ES2967344T3 - Derivados de 2-aminoquinazolina como inhibidores de cinasa p70s6 - Google Patents

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Abstract

La invención proporciona compuestos que inhiben o modulan la actividad de la quinasa p70S6, siendo los compuestos de fórmula (1): o una sal, tautómero o N-óxido del mismo; en donde: uno de Y y Z es R3 y el otro es Ar2; Q1 es un grupo alquileno C1-8 opcionalmente sustituido; y en el que un átomo de carbono del grupo alquileno C1-8 puede opcionalmente reemplazarse por un grupo ciclopropano-1,1-diilo o ciclobutano-1,1-diilo siempre que el número total de átomos de carbono en un grupo alquileno que contiene dicho reemplazo no excede 8; Q<2> es un enlace o un grupo alquileno C1-8 opcionalmente sustituido; R<1> se selecciona entre hidrógeno, NR<x>R<y> y un grupo Cy<1>;R<x> y cada uno de Ry se selecciona entre hidrógeno, hidrocarbilo C1-4 o hidroxi-hidrocarbilo C1-4; o NR<x>R<y> forma un anillo heterocíclico de 4 a 7 miembros opcionalmente sustituido; Cy<1> es un carbocíclico o heterocíclico monocíclico no aromático de 3 a 7 miembros unido a C opcionalmente sustituido; R<2> y R<4 > cada uno se selecciona entre hidrógeno, flúor, cloro, alquilo C1-2 opcionalmente sustituido y alcoxi C1-2 opcionalmente sustituido; R3 se selecciona entre hidrógeno, flúor, cloro, alquilo C1-2 opcionalmente sustituido y alquilo C1-2 opcionalmente sustituido; 2 alcoxi; Ar1 es un anillo arilo o heteroarilo monocíclico de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido; y Ar2 es un grupo heteroarilo bicíclico de 8 a 11 miembros opcionalmente sustituido. Los compuestos son útiles en medicina, por ejemplo en el tratamiento de una enfermedad o afección seleccionada entre cánceres, enfermedades del desarrollo neurológico y enfermedades neurodegenerativas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCION
Derivados de 2-aminoquinazolina como inhibidores de cinasa p70s6
Campo de la invención
Esta invención se refiere a compuestos que inhiben o modulan la actividad de la cinasa p70S6, composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos y los usos terapéuticos de los compuestos.
Antecedentes de la invención
La enzima, cinasa p70S6 (también conocida como p70S6K, p70S6K1, pS6K, S6K, S6K1) es una serina-treonina cinasa y un miembro de la familia AGC. Es un efector corriente abajo de la trayectoria de señalización de la cinasa fosatidilinositol 3 (PI3K)/AKT/objetivo mamífero de rapamicina (mTOR, por sus siglas en inglés) y la p70S6K sufre fosforilación y activación en respuesta a factores de crecimiento tales como IGF-I, EGF, TGF-[alfa] y HGF.
La activación de p70S6K a su vez fosforila un número de proteínas involucradas en la traducción de la proteína que incluyen la proteína Ribosomal S6 (RPS6), eIF4B y eEF2K. El efecto neto de esto es promover la traducción que conduce a un incremento en la síntesis de proteína en una célula. Niveles altos de síntesis de proteína son requeridos para la proliferación celular. También se ha mostrado que la p70S6K tiene un papel necesario en el ciclo mitótico de una célula (Lane et al, Nature, 1993, 363(6425):170-2).
La cinasa p70S6K se ha mostrado por ser constitutivamente activada en las células de tumores humanos, conduciendo a la proliferación de células tumorales. La inhibición de la trayectoria de mTOR/p70S6K se ha mostrado por conducir a una reducción en la proliferación de células tumorales y un incremento en la apoptosis de células tumorales (Pene et al (2002) Oncogene 21, 6587 y Le et al (2003) Oncogene 22, 484). La inhibición de la actividad de p70S6K podría, por lo tanto, presentar un procedimiento atractivo para el tratamiento de cáncer.
La trayectoria de mTOR/p70S6K ha sido mostrada por ser activada en carcinoma renal y es inhibida por CCI-779 (Robb, V. A.; Karbowniczek, M.; Klein-Szanto, A. J.; Henske, E. P.J Urol2007,177,346-52). Además, pacientes con glioblastoma multiforme cuyos tumores expresan niveles altos de p70S6K fosforilada se han encontrado por beneficiarse del tratamiento con CCI-779 (Galaniset al. J. Clin. Oncol.2005,23,5294-304).
En adición, una asociación linear significante entre el tiempo al progreso de la enfermedad e inhibición de la actividad de p70S6K en células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) después de la administración del inhibidor CCI-779 de mTOR ha sido reportada para pacientes con Carcinoma de Células Renales por Peralba et al [(2003) Clinical Cancer Research 9, 2887]. Esto indica que la actividad de p70S6K es un conductor de enfermedad en este entorno y que la actividad de p70S6K puede ser potencialmente usada como un biomarcador clínico.
El gen RPS6KB1 que codifica para p70S6K, está localizado en la región cromosomal 17q23 y esta región es amplificada en Cáncer de Mama (Cancer Res. (1999) 59: 1408-11 Localization of pS6K to Chromosomal Region 17q23 and Determinación de Its Amplification in Breast Cancer). Esto conduce a sobre-expresión de la proteína p70S6K y una asociación estadísticamente significante entre la amplificación y el diagnóstico pobre se ha observado en pacientes con cáncer de mama (Detecting activation of ribosomal protein S6 kinase by complementary DNA and tissue microarray analysis. J. Natl. Cancer Inst. 2000; 92:1252-9).
Además, Bellettiet alpublicó que la S6K1 media la supervivencia y recurrencia de Cáncer de Mama después de cirugía (Mol Oncol. 2014 Mayo; 8(3):766-80).
La P70S6K tiene un papel en la migración e invasión de cáncer de ovario (cinasa p70 S6 en el control de las dinámicas de citoesqueleto de actina y migración dirigida de células de cáncer de ovario, Oncogene (2011), 1-13). En adición, se ha revelado que la p70S6K tiene una función en la promoción de la invasión, migración y metástasis de células de Cáncer de Mama Triple-Negativas altamente agresivas (Targeting p70S6K Prevented Lung Metastasis in a Breast Cancer Xenograft Model, Akaret al,Molecular Cancer Therapeutics (2010), 9 (5), 1180 y Hunget al,S6K1 promotes invasiveness of breast cancer cells in a model of metastasis of triple-negative breast cancer, Am. J. Transl, Res. 2014 Julio 18;6(4):361-76).
En adición, la Linfangioleiomiomatosis (LAM, por sus siglas en inglés) es una enfermedad tipificada por hiper-activación del eje PI3K/Akt/mTOR/p70S6K debido a inactivación de mutación del complejo represor, Complejo de Esclerosis Tuberosa (TSC, por sus siglas en inglés). Las células de LAM son también metastásicas, dando origen a metástasis en el pulmón.
La LAM es una enfermedad pulmonar destructiva rara, casi exclusivamente de mujeres, y está asociada con la metástasis de células tuberinas-nulas (Taveira-DaSilva et al. (2006). Cancer Control. 2006; 13:276-285). Las lesiones metastásicas se desarrollan en órganos distantes que incluyen pulmones, riñón y nodos linfáticos, representando una carga de la enfermedad debilitante y severa.
La LAM ocurre ya sea esporádicamente o como una manifestación del Complejo de Esclerosis Tuberosa (TSC), un trastorno hereditario autosomal dominante (Revisión experta en http://www.orpha.net). Los trastornos de LAM y TSC son caracterizados por mutaciones nulificantes en supresores de tumor TSC1 o TSC2 conduciendo a hiper activación de mTOR y de S6K1. Esto a su vez acciona el crecimiento celular y proliferación de células de LAM (Holz et al. (2014), Cell Cycle 2014; 13:371 - 382). La S6K1 también se conoce por promover la metástasis en otros cánceres: mama (Akar et al. (2010), Mol Cancer Ther; 9(5)) y ovario (Wong et al. (2011), Oncogene (2011) 30, 2420-2432). Debido a la dependencia de células LAM en S6K1, y de la función probable de S6K1 en el proceso metastásico, se anticipa que un inhibidor de S6K1 tendrá propiedades modificadores de la enfermedad para LAM.
El LAM esporádico tiene una prevalencia de aproximadamente 1 en 125.000 nacimientos mientras la LAM Pulmonar, que se origina de TSC, tiene una prevalencia de aproximadamente 1 en 15.000 nacimientos (figuras de base de datos de enfermedades raras en la internet, http://www.orpha.net). No existen terapias aprobadas para LAM y por lo tanto la LAM es actualmente clasificada como una enfermedad huérfana.
Dado que la p70S6K promueve la traducción, se sabe que la p70S6K tiene una función crucial en la patología de las enfermedades que dependen de la síntesis de proteína excesiva (por ejemplo, Fragile X Syndrome, Genetic Removal of p70 S6 Kinase 1 Corrects Molecular, Synaptic, y Behavioral Phenotypes in Fragile X Syndrome Mice. Klannet al,Neuron, Volume 76, Publicación 2, p325-337, 18 Octubre 2012). Además, la p70S6K tiene un papel en la patología de cánceres que involucran la síntesis de proteínas oncogénicas tales como c-Myc, por ejemplo, cáncer pancreático (The mTORC1/S6K1 Pathway Regulates Glutamine Metabolism through the eIF4B Dependent Control of c-Myc Translation, Blenis et al, Current Biology, Volume 24, Publicación 19, p2274-2280, 6 Octubre 2014). Para tratamiento de estas condiciones podría ser ventajoso usar un inhibidor de p70S6K oralmente disponible para corregir la excesiva síntesis de proteína.
La P70S6K ha sido implicada en la patología de un número de cánceres del cerebro. Tales condiciones incluyen, pero no se limitan a:
• Metástasis cerebral que se origina de cánceres en otras partes del cuerpo, por ejemplo, metástasis cerebral que se origina de un cáncer de mama tal como Cáncer de Mama Triple-Negativo (Distant metastasis in triple-negative breast cancer. Neoplasma 2013; 60: 290-294)
• Metástasis cerebral a partir de cáncer de mama metastásico (Metástasis cerebral o del sistema nervioso central que ocurre tradicionalmente en 10-16% del pacientes con cáncer de mama metastásico y están asociados con un pronóstico catastrófico - véaseBreast Dis.2006-2007; 26:139-47.)
• Gliomas y glioblastomas (S6K1 Plays a Key Role in Glial Transformation, Cancer Research (2008), 68(16), 6516 6523)
Además, un inhibidor de p70S6K puede ser particularmente útil para tratar los siguientes cánceres los cuales son dependientes de la señalización de p70S6K:
Cáncer de vejiga
Cáncer de mama
Cáncer colorrectal (CRC)
Linfomas de células B grandes difusas (DLBCL)
Cáncer de vesícula biliar
Gliomas y glioblastomas
Cánceres de cabeza y cuello
Carcinoma hepatocelular
Neuroblastoma Olfatorio Humano
Leucemias
Linfomas
Carcinoma Nasofaríngeo
Cáncer neuroendocrino
Cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC)
Cáncer de pulmón de células pequeñas
Cáncer de ovario
Cáncer pancreático
Feocromocitoma
Carcinoma de células renales (RCC)
Carcinoma de células escamosas
Metástasis, por ejemplo, metástasis ósea y metástasis pulmonar
La P70S6K también tiene una función crucial en la patología de un número de enfermedades del neurodesarrollo (muchas referencias en The Autistic Neuron: Troubled Translation?. Bear et al, Cell 135, Octubre 31, 2008). En particular, estas enfermedades son causadas por la excesiva síntesis de proteína que es accionada por P70S6K. Tales condiciones incluyen, pero no se limitan a:
Síndrome Frágil X, una enfermedad rara del neuro-desarrollo causada por niveles excesivos de la actividad de p70S6K
Autismo y trastornos del espectro autista
Síndrome de ataxia/temblor asociado a Frágil X (FXTAS)
Síndrome de Angleman
Esclerosis tuberosa
Síndrome de hamartoma de PTEN
Síndrome de duplicación de MECP2
Neurofibromatosis
Enfermedad de Alzheimer (referida a (1) Oddoet al,Reducing Ribosomal Protein S6 Kinase 1 Expression Improves Spatial Memory and Synaptic Plasticity in a Mouse Model of Alzheimer's Disease, The Journal of Neuroscience, Octubre 14, 2015, 35(41):14042-14056 y (2) Genetic reduction of mammalian target of rapamycin ameliorates Alzheimer's disease-like cognitive and pathological deficits by restoring hippocampal gene expression signature, Journal of Neuroscience (2014), 34(23), 7988-7998)
• Síndrome de Down (mTOR Hyperactivation in Down Syndrome Hippocampus Appears Early During Development, Journal of Neuropathology & Experimental Neurology (2014), 73(7), 671-683)
Síndrome de hamartoma de PTEN
El síndrome de hamartoma de PTEN (PHTS) abarca cuatro síndromes mayores clínicamente distintos asociados con las mutaciones de línea germinal en el PTEN supresor del tumor. Estos trastornos alélicos, síndrome de Cowden, síndrome de Bannayan-Riley-Ruvalcaba, síndrome de Proteus, y síndrome similar a Proteus, están asociados con la proliferación celular no regulada que conduce a la formación de hamartomas (tumores benigno y maligno de la tiroides, mama, y endometrio) (Genetics in Medicine (2009) 11, 687-694). La ausencia de PTEN conduce a pérdida de regulación descendente de Akt fosforilado el cual, a su vez, permite la supervivencia, crecimiento y proliferación de las células no comprobada, en cuestión. Como la S6K1 es un efector clave de Akt, un inhibidor de S6K1 puede tener utilidad para controlar el crecimiento del cáncer. La prevalencia de PHTS es actualmente desconocida.
Neurofibromatosis tipo 1
La neurofibromatosis tipo 1 es una condición caracterizada por cambios en el color de la piel (pigmentación) y el crecimiento de tumores a lo largo de los nervios en la piel, cerebro, y otras partes del cuerpo. Los signos y síntomas de esta condición varían ampliamente entre las personas afectadas. La mayoría de los adultos con neurofibromatosis tipo 1 desarrollan neurofibromas, los cuales son tumores no cancerosos (benignos) que están usualmente localizados en o solo bajo la piel. Estos tumores pueden también ocurrir en nervios cerca de la médula espinal o a lo largo de nervios en otra parte en el cuerpo. Algunas personas con neurofibromatosis tipo 1 desarrollan tumores cancerosos que crecen a lo largo de nervios. Estos tumores, los cuales se desarrollan usualmente en la adolescencia o edad adulta, son llamados tumores malignos de la vaina del nervio periférico. Las personas con neurofibromatosis tipo 1 también tienen un riesgo incrementado de desarrollar otros cánceres, que incluyen tumores cerebrales y cáncer del tejido que forma la sangre (leucemia).
La neurofibromatosis tipo 1 ocurre en 1 de 3.000 hasta 4.000 personas alrededor del mundo y actualmente la cirugía es la principal opción de tratamiento; está clasificada como una enfermedad huérfana ya que no existen terapias dirigidas (http://ghr.nlm.nih.gov/condition/neurofibromatosis-type-1).
Las mutaciones en el gen NF1 causan neurofibromatosis tipo 1. El gen NF1 proporciona instrucciones para elaborar la proteína neurofibromina. Esta proteína es producida en muchas células, que incluyen células del nervio y células especializadas que rodean los nervios (oligodendrocitos y células Schwann). La neurofibromina actúa como un supresor del tumor. Las mutaciones en el gen NF1 conducen a la producción de una versión no funcional de neurofibromina que no puede regular el crecimiento y división celular. Como un resultado, los tumores tales como neurofibromas pueden formarse a lo largo de nervios a través del cuerpo. Un inhibidor de S6K1 puede controlar el crecimiento de las células que expresan el gen NF1 mutado amortiguando la producción de proteína neurofibromina y otras proteínas esenciales para crecimiento del tumor.
Función de P70S6 en enfermedades neurológicas
La P70S6K también tiene una función crucial en la patología de un número de enfermedades del neurodesarrollo (muchas referenciadas en The Autistic Neuron: Troubled Translation?. Bear et al, Cell 135, Octubre 31, 2008). En particular, estas enfermedades son causadas por la excesiva síntesis de proteína que es accionada por P70S6K.
Es bien sabido que el control de traducción preciso (síntesis de proteína) es absolutamente requerido para procesos neurológicos del cerebro tales como plasticidad sináptica de larga duración y la formación de memoria a largo plazo. Sin embargo, las alteraciones en el control traduccional son una característica patofisiológicas comunes de trastornos neurológicos humanos, que incluyen trastornos del desarrollo, trastornos neuropsiquiátricos y enfermedades neurodegenerativas. Además, se sabe que los mecanismos de control traduccional son susceptibles a modificación por moléculas pequeñas que penetran el cerebro (Klann and Santini, Dysregulated mTORC1-dependent translational control: from brain disorders to psychoactive drugs, Front. Behav. Neurosci., 08 Noviembre 2011, doi: 10.3389/fnbeh.2011.00076).
La S6K1 es bien conocida como un regulador maestro de la biosíntesis de la proteína mediante su papel en el inicio de la traducción, así como también en la fosforilación y activación de varios sustratos que conducen la producción de proteína (eIF4B, PDCD4, SKAR, eEF2K, RPS6 - para revisión referirse a Ma and Blenis, Nature Reviews Molecular Cell Biology 10, 307-318 (Mayo 2009), doi:10.1038/nrm2672).
Los siguientes trastornos son tipificados por aberraciones fundamentales en la regulación de la traducción de la proteína lo cual está ligado a las patologías observadas. Un inhibidor de S6K1, el cual actúa reduciendo la traducción de la proteína excesiva puede, por lo tanto, tener utilidad como una terapia en tales trastornos.
Es posible clasificar ciertos trastornos en sub-grupos: (1) Trastornos del neurodesarrollo (2) Enfermedades Neurodegenerativas. Dentro de cada sub-clase los trastornos están ligados por temas comunes:
1. Enfermedades del Neurodesarrollo
Los trastornos del neurodesarrollo son definidos como enfermedades causadas por el desarrollo anormal del cerebro durante las primeras dos décadas de vida. También es posible definir un subgrupo de estos trastornos que están caracterizados por mutaciones de gen único. Una anormalidad molecular común en varios de estos trastornos es la pérdida de la función de mutaciones y/o supresión de genes que codifican proteínas que normalmente reprimen la trayectoria de señalización de mTORC1. Estos trastornos son listados abajo.
Síndrome Frágil X
El Síndrome Frágil X (FXS) es una condición genética que da origen a un intervalo de problemas del desarrollo que incluyen incapacidades de aprendizaje y deterioro cognitivos. Usualmente, los hombres son más severamente afectados por este trastorno que las mujeres, debido al hecho de que la condición es heredada mediante el cromosoma X. Los individuos afectados usualmente tienen desarrollo retardado del habla y lenguaje por la edad de 2 años. La mayoría de los hombres con FXS tienen discapacidad intelectual leve a moderada, mientras aproximadamente un tercio de las mujeres afectadas son intelectualmente incapacitadas. Los niños con FX pueden tener también ansiedad y conducta hiperactiva tal como acciones inquietas o impulsivas. Pueden tener trastorno de déficit de atención (ADD), el cual incluye una capacidad alterada para mantener la atención y dificultad para enfocarse en tareas específicas. Aproximadamente un tercio de los individuos con FXS tienen características de trastornos del espectro autista que afectan la comunicación e interacción social. Las convulsiones ocurren en aproximadamente 15 porciento de hombres y aproximadamente 5 porciento de mujeres con FXS. La mayoría de los hombres y aproximadamente la mitad de mujeres con FXS tienen factores físicos característicos que llegan a ser más aparentes con la edad. Estas características incluyen una cara larga y estrecha, orejas largas, una mandíbula y frente prominente, dedos inusualmente flexibles, pie plano, y en los hombres, testículos alargados (macro-orquidismo) después de la pubertad. El FXS ocurre en aproximadamente 1 en 4.000 hombres y 1 en 8.000 mujeres.
Las mutaciones en el gen Fmr1 causan FXS. El gen Fmr1 proporciona instrucciones para elaborar una proteína llamada proteína de retardo mental 1 de frágil X, o FMRP. Esta proteína ayuda a regular la producción de otras proteínas y desempeña un papel en el desarrollo de sinapsis, las cuales son conexiones especializadas entre las células nerviosas. Las sinapsis son críticas para retardar los impulsos nerviosos.
Casi todos los casos de FXS son causados por mutación en un segmento de ADN, conocido como la repetición del triplete CGG, en el gen Fmr1. Normalmente, este segmento de AND es repetido en el intervalo entre 5 y 44 veces (más comúnmente ya sea 29 o 30 veces). En personas con FXS, sin embargo, el segmento de CGG es repetido más de 200 veces. El segmento CGG anormalmente expandido apaga (silencia) el gen Fmr1, lo cual previene al gen de producir FMRP.
El FMRP es un represor de la traducción de la proteína. En el caso de pacientes con FXS, quienes ya sea, experimentan una pérdida o acortamiento de FMRP, no existe una representación de la traducción, conduciendo a la producción excesiva de un arreglo de proteínas normalmente controladas por FMRP. Un número de estas proteínas son expresadas en las neuronas y plasticidad sináptica de control (formación de memoria, aprendizaje, capacidad para almacenar la información). La carencia de control de producción de estas proteínas conduce al estado neuropatológico observado en pacientes con FXS. Klann et al, publicó que la S6K1 tiene una función central en la traducción excesiva de estas proteínas y que desactivación genética de S6K1 resulta en la corrección de fenotipos en el modelo de ratón de FXS (Genetic Removal of p70 S6 Kinase 1 Corrects Molecular, Synaptic, and Behavioral Phenotypes in Fragile X Syndrome Mice. Neuron 76, 325-337, 2012). Se ha determinado que los inhibidores de S6K1 descritos en la presente también tienen la capacidad para amortiguar la síntesis de proteína en las neuronas, conduciendo a la corrección de fenotipos aberrantes en un modelo de ratón de FXS.
Además, Tassone et al (Genes, Brain and Behavior (2012), doi: 10.1111/j.1601-183X.2012.00768.x) publicó que los linfocitos aislados de la sangre de pacientes con FXS humano presentan niveles superiores de p70S6K fosforilados (activados) y también niveles superiores de RPS6 fosforilados, el sustrato directo de S6K1. Esto confirma que la p70S6K es más altamente activada en pacientes con FXS humanos y soporta la noción de inhibición de la actividad de p70S6K con el fin de corregir la enfermedad. En adición, esto representa un biomarcador clínico posible para así evaluar el efecto de farmacodinámicas del inhibidor de p70S6K en la clínica.
Síndrome de ataxia/temblor asociado con Frágil X (FXTAS)
El síndrome de ataxia/temblor asociado con Frágil X (FXTAS) es un trastorno neurodegenerativo raro caracterizado por ataxia de marcha y temblor de intensión progresiva de comienzo en adulto. Es un trastorno genético ligado a X y como tal, el trastorno afecta principalmente a hombres (base de datos de la enfermedad rara en Orphanet, http://www.orpha.net/consor/cgi-bin/index.php?lng=EN).
La prevalencia es estimada a 1-9 en 100.000 individuos, La edad de comienzo de temblor y/o ataxia en hombres es aproximadamente 60 años. La presentación clínica es variable con manifestaciones dominantes que incluyen: temblor de intención, ataxia de marcha cerebelar progresiva, disfunción ejecutiva frontal, decline cognitivo, neuropatía periférica, y disautonomía. Otros signos incluyen Parkinsonismo leve y manifestaciones psiquiátricas (depresión, ansiedad y agitación) con progreso posible a demencia). Las mujeres portadoras en general tienen menos manifestaciones severas que los hombres, pero también tienen un riesgo incrementado de insuficiencia primaria en ovario, dolor muscular crónico, e hipotiroidismo. La FXTAS es causada por una expansión de repetición de trinucleótido CGG (55-200 repeticiones) en el intervalo de permutación del gen Fmr1. No existe tratamiento específico para el FXTAS que dirige el mecanismo patológico subyacente; el FXTAS es por lo tanto clasificado como una enfermedad huérfana. La expansión de repetición de trinucleótido CGG a menudo conduce a niveles reducidos de proteína FMRP, un represor de la traducción de la proteína. Esto conduce a excesiva traducción de la proteína lo cual puede ser contra-accionado por el uso de un inhibidor de S6K1.
Autismo y trastornos del espectro autista
El trastorno del espectro autista (ASD) y autismo son términos para un grupo de trastornos complejos del desarrollo cerebral. Los trastornos son caracterizados por dificultades en la interacción social, comunicación verbal y no verbal y conductas repetitivas. Una publicación en 2013 titulada Diagnóstico y Manual de Estadística de Trastornos Mentales (DSM-5) reúne en conjunto todos los trastornos del autismo en un diagnóstico general de ASD. Previamente, se reconocieron como subtipos distintos, que incluyen trastornos autistas, trastorno desintegrativo de la infancia, trastorno del desarrollo penetrante de otro modo no especificado (PDD-NOS) y síndrome de Asperger. Los Centros Estadounidenses para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC) identifican aproximadamente 1 en 68 niños americanos como en el espectro autista. Los estudios también muestran que el autismo es cuatro a cinco veces más comunes entre los niños que las niñas. En un estimado de 1 de 42 niños y 1 en 189 niñas son diagnosticados con autismo en los Estados Unidos. En total, el ASD afecta más de 3 millones de individuos en los Estados Unidos y decenas de millones alrededor del mundo (sitio de red que habla del autismo, http://www.autismspeaks.org/). Sin embargo, las estadísticas del gobierno acerca del autismo sugieren que los índices de prevalencia están en incremento. El síndrome Frágil X (FXS) es la causa más común heredada de discapacidades intelectuales y la causa más común de autismo alrededor del mundo (Penagarikano et al (2007). The pathophysiology of Fragile X Syndrome. Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 8, 109-129). Este enlace causativo entre FXS y autismo indica que el inhibidor de S6K1 que presenta eficacia en tratamiento de FXS también puede ser útil en el tratamiento del autismo y ASDs.
Síndrome de Angelman
El síndrome de Angelman (AS) es un trastorno neurogenético que es usualmente diagnosticado en infantes y está caracterizado por retardo del desarrollo, severa discapacidad intelectual, habla ausente, conducta exuberante con porte feliz, deterioro motor, y epilepsia. El AS es causado por deficiente expresión del gen UBE3A que puede ser causado por varias anormalidades en el cromosoma 15 (Dan, B., Angelman syndrome: Current understanding and research prospects. Epilepsia, 2009. 50(11): p. 2331-2339). Aunque no precisamente conocido, la prevalencia de AS entre niños y adultos jóvenes es entre 1/10.000 y 1/20.000 definiendo el AS como una enfermedad rara. Las mutaciones en la ligasa ubiquitina UBE3A de E3 han sido identificadas en AS, sugiriendo que el cambio de la proteína dependiente de ubiquitina puede ser alterado por este trastorno, posiblemente conduciendo a niveles elevados de proteína sináptica (Jiang and Beaudet, 2004). Además, se ha descrito que la inhibición de S6K1 puede mejorar la plasticidad sináptica hipocampal y aprendizaje en un modelo de ratón del síndrome de Angelman (Cellular and Molecular Life Sciences pp 1-12). Un inhibidor de cinasa S6K1 podría ejercer su efecto reduciendo la traducción de niveles de proteína sináptica.
Complejo de esclerosis tuberosa
El complejo de esclerosis tuberosa es un trastorno genético caracterizado por el crecimiento de numerosos tumores no cancerosos (benignos) en muchas partes del cuerpo. Estos tumores pueden ocurrir en la piel, cerebro, riñones, y otros órganos, en algunos casos conduciendo a significantes problemas de salud. El complejo de esclerosis tuberosa también causa problemas de desarrollo, y los signos y síntomas de la condición varían de persona a persona.
El complejo de esclerosis tuberosa a menudo afecta el cerebro, causando convulsiones, problemas de conducta tales como hiperactividad y agresión, y discapacidad intelectual o problemas de aprendizaje. Algunos niños afectados tienen los factores caracterizantes de autismo, un trastorno del desarrollo que afecta la comunicación e interacción social, como se describe anteriormente. Los tumores cerebrales benignos también pueden desarrollarse en personas con complejo de esclerosis tuberosa; estos tumores pueden causar complicaciones serias o que amenazan la vida. El complejo de esclerosis tuberosa afecta aproximadamente 1 en 6.000 personas (http://ghr.nlm.nih.gov/condition/tuberous-sclerosiscomplex).
Las mutaciones en el gen TSC1 o TSC2 pueden causar complejo de esclerosis tuberosa. Los genes TSC1 y TSC2 proporcionan instrucciones para elaborar las proteínas hamartina y tuberina, respectivamente. Estas proteínas están involucradas en la red de señalización de la trayectoria PI3K y actúan como supresores tumorales, inhibiendo la activación de mTOR mediante Rheb-GTP. Cuando TSC1 o TSC2 son mutados, esto conduce a pérdida de la función supresora del tumor, conduciendo a hiper-activación de mTOR.
De manera importante, la rapamicina inhibidora de mTORC1 ha sido mostrada por ser efectiva en aliviar el aprendizaje y deficiencias de memoria en ratones agénicos heterocigotos TSC2 (Ehninger et al., 2008b), sugiriendo que la señalización de mTORC1 no controlada es un mecanismo molecular nuclear involucrado en las anormalidades conductuales.
Uno de los efectos funcionales de mTOR es S6K1; por lo tanto, inhibir la función de S6K1 puede tener efectivos de alivio en la enfermedad.
Síndrome de duplicación de MECP2
El síndrome de duplicación de MECP2 es una condición genética que es heredada en un patrón ligado a X y ocurre casi exclusivamente en hombres. Está caracterizada por discapacidad intelectual moderada a severa. La mayoría de las personas con esta condición también tienen tono muscular débil en la infancia, dificultades de alimentación, habla pobre o ausente, y convulsiones que pueden no mejorar con el tratamiento rigidez muscular (espasticidad). Los individuos con síndrome de duplicación de MECP2 tienen desarrollo retardado de habilidades motoras tales como sentarse y caminar. Muchos individuos con síndrome de duplicación MECP2 tienen infecciones recurrentes del tracto respiratorio. Estas infecciones respiratorias son una causa mayor de muerte en individuos afectados, con casi la mitad sucumbiendo por la edad de 25 años. La prevalencia del síndrome de duplicación MECP2 es desconocida; aproximadamente 120 individuos afectados han sido reportados en la literatura científica. El síndrome de duplicación MECP2 se origina debido a una duplicación del gen MECP2 lo cual conduce a excesiva producción de la proteína MeCP2 en el cerebro. La MeCP2 es un regulador de la expresión de otros genes. Mientras la MeCP2 es crítico para la función cerebral normal, un exceso puede conducir a la regulación anormal de los genes objetivos (http://ghr.nlm.nih.gov/condition/mecp2-duplication-yndrome). Un inhibidor de S6K1 puede reducir la producción de la proteína MeCP2 mediante la amortiguación global de la traducción y puede tener utilidad como intervención terapéutica en esta enfermedad.
Síndrome de Down
El síndrome de Down (SD) o síndrome Down, también conocido como trisomía 21, es un trastorno genético causado por la presencia de toda o parte de una tercera copia del cromosoma 21 (Patterson, D (Jul 2009). “Molecular genetic analysis of Down syndrome”. Human Genetics 126 (1): 195-214). Está típicamente asociado con retardos del crecimiento físico, factores faciales característicos, e incapacidad intelectual leve a moderada. El DS es la anormalidad del cromosoma más común en humanos, que ocurre en aproximadamente uno por 1000 bebés que nacen cada año (Weijerman, ME; de Winter, JP (Dec 2010). “Clinical practice. The care of children with Down syndrome”. European journal of pediatrics 169 (12): 1445-52).
Publicaciones recientes han identificado que la hiper-activación de mTOR desempeña un papel en DS en las etapas tempranas de desarrollo. En control (sin DS) el hipocampo fosforilado S6 fue solamente detectado prenatalmente; llega a ser indetectable 2 meses post-natalmente. Contrariamente, para pacientes con DS, la cinasa fosforilada S6 y fosforilada S6 se detectaron prenatalmente y persistieron a través del desarrollo post-natal. Esto fue ligado a la expresión incrementada de la proteína fosforilada S6 (RPS6), p70S6K fosforilado, proteína 1 de unión del factor 4E de inicio eucariótico fosforilado, y mTOR fosforilado en hipocampos DS comparado con controles (J Neuropathol Exp Neurol. 2014 Jul;73(7):671-83). Además, se ha sugerido que los inhibidores de mTOR tales como Rapamicina u otros Rapálogos pueden ser de utilidad en el tratamiento de Deficiencias Cognitivas asociadas con D<s>(CNS Neurol Disord Drug Targets. 2014 Feb;13(1):34-40). Como controles de S6K1 la fosforilación y activación de la proteína S6, un inhibidor de S6K1 puede ser de utilidad terapéutica en contrarrestar la señalización de mTOR hiperactivada en pacientes con DS.
2. Enfermedades Neurodegenerativas
Enfermedad de Alzheimer
Los síntomas clínicos de la enfermedad de Alzheimer (AD) incluyen una pérdida de memoria gradual y subsecuente demencia, y deposición neuropatológica de placas seniles y ovillos neurofibrilares. La AD representa 60 % hasta 70 % de casos de demencia (Burns, A; Lliffe, S (5 February 2009). “Alzheimer's disease”. BMJ (Clinical research ed.) 338: b158). Es una enfermedad devastadora y relativamente dispersada - a partir de 2010, donde entre 21 y 35 millones de personas alrededor del mundo con AD (“Survival in dementia and predictors of mortality: a review”. International journal of geriatric psychiatry 28 (11): 1109-24).
Al nivel molecular, la AD está asociada con (1) la acumulación progresiva de péptidos p-amiloides (Ap) en la forma de placas amiloides extracelulares en el cerebro humano y (2) hiperfosforilación tau. Recientes publicaciones han implicado la trayectoria de señalización de PI3K/mTOR en la patogénesis de la enfermedad. Por ejemplo, desactivación genética de proteína mTOR en ratones Tg2576, un modelo animal ampliamente usado de AD, se encontró por suprimir los depósitos p-amiloides y rescatar deficiencias de memoria en los animales (J. Neurosci.
2014 Jun 4;34(23):7988-98). Además, las pruebas de tejido cerebral post-mórtem a partir de pacientes AD humanos destacan que la alteración de la señalización de mTOR y autofagia ocurre en etapas tempranas de AD, conduciendo a un incremento significante de niveles de Ap (1-42) e hiper-activación de la trayectoria PI3K/Akt/mTOR (J. Neurochem. 2015 Jan 27). El nivel de expresión de S6K1, el objetivo corriente abajo de mTOR, se incrementó en estas muestras sugiriendo que una intervención terapéutica por un inhibidor de S6K1 puede ser de utilidad para controlar la síntesis de la proteína p-amiloide y para amortiguar la señalización de mTOR. Además, los niveles incrementados de mTOR fosforilado y S6K1 también se encontraron en alunas de las áreas del cerebro afectadas en AD, tales como corteza, de ratones transgénicos dobles APP/PS1, un modelo de AD (Lafay-Chebassier et al., 2005).
En adición, Oddo et al (Reducing Ribosomal Protein S6 Kinase 1 Expression Improves Spatial Memory and Synaptic Plasticity in a Mouse Model of Alzheimer's Disease, The Journal of Neuroscience, Octubre 14, 2015, 35(41):14042-14056) publicó datos que apoyan las siguientes conclusiones: (1) la actividad de S6K1 es regulada ascendentemente en los cerebros de pacientes con AD (2) en un modelo de ratón con AD, la actividad de S6K1 en el cerebro es también superior que el control (3) Reducción genética de S6K1 en el modelo de ratón con AD (vía haplodeficiencia) (1) plasticidad sináptica mejorada y deficiencias de memoria espacial, y (2) acumulación reducida de niveles Amiloides-B (AB) y fosfo-tau/tau total, las marcas neuropatológicas claves de AD. Esta validación da la creencia a la hipótesis que la manipulación de la actividad de S6K1 mediante un inhibidor de molécula pequeña de S6K1 podría ser un procedimiento terapéutico en AD.
Enfermedad de Huntington
La enfermedad de Huntington es un trastorno cerebral heredado, progresivo que causa movimientos incontrolados, problemas emocionados, y pérdida de la capacidad de pensamiento (cognición); existen dos formas de la enfermedad: (1) la enfermedad de Huntington de comienzo en adulto, la forma más común de este trastorno, la cual usualmente aparece en una persona en los años treinta o cuarenta o (2) enfermedad de Huntington de comienzo juvenil, la cual es menos común y comienza en la infancia o adolescencia. En ambas formas, la enfermedad es progresiva con individuos afectados usualmente que viven por solamente 10 a 15 años después que los signos y síntomas aparecen. La enfermedad de Huntington afecta un estimado de 3 a 7 personas por 100.000 de ascendencia Europea.
La enfermedad de Huntington es causada por mutaciones en el gen HTT lo cual conduce a producción de una versión anormalmente larga de la proteína huntingtina (Htt). La proteína alargada es cortada en fragmentos tóxicos, más pequeños, que se unen en conjunto y se acumulan en las neuronas, alterando alas funciones normales de estas células. La disfunción y muerte eventual de neuronas en ciertas áreas del cerebro subyacen a los signos y síntomas de la enfermedad de Huntington. Publicaciones recientes han mostrado que la Htt mutante contribuye a la patogénesis de HD mejorando la actividad de mTORC1 (Sci. Signal., 28 Octubre 2014, Vol. 7, Publicación 349, p. ra103).
Uno de los efectores funcionales de la señalización de mTOR es S6K1; por lo tanto, inhibir la función de S6K1 puede tener efectos de alivio en la enfermedad. En adición, inhibir a S6K1 puede limitar la producción de la proteína huntingtina mediante amortiguación de la traducción de la proteína global.
Enfermedad de Parkinson
La enfermedad de Parkinson (PD) es una condición neurodegenerativa progresiva que resulta de la muerte de las células que contienen dopamina de la sustancia nigra. Personas con PD presentan clásicamente síntomas y signos asociados con el parkinsonismo, es decir, bradiquinesia, rigidez y temblor en descanso. La PD es una condición neurológica progresiva, crónica, común, estimada por afectar 100-180 personas por 100.000 de la población (entre 6 y 11 personas por 6000 de la población general en el UK) y tiene una incidencia anual de 4-20 por 100.000. Existe una prevalencia creciente con la edad y una prevalencia superior e incidencia de PD en hombres (https://www.nice.org.uk/guidance/cg035/chapter/introduction).
Mientras la PD tradicionalmente ha sido considerada un trastorno no genético, al menos 5 % de personas son ahora conocidas por tener formas de la enfermedad que ocurren debido a una mutación de uno de varios genes específicos. Las mutaciones en genes específicos han sido conclusivamente mostradas por causar PD. Estos genes codifican para alfa-sinucleína (SNCA), parkina (PRKN), cinasa 2 de repetición rica en leucina (LRRK2 o dardarina), cinasa 1 putativa inducida por PTEN (PlNK1), DJ-1 y ATP13A2 (Lesage S, Brice A; Brice (April 2009). “Parkinson's disease: from monogenic forms to genetic susceptibility factors”. Hum. Mol. Genet. 18 (R1): R48-59).
Estudios recientes que atienden el mecanismo de neurodegeneración en PD demuestran el involucramiento de la trayectoria de señalización de mTORC1 en el mecanismo de supervivencia de neuronas dopaminérgicas. Estudios in vivo in vitro mostraron que la degeneración inducida por tratamiento con toxinas PD, tales como 6-OHDA y MPTP, conduce a la regulación ascendente de RTP801, una proteína codificada por un gen sensible al estrés RTP801, el cual, a su vez, reduce la actividad de cinasa mTOR. Se ha propuesto que el mecanismo molecular, que enlaza altos niveles de inhibición de RTP801 a mTORC1 y neurodegeneración, involucra TSC2 y Akt (Deyoung et al., 2008; Malagelada et al., 2008). Las manipulaciones genéticas que interfieren con TSC2 o incrementan la expresión de una forma constitutivamente activa de Akt protegida contra las toxinas PD y previene el incremento en RTP801 (Malagelada et al., 2008). Sin embargo, la rapamicina se reportó como un agente neuroprotector tanto en el cultivo celular como en un modelo de ratón MPTP (modelo de ratón de PD). Se propone que la rapamicina puede mejorar la actividad de Akt a través de la inhibición de la activación dependiente de mTORC1 de S6K1 y la subsecuente reducción de fosfo-IRS-1, la cual es una proteína de andamiaje involucrada en la activación de Pl3K y Akt (Shah et al., 2004). Por lo tanto, también puede ser el caso de que un inhibidor de S6K1 (un efector principal de mTOR) desacoplará el mismo bucle de retroalimentación negativa a IRS-1, conduciendo a la activación de Akt y supervivencia incrementada en las neuronas de pacientes con PD. Un inhibidor de S6K1 puede, por lo tanto, presentar efectos terapéuticos cuando se dosifican a un paciente con PD.
Para el tratamiento de todas las enfermedades descritas anteriormente, podría ser ventajoso usar un inhibidor de P70S6K oralmente biodisponible con propiedades que permiten la penetración del cerebro en concentración suficiente para lograr eficacia.
Por lo tanto, podría ser benéfico desarrollar compuestos que tengan la capacidad para inhibir la cinasa de p70S6.
La invención
La presente invención proporciona una clase de nuevas quinazolinas sustituidas con arilalquilamino como inhibidores de cinasa p70S6.
En una primera forma de realización (Forma de realización 1.0) de la invención, se proporciona un compuesto ((R)-1 -feniletil)-[6-(1H-pirazolo[3.4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otra forma de realización (Forma de realización 1.1) de la invención, se proporciona un compuesto [(R)-1-(3,4-difluorofenil)-etil]-[6-(1H-pirazolo[3.4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Cualesquiera referencias a métodos de tratamiento en los párafos abajo tienen que ser interpretadas como referencia a compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) por terapia (o para diagnosis).
Compuestos particulares y preferidos se describen en las Formas de realización 1.2 a 1.5 a continuación.
1.2 Un compuesto de conformidad con cualesquiera de las Formas de realización 1.0 o 1.1, el cual es en la forma de una base libre.
1.3 Un compuesto de conformidad con cualesquiera de las Formas de realización 1.0 o 1.1, el cual es en la forma de una sal.
1.4 Un compuesto de conformidad con la Forma de realización 1.3, en el que la sal es una sal de adición de ácido.
1.5 Un compuesto de conformidad con la Forma de realización 1.3 o Forma de realización 1.4, en el que la sal es una sal de adición de ácido.
1.6 Un compuesto de conformidad con cualesquiera de las Formas de realización 1.0 o 1.5, el cual es en la forma de un solvato.
1.7 Un compuesto de conformidad con la Forma de realización 1.6, en donde el solvato es un hidrato.
Definiciones
Sales
Los compuestos de la invención como se define en la Formas de realización 1.0 a 1.1 pueden ser presentados en la forma de sales.
Las sales referidas anteriormente (y también se define en las formas de realización 1.3, 1.4 y 1.5) son típicamente sales de adición de ácido.
Las sales pueden ser sintetizadas a partir del compuesto precursor por métodos químicos convencionales tales como los métodos descritos enPharmaceutical Sales: Properties, Selection, and Use,P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 páginas, Agosto 2002. En general, tales sales se pueden preparar haciendo reaccionar la forma de base libre del compuesto con el ácido en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos; en general, se usan medios no acuosos tal como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo.
Las sales de adición de ácido (como se define en la Forma de realización 1.4) se pueden formar con una amplia variedad de ácidos, tanto inorgánico como orgánico. Ejemplos de sales de adición de ácido incluyen sales formadas con un ácido seleccionado del grupo que consiste de ácidos acético, 2,2-dicloroacético, adípico, algínico, ascórbico (por ejemplo, L-ascórbico), L-aspártico, bencensulfónico, benzoico, 4-acetamidobenzoico, butanoico, (+) camfórico, camfor-sulfónico, (+)-(1S)-camfor-10-sulfónico, cáprico, caproico, caprilico, cinámico, cítrico, ciclamico, dodecilsulfúrico, etan-1,2-disulfónico, etansulfónico, 2-hidroxietansulfónico, fórmico, fumárico, galactárico, gentísico, glucoheptónico, D-glucónico, glucurónico (por ejemplo, D-glucurónico), glutámico (por ejemplo, L-glutámico), a-oxoglutárico, glicólico, hipúrico, bromhídrico, clorhídrico, yodhídrico, isetiónico, (+)-L-láctico, (±)-DL-láctico, lactobiónico, maleico, málico, (-)-L-málico, malónico, (±)-DL-miélico, metansulfónico, naftalen-2-sulfónico, naftalen-1,5-disulfónico, 1-hidroxi-2-naftoico, nicotínico, nítrico, oleico, orótico, oxálico, palmítico, pamoico, fosfórico, propiónico, L-piroglutámico, salicílico, 4-amino-salicílico, sebácico, esteárico, succínico, sulfúrico, tánico, (+)-L-tartárico, tiociánico, p-toluensulfónico, undecilénico y valérico, así como aminoácidos acilados y resinas de intercambio catiónico.
Las formas de sal de los compuestos de la invención son típicamente sales farmacéuticamente aceptables, y ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se discuten en Bergeet al.,1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts,"J. Pharm. Sci.,Vol. 66, pp. 1-19. Sin embargo, las sales que no son farmacéuticamente aceptables pueden también ser preparadas como formas intermediarias las cuales puede entonces ser convertidas en sales farmacéuticamente aceptables. Tales formas de sal no farmacéuticamente aceptables, las cuales puede ser útiles, por ejemplo, en la purificación o separación de los compuestos de la invención, también forman parte de la invención.
Isómeros y tautómeros geométricos
Los compuestos de la invención pueden existir en un número de diferentes formas isoméricas y tautoméricas geométricas y se hace referencia a los compuestos como se define en las Formas de realización 1.0 a 1.7 incluyen todas estas formas. Para evitar la duda, donde un compuesto puede existir en una de varias formas isoméricas o tautoméricas geométricas y solamente una está específicamente descrita o se muestra, todos los demás son sin embargo abarcados por los compuestos como se definen en las Formas de realización 1.0 a 1.7 o subgrupos, subseries, preferencias y ejemplos del mismo.
Isómeros ópticos
Donde los compuestos de la fórmula contienen uno o más centros quirales, y pueden existir en la forma de dos o más isómeros ópticos, se hace referencia a los compuestos incluyendo todas las formas isoméricas ópticas del mismo (por ejemplo, enantiómeros, epímeros y diastereoisómeros), ya sea como isómeros ópticos individuales, o mezclas (por ejemplo, mezclas racémicas) o dos o más isómeros ópticos, a menos que el contexto lo requiera de otra forma.
Los isómeros ópticos pueden ser caracterizados e identificados por su actividad óptica (es decir, como isómeros y - , o isómerosd y l)o pueden ser caracterizados en términos de su estereoquímica absoluta usando la nomenclatura “R y S” desarrollada por Cahn, Ingold y Prelog, véaseAdvanced Organic Chemistrypor Jerry March, 4th Edición, John Wiley & Sons, New York, 1992, páginas 109-114, y véase también Cahn, Ingold & Prelog,Angew. Chem. Int. Ed. Engl.,1966, 5, 385-415.
Los isómeros ópticos pueden ser separados por un número de técnicas que incluyen cromatografía quiral (cromatografía en un soporte quiral) y tales técnicas son bien conocidas por la persona experta en la técnica.
Como una alternativa a cromatografía quiral, los isómeros ópticos pueden ser separados formando sales diastereoisoméricas con ácidos quirales tal como ácido (+)-tartárico, ácido (-)-piroglutámico, ácido (-)-di-toluoil-L-tartárico, ácido (+)-miélico, ácido (-)-málico, y (-)-camforsulfónico, separando los diastereoisómeros por cristalización preferencial, y entonces disociando las sales para dar el enantiómero individual de la base libre.
Donde los compuestos de la invención existen como dos o más formas isoméricas ópticas, un enantiómero en un par de enantiómeros puede exhibir ventajas sobre los otros enantiómeros, por ejemplo, en términos de actividad biológica. En consecuencia, en ciertas circunstancias, puede ser deseable usar como un agente terapéutico solamente uno de un par de enantiómeros, o solamente uno de una pluralidad de diastereoisómeros. Por consiguiente, la invención proporciona composiciones que contienen un compuesto que tiene uno o más centros quirales, en donde al menos 55 % (por ejemplo, al menos 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 %) del compuesto, como se define en cualesquiera de las formas de realización 1.0 a 1.7, está presente como un isómero óptico sencillo (por ejemplo, enantiómero o diastereoisómero). En una forma de realización general, 99 % o más (por ejemplo, sustancialmente todo) de la cantidad total del compuesto, como se define en cualesquiera de las formas de realización 1.0 a 1.7, puede estar presente como un isómero óptico sencillo (por ejemplo, enantiómero o diastereoisómero).
Isotipos
Los compuestos de la invención como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 pueden contener una o más sustituciones isotípicas, y una referencia para un elemento particular que incluye dentro de su alcance todos los isotipos del elemento. Por ejemplo, una referencia a hidrógeno que incluye dentro de su alcance 1H, 2H (D), y 3H (T). De manera similar, se hace referencia a carbono y oxígeno incluyendo dentro de su alcance respectivamente 12C, 13C y 14C y 16O y 18O.
Los isotipos pueden ser radioactivo o no radioactivo. En una forma de realización de la invención, los compuestos contienen isotipos no radioactivos. Tales compuestos son preferidos para uso terapéutico. En otra forma de realización, sin embargo, el compuesto puede contener uno o más radioisotipos. Los compuestos que contienen tales radioisotipos puedes ser útiles en un contexto de diagnóstico.
Solvatos
Los compuestos como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 pueden formar solvatos.
Los solvatos preferidos son solvatos formados por la incorporación sobre la estructura en estado sólido (por ejemplo, estructura de cristal) de los compuestos de la invención de moléculas de un solvente farmacéuticamente aceptable no tóxico (referido a continuación como el solvente de solvatación). Ejemplos de tales solventes incluyen agua, alcoholes (tal como etanol, isopropanol y butanol) y dimetilosulfóxido. Los solvatos se pueden preparar recristalizando los compuestos de la invención con un solvente o mezcla de solventes que contienen el solvente de solvatación. Si o no un solvato ha sido formado en cualquier caso dado puede ser determinado inyectando cristales del compuesto para análisis usando técnicas bien conocidas y estándar tal como análisis termogravimétrico (TGE), calorimetría de barrido diferencial (DSC) y Cristalografía de rayos X.
Los solvatos pueden ser solvatos estequiométricos y no estequiométricos.
Solvatos particularmente preferidos son hidratos, y ejemplos de hidratos incluyen hemihidratos, monohidratos y dihidratos.
Para una discusión más detallada de solvatos y los métodos usados para hacerlos y caracterizarlos, véase Bryn et al., Solid-State Chemistry of Drugs, Segunda Edición, publicada por SSCI, Inc of West Lafayette, IN, USA, 1999, ISBN 0-967 06710-3.
Complejos y caltratos
También abarcados por los compuestos de las formas de realización 1.0 a 1.7 o subgrupos, subseries, preferencias y ejemplos del mismo son complejos (por ejemplo, complejos o caltratos de inclusión con compuestos tal como ciclodextrinas, o complejos con metales) de los compuestos.
Actividad biológica
Los compuestos como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 tienen actividad como inhibidores de cinasa p70S6. Como tal, pueden ser útiles en la prevención o tratamiento de estados de enfermedad y condiciones en las cuales cinasa p70S6 o formas mutantes de la misma juegan una parte activa.
Por ejemplo, está previsto que los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 serán útiles en el tratamiento de un intervalo de trastornos proliferativos tal como cánceres.
Por consiguiente, en formas de realización adicionales (Formas de realización 2.1 a 2.6), la divulgación proporciona:
2.1 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en medicina o terapia.
2.2 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en la prevención o tratamiento de estados de enfermedad y condiciones mediadas por cinasa p70S6 o formas mutantes de la misma.
2.3 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en la prevención o tratamiento de estados de enfermedad y condiciones caracterizadas por expresión anormal de cinasa p70S6 (por ejemplo, sobre-expresión o expresión de una forma mutante de cinasa p70S6).
2.4 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso como un agente anti-cancerígeno.
2.5 El uso de un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de cáncer.
2.6 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el mejoramiento de un efecto terapéutico de terapia de radiación o quimioterapia en el tratamiento de una enfermedad proliferativa tal como cáncer.
Ejemplos de trastornos proliferativos (por ejemplo, cánceres) como se define en la Formas de realización 2.4 a 2.6 incluyen, pero no se limitan a carcinomas, por ejemplo carcinomas de vejiga, mama, colon, riñón, epidermis, hígado, pulmón, esófago, vesícula biliar, ovario, páncreas, estómago, cerviz, tiroides, próstata, sistema gastrointestinal, o piel, tumores hematopoyéticos tal como leucemia, linfoma de célula B, linfoma de célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfoma de célula pilosa, o linfoma de Burkitt; tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, por ejemplo leucemias mielógenas aguda y crónica, síndrome mielodisplásico, o síndrome promielocítica; cáncer folicular de tiroides; tumores de origen mesenquimal, por ejemplo fibrosarcoma o rabdomiosarcoma; tumores del sistema nervioso central y periférico, por ejemplo astrocitoma, neuroblastoma, glioma o schwannoma; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteosarcoma; xeroderma pigmentosa; ceratoctantoma; cáncer folicular de tiroides; o sarcoma de Kaposi.
Una subserie particular de cánceres contra las cuales los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 deben demostrar ser particularmente activos son cánceres las cuales son caracterizados por sobreexpresión de P70S6 o expresión elevada de P70S6 o la presencia de formas mutantes de P70S6 o niveles elevados de p70S6K activado (fosforilado).
La capacidad de los compuestos de la invención para inhibir cinasa P70S6 puede ser determinada por medio de los protocolos establecidos en la sección de Ejemplos a continuación.
Los ejemplos adicionales particulares de cánceres contra los cuales los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 deben demostrar ser particularmente activos son:
• Cáncer de Mama (sobreexpresión está unida a la pobre pronóstico y metástasis (véase Mol. Can. Ther, 2010, 9, 1180), particularmente cáncer de mama triple negativo
• Linfoma de célula B grande difusa: (véase Expert Opin Ther Targets. 2009 Sep;13(9):1085-93.)
• Glioblastoma multiforme (asociado con niveles incrementados de P70S6K (véase J Clin Oncol. 2005 Aug 10;23(23):5294-304))
• Cáncer colorrectal humano (en el cual la trayectoria mTOR y p70S6K son altamente activadas (véase Ann. Surg.
Oncol. 2009 Sep; 16(9):2617-28. Epub 2009 Jun 11))
Otra subserie de cánceres contra los cuales los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 deben demostrar ser particularmente activos incluye:
• cáncer de mama
• glioblastoma multiforme;
• adenocarcinomas del colon;
cáncer de pulmón de célula no pequeña;
cáncer de pulmón de célula pequeña;
cáncer de pulmón de célula pequeña resistente a cisplatino;
cáncer ovario;
leucemia;
cáncer pancreático;
cáncer de próstata;
carcinoma mamario;
carcinoma de célula renal;
mieloma múltiple;
sarcoma de Kaposi;
linfoma de Hodgkin;
limfangioeiomiomatosis; y
linfoma no de Hodgkin o sarcoma
Una subserie adicional de cánceres contra los cuales los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 deben demostrar ser particularmente activos incluye cánceres del cerebro tal como:
• metástasis cerebral de Cáncer de Mama Negativo Triple; y
gliomas y glioblastomas.
Cáncer de Mama Triple Negativo
La mayoría de los cánceres de mama son cánceres de mama de hormona positiva, en donde el crecimiento de células cancerosas es estimulado por exposición a estrógeno y/o progesterona. Los pacientes que sufren de tales cánceres son típicamente tratados con agentes terapéuticos que previenen o reducen la formación de estrógeno en el cuerpo o previenen al estrógeno unirse a la célula y estimular el crecimiento. Ejemplos de tales agentes terapéuticos incluyen moduladores de respuesta del receptor de estrógeno selectivos (SERMs) tal como tamoxifeno y toremifeno; inhibidores de aromatasa tal como anastrozol, exemestana y letrozol; reguladores descendentes del receptor de estrógeno (ERDs) tal como fulvestrant; y agentes hormonales que libera la hormona letunizante (LHRHs) tal como goserelina, leuprolida), y triptorelina. La estimulación de progesterona en células cancerosas de hormona positiva es afectada por actividad del receptor de estrógeno; por lo tanto, si se reduce la exposición a estrógeno, a menudo también se afecta la sensibilidad a progesterona.
Aproximadamente un cuarto de cánceres de mama son cánceres de mama HER-2 positivos los cuales son caracterizados por sobreexpresión del receptor del factor de crecimiento 2 epidérmico humano (HER2). Los cánceres HER-2 positivos son típicamente tratados con agentes terapéuticos (por ejemplo, Herceptina) que el dirigido al receptor por mostrar crecimiento y replicación.
Sin embargo, existen algunos cánceres de mama que no son positivos a estrógeno o progesterona y no sobreexpresan HER2 a un nivel que puede ser caracterizado como positivo a HER2. Tales formas de cáncer de mama son comúnmente referidas como cánceres de mama triple negativo. Los pacientes con cáncer de mama triple negativo tienen pocas opciones de tratamiento que los pacientes con cualquiera de las enfermedades positiva a hormona o positivos a h ER2, y por consiguiente son en general más difíciles de tratar que los cánceres positivos a estrógeno, positivo a progesterona y positivo a HER2. Los cánceres de mama triple negativo también son reconocidos por ser más probable que se propaguen (metástasis) al cerebro. Los pacientes con metástasis de cerebro son típicamente considerados ser incurables con procedimientos de tratamiento estándar.
Los compuestos como se define en las Formas de realización 1.0 a 1.7 en la presente se pueden usar en los tratamientos de cáncer de mama triple negativo y el tratamiento de metástasis de cerebro que se origina del cáncer de mama triple negativo. Los compuestos también se pueden usar en el tratamiento de metástasis de cerebro que se origina de otras formas de cáncer.
Además, los compuestos como se definen en las Formas de realización 1.0 a 1.7 en la presente, se pueden usar en la prevención o tratamiento de metástasis en general, por ejemplo, en la prevención o tratamiento de metástasis en el cerebro, pulmón, hígado, páncreas, riñón, vejiga y vesícula biliar.
Por consiguiente, en formas de realización adicionales 2.7 a 2.9, la invención proporciona:
2.7 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de cánceres de mama triple negativo.
2.8 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en la prevención o tratamiento de metástasis, por ejemplo, metástasis en el cerebro, huesos, pulmón, hígado, páncreas, riñón, vejiga y vesícula biliar, por ejemplo, metástasis de cerebro que se origina de cánceres de mama triple negativo.
2.9 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de metástasis de cerebro que se origina de cánceres no de cerebro.
Gliomas
Está previsto que los compuestos como se define en la Formas de realización 1.0 a 1.7 en la presente serán útiles en el tratamiento de gliomas a causa de su potencia como inhibidores de S6K1 (el cual se conoce por tener un papel en transformación glial) y su capacidad para alcanzar uno de los sitios de acción, es decir, el cerebro.
Los gliomas son un tipo común de tumor de cerebro primario que se origina en las células gliales en el cerebro, y cuenta con aproximadamente 30 % de tumores en todo el cerebro primario y sistema nervioso central, y aproximadamente 80 % de todos los tumores del cerebro malignos. Los gliomas típicamente surgen de tres tipos diferentes de células que son normalmente encontradas en el cerebro, es decir astrocitos, oligodendrocitos, y células epemdimarias. Tipos principales de gliomas incluyen ependimomas (asociado con células epemdimarias), astrocitomas (asociado con astrocitos), oligodendrogliomas (asociado con oligodendrocitos), glioma del tronco cerebral (el cual se desarrolla en el tronco cerebral), glioma del nervio óptico (el cual se desarrolla en o alrededor del nervio óptico) y gliomas mezclados (los cuales contienen células de diferentes tipos de glia).
Un ependimoma es un tipo de glioma que se desarrolla de las células epemdimarias, usualmente en el recubrimiento de los ventrículos del cerebro o en la médula espinal. En niños, son más comúnmente encontrados cerca del cerebelo. Ependiomas son raros, contabilizado para solamente aproximadamente 2-3 % de tumor de cerebro primarios. Sin embargo, cuentan con aproximadamente 8-10% de tumores de cerebro en niños y ocurre más a menudo en niños menores de 10 años de edad.
Los astrocitomas originados en las células gliales en forma de estrella (astrocitos) en el cerebro. Los astrocitomas usualmente no se esparcen fuera del cerebro y médula espinal y usualmente no afectan otros órganos, pero son los gliomas más comunes y se pueden originar en muchas partes del cerebro y ocasionalmente en la médula espinal. Las dos clases amplias de astrocitomas son en general reconocidos, es decir aquellos con zonas estrechas de infiltración (principalmente tumores invasivos; por ejemplo, atrocitoma pilocítica, astrocitoma de célula gigante subependimal, xantoastrociloma pleomórfica), que a menudo con claramente resumidos en imágenes de diagnóstico; y aquellos con zonas difusas de infiltración (por ejemplo, astrocitoma de grado alto, astrocitoma anaplásica, glioblastoma). El glioblastoma multiforme es un astrocitoma maligno y el tumor de cerebro primario más común entre adultos humanos.
Un oligodendroglioma es un tipo de glioma que se desarrolla de oligodendrocitos, los cuales son las células de tejido de apoyo del cerebro, y usualmente se encuentran en el cerebro. Aproximadamente 4 % de los tumores de cerebro primario son oligodendrogliomas y son más comunes en adultos jóvenes y de edad media. Las convulsiones son un síntoma muy común de estos gliomas, así como también dolor de cabeza, debilidad o cambios en comportamiento o somnolencia. Los gliomas del tronco cerebral, como el nombre lo sugiere, son tumores encontrados en el tronco cerebral. La mayoría de los tumores del tronco cerebral no pueden ser removidos quirúrgicamente porque la ubicación remota y la función delicada y compleja controlan esta área. Los gliomas del tronco cerebral se originan casi exclusivamente en niños, típicamente en niños en edad escolar.
Un glioma mezclado es un glioma maligno hecho de más de un tipo de la célula glial. Este tipo de glioma puede también ser referido como un oligoastrocitoma. Los gliomas mezclados son a menudo encontrados en el cerebro, pero pueden ser metastatizados a otras partes del cerebro. Solamente aproximadamente 1 % de tumores del cerebro primario son gliomas mezclados y son más comúnmente encontrados en hombres adultos.
Un glioma del nervio óptico es un tipo de glioma maligno (tumor de cerebro) encontrado en el quiasma óptico. Los gliomas del nervio óptico a menudo rodean los nervios ópticos, y se encuentran frecuentemente en la gente las cuales tienen neurofibromatosis. Una persona que sufre de un glioma del nervio óptico típicamente experimenta pérdida de visión, y pueden también sufrir de alteraciones de hormona ya que los tumores son a menudo encontrados en la base del cerebro donde se localizan las estructuras responsables para el control hormonal. Los gliomas del nervio óptico son típicamente difíciles para tratar debido a la severidad de las estructuras del cerebro circundantes.
Además, a lo clasificado de conformidad con el tipo de célula glial a partir de las cuales se originan o la región del cerebro en el cual se desarrollan, los gliomas pueden también ser clasificados de conformidad con su “grado”, el cual se mide del crecimiento potencial y agresividad del tumor.
Los gliomas son más a menudo referidos como gliomas de “grado bajo” o “grado alto”, el grado es determinado por evaluación patológica del tumor. Los tumores pueden además ser clasificados de conformidad con el sistema clasificación de la Organización Mundial de la Salud (WHO), bajo el cual los tumores son graduados de I (al menos enfermedad avanzada-mejor pronóstico) a IV (enfermedad más avanzada-peor pronóstico).
Los gliomas también pueden ser clasificados de acuerdo si son localizados por arriba o por abajo de la membrana de tentorio la cual es tentorio separado de la del cerebro (por arriba) del cerebro a partir del cerebelo (por abajo). Los gliomas supratentoriales (es decir, tumores localizados por arriba del tentorio en el cerebro), son principalmente encontrados en adultos (70 %), mientras que los gliomas infratentoriales (tumores localizados por abajo del tentorio, en el cerebelo), se encuentran principalmente en niños (70 %).
Una clase adicional de gliomas consiste de estos tumores encontrados en la protuberancia anular del tronco cerebral. El tronco cerebral tiene tres partes (protuberancia anular, mesencéfalo y médula), las protuberancias anulares controlan las funciones críticas tal como respiración, efectuar cirugía en gliomas pontinos extremadamente peligrosos.
En consecuencia, en Formas de realización adicionales 2.10 a 2.23, la invención proporciona:
2.10 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de gliomas y glioblastomas.
2.11 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un ependimoma.
2.12 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un astrocitoma.
2.13 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioblastoma.
2.14 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es glioblastoma multiforme.
2.15 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un oligodendroglioma.
2.16 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma del tronco cerebral.
2.17 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma del nervio óptico.
2.18 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma mezclado.
2.19 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma de grado bajo.
2.20 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma de grado alto.
2.21 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma supratentorial.
2.22 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma infratentorial.
2.23 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.10 en donde el glioma es un glioma pontino.
Enfermedades de neurodesarrollo y enfermedades neurodegenerativas
Como se discute anteriormente, el P70S6K también tiene un papel crucial en la patología de un número de enfermedades de neurodesarrollo y trastornos y enfermedades neurodegenerativas y está previsto que la inhibición de P70S6K proporcionará un medio de tratamiento de muchas de estas enfermedades. Por consiguiente, en formas de realización adicionales 2.24 a 2.36, la invención proporciona:
2.24 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de un trastorno de neurodesarrollo.
2.25 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.24 en donde el trastorno de neurodesarrollo es Síndrome Frágil X.
2.26 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.24 en donde el trastorno de neurodesarrollo es Autismo o un Trastorno de Espectro de Autismo.
2.27 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.24 en donde el trastorno de neurodesarrollo es síndrome de temblores/ataxia asociado a Frágil X (FXTAS).
2.28 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.24 en donde el trastorno de neurodesarrollo es síndrome de Angleman.
2.29 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.24 en donde el trastorno de neurodesarrollo es complejo de esclerosis Tuberosa.
2.30 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.24 en donde el trastorno de neurodesarrollo es síndrome de duplicación MECP2.
2.31 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.24 en donde el trastorno de neurodesarrollo es Síndrome de Down.
2.32 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa.
2.33 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.32 en donde la enfermedad neurodegenerativa es enfermedad de Alzheimer.
2.34 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.32 en donde la enfermedad neurodegenerativa es enfermedad de Huntington.
2.35 Un compuesto para uso de conformidad con la Forma de realización 2.32 en donde la enfermedad neurodegenerativa es enfermedad de Parkinson.
El síndrome Frágil X usualmente se manifiesta primero en la niñez. Es común un retraso en el habla y es a menudo que el primer síntoma que porta el infante para atención médica (al rededor de dos a tres). En consecuencia, en formas de realización adicionales, la invención proporciona:
2.36 Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de Síndrome Frágil X en un paciente por debajo de la edad de 20, por ejemplo, por debajo de la edad de 15, o por debajo de la edad de 12, o por debajo de la edad de 10, preferiblemente por debajo de la edad de 8, y aún más preferiblemente por debajo de la edad de 5.
Otras enfermedades y condiciones en las cuales el S6K1 puede estar implicado
Como se discute anteriormente, los inhibidores P70S6K pueden también ser útiles en el tratamiento del síndrome de hamartoma PTEN, neurofibromatosis tipo 1 y linfangioleiomiomatosis (LAM). Por consiguiente, en formas de realización adicionales (Formas de realización 2.37 a 2.39), la divulgación proporciona:
2.37 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de una condición la cual es síndrome hamartoma PTEN.
2.38 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de una condición la cual es neurofibromatosis tipo 1.
2.39 Un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento de una condición la cual es limfangioleiomiomatosis.
Determinación de propiedades biológicas
La capacidad de los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para inhibir la proliferación celular puede también ser determinada usando los protocolos establecidos en la sección de Ejemplos a continuación.
Una ventaja de los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 es que puede también ser determinada.
Compuestos preferidos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son aquellos que tiene un CI<50>contra la cinasa p70S6 de menos de 5 j M, o menos que 1 j M y preferiblemente menos que 0.1 j M.
Por ejemplo, los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son inhibidores selectivos de cinasa p70S6 comparado con la actividad contra la cinasa Akt2. Los compuestos preferidos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son al menos 5 veces más activos contra la cinasa p70S6 que contra la cinasa Akt2, y compuestos más preferidos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son al menos 10 veces o al menos 20 veces más activos contra la cinasa p70S6 que contra la cinasa Akt2. Compuestos particularmente más preferidos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son al menos 100 veces más activos contra la cinasa p70S6 que contra la cinasa Akt2.
Además, los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son inhibidores selectivos de la cinasa p70S6 comparados con la actividad contra la cinasa Aurora. Compuestos preferidos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son al menos 5 veces más activos contra la cinasa p70S6 que contra la cinasa Aurora A y/o B, y compuestos más preferidos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 son al menos 10 veces más activos contra la cinasa p70S6 que contra la cinasa Aurora A y/o B.
Compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 que tienen mayor selectividad para la cinasa p70S6 contra la cinasa Aurora y/o Aurora B y/o cinasa Akt se espera presenten perfiles de efecto secundario mejorado con relación a los efectos secundarios que se originan de la inhibición de la cinasa Aurora y cinasa Akt. Por ejemplo, en el caso de inhibición de cinasas Aurora, la neutropenia es un efecto secundario bien conocido en la clínica.
Por consiguiente, en formas de realización adicionales (Formas de realización 2.40 a 2.43), la divulgación proporciona:
2.40 Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 que tiene una CI<50>contra la cinasa p70S6 de menos de 5<j>M.
2.41 Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 que tiene una CI<50>contra la cinasa p70S6 of o menos que 1<j>M.
2.42 Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 que tiene una CI<50>contra la cinasa p70S6 de menos de 0.1 j M.
2.43 Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Formas de realización 2.40 a 2.43 para uso en una terapia, tratamiento, método o uso de conformidad con cualquiera de las Formas de realización 2.1 a 2.391.
Muchos compuestos definidos en las Formas de realización 1.0 a 1.7 tienen buena penetración cerebral y por lo tanto son útiles en el tratamiento de trastornos cerebrales en los cuales la inhibición de la cinasa p70S6 es terapéuticamente efectiva.
La capacidad de penetración en el cerebro de los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 puede ser determinada por medio de un modelo de ratón de casetein vivoel cual es un medio estándar en la industria para evaluar la penetración en el cerebro de moléculas pequeñas (véase por ejemplo “ In vitro permeability analysis, pharmacokinetic and brain distribution study in mice of imperatorin, isoimperatorin and cnidilin in Radix Angelicae Dahuricae”, Fitoterapia, Volume 85, Marzo 2013, Páginas 144-153).
Formulaciones Farmacéuticas
Si bien es posible que el compuesto activo se administre solo, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica (por ejemplo, formulación).
Por consiguiente, en otra forma de realización (Forma de realización 3.1) de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
El excipiente farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, un portador (por ejemplo, un portador sólido, líquido o semi-sólido), un diluyente agente de volumen, un agente de granulación, agente de recubrimiento, agente de unión, desintegrante, agente lubricante, preservativo, antioxidante, agente amortiguador, agente de suspensión, agente espesante, agente saborizante, endulzante, agente enmascarador del sabor o cualquier otro excipiente convencionalmente usado en las composiciones farmacéuticas. Ejemplos de excipientes de varios tipos de composiciones farmacéuticas se exponen en más detalle a continuación.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en cualquier forma adecuada para administración oral, parenteral, tópica, intranasal, oftálmica, ótica, rectal, intra-vaginal, o transdermal. Donde las composiciones están propuestas para administración parenteral, pueden ser formuladas para administración intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea o para suministro directo en un órgano o tejido objetivo por inyección, infusión u otros medios de suministro. El suministro puede ser por inyección de bolo, infusión a corto plazo o infusión a largo plazo y puede ser mediante suministro pasivo o mediante la utilización de una bomba de infusión adecuada.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estéril acuosas y no acuosas las cuales pueden contener anti-oxidantes, amortiguadores, bacteriostats, co-solventes, mezclas de solvente orgánico, agentes formadores de complejo de ciclodextrina, agentes emulsificantes (para formar y estabilizar formulaciones de emulsión), componentes de liposoma para formar liposomas, polímeros gelificables para formar geles poliméricos, protectores de liofilización y combinación de agentes para, entre otros, estabilizar el ingrediente activo en una forma soluble y proporcionar la formulación isotónica con la sangre del recipiente propuesto. Las formulaciones farmacéuticas para administración parenteral también pueden tomar la forma de suspensiones estériles acuosas y no acuosas las cuales pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes (R. G. Strickly, Solubilizing Excipients in oral and injectable formulations, Pharmaceutical Research, Vol 21(2) 2004, p 201-230).
Una molécula de fármaco que es ionizable puede ser solubilizada a la concentración deseada por ajuste de pH si elpKaestá suficientemente lejos del valor de pH de la formulación. El intervalo aceptable es pH 2-12 para administración intravenosa e intramuscular, pero subcutáneamente el intervalo es pH 2.7-9.0. El pH de la solución es controlado por ya sea la forma de sal del fármaco, ácidos/bases fuertes tales como ácido clorhídrico o hidróxido de sodio, o por soluciones de amortiguadores las cuales incluyen, pero no se limitan a soluciones amortiguadoras formadas de glicina, citrato, acetato, maleato, succinato, histidina, fosfato, tris(hidroximetil)-aminometano (TRIS), o carbonato.
La combinación de una solución acuosa y un solvente/tensoactivo orgánico soluble en agua (es decir, un co-solvente) es a menudo usada en formulaciones inyectables. Los solventes y tensoactivos orgánicos solubles en agua usados en las formulaciones inyectables incluyen, pero no se limitan a propilenglicol, etanol, polietilenglicol 300, polietilenglicol 400, glicerina, dimetilacetamida (DMA), N-metil-2-pirrolidona (NMP; Pharmasolve), dimetilosulfóxido (Dm So ), Solutol HS 15, Cremophor EL, Cremophor RH 60, y polisorbato 80. Tales formulaciones pueden ser usualmente, pero no son siempre, diluidas previo a la inyección.
El propilenglicol, PEG 300, etanol, Cremophor EL, Cremophor RH 60, y polisorbato 80 son los solventes y tensoactivos miscibles en agua completamente orgánicos usados en formulaciones inyectables comercialmente disponibles y pueden ser usadas en combinaciones entre sí. Las formulaciones orgánicas resultantes son usualmente diluidas al menos 2-veces previo al bolo IV o infusión IV.
Alternativamente, la solubilidad incrementada en agua se puede lograr mediante la complejación molecular con ciclodextrinas.
Las formulaciones pueden ser presentadas en contenedores de dosis unitaria o dosis múltiple, por ejemplo, ampolletas y viales sellados, y pueden ser almacenadas en una condición de secado por congelamiento (liofilizada), requiriendo solamente la adición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente previo al uso.
La formulación farmacéutica se puede preparar liofilizando un compuesto como se define en cualquiera de las formas de realización 1.0 a 1.7 o sal de adición de ácido del mismo. La liofilización se refiere al procedimiento de secar por congelamiento una composición. El secado por congelamiento y liofilización son por lo tanto usados en la presente como sinónimos. Un proceso típico es solubilizar el compuesto y la formulación resultante es clarificada, filtrada estéril y asépticamente transferida a contenedores apropiados para liofilización apropiada (por ejemplo, viales). En el caso de viales, son parcialmente tapados con tapones lyo. La formulación puede ser enfriada a congelamiento y sometida a liofilización bajo condiciones estándares y después herméticamente tapada formando una formulación de liófilo seco, estable. La composición típicamente tendrá un bajo contenido de agua residual, por ejemplo, menos de 5%por ejemplo, menos de 1 % en peso con base en el peso del liófilo.
La formulación de liofilización puede contener otros excipientes, por ejemplo, agentes espesantes, agentes dispersantes, amortiguadores, antioxidantes, preservativos y ajustadores de la tonicidad. Los amortiguadores típicos incluyen fosfato, acetato, citrato y glicina. Ejemplos de antioxidantes incluyen sales de ácido ascórbico, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, monotioglicerol, tiurea, hidroxitolueno butilado, hidroxil anisol butilado, y ácido etilendiaminatetraacético. Los preservativos pueden incluir ácido benzoico y sus sales, ácido sórbico y sus sales, alquilésteres de ácidopara-hidroxibenzoico, fenol, clorobutanol, alcohol bencílico, timerosal, cloruro de benzalconio y cloruro de cetilpiridinio. Los amortiguadores mencionados previamente, así como también dextrosa y cloruro de sodio, pueden ser usados para ajuste de tonicidad si es necesario.
Los agentes de volumen son en general usados en tecnología de liofilización para facilitar el proceso y/o proporcionar volumen y/o integridad mecánica a la torta liofilizada. El agente de volumen significa una sal soluble en agua, diluyente de partícula sólida que cuando se co-liofiliza con el compuesto o sal del mismo, proporciona una torta liofilizada físicamente estable, un proceso de secado por congelamiento óptimo y reconstitución rápida y completa. El agente de volumen también puede ser liofilizado para hacer la solución isotónica.
El agente de volumen soluble en agua puede ser cualquiera de los materiales sólidos inertes farmacéuticamente aceptables típicamente usados para liofilización. Tales agentes de volumen incluyen, por ejemplo, azúcares tales como glucosa, maltosa, sacarosa y lactosa; polialcoholes tales como sorbitol o manitol; amino ácidos tales como glicina; polímeros tales como polivinilpirrolidina; y polisacáridos tales como dextrano.
La relación del peso del agente de volumen al peso del compuesto activo está típicamente dentro del intervalo desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 5, por ejemplo, de aproximadamente 1 hasta aproximadamente 3, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 1 a 2.
Alternativamente, pueden ser proporcionados en una forma de solución la cual puede ser concentrada y sellada en un vial adecuado. La esterilización de formas de dosificación puede ser mediante filtración o por autoclave de los viales y sus contenidos en etapas apropiadas del proceso de formulación. La formulación suministrada puede requerir dilución o preparación adicional antes del suministro, por ejemplo, dilución en paquetes de infusión estéril adecuados.
Las soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas pueden ser preparadas a partir de polvos, gránulos y tabletas estériles.
En una forma de realización preferida de la invención, la composición farmacéutica está en una forma adecuada, por ejemplo, administración i.v., por ejemplo por inyección o infusión.
En otra forma de realización preferida, la composición farmacéutica está en una forma adecuada para administración sub cutánea (s.c.).
Las formas de dosificación farmacéutica adecuadas para administración oral incluyen tabletas, cápsulas, capletas, píldoras, grageas, jarabes, soluciones, polvos, gránulos, elixires y suspensiones, tabletas sublinguales, obleas o parches y parches bucales.
Las composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de la fórmula (I) pueden ser formuladas de conformidad con técnicas conocidas, véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, EE. UU.
En consecuencia, las composiciones de tableta pueden contener una forma de dosificación unitaria del compuesto activo junto con un diluyente o portador inerte tal como un azúcar o alcohol de azúcar, por ejemplo; lactosa, sacarosa, sorbitol o manitol; y/o un diluyente derivado no de azúcar tal como carbonato de sodio, fosfato de calcio, carbonato de calcio, o una celulosa o derivada de la misma tal como metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, y almidones tales como almidón de maíz. Las tabletas pueden también contener tales ingredientes estándares como agentes de unión y granulación tales como polivinilpirrolidona, desintegrantes (por ejemplo, polímeros reticulados hinchables tales como carboximetilcelulosa reticulada), agentes lubricantes (por ejemplo, estearatos), preservativos (por ejemplo, parabenos), antioxidantes (por ejemplo, BHT), agentes amortiguadores (por ejemplo, amortiguadores de fosfato o citrato), y agentes efervescentes tales como mezclas de citrato/bicarbonato. Tales excipientes son bien conocidos y no necesitan ser discutidos en detalle en la presente.
Las formulaciones de cápsula pueden ser de la variedad cápsula de gelatina dura o gelatina blanda y pueden contener el componente activo en forma sólida, semi-sólida o líquida. Las cápsulas de gelatina se pueden formar a partir de gelatina animal o sintética o equivalentes del mismo derivados de plantas.
Las formas de dosificación sólida (por ejemplo: tabletas, cápsulas etc.) pueden ser recubiertas o no recubiertas, pero típicamente tienen un recubrimiento, por ejemplo, un recubrimiento de película protectora (por ejemplo, una cera o barniz) 0 un recubrimiento de control de liberación. El recubrimiento (por ejemplo, un polímero de tipo Eudragit™) puede ser designado para liberar el componente activo en una ubicación deseada dentro del tracto gastro-intestinal. En consecuencia, el recubrimiento puede ser seleccionado para así degradar bajo ciertas condiciones de pH dentro del tracto gastrointestinal, de este modo liberando selectivamente el compuesto en el estómago o en el íleo o duodeno.
En lugar de, o en adición a, un recubrimiento, el fármaco puede ser presentado en una matriz sólida que comprende un agente de control de liberación, por ejemplo, un agente que retarda la liberación el cual puede ser adaptado para liberar selectivamente el compuesto bajo condiciones de variar la acidez o alcalinidad en el tracto gastrointestinal. Alternativamente, el material de matriz o recubrimiento que retarda la liberación, pueden tomar la forma de un polímero comestible (por ejemplo, un polímero de anhídrido maleico) el cual es sustancialmente continuamente reducido conforme la formad de dosificación pasa mediante el tracto gastrointestinal. Como una alternativa adicional, el compuesto activo puede ser formulado en un sistema de suministro que proporciona el control osmótico de la liberación del compuesto. La liberación osmótica y otras formulaciones de liberación sostenida o liberación retardada pueden ser preparadas de conformidad con métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica.
El compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 puede ser formulado con un portador y administrado en la forma de nanopartículas. Las nanopartículas ofrecen la posibilidad de penetración directa en la célula. Los sistemas de suministro de fármaco de nanopartículas se describen en “Nanoparticle Technology for Drug Delivery”, editado por Ram B Gupta and Uday B. Kompella, Informa Healthcare, ISBN 9781574448573, publicado el 13 de Marzo de 2006. Las nanopartículas para suministro de fármaco también se describen en J. Control. Release, 2003, 91 (1-2), 167-172, y en Sinhaet al.,Mol. Cáncer Ther. Agosto 1, (2006)5,1909.
Las formulaciones farmacéuticas pueden ser presentadas a un paciente en “paquetes para paciente” que contienen un curso de tratamiento completo en un envase único, usualmente un envase en ampolla. Los paquetes para pacientes tienen una ventaja sobre las prescripciones tradicionales, donde un farmacéutico divide un suministro del paciente de un farmacéutico a partir de un suministro de volumen, en el cual el paciente siempre tiene acceso al inserto de envase contenido en el paquete para paciente, normalmente faltando en las prescripciones del paciente. La inclusión de un inserto de paquete se ha mostrado por mejorar el cumplimiento del paciente con las instrucciones del especialista.
Las composiciones para uso tópico incluyen ungüentos, cremas, atomizadores, parches, geles, gotas líquidas e insertos (por ejemplo, insertos intraoculares). Tales composiciones pueden ser formuladas de conformidad con métodos conocidos.
Las composiciones para administración parenteral son típicamente presentadas como soluciones acuosas o aceitosas estériles o suspensiones finas, o pueden ser proporcionadas en polvo estéril finamente dividido para constitución extemporáneamente con agua estéril para inyección.
Ejemplos de formulaciones para administración rectal o intra-vaginal incluyen pesarios y supositorios los cuales pueden ser, por ejemplo, formados a partir de un material ceroso o moldeable configurado que contiene el compuesto activo.
Las composiciones para administración por inhalación pueden tomar la forma de composiciones en polvo inhalables o líquidos o atomizaciones en polvo, y pueden ser administradas en forma estándar usando dispositivos inhaladores en polvo o dispositivos de dispensión en aerosol. Tales dispositivos son bien conocidos. Para administración por inhalación, las formulaciones en polvo comprenden típicamente el compuesto activo en conjunto con un diluyente en polvo sólido inerte tal como lactosa.
Los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 en general serán presentados en forma de dosificación unitaria y, como tal, típicamente contendrán suficiente compuesto para proporcionar un nivel deseado de actividad biológica. Por ejemplo, una formulación puede contener desde 1 nanogramo hasta 2 gramos de ingrediente activo, por ejemplo, desde 1 nanogramo hasta 2 miligramos de ingrediente activo. Dentro de este intervalo, sub-intervalos particulares del compuesto son 0.1 miligramos hasta 2 gramos de ingrediente activo (más usualmente desde 10 miligramos hasta 1 gramo, por ejemplo, 50 miligramos hasta 500 miligramos), o 1 microgramo hasta 20 miligramos (por ejemplo, 1 microgramo hasta 10 miligramos, por ejemplo, 0.1 miligramos hasta 2 miligramos de ingrediente activo).
Para composiciones orales, una forma de dosificación unitaria puede contener desde 1 miligramos hasta 2 gramos, más típicamente 10 miligramos hasta 1 gramo, por ejemplo, 50 miligramos hasta 1 gramo, por ejemplo, 100 miligramos hasta 1 gramo, de compuesto activo.
El compuesto activo será administrado a un paciente en necesidad del mismo (por ejemplo, un paciente humano o animal) en una cantidad suficiente para lograr el efecto terapéutico deseado.
Métodos de Tratamiento
Se contempla que los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 serán útiles ya sea como agentes quimioterapéuticos únicos o, más usualmente, en terapia de combinación con agentes quimioterapéuticos o terapia de radiación en la profilaxis o tratamiento de un intervalo de estados o condiciones de enfermedad proliferativa. Ejemplos de tales estados y condiciones de enfermedad son expuestos anteriormente.
Ejemplos particulares de agentes quimioterapéuticos que pueden ser co-administrados con los compuestos de las Formas de realización 1.0 a 1.7 incluyen:
Inhibidores de Topoisomerasa I
Antimetabolitos
Agentes dirigidos a tubulina
Inhibidores de topoisomerasa II y aglutinantes de ADN
Inhibidores de EGFR (por ejemplo, Gefitinib - véase Biochemical Pharmacology 782009460-468) Inhibidores de mTOR (por ejemplo, Everolimus)
Inhibidores de la trayectoria de PI3K (por ejemplo, PI3K, PDK1)
Inhibidores de Akt
Agentes de alquilación (por ejemplo, temozolomida, ciclofosfamida)
Anticuerpos monoclonales (por ejemplo, anticuerpos dirigidos a CTLA-4, PD-1, PD-L1, CD52 o CD20)
Anti-Hormonas
Inhibidores de la transducción de señal
Inhibidores de proteasoma
Metil transferasas de ADN
Citocinas y retinoides
Agentes de daño al ADN activados por hipoxia (por ejemplo, Tirapazamina)
Inhibidores de aromatasa
Anticuerpos anti-Her2, (véase, por ejemplo, http://www.wipo.int/pctdb/en/wo.jsp?wo=2007056118), Inhibidores de angiogénesis
Inhibidores de HDAC
Inhibidores de MEK
Inhibidores de B-Raf
Inhibidores de ERK
Inhibidores de molécula pequeña HER2 (por ejemplo, lapatinib)
Inhibidores de tirosina-cinasa Bcr-Abl (por ejemplo, imatinib)
Inhibidores de CDK4/6, por ejemplo, Ibrance
Inhibidores de VEGFR
Inhibidores de IGFR-1
Inhibidores de la trayectoria de señalización Hedgehog
Ejemplos adicionales de agentes quimioterapéuticos que pueden ser co-administrados con un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 incluyen:
• Inhibidores de Torc 1
• Inhibidores de la trayectoria PI3K (por ejemplo, PI3K, PDK1)
• Inhibidores de EGFR (por ejemplo, Gefitinib- se refiere a: el Everolimus restaura la sensibilidad de gefitinib en las líneas de células de cáncer de pulmón de células no pequeñas resistentes, Biochemical Pharmacology 782009460 468)
• Taxanos (por ejemplo, paclitaxel, docetaxel, cabazitaxel)
• Agentes de Platino (por ejemplo, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino)
• Antraciclinas (por ejemplo, Doxorubicina)
• Inhibidores de proteínas de la familia Bcl-2 por ejemplo, ABT263 (navitoclax), un inhibidor extragrande de Bcl-2/Bcl (Bcl-xL)
Una combinación particular comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 junto con un inhibidor de EGFR tal como Gefitinib o Erlotinib o con un inhibidor de mTOR tal como Everolimus. Los compuestos también pueden ser administrados en conjunto con radioterapia.
Los compuestos pueden ser administrados durante un término prolongado para mantener los efectos terapéuticos benéficos o pueden ser administrados por un periodo corto solamente. Alternativamente, pueden ser administrados en una manera pulsátil o continua.
Los compuestos de la invención serán administrados en una cantidad efectiva, es decir, una cantidad la cual es efectiva para producir el efecto terapéutico deseado. Por ejemplo, la “cantidad efectiva” puede ser una cantidad de compuesto el cual, cuando se administra a un sujeto que sufre de cáncer, reduce el crecimiento del tumor, alivia los síntomas de la enfermedad y/o longevidad incrementada.
La cantidad de compuesto inhibidor de P70S6 de la invención administrado al sujeto dependerá del tipo y severidad de la enfermedad o condición y de las características del sujeto, tal como salid general, edad, sexo, peso corporal y tolerancia a fármacos. La persona experta será capaz de determinar las dosificaciones apropiadas dependiendo de estos y otros factores.
Los compuestos son en general administrados a un sujeto en necesidad de tal administración, por ejemplo, un paciente humano o animal, preferiblemente un humano.
Una dosis diaria típica del compuesto de cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 puede estar en el intervalo desde 100 picogramos hasta 100 miligramos por kilogramo de peso corporal, más típicamente 5 nanogramos hasta 25 miligramos por kilogramo de peso corporal, y más usualmente 10 nanogramos hasta 15 miligramos por kilogramo de peso corporal (por ejemplo, 10 nanogramos hasta 10 miligramos, y más típicamente 1 microgramo por kilogramo hasta 20 miligramos por kilogramo, por ejemplo, 1 microgramo hasta 10 miligramos por kilogramo) aunque dosis superiores o inferiores pueden ser administradas donde se requiera. El compuesto puede ser administrado en una base diaria o en una base repetida cada 2, o 3, o 4, o 5, o 6, o 7, o 10 o 14, o 21, o 28 días, por ejemplo.
En un esquema de dosificación particular, un paciente proporcionará una fusión de un compuesto por periodos de uno hora diaria hasta diez días en particular hasta cinco días por una semana, y el tratamiento repetido a un intervalo deseado tal como dos a cuatro semanas, en particular cada tres semanas.
Más particularmente, un paciente puede ser proporcionado con una infusión de un compuesto por periodos de una hora diariamente por 5 días y el tratamiento repetido cada tres semanas.
En otro esquema de dosificación particular, un paciente es proporcionado con una infusión durante 30 minutos hasta 1 hora seguidas por infusiones de mantenimiento de duración variable, por ejemplo, 1 hasta 5 horas, por ejemplo, 3 horas. En un esquema de dosificación particular adicional, un paciente es proporcionado con una infusión continua por un periodo de 12 horas hasta 5 días, en una infusión continua o particular de 24 horas hasta 72 horas.
Finalmente, sin embargo, la cantidad de compuesto administrado y el tipo de composición usada será conmensurada con la naturaleza de la enfermedad o condición fisiológica que será tratada y será a la discreción del especialista.
Métodos de Diagnóstico
Previo a la administración de un compuesto de cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7, un paciente puede ser seleccionado para determinar si una enfermedad o condición a partir de la cual el paciente es o puede estar sufriendo, es uno el cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra la cinasa p70S6.
Por ejemplo, una muestra biológica tomada a partir de un paciente puede ser analizada para determinar si una condición o enfermedad, tal como cáncer, que el paciente está o puede estar sufriendo es una la cual es caracterizada por una anormalidad genética o expresión de proteína anormal lo cual conduce a la regulación ascendente de la cinasa p70S6 o a sensibilización de una trayectoria para actividad normal de la cinasa p70S6 o para sobre-expresión de cinasa p70S6 fosforilada. El término regulación ascendente incluye expresión elevada o sobre-expresión, que incluye amplificación del gen (es decir, copias múltiples de gen) y expresión incrementada por un efecto transcripcional, e hiperactividad y activación, que incluye activación por mutaciones. De este modo, el paciente puede ser sometido a una prueba de diagnóstico para detectar un marcador característico de regulación ascendente de cinasa p70S6. El término diagnóstico incluye selección. Por marcador se incluyen marcadores genéticos que incluyen, por ejemplo, la medición de la composición de ADN para identificar mutaciones a p70S6. El término marcador también incluye marcadores los cuales son característicos de la regulación ascendente de p70S6, que incluyen actividad enzimática, niveles enzimáticos, estado enzimático (por ejemplo, fosforilado o no) y niveles de ARNm de las proteínas mencionadas anteriormente.
Los tumores con regulación ascendente de la cinasa p70S6 pueden ser particularmente sensibles a inhibidores de p70S6. Los tumores pueden ser preferiblemente seleccionados para regulación ascendente de p70S6. De este modo, el paciente puede ser sometido a una prueba de diagnóstico para detectar un marcador característico de regulación ascendente de p70S6. Las pruebas de diagnóstico son típicamente conducidas en una muestra biológica seleccionada a partir de muestras de biopsia tumoral, muestras de sangre (aislamiento y enriquecimiento de células tumorales desprendidas), biopsias de heces, esputo, análisis de cromosoma, fluido pleural, fluido peritoneal.
Los métodos para identificación y análisis de mutaciones y regulación ascendente de proteínas se conocen por las personas expertas en la técnica. Los métodos de selección podrían incluir, pero no se limitan a, métodos estándares tales como reacción en cadena de polimerasa de transcriptasa inversa (RT-PCR) o hibridización in situ.
En la selección por RT-PCR, el nivel de ARNm en el tumor es evaluado creando una copia de ADNc del ARNm seguido por amplificación del ADNc por PCR. Los métodos para amplificación de PCR, la selección de cebadores, y condiciones para amplificación, se conocen por una persona experta en la técnica. La manipulaciones de ácido nucleico y PCR se llevan a cabo por métodos estándares, como se describe, por ejemplo, en Ausubel, F.M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc., o Innis, M.A. et-al., eds. PCR Protocols: a guide to methods and applications, 1990, Academic Press, San Diego. Reacciones y manipulaciones que involucran técnicas de ácido nucleico también se describen en Sambrook et al., 2001, 3rd Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Alternativamente un kit comercialmente disponible para RT-PCR (por ejemplo, Roche Molecular Biochemicals) puede ser usado, o metodología como se expone en las Patentes Estadounidense 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659, 5,272,057, 5,882,864, y 6,218,529 e incorpora en la presente por referencia.
Un ejemplo de una técnica de hibridizaciónin situpara evaluar la expresión del ARNm podría ser hibridización por fluorescenciain situ(FISH) (véase Angerer, 1987 Meth. Enzymol., 152: 649).
En general, la hibridizaciónin situcomprende las siguientes etapas principales: (1) fijación del tejido que será analizado; (2) tratamiento de pre-hibridización de la muestra para incrementar la accesibilidad del ácido nucleico objetivo, y para reducir la unión no específica; (3) hibridización de la mezcla de ácidos nucleicos al ácido nucleico en la estructura o tejido biológico; (4) lavados post-hibridización para remover fragmentos de ácido nucleico no unidos en la hibridización, y (5) detección de los fragmentos de ácido nucleico hibridizado. Las sondas usadas en tales aplicaciones son típicamente etiquetadas, por ejemplo, con radioisótopos o reporteros fluorescentes. Las sondas preferidas son suficientemente largas, por ejemplo, desde aproximadamente 50, 100, o 200 nucleótidos hasta aproximadamente 1000 o más nucleótidos, para permitir la hibridización específica con el(los) ácido(s) nucleicos objetivos bajo condiciones rigurosas. Los métodos estándares para llevar cabo FISH se describen en Ausubel, F.M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview by John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-760-2; Mazo 2004, pps. 077-088; Series: Methods in Molecular Medicine.
Alternativamente, los productos de proteína expresados a partir de los mARNs pueden ser ensayados por inmunohistoquímica de muestras tumorales, inmunoensayo de fase sólida con placas microtituladoras, manchado Western, electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS de 2 dimensiones, ELISA, citometría de flujo y otros métodos conocidos en la técnica para la detección de proteínas específicas. Los métodos de detección podrían incluir el uso de anticuerpos específicos del sitio. La persona experta reconocerá que todas de tales técnicas bien conocidas para detección de la regulación ascendente de la cinasa p70S6 podrían ser aplicables en el presente caso.
Por consiguiente, en otra forma de realización de la invención (Forma de realización 4.1), se proporciona un método para el diagnóstico y tratamiento de un estado o condición de enfermedad mediado por la cinasa p70S6 en el cual el método comprende (i) seleccionar un paciente para determinar si una enfermedad o condición a partir de la cual el paciente está o puede estar sufriendo es uno el cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra la cinasa p70S6; y (ii) donde se indica que la enfermedad o condición a partir de la cual el paciente es de este modo susceptible, posteriormente administrar al paciente un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7.
En otra forma de realización (Forma de realización 4.2), se proporciona el uso de un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un estado o condición de enfermedad en un paciente quién ha sido seleccionado y ha sido determinado como que sufre de, o está en riesgo de sufrir de, una enfermedad o condición la cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra p70S6.
En una forma de realización adicional (Forma de realización 4.3), se proporciona un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento o profilaxis de un estado o condición de enfermedad en un paciente quién ha sido seleccionado y ha sido determinado como que sufre de, o está en riesgo de sufrir de, una enfermedad o condición la cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra p70S6.
En otra forma de realización de la invención (Forma de realización 4.4), se proporciona un método para el diagnóstico y tratamiento de un estado o condición de enfermedad caracterizada por la regulación ascendente de cinasa p70S6 o la presencia de una forma mutada de p70S6, en el cual el método comprende (i) seleccionar un paciente para determinar si una enfermedad o condición a partir de la cual el paciente está o puede estar sufriendo es uno el cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra la cinasa p70S6; y (ii) donde se indica que la enfermedad o condición a partir de la cual el paciente es de este modo susceptible, posteriormente administrar al paciente un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7.
En una forma de realización adicional (Forma de realización 4.5), se proporciona un método para el tratamiento de un estado o condición de enfermedad caracterizada por la regulación ascendente de cinasa p70S6 o la presencia de una forma mutada de p70S6, en el cual el método comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 a un paciente quién ha sido seleccionado y ha sido determinado como que sufre de, o está en riesgo de sufrir de, una enfermedad o condición la cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra p70S6.
En otra forma de realización (Forma de realización 4.6), se proporciona el uso de un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad, condición de trastorno como se define en cualquiera de las Formas de realización 2.1 a 2.23 en un paciente quién ha sido seleccionado y ha sido determinado como que sufre de, o está en riesgo de sufrir, de tal enfermedad, condición o trastorno el cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra p70S6.
En una forma de realización adicional (Forma de realización 4.7), se proporciona un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento o profilaxis de una enfermedad o trastorno cerebral en un paciente quién ha sido seleccionado y ha sido determinado como que sufre de, o está en riesgo de sufrir de, una enfermedad, condición de trastorno como se define en cualquiera de las Formas de realización 2.1 a 2.32 el cual podría ser susceptible a tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra p70S6.
Los cánceres de mama triple-negativos son caracterizados porque el cáncer no expresa los genes para el receptor de estrógeno (ER), receptor de progesterona (PR) o HER2. La presencia de ER y PR puede ser determinada por métodos de teñido inmuno-histoquímico estándares (véase, por ejemplo, Narod et al, Triple-Negative Breast Cancer: Clinical Features and Patterns of Recurrence, Clin Cancer Res August 1, 2007 13; 4429). Alternativamente, es posible evaluar la expresión del gen de estas proteínas por métodos tales como reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativo (QRT-PCR) con ensayos de PCR comercialmente disponibles (véase Jozefczuk et al, Quantitative real-time PCR-based analysis of gene expression, Methods Enzymol. 2011;500:99-109).
La sobre-expresión de la proteína HER2 puede ser evaluada usando el anticuerpo monoclonal CB11 en las secciones de parafina representativas de cada tumor usando la técnica de peroxidasa-antiperoxidasa para ensayo inmunohistoquímico. Un tumor se define por presentar positividad HER2 cuando se observa fuerte teñido de membrana completa en al menos 10 % de células tumorales (Narod et al, Clin Cancer Res August 1, 2007 13; 4429).
Por consiguiente, en otra forma de realización de la invención (Forma de realización 4.8), se proporciona un método para el diagnóstico y tratamiento de un cáncer como se define en cualquiera de las Formas de realización 2.7 a 2.9, en el cual el método comprende (i) seleccionar un paciente para determinar si un cáncer a partir del cual el paciente es o puede estar sufriendo es uno el cual no expresa el receptor de estrógeno, receptor de progesterona y/o HER2; y (ii) donde se indica que el cáncer el cual el paciente es de este modo susceptible a,, posteriormente administrar al paciente un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7.
En otra forma de realización (Forma de realización 4.9), se proporciona el uso de un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un cáncer como se define en cualquiera de las Formas de realización 2.7 a 2.9 en un paciente quién ha sido seleccionado y ha sido determinado como que sufre de, o está en riesgo de sufrir, a partir de un cáncer el cual no expresa el receptor de estrógeno, receptor de progesterona y/o HER2.
En una forma de realización adicional (Forma de realización 4.10), se proporciona un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento o profilaxis de un cáncer como se define en cualquiera de las Formas de realización 2.7 a 2.9 en un paciente quién ha sido seleccionado y ha sido determinado como que sufre de, o está en riesgo de sufrir, a partir de un cáncer el cual no expresa el receptor de estrógeno, receptor de progesterona y/o HER2.
El síndrome Frágil X ocurre como un resultado de una mutación del gen de retardo mental 1 de Frágil X (FMR1). En individuos afectados por FXS, el gen FMR1 contiene más de 45, más comúnmente más de 55 y en algunos casos más de 200 repeticiones del codón CGG comparado entre 5 y 44 veces, más comúnmente ya sea 29 o 30 veces, en individuos no afectados. Esta mutación resulta en una falla para expresar la proteína de retardo mental de frágil X FMRP que conduce a la producción excesiva de un arreglo de proteínas normalmente controladas por FMRP. Como el FXS es una enfermedad genética, el diagnóstico de FXS puede ser fácilmente realizado corriendo una prueba genética de una muestra de piel o sangre del paciente en cuestión. Los pacientes con FXS no expresan o tienen niveles de ARNm FMR1 muy inferiores que los individuos no afectados. Los niveles de ARNm de FMR1 pueden ser cuantificados usando PCR en tiempo real, los ensayos para los cuales son comercialmente disponibles. En adición, el tamaño de la repetición CGG puede ser determinado por aislamiento de ADN genómico por salación seguida por PCR. Véase, por ejemplo, Kumari et al. (HUMAN MUTATION, Vol. 35, No. 12, 1485-1494, 2014) por métodos de laboratorio para obtener estos datos. De este modo, los biomarcadores que permiten FXS para ser identificado en un paciente que incluye niveles de ARNm de FMR1 y la presencia de repeticiones de CGG de tamaño en exceso en el<a>D<n>genómico del paciente.
Por consiguiente, en otra forma de realización de la invención (Forma de realización 4.11), se proporciona un método para el diagnóstico y tratamiento de síndrome Frágil X, en el cual el método comprende (i) seleccionar un paciente por uno o más biomarcadores indicativos de síndrome Frágil X; y (ii) donde tal biomarcador es detectado, posteriormente administrar al paciente un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7.
En otra forma de realización (Forma de realización 4.12), se proporciona el uso de un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de síndrome Frágil X en un paciente quién ha sido seleccionado para y encontrado por albergar uno o más biomarcadores indicativos de síndrome Frágil X.
En una forma de realización adicional (Forma de realización 4.13), se proporciona un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento o profilaxis de síndrome Frágil X en un paciente quién ha sido seleccionado para y encontrado por albergar uno o más biomarcadores indicativos de síndrome Frágil X.
En otra forma de realización de la invención (Forma de realización 4.14), se proporciona un método para el diagnóstico y tratamiento de síndrome Frágil X, en el cual el método comprende (i) seleccionar un paciente para determinar si tienen niveles de ARNm de FMR1 indicativo de síndrome Frágil X; y (ii) donde se indica que tienen tales niveles de ARNm de FMR1, posteriormente administrar al paciente un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7.
En otra forma de realización (Forma de realización 4.15), se proporciona el uso de un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de síndrome Frágil X en un paciente quién ha sido seleccionado y se ha determinado por tener niveles de FMR1 mRNA indicativo de síndrome Frágil X.
En una forma de realización adicional (Forma de realización 4.16), se proporciona un compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 para uso en el tratamiento o profilaxis de síndrome Frágil X en un paciente quién ha sido seleccionado y se ha determinado por tener niveles de FMR1 mRNA indicativo de síndrome Frágil X.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 ilustra los resultados obtenidos de, en un modeloin vivode cáncer de mama triple negativo como se describe en el Ejemplo 3 en la presente, y en particular muestra el porcentaje de ratones libres de tumor contra el número de días después del implante del tumor cuando se trató con 100mg/kg del Ejemplo 1 o el vehículo.
La Figura 2 muestra el volumen del tumor contra el número de días después del implante del tumor cuando se trata con 100mg/kg del Ejemplo 1 o el vehículo, en el modeloin vivode cáncer de mama triple negativo como se describe en el Ejemplo 3 de la presente.
La Figura 3 muestra los pesos de los hígados de ratones objetivos en el Ejemplo 3.
La Figura 4 muestra los pesos del tumor de los ratones objetivos en el Ejemplo 3.
EJEMPLOSEJEMPLOS 1 A 2
Los compuestos de los Ejemplos 1 a 2 en la Tabla 1 siguiente son ilustrativos de la invención
Datos analíticos
Los espectros de 1H RMN se registraron en una máquina Bruker 400.
Métodos de LCMS:
El análisis de LCMS se llevó a cabo usando el(los) siguiente(s) método(s):
LCMS método 1
Gradiente de elución:
LCMS método 2
Gradiente de elución:
Métodos de HPLC quiral:
El análisis de HPLC se llevó a cabo utilizando los siguientes métodos:
HPLC quiral método 1
Se usó una elución isocrática:
HPLC Quiral método 2
Se usó una elución isocrática:
Esquema de Reacción Sintética A
Int A es comercialmente disponible y también puede ser sintetizado por los métodos descritos en la literatura (Jain, Rama et al, Solicitud Internacional PCT WO2009153313)
Donde X = CH o N y donde R = grupo protector tal como THP
El Compuesto 4 puede ser aislado como la base libre o una forma de sal, por ejemplo, sal de monoclorhidrato, dependiendo del método de aislamiento usado.
Síntesis de intermediarios:
Intermediario A: 6-Bromo-2-cloro-quinazol¡na
Una suspensión de 6-Bromo-quinazolin-2-ol (2 g, 8.89 mmol) en POCI3 (20 mL) se agitó a 110°C por 5 h. Después que se completó la reacción, la mezcla de reacción se concentróin vacuoy el residuo se vertió lentamente en hielo, resultando en un precipitado sólido. Lo sólido se filtró, se lavó con agua seguido por hexanos y después se secóin vacuopara proporcionar el producto del título (1,5 g, 69%).
El 6-Bromo-quinazolin-2-ol es comercialmente disponible y puede también ser sintetizado por métodos descritos en la literatura (Jain, Rama et al, PCT Int. Appl., 2009153313)
Intermediario B: 4-Cloro-1-(tetrah¡dro-p¡ran-2-¡l)-1H-p¡razolo[3.4-d1p¡rim¡d¡na
Etapa 1: 4-Cloro-1H-p¡razolo[3,4-d1pirimidina
[3,4-d]p¡rim¡d¡n-4-ol 1H-pirazolo (5.0 g, 36.7 mmol) se disolvió en POCh (61.2 mL, 100.67g, 657 mmol) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Etilamina de N,N-diisopropilo (10.2 mL, 58.5 mmol) se agregó en la mezcla de reacción y la mezcla resultante se sometió a reflujo a 110oC por 4 hrs. Después de 4 hrs, POCh se destiló bajo vacío a 40oC para obtener una goma espesa roja negruzca. La goma espesa se vertió en agua enfriada con hielo (25 mL) y se extrajo por DCM (25 mL * 3). La capa orgánica se concentró a 25 mL. El producto se usó como crudo por la siguiente etapa.
Etapa 2: 4-Cloro-1-(tetrah¡dro-p¡ran-2-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d1p¡r¡m¡d¡na
A una solución de 4-cloro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (2 g, 12.9 mmol) y ácido D-10-Camphor sulfónico (0.324 g, 1.39 mmol) en acetato de etilo anhidro (20 mL) se agregó lentamente 3,4-dihidropirano (6 mL, 5.53 g, 65.8 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción después se dejó agitar a temperatura ambiente por 24 h. Después de completar la reacción, como se juzgó por TLC, la mezcla de reacción se concentróin vacuoy se purificó por cromatografía en columna instantánea en gel de sílice eluyendo con 10% acetato de etilo en hexanos para proporcionar el producto del título (1.92 g, 62%).
Esquema de reacción sintético A se ilustra con referencia al Ejemplo 1 a continuación.
EJEMPLO 1
((ft)-1-Fenil-etil)-[6-(1H-pirazolo[3,4-d1pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina
Etapa 1: (6-Bromo-quinazolin-2-il)-((R)-1-fenil-etil)-amina
A una solución de 6-Bromo-2-cloro-quinazolina (10 g, 41.07 mmol) en DMSO (100 mL) se agregó (R)-(+)-1-feniletilamina (6.0 g, 49.51 mmol) y DIPEA (21.4 g, 28.84 mL, 166 mmol). La mezcla resultante se calentó a 80 oC por 12 h. La mezcla de reacción se vertió en agua fría resultando en un precipitado sólido. Lo sólido se recolectóin vacuoy se lavó con agua fría (3 x 100 mL) para proporcionar el producto del título el cual se usó en la siguiente etapa sin purificación (13.2 g, 98%).
Etapa 2: ((R)-1-Fenil-etil)-[6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-quinazolin-2-il]-amina
A una solución agitada de (6-Bromo-quinazolin-2-il)-((R)-1-fenil-etil)-amina (13.2 g, 40.22 mol) en 1,4-dioxano (149 mL) se agregó bis(pinacolato)diborano (17.4 g, 68.52 mmol) seguido por acetato de potasio (11.8 g, 120.2 mmol) bajo nitrógeno a TA. Se hizo burbujear gas nitrógeno a través de la mezcla resultante por 30 min. A la mezcla de reacción después se agregó complejo dicloruro de 1,1-bis(difenilfosfino)ferrocen paladio(II) diclorometano (1.6 g, 1.96 mmol). La mezcla de reacción después se calentó a 80 oC por 3 h. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 mL). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera (100 mL) seguido por agua (100 mL), después se separaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. La capa orgánica se concentróin vacuodespués se purificó por cromatografía en columna instantánea en sílice eluyendo con 15% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar el producto del título el cual se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional (19.9 g, >100%).
Etapa 3: ((R)-1-Fenil-etil)-{6-[1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il]-quinazolin-2-il}-amina
A una solución de ((R)-1-Fenil-etil)-[6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-quinazolin-2-il]-amina (19.9 g, 67.89 mmol) en una mezcla de THF:agua (267 mL, proporción 4:1) se agregó el Intermediario B (19.4 g, 81.28 mmol) seguido por Cs2COa (88.3 g, 271.01 mmol) bajo nitrógeno a TA. Se hizo burbujear gas nitrógeno a través de la mezcla resultante por 45 min y a la mezcla de reacción después se agregó tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (7.84 g, 6.78 mmol). La mezcla de reacción después se calentó a 80 oC por 4 h bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (2 x 300 mL). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (100 mL), se separaron después se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. La capa orgánica se concentróin vacuodespués se purificó por cromatografía en columna instantánea en sílice eluyendo con 45% de acetato de etilo en hexanos para proporcionar el producto del título (15 g, 49%).
Etapa 4: ((R)-1-Fenil-etil)-[6-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina
A una solución agitada de ((R)-1-Fenil-etil)-{6-[1-(tetrahidro-piran-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il]-quinazolin-2-il}-amina (15.0 g, 33.2 mol) en una mezcla de metanol (36 mL) y 1,4-dioxano (150 mL) se agregó 4N de HCl en 1,4-dioxano (41.5 mL) bajo nitrógeno a TA. La mezcla de reacción se agitó adicionalmente por 3 h a TA.
La mezcla de reacción se filtróin vacuo,y lo sólido filtrado se lavó con acetato de etilo (3 x 50 mL) después hexano (3 x 50 mL) para proporcionar la sal de HCl. Lo sólido se agregó al agua (100 mL) y la mezcla resultante se basificó a pH 8.3 usando solución de NaHCO3 acuosa saturada. La suspensión resultante se agitó por 30 min a TA después se filtró in vacuo. Lo sólido se suspendió nuevamente en agua en un embudo de Büchner y la suspensión resultante se agitó por 10 mins y después se filtróin vacuo.El proceso de suspensión en agua se repitió unas siete veces más. Lo sólido filtrado resultante se secóin vacuopara proporcionar el producto del título (9.0 g, 74%).
Opcionalmente, es posible retener el compuesto del título como la sal de HCl omitiendo el procedimiento de basificación.
EJEMPLO 2
[(R)-1-(3,4-Difluoro-fenil)-etil]-[6-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina
Etapa 1: ((R)-6-bromo-N-(1-(3,4-difluorofenil)etil)quinazolin-2-amina)
A una solución agitada del intermediario A (0.5 g, 2.05 mol) en DMSO (5 mL) se agregó (R)-1-(3,4-difluorofenil)etilamina (0.39 g, 2.48 mmol) y DIPEA (1.08g, 1.46 mL, 8.4 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se calentó a 80oC por 12 h. La mezcla de reacción se vertió en hielo agua resultando en un precipitado. Lo sólido se filtróin vacuoy se lavó con agua fría para proporcionar el producto del título (0.7 g, 94%).
Etapa 2: ((R)-N-(1-(3,4-difluorofenil)etil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)quinazolin-2-amina)
A una solución agitada de ((R)-6-bromo-N-(1-(3,4-difluorofenil)etil)quinazolin-2-amina) (0.70g, 1.92 mmol) en 1,4-dioxano (8 mL) se agregó bis(pinacolato)diborano (0.84 g, 3.31 mmol) seguido por acetato de potasio (0.57g, 5.80 mmol) bajo nitrógeno a TA. La mezcla resultante se purgó haciendo burbujear nitrógeno a través de por 30 minutos. A la mezcla de reacción se agregó 1, complejo de dicloruro 1-bis(difenilfosfino)ferrocenpaladio(II) diclorometano (0.08g, 0.098 mmol). La mezcla de reacción después se calentó a 80oC por 2 h. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (2 x 40 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 mL) después agua (20 mL), se separaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro antes de la concentraciónin vacuo.El residuo crudo se purificó por cromatografía en columna instantánea en gel de sílice, eluyendo con 7% de acetato de etilo en hexano para proporcionar el producto del título (0.94 g. >100%).
Etapa 3: (A/-((R)-1-(3,4-d¡fluorofen¡l)et¡l)-6-(1-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)qu¡nazol¡n-2-am¡na)
A una soluc¡ón ag¡tada de ((R)-N-(1-(3,4-d¡fluorofen¡l)et¡l)-6-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)qu¡nazol¡n-2-am¡na) (0.94 g, 2.29 mmol) en una mezcla de THF: agua (12.5 mL, 4:1) se agregó el Intermed¡ar¡o B (0.65 g, 2.72 mmol) segu¡do por CS2CO3 (2.97 g, 9.12 mmol) bajo n¡trógeno a TA. La mezcla se purgó hac¡endo burbujear gas n¡trógeno durante 45 m¡n, y a la mezcla resultante se agregó Tetraqu¡s(tr¡fen¡lfosf¡na)palad¡o(0) (0.26g, 0.225 mmol) a TA. La mezcla de reacc¡ón después se calentó a 80oC por 3 h. La mezcla de reacc¡ón resultante se vert¡ó en agua y el producto se extrajo usando acetato de et¡lo (2 x 30 mL). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con salmuera (20 mL) después agua (20 mL), se separaron y se secaron sobre sulfato de sod¡o anh¡dro, después se concentraronin vacuopara proporc¡onar el producto crudo. Lo crudo se pur¡f¡có por cromatografía en columna ¡nstantánea en gel de síl¡ce, eluyendo con 45% acetato de et¡lo en hexano para proporc¡onar el producto del título (0.6 g, 54%).
Etapa 4: ((R)-N-(1-(3,4-d¡fluorofen¡l)et¡l)-6-(1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)qu¡nazol¡n-2-am¡na)
A una soluc¡ón ag¡tada de (N-((R)-1-(3,4-d¡fluorofen¡l)et¡l)-6-(1-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-2-¡l)-1H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)qu¡nazol¡n-2-am¡na) (0.6g, 1.23 mmol) en una mezcla de metanol (1.4 mL) y 1,4-d¡oxano (6 mL) se agregó 4N de HCl en 1,4-d¡oxano (6 mL) bajo n¡trógeno a TA. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó ad¡c¡onalmente por 1 h a TA, punto en el cual se ha formado un prec¡p¡tado el cual se f¡ltróin vacuoy se lavó con acetato de et¡lo (3 x 30 mL) segu¡do por hexano (3 x 30 mL). Lo sól¡do después se agregó al agua (10 mL) y la mezcla resultante se bas¡f¡có hasta pH 8 usando soluc¡ón de NaHCO3 saturada, con ag¡tac¡ón por 30 m¡n. La mezcla de reacc¡ón se f¡ltróin vacuo,se lavó con agua, para proporc¡onar el producto del título (0.27 g, 54%).
EJEMPLO 3
ACTIVIDAD BIOLÓGICA
(a) Determinación de actividad inhibitoria de p70S6
Puede ser determinada la capacidad de compuestos de la invención para inhibir P70S6 cinasa usando el protocolo a continuación.
Composición de amortiguador:
20 mM de MOPS, 1 mM de EDTA, 0.01% de Brij-35, 5% de Glicerol, 0.1% de b-mercaptoetanol, 1 mg/mL de BSA Método:
Ensayo de cinasa p70S6K (h)
En un volumen de reacción final de 25 pL, p70S6K (h) (5-10 mU) se incubó con 8 mM de MOPS pH 7.0, 0.2 mM de EDTA, 100 pM de KKRNRTLTV, 10 mM de acetato de Mg y [Y-33P-ATP] (actividad específica aproximadamente 500 cpm/pmol, concentración como se requiere). La reacción se inició por la adición de la mezcla MgATP. Después de la incubación por 40 minutos a temperatura ambiente, la reacción se detuvo por la adición de 5 pL de 3% de una solución de ácido fosfórico.
10 pL de la mezcla de reacción es después manchada sobre a P30 estera de filtro y se lavó tres veces por 5 minutos en 75 mM ácido fosfórico y una vez en metanol antes del secado y conteo por escintilación.
(b) Evaluación de concentraciones de cerebro y plasma en un modelo de ratón en casetein vivo
Los compuestos de esta invención se evaluaron en un modelo de ratón en casetein vivopara determinar concentraciones de cerebro y plasma siguiendo la dosificación oral. Esto es un medio estándar y reconocido en la industria para valorar la penetración al cerebro de moléculas pequeñas (para artículo de literatura reciente, se refiere a: análisis de permeabilidadin vitro,farmacocinética y estudio de distribución del cerebro en ratones de imperatorina, isoimperatorina y cnidilina enRadix Angelicae Dahuricae, Fitoterapia, Volumen 85, Marzo 2013, Páginas 144-153). También se reconoce que las concentraciones del cerebro más altas (y relaciones más altas del cerebro: concentración de plasma) conduce a mayor exposición del cerebro - esto es claramente ventajoso si el cerebro es el sitio de acción.
Método experimental:
Para un estudio de casete único, se usaron ratones CD-1 machos (n=3 por punto de tiempo, tres puntos de tiempo: 1.0 hr, 3.0 hr y 8.0 hr).
Se dosificaron PO 5 compuestos por casete (nivel de dosis 2.5 mg/kg por compuesto, concentración de dosis 0.25 mg/ml, volumen de dosis 10.0 ml/kg).
Formulación para solubilizar compuestos: 10% de DMSO/90% de hidroxipropil-p-ciclodextrina (20% p/v acuoso) El muestreo fue terminal y se generaron matrices de plasma y cerebro. Para preparar las muestras de plasma, se precipitaron proteínas usando acetonitrilo. Para preparar muestras de cerebro, se realizaron homogeneización y precipitación de proteína con acetonitrilo. Las muestras se analizaron usando HPLC-TOF MS usando ionización de electrorrocío.
Las concentraciones de cerebro y plasma y las relaciones de cerebro-plasma observadas para los compuestos probados se fijaron en la tabla de abajo.
En resumen, los compuestos de la invención demuestran inhibición potente de p70S6K1. Los compuestos probados exhiben concentraciones de cerebro y plasma favorables en ratones siguiendo la dosificación oral, con concentraciones de cerebro en exceso de plasma, conduce a relaciones de cerebro:plasma mayor. En general se considera que una relación cerebro:plasma de >0.5 es favorable para tratamiento de enfermedades del cerebro.
(c) Evaluación de eficacia de compuestos en inicio y metástasis de tumor que activa el contador en un modelo in vivo de cáncer de mama negativo triple (TNBC)
Se conoce que S6K1 tiene un papel crucial en la reaparición de cánceres TNBC siguiendo la cirugía, principalmente a través de la actividad de S6K1 en promover la supervivencia de células de cáncer en el hospedero mediante fosforilación y activación de proteína Bcl2 anti-apoptótica y de Gli1 (Belleti 2014). Además, el S6K1 promueve la metástasis de células TNBC (Akar 2010, Hung 2014).
Para probar la eficacia de un inhibidor de S6K1 en un modeloin vivode inicio y metástasis de tumor, se estableció el siguiente experimento:
Se adquirieron un total de 22 ratones desnudos atímicos hembras (Hsd:Athymic Nude-Foxn1nu) de Harlan (RU) y se aclimataron por 7 días antes del comienzo del estudio. Los animales se alojaron en jaulas IVC (5 por jaula) con ratones individuales identificados por cada perforación. Todos los animales se dejaron con acceso libre a una dieta comercial certificada estándar y agua desinfectada durante el estudio. El cuarto de alojamiento se mantuvo bajo condiciones estándar: 20-24°C, 40-70% de humedad y un ciclo luz/oscuridad de 12 horas.
En el día-1, los animales se asignaron aleatoriamente a grupos de tratamiento como se indica en la tabla de abajo, y comenzó el tratamiento con fármaco. En el día 0, se implantaron las células MDA-MB-231 (1x106 en matrigel) en la segunda almohadilla de grada mamaria.
La ruta de dosificación fue PO y la formulación fue como sigue: 10% de DMSO/90% de hidroxipropil-p-ciclodextrina (20% p/v acuoso).
Grupos de Tratamiento:
Durante el experimento, se valoraron las mediciones de resultados siguientes:
(1) Tiempo de palpitación de tumor (latencia) (2) volumen de tumor (3) tumor y pesos de órgano como se mide de la metástasis (4) apariencia visual de nódulos metastásicos en los pulmones.
Resultados:
(1) Tiempo de Palpitación del Tumor
El compuesto del Ejemplo 1 demora el tiempo hasta la aparición (palpitación) del tumor y también disminuye la velocidad de incidencia (véase Figura 1) comparado al control.
(2) Volumen de Tumor
El ejemplo 1 induce una reducción significante en volumen de tumores (Figura 2) comparado al control.
Se tomaron los pesos del hígado y tumor en el día 21. El tratamiento con el compuesto del Ejemplo 1 conduce a una reducción en peso del hígado comparado al grupo tratado con vehículo lo cual puede indicar una reducción en lesiones metastásicas para el grupo de tratamiento (véase Figura 3). Además, los tumores de los animales tratados pesan significativamente menos (véase Figura 4).
(3) Apariencia Visual de Nódulos Metastásicos en los Pulmones
En la necropsia de los pulmones de los animales con vehículo y tratados se examinaron por la presencia de nódulos metastásicos.
Esto muestra que el ejemplo 1 es efectivo en la reducción de la carga metastásica en los pulmones del ratón que surge como metástasis espontánea de un tumor primario TNBC.
Tomados juntos esto indica que el Ejemplo 1, un inhibidor S6K1, es efectivo en (a) prevenir el inicio del tumor (b) limitar el crecimiento de tumores que se hace presente y (c) prevenir la metástasis al pulmón que surge del tumor primario.
(d) Evaluación de compuestos en ensayo de convulsión audiogénico, un modeloin vivodel Síndrome X Frágil (FXS)
Las convulsiones ocurren junto con FXS y autismo en hasta un cuarto de niños con estos trastornos (Berry-Kravis E (2002) Epilepsy in fragile X syndrome. Dev. Med.Child Neurol. 44(11):724-728). La susceptibilidad incrementada para convulsiones inducidas por sonido, llamadas convulsiones audiogénicas (AGS), es un fenotipo robusto y confiable en ratones FXS(Fmr1KO) que no ocurre en ratones WT. El ensayo de convulsión audiogénica (AGS) es un modelo de ratón bien documentado de FXS (Susceptibilidad de convulsiones audiogénicas en ratones transgénicos con síndrome X frágil, Epilepsia. 2000 Jan; 41(1):19-23). En tal modelo es posible para los compuestos de dosis observar efectos en susceptibilidad de los ratones para convulsiones audiogénicas. El siguiente experimento AGS siguiente se estableció para probar la eficacia de los compuestos de esta solicitud:
Se usó el diseño del siguiente experimento:
Cepa de ratones FXS usada: Antecedente FVB
Vehículo usado: 10% de DMSO/90% de hidroxipropil-p-ciclodextrina (20% p/v acuoso)
Los animales se valoraron en AGS después de 7 días consecutivos de dosificación.
Método:
La cámara experimental consiste de una jaula de plástico de dimensiones 25 x 25 x 47 cm en la cual un se ha montado un timbre de puerta (Electrical bell Heath Zenith, modelo 172C-A) en el techo de la jaula.
Los ratones se tomaron de su cuarto de alojamiento por uno y transferido en la cámara experimental y se dejó explorar al nuevo ambiente (ruido basal ~65 dB) por un periodo de 30 segundos después de tal punto la campana sonó (124 dB) por un periodo de 60 segundos.
Las respuestas del motor resultantes se clasificaron usando una escala modificada de una originalmente descrita por Jobe et al. (1973): sin respuesta (NR: pausa o exploración continua), funcionamiento salvaje (WR), convulsión (S) o paro respiratorio y/o muerte (RA). La velocidad de respuesta motora se define como el porcentaje de animales por grupo que responde a estímulos.
Resultados:
Los datos muestran que la incidencia de convulsiones audiogénicas y severidad de respuestas, ambas son reducidas por administración del Ejemplo 1.
EJEMPLO 4
FORMULACIONES FARMACÉUTICAS
(i) Formulación de Tableta
Se puede preparar una composición en tableta que contiene un compuesto como se define en cualquiera de una de las formas de realización 1.0 a 1.7 mezclando 50 mg del compuesto con 197 mg de lactosa (BP) como diluyente y 3 mg de estearato de magnesio como un lubricante y se comprime para formar una tableta de manera conocida. (ii) Formulación de Cápsula
Se preparó una formulación de cápsula mezclando 100 mg de un compuesto como se define en cualquiera de alguna de las formas de realización 1.0 a 1.7 con 100 mg de lactosa y rellenando la mezcla resultante en cápsulas de gelatina dura opacas estándar.
(i¡¡) Formulación Inyectable I
Se puede preparar una composición parenteral para administración por inyección disolviendo un compuesto como se define en cualquiera de alguna de las formas de realización 1.0 a 1.7 en agua que contiene 10% de propilen glicol para dar una concentración del compuesto activo de 1.5% en peso. La solución después se esteriliza por filtración, se rellenó en una ampolla y se selló.
(iv) Formulación Inyectable II
Una composición parenteral para inyección se preparó disolviendo en agua un compuesto como se define en cualquiera de alguna de las formas de realización 1.0 a 1.7 (2 mg/ml) y manitol (50 mg/ml), la solución se esterilizó por filtración y se rellenó en viales o ampollas sellables de 1 ml.
(v) Formulación Inyectable III
Se puede preparar una formulación por I.V para inyección disolviendo el compuesto de fórmula (1) como se define en cualquiera de alguna de las formas de realización 1.0 a 1.7 (por ejemplo, en una forma de sal) en agua a 20 mg/ml. Los viales después se sellaron y esterilizaron por autoclave.
(vi) Formulación Inyectable IV
Se puede preparar por suministro i.v., para inyección o infusión disolviendo el compuesto como se define en cualquiera de las Formas de realización 1.0 a 1.7 (por ejemplo, en una forma de sal) en agua que contiene un amortiguador (por ejemplo, 0.2 M de acetato, pH 4.6) a 20mg/ml. El vial después se selló y se esterilizó por autoclave. (vii) Formulación por Inyección Subcutánea
Se preparó una composición para administración sub-cutánea mezclando un compuesto como se define en cualquiera de alguna de las Formas de realización 1.0 a 1.7 con aceite de maíz grado farmacéutico para dar una concentración de 5 mg/ml. La composición se esterilizó y se rellenó en un contenedor adecuado.
(viii) Formulación Liofilizada
Se colocaron alícuotas del compuesto formulado como se define en cualquiera de alguna de las Formas de realización 1.0 a 1.7 en viales de 50 ml y se liofilizaron. Durante la liofilización, las composiciones se congelaron usando un protocolo de congelamiento de una etapa a (~45°C). La temperatura se elevó a -10°C para templado a -45°C, seguido por secado primario a 25°C por aproximadamente 3400 minutos, seguido por un secado secundario con las etapas incrementadas si la temperatura a 50°C. La presión durante el secado primario y secundario se establece a 80 militor.

Claims (7)

REIVINDICACIONES
1. ((R)-1-Fenil-etil)-[6-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
2. ((R)-1-Fenil-etil)-[6-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina según la reivindicación 1.
3. [(R)-1-(3,4-Difluoro-fenil)-etil]-[6-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.
4. [(R)-1-(3,4-Difluoro-fenil)-etil]-[6-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-quinazolin-2-il]-amina según la reivindicación 3.
5. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
6. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para uso en medicina.
7. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para uso en:
• el tratamiento de los cánceres de mama triple negativos;
• la prevención o el tratamiento de metástasis, por ejemplo, metástasis en el cerebro, huesos, pulmón, hígado, páncreas, riñón, vejiga y vesícula biliar, p.ej. metástasis cerebrales derivadas de cánceres de mama triple negativos;
• el tratamiento de gliomas y glioblastomas;
• el tratamiento de un trastorno del desarrollo neurológico (como el síndrome de X frágil); o
• el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa.
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