ES2962679T3 - Forma cristalina del inhibidor de c-MET y su forma salina y método de preparación de las mismas - Google Patents

Forma cristalina del inhibidor de c-MET y su forma salina y método de preparación de las mismas Download PDF

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Abstract

Se divulgan una forma cristalina de un inhibidor de c-MET y una forma de sal del mismo y un método de preparación para el mismo. Están específicamente involucrados el compuesto mostrado en la fórmula (I), y una forma de sal y una forma cristalina del mismo, y también se incluye el uso de la forma cristalina y la forma de sal en la preparación de medicamentos para tratar cánceres. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Forma cristalina del inhibidor de c-MET y su forma salina y método de preparación de las mismas
La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente china CN201810387693.2 presentada el 26 de abril de 2018.
Campo técnico
La presente solicitud se refiere a una forma cristalina de un inhibidor de c-MET, una forma salina del mismo y un método de preparación de las mismas, y también se incluye en la presente solicitud el uso de la forma cristalina y la forma salina en la fabricación de un medicamento para tratar un tumor.
Antecedentes
El c-Met codificado por el protooncogén Met es un receptor de tirosina quinasa de alta afinidad que pertenece al subgrupo RON. Es el único receptor conocido del factor de dispersión o factor de crecimiento de hepatocitos (HGF). El HGF induce la fosforilación de c-Met uniéndose a su dominio extracelular y recluta una variedad de factores intersticiales como GAB1 (proteína de unión al receptor del factor de crecimiento-1) y GAB2 (proteína de unión al receptor del factor de crecimiento-2) en el dominio multifuncional C-terminal, atrayendo además moléculas como SHP2, PI3K para que se unan aquí, activando así las vías RAS/MAPK, PI3K/AKT, JAK/STAT etc., regulando así el crecimiento, la migración, la proliferación y la supervivencia de las células. La acción anormal de la vía c-Met conduciría a tumorigénesis y metástasis, y se ha encontrado una expresión anormalmente alta de c-Met en diversas neoplasias malignas humanas, como cáncer de vejiga, cáncer gástrico, cáncer de pulmón y cáncer de mama.
Además, c-Met también se asocia con la resistencia a múltiples inhibidores de quinasas en tumores. La interacción entre c-Met y diversos receptores de membrana (interferencias) constituye un sistema de red complejo. La interferencia entre c-Met y el receptor de adhesión CD44 amplifica la respuesta del péptido señal; la interferencia entre c-Met y el receptor de proteína cerebral activa el nivel de c-Met del ligando independiente HGF y luego aumenta el efecto de invasión; la interferencia entre c-Met y el receptor proapoptótico FAS acelera la apoptosis; la interferencia entre c-Met y varios receptores de tirosina quinasa como EGFR y VEGFR regula la activación entre sí, afectando así al proceso de angiogénesis. La interferencia entre c-Met y estos receptores de membrana promueve la tumorigénesis, la metástasis e induce resistencia a los fármacos.
Actualmente existen dos tipos de fármacos antitumorales dirigidos a la vía c-Met: uno es el anticuerpo monoclonal contra HGF o c-Met; el otro es un inhibidor de molécula pequeña contra c-Met. Los inhibidores de molécula pequeña que ya han entrado en investigación clínica o en investigación incluyen PF-2341066, EMD-1214063, XL-184 y ARQ-197,etc.Entre ellos, tepotinib tiene la mejor actividad antitumoral y tiene un fuerte efecto inhibidor sobre una variedad de células tumorales que sobreexpresan c-Met (actividad sobre la enzima c-MET CI<50>= 3,67 nM, en células MHCC97-H CI50 = 6,2 nM), y ha entrado en la fase II de investigación clínica. Sin embargo, aunque tepotinib tiene una alta selectividad, todavía tiene los inconvenientes de una baja estabilidad metabólica y una alta tasa de eliminaciónin vivo.Por lo tanto, se necesitan urgentemente inhibidores de c-Met metabólicamente estables para compensar la deficiencia. Los documentos WO2010/078897, WO2010/072296 yBioorg. Med. Chem. Lett.2015, 25 (7), 1597-1602 describen inhibidores de c-Met.
Contenido de la presente invención
La presente divulgación proporciona una forma cristalina A de un compuesto representado por la fórmula (I), en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la misma comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,54°±0,2°, 13,70°±0,2°, 17,84 ±0,2°, 21,24°±0,2° y 26,62±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,54°±0,2°, 13,70°±0,2°, 15,14±0,2°, 17,84±0,2°, 18,40°±0,2°, 21,24°±0,2°, 24,06°±0,2°, 26,62±0,2° y 27,44±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,538°, 9,021 °, 11,300°, 13,699°, 15,141°, 16,640°, 17,840°, 18,399°, 19,039°, 19,620°, 20,441°, 21,241°, 22,598°, 24,060°, 24,962°, 25,660°, 26,621°, 27,440°, 28,258°, 29,159°, 31,081°, 32,465°, 34,780°, 35,400°, 36,920° y 38,760°.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1: Datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I)
En algunas realizaciones de la presente divulgación, la forma cristalina A también se puede caracterizar por un patrón de DSC (calorimetría diferencial de barrido, por sus iniciales en inglés) que tiene una temperatura inicial de 171,90°C y una temperatura de pico de 173,09°C.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina A tiene un pico endotérmico a 171,90°C±3°C.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina A muestra una pérdida de peso de 0,1870% que se produce a 223,23°C±3°C, y una pérdida de peso de 10,22% que se produce a 305,06°C±3°C.
La presente divulgación también proporciona una forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II), en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la misma comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,34°±0,2°, 12,99°±0,2°, 15,35°±0,2° y 25,50°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina B comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,34°±0,2°, 6,50°±0,2°, 8,65°±0,2°, 10,82°±0,2°, 12,99°±0,2°, 15,35°±0,2°, 17,96°±0,2° y 25,50°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina B comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,335°, 6,502°, 8,645°, 10,816°, 12,986°, 15,349°, 15,782°, 16,109°, 17,955°, 18,447°, 19,057°, 19,534°, 19,816°, 20,531°, 21,16°, 22,265°, 22,752°, 23,907°, 24,407°, 25,499°, 26,248°, 26,886°, 27,725°, 28,004°, 28,653°, 29,127°, 29,779°, 30,432°, 31,064°, 33,734° y 37,02°. En algunas realizaciones de la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina B se muestran en la Tabla 2.
Tabla 2: Datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II)
En algunas realizaciones de la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina B tiene picos endotérmicos a 43,98°C±3°C y 219,64°C±3°C.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina B muestra una pérdida de peso de 0,5270% que se produce a 73,64°C±3°C, y una pérdida de peso de 1,542% que se produce a 230,90°C±3°C.
La presente divulgación también proporciona una forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III), en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la misma comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 6,94°±0,2°, 19,08°±0,2°, 21,05°±0,2° y 24,73°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina C comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 6,94°±0,2°, 9,94°±0,2°, 17,29°±0,2°, 18,04°±0,2°, 19,08°±0,2°, 21,05°±0,2°, 24,12°±0,2° y 24,73°±0,2°.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina C comprende picos de difracción característicos en los siguientes ángulos 20: 6,94°, 9,94°, 13,36°, 15,271°, 16,83°, 17,286°, 18,038, 18,767°, 19,082°, 20,605°, 21,054°, 21,884°, 22,615°, 23,228°, 24,118°, 24,728°, 25,182°, 25,813°, 28,182°, 30,757°, 31,498°, 33,318°, 33,77° y 34,595 °.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, los datos analíticos del patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina C se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3: Datos analíticos del patrón de XRPD de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III)
En algunas realizaciones de la presente divulgación, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina C tiene un pico endotérmico a 198,16°C±3°C.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina C muestra una pérdida de peso de 0,4541% que se produce a 204,73°C±3°C.
La presente divulgación también proporciona las formas cristalinas de la invención para su uso en el tratamiento del cáncer.
Efecto técnico
El procedimiento de preparación de las formas salinas y cristalinas del compuesto representado por la fórmula (I) de la presente divulgación es sencillo y las formas cristalinas son relativamente estables cuando se someten a alta temperatura y alta humedad, y es conveniente para producir preparaciones.
Definiciones y explicaciones
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos y frases utilizados en este documento tienen los siguientes significados. Un término o frase específica no debe considerarse indefinida o poco clara en ausencia de una definición particular, sino que debe entenderse en el sentido ordinario. Cuando un nombre comercial aparece en el presente documento, se pretende hacer referencia a su correspondiente producto o ingrediente activo del mismo.
Los compuestos intermedios de la presente divulgación se pueden preparar mediante diversos métodos sintéticos conocidos por los expertos en la técnica, incluidas las realizaciones que se describen a continuación, las realizaciones formadas combinando las realizaciones que se describen a continuación con otros métodos de síntesis química y alternativas equivalentes bien conocidas por los expertos en la materia. Las realizaciones preferidas incluyen, entre otras, las realizaciones de la presente divulgación.
Las reacciones químicas en las realizaciones de la presente divulgación se llevan a cabo en un disolvente adecuado, y el disolvente debe ser adecuado para el cambio químico y los reactivos y materiales requeridos de la presente divulgación. Para obtener los compuestos de la presente divulgación, a veces es necesario que los expertos en la técnica modifiquen o seleccionen las etapas sintéticas o esquemas de reacción basados en las realizaciones existentes.
La presente divulgación se describirá específicamente a continuación por medio de realizaciones, pero el alcance de la presente divulgación no se limita a las mismas.
Todos los disolventes utilizados en la presente divulgación están disponibles comercialmente y pueden usarse directamente sin purificación adicional.
La presente divulgación emplea las siguientes abreviaturas:
(R)-CBS: (3aR)-1 -metil-3,3-difenil-3a,4,5,6-tetrahidropirrolo[1,2-c][1,3,2]oxazaborol;
DIEA: W,W-d¡¡sopropilet¡lamma;
DMF: W,W-dimetilformam¡da;
THF: tetrahidrofurano;
Pd(dppf)Cl<2>: dicloruro de [1,1'-b¡s(d¡fen¡lfosf¡no)ferroceno]palad¡o;
Pd(PPh<3>)<2>Cl<2>: dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio.
Los compuestos se nombran manualmente o mediante el software ChemDraw® y los compuestos disponibles comercialmente utilizan los nombres del directorio de sus proveedores.
Método de análisis por difractómetro de rayos X en polvo (XRPD) en la presente divulgación:
Modelo de instrumento: Difractómetro de rayos X Bruker D8 Advance
Método de detección: se utilizaron aproximadamente 10-20 mg de la muestra para la detección por XRPD.
Los parámetros detallados de la XRPD fueron los siguientes:
Tubo de rayos X: Cu, ka, (A = 1,54056Á).
Voltaje del tubo de rayos X: 40 kV, corriente del tubo de rayos X: 40 mA
Rendija de divergencia: 0,60 mm
Rendija del detector: 10,50 mm
Rendija antidispersión: 7,10 mm
Rango de escaneo: 3 o 4-40 grados
Tamaño del paso: 0,02 grados
Tiempo de paso: 0,12 segundos
Velocidad de rotación de la bandeja de muestras: 15 rpm
Método para el calorímetro diferencial de barrido (DSC) en la presente divulgación.
Modelo de instrumento: Calorímetro de barrido diferencial TADSCQ2000
Método de detección: se colocaron 0,5-1 mg de la muestra en un crisol de aluminio para DSC para su análisis en condiciones de 50 mL/min de N<2>con una velocidad de calentamiento de 10°C/min, la muestra se calentó desde temperatura ambiente (25°C) hasta 300°C, o 350°C.
Método para el analizador termogravimétrico (TGA) en la presente divulgación.
Modelo de instrumento: analizador termogravimétrico TAQ5000
Método de detección: se colocaron 2-5 mg de la muestra en un crisol de platino para TGA para su análisis, en condiciones de 25 mL/min de N<2>con una velocidad de calentamiento de 10°C/min, la muestra se calentó desde temperatura ambiente (25°C) hasta 300°C, 350°C o hasta una pérdida de peso de 20%.
Analizador dinámico de absorción de vapor (DVS)
Modelo de instrumento: DVSAdvantage-1 (SMS)
Condición de detección: se utilizaron entre 10 y 15 mg de la muestra para la detección por DVS.
Equilibrio: dm/dt=0,01%/min: (tiempo: 10 min, más largo: 180 min)
Secado: 0% de HR, 120 min
Gradiente de HR (%) para pruebas: 10%
Rango de gradiente de HR(%) para el análisis: 0%-90%-0%
La higroscopicidad se evaluó utilizando las escalas de la siguiente Tabla 4:
Tabla 4: Escalas de higroscopicidad
Método de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) de la presente divulgación
Modelo de instrumento: cromatógrafo de líquidos de alto rendimiento Agilent 1200
El método de análisis es el siguiente:
Tabla 5: Método de análisis de HPLC para el análisis de contenido de sustancia relacionada
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 es el espectro de XRPD de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I). La figura 2 es el espectro de DSC de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I). La figura 3 es el espectro de TGA de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I). La figura 4 es el espectro de XRPD de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II). La figura 5 es el espectro de DSC de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II). La figura 6 es el espectro de TGA de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II). La figura 7 es el espectro de XRPD de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III). La figura 8 es el espectro de DSC de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III).
La figura 9 es el espectro de TGA de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III).
Descripción detallada de la realización.
Para comprender mejor el contenido de la presente divulgación, las siguientes realizaciones ilustran adicionalmente la presente divulgación, pero la presente divulgación no se limita a las mismas.
Realización 1: Preparación de la forma cristalina A del compuesto representado por la Fórmula (I)
Preparación de 1-B:
En atmósfera de nitrógeno a -30°C, se añadieron gota a gota diisopropiletilamina (2,9 kg, 22,67 mol) y cloruro de metanosulfonilo (2,2 kg, 19,51 mol) a una solución del compuesto 1-A (4 kg, 25,19 mol) en diclorometano (20 L) con agitación. Una vez completada la adición, la mezcla se agitó a -10°C durante 1 hora. La finalización de la reacción se detectó por CLEM. La solución de reacción se lavó con una solución saturada de cloruro de amonio (12 L*2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para dar el intermedio 1-B, que se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. CLEM (ESI) m/z: 316,0 [M+Na]+
Preparación de 1-C:
En atmósfera de nitrógeno, se añadió carbonato de potasio (1,54 kg, 11,15 mol) a una solución del intermedio 1-B (5,45 kg, 18,58 mol) y 2-cloropirimidin-5-ol (2,42 kg, 18,56 mol) en DMF (25 L). La reacción se llevó a cabo a 90°C durante 16 horas, la finalización de la reacción se detectó por CLEM. La mezcla de reacción se vertió en agua (75 L) y se agitó durante 16 horas y luego se filtró. La torta de filtración se añadió a agua (20 L) y se agitó durante 16 horas, se filtró y luego la torta de filtración se secó para dar el intermedio 1-C. CLEM (ESI) m/z: 328,1 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 5 ppm 1,21 -1,36 (m, 2H) 1,44-1,49 (m, 9H) 1,81 (br d,J= 12,10 Hz, 2H) 1,91 -2,08 (m, 1H) 2,75 (br t,J= 11,98 Hz, 2H) 3,90 (d,J= 6,24 Hz, 2H) 4,01 -4,37 (m, 2H) 8,28 (s, 2H).
Preparación de 1-E:
En atmósfera de nitrógeno a -30°C, se añadió una solución del compuesto 1-D (5 kg, 25,19 mol) en tetrahidrofurano (5 L) a una solución mixta de (R)-CBS (12,5 L, 1 mol/L). y sulfuro de dimetilborano (5 L, 10 mol/L). La reacción se llevó a cabo a -30°C durante 1 hora y la finalización de la reacción detectó por CLEM. Se añadió gota a gota metanol (10 L) a la solución de reacción para apagar la reacción y luego se concentró a presión reducida.Seañadieron acetato de etilo (2 L) y n-hexano (20) al residuo. Después de la disolución del residuo, se añadió ácido clorhídrico (10 L, 2 mol/L) y se agitó durante 1 hora, se filtró y el filtrado se lavó con ácido clorhídrico (12 L x 3, 2 mol/L) y salmuera saturada (15 L). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para dar el intermedio 1 -E. RMN de<1>H (400MHz, DMSO-afe) 5 ppm 1,31 (d,J= 6,53 Hz, 3H), 4,61-4,84 (m, 1H), 5,30 (d,J= 4,39 Hz, 1H), 7,25-7,31 (m, 1H), 7,31 -7,37 (m, 1H), 7,41 (brd,J= 7,65 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H).
Preparación de 1-F:
En atmósfera de nitrógeno, se añadieron secuencialmente 3-fluoro-1H-piridin-2-ona (723,39 g, 6,4 mol), tri-nbutilfosfina (1,39 kg, 6,88 mol) y 1,1'-(azodicarbonil)-dipiperidina (1,74 kg, 6,89 mol) a una solución del intermedio 1-E (1,2 kg, 5,97 mol) en tolueno (30 L). La solución de reacción se calentó a 90°C y la reacción se llevó a cabo durante 2 horas, después de lo cual se detectó por CLEM la finalización de la reacción. La solución de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se centrifugó, el filtrado se lavó con ácido clorhídrico (9 L x 2, 4 mol/L) y se concentró a presión reducida. El residuo se añadió a metil íe r-butil éter (12 L). Después de la disolución del residuo, la mezcla se lavó con ácido clorhídrico (9 L x 3, 4 mol/L) y salmuera saturada (9 L x 2) por separado. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió n-hexano (10 L) y la mezcla se agitó durante 16 horas y se filtró. La torta de filtración se secó para dar el intermedio 1-F. CLEM (ESI) m/z: 297,9 [M+H]+; RMNN de<1>H (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 1,74 (d,J= 7,09 Hz, 3H), 6,10 (td,J= 7,24, 4,58 Hz, 1H), 6,46 (q,J= 7,01 Hz, 1H), 6,95 (dt,J= 7,09, 1,53 Hz, 1H), 7,08 (ddd,J= 9,20, 7,43, 1,71 Hz, 1H), 7,22-7,32 (m, 2H), 7,43-7,53 (m, 2H).
Preparación de 1-G:
En atmósfera de nitrógeno, se calentó a 90°C una solución del intermedio 1-F (2 kg, 6,75 mol), bis(pinacolato)diboro (1,89 kg, 7,43 mol), dicloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (48,51 g, 67,54 mmol) y acetato de potasio (1,34 kg, 13,51 moles) en 1,4-dioxano (20 L) y la reacción se llevó a cabo durante 2 horas, después de lo cual se detectó la finalización de la reacción por CLEM. La solución de reacción del compuesto 1 -G se usó directamente en la siguiente reacción sin tratamiento adicional.
Preparación de 1-H:
En atmósfera de nitrógeno, se añadieron secuencialmente el intermedio 1-C (2,44 kg, 7,43 mol), carbonato de sodio (1,43 kg, 13,51 mol), Pd(dppf)Cl2 (299.60 g, 405,22 mmol) y agua (4 L) a la solución de reacción del compuesto 1-G. La solución de reacción se calentó a 100°C y la reacción se llevó a cabo durante 16 horas. La finalización de la reacción se detectó por CLEM. La solución de reacción se enfrió a 80°C y luego se filtró. Se añadió gota a gota agua (12 L) al filtrado y se agitó durante 16 horas y después se filtró. La torta de filtración se lavó con agua, se secó y se le añadieron metil íer-butil éter (35 L) y acetona (1 L) y se agitó durante 16 horas. La mezcla se filtró y la torta de filtración se recogió y se secó para dar el intermedio 1-H. CLEM (ESI) m/z: 531,1 [M+Na]+; RMN de<1>H (400MHz, DMSO-afe) 5 ppm 1,10 1,26 (m, 2H) 1,40 (s, 9H) 1,77 (brd,J= 7,15Hz, 5H) 1,97 (brd,J= 3,64Hz, 1H) 2,63-2,90 (m,2H) 3,88-4,03 (m, 2H) 4,06 (d,J= 6,40 Hz, 2H), 6,17-6,36 (m, 2H), 7,31-7,63 (m, 4H), 8,17-8,30 (m, 2H), 8,64 (s,2H).
Preparación de 1-I:
En atmósfera de nitrógeno a 30°C, se añadió 1,3-dibromo-5,5-dimetilimidazolin-2,4-diona (1 kg, 3,5 mol) a una solución del intermedio 1-H (2,63 kg, 5,17 mol) en DMF (27 L), la reacción se llevó a cabo a 30°C durante 1 hora, después de lo cual se detectó la finalización de la reacción por CLEM. Se añadió gota a gota agua (16,2 L) a la solución de reacción y se agitó durante 16 horas, después se filtró. La torta de filtración se lavó con agua y se secó, y después se añadió a acetona (17,6 L). La mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 1 hora, después se añadió gota a gota agua (12 L) y se agitó durante 16 horas. La mezcla se filtró y la torta de filtración se secó para dar el intermedio 1-I. CLEM (ESI) m/z: 611,1 [M+Na]+; RMN de<1>H (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 1,10-1,27 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,71-1,87 (m, 5H), 1,93 2,06 (m, 1H), 2,67-2,85 (m, 2H), 3,99 (brd,J= 11,67 Hz, 2H), 4,07 (brd,J= 6,27 Hz, 2H), 6,23 (q,J= 6,86 Hz, 1H), 7,42-7,57 (m, 2H), 7,71 (dd,J= 9,29, 1,76 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 8,18-8,30 (m, 2H), 8,65 (s, 2H).
Preparación de 1-J:
En atmósfera de nitrógeno, se calentó a 85°C una solución del intermedio 1-I (2,1 kg, 3,58 mol), bis(pinacolato)diboro (1,82 kg, 7,17 mol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio (127,09 g, 110 mmol) y acetato de potasio (719,68 g, 7,16 moles) en 1,2-dimetoxietano (21 L) y la reacción se llevó a cabo durante 2 horas, después de lo cual se detectó la finalización de la reacción por CLEM. La solución de reacción del compuesto 1-K se usó directamente en la siguiente reacción sin tratamiento adicional.
Preparación de 1-K:
En atmósfera de nitrógeno, se añadieron 2-bromopiridin-4-carbonitrilo (707 g, 3,86 mol), carbonato de sodio (741 g, 6,99 mol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio (163 g, 141 mmol) y agua (4,2 L) a la solución de reacción del compuesto 1-I, La solución de reacción se calentó a 85°C y la reacción se llevó a cabo durante 16 horas. Se detectó la finalización de la reacción por CLEM. Después de que la solución de reacción se enfriara a 50°C, se añadió gota a gota agua (12,6 L) a la solución de reacción y se agitó durante 16 horas y luego se filtró. La torta de filtración se secó y luego se puso en suspensión mediante la adición de un disolvente mixto de isopropanol:agua = 30:1 3 veces. El sólido se recogió y se secó para dar el intermedio 1-K. CLEM (ESI) m/z: 633,2 [M+Na]+; RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ofe) ó ppm 1,09 1,26 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,76 (brd,J= 11,17Hz, 2H), 1,91 (d,J= 7,15 Hz, 3H), 1,93-2,05 (m, 1H), 2,57-2,92 (m, 2H) 3,98 (brd,J= 10,92 Hz, 2H), 4,05 (d,J= 6,40 Hz, 2H), 6,35 (q,J= 7,03 Hz, 1 H), 7,47-7,56 (m, 2H), 7,73 (dd,J= 5,02, 1,00 Hz, 1 H), 8,19 (dd,J= 11,29, 2,13 Hz, 1H), 8,22-8,27 (m, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,64 (s, 2H), 8,79 (d,J= 5,02 Hz, 1H).
Preparación del compuesto representado por la fórmula (I):
En una atmósfera de nitrógeno, se añadió el intermedio 1 -K (2,4 kg, 3,93 mol) a una solución de ácido metanosulfónico (758,66 g, 7,89 mol) en metanol (7,2 L) en lotes, y la solución de reacción se calentó a 50°C y se agitó durante 2 horas. Se detectó que el intermedio 1-K se había consumido por completo por CLEM y luego se añadieron secuencialmente metanol (16,8 L), acetato de sodio (645,54 g, 7,87 mol), formaldehído (639,63 g, 7,88 mol, solución acuosa al 37%) y triacetoxiborohidruro de sodio (1,25 kg, 5,91 mol) a la solución de reacción. La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas y se detectó la finalización de la reacción por CLEM. La mezcla de reacción se filtró, se añadieron gota a gota al filtrado hidróxido de amonio (3 L) y agua (4,5 L), se agitó durante 6 horas y después se filtró. La torta de filtración se lavó con agua y se secó. El sólido se añadió a tetrahidrofurano (13 L) y se calentó a 50°C. Después de la disolución del sólido, se añadió resina de tiourea (650 g), se agitó a 50°C durante 2 horas y se filtró. Se añadió resina de tiourea (650 g) al filtrado y se agitó a 50°C durante 2 horas y luego se filtró. Se añadió resina de tiourea (650 g) al filtrado y se agitó a 50°C durante 16 horas y después se filtró. Al filtrado se le añadió polvo de carbón activado (150 g), después se calentó a 66°C y se agitó durante 2 horas, se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. Al residuo se le añadió acetato de etilo (16,8 L) y la mezcla se agitó a reflujo hasta que se disolvió el sólido. La mezcla se filtró mientras estaba caliente y el filtrado se dejó enfriar lentamente hasta 20°C y luego se filtró. La torta de filtración se recogió y se secó para dar el compuesto representado por la fórmula (I). CLEM (ESI) m/z: 525,2 [M+H]+; RMN de 1H (400 MHz, CD3DO) 5 ppm 8,72 (d,J= 5,01 Hz, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,38 (s, 1H), 8,24-8,3 3 (m, 2H), 8,06-8,15 (m, 2H), 7,46-7,57 (m, 3H), 6,49 (q,J= 7,17 Hz, 1H), 4,03 (d,J= 5,75 Hz, 2H), 2,95 (brd,J= 11,74 Hz, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,04-2,14 (m, 2H), 1,96 (d,J= 7,09 Hz, 3H), 1,80-1,92 (m, 3H), 1,40-1,58 (m, 2H).
Preparación de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I):
El compuesto representado por la fórmula (I) (850 g) se añadió a acetato de etilo (6,8 L), se calentó a temperatura de reflujo y se agitó durante 2 horas. La solución de reacción se enfrió lentamente a 35°C y se agitó durante 16 horas, se filtró y la torta de filtración se recogió y se secó para dar la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ofe) 5 ppm 1,23-1,40 (m, 2H), 1,65-1,78 (m, 3H), 1,79-1,89 (m, 2H), 1,91 (d,J= 7,21 Hz, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,78 (br d,J= 11,25 Hz, 2H), 4,03 (d,J= 5,99 Hz, 2H), 6,35 (d,J= 7,09 Hz, 1H), 7,46-7,58 (m, 2H), 7,73 (dd,J= 5,01, 1,22 Hz, 1 H), 8,18 (dd,J= 11,31,2,14 Hz, 1H), 8,21 -8,27 (m, 1H), 8,30 (s, 1 H), 8,40 (d,J= 1,34 Hz, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,63 (s, 2H), 8,79 (d,J= 5,01 Hz, 1 H).
Realización 2: Preparación de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II)
Se pesaron 400 mg del compuesto representado por la fórmula (I) y se añadió a un vial de 40 mL, se agregaron 6 mL de THF, la muestra obtenida se colocó en un agitador magnético (40°C) y se agitó durante 5 min para su disolución, y luego se añadió lentamente una cantidad apropiada de ácido clorhídrico (la relación molar entre el compuesto representado por la fórmula (I) y el ácido clorhídrico fue 1:1,05, el ácido clorhídrico se añadió después de diluir con THF) y se observó el fenómeno. La muestra se colocó en un agitador magnético (40°C) y se agitó durante la noche. Un sólido blanco precipitó de la mezcla de reacción. La solución de muestra se centrifugó rápidamente y se descartó el sobrenadante. El sólido obtenido se secó en una estufa de secado a vacío a 30°C durante la noche para dar la forma cristalina B del compuesto de fórmula (II).
Realización 3: Preparación de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III)
Se pesaron 400 mg del compuesto representado por la fórmula (I) y se añadieron a un vial de 40 mL, al mismo se le añadieron 6 mL de THF, la muestra se colocó en un agitador magnético (40°C) y se agitó durante 5 minutos para su disolución, y luego se añadió lentamente una cantidad apropiada de ácido fosfórico (la relación molar entre el compuesto representado por la fórmula (I) y el ácido fosfórico fue 1:1,05, el ácido fosfórico se añadió después de diluir con THF) y se observó el fenómeno. La muestra se colocó en un agitador magnético (40°C) y se agitó durante la noche. Un sólido blanco precipitó de la mezcla de reacción. La solución de muestra se centrifugó rápidamente y se descartó el sobrenadante. El sólido obtenido se secó en una estufa de secado a vacío a 30°C durante la noche para dar la forma cristalina C del compuesto de fórmula (III). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 1,49 (q,J= 10,88 Hz, 2H), 1,71-2,05 (m, 6H), 2,28-2,49 (m, 6H), 3,07 (brd,J= 10,79 Hz, 2H), 4,06 (brd,J= 6,27 Hz, 2H), 6,34 (q,J= 6,94 Hz, 1H), 7,44-7,62 (m, 2H), 7,73 (dd,J= 4,89, 1,13 Hz, 1H), 8,18 (dd,J =11,29, 2,26 Hz, 1H), 8,21-8,27 (m, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,64 (s, 2H), 8,78 (d,J= 5,02 Hz, 1H).
Realización 4: Ensayo de estabilidad de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I)
Se pesaron aproximadamente 10 mg de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) y se colocaron en condiciones del ensayo de estabilidad, las muestras se recogieron y se analizaron después de 10 días, 1 mes y 2 meses. Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 6.
Tabla 6: Resultados del ensayo de estabilidad de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I)
Puede verse a partir de los resultados experimentales que la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) no presenta cambios significativos en el contenido de impurezas en condiciones de alta temperatura y alta humedad, y tiene buena estabilidad.
Realización 5: Ensayo de estabilidad de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II)
Se pesaron aproximadamente 10 mg de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II) y se colocaron en condiciones del ensayo de estabilidad, y las muestras se recogieron y se analizaron después de 5 días, 10 días y 1 mes. Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 7.
Tabla 7: Resultados del ensayo de estabilidad de la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II)
Puede verse a partir de los resultados experimentales que la forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II) es estable en condiciones de alta temperatura y luz.
Realización 6: Ensayo de estabilidad de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III)
Se pesaron aproximadamente 10 mg de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III) y se colocaron en condiciones del ensayo de estabilidad, y las muestras se recogieron y se analizaron después de 5 días, 10 días y 1 mes respectivamente. Los resultados experimentales se muestran en la Tabla 8
Tabla 8: Resultados del ensayo de estabilidad de la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III)
60°C 10 días 4,04 0,57 0,09 1,28 0,07 6,04 Humedad relativa 75%
1 mes 10,4 1,36 0,08 0,61 0,06 1,23 12,75
Puede verse a partir de los resultados experimentales que la forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III) es relativamente estable en condiciones de alta temperatura y alta humedad, respectivamente.
Realización 7: Estudio sobre la higroscopicidad de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) Se colocaron en un desecador 3 frascos de pesada de vidrio secos con tapón (diámetro exterior de 50 mm, altura de 30 mm) con una solución saturada de cloruro de amonio colocada en el fondo, los frascos de pesada se dejaron abiertos y el desecador se cubrió con una tapa y se colocó en un termostato ajustado a 25°C durante la noche. Se sacaron los frascos de pesada y se pesaron con precisión, los datos de peso se anotaron como mn1, nn2 y mn3 respectivamente.
Se esparció una cantidad apropiada de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) en los frascos de pesada pesados (el espesor de la muestra fue de aproximadamente 1 mm) y luego se pesaron con precisión, los datos de peso se anotaron como m<21>, m<22>y m23, respectivamente.
Los frascos de pesada abiertos y los tapones de las botellas se colocaron en un desecador que tenía una solución saturada de cloruro de amonio colocada en el fondo, y el desecador se cubrió con una tapa y se colocó en un termostato ajustado a 25°C durante 24 horas.
Después de reposar durante 24 horas, los frascos de pesada se cerraron con los tapones, luego se pesaron con precisión y los datos de peso se anotaron como m31, m32 y m33.
Se calculó el aumento de peso por higroscopicidad, la fórmula de cálculo fue la siguiente:
Aumento de peso = 100% x (m3-m2)/(m2-m1)
Tabla 9: Higroscopicidad de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I)
Según los resultados del ensayo de higroscopicidad, la higroscopicidad promedio de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) es 0,060% (<0,2%), por lo que la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) tiene ninguna o casi ninguna higroscopicidad.
Realización 8: Ensayo de solubilidad de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) Se colocaron 10 mg de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) en un frasco de vidrio, se le añadió 1 mL de disolvente y el frasco se agitó vigorosamente durante 30 segundos cada 5 minutos a 25°C±2°C, la disolución se observó durante 30 minutos. Los datos correspondientes se registraron en la tabla.
Para muestras insolubles, se colocó otro 1 mg de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) en un frasco de vidrio, se le añadió un disolvente apropiado y el frasco se agitó vigorosamente durante 30 segundos cada 5 minutos a 25°C±2°C, la disolución se observó durante 30 minutos. Los datos correspondientes se registraron en la Tabla 10.
Tabla 10: Solubilidad de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) en diferentes disolventes
Puede verse a partir de los resultados experimentales que la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) es muy soluble en agua o W-metilpirrolidona, soluble en HCl 0,1N, moderadamente soluble en tetrahidrofurano o ácido trifluoroacético y muy ligeramente soluble en acetato de etilo, acetonitrilo o etanol; prácticamente insoluble o insoluble en n-hexano, dietilamina o solución 0,1N de hidróxido de sodio.
Realización 9: Prueba de actividad enzimática de la forma cristalina A del compuesto representado por la fórmula (I) Reactivos y consumibles:
cMET (invitrogen PV3143)
Trazador 236 (Número de lote: 10815978)
Eu-Anti-His AB (MAb Anti 6HIS-K)
Envison de PerkinElmer Corporation, detección a 665 nm y 615 nm
Placa de 384 pocillos para ensayo de tablero de ajedrez (PerkinElmer #6007299) Principio experimental:
El presente experimento utilizó el ensayo de unión de quinasa Eu LanthaScreenTM, como se muestra en la Figura 1, la detección de conjugados de Alexa Fluor o agente trazador combinado de quinasa se realizó agregando anticuerpo marcado con Eu. La unión del agente trazador, el anticuerpo y la quinasa condujo a un estándar FRET alto, mientras que el uso de un inhibidor de quinasa en lugar de un agente trazador conduciría a la pérdida de FRET.
Método experimental:
1) Se diluyeron el anticuerpo Eu-Anti-His AB, la enzima cMET y el agente trazador T racer236.
2) Preparación del compuesto: el compuesto de ensayo 10 mM y el compuesto de referencia se diluyeron con DMSO al 100% hasta 0,667mM, luego se usó el sistema de pretratamiento de microplacas ECHO totalmente automatizado para una dilución triple con 8 gradientes de concentración. Se ajustaron pocillos duplicados dobles y cada uno de ellos de 75 nL.
3) La mezcla de 7,5 pL de anticuerpo (1/375 nM) y quinasa (10nM) se añadió a la placa de compuesto, seguido de la adición de 7,5 pL de trazador (60nM). Concentración final: cMET: 5nM, Tracer 236: 30nM, Eu-Anti-His AB (MAb Anti 6HIS-K): 1/750nM.
4) Después de 60 minutos de incubación a 4°C, las placas se leyeron con un lector de microplacas multietiquetado Envision (análisis de datos de valores de señal de 665 nm/615 mm con Prism 5; luz de excitación Ex: espejo láser 446, luz de excitación Em; 615 y 665 nM.
Resultado experimental: Véase la Tabla 11.
Tabla 11: Valor de CI50 del compuesto representado por la fórmula (I) sobre la inhibición de la actividad quinasa.
El resultado experimental muestra que el compuesto representado por la fórmula (I) tiene una fuerte actividad inhibidora sobre la enzima c-MET.
Realización 10: Experimento de inhibición de la proliferación celular del compuesto representado por la fórmula (I) El presente experimento pretende estudiar el efecto inhibidor del compuesto representado por la fórmula (I) sobre la célula de cáncer de próstata LNCaP que sobreexpresa AKT.
Reactivos y consumibles:
1) Cultivo celular: medio celular DMEM, suero bovino fetal, DPBS
2) Línea celular: MHCC97-H
3) Reactivo de detección: kit de detección de células vivas CellTiter-Glo
4) Otros consumibles y reactivos principales: placa de dilución compuesta, placa intermedia, placa de prueba, DMSO
Método experimental:
1. Preparación de las placas celulares.
Se sembraron células MHCC97-H por separado en placas de 384 pocillos conteniendo cada uno de los pocillos 500 células. Las placas celulares se colocaron y se incubaron en una incubadora de dióxido de carbono durante la noche.
2. Preparación del compuesto.
Se utilizó Echo para una dilución de 4 veces y se prepararon 9 concentraciones, listas para el ensayo de pocillos duplicados dobles.
3. Tratamiento de células con el compuesto.
El compuesto se transfirió a las placas celulares a una concentración inicial de 10 pM. Las placas celulares se incubaron en una incubadora de dióxido de carbono durante 3 días.
4. Detección
Se añadió el reactivo Promegaer Cell Titer-Glo a las placas celulares y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 10 minutos hasta que la señal de luminiscencia fue estable. Las placas se leyeron con un analizador de etiquetas múltiples PerkinElmer Envision.
Resultados experimentales: Véase la Tabla 12:
Tabla 12: Valor de CI<50>del compuesto representado por la fórmula (I) sobre la inhibición de la proliferación celular.
El resultado del experimento muestra que el compuesto representado por la fórmula (I) tiene buena actividad inhibidora en la célula MHCC97H.
Realización 11: Estudioin vivode la eficacia del compuesto representado por la fórmula (I)
Cultivo celular:
Las células MHCC97H se cultivaron en una sola capain vitro.Las condiciones de cultivo fueron: medio RPMI1640 suplementado con 10% de suero fetal bovino inactivado por calor, 1% de anticuerpo doble penicilina-estreptomicina a menos de 37°C y 5% de dióxido de carbono. El tratamiento de digestión y pasaje con tripsina-EDTA se realizó dos veces por semana. Cuando las células estaban en la fase de crecimiento exponencial, se recogieron, se contaron y se inocularon.
Animal:
Ratones desnudos BALB/c, machos, 6-8 semanas de edad, peso 18-22 g.
Inoculación de tumores:
Se inocularon por vía subcutánea 0,2 mL de una suspensión celular que contenía 5x10A6 MHCC97H en la parte posterior derecha de cada ratón. Los medicamentos se administraron por grupo después de que el volumen promedio del tumor alcanzara aproximadamente 172 mm3. La agrupación experimental y el régimen de dosificación se muestran en la siguiente tabla.
Objetivo del ensayo
Investigación sobre si el crecimiento del tumor se inhibió, retrasó o curó. Los diámetros del tumor se midieron dos veces por semana utilizando un calibre a vernier. La fórmula para calcular el volumen del tumor es V=0,5axb2, y a y b representan los diámetros largo y corto del tumor respectivamente. El efecto antitumoral (TGI) del compuesto se evaluó mediante T-C (días) y T/C (%).
Resultado experimental: véase la Tabla 13.
Tabla 13: Evaluación de la eficacia antitumoral del fármaco de ensayo en el modelo de tumor de xenoinjerto de células MHCC97H de cáncer de hígado humano
Observación: a. valor medio±SEM; b. El valor de p se calculó en función del volumen del tumor.
Conclusión: El compuesto representado por la fórmula (I) muestra un mejor efecto inhibidor del tumor que el tepotinib en el experimento farmacodinámico en el modelo de tumor de xenoinjerto subcutáneo de células de cáncer de hígado MHCC97H.
El compuesto representado por la fórmula (I) tiene mejor estabilidad metabólica que el tepotinib. El t<1/2>del compuesto representado por la fórmula (I) para el metabolismo de los microsomas hepáticos humanos, de rata y de ratón fueron 62,1 min, 36,5 min y 49,1 min, respectivamente, en las mismas condiciones, el t<1/2>del tepotinib para el metabolismo de los microsomas hepáticos humanos, de rata y de ratón fue de 48,3 min, 10,5 min y 12,4 min, respectivamente. El compuesto representado por la presente divulgación tiene una vida media aumentada, por lo que tiene un tiempo de acción prolongado contra el objetivo, una estabilidad metabólica mejorada y una mejor actividad inhibidora. La prolongación de la vida media permitirá mantener la concentración del fármaco en la sangre durante un período de tiempo más prolongado. A partir de esto, se puede predecir que el compuesto reducirá la dosis o la frecuencia de administración en comparación con fármacos similares cuando se usa en el tratamiento de tumores, y la conformidad del paciente mejorará significativamente.
Cuando c-MET se une a HGF, se activarán MAPK, PI3K/AKT, Cdc42/Rac1 y otras vías, lo que conducirá a la supervivencia y proliferación de las células tumorales, acelerando así el crecimiento del tumor. Por lo tanto, los compuestos de piridona como inhibidores de c-Met tienen grandes perspectivas de aplicación en fármacos de terapia dirigida como en cáncer de hígado, el cáncer de pulmón de células no pequeñas y el cáncer gástrico. Especialmente en el tratamiento del cáncer de hígado, estos compuestos tienen un efecto terapéutico preciso sobre el cáncer de hígado con una alta expresión de c-MET. Por lo tanto, se espera que el compuesto representado por la fórmula (I) como inhibidor de piridona c-MET sea un nuevo fármaco terapéuticamente más eficaz que otros productos similares en vista de su notable actividad inhibidora.in vivoein vitro,así como su buena estabilidad metabólica.

Claims (13)

  1. REIVINDICACIONES 1. Una forma cristalina A de un compuesto representado por la fórmula (I), en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,54°±0,2°, 13,70°±0,2°, 17,84 ±0,2°, 21,24°±0,2° y 26,62±0,2°;
  2. 2. La forma cristalina A según la reivindicación 1, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,54°±0,2°, 13,70°±0,2°, 15,14±0,2°, 17,84±0,2°, 18,40°±0,2°, 21,24°±0,2°, 24,06°±0,2°, 26,62±0,2° y 27,44±0,2°; y/o, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina A tiene un pico endotérmico con una temperatura de inicio de 171,90°C±3°C; y/o, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina A muestra una pérdida de peso de 0,1870% a 223,23°C±3°C, y una pérdida de peso de 10,22% a 305,06°C±3°C.
  3. 3. La forma cristalina A según la reivindicación 1 ó 2, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,538°, 9,021°, 11,300°, 13,699°, 15,141°, 16,640°, 17,840°, 18,399°, 19,039°, 19,620°, 20,441°, 21,241°, 22,598°, 24,060°, 24,962°, 25,660°, 26,621°, 27,440°, 28,258°, 29,159°, 31,081°, 32,465°, 34,780°, 35.400°, 36,920° y 38,760°.
  4. 4. La forma cristalina A según la reivindicación 3, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina A es como se muestra en la siguiente tabla:
  5. 5. Una forma cristalina B del compuesto representado por la fórmula (II), en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina B comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,34°±0,2°, 12,99°±0,2°, 15,35°±0,2° y 25,50°±0,2°;
  6. 6. La forma cristalina B según la reivindicación 5, en la que el patrón de difracción de polvo de rayos X de la forma cristalina B comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,34°±0,2°, 6,50°±0,2°, 8,65°±0,2°, 10,82°±0,2°, 12,99°±0,2°, 15,35°±0,2°, 17,96°±0,2° y 25,50°±0,2°; y/o, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina B tiene picos endotérmicos con una temperatura de inicio de 43,98°C±3°C y 219,64°C±3°C; y/o, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina B muestra una pérdida de peso de 0,5270% a 73,64°C±3°C, y una pérdida de peso de 1,542% a 230,90°C±3°C.
  7. 7. La forma cristalina B según la reivindicación 5 ó 6, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina B comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 4,335°, 6,502°, 8,645°, 10,816°, 12,986°, 15,349°, 15,782°, 16,109°, 17,955°, 18,447°, 19,057°, 19,534°, 19,816°, 20,531°, 21,16°, 22,265°, 22,752°, 23,907°, 24,407°, 25,499°, 26,248°, 26,886°, 27,725°, 28,004°, 28,653°, 29,127°, 29,779°, 30,432°, 31,064°, 33,734° y 37,02°.
  8. 8. La forma cristalina B según la reivindicación 7, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina B es como se muestra en la siguiente tabla:
  9. 9. Una forma cristalina C del compuesto representado por la fórmula (III), en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina C comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 6,94°±0,2°, 19,08°±0,2°, 21,05°±0,2° y 24,73°±0,2°;
  10. 10. La forma cristalina C según la reivindicación 9, en la que el patrón de difracción de polvo de rayos X de la forma cristalina C comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 6,94°±0,2°, 9,94°±0,2°, 17,29°±0,2°, 18,04°±0,2°, 19,08°±0,2°, 21,05°±0,2°, 24,12°±0,2° y 24,73°±0,2°; y/o, la curva de calorimetría diferencial de barrido de la forma cristalina C tiene un pico endotérmico con una temperatura de inicio de 198,16°C±3°C; y/o, la curva de análisis termogravimétrico de la forma cristalina C muestra una pérdida de peso de 0,4541% ocurrida a 204,73°C±3°C.
  11. 11. La forma cristalina C según la reivindicación 9 ó 10, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina C comprende picos de difracción característicos a los siguientes ángulos 20: 6,94°, 9,94°, 13,36°, 15,271°, 16,83°, 17,286°, 18,038°, 18,767°, 19,082°, 20,605°, 21,054°, 21,884°, 22,615°, 23,228°, 24,118°, 24,728°, 25,182°, 25,813°, 28,182°, 30,757°, 31,498°, 33,318°, 33,77° y 34,595°.
  12. 12. La forma cristalina C según la reivindicación 9 ó 10, en la que el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma cristalina C es como se muestra en la siguiente tabla:
  13. 13. La forma cristalina A según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -4, o la forma cristalina B según una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, o la forma cristalina C según una cualquiera de las reivindicaciones 9-12 para uso en el tratamiento del cáncer.
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