ES3028360T3 - Deuterated n-benzenesulfonylbenzamide compound for inhibiting bcl-2 protein and composition and use thereof - Google Patents

Abstract

Un compuesto de N-bencenosulfonilbenzamida representado por la fórmula (I), o una forma cristalina, un profármaco, sales farmacéuticamente aceptables, un estereoisómero, un solvato o un hidrato del mismo, una composición farmacéutica que lo comprende y un uso del mismo como un inhibidor de la proteína Bcl-2 para preparar un medicamento para el tratamiento de la leucemia o un cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuesto de N-bencenosulfonilbenzamida deuterado para inhibir la proteína Bcl-2 y composición y uso del mismo

Campo de la invención

La presente divulgación se refiere al campo de la tecnología farmacéutica. Particularmente, la presente divulgación se refiere a los compuestos de N-bencenosulfonilbenzamida que tienen excelentes efectos inhibidores sobre la proteína Bcl-2, a composiciones farmacéuticas que los comprenden, y a métodos de preparación y uso de los mismos.

Antecedentes de la invención

El diseño y la síntesis de nuevos fármacos antitumorales para dianas específicas de tumores se han convertido en el foco de la terapia antitumoral dirigida. Estudios recientes han mostrado que el mecanismo de apoptosis (muerte celular programada) está implicado en la tumorigénesis, desarrollo y regresión de tumores. La apoptosis está altamente conservada, y existen mecanismos moleculares similares de apoptosis en los organismos de diferentes especies. Las rutas de señalización apoptóticas conocidas incluyen rutas tanto endógenas como exógenas. La ruta apoptótica mitocondrial es la ruta endógena, y la ruta apoptótica mediada por el receptor de muerte es la ruta exógena. En la ruta endógena de la apoptosis, los cambios funcionales de las mitocondrias, tales como la reducción del potencial de la membrana mitocondrial, la formación de "cavidad" de permeabilidad de la membrana mitocondrial o la apertura del "canal", que conduce a la liberación del citocromo c, son las características centrales de la apoptosis.

Las proteínas de la familia Bcl-2 (familia de proteínas de linfoma de células B 2) son los factores del ápice y del núcleo de la ruta mitocondrial. Las proteínas de la familia Bcl-2 se dividen en tres subfamilias según las características funcionales y estructurales: la subfamilia 1 tiene la función antiapoptótica, incluyendo principalmente Bcl-2 (linfoma de células B 2), Mcl-1 (leucemia de células mieloides 1) y Bcl-x, (linfoma de células B x grande), etc.; la subfamilia 2 tiene la función proapoptótica, incluyendo principalmente Bax (proteína X relacionada con Bcl-2) y Bck (antagonista/asesino de Bcl-2); la otra es la subfamilia proapoptótica 3 que contiene sólo dominio BH3 (sólo BH3), incluyendo Bad (antagonista de Bcl-2 de muerte celular), Bim (mediador de interacción con Bcl-2), etc. Estudios han mostrado que de 30 % a 60 % de cáncer de próstata, 70 % de cáncer de mama, 90 % de cáncer colorrectal, 100 % de carcinoma de células pequeñas, y células de leucemia linfocítica granulocítica, etc., expresaban altamente los genes y/o proteínas Bcl-2 con el efecto antiapoptótico. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar inhibidores de la proteína Bcl-2 en el campo de la terapia contra el cáncer.

Han transcurrido más de 10 años desde el inicio de la investigación y desarrollo de inhibidores de la proteína Bcl-2 como compuestos líder anticancerosos, y se han descubierto docenas de moléculas pequeñas. Sin embargo, en el mercado internacional actualmente existe sólo un inhibidor de la proteína Bcl-2 aprobado, Venetoclax. Venetoclax, un fármaco anticanceroso de gran avance desarrollado conjuntamente por AbbVie y Roche, fue aprobado por la U.S. Food and Drug Administration el 11 de abril de 2016, y aprobado por la Agencia Europea de Medicamentos el 5 de diciembre de 2016, para el tratamiento de pacientes con leucemia linfocítica crónica (LLC) con una mutación de deleción del gen 17p, que han recibido al menos un tratamiento.

Venetoclax es el primer inhibidor de la proteína Bcl-2 aprobado por la FDA (el nombre químico es 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il]metil}piperazin-1-il)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, representada por la siguiente fórmula). Es una nueva elección de tratamiento para los pacientes con LLC con la mutación de deleción del gen 17p, que tienen un mal pronóstico y opciones de tratamiento limitadas. Sin embargo, también se pueden encontrar reacciones adversas tales como neutropenia, diarrea, náuseas, anemia, infección del tracto respiratorio superior, trombocitopenia y fatiga.

Se sabe que las propiedades de escasa absorción, distribución, metabolismo y/o excreción (ADME) son las causas principales de fracaso de ensayos clínicos de muchos candidatos a fármacos. Actualmente, muchos fármacos comercializados tienen limitaciones en su aplicación debido a sus malas propiedades de ADME. El rápido metabolismo de muchos fármacos, que podrían haber sido eficaces en el tratamiento de enfermedades, podría hacer que fueran difíciles de usar como fármacos debido a su rápida eliminación del cuerpo. Aunque una administración frecuente o de dosis alta puede resolver el problema de la eliminación rápida del fármaco, este enfoque traerá problemas tales como mala adaptabilidad de los pacientes, efectos secundarios causados por la administración de dosis alta y aumento de los costes de tratamiento. Además, los fármacos que se metabolizan rápidamente también pueden exponer a los pacientes a metabolitos tóxicos o reactivos indeseables.

Por lo tanto, todavía es necesario desarrollar un inhibidor de molécula pequeña de Bcl-2 con alta especificidad o mejores propiedades farmacodinámicas/farmacocinéticas en este campo, que pueda inhibir selectivamente la proteína Bcl-2, para restaurar el proceso de apoptosis y lograr el efecto del tratamiento del cáncer. Los documentos US2012129853 y US2011124628 divulgan Venetoclax deuterado, que no muestra propiedades farmacodinámicas/farmacocinéticas superiores a Venetoclax.

Compendio de la invención

En vista de los problemas técnicos anteriores, la presente divulgación proporciona un nuevo inhibidor de la proteína Bcl-2 de N-bencenosulfonilbenzamida, una composición farmacéutica y su uso. Más específicamente, la presente divulgación se refiere a algunas 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il]metil}piperazin-1-il)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamidas deuteradas. Estos compuestos deuterados tienen mejor actividad inhibidora de la quinasa para Bcl-2 y/o tienen mejores propiedades farmacodinámicas/farmacocinéticas. A este respecto, la solución técnica adoptada por la presente divulgación es la siguiente:

La presente invención se refiere a un inhibidor de la proteína Bcl-2, que es un compuesto de N-bencenosulfonilbenzamida representado por la siguiente fórmula, o una sal, forma cristalina, estereoisómero, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo:

Con la solución técnica en donde el hidrógeno en la molécula de fármaco se reemplaza selectivamente por deuterio, el fármaco deuterado generalmente retiene la actividad biológica y la selectividad originales, ya que en la molécula de fármaco la forma y el volumen de deuterio son sustancialmente los mismos que los del hidrógeno. Al mismo tiempo, los autores de la presente invención han confirmado mediante experimentos que la unión del enlace carbono-deuterio es más estable que la del enlace carbono-hidrógeno, lo que puede afectar directamente a las propiedades, tales como absorción, distribución, metabolismo y excreción, de algunos fármacos, mejorando de este modo la eficacia, seguridad y tolerabilidad de los fármacos.

Preferiblemente, el contenido del isótopo de deuterio en la posición deuterada es al menos mayor que el contenido natural del isótopo de deuterio (0,015 %), preferiblemente mayor que 30 %, más preferiblemente mayor que 50 %, más preferiblemente mayor que 75 %, más preferiblemente mayor que 95 %, y más preferiblemente mayor que 99 %.

Específicamente, en la presente divulgación, el contenido del isótopo de deuterio en cada posición deuterada es al menos 5 %, preferiblemente mayor que 10 %, más preferiblemente mayor que 15 %, más preferiblemente mayor que 20 %, más preferiblemente mayor que 25 %, más preferiblemente mayor que 30 %, más preferiblemente mayor que 35 %, más preferiblemente mayor que 40 %, más preferiblemente mayor que 45 %, más preferiblemente mayor que 50 %, más preferiblemente mayor que 55 %, más preferiblemente mayor que 60 %, más preferiblemente mayor que 65 %, más preferiblemente mayor que 70 %, más preferiblemente mayor que 75 %, más preferiblemente mayor que 80 %, más preferiblemente mayor que 85 %, más preferiblemente mayor que 90 %, más preferiblemente mayor que 95 %, y más preferiblemente mayor que 99 %.

En otra realización preferida, los compuestos no incluyen compuestos no deuterados.

La presente divulgación también proporciona una composición farmacéutica, que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y el inhibidor de la proteína Bcl-2 descrito en el presente documento, o una forma cristalina, sal, hidrato o disolvente farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o variante isotópica de los mismos.

Como una realización adicional de la presente divulgación, el portador farmacéuticamente aceptable comprende al menos uno de una sustancia o un aditivo, un deslizante, un edulcorante, un diluyente, un conservante, un tinte/un colorante, un potenciador del sabor, un tensioactivo, un agente humectante, un agente dispersante, un agente disgregante, un agente de suspensión, un estabilizante, un agente isotónico, un disolvente o un emulsionante encapsulado en una cápsula.

Como una realización adicional de la presente divulgación, la composición farmacéutica es un comprimido, una píldora, una cápsula, un polvo, un gránulo, una pomada, una emulsión, una suspensión, una solución, un supositorio, un inyectable, un inhalante, un gel, una microesfera o un aerosol.

Las vías típicas de administración de las composiciones farmacéuticas divulgadas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, administración oral, rectal, transmucosa, enteral, tópica, transdérmica, por inhalación, parenteral, sublingual, intravaginal, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, intravenosa. Se prefiere la administración oral o la administración por inyección.

La composición farmacéutica divulgada en el presente documento se puede producir mediante un método conocido en la técnica, tal como un método de mezcla convencional, un método de disolución, un método de granulación, un método de recubrimiento de azúcar, un método de pulverización, un método de emulsificación, un método de liofilización, y similares.

La presente divulgación también proporciona un método para preparar una composición farmacéutica que comprende las etapas de: mezclar el portador o los portadores farmacéuticamente aceptables y los inhibidores de proteína Bcl-2 como se describió anteriormente, o una forma cristalina, una sal farmacéuticamente aceptable, un hidrato, un solvato, un estereoisómero o una variante isotópica.

Como una realización adicional de la presente divulgación, también se incluyen otros compuestos activos, que se pueden seleccionar entre: agentes alquilantes, inhibidores de angiogénesis, anticuerpos, antagonistas metabólicos, agentes antimitóticos, agentes antiproliferativos, agentes antivirales, inhibidores de Aurora quinasa, otros promotores de muerte celular programada (p. ej., inhibidores de Bcl-xL, Bcl-w y Bfl-1), activadores de la ruta del receptor de muerte, inhibidores de Bcr-Abl quinasa, anticuerpos BiTE (acoplador biespecífico de células T), productos conjugados de anticuerpo y fármaco, modificadores de reacciones biológicas, inhibidores de quinasa dependientes de ciclina, inhibidores del ciclo celular, inhibidores de ciclooxigenasa-2, DAD, inhibidores del receptor homólogo de oncogén del virus de leucemia (ErbB2), inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores de la proteína de choque térmico (HSP)-90, inhibidores de histona desacetilasa (HDAC), terapia hormonal, inmunización, inhibidores de apoptosis (IAP), antibióticos de inserto, inhibidores de quinasa, Inhibidores de quinesina, inhibidores de Jak2, inhibidores de rapamicina dirigidos a animales de sangre caliente, microARN, inhibidores de quinasa regulada por señal extracelular activada por mitógeno, proteínas de unión multivalentes, AINE, inhibidores de poli ADP (difosfato de adenosina)-ribosa polimerasa (PARP), quimioterapia con platino, inhibidores de quinasa de tipo polo (Plk), inhibidores de fosfoinositido-3 quinasa (PI3K), inhibidores de proteosoma, análogos de purina, análogos de pirimidina, inhibidores de tirosina quinasa receptora, alcaloides tartrato de ergotamina (etinoides)/alcaloides de rizoma sparganii (deltoides), ácidos ribonucleicos inhibidores pequeños (ARNip), inhibidores de topoisomerasa, inhibidores de ubiquitina ligasa, agentes quimioterapéuticos, etc.

Los ingredientes activos divulgados en el presente documento también se pueden utilizar combinados con otros ingredientes activos. La elección de tal combinación se basa en la condición del tratamiento, la reactividad cruzada de los ingredientes y las propiedades farmacéuticas combinadas. También es posible administrar cualquiera de los compuestos divulgados en el presente documento combinados con uno o más de otros ingredientes activos a un paciente simultáneamente en una forma de dosificación única o secuencialmente. Las terapias combinadas se pueden administrar en un régimen de administración simultánea o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinación se puede administrar en dos o más administraciones. La terapia combinada puede proporcionar "sinergia" o "efectos sinérgicos", en otras palabras, cuando los principios activos se utilizan juntos, el efecto obtenido es mayor que la suma de los efectos obtenidos utilizando los compuestos por separado. Cuando los ingredientes activos son: (1) formulados conjuntamente y administrados, o suministrados simultáneamente en una formulación combinada; (2) administrados alternativamente o en paralelo como formulaciones separadas; o (3) administrados mediante algunos otros regímenes, se pueden obtener efectos sinérgicos. Cuando se suministran en una terapia alternativa, se pueden obtener efectos sinérgicos cuando los compuestos se administran o liberan secuencialmente, por ejemplo, como comprimidos, píldoras o cápsulas separados, o mediante inyecciones separadas de jeringas separadas. Generalmente, durante una terapia alternativa, la dosis eficaz de cada principio activo se administra secuencialmente, es decir, sucesivamente, mientras que, en una terapia combinada, las dosis eficaces de dos o más principios activos se administran juntas.

La presente divulgación también proporciona el uso del inhibidor de la proteína Bcl-2 divulgado en el presente documento o la composición farmacéutica del mismo, que incluye el uso para tratar cáncer de vejiga, cáncer cerebral, cáncer de mama, cáncer de médula ósea, cáncer de cuello uterino, leucemia linfocítica crónica, cáncer colorrectal, cáncer esofágico, carcinoma hepatocelular, leucemia linfocítica primordial, linfoma folicular, linfoma de origen de células T o células B, melanoma, leucemia granulocítica, mieloma, tumor de la cavidad oral, cáncer ovárico, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de próstata, carcinoma de células pequeñas o cáncer de bazo.

Se debe entender que, dentro del alcance divulgado en el presente documento, las diversas características técnicas anteriores y diversas características técnicas descritas específicamente a continuación en el presente documento (como en los ejemplos) en la presente divulgación se pueden combinar entre sí para constituir una solución técnica nueva o preferida. Debido a limitaciones de espacio, no se repetirán aquí.

Como se emplea en el presente documento, a menos que se especifique lo contrario, "halógeno" se refiere a F, Cl, Br e I. Más preferiblemente, un átomo de halógeno se selecciona del grupo que consiste en F, Cl y Br.

Como se emplea en el presente documento, a menos que se especifique lo contrario, "deuterado" significa que uno o más hidrógenos en un compuesto o grupo están sustituidos por deuterio; el "deuterado" puede estar monosustituido, disustituido, polisustituido o completamente sustituido con deuterio. Los términos "sustituido con uno o más deuterios" y "sustituido una o más veces con deuterio" se utilizan indistintamente.

Como se emplea en el presente documento, a menos que se especifique lo contrario, "compuesto no deuterado" se refiere a un compuesto que contiene deuterio a una relación que no es mayor que el contenido natural del isótopo de deuterio (0,015 %).

También se divulgan en el presente documento compuestos marcados isotópicamente (también denominados "variantes isotópicas") en la medida de los compuestos originales divulgados en el presente documento. Los ejemplos de isótopos que se pueden enumerar en los compuestos divulgados en el presente documento incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, y 36Cl, respectivamente. Un compuesto de fórmula (I) divulgado en el presente documento que contiene el isótopo anterior u otro átomo isotópico, o un polimorfo, una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una variante isotópica, un hidrato o un solvato del mismo están todos dentro del alcance divulgado en el presente documento. Ciertos compuestos marcados isotópicamente divulgados en el presente documento, tales como los radioisótopos de 3H y 14C, también están entre ellos y son útiles en los experimentos de distribución tisular de fármacos y sustratos. El tritio, es decir, 3H, y el carbono-14, es decir, 14C, son más fáciles de preparar y detectar y son la primera elección para isótopos. Además, la sustitución por isótopos más pesados tales como deuterio, es decir, 2H, tiene ventajas en algunas terapias debido a su buena estabilidad metabólica, por ejemplo, mayor semivida in vivo o menor dosis, y por lo tanto se le puede conceder prioridad en algunos casos. Los compuestos marcados isotópicamente se pueden preparar utilizando los esquemas mostrados en los Ejemplos mediante métodos convencionales reemplazando los reactivos no isotópicos por reactivos marcados isotópicamente fácilmente disponibles.

El compuesto de fórmula (I) divulgado en el presente documento puede existir en forma de una sal de adición de ácido, una sal de adición de base o zwitterión. La sal del compuesto se prepara durante el aislamiento del compuesto o después de la purificación del compuesto. La sal de adición de ácido de un compuesto es la derivada de la reacción del compuesto con un ácido. Por ejemplo, la presente divulgación incluye acetato, adipato, alginato, bicarbonato, citrato, aspartato, benzoato, besilato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, formiato, fumarato, glicerol fosfato, glutamato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, lactobionato, lactato, maleato, mesitilenosulfonato, metanosulfonato, naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, sal de ácido pectínico, persulfato, fosfato, picrato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tricloroacetato, p-toluenosulfonato y undecanoato del compuesto del mismo. La sal de adición de base de un compuesto es la derivada de la reacción del compuesto con hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión tal como litio, sodio, potasio, calcio, magnesio y similares.

El compuesto divulgado en el presente documento puede incluir uno o más centros asimétricos, y por lo tanto puede existir en una variedad de formas de "estereoisómero", por ejemplo, formas enantioméricas y/o diastereoméricas. Por ejemplo, el compuesto divulgado en el presente documento puede estar en forma de un enantiómero individual, un diastereómero o un isómero geométrico (p. ej., isómeros cis y trans), o puede estar en forma de una mezcla de estereoisómeros, incluyendo una mezcla racémica y una mezcla enriquecida en uno o más estereoisómeros. Los isómeros se pueden separar de la mezcla mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo: cromatografía líquida de alta presión quiral (HPLC) y formación y cristalización de una sal quiral; o los isómeros preferidos se pueden preparar mediante síntesis asimétrica.

En ciertos casos, el compuesto divulgado en el presente documento también puede existir en forma de un tautómero. Aunque solo se puede describir un tipo de estructura resonante no localizada, se contempla que todas estas formas se encuentren dentro del alcance divulgado en el presente documento. Por ejemplo, para sistemas de purina, pirimidina, imidazol, guanidina, amidina y tetrazol, pueden estar presentes tautómeros enamina, y todas sus posibles formas tautoméricas se encuentran dentro del alcance divulgado en el presente documento.

El término "polimorfo" se refiere a la diferente disposición de moléculas químicas de fármaco, que generalmente se presenta como la forma de existencia de las materias primas del fármaco en estado sólido. Un fármaco puede existir en una variedad de formas cristalinas, y diferentes formas cristalinas del mismo fármaco pueden tener diferentes propiedades de disolución y absorciónin vivo,afectando de este modo a la disolución y liberación de la formulación.

El término "solvato" se refiere a un complejo en el que un compuesto divulgado en el presente documento se coordina con una molécula de disolvente a una relación particular. "Hidrato" se refiere a un complejo formado por coordinación de un compuesto divulgado en el presente documento con agua.

En comparación con la técnica anterior, la presente divulgación tiene los siguientes efectos beneficiosos: los compuestos divulgados en el presente documento tienen excelentes propiedades inhibidoras contra la proteína quinasa para Bcl-2; y la tecnología de deuteración altera el metabolismo del compuesto en el organismo, permitiendo que el compuesto tenga mejores parámetros farmacocinéticos. En este caso, la dosis se puede cambiar y se puede formar una formulación de acción prolongada para mejorar la aplicabilidad; el uso de deuterio para reemplazar los átomos de hidrógeno en los compuestos puede aumentar la concentración de fármaco del compuesto en animales debido a su efecto isótopo de deuterio, para mejorar la eficacia del fármaco; y el reemplazo de los átomos de hidrógeno en los compuestos por deuterio puede aumentar la seguridad de los compuestos debido a la inhibición de ciertos metabolitos.

Descripción detallada de la invención

Compuestos

La presente divulgación proporciona un compuesto de N-bencenosulfonilbenzamida de la siguiente fórmula, o una sal, forma cristalina, estereoisómero, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo:

Como una realización preferida de la presente divulgación, el contenido de isótopo de deuterio en cada posición deuterada es al menos mayor que el contenido natural de isótopo de deuterio (0,015 %), preferiblemente mayor que 30 %, más preferiblemente mayor que 50 %, más preferiblemente mayor que 75 %, más preferiblemente mayor que 95 %, y más preferiblemente mayor que 99 %.

Síntesis

Los compuestos divulgados en el presente documento, incluyendo sus sales, se pueden preparar utilizando técnicas sintéticas orgánicas conocidas y se pueden sintetizar según cualquiera de diversas rutas sintéticas posibles, tales como las de los esquemas que se muestran a continuación. La reacción para preparar los compuestos divulgados en el presente documento se puede llevar a cabo en un disolvente adecuado, que puede ser fácilmente seleccionado por los expertos en la técnica de síntesis orgánica. Los disolventes adecuados pueden ser sustancialmente no reactivos con materiales de partida (reactivos), intermedios o productos a la temperatura a la que se lleva a cabo la reacción (por ejemplo, a temperaturas que oscilan de la temperatura de congelación a la temperatura de ebullición de un disolvente). Una reacción dada puede llevarse a cabo en un disolvente o una mezcla de más de un disolvente. El experto puede seleccionar el disolvente para la etapa de reacción particular dependiendo de la etapa de reacción particular.

La preparación de los compuestos divulgados en el presente documento puede implicar la protección y desprotección de diferentes grupos químicos. Un experto en la técnica puede determinar fácilmente la necesidad de protección y desprotección y la elección de grupos protectores apropiados. Las propiedades químicas de los grupos protectores se pueden encontrar, por ejemplo, en Wuts y Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 4a ed., John Wiley & Sons: Nueva Jersey, (2000).

La reacción se puede controlar según cualquier método adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la formación de producto se puede controlar por medios espectroscópicos (tales como espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN) (p. ej., 1H o 13C), espectroscopía infrarroja (IR), espectrofotometría (p. ej., UV-visible), espectrometría de masas (MS)) o por métodos cromatográficos (tales como cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) o cromatografía en capa fina (TLC)).

Composiciones farmacéuticas, formulaciones y kits

En otro aspecto, en el presente documento se proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto divulgado en el presente documento (también denominado "componente activo") y un excipiente farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz del componente activo. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del componente activo. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una cantidad profilácticamente eficaz del componente activo.

Un excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en la presente divulgación se refiere a un vehículo, adyuvante o vehículo no tóxico que no destruye la actividad farmacológica del compuesto formulado conjuntamente. Los portadores, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables que se pueden utilizar en las composiciones divulgadas en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas del suero (p. ej., albúmina de suero humano), sustancias tampón (tales como fosfato), glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, una mezcla de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sal o electrolito (tal como sulfato de protamina), hidrogenofosfato de disodio, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sal de cinc, gel de sílice, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias basadas en celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa sódica, poliacrilato, cera, polímero en bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina.

La presente divulgación también incluye un kit (p. ej., paquetes farmacéuticos). El kit proporcionado puede incluir compuestos divulgados en el presente documento, otros agentes terapéuticos, y un primer y segundo recipientes que contienen los compuestos divulgados en el presente documento y otros agentes terapéuticos (p. ej., viales, ampollas, frascos, jeringas y/o envases dispersables u otros recipientes adecuados). En algunas realizaciones, el kit proporcionado también puede incluir opcionalmente un tercer recipiente que contiene un excipiente farmacéuticamente aceptable para diluir o suspender los compuestos divulgados en el presente documento y/u otros agentes terapéuticos. En algunas realizaciones, los compuestos divulgados en el presente documento y otros agentes terapéuticos proporcionados en un primer recipiente y un segundo recipiente se combinan para formar una forma de dosificación unitaria.

La composición farmacéutica proporcionada en el presente documento se puede administrar mediante una variedad de vías que incluyen, pero sin limitación, administración oral, administración parenteral, administración mediante inhalación, administración tópica, administración rectal, administración nasal, administración en la cavidad bucal, administración vaginal, administración mediante implante u otros medios de administración. Por ejemplo, la administración parenteral como se emplea en el presente documento incluye administración subcutánea, administración intradérmica, administración intravenosa, administración intramuscular, administración intraarticular, administración intraarterial, administración intrasinovial, administración intraesternal, administración intracerebroventricular, administración intralesional e inyección intracraneal o técnicas de infusión.

Generalmente, los compuestos proporcionados en el presente documento se administran en una cantidad eficaz. La cantidad del compuesto administrada realmente será determinada típicamente por un médico, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto real administrado, la edad, peso y respuesta del paciente individual, la gravedad de los síntomas del paciente, y similares.

Cuando se utilizan para prevenir la afección divulgada en el presente documento, los compuestos proporcionados en el presente documento se administrarán a un sujeto en riesgo de desarrollar la afección, típicamente con el asesoramiento y bajo la supervisión de un médico, a los niveles de dosificación descritos anteriormente. Los sujetos en riesgo de desarrollar una afección particular incluyen generalmente aquellos que tienen antecedentes familiares de la afección, o aquellos que se ha identificado mediante pruebas o escrutinio genético que son particularmente susceptibles a desarrollar la afección.

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento también se pueden administrar crónicamente ("administración crónica"). La administración crónica se refiere a la administración de un compuesto o composición farmacéutica del mismo durante un periodo de tiempo prolongado, p. ej., durante 3 meses, 6 meses, 1 año, 2 años, 3 años, 5 años, etc., o se puede continuar indefinidamente, por ejemplo, durante el resto de la vida del sujeto. En algunas realizaciones, la administración crónica pretende proporcionar un nivel constante del compuesto en la sangre, p. ej., dentro de la ventana terapéutica durante el periodo de tiempo prolongado.

Las composiciones farmacéuticas divulgadas en el presente documento se pueden administrar adicionalmente utilizando una variedad de métodos de dosificación. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la composición farmacéutica se puede administrar como un bolo, p. ej., para aumentar rápidamente la concentración del compuesto en la sangre a un nivel eficaz. La colocación de la dosis en bolo depende de los niveles sistémicos del ingrediente activo deseado, p. ej., una dosis en bolo intramuscular o subcutánea permite una liberación lenta del ingrediente activo, mientras que un bolo suministrado directamente a las venas (p. ej., a través de un goteo IV) permite un suministro mucho más rápido que eleva rápidamente la concentración del ingrediente activo en la sangre a un nivel eficaz. En otras realizaciones, la composición farmacéutica se puede administrar como una infusión continua, p. ej., mediante goteo IV, para proporcionar el mantenimiento de una concentración en estado estacionario del principio activo en el cuerpo del sujeto. Además, en otras realizaciones más, la composición farmacéutica se puede administrar en primer lugar como una dosis en bolo, seguida de infusión continua.

Las composiciones para administración oral pueden adoptar la forma de soluciones o suspensiones líquidas a granel, o polvos a granel. Más comúnmente, sin embargo, las composiciones se presentan en formas de dosificación unitarias para facilitar una dosificación precisa. El término "formas de dosificación unitarias" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéutico adecuado. Las formas de dosificación unitaria típicas incluyen ampollas o jeringas precargadas, medidas previamente de las composiciones líquidas o píldoras, comprimidos, cápsulas o similares en el caso de composiciones sólidas. En tales composiciones, el compuesto es usualmente un componente minoritario (de aproximadamente 0,1 % a aproximadamente 50 % en peso o preferiblemente de aproximadamente 1 % a aproximadamente 40 % en peso) siendo el resto diversos vehículos o excipientes y adyuvantes de procesamiento útiles para formar la forma de dosificación deseada.

Con la dosificación oral, de una a cinco y especialmente de dos a cuatro y típicamente tres dosis orales al día son regímenes representativos. Utilizando estos patrones de dosificación, cada dosis proporciona de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg del compuesto divulgado en el presente documento, proporcionando cada una de las dosis preferidas de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg, y especialmente de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg.

Las dosis transdérmicas se seleccionan generalmente para proporcionar niveles en sangre similares o inferiores a los que se consiguen utilizando dosis inyectables, generalmente en una cantidad que oscila de aproximadamente 0,01 % a aproximadamente 20 % en peso, preferiblemente de aproximadamente 0,1 % a aproximadamente 20 % en peso, preferiblemente de aproximadamente 0,1 % a aproximadamente 10 % en peso, y más preferiblemente de aproximadamente 0,5 % a aproximadamente 15 % en peso.

Los niveles de dosis inyectables varían de aproximadamente 0,1 mg/kg/hora a al menos 10 mg/kg/hora, todo durante aproximadamente 1 a aproximadamente 120 horas y especialmente de 24 a 96 horas. También se puede administrar un bolo de precarga de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg o más para lograr niveles adecuados en estado estacionario. No se espera que la dosis total máxima exceda de aproximadamente 2 g/día para un paciente humano de 40 a 80 kg.

Las formas líquidas adecuadas para administración oral pueden incluir un vehículo acuoso o no acuoso adecuado con tampones, agentes de suspensión y dispensación, colorantes, aromas y similares. Las formas sólidas pueden incluir, por ejemplo, cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa, un agente disgregante tal como ácido algínico, Primogel o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato de magnesio; un deslizante tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente aromatizante tal como menta, salicilato de metilo o aroma de naranja.

Las composiciones inyectables se basan típicamente en solución salina estéril inyectable o solución salina tamponada con fosfato u otros excipientes inyectables conocidos en la técnica. Como se ha mencionado anteriormente, el compuesto activo en tales composiciones es típicamente un componente minoritario, siendo a menudo de aproximadamente de 0,05 % a 10 % en peso, siendo el resto el excipiente inyectable y similares.

Las composiciones transdérmicas se formulan típicamente como un ungüento o crema tópicos que contienen el ingrediente o los ingredientes activos. Cuando se formulan como una pomada, los principios activos se combinarán típicamente con una base de pomada parafínica o miscible en agua. Alternativamente, los ingredientes activos se pueden formular en una crema con, por ejemplo, una base de crema de aceite en agua. Tales formulaciones transdérmicas son bien conocidas en la técnica e incluyen generalmente ingredientes adicionales para potenciar la penetración dérmica estable de los ingredientes activos o formulación. Todas estas formulaciones transdérmicas conocidas e ingredientes están incluidos dentro del alcance proporcionado en el presente documento.

Los compuestos divulgados en el presente documento también se pueden administrar mediante un dispositivo transdérmico. Por consiguiente, la administración transdérmica se puede realizar utilizando un depósito o un parche en tipo membrana porosa o con diversas matrices sólidas.

Los componentes descritos anteriormente para composiciones administrables por vía oral, inyectables o administrables por vía tópica son meramente representativos. Otros materiales, así como técnicas de procesamiento y similares se exponen en la Parte 8 de Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a edición, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.

Los compuestos divulgados en el presente documento también se pueden administrar en formas de liberación sostenida o a partir de sistemas de suministro de fármacos de liberación sostenida. Una descripción de materiales de liberación sostenida representativos se puede encontrar en Remington's Pharmaceutical Sciences.

La presente divulgación también se refiere a las formulaciones farmacéuticamente aceptables de un compuesto divulgado en el presente documento. En una realización, la formulación comprende agua. En otra realización, la formulación comprende un derivado de ciclodextrina. Las ciclodextrinas más comunes son a-, p- y<y>-ciclodextrinas que consisten en 6, 7 y 8 unidades de glucosa conectadas en a-1, 4, respectivamente, que comprenden opcionalmente uno o más sustituyentes en los radicales azúcar conectados, que incluyen, pero sin limitarse a, sustitución metilada, hidroxialquilada, acilada y sulfoalquiléter. En algunas realizaciones, la ciclodextrina es una sulfoalquiléter p-ciclodextrina, por ejemplo, sulfobutil éter p-ciclodextrina, también conocida como Captisol. Véase, p. ej., el documento U.S. 5.376.645. En algunas realizaciones, la formulación comprende hexapropil- p-ciclodextrina (p. ej., 10-50 % en agua).

Ejemplos

Los métodos de preparación del compuesto de fórmula (I) divulgado en el presente documento se describen más específicamente a continuación, pero estos métodos específicos no se deben interpretar como limitantes del alcance de la presente divulgación de ninguna manera. El compuesto de la presente divulgación también se puede preparar convenientemente combinando opcionalmente diversos métodos sintéticos descritos en la descripción o los conocidos en la técnica, y tales combinaciones pueden ser fácilmente preparadas por los expertos en la técnica.

Generalmente, en el procedimiento de preparación, las reacciones se llevan a cabo normalmente en un disolvente inerte a una temperatura que oscilan de temperatura ambiente a temperatura de reflujo (p. ej., de 0 °C a 100 °C, preferiblemente de 0 °C a 80 °C). El tiempo de reacción es usualmente de 0,1 a 60 horas, preferiblemente de 0,5 a 24 horas.

Compuesto intermedio 1: Síntesis de 2-[(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)oxi]-4-fluorobenzoato de metilo.

En atmósfera de nitrógeno, se añadieron sucesivamente 1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-ol (1,0 g, 7,45 mmoles), 2,4-difluorobenzoato de metilo (1,6 g, 9,31 mmoles) y fosfato de potasio (2,05 g, 9,69 mmoles) a 20 ml de dimetil éter de dietilenglicol. La solución de reacción se agitó a 115 °C durante aproximadamente 10 h, y se analizó mediante cromatografía en placa hasta que el material se consumió completamente. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se inactivó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se recogió y se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 1,3 g de un producto sólido de color blanco, con un rendimiento del 62 %. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 510,66 (s, 1H), 8,24 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 7,99 (dd,J= 8,8, 6,6 Hz, 1H), 7,69 (d,J= 2,4 Hz, 1H), 7,50 - 7,42 (m, 1H), 6,83 (ddd,J= 8,8, 7,6, 2,4 Hz, 1H), 6,57 - 6,49 (m, 2H), 3,93 (s, 3H).

Compuesto intermedio 2: Síntesis de éster de pinacol de ácido 4-clorofenilborónico.

Bajo atmósfera de nitrógeno, se añadieron cloroyodobenceno (6,0 g, 25,16 mmoles), Pd(dppf)Cl2^CH2Cl2 (1,0 g, 1,26 mmoles), acetato de potasio (4,93 g, 50,3 mmoles) y bis(pinacolato)diboro (6,4 g, 26,4 mmoles) a 50 ml de DMSO sucesivamente, y la solución resultante se calentó a 95 °C y se hizo reaccionar durante 10 h. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se inactivó con agua y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se recogió y se purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 3,2 g de un producto sólido de color amarillo, con un rendimiento de 50 %. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 7,73 (d,J =8,2 Hz, 2H), 7,35 (d,J= 8,3 Hz, 2H), 1,34 (s, 12H).

Compuesto intermedio 3: Síntesis de 3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]bencenosulfonamida.

Se añadieron sucesivamente 4-fluoro-3-nitrobencenosulfonamida (1,0 g, 4,54 mmoles), (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamina (0,6 g, 4,49 mmoles) y trietilamina (1,3 g, 6,81 mmoles) a 10 ml de tetrahidrofurano. Después de agitar a temperatura ambiente durante 5 h, se eliminó el disolvente. Se añadieron 20 ml de metanol para formar una suspensión, y la mezcla se secó para proporcionar 1,4 g de un producto, con un rendimiento de 97 %. 1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 58,59 (s, 1H), 8,47 (d,J= 2,2 Hz, 1H), 7,83 (dd,J =9,2, 2,1 Hz, 1H), 7,35 (s, 2H), 7,30 (d,J =9.3 Hz, 1H), 3,85 (dd,J =11,0, 3,3 Hz, 2H), 3,37 (s, 2H), 3,26 (t,J =11,6 Hz, 2H), 1,91 (ddd,J= 11,2, 7,6, 4,0 Hz, 1H), 1,61 (d,J= 12,7 Hz, 2H), 1,33 - 1,21 (m, 2H).

Ejemplo 1 (para referencia) Preparación de 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il]metild<2>}piperazin-1-il)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, que es el compuesto T-1, representado por la siguiente fórmula:

Para la síntesis se utilizan las si uientes rutas:

Etapa 1 Síntesis del compuesto 5.

Bajo la protección de nitrógeno, se añadieron hidruro de sodio (1,9 g, 79,3 mmoles) y carbonato de dimetilo (14,3 g, 158,6 mmoles) a THF anhidro (15 ml) y se calentó. Se añadió gota a gota una solución de 3,3-dimetilciclohexan-1-ona (5,0 g, 39,6 mmoles) en THF mientras se mantenía a reflujo, y se continuó el reflujo durante 4 h después de la adición. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y la reacción se inactivó mediante la adición de metanol. Se añadieron agua y diclorometano para la extracción, y la fase orgánica se recogió y purificó mediante cromatografía en columna para proporcionar 4,2 g de un producto líquido incoloro, con un rendimiento de 70 %.

Etapa 2 Síntesis del compuesto 6.

A 0 °C, se añadió lentamente gota a gota el compuesto 5 (4,2 g, 22,8 mmoles) a una solución de hidruro de sodio (1,0 g, 45,6 mmoles) en diclorometano (80 ml). La mezcla se hizo reaccionar durante 0,5 h y se enfrió a -25 °C. A continuación, se añadió lentamente gota a gota a la mezcla anhídrido trifluorometanosulfónico (Tf2O, 7,7 g, 27,4 mmoles), después de lo cual, la solución de reacción se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. Se añadió solución 2 M de cloruro de amonio (50 ml) para la extracción y se recogió la fase orgánica, que se lavó con agua (60 mlx2) y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 100:1) para proporcionar 5,0 g de un producto líquido de color amarillo claro, con un rendimiento de 69 %. 1H RMN (400 MHz, CDCla) 53,81 (s, 3H), 2,55-2,47 (m, 2H), 2,18 (t,J =2.4 Hz, 2H), 1,44 (t,J =6.4 Hz, 2H), 1,01 (s, 6H).

Etapa 3 Síntesis del compuesto 7.

Bajo la protección de nitrógeno, se añadieron sucesivamente el compuesto 2 (0,70 g, 2,93 mmoles), el compuesto 6 (0,928 g, 2,93 mmoles), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,300 g, 0,29 mmoles) y fluoruro de potasio (0,42 g, 7,33 mmoles) a una mezcla de diclorometano (20 ml) y metanol (10 ml), y la mezcla resultante se calentó a 65 °C para la reacción durante 6 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la reacción se inactivó con agua (20 ml). Se añadió diclorometano (30 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 40:1) para proporcionar 0,54 g de un producto líquido incoloro, con un rendimiento de 67 %. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 7,33 - 7,27 (m, 2H), 7,06 (d,J= 8,5 Hz, 2H), 3,49 (s, 3H), 2,53 - 2,45 (m, 2H), 2,15 (t, J= 2,3 Hz, 2H), 1,51 (t,J =6.5 Hz, 2H), 1,02 (s, 6H).

Etapa 4 Síntesis del compuesto 8.

En condiciones de 0 °C, se añadió lentamente gota a gota LiAlD4 (0.2 g, 5,02 mmoles) a una solución del compuesto 7 (0,7 g, 2,51 mmoles) en tetrahidrofurano (20 ml), después de lo cual la reacción continuó durante 1 h. Se añadió ácido clorhídrico 1 M (10 ml) para sofocar la reacción, y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (40 mlx3). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,6 g de un producto líquido de color amarillo claro, con un rendimiento de 96 %.

Etapa 5 Síntesis del compuesto 9.

Una solución del compuesto 8 (1,2 g, 4,78 mmoles) en una mezcla de acetonitrilo (15 ml) y éter dietílico (15 ml) se enfrió a -5 °C. Se añadieron imidazol (0,72 g, 10,53 mmoles) y trifenilfosfina (2,5 g, 9,57 mmoles), y se añadió lentamente yodo (2,92 g, 11,51 mmoles) después de la disolución completa. La reacción continuó durante 1 h, y se añadió agua (20 ml) para apagar la reacción. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (40 mlx2). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 50:1) para proporcionar 1,3 g de un producto líquido incoloro, con un rendimiento de 77 %.

Etapa 6 Síntesis del compuesto 10.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 9 (1,2 g, 3,33 mmoles), N-terc-butoxicarbonil-piperazina (0,74 g, 4,00 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA, 0,86 g, 6,66 mmoles) a una solución de N,N-dimetilformamida (DMF, 10 ml). La mezcla resultante se calentó a 80 °C y se hizo reaccionar durante 1 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (20 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (20 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 30:1) para proporcionar 1,1 g de un producto, con un rendimiento de 79 %.

Etapa 7 Síntesis del compuesto 11.

A 0 °C, se añadió lentamente una solución de HCl 4 M en acetato de etilo (6 ml) a una solución del compuesto 10 (1,0 g, 2,40 mmoles) en diclorometano (15 ml) y la reacción continuó durante 3 horas después de calentarla a temperatura ambiente. Después de la filtración, la torta de filtración se disolvió en agua y se neutralizó con fosfato de potasio. Se añadió acetato de etilo (30 mlx2) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,7 g de un producto, con un rendimiento de 92 %. LC-MS (APCI): m/z = 322,13 (M+1)+.

Etapa 8 Síntesis del compuesto 12.

Bajo la protección de nitrógeno, se añadieron sucesivamente el compuesto 11 (0,9 g, 2,83 mmoles), el compuesto 1 (0,8 g, 2,83 mmoles) e hidrogenofosfato de dipotasio (0,98 g, 5,66 mmoles) a dimetilsulfóxido (DMSO, 25 ml). La solución de reacción se hizo reaccionar a 140 °C durante 12 h y se enfrió a temperatura ambiente. Después se añadió agua (50 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (40 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 3:1) para proporcionar 1,3 g de un aceite de color amarillo, con un rendimiento de 78 %. LC-MS (APCI): m/z = 588,16 (M+1)<+>.

Etapa 9 Síntesis del compuesto 13.

Se añadieron hidróxido de sodio (0,27 g, 6,85 mmoles) y agua (2 ml) a una mezcla disolvente del compuesto 12 (0,8 g, 1,37 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (3 ml). La solución de reacción se agitó a 45 °C durante 10 h y se enfrió a temperatura ambiente. La mayor parte del disolvente se eliminó, y el residuo se ajustó a pH 2 con ácido clorhídrico 2 M. Se añadió diclorometano (30 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,65 g de un sólido de color blanco, con un rendimiento de 83 %.<1>H RMN (400 MHz, DMSO) 5 11,72 (s, 1H), 10,87 (s, 1H), 8,00 (d,J =2,6 Hz, 1H), 7,78 (d,J =8,9 Hz, 1 H), 7,51 -7,47 (m, 1H), 7,45 (d,J= 2,5 Hz, 1H), 7,40 (d,J= 8,5 Hz, 2H), 7,11 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 6,77 (dd,J= 9,0, 2,4 Hz, 1H), 6,45 - 6,37 (m, 2H), 3,69 (d,J= 13,2 Hz, 2H), 3,55 (d,J= 4,1 Hz, 2H), 3,28 (d,J= 12,3 Hz, 2H), 2,72 (d,J= 11,6 Hz, 2H), 2,38 (s, 2H), 2,02 (s, 2H), 1,44 (t,J= 6,1 Hz, 2H), 0,94 (s, 6H).

Etapa 10 Síntesis del compuesto T-1.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 13 (0,10 g, 0,18 mmoles), el compuesto 3 (0,055 g, 0,18 mmoles), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 0,052 g, 0,27 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,044 mg, 0,36 mmoles) a diclorometano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Se añadió agua (10 ml) para sofocar la reacción, y se añadió diclorometano (15 mlx3) para la extracción. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo/metanol (v/v) = 30:1) para proporcionar 80 mg de un sólido de color amarillo, con un rendimiento de 53 %. LC-MS (APCI): m/z = 871,36 (M+1)<+>.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-ofe) 5 11,71 (s, 1H), 11,48 (s, 1H), 8,60-8,50 (m, 2H), 8,00 (dd,J= 15,2, 5,6 Hz, 2H), 7,76 (d,J= 9,0 Hz, 1H), 7,50 (t,J= 6,1 Hz, 3H), 7,34 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 7,26 (d,J= 8,6 Hz, 1H), 7,04 (d,J= 8,3 Hz, 3H), 6,66 (d,J= 8,9 Hz, 1H), 3,84 (dd,J= 11,2, 2,9 Hz, 2H), 3,26 (dd,J =14.6, 8,7 Hz, 4H), 3,10 (s, 4H), 2,81 (s, 2H), 2,21 (d,J =34,6 Hz, 6H), 1,61 (d,J =11,5 Hz, 2H), 1,38 (t,J= 6,2 Hz, 2H), 1,23 (s, 3H), 0,92 (s, 6H).

Ejemplo 2 (para referencia) Preparación de 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il]metild<2>}piperazin-1-il)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil-d<2>)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, que es el compuesto T-2, representado por la siguiente fórmula:

Para la síntesis se utilizan las siguientes rutas:

Etapa 1 Síntesis del compuesto 15.

En condiciones de 0 °C, se añadió lentamente gota a gota LiAlD<4>(0.4 g, 10,08 mmoles) a una solución del compuesto 14 (1,0 g, 9,00 mmoles) en tetrahidrofurano (20 ml), después de lo cual la reacción continuó durante 1 h. Se añadió ácido clorhídrico 1 M (10 ml) para sofocar la reacción, y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (40 mlx3). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,72 g de un sólido de color amarillo claro, con un rendimiento de 68,6 %. LC-MS (APCI): m/z = 118,29 (M+1)<+>.

Etapa 2 Síntesis del compuesto 16.

Se añadieron sucesivamente 4-fluoro-3-nitrobencenosulfonamida (1,12 g, 5,12 mmoles), compuesto 15 (0,6 g, 5,12 mmoles) y trietilamina (0,78 g, 7,68 mmoles) a tetrahidrofurano (10 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h, y el disolvente se eliminó. Se añadió metanol (10 ml) para formar una suspensión coloidal y la mezcla se secó para proporcionar 0,8 g de un producto, con un rendimiento de 50 %. LC-MS (APCI): m/z = 318,20 (M+1)<+>.

Etapa 3 Síntesis del compuesto T-2.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 16 (0,056 g, 0,18 mmoles), el compuesto 13 (0,10 g, 0,18 mmoles), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 0,052 g, 0,27 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,044 mg, 0,36 mmoles) a diclorometano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Se añadió agua (10 ml) para sofocar la reacción y se añadió diclorometano (15 mlx3) para la extracción. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo/metanol (v/v) = 30:1) para proporcionar 45 mg de un sólido de color amarillo, con un rendimiento de 30 %. LC-MS (APCI): m/z = 873,47 (M+1)<+>.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 511,71 (s, 1H), 11,49 (s, 1H), 8,56 (m, 2H), 8,00 (dd,J =5,2 Hz, 2H), 7,76 (d,J =9,0 Hz, 1H), 7,51 (t,J =6,1 Hz, 3H), 7,36 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 7,26 (d,J= 8,2 Hz, 1H), 7,14 (d,J= 8,3 Hz, 3H), 6,60 (d,J =8,9 Hz, 1H), 3,45-3,26 (dd, 4H), 3,10 (s, 4H), 2,81 (s, 2H), 2,56-2,21 (d,J =4,6 Hz, 6H), 1,61 (d,J =11,5 Hz, 2H), 1,38 (t,J= 6,2 Hz, 2H), 1,23 (s, 3H), 0,92 (s, 6H).

Ejemplo 3 Preparación de 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il]metil}piperazin-1-il)-N-({3-tetrahidro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil-d<2>)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, que es el compuesto T-3, representado por la siguiente fórmula:

Para la síntesis se utilizan las siguientes rutas:

Etapa 1 Síntesis del compuesto 17.

En condiciones de 0 °C, se añadió lentamente gota a gota LiAlH4 (0.14 g, 3,59 mmoles) a una solución del compuesto 7 (1,0 g, 3,59 mmoles) en tetrahidrofurano (20 ml), después de lo cual la reacción continuó durante 1 h. Se añadió ácido clorhídrico 1 M (10 ml) para sofocar la reacción, y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (40 mlx3). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,8 g de un producto líquido de color amarillo claro, con un rendimiento de 89 %.

Etapa 2 Síntesis del compuesto 18.

Se añadió el compuesto 17 (0,8 g, 3,19 mmoles) a una mezcla de acetonitrilo (15 ml) y solución de éter dietílico (15 ml) y la mezcla resultante se enfrió a -5 °C. Se añadieron imidazol (0,48 g, 7,01 mmoles) y trifenilfosfina (1,67 g, 6,38 mmoles), y se añadió lentamente yodo (1,95 g, 7,65 mmoles) después de la disolución completa. La reacción continuó durante 1 h, y se añadió agua (20 ml) para sofocar la reacción. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (40 mlx2). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 50:1) para proporcionar 0,9 g de un producto líquido incoloro, con un rendimiento de 78 %.

Etapa 3 Síntesis del compuesto 19.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 18 (0,6 g, 1,67 mmoles), N-terc-butoxicarbonil-piperazina (0,37 g, 2,00 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA, 0,43 g, 3,33 mmoles) a una solución de N,N-dimetilformamida (DMF, 10 ml). La mezcla resultante se calentó a 80 °C y se hizo reaccionar durante 1 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (20 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (20 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 30:1) para proporcionar 0,6 g de un producto, con un rendimiento de 85 %.

Etapa 4 Síntesis del compuesto 20.

A 0 °C, se añadió lentamente una solución de HCl 4 M en acetato de etilo (4 ml) a una solución del compuesto 19 (0,6 g, 1,44 mmoles) en diclorometano (15 ml) y la reacción continuó durante 3 h después de calentarla a temperatura ambiente. Después de la filtración, la torta de filtración se disolvió en agua y se neutralizó con fosfato de potasio. Se añadió acetato de etilo (30 mlx2) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,4 g de un producto, con un rendimiento de 87 %. LC-MS (APCI): m/z = 319,87 (M+1)+.

Etapa 5 Síntesis del compuesto 21.

Bajo la protección de nitrógeno, se añadieron sucesivamente el compuesto 20 (1,0 g, 3,13 mmoles), el compuesto 1 (0,9 g, 3,13 mmoles) e hidrogenofosfato de dipotasio (1,10 g, 6,26 mmoles) a dimetilsulfóxido (DMSO, 25 ml). La solución de reacción se hizo reaccionar a 140 °C durante 12 h y se enfrió a temperatura ambiente. Después se añadió agua (50 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (50 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 3:1) para proporcionar 1,4 g de un aceite de color amarillo, con un rendimiento de 76 %. LC-MS (APCI): m/z = 585,91 (M+1)+.

Etapa 6 Síntesis del compuesto 22.

Se añadieron sucesivamente hidróxido de sodio (0,20 g, 5,12 mmoles) y agua (2 ml) a una mezcla disolvente del compuesto 21 (0,6 g, 1,03 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (3 ml). La solución de reacción se agitó a 45 °C durante 10 h y se enfrió a temperatura ambiente. La mayor parte del disolvente se eliminó, y el residuo se ajustó a pH 2 con ácido clorhídrico 2 M. El disolvente se filtró y se extrajo con acetato de etilo. Se añadió diclorometano (30 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,45 g de un sólido de color blanco, con un rendimiento de 85 %. LC-MS (APCI): m/z = 572,11 (M+1)+.

Etapa 7 Síntesis del compuesto T-3.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 22 (0,10 g, 0,18 mmoles), el compuesto 16 (0,055 g, 0,18 mmoles), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 0,052 g, 0,27 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,044 mg, 0,36 mmoles) a diclorometano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Se añadió agua (10 ml) para sofocar la reacción. Se añadió diclorometano (15 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo/metanol (v/v) = 30:1) para proporcionar 50 mg de un sólido de color amarillo, con un rendimiento de 33 %. 1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 11,70 (s, 1H), 11,45 (s, 1H), 8,62 -8,51 (m, 2H), 8,00 (dd,J= 18,9, 5,6 Hz, 2H), 7,78 (d,J= 9,4 Hz, 1H), 7,54 - 7,45 (m, 3H), 7,34 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 7,26 (d,J= 8,6 Hz, 1H), 7,06 (dd,J= 17,2, 8,7 Hz, 3H), 6,67 (d,J= 7,2 Hz, 1H), 6,38 (dd,J= 3,2, 1,8 Hz, 1H), 6,20 (s, 1H), 3,84 (dd,J= 11,2, 3,2 Hz, 2H), 3,09 (s, 4H), 2,79 (s, 2H), 2,20 (d,J= 3,7 Hz, 5H), 1,95 (s, 2H), 1,61 (d,J= 12,3 Hz, 2H), 1,38 (t,J= 6,2 Hz, 2H), 1,23 (s, 2H), 0,92 (s, 6H).

Ejemplo 4 (para referencia) Preparación de 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il]-metild2}piperazin-1 -il-2,2,3,3,5,5,6,6-afe)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, que es el compuesto T-4, representado por la siguiente fórmula:

Para la síntesis se utilizan las siguientes rutas:

Etapa 1 Síntesis del compuesto 23.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 9 (1,0 g, 2,76 mmoles), N-terc-butoxicarbonil-piperazin-2,2,3,3,5,5,6,6-afe (0,64 g, 3,31 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA, 0,54 g, 4,13 mmoles) a N,N-dimetilformamida (DMF, 10 ml). La mezcla resultante se calentó a 80 °C y se hizo reaccionar durante 1 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (20 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (20 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 30:1) para proporcionar 0,8 g de un producto, con un rendimiento de 68 %.

Etapa 2 Síntesis del compuesto 24.

A 0 °C, se añadió lentamente una solución de HCl 4 M en acetato de etilo (6 ml) a una solución del compuesto 23 (0,8 g, 1,86 mmoles) en diclorometano (15 ml) y la reacción continuó durante 3 h después de calentarla a temperatura ambiente. Después de la filtración, la torta de filtración se disolvió en agua y se neutralizó con fosfato de potasio. Se añadió acetato de etilo (30 mlx2) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,7 g de un producto, con un rendimiento de 92 %. LC-MS (APCI): m/z = 329,41 (M+1)+.

Etapa 3 Síntesis del compuesto 25.

Bajo la protección de nitrógeno, se añadieron sucesivamente el compuesto 24 (0,5 g, 1,52 mmoles), el compuesto 1 (0,44 g, 1,52 mmoles) e hidrogenofosfato de dipotasio (0,53 g, 3,04 mmoles) a dimetilsulfóxido (DMSO, 15 ml). La solución de reacción se hizo reaccionar a 140 °C durante 12 h y se enfrió a temperatura ambiente. Después se añadió agua (30 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (40 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 3:1) para proporcionar 0,62 g de un aceite de color amarillo, con un rendimiento de 69 %. LC-MS (APCI): m/z = 596,39 (M+1)+.

Etapa 4 Síntesis del compuesto 26.

Se añadieron sucesivamente hidróxido de sodio (0,21 g, 5,04 mmoles) y agua (2 ml) a una mezcla disolvente del compuesto 25 (0,6 g, 1,01 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (3 ml). La solución de reacción se agitó a 45 °C durante 10 h y se enfrió a temperatura ambiente. La mayor parte del disolvente se eliminó, y el residuo se ajustó a pH 2 con ácido clorhídrico 2 M. El disolvente se filtró y se extrajo con acetato de etilo. Se añadió diclorometano (30 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,48 g de un sólido de color blanco, con un rendimiento de 82 %.

Etapa 5 Síntesis del compuesto T-4.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 26 (0,10 g, 0,18 mmoles), el compuesto 3 (0,055 g, 0,18 mmoles), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 0,052 g, 0,27 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,044 mg, 0,36 mmoles) a diclorometano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Se añadió agua (10 ml) para sofocar la reacción. Se añadió diclorometano (15 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo/metanol (v/v) = 30:1) para proporcionar 90 mg de un sólido de color amarillo, con un rendimiento de 59 %. LC-MS (APCI): m/z = 878,92 (M+1)<+>.<1>H RMN (400 MHz, DMSO-ate) 5 11,72 (s, 1H), 11,43 (s, 1H), 8,71-8,50 (m, 2H), 8,10 (dd,J= 15,6, 5,6 Hz, 2H), 7,76 (d,J =9,0 Hz, 1H), 7,60 (t,J =6,1 Hz, 3H), 7,34 (d,J =8,4 Hz, 2H), 7,16 (d,J =8,6 Hz, 1H), 7,04 (d,J =8,3 Hz, 3H), 6,51 (d,J =8,9 Hz, 2H), 3,84 (dd, 2H), 3,26 (dd,J =8,7 Hz, 2H), 3,10 (s, 2), 2,81 (s, 2H), 2,35 (d, 2H), 1,61 (d,J =11,5 Hz, 2H), 1,38 (t,J= 6,2 Hz, 2H), 1,21 (s, 2H), 0,94 (s, 6H).

Ejemplo 5 (para referencia) Preparación de 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il|metil}piperazin-1-il-2,2,3,3,5,5,6,6-d<8>)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, que es el compuesto T-5, representado por la siguiente fórmula:

Para la síntesis se utilizan las siguientes rutas:

Etapa 1 Síntesis del compuesto 27.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 18 (1,3 g, 3,60 mmoles), N-terc-butoxicarbonil-piperazin-2,2,3,3,5,5,6,6-d<8>(0,70 g, 3,60 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (DIPeA, 0,70 g, 5,40 mmoles) a N,N-dimetilformamida (DMF, 10 ml). La mezcla resultante se calentó a 80 °C y se hizo reaccionar durante 1 h. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se añadió agua (20 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (30 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 30:1) para proporcionar 1,2 g de un producto, con un rendimiento de 78 %.

Etapa 2 Síntesis del compuesto 28.

A 0 °C, se añadió lentamente una solución de HCl 4 M en acetato de etilo (6 ml) a una solución del compuesto 27 (1,2 g, 2,81 mmoles) en diclorometano (15 ml) y la reacción continuó durante 3 h después de calentarla a temperatura ambiente. Después de la filtración, la torta de filtración se disolvió en agua y se neutralizó con fosfato de potasio. Se añadió acetato de etilo (30 mlx2) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,8 g de un producto, con un rendimiento de 87 %. LC-MS (APCI): m/z = 327,26 (M+1)+.

Etapa 3 Síntesis del compuesto 29.

Bajo la protección de nitrógeno, se añadieron sucesivamente el compuesto 28 (0,8 g, 2,45 mmoles), el compuesto 1 (0,70 g, 2,45 mmoles) e hidrogenofosfato de dipotasio (0,64 g, 3,67 mmoles) a dimetilsulfóxido (DMSO, 15 ml). La solución de reacción se hizo reaccionar a 140 °C durante 12 h y se enfrió a temperatura ambiente. Después se añadió agua (30 ml) para sofocar la reacción. Se añadió acetato de etilo (50 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo (v/v) = 3:1) para proporcionar 1,21 g de un aceite de color amarillo, con un rendimiento de 83 %. LC-MS (APCI): m/z = 594,09 (M+1)+.

Etapa 4 Síntesis del compuesto 30.

Se añadieron hidróxido de sodio (0,34 g, 8,43 mmoles) y agua (2 ml) a una mezcla disolvente del compuesto 29 (1,0 g, 1,69 mmoles) en tetrahidrofurano (10 ml) y metanol (3 ml). La solución de reacción se agitó a 45 °C durante 10 h y se enfrió a temperatura ambiente. La mayor parte del disolvente se eliminó, y el residuo se ajustó a pH 2 con ácido clorhídrico 2 M. El disolvente se filtró y se extrajo con acetato de etilo. Se añadió diclorometano (30 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó para proporcionar 0,70 g de un sólido de color blanco, con un rendimiento de 71 %.

Etapa 5 Síntesis del compuesto T-5.

Se añadieron sucesivamente el compuesto 30 (0,10 g, 0,18 mmoles), el compuesto 3 (0,055 g, 0,18 mmoles), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 0,052 g, 0,27 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,044 mg, 0,36 mmoles) a diclorometano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Se añadió agua (10 ml) para sofocar la reacción. Se añadió diclorometano (15 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo/metanol (v/v) = 30:1) para proporcionar 55 mg de un sólido de color amarillo, con un rendimiento de 36 %. LC-MS (APCI): m/z = 187,85 (M+1)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 11,72 (s, 1H), 11,43 (s, 1H), 8,76-8,50 (m, 2H), 8,17 (dd,J= 5,6 Hz, 2H), 7, 76 (d,J= 9,0 Hz, 1H), 7,60 (t,J =6,1 Hz, 3H), 7,34 (d,J =8,4 Hz, 2H), 7,16 (d,J =8,6 Hz, 1H), 7,04 (d,J =8,3 Hz, 3H), 6,51 (d,J =8,9 Hz, 2H), 3,85 (dd, 2H), 3,57 (dd, 2H), 3,26 (dd,J =8,7 Hz, 2H), 3,10 (s, 2), 2,81 (s, 2H), 2,35 (d, 2H), 1,63 (d, 2H), 1,38-1,19 (m, 4H), 0,94 (s, 6H).

Ejemplo 6 (para referencia) Preparación de 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1-en-1-il]metil}piperazin-1-il-2,2,3,3,5,5,6,6-ds)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil-d2)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, que es el compuesto T-6, representado por la siguiente fórmula:

Para la síntesis se utilizan las siguientes rutas:

Se añadieron sucesivamente el compuesto 30 (0,10 g, 0,18 mmoles), el compuesto 16 (0,055 g, 0,18 mmoles), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 0,052 g, 0,27 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,044 mg, 0,36 mmoles) a diclorometano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Se añadió agua (10 ml) para sofocar la reacción. Se añadió diclorometano (15 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo/metanol (v/v) = 30:1) para proporcionar 60 mg de un sólido de color amarillo, con un rendimiento de 39 %. LC-MS (APCI): m/z = 878, 79 (M+1)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO) 511,73 (s, 1H), 11,40 (s, 1H), 8,76 8,60 (m, 2H), 8,17 (dd,J= 5,8 Hz, 2H), 7,82 (d,J= 9,0 Hz, 1H), 7,60 (t,J= 6,1 Hz, 3H), 7,34 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 7,16 (d,J= 8,6 Hz, 2H), 7,04 (d,J= 8,3 Hz, 2H), 6,51 (d,J =8,9 Hz, 2H), 3,87 (m, 2H), 3,57 (dd, 2H), 3,10 (s, 2), 2,81 (s, 2H), 2,35 (m, 2H), 1,63 (d, 2H), 1,38-1,16 (m, 4H), 0,96 (s, 6H).

Ejemplo 7 (para referencia) Preparación de 4-(4-{[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetilciclohex-1 -en-1 -il]metilcfe}piperazin-1-il-2,2,3,3,5,5,6,6-cfe)-N-({3-nitro-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil-d2)amino]fenil}sulfonil)-2-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida, que es el compuesto T-7, representado por la siguiente fórmula:

Para la síntesis se utilizan las siguientes rutas:

Se añadieron sucesivamente el compuesto 26 (0,10 g, 0,18 mmoles), el compuesto 16 (0,055 g, 0,18 mmoles), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 0,052 g, 0,27 mmoles) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 0,044 mg, 0,36 mmoles) a diclorometano (20 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. Se añadió agua (10 ml) para sofocar la reacción. Se añadió diclorometano (15 mlx3) para la extracción, y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El disolvente se eliminó, y el producto concentrado se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo/metanol (v/v) = 30:1) para proporcionar 40 mg de un sólido de color amarillo, con un rendimiento de 26 %. LC-MS (APCI): m/z = 880,52 (M+1)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO) 511,73 (s, 1H), 11,42 (s, 1H), 8,76 8,63 (m, 2H), 8,17 (dd,J= 5,8 Hz, 2H), 7,82 (d,J =9,0 Hz, 1H), 7,60 (t,J =6,1 Hz, 3H), 7,34 (d,J =8,4 Hz, 2H), 7,16 (d,J =8,6 Hz, 2H), 7,04 (d,J= 8,3 Hz, 2H), 3,87 (m, 2H), 3,57 (dd, 2H), 3,10 (s, 2), 2,81 (s, 2H), 2,35 (m, 4H), 1,63 (m, 2H), 1,38-1,16 (m, 2H), 0,95 (s, 6H).

Ensayo de actividad biológica

(1) Ensayo de actividad de la proteína Bcl-2

Proteínas: Bcl-2 (Cisbio 63ADK000CB01PEG); Bcl-xL (Cisbio 63ADK000CB04PEG);

Procedimientos experimentales: a) Dilución de los compuestos en DMSO: los compuestos que se iban a probar (soluciones de partida 10 mM) se diluyeron 500 veces con DMSO como la primera concentración, y las soluciones resultantes se diluyeron utilizando una dilución seriada 1:3, dando como resultado un total de 10 gradientes de concentración, y la 11a concentración fue control de DMSO. b) Se añadieron 100 nL/pocillo de los compuestos (que se prepararon en la etapa a) a una placa de reacción 384 (6008280, PerkinElmer) utilizando ECHO, y la placa se centrifugó a 1000 rpm durante 1 minuto para uso futuro. c) se añadieron respectivamente 5 pL/pocillo de solución de BCL-2 (2 nM) y BCL-XI (5 nM), a la placa de reacción 384 se le añadieron los compuestos descritos anteriormente, y la placa se centrifugó a 1000 rpm durante 1 minuto; a la que se añadieron 5 pl/pocillo de BAK (80 nM), y la placa se centrifugó a 1000 rpm durante 1 minuto y se incubó a 25 °C durante 15 minutos. Las concentraciones de los compuestos comenzaron desde 100 nM como concentración inicial, y se diluyeron con una dilución seriada 1:3 para obtener 10 más 0 puntos en total. La concentración final de DMSO fue del 0,5 % d) Se añadieron 10 pl/pocillo de solución Anti-Tag1-Eu3+ y Anti-Tag2-XL665 (cisbio) a la placa de reacción 384 descrita anteriormente, y la placa se centrifugó a 1000 rpm durante 1 minuto, y se incubó a 25 °C durante 180 minutos. e) La razón de 665/615 nm se leyó con un lector multifunción Envision. La constante de inhibición (Ki) de los compuestos de la presente divulgación se determina de esta manera, en donde la Ki de los compuestos se expresa como "<" (menos que) un valor específico, lo que significa que el valor de afinidad de unión es menor que el límite de detección del ensayo utilizado. Como referencia se utilizó Wang's Competitive Binding of Two Different Ligands to a Protein Molecule. FEBS Lett. 1995,360:111-4.

La constante de inhibición (Ki) es la constante de disociación de un complejo enzima-inhibidor o un complejo proteína/molécula pequeña, en donde la molécula pequeña inhibe la unión de una proteína a otra proteína o péptido. Por lo tanto, un valor de Ki alto indica una afinidad de unión baja, mientras que un valor de Ki bajo indica una afinidad de unión alta.

Los compuestos de la presente divulgación y Venetoclax se probaron mediante los procedimientos experimentales descritos anteriormente. En comparación con el Venetoclax no deuterado, los compuestos de la presente divulgación tienen mejor afinidad de unión a la proteína Bcl-2 antiapoptótica y tienen poca afinidad de unión a la proteína Bcl-xL, mostrando una alta selectividad por la proteína Bcl-2. Los resultados experimentales específicos se muestran en la Tabla 1 a continuación.

Tabla 1

(2) Prueba de viabilidad celular

Se utilizó la línea celular de leucemia linfocítica aguda (LLA) RS4;11 como línea celular humana primaria para evaluar la viabilidad celular de los selectores de Bcl-2in vitroy su eficacia envivo.

RS4;11 se cultivó en RPMI-1640 complementado con L-glutamina 2 mM, FBS al 10 %, piruvato de sodio 1 mM, HEPES 2 mM, penicilina/estreptomicina al 1 % y 4,5 g/l de glucosa, y se mantuvo a 37 °C en el entorno de dióxido de carbono al 5 %. Con el fin de probar el efecto de los compuestos sobre la viabilidad celularin vitro,las células se trataron en una placa de microtitulación de 96 pocillos con 50000 células por pocillo en presencia de suero humano al 10 % durante 48 horas en una sala húmeda con dióxido de carbono al 5 %. Los valores citotóxica de CE<50>se evaluaron utilizando Cell Tier Glo (Promega) según las recomendaciones del fabricante. El valor de CE<50>se determina por el porcentaje de células viables después del tratamiento con respecto a las células de control no tratadas.

Los resultados experimentales muestran que los compuestos de la presente divulgación son muy eficaces en la inhibición de células RS4;11, y los resultados experimentales específicos se muestran en la Tabla 2 a continuación.

Tabla 2

(3) Experimento de metabolismo microsomal hepático

Ensayo de microsomas: microsomas hepáticos de ratón: 0,5 mg/ml, Xenotech; coenzima (NADPH/NADH): 1 mM, Sigma Life Science; cloruro de magnesio: 5 mM, tampón fosfato 100 mM (pH 7,4).

Preparación de soluciones de partida: El polvo de los compuestos se pesó con precisión y se disolvió en DMSO a 5 mM.

Preparación de tampón fosfato (100 mM, pH 7,4): Se mezcló un dihidrogenofosfato de potasio 0,5 M preparado previamente (150 mL) con fosfato de potasio dibásico 0,5 M (700 mL). El pH de la mezcla se ajustó a 7,4 con solución de fosfato de potasio dibásico 0,5 M. La solución de fosfato de potasio dibásico se filtró. La mezcla se diluyó 5 veces con agua ultrapura antes de su uso, y se añadió cloruro de magnesio para obtener un tampón fosfato (100 mM) que contenía fosfato de potasio 100 mM, cloruro de magnesio 3,3 mM, pH 7,4.

Se preparó una solución del sistema de regeneración de NADPH (que contenía NADP 6,5 mM, G-6-P 16,5 mM, 3 U/ml de G-6-PD, cloruro de magnesio 3,3 mM) y se colocó en hielo húmedo antes de su uso.

Preparación de la solución de parada: una solución de acetonitrilo que contenía 50 ng/ml de hidrocloruro de propanolol y 200 ng/ml de tolbutamida (patrón interno). Se tomaron 25057,5 pL de tampón fosfato (pH 7,4) en un tubo de centrífuga de 50 mL, al que se añadieron 812,5 pL de microsomas hepáticos de ratón y se mezclaron para obtener una dilución de microsomas hepáticos con una concentración de proteína de 0,625 mg/mL.

Incubación de las muestras: Las soluciones de partida de los respectivos compuestos se diluyeron respectivamente a 0,25 mM con una solución acuosa que contenía acetonitrilo al 70 %, y se utilizaron como solución de trabajo, listas para su uso. Se añadieron 398 pL de la dilución de microsomas hepáticos humanos o microsomas hepáticos de rata a placas de incubación de 96 pocillos (N=2), respectivamente, y se añadieron y mezclaron 2 pL de solución de trabajo 0,25 mM.

Ensayo de estabilidad metabólica: se añadieron 300 pL de solución de parada enfriada previamente a cada pocillo de placas de 96 pocillos profundos y se colocaron sobre hielo como placas de parada. Las placas de incubación de 96 pocillos y el sistema de regeneración de NADPH se colocaron en una caja de baño de agua a 37 °C, se agitaron a 100 rpm y se preincubaron durante 5 minutos. Se sacaron 80 pL de solución de incubación de cada pocillo de las placas de incubación y se añadieron a las placas de parada, se mezclaron y se rellenaron con 20 pL de solución del sistema de regeneración de NADPH como muestra a 0 min. Se añadieron 80 pL de solución del sistema de regeneración de NADPH a cada pocillo de las placas de incubación para iniciar la reacción y comenzar el recuento. Los compuestos correspondientes tenían una concentración de reacción de 1 pM y la concentración de proteína fue de 0,5 mg/ml. Por separado, se tomaron 100 pL de las soluciones de reacción a 10, 30 y 90 min de reacción, respectivamente, se añadieron a las placas de detención y se sometieron a agitación vorticial durante 3 minutos para terminar la reacción. Las placas de parada se centrifugaron a 5000 xg a 4 °C durante 10 minutos. Se añadieron 100 pL del sobrenadante a una placa de 96 pocillos a la que se añadieron previamente 100 pL de agua destilada, se mezclaron y se analizaron mediante CL-EM/EM.

Análisis de datos: Las áreas de los picos de los compuestos correspondientes y el patrón interno se detectaron mediante el sistema LC-MS/MS, y se calculó la razón del área de los picos de los compuestos respecto al patrón interno. La pendiente se midió representando el logaritmo natural del porcentaje de compuesto restante frente al tiempo, y t<1/2>y CL<int>se calcularon según la ecuación siguiente, donde V/M es igual a 1/concentración de proteína.

0.693

i\V =-- P-o-rE--fie--n-ta

La estabilidad metabólica de los compuestos en microsomas hepáticos humanos y de rata se evaluó al probar y comparar simultáneamente los compuestos divulgados en el presente documento y el compuesto no deuterado. La semivida y la eliminación intrínseca hepática como indicadores de estabilidad metabólica se muestran en la Tabla 3. En la Tabla 3, se utilizó el compuesto no deuterado Venetoclax como muestra de control. Como se muestra en la Tabla 3, en comparación con el compuesto no deuterado Venetoclax, los compuestos de la presente divulgación pueden mejorar significativamente la estabilidad metabólica y, por lo tanto, son más adecuados para utilizarse como inhibidores del virus de la hepatitis C.

Tabla 3 Comparación de la estabilidad metabólica entre los Ejemplos 1 a 7 (que son, los compuestos T-1 a T-7) y el control de Venetoclax

(4) Experimento farmacocinético en ratas

Objetivo experimental: Investigar el comportamiento farmacocinético de los compuestos de la presente divulgación después de que a las ratas se les administren los compuestos de prueba.

Animales experimentales:

Especie y cepa: grado de rata SD: grado SPF

Género y cantidad: macho, 6

Intervalo de peso: de 180 a 220 g (el intervalo de peso real es de 187 a 197 g)

Fuente: Shanghai Sippr-BK Laboratory Animal Co. Ltd.

Certificado de Calificación de Laboratorio y Animal: SCXK (Shanghai) 2013-0016

Procedimientos experimentales: Antes de recoger las muestras de sangre, se añadieron previamente 20 pL de solución de fluoruro de sodio 2 M (inhibidor de esterasa) a un tubo anticoagulante de EDTA-K2, se secó en un horno a 80 °C y se colocó en un refrigerador a 4 °C.

Se dividieron aleatoriamente ratas (macho, que pesaban de 187 a 197 g) en 2 grupos, y se mantuvieron en ayunas durante la noche por la tarde antes del experimento, pero se les permitió beber agua libremente. El alimento fue proporcionado 4 horas después de la administración. Al grupo A se le proporcionó Venetoclaxr (3 mg/kg), y al grupo B se le proporcionaron los compuestos de los ejemplos 1 a 7 (3 mg/kg). Se tomaron aproximadamente 100 200 pl de sangre de la vena orbital de las ratas a los 15 min, 30 min, 1, 2, 3, 5, 8 y 10 h después de la administración, se colocaron en un tubo Eppendorf de 0,5 mL con anticoagulante EDTA-K2 y se mezclaron inmediatamente. Después de la anticoagulación, el tubo se invirtió suavemente 5-6 veces lo más rápido posible. Después de recoger la sangre, se colocó en un recipiente con hielo, y después, en el plazo de 30 min, la muestra de sangre se centrifugó durante 10 min a 4000 rpm y 4 °C para separar el plasma. Inmediatamente después de la recogida de todo el plasma, se almacenó a -20 °C. La concentración del fármaco en plasma en cada punto temporal se determinó después de la recogida de la muestra en todos los puntos temporales.

Basándose en los datos de la concentración promedio del fármaco en plasma frente al tiempo después de la administración obtenidos como se describió anteriormente, se calcularon los parámetros relacionados con la farmacocinética de ratas SD macho después de la administración i.g. de Venetoclax y compuestos de ejemplo representativos (3 mg/kg) utilizando el soporte lógico Winnonlin según la teoría de momentos estadísticos no compartimentados.

Los experimentos mostraron que, los compuestos de la presente divulgación tienen mejores propiedades farmacocinéticas en comparación con el compuesto no deuterado. Los resultados experimentales específicos son los siguientes:

Claims (3)

1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto que tiene la siguiente fórmula:

   o una forma cristalina, sal, hidrato o disolvente farmacéuticamente aceptables, o estereoisómero de los mismos.
2. 2. Una composición farmacéutica, que comprende un portador y compuesto farmacéuticamente aceptables según la reivindicación 1, o una forma cristalina, sal, hidrato o disolvente farmacéuticamente aceptables, o estereoisómero de los mismos.
3. 3. Un compuesto según la reivindicación 1, o una forma cristalina, sal, hidrato o disolvente farmacéuticamente aceptables, o estereoisómero del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad, en donde la enfermedad se selecciona entre cáncer de vejiga, cáncer cerebral, cáncer de mama, cáncer de médula ósea, cáncer de cuello uterino, leucemia linfocítica crónica, cáncer colorrectal, cáncer esofágico, carcinoma hepatocelular, leucemia linfocítica primordial, linfoma folicular, linfoma de origen de células T o células B, melanoma, leucemia granulocítica, mieloma, tumor de la cavidad oral, cáncer ovárico, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de próstata, carcinoma de células pequeñas o cáncer de bazo.