FI102378B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 4-amino- 4,6-steroidien va lmistamiseksi - Google Patents

Description

102378

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 4-amino-Δ4^-steroidien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää uusien 4-amino-A4,6-5 steroidien valmistamiseksi. Uudet yhdisteet ovat käyttökelpoisia 5a-reduktaasi-inhibiittoreina.

Nisäkkään steroidi-5a-reduktaasi, entsyymi, jota on läsnä nisäkkään kudoksissa, iho, uroksen sukuelimet ja eturauhanen mukaan lukien, katalysoi testosteroni-ste-10 roidihormonin, muuttumista dihydrotestosteroni (17fi-hyd- roksi-5a-androstan-3-oni) -steroidihormoniksi. Testosteroni ja dihydrotestosteroni (DHT) ovat kumpikin androgeenisiä hormoneja, ja ne ovat primäärisiä androgeenisiä steroideja uroksilla. Nämä steroidit ovat vastuussa fysi-15 kaalisista ominaisuuksista, jotka erottavat urokset naaraista. DHT kuitenkin on paljon tehokkaampi androgeenina kuin testosteroni, ja se vaikuttaa pääte-elin-tehostajana tietyissä kudoksissa erityisesti välittäen kasvua. Sen lisäksi DHT:n muodostumista tapahtuu primäärisesti koh-20 desoluissa itsessään seurauksena testosteronin pelkistymi sestä 5a-reduktaasin vaikutuksesta.

Tunnettua on, että iho reagoi androgeeneille ja on aktiivinen androgeenin aineenvaihdunnallinen kohta. Erityisesti testosteroni muuttuu DHT:ksi iholla 5a-reduk-25 taasin vaikutuksesta. Testosteroniaineenvaihdunta iholla voi ajoittain olla epänormaalisen liiallista, ja sillä voi olla ei-toivottavia vaikutuksia seurauksena muodostuneesta DHTtstä. Täten on olemassa merkittävä osoitus siitä, että DHT on osallisena aknen syntyyn, acne vulgaris mukaan lu-30 kien, samoin kuin muissa androgeeniin liittyvissä ti- ·; loissa. [Katso Price, Arch. Dermatol. Ill, 1496 (1975)] .

Aineet, jotka pystyvät estämään DHT:n muodostumisen testosteronista iholla, kuten ehkäisemällä 5a-reduktaasin vaikutusta, olisivat sen vuoksi käyttökelpoisia aknen hoi-35 dossa.

102378 2

Lisäksi toiset fysikaaliset tilat ja tautitilat, mukaan lukien hyvänlaatuinen eturauhanen liikakasvu, and-rogeeninen kaljuus (yleinen hiustenlähtö, jota androgeeni aiheuttaa perinnöllisesti herkissä miehissä ja naisissa), 5 talirauhasten vilkas toiminta ja naisten liikakarvaisuus, ovat myöskin yhteydessä kohonneeseen androgeeniaktiivisuu-teen ja olisivat hoidettavissa antamalla 5a-reduktaasi-inhibiittoreita. [Katso T. Liang ym., Endrocrinology 117, 571 (1985); J.R. Brooks ym., Steroids 47, 1 (1986); J.R.

10 Carlin ym., Journal of Chromatography, 427, 79 (1988)].

Täten aineet, jotka pystyvät estämään DHT:n muodostumista testosteronista ehkäisemällä 5a-reduktaasin vaikutuksia, olisivat myöskin tehokkaita näitä tiloja hoidettaessa.

Tämä keksintö koskee menetelmää yhdisteiden val-15 mistamiseksi, jotka ovat 4-amino-Ä4,6-steroideja ja jotka ovat käyttökelpoisia 5a-reduktaasin inhibiittoreina. Täsmällisemmin sanoen tämä keksintö koskee menetelmää ami-nosteroidiyhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava

Rl 20 | r4 li J_| (i·)

25 0 Z

NHR

jossa R on vety tai C^-alkanoyyli, R1 on C2.6-alkanoyyli, -C2_6-alkyyli-OZ2, -C2.6-alkyyli-(OZ2) 2 tai -A-C(0)-Y, Z2 on 30 vety, C1.6-alkyyli, Ci.j-alkanoyyli tai bentsoyyli, A puuttuu *: tai on läsnä alkyleeninä, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, Y on -OH, -O(Cj.g-alkyyli) tai -NR2R3; R2 ja R3 ovat kumpikin itsenäisesti vety tai C^-alkyyli, R4 on vety tai metyyli, X on O tai (H) (H) , Z on vety tai C^-alkyyli ja kukin piste-35 viivoista renkaissa merkitsee mahdollisesti läsnä olevaa 102378 3 kaksoissidosta edellyttäen, että 9,11-kaksoissidos voi olla läsnä vain kun X on (H)(H).

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että 5 kaavan 1' mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa R on vety, yhdiste, jolla on kaava 10 __ (II')

O

15 jossa R1, R4, X ja Z ovat edellä määriteltyjä, saatetaan reagoimaan natriumatsidin kanssa inertissä liuottimessa, minkä jälkeen haluttaessa kaavan 1' mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa R on Ci.j-alkanoyyli, asyloidaan kaavan 1' mukainen yhdiste, 20 jossa R on vety.

Erilaiset edellä mainitut alkyyliryhmät voivat olla suora- tai sivuketjuisia, ja esimerkkejä niistä voivat olla, edellytetyissä hiilirajoissa, metyyli, etyyli, propyy-li, isopropyyli, butyyli, sek.-butyyli, tert.-butyyli, 25 pentyyli ja heksyyli. Kun alkyyliryhmissä on substituent-teina kaksi -OZ2-ryhmää, nuo kaksi OZ2-ryhmää ovat eri hiiliatomeissa. Eräitä esimerkkejä edellä mainituista kahden tyyppisistä HO-substituoiduista alkyyliryhmistä ovat hydr-oksimetyyli, 1-hydroksietyyli, 1,2-dihydroksietyyli, 1-me-30 tyyli-2-hydroksietyyli, 1-hydroksipropyyli ja 3-hydrok- *: sipropyyli. Esimerkki eetteröidystä R1-ryhmästä (ts. Z2 on alkyyli) on 2-metoksi-l-metyylietyyli. Esimerkkejä este-röidyistä R1 ryhmistä, ts. Z21 on alkanoyyli, bentsoyyli tai substituoitu bentsoyyli) ovat 2-asetoksi-l-metyylietyyli 35 ja 2-bentsoyyli-l-metyylietyyli. Tapauksissa, joissa opti- 4 102378 nen isomeria on mahdollinen R^substituentissa, yksityiset puhtaat optiset isomeerit ovat kumpikin osa tästä keksinnöstä. Edellä mainitut C2_6-ai kanoyyli ryhmät voivat olla suora- tai sivuketjuisia, ja niistä voivat olla esimerk-5 keinä asetyyli, propionyyli, butyryyli, isobutyryyli ja heksanoyyli. C-L.g-alkanoyyliryhmistä voidaan esittää esimerkkejä samalla tavalla, ja niihin sisältyy myös formyy- li. Kun R1 on -A-C(0)-Y ja A puuttuu, silloin karbonyyli-funktio on sitoutunut suoraan steroidirenkaaseen; kun A on 10 alkyleeni, jossa on 1-6 hiiliatomia, esimerkkejä A:sta ovat metyleeni, etyleeni, etylideeni, propyleeni ja tetra-metyleeni.

Ensisijaisen yhdisteiden ryhmän muodostavat yhdisteet, joissa R2 on vety ja X on (H) (H) . Edelleen ensisijai-15 siä ovat yhdisteet, joissa R2 on vety ja R4 on metyyli. Yhä edelleen ensisijaisia tehokkaina 5a-reduktaasi-inhibiittoreina ovat yhdisteet, joissa R1 on -C(0)NR3R4, jossa R3 ja R4 ovat kumpikin itsenäisesti vety tai C^-alkyyli. Lisäksi yhdisteet, joissa R1 on - (Cj.g-alkyyli)-OZ2, jossa Z2 on 20 edellä määritelty, ja erityisesti, joissa R1 on -CH(CH3)-CH2OZ2, ovat myöskin käyttökelpoisia, koska aktiivisuutensa lisäksi 5a-reduktaasi-inhibiittoreina, ne ehkäisevät myös C17-20"lyaaSia ·

Edellä mainittujen yhdisteiden, joissa R on vety 25 tai Ci.g-alkyyli, happoadditiosuolat farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa, ovat samanarvoisia edellä mainittujen amiinien kanssa tämän keksinnön tarkoituksiin. Valaisevia sellaisista suoloista ovat suolat epäorgaanisten happojen, kuten esimerkiksi kloorivety-, bromivety-, 30 rikki-, fosfori- ja näiden kaltaisten happojen kanssa; *: orgaanisten karboksyylihappojen, kuten esimerkiksi etik ka-, propioni-, glykoli-, maito-, palorypäle-, maloni-, meripihka-, fumaari-, omena-, viini-, sitruuna-, askorbii-ni-, maleiini-, hydroksimaleiini- ja dihydroksimaleiini-, 35 bentsoe-, fenyylietikka-, 4-aminobentsoe-, 4-hydroksibent- 5 102378 soe-, antraniili-, kaneli-, salisyyli-, 4-aminosalisyyli-, 2-fenoksibentsoe-, 2-asetoksibentsoe-, manteli- ja näiden kaltaisten happojen kanssa; ja orgaanisten sulfonihappo-jen, kuten metaanisulfonihapon ja p-sulfonihappojen kans-5 sa.

Esimerkkejä tämän keksinnön mukaisesti valmistettavista yhdisteistä ovat seuraavat: 4-aminopregna-4,6-dieeni-3,20-dioni, 4-aminopregna-l,4,6-trieeni-3,20-dioni, 10 4-aminopregna-4,6,9(11)-trieeni-3,20-dioni, 4-amino-7-metyylipregna-4,6-dieeni-3,20-dioni, 4-amino-19-norpregna-4,6-dieeni-3,20-dioni, 4-amino-3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17S-karboksiamidi, 4-amino-N-(1,1-dimetyylietyyli)-3-oksoandrosta-4,6-dieeni-15 17S-karboksiamidi, 4-amino-N,N-dietyyli-3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17B-karbok-siamidi, 4-amino-N,N-pentametyleeni-3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17β-karboksiamidi, 20 2-[4-amino-N-(1,1-dimetyylietyyli)-3-oksoandrosta-4,6- dien-176-yyli]asetamidi, 4 -amino-3 -oksopregna-4,6-dieeni-2 0-karboksyylihappo, 4-amino-3-oksopregna-4,6-dieeni-20-karboksyylihappo-metyyliesteri, 25 4-amino-N,N-dietyyli-3-oksopregna-4,6-dieeni-20-karbok- siamidi, 4-aminopregna-4,6-dieeni-3,11,20-trioni, 4 -amino-21-hydroks i-2 0-metyylipregna-4,6-dien-3-oni, 4-amino-20-hydroksipregna-4,6-dien-3-oni, 30 4-amino-17&-hydroksimetyyliandrosta-4,6-dien-3-oni, 4-amino-N,N-bis[1-metyylietyyli)-3-oksoandrosta-l,4,6-tri-eeni-17E-karboksiamidi.

4-amino-N-(1,1-dimetyylietyyli)-7-metyyli-3-oksoandrosta- 4,6-dieeni-17E-karboksiamidi, 102378 6 4-(metyyliamino)-N-(1,1-dimetyylietyyli)-3-oksoandrosta- 4,6-dieeni-17fi-karboksiamidi, (20S)-4-(metyyliamino)-21-hydroksi-20-metyylipregna-4,6-dien-3-oni ja 5 (20S)-4-amino-21-metoksi-20-metyylipregna-4,6-dien-3-oni.

Keksinnön mukaisesti valmistettavia yhdisteitä voidaan käyttää hoidettaessa potilasta, jota vaivaa DHT:n välittämä sairaus tai tila, antamalla mainitulle potilaalle tehokkaasti 5a-reduktaasia ehkäisevä määrä tämän 10 keksinnön mukaisesti valmistettavaa yhdistettä. Tässä käy tettynä, termi "potilas" tarkoittaa lämminveristä eläintä, kuten ihmistä, jota vaivaa DHT:n välittämä sairaus tai tila. DHT-välitteisiä sairauksia tai tiloja ovat sellaiset tilat, jotka ovat yhteydessä kohonneeseen androgeeniaktii-15 visuuteen liiallisesta DHT:n muodostumisesta johtuen. Sellaisia DHT-välitteisiä sairauksia tai tiloja ovat finnit, acne vulgaris, hyvänlaatuinen eturauhasen liikakasvu, and-rogeeninen kaljuus (yleinen hiustenlähtö, jota androgeeni aiheuttaa perinnöllisesti herkissä miehissä ja naisissa), 20 talinvuoto ja naisten liikakarvaisuus.

Yksityiskohtaisesti kuvattuna tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä kaavan II' mukainen 4,5-epoksiyh-diste saatetaan reagoimaan natriumatsidin kanssa inertissä liuottimessa, kuten dimetyylisulfoksidissa. Reaktio suori-25 tetaan katalyyttisen määrän vahvaa happoa, kuten rikkihappoa, läsnä ollessa lämmittämällä 100 °C:ssa. Mitään välituotteita ei pyritty eristämään, mutta näyttää siltä, että epoksidi aukeaa ensin, jolloin saadaan 4-atsido-4-eeniä. Käytetyissä reaktio-olosuhteissa atsidoyhdiste menettää 30 typpeä, muodostuu oletettua atsiriinia, ja tämä aukeaa, ·* jolloin saadaan haluttua 4-amino-4,6-dieeniä. Tällä taval- la saadun aminoyhdisteen voidaan antaa reagoida edelleen sopivan anhydridin kanssa, jolloin saadaan vastaavaa 4-amido-yhdistettä. Formamido-yhdisteen ollessa kyseessä 102378 7 anhydridinä käytetään in situ valmistettua muurahaishappo-etikkahappoanhydridiseosta.

Edellä lähtöaineena käytettyä 4,5-epoksiyhdistettä itseään saadaan epoksidoimalla emäksellä katalysoiden so-5 pivaa vastaavaa 4-eeniä käyttämällä 30-%:ista vetyperoksidin vesiliuosta. Yhdisteiden saamiseksi, joissa on kak-soissidos 1-asemassa, tarkoituksenmukaisempaa on muodostaa tuo tyydyttymättömyys epoksidin muodostamisen jälkeen. Täten esimerkiksi käsiteltäessä 4,5-epoksi-3-ketonia di-10 klooridisyaanikinonilla saadaan vastaavaa Δ'-epok-siyhdistettä. Saatu epoksidituote on yleensä a- ja β-epok-sidien seosta, β-epoksidin ollessa pääasiallisena tuotteena. Eräissä tapauksissa saadaan yhtä ainoata isomeeriä. Joka tapauksessa epoksidien reagoidessa edelleen natrium-15 atsidin kanssa aikaisemmin selostetulla tavalla saadaan haluttua 4-amino-4,6-dieeniä.

Edellisissä synteeseissä käytetyt lähtöaineet ovat tunnettuja yhdisteitä ja/tai niitä voidaan valmistaa tunnetuin standardimenetelmin. Esimerkiksi yhdisteiden saarni-20 seksi, joissa R4 on vety, lähtöaineena voidaan käyttää est-roni-3-metyylieetteriä. Haluttu substituentti 17-asemaan saadaan sijoitetuksi standardimenetelmin. Suorittamalla aromaattisen A-renkaan Birch-pelkistys ja tekemällä sen jälkeen happamaksi saadaan vastaavaa 3-okso-A4-19-norste-25 roidia, joka muutetaan sitten epoksidiksi ja annetaan reagoida edelleen aikaisemmin selostetulla tavalla. Mahdollisia ovat myös tämän menetelmän muunnelmat ja järjestyksen muuttaminen, jossa reaktiot suoritetaan. Täten lähtemällä sopivasti substituoidusta steroidista, voidaan suo-30 rittaa Birch'in pelkistys ja saadaan 20-hydroksi-19-nor- •j pregn-4-en-3-onia. Käsittelemällä tätä yhdistettä vetyper oksidilla saadaan sitten vastaavaa 4,5-epoksidia ja hapettamalla 20-hydroksiryhmä saadaan 4,5-epoksi-19-norpregnaa-ni-3,20-dionia, jonka annetaan sitten reagoida aikaisemmin 35 selostetulla tavalla.

102378 8

Steroid-4-eenit, joita edellä on käytetty lähtöaineina, ovat itsekin tunnettuja yhdisteitä, tai niitä voidaan valmistaa tunnetuin tavallisin kemiallisin menetelmin. Lähtöaineita, joissa on eetteriryhmä 17-substituen-5 tissa, voidaan valmistaa vastaavasta alkoholista. Täten esimerkiksi 17-(hydroksialkyyli-substituoitu)-steroid-4-en-3-oni muutetaan ensin vastaavaksi 3-metoksisteroidi- 3,5-dieeniksi reaktiossa trimetyyliortoformiaatin ja pienen p-tolueenisulfonihappomäärän kanssa dioksaanin ollessa 10 liuottimena. Tämän reaktioseoksen jatkokäsittelyyn käytetään pyridiiniä. Vaihtoehtoisesti 3-ketoni voidaan suojata etyyliketaalina. Kummassakin tapauksessa saadun alkoholin annetaan sitten reagoida natriumhydridin kanssa dimetyyli-formamidissa, jolloin saadaan vastaavaa natriumsuolaa, 15 jonka annetaan sitten reagoida sopivan halogenidin, kuten metyylijodidin tai bentsyylibromidin, kanssa, jolloin saadaan vastaavaa yhdistettä, jossa on eetteriryhmä 17-subs-tituentin osana. Tätä eetteriä käsitellään sitten 10-%:isella kloorivetyhapolla, joko osana tavallista eristä-20 mismenetelmää tai muuttamalla raakatuotteen eristämisen jälkeen 3-enolieetterirakenne takaisin halutuksi steroid- 4-en-3-oniksi.

4-aminoyhdisteitä, joissa R1 on -COOH tai samanlainen happoryhmä, voidaan saada hydrolysoimalla alkalilla 25 vastaava alkyyliesteri. 4-aminoyhdisteitä, joissa R on C^-alkyyli, saadaan vastaavista yhdisteistä, joissa R on vety, tavallisin reaktioin.

Edellä esitetyt synteesit ovat näiden yhdisteiden valmistusta kuvaavia ja monia muita tarkoituksenmukaisia 30 reaktioita ja näiden reaktioiden yhdistelmiä voidaan käyt-' tää yhdisteiden valmistamiseksi tai toisikseen muuttami seksi. Näitä tarkoituksenmukaisia reaktioita ja olosuhteita voi olla löydettävissä esim. julkaisuista Fieser ym, "Steroids" (Reinhold, New York, 1959); Djerassi, Ed., 35 "Steroid Reactions" (Holden-Day, San Francisco, 1963); 102378 9

Kirk ym. "Steroid Reaction Mechanisms" (Elsevier, Amsterdam, 1968); Carruthers, "Some Modern Methods of Organic Synthesis" (Cambridge U. Press, Cambridge, 1971); ja Harrison ym. "Compendium of Organic Synthetic Methods" (Wi-5 ley-Interscience, New York, 1971).

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet ovat käyttökelpoisia 5o-reduktaasi-inhibiittoreina. Tämän mukaisesti ne ovat käyttökelpoisia hoidettaessa erilaisia sairauksia ja tiloja, joihin sellaiset inhibiittorit voi-10 sivat vaikuttaa edellä selostetulla tavalla.

Näiden yhdisteiden aktiivisuus 5a-reduktaasi-inhi-biittoreina voidaan osoittaa seuraavan standardin mukaisen koemenetelmän avulla. Steroidi-5a-reduktaasi-entsyymin (proteiini) mikrosomi-preparaatteja saatiin ihmisen etu-15 rauhaskudoksesta ja varastoitiin tasaerinä. Proteiinikon-sentraatio määritettiin ennen näytteiden käyttöä. Itse menetelmässä yksilölliset analyysinäytteet 5a-reduktaasi-aktiivisuuden määrittämiseksi sisälsivät 0,1 mol/1 fos-faattisitraattipuskuria, pH 5,6, 1 mmol/1 EDTA:ta, 7 - 20 22 μg mikrosomiproteiinia, 1 mmol/1 NADPH:ta, 5 mmol/1 glukoosi-6-fosfaattia, 1 IU/ml glukoosi-6-fosfaatti-dehyd-rogenaasia, 1,2,3H-testosteronia ja koeyhdistettä liuotettuna dimetyylisulfoksidiin ja laimennettuna sitten fos-faattisitraattipuskurissa siten, että lopulliseksi analyy-)* 25 sinäytteen konsentraatioksi saatiin 0,1 % (v/v) dimetyyli- sulfoksidissa. Kontrollikokeissa käytettiin samaa puskuria ja sama määrä dimetyylisulfoksidia, ilman mitään koeyhdistettä. Analyysinäytteen kokonaistilavuus oli 100 μΐ, ja analyysit suoritettiin kaksoismäärityksinä. Reaktio aloi-30 tettiin lisäämällä testosteronia ja inkuboitiin 30 minuut- .* tia 25 °C:ssa. Koe on lineaarinen ajan suhteen 30 minuut- tiin saakka.

Inhibition luonteesta riippuen testosteronikonsent-raatio vaihteli tyypillisesti 0,15 μmol/l:sta (noin 0,5 KJ 35 arvoon 10 radioaktiivisen merkkivakion ollessa 0,15 μCi 102378 10 koetta kohden. Lisätyn koeyhdisteen määrää vaihdeltiin loppukonsentraatioiden saamiseksi välille 1 nmol/1 - 100 μιηοΐ/l. Reaktio keskeytettiin lisäämällä 50 tilavuusosaa kloroformi/metanoli-seosta (2:1). Steroidit uutettiin sit-5 ten ja erotettiin suurpaine-nestekromatografiaa käyttäen, ja läsnäolevat testosteroni- ja dihydrotestosteronimäärät määritettiin testosteronin dihydrotestosteroniksi muuttu-misprosentin määrittämiseksi ja 5a-reduktaasi-aktiivisuuden laskemiseksi. Koeyhdisteen aktiivisuus ilmaistiin sit-10 ten IC50-arvona eli koeyhdisteen konsentraationa, joka aiheutti testosteronin muuttumisen estymisen 50-%:isesti. Kun tämän keksinnön mukaisesti valmistettavaa yhdistettä testattiin tällä tavalla, saatiin seuraavia tuloksia: 15 Koeyhdiste IC50 (nmol/1) 4-aminopregna-4,6-dieeni-3,20-dioni 25 N,N-di-isopropyyli-4-amino-3-okso-androsta-4,6-dieeni-17£-karboksiamidi 16 20 N-(t-butyyli)-4-amino-3-oksoandrosta- 4,6-dieeni-176-karboksiamidi 8

Halutun aknen vastaisen tai talivuodon vastaisen :* 25 vaikutuksen saavuttamiseksi tämän keksinnön mukaisesti « valmistettavia yhdisteitä voidaan antaa suun kautta pa-renteraalisesti, esimerkiksi lihaksensisäisesti ja ihonalaisesti, ja paikallisesti hoidon tarpeessa olevalle potilaalle. Paikallinen anto on ensisijainen. Tässä käytet-30 tynä näppyisen tai öljyisen ihon hoidon yhteydessä ter-v millä potilas tarkoitetaan lämminveristä nisäkästä, esi merkiksi kädellisiä, mies- tai naispuolisia ihmisiä, joilla näppyinen yleistila tai öljyinen yleistila on hoidon tarpeessa. Yhdisteitä voidaan antaa yksinään tai sopivasti 35 sekoitettuna farmaseuttisen valmisteen muodossa hoidetta- 11 102378 valle potilaalle. Annettavan yhdisteen määrä vaihtelee nyppyisyystilan tai ihon öljyisyystilan vakavuudesta riippuen ja toistuva hoito voi olla toivottavaa. Suun kautta ja parenteraalisesti tapahtuvaa antoa varten annettavan 5 yhdisteen määrä, se on aknen vastaisesti tai talivuodon vastaisesti tehoava määrä on 0,01 - 1,0 mg kehon painon kiloa kohden päivässä. Yksikköannokset suun kautta tai parenteraalisesti tapahtuvaa antoa varten voivat sisältää esimerkiksi 0,2 - 100 mg aktiivista aineosaa. Paikallista 10 antoa varten aknen tai talivuodon vastaisesti tehoava keksinnön yhdisteiden määrä prosentteina voi vaihdella välillä 0,001 - 5 % ja ensisijaisesti välillä 0,005 - 1 %

Paikallista antoa varten aktiivisen aineen seos-muotoa, ts. keksinnön mukaisesti valmistettavaa yhdistet-15 tä, voidaan aplikoida suoraan tarpeelliseen hoitokohtaan tai sitä voidaan aplikoida suun tai nenän limakalvoon. Yhdisteiden antamiseen voidaan käyttää aplikointitikkuja, joilla on seosmuotoa.

Hoidettaessa hyvänlaatuista eturauhasen liikakasvua 20 (BPH) yhdisteitä voidaan antaa eri tavoin hoidettavalle potilaalle toivotun vaikutuksen aiheuttamiseksi. Tässä käytettynä BPH:n hoidossa termillä potilas tarkoitetaan urospuolisia lämminverisiä eläimiä, kuten uroskoiria ja miespuolisia ihmisiä. Yhdisteitä voidaan antaa yksinään 25 tai yhdistelmänä toisen kanssa. Yhdisteitä voidaan antaa myös farmaseuttisen valmisteen muodossa. Yhdisteitä voidaan antaa suun kautta, parenteraalisesti, esimerkiksi, laskimonsisäisesti, vatsaontelonsisäisesti, lihaksensisäisesti tai ihonalaisesti, mukaan luettuna aktiivisen aine-30 osan ruiskutus suoraan eturauhaseen. Voidaan käyttää myös « * hitaasti vapauttavia istutteita. Annettavan yhdisteen mää rä vaihtelee avarissa rajoissa ja voi olla mikä tahansa tehoava määrä. Riippuen hoidettavasta potilaasta, hoidettavasta tilasta ja antotavasta annettavan yhdisteen teho-35 ava määrä vaihtelee välillä noin 0,001 - 10 mg kehon pai- 102378 12 non kiloa kohden päivässä ja ensisijaisesti välillä 0,01 - 1,0 mg kehonpainon kiloa kohden päivässä. Yksikköannokset suun kautta tai parenteraalista antoa varten voivat sisältää esimerkiksi 0,2 - 100 mg keksinnön yhdistettä.

5 Nämä annosrajat edustavat yhdisteen määrää, jotka tehoavat pienentäen eturauhasen kokoa, ts. yhdisteen määrää, joka tehoaa BPH:n hoidossa. Yhdisteitä voidaan antaa eturauhasen liikakasvun alkamisesta oireiden takautumiseen saakka, ja niitä voidaan käyttää estävänä 10 toimenpiteenä.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavia yhdisteitä voidaan antaa joko yksittäisinä terapeuttisina aineina tai seoksina muiden terapeuttisten aineiden kanssa. Niitä voidaan antaa pelkkänä, mutta tavallisesti niitä annetaan 15 farmaseuttisten yhdistelmien muodossa, se on, aktiivisten aineiden seoksina sopivien farmaseuttisten kantajien tai laimentimien kanssa. Esimerkkeinä sellaisista yhdistelmistä ovat tabletit, pastillit, kapselit, jauheet, aerosolisuihkeet, vesi- tai öljysuspensiot, siirapit, 20 eliksiirit ja vesiliuokset injektointia varten. Yhdisteitä annetaan ensisijaisesti suun kautta annettavina annos-muotoina .

Farmaseuttisen yhdistelmän ja farmaseuttisen kantajan tai laimentimen luonne, tietenkin, riippuu halutusta 25 antotiestä, toisin sanoen annosta suun kautta tai paren-teraalisesti. Suun kautta annettavat yhdistelmät voivat olla tablettien tai kapselien muodossa ja voivat sisältää tavallisia lisäaineita, kuten sideaineita, esim. siirappia, akaasiaa, gelatiinia, sorbitolia, traganttia tai po-30 lyvinyylipyrrolidonia), täyteaineita (esim. laktoosia, sokeria, maissitärkkelystä, kalsiumfosfaattia, sorbitolia tai glysiiniä), liukastavia aineita (esim. magnesiumstea-raattia, talkkia, polyetyleeniglykolia tai piidioksidia), hajoittavia aineita (esim. tärkkelystä) tai kostutusainei-35 ta (esim. natriumlauryylisulfaattia). Suun kautta annetta- 102378 13 vat nestemäiset valmisteet voivat olla vesi- tai öljysus-pensioiden, liuosten, emulsioiden, siirappien, eliksiirien jne. muodossa, tai ne voivat olla kuivana tuotteena sekoitettaviksi veden tai muun sopivan väliaineen kanssa ennen 5 käyttöä. Sellaiset nestemäiset valmisteet voivat sisältää tavallisia lisäaineita, kuten suspendointlaineita, mauste-aineita, laimentimia tai emulgointlaineita. Parenteraali-seen antoon voidaan käyttää yhdisteen liuoksia tai suspensioita tavallisten farmaseuttisten väliaineiden kanssa, 10 esim. vesiliuoksena laskimonsisäisenä ruiskeena antoa varten tai öljysuspensiona lihaksensisäisenä ruiskeena antoa varten. Menetelmiä edellä käsiteltyjen yhdistelmien valmistamiseksi on selostettu standarditeksteissä, kuten julkaisussa Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Pub-15 lishing Company, Easton, Pennsylvania.

Seuraavat ovat kuvaavia farmaseuttisia seosmuotoja, jotka soveltuvat suun kautta annettaviksi:

Tabletti 20 (a) N-(t-butyyli)-4-amino-3-oksoandrosta- 4,6-dieeni-17S-karboksiamidi 75 g (b) Laktoosi 1,216 kg (c) Maissitärkkelys 0,3 kg

Sekoita aktiivinen aineosa, laktoosi ja mais-:* 25 sitärkkelys homogeeniseksi. Granuloi 10 %:n kanssa tärkke- lyspastaa. Kuivaa kunnes kosteuspitoisuus on noin 2,5 %. Seulo nro 12 mesh'in seulan läpi. Lisää ja sekoita seuraavat aineet: (a) Magnesiumstearaatti 0,015 kg 30 (b) Maissitärkkelystä riittävästi ad 1,725 kg

Purista sopivassa tablettikoneessa siten, että pai- « noksi saadaan 0,115 g/tabletti.

Pehmeä gelatiinikapseli (a) N-(t-butyyli)-4-amino-3-oksoandrosta-35 4,6-dieeni-17E-karboksiamidi 0,25 kg 102378 14 (b) polysorbaatti 80 0,25 kg (c) Maissiöljyä riittävästi ad 25,0 kg

Sekoita ja täytä 50,000:een pehmeään gelatiinikapseliin.

Seuraavat esimerkit on esitetty tämän keksinnön 5 valaisemiseksi, mutta niitä ei pidä katsoa millään tavalla suunnitelluiksi sitä rajoittaviksi.

Esimerkki 1 N- (1,1-dimetyylietyyli)-4,5-epoksi-3-oksoandrostaa- ni-17β-karboksiamidi 10 Liuos, jossa oli N-(1,1-dimetyylietyyli)-3-oksoand- rost-4-eeni-17S-karboksiamidia (4,77 g, 12,8 mmol) meta-nolissa (55 ml) ja dikloorimetaanissa (11 ml), jäähdytettiin 12 °C:seen ja käsiteltiin yhtenä eränä 30-%:isella vetyperoksidin vesiliuoksella (3,3 ml), minkä jälkeen li-15 sättiin tiputtamalla natriumhydroksidin vesiliuosta, jota oli valmistettu liuottamalla natriumhydroksidia (0,38 g) veteen (2,2 ml). Tunnin kuluttua jäähdytyshaude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin vielä 3 tuntia. Pääosa liuottimesta poistettiin sitten vakuumissa. Jäännös liuo-20 tettiin dikloorimetaaniin ja puhdistettiin flash-kromato-grafoimalla (heksaani-20 % etyyliasetaattia ja heksaani-40 % etyyliasetaattia), jolloin saatiin N-(1,1-dimetyylietyyli) -4,5-epoksi-3-oksoandrostaani-17fi-karboksiamidia (3,3 g, 66,2 % kiinteänä vaahtona. Tämä aine oli 4α,5a- ja 25 4S,5S-isomeerien seosta, ja sitä käytettiin jatkoreakti- oissa sellaisenaan.

Esimerkki IA

Toistettaessa esimerkin 1 menetelmä käyttämällä sopivia lähtöaineita saatiin seuraavia yhdisteitä, taval-30 lisesti kahden isomeerisen epoksidin seoksena: : Ν,Ν-bis(1-metyylietyyli)-4,5-epoksi-3-oksoandrostaani-17fi- karboksiamidi (73,5 %).

(20S)-4,5-epoksi-3-oksopregnaani-20-karboksyylihappome-tyyliesteri (61,3 %).

35 4,5-epoksipregnaani-3,20-dioni (87,6 %).

102378 15 4.5- epoksi-17o-hydroksipregnaani-3,20-dioni (79,1 %).

4.5- epoksipregnaani-3,11,20-trioni (41,8 %).

(2 OS)-4,5-epoksi-21-hydroksi-20-metyylipregnan-3-oni (73,1 %).

5 4,5-epoksipregn-9(11)-eeni-3,20 dioni (75,5 %).

Esimerkki 2 4-amino-N-(1,1-dimetyylietyyli)-3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17S-karboksiamidi

Liuos, jossa oli 4,5-epoksi-N-(1,l-dimetyylietyy-10 li)-3-oksoandrostaani-17S-karboksiamidia (3,0 g, 7,7 mol) dimetyylisulfoksidissa (40 ml) typpiatmosfäärin suojaamana, pantiin 60 °C:seen lämmitettyyn öljyhauteeseen. Liuosta sekoitettiin voimakkaasti lisättäessä hitaasti nat-riumatsidia (8,11 g, 0,338 mol). Atsidin lisäyksen päätyt-15 tyä lisättiin väkevää rikkihappoa (0,54 ml). Hauteen lämpötila kohotettiin 100 °C:seen, ja reaktioseosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 90 minuuttia. Reaktioseos poistettiin öljyhauteesta ja jäähdytettiin huoneen lämpötilaan, ja muodostunut kiinteä massa hajotettiin ja kaadettiin 20 kylmään veteen (550 ml) . Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, ja kiinteät aineet kerättiin talteen suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin keltaiseksi kiinteäksi aineeksi. Raaka tuote puhdistettiin flash-kromatografoimalla (heksaani-30 % etyyliasetaattia), jolloin saatiin 4-amino-*. 25 N-(l,1-dimetyylietyyli)-3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17B- karboksiamidia kiteisenä, keltaisena kiinteänä aineena (0,90 g, 30 %) (vesipitoinen metanoli).

IR 3442, 3372, 1662, 1616, 1592, 1570, 1512 cm-1; MS (CI) m/z 385 (100%, M+ + 1); (EI) m/z 384 (35%, M+), 150 30 (100%); 1H NMR (CDC13) θ 0,77 (3H, s, Ci8-Me), 1,06 (3H, s, •\ Cie-Me), 1,37 (s, ^u-Me's), 2,44-2,54 (1H, pr dd), 2,58-2,72 (1H, pr dd), 3,70 (1.6H, br, NH2), 5,13 (1H, s, NH), 5,97 (1H, dd), 6,30 (1H, dd); 13C NMR (CDCI3) δ 132,27, 132,44, 135,90, 171,51, 194,27.

102378 16 Tällä yhdisteellä on seuraava rakennekaava: ^ NH-C-(CH3)3 NH2

Esimerkki 2A

Toistettaessa esimerkin 2 menetelmä käyttämällä sopivia lähtöaineita saatiin seuraavia yhdisteitä: 15 4-amino-N,N-bis(1-metyylietyyli)-3-oksoandrosta-4,6-diee- ni-17S-karboksiamidi, IR 3446r 3372, 1662, 1634, 1592 cm-1; MS (CI) m/z 413 (100%, M+ + 1); (EI) m/z 412 (100%, M+); XH NMR (CDC13) δ 0,84 (3H, s, Ci8-Me), 1,06 (3H, s, Cig-Me), 1,14 20 (d, ipr-Me), 1,21 (d, *Pr-Me), 1,39 + 1,42 (pr d, 2 x *Pr-

Me), 3,40 (1H, hept ^r-CH), 3,71 (2H, br s, NH2), 4,20 (1H, hept ipr-CH), 5,98 (1H, dd) 6,31 (1H, dd); 13C NMR (CDC13) δ 121,83, 132,16, 132,64, 136,23, 173,63, 194,29.

25 (20S )-4-amino-oksopregna-4,6-dieeni-20-karboksyylihappo- metyyliesteri, ir 3478, 3374, 1728, 1666, 1616, 1596, 1572 cm"1; MS (CI) m/z 372 (100%, M+ + 1); (EI) m/z 371 (100%, M+); XH NMR (CDCI3) δ 0,77 (3H, s, Cie-Me), 1,05 (3H, s, C19-Me), 1,19 (d, C2i-Me), 3,64 (5H, s over br s,’ CH30 + NH2), 30 5,94 (1H, dd), 6,29 (1H, dd); 13C NMR (CDCI3) δ 121,88, 132,14, 132,68, 136,14, 177,12, 194,32.

102378 17

4-aminopregna-*4,6-dieeni-3,20-dioni, ir 3450, 3365, 1695, 1660, 1620, 1595, 1575 cm'1; MS (Cl) m/z 328 (100%, M+ + 1); (El) m/z 327 (40%, M+), 150 (100%); 3H NMR (CDC13) δ 0,71 (3H, s, Cie-Me), 1j06 (3H, s, Cig-Me), 2,15 (s, C2i“Me), 3,72 5 (2H, br s, NH2), 5,95 (1H, dd), 6,31 (1H, dd); 13C NMR

(CDCI3) 6 122,04, 132,24, 132,28, 135,61, 194,25, 209,16.

4-amlno-17a-hydroksipregna-4,6-dieeni-3,20-dioni, IR 3442, 10 1704, 1660, 1614, 1590 cm-1? MS (Cl) m/z 344 (100%, M+ + 1); (El) ift/z 343 (75%, M+), 150 (100%); *Η NMR (CDCI3) δ 0;78 (s, Cie-Me), 1,06 (3H, S, Cig-Me), 2,28 (3H, s, C2i-Me), 2,7-3,7 (2,5H, br m, NH2), 5,97 (1H, dd); 13C NMR (CDC13) δ 89,62, 122,08, 132,25, 132,51, 135,69, 178,91, 194,32, 211,39.

15 4-amlnopregna-4,6-dieeni-3,11,20-trioni, IR 3454, 3362, 1706, 1694, 1620, 1600, 1570 cm-1; MS (Cl) m/z 342 (100%, M+ + 1); (El) m/z 341 (80%, M+), 43 (100%); 1H-NMR (CDC13) 0,70 (3H, s, Ci8-Me), 1,27 (3H, s, Cig-Me), 2,12 (3H, s, Cn-Me),

20 3,28 (2H br S, NH2), 5,93 (lH,dd), 6,36 (lH,dd); 13C NMR

(CDCI3) 122,73, 129,56, 132,64, 133,04, 194,60, 207,60, 208,40.

(2OS)-4-amino-21-hydroksi-20-metyylipregna-4,6-dien-3-oni, 25 IR 3462, 3390, 3346, 1652, 1616, 1592, 1564 cm'1; MS (Cl) m/z 344 (100%, M+ + 1); (El) m/z 343 (60%, M+), 150 (100%); 3H NMR (CDCI3) δ 0,76 (3H, s, Cie-Me), 1,04 + 1,05 (6H, S t d, Cig-Me + C2i-Me) 2,48 (1H, dq), 2,63 (1H, dq), 3,38 (1H, dd, 1/2 C21-CH2), 3,64(dd + v br, 1/2 C2i-CH2 + NH2), 5,97 (1H, . dd) 6,30 (1H, dd); 13C NMR (CDCI3) δ 121,77, 132,08, 132,98, • 136,55, 194,40.

Esimerkki 3 4-asetamido-N-(1,1-dimetyylietyyli)-3-oksoandrosta-35 4,6-dieeni-17S-karboksiamidi 102378 18

Liuosta, jossa oli 4-amino-N-(1,1-dimetyylietyyli)- 3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17S-karboksiamidia (0,9 g, 2,34 mmol) etikkahappoanhydridissä (3 ml) ja pyridiinissä (6 ml), sekoitettiin yön ajan huoneen lämpötilassa. Lisät-5 tiin vettä, ja seosta sekoitettiin 3 tuntia. Kiinteät aineet kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin ruskeata kiinteää ainetta, joka puhdistettiin flash-kromato-grafoimalla (heksaani-50 % etyyliasetaattia, etyyliasetaatti) , jolloin saatiin 4-asetamido-N-(1,1-dimetyyli-10 etyyli)- 3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17S-karboksiamidia (0,29 g, 30,4 %, dietyylieetteri-heksaani).

IR 3442, 3382, 1664, 1616 cm-1; MS (CI) m/z 427 (100%, M+ + 1); (EI) m/z 426 (65%, M+), 57 (100%); lH NMR (CDCI3) δ 0,78 (3H, s, Cie-Me), 1,13 (3H, s, Cig-Me), 1,35 15 (s, 3 x fcBu-Me's), 2,14 (s, Ac-Me), 5,13 (1H, s, NHCOBu), 6,16 (2H, s, C6-H + C7-H), 7,12 (1H, NHAc); 13C NMR (CDCI3) 6 124,65, 124,89, 139,95, 153,20, 168,74, 171,44, 194,93.

Tällä yhdisteellä on seuraava rakennekaava:

20 O

n^NH-CiCHsh V 25 /\l- NH-C-CH3

II

30 0

Esimerkki 3A

Toistettaessa esimerkin 3 menetelmä käyttämällä sopivia lähtöaineita saatiin seuraavaa yhdistettä: 35 4-asetamidopregna-4,6-dieeni-3,20-dioni, IR 3295,1700, 102378 19 1665, 1615(m) cm"1? MS (CI) m/z 370 (100%, M+ + 1); (El) m/z 369 (10%, M+), 43 (100%); XH NMR (CDCI3) δ 0,71 (3H, s, Ci8" Me), 1,13 (3H, s, Cig-Me), 2,13 (s, C2i~Me + Ac-Me), 6,12 (2H, s, Ce-Η + C7-H), 7,03 (1H, br s, NH); 13C NMR (CDCI3) 6 5 124,83, 139,63, 152,95, 195,92, 209,14.

(20S)-4-asetamido-21-asetoksi-20-metyylipregna-4 * 6-dien-3-onia saadaan samalla tavalla.

Esimerkki 4 10 4-formamido-N- (1,1 - dime tyyl ie tyyli) -3-oksoandrosta- 4,6-dieeni-17S-karboksiamidi

Liuosta, jossa oli muurahaishappoa (0,22 ml, 5,84 mmol) ja etikkahappoanhydridiä (0,46 ml, 4,76 mmol), kuumennettiin palautusjäähdytyslämpötilassa 2 tuntia typ-15 piatmosfäärin suojaamana. Jäähdytetty liuos laimennettiin tetrahydrofuraanilla (5 ml) ja siihen lisättiin liuos, jossa oli 4-amino-N- (1,1-dimetyylietyyli)-3-oksoandrosta- 4.6- dieeni-17E-karboksiamidia (0,35 g, 0,91 mmol) tetrahydrof uraanissa (10 ml) . Reasktioseosta sekoitettiin yön 20 ajan huoneen lämpötilassa ja laimennettiin sitten vedellä (25 ml). Erottui hartsimaista ainetta, joka uutettiin di-etyylieetteri-dikloorimetaani-seokseen ja pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella. Kuivattu liuos haihdutettiin keltaiseksi vaahdoksi, joka puhdistet-25 tiin flash-kromatografoimalla (heksaani-50 % etyyliasetaattia, etyyliasetaatti), jolloin saatiin 4-formamido-N-(1,1-dimetyylietyyli)-l-oksoandrosta-4,6-dieeni-176-karb-oksiamidia (0,25 g, 67,6 %, dietyylieetteri), IR 3440, 3304, 3246, 1684, 1670, 1650 cm*1; MS (CI) m/z 413 (100%, M+ 30 +1); (EI) m/z 412 (18%, M+), 57 (100%); 1H NMR (CDCI3) « 0,78 (3H, s, Cie-Me), 1,14 (3H, s, Cig-Me), 1,37 (s, 3 x cBu-Me's), 5,11 (1H, s, NHCOBu), 6,15-6,45 (2H, m, C6-H+C7-H), 7.07- 7,20 (1H, d + s, NHCO), 8,12+8,29 (1H, d + s, CHO).

102378 20

Esimerkki 4A

Toistettaessa esimerkin 4 menetelmä käyttämällä sopivia lähtöaineita saatiin seuraavaa yhdistettä: 4-formamidopregna-4,6-dieeni-3,20-dioni, IR 3325, 1710, 5 1690, 1650, 1615, 1585, 1475; MS (CI) m/z 356 (100%, M+ + 1); (EI) m/z 355 (25%, M+), 43 (100%); XH NMR (CDCI3) δ 0;73 + 0;74 (pr s, Ci8“Me), 1,13 + 1,15 (pr s, Ci9~Me), 2,12 (s, C2i-Me), 6,14-6,25 (m + s) 6,38-6,45 (m, 3 osaa), 7,00-7,08 (m, 3 osaa + 8 osaa), 7,16 (br s, 4 10 osaa), 7,59 (d, 3 osaa), 8,02 s, 4 osaa).

Esimerkki 5 (2 OS)-4 -amino-N,N-dietyyli-3 -oksopregna-4,6-dieeni- 2 0-karboks iamidi

Sekoitettua suspensiota, jossa oli 3-oksopregn-4-15 eeni-20-karboksyylihappoa (2,0 g, 5,8 mmol) bentseenissä (40 ml), sekoitettiin pyridiinin (0,59 ml, 7,3 mmol) kanssa, jäähdytettiin jäävesihauteessa ja käsiteltiin oksalyy-likloridilla (0,65 ml, 7,5 mmol). Jäähdytyshaude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin tunnin ajan huoneen 20 lämpötilassa. Sitten seos jäähdytettiin jäävesihauteessa ja käsiteltiin dietyyliamiinilla (3,48 ml, 33,7 mmol). 45 minuutin kuluttua reaktioseos laimennettiin metyleeniklo-ridilla (100 ml) ja uutettiin 7-%:isella kloorivetyhapolla (100 ml) . Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin mag-25 nesiumsulfaatilla, käsiteltiin puuhiilellä ja suodatettiin. Sitten liuotin poistettiin, jolloin jäljelle jäi kiinteää ainetta, joka liuotettiin uudelleen mety-leenikloridiin ja puhdistettiin flash-kromatografoimalla (etyyliasetaatti-50-% heksaania). Saatu kiinteä aine ki-30 teytettiin uudelleen vesipitoisesta metanolista, jolloin saatiin (20S)-N,N-dietyyli-3-oksopregn-4-eeni-20-karbok- • φ siamidia, joka suli noin 198 - 199 °C:ssa.

Kun edellä esitetyssä reaktiossa saadun tuotteen annetaan reagoida 30-%risen vetyperoksidin vesiliuoksen 35 kanssa esimerkissä 1 selostetun menetelmän mukaisesti, 102378 21 saadaan vastaavaa 4,5-epoksidia. Tämän epoksidin annetaan sitten reagoida natriumatsidin ja rikkihapon kanssa esimerkissä 2 selostetun menetelmän mukaisesti, jolloin saadaan (20S)-4-amino-N,N-dietyyli-3-oksopregna-4,6-dieeni-5 20-karboksiamidia.

Esimerkki 6 (20S)-4-amino-N-(1,l-dimetyylietyyli-3-oksopregna- 4,6-dieeni-20-karboksiamidi

Sekoitettua suspensiota, jossa oli 3-oksopregn-4-10 eeni-20-karboksyylihappoa (1,7 g, 5,0 mmol) bentseenissä (35 ml), sekoitettiin pyridiinin (0,56 ml, 6,25 mmol) kanssa, jäähdytettiin jäävesihauteessa ja käsiteltiin ok-salyylikloridilla (0,56 ml, 6,45 mmol). Jäähdytyshaude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin 1,5 tuntia.

15 Saatu seos jäähdytettiin sitten jäissä ja käsiteltiin hi taasti lisätyllä tert-butyyliamiinilla (2,9 ml, 29 mmol). Kolmenkymmenen minuutin kuluttua seos laimennettiin mety-leenikloridilla (100 ml) , uutettiin-5 %:isella kloorivety-hapolla, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, käsiteltiin puu-20 hiilellä ja suodatettiin. Saatu suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin keltaista kiinteätä ainetta, joka liuotettiin metyleenikloridiin ja puhdistettiin flash-kro-matografoimalla (heksaani 40 % etyyliasetaattia) . Tällä tavalla saatu tuote flash-kromatografoitiin uudelleen 25 (heksaani-30 % etyyliasetaattia), ja saatu tuote kiteytettiin uudelleen asetonista, jolloin saatiin (20S)-N-(l,l-dimetyylietyyli)-3-oksopregna-4-eeni-20-karboksiamidia.

IR 3445, 3375, 1670 cm'1.

Kun edellä esitetyssä reaktiossa saadun tuotteen 30 annetaan reagoida 30%:isen vetyperoksidin vesiliuoksen • kanssa esimerkissä 1 selostetun menetelmän mukaisesti, » « saadaan vastaavaa 4,5-epoksidia. Tämän epoksidin annetaan sitten reagoida natriumatsidin ja rikkihapon kanssa esimerkissä 2 selostetun menetelmän mukaisesti, jolloin saa- 102378 22 daan (20S)-4-amino-N-(1,l-dimetyylietyyli-3-oksopregna- 4,6-dieeni-20-karboksiamidia.

Esimerkki 7 (2OS)-4,5-epoksi-21-hydroksi-20-metyylipregnan-3-5 oni-asetaatti

Liuokseen, jossa oli (20S)-21-hydroksi-20-metyyli-pregn-4-en-3-oni-asetaattia (10,6 g, 28,3 ramol) metanolis-sa (60 ml) ja dikloorimetäänissä (15 ml) jäähdytettynä 15 °C:seen kylmässä vesihauteessa, lisättiin 30-%:ista ve-10 typeroksidia (6,8 ml) ja sitten tiputtamalla liuos, jossa oli natriumhydroksidia (0,49 g) vedessä (3,2 ml). 30 minuutin kuluttua kylmähaude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin 4 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuottimet poistettiin sitten vakuumissa, ja jäännös liuotettiin di-15 kloorimetaaniin (300 ml) ja uutettiin suolaliuoksella (100 ml) . Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kiinteäksi aineeksi, joka puhdistettiin flash-kromatografoimalla silikageelillä, jolloin saatiin (20S)-4,5-epoksi-21-hydr-20 oksi-20-metyylipregnan-3-oni-asetaattia (6,1 g, 55,6 %) 4a,5a- ja 4fi,5fi-isomeerien seosksena.

Esimerkki 8 (20S)-4-amino-21-hydroksi-20-metyylipregnan-4,6-dien-3-oni-asetaatti ; ' 25 Voimakkaasti sekoitettuun liuokseen, jossa oli (20S)-4,5-epoksi-21-hydroksi-20-metyylipregnan-3-oni-asetaattia (2,0 g, 5,15 mmol), jota oli saatu esimerkissä 7, dimetyylisulfoksidissa (70 ml) ja lämmitetty 60 °C:seen, lisättiin natriumatsidia (5,4 g) ja sitten väkevää rikki-30 happoa (0,37 ml). Seoksen lämpötila kohotettiin nopeasti V 100 °C:seen ja pidettiin tuossa lämpötilassa tunnin ajan.

Jäähtynyt seos kaadettiin sitten kylmään veteen (450 ml). Kiinteät aineet kerättiin talteen suodattamalla, pestiin vedellä, ja kuivattiin imussa, jolloin saatiin keltaista 35 kiinteää ainetta, joka puhdistettiin flash-kromatografoi- 102378 23 maila, jolloin saatiin (20S)-4-amino-21-hydroksi-20-metyy-lipregna-4,6-dien-3-oni-asetaattia (1,04 g, 52,5 %) . IR 3488, 3446, 3360, 1740, 1668, 1612 (m), 1592 (m), 1562 (m), 1252 cm'1; MS (CI) 386 (20%, M 5 + 1)/ 326 (100% t M + 1 - AcOH); *Η NMR (CDCI3) δ 0,78 (3H, S,

Cie-Me), 1,03 (d, C22-Me), 1,06 (s, Cig-Me), 2,07 (s, Ac-

Me) r 3,69 + 3,78 (3H, v br + ddr NH2 + 1/2 C2i-CH2), 4,09 (1H, ddr 1/2 C2i-CH2), 5,97 (IHr dd), 6,30 (1H, dd).

10 Tällä yhdisteellä on seuraava rakennekaava: CH2OCOCH3 ^ CH-CH3 15 NH2 20

Esimerkki 9 (2OS)-2l-hydroksi-20-metyylipregn-4-en-3-oni-bent-soaatti

Liuosta, jossa oli (20S)-21-hydroksi-20-metyyli-25 pregn-4-en-3-onia (8,0 g, 24,2 mmol) dikloorimetaanissa (200 ml) , jäähdytettiin jäävesihauteessa ja käsiteltiin peräkkäin trietyyliamiinilla (3,69 ml, 26,6 mmol) ja bentsoyylikloridilla (3,09 ml, 26,6 mmol) ja sekoitettiin 16 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktion jälkeen seos lai-30 mennettiin dikloorimetaanilla (200 ml), se uutettiin eetterillä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin, ja suodos haihdutettiin kuiviin kiinteäksi aineeksi, joka puhdistettiin flash-kromatografoimalla, jolloin saatiin (2 OS)-21-hydroksi-20-metyylipregn-4-en-3-oni-bentsoaattia 102378 24 (9,4 g, 89,5 %) , joka sulaa 193 - 195 °C:ssa asetonista uudelleen kiteyttämisen jälkeen.

IR 1716, 1676, 1614 (m), 1284 cm-1; MS (CI) 435 (100%, M + 1), 313 (70%, M + 1 - PhCOOH); *H NMR (CDC13) δ 5 0,77 (3H, s, Ci8-Me), 1,04 (d, C22-Me), 1,19 (s, Cig-Me), 4,05 (1H, dd, 1/2 C2i-CH2), 4,34 (1H, dd, 1/2 C21-CH2), 5,72 (1H, s, C4-H), 7;45 (2H, t), 7,56 (1H, t), 8,04 (2H, dd). Esimerkki 10 (20S)-4,5-epoksi-21-hydroksi-20-metyylipregnan-3-10 oni-bentsoaatti

Liuos, jossa oli (20S)-21-hydroksi-20-metyylipregn-4-en-3-oni-bentsoaattia (8,9 g, 20,5 mmoolia) metanolissa (80 ml) ja dikloorimetaanissa (80 ml) , jäähdytettiin 15 °C:seen ja käsiteltiin peräkkäin 30-%:isella vetyperok-15 sidilla (5,0 ml) ja natriumhydroksidilla (1,09 g) vedessä (6,7 ml). 4 tunnin jälkeen huoneen lämpötilassa oltuaan tuote eristettiin reaktioseoksesta samalla menetelmällä, jota on selostettu esimerkissä 7, jolloin saatiin (20S) - 4,5-epoksi-21-hydroks i-2 0-metyylipregnan-3-oni-bentsoaat-20 tia (1,6 g, 17,3 %).

IR 1720, 1280 cm-1; MS (CI) 451 (95%, M + 1), 329 (100%, M + 1 - PhCOOH); *H NMR {CDCI3) δ 0,76 (3H, s, Ci8-Me), 1,13 (d, C22-Me), 1,16 (s, Cig-Me), 2,98 + 3,04 (1H, s + S, C4-H), 4,04 (1H, dd, 1/2 C2i~CH2), 4,32 (1H, dd, 1/2 25 C2i-CH2), 7,46 (2H, t), 7,57 (1H, t), 8,04 (1H, dd).

Esimerkki 11 (2OS)-4-amino-21-hydroksi-20-metyylipregna-4,6-dien-3-oni-bentsoaatti 30 Voimakkaasti sekoitettuun liuokseen, jossa oli (20S)-4,5-epoksi-21-hydroksi-20-metyylipregnan-3-oni-bent-soaattia (1,0 g, 2,22 mmo) dimetyylisulfoksidissa (35 ml) lämmitettynä 60 °C:seen, lisättiin natriumatsidia (2,7 g) ja väkevää rikkihappoa (0,2 ml). Seoksen lämpötila koho-35 tettiin nopeasti 100 °C:seen ja pidettiin tuossa lämpöti- 102378 25 lassa tunnin ajan. Jäähtynyt seos kaadettiin sitten kylmään veteen {250 ml) . Saatu seos uutettiin eetterillä (300 ml),ja eetteriliuos pestiin suolaliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja suodatettiin, ja suodos haihdutet-5 tiin kuiviin, jolloin saatiin keltaista kiinteää ainetta, joka puhdistettiin kromatografoimalla, jolloin saatiin (20S)-4-amino-2l-hydroksi-20-metyylipregna-4,6-dieen-3-oni-bentsoaattia (0,8 g, 80,1 %) , joka sulaa 163 167 °C:ssa hajoten.

10 IR 3470, 3366, 1718, 1682 (m), 1656, 1608 (m), 1586 (m), 1567 (m), 1274, 1268, 718 cm-1; MS (CI) 448 (100%, M + 1), 326 (35%, M + 1 - PhCOOH); *H NMR (CDC13) δ 0,82 (3H, s, Cie-Me), 1,07 (s, Cig-Me), 1,15 (d, C22-Me), 3,71 (2H, v br, NH2), 4,07 (1H, dd, 1/2 C2i~CH2), 4,35 (1H, dd, 1/2 C21- 15 CH2)r 5,98 (1H dd), 6,30 (lHdd), 7;35 (2H, t), 7,57 (1H, t), 8,04 (2H, dd).

Esimerkki 12

Jos esimerkeissä 1 ja 2 selostetut menetelmät tois-20 tetaan käyttämällä sopivia lähtöaineita, saadaan seuraavia yhdisteitä: 4-amino-17B-hydroks ime tyy1i andros t a-4,6-dien-3-oni, (20S)-4-amino-20-hydroksipregna-4,6-dien-3-oni, (20R)-4-amino-20-hydroksipregna-4,6-dien-3-oni, 25 (20S)-4-amino-2 0-hydroksipregna-4,6,16-trien-3-oni, (20R)-4-amino-20-hydroksipregna-4,6,16-trien-3-oni, (20R)-4-amino-20,21-hydroksipregna-4,6-dien-3-oni, 4-amino-21-hydroksipregna-4,6-dien-3-oni ja (20S)-4-amino-2l-metoksi-20-metyylipregna-4,6-dien-3-oni .

Claims (5)

102378 26

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava 5 Ri R4 ! ^ (I1) 10 NHR jossa R on vety tai C^-alkanoyyli, R1 on C2_6-alkanoyyli,

15 -C2_6-alkyyli-OZ2, -C2.6-alkyyli-(OZ2) 2 tai -A-C(0)-Y, Z2 on vety, C^g-alkyyli, Ci.g-alkanoyyli tai bentsoyyli, A puuttuu tai on läsnä alkyleeninä, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, Y on -OH, -O (Ci.g-alkyyli) tai -NR2R3; R2 ja R3 ovat kumpikin itsenäisesti vety tai C^-alkyyli, R4 on vety tai metyyli, X 20 on O tai (H) (H) , Z on vety tai C^-alkyyli ja kukin piste-viivoista renkaissa merkitsee mahdollisesti läsnä olevaa kaksoissidosta edellyttäen, että 9,11-kaksoissidos voi olla läsnä vain kun X on (H)(H), tunnettu siitä, että 25 kaavan 1' mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa R on vety, yhdiste, jolla on kaava Ri R4 1' I 30 -1 di') o jossa R1, R4, X ja Z ovat edellä määriteltyjä, saatetaan 35 reagoimaan natriumatsidin kanssa inertissä 102378 27 liuottimessa, minkä jälkeen haluttaessa kaavan 1' mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa R on C^-alkanoyyli, asyloidaan kaavan 1' mukainen yhdiste, jossa R on vety.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava Ri

10 R4 nh2 15 jossa R1 on C2_6-alkanoyyli, -Ci.s-alkyyli-.OZ2, -C2_6-alkyyli-(OZ2) 2 tai -A-C (O) -Y, Z2 on vety, C1.6-alkyyli, Ci.g-alkanoyy-li tai bentsoyyli, A puuttuu tai on läsnä alkyleeninä, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, Y on -OH, -O(C^g-alkyyli) tai

20 -NR2R3, R2 ja R3 ovat kumpikin itsenäisesti vety tai Cj^.g- alkyyli, R4 on vety tai metyyli, X on O tai (H) (H) ja Z on vety tai C^-alkyyli.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 4-amino-N-(1,1-dime- 25 tyylietyyli)-3-oksoandrosta-4,6-dieeni-17S-karboksiamidi.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (20S)-4-amino-21-hyd-roksi-20-metyylipregn-4-en-3-oni.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n- 30. e t t u siitä, että valmistetaan 4-aminopregn-4,6-diee- .· ni-3,20-dioni . 102378 28