ES2964312T3 - Derivados de benzotiofeno, tienopiridina y tienopirimidina para la modulación de STING - Google Patents

Derivados de benzotiofeno, tienopiridina y tienopirimidina para la modulación de STING Download PDF

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Abstract

Un compuesto de fórmula (I): en la que: Y es (CH2)n, en la que n es de 2 a 4; W1 y W11 se seleccionan independientemente entre OH y ORP, donde RP es Me o Et. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de benzotiofeno, tienopiridina y tienopirimidina para la modulación de STING
Antecedentes de la invención
Los vertebrados están constantemente amenazados por la invasión de microorganismos y han desarrollado mecanismos de defensa inmune para eliminar patógenos infecciosos. En los mamíferos, este sistema inmunológico comprende dos ramas; inmunidad innata e inmunidad adaptativa. El sistema inmunológico innato es la primera línea de defensa que es iniciada por los receptores de reconocimiento de patrones (PRR) que detectan ligandos de los patógenos, así como patrones moleculares asociados con daños (Takeuchi 2010). Se ha identificado un número creciente de estos receptores, incluidos los receptores tipo Toll (TLR), los receptores de lectina tipo C, los receptores tipo gen I inducible por ácido retinoico (RIG-I) y los receptores tipo NOD (NLR) y también los sensores de ADN bicatenario. La activación de los PRR conduce a una regulación positiva de los genes implicados en la respuesta inflamatoria, incluidos los interferones tipo 1, las citocinas proinflamatorias y las quimiocinas que suprimen la replicación de patógenos y facilitan la inmunidad adaptativa.
La proteína adaptadora STING (Estimulador de Genes de Interferón), también conocida como TMEM 173, MPYS, MITA y ERIS, ha sido identificada como una molécula de señalización central en la respuesta inmune innata a los ácidos nucleicos citosólicos (Ishikawa 2008; documento WO2013/166000). La activación de STING da como resultado una regulación positiva de las rutas de IRF3 y NFkB que conducen a la inducción de interferones tipo 1, incluidos el interferón-p y otras citocinas. STING es crítica para las respuestas al ADN citosólico de origen patógeno o del huésped, y de ácidos nucleicos inusuales llamados dinucleótidos cíclicos (CDN).
Los CDN se identificaron por primera vez como mensajeros secundarios bacterianos responsables de controlar numerosas respuestas en la célula procariótica. Los CDN bacterianos, tales como el c-di-GMP, son moléculas simétricas caracterizadas por dos enlaces fosfodiéster 3',5'.
La activación directa de STING por CDN bacterianos se ha confirmado recientemente mediante cristalografía de rayos X (Burdette 2013). En consecuencia, los CDN bacterianos y sus análogos han atraído interés como posibles adyuvantes de vacunas (Libanova 2012; documentos WO2007/054279; WO2005/087238).
Más recientemente, se ha dilucidado la respuesta al ADN citosólico y se ha demostrado que implica la generación, por una enzima llamada GMP-AMP sintasa cíclica (cGAS, anteriormente conocida como C6orfl50 o MB21D1), de una nueva molécula de señalización CDN de mamíferos identificada como cGAMP, que luego activa STING. A diferencia de los CDN bacterianos, cGAMP es una molécula asimétrica caracterizada por sus enlaces fosfodiéster mixtos 2',5' y 3',5' (Gao 2013A). La interacción de cGAMP (II) con STING también se ha demostrado mediante cristalografía de rayos X (Cai 2014).
El interferón se describió por primera vez como una sustancia que podía proteger a las células de infecciones virales (Isaacs 1957). En el hombre, los interferones tipo I son una familia de proteínas relacionadas codificadas por genes en el cromosoma 9 y que codifican al menos 13 isoformas de interferón alfa (IFNa) y una isoforma de interferón beta (IFNp). El IFNa recombinante fue el primer terapéutico biológico aprobado y se ha convertido en una terapia importante en infecciones virales y en cáncer. Además de su actividad antiviral directa sobre las células, se sabe que los interferones son potentes moduladores de la respuesta inmunitaria y actúan sobre las células del sistema inmunitario.
La administración de un compuesto de molécula pequeña que podría modular la respuesta inmune innata, incluida la activación o inhibición de la producción de interferón tipo I y otras citocinas, podría convertirse en una estrategia importante para el tratamiento o la prevención de enfermedades humanas, incluidas infecciones virales y enfermedades autoinmunes. Este tipo de estrategia inmunomoduladora tiene el potencial de identificar compuestos que pueden ser útiles no solo en enfermedades infecciosas sino también en el cáncer (Zitvogel 2015), enfermedades alérgicas (Moisan 2006), enfermedades neurodegenerativas tales como la esclerosis lateral amiotrófica y la esclerosis múltiple (Lemos 2014; Cirulli 2015; Freischmidt 2015), otras afecciones inflamatorias tales como la enfermedad del intestino irritable (Rakoff-Nahoum 2004) y como adyuvantes de vacunas (Persing 2002; Dubensky 2013).
STING es esencial para la defensa antimicrobiana del huésped, incluida la protección contra una variedad de virus y bacterias de ADN y ARN (revisado en McNab 2015; Ma 2016). Herpesviridae, Flaviviridae, Coronaviridae, Papillomaviridae, Adenoviridae, Hepadnaviridae, Orto y Paramyxoviridae y Rhabdoviridae han desarrollado mecanismos para inhibir la producción de interferón tipo I mediada por STING y evadir el control inmunológico del huésped (Holm 2016; Ma 2015; Wu 2015; Liu 2016; Chen 2014; Lau 2013; Ding 2013; Nitta 2013; Sun 2012; Aguirre 2012; Ishikawa 2009). Por lo tanto, la activación de STING por moléculas pequeñas podría ser beneficiosa para el tratamiento de estas enfermedades infecciosas.
Por el contrario, la producción aumentada y prolongada de IFN tipo I se asocia con una variedad de infecciones crónicas, incluidas Mycobacteria (Collins 2015; Wassermann 2015; Watson 2015), Franciscella (Storek 2015; Jin 2011A), Chlamydia (Prantner 2010), Plasmodium (Sharma 2011) y HIV (Herzner 2015; Gao 2013B). De manera similar, se encuentra una producción excesiva de interferón tipo I entre pacientes con formas complejas de enfermedades autoinmunitarias. La evidencia genética en seres humanos y el apoyo de estudios en modelos animales respaldan la hipótesis de que la inhibición de STING da como resultado una reducción del interferón tipo I que provoca enfermedades autoinmunes (Crow 2006; Stetson 2008). Por lo tanto, los inhibidores de STING proporcionan un tratamiento a pacientes con producción crónica de interferón tipo I y citoquinas proinflamatorias asociada con infecciones o enfermedades autoinmunes complejas. Las enfermedades alérgicas están asociadas con una respuesta inmune a los alérgenos sesgada por Th2. Las respuestas Th2 están asociadas con niveles elevados de IgE, que, a través de sus efectos sobre los mastocitos, promueve una hipersensibilidad a los alérgenos, lo que resulta en los síntomas observados, por ejemplo, en la rinitis alérgica y el asma. En individuos sanos, la respuesta inmune a los alérgenos está más equilibrada con una respuesta mixta Th2/Th1 y de células T reguladoras. Se ha demostrado que la inducción de interferones tipo 1 produce una reducción de las citocinas de tipo Th2 en el entorno local y promueve respuestas Th1/Treg. En este contexto, la inducción de interferones tipo 1 mediante, por ejemplo, la activación de STING puede ofrecer beneficios en el tratamiento de enfermedades alérgicas tales como el asma y la rinitis alérgica (Huber 2010).
Se ha demostrado que los compuestos que se unen a STING y actúan como agonistas inducen interferones tipo 1 y otras citocinas durante la incubación con PBMC de ser humano. Los compuestos que inducen interferones de ser humano pueden ser útiles en el tratamiento de diversos trastornos, por ejemplo el tratamiento de enfermedades alérgicas y otras afecciones inflamatorias, por ejemplo rinitis alérgica y asma, el tratamiento de enfermedades infecciosas, enfermedades neurodegenerativas, síndromes precancerosos y cáncer, y también pueden ser útiles como composición inmunogénica o adyuvantes de vacunas. Los compuestos que se enlazan a STING pueden actuar como antagonistas y podrían ser útiles en el tratamiento, por ejemplo, de enfermedades autoinmunes. Se prevé que atacar STING con agentes activadores o inhibidores puede ser un enfoque prometedor para prevenir y tratar enfermedades y afecciones en las que la modulación de la ruta del IFN tipo 1 es beneficiosa, incluidas enfermedades inflamatorias, alérgicas y autoinmunes, enfermedades infecciosas, cáncer, síndromes precancerosos y como composiciones inmugénicas o adyuvantes de vacunas.
Los cánceres de piel y diversas infecciones virales de la piel implican un entorno inmunológico privilegiado y la activación de la respuesta inmune local a las lesiones puede ser un enfoque terapéutico tópico. Para tratar verrugas virales, cánceres de piel superficiales y queratosis actínicas premalignas pueden usarse agonistas de STING. Mediante un mecanismo de acción dual, la activación de STING (p. ej., mediante la administración de un parche con microagujas o una formulación tópica) se puede utilizar para controlar el HPV directamente mediante la producción de interferón antiviral tipo I e indirectamente mejorando la respuesta inmune adaptativa posterior a la activación inmune innata. El agonista de STING puede activar la respuesta inmune innata en la lesión e impulsar la respuesta de las células T anti-HPV.
La evidencia reciente ha indicado que la activación espontánea de la ruta STING dentro de las células dendríticas residentes en tumores conduce a la producción de IFN tipo I y a respuestas inmunes adaptativas contra los tumores. Además, la activación de esta ruta en las células presentadoras de antígenos (APC) dentro del microambiente tumoral impulsa el posterior cebado de las células T contra los antígenos asociados a tumores (Corrales 2015). Las Solicitudes de Patentes Internacionales WO2014/093936, WO2014/189805, WO2013/185052, WO2015/077354 y WO2015/185565 describen ciertos dinucleótidos cíclicos y su uso para inducir una respuesta inmune mediante la activación de STING.
Adicionalmente, como agonistas activos de STING se han descrito compuestos distintos de CDN.
Las Solicitudes de Patente WO2019/069269, WO2019/069270, WO2017/175156, y WO2017/175147 y Ramanjulu 2018 describen ciertos compuestos basados en amidobencimidazol y diamidobencimidazol y su uso en la modulación de STING.
Las Solicitudes WO2019/027858 y US2018/0093964 describen ciertos compuestos de benzo[b]tiofeno y su uso como agonistas de STING. El documento WO2019/195063 describe compuestos tipo azabenzotiofeno, y el documento WO2019/195124 describe los benzotiofenos y compuestos relacionados y su uso como agonistas de STING. El documento WO 2019/219820 describe benzotiofenos, tienopiridinas y tienopirimidinas como moduladores de STING. Las Solicitudes WO2018/234808, WO2018/234807, GB2563642A, WO2018/234805 describen ciertos compuestos tipo arilamido y su uso como moduladores de STING.
STING tiene polimorfismos conocidos, incluidos alelos que codifican histidina en la posición 232, que son refractarios a los CDN bis-3',5' (canónicos), pero no a los CDN 2',5'-3',5' (enlace mixto no canónico) (Diner 2013; Jin 2011B). Se ha informado que los polimorfismos de un solo nucleótido en el gen STING afectan la capacidad de respuesta a los CDN canónicos derivados de bacterias (Diner 2013; Gao 2013C; Conlon 2013). Se han informado cinco haplotipos principales de STING (alelos WT, R232H, HAQ, AQ y Q), que varían en las posiciones de los aminoácidos 71,230, 232 y 293 (Jin 2011B; Yi 2013). El documento WO00/78761 describe derivados de indolil benimidazol como agentes antibacterianos. S. M. Sherif, Monatshefte für Chemie 127,955-962 (1996) describe tiofeno, tieno[3,2-b]piridina y tieno[3,2-d]pirimidina como agentes antibacterianos. Wagnat Wahba Wardakhan describe que los tiofenos y sus derivados anulados tienen interés farmacéutico. El documento WO2008/08309 describe derivados de benzoimidazol y piridintiofeno que son inhibidores de la proteína quinasa.
Los compuestos de esta invención modulan la actividad de STING y, en consecuencia, pueden proporcionar un impacto terapéutico beneficioso en la prevención y el tratamiento de enfermedades, trastornos y/o afecciones en las que la modulación de STING (Estimulador de Genes de Interferón) es beneficiosa, por ejemplo para inflamación, enfermedades alérgicas y autoinmunes, enfermedades infecciosas, cáncer, síndromes precancerosos y como adyuvantes de vacunas. Cualquier referencia a métodos de tratamiento en los párrafos siguientes de esta descripción debe interpretarse como referencia a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o de diagnóstico).
Sumario de la invención
Un primer aspecto de la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I
en donde:
Y es (CH<2>)n, donde n es de 2 a 4;
W1 y W11 se seleccionan independientemente entre OH y ORP, donde RP es Me o Et;
A1 es CRA o N;
A2 es CRB o N;
A3 es CRC o N;
A4 es CRD o N;
donde no más que dos de A1, A2, A3 y A4 puede ser N;
uno o dos de RA, RB, RC Y RD, (si están presentes) se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH;
el resto de RA, RB, RC Y RD (si están presentes) son H;
A11 es CRAA o N
A12 es CRBB o N
A13 es CRCC o N
A14 es CRDD o N
donde no más de dos de A11, A12, A13 y A14 pueden ser N;
uno o dos de RAA, RBB, RCC and RDD (si están presentes) se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH;
el resto de RAA, RBB, RCC Y RDD (si están presentes) son H;
RC1, RC3 y RC4 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, OEt, ciano, CF<3>, CH<2>OH, CH<2>OMe, alquenilo C<2-4>y heterociclilo C<5>;
RC11 RC13 y RC14 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, OEt, ciano, CF<3>, CH<2>OH, CH<2>OMe, alquenilo C<2-4>y heterociclilo C<5>.
Un segundo aspecto de la presente invención proporciona un compuesto del primer aspecto para uso en un método de terapia. El segundo aspecto también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto del primer aspecto y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Un tercer aspecto de la presente invención proporciona un método de tratamiento o prevención de una enfermedad mejorada por la modulación de STING, que comprende administrar a un paciente que necesita tratamiento, un compuesto del primer aspecto de la invención o una composición farmacéutica del segundo aspecto de la invención. El tercer aspecto de la presente invención también proporciona el uso de un compuesto del primer aspecto de la invención en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir enfermedades mejoradas mediante la modulación de STING, y un compuesto del primer aspecto de la invención o composición farmacéutica del mismo para uso en el tratamiento o prevención de enfermedades mejoradas por la modulación de STING.
Definiciones
Cicloalquilo C<3-6>: La expresión ''cicloalquilo C<3-6>", como se usa en el presente documento, pertenece a un resto monovalente obtenido eliminando un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto de hidrocarburo cíclico saturado que tiene de 3 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de grupos cicloalquilo C<3-6>incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo (C<3>), ciclobutilo (C<4>), ciclopentilo (C<5>) y ciclohexilo (C6).
Heterociclilo C<3-7>: La expresión "heterociclilo C<3-7>", tal como se utiliza en el presente documento, pertenece a un resto monovalente obtenido eliminando un átomo de hidrógeno de un átomo del anillo de un compuesto heterocíclico monocíclico, cuyo resto tiene de 3 a 7 átomos en el anillo; de los cuales de 1 a 2 átomos son heteroátomos, elegidos de oxígeno o nitrógeno.
En este contexto, los sufijos (p. ej., C<3-7>) denotan el número de átomos del anillo, o el rango de número de átomos del anillo, ya sean átomos de carbono o heteroátomos.
Ejemplos de grupos heterociclilo C3-7 incluyen, pero no se limitan a, los derivados de:
N<1>: aziridina (C<3>), azetidina (C<4>), pirrolidina (tetrahidropirrol) (C<5>), pirrolina (p. ej., 3-pirrolina, 2,5-dihidropirrol) (C<5>), 2H-pirrol o 3H-pirrol (isopirrol, isoazol) (C<5>), pirrol (C<5>), piperidina (C6), dihidropiridina (C6), tetrahidropiridina (C6), piridina (C6), azepina (C<7>), azepano (C<7>);
N<2>: diazirina (C<3>) diazetidina (C<4>), imidazolidina (C<5>), pirazolidina (diazolidina) (C<5>), imidazolina (C<5>), pirazolina (dihidropirazol) (C<5>), imidazol (C<5>), pirazol (C<5>), piperazina (C6), pirazina (C6), pirimidina diazepina (C<7>), diazepano (C<7>);
O<1>: oxetano (C<4>), tetrahidrofurano (C<5>); oxano (C6);
O<2>: dioxetano (C<4>), dioxolano (C<5>); dioxano (C6), dioxol (C<5>);
N<1>O<1>: tetrahidrooxazol (C<5>), dihidrooxazol (C<5>), tetrahidroisoxazol (C<5>), dihidroisoxazol (C<5>), isoxazol (C<5>), oxazol (C<5>), morfolina (C6), tetrahidrooxazina (C6), dihidrooxazina (C6), oxazina (C6).
Alquilo C<1-4>: La expresión "alquilo C<1-4>", como se usa en el presente documento, pertenece a un resto monovalente obtenido eliminando un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono de un compuesto tipo hidrocarburo saturado que tiene de 1 a 4 átomos de carbono.
Ejemplos de grupos alquilo saturados incluyen, pero no se limitan a, Me: metilo (C<1>), Et: etilo (C<2>), Pr: propilo (C<3>), y Bu: butilo (C<4>).
Ejemplos de grupos alquilo lineales saturados incluyen, pero no se limitan a, metilo (C<1>), etilo (C<2>), nPr: n-propilo (C<3>), y nBu: n-butilo (C<4>).
Ejemplos de grupos alquilo ramificados saturados incluyen, pero no se limitan a, iPr: iso-propilo (C<3>, -C(CH3)2), iBu: isobutilo (C<4>), sBu: sec-butilo (C<4>) y tBu: terc-butilo (C<4>).
Alquenilo C<2>-<4>: La expresión "alquenilo C<2>-<4>", como se usa en el presente documento, pertenece a un grupo alquilo que tiene de 2 a 4 átomos de carbono y que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono.
Los ejemplos de grupos alquenilo insaturados incluyen, pero no se limitan a, etenilo (vinilo, -CH=CH<2>), 1-propenilo (-CH=CH-CH3), 2-propenilo (alilo, -CH-CH=CH<2>), isopropenilo (1 -metilvinilo, -C(CH3)=CH2) y butenilo (C<4>).
Fluoroalquilo C<1-4>: La expresión "fluoroalquilo C<1-4>", como se usa en el presente documento, pertenece a un grupo alquilo C<1-4>, sustituido con uno o más átomos de flúor.
Alcoxi: -OR en donde R es un grupo alquilo C<1-4>como se definió anteriormente. Se puede representar como -O-alquilo C<1>-<4>. Los ejemplos de grupos alcoxi incluyen, pero no se limitan a, metoxi (OMe, C<1>), etoxi (OEt, C<2>), propiloxi (C<3>), y butiloxi (C<4>).
Alquilcarbamoílo: -NHC(=O)OR en donde R es un grupo alquilo C<1-4>como se definió anteriormente. Los ejemplos de grupos alquilcarbamoílo incluyen, pero no se limitan a, -N(H)C(=O)OCH3, -N(H)C(=O)OCH2CH3, y -N(H)C(=O)OC(CH3)3.
Éster de alquilcarbamoilo: -OC(=O)NRR' en donde R y R' se seleccionan independientemente entre H y alquilo C<1-4>como se definió anteriormente. Los ejemplos de grupos éster de alquilcarbamoilo incluyen, pero no se limitan a, -OC(=O)N(CH3)2, y -OC(=O)N(H)CH3.
Éster de alquilcarboxilo: -OC(=O)OR en donde R es un grupo alquilo C<1-4>como se definió anteriormente. Los ejemplos de grupos éster de alquilcarboxilo incluyen, pero no se limitan a, -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH<3>)<3>, y -OC(=O)OCH(CH<3>)<2>.
Amino: -N(R)R' en donde R y R' se seleccionan independientemente entre H y alquilo C1-4 como se definió anteriormente. Los ejemplos de un grupo amino incluyen, pero no se limitan a, -NH<2>, -N(H)CH<3>, -N(H)C(CH<3>)<2>, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2.
Amido (carbamoilo, carbamilo, aminocarbonilo, carboxamida, aminoacilo): -C(=O)N(R)R' en donde R y R' se seleccionan independientemente entre H y alquilo C<1-4>como se definió anteriormente. Los ejemplos de un grupo amido incluyen, pero no se limitan a, C(=O)NH<2>, -C(=O)N(H)CH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)N(H)CH2CH3, y -C(=O)N(CH2CH3)2. Acilamido: -N(R)C(=O)R' en donde R y R' se seleccionan independientemente entre H y alquilo C<1-4>como se definió anteriormente. Los ejemplos de un grupo acilamido incluyen, pero no se limitan a, -N(H)C(=O)CH2CH3, -N(H)C(=O)CH3 y -N(CH3)C(=O)CH3.
Fenilo: -C<6>H<5>, en donde el fenilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos alquilo C<1-4>, uno o más grupos fluoroalquilo C<1-4>, uno o más grupos alcoxi C<1-4>, uno o más sustituyentes halo y uno o más sustituyentes ciano. Bencilo: -CH<2>-fenilo, en donde fenilo es como se definió anteriormente.
Éster (carboxilato, éster de ácido carboxílico, oxicarbonilo): -C(=O)OR, en donde R es un sustituyente éster, por ejemplo, un grupo alquilo C<1-4>, un grupo heterociclilo C<3-7>, o un grupo fenilo, como se definieron anteriormente, preferiblemente un grupo alquilo C<1-4>. Los ejemplos de grupos éster incluyen, pero no se limitan a, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3 y -C(=O)OPh.
Aciloxi (éster inverso): -OC(=O)R, en donde R es un sustituyente aciloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C<1-4>, un grupo heterociclilo C<3-7>, o un grupo fenilo, como se definieron anteriormente, preferiblemente un grupo alquilo C<1-4>. Ejemplos de grupos aciloxi incluyen, pero no se limitan a, -OC(=O)CH3 (acetoxi), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(c H3)3 y -OC(=O)Ph. Otros ejemplos de grupos aciloxi incluyen, pero no se limitan a, éster metílico (C<1>), éster etílico (C<2>), éster propílico (C<3>) y éster butílico (C<4>).
Aminoácido de origen natural: La expresión "un aminoácido de origen natural", como se utiliza en el presente documento, se refiere a un resto monovalente obtenido eliminando un átomo de hidrógeno de un grupo carboxilo o un grupo amino en uno de los compuestos tipo aminoácido que se encuentran comúnmente en la naturaleza (por ejemplo, alanina, arginina, asparagina, aspartato, cisteína, glicina, glutamina, glutamato, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina). El aminoácido se selecciona particularmente entre isoleucina, leucina y valina, más particularmente valina.
En cada uno de estos grupos, el átomo de carbono que está enlazado tanto a un grupo carboxilo como a uno amino se conoce como carbono a y los grupos carboxilo y amino a los que está unido son los grupos a -carboxilo y a -amino. Los aminoácidos de origen natural están opcionalmente sustituidos con un grupo protector en el grupo a-amino o cualquier otro grupo amino en el resto; los grupos protectores incluyen, pero no se limitan a, grupos acetilo, carbamato de metilo y de terc-butilo (boc).
Éster de fosfonato: -P(O)(OR)OR', en donde R y R' se seleccionan independientemente de alquilo C<1-4>como se definió anteriormente. Los ejemplos de un éster de fosfonato incluyen, pero no se limitan a, -P(O)(OEt)<2>.
Ciano: -C=N.
Pivaloiloximetilo: un grupo de fórmula
Incluye otras formas
A menos que se especifique lo contrario, en lo anterior se incluyen las formas iónicas, salinas, solvatadas y protegidas bien conocidas de estos sustituyentes. Por ejemplo, una referencia al ácido carboxílico (-COOH) también incluye la forma aniónica (carboxilato) (-COO-), una sal o solvato del mismo, así como formas protegidas convencionales. De manera similar, una referencia a un grupo amino incluye la forma protonada (-N+HR1R2), una sal o solvato del grupo amino, por ejemplo, una sal hidrocloruro, así como formas protegidas convencionales de un grupo amino. De manera similar, una referencia a un grupo hidroxilo también incluye la forma aniónica (-O-), una sal o solvato del mismo, así como formas protegidas convencionales.
Sales
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular una sal correspondiente del compuesto activo, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se tratan en Bergé et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
Por ejemplo, si el compuesto es aniónico o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico (p. ej., -COOH puede ser -COO-), entonces se puede formar una sal con un catión adecuado. Ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, iones de metales alcalinos tales como Na+ y K+, cationes alcalinotérreos tales como Ca2+ y Mg2+, y otros cationes tales como Al+3. Ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, ion amonio (es decir, NH<4>+) e iones amonio sustituidos (p. ej., NH<3>R+, NH<2>R<2>+, NHR<3>+, NR<4>+). Ejemplos de algunos iones amonio sustituidos adecuados son los derivados de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina, así como aminoácidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ion amonio cuaternario común es N(CH3)4+.
Si el compuesto es catiónico o tiene un grupo funcional que puede ser catiónico (p. ej., -NH<2>puede ser -NH<3>+), entonces se puede formar una sal con un anión adecuado. Los ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, los derivados de los siguientes ácidos inorgánicos: clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico y fosforoso.
Los ejemplos de aniones orgánicos adecuados incluyen, pero no se limitan a, los derivados de los siguientes ácidos orgánicos: 2-acetiloxibenzoico, acético, ascórbico, aspártico, benzoico, canforsulfónico, cinámico, cítrico, edético, etanodisulfónico, etanosulfónico, fumárico, gluceptónico, glucónico, glutámico, glicólico, hidroximaleico, hidroxinaftalenocarboxílico, isetiónico, láctico, lactobiónico, láurico, maleico, málico, metanosulfónico, múcico, oleico, oxálico, palmítico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fenilsulfónico, propiónico, pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, ácido sulfanílico, tartárico, toluenosulfónico, trifluoroacético y valérico. Ejemplos de aniones orgánicos poliméricos adecuados incluyen, pero no se limitan a, los derivados de los siguientes ácidos poliméricos: ácido tánico, carboximetilcelulosa.
Solvatos
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular un solvato correspondiente del compuesto activo. El término "solvato" se utiliza en el presente documento en el sentido convencional para referirse a un complejo de un soluto (p. ej., un compuesto activo, una sal de un compuesto activo) y un disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato puede denominarse convenientemente hidrato, por ejemplo, monohidrato, dihidrato, trihidrato, etc.
Profármacos
Los compuestos activos pueden prepararse como profármacos. En particular, los grupos carboxi que comprenden W1 y W11 pueden estar presente como grupos éster, amino (-NH<2>) y amino sustituido. En algunas realizaciones W1 y W11 pueden seleccionarse independientemente de OR1, NH<2>y NHR1, donde R1 se selecciona de:
(i) Cicloalquilo C<3-6>;
(ii) Heterociclilo C<3-7>opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado entre:
Metilo; y
Éster; y
(iii) Alquilo C<1-4>lineal o ramificado opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado entre:
Alcoxi;
Amino;
Amido;
Acilamido;
Aciloxi;
Éster de alquilcarboxilo;
Alquilcarbamoílo;
Éster de alquilcarbamoilo;
Fenilo;
Éster de fosfonato;
Heterociclilo C<3-7>opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado entre metilo y oxo; y
Un aminoácido de origen natural, opcionalmente N-sustituido con un grupo seleccionado entre metilo, acetilo y boc;
En algunas realizaciones, W1 y W11 son NH<2>. En estas realizaciones, los compuestos son de fórmula Ic:
donde A1-A4, A11-A14, RC1, RC3, RC4, RC11, RC13, RC14 e Y son como se definieron anteriormente.
En algunas realizaciones R1 es alquilo C<1-4>opcionalmente sustituido lineal o ramificado. En algunas realizaciones R1 es alquilo C<1-4>no sustituido. En algunas realizaciones R1 es alquilo C<1-4>sustituido.
Cuando R1 es alquilo Ci-4, en algunas de estas realizaciones R1 es metilo. En otras de estas realizaciones, R1 es etilo. En otras de estas realizaciones, R1 es propilo (p. ej., isopropilo, n-propilo). En otras de estas realizaciones, R1 es butilo (p. ej. iso-butilo, sec-butilo, terc-butilo).
En algunas realizaciones, R1 es cicloalquilo C<3-6>. En algunas de estas realizaciones, R1 es ciclopropilo. En otras de estas realizaciones, R1 es ciclobutilo. En otras de estas realizaciones, R1 es ciclopentilo. En otras de estas realizaciones, R1 es ciclohexilo.
En algunas realizaciones, R1 es heterociclilo C<3-7>. En algunas de estas realizaciones, el heterociclilo C<3-7>tiene un solo átomo de nitrógeno en el anillo. En algunas de estas realizaciones, R1 es azetidinilo, pirrolidinilo o piperidinilo. En algunas de estas realizaciones, R1 es azetidinilo. En algunas de estas realizaciones, R1 es piperidinilo.
Sustituyentes en R1
En algunas realizaciones, cuando R1 es heterociclilo C3-7, está sustituido con un grupo seleccionado entre metilo y éster. En algunas realizaciones, cuando R1 es heterociclilo C<3-7>, está sustituido con metilo. En algunas realizaciones, cuando R1 es heterociclilo C3-7, está sustituido con éster.
En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido con un grupo seleccionado entre alcoxi, amino, amido, acilamido, aciloxi, éster de alquilcarboxilo, alquilcarbamoilo, éster de alquilcarbamoilo, fenilo, éster de fosfonato, heterociclilo C<3-7>opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado entre metilo y oxo, y un aminoácido de origen natural, opcionalmente N-sustituido con un grupo seleccionado entre metilo, acetilo y boc. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido con un grupo seleccionado entre aciloxi y fenilo. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido con aciloxi, es pivaloiloximetilo; un grupo de fórmula:
En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido con aciloxi, es propanoiloxiisobutilo; un grupo de fórmula:
En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido con fenilo, es bencilo.
En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido con un aminoácido de origen natural, opcionalmente N-sustituido con un grupo seleccionado entre metilo, acetilo y boc. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido con un aminoácido de origen natural, el aminoácido de origen natural es valina. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido con un aminoácido de origen natural, el aminoácido de origen natural es N-metil-valina. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido con un aminoácido de origen natural, el aminoácido de origen natural es N-acetilvalina. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido con un aminoácido de origen natural, el aminoácido de origen natural es N-boc-valina.
En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido por amino. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido por amido. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido por acilamido. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1>-<4>lineal o ramificado, está sustituido con aciloxi. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido por éster de alquilcarboxilo. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido con alquilcarbamoílo. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido por éster de alquilcarbamoilo. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido por fenilo. En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido por éster de fosfonato.
En algunas realizaciones, cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado, está sustituido con heterociclilo C<3-7>, opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado entre metilo y oxo. En algunas realizaciones cuando R1 es alquilo C<1-4>lineal o ramificado sustituido por heterociclilo C<3-7>, el heterociclilo C<3-7>es dioxol, opcionalmente sustituido por un grupo seleccionado entre metilo y oxo.
Isómeros
Ciertos compuestos de la invención pueden existir en una o más formas geométricas, ópticas, enantiómeras, diastereómeras, epímeras, atrópicas, estereoisómeras, tautómeras, conformacionales o anómeras particulares, que incluyen, pero no se limitan a, formas cis y trans; formas E y Z; formas c, t y r; formas endo y exo; formas R, S y meso; Formas D y L; formas d e I; formas (+) y (-); formas ceto, enol y enolato; formas sin y anti; formas sinclinales y anticlinales; formas a y p; formas axiales y ecuatoriales; formas de barco, silla, torsión, sobre y media silla; formas M y P; formas A y A; formas Ra y Sa; y combinaciones de los mismos, en lo sucesivo denominados colectivamente "isómeros" (o "formas isómeras").
El término "quiral" se refiere a moléculas que tienen la propiedad de no superponerse a su compañero de imagen especular, mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas que son superponibles a su compañero de imagen especular.
El término "estereoisómeros" se refiere a compuestos que tienen una constitución química idéntica, pero se diferencian en la disposición de los átomos o grupos en el espacio.
"Diastereómero" se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y cuyas moléculas no son imágenes especulares unas de otras. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, p.ej., puntos de fusión, puntos de ebullición, propiedades espectrales y reactividades. Las mezclas de diastereómeros pueden separarse mediante procedimientos analíticos de alta resolución, tales como electroforesis y cromatografía.
"Enantiómeros" se refiere a dos estereoisómeros de un compuesto que son imágenes especulares no superponibles entre sí.
"Atropisómeros" se refiere a estereoisómeros de un compuesto que surgen debido a una rotación restringida alrededor de un enlace simple, en donde la rotación alrededor de dicho enlace está lo suficientemente impedida como para que se puedan aislar confórmeros individuales y los confórmeros son imágenes especulares no superponibles entre sí (enantiómeros) o estereoisómeros que no son imágenes especulares entre sí (diastereómeros).
Las definiciones y convenciones estereoquímicas utilizadas en este documento generalmente siguen S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994. Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por tanto, existir en diferentes formas estereoisómeras. Se pretende que todas las formas estereoisómeras de los compuestos de la invención, que incluyen, pero no se limitan a, diastereómeros, enantiómeros y atropisómeros, así como mezclas de los mismos tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir, tienen la capacidad de rotar el plano de la luz polarizada. Al describir un compuesto ópticamente activo, los prefijos D y L, o R y S, M y P, A y A, Ra y Sa se utilizan para denotar la configuración absoluta de la molécula alrededor de su(s) centro(s) quiral(es). Los prefijos d e I o (+) y (-) se emplean para designar el signo de rotación de la luz polarizada plana por el compuesto, donde (-) o I significa que el compuesto es levógiro. Un compuesto con el prefijo (+) o d es dextrógiro. Para una estructura química dada, estos estereoisómeros son idénticos excepto que son imágenes especulares unos de otros. Un estereoisómero específico también puede denominarse enantiómero, y una mezcla de dichos isómeros a menudo se denomina mezcla enantiómera. Una mezcla 50:50 de enantiómeros se denomina mezcla racémica o racemato, que puede ocurrir cuando no ha habido estereoselección o estereoespecificidad en una reacción o proceso químico. La expresión "mezcla racémica" y el término "racemato" se refieren a una mezcla equimolar de dos especies enantiómeras, desprovistas de actividad óptica.
De particular relevancia para los compuestos de la presente invención es el atropismo ilustrado a continuación, donde hay una rotación restringida alrededor del enlace simple entre los dos sistemas de anillos heteroaromáticos en cada mitad del dímero:
Los dos compuestos del racemato son imágenes especulares no superponibles entre sí, mientras que los dos mesocompuestos dibujados pueden superponerse mediante una rotación de 180° alrededor de la línea de puntos, donde A1 = A11, A2 = A12, A3 = A13, A4 = A14, W1 = W11, RC1 = RC11, RC3 = RC13 y RC4 = RC14.
Téngase en cuenta que, excepto como se trata a continuación para las formas tautómeras, específicamente excluidas del término "isómeros", como se usa en este documento, son los isómeros estructurales (o constitucionales) (es decir, isómeros que difieren en las conexiones entre átomos en lugar de simplemente por la posición de los átomos en el espacio). Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH<3>, no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, un grupo hidroximetilo, -CH<2>OH. De manera similar, una referencia al orto-clorofenilo no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, el meta-clorofenilo. Sin embargo, una referencia a una clase de estructuras bien puede incluir formas estructuralmente isómeras que caen dentro de esa clase (p. ej., alquilo C<1-7>incluye n-propilo e iso-propilo; butilo incluye n-, iso-, sec- y terc-butilo; metoxifenilo incluye orto-, meta- y parametoxifenilo).
La exclusión anterior no se aplica a las formas tautómeras, por ejemplo, formas ceto, enol y enolato, como en, por ejemplo, los siguientes pares tautómeros: ceto/enol (ilustrado a continuación), imina/enamina, amida/iminoalcohol, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enotiol, N-nitroso/hidroxiazo y nitro/aci-nitro.
c e t o e n o l e n o l a t o
El término "tautómero" o la expresión "forma tautómera" se refieren a isómeros estructurales de diferentes energías que son interconvertibles a través de una barrera baja de energía. Por ejemplo, los tautómeros de protones (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones mediante la migración de un protón, tal como las isomerizaciones ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones por reorganización de algunos de los electrones de enlace.
Téngase en cuenta que en el término "isómero" se incluyen específicamente compuestos con una o más sustituciones isotópicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 1H, 2H (D), y 3H (T); C puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 12C, 13C, y 14C; O puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 16O y 18O; y similares.
Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse a los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero no limitados a, 2H (deuterio, D), 3H (tritio), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl, y 125I. Diversos compuestos isotópicamente marcados de la presente invención, por ejemplo aquellos en los que están incorporados isótopos radiactivos tales como 3H, 13C, y 14C. Dichos compuestos marcados isotópicamente pueden ser útiles en estudios metabólicos, estudios cinéticos de reacción, técnicas de detección o de obtención de imágenes, tales como la tomografía por emisión de positrones (PET) o la tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT), incluidos ensayos de distribución en tejidos de fármacos o sustratos, o en tratamientos radiactivos de pacientes. Los compuestos terapéuticos sustituidos o marcados con deuterio de la invención pueden tener propiedades DMPK (metabolismo y farmacocinética de fármacos) mejoradas, relacionadas con la distribución, el metabolismo y la excreción (ADME). La sustitución con isótopos más pesados, tales como el deuterio, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una mayor vida media in vivo o requisitos de dosificación reducidos. Un compuesto marcado con 18F puede ser útil para estudios PET o SPECT. Los compuestos marcados isotópicamente de esta invención y sus profármacos generalmente se pueden preparar llevando a cabo los procedimientos descritos en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones descritos a continuación sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible por un reactivo no marcado isotópicamente. Además, la sustitución con isótopos más pesados, particularmente deuterio (es decir, 2H o D) pueden proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo una mayor vida media in vivo o menores requisitos de dosificación o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que en este contexto el deuterio se considera un sustituyente. La concentración de dicho isótopo más pesado, específicamente el deuterio, puede definirse mediante un factor de enriquecimiento isotópico. En los compuestos de esta invención, cualquier átomo no designado específicamente como un isótopo particular pretende representar cualquier isótopo estable de ese átomo.
A menos que se especifique lo contrario, una referencia a un compuesto particular incluye todas esas formas isómeras, incluidas (total o parcialmente) mezclas racémicas y otras mezclas de las mismas. Los métodos para la preparación (p. ej., síntesis asimétrica) y separación (p. ej., cristalización fraccionada y medios cromatográficos) de tales formas isómeras son conocidos en la técnica o se obtienen fácilmente adaptando los métodos enseñados en el presente documento, o métodos conocidos, de una manera conocida.
Indicaciones terapéuticas
Los compuestos descritos en el presente documento pueden proporcionar un beneficio terapéutico en una serie de trastornos, en particular, en el tratamiento o prevención de enfermedades mejoradas por la modulación de STING.
Un aspecto de la invención proporciona métodos de tratamiento o prevención de enfermedades y trastornos mediados por STING, en los que es beneficioso agonizar al STING. Las enfermedades/trastornos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, cáncer y enfermedades infecciosas (tales como las causadas por virus, por ejemplo, HIV, HBV, HCV, HPV y gripe, y bacterias). Otro aspecto de la invención proporciona el uso de un agonista de STING como adyuvante de vacuna.
En una realización, esta invención proporciona un compuesto de la invención para uso en terapia. Esta invención también proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia. Esta invención proporciona particularmente un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por STING.
Esta invención también proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como adyuvante de vacunas. Por lo tanto, también se proporciona una composición inmunogénica o adyuvante de vacunas que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización adicional de la invención, se proporciona una composición que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más agentes inmunoestimulantes.
En otra realización, esta invención proporciona un compuesto de la invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por STING y/o para su uso como una composición inmunogénica o un adyuvante de vacunas. En otra realización, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en la mejora de una lesión o daño orgánico sufrido como resultado de una enfermedad o trastorno mediado por STING.
La invención proporciona además el uso de un compuesto de la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por STING. La invención proporciona además el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo, particularmente una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por STING, por ejemplo, las enfermedades y trastornos mencionados en el presente documento.
La invención proporciona además el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo, particularmente una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de una vacuna. Se proporciona además el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de una composición inmunogénica que comprende un antígeno o una composición antigénica, para el tratamiento o prevención de enfermedades. Se proporciona además el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de una composición de vacuna que comprende un antígeno o una composición antigénica, para el tratamiento o prevención de enfermedades.
En otra realización, la invención se dirige a un método para tratar una enfermedad o trastorno mediado por STING que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de esta invención a un ser humano que lo necesite. En otra realización, la invención se dirige a un método para tratar una enfermedad o trastorno mediado por STING que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I o una sal, particularmente una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un ser humano que lo necesita.
Enfermedades infecciosas
Los compuestos de esta invención se pueden usar para tratar una enfermedad infecciosa, que es cualquier enfermedad instigada por o coincidente con una infección por un patógeno. Los patógenos se definen en términos generales como cualquier especie de organismo que es extraño al entorno de los tejidos humanos. Los patógenos que causan enfermedades comunes incluyen bacterias (muchas como la TB), virus (muchos como el HBV, el HIV y la gripe) y protozoos parásitos (como el P. falciparum que causa la malaria). Los compuestos de esta invención se pueden usar para tratar enfermedades infecciosas derivadas de bacterias, tales como infección por TB (Mycobacterium tuberculosis), Clamidia, infección por Tularemia (Francisella tularensis), infección por Plasmodium o infecciones por virus de ADN o ARN. Los compuestos de esta invención se pueden usar para tratar enfermedades infecciosas derivadas de las familias de virus de ADN: Herpesviridae (virus del herpes simple-1, virus asociado al sarcoma de Kaposi y virus de Epstein-Barr), Papillomaviridae (virus del papiloma humano), Adenovirus y Hepadnaviridae (virus de la hepatitis B). Ejemplos de familias de virus de ARN incluyen Retroviridae (virus de inmunodeficiencia humana), Flaviviridae (virus del dengue, virus de la hepatitis C), Orthomyxoviridae (gripe) y Coronaviridae (coronavirus de ser humano y coronavirus del SARS).
Cáncer
Tal como se usan en el presente documento, los términos "cáncer", "neoplasia" y "tumor" se usan indistintamente y, ya sea en forma singular o plural, se refieren a células que han sufrido una transformación maligna que las convierte en patológicas para el organismo huésped. Las células cancerosas primarias se pueden distinguir fácilmente de las células no cancerosas mediante técnicas bien establecidas, en particular el examen histológico. La definición de célula cancerosa, tal como se utiliza en el presente documento, incluye no sólo una célula cancerosa primaria, sino cualquier célula derivada de un ancestro de célula cancerosa. Esto incluye células cancerosas metastatizadas y cultivos y líneas celulares in vitro derivados de células cancerosas. Cuando se hace referencia a un tipo de cáncer que normalmente se manifiesta como un tumor sólido, un tumor "clínicamente detectable" es aquel que es detectable en base a la masa tumoral; p. ej., mediante procedimientos tales como un barrido de tomografía computarizada (CT), obtención de imágenes por resonancia magnética (MRI), rayos X, ultrasonidos o palpación en el examen físico, y/o que sea detectable debido a la expresión de uno o más antígenos específicos del cáncer en una muestra que se puede obtener de un paciente. Los tumores pueden ser un cáncer hematopoyético (o hematológico o hematológico o relacionado con la sangre), por ejemplo, cánceres derivados de células sanguíneas o inmunes, que pueden denominarse "tumores líquidos". Ejemplos específicos de afecciones clínicas basadas en tumores hematológicos incluyen leucemias, tales como leucemia mielocítica crónica, leucemia mielocítica aguda, leucemia linfocítica crónica y leucemia linfocítica aguda; neoplasias malignas de células plasmáticas tales como mieloma múltiple, MGUS y macroglobulinemia de Waldenstrom; linfomas tales como linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin; y similares.
El cáncer puede ser cualquier cáncer en el que esté presente un número anormal de células blásticas o una proliferación celular no deseada o que se diagnostique como cáncer hematológico, incluidas neoplasias malignas linfoides y mieloides. Las neoplasias malignas mieloides incluyen, pero no se limitan a, leucemia mieloide (indiferenciada o diferenciada) aguda (o mielocítica o mielógena o mieloblastos), leucemia promieloide aguda (o promielocítica o promielogénica o promieloblástica), leucemia mielomonocítica (o mielomonoblástica) aguda, leucemia monocítica (o monoblástica) aguda, eritroleucemia y leucemia megacariocítica (o megacarioblástica). Estas leucemias pueden denominarse en conjunto leucemia mieloide (o mielocítica o mielógena) aguda (AML). Las neoplasias malignas mieloides también incluyen trastornos mieloproliferativos (MPD), que incluyen, pero no se limitan a, leucemia mielógena (o mieloide) crónica (CML), leucemia mielomonocítica crónica (CMML), trombocitemia esencial (o trombocitosis) y policitemia vera (PCV). Las neoplasias malignas mieloides también incluyen mielodisplasia (o síndrome mielodisplásico o MDS), que puede denominarse anemia refractaria (RA), anemia refractaria con exceso de blastos (RAEB) y anemia refractaria con exceso de blastos en transformación (RAEBT); así como mielofibrosis (MFS) con o sin metaplasia mieloide agnogénica.
Los cánceres hematopoyéticos también incluyen neoplasias malignas linfoides, que pueden afectar a los ganglios linfáticos, el bazo, la médula ósea, la sangre periférica y/o los sitios extraganglionares. Los cánceres linfoides incluyen neoplasias malignas de células B, que incluyen, pero no se limitan a, linfomas no Hodgkin de células B (B-NHL). Los B-NHL pueden ser indolentes (o de bajo grado), de grado intermedio (o agresivos) o de alto grado (muy agresivos). Los linfomas de células B indolentes incluyen el linfoma folicular (FL); linfoma linfocítico pequeño (SLL); linfoma de zona marginal (MZL), que incluye MZL ganglionar, MZL extraganglionar, MZL esplénico y MZL esplénico con linfocitos vellosos; linfoma linfoplasmocítico (LPL); y linfoma de tejido linfoide asociado a mucosas (MALT o zona marginal extraganglionar). Los B-NHL de grado intermedio incluyen linfoma de células del manto (MCL) con o sin afectación leucémica, linfoma difuso de células grandes (DLBCL), linfoma folicular de células grandes (o grado 3 o grado 3B) y linfoma mediastínico primario (PML). Los B-NHL de alto grado incluyen el linfoma de Burkitt (BL), el linfoma similar a Burkitt, el linfoma de células pequeñas no escindidas (SNCCL) y el linfoma linfoblástico. Otros B-NHL incluyen linfoma inmunoblástico (o inmunocitoma), linfoma de derrame primario, linfomas asociados al HIV (o relacionados con el SIDA) y trastorno linfoproliferativo postrasplante (PTLD) o linfoma. Las neoplasias malignas de células B también incluyen, pero no se limitan a, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia prolinfocítica (PLL), macroglobulinemia de Waldenstrom (WM), leucemia de células pilosas (HCL), leucemia de linfocitos granulares grandes (LGL), leucemia linfoide (o leucemia linfocítica o linfoblástica) aguda y la enfermedad de Castleman. NHL también puede incluir linfoma no Hodgkin de células T (T-NHL), que incluyen, pero no se limitan a, linfoma no Hodgkin de células T no especificado (NOS), linfoma periférico de células T (PTCL), linfoma anaplásico de células grandes (ALCL), trastorno linfoide angioinmunoblástico (AILD), linfoma nasal de células asesinas naturales (NK)/células T, linfoma gamma/delta, linfoma cutáneo de células T, micosis fungoide y síndrome de Sezary.
Los cánceres hematopoyéticos también incluyen el linfoma (o enfermedad) de Hodgkin, incluido el linfoma de Hodgkin clásico, el linfoma de Hodgkin esclerosante nodular, el linfoma de Hodgkin de celularidad mixta, el linfoma de Hodgkin con predominio de linfocitos (LP), el linfoma de Hodgkin LP nodular y el linfoma de Hodgkin con depleción de linfocitos. Los cánceres hematopoyéticos también incluyen enfermedades o cánceres de células plasmáticas como el mieloma múltiple (MM), que incluyen MM latente, gammapatía monoclonal de significado indeterminado (o desconocido o poco claro) (MGUS), plasmocitoma (hueso, extramedular), linfoma linfoplasmacítico (LPL), macroglobulinemia de Waldenstrom, leucemia de células plasmáticas y amiloidosis primaria (AL). Los cánceres hematopoyéticos también pueden incluir otros cánceres de células hematopoyéticas adicionales, incluidos leucocitos polimorfonucleares (o neutrófilos), basófilos, eosinófilos, células dendríticas, plaquetas, eritrocitos y células asesinas naturales. Los tejidos que incluyen células hematopoyéticas denominados en el presente documento "tejidos de células hematopoyéticas" incluyen médula ósea; sangre periférica; timo; y tejidos linfoides periféricos, tales como bazo, ganglios linfáticos, tejidos linfoides asociados con mucosas (tales como los tejidos linfoides asociados al intestino), amígdalas, placas de Peyer y apéndice, y tejidos linfoides asociados con otras mucosas, por ejemplo, los revestimientos bronquiales.
Ejemplos de enfermedades y afecciones cancerosas en las que los compuestos de esta invención pueden tener efectos antitumorales potencialmente beneficiosos incluyen, pero no se limitan a, cánceres de pulmón, hueso, páncreas, piel, cabeza, cuello, útero, ovarios, estómago, colon, mama, esófago, intestino delgado, intestino, sistema endocrino, glándula tiroides, glándula paratiroidea, glándula suprarrenal, uretra, próstata, pene, testículos, uréter, vejiga, riñón o hígado; cáncer de recto; cáncer de la región anal; carcinomas de trompas de Falopio, endometrio, cuello uterino, vagina, vulva, pelvis renal, célula renal; sarcoma de tejido blando; mixoma; rabdomioma; fibroma; lipoma; teratoma; colangiocarcinoma; hepatoblastoma; angiosarcoma; hemangioma; hepatoma; fibrosarcoma; condrosarcoma; mieloma; leucemia crónica o aguda; linfomas linfocíticos; linfoma primario del SNC; neoplasias del SNC; tumores del eje espinal; carcinomas de células escamosas; sarcoma sinovial; mesoteliomas pleurales malignos; glioma de tronco encefálico; adenoma pituitario; adenoma bronquial; hamartoma condromatoso; mesotelioma; enfermedad de Hodgkin o una combinación de uno o más de los cánceres anteriores.
Adecuadamente, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de cánceres seleccionados del grupo que consiste en cánceres de cerebro (gliomas), glioblastomas, astrocitomas, glioblastoma multiforme, síndrome de Bannayan-Zonana, enfermedad de Cowden, enfermedad de Lhermitte-Duclos, tumor de Wilm, sarcoma de Ewing, rabdomiosarcoma, ependimoma, meduloblastoma, cabeza y cuello, riñón, hígado, melanoma, ovario, páncreas, adenocarcinoma, adenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células acinares, glucagonoma, insulinoma, próstata, sarcoma, osteosarcoma, tumor óseo de células gigantes, tiroides, leucemia linfoblástica de células T, leucemia mielógena crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pilosas, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia neutrofílica crónica, leucemia linfoblástica aguda de células T, plasmocitoma, leucemia inmunoblástica de células grandes, leucemia de células del manto, mieloma múltiple, leucemia megacarioblástica, mieloma múltiple, leucemia megacariocítica aguda, leucemia promielocítica, eritroleucemia, linfoma maligno, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma linfoblástico de células T, linfoma de Burkitt, linfoma folicular, neuroblastoma, cáncer de vejiga, cáncer urotelial, cáncer de vulva, cáncer de cuello uterino, cáncer de endometrio, cáncer renal, mesotelioma, cáncer de esófago, cáncer de glándulas salivales, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico, cáncer de nasofaringe, cáncer bucal, cáncer de boca, GIST (tumor del estroma gastrointestinal) y cáncer testicular.
En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar tumores sólidos o líquidos. En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invención se pueden usar para tratar sarcoma, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer gastroesofágico, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), carcinoma de células renales de células claras (RCC), linfomas, carcinoma de células escamosas de células de cabeza y cuello (SCCHN), carcinoma hepatocelular (HCC) y/o linfoma no Hodgkin (NHL). Adecuadamente, la presente invención se refiere a un método para tratar o disminuir la gravedad de síndromes precancerosos en un mamífero, incluido un ser humano, en donde el síndrome precanceroso se selecciona de: neoplasia intraepitelial cervical, gammapatía monoclonal de significado desconocido (MGUS), síndrome mielodisplásico, anemia aplásica, lesiones cervicales, nevos cutáneos (premelanoma), neoplasia intraepitelial (intraductal) prostática (PIN), carcinoma ductal in situ (DCIS), pólipos de colon y hepatitis o cirrosis grave.
En un aspecto, el ser humano tiene un tumor sólido. En un aspecto, el tumor se selecciona entre cáncer de cabeza y cuello, cáncer gástrico, melanoma, carcinoma de células renales (RCC), cáncer de esófago, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de ovario y cáncer de páncreas. En un aspecto, el ser humano tiene uno o más de los siguientes: cáncer colorrectal (CRC), esofágico, cervical, de vejiga, de mama, de cabeza y cuello, de ovario, melanoma, carcinoma de células renales (RCC), EC de células escamosas, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, mesotelioma y cáncer de próstata. En otro aspecto, el ser humano tiene un tumor líquido tal como linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), mieloma múltiple, leucemia linfoblástica crónica (CLL), linfoma folicular, leucemia mieloide aguda y leucemia mielógena crónica.
En una realización, los compuestos de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento de cánceres de piel (p. ej., cáncer de piel no melanoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales) o queratosis actínica. Además de un efecto de campo para eliminar los cánceres de piel superficiales, los compuestos de la presente invención pueden prevenir el desarrollo de cánceres de piel posteriores y queratosis actínica premaligna en pacientes tratados.
Enfermedades autoinmunes
Las enfermedades autoinmunes asociadas incluyen, pero no se limitan a, vasculitis asociada a STING con inicio en la infancia (SAVI), síndrome de Aicardi Goutieres (AGS), lupus de sabañones, ataxia telanogiectasia (también conocida como síndrome de Louis-Bar), vasculopatía retiniana con leucodistrofia cerebral (RCVL), lupus eritematoso sistémico (SLE), lupus cutáneo, nefritis lúpica, psoriasis, diabetes mellitus, incluida la diabetes mellitus insulinodependiente (IDDM), dermatomiositis, virus de inmunodeficiencia humana (HIV), SIDA, polimiositis, esclerosis sistémica (esclerodermia) y síndrome de Sjogren (SS), artritis reumatoide, artritis psoriásica, poliartritis, miastenia gravis, poliarteritis nudosa, vasculitis, vasculitis cutánea, vasculitis asociada a anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA), púrpura de Henoch-Schonlein, hepatitis autoinmune, colangitis esclerosante primaria, granulomatosis de Wegener, poliangeítis microscópica, enfermedad de Behcet, espondilitis, arteritis de células gigantes, polimialgia reumática, fenómeno de Raynaud, cirrosis biliar primaria, angiítis primaria del sistema nervioso central, poliangeítis microscópica, neuromielitis óptica y enfermedad mixta del tejido conectivo.
Inflamación
La inflamación representa un grupo de respuestas vasculares, celulares y neurológicas al trauma. La inflamación se puede caracterizar como el movimiento de células inflamatorias tales como monocitos, neutrófilos y granulocitos hacia los tejidos. Esto generalmente se asocia con una función de barrera endotelial reducida y edema en los tejidos. La inflamación se puede clasificar como aguda o crónica. La inflamación aguda es la respuesta inicial del cuerpo a estímulos dañinos y se logra mediante el aumento del movimiento de plasma y leucocitos desde la sangre hacia los tejidos lesionados. Una cascada de eventos bioquímicos propaga y madura la respuesta inflamatoria, involucrando al sistema vascular local, el sistema inmunológico y varias células dentro del tejido lesionado. La inflamación prolongada, conocida como inflamación crónica, conduce a un cambio progresivo en el tipo de células que están presentes en el sitio de la inflamación y se caracteriza por la destrucción y curación simultáneas del tejido debido al proceso inflamatorio.
Cuando ocurre como parte de una respuesta inmune a una infección o como una respuesta aguda a un trauma, la inflamación puede ser beneficiosa y normalmente es autolimitada. Sin embargo, la inflamación puede ser perjudicial en diversas condiciones. Esto incluye la producción de inflamación excesiva en respuesta a agentes infecciosos, lo que puede provocar daños importantes a los órganos y la muerte (por ejemplo, en el caso de sepsis). Además, la inflamación crónica es generalmente nociva y es la raíz de numerosas enfermedades crónicas, provocando daños graves e irreversibles a los tejidos. En tales entornos, la respuesta inmune a menudo se dirige contra los propios tejidos (autoinmunidad), aunque las respuestas crónicas a entidades extrañas también pueden provocar daños indirectos a los propios tejidos.
Por tanto, el objetivo de la terapia antiinflamatoria es reducir esta inflamación, inhibir la autoinmunidad cuando esté presente y permitir que progrese el proceso fisiológico de curación y reparación de los tejidos.
Los compuestos de esta invención se pueden usar para tratar la inflamación de cualquier tejido y órgano del cuerpo, incluyendo inflamación musculoesquelética, inflamación vascular, inflamación neural, inflamación del sistema digestivo, inflamación ocular, inflamación del sistema reproductivo y otras inflamaciones, como se ejemplifica a continuación.
La inflamación musculoesquelética se refiere a cualquier afección inflamatoria del sistema musculoesquelético, particularmente aquellas afecciones que afectan las articulaciones esqueléticas, incluidas las articulaciones de la mano, muñeca, codo, hombro, mandíbula, columna, cuello, cadera, rodilla, tobillo y pie, y afecciones que afectan a los tejidos que conectan músculos a huesos tales como los tendones. Ejemplos de inflamación musculoesquelética que pueden tratarse con compuestos de la invención incluyen artritis (incluyendo, por ejemplo, osteoartritis, artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, artritis infecciosa aguda y crónica, artritis asociada con gota y pseudogota y artritis idiopática juvenil), tendinitis, sinovitis, tenosinovitis, bursitis, fibrositis (fibromialgia), epicondilitis, miositis y osteítis (incluyendo, por ejemplo, enfermedad de Paget, osteítis del pubis y osteítis fibrosa quística).
La inflamación ocular se refiere a la inflamación de cualquier estructura del ojo, incluidos los párpados. Ejemplos de inflamación ocular que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen blefaritis, blefarocalasia, conjuntivitis, dacrioadenitis, queratitis, queratoconjuntivitis seca (ojo seco), escleritis, triquiasis y uveítis.
Ejemplos de inflamación del sistema nervioso que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen encefalitis, síndrome de Guillain-Barré, meningitis, neuromiotonía, narcolepsia, esclerosis múltiple, mielitis, vasculitis del SNC y esquizofrenia.
Ejemplos de inflamación de la vasculatura o del sistema linfático que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen artroesclerosis, artritis, flebitis, vasculitis y linfangitis.
Ejemplos de afecciones inflamatorias del sistema digestivo que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen colangitis, colecistitis, enteritis, enterocolitis, gastritis, gastroenteritis, enfermedad inflamatoria intestinal (tal como enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), ileítis y proctitis.
Ejemplos de afecciones inflamatorias del sistema reproductivo que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen cervicitis, corioamnionitis, endometritis, epididimitis, onfalitis, ooforitis, orquitis, salpingitis, absceso tuboovárico, uretritis, vaginitis, vulvitis y vulvodinia.
Los compuestos de esta invención se pueden usar para tratar afecciones autoinmunitarias que tienen un componente inflamatorio. Tales condiciones incluyen alopecia universalizada aguda diseminada, enfermedad de Behcet, enfermedad de Chagas, vasculitis asociada a STING con inicio en la infancia (SAVI), síndrome de Aicardi Goutiéres (AGS), perniosis lúpica, ataxia telangiectasia (también conocida como síndrome de Louis-Bar), vasculopatía retiniana con leucodistrofia cerebral (RCVL), vasculitis asociada a ANCA, síndrome de fatiga crónica, disautonomía, encefalomielitis, espondilitis anquilosante, anemia aplásica, hidradenitis supurativa, hepatitis autoinmune, ooforitis autoinmune, enfermedad celíaca, enfermedad de Crohn, diabetes mellitus tipo 1, células gigantes arteritis, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Grave, síndrome de Guillain-Barré, enfermedad de Hashimoto, púrpura de Henoch-Schonlein, enfermedad de Kawasaki, lupus eritematoso, colitis microscópica, poliarteritis microscópica, enfermedad mixta del tejido conectivo, esclerosis múltiple, miastenia gravis, síndrome de opsoclono mioclono, neuritis óptica, tiroiditis de Ord, pénfigo, poliarteritis nodosa, polimialgia, artritis reumatoide, síndrome de Reiter, síndrome de Sjogren, arteritis temporal, granulomatosis de Wegener, anemia hemolítica autoinmune caliente, cistitis intersticial, enfermedad de Lyme, morfea, psoriasis, sarcoidosis, esclerodermia, colitis ulcerosa y vitíligo.
Los compuestos de esta invención se pueden usar para tratar enfermedades de hipersensibilidad mediadas por células T que tienen un componente inflamatorio. Dichas afecciones incluyen hipersensibilidad de contacto, dermatitis de contacto (incluida la debida a la hiedra venenosa), urticaria, alergias cutáneas, alergias respiratorias (fiebre del heno, rinitis alérgica) y enteropatía sensible al gluten (enfermedad celíaca).
Otras afecciones inflamatorias que pueden tratarse con los compuestos de esta invención incluyen, por ejemplo, apendicitis, dermatitis, dermatomiositis, endocarditis, fibrositis, gingivitis, glositis, hepatitis, hidradenitis supurativa, iritis, laringitis, mastitis, miocarditis, nefritis, otitis, pancreatitis, parotiditis, percarditis, peritonitis, faringitis, pleuritis, neumonitis, prostatitis, pielonefritis y estomatitis, rechazo de trasplantes (que afectan a órganos tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, páncreas (p. ej., células de los islotes), médula ósea, córnea, intestino delgado, aloinjertos de piel, homoinjertos de piel y xenoinjertos de válvulas cardíacas, enfermedad del suero y enfermedad de injerto contra huésped), pancreatitis aguda, pancreatitis crónica, síndrome de dificultad respiratoria aguda, síndrome de Sezary, hiperplasia suprarrenal congénita, tiroiditis no supurativa, hipercalcemia asociada con cáncer, pénfigo, dermatitis herpetiforme ampollosa, eritema multiforme grave, dermatitis exfoliativa, dermatitis seborreica, rinitis alérgica estacional o perenne, asma bronquial, dermatitis de contacto, dermatitis atópica, reacciones de hipersensibilidad a medicamentos, conjuntivitis alérgica, queratitis, herpes zóster oftálmico, iritis e iridociclitis, coriorretinitis, neuritis óptica, sarcoidosis sintomática, quimioterapia para tuberculosis pulmonar fulminante o diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática en adultos, trombocitopenia secundaria en adultos, anemia hemolítica adquirida (autoinmune), leucemia y linfomas en adultos, leucemia aguda infantil, enteritis regional, vasculitis autoinmune, esclerosis múltiple, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rechazo de trasplantes de órganos sólidos, sepsis. Los tratamientos preferidos incluyen el tratamiento del rechazo de trasplantes, artritis reumatoide, artritis psoriásica, esclerosis múltiple, diabetes tipo 1, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, lupus eritematoso sistémico, psoriasis, enfermedad pulmonar crónica e inflamación que acompaña a afecciones infecciosas (p. ej., sepsis). En una realización, los compuestos de esta invención se pueden usar para tratar el asma.
Proliferación celular
Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles en el tratamiento de una o más enfermedades que afectan a los mamíferos que se caracterizan por la proliferación celular en el área de trastornos asociados con la neovascularización y/o la permeabilidad vascular, incluidos los trastornos proliferativos de los vasos sanguíneos, incluidas la artritis (artritis reumatoide) y la restenosis; trastornos fibróticos que incluyen cirrosis hepática y aterosclerosis; los trastornos proliferativos de células mesangiales incluyen glomerulonefritis, nefropatía diabética, nefroesclerosis maligna, síndromes de microangiopatía trombótica, retinopatías proliferativas, rechazo de trasplantes de órganos y glomerulopatías; y los trastornos metabólicos incluyen psoriasis, diabetes mellitus, cicatrización de heridas crónicas, inflamación y enfermedades neurodegenerativas.
Enfermedades neurodegenerativas
Los compuestos de esta invención pueden usarse para tratar enfermedades neurodegenerativas. Las enfermedades neurodegenerativas ejemplares incluyen, pero no se limitan a, esclerosis múltiple, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y esclerosis lateral amiotrófica (ELA).
Combinaciones
Los compuestos de esta invención se pueden emplear solos o en combinación con otros agentes terapéuticos. Como moduladores de la respuesta inmune, los compuestos de esta invención también se pueden usar en monoterapia o en combinación con otro agente terapéutico en el tratamiento de enfermedades y afecciones en las que la modulación de STING es beneficiosa. Las terapias de combinación según la presente invención comprenden así la administración de un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos otro agente terapéuticamente activo. En una realización, las terapias de combinación según la presente invención comprenden la administración de al menos un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos otro agente terapéutico. El o los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables, y el o los otros agentes terapéuticos pueden administrarse juntos en una única composición farmacéutica o por separado y, cuando se administran por separado, esto puede ocurrir simultánea o secuencialmente en cualquier orden. Las cantidades del o de los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables, y del o de los otros agentes terapéuticos y los tiempos de administración relativos se seleccionarán para lograr el efecto terapéutico combinado deseado. Por tanto, en un aspecto adicional, se proporciona una combinación que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más agentes terapéuticos diferentes.
Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden usar en combinación con uno o más agentes terapéuticos que pueden ser útiles en la prevención o el tratamiento de enfermedades alérgicas, enfermedades inflamatorias o enfermedades autoinmunitarias, por ejemplo; inmunoterapia con antígenos, antihistamínicos, esteroides, NSAIDs, broncodilatadores (p. ej., agonistas beta 2, agonistas adrenérgicos, agentes anticolinérgicos, teofilina), metotrexato, moduladores de leucotrienos y agentes similares; terapia con anticuerpos monoclonales tales como anti-IgE, anti-TNF, anti-IL-5, anti-IL-6, anti-IL-12, anti-IL-1 y agentes similares; terapias con receptores, p. ej., etanercept y agentes similares; inmunoterapias no específicas de antígenos (p. ej., interferón u otras citocinas/quimiocinas, moduladores de receptores de citocinas/quimiocinas, agonistas o antagonistas de citocinas, agonistas de TLR y agentes similares).
Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden usar en combinación con radioterapia y/o cirugía y/o al menos otro agente terapéutico que pueda ser útil en el tratamiento del cáncer y síndromes precancerosos. En la combinación se puede utilizar cualquier agente antineoplásico que tenga actividad frente a un tumor susceptible que se esté tratando. Los agentes antineoplásicos típicos útiles incluyen, pero no se limitan a, (a) agentes antimicrotúbulos tales como diterpenoides (p. ej., paclitaxel, docetaxel) y alcaloides de la vinca (p. ej., vinblastina, vincristina y vinorelbina); (b) complejos de coordinación de platino (p. ej., oxaliplatino, cisplatino y carboplatino); (c) agentes alquilantes tales como mostazas nitrogenadas (p. ej., ciclofosfamida, melfalán y clorambucilo), oxazafosforinas, alquilsulfonatos (p. ej., busulfano), nitrosoureas (p. ej., carmustina) y triazenos (p. ej., dacarbazina); (d) agentes antibióticos tales como antraciclinas (p. ej., daunorrubicina y doxorrubicina), actinomicinas (p. ej., dactinomicina) y bleomicinas; (e) inhibidores de la topoisomerasa II tales como epipodofilotoxinas (p. ej. ejemplo, etopósido y tenipósido); (f) antimetabolitos tales como análogos de purina y pirimidina y compuestos antifolato (p. ej., fluorouracilo, metotrexato, citarabina, mercaptopurina, tioguanina y gemcitabina); (g) inhibidores de la topoisomerasa I tales como camptotecinas (p. ej., irinotecán, topotecán y diversas formas ópticas de 7-(4-metilpiperazino-metileno)-10,Il-etilendioxi-20-camptotecina); (h) hormonas y análogos hormonales (p. ej., adrenocorticosteroides tales como la prednisona y la prednisolona, que son útiles en el tratamiento del linfoma maligno y la leucemia aguda en niños; aminoglutetimida y otros inhibidores de la aromatasa, tales como anastrozol, letrozol, vorozol y exemestano, útiles en el tratamiento de carcinoma adrenocortical y carcinoma de mama dependiente de hormonas que contiene receptores de estrógeno; progestágenos tales como acetato de megestrol útil en el tratamiento del cáncer de mama dependiente de hormonas y carcinoma de endometrio; estrógenos y antiestrógenos tales como fulvestrant, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona y 5-reductasas tales como finasterida y dutasterida, útiles en el tratamiento del carcinoma de próstata y la hipertrofia prostática benigna; antiestrógenos tales como tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, yodoxifeno, así como moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERMS) tales como los descritos en las Patentes de EE. UU. Nos. 5681835, 5877219, y 6207716, útiles en el tratamiento del carcinoma de mama dependiente de hormonas y otros cánceres susceptibles; y hormona liberadora de gonadotropina (GnRH) y análogos de la misma que estimulan la liberación de la hormona leutinizante (LH) y/o la hormona estimulante del folículo (FSH) para el tratamiento del carcinoma de próstata, por ejemplo, agonistas y antagonistas de LHRH tales como acetato de goserelina y leuprolida); (i) inhibidores de la ruta de transducción de señales; (j) inhibidores de la angiogénesis no receptores de tirosina; (k) agentes inmunoterapéuticos (p. ej., enfoques ex vivo e in vivo para aumentar la inmunogenicidad de las células tumorales del paciente, tales como la transfección con citocinas tales como la interleucina 2, la interleucina 4 o el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos, enfoques para disminuir la energía de las células T, enfoques que utilizan células inmunitarias transfectadas tales como células dendríticas transfectadas con citocinas, enfoques que utilizan líneas celulares tumorales transfectadas con citoquinas y enfoques que utilizan anticuerpos antiidiotípicos); (I) agentes proapoptóticos (p. ej., oligonucleótidos antisentido bcl-2); (m) inhibidores de la señalización del ciclo celular; (n) agentes inmunooncológicos y (o) agentes inmunoestimulantes.
Inhibidores de la ruta de transducción de señales
Los inhibidores de la ruta de transducción de señales son aquellos inhibidores que bloquean o inhiben un proceso químico que provoca un cambio intracelular. Como se usa en el presente documento, este cambio es la proliferación 0 diferenciación celular. Los inhibidores de la transducción de señales útiles en la presente invención incluyen inhibidores de tirosina quinasas receptoras, tirosina quinasas no receptoras, bloqueadores de los dominios SH2/SH3, serina/treonina quinasas, fosfatidilinositol-3 quinasas, señalización de mioinositol y oncogenes Ras.
Varias proteínas tirosina quinasas catalizan la fosforilación de residuos de tirosilo específicos en diversas proteínas implicadas en la regulación del crecimiento celular. Tales proteínas tirosina quinasas se pueden clasificar en términos generales como quinasas receptoras o no receptoras.
Las tirosina quinasas receptoras son proteínas transmembrana que tienen un dominio extracelular de enlace a ligandos, un dominio transmembrana y un dominio de tirosina quinasa. Los receptores tirosina quinasas están implicados en la regulación del crecimiento celular y generalmente se denominan receptores de factores de crecimiento. Se ha demostrado que la activación inapropiada o incontrolada de muchas de estas quinasas, es decir, la actividad aberrante del receptor del factor de crecimiento quinasa, por ejemplo mediante sobreexpresión o mutación, da como resultado un crecimiento celular incontrolado. En consecuencia, la actividad aberrante de dichas quinasas se ha relacionado con el crecimiento de tejidos malignos. En consecuencia, los inhibidores de tales quinasas podrían proporcionar métodos de tratamiento del cáncer. Los receptores de los factores de crecimiento incluyen, por ejemplo, el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFr), el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFr), erbB2, erbB4, ret, el receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFr), la tirosina quinasa con dominios de homología (TIE-2) similares a inmunoglobulina y el factor de crecimiento epidérmico, el receptor del factor-1 de crecimiento de insulina (IGFI), factor estimulante de colonias de macrófagos (cfms), BTK, ckit, cmet, receptores del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), receptores Trk (TrkA, TrkB y TrkC), receptores de efrina (eph) y el protooncogén RET. Se están desarrollando varios inhibidores de los receptores de crecimiento e incluyen antagonistas de ligandos, anticuerpos, inhibidores de las tirosina quinasas y oligonucleótidos antisentido. Los receptores de los factores de crecimiento y los agentes que inhiben la función de los receptores de los factor de crecimiento se describen, por ejemplo, en Kath 2000; Shawver 1997; y Lofts 1994.
Las tirosina quinasas, que no son quinasas receptoras de factores de crecimiento, se denominan tirosina quinasas no receptoras. Las tirosina quinasas no receptoras útiles en la presente invención, que son objetivos u objetivos potenciales de fármacos anticancerígenos, incluyen cSrc, Lck, Fyn, Yes, Jak, cAbl, FAK (quinasa de adhesión focal), tirosina quinasa de Brutons y Bcr-Abl. Dichas quinasas no receptoras y agentes que inhiben la función tirosina quinasa no receptora se describen en Sinh 1999; y Bolen 1997.
Los bloqueadores de los dominios SH2/SH3 son agentes que interrumpen la unión del dominio SH2 o SH3 en una variedad de enzimas o proteínas adaptadoras, incluidas la subunidad PI3-K p85, las quinasas de la familia Src, las moléculas adaptadoras (She, Crk, Nek, Grb2) y Ras-GAP. Los dominios SH2/SH3 como objetivos para fármacos anticancerígenos se analizan en Smithgall 1995.
Inhibidores de serina/treonina quinasas, incluidos los bloqueadores de la cascada de MAP quinasas que incluyen bloqueadores de quinasas Raf (rafk), mitógenos o quinasas reguladas extracelulares (MEK) y quinasas reguladas extracelulares (ERK); y bloqueadores de miembros de la familia de la proteína quinasa C, incluidos los bloqueadores de PKC (alfa, beta, gamma, épsilon, mu, lambda, iota, zeta). Familia de quinasas IkB (IKKa, IKKb), quinasas de la familia PKB, miembros de la familia de quinasas akt y quinasas receptoras de TGF-beta. Dichas serina/treonina quinasas y sus inhibidores se describen en Yamamoto 1999; Brodt 2000; Massagué 1996; Philip 1995; Lacayo 2000; Patente de EE. UU. No. 6268391; y Martínez-Lacaci 2000.
Los inhibidores de los miembros de la familia de la fosfatidilinositol-3 quinasa, incluidos los bloqueadores de Pekinese, ATM, DNA-PK y Ku, también son útiles en la presente invención. Tales quinasas se tratan en Abraham 1996; Canman 1998; Jackson 1997; y Zhong 2000.
También son útiles en la presente invención los inhibidores de la señalización de mioinositol tales como bloqueadores de fosfolipasa C y análogos de mioinositol. Estos inhibidores de señales se describen en Powis 1994.
Otro grupo de inhibidores de la vía de transducción de señales son los inhibidores del oncogén Ras. Dichos inhibidores incluyen inhibidores de farnesiltransferasa, geranil-geranil transferasa y proteasas CAAX así como oligonucleótidos antisentido, ribozimas e inmunoterapia. Se ha demostrado que dichos inhibidores bloquean la activación de ras en células que contienen ras mutante de tipo silvestre, actuando así como agentes antiproliferación. La inhibición del oncogén ras se trata en Scharovsky 2000; Ashby 1998; y Oliff 1999.
Como se mencionó anteriormente, los anticuerpos antagonistas de la unión del ligando al receptor quinasa también pueden servir como inhibidores de la transducción de señales. Este grupo de inhibidores de la ruta de transducción de señales incluye el uso de anticuerpos humanizados contra el dominio extracelular de unión al ligando de los receptores tirosina quinasas. Por ejemplo, el anticuerpo específico Imclone C225 EGFR (véase Green 2000); Anticuerpo erbB2 Herceptin® (véase Stern 2000); y anticuerpo específico 2CB VEGFR2 (véase Brekken 2000).
Inhibidores de la angiogénesis no receptores de tirosinas
También pueden ser útiles agentes terapéuticos antiangiogénicos que incluyen inhibidores de la angiogénesis no receptores de MEK. Agentes antiangiogénicos tales como aquellos que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular (por ejemplo, el anticuerpo anti-factor de crecimiento de células endoteliales vasculares bevacizumab [Avastin™], y compuestos que actúan mediante otros mecanismos (por ejemplo, linomida, inhibidores de la función de la integrina avp3, endostatina y angiostatina).
Inhibidores de la señalización del ciclo celular
Los inhibidores de la señalización del ciclo celular inhiben las moléculas implicadas en el control del ciclo celular. Una familia de proteínas quinasas llamadas quinasas dependientes de ciclina (CDK) y su interacción con una familia de proteínas denominadas ciclinas controla la progresión a través del ciclo celular eucariota. La activación e inactivación coordinada de diferentes complejos ciclina/CDK es necesaria para la progresión normal a lo largo del ciclo celular. Se están desarrollando varios inhibidores de la señalización del ciclo celular. Ejemplos de quinasas dependientes de ciclina, incluidas CDK2, CDK4 y CDK6, e inhibidores de las mismas se describen, por ejemplo, en Rosania 2000.
Inmunomoduladores
Ejemplos adicionales de otros agentes terapéuticos (p. ej., agente antineoplásico) para uso en combinación o coadministrados con un compuesto de Fórmula I son los inmunomoduladores.
Tal como se utiliza en el presente documento, "inmunomoduladores" se refiere a cualquier sustancia, incluidos los anticuerpos monoclonales, que afecta al sistema inmunológico. Los inmunomoduladores se pueden utilizar como agentes antineoplásicos para el tratamiento del cáncer. Por ejemplo, los inmunomoduladores incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos anti-CTLA-4 tales como ipilimumab (YERVOY) y anticuerpos anti-PD-1 (Opdivo/nivolumab y Keytruda/pembrolizumab). Otros inmunomoduladores incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos ICOS, anticuerpos OX-40, anticuerpos PD-L1, anticuerpos LAG3, anticuerpos TIM-3, anticuerpos 41BB y anticuerpos GITR.
Agentes anti-PD-L1
Ejemplos adicionales de otros agentes terapéuticos (agentes antineoplásicos) para uso en combinación o coadministrados con un compuesto de esta invención son agentes anti-PD-L1. Los anticuerpos anti-PD-L1 y los métodos para producirlos se conocen en la técnica. Dichos anticuerpos contra PD-L1 pueden ser policlonales o monoclonales y/o recombinantes y/o humanizados. Los anticuerpos PD-L1 ejemplares se describen en las Patentes de EE. UU. Nos. 8217149, 8383796, 8552154, 9212224, y 8779108, y las Publicaciones de Patente de EE.UU. Nos.
2011/0280877, 2014/0341902 y 2013/0045201. Anticuerpos ejemplares adicionales contra PD-L1 (también denominado CD274 o B7-H1) y métodos para su uso se describen en las Patentes de EE. UU. Nos. 7943743, 8168179, y 7595048; el documento WO2014/055897, el documento WO2016/007235; y las Publicaciones de Patente de EE.UU. Nos. 2013/0034559 y 2015/0274835. Los anticuerpos PD-L1 se están desarrollando como agentes inmunomoduladores para el tratamiento del cáncer.
En una realización, el anticuerpo contra PD-L1 es un anticuerpo divulgado en la Patente de EE. UU. No. 8217149. En otra realización, el anticuerpo anti-PD-L1 comprende las CDR de un anticuerpo divulgado en la Patente de EE. UU. No. 8217149. En otra realización, el anticuerpo contra PD-L1 es un anticuerpo divulgado en la Patente de EE. UU. No.
8779108. En otra realización, el anticuerpo anti-PD-L1 comprende las CDR de un anticuerpo divulgado en la Solicitud de EE. UU. No. 8779108. En otra realización, el anticuerpo contra PD-L1 es un anticuerpo divulgado en la Publicación de Solicitud de Patente de EE. UU. No. 2013/0045201. En otra realización, el anticuerpo anti-PD-L1 comprende las CDR de un anticuerpo divulgado en la Publicación de Solicitud de Patente de EE. u U. No. 2013/0045201. En una realización, el anticuerpo anti-PD-L1 es BMS-936559 (MDX-1105), que se describió en el documento WO 2007/005874. En otra realización, el anticuerpo anti-PD-L1 es MPDL3280A (RG7446). En otra realización, el anticuerpo anti-PD-L1 es MEDI4736, que es un anticuerpo monoclonal anti-PD-L1 descrito en los documentos WO 2011/066389 y US 2013/034559. En otra realización, el anticuerpo anti-PD-L1 es TECENTRIQ™ (atezolizumab), que es una inmunoterapia anti-PD-L1 contra el cáncer que fue aprobada en los EE. UU. en mayo de 2016 para tipos específicos de cáncer de vejiga. En otra realización, el anticuerpo anti-PD-L1 es YW243.55.S70 que es un anti-PD-L1 descrito en el documento WO 2010/077634 y en la Pat. de EE. UU. No. 8217149. Ejemplos de anticuerpos anti-PD-L1 útiles para los métodos de esta invención y métodos para prepararlos se describen en las Solicitudes de Patente PCT WO 2010/077634, WO 2007/005874, WO 2011/066389, en la Pat. de EE. UU. No. 8217149 y el documento US 2013/034559.
Antagonista de PD-1
Ejemplos adicionales de otros agentes terapéuticos (agentes antineoplásicos) para uso en combinación o coadministrados con un compuesto de esta invención son antagonistas de PD-1. "Antagonista de PD-1" significa cualquier compuesto químico o molécula biológica que bloquea la unión de PD-L1 expresada en una célula cancerosa a PD-1 expresada en una célula inmune (célula T, célula B o célula NKT) y preferiblemente también bloquea la unión de PD-L2 expresada en una célula cancerosa a PD-1 expresada en células inmunes. Los nombres alternativos o sinónimos de PD-1 y sus ligandos incluyen: PDCDI, PDI, CD279 y SLEB2 para PD-1; PDCDILI, PDLI, B7H1, B7-4, CD274 y B7-H para PD-LI; y PDCD1<l>2, PDL2, B7-DC, Btdc y CD273 para PD-L2. En cualquier realización de los aspectos o realizaciones de la presente invención en las que se va a tratar un individuo humano, el antagonista de PD-1 bloquea la unión de PD-L1 de ser humano a PD-1 de ser humano, y preferiblemente bloquea la unión tanto de PD-L1 de ser humano como de PD-L2 de ser humano a PD-1 de ser humano. Las secuencias de aminoácidos de PD-1 de ser humano se pueden encontrar en NCBI Locus No.: NP_005009. Las secuencias de aminoácidos de PD-L1 y PD-L2 de ser humano se pueden encontrar en NCBI Locus No.: NP_054862 y NP_079515, respectivamente.
Los antagonistas de PD-1 útiles en cualquiera de los aspectos de la presente invención incluyen un anticuerpo monoclonal (mAb), o fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une específicamente a PD-1 o PD-L1, y preferiblemente se une específicamente a PD-1 de ser humano o PD-L1 de ser humano. El mAb puede ser un anticuerpo de ser humano, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico, y puede incluir una región constante de ser humano. En algunas realizaciones, la región constante de ser humano se selecciona del grupo que consiste en regiones constantes de IgGI, IgG2, IgG3 e IgG4, y en realizaciones preferidas, la región constante de ser humano es una región constante de IgGI o IgG4. En algunas realizaciones, el fragmento de unión al antígeno se selecciona del grupo que consiste en fragmentos Fab, Fab'-SH, F(ab')2, scFv y Fv.
Ejemplos de mAb que se unen a PD-1 de ser humano y que son útiles en los diversos aspectos y realizaciones de la presente invención se describen en los documentos US7488802, US7521051, US8008449, US8354509, US8168757, WO2004/004771, WO2004/072286, WO2004/056875, y US2011/0271358. Los mAb específicos anti-PD-1 de ser humano útiles como antagonistas de PD-1 en cualquiera de los aspectos y realizaciones de la presente invención incluyen: MK-3475, un mAb humanizado IgG4 con la estructura descrita en WHO Drug Information, vol. 27, núm. 2, páginas 161-162 (2013) y que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera mostradas en la Figura 6; nivolumab, un mAb de ser humano IgG4 con la estructura descrita en WHO Drug Information, vol. 27, núm.
1, páginas 68-69 (2013) y que comprende las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera mostradas en la Figura 7; los anticuerpos humanizados h409AII, h409A16 y h409A17, que se describen en el documento WO2008/156712, y AMP-514, que está siendo desarrollado por Medimmune.
Otros antagonistas de PD-1 útiles en cualquiera de los aspectos y realizaciones de la presente invención incluyen una inmunoadhesina que se une específicamente a PD-1, y preferiblemente se une específicamente a PD-1 de ser humano, p. ej., una proteína de fusión que contiene la proteína porción de unión extracelular o PD-1 de PD-L1 o PD-L2 fusionada a una región constante tal como una región Fc de una molécula de inmunoglobulina. Ejemplos de moléculas de inmunoadhesión que se unen específicamente a PD-1 se describen en los documentos WO2010/027827 y WO2011/066342. Las proteínas de fusión específicas útiles como antagonistas de PD-1 en el método de tratamiento, los medicamentos y los usos de la presente invención incluyen AMP-224 (también conocida como B7-DClg), que es una proteína de fusión PD-L2-FC y se une a PD-1 de ser humano.
Otros ejemplos de mAb que se unen a PD-L1 de ser humano, y útiles en el método de tratamiento, medicamentos y usos de la presente invención, se describen en los documentos WO2013/019906, WO2010/077634 y US8383796. Los mAb anti-PD-L1 de ser humano específicos útiles como antagonistas de PD-1 en el método de tratamiento, los medicamentos y los usos de la presente invención incluyen MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C.
KEYTRUDA/pembrolizumab es un anticuerpo anti-PD-1 comercializado por Merck para el tratamiento del cáncer de pulmón. La secuencia de aminoácidos de pembrolizumab y los métodos de uso se describen en la Patente de EE. UU. No. 8168757.
Opdivo/nivolumab es un anticuerpo monoclonal totalmente de ser humano comercializado por Bristol Myers Squibb dirigido contra el receptor superficial de células de ser humano inmunorregulador negativo PD-1 (muerte programada-1 o muerte celular programada-I/PCD-1) con actividad de inmunopotenciación. Nivolumab se une y bloquea la activación de PD-1, una proteína transmembrana de la superfamilia de Ig, mediante sus ligandos PD-L1 y PD-L2, lo que da como resultado la activación de células T y respuestas inmunes mediadas por células contra células tumorales o patógenos. La PD-1 activada regula negativamente la activación de las células T y la función efectora mediante la supresión de la activación de la ruta PI3K/Akt. Otros nombres de nivolumab incluyen: B<m>S-936558, MDX-1106 y ONO-4538. La secuencia de aminoácidos de nivolumab y los métodos de uso y elaboración se describen en la Patente de EE. UU. No. US 8008449.
Anticuerpos contra ICOS
Ejemplos adicionales de otros agentes terapéuticos (agentes antineoplásicos) para uso en combinación o coadministrados con un compuesto de Fórmula I son anticuerpos contra ICOS. ICOS es un receptor de células T coestimulador con relación estructural y funcional con la superfamilia CD28/CTLA-4-Ig (Hutloff 1999). La activación de ICOS se produce mediante la unión de ICOS-L (B7RP-1/B7-H2). Ni B7-1 ni B7-2 (ligandos para CD28 y CTLA4) se unen o activan ICOS. Sin embargo, se ha demostrado que ICOS-L se une débilmente tanto a CD28 como a CTLA-4 (Yao 2011). La expresión de ICOS parece estar restringida a las células T. Los niveles de expresión de ICOS varían entre diferentes subconjuntos de células T y según el estado de activación de las células T. La expresión de ICOS se ha demostrado en células TH17 en reposo, células T auxiliares foliculares (TFH) y células T reguladoras (Treg); sin embargo, a diferencia de CD28, no se expresa mucho en poblaciones de células T efectoras THI y TH2 vírgenes (Paulos 2010). La expresión de ICOS está muy inducida en las células T efectoras CD4+ y CD8+ tras la activación mediante la participación de TCR (Wakamatsu 2013).
CDR para anticuerpos murinos contra ICOS de ser humano que tienen actividad agonista se muestran en el documento PCT/EP2012/055735 (WO 2012/131004). Anticuerpos contra ICOS también se describen en los documentos WO 2008/137915, WO 2010/056804, EP1374902, EP1374901 y EP1125585.
En los documentos WO2012/131004, WO 2014/033327, WO2016/120789, US20160215059, y US20160304610 se describen anticuerpos agonistas de ICOS o proteínas de unión a ICOS. En una realización, los anticuerpos agonistas de ICOS incluyen proteínas de unión a ICOS o porciones de unión a antígenos de las mismas que comprenden uno o más de: CDr H i como se establece en SEQ ID NO: 1; CDRH2 como se establece en SEQ ID NO:2; c Dr H3 como se establece en SEQ ID NO:3; CDRLI como se establece en SEQ ID NO:4; CDRL2 como se establece en SEQ ID NO:5 y/o CDRL3 como se establece en SEQ ID NO:6 o un equivalente directo de cada CDR en donde un equivalente directo tiene no más de dos sustituciones de aminoácidos en dicha CDR como se describe en el documento WO2016/120789.
En una realización, la proteína de unión a ICOS o su porción de unión a antígenos es un anticuerpo agonista de ICOS que comprende un dominio VH que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:7 y/o un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos idéntica al menos en un 90% a la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 8, como se expone en el documento WO2016/120789 en donde dicha proteína de unión a ICOS se une específicamente a ICOS de ser humano. En una realización, la proteína de unión a ICOS es un anticuerpo agonista de ICOS que comprende un dominio VH que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:7 y un dominio VL que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:8 como se expone en el documento WO2016/120789.
Yervoy (ipilimumab) es un anticuerpo CTLA-4 totalmente de ser humano comercializado por Bristol Myers Squibb. La estructura proteica de ipilimumab y los métodos que se utilizan se describen en las Patentes de EE. UU. Nos. 6984720 y 7605238.
CD134, también conocido como OX40, es un miembro de la superfamilia de receptores TNFR que no se expresa constitutivamente en células T vírgenes en reposo, a diferencia de CD28. OX40 es una molécula coestimuladora secundaria, expresada entre 24 y 72 horas después de la activación; su ligando, OX40L, tampoco se expresa en células presentadoras de antígenos en reposo, pero sigue su activación. La expresión de OX40 depende de la activación completa de las células T ; sin CD28, la expresión de OX40 se retrasa y en niveles cuatro veces más bajos. Los anticuerpos OX-40, las proteínas de fusión OX-40 y los métodos para utilizarlos se describen en las Patentes de EE. UU. Nos.: US 7504101; US 7758852; US 7858765; US 7550140; US 7960515; el documento WO2012/027328; el documento WO2013/028231.
En una realización, la proteína de unión al antígeno OX40 es una descrita en el documento WO2012/027328 (PCT/US2011/048752), fecha de registro internacional 23 de agosto de 2011. En otra realización, la proteína de unión a antígenos comprende las CDR de un anticuerpo divulgado en el documento WO2012/027328 (PCT/US2011/048752), fecha de registro internacional 23 de agosto de 2011, o CDR con 90% de identidad con las secuencias de CDR divulgadas. En una realización adicional, la proteína de unión a antígenos comprende un VH, un VL o ambos de un anticuerpo divulgado en el documento WO2012/027328 (PCT/US2011/048752), fecha de registro internacional 23 de agosto de 2011, o un VH o un VL con un 90% de identidad con las secuencias de VH o VL divulgadas.
En otra realización, la proteína OX40 de unión al antígeno se divulga en el documento WO2013/028231 (PCT/US2012/024570), fecha de registro internacional 9 de febrero de 2012. En otra realización, la proteína de unión al antígeno comprende las CDR de un anticuerpo divulgado en el documento WO2013/028231 (PCT/US2012/024570), fecha de registro internacional 9 de febrero de 2012, o CDR con 90% de identidad con las secuencias de CDR divulgadas. En una realización adicional, la proteína de unión al antígeno comprende un VH, un VL o ambos de un anticuerpo divulgado en el documento WO2013/028231 (PCT/US2012/024570), fecha de registro internacional 9 de febrero de 2012, o un VH o un VL con un 90% de identidad con las secuencias de VH o VL divulgadas. En una realización, la proteína OX40 de unión al antígeno es un anticuerpo agonista aislado de OX40 que comprende una región variable de cadena ligera que tiene una secuencia al menos 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 como se expone en el documento WO2013/028231 y una región variable de cadena pesada que tiene una secuencia al menos 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 como se expone en el documento WO2013/028231. En una realización, la proteína OX40 de unión al antígeno es un anticuerpo aislado que comprende una variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 como se expone en el documento WO2013/028231 y una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 como se expone en el documento WO2013/028231.
Agente inmunoestimulante
Ejemplos adicionales de otros agentes terapéuticos para uso en combinación o coadministrados con un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo, son agentes inmunoestimulantes.
Como se utiliza en el presente documento, "agente inmunoestimulante" se refiere a cualquier agente que pueda estimular el sistema inmunológico. Como se usan en el presente documento, los agentes inmunoestimulantes incluyen, pero no se limitan a, adyuvantes de vacunas, tales como agonistas de los receptores tipo Toll, bloqueadores de puntos de control de células T, tales como mAb para PD-1 y CTL4 y agonistas de puntos de control de células T, tales como mAb agonistas de OX-40 e ICOS. Como se utiliza en el presente documento, "agente inmunoestimulante" se refiere a cualquier agente que pueda estimular el sistema inmunológico. Como se usan en el presente documento, los agentes inmunoestimulantes incluyen, pero no se limitan a, adyuvantes de vacunas.
El término "receptor tipo Toll" (o "TLR") como se usa en el presente documento se refiere a un miembro de la familia de proteínas de receptores tipo Toll o a un fragmento del mismo que detecta un producto microbiano y/o inicia una respuesta inmune adaptativa. En una realización, un TLR activa una célula dendrítica (DC). Los receptores tipo Toll (TLR) son una familia de receptores de reconocimiento de patrones que se identificaron inicialmente como sensores del sistema inmunológico innato que reconocen patógenos microbianos. Los TLR reconocen estructuras distintas en los microbios, a menudo denominadas "PAMP" (patrones moleculares asociados a patógenos). La unión del ligando a los TLR invoca una cascada de rutas de señalización intracelular que inducen la producción de factores implicados en la inflamación y la inmunidad. En seres humanos se han identificado diez TLR. Los TLR que se expresan en la superficie de las células incluyen TLR-1, -2, -4, -5 y -6, mientras que TLR-3, -7/8 y -9 se expresan en el compartimento ER. Los subconjuntos de DC de ser humano se pueden identificar sobre la base de distintos patrones de expresión de TLR. A modo de ejemplo, el subconjunto mieloide o "convencional" de DC (mDC) expresa TLR 1-8 cuando se estimula, y se produce una cascada de marcadores de activación (p. ej., CD80, CD86, MHC clase I y II, CCR7), citocinas proinflamatorias y quimiocinas. Un resultado de esta estimulación y expresión resultante es el cebado de células T CD4+ y CD8+ específicas de antígeno. Estas DC adquieren una capacidad mejorada para captar antígenos y presentarlos en una forma apropiada a las células T. Por el contrario, el subconjunto plasmocitoide de DC (pDC) expresa solo TLR7 y TLR9 tras la activación, con la activación resultante de las células NK y de las células T. Como las células tumorales moribundas pueden afectar negativamente la función de las DC, se ha sugerido que la activación de las DC con agonistas de TLR puede ser beneficiosa para cebar la inmunidad antitumoral en un enfoque de inmunoterapia para el tratamiento del cáncer. También se ha sugerido que el tratamiento exitoso del cáncer de mama usando radiación y quimioterapia requiere la activación de TLR4.
Los agonistas de TLR conocidos en la técnica y que encuentran uso en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: Pam3Cys, un agonista de TLRI/2; CFA, un agonista de TLR2; MALP2, un agonista de TLR2; Pam2Cys, un agonista de TLR2; FSL-I, un agonista de TLR-2; Hib-OMPC, un agonista de TLR-2; ácido poliinosínico:policitidílico (Poli I:C), un agonista de TLR3; ácido poliadenosina-poliuridílico (Poli AU), un agonista de TLR3; ácido poliinosínico-policitidílico estabilizado con poli-L-lisina y carboximetilcelulosa (Hiltonol), un agonista de TLR3; flagelina bacteriana, un agonista de TLR5; imiquimod, un agonista de TLR7; resiquimod, un agonista de TLR7/8; loxoribina, un agonista de TLR7/8; y dinucleótido CpG no metilado (CpG-ODN), un agonista de TLR9.
Los agonistas de TLR adicionales conocidos en la técnica y que se utilizan en la presente invención incluyen además, pero no se limitan a, fosfatos de aminoalquilglucosminida (AGP) que se unen al receptor TLR4 y se sabe que son útiles como adyuvantes de vacunas y agentes inmunoestimulantes para estimular la producción de citoquinas, activar macrófagos, promover la respuesta inmune innata y aumentar la producción de anticuerpos en animales inmunizados. Un ejemplo de un agonista de TLR4 de origen natural es el LPS bacteriano. Un ejemplo de agonista semisintético de TLR4 es el monofosforil lípido A (MPL). Los AGP y sus efectos inmunomoduladores a través de TLR4 se describen en publicaciones de patentes tales como WO 2006/016997, WO 2001/090129, y/o la Patente de EE. UU. No. 6113918 y han sido reportados en la bibliografía. Derivados de AGP adicionales se revelan en la Patente de EE. UU. No.
7129219, la Patente de EE. UU. No. 6525028 y la Patente de EE. UU. No 6911434. Ciertos AGP actúan como agonistas de TLR4, mientras que otros son reconocidos como antagonistas de TLR4.
Además de los agentes inmunoestimulantes descritos anteriormente, las composiciones de la presente invención pueden comprender adicionalmente otros agentes terapéuticos que, debido a su naturaleza adyuvante, pueden actuar para estimular el sistema inmunológico para que responda a los antígenos cancerosos presentes en la(s) célula(s) tumoral(es) inactivada(s). Dichos adyuvantes incluyen, pero no se limitan a, lípidos, liposomas, bacterias inactivadas que inducen inmunidad innata (p. ej., Listeria monocytogenes inactivada o atenuada), composiciones que median la activación inmune innata a través de receptores semejantes a (NOD) (NLR), receptores semejantes a (RIG)-I basados en genes inducibles con ácido retinoico y/o receptores de lectina tipo C (CLR). Los ejemplos de PAMP incluyen lipoproteínas, lipopolipéptidos, peptidoglicanos, zimosano, lipopolisacárido, porinas de neisseria, flagelina, profilina, galactoceramida y muramil dipéptido. Los peptidoglicanos, las lipoproteínas y los ácidos lipoteicoicos son componentes de la pared celular de las bacterias grampositivas. La mayoría de las bacterias expresan lipopolisacáridos, siendo MPL un ejemplo. Flagelina se refiere al componente estructural de los flagelos bacterianos secretado por bacterias patógenas y comensales, la rt-galactosilceramida (rt.-GalCer) es un activador de las células T asesinas naturales (NKT). El muramil dipéptido es un motivo de peptidoglicano bioactivo común a todas las bacterias.
Debido a sus cualidades adyuvantes, los agonistas de TLR se usan preferiblemente en combinaciones con otras vacunas, adyuvantes y/o moduladores inmunes, y pueden combinarse en diversas combinaciones. Por tanto, en determinadas realizaciones, los compuestos de Fórmula I descritos en el presente documento que se unen a STING e inducen la activación de TBKI dependiente de STING y una célula tumoral inactivada que expresa y secreta una o más citocinas que estimulan la inducción, el reclutamiento y/o la maduración de DC, se puede administrar como se describe en este documento junto con uno o más agonistas de TLR con fines terapéuticos.
La indoleamina 2,3-dioxigenasa 1 (IDO1) es una enzima inmunosupresora clave que modula la respuesta inmune antitumoral al promover la generación de células T reguladoras y bloquear la activación de las células T efectoras, facilitando así el crecimiento tumoral al permitir que las células cancerosas eviten la vigilancia inmune (Lemos 2016; Munn 2016). Otros ingredientes activos (agentes antineoplásicos) para uso en combinación o coadministrados con los compuestos actualmente inventados de Fórmula I son inhibidores de IDO. Epacadostat, ((Z)-N-(3-bromo-4-fluorofenil)-N'-hidroxi-4-[2-(sulfamoilamino)etilamino]-1,2,5-oxadiazol-3-carboxamidina) es un inhibidor oral muy potente y selectivo de la enzima IDO1 que revierte la supresión inmune asociada a tumores y restaura respuestas inmunes antitumorales efectivas. Epacadostat se divulga en la Patente de EE. UU. No. 8034953.
Ejemplos adicionales de otros agentes terapéuticos (agentes antineoplásicos) para uso en combinación o coadministrados con un compuesto de Fórmula I son inhibidores de CD73 y antagonistas de adenosina A2a y A2b.
Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden usar en combinación con al menos otro agente terapéutico útil en la prevención o el tratamiento de infecciones bacterianas y virales. Ejemplos de dichos agentes incluyen, sin limitación: inhibidores de la polimerasa tales como los divulgados en el documento WO 2004/037818, así como los divulgados en los documentos WO 2004/037818 y WO 2006/045613; JTK-003, JTK-019, NM-283, H<c>V-796, R-803, R1728, R1626, así como los divulgados en los documentos WO 2006/018725, WO 2004/074270, WO 2003/095441, US2005/0176701, WO 2006/020082, WO 2005/080388, WO 2004/064925, WO 2004/065367, WO 2003/007945, WO 02/04425, WO 2005/014543, WO 2003/000254, EP 1065213, WO 01/47883, WO 2002/057287, WO 2002/057245 y agentes similares; inhibidores de la replicación tales como aciclovir, famciclovir, ganciclovir, cidofovir, lamivudina y agentes similares; inhibidores de proteasa tales como los inhibidores de proteasas de HIV saquinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir, amprenavir, fosamprenavir, brecanavir, atazanavir, tipranavir, palinavir, lasinavir y los inhibidores de proteasas de HCV BILN2061, VX-950, SCH503034; y agentes similares; inhibidores de la transcriptasa inversa tipo análogos de nucleósidos y nucleótidos tales como zidovudina, didanosina, lamivudina, zalcitabina, abacavir, estavudina, adefovir, adefovir dipivoxil, fozivudina, todoxil, emtricitabina, alovudina, amdoxovir, elvucitabina, tenofovir disproxil fumarato, tenofovir alafenamida fumarato/hemifumarato y agentes similares; inhibidores de la transcriptasa inversa tipo no nucleósidos (incluido un agente que tiene actividad antioxidante como inmunocal, oltipraz, etc.) tales como nevirapina, delavirdina, efavirenz, lovirida, inmunocal, oltipraz, capravirina, TMC-278, TMC-125, etravirina, rilpivirina y agentes similares; inhibidores de entrada tales como enfuvirtida (T-20), T-1249, PRO-542, PRO-140, TNX-355, BMS-<80 6>, 5-Helix y agentes similares; inhibidores de la integrasa tales como dolutegravir, elvitegravir, raltegravir L-870,180 y agentes similares; inhibidores de gemación tales como PA-344 y PA-457, y agentes similares; inhibidores de los receptores de quimiocinas tales como vicriviroc (Sch-C), Sch-D, TAK779, maraviroc (documento UK-427.857), TAK449, así como los divulgados en los documentos WO 02/74769, WO 2004/054974, WO 2004/055012, WO 2004/055010, WO 2004/055016, WO 2004/055011 y WO 2004/054581, y agentes similares; potenciadores farmacocinéticos tales como cobicistat; inhibidores de neuraminidasa tales como CS-8958, zanamivir, oseltamivir, peramivir y agentes similares; bloqueadores de los canales iónicos tales como amantadina o rimantadina y agentes similares; y ARN de interferencia y oligonucleótidos antisentido y tales como ISIS-14803 y agentes similares; agentes antivirales de mecanismo de acción indeterminado, por ejemplo los divulgados en los documento WO 2005/105761, WO 2003/085375, WO 2006/122011, ribavirina y agentes similares.
Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden usar en combinación con otros agentes terapéuticos que pueden ser útiles en el tratamiento de infecciones por herpesvirus asociadas al sarcoma de Kaposi (KSHV y relacionadas con KSHV) que incluyen, sin limitación, agentes quimioterapéuticos tales como bleomicina, vinblastina, vincristina, ciclofosfamida, prednisona, alitretinoína y antraciclinas liposomales tales como doxorrubicina, daunorrubicina, inmunoterapéuticos tales como rituximab, tocilizumab, siltuximab y otros tales como paclitaxel y rapamicina.
En una realización de esta invención, al menos otro agente terapéutico es un agente antimicobacteriano o un antibiótico bactericida. Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden usar en combinación con al menos otro agente terapéutico que puede ser útil en el tratamiento de la infección por TB (Mycobacterium tuberculosis) y Tularemia (Francisella tularensis) incluyen, sin limitación, agentes orales de primera línea isoniazida, rifampicina, pirazinamida, etambutol, estreptomicina, rifabutina; agentes inyectables que incluyen kanamicina, amikacina, capreomicina, estreptomicina; fluoroquinolonas que incluyen levofloxacina, moxifloxacina, ofloxacina; agentes bacteriostáticos orales ácido para-aminosalicílico, cicloserina, terizidona, tionamida, protionamida; SQ-109 PNU-100480, rifapentina, linezolid, PA-824, AZD5847, gatifloxacina, moxifloxacina, sirturo (bedaquilina) delamanid (OPC-67683) y agentes con mecanismo de acción indeterminado en el tratamiento de la TB resistente a los fármacos, incluidos dosis altas de clofazimina, linezolid, amoxicilina/clavulanato, tioacetazona, imipenem/cilastatina, isoniazida, claritromicina, ciprofloxacina. Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden usar en combinación con un agente antimicobacteriano (tales como isoniazida (INH), ehambutol (Myambutol®), rifampicina (Rifadin®), y pirazinamida (PZA)), un antibiótico bactericida (tal como rifabutina (Mycobutin®) o rifapentina (Priftin®)), un aminoglucósido (Capreomicina®), una fluorquinolona (levofloxacina, moxifloxicina, ofloxacina), tioamida (ehionamida), ciclosporina (Sandimmune®), ácido paraaminosalicílico (Paser®), cicloserina (Seromycin®), kanamicina (Kantrex®), estreptomicina, viomicina, capreomicina (Capastat®), fumarato de bedaquilina (Sirturo®), oxazolidinona (Sutezolid®), PNU-100480 o delamanid (OPC-67683).
Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden usar en combinación con al menos otro agente terapéutico que puede ser útil en el tratamiento de Chlamydia que incluye, sin limitaciones, azitromicina, doxiciclina, eritromicina, levofloxacina, ofloxacina.
Los compuestos de esta invención también se pueden usar en combinación con al menos otro agente terapéutico que puede ser útil en el tratamiento de la infección por Plasmodium que incluye, sin limitaciones, cloroquina, atovacuonaproguanil, arteméter-lumefantrina, mefloquina, quinina, quinidina, doxociclina, cindamicina, artesunato, primaquina.
En el tratamiento de la esclerosis lateral amiotrófica (ELA), se puede usar un compuesto de Fórmula I o una de sus sales farmacéuticamente aceptables en combinación con un bloqueador de glutamato (riluzol (Rilutek®)), quinidina (Nuedexta®), anticolinérgicos (Amitriptyline®, Artane®, parche de escopolamina (Transderm Scop®)), simpaticomiméticos (pseudoefedrina), mucolíticos (guaifenesina) o analgésicos (tramadol (Ultram®); ketorolaco (Toradol®); morfina; parche de fentanilo (Duragesic®)).
En el tratamiento de la esclerosis múltiple, se puede usar un compuesto de Fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables en combinación con corticosteroides (prednisona, metilprednisolona), Interferón Beta 1-A (Avonex®, Extavia®, Rebif®, Betaseron®), peginterferón beta-IA (Plegridy®), acetato de glatiramero (Copaxone®); acetato de glatiramero (Glatopa®-equivalente genérico de Copaxone); fumarato de dimetilo (Tecfidera®); Fingolimod (Gilenya®); teriflunomida (Aubagio®); dalfampridina (Ampyra®); daclizumab (Zinbryta); alemtuzumab (Lemtrada®); natalizumab (Tysabri®); o clorhidrato de mitoxantrona (Novantrone®).
Los compuestos de esta invención también se pueden usar como adyuvantes para mejorar la respuesta inmune generada ante cualquier antígeno dado y/o reducir la reactogenicidad/toxicidad en un paciente, particularmente un ser humano, que lo necesite. Como tal, un compuesto de esta invención puede usarse en combinación con composiciones de vacunas para modificar, especialmente para mejorar, la respuesta inmune, por ejemplo aumentando el nivel o la duración de la protección y/o permitiendo una reducción en la dosis antigénica.
Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden usar en combinación con una o más vacunas o antígenos inmunogénicos útiles en la prevención o el tratamiento de infecciones virales. Dichas vacunas o antígenos inmunogénicos incluyen, sin limitación, proteínas o partículas derivadas de patógenos tales como virus atenuados, partículas de virus y proteínas virales utilizadas típicamente como sustancias inmunogénicas. Ejemplos de virus y antígenos virales incluyen, pero no se limitan a, poliovirus, coronaviridae y coronavirus, rinovirus (todos los subtipos), adenovirus (todos los subtipos), hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, virus del papiloma humano (incluidos todos los subtipos), virus de la rabia, virus linfotrópico de células T de ser humano (todos los subtipos), virus de la rubéola, virus de las paperas, virus Coxsackie A (todos los subtipos), virus Coxsackie B (todos los subtipos), enterovirus de ser humano, herpesvirus incluido el citomegalovirus, virus de Epstein-Barr, herpesvirus de ser humano (todos los subtipos), virus del herpes simple, virus de la varicela zoster, virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) (todos los subtipos), virus de Epstein-Barr, reovirus (todos los subtipos), filovirus incluidos el virus de Marburg y el virus del Ébola (todas las cepas), arenavirus, incluidos el virus de la coriomeningitis linfocítico, el virus de Lassa, el virus Junín y el virus Machupo, arbovirus incluidos el virus del Nilo Occidental, virus del dengue (todos los serotipos), virus del Zika, virus de la fiebre por garrapatas de Colorado, virus Sindbis, Togaviraidae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Reoviridae, Rhabdoviridae, Orthomyxoviridae, Poxvirus incluidos ortopoxvirus (variola virus, virus de la viruela del mono, virus vaccinia, virus de la viruela vacuna), yatapoxvirus (virus de tanapox, virus del tumor del mono Yaba), parapoxvirus, moluscipoxvirus, fiebre amarilla, hantavirus incluidos Hantaan, Seúl, Dobrava, Sin Nombre, Puumala y Saaremaa similar a Dobrava, virus de la parainfluenza de ser humano y virus de la gripe (todos los tipos), virus de la gripe HINI y de la gripe porcina, virus respiratorio sincitial (todos los subgrupos), rotavirus incluidos los rotavirus humanos A-E, rotavirus bovino, rotavirus del mono rhesus, poliomavirus incluido el virus 40 de los simios, Virus JC, virus BK, coltivirus, virus eyach, calcivirus y parvoviridae, incluidos dependovirus, parvovirus y eritrovirus.
Por consiguiente, esta invención proporciona una composición inmunogénica que comprende un antígeno o una composición antigénica y un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Se proporciona además una composición de vacuna que comprende un antígeno o una composición antigénica y un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables también se pueden usar en combinación con al menos otro agente terapéutico que puede ser útil en la prevención o el tratamiento de infecciones virales, por ejemplo inmunoterapias (p. ej., interferón u otras citocinas/quimiocinas, moduladores de receptores de citocinas/quimiocinas, agonistas o antagonistas de citocinas y agentes similares); y vacunas terapéuticas, agentes antifibróticos, agentes antiinflamatorios tales como corticosteroides o NSAID (agentes antiinflamatorios no esteroideos) y agentes similares.
Un compuesto que modula STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede administrarse en combinación con otros agentes antiinflamatorios, incluyendo corticosteroides orales o tópicos, agentes anti-TNF, preparaciones de ácido 5-aminosalicílico y mesalamina, hidroxicloroquina, tiopurinas, metotrexato, ciclofosfamida, ciclosporina, inhibidores de la calcineurina, ácido micofenólico, inhibidores de mTOR, inhibidores de JAK, inhibidores de Syk, agentes biológicos antiinflamatorios, incluidos agentes biológicos anti-IL6, agentes anti-ILI, agentes biológicos anti-IL17, anti-CD22, agentes anti-integrina, agentes biológicos anti-IFNa, anti-CD20 o CD4 y otros inhibidores de citoquinas o agentes biológicos para receptores o interleucinas de células T o células B.
Por ejemplo, en el tratamiento del lupus eritematoso sistémico y trastornos lúpicos relacionados, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con al menos otro agente terapéutico, que incluye, un corticosteroide (tal como prednisolona (Delatsone®, Orapred, Millipred, Omnipred, Econopred, Flo-Pred), un agente inmunosupresor (tal como metotrexato (Rhuematrex®, Trexall®), dexametasona (Decadron®, Solurex®), micofenolato de mofetilo (Cellcept®), Tacrolimus®, Sirolimus®), terapia con células B (belimumab (Benlysta®), inhibidor de células B (Atacicept®, Apratuzumab® (anti-CD22), SBI-087 (anti-CD20), un anticuerpo anti-BAFF (LY2127399, A623), Velcade®), azatioprina (Azasan®, Imuran®), triamcinolona (Clinacort®, Kenalog-10®), hidroxicloroquina (Plaquenil®), talidomida (Immunoprin®, Contergan®), terapia con inmunoglobulinas (HyQiva®, Flebogamma®, Gamunex®, Privigen®, Gammagard®), terapia anti-interferón alfa (Rontalizumab®, Sifalimumab®, Ag S-009®, IFN Kinoid), bloqueadores de t Lr 7 y TLR9 (Im O-3100), terapias anticitocinas (anti-IL6 (CNTO-136), anti-interferón gamma (AMG811), terapia inmunomoduladora (Lupuzor™, Abatacept, Orencia®, AMG557, Laquinimod, Paquinimod, Leflunomida, anti-ICOS (Medi-570), anticuerpo anti-ligando
CD40 (CDP7657)) y/o un inhibidor de la agregación plaquetaria (aspirina).
En el tratamiento de vasculitis y enfermedades con inflamación de vasos sanguíneos pequeños o medianos, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con agentes alquilantes (ciclofosfamida, Cytoxan®), anticuerpo anti-CD20 antirreumático (Rituxan®, Rituximab®), e inhibidores anti-TNF (Etanrcept®).
En el tratamiento de la psoriasis, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con ixekizumab, tildrakizumab (MK-3222) o secukinumab (AIN457).
En una realización de esta invención, al menos otro agente terapéutico se selecciona de un corticosteroide inhalado, un agonista beta de acción prolongada, una combinación de un corticosteroide inhalado y un agonista beta de acción prolongada, un agonista beta de acción corta, un modificador de leucotrienos, un anti-IgE, un broncodilatador de metilxantina, un inhibidor de mastocitos y un antagonista muscarínico de acción prolongada. Por ejemplo, en el tratamiento del asma, se puede administrar un compuesto que inhiba STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un corticosteroide inhalado ((ICS) tal como propionato de fluticasona (Flovent®), dipropionato de beclometasona (QVAR®), budesonida (Pulmicort), acetónido de trimcinolona (Azmacort®), flunisolida (Aerobid®), furoato de mometasona (Asmanex® Twisthaler®), o ciclesonida (Alvesco®)), un agonista beta de acción prolongada ((LABA) tal como el fumarato de formoterol (Foradil®), xinafoato de salmeterol (Serevent®)), una combinación de un ICS y LABA (tal como furoato de fluticasona y vilanterol
(Breo Ellipta®), formoterol/budesonida para inhalación (Symbicort®), dipropionato de beclometasona/formoterol (Inuvair®), y propionato de fluticasona/salmeterol (Advair®), un agonista beta de acción corta ((SABA), tal como el sulfato de albuterol (ProAir®, Proventil HFA®, Ventolin HFA®, solución para inhalación AccuNeb®), tartrato de levalbuterol (Xopenex® HFA), bromuro de ipratropio/albuterol (Combivent® Respimat®), bromuro de ipratropio (Atrovent® HFA), un modificador de leucotrienos (tal como montelukast sódico (Singulair®), zafirlukast (Accolate®), o zileutón (Zyflo®) y anti-IgE (tal como omalizumab (Xolair®)), un broncodilatador de metilxantina (tal como teofilina (Accurbron®, Aerolate®, Aquaphyllin®, Asbron®, Bronkodyl®, Duraphyl®, Elixicon®, Elixomin®, Elixo Lanophyllin®, Quibron-T®, Slo-Bid®, Slo-Phyllin®, Somophyllin®, Sustaire®, Synophylate®, T-Phyll®, Teo-24®, Theo-Dur®, Teobid®, Teochron®, Teoclear®, Theolair®, Theolixir®, Teophyl®, Theovent®, Uni-dur®, Uniphyl®), un inhibidor de mastocitos (tales como cromulina sódica (Nasalcrom®) y nedocromil sódico (Tilade®)), un antagonista muscarínico de acción prolongada ((LAMA), tal como furoato de mometasona/fumarato de formoterol dihidrato (Dulera®)).
Otros agentes que pueden ser adecuados para su uso en terapia combinada en el tratamiento del asma incluyen un inhibidor de la proteína tirosina quinasa (masitinib), un antagonista del receptor CRTH2/prostanoide D (AMG 853), indacaterol (Arcapta®, Neohaler®), un aerosol para inhalación de epinefrina (E004), furoato de fluticasona/propionato de fluticasona, polvo para inhalación de vinanterol/furoato de fluticasona (Relovair™), propionato de fluticasona/fumarato de eformoterol deshidratado (Flutiform®), reslizumab, salbutamol en polvo seco para inhalación, bromuro de tiotropio (Spiriva®HandiHaler®), formoterol/budesonida (Symbicort®SMART®), furoato de fluticasona (Veramyst®), VR506 de Vectura, lebrikizumab (RG3637), una combinación de inhibidores (RPL554) de la fosfodiesterasa (PDE)-3 y (PDE)-4.
En una realización de esta invención, al menos otro agente terapéutico se selecciona de un agonista beta de acción prolongada, un antagonista anticolinérgico o muscarínico inhalado de acción prolongada, un inhibidor de la fosfodiesterasa, una combinación de un agonista beta de acción prolongada con corticosteroide inhalado, un agonista beta de acción corta y un corticosteroide inhalado. Por ejemplo, en el tratamiento de COPD, se puede administrar un compuesto que modula STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un LABA (tal como xinafoato de salmeterol (Serevent), umeclidinio/vilanterol (Anoro Ellipta®), umeclidinio (Incruse Ellipta®), tartrato de aformoterol (Brovana®), polvo para inhalación de fumarato de formoterol (Foradil®), maleato de indacterol (Arcapta® Neohaler®), o propionato de fluticasona/fumarato de formoterol deshidratado (Flutiform®)), un anticolinérgico inhalado de acción prolongada (o antagonista muscarínico, tal como el bromuro de tiotropio (Spiriva®), y bromuro de aclidinio (Tudorza®, Pressair®), un inhibidor de la fosfodiesterasa (PDE-r) (tal como roflumilast, Daliresp®), una combinación ICS/LABA (tal como furoato de fluticasona y vilanterol (Breo Ellipta®), propionato de fluticasona/salmeterol (Advair®), budesonida/formoterol (Symbicort®), mometasona/formoterol (Dulera®), bromuro de ipratropio/sulfato de albuterol (Duoneb®, Atrovent®), albuterol/ipratropio (Combivent Respimat®)), un SABA (tales como el bromuro de ipratropio (Atrovent®) y el sulfato de albuterol (ProAir®, Proventil®)), y un ICS (tales como budesonida (Pulmicort®), propionato de fluticasona (Flovent®) y dipropionato de beclometasona (QVAR®)).
Otros agentes que pueden ser adecuados para su uso en terapia de combinación en el tratamiento de COPD incluyen la inhalación de SCH527123 (un antagonista de CXCR2), bromuro de glicopronio ((NVA237) Seebri®, Breezhaler®), bromuro de glicopirronio y maleato de indacaterol ((QVA149) Ultibro®, Breezhaler®), glicopirrolato y fumarato de formoterol (PT003), maleato de indacaterol (QVA149), olodaterol (Striverdi®, Respimat®), tiotropio (Spiriva®)/olodaterol (Striverdi®, Respimat®) y aclidinio/formoterol.
En una realización de esta invención, al menos otro agente terapéutico se selecciona de un corticosteroide oral, globulina antitimocítica, talidomida, clorambucilo, un bloqueador de los canales de calcio, un emoliente tópico, un inhibidor de ACE, un inhibidor de la reabsorción de serotonina, un inhibidor de los receptores de la endotelina-1, un agente antifibrótico, un inhibidor de la bomba de protones o imatinib, ARG201 y tocilizumab. Por ejemplo, en el tratamiento de la esclerodermia sistémica, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un corticosteroide oral (tal como prednisolona (Delatsone®, Orapred, Millipred, Omnipred, Econopred, Flo-Pred)), un agente inmunosupresor (tal como metotrexato (Rhuematrex®, Trexall®), ciclosporina (Sandimmune®), globulina antitimocítica (Atgam®), micofenolato de mofetilo (CellCept®), ciclofosfamida (Cytoxan®), FK506 (tacrolimus), talidomida (Thalomid®), clorambucilo (Leukeran®), azatioprina (Imuran®, Azasan®)), un bloqueador de los canales de calcio (tal como nifedipina (Procardia®, Adalat®) o nicardipina (Cardene®), un emoliente tópico (ungüento de nitroglicerina), un inhibidor de la ACE (tal como lisinopril (Zestril®, Prinivil®), diltaizem (Cardizem®, Cardizem SR®, Cardizem CD®, Cardia®, Dilacor®, Tiazac®)), un inhibidor de la reabsorción de la serotonina (tal como fluoxetina (Prozac®)), un inhibidor de los receptores de la endotelina-1 (tal como bosentán (Tracleer®) o epoprostenol (Flolan®, Veletri®, Prostacyclin®)) un agente antifibrótico (tal como colchicinas (Colcrys®), ácido para-aminobenzoico (PABA), dimetilsulfóxido (DMSO) y D-penicilamina (Cuprimine®, Depen®), interferón alfa e interferón gamma (INF-g)), un inhibidor de la bomba de protones (tales como omeprazol (Prilosec®), metoclopramida (Reglan®), lansoprazol (Prevacid®), esomeprazol (Nexium®), pantoprazol (Protonix®), rabeprazol (Aciphex®)) o imatinib (Gleevec®), ARG201 (arGentis Pharmaceutical), belimumab (Benlysta®), tocilizumab (Actema®).
En el tratamiento del síndrome de Sjogren, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con agentes antirreumáticos (hidroxicloroquina y Plaquenil®, Ridaura®, Kineret®), agonistas colinérgicos (Salagen®, Evoxac®), un inhibidor de JAK (Xelijanz® y tratamientos anti-TNF (Remicade®, Humira®, Enbrel®, Cimzia®, Simponi®).
En una realización de esta invención, al menos otro agente terapéutico es un factor de crecimiento neurotrófico ciliar o un agente de transferencia genética. Por ejemplo, en el tratamiento de la retinitis pigmentosa, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un factor de crecimiento neurotrófico ciliar (NT-501-CNTF) o un agente de transferencia génica, UshStat®.
En una realización de esta invención, al menos otro agente terapéutico se selecciona de una vacuna trivalente (IIV3) inactivada contra la gripe, una vacuna tetravalente (IIV4) inactivada contra la gripe, una vacuna recombinante trivalente contra la gripe, una vacuna viva atenuada tetravalente contra la gripe, un agente antiviral, una vacuna antigripal inactivada. Por ejemplo, en el tratamiento de la gripe, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con una vacuna trivalente (IIV3) inactivada contra la gripe (tales como Afluria®, Fluarix®, Flucelvax®, FluLaval®, Fluvirin®, Fluzone®), una vacuna tetravalente (IIV4) inactivada contra la gripe (tales como Fluarix® Quadrivalent, Flulaval® Quadrivalent, Fluzone® Quadrivalent), una vacuna recombinante trivalente contra la gripe (tales como FluBlok®), una vacuna tetravalente viva atenuada contra la gripe (tal como FluMist® Quadrivalent), un agente antiviral (tal como oseltamivir (Tamiflu®), zanamivir (Relenza®), rimantadina (Flumadine®), o amantadina (Symmetrel®)), o Fluad®, Fludasa, FluNhance®, Preflucel o VaxiGrip®.
En el tratamiento de una infección por estafilococos, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un antibiótico (tales como una cefalosporina p-lactámica (Duricef®, Kefzol®, Ancef®, Biocef®, etc.), nafcilina (Unipen®), una sulfonamida (sulfametoxazol y trimetoprima (Bacrim®, Septra®) sulfasalazina (Azulfidine®), acetil sulfisoxazol (Gantrisin®), etc.), o vancomicina (Vancocin®)).
En una realización de esta invención, al menos otro agente terapéutico se selecciona de un inmunomodulador tópico o inhibidor de la calcineurina, un corticosteroide tópico, un corticosteroide oral, un interferón gamma, un antihistamínico o un antibiótico. Por ejemplo, en el tratamiento de la dermatitis atópica, se puede administrar un compuesto que module STING, particularmente un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inmunomodulador tópico o un inhibidor de la calcineurina (tal como pimecrolimus (Elidel®) o ungüento de tacrolimus (Protopic®)), un corticosteroide tópico (tal como hidrocortisona (Synacort®, Westcort®), betametasona (Diproleno®), Flurandrenolida (Gordan®), fluticasona (Cutivate®), triamcinolona (Kenalog®), fluocinonida (Lidex®), y clobetasol (Temovate®)), un corticosteroide oral (tal como hidrocortisona (Cortef®), metil prednisolona (Medrol®), o prednisolona (Pediapred®, Prelone®), un inmunosupresor (tal como ciclosporina (Neoral®) o interferón gamma (Alferon N®, Infergen®, Intrón A, Roferon-A®)), un antihistamínico (para la picazón tal como Atarax®, Vistaril®, Benadril®), un antibiótico (tal como los derivados de la penicilina, flucloxacilina (Floxapen®) o dicloxacilina (Dynapen®), eritromicina (Eryc®, T-Stat®, Erythra-Derm®, etc.)), un agente inmunosupresor no esteroideo (tal como la azatioprina (Imuran®, Azasan®), metotrexato (Rhuematrex®, Trexall®), ciclosporina (Sandimmune®), o micofenolato de mofetilo (CellCept®)).
Los compuestos de la invención también pueden formularse con vacunas como adyuvantes para modular su actividad. Dichas composiciones pueden contener anticuerpo(s) o fragmento(s) de anticuerpo(s) o un componente antigénico que incluyen, pero no se limitan a, proteínas, ADN, bacterias y/o virus vivos o muertos o partículas similares a virus, junto con uno o más componentes con actividad adyuvante que incluyen, pero no se limitan a, sales de aluminio, emulsiones de aceite y agua, proteínas de choque térmico, preparaciones y derivados de lípido A, glicolípidos, otros agonistas de TLR tales como ADN CpG o agentes similares, citoquinas tales como GM-CSF o IL-12 o agentes similares.
En un aspecto adicional de la invención, se proporciona un adyuvante de vacunas que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Se proporciona además una composición de vacuna que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un antígeno o una composición antigénica.
Métodos de tratamiento
Los compuestos de la presente invención se pueden usar en un método de terapia. También se proporciona un método de tratamiento, que comprende administrar a un sujeto que necesita tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" es una cantidad suficiente para mostrar beneficio a un paciente. Tal beneficio puede ser al menos una mejora de al menos un síntoma. La cantidad real administrada, la tasa y el tiempo de administración dependerán de la naturaleza y gravedad de lo que se esté tratando. La prescripción de tratamiento, p. ej., las decisiones sobre la dosificación son responsabilidad de los médicos de familia y otros médicos.
Administración
El compuesto activo o la composición farmacéutica que comprende el compuesto activo se puede administrar a un sujeto mediante cualquier vía de administración conveniente, ya sea sistémica/periféricamente o en el sitio de acción deseada, que incluyen, pero no se limitan a, oral (p. ej., mediante ingestión); tópica (que incluyen, p. ej., transdérmica, intranasal, ocular, bucal y sublingual); pulmonar (p. ej., mediante terapia de inhalación o insuflación usando, p. ej., un pulverizador, p. ej., a través de la boca o la nariz); rectal; vaginal; parenteral, por ejemplo, mediante inyección, incluyendo subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbitaria, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnoidea, intravítrea e intraesternal; mediante implante de un depósito, por ejemplo, por vía subcutánea, intravítrea o intramuscular. El sujeto puede ser un eucariota, un animal, un animal vertebrado, un mamífero, un roedor (p. ej., un conejillo de indias, un hámster, una rata, un ratón), un murino (p. ej., un ratón), un canino (p. ej., un perro), un felino (p. ej., un gato), un equino (p. ej., un caballo), un primate, un simio (p. ej., un mono o un simio), un mono (p. ej., un tití, un babuino), un simio (p. ej., un gorila, un chimpancé, un orangután, un gibón), o un ser humano.
En una realización en la que se tratan tumores, se puede utilizar la inyección intratumoral.
Formulaciones
Si bien es posible que el compuesto activo se administre solo, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica (p. ej., una formulación) que comprende al menos un compuesto activo, como se definió anteriormente, junto con uno o más vehículos, adyuvantes, excipientes, diluyentes, cargas, tampones, estabilizadores, conservantes, lubricantes u otros materiales bien conocidos por los expertos en la técnica farmacéuticamente aceptables y opcionalmente otros agentes terapéuticos o profilácticos.
Por lo tanto, la presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas, como se definió anteriormente, y métodos para preparar una composición farmacéutica que comprende mezclar al menos un compuesto activo, como se definió anteriormente, junto con uno o más vehículos, excipientes, tampones, adyuvantes, estabilizadores u otros materiales farmacéuticamente aceptables, como se describe en el presente documento.
La expresión "farmacéuticamente aceptable" como se usa en el presente documento se refiere a compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del buen juicio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de un sujeto (p. ej., un ser humano) sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable. Cada vehículo, excipiente, etc. también tiene que ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los demás ingredientes de la formulación.
Se pueden encontrar vehículos, excipientes, etc. adecuados en textos farmacéuticos estándar, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania, 1990.
Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse mediante cualquier método bien conocido en la técnica farmacéutica. Dichos métodos incluyen la etapa de asociar el compuesto activo con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme e íntimamente el compuesto activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos, y luego, si es necesario, dando forma al producto.
Las formulaciones pueden estar en forma de líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, elixires, jarabes, comprimidos, pastillas, gránulos, polvos, cápsulas, sellos, píldoras, ampollas, supositorios, pesarios, ungüentos, geles, pastas, cremas, pulverizadores, nieblas, espumas, lociones, aceites, bolos, electuarios o aerosoles.
Las formulaciones adecuadas para administración oral (p. ej., por ingestión) pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, sellos o comprimidos, conteniendo cada una cantidad predeterminada del compuesto activo; en forma de polvo o gránulos; como solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite; como bolo; como electuario; o como pasta.
Se puede preparar un comprimido por medios convencionales, p. ej., compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos pueden prepararse comprimiendo en una máquina adecuada el compuesto activo en una forma fluida tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con uno o más aglutinantes (p. ej., povidona, gelatina, goma arábiga, sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetilcelulosa); cargas o diluyentes (p. ej., lactosa, celulosa microcristalina, hidrógeno-fosfato de calcio); lubricantes (p. ej., estearato de magnesio, talco, sílice); disgregantes (p. ej., glicolato de almidón sódico, povidona reticulada, carboximetilcelulosa sódica reticulada); agentes tensioactivos o dispersantes o humectantes (p. ej., laurilsulfato de sodio); y conservantes (p. ej., p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, ácido sórbico). Los comprimidos moldeados se pueden preparar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Opcionalmente, los comprimidos pueden estar recubiertos o ranurados y pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del compuesto activo que contienen usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado. Opcionalmente, los comprimidos pueden estar provistos de un recubrimiento entérico, para proporcionar liberación en partes del intestino distintas del estómago.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica (p. ej., transdérmica, intranasal, ocular, bucal y sublingual) se pueden formular como un ungüento, crema, suspensión, loción, polvo, solución, pasta, gel, pulverizador, aerosol o aceite. Alternativamente, una formulación puede comprender un parche o un apósito tal como un vendaje o emplasto adhesivo impregnado con compuestos activos y opcionalmente uno o más excipientes o diluyentes.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica en la boca incluyen grageas que comprenden el compuesto activo en una base aromatizada, normalmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el compuesto activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia; y enjuagues bucales que comprenden el compuesto activo en un vehículo líquido adecuado.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica en los ojos también incluyen gotas para los ojos en las que el compuesto activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para el compuesto activo.
Las formulaciones adecuadas para administración nasal, en las que el vehículo es un sólido, incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 20 a aproximadamente 500 micrómetros, que se administra de la manera en que se toma el rapé, es decir, por inhalación rápida a través del conducto nasal desde un recipiente con el polvo colocado cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas en las que el vehículo es un líquido para administración como, por ejemplo, pulverizador nasal, gotas nasales o mediante administración en aerosol mediante nebulizador, incluyen soluciones acuosas u oleosas del compuesto activo.
Las formulaciones adecuadas para la administración por inhalación incluyen aquellas presentadas como un pulverizador en aerosol en un envase presurizado, con el uso de un propulsor adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otros gases adecuados.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica a través de la piel incluyen ungüentos, cremas y emulsiones. Cuando se formula como un ungüento, el compuesto activo se puede emplear opcionalmente con una base de ungüento parafínica o miscible en agua. Alternativamente, los compuestos activos se pueden formular en una crema con una base de crema de aceite en agua. Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos aproximadamente 30% p/p de un alcohol polihídrico, es decir, un alcohol que tiene dos o más grupos hidroxilo tales como propilenglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol y mezclas de los mismos. Las formulaciones tópicas pueden incluir deseablemente un compuesto que mejore la absorción o penetración del compuesto activo a través de la piel u otras áreas afectadas. Ejemplos de tales potenciadores de la penetración dérmica incluyen dimetilsulfóxido y compuestos análogos relacionados.
Cuando se formula como una emulsión tópica, la fase oleosa puede comprender opcionalmente simplemente un emulsionante (también conocido como emulgente), o puede comprender una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con una grasa y un aceite. Preferiblemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante lipófilo que actúa como estabilizador. También se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. Juntos, el/los emulsionante(s) con o sin estabilizante(s) forman la denominada cera emulsionante, y la cera junto con el aceite y/o la grasa forman la denominada base de ungüento emulsionante que forma la fase oleosa dispersa de las formulaciones en forma de crema.
Los emulgentes y estabilizadores de emulsión adecuados incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y laurilsulfato de sodio. La elección de aceites o grasas adecuados para la formulación se basa en lograr las propiedades cosméticas deseadas, ya que la solubilidad del compuesto activo en la mayoría de los aceites que probablemente se usan en formulaciones farmacéuticas en emulsión puede ser muy baja. Por tanto, la crema debe ser preferentemente un producto no graso, que no manche y lavable con una consistencia adecuada para evitar fugas de los tubos u otros recipientes. Se pueden usar ésteres alquílicos mono o dibásicos de cadena lineal o ramificada tales como diisoadipato, estearato de isocetilo, diéster de propilenglicol de ácidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de ésteres de cadena ramificada conocida como Crodamol CAP, siendo los ésteres preferidos los tres últimos. Estos se pueden usar solos o en combinación según las propiedades requeridas.
Alternativamente, se pueden usar lípidos de alto punto de fusión tales como parafina blanda blanca y/o parafina líquida u otros aceites minerales.
Las formulaciones adecuadas para la administración rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.
Las formulaciones adecuadas para la administración vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en pulverizadores que contienen, además del compuesto activo, vehículos que se sabe que son apropiados en la técnica.
Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral (p. ej., mediante inyección, incluyendo cutánea, subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), incluyen soluciones para inyección estériles, isotónicas, acuosas y no acuosas, libres de pirógenos, que pueden contener antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizadores, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes, y liposomas o exosomas u otros sistemas de micropartículas que están diseñados para dirigir el compuesto a componentes sanguíneos o uno o más órganos. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para uso en tales formulaciones incluyen inyección de cloruro de sodio, solución de Ringer o inyección de Ringer lactato. Normalmente, la concentración del compuesto activo en la solución es de aproximadamente 1 ng/mL a aproximadamente 10 pg/mL, por ejemplo de aproximadamente 10 ng/mL a aproximadamente 1 pg/mL. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes sellados de dosis unitarias o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales, y pueden almacenarse en una condición liofilizada que requiere sólo la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Se pueden preparar soluciones y suspensiones inyectables extemporáneas a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles. Las formulaciones pueden estar en forma de liposomas o exosomas u otros sistemas de micropartículas que están diseñados para dirigir el compuesto activo a los componentes sanguíneos o a uno o más órganos.
Dosis
Un experto en la técnica apreciará que las dosis apropiadas del compuesto y las composiciones que comprenden el compuesto pueden variar de un paciente a otro. La determinación de la dosis óptima generalmente implicará equilibrar el nivel de beneficio terapéutico con cualquier riesgo o efecto secundario perjudicial. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una variedad de factores que incluyen, pero no se limitan a, la actividad del compuesto particular, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción del compuesto, la duración del tratamiento, otros medicamentos, compuestos y/o materiales utilizados en combinación, la gravedad de la afección y la especie, sexo, edad, peso, afección, salud general e historial médico previo del paciente. La cantidad de compuesto y la vía de administración quedarán en última instancia a discreción del médico, veterinario o clínico, aunque generalmente la dosis se seleccionará para lograr concentraciones locales en el sitio de acción que logren el efecto deseado sin causar daños o efectos secundarios nocivos o perjudiciales.
La administración puede efectuarse en una dosis, de forma continua o intermitente (p. ej., en dosis divididas a intervalos apropiados) durante todo el curso del tratamiento. Los métodos para determinar los medios y la dosis de administración más eficaces son bien conocidos por los expertos en la técnica y variarán según la formulación utilizada para la terapia, el propósito de la terapia, las células diana que se están tratando y el sujeto que se está tratando. Se pueden realizar administraciones únicas o múltiples, seleccionando el nivel de dosis y el patrón el médico, veterinario o clínico tratante.
En general, una dosis adecuada del compuesto activo está en el intervalo de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 mg (más típicamente de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 10 mg) por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. Cuando el compuesto activo es una sal, un éster, una amida, un profármaco o similar, la cantidad administrada se calcula basándose en el compuesto original y, por tanto, el peso real a utilizar aumenta proporcionalmente.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 100 mg, 3 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 150 mg, 2 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 200 mg, 2 veces al día.
Sin embargo, en una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 50 o aproximadamente 75 mg, 3 ó 4 veces al día.
En una realización, el compuesto activo se administra a un paciente humano según el siguiente régimen de dosificación: aproximadamente 100 o aproximadamente 125 mg, 2 veces al día.
Tratamiento
El término "tratamiento", como se usa en el presente documento en el contexto del tratamiento de una afección, se refiere generalmente al tratamiento y terapia, ya sea de un ser humano o de un animal (p. ej., en aplicaciones veterinarias), en el que se logra algún efecto terapéutico deseado, por ejemplo, la inhibición del progreso de la afección, e incluye una reducción en la velocidad de progreso, una parada en la velocidad de progreso, una regresión de la afección, una mejora de la afección y una cura de la afección. También se incluye el tratamiento como medida profiláctica (es decir, profilaxis, prevención).
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", como se utiliza en el presente documento, se refiere a esa cantidad de un compuesto activo, o un material, composición o dosis que comprende un compuesto activo, que es eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable, cuando se administra de acuerdo con un régimen de tratamiento deseado.
De manera similar, la expresión "cantidad profilácticamente eficaz", como se usa en el presente documento, se refiere a esa cantidad de un compuesto activo, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto activo, que es eficaz para producir algún efecto profiláctico deseado, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable, cuando se administra de acuerdo con un régimen de tratamiento deseado.
El sujeto/paciente
El sujeto/paciente puede ser un animal, un mamífero, un mamífero placentario, un marsupial (p. ej., canguro, wombat), un monotrema (p. ej., ornitorrinco), un roedor (p. ej., un conejillo de indias, un hámster, una rata, un ratón), murino (p. ej., un ratón), lagomorfo (p. ej., un conejo), aviar (p. ej., un pájaro), canino (p. ej., un perro), felino (p. ej., un gato), equino (p. ej., un caballo ), porcino (p. ej., un cerdo), ovino (p. ej., una oveja), bovino (p. ej., una vaca), primate, simio (p. ej., un mono o simio), un mono (p. ej., tití, babuino), un simio (p. ej., gorila, chimpancé, orangután, gibón) o un ser humano.
Además, el sujeto/paciente puede ser cualquiera de sus formas de desarrollo, por ejemplo, un feto. En una realización preferida, el sujeto/paciente es un ser humano.
Métodos generales de síntesis
Los compuestos de la invención se pueden preparar empleando los siguientes métodos generales y utilizando procedimientos descritos en detalle en los ejemplos. Las condiciones de reacción a las que se hace referencia son ilustrativas y no limitantes, por ejemplo, un experto en la técnica puede usar una amplia gama de métodos sintéticos para sintetizar los compuestos deseados tales como, pero que no se limitan a, los métodos descritos en la bibliografía (por ejemplo, pero no que se limitan a, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 7a edición, on Larock's Comprehensive Organic Transformations: Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations).
Los compuestos de fórmula I que se describieron anteriormente se pueden preparar mediante estrategias sintéticas descritas a continuación, en las que se aplican las definiciones anteriores.
Síntesis general 1
El esquema 1 ilustra la síntesis de compuestos con la estructura G9. La primera etapa implica la reacción de una cetona G1 adecuadamente sustituida con 2-mercaptoacetato de etilo G2 en presencia de una base adecuada tal como, pero no limitada a, K<2>CO<3>. La bromación del producto G3 para formar el bromuro de alquilo G4 se puede realizar usando una fuente de bromo adecuada tal como, pero no limitada a, N-bromosuccinimida, en presencia de un iniciador tal como, pero no limitado a, peróxido de benzoílo. Se puede llevar a cabo una reacción de oxidación de G4 con un oxidante adecuado tal como, pero no limitado a, N-metilmorfolina N-óxido para dar compuestos del tipo G5. Un equivalente de aldehído G5 con sustituyentes A1, A2, A3 y A4 y un equivalente de aldehído G6 con sustituyentes A11, A12, A13 y A14 se hacen reaccionar con un equivalente de la tetraanilina G7 en presencia de (a) un ácido adecuado tal como, pero no limitado a, ácido acético o (b) bisulfito de sodio o (c) metabisulfito de sodio para dar compuestos del tipo G8. En algunos casos, dos equivalentes del mismo aldehído (es decir, G6 = G5, A1 = A11, A2 = A12, A3 = A13, A4 = A14) se hacen reaccionar con un equivalente de la tetraanilina G7 para dar compuestos del tipo G8. En otros casos, la tetraanilina será simétrica (RC1 = RC11, RC3 = RC13, RC4 = RC14). El ácido dicarboxílico G9 se puede formar mediante hidrólisis del diéster G8 con una base tal como un hidróxido de metal alcalino o un ácido tal como ácido clorhídrico acuoso.
Los expertos en la técnica apreciarán que los sustituyentes RA (cuando A1 = CRA), RB (cuando A2 = CRB), RC (cuando A3 = CRC), y RD (cuando A4 = CRD), RAA (cuando A11 = CRAA), RBB (cuando A12 = CRBB), RCC (cuando A13 = CRcc) y RDD (cuando A14 = CRDD), RC1, RC3 y RC4, RC11, RC13 y RC14 en el compuesto G8 o G9 pueden ser un átomo de halógeno para permitir transformaciones catalizadas por metales de transición, tales como los acoplamientos de Ulmann, Negishi, Stille, Suzuki-Miyaura, Sonogashira y Buchwald-Hartwig, o desplazamientos de SnAr para producir ejemplos adicionales del tipo de compuesto I.
Síntesis General 2
Los compuestos de la estructura G1 pueden obtenerse mediante reacción de un aldehído G10 adecuadamente sustituido con un reactivo de Grignard tal como bromuro de metilmagnesio para dar el alcohol G11. Los métodos para la oxidación del alcohol G11 para dar la cetona G1 serán evidentes para los expertos en la técnica, pero incluyen, por ejemplo, el uso de reactivos tales como trióxido de cromo y ácido sulfúrico.
Síntesis General 3
Los compuestos de estructura G10 se pueden preparar mediante el tratamiento de un areno o heteroareno G12 adecuadamente sustituido con un alquil-litio tal como, pero no se limita a, n-butil-litio, o una base de amida de litio tal como, pero no se limita a, diisopropilamida de litio y posterior inactivación de las especies litiadas resultantes con N,N-dimetilformamida. Alternativamente, las especies litiadas formadas a partir del tratamiento de G12 con un alquillitio o una amida de litio se pueden inactivar con acetaldehído para dar el compuesto G11 directamente.
Síntesis General 4
Los compuestos de fórmula G7 se pueden obtener mediante reacción de un compuesto tipo halo-nitrofenilo G13 adecuadamente sustituido con una diamina del tipo G14 y un equivalente de otro compuesto tipo halo-nitrofenilo del tipo G15 para dar la especie bis-nitro G19. En algunos casos, el compuesto bis-nitro G19 será simétrico donde RC1 = RC11, RC3 = RC13, RC4 = RC14. Alternativamente, se puede acceder a compuestos del tipo G19 haciendo reaccionar primero un compuesto tipo halo-nitrofenilo G13 adecuadamente sustituido con una diamina G16 monoprotegida con un grupo protector adecuado tal como, pero sin limitarse a, un grupo Boc para dar el compuesto intermedio G17. La desprotección de la amina usando, por ejemplo, condiciones ácidas proporciona intermedios del tipo G18 que pueden hacerse reaccionar posteriormente con un grupo halo-nitrofenilo G15 adecuadamente sustituido para dar el intermedio di-nitro G19. Una etapa de reducción final, tal como la hidrogenación usando Pd al 10%/C en una atmósfera de hidrógeno, proporciona acceso al intermedio tipo tetraanilina G7.
Síntesis General 5
Las condiciones para la conversión del diácido G9 en el diéster o la diamida G21 serán evidentes para los expertos en la técnica, pero incluyen un exceso de un nucleófilo G20 adecuado y un catalizador tal como ácido sulfúrico concentrado (para la formación de un éster), como se muestra en el Esquema 5a. Alternativamente, G9 puede activarse primero mediante un agente de acoplamiento tal como, pero no se limita a, hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio 3-óxido, 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o N,N'-diciclohexilcarbodiimida antes de la reacción con el nucleófilo G20 en presencia de un catalizador tal como, pero no se limita a, 4-dimetilaminopiridina (para la formación de un diéster o una diamida) o en presencia de una base tal como, pero no se limita a, N,N-diisopropiletilamina (para la formación de una diamida).
Se puede acceder al diéster G23 mediante la reacción del diácido G9 con un haluro de alquilo G22 adecuado en presencia de una base adecuada tal como, pero no se limita a, carbonato de cesio como se muestra en el Esquema 5b.
Síntesis General 6
El Esquema 6 ilustra una ruta alternativa hacia la síntesis de compuestos con la estructura G9. El intermedio nitro G17 se puede reducir al intermedio dianilina usando condiciones tales como, pero que no se limitan a, agitación sobre un catalizador heterogéneo tal como Pd/C bajo una atmósfera de hidrógeno para dar G24. La condensación de esta dianilina con el aldehído intermedio G5 en presencia de (a) un ácido adecuado tal como, pero no se limita a, ácido acético o (b) bisulfito de sodio o (c) metabisulfito de sodio proporciona acceso a intermedios del tipo G25. El tratamiento del material protegido con mono-Boc en condiciones ácidas libera la amina primaria para dar compuestos del tipo G26. Se puede realizar una segunda sustitución aromática nucleófila con un compuesto tipo halo-nitrofenilo del tipo G15 en presencia de una base tal como, pero no limitada a, trimetilamina para dar G27. Se puede realizar una etapa de reducción del compuesto nitro G27 para dar G28 usando condiciones tales como, pero que no se limitan a, agitación sobre un catalizador heterogéneo tal como Pd/C bajo una atmósfera de hidrógeno. El compuesto intermedio tipo dianilina G28 se puede condensar con un equivalente de un aldehído del tipo G6 en presencia de (a) un ácido adecuado tal como, pero que no se limita a, ácido acético o (b) bisulfito de sodio o (c) metabisulfito de sodio para dar el bisbenzimidazol G8. La estructura del bisbenzimidazol G8 puede hidrolizarse entonces en una etapa final con una base tal como un hidróxido de metal alcalino o un ácido tal como ácido clorhídrico en solución acuosa para dar el diácido libre G9.
Los expertos en la técnica apreciarán que los sustituyentes RA (cuando A1 = CRA), RB (cuando A2 = CRB), RC (cuando A3 = CRC), y RD (cuando A4 = CRD), RAA (cuando A11 = CRAA), RBB (cuando A12 = CRBB), RCC (cuando A13 = CRCC) y RDD (cuando A14 = CRDD), RC1, RC3 y RC4, RC11, RC13 y RC14 en el compuesto G8 o G9 pueden ser un átomo de halógeno para permitir transformaciones catalizadas por metales de transición, tales como los acoplamientos de Ulmann, Negishi, Stille, Suzuki-Miyaura, Sonogashira y Buchwald-Hartwig, o desplazamientos de SnAr para producir más ejemplos del tipo de compuesto I.
Otras realizaciones
En algunas realizaciones, los dos restos unidos a Y son iguales, es decir, A11 = A1, A12 = A2, A13 = A3, A14 = A4, RC11 = RC1, RC13=RC3, RC14 = RC4, W'1 = W1.
A1-A4 y A11-A14
En algunas realizaciones, A1 es CRA.
En otras realizaciones, A1 es N.
En algunas realizaciones, A2 es CRB.
En otras realizaciones, A2 es N.
En algunas realizaciones, A3 es CRC.
En otras realizaciones, A3 es N.
En algunas realizaciones, A4 es CRD.
En otras realizaciones, A4 es N.
En algunas realizaciones, dos de A1, A2, A3 y A4 son N.
En otras realizaciones, uno de A1, A2, A3 y A4 es N.
En otras realizaciones, ninguno de A1, A2, A3 y A4 es N, es decir, A1, A2, A3 y A4 son CRA, CRB, CRC y RCD, respectivamente.
En algunas realizaciones, A11 es CRAA.
En otras realizaciones, A11 es N.
En algunas realizaciones, A12 es CRBB.
En otras realizaciones, A12 es N.
En algunas realizaciones, A13 es CRCC.
En otras realizaciones, A13 es N.
En algunas realizaciones, A14 es CRDD.
En otras realizaciones, A14 es N.
En algunas realizaciones, dos de A11, A12, A13 y A14 son N.
En otras realizaciones, uno de A11, A12, A13 y A14 es N.
En otras realizaciones, ninguno de A11, A12, A13 y A14 es N, es decir, A11, A12, A13 y A14 son CRAA, CRBB, CRCC y RCDD, respectivamente.
En algunas realizaciones, el compuesto de fórmula I se selecciona de compuestos de fórmulas (IMa)-(MIe):
��
RA, RB, RC, RD, RAA, RBB, RCC y RDD (si están presentes)
En algunas realizaciones, RA, RB, RC, RD, RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br,
Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH.
En algunas realizaciones uno de RA, RB, RC y RD, (si están presentes), y uno de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes), se selecciona entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH. El resto
(si están presentes) son H.
En otras realizaciones dos de RA, RB, RC y RD, (si están presentes), y dos de RA, RB, RC, RD, RAA, están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH.
El resto (si están presentes) son H.
En algunas realizaciones, uno o dos de RA, RB, RC y RD, (si están presentes), y uno o dos de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF3, ciclopropilo, ciano y OMe. El resto (si están presente) son H. En algunas de estas realizaciones, uno o dos de RA, RB, RC y RD (si están presentes), y uno o dos de RAA, RBB,
RCC y RDD, (si están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, y ciclopropilo y OMe. El resto (si están presentes) son H. En algunas de estas realizaciones, uno o dos de RA, RB, RC y RD, (si están presentes), y uno o dos de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me y CF<3>y OMe. El resto (si están presentes) son H. En algunas de estas realizaciones, uno o dos de RA, RB, RC y RD, (si están presentes), y uno o dos de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br y OMe. El resto (si están presentes) son
H.
En algunas realizaciones RA, RAA, RD y RDD se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano y OMe; y
RB, RBB, RC y RCC son H. En algunas realizaciones RA, RAA, RD y RDD se seleccionan entre H, F, Cl, Br y OMe; y RB,
RBB, RC y RCC son H.
En algunas realizaciones RA y RAA se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt y CH<2>OMe.
En algunas realizaciones RA y RAA se seleccionan entre F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano y OMe. En algunas realizaciones RA y RAA se seleccionan de CI, Br y OMe. En algunas realizaciones RA y RAA se seleccionan entre Cl,
Br, Me y CF<3>. En algunas realizaciones RA y RAA son Cl. En algunas realizaciones RA y RAA son Br. En algunas realizaciones RA y RAA son OMe.
En algunas realizaciones RD y RDD se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, CH<2>OH y CFbOMe. En algunas realizaciones RD y RDD se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano y OMe. En algunas realizaciones RD y RDD se seleccionan entre H, F, Br, Me y OMe. En algunas realizaciones RD y RDD se seleccionan de H y F. En algunas realizaciones RD y RDD son H. En algunas realizaciones RD4 y RDD son F. En algunas realizaciones RD y RDD son Br. En algunas realizaciones RD y RDD son H. En algunas realizaciones RD y RDD son OMe. En algunas realizaciones, A1, A2, A3, A4, A11, A12, A13 y A14 se seleccionan de las combinaciones 1 - 10 en la siguiente tabla:
En algunas realizaciones, se prefieren las combinaciones 1,4, 9 y 10.
Y
En algunas realizaciones, Y es (CH<2>)n, donde n es de 2 a 3. En algunas realizaciones, Y es (CH<2>)<2>. En algunas realizaciones, Y es (CH2)3. En algunas realizaciones, Y es (CH2)4.
RC1, RC3, RC4, RC11, RC13 y RC14
En algunas realizaciones, RC1, RC3, RC4, RC11, RC13 Y RC14 son todos H.
En otras realizaciones, dos de RC1, RC3 y RC4 son H y dos de RC11, RC13 y RC14, y los demás se seleccionan de los grupos definidos (excepto H).
En otras realizaciones, uno de RC1, RC3 y RC4 es H y uno de RC11, RC13 Y RC14, y los demás, se seleccionan independientemente de los grupos definidos (excepto H). En algunas de estas realizaciones, RC1 y RC11 son OMe. En algunas realizaciones, RC1, RC3 y RC4 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, OEt, ciano, CF<3>y CH<2>OH. En algunas de estas realizaciones, RC1, RC3 y RC4 se seleccionan independientemente de H, Cl, F, CF<3>, OMe y CH<2>OH. En otras de estas realizaciones, RC1, RC3 y RC4 se seleccionan independientemente entre H, Cl y OMe. En algunas realizaciones, RC11, RC13 y RC14 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, ciano, CF<3>y CH<2>OH. En algunas de estas realizaciones, RC11, RC13 y RC14 se seleccionan independientemente de H, Cl, F, CF<3>, OMe y CH<2>OH. En otras de estas realizaciones, RC11, RC13 y RC14 se seleccionan independientemente entre H, Cl y OMe.
W1 y W11
En algunas realizaciones, W1 y W11 son OH.
En otras realizaciones, W1 y W11 son ORP, donde RP es Me o Et.
Otras realizaciones
En algunas realizaciones, se proporciona un compuesto de Fórmula II:
En donde:
Y es (CH<2>)n, donde n es de 2 a 4;
W1 y W11 son OH;
A1 es CRA o N;
A2 es CRB o N;
A3 es CRC o N;
A4 es CRD o N;
donde no más de dos de A1, A2, A3 y A4 pueden ser N;
uno o dos de RA, RB, RC y RD, (si están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH;
el resto de RA, RB, RC y RD, (si están presentes) son H;
A11 es CRAA o N;
A12 es CRBB o N;
A13 es CRCC o N;
A14 es CRDD o N;
donde no más de dos de A11, A12, A13 y A14 pueden ser N;
uno o dos de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes), se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH;
el resto de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes), son H;
RC1, RC3 y RC4 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, ciano, CF<3>, CH<2>OH, CH<2>OMe, alquenilo C<2-4>y heterociclilo C<5>;
rc11, r c13 y rc14 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, ciano, CF<3>, CH<2>OH, CH<2>OMe, alquenilo C2-4 y heterociclilo C5.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se proporcionan únicamente para ilustrar la presente invención y no pretenden limitar el alcance de la invención, como se describe en el presente documento.
Acrónimos
Por conveniencia, muchos restos químicos se representan utilizando abreviaturas bien conocidas, que incluyen, pero no se limitan a, metilo (Me), etilo (Et), n-propilo (nPr), isopropilo (iPr), n-butilo (nBu), terc-butilo (tBu), fenilo (Ph), bencilo (Bn), metoxi (MeO), etoxi (EtO), trimetilsililo (TMS) y acetilo (Ac).
Por conveniencia, muchos compuestos químicos se representan utilizando abreviaturas bien conocidas, que incluyen, pero no se limitan a, metanol (MeOH), metanol deuterado (MeOD-d4 o CD<3>OD), etanol (EtOH), isopropanol (i-PrOH), éter o éter dietílico (Et<2>O), acetato de etilo (EtOAc), ácido acético (AcOH), acetonitrilo (MeCN o ACN), diclorometano (cloruro de metileno, DCM), ácido trifluoroacético (TFA), dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), dimetilsulfóxido (DMSO), cloroformo deuterado (CDCta), dietilamina (DEA), dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-d6), hidrocloruro de N-etil-N'- (3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCl.HCl), ácido meta-cloroperoxibenzoico (mCPBA), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno (dppf), terc-butiloxicarbonilo (Boc, BOC), 2-(trimetilsilil)etoximetilo (SEM), trietilamina (Et3N o TEA), hexafluorofosfato de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (H<a>TU), 4-dimetilaminopiridina (DMAP), N,N-diisopropiletilamina (DIPEA o DIEA), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno dicloropaladio (II) (PdCl<2>(dppf)), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II) (PdCl<2>(PPh<3>)<2>), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (Pd2(dba)3), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (Pd(PPh3)4), anhídrido propilfosfónico (T3P), hexametilfosforamida (HMPA), 1,2-dicloroetano (DCE), óxido de cromo (Vi) (Crüa), N-bromosuccinimida (NBS), hidróxido de potasio (KOH), peróxido de benzoílo (BPO), tetracloruro de carbono (CCU), éter de petróleo (éter pet.), carbonato de potasio (K<2>CO<3>), sulfato de sodio (Na2SO4), diisopropilamina de litio (LDA), azobisisobutironitrilo (AIBN), N-metilmorfolina N-óxido (NMO), peróxido de benzoilo (BPO) y 1-hidroxibenzotriazol (HOBt).
Otras abreviaturas: cromatografía de capa fina (TLC), tiempo de retención (rt).
Detalles experimentales generales
A menos que se indique lo contrario, se aplican las siguientes generalizaciones. Los espectros de 1H-RMN se registraron en un equipo Bruker AVANCE III (400 MHz). La multiplicidad de una señal se designa con las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuadruplete; dd, doblete de doblete; dt, doblete de triplete; tt, triplete de triplete; td, triplete de doblete; ddd, doblete de doblete de doblete, br, ancho; m, multiplete. Todas las constantes de acoplamiento observadas, J, se informan en Hertz. No siempre se observan protones intercambiables.
Los datos de LCMS se generaron utilizando las condiciones que se describen a continuación. Los isótopos de cloro se informan como 35Cl, los isótopos de bromo se informan como 79Br o 81Br o ambos 79Br/81Br.
Método LC-MS A (LCMS-A)
Información del equipo
Modelo LC: Agilent 1200 (Tipo de bomba: Bomba binaria, Tipo de detector: DAD)
Modelo MS: Cuadrupolo Agilent G6110A
Parámetros de LC-MS
LC: Columna: Xbridge-C18, 2,5 gm, 2,1x30 mm
Temperatura de la columna: 30 °C
Longitudes de onda de adquisición: 214 nm, 254 nm
Fase móvil: A: Solución acuosa de HCOOH al 0,07%, B: MeOH
MS: Fuente de iones: ES+ (o ES-)
Rango de MS: 50~900 m/z
Fragmentador: 60
Flujo de gas de secado: 10 L/min
Presión del nebulizador: 0,241 Mpa (35 psi)
Temperatura del gas de secado: 350 °C
Vcap: 3,5 kV
Tabla de gradiente
Preparación de la muestra
La muestra se disolvió en metanol, la concentración fue de aproximadamente 0,11-1 mg/mL, luego se filtró a través de un filtro de jeringa con un tamaño de poro 0,22 gm. (Volumen de inyección: 1 ~10 gL)
Método LC-MS B (LCMS-B)
Información del equipo
Modelo LC: Agilent 1200 (Tipo de bomba: Bomba binaria, Tipo de detector: DAD)
Modelo MS: Cuadrupolo Agilent G6110A
Parámetros del LCMS
LC: Columna: Xbridge-C18, 2,5 gm, 2,1 x30 mm
Temperatura de la columna: 30 °C
Longitudes de onda de adquisición: 214 nm, 254 nm
Fase móvil: A: Solución acuosa de HCOOH al 0,07%, B: MeOH
MS: Fuente de iones: ES+ (o ES-)
Rango de MS: 50-900 m/z
Fragmentador: 60
Flujo de gas de secado: 10 L/min
Presión del nebulizador: 0,241 MPa (35 psi)
Temperatura del gas de secado: 350 °C
Vcap: 3,5 kV
Tabla de gradiente
Preparación de la muestra
La muestra se disolvió en metanol, la concentración fue de aproximadamente 0,11-1 mg/mL, luego se filtró a través de un filtro de jeringa con un diámetro de poro de 0,22 gm. (Volumen de inyección: 1 ~10 gL)
Método LC-MS C (LCMS-C)
Información del equipo
Modelo LC: Waters 2695 Alliance (tipo de bomba: Bomba cuaternaria, detector: Detector de matriz de fotodiodos 2996)
Modelo MS: Micromass ZQ
Parámetros de LCMS
LC: Columna: Xbridge-C18, 3,5 gm, 2,1 x 50 mm
Temperatura de la columna: 30 °C
Longitudes de onda de adquisición: 214 nm, 254 nm
Fase móvil: A: solución acuosa de HCOOH al 0,07%, B: MeOH
MS: Fuente de iones: ES+ (o ES-)
Rango de MS: 50-900 m/z
Capilar: 3 kV
Cono: 3 V
Extractor: 3 V
Flujo de gas de secado: 600 L/h
Cono: 50 L/h
Temperatura de desolvatación: 300 °C
Temperatura de la fuente: 100 °C
Tabla de gradiente
Preparación de la muestra
La muestra se disolvió en metanol, la concentración fue de aproximadamente 0,11-1 mg/mL, luego se filtró a través de un filtro de jeringa con un diámetro de poro de 0,22 gm. (Volumen de inyección: 1 ~10 gL)
RP-HPLC preparativa
Tipo de instrumento: Serie Varian 940-LC;
Tipo de bomba: Bomba Cuaternaria;
Tipo de detector: Detector de matriz de diodos
Condiciones de HPLC: columna Waters Sunfire prep C18 OBD, 5 gm, 19 x 100 mm, eluyendo con un gradiente de MeOH en agua con TFA al 0,07 % a un caudal de 15 mL/min. Longitudes de onda de adquisición 214 nm, 254 nm.
La cromatografía analítica en capa fina se realizó en placas con soporte de aluminio de gel de sílice Merck 60 F254 que se visualizaron mediante extinción de la fluorescencia bajo luz UV o inmersión en KMnO4 en medio básico o inmersión en ninhidrina.
La cromatografía preparativa en capa fina (TLC prep.) se realizó utilizando gel de sílice Tklst (China), gran calidad: (HPTLC): 8 ± 2 gm > 80 %; (TLC): 10-40 gm. Tipo: GF254. Los compuestos se visualizaron mediante U<v>(254 nm). La cromatografía en columna se realizó utilizando gel de sílice Tklst (China), de gran calidad, de malla 100-200. La irradiación con microondas se logró utilizando un reactor de microondas CEM Explorer SP.
Cuando fue necesario, se adquirieron disolventes anhidros de Sigma-Aldrich o se secaron utilizando métodos convencionales. Las soluciones de ácidos o bases inorgánicos se prepararon como soluciones acuosas, a menos que se indique lo contrario.
Los cartuchos adicionales utilizados son los siguientes:
Separador de fases
Fabricante: Biotage
Producto: Separador de fases ISOLUTE® (3 mL, a menos que se indique lo contrario)
Cartuchos SCX y SCX-2
Fabricante: Biotage
Producto: ISOLUTE® SCX 1 g (columna SPE de 6 mL, a menos que se indique lo contrario)
Fabricante: Biotage
Producto: ISOLUTE® SCX-2 1 g (columna de 6 mL)
Fabricante: Silicycle
Producto: SCX-2500 mg o 5 g
Fabricante: Agilent
Producto: Bond Elut® SCX 10g
Cartucho de extracción de muestras
Fabricante: Waters
Producto: Cartucho de extracción LP Oasis® HLB de 35 cc (6 g).
Las soluciones de cloruro de hidrógeno, hidróxido de sodio, carbonato de potasio y bicarbonato de sodio son acuosas, a menos que se indique lo contrario.
Preparaciones de compuestos intermedios
(i) 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4)
a) (2-((4-Carbamoil-2-nitrofenil)amino)etil)carbamato de terc-butilo (I1)
Una suspensión de 4-cloro-3-nitrobenzamida (8,0 g, 39,9 mmoles), (2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (6,40 g, 39,9 mmoles) y Et3N (8,1 g, 79,8 mmoles) en NMP (80 mL) se calentó a 150 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. Se añadió agua (500 mL) seguido de Éter Pet./EtOAc (5:1, 300 mL) y el precipitado resultante se recogió mediante filtración para dar el compuesto del título I1 (12,0 g, 92%) como un sólido amarillo. LCMS-B: rt 3,2 min, m/z 347,1 [M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,65 (s, 1H), 8,44 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 8,05 - 7,92 (m, 2H), 7,27 (s, 1H), 7,14 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 7,04 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,46 - 3,45 (m, 2H), 3,20 - 3,19 (m, 2H), 1,35 (s, 9H).
b) Hidrocloruro de 4-((2-aminoetil)amino)-3-nitrobenzamida (12)
Una mezcla de (2-((4-carbamoil-2-nitrofenil)amino)etil)carbamato de terc-butilo (I1) (12,0 g, 37,0 mmoles) y una solución de HCl 5,5 M en dioxano (200 mL) se agitaron a temperatura ambiente durante la noche. Luego se eliminó el disolvente a presión reducida para dar el compuesto del título I2 (8,0 g, 96%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B: rt 1,2 min, m/z 225,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,65 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,25 (s, 2H), 8,05 (dd, J = 9,0, 2,2 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 5,62 (br s, 3H), 3,76 - 3,74 (m, 2H), 3,01 - 2,97 (m, 2H). (c) 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-nitrobenzamida) (I3)
Una suspensión de hidrocloruro de 4-((2-aminoetil)amino)-3-nitrobenzamida (I2) (7,6 g, 33,9 mmoles), 4-cloro-3-nitrobenzamida (6,80 g, 33,9 mmoles) y Et3N (20,6 g, 203 mmoles) en NMP (80 mL) se calentó a 150 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. Se añadieron hidrocloruro de 4-((2-aminoetil)amino)-3-nitrobenzamida (I2) (800 mg, 3,57 mmoles) y Et3N (3,0 g, 29,6 mmoles) adicionales y la mezcla se calentó a 150 °C en una atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se diluyó con Éter Pet./EtOAc (1:1, v/v, 500 mL) y el precipitado resultante se recogió mediante filtración para dar el compuesto del título I3 (12,0 g, 91%) como un sólido amarillo. LCMS-B: rt 1,3 min, m/z 389,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,62 (s, 4H), 7,99 - 7,95 (m, 4H), 7,30 - 7,28 (m, 4H), 3,70 - 3,64 (m, 4H).
(d) 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4)
Una suspensión de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-nitrobenzamida) (I3) (12 g, 30,9 mmoles) y Pd al 10%/C (2,0 g) en DMF (200 mL) se calentó a 100 °C en una atmósfera de H<2>durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título I4 (9,0 g, 90%) en forma de un sólido negro. LCMS-B: rt 0,3 min, m/z 329,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,44 (s, 2H), 7,13 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,11 (s, 2H), 6,74 (s, 2H), 6,46 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 5,05 (s, 2H), 4,58 (s, 4H), 3,41 - 3,36 (m, 4H).
(ii) 4,4'-(Propano-1,3-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I8)
(a) (3-((4-Carbamoil-2-nitrofenil)amino)propil)carbamato de terc-butilo (I5)
A una solución de 4-cloro-3-nitrobenzamida (2 g, 10 mmoles) en NMP (30 mL) se añadió (3-aminopropil)carbamato de terc-butilo (1,7 g, 9,97 mmoles) y Et3N (2,1 g, 19,9 mmoles) y la mezcla se calentó a 150 °C durante la noche. Se añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (150 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 100:1 a 50:1) para dar el compuesto del título I5 (2,1 g, 62%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B: rt 3,42 min, m/z 361,1 [M+Na]+.
(b) Hidrocloruro de 4-((3-aminopropil)amino)-3-nitrobenzamida (I6)
Se agitó a temperatura ambiente durante la noche una mezcla de (3-((4-carbamoil-2-nitrofenil)amino)propil)carbamato de terc-butilo (I5) (2,1 g, 6,2 mmoles) y una solución 6 M de HCl en dioxano (40 mL). Luego se eliminó el disolvente a presión reducida para dar el compuesto del título I6 (1,5 g, 88%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B: rt 0,29 min, m/z 239,3 [M+H]+.
(c) 4,4'-(Propano-1,3-diilbis(azanediil))bis(3-nitrobenzamida) (I7)
A una mezcla de hidrocloruro de 4-((3-aminopropil)amino)-3-nitrobenzamida (I6) (2,0 g, 7,31 mmoles) en NMP (50 mL) se añadió 4-cloro-3-nitrobenzamida (1,5 g, 7,31 mmoles) y Et<3>N (2,2 g, 21,9 mmoles) y la mezcla se calentó a 150 °C durante la noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (300 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 100:1 a 50:1) para dar el compuesto del título I7 (1,3 g, 45%) en forma de un sólido negro. LCMS-B: rt 2,98 min, m/z 403,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,65 (s, 2H), 8,60 - 8,48 (m, 2H), 7,99 (s, 4H), 7,29 (s, 2H), 7,12 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,62 - 3,48 (m, 4H), 2,01 - 1,88 (m, 2H).
d) 4,4'-(Propano-1,3-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I8)
A una solución de 4,4'-(propano-1,3-diilbis(azanediil))bis(3-nitrobenzamida) (I7) (1 g, 2,5 mmoles) en DMF (30 mL) se añadió Pd al 10 %/C (100 mg) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de H<2>durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título I8 (777 mg, 91%) en forma de un sólido negro. LCMS-B: rt 0,27 min, m/z 343,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,41 (s, 2H), 7,17 - 6,96 (m, 4H), 6,69 (s, 2H), 6,48 - 6,29 (m, 2H), 5,22 - 4,12 (m, 6H), 3,27 - 3,12 (m, 4H), 1,99 - 1,87 (m, 2H).
(iii) 4,4'-(Butano-1,4-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I12)
a) (4-((4-Carbamoil-2-nitrofenil)amino)butil)carbamato de terc-butilo (I9)
A una solución de 4-cloro-3-nitrobenzamida (2,0 g, 10,0 mmoles) en NMP (20 mL) se añadió (4-aminobutil)carbamato de terc-butilo (2,24 g, 10,0 mmoles) y Et3N (2,02 g, 20,0 mmoles) y la mezcla se calentó a 150 °C durante la noche. La mezcla se repartió entre agua (100 mL) y EtOAc (100 mL), las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (100 mL x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 100:1 a 40:1) para dar el compuesto del título I9 (2,0 g, 57%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B: rt 3,44 min, m/z 375,1 [M+Na]+.
b) Hidrocloruro de 4-((4-aminobutil)amino)-3-nitrobenzamida (I10)
Se agitó una mezcla de (4-((4-carbamoil-2-nitrofenil)amino)butil)carbamato de terc-butilo (I9) (2,27 g, 6,44 mmoles) y una solución de HCl 6 M en dioxano (30 mL) a temperatura ambiente durante 16 h. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar el compuesto del título I10 (1,61 g, 100%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B: rt 3,47 min, m/z 253,1 [M+H]+.
(c) 4,4'-(Butano-1,4-diilbis(azanediil))bis(3-nitrobenzamida) (I11)
A una solución de hidrocloruro de 4-((4-aminobutil)amino)-3-nitrobenzamida (I10) (1,50 g, 5,95 mmoles) en NMP (50 mL) se añadió 4-cloro-3-nitrobenzamida (1,19 g, 5,95 mmoles) y Et3N (1,81 g, 17,85 mmoles) y la mezcla se calentó a 150 °C durante 16 h. La mezcla se repartió entre agua (200 mL) y EtOAc (200 mL), lo que dio como resultado la formación de un precipitado. El precipitado se recogió por filtración para dar el compuesto del título I11 (1,22 g, 49%) en forma de un sólido negro. lCm S-B: rt 3,12 min, m/z 417,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,64 (s, 2H), 8,41 (s, 2H), 8,10 - 7,88 (m, 4H), 7,27 (s, 2H), 7,12 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 3,55 - 3,40 (m, 4H), 1,73 (s, 4H).
(d) 4,4'-(Butano-1,4-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I12)
A una solución de 4,4'-(butano-1,4-diilbis(azanediil))bis(3-nitrobenzamida) (I11) (1,0 g, 2,40 mmoles) en DMF (20 mL) se añadió Pd al 10 %/C (100 mg) y la mezcla se calentó a 90 °C en una atmósfera de H<2>durante 16 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título I12 (842 mg, 98%) en forma de un sólido negro. LCMS-B: rt 0,32 min, m/z 357,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,41 (s, 2H), 7,16 - 7,04 (m, 4H), 6,71 (s, 2H), 6,39 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 4,92 (s, 2H), 4,60 (s, 4H), 3,13 (s, 4H), 1,73 (s, 4H).
(iv) 3-Formil-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I16)
a) 4-Hidroxi-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I13)
A una solución de 1-(2-fluoro-6-hidroxifenil)etan-1-ona (2,0 g, 3,24 mmoles) en DMF (20 mL) se añadió 2-mercaptoacetato de etilo (2,4 g, 4,86 mmoles) y K<2>CO<3>(3,6 g, 26,1 mmoles) y la mezcla se calentó a 100 °C en atmósfera de nitrógeno durante la noche. Se añadió agua (100 mL) y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 mL x<3>), salmuera (100 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 1:0 a 10:1) para dar el compuesto del título I13 (1,8 g, 60 %) en forma de un sólido gris. LCMS-A: rt 2,64 min; m/z 259,0 [M+Na]+.
b) 4-Metoxi-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (114)
A una solución de 4-hidroxi-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I13) (350 mg, 1,48 mmoles) y yoduro de metilo (2,1 g, 14,8 mmoles) en DMF (8 mL) se añadió K<2>CO<3>(613 mg, 4,44 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente en un tubo sellado durante la noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SÜ4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 10:1) para dar el compuesto del título I14 (380 mg, 100%). LCMS-A: rt 2,65 min; m/z 251,0 [M+H]+.
c) 3-(Bromometil)-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (115)
A una suspensión de 4-metoxi-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I14) (380 mg, 1,48 mmoles) y NBS (268 mg, 1,50 mmoles) en CCl4 (20 mL) se añadió BPO (92 mg, 0,38 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. El extracto orgánico se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2SÜ4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 10/1) para dar el compuesto del título (360 mg, 76%). LCMS-A: rt 2,73 min; m/z 350,8/352,9 [M+Na]+.
d) 3-Formil-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I16)
A una solución de 3-(bromometil)-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I15) (1,0 g, 3,0 mmoles) en THF (30 mL) se le añadió NMO (1,41 g, 12,0 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con EtOAc (50 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 50:1 a 10:1) para dar el compuesto del título (330 mg, 42%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B: rt 4,0 min; m/z 265,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 510,6 (s, 1H), 7,67 (dd, J = 8,2, 0,8 Hz, 1H), 7,55 (t, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,05 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,32 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
(v) 4-Cloro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I19)
a) 4-Cloro-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I17)
Una solución de 1-(2-cloro-6-fluorofenil)etanona (25,0 g, 145 mmoles), 2-mercaptoacetato de etilo (17,4 g, 145 mmoles) y K<2>CO<3>(30,0 g, 217 mmoles) en DMF (200 mL) se calentó a 100 °C durante la noche. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y luego se vertió en agua (1,0 L) y EtOAc (500 mL). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (500 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante recristalización en Éter Pet./EtOAc para dar el compuesto del título I17 (28,0 g, 76%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-A: rt 2,82 min; m/z 255,0 [M+H]+.
b) 3 -(B ro m o m e til)-4 -c lo ro b e n z o [b ]tio fe n -2 -c a rb o x ila to de e tilo (I18)
Una suspensión de 4-cloro-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I17) (28,0 g, 0,11 moles), NBS (19,6 g, 0,11 moles) y BPO (2,67 g, 0,011 moles) en CCl4 (200 mL) se calentó a 115 °C durante 1,5 h. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, luego se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante recristalización en DCM/Éter Pet. para dar el compuesto del título I18 (26,0 g, 71%) en forma de un sólido de color púrpura. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) 57,74 (dd, J = 8,0, 1,2 Hz, 1 H), 7,46 (dd, J = 7,6, 0,8 Hz, 1 H), 7,40 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,61 (s, 2H), 4,44 (q, J = 7,1 Hz 2H), 1,44 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
c) 4-Cloro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (119)
Se calentó a reflujo una mezcla de 3-(bromometil)-4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I18) (10,00 g, 29,97 mmoles) y NMO (14,00 g, 119,88 mmoles) en THF (250 mL) durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 50:1) para dar el compuesto del título I19 (2,70 g, 34%) como un sólido blanco. LCMS-B: rt 4,16 min, m/z 269,0 [M+H]+, 290,9 [M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 510,7 (s, 1H), 8,17 (dd, J = 7,6, 1,5 Hz, 1H), 7,66 - 7,58 (m, 2H), 4,36 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
(vi) 4-Cloro-7-fluoro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I24)
(a) 1-(6-Cloro-2,3-difluorofenil)etan-1-ol (I20)
A una solución de diisopropilamina (4,4 g, 43,9 mmoles) en THF seco (100 mL) a -78 °C bajo nitrógeno se añadió gota a gota n-BuLi (solución 2,5 M en n-hexano, 17,6 mL, 43,9 mmoles) seguido de 4-cloro-1,2-difluorobenceno (5,0 g, 33,8 mmoles) y la mezcla se agitó durante 1 h. Se añadió gota a gota acetaldehído (4,4 g, 101,4 mmoles) y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se inactivó mediante la adición de una solución acuosa saturada de NH4Cl y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 1:0 a 20:1) para dar el compuesto del título I20 (3,0 g, 46%) en forma de un aceite amarillo. LCMS-B: rt 3,39 min; m/z 175,0 [M-o H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,41 - 7,33 (m, 1 H), 7,31 - 7,25 (m, 1H), 5,54 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,25 - 5,16 (m, 1H), 1,45 (d, J = 6,7 Hz, 3H).
(b) 1-(6-Cloro-2,3-difluorofenil)etan-1-ona (I21)
A una solución de 1-(6-cloro-2,3-difluorofenil)etan-1-ol (I20) (3,0 g, 15,6 mmoles) en DCM seco (50 mL) se añadió periodinano de Dess-Martin (19,8 g, 46,7 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de NaHCO3, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet.) para dar el compuesto del título I21 (2,3 g, 79 %) en forma de un aceite amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa.
c) 4-Cloro-7-fluoro-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I22)
A una mezcla de 1-(6-cloro-2,3-difluorofenil)etan-1-ona (I21) (1,8 g, 9,3 mmoles) y K<2>CO<3>(3,9 g, 28,0 mmoles) en DMF (20 mL) bajo nitrógeno, se añadió 2-mercaptoacetato de etilo (1,3 g, 11,2 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 1:0) para dar el compuesto del título I22 (1,5 g, 60 %) en forma de un sólido marrón. LCMS-A: rt 3,54 min; m/z 273,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,55 - 7,50 (m, 1H), 7,40 (t, J = 8,7 Hz, 1 H), 4,35 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,97 (s, 3H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
d) 3-(Bromometil)-4-cloro-7-fluorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I23)
A una solución de 4-cloro-7-fluoro-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I22) (1,5 g, 5,5 mmoles) en CCU (50 mL) se añadió NBS (978 mg, 5,5 moles) y AIBN (451 mg, 2,75 mmoles) y la mezcla se calentó a 80 °C bajo N<2>durante la noche. La mezcla se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título I23 (1,3 g, 80%) como un sólido amarillo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,67 - 7,61 (m, 1 H), 7,50 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 5,47 (s, 2H), 4,41 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,36 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
e) 4-Cloro-7-fluoro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I24)
A una solución de 3-(bromometil)-4-cloro-7-fluorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I23) (1,0 g, 2,8 mmoles) en THF (20 mL) en atmósfera de N<2>se añadió NMO (1,33 g, 11,4 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante 16 h. La mezcla se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 1:0 a 100:1) para dar el compuesto del título I24 (250 mg, 31%) como un sólido blanco. LCMS-B: rt 4,39 min; m/z 286,9 [M+H]+, 308,9 [M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 10,7 (s, 1H), 7,73 -7,66 (m, 1H), 7,57 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 4,38 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
(vii) 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-amino-2-metoxibenzamida) (I33)
a) 4-Fluoro-2-hidroxibenzoato de metilo (125)
Una mezcla de ácido 4-fluoro-2-hidroxibenzoico (50,0 g, 320,3 mmoles) y H<2>SO<4>concentrado (40 mL, 672,7 mmoles) en MeOH (600 mL) se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se vertió en agua (500 mL) y se extrajo con EtOAc (500 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (500 mL x 2), salmuera (500 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 20:1) para dar el compuesto del título (50,0 g, 91%) en forma de un sólido blanco. LCMS-A (ES-API): rt 1,80 min, m/z 171,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 10,8 (s, 1H), 7,83 (dd, J = 8,9, 6,8 Hz, 1 H), 6,90 - 6,70 (m, 2H), 3,88 (s, 3H).
b) 4-Fluoro-2-hidroxi-3-nitrobenzoato de metilo (I26)
A una solución de 4-fluoro-2-hidroxibenzoato de metilo (I25) (50,0 g, 294,0 mmoles) en H<2>SO<4>concentrado (100 mL) a 0 °C bajo N<2>se añadió gota a gota HNO<3>concentrado (20 mL, 382,1 mmoles) y la mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. La mezcla se vertió lentamente en agua (2,0 L) y se extrajo con EtOAc (1,5 L x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (1,5 L x 2), salmuera (1,5 L), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet. 100%) para dar una mezcla del compuesto del título y un regioisómero no caracterizado (50 g, ~3,75:1 regioisómero no caracterizado/compuesto del título). La mezcla se usó en la siguiente etapa sin purificación o caracterización adicional. LCMS-A (ES-API): rt 1,57 min (menor) m/z 216,0 [M+H]+ y rt 1,68 min (mayor) m/z 216,1 [M+H]+.
c) 4-Fluoro-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo (I27)
Una mezcla de 4-fluoro-2-hidroxi-3-nitrobenzoato de metilo (que contiene un regioisómero principal no caracterizado) (I26) (50,0 g), CH<3>I (99,0 g, 697 mmoles) y K<2>CO<3>(64,1 g, 465 mL) en DMF (200 mL) se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se vertió en agua (1,0 L), se extrajo con EtOAc (1,0 L x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (1,0 L x 2), salmuera (1,0 L), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 40:1) y las fracciones que contenían el componente minoritario se recogieron para dar el compuesto del título (14,0 g, 21 % en dos etapas) como un color blanco. sólido. LCMS-C (ES-API): rt 3,53 min, m/z 230,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,12 (dd, J = 9,1,6,5 Hz, 1H), 7,50 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 3,93(s, 3H), 3,91 (s, 3H).
d) 4-((2-((terc-Butoxicarbonil)amino)etil)amino)-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo (I28)
Una mezcla de 4-fluoro-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo (I27) (6,0 g, 26,2 mmoles), (2-aminoetil)carbamato de tercbutilo (4,2 g, 26,2 mmoles) y Et3N (5,3 g, 52,4 mmoles) en NMP (100 mL) se calentó a 80 °C en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se vertió en agua (500 mL), se extrajo con EtOAc (500 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (500 x 2 mL), salmuera (500 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 10:1) para dar el compuesto del título (9,5 g, 98%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-C (ES-API): rt 4,43 min, m/z 392,1 [M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 57,79 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,96 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,70 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 3,79 (s, 6H), 3,27 - 3,21 (m, 2H), 3,11 - 3,06 (m, 2H), 1,37 (s, 9H).
e) Hidrocloruro de 4-((2-aminoetil)amino)-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo (I29)
Una mezcla de 4-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)amino)-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo (I28) (9,5 g, 25,7 mmoles) y una solución de HCl 3 M en dioxano (200 mL) se agitó a temperatura ambiente bajo N<2>durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (6,0 g, 87%) en forma de un sólido blanco. LCMS-C (ES-API): rt 0,82 min, m/z 270,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,81 (dd, J = 9,2, 3,8 Hz, 1H), 6,82 - 6,71 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,31 - 3,28 (m, 4H).
f) 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(2-metoxi-3-nitrobenzoato) de dimetilo (I30)
Una mezcla de hidrocloruro de 4-((2-aminoetil)amino)-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo (I29) (5,5 g, 18,0 mmoles), 4-fluoro-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo I27 (4,68 g, 20,4 mmoles) y Et3N (6,2 g, 61,3 mmoles) en NMP (100 mL) se calentó a 80 °C en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se vertió en agua (600 mL) y el precipitado resultante se recogió mediante filtración para dar el compuesto del título (8,0 g, 82%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-C (ES-API): rt 4,75 min, m/z 477,1 [M-H]-.1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,76 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 6,77 - 6,74 (m, 4H), 3,78 (s, 6H), 3,77 (s, 6H), 3,40 (br s, 4H).
g) Ácido 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(2-metoxi-3-nitrobenzoico) (I31)
Una mezcla de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(2-metoxi-3-nitrobenzoato) de dimetilo (I30) (4,0 g, 8,4 mmoles) y NaOH (2,0 g, 50,2 mmoles) en EtOH/agua (50 mL/50 mL) se calentó a 80 °C durante 16 h. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (50 mL) y se acidificó a pH 4-5 con una solución acuosa de HCl 2 M. El precipitado resultante se recogió por filtración para dar el compuesto del título (3,5 g, 93%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-C (ES-API): rt 3,45 min, m/z 473,1 [M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 12,6 (br s, 2H), 7,77 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 6,74 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 6,69 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,78 (s, 6H), 3,44 (br s, 4H).
h) 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(2-metoxi-3-nitrobenzamida) (I32)
Una mezcla de ácido 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(2-metoxi-3-nitrobenzoico) (I31) (3,4 g, 7,6 mmoles), NH4Cl (2,4 g, 45,3 mmoles), HOBt (3,1 g, 22,7 mmoles), EDCl.HCl (4,3 g, 22,7 mmoles) y DiPeA (5,9 g, 45,3 mmoles) en DMF (300 mL) se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se vertió en agua (600 mL) y el precipitado resultante se recogió mediante filtración para dar el compuesto del título (2,4 g, 71%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-C (ES-API): rt 3,02 min, m/z 471,1 [M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,63 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,42 (br s, 4H), 6,77 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 6,60 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,77 (s, 6H), 3,39 - 3,36 (m, 4H).
(i) 4,4'-(Etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-amino-2-metoxibenzamida) (I33)
Una mezcla de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(2-metoxi-3-nitrobenzamida) (I32) (1,0 g, 2,3 mmoles) y Pd al 10 %/C (200 mg) en MeOH (150 mL) se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de H<2>(3 MPa) durante 3 días. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida dando el compuesto del título (120 mg). La torta del filtro se lavó con DMSO y el filtrado se liofilizó para dar más compuesto del título (680 mg). Los sólidos aislados se combinaron para dar el compuesto del título (800 mg, 92%) en forma de un sólido marrón. LCMS-B (ES-API): rt 1,09 min, m/z 388,8 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,39 (br s, 2H), 7,11 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,10 (br s, 2H), 6,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,23 (br s, 2H), 4,42 (br s, 4H), 3,66 (s, 6H), 3,35 (br s, 4H).
(viii) 3 -F o rm ilb e n z o [b ]tio fe n -2 -c a rb o x ila to de e tilo (I36)
a) 3-Metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I34)
Una solución de 1-(2-fluorofenil)etan-1-ona (25,0 g, 181 mmoles), 2-mercaptoacetato de etilo (26,1 g, 217 mmoles) y K<2>CO<3>(75,1 g, 543 mmoles) en DMF (250 mL) se calentó a 75 °C en atmósfera de N<2>durante 16 h. Se añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:0 a 100:1) para dar el compuesto del título (38,8 g, 97%) en forma de un sólido de color verde claro. LCMS-B (ES-API): rt 4,51 min; m/z 221,1 [M+H]+.
b) 3-(Bromometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I35)
Una solución de 3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I34) (10,0 g, 45,4 mmoles), NBS (8,08 g, 45,4 mmoles) y BPO (1,09 g, 4,5 mmoles) en CCl4 (200 mL) se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante 16 h. Se añadió agua y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM) para dar el compuesto del título (11,8 g, 86%) en forma de un sólido de color amarillo claro. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,11 - 8,08 (m, 2H), 7,61 - 7,57 (m, 2H), 5,30 (s, 2H), 4,41 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
c) 3-Formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I36)
Una mezcla de 3-(bromometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I35) (5 g, 16,7 mmoles) y NMO (7,83 g, 66,8 mmoles) en THF (100 mL) se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 50:1) para dar el compuesto del título (2,0 g, 50 %) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B (ES-API): rt 4,18 min; m/z 235,0 [M+H]+.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 510,7 (s, 1H), 8,63 - 8,57 (m, 1H), 8,21 - 8,15 (m, 1H), 7,67 - 7,57 (m, 2H), 4,44 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,38 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
ix) 7-Fluoro-3-formil-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I40)
(a) 1-(2,3-Difluoro-6-metoxifenil)etan-1-ona (I37)
A una solución de 1,2-difluoro-4-metoxibenceno (10,0 g, 69,4 mmoles) en THF (300 mL) a -78 °C se añadió gota a gota n-BuLi (solución 2,5 M en hexanos, 30,5 mL, 76,3 mmoles) y la mezcla se agitó a -78 °C durante 40 min. Luego se añadió gota a gota una solución de N-metoxi-N-metilacetamida (11,3 g, 69,4 mmoles) en THF (50 mL) a -78 °C y la mezcla se agitó a -78 °C durante 1 h más. La reacción se inactivó con una solución acuosa saturada de NH<4>G, se diluyó con agua (300 mL) y se extrajo con EtOAc (500 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 50:1 a 10:1) para dar el compuesto del título (2,1 g, 16%) en forma de un aceite amarillo. LCMS-B (ES-API): rt 3,56 min, m/z 187,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, CDCb) 57,17 - 7,10 (m, 1H), 6,63 - 6,60 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 2,54 (d, J = 0,8 Hz, 3H).
b) 7-Fluoro-4-metoxi-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I38)
Una mezcla de 1-(2,3-difluoro-6-metoxifenil)etan-1-ona (I37) (1,88 g, 10,1 mmoles), 2-mercaptoacetato de etilo (1,21 g, 10,1 mmoles) y K<2>CO<3>(1,39 g, 10,1 mmoles) en DMF (75 mL) se calentó a 75 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se vertió en agua, se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 500:1 a 100:1) para dar el compuesto del título (2,19 g, 81%) en forma de un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 3,56 min, m/z 291,2 [M+Na]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 57,34 (t, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,93 (dd, J = 8,8, 3,8 Hz, 1H), 4,33 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,91 (s, 3H), 2,90 (s, 3H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
c) 3-(Bromometil)-7-fluoro-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I39)
A una solución de 7-fluoro-4-metoxi-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I38) (1,7 g, 6,21 mmoles) en CCl4 (75 mL) se añadió NBS (1,2 g, 6,69 mmoles) y AIBN (500 mg, 3,11 mmoles) y la mezcla se calentó a 80 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se diluyó con agua (70 mL), se extrajo con EtOAc (70 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida.
El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 500:1 a 150:1) para dar el compuesto del título (1,85 g, 84%) en forma de un sólido blanco.1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,53 - 7,30 (m, 2H), 5,39 (s, 2H), 4,41 - 4,36 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 1,37 - 1,33 (m, 3H).
d) 7-Fluoro-3-formil-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I40)
A una solución de 3-(bromometil)-7-fluoro-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I39) (1,8 g, 0,005 moles) en THF (25,0 mL) se añadió NMO (2,5 g, 0,02 moles) y la mezcla se calentó a reflujo bajo N<2>durante la noche. La mezcla se diluyó con agua (60 mL), se extrajo con EtOAc (60 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 500:1 a 40:1) para dar el compuesto del título (810 mg, 54%) en forma de un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 3,33 min, m/z 283,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 510,5 (s, 1H), 7,47 (dd, J = 9,5, 8,7 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 8,8, 3,6 Hz, 1H), 4,34 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,89 (s, 3H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
x) 4-Ciano-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I44)
El compuesto I41 es el compuesto I61 del documento WO 2019/219820.
a) 4-Ciano-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I42)
A una solución de 4-bromo-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I41) (1,2 g, 4,01 mmoles) en DMF (40 mL) se añadió CuCN (717 mg, 8,02 mmoles) y Pd[PPh3]4 (463 mg, 0,40 mmoles) y la mezcla se calentó a 120 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 80:1) para dar el compuesto del título (600 mg, 60%) en forma de un sólido blanco. LC<m>S-B (ES-API): rt 4,27 min, m/z 246,1 [M+H]+.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,68 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,36 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2,99 (s, 3H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
b) 3-(Bromometil)-4-cianobenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I43)
Una mezcla de 4-ciano-3-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I42) (450 mg, 1,83 mmoles), NBS (392 mg, 2,20 mmoles) y BPO (44 mg, 0,18 mmoles) en CCl4 (20 mL) se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 20:1) para dar el compuesto del título (360 mg, 60%) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8,52 (dd, J = 8,3, 0,9 Hz, 1H), 8,14 (dd, J = 7,4, 0,9 Hz, 1 H), 7,77 (dd, J = 8,1,7,6 Hz, 1H), 5,49 (s, 2H), 4,43 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
c) 4-Ciano-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I44)
Se calentó a reflujo una solución de 3-(bromometil)-4-cianobenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I43) (450 mg, 1,39 mmoles) y NMO (651 mg, 5,56 mmoles) en THF (15 mL) bajo N<2>durante 16 h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 50:1) para dar el compuesto del título (180 mg, 50%) como un sólido blanco. LCMS-A (ES-A<p>I): rt 1,56 min, m/z 260,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 510,7 (s, 1H), 8,57 (dd, J = 8,3, 0,8 Hz, 1H), 8,13 (dd, J = 7,4, 0,8 Hz, 1H), 7,78 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 4,44 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,36 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
xi) 3 -F o rm il-4 -( tr if lu o ro m e til)b e n z o [b ]tio fe n -2 -c a rb o x ila to de e tilo (I47)
145 146 147
a) 3-Metil-4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I45)
Una mezcla de 1-(2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)etan-1-ona (2,0 g, 0,01 moles), 2-mercaptoacetato de etilo (1,44 g, 0,012 moles) y K<2>CO<3>(4,15 g, 0,03 moles) en DMF (40 mL) se calentó a 100 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se diluyó con agua (50 mL), se extrajo con EtOAc (50 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera y luego se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 120:1 a 100:1) para dar el compuesto del título (2,4 g, 86%) en forma de un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 4,6 min, m/z 289,6 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,40 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,68 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 4,36 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,83 (d, J = 2,0 Hz, 3H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H). b) 3-(Bromometil)-4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I46)
Una mezcla de 3-metil-4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I45) (1,2 g, 4,2 mmoles), NBS (0,78 g, 4,4 mmoles) y AIBN (65,7 mg, 0,4 mmoles) en CCl4 (20 mL) se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante 3 h. Se añadió más NBS (0,28 g, 1,6 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h más. Se añadió más NBS (0,28 g, 1,6 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla se diluyó con agua (20 mL), se extrajo con EtOAc (30 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1) para dar el compuesto del título (1,17 g, 80%) en forma de un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,47 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,74 (t, J = 7,9 Hz, 1 H), 5,33 (s, 2H), 4,16 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,37 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
c) 3-Formil-4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I47)
Una solución de 3-(bromometil)-4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I46) (1,5 g, 4,1 mmoles) y NMO (2,06 g, 17,6 mmoles) en THF (20 mL) se calentó a reflujo bajo N<2>durante la noche. Se añadió agua (40 mL) y la mezcla se extrajo con EtOAc (40 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 70:1) para dar el compuesto del título (560 mg, 45%) en forma de un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 4,20 min, m/z 303,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 510,5 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,01 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,80 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 4,39 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,33 (t, J = 7,1 Hz, 3H). xii) 4-Bromo-7-fluoro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I49)
El compuesto I48 es el compuesto I52 del documento WO 2019/219820.
Una solución de 4-bromo-3-(bromometil)-7-fluorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I48) (676 mg, 1,71 mmoles) y NMO (800 mg, 6,84 mmoles) en THF (5 mL) se calentó a reflujo en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se repartió entre agua (30 mL) y EtOAc (30 mL), las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc (30 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 30:1) para dar el compuesto del título (243 mg, 43%) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 510,8 (s, 1H), 7,85 (dd, J = 8,4, 4,4 Hz, 1 H), 7,52 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,39 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,33 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
xiii) 4 -B ro m o -3 -fo rm ilb e n z o [b ]tio fe n -2 -c a rb o x ila to de e tilo (I51)
El compuesto I50 es el compuesto I62 del documento WO 2019/219820.
Se calentó a reflujo una solución de 4-bromo-3-(bromometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I50) (100 mg, 2,64 mmoles) y NMO (124 mg, 10,6 mmoles) en THF (20 mL) bajo N<2>durante la noche. La mezcla se repartió entre agua y EtOAc, las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 200:1 a 50:1) para dar el compuesto del título (290 mg, 35%) en forma de un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 3,33 min; m/z 312,9 [M+H]+.
xi) 3-Formil-4-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I52)
Una mezcla de 4-bromo-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I51) (225 mg, 0,78 mmoles), 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinano (361 mg, 2,87 mmoles), K<2>CO<3>(397 mg, 2,87 mmoles) y Pd(PPh3)4 (125 mg, 0,11 mmoles) en dioxano (10 mL) se calentó a reflujo durante la noche en atmósfera de N<2>. Se añadió agua (50 mL) y la mezcla se extrajo con EtOAc (50 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 100:1 a 50:1) para dar el compuesto del título (50 mg, 28%) en forma de un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 4,26 min, m/z 249,1 [M+H]+.
xv) 4-Etoxi-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I54)
El compuesto I53 es el compuesto I40 del documento WO 2019/219820.
Una solución de 3-(bromometil)-4-etoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I53) (2,0 g, 6,00 mmoles) y NMO (4,7 g, 24,0 mmoles) en THF (100 mL) se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet.) para dar el compuesto del título (600 mg, 37%) en forma de un sólido gris. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 510,6 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,52 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,32 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,17 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,36 (t, J = 6,9 Hz, 3H), 1,29 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
xvi) 3-Formil-4-metoxitieno[3,2-c]piridin-2-carboxilato de etilo (I56)
El compuesto I55 es el compuesto I29 del documento WO 2019/219820.
Una mezcla de 3-(bromometil)-4-metoxitieno[3,2-c]piridin-2-carboxilato de etilo (I55) (1 g, 3,03 mmoles) y NMO (2,15 g, 12,2 mmoles) en THF (20 mL) se calentó a reflujo durante la noche. Se añadió agua (100 mL) y la mezcla se extrajo con EtOAc (50 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 mL x 2), salmuera (100 mL x 2), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 50:1 a 5:1) para dar el compuesto del título (260 mg, 32%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B (ES-API): rt 3,87 min; m/z 266,0 [M+H]+.
Ejemplos
Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (1.1 y 1.2)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A1)
A una solución de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (20 mg, 0,061 mmoles) en EtOH (3 mL) se añadió 4-cloro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I19) (33 mg, 0,12 mmoles) y AcOH (0,3 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCO<3>y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. (columna Agilent 10 prep-C18, 10 gm, 250 x 21,2 mm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con TFA al 0,1%, a un caudal de 20 mL/min) para dar el compuesto del título A1 (5 mg, 10%) como un sólido amarillo (mezcla de diastereómeros atropisómeros: 1H-RMN mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-B: rt 3,43 min; m/z 825,1/827,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, MeOD) 58,29 (s, 2H), 8,14 (dd, J = 8,3, 0,8 Hz, 1H), 8,12 - 8,05 (m, 2H), 8,04 - 7,91 (m, 3H), 7,63 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,54 - 7,48 (m, 2H), 7,23 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,77 - 4,67 (m, 2H), 4,53 - 4,40 (m, 2H), 4,17 - 4,09 (m, 2H), 3,85 - 3,71 (m, 2H), 1,08 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,91 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (1.1 y<1>.<2>)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A1) (150 mg, 0,18 mmoles) en EtOH (10 mL) se añadió una solución de NaOH (43 mg, 1,08 mmoles) en agua (2 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua, se acidificó a pH 3-4 con una solución acuosa de HCl 1 M y el precipitado resultante se recogió mediante filtración. El sólido se purificó mediante HPLC prep. (columna Agilent 10 prep-C18, 10 gm, 250 x 21,2 mm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con TFA al 0,1%, a un caudal de 20 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título 1.1 (pico 1: 20 mg, 14%) y 1.2 (pico 2: 15 mg, 11%) como sólidos de color amarillo.
Pico 1 (1.1) (HPLC prep.: rt 13,27 min): LCMS-B: rt 2,81 min; m/z 769,0/771,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, MeOD) 5 8,30 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 8,11 (dd, J = 8,3, 0,8 Hz, 2H), 8,02 (dd, J = 8,7, 1,6 Hz, 2H), 7,87 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,62 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,49 (dd, J = 7,7, 0,8 Hz, 2H), 4,70 - 4,67 (m, 2H), 4,60 - 4,57 (m, 2H).
Pico 2 (1,2) (HPLC prep.: rt 15,45 min): LCMS-B: rt 2,94 min; m/z 769,0/771,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, MeOD) 5 8,29 (d , J = 1,2 Hz, 2H), 8,11 (dd, J = 8,8, 0,8 Hz, 2H), 8,02 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,51 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 4,78 - 4,76 (m, 2H), 4,52 - 4,50 (m, 2H).
Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cloro-7-fluorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (2.1 y 2.2)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cloro-7-fluorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A2)
A una solución de 4-cloro-7-fluoro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I24) (250 mg, 0,87 mmoles) en DMF (10 mL) se añadió 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (143 mg, 0,44 mmoles) y NaHSO3 (90 mg, 0,87 mmoles) y la mezcla se calentó a 120 °C en una atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se repartió entre EtOAc y agua, las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 10:1 a 1:1 a DCM/MeOH = 10:1) para dar el compuesto del título A2 (90 mg, 24%) como un sólido gris (mezcla de diastereómeros atropisómeros): 1H-RMN mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-B: rt 3,55 min; m/z 861,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,23 (s, 2H), 8,09 - 7,96 (m, 6H), 7,70 - 7,58 (m, 2H), 7,50 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 7,39 - 7,29 (m, 3H), 4,54 - 4,32 (m, 4H), 4,08 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,84 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 0,85 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
(b) Ácido 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cloro-7-fluorobenzo[b]tiofeno-2-carboxílico) (2.1 y 2.2)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cloro-7-fluorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A2) (80 mg, 0,09 mmoles) en EtOH/agua (3 mL/3 mL) se añadió NaOH (11 mg, 0,28 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y el residuo acuoso se acidificó a pH 5 con una solución acuosa de HCl 1 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante HPLC preparativa (Varian-940LC, columna prep-C18, 5 ^ , 150 x 20 mm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1%, a un caudal de 15 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título 2.1 (pico 1: 5 mg, 7%) y 2.2 (pico 2: 5 mg, 7%) como sólidos blancos.
Pico 1 (2.1) (HPLC: rt 6,78 min): LCMS-B: rt 2,87 min; m/z 805,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,21 (s, 2H), 8.02 (s, 2H), 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,85 (br s, 2H), 7,59 - 7,47 (m, 4H), 7,30 (s, 2H), 4,52 - 4,41 (m, 2H), 4,41 - 4,29 (m, 2H).
Pico 2 (2,2) (HPLC: rt 8,00 min): LCMS-B: rt 2,97 min; m/z 804,9 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,21 (s, 2H), 8.03 (s, 2H), 8,00 - 7,93 (m, 2H), 7,81 (br s, 2H), 7,44 - 7,35 (m, 2H), 7,33 - 7,25 (m, 4H) , 4,62 - 4,53 (m, 2H), 4,31 -4,11 (m, 2H).
Ácido 3,3'-(butano-1,4-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (3)
(a) 3,3'-(Butano-1,4-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A3)
Una mezcla de 4,4'-(butano-1,4-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I12) (100 mg, 0,28 mmoles), 4-cloro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I19) (151 mg, 0,56 mmoles) y NaHSO3 (59 mg, 0,56 mmoles) en DMF (8 mL) se calentó a 80 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 16 h. La mezcla se repartió entre agua (50 mL) y EtOAc (50 mL), las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (50 mL x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 100:1 a 10:1) para dar el compuesto del título A3 (130 mg, 54%) como un sólido negro (mezcla de diastereómeros atropisómeros: análisis por HPLC analítico (Agilent serie 1200, columna C18 Waters Nova-Pak, 3,9 x 150 mm, 4 |um, eluyendo con un gradiente de MeOH en agua con TFA al 0,05%, a un caudal de 0,5 mL/min) mostró una mezcla 1:1 de componentes con rt 11,59 min y 11,80 min.). LCMS-B: rt 3,57 min; m/z 853,1/855,1. La mezcla se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
b) Ácido 3,3'-(butano-1,4-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (3)
Una solución de 3,3'-(butano-1,4-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A3) (80 mg, 0,09 mmoles) y NaOH (23 mg, 0,54 mmoles) en EtoH/agua<(6>mL</2>mL) se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se acidificó a pH 4-5 con una solución acuosa de HCl 2 M. El precipitado resultante se recogió mediante filtración y se purificó mediante HPLC preparativa (columna Agilent 10 Prep-C18, 250 x 21,2 mm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con TFA al 0,1%, a un caudal de 20 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título 3 (pico 1: 5 mg,<6>%) y (pico 2: 10 mg, impuro) como sólidos grises.
Pico 1: (3) (HPLC prep.: rt 11,34 min): LCMS-B: rt 2,81 min; m/z 797,0/799,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,17 (s, 4H), 8,01 (s, 2H), 7,84 (s, 2H), 7,66 - 7,46 (m, 4H), 7,36 - 7,16 (m, 4H), 4,01 - 3,75 (m, 4H), 1,56 - 1,41 (m, 4H).
Pico 2: (HPLC prep.: rt 14,51 min): LCMS-B: rt 2,90 min; m/z 797,1/799,1 [M+H]+.
Ácido 3,3'-(propano-1,3-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (4.1 y 4.2)
(a) 3,3'-(Propano-1,3-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A4)
A una solución de 4,4'-(propano-1,3-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I<8>) (200 mg, 0,58 mmoles) en DMF (15 mL) se añadió 4-cloro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I19) (314 mg, 1,17 mmoles) y NaHSO3 (122 mg, 1,17 mmoles) y la mezcla se calentó a 80 °C en atmósfera de nitrógeno durante la noche. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc (100 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 10:1 a DCM/MeOH = 15:1) para dar el compuesto del título A4 (155 mg, 32 %) como un sólido gris (mezcla de diastereómeros atropisómeros: 1H-RMN mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-B: rt 3,48 min; m/z 839,1. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,28 - 8,15 (m, 4H), 8,05 - 7,99 (m, 2H), 7,84 - 7,75 (m, 2H), 7,65 - 7,40 (m,<6>H), 7,32 - 7,26 (m, 2H), 4,10 - 3,94 (m,<8>H), 2,30 - 2,04 (m, 2H), 0,81 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,77 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
(b) Ácido 3,3'-(propano-1,3-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (4.1 y 4.2)
A una solución de 3,3'-(propano-1,3-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A4)<(80>mg, 0,095 mmoles) en EtOH/agua (4 mL/2 mL) se añadió NaOH (23 mg, 0,57 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua y se acidificó a pH 4-5 con una solución acuosa de HCl 2 M. El precipitado resultante se recogió mediante filtración y se purificó mediante HPLC preparativa (columna Agilent 10 Prep-C18, 250 x 21,2 mm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con TFA al 0,1%, a un caudal de 20 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título 4.1 (pico 1: 5 mg,<6>%) y 4.2 (pico 2:<6>mg, 7%) como sólidos blancos.
Pico 1 (4.1) (HPLC: rt 9,10 min): LCMS-B: rt 2,82 min; m/z 783,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,27 - 8,17 (m, 4H), 8,01 (br s, 2H), 7,78 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,59 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 7,50 - 7,40 (m, 4H), 7,31 (br s, 2H), 4,09 -4,06 (m, 4H), 2,26 - 2,03 (m, 2H).
Pico 2 (4.2) (HPLC: rt 11,50 min): LCMS-B: rt 2,90 min; m/z 783,0 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,24 - 8,16 (m, 4H), 8,00 (br s, 2H), 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,64 - 7,47 (m, 4H), 7,38 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,29 (br s, 2H), 4,18 -3,95 (m, 4H), 2,21 - 2,08 (m, 2H).
Á c id o 3 ,3 '-(e ta n o -1 ,2 -d iilb is (5 -ca rb a m o il-1 H -b e n z o [d ]im id a z o l-1 ,2 -d iil) )b is (4 -m e to x ib e n z o [b ]tio fe n -2 -c a rb o x ílic o ) (5.2)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A5)
Una mezcla de 3-formil-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I16) (270 mg, 1,02 mmoles), 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (167 mg, 0,51 mmoles) y NaHSO3 (53 mg, 0,51 mmoles) en DMF (25 mL) se calentó a 120 °C en atmósfera de nitrógeno durante la noche. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con EtOAc (50 mL). El extracto orgánico se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 100:1 a 10:1) para dar el compuesto del título A5 (112 mg, 13%) como un sólido blanco (mezcla de diastereómeros atropisómeros: 1H-RMN mostró una mezcla 3:1). El material se utilizó en la siguiente etapa sin purificación adicional. LCMS-B: rt 3,45 min; m/z 817,3. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,18 (br s, 2H), 8,10 - 7,92 (m, 4H), 7,90 - 7,80 (m, 1H), 7,78 - 7,68 (m, 2H), 7,66 - 7,42 (m, 3H), 7,28 (br s , 2H), 6,87 (d, J = 7,8 Hz, 1,5 H), 6,58 (d, J = 7,6 Hz, 0,5 H), 4,59 - 4,36 (m, 3 H), 4,26 - 4,06 (m, 3 H), 4,01 - 3,91 (m, 1 H), 3,67 - 3,59 (m, 1 H), 3,30 (s, 4,5 H, coincidente con el pico de agua), 3,18 (s, 1,5H), 0,86 (t, J = 7,6 Hz, 1,5 H), 0,67 (t, J = 7.6 Hz, 4,5H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (5.2)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A5) (83 mg, 0,1 mmoles) en EtOH/agua (5:1, 10 mL) se añadió NaOH (40 mg, 1,0 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se aciduló hasta pH 6 con una solución acuosa de HCl 1 M y después se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (columna Agilent PrepStar 218, prep-C18, 10 ^ , 250 x 2,12 mm, eluyendo con un gradiente de MeOH en agua con TFA al 0,1%, a un caudal de 20 mL/min) para dar el compuesto del título 5.2 (10 mg, 13%) como un sólido blanco. Sólo se aisló un componente de la mezcla de reacción de estereoquímica desconocida.
LCMS-B: rt 2,85 min; m/z 761,1. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,18 (s, 2H), 7,99 (br s, 2H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,70 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,57 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,27 (br s, 2H), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,32 - 4,15 (m, 4H), 3,36 (s, 6H).
Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (5.1 y 5.2)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A6)
Una solución de 3-formil-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I16) (400 mg, 1,52 mmoles), 3,3'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(4-aminobenzamida) (I4) (250 mg, 0,76 mmoles) y NaHSO<3>(78,1 mg, 0,76 mmoles) en DMF (15 mL) se calentó a 120 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. Se añadió agua (50 mL) y la mezcla se extrajo con diclorometano (50 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (450 mg, 36%) en forma de un sólido marrón. LCMS-B (ES-API): rt 3,12 min, m/z 817,6 [M+H]+.
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (5.1 y 5.2)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (A6) (430 mg, 0,53 mmoles) en EtOH/H<2>O (5:1, 10 mL) se añadió NaOH (212 mg, 5,3 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y el residuo acuoso se ajustó a pH 5 con HCl acuoso 1 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante HPLC prep. (Agilent, BOSTON, columna de 250 x 2,12 mm, 10 pm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1 % a un caudal de 20,0 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título (5.1) (pico 1: 11 mg, 3%) como un sólido blanco y (5.2) (pico 2: 22 mg, 5%) como un sólido marrón.
Pico 1 (HPLC prep., rt 7,53 min): (5,1); LCMS-B (ES-API): rt 2,57 min, m/z 761,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,17 (s, 2H), 7,99 (br s, 2H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,46 - 7,43 (m, 4H), 7,27 (br s, 2H), 6,61 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,37 - 4,32 (m, 2H), 4,11 - 4,09 (m, 2H), 3,18 (s, 6H).
Pico 2 (HPLC preparatoria, rt 8,60 min): (5,2); LCMS-B (ES-API): rt 2,51 min, m/z 761,1 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,17 (s, 2H), 7,98 (br s, 2H), 7,80 - 7,73 (m, 2H), 7,69 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,54 (t, j= 8,1 Hz, 2H), 7,35 -7,11 (m, 4H), 6,85 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,23 - 4,20 (m, 2H), 4,14 - 4,12 (m, 2H), 3,34 (s, 6H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxitieno[3,2-c]piridin-2-carboxilato) de dietilo (6) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxitieno[3,2-c]piridina-2-carboxílico) (7)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxitieno[3,2-c]piridina-2-carboxilato) de dietilo (6)
Una solución de 3-formil-4-metoxitieno[3,2-c]piridin-2-carboxilato de etilo (I56) (162 mg, 0,61 mmoles), 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (100 mg, 0,305 mmoles) y NaHSO3 (64 mg, 0,61 mmoles) en DMF (3 mL) se calentó a 80 °C durante la noche. Se añadió agua (30 mL) y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 mL x 3). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (30 mL x 2), salmuera (30 mL x 2), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC prep. (Varian-940-LC, columna 150 x 20 mm, de 5 pm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1 % a un caudal de 15,0 mL/min) para dar el compuesto del título (6 mg, 2 %) como un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 3,08 min; m/z 819,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,20 (s, 4H), 8,02 - 7,94 (m, 6H), 7,83 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,31 (br s, 2H), 4,54 - 4,48 (m, 2H), 4,20 - 4,13 (m, 2H), 3,79 - 3,73 (m, 2H), 3,65 - 1,66 (m, 2H), 3,54 (s, 6H), 0,77 (t, J = 6,8Hz, 6H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxitieno[3,2-c]piridina-2-carboxílico) (7)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metoxitieno[3,2-c]piridina-2-carboxilato) de dietilo (6) (70 mg, 0,086 mmoles) en EtOH/H<2>O (2,0 mL/0,5 mL) se añadió NaOH (11 mg, 0,257 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se diluyó con agua (5 mL) y la mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida. El residuo acuoso se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 2 M y el precipitado resultante se recogió mediante filtración y se purificó mediante HPLC prep (Varian-940-LC, columna 150 x 20 mm, de 5 pm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1% a un caudal de 15,0 mL/min) para dar el compuesto del título (4 mg, 6 %) en forma de un sólido blanco. LCMS-B (ES-API): rt 2,53 min, m/z 761,0 [MH]-.1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,19 (s, 2H), 8,06 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 8,01 (br s, 2H), 7,94 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,74 - 7,66 (m, 4H), 7,28 (br s, 2H), 4,46 - 4,42 (m, 2H), 4,17 - 4,15 (m, 2H), 3,32 (s, 6H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(benzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (8) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(benzo[b]tiofen-2-carboxílico) (9)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoy/-1 H-benzo[d]imidazo/e-1,2-diil))bis(benzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (8)
Una solución de 3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I36) (0,600 g, 2,57 mmoles), 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (0,423 g, 1,29 mmoles) y NaHSO3 (0,268 g, 2,57 mmoles) en DMF (40 mL) se calentó a 130 °C en atmósfera de N<2>durante 48 h. Se añadió agua y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 80:1 a 40:1) para dar el compuesto del título (440 mg, 46%) como un sólido marrón (mezcla de diastereómeros atropisómeros: 1H-RMN mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-B (ES-API): rt 2,95 min; m/z 757,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,23 (s, 1H), 8,17 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,04 (br s, 1H), 7,85 - 7,79 (m, 2H), 7,72 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,56 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,38 - 7,30 (m, 4H), 7,24 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,15 - 7,13 (m, 2H), 7,00 - 6,97 (m, 2H), 6,13 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,79 - 4,76 (m, 1H), 4,52 - 4,49 (m, 1H), 4,31 - 4,29 (m, 1H), 4,19 - 3,95 (m, 5H), 0,98 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,91 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(benzo[b]tiofen-2-carboxílico) (9)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(benzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (<8>) (0,200 g<0 ,26>mmoles) en EtOH/H<2>O (20 mL/4 mL) se añadió NaOH (0,106 g, 2,6 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y el residuo acuoso se acidificó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M. El precipitado resultante se recogió mediante filtración y se purificó mediante HPLC preparativa (Shimadzu LC-<8>A, columna 150 x 20 mm, de 10 |um, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con TFA al 0,1% a un caudal de 15,0 mL/min para dar el compuesto del título (5 mg, 2%) como un sólido blanco (mezcla de diastereómeros atropisómeros:<1>H-RM<n>mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-C (ES-API): rt 3,14 min; m/z 701,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, 60 °C, DMSO-ds) 58,23 (s, 1H), 8,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,85 - 7,82 (m, 3H), 7,73 (dd, J = 8,4, 1,7 Hz, 1H), 7,56 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,38 - 7,36 (m, 3H), 7,23 - 7,18 (m, 3H), 7,13 -7,05 (m, 3H), 6,90 (d, J =<8 ,8>Hz, 1H), 6,28 (d, j= 8,4 Hz, 1H), 4,73 - 4,70 (m, 1H), 4,67 - 4,34 (m, 2H), 4,17 - 4,14 (m,<1>H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (10) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (<11 . 1>y<1 1>.<2>)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (<1 0>)
Una solución de 4-bromo-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I51) (0,300 g, 0,96 mmoles), 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (0,157 g, 0,48 mmoles) y NaHSO3 (0,199 g, 1,92 mmoles) en DMF (15 mL) se calentó a 80 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. Se añadió NaHSO3 adicional (0,199 g, 1,92 mmoles) y la mezcla se calentó a 100 °C durante la noche. La mezcla se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc (100 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 60:1 a 20:1) para dar el compuesto del título (180 mg, 21%) en forma de un sólido blanco (mezcla de diastereómeros atropisómeros: 1H-RMN mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-B (ES-API): rt 3,18 min; m/z 912,9, 914,8 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,30 (dd, J = 8,0, 0,8 Hz, 1H), 8,25 - 8,22 (m, 2H), 8,19 - 8,16 (m, 1H), 8,04 - 7,95 (m, 5H), 7,92 - 7,90 (m, 1H), 7,71 (dd, J = 8,0, 0,8 Hz, 1H), 7,57 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,49 - 7,46 (m, 2H), 7,32 (br s, 2H), 4,63 -4,57 (m, 1H), 4,50 - 4,46 (m, 1H), 4,38 - 4,34 (m, 1H) , 4,28 - 4,21 (m, 1H), 4,05 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,65 - 3,57 (m, 2H), 0,94 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,78 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (<1 1>.<1>. y<1 1>.<2>)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (10) (150 mg, 0,16 mmoles) en EtOH/H<2>O (10 mL/2 mL) se añadió NaOH (39 mg, 0,98 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y el residuo acuoso se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante preparación. HPLC (columna Agilent 10 prep-C18, 10 gm, 250 x 21,2 mm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con TFA al 0,1%, a un caudal de 20 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título (11.1) (pico 1: 10 mg, 7%) y del compuesto del título (11.2) (pico 2: 14 mg, 10%) como sólidos blancos.
Pico 1 (HPLC preparatoria, rt 8,99 min): (11.1); LCMS-B (ES-API): rt 0,56 min, m/z 856,9, 858,9 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,21 - 8,19 (m, 6H), 7,97 (br s, 2H), 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,59 - 7,53 (m, 2H), 7,42 - 7,39 (m, 2H), 7,20 (br s, 2H), 4,35 - 4,33 (m, 2H), 4,27 - 4,24 (m, 2H) .
Pico 2 (HPLC prep., rt 12,15 min): (11.2); LCMS-B (ES-API): rt 0,67 min, m/z 856,9, 858,9 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,23 - 8,16 (m, 6H), 8,01 (br s, 2H), 7,89 - 7,81 (m, 2H), 7,51 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,44 - 7,42 (m, 2H), 7,25 (br s, 2H), 4,57 - 4,50 (m, 2H), 4,19 - 4,07 (m, 2H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(7-fluoro-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (12) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(7-fluoro-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (13.1 y 13.2)
a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(7-fluoro-4-metoxibenzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (12)
Una solución de 7-fluoro-3-formil-4-metoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I40) (158 mg, 0,56 mmoles), 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (37 mg, 0,28 mmoles) y NaHSO3 (58 mg, 0,56 mmoles) en DMF (3 mL) se calentó a 100 °C en atmósfera de N<2>durante la noche. La mezcla se vertió en agua (30 mL), se extrajo con EtOAc (30 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Éter Pet./EtOAc = 40:1 a 20:1 y DCM/MeOH = 10:1) para dar el compuesto del título (80 mg, 16%) como un sólido amarillo (mezcla de diastereómeros atropisómeros). Lc Ms -B (ES-API): rt 1,21 min, m/z 853,1 [M+H]+.
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(7-fluoro-4-metoxibenzo[b]tiofeno-2-carboxílico) (13.1 y 13.2)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(7-fluoro-4-metoxibenzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (12) (25 mg, 0,03 mmoles) en EtOH/H<2>O (5 mL/1 mL) se añadió NaOH (7 mg, 0,18 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió agua (5 mL) y la mezcla se lavó con EtOAc (5 mL x 3). La capa acuosa se acidificó a pH 4-5 con HCl acuoso 3 M y el precipitado resultante se recogió mediante filtración y se purificó mediante HPLC prep. (Shimadzu LC-20AP, BOSTON, columna 250 x 2,12 mm, de 10 pm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con TFA al 0,1% a un caudal de 20,0 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título (13.1) (pico 1: 3,5 mg, 15%) y (13.2) (pico 2: 4 mg, 17%) como sólidos amarillos.
Pico 1 (HPLC prep., rt 12,70 min): (13.1); LCMS-B (ES-API): rt 0,56 min, m/z 797,1 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,18 (s, 2H), 8,02 (br s, 2H), 7,97 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,43 (t, J = 9,1 Hz, 2H), 7,29 (br s, 2H), 6,82 (dd, J = 8,8, 3,1 Hz, 2H), 4,38 - 4,34 (m, 2H), 4,22 - 4,19 (m, 2H), 3,51 (s, 6H).
Pico 2 (HPLC prep., rt 13,46 min): (13.2); LCMS-B (ES-API): rt 0,65 min, m/z 797,0 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,19 (s, 2H), 8,06 -7,97 (m, 4H), 7,89 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,31 - 7,25 (m, 4H), 6,55 (dd, J = 8,8, 3,3 Hz, 2H), 4,44 - 4,39 (m, 2H), 4,21 - 4,16 (m, 2H), 3,19 (s, 6H).
3,3'-(1,1'-(Etano-1,2-diil)bis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-2,1-diil))bis(4-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (14) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (15.1 y 15.2)
a) 3,3'-(1,1'-(Etano-1,2-diil)bis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-2,1-diil))bis(4-metilbenzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (14)
Una solución de 3-formil-4-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I52) (50 mg, 0,75 mmoles), 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (23 mg, 0,07 mmoles) y NaHSO3 (14,6 mg, 0,14 mmoles) en DMF (2 mL) se calentó a 80 °C durante la noche en atmósfera de N<2>. La mezcla se diluyó con agua (10 mL), se extrajo con EtOAc (10 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante TLC preparativa (DCM/MeOH = 20/1) para dar el compuesto del título (20 mg, 13 %) en forma de un sólido blanco (mezcla de diastereómeros atropisómeros en una proporción de ~2:1). LCMS-B (ES-API): rt 3,32 min, m/z 785,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,25 - 8,24 (m, 2H), 8,11 - 8,04 (m, 3H), 8,03 - 7,93 (m, 3H), 7,86 (d, J = 8,5 Hz, 1,35 H), 7,59 (d, J = 8,6 Hz, 0,65 H), 7,54 - 7,48 (m, 1.35 H), 7,46 - 7,41 (m, 0,65 H), 7,32 (br s, 2H), 7,21 (d, J = 7,1 Hz, 1,35H), 7,02 (d, J = 7,3 Hz, 0,65 H), 4,78 - 4,69 (m, 1,35 H), 4,59 - 4,54 (m, 0,65 H), 4,15 - 3,96 (m, 4H), 3,51 - 3,40 (m, oscurecido por disolvente), 1,70 (s, 4H), 1,54 (s, 2H), 0,90 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 0,73 (t, J = 7,1 Hz, 4H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (15.1 y 15.2)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-metilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (14) (140 mg, 0,18 mmoles) en EtOH (10 mL) y agua (2 mL) se añadió NaOH (43 mg, 1,10 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (3 mL) y se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 1 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante HPLC prep. (Varian-940-LC, columna YMC-C18, 150 x 20 mm, de 5 |jm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1% a un caudal de 15,0 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título (15.1) (pico 1: 9 mg, 7%) y (15.2) (pico 2: 12,7 mg, 10%) como sólidos blancos.
Pico 1 (HPLC prep., rt 10,85 min): (15.1); LCMS-B (ES-API): rt 2,82 min, m/z 729,1 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,24 (d, J = 1,7 Hz, 2H), 8,02 (br s, 2H), 7,97 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,87 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,46 - 7,39 (m, 2H), 7.36 - 7,26 (m, 4H), 7,05 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 4,57 - 4,49 (m, 2H), 3,99 - 3,95 (m, 2H), 1,56 (s, 6H).
Pico 2 (HPLC preparatoria, rt 12,01 min): (15.2); LCMS-B (ES-API): rt 2,80 min, m/z 729,1 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,24 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 8,07 - 7,96 (m, 6H), 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,48 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,28 (br s, 2H), 7,17 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 4,30 - 4,21 (m, 4H), 1,66 (s, 6H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cianobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (16) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cianobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (17)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cianobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (16)
Una solución de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (139 mg, 0,42 mmoles), 4-ciano-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I44) (220 mg, 0,84 mmoles) y NaHSO3 (88 mg, 0,84 mmoles) en DMF (15 mL) se calentó a 120 °C en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se vertió en agua (80 mL), se extrajo con EtOAc (80 mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (80 x 2 mL), salmuera (80 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 1:0 a 20:1) para dar el compuesto del título (130 mg, 38%) como un sólido marrón (mezcla de diastereómeros atropisómeros: 1H-R<m>N mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-C (ES-API): rt 3,42 min, m/z 807,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d^ 58,58 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,54 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,24 (s, 2H), 8,06 - 8,00 (m, 7H), 7,83 - 7,72 (m, 3H), 7,34 (br s, 2H), 4,59 - 4,44 (m, 2H), 4,38 - 4,25 (m, 2H), 4,09 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,89 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 0,98 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 0,88 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cianobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (17)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-cianobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (16) (125 mg, 0,15 mmoles) en EtOH/agua (5 mL/5 mL) se añadió NaOH (6 mg, 0,90 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se concentró a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (5 mL) y se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 2 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante HPLC prep. (Agilent, BOSTON, columna 250 x 2,12 mm, de 10 pm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1% a un caudal de 20,0 mL/min) para dar el compuesto del título como una mezcla de atropisómeros (racemato:meso 1:1, 15 mg, 12%). lCm S-C (ES-API): rt 2,43 min, m/z 751,1 [M+H]+ y 2,72 min, m/z 751,1 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,48 - 8,45 (m, 2H), 8,22 (s, 2H), 8,10 - 7,98 (m, 2H), 7,94 -7,55 (m, 7H), 7,40 - 7,21 (m, 3H), 4,54 - 4,52 (m , 2H), 4,22 - 4,10 (m, 2H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (18) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-(trifluorometil)benzo[b]tiofeno-2-carboxílico) (19.1 y 19.2)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-(trifluorometil)benzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (18)
A una solución de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (197 mg, 0,6 mmoles) en DMF (4 mL) se añadió H<2>O (0,1 mL) seguido de oxona (369 mg, 0,6 mmoles). Luego se añadió gota a gota durante 1 h una solución de 3-formil-4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I47) (300 mg, 1,0 mmol) en DMF (2 mL) y se calentó la mezcla a 80°C durante 2 días. Se añadió agua (20 mL) y el precipitado resultante se recogió mediante filtración y se trituró con una mezcla 1:1 de Éter Pet./EtOAc para dar el compuesto del título (183 mg, 21 %) como un sólido negro (mezcla de diastereómeros atropisómeros en una proporción de ~1,5:1). LCMS-B (ES-API): rt 3,20 min, m/z 893,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,66 - 8,64 (m, 1H), 8,52 - 8,50 (m, 1H), 8,23 - 8,20 (m, 2H), 8,06 - 7,98 (m, 5H), 7,96 - 7,84 (m, 4H), 7,78 - 7,76 (m, 1H), 7,32 (br s, 2H), 4,52 - 4,35 (m, 2,4H), 4,14 - 4,07 (m, 1,6H), 4,05 (q, J = 7,1 Hz, 1,6H), 3,54 (q, J = 7,1 Hz, 2,4H), 0,90 (t, J = 7,1 Hz, 2,4H), 0,74 (t, J = 7,1 Hz, 3,6H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-(trifluorometil)benzo[b]tiofen-2-carboxílico) (19.1 y 19.2)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-(trifluorometil)benzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (18) (183 mg, 0,20 mmoles) en EtOH/agua (8 mL, 10:1) se añadió NaOH (80 mg, 2,0 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y la capa acuosa se ajustó a pH 5 con HCl acuoso 1 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante HPLC prep. (columna Agilent Prep Star 218, 150 x 20 mm, de 5 pm, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1% a un caudal de 20,0 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título (19.1) (pico 1: 5 mg, 3%) y (19.2) (pico 2: 10,8 mg, 7%) como sólidos marrones.
Pico 1 (HPLC prep., rt, 10,27 min): (19.1); LCMS-B (ES-API): rt 2,66 min, m/z 837,1 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,51 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 8,21 (s, 2H), 8,01 (br s, 2H), 7,94-7,70 (m, 8H), 7,27 (br s, 2H), 4,29 - 4,19 (m, 4H).
Pico 2 (HPLC prep., rt, 14,98 min): (19.2); LCMS-B (ES-API): rt 2,77 min, m/z 837,1 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,50 - 8,48 (m, 2H), 8,22 (s, 2H), 8,01 (br s, 2H), 7,93 - 7,86 (m, 2H), 7,79 - 7,69 (m, 6H), 7,28 (br s, 2H) ), 4,43 -4,41 (m, 2H), 4,07 - 4,05 (m, 2H).
Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromo-7-fluorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (20.1 y 20.2)
a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromo-7-fluorobenzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (A7)
Una mezcla de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (I4) (200 mg, 0,61 mmoles) y 4-bromo-7-fluoro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I49) (404 mg, 1,22 mmoles) en AcOH/EtOH (10 mL/10 mL) se calentó a 50 °C durante<6>h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/MeOH = 20:1) para dar el compuesto del título (260 mg, 45%) en forma de un sólido amarillo. LCMS-B (ES-<a>P<i>): rt 3,61 min; m/z 475,0 [M/<2>+H]+.
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromo-7-fluorobenzo[b]tiofeno-2-carboxílico) (<20 .1>y<2 0>.<2>)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-bromo-7-fluorobenzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (A7) (260 mg, 0,27 mmoles) en EtOH (10 mL) se añadió una solución de NaOH (65 mg, 1,62 mmoles) en agua (2 mL) y la mezcla se calentó a 50 °C durante la noche. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y el residuo acuoso se ajustó a pH 3-4 con HCl acuoso 1 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante HPLC prep. (columna Agilent 10 prep-C18, 250 x 21,2 mm, 10 |jm, eluyendo con un gradiente de MeOH en agua con TFA al 0,1% a un caudal de 20 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título (20.1 ) (pico 1: 25 mg, 10%) y (20.2) (pico 2: 90 mg, 37%) como sólidos de color amarillo.
Pico 1: (HPLC prep., rt, 8,59 min): (20.1); LCMS-B (ES-API): rt 2,83 min, m/z 892,8, 894,9 [M+H]+;<1>H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,21 (s, 2H), 8,02 (br s, 2H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,70 - 7,59 (m, 4H), 7,42 (t, J =<8 ,8>Hz, 2H), 7,27 (br s, 2H), 4,51 - 4,34 (m, 4H).
Pico 2: (HPLC prep., rt, 10,72 min): (20.2); LCMS-B (ES-API): rt 3,02 min, m/z 892,8, 894,8 [M+H]+;<1>H-RMN (400 MHz, DMSO-d<6>) 58,26 - 7,75 (m,<8>H), 7,44 - 7,32 (m,<6>H), 4,51 - 4,29 (m, 4H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-4-metoxi-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (21) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-4-metoxi-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-<2>-carboxílico) (<22 .1>y<2 2>.<2>)
a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-4-metoxi-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofeno-2-carboxilato) de dietilo (<2 1>)
Una mezcla de 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-amino-2-metoxibenzamida) (I33) (145 mg, 0,37 mmoles), 4-cloro-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I19) (200 mg, 0,74 mmoles) y NaHSO3 (78 mg, 0,74 mmoles) en DMF (15 mL) se calentó a 120 °C en atmósfera de N<2>durante 16 h. La mezcla se vertió en agua (80 mL), se extrajo con EtOAc<(80>mL x 3) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (80 x 2 mL), salmuera (80 mL), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante TLC prep. (DCM/MeOH = 15:1) para dar el compuesto del título (130 mg, 39%) como un sólido amarillo (mezcla de diastereómeros atropisómeros: 1H-RMN mostró una mezcla 1:1 de racemato:meso). LCMS-C (ES-API): rt 4,53 min, m/z 885,2, 887.2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-ds) 58,27 - 8,25 (m, 1H), 8,16 - 8,14 (m, 1H), 7,89 (s, 2H), 7,67 -7,65 (m, 3H), 7,54 - 7,43 (s,<6>H), 7,29 - 7,27 (m , 1H), 4,47 - 4,42 (m, 2H), 4,25 - 4,23 (m, 10 H), 4,06 - 4,05 (m, 2H), 0,95 (t, J = 6,4 Hz, 3H), 0,79 (t, J =<6 ,8>Hz, 3H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-4-metoxi-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (<22 .1>y<2 2>.<2>)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-4-metoxi-1H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-clorobenzo[b]tiofeno-<2>-carboxilato) de etilo (<2 1>) (130 mg, 0,15 mmoles) en EtOH/H<2>O<(8>mL</8>mL) se añadió NaOH (35 mg, 0,90 mmoles) y la mezcla se calentó a 80 °C durante 16 h. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se diluyó con agua (10 mL) y se ajustó a pH 4-5 con HCl acuoso 2 M. El precipitado resultante se recogió por filtración y se purificó mediante HPLC prep. (Agilent, BOSTON, columna 250 x 2,12 mm, de 10 ^m, eluyendo con un gradiente de ACN en agua con ácido fórmico al 0,1% a un caudal de 20,0 mL/min) para dar los atropisómeros separados del compuesto del título (22.1) ( pico 1: 5 mg, 4%) y (22.2) (pico 2: 10 mg,<8>%) como sólidos blancos.
Pico 1 (HPLC prep., rt 12,08 min): (22.1); LCMS-C (ES-API): rt 3,58 min, m/z 829,1,831,0 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,17 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7,72 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,67 (s, 2H), 7,58 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 7,46 - 7,44 (m, 4H), 7,25 - 6,61 (m, 2H), 4,37 - 4,28 (m, 2H), 4,29 (s, 6H), 4,18 - 4,16 (m, 2H).
Pico 2 (HPLC prep., rt 14,84 min): (22.2); LCMS-C (ES-API): rt 3,80 min, m/z 829,1,831,0 [M+H]+; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,14 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,91 - 7,73 (m, 2H), 7,68 (s, 2H), 7,58 - 7,48 (m, 2H), 7,44 (s, 2H), 7,30 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,19 - 7,04 (m, 2H), 4,45 - 4,43 (m, 2H), 4,28 (s, 6H), 4,12 - 4,01 (m, 2H).
3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-etoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (23) y ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-etoxibenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (24)
(a) 3,3'-(Etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-etoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (23)
Una solución de 4-etoxi-3-formilbenzo[b]tiofen-2-carboxilato de etilo (I54) (500 mg, 1,8 mmoles), 4,4'-(etano-1,2-diilbis(azanediil))bis(3-aminobenzamida) (l4) (300 mg, 0,91 mmoles) y NaHSO3 (175 mg, 1,8 mmoles) en DMF (25 mL) se calentó a 80 °C durante la noche. La mezcla se diluyó con agua, se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (200 mg, 26%) en forma de un sólido rosa. LCMS-B (ES-API): rt 3,20 min, m/z 845,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,19 (s, 2H), 8,05 (br s, 2H), 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,57 - 7,47 (m, 2H), 7,29 (br s, 2H), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 4,55 - 4,44 (m, 2H), 4,09 - 4,07 (m, 2H), 3,69 - 3,57 (m, 4H), 3,51 - 3,45 (m, 4H), 0,74 (t, J = 7,0 Hz, 6H), 0,35 (t, J = 7,0 Hz, 6H).
(b) Ácido 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-etoxibenzo[b]tiofen-2-carboxílico) (24)
A una solución de 3,3'-(etano-1,2-diilbis(5-carbamoil-1 H-benzo[d]imidazol-1,2-diil))bis(4-etoxibenzo[b]tiofen-2-carboxilato) de dietilo (23) (15 mg, 0,018 mmoles) en EtOH (8 mL) se añadió una solución de NaOH (7 mg, 0,18 mmoles) en H<2>O (1 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mayor parte del EtOH se eliminó a presión reducida y el residuo acuoso se ajustó a pH 5 con HCl acuoso 1 M. El precipitado resultante se recogió mediante filtración y se secó a presión reducida para dar el compuesto del título como una mezcla ~1,8:1 de atropisómeros (5 mg, 35%) en forma de un sólido negro. LCMS-C (ES-API): rt 2,98 min, m/z 789,2 [M+H]+ y 3,07 minutos, m/z 789,2 [M+H]+. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) 58,13 - 8,08 (m, 2H), 7,96 - 7,90 (m, 2H), 7,65 - 7,48 (m, 4H), 7,34 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,19 (br s, 0,7H), 7,16 (s, 1,3H), 6,74 - 6,63 (m, 2H), 6,49 - 6,42 (m, 0,7H), 6,36 - 6,30 (m, 1,3 H), 4,54 - 4,45 (m, 1 H), 4,24 - 4,11 (m, 2H), 4,06 - 3,93 (m, 2H), 3,83 - 3,76 (m, 1 H), 3,58 - 3,50 (m, 2H), 1,08 ( t, J = 7,3 Hz, 6H).
Ensayos
Producción y purificación de proteínas
Se realizaron experimentos biofísicos con tres variantes diferentes de la proteína STING recombinante de ser humano designadas según la nomenclatura alélica de Yi et al., (2013). Secuencias de ADN optimizadas con codones (para expresión enEsoheriohiacoli) que codificaban los residuos de aminoácidos 149 a 345 (Swiss Prot Q86WV6) de STING (WT) de ser humano, STING (HAQ) de ser humano y STING (R232H) de ser humano fueron sintetizadas por GenScript USA Inc (Piscataway, Nueva Jersey, EE. UU.). Estas se ligaron en un vector de expresión pET43a modificado de E. coli diseñado para codificar la etiqueta His N-terminal seguida por el sitio de escisión de la proteasa del virus del grabado del tabaco (TEV) y una secuencia del gen STING. Las secuencias de proteínas resultantes para las tres variantes alélicas se enumeran a continuación:
His-TEV-hSTING(WT)
/WGHHHHHHG7£A/LYFQGSE149KGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNL
LRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDRAGIKDRVYSNSIYELLENG
QRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLI
AYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQEEKEEVTVGS345
His-TEV-hSTING(R232H)
MGHHHHHHGTEA/LYFQGSE149KGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNL
LRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDHAGIKDRVYSNSIYELLENG
QRAGTCVLEYATPLQTLFAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLI
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His-TEV-hSTING(HAQ)
MGHHHHHHGTENLYFQGSE149KGNFNVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNL
LRGAVSQRLYILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTADRAGIKDRVYSNSIYELLENG
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Para producir proteínas STING recombinantes de ser humano, los constructos descritos anteriormente que codifican el plásmido de expresión se transformaron en E. coli Cepa BL21 DE3 y se cultivó con agitación a 37 °C en volúmenes de 2 x 1 L de caldo Terrific (TB) suplementado con 100 ^ /m L de ampicilina hasta que se alcanzó una DO<600>de 0,8. Luego se enfriaron los cultivos a 16 °C y se indujo la expresión de proteínas mediante la adición de isopropil p-D-1-tiogalactopiranósido hasta una concentración final de 0,5 mM y los cultivos se agitaron mediante sacudidas durante la noche durante 16 horas más. Después de la expresión, los cultivos celulares se centrifugaron a 5000 x g durante 20 min y el pelet celular se almacenó congelado a -70 °C.
La purificación de las proteínas se inició descongelando el pelet celular en tampón de lisis (Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, MgCl<2>mM), imidazol 10 mM, lisozima 0,5 mg/mL, endonucleasa Benzonase® [EMD Millipore], PMSF 1 mM, comprimidos completos inhibidores de proteasas sin EDTA [Roche]) utilizando una proporción de 7 mL de tampón por 1 g de células. Las células se lisaron adicionalmente mediante 3 pases a través de un triturador de células Avestin C5 enfriado con hielo y luego se centrifugaron a 48.000 x g a 4 °C. El sobrenadante (lisado celular) se filtró a través de un filtro de 5 |jm y se cargó en una columna de sefarosa FF HiTrap IMAC de 5 mL (GE Healthcare) preequilibrada con tampón de lavado IMAC 1 (Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, imidazol 10 mM) utilizando el sistema de purificación por cromatografía Profinia Affinity (Bio-Rad). Luego, la columna IMAC se lavó secuencialmente con tampón de lavado IMAC 1 y tampón de lavado<i>M<a>C 2 (Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 300 mM, DTT 5 mM, imidazol 20 mM) y la proteína His-TEV-hSTING unida se eluyó con tampón de elución IMAC (Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 300 mM, DTt 5 mM, imidazol 250 mM). La proteína eluida con Im Ac se purificó aún más haciéndola pasar a través de una columna HiLoad 26/60 Superdex 75 preequilibrada en tampón de almacenamiento (Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, NaCl 150 mM, DTT 5 mM, azida sódica al 0,02 % [p/v]). Finalmente, la proteína hSTING se concentró hasta > 2 mg/mL usando una unidad de filtro centrífugo Amicon Ultra (Utra-15 MWCO 10 kDa), se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenó en un congelador a -70 °C.
Fluorometría diferencial de barrido (DSF)
La fluorometría diferencial de barrido (DSF) es un método de detección rápido para identificar ligandos de bajo peso molecular que se unen y, al hacerlo, estabilizan (o a veces desestabilizan) proteínas purificadas (Niesen 2007). La DSF monitoriza el despliegue térmico de la proteína en presencia de un colorante fluorescente y generalmente se realiza utilizando un instrumento de PCR en tiempo real. La temperatura a la que se despliega una proteína se mide mediante un aumento de la fluorescencia de un colorante con afinidad por las partes hidrófobas de la proteína que van quedando expuestas gradualmente durante el despliegue. La fluorescencia del colorante se extingue en ambientes acuosos, pero cuando el colorante se asocia con sitios hidrófobos en proteínas desplegadas, su fluorescencia aumenta. La intensidad de la fluorescencia se representa en función de la temperatura, generando una curva sigmoidea que puede describirse mediante una transición de dos estados. El punto de inflexión de la curva de transición (Tm) se calcula usando ecuaciones simples tales como la de Boltzmann.
La estabilidad térmica de la proteína STING (con y sin ligando unido) se midió utilizando la metodología descrita anteriormente (Seabrook & Newman, 2013), con muestras ensayadas por triplicado utilizando una microplaca de PCR de 96 pocillos (AB Gene, ABGAB-0600/W). En un volumen final de 20 ^ , se mezcló proteína 2 ^ en tampón HBS 1 x (HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM) con colorante naranja SYPr O (Sigma-Aldrich S5692, dilución de la mezcla de reacción final 1:1200) y un compuesto (concentración final de 100 ^ ) . Las placas selladas se colocaron en un termociclador Bio-Rad CFX96/C1000 y en modo de escaneo FRET (Aexcitación de 490 nm y lee a una Aemisión de 570 nm). Se registraron curvas de fusión de 20 °C a 100 °C en incrementos de 0,5 °C cada 30 segundos con una lectura en cada incremento. Los datos se analizaron usando el protocolo de "análisis Meltdown" descrito por Rosa (2015). La temperatura de fusión (Tm) obtenida para la proteína STING sola (DMSO 1 %[v/v]) se restó de la Tm obtenida para la proteína incubada con ligando para generar valores de ATm enumerados en la tabla siguiente. Se generaron datos de DSF para cada compuesto frente a 3 variantes diferentes de la proteína STING: STING (WT) de ser humano, STING (HAQ) de ser humano y STING (R232H) de ser humano.
Resonancia de plasmones superficiales (SPR)
Las interacciones de unión de ligandos con proteínas STING se cuantificaron mediante resonancia de plasmones superficiales (SPR) con una proteína STING mínimamente biotinilada inmovilizada en una superficie de chip de estreptavidina. De esta manera se obtuvieron superficies de proteínas STING muy activas que no se vieron comprometidas por el bajo pH requerido para un método de acoplamiento de aminas. Se realizó una biotinilación mínima de proteínas huSTING purificadas utilizando una metodología descrita previamente (Chhabra 2012). Brevemente, se mezclaron aproximadamente 20 nmoles de proteína STING recombinante en tampón TBS 1 x (Tris-HCl 25 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, DTT 5 mM) con Sulfo-NHS-LC-LC-Biotina EZ-Link™ (Thermofisher Scientific, n° cat. 21338) en una proporción molar de 1 a 0,6 y se incubó en hielo durante 2 horas. Para eliminar cualquier reactivo de biotina sin reaccionar, se pasó la mezcla de proteína/biotina a través de una columna Superdex 75 (10/300 GL) equilibrada con HEPES 10 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, DTT 5 mM, glicerol al 5 % [v/v]. Se recogió un pico de proteína que contenía proteína huSTING biotinilada y se almacenó en partes alícuotas a -80 °C.
La estreptavidina se inmovilizó simultáneamente en los cuatro canales de un chip sensor CM5 acoplado en un instrumento Biacore (ya sea Biacore S200 o Biacore T200, GE Healthcare) como se describió anteriormente (Zender 2013). La proteína STING mínimamente biotinilada se capturó sobre una superficie de chip recubierta con estreptavidina a 8 °C en tampón de unión SPR (HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, DMSO al 2 % [v/v]) mediante inyección gradual en un solo canal a una caudal constante de 2 pL/min hasta alcanzar el nivel de captura deseado, normalmente de 3000 a 7000 RU (1 RU = 1 pg/mm2).
Todos los experimentos de unión se realizaron a 8 °C en tampón de unión SPR. Para determinar la afinidad de unión, se analizó la interacción del compuesto con la proteína STING inmovilizada mediante experimentos de dosisrespuesta. Se diluyeron soluciones recientes de compuesto en DMSO 10 mM directamente en tampón de unión SPR normalmente hasta una concentración de 50 pM y luego se diluyeron adicionalmente 2 ó 3 veces con el objetivo de obtener un rango de series de concentración de 5 ó 7 puntos. Cada serie de concentraciones de ligando se inyectó a un caudal constante de 60 pL/min con un tiempo de asociación de 90 segundos y un tiempo de disociación de 180 segundos. Estos se modificaron para compuestos con tiempos de residencia más largos, de modo que las curvas pudieran alcanzar el estado estacionario o para que el compuesto se disociara por completo antes de la inyección posterior. Cuando fue apropiado, se ensayaron compuestos de unión más fuerte (aproximadamente kD < 1 pM) utilizando un formato cinético de ciclo único (Karlsson 2006), con tiempos de asociación y disociación prolongados (normalmente 450 s y 1800 s, respectivamente).
Se utilizó Scrubber 2 (www.biologic.com.au) para el procesamiento de datos, donde las señales se referenciaron frente la superficie en blanco (estreptavidina D-biotina) y se corrigieron adicionalmente para determinar el cambio en el índice de refracción de DMSO y luego se "referenciaron doblemente" usando una inyección del tampón como blanco (Papalia 2006). Las respuestas se ajustaron a un modelo de afinidad de estado estacionario 1:1 o a un modelo cinético 1:1 (que incluía un componente de transporte de materia), disponible en Scrubber.
Ensayos de líneas celulares reporteras THP-1
Se cultivaron células THP-1 STING Lucia ISG (InvivoGen #thpl-isg) en RPMI-1640 que contenía L-glutamina 2 mM, HEPES 25 mM, normocina 100 pg/mL (InvivoGen) y FBS al 10% inactivado por calor. Las células se sembraron a una densidad de 7 x 105 células/mL, se mantuvieron a 37 °C/CÜ<2>al 5%, y se hicieron pases cada 3-4 días. La presión de selección se mantuvo mediante la adición de 100 pg/mL de zeocina cada segundo pase.
Condiciones del ensayo: las células se cosecharon y se resuspendieron en una concentración de 5 x 105 células/mL en medio de crecimiento reciente. De esta preparación celular, se dispensaron 20 pL por pocillo en placas de cultivo celular de 384 pocillos (Greiner, n.° 781098X) y se incubaron a 37 °C/CÜ<2>al 5% durante 2 horas.
Se prepararon curvas de respuesta-concentración (comúnmente 11 dosis) mediante diluciones en serie de 2,5 veces a partir de una solución madre del compuesto 10 mM en DMSO. Las diluciones de compuestos se transfirieron a las placas de cultivo celular usando una herramienta de agujas (en inglés “pin tool”) (transferencia de 0,1 pL), se emparejaron pocillos de control para DMSO. Los pocillos de control positivo recibieron ML RR-S2 CDA (Med Chem Express HY12885B) en 5 pL de medio hasta una concentración final de 40 pM. Todos los demás pocillos recibieron 5 pL adicionales de medio solo para igualar el volumen. Las placas se incubaron durante 24 h a 37 °C/CO<2>al 5%.
Para la etapa de detección, se preparó QUANTI-Luc (InvivoGen n° rep-qlc1) según las instrucciones del fabricante y se agregaron 10 pL por pocillo a las placas de cultivo. Las placas se agitaron durante diez segundos en un agitador orbital y se dejaron en la oscuridad a temperatura ambiente durante dos minutos antes de leer la luminiscencia en un lector de placas Perkin Elmer Envision.
Análisis de datos: Los datos brutos de luminiscencia se normalizaron como % de actividad relativa a la señal de los pocillos de control positivo y los pocillos de control negativo que no fueron tratados con el compuesto. Para calcular el % de actividad normalizado a partir de señales sin procesar se utilizó la siguiente fórmula:
Actividad (%) = (muestra - negativo)/(positivo - negativo)
El EC<50>de las células THP-1 STING Lucia ISG proporciona una evaluación de la actividad en la isoforma de ser humano HAQ de STING. Para evaluar la actividad del compuesto contra la isoforma WT de STING de ser humano se realizó un método equivalente donde las células utilizadas fueron KI-hSTING-R232 THP-1 -DualTM (InvivoGen n° thpdr232).

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula I:
    en donde: Y es (CH<2>)n, donde n es de 2 a 4; W1 y W11 se seleccionan independientemente entre OH y ORP, donde RP es Me o Et; A1 es CRA o N; A2 es CRB o N; A3 es CRC o N; A4 es CRD o N; donde no más de dos de A1, A2, A3 y A4 pueden ser N; uno o dos de RA, RB, RC y RD, (si están presentes) se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF<3>, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH; el resto de RA, RB, RC y RD, (si están presentes) son H; A11 es CRAA o N; A12 es CRBB o N; A13 es CRCC o N; A14 es CRDD o N; donde no más de dos de A11, A12, A13 y A14 pueden ser N; uno o dos de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes) se seleccionan entre H, F, Cl, Br, Me, CF3, ciclopropilo, ciano, OMe, OEt, CH<2>OH, CH<2>OMe y OH; el resto de RAA, RBB, RCC y RDD, (si están presentes) son H; RC1, RC3 y RC4 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, OEt, ciano, CF<3>, CH<2>OH, CH<2>OM, alquenilo C<2-4>y heterociclilo C<5>; rc11 rc13 y rc14 se seleccionan independientemente de H, CI, F, Br, Me, OMe, OEt, ciano, CF<3>, CH<2>OH, CH<2>OMe, alquenilo C<2-4>y heterociclilo C<5>.
  2. 2. Un compuesto según la reivindicación 1, en donde A11 = A1, A12 = A2, A13 = A3, A14 = A4, RC11 = RC1, RC13 = RC3, RC14 = RC4, W11 = W1.
  3. 3. Un compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde A1 es CRA, A2 es CRB, A3 es CRC y A4 es CRD.
  4. 4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde A11 es CRAA, A12 es CRBB, A13 es CRCC y A14 es CRDD.
  5. 5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el compuesto se selecciona de las fórmulas INb, IIIc, IIId y IIIe:
  6. 6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde: RA (si está presente) se selecciona entre CI, Br y OMe; RB (si está presente) es H; RC (si está presente) es H; RD (si está presente) se selecciona entre H, F, Br, Me y OMe; y/o, en donde RAA (si está presente) se selecciona entre CI, Br y OMe; RBB (si está presente) es H; RCC (si está presente) es H; RDD (si está presente) se selecciona entre H, F, Br, Me y OMe.
  7. 7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde A1, A2, A3 y A4 se seleccionan de las combinaciones 1-10:
  8. 8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde A11, A12, A13 y A14 se seleccionan de las combinaciones 1 - 10:
  9. 9. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde RC11 = RC1, RC13 = RC3 y RC14 = RC4; preferiblemente en donde A1, A2, A3, A4, A11, A12, A13 y A14 se seleccionan de las combinaciones 1,4, 9 y 10:
  10. 10. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde RC1, RC3 y RC4 se seleccionan de las combinaciones 1 - 3:
    y/o en donde RC11, RC13 y RC14 se seleccionan de las combinaciones 1 - 3:
  11. 11. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde Y es (CH<2>)n, donde n es de 2 a 3, preferiblemente en donde n es 2.
  12. 12. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde W1 y W11 son OH.
  13. 13. Un compuesto como se definió en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para uso en un método de terapia.
  14. 14. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se definió en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  15. 15. Un compuesto como se definió en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una composición farmacéutica según la reivindicación 14, para uso en el tratamiento o prevención de enfermedades mejoradas mediante la modulación de STING.
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