EA032654B1 - [1,2,4]ТРИАЗОЛО[4,3-b]ПИРИДАЗИНЫ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ЛЕЧЕНИИ ПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)или их фармацевтически приемлемым солям, где R, Rи n имеют какое-либо из значений, определенных выше в настоящем описании; способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим их, и их применению в качестве антипролиферативных средств и/или средств, обеспечивающих гибель клеток.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)

032654 Β1

или их фармацевтически приемлемым солям, где В¹, В² и η имеют какое-либо из значений, определенных выше в настоящем описании; способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим их, и их применению в качестве антипролиферативных средств и/или средств, обеспечивающих гибель клеток.

Настоящее изобретение относится к конкретным замещенным триазолопиридазиновым (ΤΡΌΖ) соединениям или их фармацевтически приемлемым солям, которые обладают противораковой активностью и, следовательно, являются пригодными в способах лечения организма человека или животного. Настоящее изобретение также относится к способу получения указанных ΤΡΌΖ-соединений, фармацевтических композиций, содержащих указанные соединения или их фармацевтически приемлемые соли, и к способам лечения форм рака у теплокровных животных, таких как человек.

Настоящее изобретение также относится к ΤΡΌΖ-соединениям, которые являются ингибиторами одного или нескольких бромодоменсодержащих белков, в частности семейства ΒΕΤ бромодоменсодержащих белков.

Бромодоменсодержащие белки вовлечены в разнообразные заболевания и представляют существенный интерес в качестве терапевтических мишеней. Бромодомен представляет собой высоконсервативную структурную складку, которая распознает ацетилированные остатки лизина, и встречается в больших мультидоменных белках, ассоциированных с контролем транскрипции путем реконструкции хроматина, метил- или ацетилтрансферазной активностью или геликазами. Семейство ΒΕΤ бромодоменсодержащих белков состоит из четырех членов (ΒΒΌ2, ΒΒΌ3, ΒΒΌ4 и ΒΒΌ!), все из которых демонстрируют общую структуру домена Ν-концевых тандемных бромодоменов, способных к связыванию с ацетилированными остатками лизина в гистонах и факторах транскрипции. ΒΒΌ4 играет важную роль в регуляции транскрипции генов, о чем свидетельствует его ассоциация с позитивным транскрипционным фактором элонгации Ь (ρΤΕΕΒ) (1апд е! а1., Мо1. Се11, 2005, 19, 523-534), общим транскрипционным кофактором МсЕаЮг (СЫаид, Е1000 Βίο1. Вер, 2009, 1, 98), ген-специфическим провоспалительным фактором ΝΡΕΒ (Ниапд е! а1., Мо1. Се11 Βίο1. 2009, 29, 1375-1387) и кодируемыми вирусами транскрипционными регуляторами (Уои е! а1., Се11, 2004, 117, 349-360). Было обнаружено, что ΒΒΌ4 имеет асимметричную нагрузку на сверхбольших энхансерах, которые ассоциированы с небольшим подмножеством генов, которые зачастую составляют онкогенные и линиеспецифические транскрипционные программы в конкретном клеточном окружении (Боуеп е! а1., Се11, 2013, 153, 320-334). Подобным образом ΒΒΌ2 и ΒΒΌ3 описаны в качестве регуляторов транскрипции, связывающихся с гиперацетилированными участками хроматина генов, стимулирующих рост (ЬеКоу е! а1., Мо1. Се11. 2008, 30, 51-60). Также сообщалось, что ΒΒΌ4 или ΒΒΌ3 может сливаться с ΝΌΤ (ядерным белком в семеннике) с образованием новых онкогенов, ΒΚΌ4-ΝϋΤ или ΒΒΌ3-ΝυΤ, при чрезвычайно злокачественной форме эпителиальной неоплазии (Егепсй е! а1., Сапсег Векеатей, 2003, 63, 304-307 и Етепей е! а1. 1оитпа1 С11тса1 Опсо1оду, 2004, 22, 41354139). Данные показывают, что белки слияния ΒΒΌ-ΝυΤ способствуют канцерогенезу (Егепсй е! а1., 2008, Опсодепе, 27, 2237-2242). Также было обнаружено, что количество гена ΒΒΌ4 изменяется при серозном раке яичников и других формах рака в ряде данных под названием Атлас ракового генома (НОСА). Сообщалось, что все члены семейства ΒΕΤ обладают некоторыми аспектами контроля функций или выполнения функций клеточного цикла, и было показано, что они остаются в комплексе с хромосомами в течение деления клеток, что указывает на функцию в сохранении эпигенетической памяти. Неудивительно, что члены семейства ΒΕΤ недавно были признаны как важные для поддержания многих видов опухолей, например острого миелолейкоза и недифференцированного лейкоза (АМЬ), множественной миеломы (ММ), лимфомы, глиобластомы и нейробластомы. Ингибирование ΒΒΌ4 эффективно подавляет Мус, ΕΒ, ΒΟ12 и другие онкогены, которые зачастую изменяются при раке. Как полагают, модуляция данных ключевых генов способствует возникновению противоопухолевого фенотипа ингибирования ΒΕΤ.

Кроме того, было показано, что ингибиторы ΒΕΤ обладают противовоспалительными свойствами (Мсобеше е! а1. №1Ц.1ге. 2010, 468, 1119-1123) и реактивируют транскрипцию латентного Ηΐν в моделях клеточных линий в отношении латентности (Β;πκι^ е! а1., 1. Бенкос Β^Ε 2012, 92, 1147-1154).

В последнее время несколько соединений были описаны в качестве ингибиторов бромодомена, например, производные бензодиазепинов, такие как раскрытые в \УО 2011/054553. Тем не менее, остается потребность в разработке новых и эффективных ингибиторов бромодомена, которые можно применять для лечения заболеваний и симптомов, в которые вовлечены бромодоменсодержащие белки.

Было обнаружено, что соединения по настоящему изобретению обладают активностью в качестве ингибиторов бромодоменсодержащих белков, таких как семейство ΒΕΤ бромодоменов, например ΒΒΌ4, ΒΒΌ2, ΒΒΌ3 и ΒΒΌ!, и их тандемные домены, например ΒΒΌ4(1) и ΒΒΌ4(2).

В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль:

- 1 032654

---- обозначает точку присоединения;

К² представляет собой С1-С₄-алкил и η равняется 2 или 3.

В другом аспекте настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I), определенное выше.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения К² представляет собой метил.

В еще одном аспекте настоящего изобретения

К¹ представляет собой группу

К² представляет собой С₁-С₄-алкил и η равняется 2.

В одном аспекте настоящего изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение, выбранное из

4-(2-(4-(1-(3 -метокси-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)этил)-1,3 -диметилпиперазин-2-она,

-(4-(2-(4-(1 -(3 -метокси-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)этил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона,

4-(3 -(4-(1-(3 -метокси-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)пропил)-1,3 -диметилпипераз ин-2-она и

-(4-(3-(4-(1 -(3-метокси-[ 1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пирид азин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)пропил)-3,5 -диметилпипераз ин-1 -ил)этанона.

В другом аспекте настоящего изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (!А)

Соединение формулы (ΙΑ) далее в данном документе также называют соединением А. В другом аспекте соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (Ш)

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (!С)

- 2 032654

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (ГО)

О А

(Ш).

Дополнительный аспект предусматривает какой-либо из аспектов, определенных в данном документе (например, аспект п.1 формулы изобретения), при условии, что один или несколько конкретных примеров (например, один, два или три конкретных примера), выбранные из группы, состоящей из примеров 1, 2, 3 и 4, по отдельности исключены.

Некоторые из соединений формулы (I) могут быть кристаллическими и могут иметь более одной кристаллической формы. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает любую кристаллическую или аморфную форму или их смеси, при этом форма обладает свойствами, пригодными для ингибиторной активности в отношении ВЕТ и, например, ингибиторной активности в отношении ΒΚΌ2, ΒΚΌ3, ΒΚΌ4 и ΒΚΌΕ Хорошо известно как определить эффективность кристаллической или аморфной формы с помощью стандартных испытаний, описанных далее в данном документе.

В целом известно, что кристаллические материалы можно анализировать с применением традиционных методик, таких как, например, анализ порошковой рентгеновской дифракции (далее в данном документе ΧΚΡΌ) и дифференциальная сканирующая калориметрия (далее в данном документе Э8С).

В качестве примера, было идентифицировано, что соединение примера 1 характеризуется кристалличностью и одною кристаллической формой, формой А.

Следовательно, дополнительный аспект настоящего изобретения представляет собой форму А соединения А (пример 1).

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=20,9°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=16,7°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками приблизительно при 2-тета=20,9° и 16,7°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ с характерными пиками приблизительно при 2-тета=20,9, 16,7, 20,2, 21,2, 27,4, 18,0, 16,8, 23,6, 15,1 и 15,5°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ, практически такой же, что и ΧΚΡΌ, показанная на фиг. А, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком при 2-тета=20,9±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком при 2-тета=16,7±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками при 20,9 и 16,7±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

- 3 032654

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, соединения А, которая характеризуется порошковой рентгенограммой с характерными пиками при 20,9, 16,7, 20,2, 21,2, 27,4, 18,0, 16,8, 23,6, 15,1 и 15,5±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКаизлучения.

Когда указано, что настоящее изобретение относится к кристаллической форме соединения А, форме А, степень кристалличности преимущественно составляет более приблизительно 60%, более преимущественно более приблизительно 80%, предпочтительно более приблизительно 90% и более предпочтительно более приблизительно 95%. В наиболее предпочтительном случае степень кристалличности составляет более приблизительно 98%.

Некоторые из соединений формулы (I) могут образовывать сокристаллы с определенными молекулами коформера. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает любые такие сокристаллы, которые обладают свойствами, пригодными для ингибиторной активности в отношении ВЕТ и, например, ингибиторной активности в отношении ΒΚΌ2, ΒΚΌ3, ΒΚΌ4 и ΒΚΌΐ. Хорошо известно как определять эффективность таких сокристаллов с помощью стандартных испытаний, описанных далее в данном документе.

Следовательно, в настоящем изобретении предусматривают сокристалл соединения формулы (I) и молекулу коформера.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают сокристалл соединения А и молекулу коформера, 6-гидрокси-2-нафтойную кислоту.

Во избежание неоднозначности толкования термин сокристалл относится к многокомпонентной системе, в которой присутствует молекула-хозяин или молекулы-хозяева ΑΡΙ (активного фармацевтического ингредиента) и молекула-гость или молекулы-гости (или коформер) в той же кристаллической решетке. В сокристалле как молекула ΑΡΙ, так и молекула-гость (или коформер) присутствуют в виде твердых веществ при комнатной температуре по отдельности в их чистой форме (с целью обособления сокристалла от сольватов или гидратов). В сокристалле молекулы ΑΡΙ и коформера взаимодействуют посредством образования водородных связей и, возможно, других нековалентных взаимодействий.

При получении сокристаллов соединения А с 6-гидрокси-2-нафтойной кислотой, где соединение А представляет собой ΑΡΙ, может быть достигнут диапазон молярных соотношений/стехиометрических составов ΑΡI:коформер, например, совокупное молярное соотношение ΑΡΙ: коформер составляет 1:1, тем не менее, оно может слегка варьироваться, например, в зависимости от измерений характеристик. Следовательно, в настоящем изобретении предусматривают сокристалл соединения А и молекулы коформера, 6-гидрокси-2-нафтойной кислоты, при молярном соотношении соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, находящемся в диапазоне от 1:0,8 до 1:1,2. В одном аспекте настоящего изобретения предусматривают сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1).

В дополнительном аспекте настоящего изобретения сокристалл соединения А с 6-гидрокси-2нафтойной кислотой находится в кристаллической форме, форме А.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1).

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=19,4°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=12,5°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками приблизительно при 2-тета=19,4° и 12,5°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ с характерными пиками приблизительно при 2-тета=19,4, 12,5, 12,8, 18,1, 24,2, 23,4, 14,0, 18,6, 17,0 и 17,9°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ, практически такой же, что и рентгенограмма ΧΚΡΌ, показанная на фиг. Ι, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком при 19,4±0,2° 2-тета, согласно измерениям

- 4 032654 с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ, по меньшей мере с одним характерным пиком при 12,5±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками при 2-тета=19,4 и 12,5°, где указанные значения могут составлять ±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму А, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ с характерными пиками при 2-тета=19,4, 12,5, 12,8, 18,1, 24,2, 23,4, 14,0, 18,6, 17,0 и 17,9°, где указанные значения могут составлять ±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКаизлучения.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения сокристалл соединения А с 6-гидрокси-2нафтойной кислотой находится в кристаллической форме, форме В. В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота (1:1).

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=15,2°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=6,1°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками приблизительно при 2-тета=15,2 и 6,1°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ с характерными пиками приблизительно при 2-тета=15,2, 6,1, 16,8, 12,2, 26,1, 28,4, 18,3, 3,1 и 20,7°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ, практически такой же, что и порошковая рентгенограмма, показанная на фиг. К, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком при 2-тета=15,2±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком при 2-тета=6,1±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками при 15,2 и 6,1±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ с характерными пиками при 2-тета=15,2, 6,1, 16,8, 12,2, 26,1, 28,4, 18,3, 3,1 и 20,7°, где указанные значения могут составлять ±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКаизлучения.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения сокристалл соединения А с 6-гидрокси-2нафтойной кислотой находится в кристаллической форме, форме С.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1).

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгено

- 5 032654 граммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=8,2°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком приблизительно при 2-тета=24,8°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками приблизительно при 2-тета=8,2 и 24,8°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму В, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ с характерными пиками приблизительно при 2-тета=8,2, 24,8, 18,9, 29,0, 14,8, 15,5 и 16,3°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ, практически такой же, что и порошковая рентгенограмма, показанная на фиг. М.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком при 2-тета=8,2±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с одним характерным пиком при 2-тета=24,8±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ по меньшей мере с двумя характерными пиками при 8,2 и 24,8±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают кристаллическую форму, форму С, сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), которая характеризуется рентгенограммой ΧΚΡΌ с характерными пиками при 2-тета=8,2, 24,8, 18,9, 29,0, 14,8, 15,5 и 16,3°, где указанные значения могут составлять ±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

Когда указано, что настоящее изобретение относится к кристаллической форме сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1), степень кристалличности преимущественно составляет более приблизительно 60%, более преимущественно более приблизительно 80%, предпочтительно более приблизительно 90% и более предпочтительно более приблизительно 95%. В наиболее предпочтительном случае степень кристалличности составляет более приблизительно 98%.

Следует понимать, что значения 2-тета порошковой рентгенограммы могут слегка варьировать от одного аппарата к другому или от одного образца к другому, и, таким образом, приведенные значения не должны истолковываться как абсолютные.

Известно, что может быть получена порошковая рентгенограмма, которая характеризуется одной или несколькими погрешностями измерения в зависимости от условий измерения (таких как применяемое оборудование или аппарат). В частности, в целом известно, что значения интенсивности на порошковой рентгенограмме могут колебаться в зависимости от условий измерения. Следовательно, необходимо понимать, что соединение А, форма А, по настоящему изобретению не ограничивается кристаллами, которые обеспечивают порошковые рентгенограммы, идентичные порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. А, и любые кристаллы, обеспечивающие порошковые рентгенограммы, практически такие же, что и порошковая рентгенограмма, показанная на фиг. А, попадают в объем настоящего изобретения. Подобным образом следует понимать, что форма А сокристалла соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота (1:1) по настоящему изобретению не ограничивается кристаллами, которые обеспечивают порошковые рентгенограммы, идентичные порошковой рентгенограмме, показанной на фиг. С или I, и любые кристаллы, обеспечивающие порошковые рентгенограммы, практически такие же, что и порошковые рентгенограммы, показанные на фиг. С или I, попадают в объем настоящего изобретения. Подобным образом следует понимать, что формы В и С сокристалла соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота (1:1) по настоящему изобретению не ограничиваются кристаллами, которые обеспечивают порошковые рентгенограммы, идентичные порошковой рентгенограмме, показанной соответственно на фиг. К и М, и любые кристаллы, обеспечивающие порошковые рентгенограммы, практически такие же, что и порошковые рентгенограммы, показанные на фиг. К и М, попадают в объем настоящего изобретения. Специалист в области порошковой рентгеновской дифракции способен оценивать существенную идентичность порошковых рентгенограмм.

- 6 032654

Специалистам в области порошковой рентгеновской дифракции будет понятно, что на относительную интенсивность пиков могут влиять, например, зерна размером более 30 микрон и неунитарными соотношениями сторон, которые могут влиять на анализ образцов. Специалисту в данной области также будет понятно, что на положение отражений могут влиять точная высота, на которой находится образец в дифрактометре, и калибровка нуля дифрактометра. Плоскостность поверхности образца также может оказывать незначительный эффект. Следовательно, представленные данные дифрактограммы не следует принимать как абсолютные значения. Пспкиъ. Я & 8иубет, Я.Ь. 'Тийобискои 1о Х-Яау Ро\\бег ΟίίΤπιοΙοтеОу .Токи \УПеу & 8оик 1996; Виии, СЛУ. (1948), Скеш1са1 Стук1а11одтарку, С1агеибои Ргекк, Ьоибои; К1ид, Н. Р. & А1ехаибег, Ь. Е. (1974), Х-Яау ИШтаскои Ртосебитек).

Как правило, погрешность измерения угла дифракции на рентгеновской порошковой дифрактограмме составляет примерно ±0,2° 2-тета, и такая степень погрешности измерения должна быть принята во внимание при рассмотрении порошковой рентгенограммы на фиг. А, С, I, К и М и при чтении табл. АЕ (см. пример 1). Кроме того, следует понимать, что значения интенсивности могут колебаться в зависимости от экспериментальных условий и способа получения образца (предпочтительной ориентации).

Соединения формулы (I) включают один или несколько хиральных центров. В тех случаях, когда структура или химическое название в настоящем описании не указывает на хиральность, предполагается, что структура или название охватывает какой-либо отдельный стереоизомер (т.е. какой-либо отдельный хиральный изомер), соответствующий такой структуре или названию, а также какую-либо смесь стереоизомеров (например, рацемат). Из уровня техники хорошо известно как можно получать такие оптически активные формы. Например, отдельный стереоизомер можно получать посредством выделения его из смесей изомеров (например, рацемата) с применением, например, хирального хроматографического разделения. В других вариантах осуществления отдельный стереоизомер получают путем прямого синтеза, например, из хирального исходного материала.

Конкретный энантиомер или диастереоизомер соединения, описанного в данном документе, может быть более активным, чем другие энантиомеры или диастереоизомеры того же соединения.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, которое представляет собой отдельный энантиомер, находящийся в энантиомерном избытке (% ее), составляющем >95, >98 или >99%. Преимущественно отдельный энантиомер присутствует в энантиомерном избытке, составляющем >99%.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, которое представляет собой отдельный энантиомер, находящийся в энантиомерном избытке (% ее) в диапазоне 95-100%.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают фармацевтическую композицию, которая содержит соединение формулы (I), которое представляет собой отдельный энантиомер, находящийся в энантиомерном избытке (% ее), составляющем >95, >98 или >99%, или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. Преимущественно отдельный энантиомер присутствует в энантиомерном избытке, составляющем >99%.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают фармацевтическую композицию, которая содержит соединение формулы (I), которое представляет собой отдельный энантиомер, находящийся в энантиомерном избытке (% ее) в диапазоне 95-100%, или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Подразумевается, что настоящее изобретение включает все изотопы атомов, присутствующих в соединениях по настоящему изобретению. Следует понимать, что изотопы включают такие атомы, которые имеют одинаковое атомное число, но отличающееся массовое число. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий, а изотопы углерода включают ¹³С и ¹⁴С.

Термин фармацевтически приемлемый применяется для указания того, что объект (например, соль, лекарственная форма, разбавитель или носитель) подходит для применения пациентами. Перечень примеров фармацевтически приемлемых солей можно найти в НаибЬоок оТ Ркагшасеи11са1 8а11к: РгорегИек, 8е1ес1юи аиб Ике, Р. Н. 81ак1 аиб С С. Уегши1к, ебйотк, Уешке1ш/2штск:У11еу-УСН/УНСА, 2002. Подходящей фармацевтически приемлемой солью соединения формулы (I) является, например, соль присоединения кислоты. Соль присоединения кислоты соединения формулы (I) может быть образована посредством приведения соединения в контакт с подходящей неорганической или органической кислотой в условиях, известных специалисту. Например, соль присоединения кислоты может быть образована с применением неорганической кислоты, выбранной из группы, состоящей из хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты и фосфорной кислоты. Соль присоединения кислоты также может быть образована с применением органической кислоты, выбранной из группы, состоящей из трифторуксусной кислоты, лимонной кислоты, малеиновой кислоты, щавелевой кислоты, уксусной кислоты, муравьиной кислоты, бензойной кислоты, фумаровой кислоты, янтарной кислоты, винной кислоты, молочной кислоты, пировиноградной кислоты, метансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты и пара-толуолсульфоновой кислоты.

- 7 032654

Следует понимать, что соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в сольватированной и несольватированной формах. Например, сольватированная форма может представлять собой гидратированную форму. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает все такие сольватированные и несольватированные формы.

Соединения формулы (I) можно вводить в форме пролекарства, которое представляет собой соединение, которое разрушается в организме человека или животного с высвобождением соединения по настоящему изобретению. Такие фармацевтически приемлемые пролекарства соединений формулы (I) также составляют аспект настоящего изобретения. Различные формы пролекарств известны из уровня техники. Например, см.:

a) Без1дп ок Рго-бгидз, ебйеб Ьу Н. Випбдаагб, (Е1зеу1ег, 1985);

b) А Тех1Ьоок ок Бгид Без1дп апб Беуе1оршеп1, ебйеб Ьу Кгодздаагб-Багзеп апб Н. Випбдаагб, СЬар!ег 5 Бе81дп апб Аррйеабоп ок Рго-бгидз, Ьу Н. Випбдаагб р. 113-191 (1991);

c) Н. Випбдаагб, Абуапееб Бгид Бейуегу Кеу1е^8, 8, 1-38 (1992);

б) Н. Випбдаагб, е! а1., 1оигпа1 ок РЬагшасеибса1 Зщепсез, 77, 285 (1988) и

е) N. Какеуа, е! а1., СЬеш. РЬагш. Ви11., 32, 692 (1984).

В другом аспекте настоящего изобретения предусматривают способ получения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Подходящий способ проиллюстрирован следующим иллюстративным способом, при котором, если не указано иное, К¹, К² и п имеют значения, определенные выше в данном документе. Необходимые исходные материалы можно получать с помощью стандартных процедур органической химии. Получение таких исходных материалов описано совместно со следующими вариантами иллюстративного способа и в пределах прилагаемых примеров. В качестве альтернативы, необходимые исходные материалы могут быть получены с помощью процедур, аналогичных проиллюстрированным процедурам, и являются известными рядовому специалисту в области органической химии.

Соединения формулы (I) преимущественно получают с помощью реакции сочетания, например, реакции соединения формулы (II) с соединением формулы (Ша) или формулы (ШЬ) в присутствии триалкилфосфина, такого как триалкил трибутилфосфин, и диазенового реагента, такого как (Е)-диазен-1,2диил-бис-(пиперидин-1-илметанон), в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, и при подходящей температуре, такой как 5°С.

Соединения формулы (II) можно получать, например, с помощью реакции соединения формулы (IV) с 4-(пиперидин-4-ил)фенолом в присутствии основания, такого как Ν,Ν-диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как этанол, и при подходящей температуре, такой как 55°С.

(IV)

Соединения формулы (IV) можно получать, например, с помощью реакции 3-хлор-6гидразинилпиридазина с тетраметоксиалканом, таким как тетраметоксиметан, при подходящей температуре, такой как 90°С.

Соединения формулы (Ша) можно получать посредством осуществления реакции гидрохлорида 1,3-диметилпиперазин-2-она с 2-бромэтанолом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в растворителе, таком как 2-метилтетрагидрофуран, при подходящей температуре, такой как 100°С.

Соединения формулы (ШЬ) можно получать посредством осуществления реакции 1-(3,5- 8 032654 диметилпиперазин-1-ил)этанона (соединения V) с 2-бромпропан-1-олом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в растворителе, таком как 2-метилтетрагидрофуран, при подходящей температуре, такой как 80°С.

н

(V)

1-(3,5-Диметилпиперазин-1-ил)этанон можно получать посредством осуществления реакции Νацетил-№-(2-(трифторметил)фенил)ацетамида с 2,6-диметилпиперазином в растворителе, таком как этанол, при подходящей температуре, такой как температура окружающей среды.

Н-ацетил-Ы-(2-(трифторметил)фенил)ацетамид можно получать посредством осуществления реакции ацетилхлорида с 2-(трифторметил)анилином и пиридином в подходящем растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, такой как 50°С.

4-(Пиперидин-4-ил)фенол можно получать, например, в соответствии со следующей схемой реакций (схема).

Схема

Согласно схеме можно применять следующие условия реакций:

стадия (а): основание, такое как бис-(триметилсилил)амид лития, и сульфонилирующее средство, такое как 1,1,1-трифтор-№-фенил-№-(трифторметилсульфонил)метансульфонамид, в присутствии растворителя, такого как ТНР, при подходящей температуре, такой как от -78 до 0°С;

стадия (Ь): 4-гидроксифенилбороновая кислота в присутствии катализатора на основе палладия II, такого как 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцендихлорпалладий(11), основания, такого как карбонат натрия, и растворителя, такого как смесь диоксан-вода, при подходящей температуре, такой как 80°С, и стадия (с): водород в присутствии катализатора гидрирования, такого как 5% палладий на угле, в растворителе, таком как метанол.

Соединения формулы (I) также можно получать, например, с помощью реакции соединения формулы (νΐα) или соединения формулы (ν^) с соединением формулы (IV), как описано выше, в присутствии основания, такого как триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как диметилформамид, и при подходящей температуре, такой как 56°С.

Соединения формулы (νΡι) можно получать посредством осуществления реакции соединений формулы (νΠα) с кислотой, такой как хлороводород, в присутствии подходящего растворителя, такого как

- 9 032654 диоксан, и при подходящей температуре, такой как 20°С.

Соединения формулы (У11а) можно получать посредством осуществления реакции соединений формулы (У111а) с 1,3-диметилпиперазин-2-оном в присутствии основания, такого как Ν,Νдиизопропилэтиламин, в присутствии катализатора, такого как иодид калия, и растворителя, такого как диметилацетамид, и при подходящей температуре, такой как 120°С.

Соединения формулы (У11а) можно получать посредством осуществления реакции трет-бутил-4-(4гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилата с 1-бром-3-хлоралканом и в присутствии основания, такого как карбонат калия, и растворителя, такого как дихлорметан, и при подходящей температуре, такой как 80°С.

трет-Бутил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилат можно получать посредством осуществления реакции 4-(пиперидин-4-ил)фенола (полученного как было описано выше в данном документе) с ди-трет-бутилдикарбонатом в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, и при подходящей температуре, такой как 0°С.

Соединения формулы (У1Ь) можно получать посредством осуществления реакции соединений формулы (У11Ь) в присутствии подходящего растворителя, такого как метанол, и подходящего катализатора, такого как 10% палладий на угле, в атмосфере водорода.

Соединения формулы (УПЬ) можно получать посредством осуществления реакции соединений формулы (У111Ь) с 1-(3,5-диметилпиперазин-1-ил)этаноном, полученным, как описано выше, в присутствии подходящего основания, такого как Ν,Ν-диизопропилэтиламин, в присутствии катализатора, такого как иодид калия, и растворителя, такого как диметилацетамид, и при подходящей температуре, такой как 120°С.

Соединения формулы (У111Ь) можно получать посредством осуществления реакции бензил-4-(4гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилата с 1-бром-3-хлоралканом и в присутствии основания, такого как карбонат калия, и растворителя, такого как дихлорметан, и при подходящей температуре, такой как 80°С.

Бензил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин- 1 -карбоксилат можно получать посредством осуществления реакции 4-(пиперидин-4-ил)фенола (полученного как было описано выше в данном документе) с бензилхлорформиатом и ΌΙΡΕΑ в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, и при подходящей темпе ратуре.

Как указано выше, один аспект настоящего изобретения представляет собой сокристалл соединения А с 6-гидрокси-2-нафтойной кислотой.

- 10 032654

Сокристалл можно получать посредством смешивания соединения А в подходящем растворителе с 6-гидрокси-2-нафтойной кислотой в подходящем растворителе. Таким образом, в соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ получения сокристалла соединения А с 6-гидрокси-2-нафтойной кислотой, причем способ включает стадию смешивания раствора соединения А, которое находится в подходящем растворителе, с 6-гидрокси-2-нафтойной кислотой, которая находится в подходящем растворителе. Подходящие растворители будут включать растворители, которые растворяют оба компонента и не образуют сольваты либо с соединением А, либо с 6-гидрокси2-нафтойной кислотой. В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, получаемый с помощью стадий:

ί) смешивание раствора соединения А в подходящем растворителе с 6-гидрокси-2-нафтойной кислотой в подходящем растворителе и ίί) высушивание полученной на стадии (ί) смеси с получением твердого вещества.

В одном аспекте настоящего изобретения подходящим растворителем является метанол.

Было обнаружено, что сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) обладает рядом преимущественных свойств по сравнению с формой свободного основания соединения А. В частности, было обнаружено, что он значительно менее гигроскопичен, чем свободное основание соединения А. Также было обнаружено, что сокристалл является более устойчивым, чем свободное основание соединения А при подвергании диапазону температур и условий влажности.

Биологические анализы

Следующие анализы применяли для измерения эффектов соединений по настоящему изобретению.

Анализ ВКОМОзеап™ (от ϋΐ^οονβΓχ)

Способность соединений связываться с содержащим бромодомен белком испытывали с помощью ЭБсоуегх. применяя сайт-направленный анализ конкурентного связывания с лигандом их собственной разработки. Поставляемые соединения делали анонимными.

Анализ ВВОМОксап основан на принципе, что испытуемые соединения, которые связывают содержащий бромодомен белок, предотвращают его связывание с иммобилизованным лигандом, снижая, таким образом, количество белка, захваченного на твердой подложке. Наоборот, испытуемые молекулы, которые не связывают бромодомен, не влияют на количество белка, захваченного на твердой подложке. Пики скрининга идентифицируют посредством измерения количества бромодомена, захваченного в испытании, по сравнению с контрольными образцами путем применения количественного, точного и сверхчувствительного способа дРСВ, с помощью которого выявляют связанную ДНК-метку. Аналогичным образом рассчитывают константы диссоциации (К,|) для взаимодействий испытуемое соединениебромодомен посредством измерения количества содержащего бромодомен белка, захваченного на твердой подложке, в зависимости от концентрации испытуемого соединения.

Анализ А1рЬа-8егееп

Способность соединений связываться с содержащим бромодом белком испытывали с помощью анализа А1рйа8сгееп®. Анализ основан на взаимодействии между меченным гистидином, содержащим бромодомен белком, который может связываться с никель-хелатными микросферами-донорами, и содержащим ацетиллизин биотинилированным пептидом, соответствующим аминокислотной последовательности гистона, который может связываться с конъюгированными со стрептавидином микросферамиакцепторами. Взаимодействие белок-пептид можно выявлять с помощью излучения света при 520-620 нм. В присутствии соединений, которые связываются с ВВИ4, наблюдают более низкий сигнал, поскольку взаимодействие белок-пептид снижается.

1. Анализ осуществляли следующим образом: применяли планшеты для соединений Стешет ВюОие (№ по кат. 784075). Соединения получали с применением акустического диспергатора Ес1о от БаЬсу1е. при этом соединения в конечном объеме 40 нл на лунку нормализовали до 0,5% (об./об.) ΌΜ8Ο в конечных условиях анализа. Соединения испытывали в 12-точечном формате ответа при одной концентрации.

2. 4 мкл белка ВВИ4 (6Нщ-ТЕУ-ВКП4, аминокислотные остатки 42-169, соответствующие домену ΒΌ1) (концентрация при конечном анализе=50 нМ) на лунку добавляли с применением микрожидкостной установки для распыления микроколичеств реагентов (Е1утд Веадеп! Ищрепког Мюгойшбю Аогкδίαΐίοη) ВюВАРТВ® от Весктап СоиИег.

3. Инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре.

4. Добавляли 4 мкл пептида с ацетиллизином (Н4К5,8,12,16(Ас)4-биотин:(ИН₂-)¥8СВС(КАс)СС(К-Ас)СЬС(К-Ас)ССА(К-Ас)ВНВ(К-биотин)(-СООН)) (концентрация при конечном анализе= 50 нМ) на лунку с применением микрожидкостной установки для распыления микроколичеств реагентов (Е1у1пд Веадеп! Ищрепког МюгоПшШс Аогкйайоп) ВюВАРТВ®® от Весктап СоиИег.

5. Инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре.

6. Добавляли 4 мкл предварительно смешанного раствора с микросферами с никелем и стрептавидином (микросферы поставляются компанией Регкт Е1тег) на лунку с применением ВюВарЩ как и ранее (концентрация при конечном анализе=4 мкг/мл). После добавления планшеты выдерживали в темноте.

- 11 032654

7. Инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре, выдерживая анализируемый планшет в темноте.

8. Затем планшеты считывали с применением планшет-ридера Εηνίδίοη от Регкт Е1тег, возбуждение лазера при 680 нм и испускание, выявленное при 520-620 нм.

9. Данные анализировали с применением программного обеспечения Сепеба!а и рассчитывали значения 1С₅₀.

Анализ антипролиферативных свойств

Антипролиферативный эффект соединений оценивали с помощью анализа с использованием аламара синего в клетках ММ1.8, которые исходно получали от пациента с множественной миеломой. В основе данного анализа лежит применение резазурина, нефлуоресцирующего индикаторного красителя, превращающегося в ярко-красный флуоресцирующий резоруфин посредством реакций восстановления в метаболически активных клетках. Количество полученного флуоресцентного излучения пропорционально числу живых клеток. Клетки ММ. 18 культивировали в среде ВРМ1-1640 (С1Ьсо®) с 10% фетальной бычьей сывороткой (ЕВ8) и 1 мМ Ь-глутамина. За 12-24 ч до введения соединения высеивали 90 мкл суспензии клеток (18750 клеток) в 96-луночные титрационные микропланшеты (черные, с лунками с плоским дном). В день введения соединения соединения последовательно разбавляли 1:3 в 100% ΌΜ8Θ с использованием столбцов 2-10 96-луночного титрационного микропланшета. Столбец 11 планшета с последовательно разбавленными соединениями содержал только ΌΜ8Θ. Затем содержимое всех лунок дополнительно разбавляли 1:30 в среде. 10 мкл соединения или ΌΜ8Θ отдельно в среде добавляли в лунки столбцов 2-11 планшетов с клетками в трех повторностях. Кроме того, 1 планшет содержал 10 мкл добавленной среды и был проявлен с применением аламара синего. Планшеты, проявляемые в день добавления соединения, упоминались как день 0. Планшеты с введенным соединением культивировали 3 дня в нормальных условиях (КРМ1-1640 с 10% ЕВ8 и 1 мМ Ь-глутамина). Через 3 суток культивирования планшеты с введенным соединением проявляли с применением либо МТ8, либо аламара синего. Для каждой концентрации соединения % чистого прироста рассчитывали по формуле: (Значение флуоресценции в день 3 для лунок с введенным соединением - среднее значение флуоресценции в день 0)/(среднее значение флуоресценции в день 3 для лунок с ЭМ8О в качестве контроля - среднее значение флуоресценции в день 0). С1₅₀, концентрацию, которая вызывает 50% ингибирование роста, для каждого соединения рассчитывали с применением % чистого прироста, как определено Национальным институтом рака (ЯС1).

Анализ для отслеживания модуляции белка сМус

Клетки множественной миеломы ММ1.8 культивировали в среде КРМ1-1640, содержащей 10% ЕВ8 и 1% Ь-глутамина, в стандартных условиях в инкубаторе с увлажнением (37°С и 5% СО₂). Влияние модуляции белка сМус, индуцированной ингибиторами бромодомена, оценивали с помощью окрашивания и количественного определения уровня белка с-Мус после обработки соединением с применением анализа с использованием проточного цитометра, осуществляемого в планшете 96-луночного формата с 200К клеток на лунку. Клетки обрабатывали последовательно разбавленными соединениями за 16 часов до фиксации с помощью 2% параформальдегида (конечная концентрация) в течение 10 мин при 37°С. После пермеабилизации с помощью ледяного 90% метанола при 4°С в течение 30 мин. клетки промывали, блокировали буфером (0,5% ЕВ8 в фосфатно-солевом буферном растворе (РВ8)) в течение 10 мин при комнатной температуре и окрашивали с помощью антитела к сМус в течение 1 ч (Се11 8фпа1тд Тес11по1оду®5605. разбавление 1:200). Клетки промывали и окрашивали посредством инкубирования с конъюгированным с А1еха-488 антителом к 1дС кролика (Се11 8щпа1йщ Тесйпо1оду®, №4412, разбавление 1:1000) при к. т. в течение 30 мин. После окрашивания клетки промывали снова и фиксировали с помощью 2% параформальдегида в РВ8 и подготавливали к анализу с помощью проточного цитометра ВЬ ЕАС8Са11Ьит™. Среднее геометрическое значение флуоресценции рассчитывали с помощью Р1о\\1о (Ттее8!ат 1пс), причем сигнал максимального ингибирования определяли посредством обработки высокой дозой контрольного соединения каждого планшета, а сигнал минимального ингибирования определяли посредством обработки с помощью ЭМ8О. 1С₅₀ рассчитывали посредством аппроксимации точек данных доза-эффект, которые нормализовали по отношению к максимальному и минимальному сигналам в виде процента ингибирования с применением стандартной логистической модели нелинейной регрессии с 4мя параметрами.

Несмотря на то что, как и предполагалось, фармакологические свойства соединений формулы (I) варьируют при изменении структуры, в целом активность, которой обладают соединения формулы (I), может быть продемонстрирована при следующих значениях концентрации или дозах в одном или нескольких из вышеуказанных испытаний.

Следующие данные были получены для примеров (данные ниже могут представлять собой результат одного эксперимента или среднее значение многократно повторяемых экспериментов).

- 12 032654

Таблица 1

Прим ер	А1рНа зсгееп ВВО4( 1) 1С50/М кМ	ϋίδοονβίΧ Ко/мкМ
ВВО4 (1)	ВВО4 (2)	ВВО2 (1)	ВВО2 (2)	ВВОЗ (1)	ВВОЗ (2)	ВВОТ (1)	ВВОТ (2)
1	0,12 (п=2)	0,047 (п=2)	0,13 (п=4)	0,10 (п=2)	0,28 (п=2)	0,064 (п=2)	0,43 (п=2)	0,095 (п=2)	0,45 (п=2)
2	0,035 (п=2)	0,026 (п=6)	0,29 (п=6)	0,083 (п=2)	0,35 (п=2)	0,057 (п=2)	0,92 (п=2)	0,035 (п=2)	1,1 (п=2)
3	0,30 (п=2)	0,11 (п=2)	0,34 (п=4)	0,16 (п=2)	0,53 (п=2)	о,и (п=2)	0,67 (п=2)	0,093 (п=2)	0,99 (п=2)
4	0,14 (п=4)	0,057 (п=2)	0,25 (п=2)

В скобках указано число повторений.

Таблица 2

Пример	Клетки ММ 1.8, антипрлиферативное ΘΙ50/μκΜ	ММ 1.8 МоА 1С50/мкМ
1	0,0049 (п=9)	0,011 (п=12)
2	<0,0020 (п=3)	<0,0020 (п=4)
3	0,0075 (п=2)	0,025 (п=1)
4	0,0051 (п=3)	0,012 (п=2)

В скобках указано число повторений.

Ксенотрансплантатные модели

Соединение А также исследовали в ксенотрансплантатной модели, как описано ниже.

Самок мышей СВ17 8СГО возрастом 6-8 недель получали из лаборатории Чарльза Ривера (Сйаг1е§ К1уег) (Уилмингтон, Массачусетс) и содержали в условиях отсутствия специфических патогенов в аккредитованном АААБАС (Международной ассоциацией по аттестации и аккредитации содержания лабораторных животных) центре. Облученную пищу и стерилизованную в автоклаве воду обеспечивали в неограниченном количестве.

Клетки МУ-4-11 (Американская коллекция типовых культур) ресуспендировали в 0,1 мл среды без сыворотки и матригеля (Вес1оп ΌΐεΕΐηδοη) при соотношении 1:1. Клетки (10⁷/мышь) вводили посредством подкожной инъекции в правый бок мышей. Опухолям давали расти до достижения ими среднего объема 200 мм³ для эффективности и затем мышей распределяли случайным образом в группы по 8 особей. Соединение А солюбилизировали в 0,5% НРМС/0,1% Т^ееп80 для введения. Для эффективности или среду-носитель, или соединение А вводили РО один раз в сутки (ςά) в течение 21 дня при 10 мг/кг (трк). Вес тела и объем опухоли измеряли два раза в неделю в течение 21 дня. Результаты показаны на фиг. Е и демонстрируют эффект соединения А в отношении объема опухоли.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают фармацевтическую композицию, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, определенные в данном документе, в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают фармацевтическую композицию, которая содержит сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенный в данном документе, в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Композиции по настоящему изобретению могут находиться в форме, подходящей для перорального применения (например, в виде таблеток, пастилок, твердых или мягких капсул, водных или масляных суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков или гранул, сиропов или крепких настоек), для местного применения (например, в виде кремов, мазей, гелей или водных или масляных растворов или суспензий), для введения путем ингаляции (например, в виде мелкодисперсного порошка или жидкого аэрозоля), для введения путем инсуффляции (например, в виде мелкодисперсного порошка) или для парентерального введения (например, в виде стерильного водного или масляного раствора для внутривенного, подкожного, внутримышечного или внутримышечного введения доз или в виде суппозитория для ректального введения доз). В одном аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция по настоящему изобретению представляет собой композицию, подходящую для перорального применения.

Композиции по настоящему изобретению можно получать с помощью традиционных процедур, с применением традиционных фармацевтических наполнителей, хорошо известных из уровня техники. Таким образом, композиции, предназначенные для перорального применения, могут содержать, например, одно или несколько красящих, подслащивающих, вкусовых и/или консервирующих средств.

Для получения более подробной информации о составлении читателю дается ссылка на главу 25.2 тома 5 Сотргейепыуе МеШста1 СйетБйу (СогМп Напзсй; Сйаптап оГ ебйопа1 Воагб), Регдатоп Рг姧 1990.

- 13 032654

Соединение формулы (I) или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота обычно будут вводить теплокровному животному в однократной дозе в диапазоне 5-5000 мг/м площади поверхности тела животного, т.е. примерно 0,1-100 мг/кг, и данное количество обычно обеспечивает терапевтически эффективную дозу. Единичная лекарственная форма, такая как таблетка или капсула, будет обычно содержать от 0,5 мг до 250 мг и, например, от 1 до 250 мг активного ингредиента. Суточная доза в обязательном порядке будет варьироваться в зависимости от хозяина-животного или хозяина-пациента, которого лечат, конкретного пути введения и тяжести заболевания, подлежащего лечению. Следовательно, практикующий врач, который лечит какое-либо конкретное животное или пациента, может определить оптимальную дозу. Соединения или сокристаллы по настоящему изобретению потенциально представляют ценность в качестве антипролиферативных средств и/или средств, обеспечивающих гибель клеток, при сдерживании распространения и/или лечении гематологических форм рака (также называемых гемобластозами) и заболеваний, связанных с солидными опухолями. В частности, предполагается, что соединения или сокристаллы по настоящему изобретению пригодны в предупреждении или лечении таких опухолей, которые ассоциированы с амплификацией одного или нескольких из семейства ВЕТ бромодоменсодержащих белков, соответственно с амплификацией ВКЭ4, или зависят от ключевых онкогенов, которые можно регулировать с помощью одного или нескольких из семейства ВЕТ бромодоменсодержащих белков, соответственно ВКЭ4, как например, рак яичников, острый миелолейкоз и недифференцированный лейкоз (АМЬ), множественная миелома (ММ), диффузная В-крупноклеточная лимфома (ОБВСЬ), кастрационно-резистентный рак предстательной железы (СКРС), немелкоклеточный рак легкого (Ν8ί.Τί.'). мелкоклеточный рак легкого (8СЬС), рак молочной железы, глиобластома и нейробластома.

Термин терапия предназначен для обозначения своего обычного значения, когда он касается заболевания, для полного или частичного ослабления одного, нескольких или всех его симптомов или для устранения или купирования лежащей в основе патологии. Термин терапия также включает термин профилактика, если нет конкретных указаний об обратном. Термины терапевтический и терапевтически должны интерпретироваться соответствующим образом.

Термин профилактика предназначен для обозначения своего обычного значения и включает первичную профилактику для предупреждения развития заболевания и вторичную профилактику, при которой заболевание уже развилось и пациент временно или постоянно защищен от обострения заболевания или ухудшения заболевания или развития новых симптомов, ассоциированных с заболеванием.

Термин лечение применяют синонимично с терапией. Подобным образом термин лечить можно рассматривать в качестве применение терапии, где терапия определена в данном документе.

Термин эффективное количество относится к количеству соединения формулы (I) или сокристалла, описанных в каком-либо из вариантов осуществления в данном документе, которое является эффективным для потенциального обеспечения терапии субъекта. В случае рака эффективное количество может вызывать какое-либо из изменений, наблюдаемых или измеряемых у субъекта, как описано в определении терапии, лечения и профилактики. Например, эффективное количество может потенциально снижать количество раковых или опухолевых клеток; потенциально снижать общий размер опухоли; потенциально ингибировать или останавливать инфильтрацию опухолевых клеток в периферические органы, включая, например, мягкую ткань и кость; потенциально ингибировать и останавливать метастазы опухолей; потенциально ингибировать и останавливать рост опухолей; потенциально ослаблять до некоторой степени один или несколько симптомов, ассоциированных с раком; потенциально снижать тяжесть заболевания и смертность; потенциально улучшать качество жизни; или обеспечивать комбинацию таких эффектов. Эффективное количество может представлять собой количество, достаточное для уменьшения симптомов заболевания, чувствительного к ингибированию одного или нескольких бромодоменсодержащих белков. Для терапии рака эффективность ίη-νίνο можно измерять, например, с помощью оценки продолжительности поддержания жизнедеятельности, периода время до прогрессирования заболевания (ТТР), значений частоты ответа (КК), продолжительности ответа и/или качества жизни.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение формулы (1):коформер, соответственно сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в терапии.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для изготовления лекарственного препарата.

В соответствии с настоящим изобретением предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в качестве лекарственного препарата у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2

- 14 032654 нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в получении антипролиферативного эффекта или эффекта, вызывающего гибель клеток, у теплокровного животного такого, как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата для применения в получении антипролиферативного эффекта или эффекта, вызывающего гибель клеток, у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, для получения антипролиферативного эффекта или эффекта, вызывающего гибель клеток, у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ получения антипролиферативного эффекта или эффекта, вызывающего гибель клеток, у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в предупреждении или лечении рака у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата для применения в предупреждении или лечении рака у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ предупреждения или лечения рака у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенных выше в данном документе.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в предупреждении или лечении гематологических форм рака (также называемых гемобластозами) и солидных форм рака у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата для применения в предупреждении или лечении гематологических и солидных форм рака у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ предупреждения или лечения гематологических и солидных форм рака у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе.

В одном аспекте настоящего изобретения предусматривают соединения формулы (I), которые потенциально ингибируют один или несколько бромодоменсодержащих белков, т.е. семейство ВЕТ бромодоменсодержащих белков и, например, ВКЭ2, ВКЭ3, ВКЭ4 и ΒΒΌΐ, и соответственно ВКЭ4. Преимущественно такие соединения могут быть пригодными для лечения пролиферативного нарушения, такого как рак, у пациента, где пролиферативное нарушение является нарушением, опосредованным бромодоменсодержащим белком. Под нарушением, опосредованным бромодоменсодержащим белком подразумевают какое-либо заболевание или другое болезнетворное состояние, при которых известно, что один или несколько бромодоменсодержащих белков выполняют определенную функцию.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в предупреждении или лечении ВЕТ-зависимого рака у теплокровного животного, такого как человек.

Под ВЕТ-зависимым раком понимают какую-либо форму рака, при которой определенную функцию выполняют один или несколько из семейства ВЕТ бромодоменсодержащих белков, таких как ВКЭ2,

- 15 032654

ВВОЗ, ΒΒΌ4 и ΒΒΌΐ.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в предупреждении или лечении ВВО4-зависимого рака у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата для применения в предупреждении или лечении ВЕТ-зависимого рака у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата для применения в предупреждении или лечении ВВЭ4-зависимого рака у теплокровного животного, такого как человек.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ предупреждения или лечения ВЕТ-зависимого рака у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ предупреждения или лечения ВВЭ4-зависимого рака у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в обеспечении ингибиторного эффекта в отношении одного или нескольких из семейства ВЕТ бромодоменсодержащих белков.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота, определенные выше в данном документе, для применения в обеспечение ингибиторного эффекта в отношении ВВЭ4.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата для применения в обеспечении ингибиторного эффекта в отношении одного или нескольких из семейства ВЕТ бромодоменсодержащих белков.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе, при изготовлении лекарственного препарата для применения в обеспечении ингибиторного эффекта в отношении ВВЭ4.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ обеспечения ингибиторного эффекта в отношении одного или нескольких из семейства ВЕТ бромодоменсодержащих белков, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают способ обеспечения ингибиторного эффекта в отношении ВВЭ4, который включает введение указанному животному эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных выше в данном документе.

Сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота может находиться в форме А, В или С, как определено в данном документе, и, соответственно, в форме А.

Противораковое лечение, описанное в данном документе, может быть применено в виде монотерапии или может включать, в дополнение к соединениям по настоящему изобретению, традиционные хирургическое вмешательство, или лучевую терапию, или химиотерапию, или иммунотерапию. Такую химиотерапию можно вводить совместно, одновременно, последовательно или раздельно с лечением соединением по настоящему изобретению.

Если применяют комбинированную терапию, количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, описанных в настоящем описании, и количество другого (других) фармацевтически активного (активных) сред

- 16 032654 ства (средств) при объединении являются совместно эффективными для лечения целевого нарушения у пациента-животного. В данном контексте объединенные количества представляют собой терапевтически эффективное количество, если при объединении их достаточно для снижения интенсивности симптомов заболевания, чувствительного к ингибированию одного или нескольких бромодоменсодержащих белков. Как правило, такие количества могут быть определены специалистом в данной области, например, исходя из диапазона доз, описанного в настоящем описании, для соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенных в данном документе, и утвержденного (утвержденных) или иным способом опубликованного (опубликованных) диапазона (диапазонов) доз другого (других) фармацевтически активного (активных) соединения (соединений).

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предусматривают фармацевтический продукт, содержащий соединение формулы (I) и дополнительное противоопухолевое вещество, для совместного лечения рака.

В таком аспекте настоящего изобретения предусматривают фармацевтический продукт, содержащий соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, определенные выше в данном документе, и дополнительное противоопухолевое средство, для совместного лечения рака.

В таких аспектах фармацевтический продукт содержит соединение формулы (I) и коформер в форме сокристалла.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предусматривают фармацевтический продукт, содержащий сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота, определенный выше в данном документе, и дополнительное противоопухолевое вещество, для совместного лечения рака.

Такое совместное лечение может включать одно или несколько из следующих противоопухолевых средств:

(ί) антипролиферативные/антинеопластические лекарственные средства и их комбинации, применяемые в терапевтической онкологии, такие как алкилирующие средства (например, цис-платин, оксалиплатин, карбоплатин, циклофосфамид, азотистый иприт, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, темозоломид и нитрозомочевины); антиметаболиты (например, гемцитабин и антифолаты, такие как фторпиримидины, например 5-фторурацил, пеметрексед и тегафур, ралтитрексед, метотрексат, цитозина арабинозид и гидроксимочевина); противоопухолевые антибиотики (например, антрациклины, например адриамицин, блеомицин, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин и митрамицин) и ингибиторы топоизомеразы (например, эпиподофиллотоксины, например этопозид и тенипозид, амсакрин, топотекан, и камптотецин, и иринотекан); ингибиторы механизмов репарации ДНК, такие как киназа СНК; ингибиторы ДНК-зависимой протеинкиназы; ингибиторы поли(АЭРрибоза)полимеразы (ингибиторы РАКР, включая олапариб) и ингибиторы Н§р90, такие как танеспимицин и ретаспимицин;

(й) соединения, которые ингибируют прогрессирование путем контроля клеточного цикла, такие как антимитотические средства (например, алкалоиды винка, например винкристин, винбластин, виндезин и винорелбин; эпотилоны, такие как иксабепилон и патупилон; таксоиды, например таксол, таксотер и доцетаксел; ингибиторы ро1о-подобной киназы и ингибиторы двигательных белков-кинезинов, такие как ингибиторы белка Ед5); ингибиторы киназы аигога (например, ΑΖΌ1152, РН739358, УХ-680, ΜΕΝ8054, К.763. МР235, МР529, УХ-528 и АХ39459); ингибиторы циклин-зависимой киназы, такие как ингибиторы ί.ΌΙ<2 и/или ингибиторы СЭК4, и ингибиторы функции центромерных белков, такие как ингибиторы ΟΕΝΡ-Ε;

(ίίί) цитостатические средства, которые изменяют гормонозависимый рост, такие как антиэстрогены (например, тамоксифен, фулверстрант, торемифен, ралоксифен, дролоксифен и иодоксифен), антиандрогены (например, бикалутамид, флутамид, нилутамид и ципротерона ацетат), антагонисты ЬНКН или агонисты ЬНКН (например, гозерелин, лейпрорелин и бусерелин), прогестогены (например, мегестрола ацетат), ингибиторы ароматазы (например, анастрозол, летрозол, воразол и эксеместан); ингибиторы 5аредуктазы, такие как финастерид и ингибиторы СУР17А1, такие как абиратерон;

(ίν) антиинвазивные средства, например, ингибиторы киназ семейства с-8тс, например ΑΖΌ0530 (саракатиниб); дазатиниб ((ΒΜ8-354825), 1. Меб. Сйет., 2004, 47, 6658-6661) и бозутиниб (8ΚΕ606) и ингибиторы металлопротеиназы, например маримастат, ингибиторы функции рецептора активатора плазминогена урокиназного типа или антитела к гепараназе; ингибиторы ΕΑΚ, или киназы фокальной адгезии; низкомолекулярные ингибиторы рецепторной киназы МЕТ (например, волитиниб/ΑΖ^6904); антитела к рецепторной киназе МЕТ или лиганду МЕТ, фактору роста гепатоцитов (например, онартузумаб);

(ν) ингибиторы функции фактора роста: например, такие ингибиторы включают антитела к фактору роста и антитела к рецептору фактора роста (например, антитело к егЬВ2, трастузумаб [Нетсерйи™], антитело к ЕСЕК, панитумумаб, антитело к егЬВ1, цетуксимаб [ЕтЬйих, С225], и антитела к какому-либо фактору роста или к рецептору фактора роста, раскрытые в 81егп е1 а1., Спбса1 ге\зе\\ъ ίη опсо1оду/йаета1о1оду, 2005, Уо1. 54, р. 11-29); такие ингибиторы также включают ингибиторы тирозинкиназы, например ингибиторы семейства эпидермального фактора роста, например ингибиторы тирозинкиназы

- 17 032654 семейства Ε6ΕΚ, такие как гефитиниб (ΖΌ1839), эрлотиниб (Θ8Ι-774) и С11033, ингибиторы тирозинкиназы егЬВ2, такие как лапатиниб; комбинированные ингибиторы егЬВ 1/2, такие как афатаниб; и необратимо действующие ингибиторы Ε6ΡΒ и Нег2, такие как ΗΚΙ-272, необратимо действующие ингибиторы ЕСЕК, такие как ΆΖΌ9291; ингибиторы членов семейства фактора роста гепатоцитов и их рецепторов; ингибиторы семейства факторов роста инсулинового типа, включая низкомолекулярные ингибиторы киназ и антитела, направленные на инсулиноподобные факторы роста и рецепторы инсулиноподобных факторов роста; ингибиторы членов семейства тромбоцитарного фактора роста и их рецепторов, такие как иматиниб и/или нилотиниб (ΑΜΝ107); ингибиторы с-кй, ингибиторы АиЬК, ингибиторы киназы Е113, ингибиторы киназы с-аЬ1, и ингибиторы киназы С8Е-1К или киназы ТКК;

(νί) ингибиторы киназ, участвующих в сигнальной трансдукции, например киназ ЕСЕК (например, ΑΖΌ4547), ΡΙΜ (например, ΑΖΌ1208), МЕК (например, селуметиниб (ΑΖΌ6244), АКТ (например, ΑΖΌ5363), ингибиторы киназ ТОК (включая ТОКС1 и ТОКС2, например ΑΖΌ2014) и ингибиторы киназы ΡΙ3, включая изоформы, такие как ΡΙ3Κ-α, ΡΙ3Κ-β или ΡΙ3Κ-δ (например, ΑΖΌ8186); ингибиторы серин/треонинкиназ, таких как киназы Как или КаЕ (например, сорафениб или вемурафениб); ингибиторы ΡΌΚ, 8С1<, ΡΙ4Κ или ΡΙΡ5Κ, 1ΑΚ, 8ТΑТ (включая 8ТΑТ3, ингибитором которого является ΑΖΌ9150) и ΙΗΑΚ4; ингибиторы Α^ (например, ΑΖΌ6738) или ингибиторы ΑТΜ; ингибиторы ВТК, такие как ибрутиниб, ингибиторы 8ΎΚ, такие как фостаматиниб, и ингибиторы циклин-зависимой киназы; ингибиторы фарнезилтрансферазы, такие как типифарниб (К115777), лонафарниб (8СН66336) и ингибиторы киназы Аее-ΐί (например, ΑΖΌ1775, как описано в АО 2007/126128);

(νίί) антиангиогенные средства, такие как антиангиогенные средства, которые ингибируют эффекты фактора роста эндотелия сосудов, например антитело к фактору роста клеток эндотелия сосудов, бевацизумаб (ΑνηΛιη™), и, например, ингибитор рецепторной тирозинкиназы УЕСЕ, такой как вандетаниб (ΖΌ6474), сорафениб, ваталаниб (РТК787), сунитиниб (8Ш1248), акситиниб (Α^013736), пазопаниб (СА 786034) и цедираниб (ΑΖΌ2171), соединения, такие как соединения, раскрытые в АО 97/22596, АО 97/30035, АО 97/32856 и АО 98/13354, и соединения, которые действуют посредством других механизмов (например, линомид, ингибиторы функции интегрина аνβ3 и ангиостатин);

(νίίί) средства, повреждающие сосуды, такие как комбретастатин А4, и соединения, раскрытые в АО 99/02166, АО 00/40529, АО 00/41669, АО 01/92224, АО 02/04434 и АО 02/08213;

(ίχ) антисмысловые терапевтические препараты, например антисмысловые терапевтические препараты, которые направлены на мишени, перечисленные выше, такие как Ι8Ι8 2503, антисмысловой олигомер к так;

(х) подходы генной терапии, включая, например, подходы для замены аберрантных генов, таких как аберрантный р53 или аберрантные ΒΒί.Ά1 или ΒΡΕΆΣ, подходы СЭЕГТ (ген-направленная ферментная терапия с применением пролекарств), такие как подходы, в которых применяют цитозиндезаминазу, тимидинкиназу или бактериальный фермент нитроредуктазу, и подходы для повышения переносимости пациентом химиотерапии или лучевой терапии, такие как генная терапия при множественной лекарственной устойчивости;

(χί) подходы иммунотерапии, включая, например, подходы ех-νίνο и ίη-νίνο для повышения иммуногенности опухолевых клеток пациента, такие как трансфекция цитокинами, такими как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор; подходы для снижения Т-клеточной анергии или функции регуляторных Т-клеток; подходы, которые обеспечивают усиление ответных реакций Т-клеток на опухоли, например, блокирующие антитела к ΟΓΕΑ4 (например, ипилимумаб и тремелимумаб), В7Н1, ΡΌ-1 (например, ΒΜ8-936558 или ΜΕΌΙ-4736) и антителаагонисты к СО137; подходы с применением трансфицированных иммунных клеток, таких как цитокинтрансфицированные дендритные клетки; подходы с применением цитокин-трансфицированных опухолевых клеточных линий, подходы с применением антител к антигенам, ассоциированным с опухолями, и антител, которые обеспечивают уменьшение количества типов целевых клеток (например, неконъюгированных антител к СО20, таких как ритуксимаб, меченых радиоактивным изотопом антител к 0020, бекксар и зевалин, и антитела к СО54, кампат); химиотерапия по схеме К-СНОР (ритуксимаб вместе с циклофосфамидом, гидрохлоридом доксорубицина, сульфатом винкристина и преднизоном); подходы с применением антиидиотипических антител; подходы, которые обеспечивают усиление функции естественной клетки-киллера, и подходы, в которых используют конъюгаты антитело-токсин (например, антитело к СО33, милотарг); иммунотоксины, такие как моксетумумаб пасудотокс; агонисты толл-подобного рецептора 7 или толл-подобного рецептора 9;

(χίί) ингибиторы деградации белков, опосредованной протеасомой, включая без ограничения ингибиторы протеасом, такие как Уе1са4е (бортезомиб) или карфилзомиб, ингибиторы убиквитинлипаз, ингибиторы убиквитинпротеаз, ингибиторы неддилирования белка и ингибиторы сумоилирования белка, и (χίίί) другие стандартные средства лечения, такие как циклофосфамид, преднизон, леналидомид или талидомид.

В соответствии с данным аспектом настоящего изобретения предусматривают комбинацию, подходящую для применения в лечении рака, содержащую соединение формулы (Ι) или его фармацевтически

- 18 032654 приемлемую соль и дополнительное противоопухолевое средство, в частности, какое-либо средство из противоопухолевых средств, перечисленных в пунктах (ί)-(χίίί) выше.

В соответствии с данным аспектом настоящего изобретения также предусматривают комбинацию, подходящую для применения в лечении рака, содержащую сокристалл соединение А:6-гидрокси-2нафтойная кислота и дополнительное противоопухолевое средство, в частности, какое-либо средство из противоопухолевых средств, перечисленных в пунктах (ί)-(χίίί) выше.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предусматривают соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с дополнительным противоопухолевым средством, в частности, противоопухолевым средством, выбранным из средств, перечисленных в пунктах (ί)-(χίίί) выше.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предусматривают сокристалл соединение А:6гидрокси-2-нафтойная кислота в комбинации с дополнительным противоопухолевым средством, в частности, противоопухолевым средством, выбранным из средств, перечисленных в пунктах (ί)-(χίίί) выше.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают набор, содержащий соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота в комбинации с противоопухолевым средством. В определенных вариантах осуществления набор дополнительно содержит инструкции по применению указанного (указанных) соединения (соединений) или сокристалла.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предусматривают набор, содержащий:

a) соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или сокристалл соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота в первой единичной лекарственной форме;

b) дополнительное противоопухолевое средство во второй единичной лекарственной форме и

c) средство-контейнер для содержания указанных первой и второй лекарственных форм.

Настоящее изобретение далее будет проиллюстрировано в следующих примерах, в которых, как правило, придерживались следующего.

(ί) Значения температуры приведены в градусах по Цельсию (°С); если не указано иное, действия осуществляли при комнатной температуре или температуре окружающей среды, т.е. при температуре в диапазоне 18-25°С.

(ίί) Органические растворы высушивали над безводным сульфатом магния или безводным сульфатом натрия; выпаривание растворителя осуществляли с применением роторного испарителя при пониженном давлении (600-4000 Па; 4,5-30 мм рт. ст.) с температурой бани не более 60°С.

(ш) Хроматография означает флэш-хроматографию на силикагеле; тонкослойную хроматографию (ТЬС) осуществляли на пластинках с силикагелем.

(ίν) Как правило, за ходом реакций следили с помощью ТЬС и/или аналитической БС-М8, и если приведены периоды времени реакции, то они приведены лишь для иллюстрации.

(ν) Конечные продукты характеризовались удовлетворительными данными спектров протонного ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и/или данными масс-спектров.

(νί) Значения выхода приведены лишь для иллюстрации и не обязательно являются значениями, которые можно получить при тщательной разработке способа; получение повторяли, если требовалось больше материала.

(νίί) Если приведены, данные ЯМР представлены в форме значений дельта для основных диагностических протонов, приведенных в частях на миллион (ррт) относительно тетраметилсилана (ТМ8) в качестве внутреннего стандарта, определенных при 300, 400 или 500 МГц с применением пердейтеродиметилсульфоксида (ΌΜ8Θ-ά₆) в качестве растворителя, если не указано иное; были применены следующие сокращения: 8, синглет; ά. дублет; ΐ, триплет; с.|. квартет; т, мультиплет; Ьб, широкий синглет; άά, двойной дублет; ΐά, тройной дублет; ςά, квартет дублетов.

(νίίί) Для углерода (¹³С) ЯМР-анализ твердого тела с кроссполяризацией и вращением под магическим углом осуществляли по примеру 1, спектры сокристалла, свободного основания соединения А и коформера регистрировали на ЯМР-спектрофотометре Вгикег Ауапсе, эксплуатируемом при частоте Н, составляющей 400 МГц. Образцы вращали приблизительно под магическим углом при частоте 9 кГц и использовали контактный импульс 2 мс для обеспечения переноса намагниченности от протона к углероду. Применяли задержку между циклами, составляющую 5 с, для обеспечения спин-решеточной релаксации.

(ίχ) Для азота (¹⁵Ν) ЯМР-анализ твердого тела с кроссполяризацией и вращением под магическим углом осуществляли по примеру 1, спектры сокристалла регистрировали на ЯМР-спектрофотометре Вгикег Луапсе, эксплуатируемом при частоте ¹Н, составляющей 400 МГц. Образцы вращали приблизительно под магическим углом при частоте 5 кГц и использовали контактный импульс 200 мкс и 2 мс для обеспечения переноса намагниченности от протона к углероду. Применяли задержку между циклами, составляющую 5 с, для обеспечения спин-решеточной релаксации.

(х) Химические символы имеют их обычные значения; применяют единицы и символы системы 8Г (χί) Масс-спектры (М8) и данные БС-М8 получали на ЬС-М8-системе, где НРЬС-компонент вклю

- 19 032654 чал, как правило, либо оборудование Адйеп! 1100, \Уа1сг5 АШапсе НТ (2790 & 2795), либо насос НР 1100 и диодную матрицу с устройством автоматического отбора проб СТС, и работали на колонке Рйепотепех Сет1П1 С18 5 мкм, 50x2 мм (или подобной) с элюированием посредством либо кислотного элюента (например, с применением градиента 0-95% вода/ацетонитрил с 5% 1%-й муравьиной кислоты в смеси 50:50 вода:ацетонитрил (об./об.)), либо основного элюента (например, с применением градиента 0-95% вода/ацетонитрил с 5% 0,1%-го аммиака 880 в смеси с ацетонитрилом); и М8-компонент включал, как правило, масс-спектрометр \Уа1ег5 ΖΟ. осуществляющий сканирование в соответствующем диапазоне массовых чисел. Получены хроматограммы для электрораспыления (ЕМ) с указанием интенсивности положительного и отрицательного основного пика и хроматограмма полного поглощения УФ при 220300 нм и приведены значения масса/заряд; как правило, описаны лишь ионы, которые указывают на массу недиссоциированной молекулы, и, если не указано иное, выражаемым значением является (М+Н)⁺ для режима детекции положительно заряженных ионов и (М-Н)^- для режима детекции отрицательно заряженных ионов.

(хл) Если не указано иное, соединения, содержащие асимметрично замещенный атом углерода не были разделены.

(χίίί) Препаративную высокоэффективную жидкостную хроматографию (НРЬС) осуществляли с помощью устройства ОНкоп с применением следующих условий: колонка: С18 диоксид кремния с обращенной фазой, например, ХЬпйде от ^а1ег8, диоксид кремния 5 мкм, 19x100 мм, или 30x100 мм, с применением смесей растворителей с уменьшающейся полярностью в качестве элюента (уменьшающееся соотношение растворителя А и растворителя В); растворитель А: вода с 1% гидроксидом аммония; растворитель В: ацетонитрил; расход: 28 мл/мин, или 61 мл/мин; градиент: индивидуально для каждого соединения, как правило, продолжительностью 7-10 мин; длина волны: 254 нм.

(χίν) Хроматографию с сильным катионным обменом (8СХ) осуществляли на предварительно заполненных картриджах (например, картриджах КОШТЕ 8СХ-2 на основе пропилсульфоновой кислоты, поставляемых ИНетаОопа! 8огЬеп1 Тес1то1оду) с применением основного элюента (например, 1 М аммиака в метаноле).

(χν) Следующие сокращения были использованы в данном документе, если необходимо:

ΑΌΌΡ: 1,1 '-(азодикарбонил)дипиперидин;

ЭСМ: дихлорметан;

ΌΚΕΑ: Ν,Ν-диизопропилэтиламин;

ΌΜΑ: Ν,Ν-диметилацетамид;

ΌΜΡ: Ν,Ν-диметилформамид;

ΌΜΕ: диметоксиэтан;

ΌΜ8Ο: диметилсульфоксид;

Е1₂О: диэтиловый эфир;

ЕЮАс: этилацетат;

ЕЮН: этанол;

НРЬС: высокоэффективная жидкостная хроматография;

МеОН: метанол;

Мд8О₄: сульфат магния;

МТВЕ: метил-трет-бутиловый эфир;

ΝΜΚ: ядерный магнитный резонанс;

8СХ: сильный катионный обмен;

ТЕА: трифторуксусная кислота;

ТНЕ: тетрагидрофуран.

(χνίί) Для анализа ХЕРЭ из примера 1 образец закрепляли с помощью крепления с кремнийсодержащей подложкой и анализировали с применением дифрактометра СиЫХ РКО от РАЫа1уйса1. Образцы измеряли в отношении геометрии отражения в конфигурации θ-2θ диапазоне сканирования от 2 до 40° 2Θ с номинальной выдержкой 25 с на шаг 0,02°. Образец вращали при 30 об/мин (для улучшения статистики подсчета) и облучали рентгеновским излучением, генерируемым медной длинной острофокусной трубкой, эксплуатируемой при 45 кВ и 40 мА и длине волны 1,5418 А. Специалистам в области порошковой рентгеновской дифракции будет понятно, что на относительную интенсивность пиков могут влиять, например, зерна с размером более 30 микрон и неунитарными соотношениями сторон, которые могут влиять на анализ образцов. Специалисту в данной области также будет понятно, что на положение отражений могут влиять точная высота, на которой находится образец в дифрактометре, и калибровка нуля дифрактометра. Плоскостность поверхности образца также может оказывать незначительный эффект. Следовательно, представленные данные дифрактограммы не следует принимать как абсолютные значения.

(χνίίί) Дифференциальная сканирующая калориметрия: аналитическое устройство: 01000 Э8С от ТА ШйгитепК

Как правило, менее 5 мг материала, содержащегося в стандартном алюминиевом тигле, оснащен

- 20 032654 ном крышкой, нагревали в диапазоне температур от 25 до 300°С при постоянной скорости нагрева, составляющей 10°С/мин. Применяли газ для продувки с применением азота; расход 50 мл/мин.

Пример 1. Получение формы А (Κ)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-она

К суспензии 4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенола (67,5 г, 207,46 ммоль) в дегазированном надлежащим образом, безводном БСМ (1,7 л) при 5°С под азотом порциями добавляли трибутилфосфин (102 мл, 414,92 ммоль). Смесь охлаждали до 0°С и порциями добавляли (Е)-диазен-1,2-диил-бис-(пиперидин-1-ил-метанон) (105 г, 414,92 ммоль). Затем по каплям добавляли раствор (Κ)-4-(2-гидроксиэтил)-1,3-диметилпиперазин-2-она (46,4 г, 269,70 ммоль) в БСМ (200 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и фильтровали. Чистый раствор разбавляли с помощью дополнительного количества БСМ (1 л) и затем подкисляли с помощью 2 М НС1 (400 мл) и добавляли воду (400 мл). Объединенный водный раствор промывали с помощью БСМ (3x1 л) и затем ЕЮАс (1 л). Затем повышали основность водного раствора с помощью твердого №₂СО₃ до рН ~10 и экстрагировали с помощью БСМ (3x1,5 л). Объединенный органической раствор промывали водой (500 мл) и насыщенным солевым раствором (500 мл), затем высушивали над М§ЗО₄ и выпаривали до сухого состояния с получением неочищенного материала. Полученное очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния с элюированием с помощью смеси ЕЮН:ЕЮАс:гептан:КН₃(водн.) 1,8:4:4:0,2. Фракции, содержащие необходимый продукт, выпаривали до сухого состояния с получением пены желтого цвета. Полученное дополнительно очищали с помощью препаративной НЕБС (колонка СЫга1рак А8, диоксид кремния 20 мкм, диаметр 100 мм, длина 250 мм), гептан/ЕЮН 50/50 при 400 мл/мин. Фракции, содержащие необходимый продукт, выпаривали до сухого состояния и полученное твердое вещество перемешивали в виде суспензии в диэтиловом эфире (300 мл) в течение 18 ч, фильтровали и высушивали с получением (Κ)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-она (69 г, 69,4%) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета.

‘Н ЯМР (400 МГц, Г)М8О, 30°С) 1,22 (3Н, 4), 1,62 (2Н, ςά), 1,82 (2Н, 4), 2,6-2,79 (3Н, т), 2,79 (3Н, 5), 2,85-3,09 (4Н, т), 3,13 (1Н, ς), 3,2-3,26 (2Н, т), 4,03 (2Н, I), 4,17 (3Н, 8), 4,28 (2Н, ά), 6,85 (2Н, ά), 7,15 (2Н, ά), 7,29 (1Н, ά), 7,85 (1Н, ά).

Масса/заряд Е8+ [М+Н]⁺=480.

4-(1-(3-Метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенол, применяемый в качестве исходного материала, получали, как описано далее.

Получение бензил-4-(трифторметилсульфонилокси)-5,6-дигидропиридин-1 (2Н)-карбоксилата

о

Раствор бензил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (88,57 г, 379,70 ммоль) в ТНР (300 мл) добавляли по каплям к бис-(триметилсилил)амиду лития (1 М в ТНР) (418 мл, 417,67 ммоль) при -78°С под азотом в течение периода, составляющего 1 ч. Полученную смесь перемешивали при -78°С в течение 90 мин, затем в течение периода, составляющего 1 ч, по каплям добавляли раствор 1,1,1-трифтор Ν-фенил-Ж (трифторметилсульфонил)метансульфонамида (142 г, 398,68 ммоль) в ТНР (600 мл). Полученную смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин, затем обеспечивали нагревание до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили с помощью 2 М водного раствора гидроксида натрия (450 мл). Слои разделяли и органический слой промывали 2 М водным раствором гидроксида натрия (360 мл). Растворитель выпаривали, затем остаток повторно растворяли в Е1₂О (1500 мл) и раствор промывали водой (500 мл) Органический слой высушивали над М§ЗО₄, фильтровали и выпаривали с получением бензил-4-(трифторметилсульфонилокси)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата (124 г, 81%) в виде бесцветного масла.

‘Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О, 30°С) 2,43 (2Н, т), 3,62 (2Н, т), 4,06 (2Н, т), 5,10 (2Н, 8), 6,02 (1Н, т), 7,34 (5Н, т).

Получение бензил-4-(4-гидроксифенил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата

- 21 032654

К бензил-4-(трифторметилсульфонилокси)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилату (123,1 г, 303,26 ммоль) и 4-гидроксифенилбороновой кислоте (46,0 г, 333,59 ммоль) в смеси диоксана (1000 мл) и воды (250 мл) добавляли карбонат натрия (96 г, 909,79 ммоль). Полученную смесь барботировали азотом в течение 10 мин, затем добавляли 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцендихлорпалладий(11) (5,49 г, 7,58 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляли с помощью ОСМ (2 л) и промывали водой (2 л). Водный слой повторно экстрагировали с помощью ОСМ (1 л), затем объединенные органические вещества промывали насыщенным солевым раствором (500 мл), высушивали над Мд8О₄, фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 10-30% ЕЮАс в изогексане. Фракции, содержащие необходимый продукт, выпаривали до сухого состояния, затем растирали с помощью изогексана, фильтровали и высушивали с получением бензил-4-(4гидроксифенил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата (62,3 г, 66,4%) в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ80, 30°С) 2,44 (2Н, т), 3,61 (2Н, т), 4,05 (2Н, т), 5,12 (2Н, §), 5,99 (1Н, т), 6,73 (2Н, ά), 7,26 (2Н, ά), 7,32-7,40 (5Н, т), 9,45 (1Н, §).

Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=310.

Получение 4-(пиперидин-4-ил)фенола

Бензил-4-(4-гидроксифенил)-5,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилат (37,7 г, 121,86 ммоль) и 5% палладий на угле (7,6 г, 3,57 ммоль) в МеОН (380 мл) перемешивали в атмосфере водорода при 5 бар и 25°С в течение 2 ч. Катализатор удаляли посредством фильтрования, промывали с помощью МеОН и растворители выпаривали. Неочищенный материал растирали с помощью Εί₂Ο (200 мл), затем необходимый продукт собирали посредством фильтрования и высушивали под вакуумом с получением 4(пиперидин-4-ил)фенола (20,36 г, 94%) в виде твердого вещества белого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο, 30°С) 1,46 (2Н, т), 1,65 (2Н, т), 2,45 (1Н, т), 2,58 (2Н, т), 3,02 (2Н, т), 6,68 (2Н, ά), 7,00 (2Н, ά), 9,15 (1Н, δ).

Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=178.

Получение 4-(пиперидин-4-ил)фенола гидробромида

К суспензии 4-(пиперидин-4-ил)фенола (0,4 г, 2,26 ммоль) в ТНЕ (23 мл) по каплям добавляли бромоводород (48% в воде) (0,283 мл, 2,48 ммоль). Полученную суспензию перемешивали в течение 30 мин. Твердое вещество собирали посредством фильтрования, промывали с помощью ТНЕ (20 мл) и высушивали под вакуумом с получением 4-(пиперидин-4-ил)фенола гидробромида (0,580 г, 100%) в виде порошка белого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ, 30°С) 1,74 (2Н, ςά), 1,86 (2Н, б), 2,71 (1Н, ίί), 2,96 (2Н, ίά), 3,33 (2Н, ά), 6,68-6,73 (2Н, т), 6,97-7,02 (2Н, т), 8,48 (2Н, Ьгз), 9,18 (1Н, Ьгз).

Получение 6-хлор-3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазина

3-Хлор-6-гидразинилпиридазин (18 г, 124,51 ммоль) суспендировали в ОМЕ (330 мл) и обрабатывали с помощью тетраметоксиметана (26,5 мл, 199,22 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 90°С в течение 3 ч. ОМЕ выпаривали и остаток растворяли в 5% МеОН/ОСМ и затем фильтровали через тампон из диоксида кремния. Фильтрат выпаривали до сухого состояния и затем поглощали в МТВЕ (200 мл) и суспендировали в течение 1 ч. Твердое вещество отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 6-хлор-3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазина (19,78 г, 86%) в виде порошка кремового цвета.

Ή ЯМР (400 МГц, ГМ8О. 30°С) 4,25 (3Н, δ), 7,30 (1Н, ά), 8,22 (1Н, ά).

- 22 032654

Масса/заряд: Ε8+ [М+Н]⁺=185.

Получение 4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенола

К 4-(пиперидин-4-ил)фенола гидробромиду (18,4 г, 71,28 ммоль) в ΕΐΘΗ (200 мл) добавляли 6-хлор3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин (19,73 г, 106,91 ммоль). К данной смеси добавляли ΌΙΡΕΆ (62,2 мл, 356,38 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 55°С в течение 18 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и выливали в интенсивно перемешиваемую воду (1600 мл) и перемешивали интенсивно в течение 2 ч. Твердый осадок отфильтровывали и последовательно промывали с помощью Н₂О (200 мл) и Εΐ₂Θ (200 мл). Полученное твердое вещество высушивали под вакуумом с получением 4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенола (15,30 г, 66,0%) в виде твердого вещества бледно-коричневого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ, 30°С) 1,59 (2Н, ςά), 1,81 (2Н, ά), 2,67 (1Н, άάΐ), 2,9-3,02 (2Н, т), 4,17 (3Н, 8), 4,23-4,31 (2Н, т), 6,63-6,71 (2Н, т), 7,02 (2Н, άά), 7,29 (1Н, ά), 7,84 (1Н, ά), 9,14 (1Н, з).

Масса/заряд Ε8+ [М+Н]⁺=326.

(Κ)-4-(2-гидроксиэτил)-1,3-димеτилпиперазин-2-он, применяемый в качестве исходного материала, получали, как описано далее.

Получение (Κ)-4-(2-ι идроксиэтил)-1,3-диметилпиперазин-2-она

К смеси (1<)-Е3-диметил11и11ерази11-2-она гидрохлорида (50 г, 303,71 ммоль) и карбоната калия (126 г, 911,12 ммоль) в 2-метилтетрагидрофуране (500 мл) добавляли 2-бромэтанол (108 мл, 1518,54 ммоль). Смесь перемешивали при 100°С в течение 16 ч. Смесь фильтровали и выпаривали до сухого состояния с получением неочищенного продукта. Полученное очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием с помощью 1-5% МеОН в ЭСМ и чистые фракции объединяли и выпаривали до сухого состояния с получением (Κ)-4-(2-гидроксиэтил)-1,3-диметилпиперазин-2-она (36,0 г, 68,8%) в виде масла тускло-желтого цвета.

Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8О, 30°С) 1,19 (3Н, ά), 2,42 (1Н, άΐ), 2,59 (2Н, «), 2,79 (3Н, з), 2,93-3,1 (2Н, т), 3,17-3,25 (2Н, т), 3,47 (2Н, ς), 4,41 (1Н, I).

Конечный продукт, (Κ)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он, анализировали с помощью ΧΚΡΌ и Э8С и устанавливали, что он являлся кристаллическим. ΧΚΡΌ образца материала приводила к получению дифрактограммы, показанной на фиг. А. Форма А (Κ)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)- 1 ,3-диметилпиперазин-2-она характеризуется по меньшей мере одним пиком при значении 2Θ 20,9 или 16,7°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.

Десять наиболее выраженных пиков ΧΚΡΌ показаны в табл. А.

Таблица А

Десять наиболее выраженных пиков ΧΚΡΌ для формы А (Κ)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-она

Угол 2-тета (2θ)	Интенсивность %
20,9	100,0
16,7	53,4
20,2	38,1
21,2	27,2
27,4	26,5
18,0	23,4
16,8	20,0
23,6	18,1
15,1	14,2
15,5	13,9

В таблице значения 2-тета (2Θ) составляют ±0,2°.

- 23 032654

Анализ с применением дифференциальной сканирующей калориметрии (Э8С) формы А (К)-4-(2-(4(1-(3 -метокси[ 1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3диметилпиперазин-2-она продемонстрировал эндотерму плавления с началом при 106,4°С и пиком при 111,2°С. Кривая Э8С показана на фиг. В.

Пример 1.1. Получение формы А сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1)

В круглодонную колбу, содержащую 10 мл метанола, добавляли примерно 3 г формы А (К)-4-(2-(4(1-(3 -метокси[ 1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3диметилпиперазин-2-она. Затем в круглодонную колбу по каплям добавляли отдельный раствор, содержащий 1 мол.экв. (1,18 г) 6-гидрокси-2-нафтойной кислоты в 5 мл метанола, и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. На следующий день материал фильтровали и промывали метанолом (5 мл). Выделенное твердое вещество высушивали на воздухе и затем перемещали в вакуумную печь, где его дополнительно высушивали в течение ночи при 50°С. Сокристалл (К)-4-(2-(4(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) получали в виде твердого вещества грязно-белого цвета. Данную форму определяли как кристаллическую с помощью ХКРЭ.

Данный материал анализировали с помощью ХКРЭ и Э8С. ХКРЭ образца материала приводила к получению дифрактограммы, показанной на фиг. С. Форма А сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) характеризуется по меньшей мере одним пиком при значении 2Θ 19,5 или 12,5°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения. Десять наиболее выраженных пиков ХКРЭ показаны в табл. В.

Таблица В Десять наиболее выраженных пиков ХКРЭ для формы А сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-

В таблице значения угла 2-тета (2Θ) составляют ±0,2°.

Анализ с применением дифференциальной сканирующей калориметрии (Э8С) формы А сокристалла (К)-4-(2-(4-( 1 -(3 -метокси[ 1,2,4]триазоло[4,3 -Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) продемонстрировал эндотерму плавления с началом при 186,3°С и пиком при 188,3°С. Кривая Э8С показана на фиг. Ό.

Сокристаллы можно определять по показателю АрКа, т.е. (рКа(основания)-рКа(кислоты)). Если АрКа составляет < 1, молекулярный комплекс АРЕкоформер классифицируют как сокристалл. (Кеди1а1огу С1а881йсайоп ок РЬагшасеийса1 Со-Сгу81а1з, И8 ЕОА Ошбапсе, Арп1 2013). рКа для основного центра на пиперазиноне в соединении А был определен как 4,8, а рКа для молекулы коформера, 6-гидрокси-2нафтойной кислоты, составлял 4,3, что давало показатель АрКа, составляющий <1, и, следовательно, соответствовало образованию сокристалла.

¹³С ЯМР-анализ твердого тела с кроссполяризацией и вращением под магическим углом осуществляли в отношении конечного продукта из примера 1.1, (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-она с коформером, 6гидрокси-2-нафтойной кислотой. Спектры показаны на фиг. Е. Нижний спектр на фиг. Е (т.е. продукта из примера 1.1) не являлся объединением спектров (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-она (средний спектр) и коформера (верхний спектр). На верхнем спектре присутствовал пик приблизительно при 172 ррт, относящийся к полностью протонированной карбоновой кислоте в коформере (если карбоновая кислота в коформере не является протонированной, то пик можно было бы ожидать при 177 ррт, а не при 172 ррт). На среднем спектре присутствовал пик приблизительно при 169 ррт, относящийся к карбонилу в

- 24 032654 (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3диметилпиперазин-2-оне. На спектре для продукта из примера 1.1 присутствовало 3 пика на участке карбонила, которые не соответствовали пикам на верхнем или среднем спектрах. Кроме того, на данном спектре не было пика при 177 ррт. Можно было ожидать, что такой пик присутствует, если карбоновая кислота коформера не является протонированной, и он свидетельствовал бы о том, что протон переместился между коформером и образованными свободным основанием и солью. Отсутствие данного пика соответствует образованию сокристалла.

¹⁵Ν ЯМР-анализ твердого тела с кроссполяризацией и вращением под магическим углом осуществляли в отношении конечного продукта из примера 1.1. Спектры регистрировали при значениях времени контакта 2 мс и 200 мкс, и они показаны на фиг. О. Спектр, зарегистрированный с более продолжительным временем контакта, соответствовал по меньшей мере 8 различным окружениям азота в сокристалле, при этом при менее продолжительном времени контакта пики не наблюдали. Это соответствовало тому, что ни один из атомов азота не демонстрировал сильное диполярное связывание с протоном, как было бы в случае, если протон полностью переместился между коформером и основанием, как наблюдалось бы для соли.

Стехиометрию сокристалла (Κ)-4-(2-(4-( 1 -(3 -метокси[1,2,4]триазоло [4,3-Ь]пиридазин-6ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота определяли с помощью протонного ЯМР. Материал обеспечивал получение ЯМР-спектра, показанного на фиг.

H. Стехиометрию определяли с помощью интегрирования резонанса, обусловленного (Κ)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло [4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2оном, например, с использованием резонанса при 6,85 ррт (2Н), и сравнения с резонансом, обусловленным 6-гидрокси-2-нафтойной кислотой, например, с использованием резонанса при 8,46 (1Н), и определения соотношения пиков, принимая во внимание количество протонов, обеспечивающее получение резонансного сигнала. Стехиометрию (молярное соотношение) определяли как 1:1.

Ή ЯМР (500 МГц, ЭМ8О. 27°С) 1,22 (3Н, б), 1,62 (2Н, ςά), 1,82 (2Н, б), 2,63-2,79 (3Н, т), 2,81 (3Н, 8), 2,85-3,09 (4Н, т), 3,13 (1Н, ф, 3,20-3,28 (2Н, т), 4,03 (2Н, ΐ), 4,17 (3Н, δ), 4,28 (2Н, б), 6,85 (2Н, б), 7,12-7,21 (4Н, т), 7,29 (1Н, б), 7,75 (1Н, б), 7.83-7.89 (2Н, т), 7.96 (1Н, б), 8.47 (1Н, 8), 10.15 (1Н, Ь8), 12.81 (1Н, Ь8)

Таким образом, Ή ЯМР, ¹³С и ¹⁵Ν ЯМР твердого тела и ДрКа, упоминаемые выше, соответствовали образованию сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1).

Пример 1.2. Получение формы А сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1).

4-(1-(3-Метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенол (0,818 кг, 2,34 моль) смешивали с ΑΌΌΡ (1,19 кг, 4,67 моль) и ЭСМ (9,8 л, 150 моль) и перемешивали приблизительно при 10°С. К реакционной смеси в течение 30 мин порциями добавляли трибутилфосфин (0,98 кг, 47,6 моль) и затем ее перемешивали в течение 30 мин. Затем по каплям добавляли раствор (К)-4-(2-гидроксиэтил)-1,3диметилпиперазин-2-она (0,503 кг, 2,80 моль) в ЭСМ (1,64 л, 25,6 моль) и реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч.

Реакционную смесь затем фильтровали посредством промывки с помощью ЭСМ для удаления ΑΌΌΡ как побочного продукта. Фильтрат перемешивали с водным раствором хлористоводородной кислоты и нижний органический слой удаляли. Водный слой дополнительно промывали с помощью ЭСМ и нижний органической слой удаляли. Затем повышали основность водного раствора с помощью №ьСО₃, до рН 9-10 и экстрагировали с помощью ЭСМ. Слой ЭСМ дополнительно промывали водой и выпаривали и подвергали азеотропной перегонке с метанолом для удаления остаточной воды с получением неочищенного материала. Неочищенный материал растворяли в метаноле (7,5 л, 190 моль) и нагревали до 60°С в сосуде 1. 6-Гидроксинафтален-2-карбоновую кислоту (0,360 кг, 1,87 моль) растворяли в метаноле (3,8 л, 94 моль) в сосуде 2. Затем 10% раствора из сосуда 2 в течение 10 мин по каплям добавляли в сосуд

I. Температуру сосуда 1 поддерживали при примерно 60°С.

Затравочный материал сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) (1,2 г, 0,0018 моль), который можно получать, как описано в примере 1.1, добавляли в сосуд 1 и температуру удерживали на уровне 60°С в течение примерно 1 ч. Затем оставшееся содержимое сосуда 2 в течение примерно 16 ч по каплям добавляли в сосуд 1. Полученную взвесь охлаждали до комнатной температуры в течение 5 ч и затем фильтровали и промывали метанолом. Выделенное твердое вещество высушивали в вакуумной печи при 50°С с получением сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) (выход 56,45%).

Ή ЯМР (500 МГц, ЭМ8О-б₆) δ ррт 1,43 (б, 1=7,00 Гц, 3Н), 1,54-1,69 (т, 2Н), 1,80 (б, 1=11,36 Гц, 2Н), 2,74 (й, 1=12,06, 3,41 Гц, 1Н), 2,84 (8, 3Н), 2,91-3,03 (т, 2Н), 3,25-3,63 (т, 6Н), 3,83 (б, 1=6,88 Гц, 1Н), 4,10-4,34 (т, 7Н), 6,89 (б, 1=8,69 Гц, 2Н), 7,09-7,22 (т, 4Н), 7,28 (б, 1=10,34 Гц, 1Н), 7,72 (б, 1=8,72 Гц, 1Н), 7,79-7,88 (т, 2Н), 7,92 (б, 1=8,88 Гц, 1Н), 8,44 (б, 1=0,63 Гц, 1Н), 10,12 (Ьг. 8., 1Н).

- 25 032654

Масса/заряд (Ε8+), [М+Н]⁺=480.

Данную форму определяли как кристаллическую с помощью ΧΙΒΡΟ.

Получение 4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенола.

3-Хлор-6-гидразинилпиридазин (0,753 кг) смешивали с тетраметоксиметаном (8,231 моль, 1,22 кг) в метаноле (5,7 л) и перемешивали. Полученную смесь затем нагревали и перемешивали при 55°С в течение 2 ч. После охлаждения до 45°С добавляли 4-(пиперидин-4-ил)фенола гидробромид (полученный как описано выше) (1,000 кг, 3,874 моль). Затем по каплям в течение периода приблизительно 10 мин добавляли ΟΙ ΡΕΑ (2,03 л, 11,6 моль) и реакционную смесь дополнительно перемешивали. Добавляли метанол (5,1 л, 126 моль) и реакционную смесь перемешивали в течение по меньшей мере 48 ч при примерно 45°С. Смесь фильтровали и фильтрат промывали метанолом и водой. Отделенное твердое вещество высушивали в вакуумной печи при примерно 50°С с получением 4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенола (выход 65%).

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О, 30°С) 1,59 (2Н, ςά), 1,81 (2Н, ά), 2,67 (1Н, άά!), 2,9-3,02 (2Н, т), 4,17 (3Н, к), 4,23-4,31 (2Н, т), 6,63-6,71 (2Н, т), 7,02 (2Н, άά), 7,29 (1Н, ά), 7,84 (1Н, ά), 9,14 (1Н, к).

Масса/заряд Ε8+ [М+Н]⁺=326.

Сокристалл (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) анализировали с помощью ΧΒΡΏ и ΙΧ'.ΧΙΒΡΟ образца материала приводила к получению дифрактограммы, показанной на фиг. I. Форма А сокристалла (11)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) характеризуется по меньшей мере одним пиком при значении 2Θ 19,4 или 12,5°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения. Десять наиболее выраженных пиков ΧΙΒΡΟ показаны в табл. С.

Таблица С Десять наиболее выраженных пиков ΧΙΒΡΟ для формы А сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1)

Угол 2-тета (20)	Интенсивность %
19,4	100
12,5	79,3
12,8	77,4
18,1	75,0
24,2	66,8
23,4	55,2
14,0	53,2
18,6	37,8
17,0	37,5
17,9	36,4

В таблице значения угла 2-тета (2Θ) составляют ±0,2°.

Анализ с применением дифференциальной сканирующей калориметрии (О8С) формы А сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пирндазин-6-ил)пиперндин-4-ил)фенокси)этнл)-1,3диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) продемонстрировал эндотерму плавления с началом при 184,9°С и пиком при 187,9°С (фиг. I).

Таким образом, анализ Э8С продемонстрировал, что форма А сокристалла (Β)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) является тугоплавким твердым веществом с началом плавления в диапазоне 163-186°С и пиком в диапазоне 169-188°С.

Пример 1.1А. Материал, полученный при повторном получении по пути, описанном в примере 1.1, давал в результате дополнительную форму, форму В. Данную форму определяли как кристаллическую с помощью ΧΒΡΏ.ΧΒΡΏ образца материала приводила к получению дифрактограммы, показанной на фиг. К. Форма В сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) характеризуется по меньшей мере одним пиком при значении 2Θ 15,2 или 6,1°, согласно измерениям с применением СиКаизлучения. Девять наиболее выраженных пиков ΧΙΒΡΟ показаны в табл. Ώ.

- 26 032654

Таблица I) Девять наиболее выраженных пиков ΧΚΡΏ для формы В сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1)

Угол 2-тета (20)	Интенсивность %
15,2	40,9
6,1	58,1
16,8	64,3
12,2	44,0
26,1	43,9
28,4	41,0
18,3	34,2
3,1	30,6
20,7	25,4

В таблице значения угла 2-тета (2θ) составляют ±0,2°.

Анализ с применением дифференциальной сканирующей калориметрии ([)8С) формы В сокристалла (К)-4-(2-(4-( 1 -(3 -метокси[ 1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) продемонстрировал эндотерму плавления с началом при 169,3°С и пиком при 172,7°С. Кривая О8С показана на фиг. Ь.

Пример 1.3. Получение формы С сокристалла (Е)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1).

Образец формы А сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) анализировали с помощью высокотемпературной ΧΚΡΏ с применением дифрактометра Вгикег 1)8 ;и1νаηсе. Образец нагревали до 210°С, при этом дифрактограммы регистрировали каждые 3°С.

Затем образец охлаждали до 25°С при 10°С/мин и при обеспечении доступа к предметному столику в конце эксперимента наблюдали, что материал сублимировался и собирался на ограничителе размера пучка типа лезвия ножа дифрактометра в виде порошка белого цвета. Данный белый порошок собирали и анализировали, и было показано, что он имел отличную кристаллическую форму, форму С. Данную форму определяли как кристаллическую с помощью ΧΚΡΏ.ΧΚΡΏ образца материала приводила к получению дифрактограммы, показанной на фиг. М. Форма С сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) характеризуется по меньшей мере одним пиком при значении 2Θ 8,2 или 24,8°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения. Семь наиболее выраженных пиков ΧΚΡΏ показаны в табл. Е.

Таблица Е Семь наиболее выраженных пиков ΧΚΡΏ для формы С сокристалла (К)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3-диметилпиперазин-2он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота

Угол 2-тета (20)	Интенсивность %
8,2	100
24,8	90,9
18,9	46,4
29,0	32,3
14,8	26,3
15,5	22,2
16,3	20,7

В таблице значения угла 2-тета (2Θ) составляют ±0,2°.

Анализ с применением дифференциальной сканирующей калориметрии (1)8С) формы С сокристалла (К)-4-(2-(4-( 1 -(3 -метокси[ 1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3диметилпиперазин-2-он:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) продемонстрировал эндотерму плавления с началом при 156,8°С и пиком при 160,5°С. Кривая О8С показана на фиг. N.

Пример 2. Получение 1-((38,5К)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона

- 27 032654

К 1-((38,5Я)-3,5-диметил-4-(2-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)этанону (1,502 г, 4,18 ммоль) и 6-хлор-3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазину (полученному, как описано в примере 1, получение исходных материалов) (1,003 г, 5,43 ммоль) в ΌΜΓ (15 мл) добавляли БТРЕА (1,455 мл, 8,36 ммоль). Полученный раствор перемешивали при 80°С в течение 18 ч и выпаривали до сухого состояния. Неочищенный продукт очищали с помощью ионообменной хроматографии с применением колонки 8СХ. Необходимый продукт элюировали из колонки с применением 1 М Ν^/МеОН и выпаривали до сухого состояния с получением смолы коричневого цвета. Полученное дополнительно очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-10% 7 М Ν^/МеОН в ЕЮАс. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 1-((38,5Я)-4-(2-(4-(1-(3метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-3,5-диметилпиперазин-1ил)этанона (0,991 г, 46,7%) в виде пены кремового цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ, 100°С) 1,06-1,1 (6Н, т), 1,69 (2Н, цб), 1,91 (2Н, б), 1,97 (3Н, к), 2,56-2,68 (4Н, т), 2,78 (1Н, ΐΐ), 2,99 (2Н, ΐ), 3,06 (2Н, ϊ6), 3,84 (2Н, Ьг δ), 4,00 (2Н, ΐ), 4,21 (3Н, δ), 4,27 (2Н, б), 6,836,88 (2Н, т), 7,14-7,19 (3Н, т), 7,74 (1Н, б).

Масса/заряд: Е8+ [М+н]⁺=508.

1-((38,5Я)-3,5-Диметил-4-(2-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)этанон, применяемый в качестве исходного материала, получали, как описано далее.

Получение бензил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин-1 -карбоксилата

О

К 4-(пиперидин-4-ил)фенола гидробромиду (полученному, как описано в примере 1, получение исходных материалов) (9 г, 34,86 ммоль) и ПРЕЛ (14,57 мл, 83,67 ммоль) в БСМ (150 мл) добавляли бензилхлорформиат (5,97 мл, 41,84 ммоль). Полученную суспензию перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь промывали последовательно водой (2x100 мл) и 1 М водным раствором лимонной кислоты (100 мл). Органический слой высушивали над М§80₄, фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-5% МеОН в БСМ. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением бензил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилата (7,89 г, 72,7%) в виде бесцветной смолы, которая затвердевала при отстаивании.

¹Н ЯМР (400 МГц, ВМ80, 30°С) 1,43 (2Н, цб), 1,71 (2Н, б), 2,57 (1Н, ΐΐ), 2,79-2,93 (2Н, т), 4,11 (2Н, б), 5,08 (2Н, к), 6,64-6,69 (2Н, т), 6,98-7,02 (2Н, т), 7,28-7,33 (1Н, т), 7,34-7,4 (4Н, т), 9,10 (1Н, к).

Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=312.

Получение бензил-4-(4-(2-хлорэтокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата

О

К бензил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилату (5,322 г, 17,09 ммоль) и карбонату калия (4,72 г, 34,18 ммоль) в ΜсСN (80 мл) добавляли 1-бром-2-хлорэтан (2,134 мл, 25,64 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 85°С в течение 18 ч. Реакция не была завершена, и добавляли дополнительное количество карбоната калия (4,72 г, 34,18 ммоль) и 1-бром-2-хлорэтана (2,134 мл, 25,64 ммоль) и смесь перемешивали при 85°С в течение дополнительных 48 ч. Реакция демонстрировала некоторый прогресс до ~50% завершения. Реакция не была завершена, поэтому температуру повышали до 95°С и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 24 ч. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и повторно растворяли в ЕЮАс (200 мл) и промывали последовательно водой (2x100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Органический слой высушивали над М§80₄, фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью флэшхроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-5% МеОН в БСМ. Чистые фракции выпа

- 28 032654 ривали до сухого состояния с получением бензил-4-(4-(2-хлорэтокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата (3,30 г, 51,7%) в виде смолы бледно-желтого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О, 30°С) 1,47 (2Н, цф, 1,73 (2Н, 4), 2,64 (1Н, й), 2,81-2,95 (2Н, т), 3,90 (2Н,

Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=374.

Получение бензил-4-(4-(2-((28,6К)-4-ацетил-2,6-диметилпиперазин-1-ил)этокси)фенил)пиперидин1-карбоксилата

О

К бензил-4-(4-(2-хлорэтокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилату (2,18 г, 5,83 ммоль), 1-((38,5К)-3,5диметилпиперазин-1-ил)этанону (1,366 г, 8,75 ммоль) и иодиду калия (0,968 г, 5,83 ммоль) в ЭМА (25 мл) добавляли ЭШЕА (3,05 мл, 17,49 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 125°С в течение 18

ч. Реакционную смесь выпаривали до сухого состояния и повторно растворяли в ЕЮАс (250 мл) и промывали последовательно водой (200 мл) и насыщенным солевым раствором (200 мл). Органический слой высушивали над Мд8О₄, фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Полученное очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-4% 7 М ΝΗβ/ΜβΟΗ в ЭСМ. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением бензил-4-(4-(2((28,6К)-4-ацетил-2,6-диметилпиперазин-1-ил)этокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата (2,180 г, 76%) в виде смолы коричневого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜ8Ο, 100°С) 1,06-1,1 (6Н, т), 1,51 (2Н, ςά), 1,76-1,83 (2Н, т), 1,97 (3Н, δ), 2,57-

т), 7,1-7,15 (2Н, т), 7,27-7,33 (1Н, т), 7,34-7,38 (4Н, т).

Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=494.

Получение 1-((38,5К)-3,5-диметил-4-(2-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)этанона

ΝΗ

Бензил-4-(4-(2-((28,6К)-4-ацетил-2,6-диметилпиперазин-1 -ил)этокси)фенил)пиперидин-1 карбоксилат (2,18 г, 4,42 ммоль) и 10% палладий на угле (0,470 г, 0,44 ммоль) в МеОН (45 мл) перемешивали в атмосфере водорода в течение 5 ч. Затем смесь фильтровали и выпаривали до сухого состояния с получением 1 -((38,5К)-3,5-диметил-4-(2-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)этил)пиперазин-1 -ил)этанона (1,502 г, 95%) в виде смолы бледно-желтого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜ8Ο, 100°С) 1,07-1,1 (6Н, т), 1,48 (2Н, ςά), 1,70 (2Н, ά), 1,97 (3Н, δ), 2,5-2,66 (7Н, т), 2,99 (2Н, ΐ), 3,01-3,07 (2Н, т), 3,85 (2Н, Ьг δ), 4,00 (2Н, ΐ), 6,82-6,86 (2Н, т), 7,09-7,13 (2Н, т).

Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=360.

1-((38,5К)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанон, применяемый в качестве исходного материала, получали, как описано далее.

Получение ^ацетил-^(2-(трифторметил)(фенил)ацетамида

О О

К 2-(трифторметил)анилину (100 г, 620,64 ммоль) и пиридину (200 мл, 2482,55 ммоль) в толуоле (500 мл), охлажденном до 0°С, в течение 30 мин по каплям добавляли ацетилхлорид (132 мл, 1861,91 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°С и перемешивали в течение 20 ч. Затем смесь охлаждали до температуры окружающей среды и дважды промывали 1 М водным раствором лимонной кислоты (250 мл). Затем смесь неочищенного продукта выпаривали до половинного объема и обрабатывали с помощью гептана (500 мл). Полученную взвесь перемешивали при 5°С в течение 4 ч и затем осадок собирали с помощью фильтрования, промывали гептаном (500 мл) и высушивали под вакуумом. В результате этого получали №ацетил-№(2-(трифторметил)фенил)ацетамид (93 г, 59,1%) в виде твердого вещества светло-коричневого цвета.

- 29 032654 ¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ, 30°С) 2,18 (6Н, 8), 7,58-7,93 (4Н, т). Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=246.

Получение 1-((3 8,5В)-3,5 -диметилпиперазин-1 -ил)этанона

„А

Н-ацетил-Н-(2-(трифторметил)фенил)ацетамид (13,28 г, 52,54 ммоль) добавляли к 2В,68-2,6диметилпиперазину (5 г, 43,79 ммоль) в ЕЮН (75 мл) и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 24 ч. Затем полученное выпаривали до сухого состояния, повторно растворяли в 1)СМ (25 мл) и промывали 2 М водным НС1 (25 мл). Затем повышали основность водного раствора до рН 14 с помощью концентрированного водного раствора ΝαΟΗ и экстрагировали с помощью ЭСМ (2x25 мл). Объединенные органические вещества выпаривали до сухого состояния с получением жидкости желтого цвета. Полученное очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-10% 7 М ΝΗ₃/ΜϋΟΗ в ЭСМ. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 1-((38,5В)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона (4,00 г, 66,7%) в виде масла бледно-бежевого цвета.

‘Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο, 100°С) 0,98 (6Н, ά), 1,78 (1Н, Ьг 8), 1,96 (3Н, 8), 2,26 (2Н, Ьг ₈), 2,58-2,68 (2Н, т), 3,94 (2Н, Ьг 8).

Пример 3. Получение (В)-4-(3-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)пропил)-1,3-диметилпиперазин-2-она

Триэтиламин (0,396 мл, 2,84 ммоль) добавляли к 6-хлор-3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазину (полученному, как описано в примере 1, получение исходных материалов) (350 мг, 1,90 ммоль) и (В)-1,3диметил-4-(3-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)пиперазин-2-ону (655 мг, 1,90 ммоль) в ΌΜΓ (10 мл) и смесь нагревали до 56°С в течение 5 ч. Раствор неочищенного продукта очищали с помощью ионообменной хроматографии с применением колонки 8СХ. Необходимый продукт элюировали из колонки с применением 7 М Ν^/МеОН и выпаривали до сухого состояния с получением смолы коричневого цвета. Полученное дополнительно очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-10% МеОН в ^СΜ. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением (В)4-(3 -(4-( 1 -(3 -метокси[ 1,2,4]триазоло [4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)-1,3диметилпиперазин-2-она (140 мг, 14,96%) в виде пены коричневого цвета.

‘Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο, 30°С) 1,20 (3Н, ά), 1,64 (2Н, т), 1,86 (4Н, т), 2,45 (2Н, т), 2,72 (2Н, т), 2,82 (3Н, 8), 3,00 (4Н, т), 3,25 (2Н, т), 3,98 (2Н, Л), 4,19 (3Н, 8), 4,30 (2Н, т), 6,87 (2Н, άά), 7,17 (2Н, άά),

7,30 (1Н, ά), 7,86 (1Н, ά).

Масса/заряд Е8+ [М+Н]⁺=494.

(В)-1,3-диметил-4-(3-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)пиперазин-2-он, применяемый в качестве исходного материала, получали, как описано далее.

Получение трет-бутил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин-1 -карбоксилата

К 4-(пиперидин-4-ил)фенола гидробромиду (полученному, как описано в примере 1, получение исходных материалов) (40 г, 154,95 ммоль) в 1)СМ (190 мл) при 0°С медленно добавляли триэтиламин (23,76 мл, 170,44 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 20 мин и затем добавляли ди-третбутилдикарбонат (35,5 г, 162,69 ммоль). Ледяную баню удаляли и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Реакционную смесь промывали последовательно водой (2x200 мл) и насыщенным солевым раствором (200 мл). Органический слой высушивали над Μ§8Ο₄, фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Твердое вещество поглощали в МТВЕ (150 мл) и обрабатывали ультразвуком и суспендировали в течение 2 ч. Полученное твердое вещество собирали с помощью фильтрования, промывали гептаном (200 мл) и высушивали под вакуумом с получением трет-бутил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилата (36,0 г, 84%) в виде продукта, представляющего собой твердое вещество кремово-белого цвета.

‘Н ЯМР (400 МГц, ΩΜ8Ο, 27°С) 1,40 (9Н, 8), 1,44 (2Н, ά), 1,68 (2Н, ά), 2,49-2,59 (1Н, т), 2,76 (2Н,

- 30 032654

8), 4,03 (2Н, ά), 6,63-6,7 (2Н, т), 6,96-7,04 (2Н, т), 9,13 (1Н, 8). Масса/заряд [Е8-] М^-=276.

Получение трет-бутил-4-(4-(3-хлорпропокси)фенил)пиперидин-1 -карбоксилата

К перемешанному раствору трет-бутил-4-(4-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилата (9,99 г, 36,02 ммоль) в МеСN (200 мл) добавляли 1-бром-3-хлорпропан (14,27 мл, 144,07 ммоль) и карбонат калия (19,91 г, 144,07 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (125 мл) и экстрагировали с помощью ЭСМ (200 мл). Органический слой высушивали над М§80₄, фильтровали и выпаривали с получением трет-бутил-4-(4-(3хлорпропокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата (12,75 г, 100%) в виде бесцветного масла.

'Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃, 30°С) 1,48 (9Н, 8), 1,54-1,65 (2Н, т), 1,79 (2Н, ά), 2,20 (2Н, ά), 2,59 (1Н, й), 2,78 (2Н, I), 3,56 (2Н, I), 4,02-4,13 (2Н, т), 4,23 (2Н, ά), 6,8-6,87 (2Н, ά), 7,03-7,17 (2Н, ά).

Получение (К)-трет-бутил-4-(4-(3-(2,4-диметил-3-оксопиперазин-1-ил)пропокси)фенил)пиперидин1-карбоксилата

К суспензии (К)-1,3-диметилпиперазин-2-она гидрохлорида (7,12 г, 43,23 ммоль), трет-бутил-4-(4(3-хлорпропокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата (12,75 г, 36,03 ммоль) и иодида калия (5,98 г, 36,03 ммоль) в ЭМА (100 мл) добавляли ЭГРЕА (28,2 мл, 162,13 ммоль). Раствор нагревали до 120°С в течение 24 ч. Реакционную смесь разбавляли водой (200 мл) и экстрагировали с помощью ЭСМ (200 мл). Органический слой высушивали над М§80₄, фильтровали и выпаривали с получением неочищенного продукта. Полученное очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния с элюированием с помощью 10% МеОН в ЕЮАс. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением (К)-третбутил-4-(4-(3-(2,4-диметил-3-оксопиперазин-1-ил)пропокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата (15,50 г, 97%) в виде масла коричневого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ЭМ80, 30°С) 1,19-1,22 (3Н, ά), 1,42 (9Н, 8), 1,71 (2Н, ά), 1,8-1,9 (2Н, т), 1,96 (2Н, 8), 2,37-2,49 (1Н, т), 2,60 (1Н, άάΐ), 2,80 (5Н, ά), 2,93-3,05 (4Н, т), 3,2-3,28 (2Н, т), 4,05 (2Н, άά), 6,8-6,9 (2Н, т), 7,12 (2Н, άά).

Масса/заряд Е8+ [М+Н]⁺=446.

Получение 1(К)-1,3-диметил-4-(3-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)пиперазин-2-она

К суспензии (К)-трет-бутил-4-(4-(3-(2,4-диметил-3-оксопиперазин-1-ил)пропокси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата (15,5 г, 34,78 ммоль) в диоксане (20 мл) добавляли 4,0 М хлороводород в диоксане (34,8 мл, 139,14 ммоль). Раствор перемешивали до 20°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выпаривали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью ионообменной хроматографии с применением колонки 8СХ. Необходимый продукт элюировали из колонки с применением 7 М ХН₃/МеОН и чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением (К)-1,3диметил-4-(3-(4-(пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)пиперазин-2-она (10,50 г, 87%) в виде масла коричне вого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ЭМ80, 30°С) 1,21 (3Н, ά), 1,73-1,93 (6Н, т), 2,4-2,46 (1Н, т), 2,68-2,78 (2Н, т), 2,80 (3Н, 8), 2,92-3,04 (4Н, т), 3,18 (1Н, ά), 3,22-3,27 (2Н, т), 3,35 (2Н, 8), 3,98 (2Н, ΐ), 6,89 (2Н, ά), 7,13 (2Н, ά), 8,79 (1Н, Ь8).

Масса/заряд Е8+ [М+Н]⁺=346.

Пример 4. Получение 1-((38,5К)-4-(3-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6ил)пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона

- 31 032654

К 4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенолу (полученному, как описано в примере 1, получение исходных материалов) (0,95 г, 2,92 ммоль), 1-((3Κ,58)-4-(3гидроксипропил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанону (0,751 г, 3,50 ммоль) и (Е)-диазен-1,2-диил-бис(пиперидин-1-ил-метанону) (1,473 г, 5,84 ммоль) в дегазированном ИСМ (20 мл) под азотом добавляли по каплям трибутилфосфин (1,441 мл, 5,84 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 90 мин и затем фильтровали. Раствор неочищенного продукта очищали с помощью ионообменной хроматографии с применением колонки 8СX. Необходимый продукт элюировали из колонки с применением 1 М КН₃/МеОН и выпаривали до сухого состояния с получением смолы бледно-коричневого цвета. Полученное дополнительно очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-10% 7 М КН₃/МеОН в ЕЮАс. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 1((3Κ,58)-4-(3-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона (0,868 г, 57,0%) в виде пены белого цвета.

¹Н ЯМР (400 МГц, ИМ8О, 100°С) 1,04 (6Н, ά), 1,69 (2Н, ςά), 1,76-1,84 (2Н, т), 1,88-1,94 (2Н, т), 1,96 (3Н, δ), 2,51-2,55 (2Н, т), 2,56-2,7 (2Н, т), 2,74-2,82 (3Н, т), 3,06 (2Н, ίά), 3,81 (2Н, Ьг δ), 3,98 (2Н, ί), 4,21 (3Н, δ), 4,27 (2Н, ά), 6,83-6,87 (2Н, т), 7,13-7,18 (3Н, т), 7,74 (1Н, ά).

Масса/заряд: Е8+ [М+Н]⁺=522.

1-((3Е,58)-4-(3-Гидроксипропил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанон, применяемый в качестве исходного материала, получали, как описано далее.

Получение 1-((38,5Е)-4-(3-гидроксипропил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона

К 1-((3Е,58)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанону (полученному, как описано в примере 2, получение исходных материалов) (6,51 г, 41,67 ммоль) и карбонату калия (14,40 г, 104,18 ммоль) в 2метилтетрагидрофуране (40 мл) добавляли 3-бромпропан-1-ол (6,41 мл, 70,84 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 80°С в течение 18 ч, затем фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на диоксиде кремния, градиент элюирования 0-6% 7 М КН₃/МеОН в ИСМ. Чистые фракции выпаривали до сухого состояния с получением 1-((3Κ,58)4-(3-гидроксипропил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона (0,749 г, 8,39%) в виде бесцветного масла.

¹Н ЯМР (400 МГц, ИМ8О, 30°С) 0,96-1,03 (6Н, т), 1,39-1,5 (2Н, т), 1,96 (3Н, δ), 2,19-2,28 (1Н, т), 2,28-2,36 (1Н, т), 2,39-2,47 (1Н, т), 2,67-2,77 (3Н, т), 3,36 (2Н, ί), 3,60 (1Н, άί), 4,12 (1Н, άί), 4,36 (1Н, Ьг δ).

Claims (15)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль:

   где Κ¹ представляет собой группу

   ----обозначает точку присоединения;

   Κ² представляет собой С₁-С₄-алкил и η равняется 2 или 3.

   (I) или группу

   - 32 032654
2. 2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где

   К¹ представляет собой группу о _— обозначает точку присоединения;

   В² представляет собой С1-С₄-алкил и п равняется 2 или 3.
3. 3. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где

   В¹ представляет собой группу ^ο , _— обозначает точку присоединения;

   В² представляет собой С1-С₄-алкил и п равняется 2 или 3.
4. 4. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где

   В¹ представляет собой группу ⁰ , _— обозначает точку присоединения;

   В² представляет собой С1-С₄-алкил и п равняется 2.
5. 5. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, при этом соединение выбрано из

   4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3диметилпиперазин-2-она,

   1-(4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-3,5диметилпиперазин-1-ил)этанона,

   4-(3-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)-1,3диметилпиперазин-2-она и

   1-(4-(3-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)-3,5диметилпиперазин-1-ил)этанона.
6. 6. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, при этом соединение выбрано из (В)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)этил)-1,3- диметилпиперазин-2-она (называемого далее в данном документе соединением А),

   1-((38,5В)-4-(2-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)этил) -3,5 -диметилпиперазин-1 -ил)этанона, (В)-4-(3-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4-ил)фенокси)пропил)1,3-диметилпиперазин-2-она и

   1-((3В,58)-4-(3-(4-(1-(3-метокси[1,2,4]триазоло[4,3-Ь]пиридазин-6-ил)пиперидин-4ил)фенокси)пропил)-3,5-диметилпиперазин-1-ил)этанона.
7. 7. Соединение по п.6 или его фармацевтически приемлемая соль, представленные формулой (1А) .0.

   (1А).
8. 8. Соединение по п.7, представленное формулой (1А).
9. 9. Соединение по п.8 в кристаллической форме, которая имеет рентгенограмму ХВРЭ по меньшей мере с двумя характерными пиками при 20,9 и 16,7±0,2° 2-тета, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.
10. 10. Сокристалл соединения формулы (1А) по п.7 и 6-гидрокси-2-нафтойной кислоты в качестве молекулы коформера, где сокристалл имеет рентгенограмму ХВРИ по меньшей мере с двумя пиками приблизительно при 2-тета=19,4 и 12,5°, согласно измерениям с применением СиКа-излучения.
11. 11. Способ получения сокристалла соединения формулы (1А) по п.7 и 6-гидрокси-2-нафтойной кислоты, получаемого посредством стадий:

    ί) смешивание раствора соединения формулы (1А) в подходящем растворителе с сокристаллом на основе 6-гидрокси-2-нафтойной кислоты в подходящем растворителе при повышенной температуре;

    ίί) добавление затравочного материала сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1) к смеси, полученной на стадии (1);

    - 33 032654 ΐΐΐ) охлаждение смеси, полученной на стадии (ίί);

    ιν) фильтрование смеси, полученной на стадии (ΐΐΐ); и

    ν) высушивание твердого вещества, выделенного на стадии (ΐν), с получением твердого вещества.
12. 12. Применение соединения по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемой соли или сокристалла по п.10 в предупреждении или лечении рака у человека.
13. 13. Применение по п.12 в лечении рака яичников, острого миелолейкоза и недифференцированного лейкоза (ЛМЬ), множественной миеломы (ММ), диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ПЬВСЬ), кастрационно-резистентного рака предстательной железы (СИРС), немелкоклеточного рака легкого (Ы8СГС), мелкоклеточного рака легкого (8СГС), рака молочной железы, глиобластомы и нейробластомы у человека.
14. 14. Способ предупреждения или лечения рака у человека, нуждающегося в таком лечении, который включает введение эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-9 или сокристалла по п.10.
15. 15. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-9 или сокристалл по п.10 и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, для применения в предупреждении или лечении рака у человека.

    Порошковая рентгенограмма соединения А, форма А

    - 34 032654

    Порошковая рентгенограмма формы А сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1)

    Термограмма О8С формы А сокристалла соединение А:6-гидрокси-2-нафтойная кислота (1:1)

    График зависимости объема опухоли от времени