:seen 15 5 minuuttia, jonka jälkeen sen annettiin jäähtyä hitaasti huoneenlämpötilaan yön yli. 18 tunnin sekoittamisen jälkeen kiinteä aine kerättiin karkealle suppilolle, joka oli päällystetty "shark"-kalvopaperilehdellä ja polypropylee-nitäytteellä (10 μιη) , pestiin Dl-vedellä (20 1) ja kuivat-20 tiin osittain käyttämällä sisäistä vakuumia ja typpisuih-kua useiden tuntien ajan. Tämä huuhtelu toistettiin ja kiinteä aine pestiin Dl-vedellä (20 1), metanolilla (3 x 41) ja kuivattiin vakuumissa 35 °C:ssa typpisuihkussa kahden päivän ajan. Saatiin 1,16 kg (77 %, 62 kokonais-%) 25 likaisen valkoista kiinteää ainetta.

• ·

Myöhäisempi tutkimus osoitti, etteivät metanolipe-sut olleet välttämättömiä. Noin'5 % aineesta menetettiin tässä operaatiossa. Jos bis-alkyloidun epäpuhtauden taso on suurempi kuin 0,1 %, tulisi suorittaa toinen etikkahap-30 po/vesi-huuhtelu.

HPLC-koe: tuote 5, 99,8 % ala, RT = 6,76 min, tyrosiini 1, RT = 7,66 min, bis-alkyloitu tuote, RT = 6,20 min; Zorbax RX-C8-pylväs, 4,6 mm x 25 cm ID, 220 nm, 1,5 ml/min, lineaarinen gradientti 10 - 90 % A:ta 10 minuutin aikana, A = 3 5 CH3CN, B = 0,1 %:inen vesipitoinen H3P04.

♦ · ·· 18 107255

Sp. 137 - 138 °C, [a] 25d = -14,7 ° (c 0,91, MeOH), MS (Cl) m/z 435 (MH+).

XH NMR (CD3OD) δ 0,86 (t, J=7,3 Hz, 3H) , 1,33 (hex, J=7,3

Hz, 2H), 1,68 (m, 2H), 1,83 (m, 2H), 2,82 (m, 2H), 3,06 (A 5 ABX: stä, Jm«13,9 Hz, JM=6,3 Hz, 1H) , 3,16 (B ABX:stä, JBA=13,9 Hz, Jbx=5,0 Hz, 1H) , 3,90 (t, J=5,7 Hz, 2H) , 4,32 (X ABX: stä, Jxa=6,3 Hz, ^=5,0 Hz, 1H) , 6,72 (d, J=8,6 Hz, 2H), 7,17 (d, J= 8,6 Hz, 2H), 7,33 (d, J=6,3 Hz, 2H), 8,19 (d, J=6,3 Hz, 2H) , 10 13C NMR (CDCI3) δ 13,5, 21,5, 25,4, 26,5, 28,6, 35,1, 38,9, 53,0, 57,9, 67,0, 114,3, 125,0, 128,7, 130,8, 145,3, 155,8, 157,7, 175,0,

Analyysi: Laskettu C22H30O5SN2: lie : C 60,81, H 6,96, N 6,45, S 7,38 15 Saatu: C 60,53, H 6,88, N 6,26, S 7,65.

Vaihe 4: Hydraus

Lopuksi suoritettiin pyridiinirenkaan selektiivinen hydraus piperidiinirenkaaksi käyttämällä 5 p-%:a 10 %:ist:a Pd/C:llä AcOH:ssa 60 °C:ssa, jolloin saatiin haluttu tuote 20 puhtaasti ilman f enolirenkaan pelkistymistä. Hydrausta seurattiin huolellisesti HPLC:lla ja 1HNMR:11a silloin, kun vedyn teoreettinen otto oli lähellä. Heti kun lähtöainein kuluminen on täydellinen, hydraus tulisi lopettaa. Reak-tioseoksen suodattaminen, etikkahapon haihduttaminen, jota 25 seurasi tuotteen kiteyttäminen 6 %:isesta AcOH/vedestä > antoi 6:n vapaan emäksen. Vähäiset lähtöainemäärät poistettiin huuhtelemalla 6 %:isessa AcOH/vedessä. Vapaan emäksen käsittely 2,5 til.-%:isella konsentroidulla HCl:lla (2,1 ekv.) i-propyyliasetaatissa antoi 5.:n (hydrc-30 kloridi)monohydraattia 94 %:isella kokonaissaannolla val koisesta likaisen valkoiseen kiinteänä aineena >99,7 A %:n puhtaudella, jossa kahta epäpuhtautta kumpaakin oli 0,1 A %-taso.

« · 19 107255

Vaihe 4a:

Fenyylieetteri 5 (1,051 kg, 2,42 mol) ja 10 %:ista Pd/C:tä (53 g, 5 p-%) etikkahapossa (14 1) hydrattiin 5:n gallonan ruostumattomasta teräksestä valmistetussa astias-5 sa 40 psi:ssä ja 60 °C:ssa. Reaktiosta otettiin näytteitä kerran tunnissa reaktion loppumisen lähellä ja se lopetettiin heti, kun lähtöaineen täydellinen loppuunkuluminen havaittiin (kesti 5,5 tuntia). Pitempi reaktioaika johti epäpuhtauksien muodostumiseen.

10 1 ml: n näyte suodatettiin Solka-Flock'n (pesty etikkahapolla) ohuen täytteen läpi, pestiin etikkahapolla ja haihdutettiin kuiviin kiertohaihduttimessa. Saatua öljyä käsiteltiin muutamalla millilitralla vettä kiinteän aineen saostamiseksi, ja sen jälkeen pantiin takaisin 15 kiertohaihduttimeen kuivumaan. Saatu valkoinen kiinteä aine analysoitiin 1HNMR:lla (CD30D) ja HPLCrlla. Koko menetelmä kesti noin 30 minuuttia suorittaa loppuun. 1HNMR:ssä (CD3OD) pyridiinipiikkien 7,32 ja 8,40 ppm:ssa täydellinen häviäminen osoittaa lähtöaineen täydellisen kulumisen. 20 HPLC:aa (käyttämällä edellä kuvattuja lineaarisen gradientin olosuhteita) käytettiin seuraamaan epäpuhtauden määrää RT = ~8,9 minuutin kohdalla, tämä epäpuhtaus lisääntyy merkittävään määrään, kun hydraus kesti pitempään. Lähtöaineen ja tuotteen piikit tulivat hyvin lähelle toisiaan, 25 niiden retentioaikojen ollessa 6,76 ja 6,80, mainitussa j ärj estyksessä.

Reaktioseos suodatettiin Solka-Flock-täytteen (820 g, pesty 5 1:11a etikkahappoa) läpi ja pestiin etikkahapolla (14 1). Suodos konsentroitiin paksuksi öljyksi, 30 joka sisälsi noin 1 kg etikkahappoa, panoskonsentroijassa, johon oli sovitettu kaksi lisätrappia keräyssäiliön ja si-säisen vakuumilinja välille 60 °C:ssa (kesti noin 5 tuntia) . Dl-vettä (15 1) lisättiin konsentraatioon 1 g/15 ml 6 %:ista etikkahappoa vedessä ja saatua lietettä sekoitet-35 tiin 18 tuntia huoneenlämpötilassa. Kiinteä aine kerättiin Buchner-suppiloon, joka oli päällystetty "shark"-kalvopa- • 20 107255 periliuskalla ja polypropyleenitäytteellä (10 μπι) , pestiin DI-vedellä (10 1) ja kuivattiin vakuumissa typpisuihkuss a, jolloin saatiin 1,03 kg (97 %) valkoista kiinteää ainetta.

Jos 5.:n määrä on vielä korkeampi kuin ohjearvo, 5 tulisi suorittaa toinen huuhtelu 6 %:isessa etikkahaposoa vedessä (1 g/15 ml) (vähintään 6 tuntia) . Tyypillinen saanto on noin 92 %:a 5,:n 3-kertaisella vähentymisellä. HPLC-koe: 6. vapaa emäs, 99,5 ala-%, RT = 6,94 min, 5. RT = 6,72 min, 1 RT = 7,39 min; Zorbax RX-C8-pylväs, 4,6 mm x 10 25 cm ID, 220 nm, 1,5 ml/min, lineaarinen gradientti 20 - 70 % A: ta 12 minuutin aikana, A = CH3CN, B = 0,1 %:inen vesipitoinen H3P04. Sp. 223 - 225 °C.

1H NMR (CD3OD) δ 0,88 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,33 (m, 6H), 1,58 (m, 5H), 1,76 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 2,77 (t, J=7,5, 2H), 15 2,80 (m, 1H) , 2,88 (m, 2H) , 3,03 (B ABX:stä, JBA=13,9 Hz,

Jbx=4,6 Hz, 1H) , 3,30 (m, 2H) , 3,90-4,0 (m, 3H) , 6,80 (cj, J=8,5 Hz, 2H), 7,18 (d, J=8,5 Hz, 2H). |

Analyysi: Laskettu ^-22^37^5^2^ · ί C 59,84, H 8,40, N 6,34, S 7,24 20 Saatu: C 59,98, H 8,40, N 6,40, S 7,24. j

Vaihe 4b: 22 l:n kolmekaulaiseen RB-pulloon, joka oli varustettu mekaanisella sekoittajalla, typen syöttökohdalla ja lisäyssuppilolla, laitettiin 6.:n vapaata emästä (316,0 g, 25 0,717 mol) ja isopropyyliasetaattia (9,5 1). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa (19 °C) 10 - 15 minuuttia, jonka jälkeen lisättiin konsentroitua kloorivetyhappoa (120 ml) tipoittain. Lisäys kesti noin 40 minuuttia ja lämpötila pysyi 19 °C:ssa lisäyksen ajan. Seosta sekoitet-30 tiin sitten huoneenlämpötilassa (19 °C) edelleen 5 tuntia.

Tuote eristettiin suodattamalla typpi-ilmakehässä. Kiinteä tuote pestiin isopropyyliasetaatilla (2x11) ja imukui-vattiin typpi-ilmakehässä yön yli, jolloin saatiin 6_:.i HCl-monohydraattia (348 g) 98 %:isella saannolla.

I · 21 107255 HPLC-koe: 6., 99,8 ala-%, RT = 6,79 min; Zorbax RX-C8-pyl-väs, 4,6 mm x 25 cm ID, 220 nm, 1,5 ml/min, lineaarinen gradientti 10 - 90 % A:ta 10 minuutin aikana, A = CH3CN, B = 0,1 %:inen vesipitoinen H3P04, tai L-700,462, 99,8 5 ala-%, RT = 6,94 min; 5, RT = 6,72 min; 1, RT = 7,39 min; Zorbax RX-C8-pylvas, 4,6 mm x 25 cm ID, 220 nm, 1.5 ml/min, lineaarinen gradientti 20 - 70 % A:ta 12 minuutin aikana, A = CH3CN, B = 0,1 %:inen vesipitoinen H3P04. Kiraalinen HPLC: L-isomeeri, >99,9 %, RT = 10 min; D-iso- 10 meeri, <0,1 %, RT = 8,5 min; ULTRON-ES-OVM-pylväs, 4,6 mm ✓ x 25 cm, 5 m, "guard"-pylväällä, 220 nm, 0,7 ml/min, iso-kraattinen, 90 %:inen puskuri (6 g ammoniumformaattia, jonka pH säädetty 4,l:een muurahaishapolla), 10 %:inen MeOH.

15 Spl. 87 - 88 °C, sp2. 131 - 132 °C, [a]25D = - 14,4 ° (c 0,92, MeOH), XH NMR (CD30D) 6 0,84 (t, J=7,3 Hz, 3H), 1,23 (hex, J=7,3 Hz, 2H) , 1,30-1,70 (m, 9H) , 1,75 (m, 2H) , 1,95 (m, 2H) , 2,64 (t, J=7,4, 2H), 2,77 (A ABX:stä, JAB=13,9Hz, JAX=9,8 20 Hz, 1H), 2,95 (m, 2H), 3,11 (B ABX:stä, JBA=13,9 Hz, JBX=- 4.6 Hz, 1H) , 3,47 (m, 2H) , 3,95 (t, J=6,2 Hz, 2H) , 4,09 (X ABX: stä, JXA=9,8 Hz, JXB=4,6 Hz, 1H) , 6,84 (d, J=8,6 Hz, 2H), 7,18 (d, J=8,6 Hz, 2H).

13C NMR (CD3OD) δ 14,0, 22,5, 24,0, 26,5, 30,0, 30,4, 34,8, 25 36,8, 39,0, 45,3, 54,1, 59,4, 68,7, 115,5, 130,4, 131,7, 159,6, 175,2.

IR (Nujol, cm-1) 3520, 3208, 3166, 2800-2300, 1727, 1610, 1595, 1324, 1256, 1141, 1119, 829.

HRMS laskettu C22H37N205S: lie 441,2423, saatu 441,2423 (MH+-30 H20-C1)

Analyysi: Laskettu C22H3906C1N2S:lie: C 53,37, H 7,94, N 5,66, Cl 7,16, S 6,48.

Saatu: C 53,56, H 8,04, N 5,62, Cl 7,36, S 6,53. 1 · >«

Claims (6)

107255

1. Yhdiste, jolla on kaava co2h ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, t u :i- n e t t u siitä, että suola on hydrokloridisuola.

3. Menetelmä yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava N(=W^°Y^ co2h ^^v^:-1'NHS02C4H9 2. ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistei- miseksi, tunnettu siitä, että yhdisteelle, jolla on kaava H 0^^. C02H

25 L^'s^^-'NHSO^Hg suoritetaan fenoli-O-alkylaatio kaavan 3o mukaisen yhdisteen kanssa vesipitoisessa alkalihydroksi-dissa voimakkaasti polaarisessa aproottisessa liuottimes-35 sa. > · » 107255

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fenoli-O-alkylaatio suoritetaan voimakkaasti polaarisessa aproottisessa liuottimessa, joka on 1,3-dimetyyli-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pyrimidinoni tai 5 metyylisulfoksidi, 3 N KOH:ssa noin 65 °C:n lämpötilassa.

5. Yhdisteen c\°2h

10 Nnhso2c4h9 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan käyttö yhdisteen 15 |s/ co2h N' Vsj^^'"*NHS02C4H9 20 tai sen vastaavan farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistukseen, tunnettu siitä, että edellä mainittu yhdiste O^^°'0JCls0AH. 30 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola hydrataan f selektiivisesti.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että lähtöyhdiste on hydrokloridisuolan muodossa. > · · 107255