FI104079B - Menetelmä tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin immunologiseksi määrittämiseksi - Google Patents
Menetelmä tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin immunologiseksi määrittämiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI104079B FI104079B FI913069A FI913069A FI104079B FI 104079 B FI104079 B FI 104079B FI 913069 A FI913069 A FI 913069A FI 913069 A FI913069 A FI 913069A FI 104079 B FI104079 B FI 104079B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- propeptide
- procollagen
- type
- human
- typ
- Prior art date
Links
- 102100036213 Collagen alpha-2(I) chain Human genes 0.000 title claims abstract description 25
- 101000875067 Homo sapiens Collagen alpha-2(I) chain Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title 1
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 claims description 25
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 claims description 21
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims 1
- RYXPMWYHEBGTRV-UHFFFAOYSA-N Omeprazole sodium Chemical compound [Na+].N=1C2=CC(OC)=CC=C2[N-]C=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C RYXPMWYHEBGTRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 claims 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims 1
- 239000002893 slag Substances 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 11
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 abstract 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 5
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 5
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 1
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 1
- 102100030152 Complement C1r subcomponent-like protein Human genes 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010056438 Growth hormone deficiency Diseases 0.000 description 1
- 241001622557 Hesperia Species 0.000 description 1
- 101100326463 Homo sapiens C1RL gene Proteins 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009578 growth hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N iodine-125 Chemical compound [125I] ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 101150108812 proC gene Proteins 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 description 1
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/971—Capture of complex after antigen-antibody reaction
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/805—Optical property
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/808—Automated or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Slide Fasteners, Snap Fasteners, And Hook Fasteners (AREA)
- Filters For Electric Vacuum Cleaners (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Management, Administration, Business Operations System, And Electronic Commerce (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
104079
Menetelmä tyypin I prokollageenin Jcarboksiterminaalisen propeptidin immunologiseksi määrittämiseksi - Metod för immunologisk bestämning av karboxiterminal propeptid av , typ I prokollagen Tämä keksintö koskee menetelmää tyypin I prokollageenin synteesin mittaamiseksi ihmisillä.
Tyypin I kollageenia tavataan monentyyppisissä erilaisissa sidekudoksissa kaikkialla ihmisen kehossa, mutta eniten sitä esiintyy luissa, joissa sen osuus orgaanisesta aineesta on yli 95 %. Monet taudit ovat yhteydessä syntetisoituvan kollageenin määrän lisääntymiseen, t.s. luuaineen muo-dostumisnopeuden kasvuun ja uusiutumisen lisääntymiseen. Erityisesti olisi toivottavaa, että pystyttäisiin mittaamaan tämä nopeus koska osteoporoosi ja muut metaboliset luusairaudet ovat yleinen terveysongelma ja tällainen mittaus voisi toimia suuntaa antavana suunniteltaessa näiden sairauksien hoitoa.
Tyypin I kollageeni syntetisoituu prokollageenina, joka sisältää molekyylin molemmissa päissä propeptidipidennyk-set. Tyypin I kollageenin syntetisoitumisnopeus voidaan täten mitata määrittämällä sen propeptidin määrä, joka vapautuu prokollageenin muuttuessa kollageeniksi. Tyypin I prokollageenin propeptidin määritys on esitetty (Taubman et ai., Science 186, 1115-1117, 1974) ja siinä viitataan antigeeniin, jonka uskottiin olevan tyypin I prokollageenin aminoterminaalinen propeptidi. Kuitenkin mitatun antigeenin osoitettiin jälkeenpäin olevan kaikkein ilmeisimmin ; peräisin karboksiterminaalisesta osasta.
Lisäksi tässä määrityksessä käytetyn propeptidiantigeenin, joka on puhdistettu kasvatettujen fibroplastien tuottamasta prokollageenista, on havaittu reagoivan myös tyypin III prokollageenin vastaavan propeptidin kanssa (Simon et ai., 2 104079 J.Clin.Endocrinol.Metab. 58, 110-120, 1984). Kun propepti-diantigeeni on pelkistetty ja sen jälkeen tutkittu SDS-po-lyakryyliamidigeelielektroforeesilla, on saatu kolme -neljä erilaista vyöhykettä (Goldberg et ai., Collagen Rel. Res 5, 393-404, 1985; kuvio 3 sivulla 398). Tämä on todiste ylimääräisistä ketjuista, jotka ovat peräisin tyypin lii prokollageenin karboksipeptidistä. Näin aikaisemmin kuvattu määritys ei ole spesifinen tyypin I prokollagee-nille.
viljellyt ihmisen ihon fibroplastit tuottavat aina sekä tyypin I että tyypin lii prokollageenia. Kuitenkin on teknisesti vaikeata täysin erottaa näitä kahta tyyppiä toisistaan. Suolafraktiointi, joka on useimmiten käytetty erotusmenetelmä, ei johda täydelliseen erottumiseen. Tyypin III prokollageenin konsentraatio on usein todettu käyttäen tyypin III prokollageenin aminoterminaaliselle propeptidille esitettyä määritysmenetelmää. Kuitenkaan tämä ei ole riittävän herkkä, koska se ei tunnista mole-kyylejä, jotka sisältävät karboksiterminaalisen propepti-din mutta joista puuttuu aminoterminaalinen osa (tällaiset molekyylit tunnetaan tyypin III pC-kollageenina).
Tästä johtuen tämän keksinnön tarkoituksena on kehittää menetelmä tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin (lyhennetty PICP) tuottamiseksi, joka olisi vapaa tyypin III prokollageenin vastaavasta propeptidistä (lyhennetty PIIICP), ja luoda kvantitatiivinen menetelmä, joka on nopea ja yksinkertainen toteuttaa tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin määrän mittaa-; miseksi ihmisen seerumista.
Tämä keksintö koskee tyypin I prokollageenin karboksiter-1 minaalista propeptidiä, joka on vapaa tyypin III prokolla geenin propeptidistä.
j 3 104079
Puhdistetun propeptidin valmistus alkaa materiaalista, joka sisältää riittävän konsentraation joko vapaata propep-tidiä tai tyypin I prokollageenia. Esimerkkejä ensiksi mainitusta ovat esim. askitesneste, parantuvan haavan in-terstitiaalineste ja seerumi. Ihmisen fibroblastien solu-viljelyneste on esimerkki viimeksi mainitusta. Kuitenkin viljellyt ihmisen fibroblastit poikkeavat toisistaan sen suhteen, miten ne soveltuvat prokollageenilähtöaineen tuottamiseen. Primääriset viljelmät, joita ylläpidetään käyttäen mukana suhteellisen suuria vasikanseerumikonsent-raatioita (yli 10 %), tuottavat suurimmat määrät prokollageenia. Nämä ovat tietysti vain esimerkkejä, muita lähteitä voidaan käyttää yhtä hyvin.
Jos lähdetään prokollageenilähteestä, on edullista erottaa suurin osa tyypin III prokollageenista prokollageenivai-heessa tyypin I prokollageenista. Tämä voidaan tehdä sarjalla saostuksia, esim. käyttäen ammoniumsulfaattia ja natriumkloridia. Tämän jälkeen suoritetaan geelisuodatus ja ioninvaihtokromatografiat.
PICP:n lopullinen erottaminen PIIICP:stä aikaansaadaan propeptidivaiheessa. Prokollageenin bakteerikollagenaasi-katkaisu tuottaa propeptidin, joka sen jälkeen puhdistetaan lektiinisitoutumisella, geelisuodatuksella ja kroma- ’ tografialla.
Sekä PICP että PIIICP sisältävät mannoosi-rikkaita oligo-sakkaridisivuketjuja ja siten ne sitoutuvat konkanavaliini A-lektiiniin. PICP:n tehokas erottaminen kontaminoivasta ; PIIICP:stä perustuu tämän jälkeen siihen, että viimeksi mainittu, kun se tuotetaan viljelemällä ihmisen fibroblas-teja, on fosforyloitunut ja siitä johtuen varaukseltaan negatiivisempi ja eluoituu kromatografoitaessa paljon myöhemmin kuin PICP. On edullista, että kromatografointi suoritetaan käyttäen ioninvaihtokromatografiaa ja käänteis- 104079 .
4 faasikromatografiaa pH-arvossa, joka on yli 4,0. Esim. DEAE-Sephacel-ioninvaihtokromatografiapylvään NaCl-gradi-entti eluoi erottavasti PIIICP:n ja PICP:n.
Tuotteen suolan poistaminen ja PICPrn lopullinen puhdistaminen voidaan tehdä käänteisfaasikromatografiällä. Kroma-tografoinnit tulisi suorittaa olosuhteissa, jotka ovat sellaiset, että propeptidi ei denaturoidu. On edullista, että edellä mainitut kromatografoinnit suoritetaan sellaisissa oloissa, joissa valmisteen pH pysyy välillä 4,0 - 8,5. On tunnettua, että prokollageenien ja propeptidien käsitteleminen käytännössä on vaikeata, jolloin seurauksena ovat alhaiset saannot. Yksityiskohtaiset olosuhteet tyypilliseen puhdistusmenetelmään, jolla PICP voidaan eristää olennaisesti vapaaksi PlICPrstä, on kuvattu jäljempänä esitetyssä esimerkissä.
Kun lähdetään propeptidien seoksesta (tyyppi I ja tyyppi III), tyypin I propeptidi voidaan saada geelisuodatuk-sella, esim. Sephacryl S-300:lla, lektiini-affiniteetti-sitoutumisella, esim. käyttäen konkanavaliini A-lektiiniä, ioninvaihtokromatografialla, esim. DEAE-selluloosalla ja käänteisfaasikromatografiällä pH-arvon ollessa yli 4,0.
Eristetty propeptidi on homogeeninen SDS-polyakryyliamidi- ' geelielektroforeesilla. Pelkistyksen jälkeen elektroforeesilla, päinvastoin kuin aikaisempien valmisteiden yhtey dessä, saadaan ainoastaan kaksi vyöhykettä, joissa likimääräiset molekyylimassat ovat noin 30 000 ja suhde noin 2.1. Tämä osoittaa, että tyypin III prokollageenin propeptidi puuttuu. Aminoterminaalisen sekvenssin analyysi myös vahvistaa, ettei läsnä ole yhtään ketjua, joka olisi peräisin tyypin III prokollageenin karboksiterminaalisesta j propeptidistä.
i
I Keksintö koskee myös vasta-ainetta, joka syntyy tyypin I
! prokollageenin karboksiterminaalista propeptidiä vastaan, s 104079 erityisesti keksintö koskee vasta-ainetta, jolla ei ole affiniteettia tyypin III prokollageenin karboksiterminaa-liselle propeptidille. Tämä vasta-aine voidaan synnyttää käyttäen alalla tunnettuja menetelmiä. Esimerkiksi immunisaatio propeptidillä voidaan suorittaa kuten Niemelä O., Risteli L·., Parkkinen J. ja Risteli J. ovat kuvanneet eräälle toisella prokollageenipropeptidiantigeenille julkaisussa Biochem.J. 232, 145-150, 1985.
Tämä keksintö koskee myös menetelmää tyypin I kollageenin karboksiterminaalisen propeptidin määrittämiseksi, jossa menetelmässä analysoitava näyte saaatetaan kosketukseen keksinnön mukaisen vasta-aineen kanssa leiman läsnäollessa, siten että leima sitoutuu muodostuneeseen propeptidi-vasta-ainekompleksiin ja sitoutunut ja/tai sitoutumaton leima määritetään.
Uusi analyysi takaa nopean ja tarkan propeptidikonsentraa-tioanalyysin. Se on erityisen käyttökelpoinen niissä kliinisissä olosuhteissa, joissa varsinaiset muutokset toisiaan seuraavien analyysien konsentraatioiden välillä eivät ole kovin suuret. Esimerkkejä tästä ovat estrogeenihoidon vaikutus osteoporosipotilailla ja kasvuhormonihoito lapsilla, joilla on kasvuhormonipuutos.
Analyysi voidaan suorittaa saattamalla tämä ensimmäinen vasta-aine leiman läsnäollessa kosketukseen tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin kanssa ja analysoitavan näytteen kanssa, näin muodostunut leimattu propeptidi-vasta-ainekompleksi erotetaan kompleksoitumat-; tomasta aineesta ja analysoidaan kompleksoitunut ja/tai kompleksoitumaton leima. Propeptidi-vasta-aine-kompleksi voi olla kosketuksessa toisen vasta-aineen kanssa, joka on spesifinen ensimmäiselle vasta-aineelle ja joka voi sitoutua kiinteään tukeen. Sen jälkeen propeptidi-vasta-aine-vasta-ainekompleksi voidaan erottaa kompleksoitumattomasta aineesta.
6 104079
Analyysissä käytetyn leimatun propeptidin täytyy myös olla vapaa tyypin III prokollageenin karboksiterminaalisesta propeptidistä (PIIICP).
Tämä propeptidin immunologinen analyysi, jossa käytetään » kuvatulla tavalla valmistettuja reagensseja, voidaan suorittaa esim. radioaktiivisella, fluoresoivalla, luminesoi-valla tai entsymaattisella leimalla, joka on joko indeksi-antigeenissa tai vasta-aineessa. Tavallisesti leima liitetään indeksiantigeeniin, joka on tyypin I kollageenin puhdistettu, karboksiterminaalinen propeptidi. voidaan käyttää joko polyklonaalisia tai monoklonaalisia vasta-aineita. Täysikasvuisilla ihmisellä propeptidin konsentraatio on tavallisesti noin 40 - 200 mikrogrammaa/seerumilitra. vauvoilla ja lapsilla konsentraatio on merkittävästi kor- , keampi.
Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä. Esimerkissä 1 käytettiin ihmisen fibroblasteista saatua kasvualustaa. Kui-1 tenkin on myös mahdollista käyttää soluja ja nesteitä, jotka saadaan muista lajeista, kuten naudasta, lampaasta ja siasta, vasta-aineiden saamiseksi, joilla on riittävä 1 ristireaktio ihmisen PICP:n kanssa.
ESIMERKKI 1
Ihmisen tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin, joka on vapaa tyypin III prokollageenin karboksiterminaalisesta propeptidistä, eristäminen.
; 30 litraa ihmisen ihon fibroblasteista saatua kasvatus- alustaa saostetaan kiinteällä (NH4)2S04:llä (20%:inen kyllästys). Saostetut proteiinit kerätään sentrifugoimalla 30 minuutin ajan 15 000 x g, liuotetaan ja dialysoidaan seosta vastaan, jossa on 50 mM Tris/HCl:ää, pH 7,4, 1 M NaClrää ja joka sisältää proteaasi-inhibiittoreita (3 mg/1 fenyy-m 7 104079 limetyylisulfonyylifluoridia, N-etyyli-maleimidiä ja p-hyd-roksielohopea(2)bentsoaattia ja 10 mM EDTA:ta) ja saoste-taan kiinteällä NaCl:llä (lopullinen konsentraatio 1,7 M). Supernatantti, joka sisältää suurimman osan tyypin I pro-kollageenista, kromatografoidaan Sephacryl S-500-pylväässä ja prokollageeneja vastaavat fraktiot yhdistetään ja dia-lysoidaan DEAE-lähtöpuskuria vastaan (katso jäljempänä).
Sen jälkeen näyte kromatografoidaan DEAE-Sephacel-pylvääs-sä (5 x 30 cm), joka on tasapainotettu seoksessa, jossa on 50 mM Tris/HCl:ää, pH 8,0, 6 M ureaa ja joka sisältää edellä luetellut proteaasi-inhibiittorit. Eluointi suoritetaan NaCl:n lineaarisella gradientilla (3000 + 3000 ml). Tyypin I prokollageenin sisältävät fraktiot yhdistetään, dialysoidaan puskuria vastaan, jossa on 50 mM Tris/HCl:ää ja 0,5 M NaClrää ja edellä mainitut proteaasi-inhibiittorit. Sen jälkeen prokollageenivalmiste valutetaan pylvääseen, joka on Con-A Sepharose (2 x 20 cm) (Pharmacia, Uppsala, Ruotsi) ja kun valmiste on sidottu pylvääseen, elu-oidaan 0,5 M alfa-metyylimannosidilla. Dialysoidaan 0,2 M NH4HCO3:a vastaan, jonka jälkeen valmiste lyofilisoidaan. Eristetty prokollageeni, joka yhä sisältää jälkiä tyypin III prokollageenista, kuten osoittaa tyypin III prokollageenin aminoterminaalisen propeptidin analyysi, katkaistaan 15 tunnin ajan +30 °C:ssa erittäin puhdistetulla bak-teerikollagenaasilla (Worthington, laatu CLSPA), käyttäen 9 mg entsyymiä/30 litraa alkuperäistä kasvatusalustaa. Geelisuodatuksen, joka suoritetaan Sephacryl S-300:11a (2,5 x 120 cm 0,2 M:ssa NH4HC03:ssa), ja lyofilisoinnin jälkeen dialysoidaan 50 mM Tris/asetaatti-puskuria, pH
8,6, vastaan ja kromatografoidaan käyttäen HPLC-laitteessa : Protein Pak DEAE 5PV-kolonnia (Waters, Milford, Massachu setts, USA), ja sitoutunut proteiini eluoidaan NaCl:n lineaarisella gradientilla (0 - 60 min, 0 - 0,5 M). Lopullinen puhdistaminen tapahtuu pH-stabiililla käänteisfaasiko-lonnilla, (500 mM ammoniumasetaatti, pH 8,0, kolonni: Vy-dac 228 TP, The Separatios Group, Hesperia, Kalifornia, USA) HPLC-laitteessa.
„ 104079
Kuten kuviossa l on esitetty, puhdistetulla PICP:llä saadaan ainoastaan yksi vyöhyke SDS-polyakryyliamidigeeli-elektroforeesissa ja pelkistyksen jälkeen saadaan vain kaksi vyöhykettä, joilla moolisuhde on noin 2:1, osoittaen, että tuote on vapaa tyypin III karboksiterminaalisesta propeptidistä.
ESIMERKKI 2
Tasapainotyyppisen radioimmunomäärityksen suorittaminen:
Kymmenen mikrogrammaa tyypin I prokollageenin karboksiter-minaalista propeptidiä leimataan 1 millicuriellä jodi-125: ttä käyttäen kloramiini-T:tä (5 mikrogrammaa) ja leimattu propeptidi eristetään vapaasta jodista geelisuodattamalla Sephacryl S-300-kolonnissa (1 x 200 cm), joka on tasapainotettu PBS-puskurissa, joka sisältää 1 mg/ml naudan see-rumialbumiinia. Leimattu propeptidi (tai merkkiaine) elu-oituu kolonnista terävänä huippuna paljon ennen vapaata jodia. Kalibrointi suoritetaan muodostamalla antiseerumin sitoutumiskäyrät 50 000 radioaktiivisuusyksiköllä per minuutti (cpm) leimattua propeptidiä. Seerumin tai kehon muun nesteen tuntemattoman näytteen propeptidikonsentraa-tio määritetään seuraavalla radioimmuno-inhibitiomäärityk-sellä: ennalta testattu määrä antiseerumia inkuboidaan * ’ tuntemattoman näytteen ja 50 000 cpm merkkiainetta kanssa 2 tuntia 37 eC:ssa. Sen jälkeen kiinteäfaasinen toinen vasta-aine kanin gammaglobuliinia vastaan lisätään ja 15 minuutin inkuboinnin jälkeen 20 °C:ssa immuunikompleksiin sitoutunut antigeeni erotetaan liuoksesta sentrifugoimal- ; la. Tuntemattoman näytteen inhibitioaktiivisuutta verra taan leimaamattoman tyypin I prokollageeninen karboksiter-minaalisen propepitidin vakiokonsentraatioiden aktiivisuuteen.
Claims (11)
1. Menetelmä ihmisen tyypin I prokollageenin karboksiter-minaalisen propeptidin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että saatetaan toistensa kanssa kosketukseen missä tahansa järjestyksessä (i) ihmisen ruumiinnestenäyte, jonka tiedetään tai epäillään sisältävän mainittua propeptidiä, (ii) vasta-aine, joka spesifisesti sitoutuu ihmisen tyypin I prokollageenin karboksiterminaaliseen propeptidiin mutta ei ihmisen tyypin III prokollageenin karboksiterminaaliseen propeptidiin ja (iii) leima, siten että leima sitoutuu sellaisena määränä, joka riippuu näytteessä olevan propeptidin määrästä, ja määritetään sitoutunut ja/tai sitoutumaton leima, joka osoittaa ihmisen tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin läsnäolon tai määrän näytteessä.
2. Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat därav, att den märkta karboxiterminala propeptiden av typ I pro- . kollagen och provet som skall bestämmas, bringas i kon- » 1, takt med antikroppen, det sk bildade propeptid-antikropp-komplexet avskiljs frän det okomplexerade ämnet och den komplexerade eller okomplexerade markören bestäms.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että leimattu tyypin I prokollageenin karboksiter-minaalinen propeptidi ja määritettävä näyte saatetaan kosketukseen vasta-aineen kanssa, näin muodostunut pro-peptidi-vasta-ainekompleksi erotetaan kompleksoitumatto-masta aineesta ja kompleksoitunut tai kompleksoitumaton leima määritetään. • < ’ 3. Patenttivaatimuksen l tai 2 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että mainitun propeptidin ja mainitun, ensimmäisen vasta-aineen muodostama kompleksi saatetaan kosketukseen toisen, ensimmäiselle vasta-aineelle spesifisen vasta-aineen kanssa ja propeptidi-vasta-aine-vasta- . ainekompleksi erotetaan kompleksoitumattomasta aineesta.
3. Förfarande enligt patentkravet 1 eller 2, kännetecknat 104079 därav, att ett komplex bildat ur nämnda propeptid och nämnda första antikropp bringas i kontakt med en andra antikropp, vilken är specifik för den första antikroppen, och propeptid-antikropp-antikropp-komplexet avskiljs frän det okomplexerade ämnet. ,
4. Förfarande enligt patentkravet 3, kännetecknat därav, att den andra antikroppen är bunden tili en fast bärare.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että toinen vasta-aine on sitoutunut kiinteään tukeen. 104079
5. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-4, känne-tecknat därav, att markören är en radioaktiv, enzymatisk, luminiscerande eller fluorescerande markör.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että leima on radioaktiivinen, entsyymi-nen, luminesoiva tai fluoresoiva leima.
6. Förfarande enligt nägot av patentkraven 1-5, kännetecknat därav, att den himana kroppvätskan är serum, sär-vätska eller askitesvätska.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ihmisen ruumiinneste on seerumi, haavaneste tai askitesneste.
7. Förfarande enligt patentkravet 6, kännetecknat därav, att den humana kroppvätskan är serum.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ihmisen ruumiinneste on seerumi.
8. Förfarande för att producera en karboxiterminal propeptid av typ I prokollagen (PICP) fri frän en karboxiterminal propeptid av typ III prokollagen (PIIICP), vilken förmär producera en antikropp, som reagerar specifikt med human PICP, kännetecknat därav, att en blandning, som innehäller PICP och PIIICP, kromatograferas under icke-denaturerande förhällanden.
8. Menetelmä tyypin III prokollageenin karboksiterminaalisesta propeptidistä (PIIICP) vapaan tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin (PICP) tuottamiseksi, joka kykenee tuottamaan vasta-ainetta, joka reagoi spesifisesti ihmisen PICP:n kanssa, tunnettu siitä, että PICP:tä ja PIIICP:tä sisältävä seos kromatografoidaan ei-denaturoivissa olosuhteissa.
9. Förfarande enligt patentkravet 8, kännetecknat därav, *i;i att propeptidblandningen kromatograferas genom att and- j j . vända motfasseparation vid pH över 4,0.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että propeptidiseos kromatografoidaan käyttäen käänteisfaasierotusta pH:ssa, joka on yli 4,0.
10. Förfarande för att producera en karboxiterminal propeptid av typ I prokollagen (PICP) fri frän en karboxiterminal propeptid av typ III prokollagen (PIIICP) vilken förmär producera en antikropp, som reagerar specifikt med i human PICP, kännetecknat därav, att frän blandningen, som rm F' ·«¥* 104079 innehäller typ I prokollagen och typ III prokollagen, av-lägsnas närvarande typ III prokollagen, omvandlas prokol-lagenerna tili motsvarande karboxiterminala propeptider, varefter förfarandet enligt patentkravet 8 eller 9 utfö-res.
10. Menetelmä tyypin III prokollageenin karboksiterminaa-lisesta propeptidistä (PIIICP) vapaan tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin (PICP) tuottami- 1 seksi, joka kykenee tuottamaan vasta-ainetta, joka reagoi ; spesifisesti ihmisen PICP:n kanssa, tunnettu siitä, että » j tyypin I prokollageenin ja tyypin III prokollageenin si sältävästä seoksesta poistetaan läsnäoleva tyypin III ; prokollageeni, muutetaan prokollageenit vastaaviksi karboksiterminaalisiksi propeptideiksi, jonka jälkeen suoritetaan patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen menetelmä.
11. Vasta-aine, joka soveltuu käytettäväksi jonkin pa- T tenttivaatimuksista 1-7 mukaisessa menetelmässä, ja joka m 104079 on tuotettu tyypin III prokollageenin karboksiterminaalisesta propeptidistä (PIIICP) vapaan tyypin I prokollageenin karboksiterminaalista propeptidiä (PICP) vastaan, tai jonkin patenttivaatimuksista 8-10 mukaisella menetelmällä valmistettua peptidiä vastaan, jolla vasta-aineella on affiniteettia ihmisen tyypin I prokollageenin karboksiterminaaliseen propeptidiin, mutta jolla ei ole affiniteettia ihmisen tyypin III prokollageenin karboksiterminaaliseen propeptidiin. • 1. Förfarande för att bestämma en karboxiterminal propep-tid av human typ I prokollagen, kännetecknat därav, att man i godtycklig ordning bringar i kontakt med varandra (i) ett humant kroppvätskeprov, vilket man vet eller misstänker innehälla nämnda propeptid, (ii) en antikropp, vilken specifikt binder sig tili en karboxiterminal propeptid av human typ I prokollagen men inte tili en karboxiterminal propeptid av human typ III prokollagen och (iii) en markör, sk att markören binder sig i en sädan mängd, som beror pä propeptidmängden i provet, och den bundna och/eller obundna markören bestäms, vilket visar t ' närvaron eller mängden av en karboxiterminal propeptid av human typ I prokollagen i provet.
11. En antikropp, som är lämplig för att andvändas i förfarandet enligt nägot av patentkraven 1-7 och som produ-cerats mot en karboxiterminal propeptid av typ I prokollagen (PICP) fri frän en karboxiterminal propeptid av typ III prokollagen (PIIICP) eller mot en peptid framställd genom förfarandet enligt nägot av patentkraven 8-10, vil-ken antikropp har affinitet tili en karboxiterminal propeptid av human typ I prokollagen, men som inte har affinitet tili en karboxiterminal propeptid av human typ III prokollagen. m .
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB909014220A GB9014220D0 (en) | 1990-06-26 | 1990-06-26 | Method for the immunlolgical determinition of the carboxyterminal propeptide of type i procollagen |
| GB9014220 | 1990-06-26 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI913069A0 FI913069A0 (fi) | 1991-06-24 |
| FI913069A FI913069A (fi) | 1991-12-27 |
| FI104079B true FI104079B (fi) | 1999-11-15 |
| FI104079B1 FI104079B1 (fi) | 1999-11-15 |
Family
ID=10678234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI913069A FI104079B1 (fi) | 1990-06-26 | 1991-06-24 | Menetelmä tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin immunologiseksi määrittämiseksi |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5698407A (fi) |
| EP (1) | EP0465104B1 (fi) |
| JP (1) | JP3137676B2 (fi) |
| AT (1) | ATE142646T1 (fi) |
| DE (1) | DE69121990T2 (fi) |
| DK (1) | DK0465104T3 (fi) |
| ES (1) | ES2091292T3 (fi) |
| FI (1) | FI104079B1 (fi) |
| GB (2) | GB9014220D0 (fi) |
| GR (1) | GR3021053T3 (fi) |
| NO (1) | NO303693B1 (fi) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4225038C2 (de) * | 1992-07-29 | 1995-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Herstellung und Verwendung von Antikörpern gegen Kollagen |
| JPH08505149A (ja) * | 1992-12-28 | 1996-06-04 | ジェイ． ベイリンク，デビッド | 骨再吸収検定法 |
| JP2703116B2 (ja) * | 1993-07-28 | 1998-01-26 | ベーリンガー マンハイム ゲーエムベーハー | コラーゲンまたはコラーゲン断片を検出するためのイムノアッセイ |
| GB9506050D0 (en) | 1995-03-24 | 1995-05-10 | Osteometer A S | Assaying collagen fragments in body fluids |
| EP0787301B1 (en) | 1994-10-17 | 2001-02-14 | Osteometer Biotech AS | Estimation of the fragmentation pattern of collagen in body fluids and the diagnosis of disorders associated with the metabolism of collagen |
| GB9507985D0 (en) * | 1995-04-19 | 1995-06-07 | Orion Yhtymae Oy | Antibody to aminoterminal propeptide to type 1 procollagen and assay method using it |
| DE69628576T2 (de) | 1995-08-31 | 2004-04-22 | The Victoria University Of Manchester | Procollagene |
| US6107047A (en) * | 1996-03-21 | 2000-08-22 | Osteometer Biotech A/S | Assaying protein fragments in body fluids |
| GB9617616D0 (en) | 1996-08-22 | 1996-10-02 | Osteometer Biotech As | Assaying protein fragments in body fluids |
| EP0944833B1 (en) | 1996-12-09 | 2001-06-27 | Osteometer Biotech AS | Sandwich assays for collagen fragments |
| AU752227B2 (en) * | 1997-07-31 | 2002-09-12 | General Hospital Corporation, The | Collagen-peptide assay method |
| US6117646A (en) * | 1997-09-22 | 2000-09-12 | Osteometer Biotech A/S | Assaying protein fragments in body fluids |
| WO2012122334A2 (en) * | 2011-03-08 | 2012-09-13 | The Johns Hopkins University | Procollagen carboxy-terminal propeptides as a target and treatment for angiogenesis related diseases |
| KR101787485B1 (ko) | 2015-12-30 | 2017-11-15 | 재단법인 의약바이오컨버젼스연구단 | 재조합 picp 단백질 및 이에 특이적으로 결합하는 항체의 제조방법 |
| JP2021151953A (ja) * | 2018-03-30 | 2021-09-30 | 独立行政法人国立高等専門学校機構 | 組換え構造タンパク質の製造方法、組換え構造タンパク質、タンパク質成形体及びタンパク質成形体の製造方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2208865B (en) * | 1987-08-19 | 1991-12-11 | Farmos Group Ltd | Purified propeptide of procollagen type iii, antibody to the propeptide and assay method using the antibody. |
| AU3687889A (en) * | 1988-04-29 | 1989-11-24 | Bionovus, Inc. | Improved micro-hplc |
-
1990
- 1990-06-26 GB GB909014220A patent/GB9014220D0/en active Pending
-
1991
- 1991-06-24 FI FI913069A patent/FI104079B1/fi not_active IP Right Cessation
- 1991-06-25 NO NO912493A patent/NO303693B1/no not_active IP Right Cessation
- 1991-06-25 JP JP03153281A patent/JP3137676B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-06-26 GB GB9113791A patent/GB2245568A/en not_active Withdrawn
- 1991-06-26 ES ES91305768T patent/ES2091292T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-06-26 DE DE69121990T patent/DE69121990T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-06-26 EP EP91305768A patent/EP0465104B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-06-26 AT AT91305768T patent/ATE142646T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-06-26 DK DK91305768.3T patent/DK0465104T3/da active
-
1995
- 1995-06-05 US US08/464,557 patent/US5698407A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-09-17 GR GR960402421T patent/GR3021053T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69121990T2 (de) | 1997-01-23 |
| GB2245568A (en) | 1992-01-08 |
| GB9113791D0 (en) | 1991-08-14 |
| NO912493L (no) | 1991-12-27 |
| EP0465104B1 (en) | 1996-09-11 |
| DE69121990D1 (de) | 1996-10-17 |
| US5698407A (en) | 1997-12-16 |
| FI913069A0 (fi) | 1991-06-24 |
| NO912493D0 (no) | 1991-06-25 |
| EP0465104A1 (en) | 1992-01-08 |
| JP3137676B2 (ja) | 2001-02-26 |
| ES2091292T3 (es) | 1996-11-01 |
| GB9014220D0 (en) | 1990-08-15 |
| GR3021053T3 (en) | 1996-12-31 |
| FI104079B1 (fi) | 1999-11-15 |
| NO303693B1 (no) | 1998-08-17 |
| DK0465104T3 (da) | 1996-09-30 |
| FI913069A (fi) | 1991-12-27 |
| JPH04261199A (ja) | 1992-09-17 |
| ATE142646T1 (de) | 1996-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI104079B (fi) | Menetelmä tyypin I prokollageenin karboksiterminaalisen propeptidin immunologiseksi määrittämiseksi | |
| Melkko et al. | Radioimmunoassay of the carboxyterminal propeptide of human type I procollagen | |
| FI92880B (fi) | Tyypin III kollageenin hajoamisen määritys | |
| Ruoslahti et al. | [46] Fibronectin: Purification, immunochemical properties, and biological activities | |
| Thomas et al. | Electrophoretic heterogeneity and polypeptide chain structure of the gamma-subunit of mouse submaxillary 7 S nerve growth factor. | |
| Aunis et al. | Immunocytochemical and biochemical demonstration of contractile proteins in chromaffin cells in culture | |
| Imawari et al. | Immunological and immunoassay studies of the binding protein for vitamin D and its metabolites in human serum. | |
| Matthews et al. | Evidence for the presence of two nonidentical subunits in carbamyl phosphate synthetase of Escherichia coli | |
| US5296354A (en) | Kit for the specific assay of angiotensin II | |
| KR940009957B1 (ko) | 1,25-디하이드록시 비타민 d의 분석방법 | |
| ATE92634T1 (de) | Verfahren zur bestimmung eines proteins nach dem prinzip des fluoreszenz-polarisations immunoassays. | |
| Giro et al. | Quantitation of elastin production in cultured vascular smooth muscle cells by a sensitive and specific enzyme-linked immunoassay | |
| JPS61204135A (ja) | 発癌遺伝子生成物阻害剤 | |
| Lertora et al. | Studies on a radioimmunoassay for human erythropoietin | |
| JP2801212B2 (ja) | タイプ▲ｉｉｉ▼プロコラーゲンのプロペプチドに対する抗体およびそれを用いるアッセイ法 | |
| Deutsch | Relationships of two light chain immunoglobulins isolated from the same human source (low molecular weight immunoglobins) | |
| JPS6259783B2 (fi) | ||
| AU707232B2 (en) | Antibody to aminoterminal propeptide of type 1 procollagen, and assay method using it | |
| US6008325A (en) | Antibody to aminoterminal propeptide of type 1 procollagen | |
| DK0418590T3 (da) | Antistoffer, fremstilling deraf og anvendelse deraf | |
| Zak et al. | Study of ventricular isomyosins during normal and thyroid hormone induced cardiac growth | |
| CA2157387C (en) | Method and compositions for recombinant osteogenic protein production | |
| Goldberg et al. | The carboxyl fragment released by bacterial collagenase from human type I procollagen: antibodies to the propeptide determinants | |
| McKenzie et al. | Crosslinks between intramolecular pairs of ferritin subunits: Effects on both H and L subunits and on immunoreactivity of sheep spleen ferritin | |
| JPH08505369A (ja) | 精製されたｔｓｈ製剤、その製法、及び、ｔｓｈ受容体検定用ｔｓｈトレーサー製造での及びｔｓｈ受容体検定でのその用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |