ES2959188T3 - Procedimientos de tratamiento de trastornos inflamatorios neurológicos - Google Patents
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Abstract
Se describen métodos para tratar enfermedades inflamatorias neurológicas o convulsiones causadas por neuroinflamación mediante la administración de cPMP. Se describe el tratamiento de enfermedades neuroinflamatorias y neurometabólicas con cPMP para anular la dishomeostasis en la vía de síntesis de MoCo y controlar la inhibición sináptica en la vía de gefirina-GABAR. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Procedimientos de tratamiento de trastornos inflamatorios neurológicos
Referencia cruzada a solicitudes relacionadas
La presente solicitud reivindica el beneficio de la patente provisional de Estados Unidos con el número de serie 62/103.629, presentada el 15 de enero de 2015.
Campo técnico
La presente invención se refiere en general al tratamiento de enfermedades inflamatorias neurológicas.
Antecedentes
El cofactor de molibdeno (MoCo) es un compuesto de pterina coordinado con molibdeno (Mo) evolutivamente conservado y es necesario para la actividad de todas las enzimas de Mo, con la excepción de la nitrogenasa. El MoCo se sintetiza mediante una ruta de múltiples etapas única y evolutivamente conservada, de la que solo se han identificado dos intermediarios: el derivado de pterina que no contiene azufre ni metales, precursor Z, también conocido como cPMP, y la molibdopterina (MPT), una pterina con una función eno-ditiol, que es esencial para el enlace de Mo. Hitzert et al. describen en Pediatrics, 2012;130:e1005-e1010, un resultado favorable en un recién nacido con deficiencia de MoCo de tipo A tratado con cPMP.
Veldman et al. describen en Journal of Inherited Metabolic Disease, vol. 34, N° de suplemento 3, 2011, en la página S84, la eficacia y la seguridad de cPMP en el tratamiento de seis pacientes recién nacidos con deficiencia de MoCo de tipo A.
Sumario
La presente invención está definida por la reivindicación independiente 1. Las reivindicaciones dependientes representan formas de realización adicionales de la invención. Cualquier objeto que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente con fines informativos.
Se describen composiciones para su uso en procedimientos de tratamiento de una enfermedad inflamatoria neurológica o de convulsiones provocadas por neuroinflamación mediante la administración de cPMP a pacientes que padecen ELA, epilepsia, autismo o esquizofrenia. Se describe el tratamiento de enfermedades neuroinflamatorias y neurometabólicas con cPMP para anular la dishomeostasis en la ruta de síntesis de MoCo y controlar la inhibición sináptica en la ruta de gefirina-GABAR. Esta es una estrategia novedosa para prevenir la dishomeostasis del circuito neuronal mediante la estabilización de las sinapsis inhibidoras.
En un aspecto, se proporciona una composición para su uso en un procedimiento de tratamiento de una enfermedad inflamatoria neurológica en un individuo que padece ELA, epilepsia, autismo o esquizofrenia. El procedimiento incluye administrar una cantidad eficaz de cPMP al individuo, tratando así al individuo. El procedimiento incluye también identificar a un individuo que padece esclerosis lateral amiotrófica (ELA), epilepsia, autismo o esquizofrenia. Las enfermedades inflamatorias neurológicas representativas incluyen, sin limitación, trastornos autoinmunitarios del sistema nervioso central (SNC) tales como epilepsias autoinmunitarias; ELA; esquizofrenia; autismo; epilepsia y convulsiones febriles sin infección subyacente.
En algunas formas de realización, la etapa de administración se selecciona del grupo que consiste en administración oral, administración tópica y administración parenteral. En algunas formas de realización, el procedimiento incluye además identificar a un individuo que tiene una mutación en un gen seleccionado del grupo que consiste en gefirina, MOCS 1 y MOCS2. En algunas formas de realización, el procedimiento incluye además realizar un seguimiento al individuo para determinar la cantidad de MPT, MoCo, MoC0-S u otro intermedio o subproducto de la ruta de biosíntesis de MoCo. Las referencias a procedimientos de tratamiento en la descripción detallada de la invención en la presente descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un procedimiento terapéutico de tratamiento del cuerpo humano (o animal). A menos que se definan de otra forma, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la técnica a la que pertenecen los procedimientos y composiciones en cuestión. Además, los presentes materiales, usos y ejemplos son solo ilustrativos.
Descripción de las figuras
La figura 1A es un esquema que muestra la síntesis del cofactor de molibdeno en condiciones homeostáticas.
La figura 1B son las estructuras químicas de los primeros tres compuestos que se muestran en la figura 1 A: trifosfato de guanosina (GTP), monofosfato de piranopterina cíclico (cPMP) y molibdopterina (MPT).
La figura 2 es un esquema que muestra la síntesis del cofactor de molibdeno en condiciones inflamatorias.
La figura 3 es un esquema que muestra un resumen del efecto de citoquinas inflamatorias sobre elementos de la ruta de biosíntesis de molibdeno y la desregulación concomitante de la función sináptica inhibidora que da como resultado hiperexcitabilidad y convulsiones.
La figura 4 demuestra la desregulación inducida por IFN gamma de la ruta de MoCo y la regulación a la baja de proteínas sinápticas inhibidoras. Se cultivaron neuronas corticales de ratón en un dispositivo de dos cámaras que separa los cuerpos celulares de los axones. El panel A es un esquema del dispositivo con cámaras construido en polímero PDMS. El panel B es una imagen de bajo aumento de las regiones correspondientes que se muestran en el panel A teñidas con un anticuerpo contra el neurofilamento (una proteína específica del axón). Se muestran imágenes de mayor aumento de la cámara de cuerpos celulares (panel C), los surcos de los axones (panel D) y la cámara de axones (panel E). La tinción DAPI indica la ausencia total de células en la cámara de axones. El panel F es un esquema que muestra el diseño experimental: se añadió IFN gamma a los axones puros en la cámara de axones; se recogió ARN de la cámara de cuerpos celulares 72 horas después y se analizó mediante micromatrices para identificar cambios en la expresión génica.
La figura 5 son gráficos que muestran que la estimulación con IFN gamma de los axones distales estimuló un programa transcripcional en los cuerpos celulares de las neuronas que está marcado por una regulación a la baja simultánea de numerosos componentes de las sinapsis inhibidoras (gefirina (panel A), subunidad beta del receptor de glicina (panel B), numerosos elementos receptores de GABA (no mostrados) y múltiples andamiajes de unión a gefirina (no mostrados)) y una sólida regulación al alza de MOCOS (panel C). Al mismo tiempo, la GTP ciclohidrolasa I (panel D), la xantina deshidrogenasa (panel E) y la aldehído deshidrogenasa (panel F) aumentaron significativamente, lo que indica cambios sustanciales en la ruta de MoCo.
La figura 6 muestra niveles espontáneos de calcio en neuronas estimuladas durante 24 h con TNF alfa o no estimuladas (PBS, control de vehículo). Los cultivos de control de PBS muestran transitorios de calcio de baja amplitud que no son sincrónicos. Por el contrario, la estimulación con TNF alfa impulsó a las células a mostrar señales de calcio de gran amplitud que estaban altamente sincronizadas, lo que indica una reducción general de la inhibición sináptica en la red neuronal. Los niveles de calcio se supervisaron utilizando un indicador fluorescente transducido en las neuronas con adenovirus.
La figura 7 demuestra que la actividad espontánea en neuronas estimuladas con TNF alfa o IFN gamma está altamente correlacionada (por lo tanto, es sincrónica), a diferencia de los cultivos estimulados con control de vehículo. Se calculó la matriz de correlación de Pearson para todas las neuronas que mostraban actividad espontánea en el cultivo y se mapearon térmicamente (rojo = actividad muy correlacionada; azul = actividad no correlacionada). En las neuronas de control de vehículo hay una pequeña agrupación de actividad sincrónica, pero la red general no está correlacionada. La estimulación con TNF alfa o IFN gamma dio como resultado una correlación casi completa a lo largo de toda la red. Además, la cantidad absoluta de células espontáneamente activas aumenta claramente en las redes estimuladas con IFN gamma y TNF alfa (137 neuronas y 151 neuronas, respectivamente, frente a solo 42 neuronas en el control de vehículo). Estos hallazgos indican que la inhibición en la red se suprime significativamente mediante la estimulación con TNF alfa o IFN gamma.
La figura 8 son gráficos que muestran las respuestas de calcio promediadas en neuronas estimuladas con citoquinas. La figura 8A muestra los niveles basales de actividad en los cultivos de neuronas. En los cultivos de control se producen respuestas de calcio no sincronizadas, lo que da como resultado un nivel general bajo de actividad sináptica en la red. Las figuras 8B y 8C muestran que la estimulación con IFN gamma o TNF alfa da como resultado una actividad sináptica de tipo ráfaga y altamente sincronizada en la red en la que se produce un flujo de calcio en muchas células presentes en el cultivo al mismo tiempo. La figura 8D muestra que el tratamiento de cultivos de control con picrotoxina (2,4 μM), un inhibidor de molécula pequeña de los canales GABAérgicos inhibidores, induce en la red sincronía y actividad de tipo ráfaga que fenocopia la respuesta observada en cultivos estimulados por citoquinas. La figura 8E muestra que la adición de GABA (27 μM) a cultivos de control suprime completamente la actividad sináptica, lo que es consistente con una inhibición mejorada.
Descripción detallada
Tal como se describe en el presente documento, la modulación de la ruta biosintética del cofactor de molibdeno devuelve la homeostasis a las células que se encuentran bajo estrés inflamatorio al reducir el desvío de gefirina de la estabilización de las sinapsis inhibidoras y renormalizar el control inhibidor de las redes neuronales. Por lo tanto, tal como se describe en el presente documento, se puede administrar cPMP a un individuo para tratar varias enfermedades inflamatorias neurológicas diferentes o aliviar los síntomas que son resultado de diversos trastornos neurológicos diferentes.
Cofactor de molibdeno(MoCo) y la genética asociada al mismo
Todas las enzimas que contienen molibdeno (Mo) de seres humanos, animales, plantas, arqueas y bacterias, con la excepción de la nitrogenasa de procariotas, requieren un cofactor que incluye un resto orgánico, molibdopterina (MPT) y molibdeno. Este cofactor de molibdeno (MoCo) posee, en todos los grupos filogenéticos, la misma estructura básica, que es muy inestable en su forma libre, en particular en condiciones aerobias cuando no está unida a una apoproteína. La ruta biosintética, que se analiza con más detalle a continuación, está evolutivamente conservada y las proteínas correspondientes de diversos organismos son extremadamente homólogas.
Un defecto mutacional en la biosíntesis de MoCo da lugar a la pérdida simultánea de las actividades de todas las enzimas de Mo, incluida la sulfito oxidasa. La deficiencia de MoCo en humanos es un trastorno genético autosómico recesivo grave que clínicamente no puede diferenciarse de la deficiencia de sulfito-oxidasa, que se produce con menos frecuencia. La mayor parte de los pacientes afectados presentan anomalías neurológicas, tales como convulsiones no tratables y falta de desarrollo del cerebro, que pueden atribuirse a la toxicidad del sulfito, a la falta de sulfato o a ambas. La mayor parte de los pacientes afectados suelen morir en la primera infancia.
Se obtuvo un gen eucariota que codifica una proteína implicada en la biosíntesis de MoCo deArabidopsis thaliana.Posteriormente, se obtuvo un gen humano que codifica una proteína involucrada en la biosíntesis de MoCo y se denominó MOCS1. Debido a un corte y empalme alternativo del gen MOCS1, se producen las proteínas MOCS1A y MOCS1B, y convierten un derivado de guanosina en el precursor Z que no contiene azufre (es decir, cPMP). Los pacientes que tienen una mutación en el gen MOCS1 se designan como pacientes con deficiencia de MoCo de tipo A. En una etapa posterior, el precursor Z (es decir, cPMP) se convierte en MPT mediante una enzima, que está codificada por un gen denominado MOCS2 y se activa mediante la proteína codificada por el gen MOCS3. Los pacientes que tienen una mutación en el gen MOCS2 se designan como pacientes con deficiencia de MoCo de tipo B. Finalmente, el Mo se inserta en MPT mediante una proteína denominada gefirina. Los pacientes que tienen una mutación en el gen que codifica la gefirina, GEPHN, se designan como pacientes con deficiencia de MoCo de tipo C.
Lesión inducida por inflamación y ruta de biosíntesis de MoCo
La inflamación desencadena lesión neuronal y axonal por medio de múltiples mecanismos. No obstante, quizás el mecanismo fisiológicamente más relevante de lesión neuronal es la disfunción sináptica inducida por inflamación y la desestabilización de la actividad electrofisiológica homeostática en los circuitos neuronales. Por ejemplo, se sabe que el TNF alfa y el IFN gamma inducen lesión del hipocampo al desencadenar excitotoxicidad. Existen múltiples mecanismos por medio de los que estas citoquinas inflamatorias alteran la función sináptica, por ejemplo mediante la alteración de la función del receptor excitador y el aumento de los niveles de calcio sináptico. Sin embargo, un mecanismo igualmente importante de desregulación sináptica mediada por citoquinas puede ser la regulación a la baja de receptores inhibidores. La inhibición reducida aumentará el nivel general de actividad sináptica y creará un circuito de retroalimentación en el que se desarrolla actividad sináptica excitadora, el calcio se acumula en la sinapsis y las proteasas dependientes de calcio degradan las conexiones sinápticas. Este circuito de retroalimentación probablemente exacerba la pérdida de inhibición, creando una desregulación sináptica generalizada, lesión neuronal, e hiperactividad y/o fallo del circuito neuronal.
La gefirina es una proteína de andamiaje fundamental que controla la ubicación, la agrupación y la función inhibidora de los receptores de glicina y GABA en los sitios sinápticos. La función de la gefirina está directamente relacionada con el control inhibidor de los circuitos neuronales, y la regulación a la baja de la gefirina está relacionada con convulsiones e hiperexcitabilidad de las neuronas. Los defectos genéticos en la gefirina están asociados con autismo, epilepsia y esquizofrenia.
La función de andamiaje del receptor inhibidor de gefirina está mediada por un dominio C que une los dominios G y E evolutivamente conservados. Fundamentalmente, los dominios G y E de la gefirina son necesarios para la síntesis del cofactor de molibdeno (MoCo), una molécula que se requiere para la activación de enzimas dependientes de molibdeno necesarias para la supervivencia. Los seres humanos con mutaciones en los dominios que no son de andamiaje de la gefirina muestran deficiencias de MoCo y anomalías neurológicas y del desarrollo graves.
En condiciones homeostáticas, el trifosfato de guanosina (GTP) se convierte en un complejo de coordinación de molibdopterina y un óxido de molibdeno (MoCo) mediante la acción de varias enzimas catalíticas, incluida la gefirina. El MoCo debe sulfurarse mediante el cofactor de molibdeno sulfurasa (MOCOS) para actuar como cofactor de la xantina deshidrogenasa y otras enzimas dependientes de molibdeno. La xantina deshidrogenasa cataliza la conversión de xantina y NAD+ en urato y NADH, proporcionando un agente reductor fundamental necesario para el metabolismo rédox y la producción de reservas de energía celular en forma de ATP.
Los aumentos en el calcio celular dan lugar a la activación de proteasas dependientes de calcio tales como la calpaína. La calpaína se dirige a dos componentes de la ruta de biosíntesis de MoCo, lo que provoca una alteración de la homeostasis celular. La calpaína convierte irreversiblemente la xantina deshidrogenasa en xantina oxidasa, creando una poderosa fuente de especies de oxígeno reactivas que dañan directamente la célula. Además, la conversión de xantina deshidrogenasa en xantina oxidasa desvía el metabolismo celular de la producción de NADH y ATP, comprometiendo el equilibrio energético celular. La calpaína también escinde la gefirina, lo que provoca la pérdida de la función de andamiaje y la regulación a la baja de la función sináptica inhibidora. La gefirina escindida por calpaína también muestra una función de síntesis de MoCo alterada provocada por la separación física de los dominios G y E.
La escisión de gefirina mediada por calpaína en las sinapsis crea un circuito de retroalimentación en el que la función del receptor inhibidor da como resultado un aumento de la actividad del receptor excitador, un aumento del influjo de calcio y una mayor activación de la calpaína.
Las citoquinas inflamatorias tales como IFN gamma y TNF alfa alteran directamente el flujo de calcio en las células diana y aumentan la expresión y la activación de calpaína. Por lo tanto, la exposición a citoquinas inflamatorias reducirá la función sináptica inhibidora, aumentará la carga excitatoria, alterará la síntesis de MoCo e impulsará a la célula diana hacia la producción de especies reactivas de oxígeno.
Las citoquinas inflamatorias también aumentan la expresión de GTP ciclohidrolasa I, la etapa limitante de la velocidad en la síntesisde novode 5,6,7,8-tetrahidrobiopterina a partir de GTP. Por lo tanto, la exposición a citoquinas inflamatorias desviará al GTP de la producción de monofosfato de piranopterina cíclico (cPMP) mediada por MOCS1A/MOCS1AB, lo que dará como resultado una disminución de la síntesis de MoCo.
Convulsiones y ruta de biosíntesis de MoCo
Las convulsiones febriles son el tipo más común de complicación neurológica en lactantes y niños en edad preescolar. Las convulsiones febriles se producen a temperaturas corporales superiores a 38 °C en ausencia de desequilibrio electrolítico agudo o deshidratación, en ausencia de infección directa del SNC y sin evidencia previa de convulsiones no provocadas (Commission on Epidemiology and Prognosis, 1993, Epilepsia, 34:592-6). Se estima que 1 de cada 25 niños experimentará al menos una convulsión febril, y la aparición de una convulsión febril se asocia con una mayor susceptibilidad a convulsiones futuras: 1 de cada 3 individuos con convulsiones febriles en la infancia experimentará otra convulsión de algún tipo dentro de 20 años. Además, el riesgo de epilepsia entre individuos que experimentan una convulsión febril en la infancia es mayor que el de la población general, con informes de incidencia que varían del 6% al 13%, tasas que son más de 10 veces superiores a las de la población general. Cabe indicar que una mayor frecuencia de convulsiones febriles se asocia con algunas vacunas en niños, incluidas las vacunas que contienen sarampión y las vacunas de la tos ferina. Por ejemplo, la vacuna de la difteria, el tétanos y la tos ferina se asocia con un aumento de 6-9 casos de convulsiones febriles por cada 100.000 vacunaciones y se observa fiebre en el 50% de los lactantes vacunados. La vacuna del sarampión, las paperas y la rubéola (MMR) se asocia con un aumento de hasta 16 casos de convulsiones febriles por cada 100.000 vacunaciones, y la adición de varicela a la misma vacuna aumenta aún más el riesgo. Finalmente, las convulsiones agudas asociadas con infecciones víricas, bacterianas y parasitarias en niños, ya sean sistémicas o localizadas en el SNC, son un factor primario en el desarrollo de la epilepsia. Por ejemplo, durante la pandemia de gripe A (H1N1) de 2009-2010, en la que más del 70% de los individuos infectados eran menores de 24 años, hasta el 6% de las infecciones provocaron complicaciones neurológicas, y más del 10% de los niños menores de 15 años presentaron síntomas neurológicos. De estas complicaciones, las convulsiones y un EEG anormal fueron las más comunes. Asimismo, la infección por enterovirus 71, un picornavirus con infectividad epidémica generalizada en toda la región de Asia-Pacífico, se asocia con complicaciones neurológicas en casi el 20% de los niños infectados. También se produce una alta incidencia de convulsiones en niños infectados conPlasmodium, Taenia soliumy otros parásitos. El factor común en todos estos episodios convulsivos, ya sean febriles o afebriles, es la producción de citoquinas inflamatorias en el SNC. La interleucina-1beta (IL-1beta) y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF alfa) son pirógenos potentes que aumentan en el cerebro durante las convulsiones febriles, y la evidencia experimental respalda directamente el papel de estos factores en el inicio de las convulsiones. Asimismo, durante una infección aguda se producen y/o se liberan en el SNC TNF alfa, interleucina-6 (IL-6) e interferón gamma (IFN gamma).
Tratamiento de enfermedades inflamatorias neurológicas
Tal como se describe en el presente documento, evitar la conversión de GTP a cPMP proporcionando cPMP exógeno puede estabilizar la síntesis de MoCo y proporcionar un control de retroalimentación reguladora para conducir un sistema desregulado de vuelta a la homeostasis. De forma similar, el bloqueo de la GTP ciclohidrolasa I para impulsar el GTP nuevamente a la ruta de MoCo; el aumento de la expresión o la actividad de MOCS1A y/o la actividad de MOCS1AB para impulsar el GTP a cPMP; o el aumento de la expresión o la actividad de MOCS2A, MOCS2B y/o MOCS3 para impulsar el cPMP a MPT también pueden estabilizar la síntesis de MoCo y proporcionar un control de retroalimentación reguladora para conducir un sistema desregulado de vuelta a la homeostasis. Asimismo, el aumento de la expresión o la actividad de la gefirina para aumentar la síntesis de MoCo y estabilizar las sinapsis inhibidoras, o el bloqueo de la calpaína para evitar la conversión de xantina deshidrogenasa en xantina oxidasa, pueden estabilizar la síntesis de MoCo y proporcionar un control de retroalimentación reguladora para conducir un sistema desregulado de vuelta a la homeostasis. La suplementación con cPMP puede potenciarse bloqueando simultáneamente la calpaína para prevenir la producción aberrante dependiente de xantina oxidasa de especies reactivas de oxígeno durante un impulso inflamatorio y para mantener la estabilización sináptica dependiente de gefirina. Además, dado el vínculo entre las convulsiones inducidas por inflamación y gefirina/GABAR, el tratamiento con inhibidores de la glucógeno sintasa quinasa 3beta (GSK3beta) puede aumentar la actividad de la gefirina. Por ejemplo, el inhibidor IX de GSK-3 (CAS 667463-62-9) o el cloruro de litio pueden suprimir las convulsiones al potenciar la función de la gefirina y subsanar la desviación de gefirina inducida por inflamación de la estabilización de la sinapsis inhibidora. Por tanto, en el presente documento se describen procedimientos para tratar una enfermedad inflamatoria neurológica.
Tal como se usa el término en el presente documento, las enfermedades inflamatorias neurológicas incluyen, sin limitación, trastornos autoinmunitarios del sistema nervioso central (SNC) tales como esclerosis múltiple (EM), neuromielitis óptica (NMO), encefalitis anti-receptor de NMDA y epilepsias autoinmunitarias; enfermedad de Alzheimer; esclerosis lateral amiotrófica (ELA); esquizofrenia; autismo; epilepsia y otros trastornos convulsivos (por ejemplo, convulsiones febriles sin infección subyacente); enfermedades infecciosas del SNC (por ejemplo, víricas, bacterianas, parasitarias); deficiencias de MoCo (por ejemplo, debido a mutaciones genéticas); y otras enfermedades neurodegenerativas que implican respuestas inflamatorias microgliales y astrocíticas. Las convulsiones inducidas por neuroinflamación son una enfermedad inflamatoria neurológica para la que los procedimientos descritos en el presente documento son particularmente útiles. "Tratar", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a aliviar, reducir o mejorar los síntomas de cualquiera de dichas enfermedades inflamatorias neurológicas.
Tal como se describe en el presente documento, el tratamiento de una enfermedad inflamatoria neurológica puede incluir la administración de una cantidad eficaz de cPMP a un individuo. En algunos casos, se puede identificar a un individuo que padece una enfermedad inflamatoria neurológica (por ejemplo, trastornos autoinmunitarios del sistema nervioso central (SNC), tales como esclerosis múltiple (EM), neuromielitis óptica (NMO), encefalitis anti-receptor de NMDA y epilepsias autoinmunitarias; enfermedad de Alzheimer; esclerosis lateral amiotrófica (ELA); esquizofrenia; autismo; epilepsia y otros trastornos convulsivos (por ejemplo, convulsiones febriles sin infección subyacente); enfermedades infecciosas del SNC (por ejemplo, víricas, bacterianas, parasitarias); deficiencias de MoCo (por ejemplo, debido a mutaciones genéticas); y otras enfermedades neurodegenerativas que implican respuestas inflamatorias microgliales y astrocíticas) antes de administrarle una cantidad eficaz de cPMP. En algunos casos, se puede identificar a un individuo que tiene una mutación en el gen MOCS1 o MOCS2 o el gen que codifica la gefirina antes de administrarle una cantidad eficaz de cPMP. La cPMP se puede administrar a largo plazo (por ejemplo, cuando hay mutaciones genéticas presentes) o se puede administrar cPMP como una intervención aguda para renormalizar las sinapsis inhibidoras.
También, tal como se describe en el presente documento, el tratamiento de una enfermedad inflamatoria neurológica puede incluir además el seguimiento del individuo. Simplemente a modo de ejemplo, se puede realizar un seguimiento de la cantidad de MPT, MoCo, MoC0-S u otro intermedio o subproducto de la ruta de biosíntesis de MoCo (por ejemplo, niveles de xantina, hipoxantina, ácido úrico, sulfito y S-sulfocisteína) en un individuo (por ejemplo, en la orina), que pueden usarse como biomarcadores para una dosificación eficaz de cPMP. En algunos casos, se puede realizar un seguimiento de los síntomas del individuo (por ejemplo, para detectar una mejora) o se puede utilizar la retroalimentación del EEG para realizar un seguimiento del tratamiento y/o establecer la dosificación. Dependiendo de los resultados de la etapa de seguimiento, se puede ajustar la cantidad eficaz de cPMP según se desee.
Normalmente, una cantidad eficaz de cPMP es una cantidad que trata (por ejemplo, mejora, alivia o reduce los síntomas de) una enfermedad inflamatoria neurológica sin inducir ningún efecto adverso. Puede formularse una cantidad eficaz de cPMP, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su administración a un individuo. La formulación particular dependerá de una diversidad de factores, incluida la vía de administración, la dosis y el intervalo de dosificación de un compuesto, el sexo, la edad y el peso del individuo que se está tratando, la gravedad de la afección y el juicio del médico del individuo. Tal como se utiliza en el presente documento, se pretende que "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluya todos y cada uno de los excipientes, disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción, y similares, compatibles con la administración. El uso de dichos medios y agentes para vehículos farmacéuticamente aceptables es bien conocido en la técnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con un compuesto, se contempla su uso.
Los vehículos farmacéuticamente aceptables son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, University of the Sciences in Philadelphia, Ed., 21.a edición, 2005, Lippincott Williams & Wilkins; y The Pharmacological Basis of Therapeutics, Goodman y Gilman, Eds., 12.a edición, 2001, McGraw-Hill Co. En la técnica se encuentran disponibles vehículos farmacéuticamente aceptables, e incluyen los enumerados en diversas farmacopeas. Véanse, por ejemplo, la Farmacopea de Estados Unidos (USP), la Farmacopea Japonesa (JP), la Farmacopea Europea (EP) y la Farmacopea Británica (BP); las publicaciones del U.S. Food and Drug Administration (FDA) Center for Drug Evaluation and Research (CDER) (por ejemplo, Inactive Ingredient Guide (1996)); y Ash and Ash, Eds. (2002) Handbook of Pharmaceutical Additives, Synapse Information Resources, Inc., Endicott, NY. El tipo de vehículo farmacéuticamente aceptable que se utiliza en una formulación particular puede depender de diversos factores, tales como, por ejemplo, las propiedades físicas y químicas de cPMP, la vía de administración y el procedimiento de fabricación.
Una composición farmacéutica que incluye cPMP tal como se describe en el presente documento normalmente se formula para que sea compatible con su vía de administración prevista. Las vías de administración adecuadas incluyen, por ejemplo, administración oral, rectal, tópica, nasal, pulmonar, ocular, intestinal y parenteral. Las vías de administración parenteral incluyen administración intravenosa, intramuscular y subcutánea, así como administración intraperitoneal, intraarterial, intraarticular, intracardíaca, intracisternal, intradérmica, intralesional, intraocular, intrapleural, intratecal, intrauterina e intraventricular.
Para inyección intravenosa, por ejemplo, la composición se puede formular como una solución acuosa usando tampones fisiológicamente compatibles, que incluyen, por ejemplo, fosfato, histidina o citrato para ajustar el pH de la formulación, y un agente de tonicidad, tal como, por ejemplo, cloruro de sodio o dextrosa. Para la administración oral, se puede formular un compuesto en formas de dosificación líquida o sólida, y también formulaciones tales como formulaciones de liberación instantánea o de liberación controlada/mantenida. Las formas de dosificación adecuadas para la ingestión oral por parte de un individuo incluyen comprimidos, píldoras, cápsulas duras y blandas, líquidos, geles, jarabes, lechadas, suspensiones y emulsiones.
Las formas de dosificación oral pueden incluir excipientes; los excipientes incluyen, por ejemplo, cargas, disgregantes, aglutinantes (secos y húmedos), retardantes de la disolución, lubricantes, deslizantes, antiadherentes, resinas de intercambio catiónico, humectantes, antioxidantes, conservantes, colorantes y aromatizantes. Los ejemplos específicos de excipientes incluyen, sin limitación, derivados de celulosa, ácido cítrico, fosfato dicálcico, gelatina, carbonato de magnesio, laurilsulfato de magnesio/sodio, manitol, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, silicatos, dióxido de silicio, benzoato de sodio, sorbitol, almidones, ácido esteárico o una sal del mismo, azúcares (por ejemplo, dextrosa, sacarosa, lactosa), talco, mucílago de tragacanto, aceites vegetales (hidrogenados) y ceras.
El cPMP tal como se describe en el presente documento también se puede formular para administración parenteral (por ejemplo, mediante inyección). Dichas formulaciones son normalmente estériles y pueden proporcionarse en formas de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas, jeringas, plumas para inyección o en recipientes multidosis, conteniendo estos últimos normalmente un conservante. Las formulaciones pueden adoptar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener otros agentes, tales como tampones, agentes de tonicidad, agentes mejoradores de la viscosidad, tensioactivos, agentes de suspensión y dispersión, antioxidantes, polímeros biocompatibles, agentes quelantes y conservantes. Dependiendo del sitio de inyección, el vehículo puede contener agua, un aceite sintético o vegetal y/o codisolventes orgánicos. En determinados casos, tales como con un producto liofilizado o un concentrado, la formulación parenteral se reconstituiría o se diluiría antes de la administración. Polímeros tales como poli(ácido láctico), poli(ácido glicólico) o copolímeros de los mismos, pueden servir como matrices de liberación controlada o mantenida, además de otros bien conocidos en la técnica.
Según la presente invención, se pueden emplear técnicas convencionales de biología molecular, microbiología, bioquímica y ADN recombinante dentro de los conocimientos de la técnica. Estas técnicas se explican detalladamente en la literatura. La invención se describirá con más detalle en los ejemplos siguientes.
Ejemplos
Ejemplo 1: Efectos del IFN gamma sobre las neuronas
Se cultivaron neuronas corticales de ratón en un dispositivo de dos cámaras que separa los cuerpos celulares de los axones. En la figura 4A se muestra un esquema del dispositivo con cámaras construido en polímero PDMS.
El diseño experimental se muestra en la figura 4F. Se añadió IFN gamma a los axones puros en la cámara de axones y se recogió ARN de la cámara de cuerpos celulares 72 horas después. El ARN se analizó mediante micromatrices para identificar cambios en la expresión génica.
En la figura 4B se muestra una imagen de bajo aumento de las regiones que se muestran en el panel A denominadas "C", "D" y "E", y se tiñeron con un anticuerpo contra el neurofilamento, una proteína específica del axón. Se obtuvieron imágenes de mayor aumento de la cámara de cuerpos celulares (figura 4C), de los surcos de axones (figura 4D) y de la cámara de axones (figura 4E). La tinción con DAPI indicó la ausencia total de células en la cámara de axones.
Los resultados de estos experimentos demostraron una desregulación de la ruta de MoCo inducida por IFN gamma y una regulación a la baja de las proteínas sinápticas inhibidoras.
Ejemplo 2: Genes regulados por IFN gamma
La estimulación con IFN gamma de los axones distales estimuló un programa transcripcional en los cuerpos celulares de las neuronas que se caracteriza por una regulación a la baja simultánea de numerosos componentes de las sinapsis inhibidoras, incluidos, por ejemplo, la gefirina (figura 5A), la subunidad beta del receptor de glicina (figura 5B), numerosos elementos receptores de GABA (no mostrados) y múltiples andamiajes de unión a gefirina (no mostrados), así como una sólida regulación al alza de MOCOS (figura 5C). Al mismo tiempo, la GTP ciclohidrolasa I (figura 5D), la xantina deshidrogenasa (figura 5E) y la aldehído deshidrogenasa (figura 5F) están significativamente reguladas al alza. En conjunto, estos resultados indican cambios sustanciales en la ruta de MoCo.
Ejemplo 3: Modelo patogénico
Si bien se sabe que las citoquinas inflamatorias alteran la excitabilidad de las neuronas, el mecanismo subyacente por el que esto ocurre no se comprende bien. Alguna evidencia indica que citoquinas tales como TNF alfa inducen cambios en la distribución de los receptores excitadores e inhibidores en la membrana plasmática de las sinapsis, lo que produce como resultado una alteración general de la excitabilidad. (Stellwagen et al., 2005, J. Neurosci., 25:3219-28). Y si bien se ha revisado ampliamente el efecto de las citoquinas inflamatorias sobre la función sináptica (véase, por ejemplo, Fouregeaud y Boulanger, 2010, Eur. J. Neurosci., 32:207-17; Koller et al., 1997, Prog. Neurobiol., 52: 1-26; Schafers y Sorkin, 2008, Neurosci. Lett., 437: 188-93), el campo todavía carece de un modelo patogénico terapéuticamente tratable para el fenómeno descrito.
En el presente documento se propone que un mecanismo clave de inducción de hiperexcitabilidad y convulsiones por citoquinas inflamatorias es la desestabilización de la ruta de biosíntesis del cofactor de molibdeno homeostática por medio de una reducción en la transición mediada por gefirina de MPT a MoCo, una alteración de la agrupación sináptica de receptores de neurotransmisores inhibidores mediada por gefirina, un cambio metabólico de la producción de energía mediante xantina deshidrogenasa hasta un fallo energético por medio de la actividad de la xantina oxidasa, la reversión de la producción de cPMP a partir de GTP a la producción de 7,8-DHNP-3'-TP con amplificación concomitante de la producción de óxido nítrico, la regulación a la baja dependiente de estrés de múltiples componentes de la maquinaria de receptores de neurotransmisores inhibidores y la regulación al alza compensatoria de elementos del aparato biosintético de molibdeno. Se trata de una hipótesis novedosa que sitúa la síntesis del cofactor de molibdeno, y en particular de cPMP, en el centro de una cascada patógena que produce secuelas clínicas graves en muchos niños. Las figuras 2 y 3 describen variaciones de este modelo propuesto.
Ejemplo 4: Datos de expresión
Se prepararon neuronas corticales a partir de fetos de ratón C57BL/6 del día embrionario 15, siguiendo protocolos publicados (Sauer et al., 2013, Neurobiol. Dis., 59:194-205). En experimentos preliminares, después de una semanain vitro,las neuronas se estimularon durante 24 horas con IFN gamma (500 U/ml). Se recogieron muestras de ARN por cuadruplicado en condiciones tratadas y sin tratar, y se evaluaron los cambios en la expresión génica utilizando el sistema Illumina BeadArray. Solo se consideraron para análisis posteriores los genes que se detectaron a P<0,05 en la matriz. Los niveles de expresión no estaban normalizados y el nivel relativo de expresión después de la estimulación con IFN gamma se comparó con los controles no tratados. La tabla 1 proporciona intervalos de confianza medios ± 95%; se eligió la prueba estadística apropiada basándose en las pruebas de normalidad y varianza igual.
Tabla 1. Cambios transcripcionales inducidos por IFN gamma en neuronas corticales de ratón
Para determinar la relevancia de estos genes en eventos inflamatorios agudosin vivo,se infectaron ratones C57BL/6 con el virus de la encefalomielitis murina de Theiler, según los protocolos estándar (Howe et al., 2012a, J. Neuroinflamm., 9:50; Howe et al., 2012b, Sci. Rep., 2:545; Lafrance-Corey y Howe, 2011, J. Vis. Exp., 52:2747). Se extirpó el hipocampo 24 horas después de la infección, se recolectó ARN y se realizó un análisis con Illumina BeadArray para comparar los niveles de expresión génica con ratones infectados de forma simulada. Este punto temporal coincidió con un fuerte infiltrado inflamatorio presente en el hipocampo, y se demostró que este infiltrado desencadena cambios en los circuitos neuronales del hipocampo que dan como resultado convulsiones entre 3 y 7 días después de la infección, seguidas del desarrollo de epilepsia después de 60 días después de la infección. Se descubrió que la GTP ciclohidrolasa I estaba regulada al alza más de 4 veces en los ratones infectados con TMEV; de la misma manera, MOCOS estaba regulado al alza más de 3 veces, Xdh aumentó 5 veces, varias isoformas de aldehído deshidrogenasa estaban regulados al alza, al igual que la colibistina. Por el contrario, la subunidad delta del receptor de GABA A estaba regulada a la baja en un 30%, y numerosas subunidades del receptor de GABA y proteínas de unión estaban reguladas a la baja en un 10%.
Ejemplo 5: El efecto de las citoquinas inflamatorias sobre la expresión génica de la biosíntesis del cofactor de molibdeno y la expresión génica de la función de receptores de neurotransmisores inhibidores
Se preparan neuronas corticales y del hipocampo de ratones C57BL/6 y se cultivan en condiciones que promueven la formación de redes sinápticas maduras. Los cultivos se exponen a TNF alfa, IL-1p, IL-6 e IFN gamma a varias dosis (0, 1,3, 10, 30, 100, 300 ng/ml) y durante diferentes periodos de tiempo (6, 12, 24, 48, 72 y 96 h). En cultivos paralelos, la cantidad de muerte celular se evalúa mediante el ensayo MTT y las dosis que matan a más del 10% del cultivo se excluyen del análisis. Se recolecta ARN utilizando kits Qiagen RNeasy y se generan ADNc utilizando el kit de síntesis de ADNc de primera cadena Roche Transcriptor y cebadores hexámeros aleatorios. Se realiza una PCR en tiempo real basada en sondas en las muestras utilizando el sistema Roche LightCycler 480 Probes Master y los pares de cebadores y las sondas de hidrólisis de Roche Universal Probe Library definidas en la tabla 2. La expresión se normaliza para Aco2 y UROD, genes que previamente se han definidos como factores constitutivos adecuados. Se utiliza un esquema de normalización multifactorial para cuantificar las diferencias relativas en la expresión génica entre los controles y las muestras tratadas con citoquinas (Anderson et al., 2004, Cancer Res., 64:5245-50).
Tabla 2. Análisis por RT-PCR de cambios inducidos por citoquinas inflamatorias en la ruta de biosíntesis de MOCO y la expresión del receptor inhibidor/excitador.
Ejemplo 6: El efecto de las citoquinas inflamatorias sobre la biosíntesis del cofactor de molibdeno y sobre la expresión de proteínas de la función de receptores de neurotransmisores inhibidores
Se usan cultivos y condiciones de tratamiento similares a los descritos en el ejemplo 5 para generar lisados de proteínas para el análisis de la expresión de subunidades del receptor de GABA, subunidades del receptor de glicina, gefirina, GTP ciclohidrolasa I y MoCoS. Las neuronas cultivadas en portaobjetos de vidrio con cámaras de múltiples pocillos se utilizan para el análisis de la expresión de estas dianas mediante microscopía de inmunofluorescencia. Para IF, las células se estimulan durante 24, 48, 72 o 96 horas a 100 ng/ml (o a una dosis definida en el ejemplo 5 como óptima para la inducción génica) antes de la fijación y la inmunotinción. La tabla 3 enumera los anticuerpos relevantes que se emplean.
Tabla 3. Anticuerpos
Ejemplo 7: El efecto de las citoquinas inflamatorias sobre la actividad sináptica espontánea y provocada
Las neuronas se cultivan en cámaras de toma de imágenes de vidrio en condiciones que promueven la formación de redes sinápticas maduras. Las células se infectan con un indicador de calcio AAV1.Syn.GCaMP6f que proporciona un rastreo óptico rápido de los niveles de calcio intracelular (Akerboom et al., 2012, J. Neurosci., 32:13819040; Chen et al., 2013, Nature, 499:295-300). Los niveles de calcio se controlan en tiempo real mediante un microscopio confocal Zeiss 5-Live equipado con una cámara ambiental. Después de la recopilación de los niveles iniciales de actividad espontánea con bajo aumento, se añade citoquina inflamatoria a la concentración óptima de citoquina determinada anteriormente y se realiza un seguimiento de las células durante un periodo de hasta 60 minutos. Las imágenes se procesan posteriormente en Imagen J para medir las amplitudes y frecuencias transitorias de calcio dentro de las células definidas. En algunos experimentos, se utiliza un microscopio multifotónico Olympus con gran aumento para rastrear la actividad en sinapsis individuales. Además de la actividad espontánea, también se mide el flujo de calcio provocado por la adición de glutamato a cultivos que se han pretratado con citoquinas inflamatorias durante diferentes periodos de tiempo (0, 1,3, 6, 12, 24, 48, 72 o 96 h) antes de la estimulación. Véanse las figuras 6 y 7.
Ejemplo 8: El efecto de la suplementación con cPMP sobre los cambios sinápticos inducidos por citoquinas inflamatorias
Las neuronas corticales y del hipocampo se tratan con citoquinas inflamatorias en la dosis y durante el periodo de tiempo optimizados identificados anteriormente en presencia de diferentes concentraciones de cPMP. Mediante extrapolación desde el campo de la señalización purinérgica, se evalúan concentraciones que varían desde una concentración nanomolar a una concentración milimolar (1, 3, 10, 30, 100, 300 nM; 1, 3, 10, 30, 100, 300 μM; 1, 3 mM). En experimentos preliminares, la supervivencia de neuronas vírgenes tratadas con cPMP durante diferentes periodos de tiempo (1,3, 6, 12, 24, 48, 72 o 96 h) se evalúa mediante ensayo de MTT o LDH, y las dosis que matan a más del 10% de las células se excluyen de análisis posteriores. En algunos casos, el cPMP está encapsulado en liposomas (por ejemplo, lipofectina o lipofectamina) (Hughes et al., 2010, Methods Mol. Biol., 605:445-59). Después de optimizar la administración de cPMP, las neuronas se estimulan con citoquinas inflamatorias en presencia o ausencia de cPMP en condiciones que alteran el flujo de calcio espontáneo y/o provocado. Si el tratamiento con cPMP revierte el efecto de las citoquinas inflamatorias sobre la actividad sináptica dinámica, también se examina el efecto de cPMP sobre la expresión y la localización de las proteínas dianas exploradas en el ejemplo 6, y se evalúa el efecto de cPMP sobre la expresión de genes medidos en el ejemplo 5.
Ejemplo 9: Cambios en la ruta de MoCo y en el receptor de neurotransmisores inducidos por una infección vírica aguda del cerebro
Se infectaron ratones jóvenes (de 4 semanas de edad) con el virus de la encefalomielitis murina de Theiler durante 24 horas para modelar la infección cerebral aguda en la infancia. Se empleó una micromatriz Illumina para evaluar los cambios transcripcionales. La tabla 4 muestra la máxima regulación al alza o a la baja de genes relevantes durante las primeras 24 horas de infección.
Tabla 4. Regulación al alza o a la baja máxima de genes relevantes
Estas mediciones indican que la infección aguda del cerebro, consistente con niveles elevados de TNF alfa (aumento de 6 veces a las 24 h) e IL1 beta (aumento de 10 veces a las 24 h) en este sistema modelo, induce un aumento de la síntesis de factores relacionados con la ruta de MoCo, un aumento de la producción de factores de estrés oxidativo, una producción de calpaína regulada al alza y un aumento en la expresión de receptores de neurotransmisores excitadores. Al mismo tiempo, la infección aguda desencadena una expresión regulada a la baja de gefirina y una serie de receptores GABAérgicos, lo que da como resultado la supresión de la inhibición sináptica.
Ejemplo 10: Cambios en la ruta de MoCo y en los receptores de neurotransmisores en neuronas humanas inducidos por citoquinas inflamatorias
Se indujeron neuronas a partir de células madre neuronales humanas y se cultivaron en condiciones que fomentan fenotipos neuronales mixtos excitadores e inhibidores. Después, estas células se estimularon con TNF alfa, IL1 beta o IFN gamma durante 24 horas y se evaluaron los cambios transcripcionales mediante micromatrices. Las respuestas fueron variables entre las citoquinas pero, en general, los estímulos inflamatorios indujeron cambios que se resumen en la tabla 5.
Tabla 5. Genes inducidos por estímulos inflamatorios
Ejemplo 11: Cambios en la ruta de MoCo y en los receptores de neurotransmisores en neuronas humanas inducidos por citoquinas inflamatorias
Se cultivaron neuronas de ratones neonatales y se estimularon con TNF alfa o IFN gamma durante 24 horas. Los cambios transcripcionales se evaluaron mediante RT-PCR cuantitativa.
Tabla 6. Cambios transcripcionales
Ejemplo 12: Las citoquinas inflamatorias inducen sincronización de la red que fenocopia la pérdida de inhibición
Se cultivaron neuronas de ratones neonatales y se estimularon con TNF alfa (100 ng/ml) o IFN gamma (500 U/ml) durante 24 horas. Después de la transducción con un indicador GCaMPf codificado por AAV, se obtuvieron imágenes de transitorios rápidos de calcio en las células. Se definieron regiones de interés que describen neuronas individuales en cada fotograma de las películas recopiladas durante varios minutos, y se representó gráficamente la intensidad de fluorescencia de cada célula a lo largo del tiempo para revelar patrones en la respuesta de la población. La figura 8 muestra los rastros de respuesta de calcio promedio calculados para docenas de neuronas estimuladas por citoquinas en cada experimento, y son representativos de más de 4 experimentos separados y más de 4 preparaciones celulares separadas dentro de cada experimento.
La figura 8A muestra el nivel basal de actividad del calcio en los cultivos de neuronas. En los cultivos de control se producen respuestas de calcio no sincronizadas, lo que da como resultado un nivel general bajo de actividad sináptica en la red. Las figuras 8B y 8C muestran la estimulación de la actividad del calcio en neuronas después del tratamiento con IFN gamma o TNF alfa, respectivamente. Las figuras 8B y 8C muestran que el tratamiento con IFN gamma o TNF alfa da como resultado una actividad sináptica en ráfagas y altamente sincronizada en la red con la que en muchas células presentes en el cultivo se produce un flujo de calcio al mismo tiempo.
La figura 8D muestra que el tratamiento de cultivos de control con picrotoxina 2,4 μM, una molécula pequeña inhibidora de los canales GABAérgicos inhibidores, induce en la red sincronía y actividad de tipo ráfaga que fenocopia la respuesta observada en cultivos estimulados por citoquinas (compárese con las figuras 8B y 8C). La figura 8E muestra que la adición de GABA 27 μM a cultivos de control suprime completamente la actividad sináptica, lo que coincide con una inhibición mejorada.
Estos hallazgos indican que el TNF alfa y el IFN gamma inducen la supresión de la neurotransmisión inhibidora en la red neuronal, lo que da como resultado un comportamiento de tipo ráfaga sincrónico. Dados los perfiles transcripcionales medidos en neuronas estimuladas por citoquinas, este comportamiento de la red es consistente con una reducción en los receptores de neurotransmisores inhibidores relacionada con una expresión reducida de gefirina y una alteración de la ruta de síntesis de MoCo.
Se divulgan procedimientos y composiciones que se pueden usar en, se pueden usar junto con, se pueden usar en la preparación de, o son productos de, los procedimientos y las composiciones divulgados. Estos y otros materiales se divulgan en el presente documento, y se entiende que se divulgan combinaciones, subconjuntos, interacciones, grupos, etc. de estos procedimientos y composiciones. Es decir, aunque es posible que no se divulgue explícitamente una referencia específica a cada una de las diversas combinaciones y permutaciones individuales y colectivas de estas composiciones y procedimientos, en el presente documento se contempla y se describe específicamente cada una de las mismas. Por ejemplo, si se divulga y se describe una composición particular de sustancias o un procedimiento particular y se describen varias composiciones o procedimientos, todas y cada una de las combinaciones y permutaciones de las composiciones y los procedimientos se contemplan específicamente a menos que se indique específicamente lo contrario. Asimismo, también se contempla y se divulga específicamente cualquier subconjunto o combinación de las mismas.
Claims (5)
1.Una composición para su uso en un procedimiento de tratamiento de una enfermedad inflamatoria neurológica en un individuo, que comprende:
identificar a un individuo que padece ELA, epilepsia, autismo o esquizofrenia,
administrar una cantidad eficaz de cPMP (monofosfato de piranopterina cíclico) al individuo,
tratando así al individuo.
2. La composición para su uso según la reivindicación 1, en la que la enfermedad inflamatoria neurológica se selecciona del grupo que consiste en trastornos autoinmunitarios del sistema nervioso central (SNC), tales como epilepsias autoinmunitarias; esclerosis lateral amiotrófica (ELA); esquizofrenia; autismo; epilepsia; y convulsiones febriles sin infección subyacente.
3. La composición para su uso según la reivindicación 1, en la que la etapa de administración se selecciona del grupo que consiste en administración oral, administración tópica y administración parenteral.
4. La composición para su uso según la reivindicación 1, que comprende además identificar a un individuo que tiene una mutación en un gen seleccionado del grupo que consiste en gefirina, MOCS1 y MOCS2.
5. La composición para su uso según la reivindicación 1, que comprende además realizar un seguimiento al individuo para determinar la cantidad de MPT, MoCo, MoC0-S u otro intermedio o subproducto de la ruta de biosíntesis de MoCo.
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