ES2954658T3

ES2954658T3 - Compuestos, composiciones y procedimientos para aumentar la actividad de CFTR

Info

Publication number: ES2954658T3
Application number: ES17739769T
Authority: ES
Inventors: Daniel Parks; Cecilia Bastos; Matthew Cullen; Benito Munoz
Original assignee: Proteostasis Therapeutics Inc
Current assignee: Kineta Inc
Priority date: 2016-06-21
Filing date: 2017-06-21
Publication date: 2023-11-23
Anticipated expiration: 2037-06-21
Also published as: US20200010461A1; CA3028966A1; WO2017223188A1; MA45397A; EP3472156A1; EP3472156B1; AU2021215136A1; US10899751B2; AU2021215136B2; AU2017280206A1

Abstract

La presente divulgación está dirigida a compuestos divulgados que aumentan la actividad del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) medida en células epiteliales bronquiales (hBE) humanas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos, composiciones y procedimientos para aumentar la actividad de CFTR

Antecedentes

Las células normalmente mantienen un equilibrio entre la síntesis, el plegamiento, el tráfico, la agregación y la degradación de proteínas, lo que se conoce como homeostasis proteica, utilizando sensores y redes de vías (Sitia et al., Nature 426: 891-894, 2003; Ron et al., Nat Rev Mol Cell Biol ⁸: 519-529, 2007). El mantenimiento celular de la homeostasis de las proteínas, o proteostasis, se refiere al control de la conformación, las interacciones de unión, la localización y la concentración de las proteínas individuales que componen el proteoma. El plegamiento de proteínas in vivo se lleva a cabo mediante interacciones entre la cadena polipeptídica que se pliega y los componentes macromoleculares celulares, incluidas múltiples clases de chaperonas y enzimas de plegamiento, que minimizan la agregación (Wiseman et al., Cell 131: 519-529, 2007). El hecho de que una proteína determinada se pliegue en un tipo celular concreto depende de la distribución, concentración y localización subcelular de chaperonas, enzimas de plegamiento, metabolitos y similares (Wiseman et al.). La fibrosis quística y otras enfermedades relacionadas con el mal plegamiento de las proteínas surgen como resultado de un desequilibrio en la capacidad del entorno de la homeostasis de las proteínas (proteostasis) para gestionar la menor estabilidad energética de las proteínas mal plegadas y mutadas que son fundamentales para la fisiología normal (Balch et al., Science 319, 916-9 (2008); Powers, et al., Annu Rev Biochem 78, 959-91 (2009); Hutt et al., FEBS Lett 583, 2639-46 (2009)).

La fibrosis quística (FQ) está causada por mutaciones en el gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR), que codifica un canal de cloruro epitelial multimembrana (Riordan et al., Annu Rev Biochem 77, 701-26 (2008)). Aproximadamente el noventa por ciento de los pacientes tienen una deleción de fenilalanina (Phe) 508 (AF508) en al menos un alelo. Esta mutación provoca una alteración de la energía del pliegue de la proteína que conduce a la degradación de CFTR en el retículo endoplásmico (RE). Así pues, la mutación AF508 se asocia a un plegamiento y tráfico defectuosos, así como a una mayor degradación de la proteína CFTR mutante (Qu et al., J Biol Chem 272,15739-44 (1997)). La pérdida de un canal CFTR funcional en la membrana plasmática altera la homeostasis iónica (Cl-, Na+, HCO³') y la hidratación de la superficie de las vías respiratorias, lo que reduce la función pulmonar (Riordan et al.). La reducción del volumen de líquido periciliario y el aumento de la viscosidad del moco impiden la depuración mucociliar, lo que da lugar a una infección e inflamación crónicas, características fenotípicas de la enfermedad de la FQ (Boucher, J Intern Med 261, 5-16 (2007)). Además de la disfunción respiratoria, el CFTR AF508 también afecta a la función normal de otros órganos (páncreas, intestino, vesícula biliar), lo que sugiere que la pérdida de función afecta a múltiples vías descendentes que requerirán corrección.

Además de la fibrosis quística, las mutaciones en el gen CFTR y/o la actividad del canal CFTR también se han implicado en otras afecciones, como por ejemplo, la ausencia bilateral congénita de conductos deferentes (CBAVD), la pancreatitis aguda, recurrente pancreatitis aguda, recurrente o crónica, bronquiectasias diseminadas, asma, aspergilosis pulmonar alérgica, enfermedades pulmonares relacionadas con el tabaquismo, como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfermedad de ojo seco, síndrome de Sjogren y sinusitis crónica, enfermedad hepática colestásica (p. ej. cirrosis biliar primaria (CBP) y colangitis esclerosante primaria (CEP)) (Sloane et al. (2012), PLoS ONE 7(6): e39809.doi:10.1371/joumal. pone.0039809; Bombieri et al. (2011), J Cyst Fibros. 2011 Jun 1;10(2):586-102 Zheng et al. (2008), Clinical Respiratory Medicine, Third Ed., Mosby Inc. ; Levin et al. (2005), Invest Ophthalmol Vis Sci., 46(4):1428-34; Froussard (2007), Pancreas 35(1): 94-5; Garboczi, et al. (2017), J Exp Med 60 (⁶): 2401-10).

El documento WO2016/054560 describe compuestos de isoxazol y procedimientos para el tratamiento de la fibrosis quística. El documento WO2014/210159 describe procedimientos de modulación de la actividad de CFTR.

Sigue existiendo una necesidad en la técnica de compuestos, composiciones y procedimientos para aumentar la actividad de CFTR, así como de procedimientos para tratar la FQ, otras enfermedades relacionadas con CFTR y otras enfermedades de mal plegamiento de proteínas.

Sumario

La presente divulgación se basa, en parte, en el descubrimiento de que los compuestos divulgados tales como los que tienen fórmulas divulgadas) pueden aumentar la actividad del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) medida en células epiteliales bronquiales humanas (hBE).

Por ejemplo, en el presente documento se describen compuestos representados por las fórmulas I o II:

y sales y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que:

X se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y halógeno;

L1 se selecciona del grupo que consiste en cicloalquileno C4; y

Ra y Rb se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C^1-4y cicloalquileno C^3-6(opcionalmente sustituido por metilo, etilo o carboxilo); o Ra y Rb tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico de 4-6 miembros, opcionalmente sustituido en el nitrógeno del anillo adicional si está presente o en un carbono del anillo, por un alquilo C^1-6como metilo o etilo.

También se contemplan en el presente documento las composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto divulgado (como aquellos compuestos que tienen fórmulas divulgadas como Fórmula I o II) y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, las composiciones pueden incluir al menos un modulador CFTR adicional como se describe en cualquier parte del presente documento o al menos dos moduladores CFTR adicionales, cada uno independientemente como se describe en cualquier parte del presente documento.

En otras realizaciones, se proporciona un compuesto divulgado para su uso en un procedimiento de mejora (por ejemplo, aumento) de la actividad del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) en un sujeto que lo necesite, comprendiendo el procedimiento la administración a dicho sujeto de una cantidad eficaz de un compuesto divulgado de, por ejemplo, Fórmula I o II.

En algunas de estas realizaciones, la actividad de uno o más (por ejemplo, uno o dos) CFTR mutantes (por ejemplo, AF508, S549N, G542X, G551D, R117H, N1303K, W1282X, R553X, 621 1G>T, 1717-1G>A, 3849+ 10kbC>T, 2789+5G>A, 3120+1G>A, I507del, R1162X, 1898+1G>A, 3659delC, G85E, D1152H, R560T, R347P, 2184insA, A455E, R334W, Q493X, E56K, P67L, R74W, D110E, D110H, R117C, G178R, E193K, L206W, R347H, R352Q, A455E, S549R, G551S, D579G, S945L, S997F, F1052V, K1060T, A1067T, G1069R, R1070Q, R1070W, F1074L, G1244E, S1251N, S1255P, D1270N, G1349D, y 2184delA CFTR) se potencia (e.g., aumentado). En ciertas realizaciones, la actividad de AF508 CFTR está mejorada (por ejemplo, aumentada). En otras realizaciones, las actividades de dos CFTR mutantes (por ejemplo, Af 508 y G^{5 5 1}D; AF508 y A455E; o G542X; A508F) se potencian (por ejemplo, aumentan).

En ciertas realizaciones, el procedimiento comprende administrar un compuesto divulgado a un sujeto (por ejemplo, un paciente humano) que padece una enfermedad asociada con la disminución de la actividad de CFTR (por ejemplo, fibrosis quística, ausencia bilateral congénita de conductos deferentes (CBAVD), pancreatitis aguda, recurrente o crónica, bronquiectasia diseminada, asma, aspergilosis pulmonar alérgica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), sinusitis crónica, enfermedad de ojo seco, deficiencia de proteína C, A-p-lipoproteinemia, enfermedad de almacenamiento lisosómico, quilomicronemia tipo 1, enfermedad pulmonar leve, deficiencias en el procesamiento de lípidos, angioedema hereditario de tipo 1, coagulación-fibrinolisis, hemocromatosis hereditaria, síndrome metabólico relacionado con CFTR, bronquitis crónica, estreñimiento, insuficiencia pancreática, enfisema hereditario, síndrome de Sjogren, hipercolesterolemia familiar, enfermedad de células I/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, polendocrinopatía/hiperinsulemia, diabetes mellitus, enanismo de Laron, deficiencia de myleoperoxidasa, hipoparatiroidismo primario, melanoma, glicanosis CDG tipo 1, hipertiroidismo congénito, osteogénesis imperfecta, hipofibrinogenemia hereditaria, deficiencia de ACT, diabetes insípida (DI), DI neurofisaria, DI nefrogénica, síndrome de Charcot-Marie Tooth, enfermedad de Perlizaeus-Merzbacher, Enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, enfermedad de Huntington, ataxia espinocerebelosa de tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, palidoluysiana dentatorubral, distrofia miotónica, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob hereditaria (debida a un defecto en el procesamiento de la proteína priónica), enfermedad de Fabry, enfermedad hepática colestásica (p. ej. cirrosis biliar primaria (CBP) y colangitis esclerosante primaria (CEP)), y síndrome de Straussler-Scheinker). En algunas realizaciones, la enfermedad es la fibrosis quística.

También se contempla en el presente documento un compuesto divulgado para su uso en un procedimiento para tratar a un paciente que padece fibrosis quística, comprendiendo el procedimiento administrar a dicho paciente una cantidad eficaz del compuesto divulgado.

En algunas realizaciones, los procedimientos descritos en el presente documento pueden incluir además la administración de un modulador CFTR adicional o la administración de al menos dos moduladores CFTR adicionales. En ciertas realizaciones, al menos un modulador de CFTR es un corrector de CFTR (por ejemplo, VX-809 (lumacaftor), VX-661 (tezacaftor), VX-983, VX-152, VX-440, VX-445, VX-659, GLPG2851, GLPG2665, GLPG2737, GLPG3221 o GLPG2222) o potenciador (por ejemplo, ivacaftor GLPG1837, GLPG2545, GLPG3067 y/o genisteína). En algunas de estas realizaciones, uno de los al menos dos agentes terapéuticos adicionales es un corrector de CFTR (por ejemplo, VX-809, VX-661, VX-983, VX-152, VX-440, VX-445, VX-659, GLPG2222, GLPG3221, GLPG2737, GLPG2851 y/o GLPG2665) y el otro es un potenciador de CFTR (por ejemplo, ivacaftor, GLPG1837, GLPG2545, GLPG3067, y/o genisteína).

Descripción detallada

La información técnica que se expone a continuación puede, en algunos aspectos, ir más allá del alcance de la invención reivindicada en la presente memoria, que se define por medio de las reivindicaciones adjuntas. La información técnica adicional se proporciona para situar la invención real en un contexto técnico más amplio y para ilustrar posibles desarrollos técnicos relacionados.

Tal como se utilizan en el presente documento, las palabras "un" y "uno, una" incluyen uno o más, a menos que se especifique lo contrario. Por ejemplo, el término "un agente" abarca tanto un único agente como una combinación de dos o más agentes.

Como se ha discutido anteriormente, la presente divulgación se dirige en parte a compuestos como los descritos en el presente documento o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos, composiciones farmacéuticas, y su uso en procedimientos para aumentar la actividad de CFTR y procedimientos para tratar la fibrosis quística. Por ejemplo, en el presente documento se describen compuestos representados por las fórmulas I o II:

X se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y halógeno;

L¹se selecciona del grupo que consiste en cicloalquileno C4 y alquileno C1-6. y

Ra y Rb se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C^1-4y cicloalquileno C^3-6(opcionalmente sustituido por metilo, etilo o carboxilo); o Ra y Rb tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico de 4-6 miembros, opcionalmente sustituido en el nitrógeno del anillo adicional si está presente o en un carbono del anillo, por metilo o etilo.

En ciertas realizaciones, los compuestos aquí divulgados pueden estar representados por la fórmula III o IV:

En ciertas realizaciones X puede ser hidrógeno. En algunas otras realizaciones, X puede ser flúor.

En ciertas realizaciones,Ra y Rb junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico de 4 miembros, por ejemplo, un anillo de azetidina.

Los compuestos ejemplares de la divulgación se muestran a continuación en la Tabla 1a y la Tabla 1b. Los compuestos marcados con un asterisco (*) se proporcionan como referencia.

Tabla 1a

(continuación)

Entre los compuestos adicionales contemplados se incluyen los de la Tabla 1B:

(continuación)

También se contemplan en el presente documento las composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto divulgado como aquellos compuestos que tienen Fórmula I o II y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, las composiciones pueden incluir al menos un modulador CFTR adicional como se describe en cualquier parte del presente documento o al menos dos moduladores CFTR adicionales, cada uno independientemente como se describe en cualquier parte del presente documento.

A continuación se describirán más particularmente las características y otros detalles de la divulgación. Por conveniencia, ciertos términos empleados en la memoria descriptiva, los ejemplos y las reivindicaciones adjuntas se recogen en este documento. Estas definiciones deben leerse a la luz del resto de la divulgación y tal como las entiende un experto en la materia. A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por un experto en la técnica. Se apreciará que la descripción de la presente divulgación debe interpretarse en congruencia con las leyes y principios del enlace químico.

El término "alquilo", tal como se utiliza aquí, a menos que se indique lo contrario, se refiere a grupos de hidrocarburos alifáticos saturados, tanto ramificados como de cadena recta, que tienen el número especificado de átomos de carbono; por ejemplo, "alquilo Ci-Cio" denota alquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, e hidrocarburos rectos o ramificados de 1-6, 1-4, o 1-3 átomos de carbono, denominados aquí alquilo C i^-6, alquilo C i^-4, y alquilo C i^-3, respectivamente. Los ejemplos de alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, ibutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo, n-hexilo, 2-metilbutilo, 2-metilpentilo, 2-etilbutilo, 3-metilpentilo y 4-metilpentilo. El término "alquenilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a las fracciones de cadena recta y ramificada que tienen el número especificado de átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. Los grupos alquenilo ejemplares incluyen, pero no se limitan a, un grupo recto o ramificado de 2-6 o 3-4 átomos de carbono, denominados en el presente documento alquenilo C^2-6y alquenilo C^3-4, respectivamente. Los grupos alquenilo ejemplares incluyen, pero no se limitan a, vinilo, alilo, butenilo, pentenilo, etc.

El término "alquinilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a las fracciones de cadena recta y ramificada que tienen el número especificado de átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono. El término "cicloalquilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a fracciones alquilo cíclicas saturadas que tienen 3 o más átomos de carbono, por ejemplo, 3-10, 3-6 o 4-6 carbonos, denominadas en el presente documento cicloalquilo C^3-10, cicloalquilo C^3-6o cicloalquilo C^4-6, respectivamente, por ejemplo. Los ejemplos del "cicloalquilo" como se usan en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y adamantilo.

El término "cicloalcoxi", tal como se utiliza aquí, se refiere a un grupo cicloalquilo unido a oxígeno (cicloalquilo-O-). Los grupos cicloalcoxi ejemplares incluyen, pero no se limitan a, grupos cicloalcoxi de 3-6 átomos de carbono, denominados en el presente documento grupos cicloalcoxi C³-⁶. Los grupos cicloalcoxi ejemplares incluyen, pero no se limitan a, ciclopropoxi, ciclobutoxi, ciclohexiloxi, etc.

El término "cidoalquenilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a las fracciones de alquenilo cíclico que tienen 3 o más átomos de carbono.

El término "cicloalquinilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a las fracciones alquinílicas cíclicas que tienen 5 o más átomos de carbono.

Por "alquileno" se entiende un radical divalente alifático saturado, recto o ramificado, con el número de carbonos indicado. "Cicloalquileno" se refiere a un radical divalente de grupo hidrocarburo saturado carbocíclico que tiene el número de carbonos indicado.

El término "alcoxi", tal como se utiliza aquí, se refiere a un grupo alquilo recto o ramificado unido a oxígeno (alquilo-O-). Los grupos alcoxi ejemplares incluyen, pero no se limitan a, grupos alcoxi de 1-6 o 2-6 átomos de carbono, denominados en el presente documento alcoxi C^1-6y alcoxi C^2-6, respectivamente. Los grupos alcoxi ejemplares incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, isopropoxi, etc.

El término "heterocíclico" o "heterociclo" abarca heterocicloalquilo, heterocicloalquenilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquenilo, heteropolicicloalquilo, heteropolicicloalquenilo y similares, a menos que se indique lo contrario. Heterocicloalquilo se refiere a grupos cicloalquilo que contienen uno o más heteroátomos (O, S o N) dentro del anillo. Heterocicloalquenilo se refiere a grupos cicloalquenilo que contienen uno o más heteroátomos (O, S o N) dentro del anillo. Heterocicloalquilo se refiere a los grupos bicicloalquilo que contienen uno o más heteroátomos (O, S o N) dentro de un anillo. Heterocicloalquenilo como se usa aquí se refiere a grupos bicicloalquenilo que contienen uno o más heteroátomos (O, S o N) dentro de un anillo, un heterociclo puede referirse, por ejemplo, a una estructura de anillo saturado o parcialmente insaturado de 4 a 12 o de 4 a 10 miembros, incluyendo anillos puenteados o fusionados, y cuyas estructuras de anillo incluyen de uno a tres heteroátomos, como nitrógeno, oxígeno y azufre. Cuando sea posible, los anillos heterociclilo pueden estar unidos al radical adyacente mediante carbono o nitrógeno. Algunos ejemplos de grupos heterociclilo son, entre otros, pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina, piperazina, oxetano, azetidina, tetrahidrofurano o dihidrofurano, etc.

Los grupos cicloalquilo, cicloalquenilo y heterocíclicos también incluyen grupos similares a los descritos anteriormente para cada una de estas categorías respectivas, pero que están sustituidos con una o más fracciones oxo.

El término "arilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a sistemas de anillos carbocíclicos aromáticos monocíclicos o policíclicos. Un arilo policíclico es un sistema de anillos policíclicos que comprende al menos un anillo aromático. Los arilos policíclicos pueden comprender anillos fusionados, anillos unidos covalentemente o una combinación de los mismos. El término "arilo" abarca radicales aromáticos, como fenilo, naftilo, indenilo, tetrahidronaftilo e indanilo. Un grupo arilo puede estar sustituido o sin sustituir. En algunas realizaciones, el pH es de aproximadamente 10. Ejemplos de arilo opcionalmente sustituido son el fenilo, el fenilo sustituido, el naftilo y el naftilo sustituido.

El término "heteroarilo", tal como se utiliza aquí, se refiere a grupos carbocíclicos aromáticos que contienen uno o más heteroátomos (O, S o N) dentro de un anillo. Un grupo heteroarilo, a menos que se indique lo contrario, puede ser monocíclico o policíclico. Un grupo heteroarilo puede además estar sustituido o no sustituido. Los grupos heteroarilo contemplados incluyen sistemas de anillos sustituidos con una o más fracciones oxo. Un heteroarilo policíclico puede comprender anillos fusionados, anillos unidos covalentemente o una combinación de los mismos. Un heteroarilo policíclico es un sistema de anillos policíclicos que comprende al menos un anillo aromático que contiene uno o más heteroátomos dentro de un anillo. Ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, piridinilo, piridazinilo, imidazolilo, pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, quinolilo, isoquinolilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranoilo, cinolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, triazinilo, isoindolilo, purinilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotriazolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo, dihidroquinolilo, tetrahidroquinolilo, dihidroisoquinolilo, tetrahidroisoquinolilo, benzofurilo, furopiridinilo, pirolopirimidinilo, tiazolopiridinilo, oxazolopiridinilo y azaindolilo. Los grupos heteroarilo anteriores pueden estar unidos a C o a heteroátomos (cuando sea posible). Por ejemplo, un grupo derivado del pirrol puede ser pirrol-1-ilo (N-acoplado) o pirrol-3-ilo (C-acoplado). En algunas realizaciones, el heteroarilo es un heteroarilo de 4 a 12 miembros. En otras realizaciones, el heteroarilo es un heteroarilo mono o bicíclico de 4 a 10 miembros.

El término "sustituido" se refiere a la sustitución por reemplazo independiente de uno, dos, o tres o más de los átomos de hidrógeno con sustituyentes que incluyen, pero no se limitan a, y a menos que se indique lo contrario, -alquilo C¹-C¹², -alquenilo C²-C¹², -alquinilo C²-C¹², -cicloalquilo C³-C¹², -cicloalquenilo C³-C¹², cicloalquinilo C³-C¹², -heterocíclico, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -NO², -N³, -CN, -NH², oxo, tioxo, -NHRx, -NRxRx, dialquilamino, -diarilamino, -diheteroarilamino, -ORx, -C(O)Ry, -C(O)C(O)Ry, -OCO₂Ry, -OC(O)Ry, OC(O)C(O)Ry, -NHC(O)Ry, -NHCO₂Ry, - NHC(O)C(O)Ry, NHC(S)NH₂, -NHC(S)NHRx, -NHC(NH)NH₂, -NHC(NH)NHRx, - NHC(NH)Rx, -C(NH)NHRX, y (C=NRx)Rxi -NRxC(O)Rx, -NRxC(O)N(Rx)₂, -NRxCO₂Ry, -NRxC(O)C(O)Ry, -NRxC(S)NH₂, -NRxC(S)NHRx, -NRxC(NH)NH₂, -NRxC(NH)NHRx, -NRxC(NH)Rx, -C(NRx)NHRx -S(O)Ry, -NHSO²Rx, -CH²NH², -CH²SO²CH³, -arilo, -arilalquilo, - heteroarilo, -heteroarilalquilo, -heterocicloalquilo, -cicloalquilo C³-C¹²-, -polialcoxialquilo, -polialcoxi, -metoximetoxi, -metoxietoxi, -SH, -S-Rx, o -metiltiometilo, donde Rx se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, -alquilo C¹-C¹², -alquenilo C²-C¹², -alquinilo C²-C¹², -cicloalquilo C³-C¹², -arilo, -heteroarilo y -heterocíclico y.Ry se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, -alquilo C¹-C¹², -alquenilo C²-C¹², -alquinilo C²-C¹², -cicloalquilo C³-C¹², -arilo, -heteroarilo, -heterocíclico, -NH², -NH.alquilo C¹.C¹², -NH.alquenilo C²-C¹², -NH.alquinilo C²-C¹², -NH.cicloalquilo C³-C¹², -NH-arilo, -NH-heteroarilo y -NH-heterocíclico. Se entiende que los arilos, heteroarilos, alquilos y similares pueden ser sustituidos adicionalmente.

Los términos "halo" o "halógeno" utilizados en el presente documento se refieren a F, Cl, Br o I.

El término "haloalquilo", tal como se utiliza aquí, se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a (2n+1) sustituyente(s) seleccionado(s) independientemente de F, Cl, Br o I, donde n es el número máximo de átomos de carbono en el grupo alquilo. Se entenderá que el haloalquilo es un ejemplo específico de un alquilo opcionalmente sustituido.

Los términos "hidroxi" e "hidroxilo", tal como se usan en el presente documento, se refieren al radical -OH.

Como comprenderá el artesano experto, "H" es el símbolo del hidrógeno, "N" es el símbolo del nitrógeno, "S" es el símbolo del azufre, "O" es el símbolo del oxígeno. "Me" es la abreviatura de metilo.

Los compuestos de la divulgación pueden contener uno o más centros quirales y, por lo tanto, existir como estereoisómeros. El término "estereoisómeros" utilizado en el presente documento incluye todos los enantiómeros o diastereómeros. Estos compuestos pueden designarse mediante los símbolos "(+)", "(-)", "R" o "S", dependiendo de la configuración de los sustituyentes alrededor del átomo de carbono estereogénico, pero el experto reconocerá que una estructura puede denotar un centro quiral implícitamente. La presente divulgación abarca diversos estereoisómeros de los compuestos divulgados y mezclas de los mismos. Las mezclas de enantiómeros o diastereómeros pueden designarse "(±)" en la nomenclatura, pero el experto reconocerá que una estructura puede denotar un centro quiral implícitamente.

Los compuestos de la divulgación pueden contener uno o más dobles enlaces y, por tanto, existir como isómeros geométricos resultantes de la disposición de los sustituyentes alrededor de un doble enlace carbono-carbono. El símbolo = :: indica un enlace que puede ser simple, doble o triple, tal como se describe en el presente documento. Los sustituyentes alrededor de un doble enlace carbono-carbono se designan como en configuración "Z" o E", donde los términos "Z' y E ' se utilizan de acuerdo con las normas de la IUPAC. Amenos que se especifique lo contrario, las estructuras que muestran dobles enlaces abarcan tanto los isómeros "E" como los Z". Los sustituyentes alrededor de un doble enlace carbono-carbono pueden denominarse alternativamente "cis" o "trans", donde "cis" representa sustituyentes en el mismo lado del doble enlace y "trans" representa sustituyentes en lados opuestos del doble enlace.

Los compuestos de la divulgación pueden contener un anillo carbocíclico o heterocíclico y, por lo tanto, existir como isómeros geométricos resultantes de la disposición de los sustituyentes alrededor del anillo. La disposición de los sustituyentes alrededor de un anillo carbocíclico o heterocíclico se designa como configuración "Z" o "£', donde los térm inosZ' y "E ' se utilizan de acuerdo con las normas de la IUPAC. A menos que se especifique lo contrario, las estructuras que representan anillos carbocíclicos o heterocíclicos abarcan tanto los isómeros "Z" como los "E" Los sustituyentes alrededor de un anillo carbocíclico o heterocíclico también pueden denominarse "cis" o "trans", donde el término "cis" representa sustituyentes en el mismo lado del plano del anillo y el término "trans" representa sustituyentes en lados opuestos del plano del anillo. Las mezclas de compuestos en los que los sustituyentes están dispuestos tanto en el mismo lado como en lados opuestos del plano del anillo se denominan "cis/trans"

Los enantiómeros y diasterisómeros individuales de los compuestos divulgados pueden prepararse sintéticamente a partir de materiales de partida comercialmente disponibles que contengan centros asimétricos o estereogénicos, o mediante la preparación de mezclas racémicas seguidas de procedimientos de resolución bien conocidos por los expertos en la materia. Estos procedimientos de resolución se ejemplifican mediante (1) la unión de una mezcla de enantiómeros a un auxiliar quiral, la separación de la mezcla resultante de diastereómeros por recristalización o cromatografía y la liberación del producto ópticamente puro del auxiliar, (2) la formación de sales empleando un agente de resolución ópticamente activo, (3) la separación directa de la mezcla de enantiómeros ópticos en columnas de cromatografía líquida quiral o (4) la resolución cinética utilizando reactivos químicos o enzimáticos estereoselectivos. Las mezclas racémicas también pueden resolverse en los enantiómeros que las componen mediante procedimientos bien conocidos, como la cromatografía líquida en fase quiral o la cristalización del compuesto en un disolvente quiral. Las síntesis estereoselectivas, una reacción química o enzimática en la que un único reactante forma una mezcla desigual de estereoisómeros durante la creación de un nuevo estereocentro o durante la transformación de uno preexistente, son bien conocidas en la técnica. Las síntesis estereoselectivas abarcan transformaciones tanto enantio como diastereoselectivas, y pueden implicar el uso de auxiliares quirales. Para ejemplos, véase Carreira y Kvaemo, Classics in Stereoselective Synthesis, Wiley-VCH: Weinheim, 2009. Cuando se describe o representa un compuesto concreto, se pretende abarcar esa estructura química, así como los tautómeros de esa estructura.

El término "enantioméricamente puro" significa una composición estereoméricamente pura de un compuesto. Por ejemplo, una composición estereoquímicamente pura es una composición que está libre o sustancialmente libre de otros estereoisómeros de ese compuesto. En otro ejemplo, para un compuesto que tiene un centro quiral, una composición enantioméricamente pura del compuesto está libre o sustancialmente libre del otro enantiómero. En otro ejemplo, para un compuesto que tiene dos centros quirales, una composición enantioméricamente pura está libre o sustancialmente libre de los otros diastereómeros.

Cuando se describe o representa una estereoquímica particular, se pretende significar que un enantiómero particular está presente en exceso en relación con el otro enantiómero. Un compuesto tiene una configuración R en una posición específica cuando está presente en exceso en comparación con el compuesto que tiene una configuración S en esa posición. Un compuesto tiene una configuración S en una posición específica cuando está presente en exceso en comparación con el compuesto que tiene una configuración R en esa posición.

El compuesto de la invención puede existir en formas no solvatadas, así como formas solvatadas, con solventes aceptables para uso farmacéutico, tales como agua, etanol y similares, y se pretende que la invención comprenda las formas tanto solvatadas como no solvatadas. En una realización, un compuesto divulgado es amorfo o, en otra realización, un polimorfo único. En otra realización, un compuesto divulgado es una mezcla de polimorfos. En otra realización, un compuesto divulgado está en forma cristalina.

La presente invención comprende además variantes marcadas isotópicamente de la presente invención que son idénticas a las indicadas en la presente memoria, excepto por el hecho de que uno o más átomos han sido sustituidos por un átomo que presenta una masa atómica o un número atómico diferente de la masa atómica o número atómico habitualmente encontrado en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁸O, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F, y ³⁶Cl, respectivamente. Por ejemplo, un compuesto divulgado puede tener uno o más átomos de H sustituidos por deuterio.

Determinados compuestos marcados isotópicamente de la invención (por ejemplo, los marcados con 3H y ¹⁴C) son útiles en ensayos de distribución en los tejidos del compuesto y/o el sustrato. Los isótopos titulados (es decir, ³H) y carbono-14 (es decir, ¹⁴C) son particularmente preferentes por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como el deuterio (es decir, ²H) puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas resultantes de la mayor estabilidad metabólica (por ejemplo una semivida in vivo incrementada o necesidades de dosis menores) y por lo tanto puede resultar preferente bajo algunas circunstancias. Los compuestos etiquetados isotópicamente de la invención generalmente se pueden preparar siguiendo procedimientos análogos a los descritos en los esquemas y/o en los ejemplos a continuación, mediante la sustitución de un reactivo etiquetado isotópicamente apropiado por un reactivo no etiquetado isotópicamente.

En algunas realizaciones, uno o más de los átomos de nitrógeno de un compuesto divulgado, si están presentes, se oxidan a N-óxido.

A lo largo de la sección de Ejemplos se proporcionan rutas sintéticas representativas para la preparación de los compuestos aquí divulgados. Como comprenderá el experto, los diastereómeros pueden separarse de la mezcla de reacción mediante cromatografía en columna.

Los compuestos divulgados también pueden prepararse usando procedimientos descritos en la literatura, incluyendo, pero no limitados a, J. Med. Chem. 2011, 54(13), 4350-64; Russian Journal of Organic Chemistry, 2011, 47(8), 1199 1203; Publicación de solicitud de patente estadounidense n° 2009/0036451 A1; WO2008/046072 A2 y Patente estadounidense n° 4.336.264.

Como se analizó anteriormente, contemplado en el presente documento en una realización es un compuesto divulgado para el uso en un procedimiento de aumentar actividad de CFTR en un sujeto que sufre de una condición asociada a actividad de CFTR, el procedimiento que comprende administrar a dicho paciente una cantidad eficaz de un compuesto descrito adjunto.

"Tratar" o "tratamiento" incluye prevenir o retrasar la aparición de los síntomas, complicaciones o indicios bioquímicos de una enfermedad, aliviar o mejorar los síntomas o detener o inhibir el desarrollo ulterior de la enfermedad, afección o trastorno. Un "sujeto" es un animal que va a ser tratado o que necesita tratamiento. Un "paciente" es un sujeto humano que necesita tratamiento.

Una "cantidad eficaz" se refiere a aquella cantidad de un agente que es suficiente para lograr un efecto deseado y/o citado. En el contexto de un procedimiento de tratamiento, una "cantidad eficaz" del agente terapéutico que es suficiente para mejorar uno o más síntomas de un trastorno y/o prevenir el avance de un trastorno, causar la regresión del trastorno y/o lograr un efecto deseado.

El término "modular" abarca aumentar, potenciar, inhibir, disminuir, suprimir y similares. Los términos "aumentar" y "potenciar" significan causar una ganancia neta por medios directos o indirectos. Tal y como se utilizan aquí, los términos "inhibir" y "disminuir" abarcan causar una disminución neta por medios directos o indirectos.

En algunos ejemplos, la actividad de CFTR se potencia tras la administración de un compuesto descrito en el presente documento cuando se produce un aumento de la actividad de CFTR en comparación con la actividad en ausencia de la administración del compuesto. La actividad de CFTR abarca, por ejemplo, la actividad del canal de cloruro del CFTR, y/u otra actividad de transporte de iones (por ejemplo, transporte de HCO3‘ ). En algunas de estas realizaciones, la actividad de uno o más (por ejemplo, uno o dos) CFTR mutantes (por ejemplo, AF508, S549N, G542X, G551D, R117H, N1303K, W1282X, R553X, 621 1G>T, 1717-1G>A, 3849+10kbC>T, 2789+5G>A, 3120+1G>A, I507del, R1162X, 1898+1G>A, 3659delC, G85E, D1152H, R560T, R347P, 2184insA, A455E, R334W, Q493X, E56K, P67L, R₇4W, D110E, D110H, R117C, G178R, E193K, L206W, R347H, R352Q, A455E, S549R, G551S, D579G, S945L, S997F, F1052V, K1060T, A1067T, G1069R, R1070Q, R1070W, F1074L, G1244E, S1251N, S1255P, D1270N, G1349D, y 2184delACFTR) se potencia (e.g., aumentado). Los pacientes contemplados pueden tener una mutación o mutaciones CFTR de una o más clases, tales como, sin limitación, mutaciones CFTR de Clase I, mutaciones CFTR de Clase II, mutaciones CFTR de Clase III, mutaciones CFTR de Clase IV, mutaciones CFTR de Clase V y mutaciones de Clase VI. Los genotipos CFTR contemplados en sujetos (por ejemplo, sujetos humanos) incluyen, sin limitación, mutaciones homocigotas (por ejemplo, AF508 / AF508 y R117H / R117H) y mutaciones heterocigotas compuestas (por ejemplo, AF508 /G551D; AF508 /A455E; AF508 / G542X; A508F / W1204X; R553X / W1316X; W1282X/N1303K, 591A18/ E831X, F508del/R117H/ N1303K/ 3849+10kbC>T; A303K/384; y DF508/G178R).

En ciertas realizaciones, la mutación es una mutación de Clase I, por ejemplo, una G542X; una mutación de Clase II/ I, por ejemplo, una mutación heterocigota compuesta AF508 / G542X. En otras realizaciones, la mutación es una mutación de Clase III, por ejemplo, una G551D; una mutación de Clase II/ Clase III, por ejemplo, una mutación heterocigota compuesta AF508 / G551D. En otras realizaciones, la mutación es una mutación de Clase V, por ejemplo, una mutación A455E; Clase II/ Clase V, por ejemplo, una mutación heterocigota compuesta AF508 /A455E. De las más de 1000 mutaciones conocidas del gen CFTR , AF508 es la mutación más prevalente de CFTR que da lugar a un mal plegamiento de la proteína y a un tráfico deficiente desde el retículo endoplásmico a la membrana apical (Dormer et al. (2001). J Cell Sci 114, 4073-4081; http://www. genet. sickkids. on. ca/app). En ciertas realizaciones, la actividad de AF508 CFTR está mejorada (por ejemplo, aumentada). En ciertas realizaciones, la actividad AF508 CFTR y/o la actividad G542X CFTR y/o la actividad G551D CFTR y/o la actividad A455E CFTR están potenciadas (por ejemplo, aumentadas). El aumento de la actividad de CFTR puede medirse, por ejemplo, utilizando procedimientos descritos en la bibliografía, incluyendo, por ejemplo, ensayos de cámara de Ussing, ensayos de pinza con parche y ensayo hBE Ieq (Devor et al. (2000), Am J Physiol Cell Physiol 279(2): C461-79 Mojica et al. (2002), J Gen Physiol 119(6): 545-59; Bruscia et al. (2005), 12 :103-8): 2965-2971).

Como se discutió anteriormente, la divulgación también abarca un compuesto divulgado para su uso en un procedimiento de tratamiento de la fibrosis quística. Los compuestos divulgados para tratar otras condiciones asociadas a la actividad de CFTR, incluyendo condiciones asociadas a la actividad deficiente de CFTR también se proporcionan adjunto.

Se proporciona aquí un compuesto divulgado para su uso en un procedimiento de tratamiento de una afección asociada con la actividad deficiente o disminuida de CFTR, el procedimiento comprende administrar una cantidad eficaz de un compuesto divulgado que mejora la actividad de CFTR. Ejemplos de afecciones asociadas a una actividad deficiente del CFTR son la fibrosis quística, la ausencia bilateral congénita de conductos deferentes, la pancreatitis aguda, recurrente o crónica, la bronquiectasia diseminada, el asma, la aspergilosis pulmonar alérgica, las enfermedades pulmonares relacionadas con el tabaquismo, como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la sinusitis crónica, la enfermedad hepática colestásica (por ejemplo, la cirrosis biliar primaria (CBP) y la colangitis esclerosante primaria (CEP)). Cirrosis biliar primaria (CBP) y colangitis esclerosante primaria (CEP)), enfermedad del ojo seco, deficiencia de proteína C, lipoproteinemia Ap, enfermedad por almacenamiento lisosómico, quilomicronemia de tipo ¹, enfermedad pulmonar leve, deficiencias en el procesamiento de lípidos, angioedema hereditario de tipo ¹, coagulación-fibrinólisis, hemocromatosis hereditaria, síndrome metabólico relacionado con CFTR, bronquitis crónica, estreñimiento, insuficiencia pancreática, enfisema hereditario y síndrome de Sjogren.

En algunas realizaciones, los procedimientos de tratamiento divulgados comprenden además la administración de un agente terapéutico adicional. Por ejemplo, en una realización, el procedimiento comprende administrar un compuesto divulgado y al menos un agente terapéutico adicional. En ciertos aspectos, un procedimiento de tratamiento divulgado comprende administrar un compuesto divulgado, y al menos dos agentes terapéuticos adicionales. Los agentes terapéuticos adicionales incluyen, por ejemplo, agentes mucolíticos, broncodilatadores, antibióticos, agentes antiinfecciosos, agentes antiinflamatorios, agentes moduladores de canales iónicos, agentes terapéuticos utilizados en terapia génica, correctores de CFTR y potenciadores de CFTR, u otros agentes que modulan la actividad de CFTR. En algunas realizaciones, al menos un agente terapéutico adicional se selecciona del grupo que consiste en un corrector de CFTR y un potenciador de CFTR. Algunos ejemplos de correctores y potenciadores de CFTR son VX-770 (Ivacaftor), Ivacaftor deuterado, GLPG2851, GLPG2737, GLPG2451, VX-809 (ácido 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoico, lumacaftor deuterado, VX-661 (1-(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-5-il)-N-[1-[(2R)-2,3-dihidroxipropil]-6-fluoro-2-(2-hidroxi-1,1-dimetiletil)-1H-indol-5-il]-ciclopropanocarboxamida), VX-983, VX-152, VX-440, VX-445, VX-659, yAtaluren (PTC124) (3-[5-(2-fluorofenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]ácido benzoico), FDL169, GLPG1837/ABBV-974 (por ejemplo, un potenciador de CfTR), GLPG2665, GLPG2222 (por ejemplo, un corrector de CFTR); y compuestos descritos en, p o re j., WO2014/144860 y 2014/176553. Ejemplos de moduladores incluyen QBW-251, QR-010, NB-124, riociquat, SPX-101, y compuestos descritos en, por ejemplo, WO2014/045283; WO2014/081821, WO2014/081820, WO2014/152213; WO2014/160440, WO2014/160478, US2014027933; WO2014/0228376, WO2013/038390, WO2011/113894, WO2013/038386y WO2014/180562, de los cuales los moduladores divulgados en esas publicaciones se contemplan como un agente terapéutico adicional. Algunos ejemplos de agentes antiinflamatorios son el N6022 (ácido 3-(5-(4-(1H-imidazol-1-il) fenil)-1-(4-carbamoil-2-metilfenil)'1H'pirrol'2'il) propanoico), CTX-4430, N1861, N1785 y N91115.

En algunas realizaciones, los procedimientos aquí descritos pueden incluir además la administración de un agente terapéutico adicional o la administración de al menos dos agentes terapéuticos CFTR adicionales. En algunas realizaciones, los procedimientos descritos en el presente documento pueden incluir además la administración de un modulador CFTR adicional o la administración de al menos dos moduladores CFTR adicionales. En ciertas realizaciones, al menos un modulador de CFTR es un corrector de CFTR (por ejemplo, VX-809, VX-661, VX-983, VX-152, VX-440, VX-445, VX-659, GLPG2222 y GLPG2665) o potenciador (por ejemplo, ivacaftor, genisteína, GLPG2545, GLPG3067, GLPG1837). En algunas de estas realizaciones, uno de los al menos dos agentes terapéuticos adicionales es un corrector de CFTR (p. ej., VX-809, VX-661, VX-983, VX-152, VX-445, VX-659,VX-440, GLPG2222, GLPG2851, GLPG2737 y/o GLPG3221) y el otro es un potenciador de CFTR (p. ej., ivacaftor, genisteína, GLPG2545, GLPG3067, GLPG1837). En algunas de estas realizaciones, uno de los al menos dos agentes terapéuticos adicionales es un corrector de CFTR (por ejemplo, GLPG2222, GLPG2851, GLPG2737, GLPG3221 o GLPG2665) y el otro es un potenciador de CFTR (por ejemplo, GLPG183, GLPG2545 o GLPG3067). En algunas de estas realizaciones, uno de los al menos dos agentes terapéuticos adicionales es un corrector de CFTR (por ejemplo, VX-809, VX-152, VX-445, VX-659, VX-440 o VX-661) y el otro es un potenciador de CFTR (por ejemplo, ivacaftor, GLPG1837, GLPG2545 o GLPG3067). En algunas de estas realizaciones, al menos un modulador CFTR es un agente que mejora la lectura de codones de parada (por ejemplo, NB124 o ataluren).

Por consiguiente, en otro aspecto, la presente divulgación proporciona un compuesto divulgado y al menos uno o dos agente(s) terapéutico(s) CFTr adicional(es) para su uso en un procedimiento de tratamiento de una afección asociada con actividad de CFTR deficiente o disminuida (p. ej., fibrosis quística), que incluye administrar a un sujeto que lo necesita (por ejemplo, un paciente humano que lo necesita) una cantidad eficaz de un compuesto divulgado y al menos uno o dos agente(s) terapéutico(s) CFTR adicional(es) (por ejemplo, al menos uno o dos agentes terapéuticos CFTR adicionales, por ejemplo, en el que uno de los al menos uno o dos agentes terapéuticos adicionales es opcionalmente un corrector o modulador de CFTR (por ejemplo, VX-809, VX-661, VX-983, VX-152, VX-440, VX-445, VX-659, GLPG2222, GLPG2665, GLPG2851, GLPG2737, GLPG3221, NB124, ataluren) y/o el otro es un potenciador de CFTR (por ejemplo, ivacaftor, genisteína, GLPG1837, GLPG2545 y GLPG3067); por ejemplo, uno de los al menos dos agentes terapéuticos adicionales es GLPG2222, GLPG2851 o GLPG2665, y el otro es GLPG1837, GLPG2545 o GLPG3067; o uno de los al menos dos agentes terapéuticos adicionales es VX-809 o VX-661, y el otro es ivacaftor). En ciertas realizaciones, el genotipo CFTR del sujeto incluye una o más mutaciones CFTR de Clase I, una o más mutaciones CFTR de Clase II, una o más mutaciones CFTR de Clase III, una o más mutaciones CFTR de Clase IV, o una o más mutaciones CFTR de Clase V, o una o más mutaciones CFTR de Clase VI. En ciertas realizaciones, el genotipo CFTR del sujeto incluye una o más mutaciones homocigotas (por ejemplo, AF508/ AF508 o R117H / R117H) y/o una o más mutaciones heterocigotas compuestas (por ejemplo, AF508/G551D; AF508/A455E; AF508/G542X; A508F / W1204X; R553X/W1316X; W1282X/N1303K; F508del / R117H; N1303K/3849+10kbC>T; AF508 / R334W; DF508 / G178R, y 591A18 / E831X). En ciertas realizaciones, el genotipo CFTR del sujeto incluye una mutación de Clase I, por ejemplo, una mutación G542X de Clase I, por ejemplo, una mutación heterocigota compuesta AF508 / G542X. En otras realizaciones, el genotipo CFTR del sujeto incluye una mutación de Clase III, por ejemplo, una mutación G551D de Clase III, por ejemplo, una mutación heterocigota compuesta AF508 / G551D. En otras realizaciones, el genotipo CFTR del sujeto incluye una mutación de clase V, por ejemplo, una mutación de clase V A455E, por ejemplo, una mutación heterocigota compuesta AF508 / A455E. En ciertas realizaciones, la actividad AF508 CFTR y/o la actividad G542X CFTR y/o la actividad G551D CFTR y/o la actividad A455E se potencian (por ejemplo, aumentan). En ciertas realizaciones, la mejora de la actividad (por ejemplo, el aumento de la actividad) proporcionada por la combinación del compuesto divulgado y uno o dos agentes terapéuticos adicionales es mayor que aditiva cuando se compara con la mejora de la actividad proporcionada por cada componente terapéutico individualmente.

Por ejemplo, se proporciona en el presente documento un compuesto divulgado para su uso en un procedimiento de tratamiento de un paciente que tiene una o más de las siguientes mutaciones en el gen CFTR: G1244E, G1349D, G178R, G551S, S1251N, S1255P, S549N, S549R, G970R, o R117H, y/o por ejemplo, un paciente con una o dos copias de la mutación F508del, o una copia de la mutación AF508 y una segunda mutación que da lugar a un efecto de compuerta en la proteína CFTR (por ejemplo, un paciente heterocigoto para la mutación AF508 y G551D), un paciente con una copia de la mutación AF508 y una segunda mutación que da lugar a actividad de CFTR residual, o un paciente con una copia de la mutación AF508 y una segunda mutación que da lugar a actividad de CFTR residual, comprendiendo el procedimiento la administración de una cantidad eficaz de un compuesto divulgado. Como se describe en el presente documento, dichos procedimientos ejemplares (por ejemplo, de un paciente que tiene una o mutaciones como las descritas anteriormente) pueden incluir, por ejemplo, administrar a dicho paciente una terapia combinada, por ejemplo, administrar (simultánea o secuencialmente) una cantidad eficaz de ivacaftor a dicho paciente y una cantidad eficaz del compuesto divulgado que puede actuar como amplificador. Dicha administración puede dar lugar, por ejemplo, a un aumento del transporte de cloruro en células epiteliales bronquiales humanas con, por ejemplo, una o dos copias de mutaciones, por ejemplo, la mutación AF508, en comparación con la administración de ivacaftor solo. Otra terapia de combinación que incluye un compuesto divulgado también puede incluir una cantidad efectiva de un agente de lectura (por ejemplo, ataluren, NB124) y una cantidad de efecto del compuesto divulgado que puede actuar como amplificador.

La expresión "terapia combinada", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a una realización en la que a un paciente se le coadministra un compuesto divulgado, un agente potenciadorde CFTR (p. ej., ivacaftor GLPG1837, GLPG2545, o GLPG3067) y opcionalmente, uno o más agente(s) corrector(es) de CFTR (por ejemplo, VX-661, VX-152, VX-440, VX-445, VX659, GLPG2222, GLPG2851, GLPG2737 O GLPG3221 y/o lumacaftor) como parte de un régimen de tratamiento específico destinado a proporcionar el efecto beneficioso de la co-acción de estos agentes terapéuticos. Por ejemplo, un efecto beneficioso de una combinación puede incluir la co-acción farmacocinética o farmacodinámica resultante de la combinación de agentes terapéuticos. Por ejemplo, la administración de un compuesto divulgado con ivacaftor solo o con un agente corrector de CFTR (por ejemplo, lumacaftor o VX-661) puede dar lugar a un nivel de función (por ejemplo, medido por la actividad de cloruro en células HBE o pacientes que tienen una mutación AF508, que logra una mejoría clínica (o mejor) en comparación con el nivel de actividad de cloruro en células o pacientes con una mutación G551D que reciben ivacaftor solo, o ivacaftor y un agente corrector (lumacaftor o VX-661; o por ejemplo, la administración de un compuesto divulgado con ivacaftor solo o ivacaftor con un agente corrector de CFTR (por ejemplo, lumacaftor o VX-661) puede dar lugar a un nivel de función (p. ej., medido por la actividad de cloruro en células HBE o pacientes que tienen una mutación A455E, que logra una mejora clínica (o mejor) en comparación con el nivel de actividad de cloruro en p. ej., 50% o más de las células de tipo salvaje; o tras la administración de un compuesto divulgado e ivacaftor a un paciente (p. ej., que tenga una mutación G551D de clase III) puede mostrar, p. ej., unas dos veces o más de mejora de la actividad de ivacaftor en comparación con la administración de ivacaftor solo. La administración de los agentes terapéuticos divulgados en combinación suele llevarse a cabo durante un periodo de tiempo definido (normalmente un día, días, semanas, meses o años, dependiendo de la combinación seleccionada). Se entiende por terapia combinada la administración de múltiples agentes terapéuticos de forma secuencial, es decir, administrando cada agente terapéutico en un momento diferente, así como la administración de estos agentes terapéuticos, o al menos dos de los agentes terapéuticos, de forma sustancialmente simultánea. La administración sustancialmente simultánea puede lograrse, por ejemplo, administrando al sujeto un único comprimido o cápsula con una proporción fija de cada agente terapéutico o en múltiples cápsulas individuales para cada uno de los agentes terapéuticos. La administración secuencial o sustancialmente simultánea de cada agente terapéutico puede efectuarse por cualquier vía apropiada, incluidas las vías oral, inhalatoria, intravenosa, intramuscular y la absorción directa a través de los tejidos de las mucosas. Los agentes terapéuticos pueden administrarse por la misma vía o por vías diferentes. Por ejemplo, un primer agente terapéutico de la combinación seleccionada puede administrarse por inyección intravenosa o por inhalación o nebulización, mientras que los demás agentes terapéuticos de la combinación pueden administrarse por vía oral. Alternativamente, por ejemplo, todos los agentes terapéuticos pueden administrarse por vía oral o todos los agentes terapéuticos pueden administrarse mediante inyección intravenosa, inhalación o nebulización.

La terapia combinada también puede abarcar la administración de los agentes terapéuticos descritos anteriormente en combinación con otros ingredientes biológicamente activos y terapias no farmacológicas. Cuando la terapia combinada comprende además un tratamiento no farmacológico, éste puede llevarse a cabo en cualquier momento adecuado siempre que se consiga un efecto beneficioso de la co-acción de la combinación de los agentes terapéuticos y el tratamiento no farmacológico. Por ejemplo, en los casos apropiados, el efecto beneficioso se sigue consiguiendo cuando el tratamiento no farmacológico se aleja temporalmente de la administración de los agentes terapéuticos, tal vez un día, días o incluso semanas.

Los componentes de una combinación divulgada pueden administrarse a un paciente simultánea o secuencialmente. Se apreciará que los componentes pueden estar presentes en el mismo portador farmacéuticamente aceptable y, por lo tanto, se administran simultáneamente. Alternativamente, los ingredientes activos pueden estar presentes en portadores farmacéuticos separados, tales como formas de dosificación oral convencionales, que pueden administrarse simultánea o secuencialmente.

También se describe en el presente documento un procedimiento de identificación de un agente candidato que aumenta la actividad de CFTR, que incluye: (i) poner en contacto una célula que expresa una proteína CFTR con el agente candidato y un compuesto divulgado; (ii) medir la actividad de CFTR en la célula en presencia del agente candidato y el compuesto divulgado; y (iii) comparar la actividad de CFTR con la actividad en ausencia del agente de prueba, donde un aumento de la actividad de CFTR en presencia del agente de prueba indica que el agente aumenta la actividad de CFTR. La célula puede expresar una proteína CFTR mutante. La actividad de CFTR puede medirse midiendo la actividad del canal de cloruro del CFTR, y/o otra actividad de transporte de iones. El procedimiento puede ser de alto rendimiento. El agente candidato puede ser un corrector CFTR o un potenciador CFTR.

El término "sal(es) farmacéuticamente aceptable(s)", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a sales de grupos ácidos o básicos que pueden estar presentes en un compuesto divulgado utilizado en composiciones divulgadas. Los compuestos incluidos en las presentes composiciones que son básicos por naturaleza son capaces de formar una amplia variedad de sales con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos. Los ácidos que pueden utilizarse para preparar sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables de tales compuestos básicos son los que forman sales de adición ácida no tóxicas, es decir sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, incluyendo malato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, acetato, lactato, salicilato, citrato, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato (es decir., 1,1'-met/len-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)). Los compuestos incluidos en las presentes composiciones que son de naturaleza ácida son capaces de formar sales de base con diversos cationes farmacológicamente aceptables. Ejemplos de tales sales incluyen sales de metales alcalinos o alcalinotérreos, en particular sales de calcio, magnesio, sodio, litio, zinc, potasio y hierro. Los compuestos incluidos en las presentes composiciones que incluyen una fracción básica o ácida también pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con diversos aminoácidos. Los compuestos de la divulgación pueden contener grupos ácidos y básicos; por ejemplo, un grupo amino y un grupo ácido carboxílico. En tal caso, el compuesto puede existir como una sal de adición ácida, un zwitterión o una sal de base.

Los procedimientos contemplados pueden incluir, por ejemplo, la administración de profármacos de los compuestos descritos en el presente documento, por ejemplo, profármacos de un compuesto de Fórmula I o II o una composición farmacéutica del mismo.

El término "profármaco" se refiere a compuestos que se transforman /n vivo para producir un compuesto divulgado o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del compuesto. La transformación puede producirse por diversos mecanismos (como por esterasas, amidasas, fosfatasas, metabolismo oxidativo y/o reductor) en diversas localizaciones (como en la luz intestinal o en el tránsito intestinal, sanguíneo o hepático). Los profármacos son bien conocidos en la técnica (por ejemplo, véase Rautio, Kumpulainen, et al., Nature Reviews Drug Discovery 2008, 7, 255).

Por ejemplo, si un compuesto de la divulgación o una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato o solvato del compuesto contiene un grupo funcional ácido carboxílico, un profármaco puede comprender un éster que consiste en la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo ácido con un grupo tal como alquilo (Ci-8), alquilcarboniloximetilo (C²-¹²), 1-(alquilcarboniloxi)etilo que tiene de 4 a 9 átomos de carbono, 1-metil-1-(alquilcarboniloxi)-etilo que tiene de 5 a 10 átomos de carbono, alcoxicarboniloximetilo que tiene de 3 a 6 átomos de carbono, 1-(alcoxicarboniloxi)etilo que tiene de 4 a 7 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcoxicarboniloxi)etilo que tiene de 5 a 8 átomos de carbono, N-(alcoxicarbonil)aminometilo que tiene de 3 a 9 átomos de carbono, 1-(N-(alcoxicarbonil)amino)etilo que tiene de 4 a 10 átomos de carbono, 3-ftalidilo, 4-crotonolactonilo, gamma-butirolacton-4-ilo, di-N,N-alquilamino (C^1-2)-alquilo (C^2-3) (como p-dimetilaminoetilo), carbamoil-alquilo (C^1-2), N,N-dialquilcarbamoil (C^1-2)-alquilo (C^1.2) y piperidino-, pirrolidinoo morfolinoalquilo (C^2-3).

Del mismo modo, si un compuesto de la divulgación contiene un grupo funcional alcohol, puede formarse un profármaco mediante la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo alcohol por un grupo comoalquilcarboniloximetilo (C^1-6), 1 -(alquilcarboniloxi (C¹-a))etilo, 1-metil-(alquilcarboniloxi (C¹-a))etilo alcoxicarboniloxi (C¹-a))metilo, N-alcoxicarbonilaminometilo (C¹-a), succinoilo, alquilcarbonil (C^1-6), a-aminoalquilcarbonilo (C^1.4), arilalquilcarbonilo y aaminoalquilcarbonilo, o a-aminoalquilcarbonilo-a-aminoalquilcarbonilo, donde cada grupo a-aminoalquilcarbonilo se selecciona independientemente de los L-aminoácidos naturales, P(O)(OH⁾², -P(O)(Oalquilo (C¹-a)⁾²o glicosilo (el radical resultante de la eliminación de un grupo hidroxilo de la forma hemiacetal de un carbohidrato).

Si un compuesto de la divulgación incorpora un grupo funcional amina, puede formarse un profármaco, por ejemplo, mediante la creación de una amida o carbamato, un derivado N-alquilcarboniloxialquilo, un derivado (oxodioxolenil)metilo, una base N-Mannich, imina o enamina. Además, una amina secundaria puede escindirse metabólicamente para generar una amina primaria bioactiva, o una amina terciaria puede escindirse metabólicamente para generar una amina primaria o secundaria bioactiva. Para ejemplos, véase Simplicio, et al., Molecules 2008, 13, 519 y sus referencias.

También se contempla el uso de clatratos de los compuestos aquí descritos, composiciones farmacéuticas que comprenden los clatratos y procedimientos de uso de los clatratos. También se contemplan en el presente documento los clatratos de un compuesto divulgado o de una composición farmacéutica del mismo.

Como se discutió anteriormente, la divulgación también contempla la administración de composiciones farmacéuticas que comprenden un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto descrito en el presente documento. Un compuesto divulgado, o una sal, solvato o clatrato farmacéuticamente aceptable del mismo, puede administrarse en composiciones farmacéuticas que comprenden un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. El excipiente puede elegirse en función de la vía de administración prevista de la composición en aplicaciones terapéuticas. La vía de administración de la composición depende de la afección a tratar. Por ejemplo, la inyección intravenosa puede ser adecuada para el tratamiento de un trastorno sistémico y la administración oral puede ser adecuada para tratar un trastorno gastrointestinal. La vía de administración y la dosis de la composición a administrar pueden ser determinadas por el artesano experto sin excesiva experimentación en conjunción con estudios estándar de dosis-respuesta. Entre las circunstancias pertinentes que deben tenerse en cuenta para tomar esas decisiones se incluyen la afección o afecciones que deben tratarse, la elección de la composición que debe administrarse, la edad, el peso y la respuesta de cada paciente y la gravedad de los síntomas del paciente. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto divulgado o una sal, solvato, clatrato o profármaco farmacéuticamente aceptable, puede administrarse por diversas vías, entre ellas parenteral, oral, pulmonar, oftálmica, nasal, rectal, vaginal, aural, tópica, bucal, transdérmica, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica, intraocular, intracerebral, intralinfática, intraarticular, intratecal e intraperitoneal. Las composiciones también pueden incluir, dependiendo de la formulación deseada, portadores o diluyentes farmacéuticamente aceptables y no tóxicos, que se definen como portadores comúnmente utilizados para formular composiciones farmacéuticas para la administración animal o humana. El diluyente se selecciona de forma que no afecte a la actividad biológica de la combinación. Ejemplos de tales diluyentes incluyen, pero no se limitan a, agua destilada, solución salina fisiológica tamponada con fosfato, soluciones de Ringer, solución de dextrosa y solución de Hank. Además, la composición o formulación farmacéutica también puede incluir otros portadores, adyuvantes o estabilizadores no tóxicos, no terapéuticos, no inmunogénicos y similares. Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir macromoléculas grandes de metabolización lenta como proteínas, polisacáridos como quitosano, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos y copolímeros (como SEPHAROSE™funcionalizado con látex, agarosa, celulosa y similares), aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos y agregados lipídicos (como gotas de aceite o liposomas).

Las composiciones divulgadas pueden administrarse por vía parenteral como, por ejemplo, por inyección intravenosa, intramuscular, intratecal o subcutánea. La administración parenteral puede realizarse incorporando una composición a una solución o suspensión. Dichas soluciones o suspensiones también pueden incluir diluyentes estériles como agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sintéticos. Las formulaciones parenterales también pueden incluir agentes antibacterianos como, por ejemplo, alcohol bencílico o metilparabenos, antioxidantes como, por ejemplo, ácido ascórbico o bisulfito sódico y agentes quelantes como EDTA. También pueden añadirse tampones, como acetatos, citratos o fosfatos, y agentes para ajustar la tonicidad, como cloruro sódico o dextrosa. El preparado parenteral puede presentarse en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis múltiples de vidrio o plástico.

Además, pueden estar presentes en las composiciones sustancias auxiliares, como agentes humectantes o emulsionantes, tensioactivos, sustancias amortiguadoras del pH y similares. Otros componentes de las composiciones farmacéuticas son los de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, por ejemplo, el aceite de cacahuete, el aceite de soja y el aceite mineral. En general, los glicoles como el propilenglicol o el polietilenglicol son portadores líquidos adecuados, especialmente para soluciones inyectables.

Las formulaciones inyectables se pueden preparar como soluciones o suspensiones líquidas; También se pueden preparar formas sólidas adecuadas para solución o suspensión en vehículos líquidos antes de la inyección. El preparado también puede emulsionarse o encapsularse en liposomas o micropartículas como polilactida, poliglicólido o copolímero para mejorar el efecto adyuvante, como se ha comentado anteriormente [Langer, Science 249: 1527, 1990 y Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997]. Como se describe en el presente documento, las composiciones se pueden administrar en forma de inyección de depósito o preparación de implante, que se puede formular de forma que permita una liberación sostenida o pulsatil del ingrediente activo.

Las formulaciones adicionales adecuadas para otros modos de administración incluyen formulaciones orales, intranasales y pulmonares, supositorios, aplicaciones transdérmicas y administración ocular. Para los supositorios, los aglutinantes y portadores incluyen, por ejemplo, polialquilenglicoles o triglicéridos; dichos supositorios pueden formarse a partir de mezclas que contengan el principio activo en un intervalo de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 10%, o de aproximadamente 1% a aproximadamente 2%. Las formulaciones orales incluyen excipientes, como grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa y carbonato de magnesio. La aplicación tópica puede dar lugar a una administración transdérmica o intradérmica. La administración transdérmica puede lograrse mediante un parche cutáneo o utilizando transferosomas.

[Paul et al., Eur. (J. Immunol. 25: 3521-24, 1995; Cevc et al., Biochem. Biophys. Acta 1368: 97-119, 1997].

Para fines de administración terapéutica oral, las composiciones farmacéuticas pueden incorporarse con excipientes y utilizarse en forma de comprimidos, troqueles, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, gomas de mascar y similares. Los comprimidos, píldoras, cápsulas, trozos y similares también pueden contener aglutinantes, excipientes, agentes desintegradores, lubricantes, deslizantes, edulcorantes y aromatizantes. Algunos ejemplos de aglutinantes son la celulosa microcristalina, la goma tragacanto o la gelatina. Algunos ejemplos de excipientes son el almidón o la lactosa. Algunos ejemplos de agentes desintegrantes son el ácido algínico, el almidón de maíz y similares. Algunos ejemplos de lubricantes son el estearato de magnesio o el estearato de potasio. Un ejemplo de agente deslizante es el dióxido de silicio coloidal. Algunos ejemplos de edulcorantes son la sacarosa, la sacarina y similares. Algunos ejemplos de agentes aromatizantes son la menta, el salicilato de metilo, el aroma de naranja y similares. Los materiales utilizados en la preparación de estas diversas composiciones deben ser farmacéuticamente puros y no tóxicos en las cantidades utilizadas. En otra realización, la composición se administra en forma de comprimido o cápsula.

Otros materiales diversos pueden estar presentes como recubrimientos o para modificar la forma física de la unidad de dosificación. Por ejemplo, las pastillas pueden estar recubiertas de goma laca, azúcar o ambos. Un jarabe o elixir puede contener, además del principio activo, sacarosa como agente edulcorante, metil y propilparabenos como conservantes, un colorante y un aromatizante como el sabor a cereza o naranja, y similares. Para la administración vaginal, una composición farmacéutica puede presentarse en forma de pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o aerosoles.

La composición farmacéutica también puede administrarse por vía nasal. Tal como se utiliza en el presente documento, la administración nasal incluye la administración de la composición a las membranas mucosas del conducto nasal o la cavidad nasal del paciente. Tal y como se utilizan en el presente documento, las composiciones farmacéuticas para la administración nasal de un compuesto incluyen cantidades terapéuticamente eficaces de los compuestos preparados por procedimientos bien conocidos para ser administrados, por ejemplo, como aerosol nasal, gota nasal, suspensión, gel, pomada, crema o polvo. La administración de la composición también puede realizarse mediante un tampón nasal o una esponja nasal.

Para la administración tópica, las formulaciones adecuadas pueden incluir aceite biocompatible, cera, gel, polvo, polímero u otros portadores líquidos o sólidos. Dichas formulaciones pueden administrarse aplicándolas directamente a los tejidos afectados, por ejemplo, una formulación líquida para tratar la infección del tejido conjuntival puede administrarse gota a gota en el ojo del sujeto, o una formulación en crema puede administrarse en la piel.

La administración rectal incluye la administración de las composiciones farmacéuticas en el recto o el intestino grueso. Esto puede conseguirse mediante supositorios o enemas. Las formulaciones de supositorios pueden elaborarse fácilmente por procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, las formulaciones para supositorios pueden prepararse calentando glicerina a unos 120 °C, disolviendo la composición farmacéutica en la glicerina, mezclando la glicerina calentada, tras lo cual puede añadirse agua purificada, y vertiendo la mezcla caliente en un molde para supositorios.

La administración transdérmica incluye la absorción percutánea de la composición a través de la piel. Las formulaciones transdérmicas incluyen parches, pomadas, cremas, geles, bálsamos y similares.

Además del significado habitual de administrar las formulaciones aquí descritas a cualquier parte, tejido u órgano cuya función principal sea el intercambio gaseoso con el medio externo, a efectos de la presente divulgación, "pulmonar" también significará incluir un tejido o cavidad contingente al tracto respiratorio, en particular, los senos paranasales.

Para la administración pulmonar, se contempla una formulación en aerosol que contenga el agente activo, un pulverizador de bomba manual, un nebulizador o un inhalador presurizado de dosis medidas, así como formulaciones de polvo seco. Las formulaciones adecuadas de este tipo también pueden incluir otros agentes, como agentes antiestáticos, para mantener los compuestos divulgados como aerosoles eficaces.

Un dispositivo de administración de fármacos para administrar aerosoles comprende un bote de aerosol adecuado con una válvula dosificadora que contiene una formulación farmacéutica en aerosol como la descrita y una carcasa de actuador adaptada para sostener el bote y permitir la administración del fármaco. El bote del dispositivo de administración de fármacos tiene un espacio de cabeza que representa más de aproximadamente el 15% del volumen total del bote. A menudo, el compuesto destinado a la administración pulmonar se disuelve, suspende o emulsiona en una mezcla de disolvente, tensioactivo y propelente. La mezcla se mantiene a presión en un bidón sellado con una válvula dosificadora.

También se describe en el presente documento el tratamiento de una afección asociada con una disfunción en la proteostasis en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad eficaz de un compuesto divulgado que potencia, mejora o restaura la proteostasis de una proteína. La proteostasis hace referencia a la homeostasis de las proteínas. Las disfunciones en la homeostasis proteica son el resultado de un mal plegamiento de las proteínas, su agregación, un tráfico proteico defectuoso o su degradación. Por ejemplo, la divulgación contempla la administración de un compuesto divulgado, por ejemplo, de Fórmula I o II que corrige el mal plegamiento de proteínas, reduce la agregación de proteínas, corrige o restaura el tráfico de proteínas y/o afecta a la degradación de proteínas para el tratamiento de una afección asociada a una disfunción en la proteostasis. Puede administrarse un compuesto divulgado, por ejemplo, de Fórmula I o II, que corrige el mal plegamiento de proteínas y/o corrige o restablece el tráfico de proteínas. En la fibrosis quística, la enzima mutada o defectuosa es el regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR). Una de las mutaciones más comunes de esta proteína es AF508, que es una deleción (A) de tres nucleótidos que da lugar a una pérdida del aminoácido fenilalanina (F) en la posición 508 (508) de la proteína. Como se ha descrito anteriormente, el regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística mutado existe en un estado mal plegado y se caracteriza por un tráfico alterado en comparación con el CFTR de tipo salvaje. Otras proteínas ejemplares de las que puede haber una disfunción en la proteostasis, por ejemplo que pueden existir en un estado mal plegado, incluyen glucocerebrosidasa, hexosamina A, aspartilglucosaminidasa, agalactosidasa A, transportador de cisteína, ceremidasa ácida, a-L-fucosidasa ácida, proteína protectora, catepsina A, p-glucosidasa ácida, p-galactosidasa ácida, iduronato 2-sulfatasa, a-L-iduronidasa, galactocerebrosidasa, amanosidasa ácida, p-manosidasa ácida, arilsulfatasa B, arilsulfatasa A, N-acetilgalactosamina-6-sulfatosulfatasa, pgalactosidasa ácida, N-acetilglucosamina-1-fosfotransferasa, esfingimielinasa ácida, NPC-1, a-glucosidasa ácida, phexosamina B, heparina N-sulfatasa, a-N-acetilglucosaminidasa, a -glucosaminida N-acetiltransferasa, N-acetilglucosamina-6-sulfatosulfatasa, a-N-acetilgalactosaminidasa, a -neuramidasa, p - glucuronidasa, p-hexosamina A y lipasa ácida, poliglutamina, a -sinucleína, TDP-43, superóxido dismutasa (SOD), péptido Ap, proteína tau, transtiretina e insulina. Los compuestos de Fórmula I o II pueden utilizarse para restaurar la proteostasis (por ejemplo, corregir el plegamiento y/o alterar el tráfico) de las proteínas descritas anteriormente.

Las enfermedades de conformación proteica abarcan trastornos de ganancia de función y trastornos de pérdida de función. La enfermedad conformacional de la proteína puede ser un trastorno de ganancia de función. Los términos "trastorno por ganancia de función", "enfermedad por ganancia de función", "trastorno por ganancia de función tóxica" y "enfermedad por ganancia de función tóxica" se utilizan indistintamente en el presente documento. Un trastorno de ganancia de función es una enfermedad caracterizada por un aumento de la proteotoxicidad asociada a la agregación. En estas enfermedades, la agregación supera el aclaramiento dentro y/o fuera de la célula. Las enfermedades de ganancia de función incluyen las enfermedades neurodegenerativas asociadas a la agregación de poliglutamina, las enfermedades de los cuerpos de Lewy, la esclerosis lateral amiotrófica, las enfermedades de agregación asociadas a la transtiretina, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Machado-Joseph, la angiopatía B-amiloide cerebral, la degeneración de las células ganglionares de la retina, tauopatías (parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal, degeneración lobar frontotemporal), hemorragia cerebral con amiloidosis, enfermedad de Alexander, Serpinopatías, neuropatía amiloidótica familiar, amiloidosis sistémica senil, amiloidosis ApoAI, amiloidosis ApoAII, amiloidosis ApoAIV, amiloidosis familiar de tipo finlandés, amiloidosis por lisozima, amiloidosis por fibrinógeno, amiloidosis por diálisis, miositis/miopatía por cuerpos de inclusión, cataratas, carcinoma medular de tiroides, amiloidosis auricular cardíaca, prolactinoma hipofisario, distrofia corneal reticular hereditaria, liquen amiloidosis cutánea, amiloidosis corneal por lactoferrina proteinosis alveolar pulmonar, amiloide tumoral odontogénico, amiloide vesical seminal, anemia falciforme, miopatía por enfermedad crítica, enfermedad de von Hippel-Lindau, ataxia espinocerebelosa 1, síndrome de Angelman, neuropatía por axones gigantes, miopatía por cuerpos de inclusión con enfermedad ósea de Paget, demencia frontotemporal (IBMPFD) y enfermedades priónicas. Las enfermedades neurodegenerativas asociadas a la agregación de poliglutamina incluyen la enfermedad de Huntington, la atrofia dentatorubral y palidoluysiana, varias formas de ataxia espinocerebelosa y la atrofia muscular espinal y bulbar. La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por la formación de dos tipos de agregados: agregados extracelulares del péptido Ap y agregados intracelulares de la proteína tau asociada a microtúbulos. Las enfermedades de agregación asociadas a la transtiretina incluyen, por ejemplo, las amiloidosis sistémicas seniles y la neuropatía amiloidótica familiar. Las enfermedades con cuerpos de Lewy se caracterizan por una agregación de la proteína a-sinucleína e incluyen, por ejemplo, la enfermedad de Parkinson, la demencia por cuerpos de Lewy (LBD) y la atrofia multisistémica (SMA). Las enfermedades priónicas (también conocidas como encefalopatías espongiformes transmisibles o EET) se caracterizan por la agregación de proteínas priónicas. Ejemplos de enfermedades priónicas humanas son la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ), la variante de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, el síndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, el insomnio familiar fatal y el kuru. La proteína mal plegada puede ser alfa-1 antitripsina.

La enfermedad de conformación proteica puede ser un trastorno de pérdida de función. Los términos "enfermedad con pérdida de función" y "trastorno con pérdida de función" se utilizan indistintamente en el presente documento. Las enfermedades con pérdida de función son un grupo de enfermedades caracterizadas por el plegamiento ineficaz de una proteína, lo que provoca una degradación excesiva de la misma. Las enfermedades con pérdida de función incluyen, por ejemplo, las enfermedades de almacenamiento lisosómico. Las enfermedades de almacenamiento lisosómico son un grupo de enfermedades caracterizadas por la deficiencia de una enzima lisosómica específica que puede producirse en diversos tejidos, dando lugar a la acumulación de moléculas normalmente degradadas por la enzima deficiente. La deficiencia de la enzima lisosomal puede estar en una hidrolasa lisosomal o en una proteína implicada en el tráfico lisosomal. Las enfermedades de almacenamiento lisosómico incluyen la aspartilglucosaminuria, la enfermedad de Fabry, la enfermedad de Batten, la cistinosis, la enfermedad de Farber, la fucosidosis, la galactasidosialidosis, la enfermedad de Gaucher (incluidos los tipos 1, 2 y 3), la gangliosidosis Gm1, la enfermedad de Hunter, la enfermedad de Hurler-Scheie, la enfermedad de Krabbe, la a-manosidosis, la p-manosidosis, la enfermedad de Maroteaux-Lamy, Leucodistrofia metacromática, síndrome de Morquio A, síndrome de Morquio B, mucolipidosis II, mucolipidosis III, enfermedad de Neimann-Pick (incluidos los tipos A, B y C), enfermedad de Pompe, enfermedad de Sandhoff, síndrome de Sanfilippo (incluidos los tipos A, B, C y D), enfermedad de Schindler, enfermedad de Schindler-Kanzaki, sialidosis, síndrome de Sly, enfermedad de Tay-Sach y enfermedad de Wolman.

Una enfermedad asociada a una disfunción de la proteostasis puede ser una enfermedad cardiovascular. Las enfermedades cardiovasculares incluyen la enfermedad arterial coronaria, el infarto de miocardio, el ictus, la reestenosis y la arteriosclerosis. Las afecciones asociadas a una disfunción de la proteostasis también incluyen afecciones isquémicas, como la lesión por isquemia/reperfusión, la isquemia miocárdica, la angina estable, la angina inestable, el ictus, la cardiopatía isquémica y la isquemia cerebral.

Un tratamiento de una enfermedad asociada con una disfunción en la proteostasis puede ser la diabetes y/o complicaciones de la diabetes, incluyendo retinopatía diabética, cardiomiopatía, neuropatía, nefropatía y deterioro de la cicatrización de heridas.

El tratamiento de una enfermedad asociada a una disfunción de la proteostasis puede ser una enfermedad ocular, incluyendo la degeneración macular asociada a la edad (DMAE), el edema macular diabético (EMD), la retinopatía diabética, el glaucoma, las cataratas, la retinosis pigmentaria (RP) y la degeneración macular seca.

Un procedimiento divulgado puede estar dirigido a tratar una enfermedad asociada con una disfunción en la proteostasis, en la que la enfermedad afecta al sistema respiratorio o al páncreas. Un procedimiento divulgado puede abarcar el tratamiento de una afección seleccionada del grupo que consiste en polendocrinopatía/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, síndrome de Charcot-Marie Tooth, enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher y síndrome de Gorham.

Otras afecciones asociadas a una disfunción de la proteostasis son las hemoglobinopatías, las enfermedades inflamatorias, las enfermedades de filamentos intermedios, el daño pulmonar inducido por fármacos y la pérdida de audición. Por ejemplo, aquí se proporcionan procedimientos para el tratamiento de hemoglobinopatías (como la anemia falciforme), una enfermedad inflamatoria (como la enfermedad inflamatoria intestinal, colitis, espondilitis anquilosante), enfermedades de filamentos intermedios (como la enfermedad del hígado graso no alcohólico y alcohólico) y daño pulmonar inducido por fármacos (como el daño pulmonar inducido por metotrexato). Se describen procedimientos para tratar la pérdida de audición, como la pérdida de audición inducida por ruido, la pérdida de audición inducida por aminoglucósidos y la pérdida de audición inducida por cisplatino, que comprenden la administración de un compuesto divulgado.

Condiciones adicionales incluyen aquellas asociadas con un defecto en el tráfico de proteínas y que pueden ser tratadas de acuerdo a los procedimientos divulgados incluyen: Mutaciones PGP, mutaciones del tráfico hERG, mutaciones de la diabetes insípida nefrongénica en el receptor 2 de la arginina-vasopresina, mutaciones de la hipoglucemia hiperinsulinémica persistente de la infancia (PHH1) en el receptor 1 de la sulfonilurea y a1AT.

La invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes Ejemplos que no deberían interpretarse en modo alguno como limitativos.

Ejemplificación

Los compuestos descritos en el presente documento pueden prepararse de varias maneras basándose en las enseñanzas contenidas en el presente documento y en procedimientos sintéticos conocidos en la técnica. En la descripción de los procedimientos sintéticos que se describen a continuación, debe entenderse que todas las condiciones de reacción propuestas, incluida la elección del disolvente, la atmósfera de reacción, la temperatura de reacción, la duración del experimento y los procedimientos de preparación, pueden elegirse para que sean las condiciones estándar para esa reacción, a menos que se indique lo contrario. Un experto en el arte de la síntesis orgánica entiende que la funcionalidad presente en varias partes de la molécula debe ser compatible con los reactivos y reacciones propuestos. Los sustituyentes no compatibles con las condiciones de reacción serán evidentes para un experto en la materia, por lo que se indican procedimientos alternativos. Los materiales de partida para los ejemplos están disponibles en el mercado o se preparan fácilmente por procedimientos estándar a partir de materiales conocidos. Al menos algunos de los compuestos identificados como "intermedios" en el presente documento se contemplan como compuestos de la divulgación.

Ejemplo 1: M-(4-(Azet¡d¡n-1-il)-4-oxobut¡l)-5-(4-fluorofen¡l)¡soxazol-3-carboxam¡da (proporcionads para propósitos de referencia):

Etapa 1: Preparación de 4-(5-(4-Fluorofenil)isoxazol-3-carboxamido)butanoato de metilo: En un matraz de fondo redondo de 100 mL se colocó una solución de ácido 5-(4-fluorofenil)-1,2-oxazol-3-carboxílico (414 mg, 2,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 mL). La solución se trató con clorhidrato de 4-aminobutanoato de metilo (462 mg, 3,01 mmol), HATU (1,9 g, 5,00 mmol) y diisopropiletilamina (903 mg, 6,99 mmol). La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante ¹⁶h, tras lo cual se diluyó con agua (50 mL). La mezcla se extrajo con EtOAc (3x25) y los extractos orgánicos agrupados se lavaron con solución hipersalina, se secaron y se concentraron. La fase orgánica se secó sobre Na²SO⁴y se concentró al vacío para obtener 600 mg (98%) de 4-(5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamido)butanoato de metilo como sólido naranja. LC/MS (m/z): [M+H]+=307

Etapa 2: Preparación del ácido 4-(5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamido)butanoico: En un matraz de fondo redondo de 100 mL se colocó una solución de4-(5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamido)butanoato de metilo (612 mg, 2,00 mmol) en metanol (30 mL). La solución se enfrió a 0 °Cy después se añadió gota a gota una solución separada de hidróxido sódico (400 mg, 10,00 mmol) en agua (5 mL). La mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 1 horas. El residuo restante se diluyó con agua (20 mL) y la mezcla acuosa resultante se lavó con acetato de etilo (1x20 mL). La fase acuosa se trató con cloruro de hidrógeno para ajustar el pH de la mezcla a un valor de 2 y el precipitado resultante se recogió por filtración. Al secar el sólido se obtuvieron 450 mg (77%) de ácido 4-(5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamido)butanoico como sólido blanco. LC/MS (m/z): [M+H]+=293

Etapa 3: Preparación de N-(4-(Azetidin-1-il)-4-oxobutil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida: En un matraz de fondo redondo de 50 mLse colocó una solución de ácido 4-(5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamido)butanoico (292 mg, 1,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 mL). A la solución se añadieron azetidina (114 mg, 2,00 mmol), ^hA^tU (950 mg, 2,50 mmol) y diisopropiletilamina (452 mg, 3,50 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 hora y luego se diluyó con EtOAc. La mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo (2x25 mL) y se combinaron los extractos orgánicos. La solución resultante se lavó con salmuera (3x50 mL), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó por HPLC preparativa con las siguientes condiciones: columna: X Bridge C18 OBD Prep Column, 19 mm x 250 mm; fase móvil: agua (10 mmol/L NH⁴HCO₃) y acetonitrilo (32,0% de acetonitrilo hasta 34,0% en 12 min); detector: K₂54/220 (nM) Este proceso proporcionó 103 mg (31%) de N-(4-(azetidin-1-il)-4-oxobutil)-5-(4-fluorofenil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. LC/MS (m/z):

[M+H]+ 332. RMN 1H (300 MHz, CDCls) 7,82 (s, 2H), 7,46 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,17-3,52 (m, 2H), 2,32-2,23 (m, 4H), 2,04-1,92 (m, 4H).

Ejemplo 2: M-((,/r.3r1-3-(Azet¡d¡n-1-carbon¡l)c¡clobut¡l)-5-fen¡l¡soxazol-3-carboxam¡da:

Preparación de N-((1r,3r)-3-(Azetidin-1-carbonil)cidobutil)-5-fenilisoxazol-3-carboxamida: En un matraz de fondo redondo de 100 mL se colocó una solución de ácido (1r,3r)-3-(5-fenil-1,2-oxazol-3-amido)ciclobutano-1-carboxílico (572 mg, 2,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 mL). A la solución se añadieron azetidina (228 mg, 3,99 mmol), HATU (1,52 g, 4,00 mmol) y diisopropiletilamina (774 mg, 5,99 mmol). La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante una noche antes de diluirla con agua (50 mL). La mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo (2x65 mL) y se combinaron los extractos orgánicos. El extracto orgánico se lavó con salmuera (3x 100 mL), se secó sobre sulfato sódico anhidro y se concentró al vacío. El producto bruto se purificó por recristalización de metanol para obtener 103 mg (16%) de N-((1r,3r)-3-(azetidin-1-carbonil)ciclobutil)-5-fenilisoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. LC/MS (m/z): [M+H]+ 326. RMN 1H (300 MHz, CDCls) 9,15 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,92 (s, 2H), 7,58 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,03 (c, J = 5,6, 7,5 Hz, 1H), 3,86-3,87 (m, 5H), 3,80 (s, 2H), 3,01-2,93 (m, 1H), 2,41-2,30 (m, 2H), 2,27-2,18 (m, 2H).

Ejemplo 3: M-(4-(Azet¡d¡n-1-¡l)-4-oxobutil)-3-fen¡l¡soxazol-5-carboxam¡da (proporcionada para propósitos de referencia):

Etapa 1: Preparación de 4-(3-fenilisoxazol-5-carboxamido)butanoato de metilo: En un matraz de fondo redondo de 100 mL se colocó una solución de ácido 3-fenil-1,2-oxazol-5-carboxílico (945 mg, 5,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 mL). La solución se trató con clorhidrato de 4-aminobutanoato de metilo (925 mg, 6,02 mmol), HATU (2,85 g, 7,50 mmol) y diispropiletilamina (1,94 g, 15,0 mmol). La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante una noche antes de diluirla con agua (50 mL). La fase acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc (40 ml) y las porciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 40 ml), se secaron sobre Na₂SO₄anhidro y se concentraron in vacuo. El residuo restante se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice, utilizando acetato de etilo/éter de petróleo (1:4) como eluyente, para obtener 1,2 g (83%) de 4-(3-fenilisoxazol-5-carboxamido)butanoato de metilo como sólido blanco. LC/MS (m/z): [M+H]+=289

Etapa 2: Preparación del ácido 4-(3-fenilisoxazol-5-carboxamido)butanoico: En un matraz de fondo redondo de 100 mL se colocó una solución de 4-(3-fenilisoxazol-5-carboxamido)butanoato de metilo (1,16 g, 4,02 mmol) en metanol (20 mL). La solución se enfrió a 0 °C y se trató con una solución separada de hidróxido sódico (800 mg, 20,0 mmol) en agua (10 mL) gota a gota. La mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo restante se diluyó con agua (20 mL). La mezcla acuosa se lavó con acetato de etilo (1x25 mL) y luego se trató con cloruro de hidrógeno para ajustar su pH a un valor de 2. El precipitado que se formó se recogió por filtración, tras lo cual el secado proporcionó 1,03 g (93%) de ácido 4-(3-fenilisoxazol-5-carboxamido)butanoico como sólido blanco. LC/MS (m/z): [M+H]+=275

Etapa 3: Preparación de N-(4-(Azetidin-1-il)-4-oxobutil)-3-fenilisoxazol-5-carboxamida: En un matraz de fondo redondo de 100 mL se colocó una solución de ácido 4-[(3-fenil-1,2-oxazol-5-il)formamido]butanoico (548 mg, 2,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 mL). La solución se trató con azetidina (228 mg, 3,99 mmol), HATU (1,52 g, 4,00 mmol) y diisopropiletilamina (774 mg, 5,99 mmol). La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante una noche antes de diluirla con agua (50 mL). La fase acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc (40 ml) y las porciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 40 ml), se secaron sobre Na²SO⁴anhidro y se concentraron in vacuo. El producto bruto se purificó por HPLC preparativa en las siguientes condiciones: columna: X Bridge C18 OBD Prep Column, 19 mm x 250 mm; fase móvil: agua (10 mmol/L NH⁴HCO₃) y acetonitrilo (33,0% de acetonitrilo hasta 50,0% en 7 min); detector: K₂54/220 (nM) Este proceso proporcionó 129 mg (21%) de N-(4-(azetidin-1-il)-4-oxobutil)-3-fenilisoxazol-5-carboxamida como sólido blanco. LC/M^s(m/z): [M+H]+ 314. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) 58,62 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,56 (br s, 2H), 4,08 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 3.81 - 3,73 (m, ⁶H), 3,46 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 3,27 (s, 3H), 2,77 (t, J = ^{6 ,6}Hz, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,79 - 1,72 (m, 2H).

Ejemplo 4: M-((1r.3r)-3-(Azet¡d¡n-1-carbon¡l)c¡clobutil)-3-fen¡l¡soxazol-5-carboxam¡da:

Preparación de N-((1r,3r)-3-(Azet¡d¡n-1-carbon¡l)c¡clobut¡l)-3-fen¡l¡soxazol-5-carboxam¡da: En un matraz de fondo redondo de 100 mL se colocó una solución de ácido (//',3r)-3-(3-fenil-1,2-oxazol-5-amido)ciclobutano-1-carboxílico (572 mg, 2,00 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 mL). La solución se trató con azetidina (228 mg, 3,99 mmol), HATU (1,52 g, 4,00 mmol) y diisopropiletilamina (774 mg, 5,99 mmol). La mezcla resultante se dejó agitar a temperatura ambiente durante una noche antes de diluirla con agua (50 mL). La fase acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc (40 ml) y las porciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 40 ml), se secaron sobre Na²SO⁴anhidro y se concentraron in vacuo. El producto bruto se purificó por recristalización de metanol para obtener 124 mg (19%) de N-((//',3r)-3-(azetidin-1-carbonil)ciclobutil)-3-fenilisoxazol-5-carboxamida como sólido blanquecino. LC/MS (m/z): [M+H]+326. RMN 1H (300 MHz, CDCls) 9,30 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,64 (s, 2H), 7,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 3,86 (c, J = 5,6, 7,5 Hz, 1H), 3,02-2,96 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 3,42-2,27 (m, 4H), 2,29-2,10 (m, 2H), 2,25-2,17 (m, 2H).

Ejemplo 5: Ensayos de act¡v¡dad de CFTR

i. Mediciones de Ussing

Como se discutió anteriormente, las mediciones de Ussing se utilizan para medir la actividad de CFTR. En este procedimiento, las células epiteliales pulmonares primarias (hBEs) homocigotas para la mutación AF508 causante de la fibrosis quística se diferencian durante un mínimo de 4 semanas en una interfaz aire-líquido en placas de filtro SnapWell antes de las mediciones de Ussing. Las células se lavan con mucosa apical durante 30 minutos antes del tratamiento con los compuestos. Se retira el medio basolateral y se sustituye por medio que contiene el compuesto de interés diluido hasta su concentración final a partir de existencias de DMSO. Las células tratadas se incuban a 37 °C y 5% de CO²durante 24 horas. Al final del periodo de tratamiento, las células en los filtros se transfieren a la cámara de Ussing y se equilibran durante 30 minutos. La corriente de cortocircuito se mide en modo de pinza de tensión (Vhold = 0 mV), y todo el ensayo se realiza a una temperatura de 36 °C -36,5 °C. Una vez estabilizados los voltajes, se sujetan las cámaras y se registran los datos mediante lecturas de impulsos cada 5 segundos. Tras la estabilización de la corriente de base, se pueden aplicar las siguientes adiciones y controlar los cambios en la corriente y la resistencia de las células:

1. Benzamil a la cámara apical para inhibir el canal de sodio ENaC.

2. Forskolin a ambas cámaras para activar AF508-CFTR por fosforilación.

3. Genisteína a ambas cámaras para potenciar la apertura del canal AF508-CFTR.

4. CFTRinh-172 a la cámara apical para inhibir la conductancia Cl- de AF508-CFTR.

La corriente inhibible (aquella corriente que es bloqueada por CFTRinh-172) se mide como la actividad específica del canal AF508-CFTR, y los aumentos en respuesta al compuesto en esta actividad sobre la observada en las muestras tratadas con vehículo se identifican como la corrección de la función AF508-CFTR impartida por el compuesto ensayado.

ii. Ensayo de corriente equivalente hBE (ieq)

Las células epiteliales pulmonares primarias homocigotas para la mutación AF508 causante de la fibrosis quística se diferenciaron durante un mínimo de 4 semanas en una interfaz aire-líquido en placas de filtro HTS Costar de 24 pocillos antes de las mediciones de corriente equivalente (Ieq). Las células se lavaron con mucosa apical durante 30 minutos 24 h antes del tratamiento con los compuestos. Se retiró el medio basolateral y se sustituyó por medio que contenía el compuesto de interés diluido a su concentración final a partir de existencias de DMSO. Las células se incubaron a 37°C con 5% de CO₂y se rotaron a 24 rpm. Al final del periodo de tratamiento, se cambiaron los medios a la solución experimental Ieq durante 30 minutos antes del experimento y las placas se mantienen en una incubadora sin CO₂durante este periodo. A continuación, las placas que contenían las células se colocaron en bloques térmicos precalentados a 36 °C±0,5 durante 15 minutos antes de realizar las mediciones. El voltaje transepitelial (VT) y la conductancia (Gr) se midieron utilizando una pinza de corriente de 24 canales personalizada (TECC-24) con un colector de electrodos de 24 pocillos. Las mediciones del ensayo Ieq se realizaron tras adiciones con periodos de tiempo normalizados:

1. Los valores basales deVT yGT se midieron durante aproximadamente 20 minutos.

2. Se añadió benzamil para bloquear el ENaC durante 15 minutos.

3. Se añadió forskolina más VX-770 para activar al máximo AF508-CFTR durante 27 minutos.

4. Se añadió bumetanida para inhibir el cotransportadorNaK₂Cly cerrar la secreción de cloruro.

Los datos de actividad capturados fueron el área bajo la curva (AUC) para las trazas de la corriente de cloruro equivalente. El AUC se recogió desde el momento de la adición de forskolina/VX-770 hasta la inhibición por adición de bumetanida. La corrección en respuesta al tratamiento con compuestos se puntuó como el aumento del AUC de las muestras tratadas con compuestos sobre el de las muestras tratadas con vehículo.

Los resultados de las mediciones de corriente equivalente hBE (Ieq) se muestran a continuación en la Tabla 2. (** indica actividad >200% de VX-809 (3 uM) con compuesto a su EC5o y VX-809 a 3 uM; * indica actividad 100-200% de VX-809 (3 uM) con compuesto a su ^eC50 y VX-809 a 3 uM. ## indica actividad ≤ 100% de VX-809 (3 uM) con compuesto a su EC50 y VX-809 a 3 uM. En la Tabla 2, un valor Ieq EC50 de "A" indica que laEC50 del compuesto es ≤1 ^M; un valor Ieq EC50 de "B" indica que la EC50 del compuesto está entre 1 y 10 ^M; un valor Ieq EC50 de "C" indica que la EC50 del compuesto es >10 ^M. Los compuestos marcados con un asterisco (*) se proporcionan como referencia.

Tabla 2:

(continuación)

Aunque la presente invención se ha mostrado y descrito particularmente con referencias a realizaciones preferidas de la misma, aquellos expertos en la materia comprenderán, a la luz de la presente divulgación, que se pueden realizar en la misma diversos cambios en la forma y los detalles sin alejarse del alcance de la invención abarcada en las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. un compuesto de fórmula general (Id) o (le):

o una sal o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

X se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y halógeno;

L¹es cicloalquileno C⁴; y

2. El compuesto de la reivindicación 1, representado por la fórmula III o IV:

3. El compuesto de la reivindicación 1 o 2, en el que X es hidrógeno o flúor.

4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el queRa y Rb tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo heterocíclico de 4 miembros.

5. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:

y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. La composición farmacéutica de la reivindicación 6, que comprende además:

a) al menos un modulador CFTR adicional; o

b) al menos dos moduladores CFTR adicionales.

8. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una composición farmacéutica de la reivindicación 6 o 7 para su uso en un procedimiento de mejora de la actividad del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) en un sujeto que padece una enfermedad asociada con una disminución de la actividad de CFTR, seleccionada del grupo que consiste en fibrosis quística, ausencia bilateral congénita de conductos deferentes (CBAVD), pancreatitis aguda, recurrente o crónica, bronquiectasia diseminada, asma, aspergilosis pulmonar alérgica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), sinusitis crónica, enfermedad de ojo seco, deficiencia de proteína C, A-p-lipoproteinemia, enfermedad por almacenamiento lisosómico, quilomicronemia tipo 1, enfermedad pulmonar leve, deficiencias en el procesamiento de lípidos, angioedema hereditario de tipo 1, coagulación-fibrinolisis, hemocromatosis hereditaria, síndrome metabólico relacionado con CFTR, bronquitis crónica, estreñimiento, insuficiencia pancreática, enfisema hereditario, síndrome de Sjogren, hipercolesterolemia familiar, enfermedad de células I/pseudo-Hurler, mucopolisacaridosis, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, polendocrinopatía/hiperinsulemia, Diabetes mellitus, enanismo de Laron, deficiencia de myleoperoxidasa, hipoparatiroidismo primario, melanoma, glicanosis CDG tipo 1, hipertiroidismo congénito, osteogénesis imperfecta, hipofibrinogenemia hereditaria, déficit de ACT, diabetes insípida (DI), DI neurofisaria, DI nefrogénica, síndrome de Charcot-Marie Tooth, Enfermedad de Perlizaeus-Merzbacher, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, parálisis supranuclear progresiva, enfermedad de Pick, enfermedad de Huntington, ataxia espinocerebelosa tipo I, atrofia muscular espinal y bulbar, palidoluysiana dentatorubral, distrofia miotónica, enfermedad hereditaria de Creutzfeldt-Jakob (debida a un defecto en el procesamiento de la proteína priónica), enfermedad de Fabry, enfermedad hepática colestásica y síndrome de Straussler-Scheinker.

9. 9. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 8, en el que se potencia la actividad de un CFTR mutante;

opcionalmente, donde el CFTR mutante se selecciona del grupo que consiste en AF508, S549N, G542X, G551D, R117H, N1303K, W1282X, R553X, 621 1G>T, 1717-1G>A, 3849+10kbC>T, 2789+5G>A, 3120+1G>A, I507del, R1162X, 1898+1G>A, 3659delC, G85E, D1152H, R560T, R347P, 2184insA, A455E, R334W, Q493X, E56K, P67L, R₇4W, D110E, D110H, R117C, G178R, E193K, L206W, R347H, R352Q, A455E, S549R, G551S, D579G, S945L, S997F, F1052V, K1060T, A1067T, G1069R, R1070Q, R1070W, F1074L, G1244E, S1251N, S1255P, D1270N, G1349D, y 2184delA CFTR;

opcionalmente, en el que se potencia la actividad AF508 CFTR.

10. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 8 o 9, en el que la enfermedad es fibrosis quística y/o el sujeto es un paciente humano.

11. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 10, que comprende además la administración de un modulador CFTR adicional; opcionalmente, en el que se administran al menos dos moduladores CFTR adicionales.

12. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 11, en el que al menos un modulador de CFTR es un corrector o potenciador de CFTR.

13. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 12, en el que cada correctoro potenciador de CFTR se selecciona independientemente del grupo que consiste en VX-770 (Ivacaftor), Ivacaftor deuterado, VX-809 (ácido 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoico, VX661 ((R)-1-(2 ,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropano-1-carboxamida), lumacaftor deuterado, genestein, VX-152, VX-440, ^vX-445, VX-659, GLPG2222, GLPG2665, GLPG2851, GLPG2737, GLPG2451, GLPG1837, GLPG 3221, GLPG2545, GLPG3067, FDL169 y QBW-251; opcionalmente, el corrector de CFTR se selecciona del grupo que consiste en VX-809, VX-661, VX-152, VX-440, VX-445, VX-659, GLPG2222, GLPG2851, GLPG2737, GLPG3221 y VX-983, y el potenciador de CFTR se selecciona del grupo que consiste en GLPG2451, GLPG1837, GLPG2545, GLPG3067, ivacaftor y genisteína.

14. El compuesto o composición farmacéutica para uso de la reivindicación 13, en el que uno de los al menos dos agentes terapéuticos adicionales es un corrector de CFTR y el otro es un potenciador de CFTR.

15. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una composición farmacéutica de la reivindicación 6 o 7 para uso en un procedimiento de tratamiento de la fibrosis quística.