BR112021008395A2

BR112021008395A2 - Composições de aminoácidos e métodos para tratamento da fibrose cística

Info

Publication number: BR112021008395A2
Application number: BR112021008395-2A
Authority: BR
Inventors: Sadasivan VIDYASAGAR; Astrid Grosche; Xiaodong Xu; Shanshan LIN; Sreekala Prabhakaran
Original assignee: University Of Florida Research Foundation, Incorporated
Priority date: 2018-10-30
Filing date: 2019-10-30
Publication date: 2021-09-28
Also published as: EP3873453A1; US20210393584A1; MX2021005113A; WO2020092639A1; EP3873453A4; KR20210086660A; JP2022506044A; CA3116015A1; CN113164425A; AU2019370363A1

Abstract

composições de aminoácidos e métodos para tratamento da fibrose cística. são fornecidas neste documento composições de aminoácidos úteis para aumentar a translocação da proteína de condutância transmembrana da fibrose cística (cftr) do citoplasma para a membrana plasmática, particularmente em células epiteliais. métodos para aumentar a concentração de cftr na membrana plasmática, aumentando o transporte de íons cloreto e aumentando o transporte de água também são fornecidos. estas composições e métodos são úteis no tratamento da fibrose cística em sujeitos portadores de uma ou mais mutações na proteína cftr. o uso dessas composições para o tratamento de fibrose cística e na preparação de um medicamento para o tratamento de fibrose cística também está incluído neste documento.

Description

“COMPOSIÇÕES DE AMINOÁCIDOS E MÉTODOS PARA TRATAMENTO DA FIBROSE CÍSTICA” PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica prioridade do Pedido Provisório U.S. 62/752.847 depositado em 30 de outubro de 2018, a totalidade do qual é incorporado neste documento por referência para todos os fins.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[0002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequência, que foi submetida eletronicamente no formato ASCII e está incorporada por meio deste a título de referência em sua totalidade. A referida cópia ASCII, criada em 25 de outubro de 2019, é denominada 174821-013301PCT_SL.txt e tem

25.987 bytes.

CAMPO DA INVENÇÃO

[0003] As composições de aminoácidos úteis para aumentar a translocação da proteína de condutância transmembranar da fibrose cística (CFTR) do citoplasma para a membrana plasmática são descritas neste documento. Métodos para aumentar a concentração de CFTR na membrana plasmática, aumentando o transporte de íons cloreto e aumentando o transporte de água também são apresentados. Composições e métodos descritos neste documento são úteis para o tratamento da fibrose cística em sujeitos portadores de uma ou mais mutações na proteína CFTR. O uso dessas composições para o tratamento de fibrose cística e na preparação de um medicamento para o tratamento de fibrose cística também está incluído neste documento.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[0004] A fibrose cística (FC) é uma doença recessiva hereditária causada pela redução ou falta de síntese de CFTR, dobramento incorreto de proteínas e/ou disfunção do canal, resultando em diminuição da secreção de cloreto, aumento da absorção de sódio (ENaC) e prejuízo na homeostase de fluidos nas células epiteliais das vias aéreas, intestinais e do pâncreas. A FC é a doença genética limitante de vida mais comum que pode afetar os pulmões, o fígado, o pâncreas, os rins e os intestinos. A fibrose cística é herdada de maneira autossômica recessiva, em que cada pai carrega uma mutação em pelo menos um alelo do gene que codifica a proteína de condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR), levando a uma em cada quatro progênies carregando duas cópias mutadas (por exemplo, alelos) do gene CFTR. Assim, mais de 75% dos pacientes são diagnosticados com fibrose cística por volta dos 2. 1 Embora a expectativa de vida das pessoas que vivem com fibrose cística tenha aumentado nos últimos anos, a idade mediana de sobrevida é atualmente de cerca de 40 anos. As terapias atuais geralmente envolvem tratamentos de suporte pesados projetados para controlar o aumento do risco de infecção pulmonar e mau estado nutricional. Além disso, embora as terapias de moléculas pequenas que tratam a causa genética subjacente da FC tenham sido aprovadas recentemente, essas terapias são minimamente eficazes contra a mutação CFTR mais comum, Phe508del, e têm um custo proibitivo de mais de $300.000 anuais por paciente. 2

[0005] Embora mais de 2.000 mutações CFTR tenham sido identificadas em pacientes que sofrem de fibrose cística, a grande maioria dos diagnósticos de fibrose cística exibe um ou mais de apenas um punhado de mutações.3 A mutação mais comum, Phe508del, é uma deleção de 3 nucleotídeos, resultando na perda de um único códon para o aminoácido fenilalanina (código de três letras: Phe, código de uma letra: F). Essa mutação resulta no processamento defeituoso da proteína CFTR (por exemplo, dobramento e tráfego para a membrana plasmática), resultando em pouca ou nenhuma expressão de CFTR, uma proteína transportadora de íons cloreto envolvida no transporte de íons e água através da membrana celular. Além disso, a pequena quantidade de CFTR Phe508del que se transloca com sucesso para a membrana plasmática é muitas vezes funcionalmente defeituosa, caracterizada por transporte prejudicado de íons cloreto. Em geral, as mutações CFTR levam à desregulação do gradiente de íons através das membranas, resultando na redução da pressão osmótica para que a água flua para fora das células epiteliais e a manifestação de uma espessa camada de muco que cobre as células. O muco espesso e rico em nutrientes serve como um ambiente ideal para a captura e o crescimento de bactérias, como Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus, que levam à infecção persistente que geralmente não responde aos antibióticos. Além disso, muitos pacientes com FC também desenvolvem outras doenças pulmonares, como aspergiliose broncopulmonar e bronquiectasia, levando ao aumento da morbimortalidade.

[0006] Embora tenham sido desenvolvidas terapias direcionadas para a fibrose cística causada por mutações específicas no CFTR, muitos são eficazes apenas em pacientes com certas mutações CFTR e efeitos colaterais adversos foram relatados. 2 Um exemplo é o ivacaftor (VX-770, KAYLDECO TM), um pequeno potenciador da molécula de CFTR, 4 conforme descrito na Publicação do Pedido de Patente U.S. 2014/0221424 e no Número de Pedido de Patente Internacional PCT/US2015/036691. No entanto, o ivacaftor é direcionado para o tratamento de FC em pacientes com a mutação missense Gly551Asp (G551D) em pelo menos um alelo do gene CFTR, que abrange cerca de 4 a 5% dos pacientes que sofrem de FC.5 Há uma clara e não atendida necessidade de terapias direcionadas ao tratamento da fibrose cística, particularmente em pacientes que apresentam a mutação CFTR mais prevalente, CFTR Phe508del.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0007] FIG. 1A mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários aminoácidos individuais (AA) (n = 4).

[0008] FIG. 1B mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários AA individuais (n = 4).

[0009] FIG. 2A mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para várias combinações AA (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA-2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4).

[0010] FIG. 2B mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos), Ringers básicos com DMSO e para várias combinações AA (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA-2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4).

[0011] FIG. 3A mostra um gráfico de corrente sensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários aminoácidos individuais (AA) (n = 4).

[0012] FIG. 3B mostra um gráfico de corrente sensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários aminoácidos individuais (AA) (n = 4).

[0013] FIG. 4A mostra um gráfico de corrente sensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para várias combinações AA (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA-2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4).

[0014] FIG. 4B mostra um gráfico de corrente sensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos), Ringers básicos com DMSO e para várias combinações AA (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA-2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4).

[0015] FIG. 5 mostra um gráfico que representa o fluxo de cloreto basal. As células FC não estimuladas banhadas em veículo não secretam cloreto. No entanto, a secreção de cloreto foi significativamente aumentada em células FC banhadas em CF-5AA-3 (P <0,05; n = 7).

[0016] FIG. 6 mostra um gráfico que representa o fluxo de cloreto basal. Células FC não estimuladas banhadas em veículo e CF-5AA-3 têm uma absorção de sódio significativamente maior em comparação com HBECs normais não estimuladas (P <0,001; n = 6).

[0017] FIG. 7A-7F mostra gráficos que representam correntes aniônicas e fluxo de cloreto estimulado. FIG. 7A mostra que a corrente insensível ao benzamil (corrente aniônica) de células FC banhadas no veículo foi significativamente menor em comparação com HBECs normais, mas CF- 5AA-3 aumentou a corrente aniônica por um fator de > 10 (n = 4). FIG. 7B mostra que a corrente sensível a bumetanida (corrente de cloreto) foi significativamente maior em células FC banhadas em CF-5AA-3 em comparação com o veículo (n = 4), mas não atingiu o valor de HBECs normais. FIGs. 7C, 7D, 7E e 7F: mostram que as células FC banhadas em CF-5AA-3 tinham uma corrente de pico de ânion significativamente maior (FIG. 7E) e secreção total de cloreto (FIG. 7F), e a estimulação com FSK e GLPG1837 não contribuem para os valores aumentados na presença de AA (FIGs. 7C, D).

[0018] FIG. 8A e FIG. 8B mostram gráficos que representam a atividade de ENaC e o fluxo de sódio bloqueado. FIG. 8A mostra que as células FC banhadas em veículo ou CF-5AA-3 tiveram uma atividade ENaC significativamente maior (corrente sensível ao benzamil) em comparação com HBECs normais, mas a atividade ENaC foi ligeiramente menor em células FC banhadas em CF-5AA-3 em comparação com o veículo (n = 4). FIG. 8B mostra de forma semelhante, que a absorção de sódio foi significativamente aumentada em células de FC com uma absorção de sódio moderadamente inferior em células de FC banhadas em CF-5AA-3 (n = 7).

[0019] FIG. 9 mostra um gráfico que representa um efeito da formulação de AA indicada na atividade de ENaC em células FC. As células FC banhadas em CF-4AA-3 podem diminuir ainda mais a atividade de ENaC em comparação com o veículo e CF-5AA-3 (n = 4).

[0020] FIG. 10A e FIG. 10 B apresentam gráficos que representam um efeito de C18 (corretor; semelhante ao Lumacaftor) e/ou VX661 (corretor; tezacaftor) na presença de forscolina e potenciador nas células CFTR∆F508. Ivacaftor: GLPG1837 (potenciador reversível); Symdeko: VX661 (tezacaftor)/C18. CF5AA-3 aumentou a corrente em maior extensão do que C18 ou Symdeko. 36

[0021] FIG. 11 mostra um gráfico que descreve estudos de Cloreto em HBECs primários com CFTR∆F508 e mostrou aumento da secreção de cloreto responsiva a CF-5AA-3.

[0022] FIG. 12 apresenta um gráfico que mostra que CF5AA-3 aumentou a corrente aniônica via CFTR em HBECs primários com CFTR∆F508. A corrente do ânion por CF5AA-3 é significativamente maior e sustentada quando comparada à combinação tripla.

[0023] FIG. 13 apresenta um gráfico que mostra que CF5AA-3 aumentou a corrente aniônica via Ano1. A corrente mediada por Ano1 por CF5AA-3 é significativamente maior e sustentada quando comparada à corrente observada com combinação tripla.

[0024] FIG. 14 apresenta um gráfico que mostra que CF5AA-3 aumenta a secreção do ânion apical em um grau semelhante ao dos corretores e potenciadores indicados.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0025] As modalidades cobertas pela invenção são definidas pelas reivindicações, não neste sumário. Este sumário é uma visão geral de alto nível de vários aspectos e apresenta alguns dos conceitos que são ainda descritos na seção Descrição Detalhada abaixo. Este sumário não se destina a identificar características chaves, requeridas ou essenciais da matéria reivindicada, nem se destina a ser utilizado isoladamente para determinar o escopo da matéria reivindicada. A matéria objeto deve ser compreendida por referência às porções apropriadas de todo o relatório descritivo, todo e qualquer desenho e cada reivindicação.

[0026] A presente divulgação reconhece a necessidade de fornecer opções de tratamento mais econômicas e eficazes para pacientes com fibrose cística. As composições de aminoácidos descritas neste documento podem ser particularmente úteis no tratamento de pacientes com FC portadores de pelo menos uma mutação Phe508del em um alelo do gene CFTR. Quando o gene CFTR é homozigoto para a mutação Phe508del, pouco ou nenhum CFTR é trafegado para a membrana plasmática, tornando o tratamento com um potenciador CFTR (por exemplo, ivacaftor), que aumenta a função do CFTR presente na membrana plasmática, virtualmente ineficaz. A presente divulgação fornece composições que aumentam a translocação de proteínas CFTR de tipo selvagem e Phe508del do citoplasma para a membrana plasmática. Em particular, as composições descritas neste documento são particularmente eficazes no aumento do número de proteínas CFTR mutantes na membrana plasmática. Além disso, métodos para o tratamento de doenças em que a disfunção de CFTR está presente (por exemplo, fibrose cística) também são fornecidos neste documento. Formulação - aminoácidos

[0027] Em um primeiro aspecto, a presente invenção fornece uma formulação que compreende: cisteína e prolina como aminoácidos livres e pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos é um L-aminoácido.

[0028] Em uma modalidade, os aminoácidos livres são L- aminoácidos.

[0029] Em uma modalidade, a formulação não compreende aminoácidos livres diferentes de cisteína, prolina e pelo menos um aminoácido adicional selecionado do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina.

[0030] Em uma modalidade, a formulação consiste essencialmente em: cisteína e prolina como aminoácidos livres e um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0031] Em uma modalidade, a formulação consiste em: cisteína e prolina como aminoácidos livres e um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L- aminoácido.

[0032] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e glicina como aminoácidos livres e, opcionalmente, um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0033] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e glicina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido e nenhum outro aminoácido livre.

[0034] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e tirosina como aminoácidos livres e, opcionalmente, um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L- aminoácido.

[0035] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e tirosina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido e nenhum outro aminoácido livre.

[0036] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e lisina como aminoácidos livres e, opcionalmente, um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina e tirosina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0037] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e lisina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido e nenhum outro aminoácido livre.

[0038] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, glicina e tirosina como aminoácidos livres e, opcionalmente, compreende adicionalmente lisina como um aminoácido livre, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0039] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, glicina e tirosina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido e nenhum outro aminoácido livre.

[0040] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, glicina e lisina como aminoácidos livres e, opcionalmente, compreende adicionalmente tirosina como um aminoácido livre, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0041] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, glicina e lisina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido e nenhum outro aminoácido livre.

[0042] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e tirosina como aminoácidos livres e, opcionalmente, compreende adicionalmente glicina como um aminoácido livre, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0043] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, lisina e tirosina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido e nenhum outro aminoácido livre.

[0044] Em uma modalidade, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0045] Em uma modalidade, a formulação não compreende outros aminoácidos livres.

[0046] Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece uma formulação que compreende: cisteína e prolina como aminoácidos livres e pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado do grupo que consiste em glicina, tirosina, lisina e valina com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos é um L-aminoácido.

[0047] Em uma modalidade do segundo aspecto, os aminoácidos livres são L-aminoácidos.

[0048] Em uma modalidade do segundo aspecto, a formulação não compreende aminoácidos livres diferentes de cisteína, prolina e pelo menos um aminoácido adicional selecionado do grupo que consiste em glicina, tirosina, lisina e valina.

[0049] Em uma modalidade do segundo aspecto, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e valina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0050] Em uma modalidade do segundo aspecto, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, valina e glicina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0051] Em uma modalidade do segundo aspecto, a formulação compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, valina e tirosina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

[0052] Em uma modalidade, qualquer uma das formulações do segundo aspecto não compreende outros aminoácidos livres. Formulação - excipientes etc.

[0053] Em uma modalidade, a formulação compreende ainda água.

[0054] Em uma modalidade, a formulação é uma formulação farmacêutica.

[0055] Em uma modalidade, a formulação compreende ainda um carreador, tampão, eletrólito, adjuvante ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

[0056] Em uma modalidade, a formulação é estéril.

[0057] Em uma modalidade, a formulação é formulada para administração por via enteral, pulmonar, inalatória, intranasal ou sublingual.

[0058] Em uma modalidade, cada aminoácido livre está presente em uma quantidade terapeuticamente eficaz. Métodos Terapêuticos

[0059] Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece uma formulação conforme descrita acima, para uso como um medicamento.

[0060] Em uma modalidade da invenção, uma formulação conforme descrita acima é para uso no tratamento de fibrose cística.

[0061] A invenção também fornece o uso de uma formulação conforme descrita acima, na fabricação de um medicamento para o tratamento de fibrose cística.

[0062] Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um método para o tratamento de um sujeito que sofre de fibrose cística, o método compreendendo a administração ao sujeito que sofre de fibrose cística da formulação descrita neste documento acima, em que a administração reduz pelo menos um sintoma de fibrose cística.

[0063] Em uma modalidade, o sujeito que sofre de fibrose cística expressa CFTR de tipo selvagem. Em uma modalidade, o sujeito tem uma mutação no gene CFTR. Em uma modalidade, o sujeito expressa CFTR de tipo selvagem e CFTR mutante. Em uma modalidade, o sujeito sofre de fibrose cística em que uma proteína CFTR que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos de CFTR de tipo selvagem está presente, em que a sequência de CFTR de tipo selvagem compreende SEQ ID NO: 1. Em uma modalidade, a mutação no CFTR compreende Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23, Phe508del ou uma combinação dos mesmos, em que X é qualquer aminoácido. Em uma modalidade, o CFTR é um CFTR mutante Phe508del.

[0064] Em uma modalidade, a formulação conforme descrita acima é usada em combinação com um agente terapêutico adicional.

[0065] Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional compreende pelo menos um de uma droga de molécula pequena, droga de proteína, droga de ácido nucleico ou combinação dos mesmos. Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é pelo menos um de um potenciador CFTR, corretor CFTR, agente de leitura CFTR ou uma combinação dos mesmos. Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um potenciador CFTR. Em uma modalidade, o potenciador

CFTR é ivacaftor. Outros aspectos da invenção

[0066] Num outro aspecto da invenção, é fornecido um kit compreendendo: uma formulação farmacêutica conforme descrito acima; e instruções para administrar a um sujeito ou contatar uma amostra biológica com a formulação.

[0067] Em um outro aspecto da invenção, é fornecido um método para aumentar o número de proteínas reguladoras de condutância transmembrana de fibrose cística (CFTR) presentes na membrana plasmática de pelo menos uma célula, o método compreendendo: contatar a pelo menos uma célula com uma quantidade eficaz da formulação farmacêutica, conforme descrito acima, em que o contato promove pelo menos um de dobramento de CFTR ou transporte de CFTR para a membrana plasmática, aumentando assim o número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula.

[0068] Em uma modalidade, o número de proteínas CFTR de tipo selvagem na membrana plasmática aumenta. Em uma modalidade, o número de proteínas CFTR mutantes na membrana plasmática aumenta. Em uma modalidade, o número de proteínas CFTR que são pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idênticas à sequência de aminoácidos do CFTR de tipo selvagem no plasma aumentos de membrana, em que o CFTR de tipo selvagem compreende SEQ ID NO: 1. Em uma modalidade, uma ou mais das proteínas CFTR compreendem Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23, Phe508del ou uma combinação dos mesmos, em que X é qualquer amino ácido. Em uma modalidade, uma ou mais das proteínas CFTR compreendem a mutação Phe508del. Em uma modalidade, o aumento do número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula é detectado pelo aumento da exportação de íons cloreto da célula. Em uma modalidade, o aumento do número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula está associado ao aumento da exportação de água da célula. Em uma modalidade, a célula é uma célula epitelial. Em uma modalidade, a célula epitelial é uma célula epitelial do pulmão. Em uma modalidade, a célula epitelial pulmonar é uma célula epitelial brônquica. Em uma modalidade, a célula epitelial brônquica é isolada de um sujeito que sofre de fibrose cística.

[0069] Em um aspecto particular, uma formulação farmacêutica é apresentada compreendendo: uma quantidade terapeuticamente eficaz de cisteína e prolina como aminoácidos livres e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um aminoácido livre adicional consistindo em glicina, tirosina ou lisina, com a condição de que em pelo menos um dos aminoácidos livres é um L-aminoácido, em que a formulação farmacêutica consiste essencialmente em cisteína, prolina e pelo menos um aminoácido livre adicional.

[0070] Em uma modalidade particular da formulação farmacêutica, os aminoácidos livres são L-aminoácidos. Em outra modalidade particular, a formulação farmacêutica compreende ainda água. Em outra modalidade particular, a formulação farmacêutica compreende ainda um carreador, tampão, eletrólito, adjuvante ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade particular, a formulação farmacêutica é estéril. Em outra modalidade, a formulação farmacêutica é formulada para administração por via enteral, pulmonar, inalatória, intranasal ou sublingual.

[0071] Em uma modalidade particular da formulação farmacêutica, a formulação farmacêutica compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cisteína e prolina como aminoácidos livres e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um aminoácido livre adicional consistindo em glicina, tirosina ou lisina, e nenhum outro aminoácido livre. As combinações dos aminoácidos citados incluem, por exemplo: cisteína, prolina e glicina; cisteína, prolina e tirosina; cisteína, prolina e lisina; cisteína, prolina, glicina e tirosina; cisteína, prolina, glicina e lisina; cisteína, prolina, tirosina e lisina; e cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina.

[0072] Em outra modalidade particular da formulação farmacêutica, a formulação farmacêutica compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cisteína e prolina como aminoácidos livres e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um aminoácido livre adicional consistindo em glicina, tirosina, lisina ou valina e nenhum outro aminoácido livre. As combinações dos aminoácidos citados incluem, por exemplo: cisteína, prolina e valina; cisteína, prolina, valina e glicina; e cisteína, prolina, valina e tirosina.

[0073] Em outra modalidade particular da formulação farmacêutica, a formulação farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada um de cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, como aminoácidos livres e nenhum outro aminoácido livre. Em outra modalidade particular da formulação farmacêutica, a formulação farmacêutica consiste essencialmente em ou consiste em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada uma de cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, como aminoácidos livres.

[0074] Em uma modalidade particular, a formulação farmacêutica é para uso em terapia. Em uma modalidade mais particular, a formulação farmacêutica é para uso no tratamento de fibrose cística. Em outra modalidade particular, a formulação farmacêutica é usada para a fabricação de um medicamento para o tratamento de fibrose cística.

[0075] Em um outro aspecto, é apresentado um método para tratar um sujeito que sofre de fibrose cística, o método compreendendo a administração ao sujeito que sofre de fibrose cística de uma formulação farmacêutica descrita neste documento, em que a administração reduz pelo menos um sintoma de fibrose cística. Em uma modalidade particular do método, o sujeito expressa CFTR de tipo selvagem. Em outra modalidade particular, o sujeito tem uma mutação no gene CFTR. Em outra modalidade particular, o sujeito expressa CFTR de tipo selvagem e CFTR mutante. Em outra modalidade particular, o sujeito sofre de fibrose cística em que uma proteína CFTR que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos de CFTR de tipo selvagem está presente, em que a sequência de CFTR de tipo selvagem compreende SEQ ID NO: 1. Em outra modalidade, a mutação no CFTR compreende Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23, Phe508del, ou uma combinação dos mesmos, em que X é qualquer aminoácido. Em outra modalidade particular, o CFTR é um CFTR Phe508del mutante. Em outra modalidade particular do método, o método compreende ainda a administração de um agente terapêutico adicional. Em outra modalidade particular do método, o agente terapêutico adicional compreende pelo menos uma de uma droga de molécula pequena, droga de proteína, droga de ácido nucleico ou combinação das mesmas. Em outra modalidade particular do método, o agente terapêutico adicional é pelo menos um de um potenciador CFTR, corretor CFTR, agente de leitura CFTR ou uma combinação dos mesmos. Em outra modalidade particular do método, o agente terapêutico adicional é um potenciador CFTR. Em outra modalidade particular do método, o potenciador CFTR é ivacaftor.

[0076] Em uma modalidade particular do método, a formulação farmacêutica compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cisteína e prolina como aminoácidos livres e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um aminoácido livre adicional consistindo em glicina, tirosina ou lisina, e nenhum outro aminoácido livre. As combinações dos aminoácidos citados incluem, por exemplo: cisteína, prolina e glicina; cisteína, prolina e tirosina; cisteína, prolina e lisina; cisteína, prolina, glicina e tirosina; cisteína, prolina, glicina e lisina; cisteína, prolina, tirosina e lisina; e cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina.

[0077] Em outra modalidade particular do método, a formulação farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada um de cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, como aminoácidos livres e nenhum outro aminoácido livre. Em outra modalidade particular do método, a formulação farmacêutica consiste essencialmente em ou consiste em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada uma de cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, como aminoácidos livres.

[0078] Em um outro aspecto, é apresentado um método para aumentar o número de proteínas reguladoras de condutância transmembrana de fibrose cística (CFTR) presentes na membrana plasmática de pelo menos uma célula, o método compreendendo: contatar a pelo menos uma célula com uma quantidade eficaz de uma formulação farmacêutica descrita neste documento, em que o contato promove pelo menos um de dobramento de CFTR ou transporte de CFTR para a membrana plasmática, aumentando assim o número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula. Em uma modalidade particular do método, o número de proteínas CFTR de tipo selvagem na membrana plasmática aumenta. Em outra modalidade particular do método, o número de proteínas CFTR mutantes na membrana plasmática aumenta. Em outra modalidade particular do método, o número de proteínas CFTR que são pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idênticas à sequência de aminoácidos de tipo selvagem CFTR na membrana plasmática aumenta, em que o CFTR de tipo selvagem compreende SEQ ID NO: 1. Em outra modalidade particular do método, uma ou mais das proteínas CFTR compreendem Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23, Phe508del, ou uma combinação dos mesmos, em que X é qualquer aminoácido. Em outra modalidade particular do método, uma ou mais das proteínas CFTR compreendem a mutação Phe508del. Em outra modalidade particular do método, o aumento do número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula é detectado pelo aumento da exportação de íons cloreto da célula. Em outra modalidade particular do método, o aumento do número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula está associado ao aumento da exportação de água da célula. Em outra modalidade particular do método, a célula é uma célula epitelial. Em uma modalidade mais particular do método, a célula epitelial é uma célula epitelial do pulmão. Em uma modalidade ainda mais particular do método, a célula epitelial do pulmão é uma célula epitelial brônquica. Em outra modalidade particular do método, a célula epitelial brônquica é isolada de um sujeito que sofre de fibrose cística e os resultados de ensaios in vitro realizados em tais células fornecem orientação sobre quais agentes terapêuticos e/ou combinações dos mesmos irão conferir eficácia terapêutica à forma do sujeito de quem as células foram isoladas. Em outra modalidade particular do método, o método compreende ainda a administração de um agente terapêutico adicional. Em outra modalidade particular do método, o agente terapêutico adicional compreende pelo menos uma de uma droga de molécula pequena, droga de proteína, droga de ácido nucleico ou combinação das mesmas. Em outra modalidade particular do método, o agente terapêutico adicional é pelo menos um de um potenciador CFTR, corretor CFTR, agente de leitura CFTR ou uma combinação dos mesmos. Em outra modalidade particular do método, o agente terapêutico adicional é um potenciador CFTR. Em outra modalidade particular do método, o potenciador CFTR é ivacaftor.

[0079] Em uma modalidade particular do método, a formulação farmacêutica compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cisteína e prolina como aminoácidos livres e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um aminoácido livre adicional consistindo em glicina, tirosina ou lisina, e nenhum outro aminoácido livre. As combinações dos aminoácidos citados incluem, por exemplo: cisteína, prolina e glicina; cisteína, prolina e tirosina; cisteína, prolina e lisina; cisteína, prolina, glicina e tirosina; cisteína, prolina, glicina e lisina; cisteína, prolina, tirosina e lisina; e cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina.

[0080] Em outra modalidade particular do método, a formulação farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada um de cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, como aminoácidos livres e nenhum outro aminoácido livre. Em outra modalidade particular do método, a formulação farmacêutica consiste essencialmente em ou consiste em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada uma de cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, como aminoácidos livres.

[0081] Em outra modalidade particular, é apresentado um kit compreendendo: uma formulação farmacêutica compreendendo, consistindo essencialmente em, ou consistindo em cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, como aminoácidos livres; e instruções para administrar a um sujeito ou contatar uma amostra biológica com a composição.

[0082] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece composições compreendendo, consistindo essencialmente em, ou consistindo em cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina para uso no tratamento de fibrose cística. Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece o uso de composições de aminoácidos para tratar a fibrose cística em um sujeito que necessite do mesmo. Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece o uso de composições de aminoácidos na preparação de um medicamento para o tratamento de fibrose cística em um sujeito que necessite do mesmo.

[0083] Em um aspecto, a presente divulgação fornece composições compreendendo, consistindo essencialmente em, ou consistindo em, cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em certas modalidades, os aminoácidos são L-aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende ainda água. Em outro aspecto, a composição compreende ainda um carreador, tampão, eletrólito, adjuvante ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, a composição é esterilizada. Em outro aspecto, a composição é formulada para administração por via enteral, pulmonar, inalatória, intranasal ou sublingual.

[0084] Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que CFTR de tipo selvagem está presente. Em um aspecto, o sujeito tem uma mutação no gene CFTR. Em um aspecto adicional, o sujeito está sofrendo de fibrose cística na qual tanto o CFTR de tipo selvagem quanto o mutante estão presentes. Em ainda outro aspecto, o sujeito está sofrendo de fibrose cística em que uma proteína CFTR que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos de CFTR de tipo selvagem conforme fornecido pela SEQ ID NO: 1 está presente. Em ainda outros aspectos, o CFTR é um mutante CFTR Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23 ou Phe508del, em que X é qualquer aminoácido. Em certas modalidades, o CFTR é um mutante Phe508del CFTR.

[0085] Também são fornecidos neste documento métodos para aumentar o número de proteínas reguladoras de condutância transmembrana de fibrose cística (CFTR) presentes na membrana plasmática de uma célula, o método compreendendo o contato da célula com uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em, ou consistindo em cisteína, prolina, glicina,

tirosina e lisina. Em certos aspectos, a quantidade eficaz aumenta o número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula. Em outros aspectos, o número de proteínas CFTR de tipo selvagem na membrana plasmática aumenta. Em ainda outros aspectos, o número de proteínas CFTR mutantes na membrana plasmática aumenta. Em certos aspectos, o número de proteínas CFTR que são pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idênticas à sequência de aminoácidos de CFTR de tipo selvagem conforme fornecido por SEQ ID NO: 1 na membrana plasmática aumenta. Em algumas modalidades, uma ou mais das proteínas CFTR são um mutante Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23 ou Phe508del, em que X é qualquer aminoácido. Em outras modalidades, uma ou mais das proteínas CFTR são um mutante CFTR Phe508del. Em certas modalidades, a exportação de íons cloreto da célula é aumentada. Em outras modalidades, a exportação de água da célula é aumentada. Em ainda outras modalidades, a célula é uma célula epitelial. Em certas modalidades, a célula epitelial é uma célula epitelial do pulmão. Em algumas modalidades, a célula epitelial do pulmão é uma célula epitelial brônquica. Em outras modalidades, a célula epitelial brônquica foi obtida de um sujeito que sofre de fibrose cística. As células podem ser in vitro, in vivo ou ex vivo.

[0086] Em certos aspectos, os métodos fornecidos neste documento compreendem ainda a administração de um agente terapêutico adicional. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é uma droga de molécula pequena, droga de proteína ou droga de ácido nucleico. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é uma droga de molécula pequena. Em outras modalidades, o agente terapêutico adicional é um potenciador, corretor ou agente de leitura CFTR. Em ainda outras modalidades, o agente terapêutico adicional é um potenciador CFTR. Em alguns aspectos, o potenciador CFTR é ivacaftor. Em certas modalidades,

o agente terapêutico adicional é um corretor CFTR. Em certas modalidades, o corretor CFTR é lumcaftor. O agente terapêutico adicional pode ser incluído em qualquer uma das composições descritas neste documento (por exemplo, a composição compreende ainda um agente terapêutico adicional). O agente terapêutico adicional pode ser administrado simultaneamente com, antes ou subsequentemente após a administração de qualquer uma das composições descritas neste documento (por exemplo, terapia de combinação).

[0087] Em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece um método para o tratamento de fibrose cística, o método compreendendo a administração a um sujeito em necessidade de uma composição descrita neste documento, em que a composição é formulada para administração por via enteral, via pulmonar, inalatória, intranasal ou sublingual. Em certas modalidades, a composição é formulada para administração pulmonar ao sujeito. Em certas modalidades, a composição é formulada para administração enteral ao sujeito. Em certas modalidades, a composição é formulada para administração oral ao sujeito.

[0088] Em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece um método para o tratamento de fibrose cística, o método compreendendo a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma composição descrita neste documento. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que o sujeito tem uma mutação no gene CFTR. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística na qual o sujeito é heterozigoto para CFTR de tipo selvagem e CFTR mutante. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que o sujeito é heterozigoto para um primeiro CFTR mutante e um segundo CFTR mutante (por exemplo, em que as mutações são diferentes). Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que o sujeito é homozigoto para CFTR mutante (por exemplo, ambos os alelos têm a mesma mutação). Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que o sujeito é homozigoto para CFTR de tipo selvagem (por exemplo, ambos os alelos não são mutados). Em certas modalidades, o CFTR mutante é um mutante CFTR Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23 ou Phe508del, em que X é qualquer aminoácido. Em certas modalidades, o CFTR mutante é um CFTR Phe508del mutante. Em certas modalidades, a proteína CFTR presente no sujeito é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos do CFTR de tipo selvagem, conforme fornecido por SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR presente no sujeito é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos de CFTR Phe508del conforme fornecido pela SEQ ID NO: 2.

[0089] Informações sobre diagnóstico e tratamento de várias doenças, incluindo fibrose cística e doenças pulmonares relacionadas, são encontradas em Longo, D., et al. (eds.), Harrison's Principles of Internal Medicine, 18th Ed.; McGraw-Hill Professional, 2011. A informação relativa a vários agentes terapêuticos e doenças humanas, incluindo doença pulmonar, é encontrada em Brunton, L., et al. (eds.) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 12th Ed., McGraw Hill, 2010 and/or Katzung, B. (ed.) Basic and Clinical Pharmacology, McGraw- Hill/Appleton & Lange; 11a edição (Julho 2009). Todas as patentes, pedidos de patentes, livros, artigos, documentos, bancos de dados, sites, publicações, referências, etc., mencionados neste documento são incorporados por referência em sua totalidade. Em caso de conflito entre o relatório descritivo e qualquer uma das referências incorporadas, o relatório descritivo prevalecerá. Os candidatos se reservam o direito de alterar o relatório descritivo com base, por exemplo, em qualquer material incorporado e/ou corrigir erros óbvios. Nenhum conteúdo do material incorporado deve limitar a invenção. Significados de termos padrão aceitados na técnica são usados neste documento, a menos que indicado de outra forma. As abreviaturas convencionais para os vários termos são utilizadas neste documento.

[0090] Em certos aspectos, a composição fornecida neste documento compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina, e nenhum outro aminoácido livre.

[0091] Também são fornecidos neste documento os usos de uma composição para tratar a fibrose cística em um sujeito em necessidade da mesma, em que a composição compreende cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina.

[0092] Também são fornecidos neste documento kits que compreendem uma composição que compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina; e instruções para administrar a um sujeito ou contatar uma amostra biológica com a composição.

[0093] Todas as combinações de modalidades descritas separadamente são consideradas.

[0094] Os detalhes de certas modalidades da invenção são apresentados na Descrição Detalhada de Certas Modalidades, conforme descrito abaixo. Outras características, objetos e vantagens da invenção serão evidentes a partir das Definições, Exemplos, Figuras e Reivindicações.

DEFINIÇÕES

[0095] Descrições e certas informações relacionadas a vários termos usados na presente divulgação são coletadas neste documento por conveniência.

[0096] O termo "agente" é usado neste documento para se referir a qualquer substância, composto (por exemplo, molécula), complexo supramolecular, material ou combinação ou mistura dos mesmos.

Um composto pode ser qualquer agente que pode ser representado por uma fórmula química, estrutura química ou sequência.

Exemplos de agentes incluem, por exemplo, pequenas moléculas, polipeptídeos, ácidos nucleicos (por exemplo, agentes de RNAi, oligonucleotídeo antisense, aptâmeros), lipídios, polissacarídeos, etc.

Em geral, os agentes podem ser obtidos usando qualquer método adequado conhecido na técnica.

O versado na técnica irá selecionar um método apropriado com base, por exemplo, na natureza do agente.

Um agente pode ser pelo menos parcialmente purificado.

Em algumas modalidades, um agente pode ser fornecido como parte de uma composição, que pode conter, por exemplo, um contraíon, diluente ou carreador aquoso ou não aquoso, tampão, conservante ou outro ingrediente, além do agente, em várias modalidades.

Em algumas modalidades, um agente pode ser fornecido como um sal, éster, hidrato ou solvato.

Em algumas modalidades, um agente é permeável às células, por exemplo, dentro da faixa de agentes típicos que são absorvidos pelas células e atuam intracelularmente, por exemplo, dentro de células de mamíferos, para produzir um efeito biológico.

Certos compostos podem existir em formas geométricas ou estereoisoméricas particulares.

Tais compostos, incluindo cis- e trans-isômeros E- e Z-isômeros, R- e S- enantiômeros, diastereômeros, (D) -isômeros, (L) -isômeros, (-) - e (+) - isômeros, suas misturas racêmicas e outras misturas dos mesmos são abrangidas por esta divulgação em várias modalidades, a menos que indicado de outra forma.

Certos compostos podem existir em uma variedade ou estados de protonação, podem ter uma variedade de configurações, podem existir como solvatos [por exemplo, com água (ou seja, hidratos) ou solventes comuns] e/ou podem ter diferentes formas cristalinas (por exemplo, polimorfos) ou diferentes formas tautoméricas.

As modalidades que exibem tais estados de protonação alternativos,

configurações, solvatos e formas são abrangidas pela presente divulgação, quando aplicável. O termo "agente" também pode abranger um "agente terapêutico". Os termos "composto" e "agente" podem ser usados indistintamente.

[0097] Uma "quantidade eficaz" ou "dose eficaz" de um agente (ou composição contendo tal agente) refere-se à quantidade suficiente para atingir um efeito biológico e/ou farmacológico desejado, por exemplo, quando distribuído a uma célula ou organismo de acordo com uma forma de administração, via e/ou cronograma selecionado. As frases "quantidade eficaz" e "quantidade terapeuticamente eficaz" são usadas indistintamente. Como será apreciado por aqueles versados na técnica, a quantidade absoluta de um agente ou composição particular que é eficaz pode variar dependendo de fatores como o desfecho biológico ou farmacológico desejado, o agente a ser distribuído, o tecido alvo, etc. Aqueles de conhecimento comum na técnica compreenderão ainda que uma "quantidade eficaz" pode ser contatada com células ou administrada a um sujeito em uma dose única, ou através do uso de doses múltiplas, em várias modalidades. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade que aumenta o tráfego de CFTR para a membrana plasmática de uma célula. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade que aumenta a translocação de CFTR do citoplasma para a membrana plasmática de uma célula. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade que aumenta a exportação de íons cloreto de uma célula. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade que aumenta a exportação de água de uma célula. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade que reduz os sintomas e/ou trata uma doença pulmonar. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade que reduz os sintomas e/ou trata a fibrose cística.

[0098] O termo "consistindo essencialmente em", tal conforme usado neste documento, limita o escopo dos ingredientes e etapas aos materiais ou etapas especificados e aqueles que não afetam materialmente as características básicas e novas da presente invenção, por exemplo, composições e uso dos mesmos para o tratamento da fibrose cística e métodos para o tratamento da fibrose cística. Por exemplo, ao usar "consistindo essencialmente em", a composição terapêutica não contém quaisquer ingredientes não especificados incluindo, mas não se limitando a, aminoácidos livres, di-, oligo-, ou polipeptídeos ou proteínas; e mono-, di-, oligo-, polissacarídeos e carboidratos que têm um efeito terapêutico direto benéfico ou adverso no tratamento da fibrose cística. Além disso, ao usar o termo "consistindo essencialmente em", a composição pode compreender substâncias que não têm efeitos terapêuticos no tratamento da fibrose cística; tais ingredientes incluem carreadores, excipientes, adjuvantes, agentes aromatizantes, etc. que não afetam a saúde ou a função do epitélio pulmonar.

[0099] A descrição neste documento de qualquer aspecto ou modalidade usando termos como "compreendendo", "tendo", "incluindo" ou "contendo com referência a um elemento ou elementos se destina a fornecer suporte para um aspecto ou modalidade semelhante" consiste em", "consiste essencialmente em" ou "compreende substancialmente" que esse elemento ou elementos em particular, a menos que indicado de outra forma ou claramente contradito pelo contexto (por exemplo, uma composição descrita neste documento como compreendendo um elemento particular deve ser entendida como também descrevendo uma composição que consiste nesse elemento, a menos que indicado de outra forma ou claramente contradito pelo contexto).

[00100] O termo "gene" refere-se a um locus (por exemplo, região) de DNA que é composto de nucleotídeos. Geralmente, um gene contém várias regiões, incluindo uma ou mais sequências regulatórias a montante ou a jusante (por exemplo, intensificador/silenciador, promotor,

sequências não codificantes 5', sequências não codificantes 3') que é normalmente necessário para iniciar a transcrição, um quadro de leitura compreendendo um ou mais éxons e um ou mais íntrons. Um "éxon" é qualquer parte de um gene que codificará parte do RNA maduro final, que será traduzido em uma sequência de proteína. Um "íntron" é qualquer parte de um gene que é removido por splicing de RNA durante a maturação do RNA maduro final. Um "éxon críptico" é um éxon que pode introduzir um códon de parada da tradução prematuro no RNA maduro ou resultar em padrões de splicing atípicos. O termo "gene" pode se referir a um fragmento de ácido nucleico que expressa uma proteína, incluindo sequências regulatórias precedendo (sequências não codificantes 5') e após (sequências não codificantes 3') a sequência codificante. "Gene nativo" refere-se a um gene encontrado na natureza com suas próprias sequências regulatórias. Adequadamente, um gene quimérico ou construto quimérico pode compreender sequências reguladoras e sequências de codificação que são derivadas de diferentes fontes, ou sequências reguladoras e sequências de codificação derivadas da mesma fonte, mas dispostas de uma maneira diferente daquela encontrada na natureza. "Gene endógeno" refere-se a um gene nativo em sua localização natural no genoma de um organismo. Um gene "estranho" se refere a um gene não normalmente encontrado no organismo hospedeiro, mas que é introduzido no organismo hospedeiro por transferência de gene. Genes estranhos podem compreender genes nativos inseridos em um organismo não nativo ou genes quiméricos.

[00101] O termo "produto gênico" (também referido neste documento como "produto de expressão gênica" ou "produto de expressão") abrange produtos resultantes da expressão de um gene, como RNA transcrito de um gene e polipeptídeos decorrentes da tradução de tal RNA. Será apreciado que certos produtos gênicos podem sofrer processamento ou modificação, por exemplo, em uma célula. Por exemplo,

os transcritos de RNA podem ser spliced, poliadenilados, etc., antes da tradução de mRNA e/ou polipeptídeos podem sofrer processamento de co- tradução ou pós-tradução, tal como remoção de sequências de sinal de secreção, remoção de sequências de direcionamento de organela ou modificações como fosforilação, acilação graxa, etc.

O termo "produto gênico" abrange essas formas processadas ou modificadas.

O mRNA genômico e as sequências polipeptídicas de uma variedade de espécies, incluindo humanos, são conhecidos na técnica e estão disponíveis em bancos de dados acessíveis ao público, como aqueles disponíveis no National Center for Biotechnology Information (www.ncbi.nih.gov) ou Universal Protein Resource (www.uniprot.org). Bancos de dados incluem, por exemplo, GenBank, RefSeq, Gene, UniProtKB/SwissProt, UniProtKB/Trembl e semelhantes.

Em geral, as sequências, por exemplo, sequências de mRNA e polipeptídeos, no banco de dados de sequência de referência do NCBI podem ser usadas como sequências de produto de gene para um gene de interesse.

Será apreciado que vários alelos de um gene podem existir entre indivíduos da mesma espécie.

Por exemplo, diferenças em um ou mais nucleotídeos (por exemplo, até cerca de 1%, 2%, 3-5% dos nucleotídeos) dos ácidos nucleicos que codificam uma proteína particular podem existir entre os indivíduos de uma determinada espécie.

Devido à degenerescência do código genético, tais variações muitas vezes não alteram a sequência de aminoácidos codificados, embora possam existir polimorfismos de DNA que levam a alterações na sequência das proteínas codificadas.

Exemplos de variantes polimórficas podem ser encontrados, por exemplo, no Single Nucleotide Polymorphism Database (dbSNP), disponível no site do NCBI em www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/[Sherry, ST, et al. (2001) dbSNP: The NCBI database of genetic variation.

Nucl Acids Res, 29: 308–311; Kitts, A. and Sherry, S. (2009) The single nucleotide polymorphism database (dbSNP) of nucleotide sequence variation.

In: The NCBI Handbook

(Internet); McEntyre, J., Ostell, J., editors. Bethesda (MD): National Center for Biotechnology Information (US); 2002 (www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=handbook&part=ch5)]. Podem existir várias isoformas de certas proteínas, por exemplo, como resultado de splicing ou edição alternativa de RNA. Em geral, onde os aspectos desta divulgação se referem a um gene ou produto gênico, modalidades pertencentes a variantes alélicas ou isoformas são abrangidas, se aplicável, a menos que indicado de outra forma. Certas modalidades podem ser direcionadas a sequência(s) particular(es), por exemplo, alelo(s) ou isoforma(s) particular(es).

[00102] O termo "aminoácido" abrange todos os aminoácidos conhecidos que compreendem um grupo funcional amina (-NH2), um grupo funcional carboxil (-COOH) e um grupo de cadeia lateral ("R") específico para cada aminoácido. "Aminoácidos" abrangem os 21 aminoácidos codificados pelo genoma humano (ou seja, aminoácidos proteinogênicos), aminoácidos codificados ou produzidos por bactérias ou organismos unicelulares e aminoácidos derivados naturalmente. Para os fins desta divulgação, a forma de ácido conjugado de aminoácidos com cadeias laterais básicas (arginina, lisina e histidina) ou a forma de base conjugada de aminoácidos com cadeias laterais ácidas (ácido aspártico e ácido glutâmico) são essencialmente as mesmas, salvo indicação em contrário. "Aminoácidos" também englobam derivados dos mesmos que retêm substancialmente a mesma, ou melhor, atividade em termos de aumento do efeito de uma composição da presente invenção (por exemplo, aumentando o número de proteínas CFTR na membrana plasmática, aumentando a exportação de íon cloreto de uma célula, tratando a fibrose cística). Os derivados podem ser, por exemplo, enantiômeros e incluem ambas as formas D- e L- dos aminoácidos. Os derivados podem ser derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais" (por exemplo, β-aminoácidos, homo-aminoácidos, derivados de prolina, derivados de ácido pirúvico,

derivados de alanina 3-substituídos, derivados de glicina, tirosina substituída por anel derivados, derivados de fenilalanina substituídos em anel, aminoácidos de núcleo linear e aminoácidos N-metil), por exemplo, selenocisteína, pirrolisina, iodotirosina, norleucina ou norvalina. Outros derivados de aminoácidos incluem, mas não estão limitados a, aqueles que são sintetizados por, por exemplo, acilação, metilação, glicosilação e/ou halogenação do aminoácido. Estes incluem, por exemplo, aminoácidos β- metil, C-metilaminoácidos e N-metilaminoácidos. Os aminoácidos descritos neste documento podem estar presentes como aminoácidos livres. O termo "aminoácido livre" refere-se a um aminoácido que não faz parte de um peptídeo ou polipeptídeo (por exemplo, não está conectado a outro aminoácido por meio de uma ligação peptídica). Um aminoácido livre é livre em solução, mas pode estar associado a um sal ou outro componente em solução.

[00103] Os termos "proteína", "peptídeo" e "polipeptídeo" são usados indistintamente neste documento e referem-se a um polímero de resíduos de aminoácidos ligados entre si por ligações peptídicas (amida). Os termos referem-se a uma proteína, peptídeo ou polipeptídeo de qualquer tamanho, estrutura ou função. Normalmente, uma proteína, peptídeo ou polipeptídeo terá pelo menos três aminoácidos de comprimento. Uma proteína, peptídeo ou polipeptídeo pode se referir a uma proteína individual ou a uma coleção de proteínas. Um ou mais dos aminoácidos em uma proteína, peptídeo ou polipeptídeo podem ser modificados, por exemplo, pela adição de uma entidade química, tal como um grupo carboidrato, um grupo hidroxil, um grupo fosfato, um grupo farnesil, um grupo isofarnesil, um grupo de ácido graxo, um ligante peptídico para conjugação, funcionalização ou outra modificação, etc. Uma proteína, peptídeo ou polipeptídeo também pode ser uma única molécula ou pode ser um complexo multi-molecular. Em algumas modalidades, uma proteína compreende um homodímero ou um heterodímero. Uma proteína,

peptídeo ou polipeptídeo pode ser apenas um fragmento de uma proteína ou peptídeo de ocorrência natural. Uma proteína, peptídeo ou polipeptídeo pode ser de ocorrência natural, recombinante ou sintético, ou qualquer combinação dos mesmos. Uma proteína pode compreender diferentes domínios, por exemplo, um domínio de ligação de ácido nucleico (por exemplo, o domínio de ligação de gRNA de Cas9 que direciona a ligação da proteína a um sítio alvo) e um domínio de clivagem de ácido nucleico. Em algumas modalidades, uma proteína compreende uma parte proteica, por exemplo, uma sequência de aminoácidos que constitui um domínio de ligação de ácido nucleico e um composto orgânico, por exemplo, um composto que pode atuar como um agente de clivagem de ácido nucleico. Em algumas modalidades, uma proteína está em um complexo com, ou está associada a, um ácido nucleico, por exemplo, RNA. Em algumas modalidades, uma proteína compreende um domínio de ligação ao ligante. Em algumas modalidades, uma proteína compreende um sítio ativo (por exemplo, sítio de atividade biológica ou enzimática). Em algumas modalidades, uma proteína compreende um sítio alostérico (por exemplo, sítio de uma proteína que pode se ligar a um ligante que pode estar remoto de um sítio ativo). Qualquer uma das proteínas fornecidas neste documento pode ser produzida por qualquer método conhecido na técnica. Por exemplo, as proteínas fornecidas neste documento podem ser produzidas através da expressão e purificação de proteínas recombinantes, que é especialmente adequado para proteínas de fusão compreendendo um ligante peptídico. Os métodos para expressão e purificação de proteínas recombinantes são bem conhecidos e incluem aqueles descritos por Green e Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual [4th ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2012)], todo o conteúdo dos quais são incorporados neste documento por referência.

[00104] "Identidade" ou "porcentagem de identidade" é uma medida da extensão em que a sequência de dois ou mais ácidos nucleicos ou polipeptídeos é a mesma.

A porcentagem de identidade entre uma sequência de interesse A e uma segunda sequência B pode ser calculada alinhando as sequências, permitindo a introdução de lacunas para maximizar a identidade, determinando o número de resíduos (nucleotídeos ou aminoácidos) que são opostos a um resíduo idêntico, dividindo pelo mínimo de TGA e TGB (aqui TGA e TGB são a soma do número de resíduos e posições de lacuna interna nas sequências A e B no alinhamento) e multiplicando por 100. Ao calcular o número de resíduos idênticos necessários para atingir uma identidade percentual específica, as frações devem ser arredondadas para o número inteiro mais próximo.

As sequências podem ser alinhadas com o uso de uma variedade de programas de computador conhecidos na técnica.

Por exemplo, programas de computador, como BLAST2, BLASTN, BLASTP, Gapped BLAST, etc., podem ser usados para gerar alinhamentos e/ou para obter uma identidade percentual.

O algoritmo de Karlin e Altschul (Karlin e Altschul, Proc Natl Acad Sci USA, 87: 22264-2268, 1990) modificado como em Karlin e Altschul, Proc Natl Acad Sci USA, 90: 5873-5877, 1993 é incorporado no NBLAST e os programas XBLAST de Altschul et al. [Altschul, et al. (1990) J Mol Biol, 215: 403-410]. Para se obter os alinhamentos com intervalos para fins de comparação, o Gapped BLAST é utilizado conforme descrito em Altschul et al. [Altschul, et al. (1997) Nucleic Acids Res, 25: 3389- 3402]. Ao utilizar os programas BLAST e Gapped BLAST, os parâmetros padrão dos respectivos programas podem ser usados.

Consulte o site com URL www.ncbi.nlm.nih.gov e/ou McGinnis, S. e Madden, TL, W20 – W25 Nucleic Acids Research, 2004, Vol. 32, problema com o servidor web.

Outros programas adequados incluem CLUSTALW [Thompson, JD, Higgins, D.

G., and Gibson, T.

J. (1994) Nuc Acid Res, 22: 4673-4680], CLUSTAL Omega [Sievers, F., Wilm, A., Dineen, D., et al. (2011) Fast, scalable generation of high-quality protein multiple sequence alignments using Clustal Omega.

Mol Sys Biol, 7: doi:10.1038/msb.2011.75], and GAP (GCG Versão 9.1; que implementa o algoritmo Needleman & Wunsch, 1970 [Needleman, S. B. and Wunsch, C. D. (1970) J. Mol Biol, 48: 443- 453]). A identidade percentual pode ser avaliada em uma janela de avaliação. Em algumas modalidades, uma janela de avaliação pode ter um comprimento de pelo menos 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais, por exemplo, 100%, do comprimento da mais curta das sequências sendo comparadas. Em algumas modalidades, uma janela de avaliação é de pelo menos 100; 200; 300; 400; 500; 600; 700; 800; 900; 1.000; 1.200; 1.500; 2.000; 2.500; 3.000;

3.500; 4.000; 4.500; ou 5.000 aminoácidos. Em algumas modalidades, não mais do que 20%, 10%, 5% ou 1% das posições em qualquer sequência ou em ambas as sequências ao longo de uma janela de avaliação são ocupadas por um intervalo. Em algumas modalidades, não mais do que 20%, 10%, 5% ou 1% das posições em qualquer uma das sequências ou em ambas as sequências são ocupadas por um intervalo.

[00105] Uma "variante" de um polipeptídeo ou polinucleotídeo particular tem uma ou mais adições, substituições e/ou deleções em relação ao polipeptídeo ou polinucleotídeo, que pode ser referido como o "polipeptídeo original" ou "polinucleotídeo original", respectivamente. Uma adição pode ser uma inserção ou pode estar em qualquer um dos terminais. Uma variante pode ser mais curta ou mais longa do que o polipeptídeo ou polinucleotídeo original. O termo "variante" abrange "fragmentos". Um "fragmento" é uma porção contínua de um polipeptídeo ou polinucleotídeo que é mais curto do que o polipeptídeo original. Em algumas modalidades, uma variante compreende ou consiste em um fragmento. Em algumas modalidades, um fragmento ou variante é pelo menos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais do que o polipeptídeo ou polinucleotídeo original. Um fragmento pode ser um terminal N, terminal C ou fragmento interno. Em algumas modalidades, um polipeptídeo variante compreende ou consiste em pelo menos um domínio de um polipeptídeo original.

Em algumas modalidades, um polipeptídeo ou polinucleotídeo variante compreende ou consiste em um polipeptídeo ou polinucleotídeo que é pelo menos 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais idêntico em sequência ao polipeptídeo ou polinucleotídeo original.

Em algumas modalidades, um polipeptídeo ou polinucleotídeo variante compreende ou consiste em um polipeptídeo ou polinucleotídeo que está acima de pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% do polipeptídeo ou polinucleotídeo original.

Em algumas modalidades, a sequência de um polipeptídeo variante compreende ou consiste em uma sequência que tem N diferenças de aminoácidos em relação a uma sequência original, em que N é qualquer número inteiro até 1%, 2%, 5% ou 10% do número de aminoácidos no polipeptídeo original, onde uma "diferença de aminoácidos" se refere a uma substituição, inserção ou deleção de um aminoácido.

Em algumas modalidades, uma substituição é uma substituição conservativa.

As substituições conservativas de aminoácidos podem ser feitas, por exemplo, com base na semelhança em tamanho da cadeia, polaridade, carga, solubilidade, hidrofobicidade, hidrofilicidade e/ou na natureza anfipática dos resíduos envolvidos.

Em algumas modalidades, as substituições conservativas podem ser feitas de acordo com a Tabela A, em que os aminoácidos no mesmo bloco na segunda coluna e na mesma linha na terceira coluna podem ser substituídos uns pelos outros em uma substituição conservativa.

Certas substituições conservativas estão substituindo um aminoácido em uma linha da terceira coluna correspondente a um bloco na segunda coluna por um aminoácido de outra linha da terceira coluna dentro do mesmo bloco na segunda coluna.

TABELA A

GAP Não-polar

ILV

CSTM Alifático Polar (sem carga)

NQ

DE Polar (carregado)

KR Aromático HFYW

[00106] Em algumas modalidades, prolina (P), cisteína (C) ou ambas são consideradas como estando em um grupo individual. Dentro de um determinado grupo, certas substituições podem ser de particular interesse em certas modalidades, por exemplo, substituições de leucina por isoleucina (ou vice-versa), serina por treonina (ou vice-versa) ou alanina por glicina (ou vice-versa).

[00107] Em algumas modalidades, uma variante é uma variante biologicamente ativa, ou seja, a variante pelo menos em parte retém pelo menos uma atividade do polipeptídeo ou polinucleotídeo original. Em algumas modalidades, uma variante retém, pelo menos em parte, mais de uma ou substancialmente todas as atividades biologicamente significativas conhecidas do polipeptídeo ou polinucleotídeo original. Uma atividade pode ser, por exemplo, uma atividade catalítica, atividade de ligação, capacidade de realizar ou participar de uma estrutura ou processo biológico, etc. Em algumas modalidades, uma atividade de uma variante pode ser de pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou mais, da atividade do polipeptídeo ou polinucleotídeo original, até aproximadamente 100%, aproximadamente 125% ou aproximadamente 150% da atividade do polipeptídeo ou polinucleotídeo original, em várias modalidades. Em algumas modalidades, uma variante, por exemplo, uma variante biologicamente ativa, compreende ou consiste em um polipeptídeo pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% idêntico a um polipeptídeo original ou mais de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% ou 100% do polipeptídeo original. Em algumas modalidades, uma alteração, por exemplo, uma substituição ou exclusão, por exemplo, em uma variante funcional, não altera ou exclui um aminoácido ou nucleotídeo que é conhecido ou previsto como importante para uma atividade, por exemplo, um resíduo catalítico conhecido ou previsto ou resíduo envolvido na ligação de um substrato ou cofator. As variantes podem ser testadas em um ou mais ensaios adequados para avaliar a atividade.

[00108] O termo "molécula pequena", conforme usado neste documento, é uma molécula orgânica que tem menos do que cerca de 2 quilodaltons (kDa) em massa. Em algumas modalidades, a molécula pequena é inferior a cerca de 1,5 kDa ou inferior a cerca de 1 kDa. Em algumas modalidades, a molécula pequena tem menos do que cerca de 800 daltons (Da), 600 Da, 500 Da, 400 Da, 300 Da, 200 Da ou 100 Da. Frequentemente, uma pequena molécula tem uma massa de pelo menos 50 Da. Em algumas modalidades, uma pequena molécula não é polimérica. Em algumas modalidades, uma pequena molécula não é um aminoácido. Em algumas modalidades, uma molécula pequena não é um nucleotídeo. Em algumas modalidades, uma molécula pequena não é um sacarídeo. Em algumas modalidades, uma pequena molécula contém múltiplas ligações carbono-carbono e pode compreender um ou mais heteroátomos e/ou um ou mais grupos funcionais importantes para a interação estrutural com proteínas (por exemplo, ligação de hidrogênio), por exemplo, uma amina, carbonila, hidroxila, ou grupo carboxil e, em algumas modalidades, pelo menos dois grupos funcionais. Moléculas pequenas frequentemente compreendem uma ou mais estruturas de carbono cíclico ou heterocíclicas e/ou estruturas aromáticas ou poliaromáticas, opcionalmente substituídas com um ou mais dos grupos funcionais acima. Em certas modalidades, a molécula pequena é um agente terapeuticamente ativo tal como uma droga (por exemplo, uma molécula aprovada pela US Food and Drug Administration conforme previsto no Code of Federal Regulations (C.F.R.)). A molécula pequena também pode ser complexada com um ou mais átomos metálicos e/ou íons metálicos. Neste caso, a molécula pequena também é referida como uma "molécula organometálica pequena". As pequenas moléculas preferenciais são biologicamente ativas na medida em que produzem um efeito biológico em animais, de preferência mamíferos, mais preferencialmente seres humanos. Pequenas moléculas incluem, mas não estão limitadas a, radionuclídeos e agentes de imagem. Em certas modalidades, a molécula pequena é uma droga. De preferência, embora não necessariamente, a droga é uma que já foi considerada segura e eficaz para uso em seres humanos ou animais pela agência governamental apropriada ou órgão regulador. Por exemplo, os medicamentos aprovados para uso humano são listados pelo FDA sob 21 CFR §§ 330.5, 331 a 361 e 440 a 460, incorporados neste documento por referência. Todos os medicamentos listados são considerados aceitáveis para utilização de acordo com a presente invenção.

[00109] Os termos "composição" e "formulação" são usados indistintamente.

[00110] Os termos "administrar", "administrando" ou "administração" referem-se a implantação, absorção, ingestão, injeção, inalação ou outra forma de introdução de um composto aqui descrito, ou uma composição dele, em ou sobre um sujeito.

[00111] Um "sujeito" pode ser qualquer organismo vertebrado em várias modalidades. Um sujeito pode ser um indivíduo a quem um agente é administrado, por exemplo, para fins experimentais, diagnósticos e/ou terapêuticos ou de quem uma amostra é obtida ou em quem um procedimento é realizado. Em algumas modalidades, um sujeito é um mamífero, por exemplo, um humano, primata não humano ou roedor (por exemplo, camundongo, rato, coelho). As espécies de mamíferos que podem se beneficiar dos métodos de tratamento divulgados incluem, mas não estão limitados a, macacos, chimpanzés, orangotangos, humanos, macacos; animais domesticados, como cães, gatos; gado, como cavalos, gado, porcos, ovelhas, cabras, galinhas; e animais como camundongos, ratos, porquinhos-da-índia e hamsters. Em modalidades específicas, o sujeito é um ser humano. O ser humano pode ser de qualquer sexo e pode estar em qualquer estágio de desenvolvimento. Em certas modalidades, um sujeito foi diagnosticado com fibrose cística. Em certas modalidades, um sujeito foi diagnosticado com fibrose cística causada por uma mutação CFTR. Em certas modalidades, um sujeito foi diagnosticado com fibrose cística causada por uma mutação CFTR Phe508del.

[00112] Modelos animais de FC humano são conhecidos na técnica e são descritos neste documento. Ver, por exemplo, Exemplo 4. Ver também Grubb et al. (Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 290: L270 – L277, 2006); McCarron et al. (Respiratory Research 19:54, 2018); e Lavelle et al. (BioMed Research International Volume 2016, Artigo ID 5258727, 14 páginas), todo o conteúdo de cada um dos quais é incorporado neste documento por referência. Lavelle et al., Por exemplo, descreve modelos de FC de camundongo e porco.

[00113] "Tratar", "tratamento", "tratando" e termos semelhantes, conforme usados neste documento, no contexto de tratamento de um sujeito, referem-se a fornecer gerenciamento médico e/ou cirúrgico de um sujeito. O tratamento pode incluir, mas não está limitado a, a administração de um agente ou composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) a um sujeito. O termo "tratamento" ou qualquer variação gramatical do mesmo (por exemplo, tratar, tratando e tratamento, etc.), conforme usado neste documento, inclui, mas não está limitado a, aliviar um sintoma de uma doença ou condição; e/ou reduzindo, suprimindo, inibindo, diminuindo ou afetando a progressão, gravidade e/ou escopo de uma doença ou condição.O efeito do tratamento também pode incluir a redução da probabilidade de ocorrência ou recorrência da doença ou de um ou mais sintomas ou manifestações da doença. Um agente terapêutico pode ser administrado a um sujeito que tem uma doença ou está em risco aumentado de desenvolver uma doença em relação a um membro da população em geral. Em algumas modalidades, um agente terapêutico pode ser administrado a um sujeito que teve uma doença, mas não mostra mais evidências da doença. O agente pode ser administrado, por exemplo, para reduzir a probabilidade de recorrência de doença. Um agente terapêutico pode ser administrado profilaticamente, ou seja, antes do desenvolvimento de qualquer sintoma ou manifestação de uma doença.

[00114] "Tratamento profilático" refere-se a fornecer tratamento médico e/ou cirúrgico a um sujeito que não desenvolveu uma doença ou não mostra evidências de uma doença a fim de, por exemplo, reduzir a probabilidade de a doença ocorrer ou reduzir a gravidade de a doença se vir a ocorrer. O sujeito pode ter sido identificado como estando em risco de desenvolver a doença (por exemplo, em risco aumentado em relação à população em geral ou como tendo um fator de risco que aumenta a probabilidade de desenvolver a doença).

[00115] O termo "melhoria" ou qualquer variação gramatical do mesmo (por exemplo, melhorar, melhorar e melhorar, etc.), tal conforme usado neste documento, inclui, mas não está limitado a, atrasar o início ou reduzir a gravidade de uma doença ou condição (por exemplo, fibrose cística ou uma complicação da mesma). A melhoria, conforme usada neste documento, não requer a ausência completa de sintomas.

[00116] Os termos "condição", "doença" e "distúrbio" são usados de forma intercambiável.

[00117] Uma "quantidade eficaz" de um composto descrito neste documento refere-se a uma quantidade suficiente para provocar a resposta biológica desejada. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para aumentar o transporte de íons cloreto. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para modular (por exemplo, aumentar) a função da proteína reguladora da condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR) (por exemplo, CFTR de tipo selvagem ou CFTR mutante). Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para modular (por exemplo, aumentar) a função de CFTR Phe508del. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade suficiente para aumentar a translocação de CFTR do citoplasma para a membrana plasmática. Uma quantidade eficaz de um composto descrito neste documento pode variar dependendo de fatores tais como o desfecho biológico desejado, a farmacocinética do composto, a condição a ser tratada, o modo de administração e a idade e a saúde do sujeito. Em determinadas modalidades, uma quantidade eficaz é uma quantidade terapeuticamente eficaz. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é um tratamento profilático. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz é a quantidade de um composto descrito neste documento numa dose única. Em certas modalidades, uma quantidade eficaz são as quantidades combinadas de um composto descrito neste documento em doses múltiplas.

[00118] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto descrito neste documento é uma quantidade suficiente para fornecer um benefício terapêutico no tratamento de uma condição ou para atrasar ou minimizar um ou mais sintomas associados à condição. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto significa uma quantidade do agente terapêutico, sozinho ou em combinação com outras terapias, que fornece um benefício terapêutico no tratamento da condição.

O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" pode abranger uma quantidade que melhora a terapia geral, reduz ou evita sintomas, sinais ou causas da condição e/ou melhora a eficácia terapêutica de outro agente terapêutico. Em certas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para aumentar o transporte de íons de cloreto (por exemplo, aumentar a exportação de cloreto de uma célula epitelial). Em certas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para aumentar o transporte de água (por exemplo, aumentar a exportação de água de uma célula epitelial). Em certas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para modular (por exemplo, aumentar) a função da proteína reguladora da condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR) (por exemplo, CFTR de tipo selvagem ou CFTR mutante). Em certas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para modular (por exemplo, aumentar) a função de CFTR Phe508del. Em certas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para aumentar a translocação de CFTR do citoplasma para a membrana plasmática. Em certas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para o tratamento de uma doença pulmonar. Em certas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para o tratamento da fibrose cística.

[00119] Conforme usado neste documento, o termo "sal" refere- se a todos e quaisquer sais e abrange sais farmaceuticamente aceitáveis.

[00120] O termo "carreador" pode se referir a qualquer diluente, adjuvante, excipiente ou veículo com o qual uma composição da presente divulgação é administrada. Exemplos de carreadores farmacêuticos adequados são descritos em Remington's Essentials of Pharmaceuticals, 21st ed., Ed. Felton, 2012, que é incorporado neste documento por referência.

[00121] Diluentes exemplificativos incluem, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, fosfato de cálcio, fosfato de dicálcio, sulfato de cálcio, hidrogenofosfato de cálcio, lactose fosfato de sódio, sacarose, celulose, celulose microcristalina, caulino, manitol, sorbitol, inositol, cloreto de sódio, amido seco, amido de milho, açúcar em pó, e misturas dos mesmos.

[00122] Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis usados na fabricação de composições farmacêuticas fornecidas incluem, diluentes inertes, agentes dispersantes e/ou de granulação, agentes surfactantes e/ou emulsionantes, agentes desintegrantes, agentes aglutinantes, conservantes, agentes de tamponamento, agentes lubrificantes e/ou óleos. Excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras de supositório, agentes corantes, agentes de revestimento, edulcorantes, aromatizantes e agentes perfumantes também podem estar presentes na composição. A quantidade exata de um composto compreendendo aminoácidos para alcançar uma quantidade eficaz varia de sujeito para sujeito, dependendo, por exemplo, da espécie, idade e condição geral de um sujeito, gravidade dos efeitos colaterais ou do distúrbio, identidade do composto específico, modo de administração e semelhantes. Uma quantidade eficaz pode ser incluída numa dose única (por exemplo, dose oral única) ou doses múltiplas (por exemplo, doses orais múltiplas). Em certas modalidades, quando doses múltiplas são administradas a um sujeito ou aplicadas a um tecido ou célula, quaisquer duas doses das doses múltiplas incluem quantidades diferentes ou substancialmente as mesmas de um composto descrito neste documento. Em certas modalidades, quando doses múltiplas são administradas a um sujeito ou aplicadas a um tecido ou célula, a frequência de administração de doses múltiplas ao sujeito ou aplicação de doses múltiplas ao tecido ou célula é de três doses por dia, duas doses por dia, uma dose por dia, uma dose a cada dois dias, uma dose a cada três dias,

uma dose a cada semana, uma dose a cada duas semanas, uma dose a cada três semanas ou uma dose a cada quatro semanas.

Em certas modalidades, a frequência de administração das doses múltiplas ao sujeito ou aplicação das doses múltiplas ao tecido ou célula é uma dose por dia.

Em certas modalidades, a frequência de administração das doses múltiplas ao sujeito ou aplicação das doses múltiplas ao tecido ou célula é de duas doses por dia.

Em certas modalidades, a frequência de administração das doses múltiplas ao sujeito ou aplicação das doses múltiplas ao tecido ou célula é de três doses por dia.

Em certas modalidades, quando doses múltiplas são administradas a um sujeito ou aplicadas a um tecido ou célula, a duração entre a primeira dose e a última dose das doses múltiplas é um dia, dois dias, quatro dias, uma semana, duas semanas, três semanas, um mês, dois meses, três meses, quatro meses, seis meses, nove meses, um ano, dois anos, três anos, quatro anos, cinco anos, sete anos, dez anos, quinze anos, vinte anos ou toda a vida do sujeito, tecido ou célula.

Em certas modalidades, a duração entre a primeira dose e a última dose das doses múltiplas é de três meses, seis meses ou um ano.

Em certas modalidades, a duração entre a primeira dose e a última dose das doses múltiplas é a vida do sujeito, tecido ou célula.

Em certas modalidades, uma dose (por exemplo, uma dose única ou qualquer dose de doses múltiplas) aqui descrita inclui independentemente entre 0,1 µg e 1 µg, entre 0,001 mg e 0,01 mg, entre 0,01 mg e 0,1 mg, entre 0,1 mg e 1 mg, entre 1 mg e 3 mg, entre 3 mg e 10 mg, entre 10 mg e 30 mg, entre 30 mg e 100 mg, entre 100 mg e 300 mg, entre 300 mg e 1.000 mg, ou entre 1 g e 10 g, inclusive, de uma composição compreendendo os aminoácidos descritos neste documento.

Em certas modalidades, uma dose descrita neste documento inclui independentemente entre 1 mg e 3 mg, inclusive, de uma composição que compreende os aminoácidos descritos neste documento.

Em certas modalidades, uma dose descrita neste documento inclui independentemente entre 3 mg e 10 mg, inclusive, de uma composição que compreende os aminoácidos descritos neste documento. Em certas modalidades, uma dose descrita neste documento inclui independentemente entre 10 mg e 30 mg, inclusive, de uma composição que compreende os aminoácidos descritos neste documento. Em certas modalidades, uma dose descrita neste documento inclui independentemente entre 30 mg e 100 mg, inclusive, de uma composição que compreende os aminoácidos descritos neste documento.

[00123] As faixas de dose conforme descritas neste documento fornecem orientação para a administração de composições farmacêuticas fornecidas a um adulto. A quantidade a ser administrada, por exemplo, a uma criança ou a um adolescente, pode ser determinada por um médico ou pessoa versada na técnica e pode ser inferior ou igual à administrada a um adulto.

[00124] A composição pode ser administrada simultaneamente com, antes de ou subsequentemente a um ou mais agentes farmacêuticos ou agentes terapêuticos adicionais, que podem ser úteis como, por exemplo, terapias combinadas. Os agentes farmacêuticos incluem agentes terapeuticamente ativos. Os agentes farmacêuticos também incluem agentes profilaticamente ativos. Os agentes farmacêuticos incluem pequenas moléculas orgânicas, tais como compostos de drogas (por exemplo, compostos aprovados pela Food and Drug Administration dos EUA, conforme fornecido no Code of Federal Regulations (CFR)), peptídeos, proteínas, carboidratos, monossacarídeos, oligossacarídeos, polissacarídeos, nucleoproteínas, mucoproteínas, lipoproteínas, polipeptídeos ou proteínas sintéticas, pequenas moléculas ligadas a proteínas, glicoproteínas, esteroides, ácidos nucleicos, DNAs, RNAs, nucleotídeos, nucleosídeos, oligonucleotídeos, oligonucleotídeos antisense, lipídios, hormônios, vitaminas e células. Em certas modalidades, o agente farmacêutico adicional é um agente farmacêutico útil para tratar e/ou prevenir uma doença (por exemplo, doença proliferativa, doença pulmonar, doença gastrointestinal, doença hematológica, doença neurológica, condição dolorosa, distúrbio psiquiátrico ou distúrbio metabólico). Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente útil para o tratamento de uma doença pulmonar.

[00125] Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente útil para o tratamento da fibrose cística. Em certas modalidades, um agente útil para o tratamento da fibrose cística pode serivacaftor (KALYDECO®), lumacaftor (ORKAMBI®), atalureno ou tezacaftor. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é ivacaftor. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é lumacaftor. Em certas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente útil para o tratamento da fibrose cística, gerenciamento dos sintomas associados à fibrose cística ou para o tratamento de doenças ou infecções que ocorrem simultaneamente com a fibrose cística (por exemplo, infecção bacteriana, infecção viral, bronquiolite, asma, etc.). Terapêutica adicional útil para os fins desta divulgação inclui, mas não está limitada a, dornase alfa sistêmica (Pulmozyme), azitromicina (por exemplo, Zithromax, Zmax), aztreonam (Cayston, Azactam), tobramicina (por exemplo, TOBI®, Nebcin, Bethkis, Kitabis Pak, TOBI Podhaler), Amikin, pancrelipase (Creon, Zenpep, Pancreaze, Viokase, Pertzye, Ultresa, Pangestyme EC, Panocaps), gentamicina (Garamycin) e pancreatina. Cada agente farmacêutico adicional pode ser administrado a uma dose e/ou em um período determinado para esse agente farmacêutico. Os agentes farmacêuticos adicionais também podem ser administrados junto uns com os outros e/ou com o composto ou composição descritos neste documento em uma dose única ou administrados separadamente em doses diferentes. A combinação específica a se empregar em um regime levará em conta a compatibilidade do composto descrito neste documento com os agentes farmacêuticos adicionais e/ou o efeito terapêutico e/ou profilático desejado a ser alcançado. Em geral, espera-se que os agentes farmacêuticos adicionais em combinação sejam utilizados em níveis que não excedam os níveis em que são utilizados individualmente. Em algumas modalidades, os níveis utilizados na combinação serão mais baixos do que os utilizados individualmente. Em certas modalidades, os compostos descritos neste documento ou composições farmacêuticas podem ser administrados em combinação com uma terapia anticâncer, incluindo, mas não se limitando a, cirurgia, radioterapia, transplante (por exemplo, transplante de células- tronco, transplante de medula óssea), imunoterapia e quimioterapia.

[00126] O termo "doença do pulmão" ou "doença pulmonar" refere-se a uma doença do pulmão. Exemplos de doenças pulmonares incluem, mas não estão limitados a, fibrose cística e condições associadas a elas, incluindo: bronquiectasia, bronquite, asma (por exemplo, asma intermitente, asma persistente leve, asma persistente moderada, asma persistente grave), bronquite crônica e pulmonar fibrose.

[00127] A presente divulgação também abrange kits (por exemplo, embalagens farmacêuticas). Os kits fornecidos podem compreender uma composição ou composto farmacêutico da invenção e um recipiente (por exemplo, um frasco, uma ampola, uma garrafa, uma seringa e/ou uma embalagem de distribuição ou outro recipiente adequado). Em algumas modalidades, kits fornecidos podem incluir ainda, opcionalmente, um segundo recipiente compreendendo um excipiente farmacêutico para diluição ou suspensão de uma composição ou composto farmacêutico descrito neste documento. Em algumas modalidades, a composição ou composto farmacêutico descrito neste documento fornecido no primeiro recipiente e o segundo recipiente são combinados para formar uma forma de dosagem unitária. Em certas modalidades, um kit descrito neste documento inclui ainda instruções para o uso do kit.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE DETERMINADAS MODALIDADES

[00128] A FC é a doença genética recessiva letal mais comum entre indivíduos de origem europeia, afetando entre 1 em 2.500 a 1 em 3.500 recém- nascidos a cada ano. A FC é causada por mutações no gene regulador da condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR) que resultam na redução ou falta da síntese de CFTR, dobramento incorreto da proteína e/ou disfunção do canal, o que leva à diminuição da secreção de cloreto, aumento da absorção de sódio (ENaC) e prejuízo na homeostase de fluidos nas células epiteliais das vias aéreas, intestinais e do pâncreas. O gene CFTR é expresso em vários tecidos. A FC é caracterizada por uma patologia multissistêmica que inclui os sistemas respiratório, gastrointestinal, pancreático e hepatobiliar. A morbidade e mortalidade primária estão relacionadas à infecção pulmonar crônica e inflamação.

[00129] As mutações de FC são classificadas como: Classe I (22%) = sem expressão de CFTR; Classe II (88%) = proteína CFTR mal dobrada; Classe III (6%) = canal CFTR não abre; Classe IV (6%) = canal CFTR defeituoso; Classe V (5%) = pouco CFTR. As mutações também podem abranger mais de uma categoria. Drogas como o lumacaftor são usadas para tratar mutações de Classe II (dobramento); drogas como tezacaftor ou ivacaftor são 'potenciadores' que são usados para tratar mutações de Classe III-V.

[00130] Avanços recentes na terapia de FC usando pequenas moléculas que ativam seletivamente a atividade de CFTR ou corrigem o dobramento incorreto da proteína mostraram sucesso limitado no que diz respeito ao tratamento de sujeitos com a mutação CFTRΔF508. Os presentes inventores identificaram combinações de aminoácidos (AA) selecionadas que podem estimular a secreção de cloreto e reduzir a atividade de ENaC, aumentando assim a atividade do canal de cloreto apical e diminuindo a absorção de sódio na membrana apical. Consequentemente, as combinações selecionadas de AA e composições dos mesmos são apresentadas como agentes terapêuticos para o tratamento de sujeitos que sofrem de FC sozinha e em combinação com outros agentes terapêuticos de FC, como, por exemplo, lumacaftor, tezacaftor e/ou ivacaftor. Também é englobado neste documento o uso das combinações AA selecionadas para o tratamento de FC ou na preparação de medicamentos para o tratamento de FC, em que o uso é sozinho e/ou em combinação com outros agentes terapêuticos de FC, tais como, por exemplo, lumacaftor, tezacaftor e/ou ivacaftor.

[00131] Como aqui descrito, os presentes inventores compararam experimentalmente células epiteliais brônquicas humanas normais primárias totalmente diferenciadas com células epiteliais brônquicas humanas homozigóticas CFTR∆F508 (mutação de Classe II). Resumidamente, a corrente transepitelial de curto-circuito (Isc), a resistência (R) e os fluxos 22 36 unidirecionais (Jms & Jsm) e fluxos líquidos (Jnet) de Na e Cl foram medidos em câmaras Ussing. Quando as células FC foram estimuladas com forscolina e GLPG1837 (potenciador alternativo ao ivacaftor) na ausência (controle) ou presença de CF-5AA-3 (formulação de aminoácido para o tratamento de FC), pico de corrente (FIG. 7E) e secreção de cloreto (FIG. 7F) foram significativamente melhorados na presença de CF-5AA-3 (também referido neste documento como CF5AA-3). Para obter detalhes adicionais do estudo, consulte o Exemplo 2 abaixo.

[00132] Os resultados apresentados, por exemplo, nas FIGs. 5-9 demonstram que combinações de aminoácidos selecionadas (por exemplo, CF- 5AA-3) melhoram a atividade disfuncional do cloreto e do canal de sódio em células epiteliais brônquicas humanas normais primárias totalmente diferenciadas CFTRΔF508 (HBEC), que são homozigotos para CFTRΔF508, corrigindo e/ou modificar a função do canal da membrana plasmática. Consequentemente, formulações de aminoácidos selecionadas (por exemplo, CF-5AA-3) são propostas para complementar o padrão existente de tratamento em pacientes com a mutação CFTRΔF508.

[00133] Na presença de corretores (C18; VX661, tezacaftor) e potenciador (GLPG1837, alternativa ao ivacaftor), as correntes de pico mais que dobraram da linha de base, mas permaneceram abaixo da corrente de pico basal CF-5AA-3 quando usadas sozinhas. A adição do mesmo coquetel triplo ao CF-5AA-3 aumentou a corrente em outros 26% em relação ao CF-5AA-3 sozinho (FIG. 10A e FIG. 10B).

[00134] Além disso, foi ainda demonstrado que o fluxo de cloreto foi dramaticamente aumentado por CF-5AA-3 em comparação com o coquetel triplo (FIG. 11) devido a efeitos diretos em ambos os canais CFTR e ANO1. CF-5AA-3 exibiu apenas um efeito menor no ENaC. Para obter detalhes adicionais do estudo, consulte o Exemplo 2 abaixo.

[00135] Em resumo, a pesquisa eletrofisiológica in vitro usando células epiteliais brônquicas humanas primárias com a mutação CFTR∆F508 (Classe II) mostra que CF-5AA-3 sozinho aumenta quantitativamente a secreção de cloreto (fluxo negativo) em células brônquicas humanas F508del de forma semelhante aos corretores comuns e os potenciadores [coluna AA DMSO BASAL vs. coluna C18 + GLPG] e CF-5AA-3 em combinação com um corretor comumente usado (C18) e potenciador (GLPG) duplica a secreção de cloreto (fluxo negativo) quando comparado ao corretor e potenciador sozinho.

[00136] Os resultados apresentados neste documento indicam que canais adicionais de cloreto também podem estar ativos (por exemplo, SLC26A9) em HBEC. A ativação de canais de cloreto diferentes de CFTR sugere que CF-5AA-3 pode fornecer alívio a todas as 5 classes de mutações de FC induzindo a secreção de cloreto por meios independentes de CFTR. Isso é particularmente notável no que diz respeito a indivíduos com mutações CFTR Classe I para os quais atualmente não há drogas. Composições compreendendo aminoácidos que aumentam a translocação de CFTR para a membrana plasmática

[00137] As composições fornecidas neste documento aumentam a translocação de proteínas CFTR de tipo selvagem e mutantes do citoplasma para a membrana plasmática. Em particular, as composições descritas neste documento são particularmente eficazes no aumento do número de proteínas CFTR Phe508del na membrana plasmática, levando a mais íon cloreto e secreção de água das células epiteliais para combater a formação de muco espesso, uma marca registrada da fibrose cística.

[00138] Em um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em certas modalidades, a composição consiste essencialmente em, ou consiste apenas nos aminoácidos livres especificados e nenhum outro aminoácido livre, ou uma quantidade insignificante de outros aminoácidos livres. As composições incluem, em certas modalidades, derivados dos aminoácidos que são derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais". As composições incluem, em certas modalidades, sais e/ou pró- drogas dos aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste ainda em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em ainda outro aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em dois ou mais, três ou mais, quatro ou mais ou todos os cinco aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em ainda outro aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em aminoácidos livres cisteína e prolina e pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado dentre glicina, tirosina e/ou lisina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis.

[00139] Em um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre treonina e lisina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres treonina e lisina. Em certas modalidades, a composição consiste essencialmente em, ou consiste apenas nos aminoácidos livres especificados e nenhum outro aminoácido livre, ou uma quantidade insignificante de outros aminoácidos livres. As composições incluem, em certas modalidades, derivados dos aminoácidos que são derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais". As composições incluem, em certas modalidades, sais e/ou pró-drogas dos aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres treonina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste ainda em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre treonina e lisina.

[00140] Em um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina e valina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de cisteína, prolina e valina. Em certas modalidades, a composição consiste essencialmente em, ou consiste apenas nos aminoácidos livres especificados e nenhum outro aminoácido livre, ou uma quantidade insignificante de outros aminoácidos livres. As composições incluem, em certas modalidades, derivados dos aminoácidos que são derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais". As composições incluem, em certas modalidades, sais e/ou pró-drogas dos aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de cisteína, prolina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste ainda em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina e valina. Em ainda outro aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em dois ou mais ou todos os três aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina e valina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis.

[00141] Em um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina e valina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de cisteína, prolina, glicina e valina. Em certas modalidades, a composição consiste essencialmente em, ou consiste apenas nos aminoácidos livres especificados e nenhum outro aminoácido livre, ou uma quantidade insignificante de outros aminoácidos livres. As composições incluem, em certas modalidades, derivados dos aminoácidos que são derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais". As composições incluem, em certas modalidades, sais e/ou pró- drogas dos aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de cisteína, prolina, glicina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste ainda em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina e valina. Em ainda outro aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em dois ou mais ou todos os todos os quatro aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina e valina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis.

[00142] Em um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, valina e tirosina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de cisteína, prolina, valina e tirosina. Em certas modalidades, a composição consiste essencialmente em, ou consiste apenas nos aminoácidos livres especificados e nenhum outro aminoácido livre, ou uma quantidade insignificante de outros aminoácidos livres. As composições incluem, em certas modalidades, derivados dos aminoácidos que são derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais". As composições incluem, em certas modalidades, sais e/ou pró- drogas dos aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de cisteína, prolina, valina e tirosina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste ainda em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, valina e tirosina. Em ainda outro aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em dois ou mais,

três ou mais ou todos os quatro aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, valina e tirosina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis.

[00143] Em um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina e lisina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de glicina, leucina e lisina. Em certas modalidades, a composição consiste essencialmente em, ou consiste apenas nos aminoácidos livres especificados e nenhum outro aminoácido livre, ou uma quantidade insignificante de outros aminoácidos livres. As composições incluem, em certas modalidades, derivados dos aminoácidos que são derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais". As composições incluem, em certas modalidades, sais e/ou pró-drogas dos aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos livres de glicina, leucina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste ainda em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina e lisina. Em ainda um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em dois ou mais, ou todos os aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina e lisina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis.

[00144] Em um aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina. Em certas modalidades, a composição consiste essencialmente em, ou consiste apenas nos aminoácidos livres especificados e nenhum outro aminoácido livre, ou uma quantidade insignificante de outros aminoácidos livres. As composições incluem, em certas modalidades, derivados dos aminoácidos que são derivados de aminoácidos "naturais" ou "não naturais". As composições incluem, em certas modalidades, sais e/ou pró-drogas dos aminoácidos. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste ainda em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina. Em ainda outro aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em dois ou mais, três ou mais, quatro ou mais, cinco ou mais ou todos os seis aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina; e opcionalmente, carreadores, tampões, eletrólitos, adjuvantes, excipientes e/ou um agente terapêutico adicional farmaceuticamente aceitáveis.

[00145] Exemplos não limitativos de composições compreendendo aminoácidos que aumentam a translocação de CFTR para a membrana plasmática são fornecidos na Tabela B abaixo.

TABELA B: COMPOSIÇÕES QUE COMPREENDEM AMINOÁCIDOS Nome da Aminoácidos Composição CF2AA Treonina, lisina CF3AA-2 Cisteína, prolina, valina CF4AA Cisteína, prolina, glicina, valina CF4AA-2 Cisteína, prolina, valina, tirosina CF5AA-3 Cistina, prolina, glicina, tirosina, lisina CF4AA-3 Histidina, triptofano, ácido aspártico, fenilalanina CF3AA Glicina, leucina, lisina CF4AA-4 Cisteína, prolina, glicina, lisina CF6AA-3 Glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina, isoleucina

[00146] Cada um dos aminoácidos livres, se presente na composição, pode estar presente, por exemplo, nas seguintes concentrações: prolina em cerca de 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, cerca de 0,9 a cerca de 1,1 gramas/litro, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; ácido glutâmico em cerca de 0,7 a cerca de 1,7, cerca de 0,9 a cerca de 1,5, cerca de 1,1 a cerca de 1,3 gramas/litro, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; glutamina em cerca de 0,6 a cerca de 1,6, cerca de 0,8 a cerca de 1,4, cerca de 1,0 a cerca de 1,2 gramas/litro, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; leucina em cerca de 0,05 a cerca de 0,4, cerca de 0,1 a cerca de 0,3 gramas/litro, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; alanina por volta de 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, a cerca de 1,1 a cerca de 2,1, cerca de 1,3 a cerca de 1,9, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; ácido aspártico em cerca de 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, em cerca de 1,1 a cerca de 2,1, cerca de 1,3 a cerca de 1,9, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; fenilalanina de 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, de cerca de 1,1 a cerca de 2,1, cerca de 1,3 a cerca de 1,9, ou cerca de 1,5 a cerca de

1,7 gramas/litro; histidina em 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, em cerca de 1,1 a cerca de 2,1, cerca de 1,3 a cerca de 1,9, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; treonina em cerca de 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, cerca de 0,9 a cerca de 1,1 gramas/litro, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; isoleucina de 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, a cerca de 1,1 a cerca de 2,1, cerca de 1,3 a cerca de 1,9 ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; asparagina em 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, em cerca de 1,1 a cerca de 2,1, cerca de 1,3 a cerca de 1,9, ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro; triptofano de 0,4 a cerca de 1,5, cerca de 0,7 a cerca de 1,3, a cerca de 1,1 a cerca de 2,1, cerca de 1,3 a cerca de 1,9 ou cerca de 1,5 a cerca de 1,7 gramas/litro.

[00147] Em certas modalidades, os aminoácidos da composição são aminoácidos livres. Em certas modalidades, os aminoácidos da composição são L-aminoácidos. Em certas modalidades, os aminoácidos da composição são D-aminoácidos. Em certas modalidades, os aminoácidos da composição são uma combinação de D e L-aminoácidos.

[00148] Em certas modalidades, os aminoácidos das composições descritas neste documento podem ser pró-drogas dos aminoácidos livres. O termo "pró-drogas" refere-se a compostos que têm grupos cliváveis e se tornam, através de solvólise ou sob condições fisiológicas, os compostos descritos neste documento, os quais são farmaceuticamente ativos in vivo.

[00149] Em certas modalidades, os aminoácidos das composições descritas neste documento podem ser sais de aminoácidos (ou seja, sais de aminoácidos). Os aminoácidos podem estar na forma de sal com cátions (por exemplo, sais de aminoácidos com cadeias laterais carregadas negativamente em solução (por exemplo, glutamato e aspartato)), ânions (sais de aminoácidos com cadeias laterais carregadas positivamente em solução (por exemplo, lisina, arginina, histidina)) e compostos inorgânicos. Sais de aminoácidos exemplificativos estão listados em Fleck M e Petrosyan AM, Salts of Amino Acids, 1st Ed; Springer International Publishing, 2014, que é incorporado por referência neste documento.

[00150] Em certas modalidades, a composição compreende ainda água.

[00151] Em certas modalidades, a composição compreende ainda um tampão. Agentes tamponantes exemplificativos incluem soluções tampão de citrato, soluções tampão de acetato, soluções tampão de fosfato, cloreto de amônio, carbonato de cálcio, cloreto de cálcio, citrato de cálcio, glubionato de cálcio, gluceptato de cálcio, gluconato de cálcio, D- ácido glucônico, glicerofosfato de cálcio, lactato de cálcio, ácido propanoico, levulinato de cálcio, ácido pentanoico, fosfato de cálcio dibásico, ácido fosfórico, fosfato de cálcio tribásico, fosfato de hidróxido de cálcio, acetato de potássio, cloreto de potássio, gluconato de potássio, misturas de potássio, fosfato de potássio dibásico, fosfato de potássio monobásico, misturas de fosfato de potássio, acetato de sódio, bicarbonato de sódio, cloreto de sódio, citrato de sódio, lactato de sódio, fosfato de sódio dibásico, fosfato de sódio monobásico, misturas de fosfato de sódio, trometamina, hidróxido de magnésio, hidróxido de alumínio, ácido algínico, água sem pirogênio, solução salina isotônica, acetato de Ringer, álcool etílico, e misturas destes.

[00152] Em certas modalidades, íons fosfato, como H2PO4-, HPO42-, e PO43-, are usados para tamponar a composição da presente invenção. Em certas modalidades, a composição terapêutica usa HCO3- ou CO32- como tampão. Em outras modalidades, a composição terapêutica não usa HCO3- ou CO32- como tampão.

[00153] Em certas modalidades, a composição compreende um ou mais eletrólitos selecionados de, por exemplo, Na+; K+; HCO3-; CO32-; Ca2+; Mg2+; Fe2+; Cl-; íons fosfato, tais como H2PO4-, HPO42- e PO43-; zinco; iodo; cobre; ferro; selênio; cromo; e molibdênio. Em uma modalidade alternativa, a composição não contém HCO3- ou CO32-. Em outra modalidade alternativa, a composição compreende HCO3- e CO32- e um total inferior a 5 mg/1 ou concentrações inferiores a 5 mg/1. Em certas modalidades, a composição não contém eletrólitos. Em certas modalidades, a composição não contém carboidratos (por exemplo, di-, oligo- ou polissacarídeos). Em certas modalidades alternativas, a composição não compreende um ou mais, ou qualquer um dos Na+; K+; HCO3-; CO32-; Ca2+; Mg2+; Fe2; Cl-; íons fosfato, como H2PO4-, HPO42-, e PO43-; zinco; iodo; cobre; ferro; selênio; cromo; e molibdênio.

[00154] Em certas modalidades, a composição compreende ainda açúcares, vitaminas, eletrólitos, minerais, proteínas ou lipídios. Em certas modalidades, a composição compreende ainda açúcares. Em certas modalidades, a composição compreende ainda vitaminas. Em certas modalidades, a composição compreende ainda eletrólitos. Em certas modalidades, a composição compreende ainda minerais. Em certas modalidades, a composição compreende ainda proteínas. Em certas modalidades, a composição compreende ainda lipídios.

[00155] Em certas modalidades, a composição não contém um ou mais dos ingredientes selecionados dentre oligo-, polissacarídeos e carboidratos; oligo-, ou polipeptídeos ou proteínas; lipídios; ácidos graxos de cadeia pequena, média e/ou longa; e/ou alimentos contendo um ou mais nutrientes mencionados acima.

[00156] A composição pode ter um pH variando de cerca de 2,5 a cerca de 8,5. Em certas modalidades, o pH da composição varia de cerca de 2,5 a cerca de 6,5, cerca de 3,0 a cerca de 6,0, cerca de 3,5 a cerca de 5,5, cerca de 3,9 a cerca de 5,0 ou cerca de 4,2 a cerca de 4,6. Em outras modalidades, o pH da composição varia de cerca de 6,5 a cerca de 8,5, cerca de 7,0 a cerca de 8,0 ou cerca de 7,2 a cerca de 7,8. Em certas modalidades, a composição tem um pH de, por exemplo, cerca de 2,5 a cerca de 8,5. Em certas modalidades, a composição tem um pH de cerca de 2,5 a cerca de 6,5, cerca de 2,5 a cerca de 6,0, cerca de 3,0 a cerca de 6,0, cerca de 3,5 a cerca de 6,0, cerca de 3,9 a cerca de 6,0, cerca de 4,2 a cerca de 6,0, cerca de 3,5 a cerca de 5,5, cerca de 3,9 a cerca de 5,0 ou cerca de 4,2 a cerca de 4,6. Em outras modalidades, o pH é de cerca de 6,5 a cerca de 8,5, cerca de 7,0 a cerca de 8,5, cerca de 7,0 a cerca de 8,0, cerca de 7,2 a cerca de 8,0 ou cerca de 7,2 a cerca de 7,8. Em certas modalidades, o pH é de cerca de 7,3 a cerca de 7,5. Em certas modalidades, o pH é de cerca de 7,3 a cerca de 7,4. Em certas modalidades, o pH é de cerca de 7,4 a cerca de 7,5. Em certas modalidades, o pH é cerca de 7,4.

[00157] Em certas modalidades, a osmolaridade total da composição é de cerca de 100 mosm a 280 mosm, ou qualquer valor entre eles. Em certas modalidades, a osmolaridade total é de cerca de 150 msom a 260 mosm. Em outra modalidade, a composição tem uma osmolaridade total que é qualquer valor inferior a 280 mosm.

[00158] Em certas modalidades, a composição é esterilizada.

[00159] Composições farmacêuticas descritas neste documento podem ser preparadas por qualquer método conhecido na técnica da farmacologia. Em geral, tais métodos preparatórios incluem trazer compostos das composições descritas neste documento (ou seja, o(s) aminoácido(s) livre(s)) em associação com um carreador ou excipiente e/ou um ou mais outros ingredientes acessórios e, então, se necessário e/ou desejável, moldar e/ou embalar o produto em uma unidade de dose única ou múltipla desejada.

[00160] As quantidades relativas do(s) ingrediente(s) ativo(s), excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou de quaisquer ingredientes adicionais numa composição farmacêutica descrita neste documento vão variar, dependendo da identidade, tamanho e/ou estado do sujeito tratado e ainda dependendo da via pela qual a composição será administrada. A composição pode compreender entre 0,1% e 100% (em p/p) de ingrediente ativo.

[00161] Um composto ou composição, conforme descrito neste documento, pode ser administrado em combinação com um ou mais agentes farmacêuticos adicionais (por exemplo, agentes terapeuticamente e/ou profilaticamente ativos). Os compostos ou composições podem ser administrados em combinação com agentes farmacêuticos adicionais que melhoram sua atividade (por exemplo, atividade (por exemplo, potência e/ou eficácia) no tratamento de uma doença em um sujeito em necessidade do mesmo, na prevenção de uma doença em um sujeito em necessidade do mesmo, na redução do risco de desenvolver uma doença em um sujeito em necessidade do mesmo e/ou no aumento da atividade de CFTR em um sujeito ou célula), melhorar a biodisponibilidade, melhorar a segurança, reduzir a resistência ao medicamento, reduzir e/ou modificar o metabolismo, inibir a excreção e/ou modificar a distribuição em um sujeito ou célula. Também será apreciado que a terapia empregada pode alcançar um efeito desejado para o mesmo distúrbio e/ou pode alcançar efeitos diferentes. Em certas modalidades, uma composição farmacêutica descrita neste documento, incluindo um composto descrito neste documento e um agente farmacêutico adicional, mostra um efeito sinérgico que está ausente em uma composição farmacêutica, incluindo um dentre o composto e o agente farmacêutico adicional, mas não ambos.

[00162] As composições descritas neste documento podem ser administradas concomitantemente com, antes ou após um ou mais agentes farmacêuticos ou agentes terapêuticos adicionais, que são diferentes do composto ou composição e podem ser úteis como, por exemplo, terapias de combinação.

Os agentes farmacêuticos incluem agentes terapeuticamente ativos.

Os agentes farmacêuticos também incluem agentes profilaticamente ativos.

Os agentes farmacêuticos incluem pequenas moléculas orgânicas, tais como compostos de drogas (por exemplo, compostos aprovados pela Food and Drug Administration dos EUA, conforme fornecido no Code of Federal Regulations (CFR)), peptídeos, proteínas, carboidratos, monossacarídeos, oligossacarídeos, polissacarídeos, nucleoproteínas, mucoproteínas, lipoproteínas, polipeptídeos ou proteínas sintéticas, pequenas moléculas ligadas a proteínas, glicoproteínas, esteroides, ácidos nucleicos, DNAs, RNAs, nucleotídeos, nucleosídeos, oligonucleotídeos, oligonucleotídeos antisense, lipídios, hormônios, vitaminas e células.

Em certas modalidades, o agente farmacêutico adicional é um agente farmacêutico útil para tratar e/ou prevenir uma doença (por exemplo, doença proliferativa, doença hematológica, doença neurológica, condição dolorosa, distúrbio psiquiátrico, doença pulmonar ou distúrbio metabólico). Em certas modalidades, o agente farmacêutico adicional é útil para o tratamento de uma doença pulmonar.

Em certas modalidades, o agente farmacêutico adicional é útil para o tratamento da fibrose cística.

Cada agente farmacêutico adicional pode ser administrado a uma dose e/ou em um período determinado para esse agente farmacêutico.

Os agentes farmacêuticos adicionais também podem ser administrados junto uns com os outros e/ou com o composto ou composição descritos neste documento em uma dose única ou administrados separadamente em doses diferentes.

A combinação específica a se empregar em um regime levará em conta a compatibilidade do composto descrito neste documento com os agentes farmacêuticos adicionais e/ou o efeito terapêutico e/ou profilático desejado a ser alcançado. Em geral, espera-se que os agentes farmacêuticos adicionais em combinação sejam utilizados em níveis que não excedam os níveis em que são utilizados individualmente. Em algumas modalidades, os níveis utilizados na combinação serão mais baixos do que os utilizados individualmente.

[00163] Em certas modalidades, as composições são administradas simultaneamente com, antes ou após um ou mais agentes terapêuticos adicionais, em que o agente terapêutico adicional é um potenciador, corretor ou agente de leitura CFTR. Um "potenciador CFTR" é um composto que aumenta a função de um CFTR na membrana plasmática de uma célula. Estes compostos podem ser úteis para o tratamento de mutações de fibrose cística que resultam em proteínas CFTR que são corretamente trafegadas para a membrana plasmática, mas não funcionam corretamente (por exemplo, o canal de entrada é defeituoso, a ligação de ATP é reduzida ou anulada e/ou o transporte de cloreto é reduzido). Em certas modalidades, o potenciador CFTR é ivacaftor (VX-770, KALYDECO®). Um "corretor CFTR" é um composto que melhora o processamento intracelular e a translocação do CFTR mutante, permitindo que mais proteína alcance a membrana plasmática. Em certas modalidades, o corretor CFTR é lumacaftor (VX-809, ORKAMBI®). Em certas modalidades, o corretor CFTR é tezacaftor (VX-661). Um "agente de leitura CFTR" é um composto que promove a transcrição na presença de uma mutação no códon de terminação prematura (PTC) resultante de uma mutação pontual na sequência do gene CFTR.

[00164] Normalmente, o PTC resultaria em uma proteína CFTR truncada que não é adequadamente processada e/ou está funcionando mal (por exemplo, o canal de entrada é defeituoso, a ligação de ATP é reduzida ou anulada e/ou o transporte de cloreto é reduzido). Em certas modalidades, o agente de leitura CFTR é atalureno (TRANSLARNA TM).

Em certas modalidades, uma composição compreendendo aminoácidos conforme descrito neste documento é administrada em combinação com ivacaftor. Em certas modalidades, uma composição compreendendo aminoácidos conforme descrito neste documento é administrada em combinação com lumacaftor. Em certas modalidades, uma composição compreendendo aminoácidos conforme descrito neste documento é administrada em combinação com atalureno. Em certas modalidades, uma composição compreendendo aminoácidos conforme descrito neste documento é administrada em combinação com ivacaftor e lumacaftor. Em certas modalidades, uma composição compreendendo aminoácidos conforme descrito neste documento é administrada em combinação com ivacaftor e atalureno. Em certas modalidades, uma composição compreendendo aminoácidos conforme descrito neste documento é administrada em combinação com lumacaftor e atalureno. Em certas modalidades, as composições são administradas sozinhas, ou seja, não são administradas simultaneamente com, antes ou após um ou mais agentes farmacêuticos ou agentes terapêuticos adicionais. Em certas modalidades, as composições são administradas na ausência de um potenciador CFTR, corretor ou agente de leitura.

[00165] As formas de dosagem sólidas para a administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas de dosagem sólidas, o ingrediente ativo é misturado com pelo menos um excipiente ou carreador inerte farmaceuticamente aceitável, como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou (a) preenchedores ou extensores, como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol, e ácido silícico, (b) ligantes tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarose e acácia, (c) umectantes tais como glicerol, (d) agentes desintegrantes tais como ágar, carbonato de cálcio, batata ou tapioca amido, ácido algínico, certos silicatos e carbonato de sódio, (e) agentes retardadores de solução, como parafina, (f) aceleradores de absorção, como compostos de amônio quaternário, (g) agentes umectantes, como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol, (h) absorventes, tais como caulino e argila bentonita, e (i) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicois sólidos, laurilsulfato de sódio e misturas dos mesmos. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem pode incluir um agente tampão.

[00166] Em certas modalidades, uma composição compreendendo aminoácidos descritos neste documento pode ser fornecida na forma de pó e reconstituída para administração a um sujeito. Uma composição farmacêutica descrita neste documento pode ser preparada, embalada e/ou vendida em uma formulação adequada para administração pulmonar por meio da cavidade bucal. Uma tal formulação pode compreender partículas secas que compreendem o ingrediente ativo e que tem um diâmetro na gama de cerca de 0,5 a cerca de 7 nanômetros ou entre cerca de 1 a cerca de 6 nanômetros. Tais composições estão convenientemente na forma de pós secos para administração utilizando um dispositivo compreendendo um reservatório de pó seco para o qual uma corrente de propulsor pode ser direcionada para dispersar o pó e/ou utilizando um solvente auto propulsor/recipiente de distribuição de pó, tal como um dispositivo que compreende o ingrediente ativo dissolvido e/ou suspenso num propulsor de ponto de ebulição baixo num recipiente selado. Tais pós compreendem partículas em que pelo menos 98% das partículas, em peso, têm um diâmetro superior a 0,5 nanômetros e pelo menos 95% das partículas por número têm um diâmetro menor do que 7 nanômetros. Alternativamente, pelo menos 95% das partículas por peso têm um diâmetro maior do que 1 nanômetro e, pelo menos, 90% das partículas por número têm um diâmetro inferior a 6 nanômetros. As composições de pó seco podem incluir um diluente em pó fino sólido tal como o açúcar e são convenientemente fornecidos numa forma de dose unitária.

[00167] As formas de dosagem líquidas para a administração oral e parenteral incluem emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Para além dos ingredientes ativos, as formas de dosagem líquidas podem compreender diluentes inertes comumente usados na técnica tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetil formamida, óleos (por exemplo, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, germe, oliva, rícino e gergelim), glicerol, álcool tetraidrofurfurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácidos graxos de sorbitano, e misturas dos mesmos. Além de diluentes inertes, as composições orais podem incluir adjuvantes, tais como agentes molhantes, agentes emulsificantes e de suspensão, edulcorantes, aromatizantes e agentes perfumantes. Em certas modalidades para administração parenteral, os conjugados descritos neste documento são misturados com agentes solubilizantes, tais como Cremophor ®, álcoois, óleos, óleos modificados, glicóis, polissorbatos, ciclodextrinas, polímeros e misturas dos mesmos.

[00168] Composições farmacêuticas descritas neste documento formuladas para administração pulmonar podem fornecer o ingrediente ativo sob a forma de gotículas de uma solução e/ou suspensão. Tais formulações podem ser preparadas, embaladas e/ou vendidas como soluções aquosas e/ou alcoólicas diluídas e/ou suspensões estéreis, opcionalmente, compreendendo o ingrediente ativo, e podem ser convenientemente administradas utilizando qualquer dispositivo de nebulização e/ou atomização. Tais formulações podem ainda compreender um ou mais ingredientes adicionais incluindo, mas não se limitando a um agente aromatizante tal como sacarina de sódio, um óleo volátil, um agente de tamponamento, um agente ativo de superfície e/ou um conservante tal como hidroxibenzoato de metil. As gotículas fornecidas por esta via de administração podem ter um diâmetro médio na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 200 nanômetros.

[00169] As formulações descritas neste documento como sendo úteis para a distribuição pulmonar são úteis para a administração de uma composição farmacêutica neste documento. Outra formulação adequada para administração intranasal é um pó grosso compreendendo o ingrediente ativo e tendo uma partícula média de cerca de 0,2 a 500 micrômetros. Tal formulação é administrada por inalação rápida através da passagem nasal de um recipiente do pó mantido próximo às narinas.

[00170] As formulações para administração nasal podem, por exemplo, compreender desde cerca de tão pouco como 0,1% (p/p) a tanto quanto 100% (p/p) de ingrediente ativo, e podem compreender um ou mais dos ingredientes adicionais descritos neste documento. Uma composição farmacêutica descrita neste documento pode ser preparada, embalada e/ou vendida numa formulação para administração bucal. Tais formulações podem, por exemplo, estar na forma de comprimidos e/ou pastilhas feitas utilizando métodos convencionais, e podem conter, por exemplo, de 0,1 a 20% (p/p) de ingrediente ativo, sendo o balanço constituído por uma composição oralmente dissolúvel e/ou degradável e, opcionalmente, um ou mais dos ingredientes adicionais descritos neste documento. Alternativamente, as formulações para administração bucal podem compreender um pó e/ou uma solução em aerossol e/ou atomizada e/ou compreendendo a suspensão do ingrediente ativo. Tais formulações em pó, aerossol e/ou aerossol, quando dispersas, podem ter uma média de partícula e/ou o tamanho das gotas na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 200 nanômetros, e podem ainda compreender um ou mais dos ingredientes adicionais descritos neste documento.

Métodos para aumentar a translocação de CFTR para a membrana plasmática

[00171] A presente divulgação fornece composições para uso para aumentar a translocação da proteína reguladora de condutância transmembrana de fibrose cística (CFTR) do citoplasma para a membrana plasmática. Em geral, sem desejar ser limitado por qualquer teoria em particular, mutações na proteína CFTR (por exemplo, Phe508del) podem interromper o processamento correto, dobramento e/ou tráfego para a membrana plasmática, resultando em um menor número de proteínas CFTR no plasma membrana e função de transporte de íon cloreto prejudicada em células que expressam a proteína CFTR mutada. O transporte prejudicado do íon cloreto resulta em um perfil osmótico desequilibrado, de modo que a água não está sendo retirada das células que expressam a proteína CFTR mutada por meio de osmose devido à concentração intracelular anormalmente alta de íons cloreto. Isso resulta na formação de uma espessa camada de muco cobrindo as células, uma marca registrada da fibrose cística.

[00172] Assim, em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para aumentar o número de proteínas CFTR na membrana plasmática de uma célula, o método compreendendo o contato da célula com uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo aminoácidos da presente divulgação. Em certas modalidades, a célula é uma célula epitelial. Em certas modalidades, a célula epitelial é uma célula epitelial do intestino delgado ou uma célula epitelial do pulmão. Em certas modalidades, a célula epitelial é uma célula epitelial do pulmão. Em certas modalidades, a célula epitelial do pulmão é uma célula epitelial brônquica. A célula epitelial brônquica pode ser uma célula epitelial brônquica humana normal (NHBE) ou uma célula epitelial brônquica humana doente (DHBE). Uma célula epitelial brônquica humana doente pode ser obtida de um doador humano com diagnóstico de doença pulmonar (por exemplo, asma, DPOC, fibrose cística). Em certas modalidades, as células epiteliais brônquicas estão expressando CFTR de tipo selvagem. Em certas modalidades, as células epiteliais brônquicas estão expressando CFTR mutante. Em certas modalidades, as células epiteliais brônquicas estão expressando CFTR de tipo selvagem e mutante (ou seja, um alelo no gene CFTR codifica CFTR de tipo selvagem e o segundo alelo contém uma mutação (por exemplo, CFTR de Phe508del)). Em certas modalidades, as células epiteliais brônquicas estão expressando apenas o CFTR mutante Phe508del. As células podem estar presentes in vitro, in vivo ou ex vivo.

[00173] Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR de tipo selvagem na membrana plasmática aumenta. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR mutantes na membrana plasmática aumenta. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR mutantes Gly542X na membrana plasmática aumenta, onde X é qualquer aminoácido. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR Gly551Asp mutantes na membrana plasmática aumenta. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR Arg553X mutantes na membrana plasmática aumenta, onde X é qualquer aminoácido. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR Arg117His mutantes na membrana plasmática aumenta. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR 120del23 mutantes na membrana plasmática aumenta. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR Phe508del mutantes na membrana plasmática aumenta. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR que são pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idênticas à sequência de aminoácidos de CFTR de tipo selvagem conforme fornecido por SEQ ID NO: 1 na membrana plasmática aumenta. Em certas modalidades, o número de proteínas CFTR que são pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idênticas à sequência de aminoácidos de CFTR Phe508del de tipo selvagem conforme fornecido por SEQ ID NO: 2 na membrana plasmática aumenta.

[00174] Em certas modalidades, a presente divulgação fornece um método para aumentar o número de proteínas CFTR na membrana plasmática de uma célula, o método compreendendo o contato da célula com uma quantidade eficaz de uma composição descrita neste documento. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre treonina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, valina e tirosina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados da glicina, leucina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina. Em ainda outro aspecto, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em aminoácidos livres, cisteína e prolina e pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado dentre glicina, tirosina e/ou lisina; e opcionalmente, tampões, eletrólitos, adjuvantes e/ou excipientes.

[00175] Por "quantidade insignificante" significa que o aminoácido presente não tem efeito sobre a proteína CFTR. Ou, em certas modalidades, mesmo se o aminoácido estiver presente na composição, ele não está presente em uma quantidade que afetaria a translocação de CFTR para a membrana plasmática, transporte de íon cloreto ou o efeito terapêutico de tratamento de um sujeito em necessidade do mesmo. Em certas modalidades, uma quantidade insignificante é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 100 mg/l, 50 mg/l, 10 mg/l, 5 mg/l, 1 mg/l, 0,5 mg/l, 0,1 mg/l ou 0,01 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade insignificante é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 100 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade desprezível é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 50 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade insignificante é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 10 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade insignificante é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 5 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade insignificante é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 1 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade insignificante é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 0,5 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade insignificante é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 0,1 mg/l. Em certas modalidades, uma quantidade desprezível é uma quantidade em que a concentração total do aminoácido é inferior a 0,01 mg/l. Entende-se que uma quantidade insignificante é uma quantidade maior que zero.

[00176] Em certas modalidades, as composições da presente divulgação compreendem um ou mais aminoácidos livres que são essenciais (por exemplo, necessários) para aumentar a translocação de CFTR para a membrana plasmática. Em certas modalidades, as composições da presente divulgação podem incluir um ou mais aminoácidos livres que não são essenciais para aumentar a translocação de CFTR para a membrana plasmática (ou seja, não estabilizam diretamente o CFTR), mas podem, em vez disso, fornecer propriedades benéficas alternativas para a composição (por exemplo, manter um pH ou osmolaridade específicos).

[00177] Em um aspecto, o método de aumentar o número de proteínas CFTR na membrana plasmática de uma célula envolve aumentar a translocação de CFTR do citoplasma da célula para a membrana celular, o método compreendendo o contato da célula com uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo aminoácidos da presente divulgação. Em uma modalidade, o método leva a um aumento no número de proteínas CFTR na membrana plasmática da célula tratada. Um aumento no número de proteínas CFTR na membrana plasmática pode ser determinado comparando as células em contato com uma composição compreendendo aminoácidos descritos neste documento com células não tratadas (por exemplo, células de controle). Por exemplo, um western blot pode ser usado para comparar a presença e a quantidade de CFTR em vesículas de membrana isoladas de células epiteliais em contato com uma composição compreendendo aminoácidos conforme descrito neste documento versus a quantidade de CFTR em vesículas de membrana isoladas de células epiteliais não tratadas (por exemplo, células de controle). A realização de uma análise de western blot, conforme descrito neste documento, está dentro da capacidade de uma pessoa versada na técnica. Técnicas adicionais relacionadas que podem ser usadas para determinar o nível de expressão da proteína CFTR em uma amostra incluem análise dot blot, imuno-histoquímica, imunocitoquímica e ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), entre outros.

[00178] A proteína CFTR é uma proteína transportadora ABC que funciona como um canal iônico controlado por ATP. Quando ativado, o CFTR permite que os íons cloreto (Cl ‒) e outros íons carregados negativamente, como o tiocianato ([SCN] -), fluam para baixo em seu gradiente eletroquímico (por exemplo, difusão passiva ou transporte passivo). Mutações em CFTR, como, por exemplo, Gly551X, onde X representa qualquer aminoácido (por exemplo, Gly551Asp), resultam em uma proteína CFTR caracterizada por função de bloqueio de canal de íons defeituosa. A mutação CFTR mais comum, Phe508del, resulta em uma proteína CFTR que não possui o códon para a fenilalanina 508 e não pode se dobrar ou trafegar adequadamente para a membrana plasmática. Assim, em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para aumentar o número de proteínas CFTR na membrana plasmática de uma célula e aumentar o transporte de íons cloreto através da membrana celular (por exemplo, exportação de íons cloreto da célula), o método que compreende o contato de uma célula com uma composição compreendendo aminoácidos, conforme descrito neste documento.

[00179] Assim, em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para aumentar a exportação de íon cloreto de uma célula, o método compreendendo o contato da célula com uma quantidade eficaz de uma composição descrita neste documento. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre treonina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, valina e tirosina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados da glicina, leucina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina. Em ainda outra modalidade, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em aminoácidos livres, cisteína e prolina e pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado dentre glicina, tirosina e/ou lisina; e opcionalmente, tampões, eletrólitos, adjuvantes e/ou excipientes.

[00180] Em certas modalidades, a exportação de cloreto de uma célula é ainda melhorada pelo contato da célula com um potenciador CFTR, corretor ou agente de leitura. Em certas modalidades, a exportação de cloreto de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e um potenciador CFTR. Em certas modalidades, a exportação de cloreto de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e um corretor CFTR. Em certas modalidades, a exportação de cloreto de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e um agente de leitura CFTR. Em certas modalidades, a exportação de cloreto de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e ivacaftor.

[00181] O fluxo de íons, como íons de cloreto, através de uma membrana é um mecanismo biológico usado para regular o fluxo de água através de uma membrana semipermeável (por exemplo, uma membrana celular). Osmose descreve um processo pelo qual as moléculas de solvente (por exemplo, água) fluem de uma área de baixa concentração de soluto para uma área de maior concentração de soluto para equilibrar a concentração em cada lado de uma membrana semipermeável (por exemplo, difusão passiva de água). Quando a concentração de íons cloreto em uma célula aumenta devido ao mau funcionamento do CFTR, as moléculas de água não fluem para fora da célula e para a membrana mucosa circundante, resultando na formação de um muco espesso. Assim, em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece métodos e composições para aumentar o fluxo de água para fora de uma célula (por exemplo, osmose), o método compreendendo o contato de uma célula com uma composição compreendendo aminoácidos, conforme descrito neste documento.

[00182] Assim, em um aspecto, a presente divulgação fornece um método para aumentar a exportação de água de uma célula, o método compreendendo o contato de uma célula com uma composição descrita neste documento. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre treonina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, valina e tirosina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados da glicina, leucina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina. Em ainda outra modalidade, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em aminoácidos livres, cisteína e prolina e pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado dentre glicina, tirosina e/ou lisina; e opcionalmente, tampões, eletrólitos, adjuvantes e/ou excipientes.

[00183] Em certas modalidades, a exportação de água de uma célula é ainda melhorada pelo contato da célula com um potenciador CFTR, corretor ou agente de leitura. Em certas modalidades, a exportação de água de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e um potenciador CFTR. Em certas modalidades, a exportação de água de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e um corretor CFTR. Em certas modalidades, a exportação de água de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e um agente de leitura CFTR. Em certas modalidades, a exportação de água de uma célula é aumentada pelo contato da célula com uma terapia de combinação compreendendo uma composição descrita neste documento e ivacaftor. Métodos para tratamento de fibrose cística

[00184] Conforme descrito acima, o fluxo de íons cloreto através da proteína reguladora da condutância transmembrana da fibrose cística

(CFTR) é crucial para a manutenção dos níveis de fluido na célula e na membrana mucosa circundante, particularmente nos pulmões e no intestino delgado. Mutações na proteína CFTR (por exemplo, Phe508del) que interrompem o processamento, dobramento e tráfego de CFTR para a membrana plasmática resultam em um número inferior de proteínas CFTR funcionais na membrana plasmática. O resultado biológico é o acúmulo de uma espessa camada de muco cobrindo a camada de células epiteliais, promovendo o crescimento bacteriano e evitando que as células epiteliais obtenham nutrientes do fluido circundante. Em última análise, doenças respiratórias e pulmonares, como fibrose cística, podem se desenvolver em pacientes portadores de uma ou mais mutações no gene CFTR.

[00185] O sujeito pode ser, por exemplo, um ser humano que sofre de uma doença pulmonar. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística. Em certas modalidades, a causa genética subjacente da fibrose cística pode ser a mutação Phe508del em um ou mais alelos do gene CFTR. O ser humano também pode sofrer de complicações adicionais que muitas vezes ocorrem simultaneamente com a fibrose cística, como infecções bacterianas, infecções virais, asma e insuficiência respiratória crônica, entre outras. Assim, as composições compreendendo aminoácidos divulgadas neste documento também podem ser úteis no gerenciamento dos sintomas e outras complicações em um sujeito com fibrose cística.

[00186] Em certas modalidades, os métodos descritos neste documento levam ao aumento da sobrevida de um paciente que sofre de uma doença pulmonar (por exemplo, fibrose cística). Os métodos e composições descritos neste documento também podem ser úteis para melhorar o resultado terapêutico de pacientes com fibrose cística.

[00187] Assim, em um aspecto, a presente divulgação fornece composições para uso no tratamento de fibrose cística, em que as composições são administradas a um sujeito em necessidade das mesmas

(por exemplo, um sujeito com fibrose cística). Em certas modalidades, um sujeito sofre de fibrose cística em que a CFTR de tipo selvagem da SEQ ID NO: 1 está presente. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que uma proteína CFTR que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos de CFTR de tipo selvagem, conforme fornecido pela SEQ ID NO: 1 está presente. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que a CFTR mutante está presente. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que o mutante CFTR é um mutante Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23 ou Phe508del, em que X representa qualquer aminoácido. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que tanto a CFTR de tipo selvagem quanto a CFTR mutante estão presentes. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que uma proteína CFTR que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos de Phe508del CFTR, conforme fornecido pela SEQ ID NO: 2 está presente. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que a CFTR mutante é Phe508del CFTR de SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, o sujeito sofre de fibrose cística em que tanto a CFTR de tipo selvagem da SEQ ID NO: 1 quanto a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2 estão presentes. As composições descritas neste documento podem ser administradas com um ou mais agentes terapêuticos adicionais, por exemplo, terapia de combinação, para aumentar adicionalmente o benefício terapêutico das composições descritas neste documento.

[00188] Em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece um método para o tratamento de fibrose cística, sendo que o método compreende a administração a um sujeito em necessidade do mesmo de uma composição descrita neste documento. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre treonina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados dentre cisteína, prolina, glicina e valina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, valina e tirosina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais dos aminoácidos livres selecionados da cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados da glicina, leucina e lisina. Em certas modalidades, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em um ou mais aminoácidos livres selecionados dentre glicina, leucina, lisina, tirosina, arginina e isoleucina. Em ainda outra modalidade, a composição compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em aminoácidos livres, cisteína e prolina e pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado dentre glicina, tirosina e/ou lisina; e opcionalmente, tampões, eletrólitos, adjuvantes e/ou excipientes.

[00189] Em certas modalidades, a composição compreende adicionalmente um potenciador CFTR, corretor ou agente de leitura. Em certas modalidades, a composição compreende adicionalmente um potenciador CFTR. Em certas modalidades, a composição compreende adicionalmente um corretor CFTR. Em certas modalidades, a composição compreende adicionalmente um agente de leitura CFTR. Em certas modalidades, a composição compreende adicionalmente ivacaftor. Em certas modalidades, a composição não compreende adicionalmente um potenciador CFTR, corretor ou agente de leitura.

[00190] SYMDEKO® (tezacaftor/ivacaftor e ivacaftor) é indicado para o tratamento de pacientes com fibrose cística (FC) de 6 anos ou mais que são homozigotos para a mutação F508del ou que têm pelo menos uma mutação no gene regulador de condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR) que responde ao tezacaftor/ivacaftor com base em dados in vitro e/ou evidências clínicas. Para pacientes com idade entre 6-11 anos e peso <30 kg, a dose típica é 50 mg de tezacaftor + 75 mg de ivacaftor pela manhã e 75 mg de ivacaftor 12 horas depois. Para pacientes com idade entre 6-11 anos, pesando ≥30 kg ou pacientes com 12 anos ou mais, a dose típica é 100 mg de tezacaftor + 150 mg de ivacaftor pela manhã e 150 mg de ivacaftor 12 horas depois.

[00191] O ORKAMBI® (lumacaftor/ivacaftor) é indicado para fibrose cística (FC) em pacientes homozigotos para a mutação F508del no gene CFTR. Para pacientes de6 a 11 anos: 2 comprimidos (cada um contendo lumacaftor 100 mg/ivacaftor 125 mg) a cada 12 horas. Para pacientes com 12 anos ou mais: 2 comprimidos (cada um contendo lumacaftor 200 mg/ivacaftor 125 mg) a cada 12 horas.

[00192] KALYDECO® (ivacaftor) é um potenciador regulador da condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR) indicado para o tratamento da CF em pacientes com 6 meses de idade ou mais que têm uma mutação no gene CFTR que responde à potenciação do ivacaftor com base clínica e/ou em dados de ensaio in vitro. Para pacientes com idade de 6 meses a < 6 anos, a dose recomendada é baseada no peso de 5 kg a 7 kg: um pacote de 25 mg a cada 12 horas; 7 kg a 14 kg: um pacote de 50 mg a cada 12 horas; ≥14 kg: um pacote de 75 mg a cada 12 horas.

[00193] O atalureno pode ser usado na dose de 40 mg/kg/dia.

[00194] Entende-se que, quando usado em combinação com as formulações farmacêuticas descritas neste documento, as doses típicas podem variar. Em uma modalidade particular dessa terapia de combinação, a dosagem de qualquer um de, por exemplo, SYMDEKO®, ORKAMBI®, KALYDECO® ou Ataluren pode ser reduzida, tanto em relação à dose administrada e/ou a frequência de administração, quando administrada em conjunto com uma formulação farmacêutica descrita neste documento. Gene CFTR e Produtos Genéticos e Mutantes CFTR

[00195] Conforme discutido acima, as composições compreendendo aminoácidos, conforme descrito neste documento, aumentam efetivamente a translocação da CFTR para a membrana plasmática. Em particular, as composições que compreendem aminoácidos, conforme descrito neste documento, podem efetivamente aumentar a translocação de CFTR mutante (por exemplo, Phe508del) para a membrana plasmática. As composições resultam em um aumento no número de proteínas CFTR na membrana plasmática, fornecendo um método para aumentar o transporte de íons cloreto através da membrana da célula epitelial para manter a hiperpolarização da membrana e o transporte da transmembrana de água. Estas composições são úteis para o tratamento de doenças pulmonares, como fibrose cística, ou doenças que resultam da desregulação do transporte de fluido em outras células epiteliais, como as do pâncreas e do intestino delgado.

[00196] Sequências dos produtos do gene CFTR de interesse neste documento compreendem ou consistem em sequências codificadas por genes CFTR humanos, embora sequências de homólogos de mamíferos não humanos possam ser usadas em certas modalidades. Em geral, a sequência de uma proteína CFTR ou RNA CFTR frequentemente compreende ou consiste em uma sequência de um CFTR humana. Em certas modalidades, a sequência de um produto gênico de um gene CFTR compreende ou consiste em uma sequência de ocorrência natural. Será apreciado que um locus genético possa ter mais de uma sequência ou alelo em uma população de indivíduos. Em algumas modalidades, uma sequência de ocorrência natural é uma sequência padrão. A menos que indicado de outra forma, uma sequência listada no banco de dados de sequência de referência (RefSeq) como uma sequência de referência para uma proteína que é referida neste documento por um nome, abreviatura ou símbolo particular, é considerada uma "sequência padrão". Se uma sequência foi atualizada subsequentemente ao momento da presente divulgação, uma versão atual no momento da presente divulgação ou uma versão atualizada da mesma pode ser usada em certas modalidades. Será apreciado que um locus genético possa ter mais de uma sequência ou alelo em uma população de indivíduos. Em algumas modalidades, uma sequência de ocorrência natural difere de uma sequência padrão em uma ou mais posições de aminoácidos. Um polinucleotídeo ou polipeptídeo de ocorrência natural cuja sequência difere de uma sequência padrão e que executa a(s) função(ões) normal(ais) do polinucleotídeo ou polipeptídeo pode ser referido como tendo uma "sequência normal".

[00197] O gene CFTR tem aproximadamente 189 kb de comprimento e é composto por 27 éxons e 26 íntrons. Em certas modalidades, a proteína CFTR é a CFTR de tipo selvagem de comprimento total. A CFTR pode ser um CFTR de mamífero (por exemplo, humano). Em certas modalidades, a sequência de uma CFTR ou variante da mesma usada nas composições e métodos descritos neste documento compreende a sequência de uma proteína CFTR de ocorrência natural ou uma variante biologicamente ativa da mesma. Uma variante biologicamente ativa de uma proteína receptora de andrógeno pode conter uma ou mais adições, substituições e/ou deleções em relação à sequência de uma proteína CFTR de ocorrência natural. Em algumas modalidades, a sequência de uma proteína CFTR compreende uma sequência CFTR padrão. A proteína CFTR de comprimento total tem 1480 aminoácidos de comprimento e tem cinco domínios: dois domínios transmembrana, um domínio de ligação de nucleotídeo intracelular (NBD) conectado a cada domínio transmembrana e um domínio regulatório "R" intracelular. A CFTR de comprimento completo, de tipo selvagem tem a seguinte sequência de aminoácidos padrão (GenBank e NCBI Referência Sequência Número de Acesso: NG_016465.4):

MQRSPLEKASVVSKLFFSWTRPILRKGYRQRLELSDIYQIPSVDSADNLSE KLEREWD RELASKKNPKLINALRRCFFWRFMFYGIFLYLGEVTKAVQPLLLGRIIASYD PDNKEE RSIAIYLGIGLCLLFIVRTLLLHPAIFGLHHIGMQMRIAMFSLIYKKTLKLSSRV LDKISI GQLVSLLSNNLNKFDEGLALAHFVWIAPLQVALLMGLIWELLQASAFCGLG FLIVLA LFQAGLGRMMMKYRDQRAGKISERLVITSEMIENIQSVKAYCWEEAMEKM IENLRQ TELKLTRKAAYVRYFNSSAFFFSGFFVVFLSVLPYALIKGIILRKIFTTISFCIV LRMAV TRQFPWAVQTWYDSLGAINKIQDFLQKQEYKTLEYNLTTTEVVMENVTAF WEEGFG ELFEKAKQNNNNRKTSNGDDSLFFSNFSLLGTPVLKDINFKIERGQLLAVA GSTGAG KTSLLMVIMGELEPSEGKIKHSGRISFCSQFSWIMPGTIKENIIFGVSYDEY RYRSVIKA CQLEEDISKFAEKDNIVLGEGGITLSGGQRARISLARAVYKDADLYLLDSPF GYLDVL TEKEIFESCVCKLMANKTRILVTSKMEHLKKADKILILHEGSSYFYGTFSEL QNLQPD FSSKLMGCDSFDQFSAERRNSILTETLHRFSLEGDAPVSWTETKKQSFKQ TGEFGEKR KNSILNPINSIRKFSIVQKTPLQMNGIEEDSDEPLERRLSLVPDSEQGEAILP RISVISTGP TLQARRRQSVLNLMTHSVNQGQNIHRKTTASTRKVSLAPQANLTELDIYS RRLSQET GLEISEEINEEDLKECFFDDMESIPA VTTWNTYLRYITVHKSLIFVLIWCLVIFLAEVAA SLVVLWLLGNTPLQDKGNSTHSRNNSYAVIITSTSSYYVFYIYVGVADTLLA MGFFR GLPLVHTLITVSKILHHKMLHSVLQAPMSTLNTLKAGGILNRFSKDIAILDDL LPLTIF DFIQLLLIVIGAIAVVAVLQPYIFVATVPVIVAFIMLRAYFLQTSQQLKQLESE GRSPIF THLVTSLKGLWTLRAFGRQPYFETLFHKALNLHTANWFLYLSTLRWFQMR IEMIFVI FFIAVTFISILTTGEGEGRVGIILTLAMNIMSTLQWAVNSSIDVDSLMRSVSR VFKFID MPTEGKPTKSTKPYKNGQLSKVMIIENSHVKKDDIWPSGGQMTVKDLTAK YTEGGN AILENISFSISPGQRVGLLGRTGSGKSTLLSAFLRLLNTEGEIQIDGVSWDSI TLQQWRK AFGVIPQKVFIFSGTFRKNLDPYEQWSDQEIWKVADEVGLRSVIEQFPGKL DFVLVD GGCVLSHGHKQLMCLARSVLSKAKILLLDEPSAHLDPVTYQIIRRTLKQAFA DCTVIL

CEHRIEAMLECQQFLVIEENKVRQYDSIQKLLNERSLFRQAISPSDRVKLFP HRNSSKC KSKPQIAALKEETEEEVQDTRL (SEQ ID NO: 1)

[00198] Em certas modalidades, a presente divulgação fornece composições compreendendo aminoácidos úteis para aumentar o número de proteínas CFTR na membrana plasmática. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou mais, por exemplo, 100%, idêntica em sequência a CFTR tipo selvagem da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 70% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem da SEQ

ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 80% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 90% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é de pelo menos 95% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 96% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 97% idêntico em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 98% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 99% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 99,5% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a proteína CFTR é pelo menos 100% idêntica em sequência a CFTR de tipo selvagem de SEQ ID NO: 1.

[00199] Em certas modalidades, a proteína CFTR é uma variante ou fragmento CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. O termo "variante" também abrange variantes de splice da CFTR que resultam de splicing alternativo do gene CFTR. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, ou 100% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 50% da CFTR de comprimento total d SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de 60% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 70% do CFTR de comprimento total da SEQ ID NO:

1. Em certas modalidades, a variante de CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 80% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo está acima de 90% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 95% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO:

1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de 96% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo está acima de pelo menos 97% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 98% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 99% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 99,5% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 100% da CFTR de comprimento total da SEQ ID NO: 1. Estas variantes podem ser variantes biologicamente ativas da CFTR de tipo selvagem, de modo que a função de bloqueio do canal de íons e/ou a função de transporte de cloreto da CFTR seja retida na variante. Estas variantes podem ser variantes biologicamente inativas da CFTR de tipo selvagem, de modo que a função de bloqueio do canal iônico e/ou a função de transporte de cloreto da CFTR seja revogada (por exemplo, não funcional) na variante.

[00200] Em certas modalidades, uma proteína CFTR é uma proteína CFTR mutante, por exemplo, a sequência da proteína compreende a sequência de uma forma mutante de ocorrência natural da CFTR.

A CFTR mutante pode ser um mutante de CFTR de mamífero (por exemplo, humano). A CFTR mutante pode resultar de um nonsense, frameshift ou mutação de splicing de mRNA.

Mais de 2.000 mutações no gene CFTR foram descobertas, muitas das quais são clinicamente relevantes e/ou levam ao fenótipo de uma doença (por exemplo, fibrose cística). Ver Bobadilla JL et al., 2002, Human Mutation, 19; pp. 575-606, o qual é incorporado neste documento por referência para mutações de gene CFTR adicional, para qual a administração de uma composição da presente divulgação pode ser útil.

Em certas modalidades, a CFTR mutante é um mutante Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23 ou Phe508del, em que X representa qualquer aminoácido.

Em certas modalidades, a CFTR mutante é um mutante Gly542X, em que X representa qualquer aminoácido.

Em certas modalidades, a CFTR mutante é um mutante Gly551Asp.

Em certas modalidades, a CFTR mutante é um mutante Arg553X, em que X representa qualquer aminoácido.

Em certas modalidades, a CFTR mutante é um mutante Arg117His.

Em certas modalidades, a CFTR mutante é um mutante 120del23. Em certas modalidades, a CFTR mutante é um mutante Phe508del.

Em certas modalidades, um sujeito humano abriga uma mutação CFTR em pelo menos um alelo do gene que codifica a proteína CFTR (por exemplo, um alelo codifica CFTR de tipo selvagem e um alelo codifica CFTR Phe508del). Em certas modalidades, um sujeito humano abriga uma mutação CFTR em pelo menos dois dos alelos do gene que codifica a proteína CFTR.

Em certas modalidades, um sujeito humano abriga a mesma mutação em pelo menos dois dos alelos do gene que codifica a proteína CFTR (por exemplo, ambos os alelos codificam um mutante Phe508del, isto é, homozigoto). Em certas modalidades, um sujeito humano abriga diferentes mutações em pelo menos dois dos alelos do gene que codifica a proteína CFTR (por exemplo, um alelo codifica um mutante Phe508del e um alelo codifica um mutante Gly551Asp, isto é, heterozigoto). Em certas modalidades, uma célula abriga uma mutação CFTR em pelo menos um alelo do gene que codifica a proteína CFTR (por exemplo, um alelo codifica CFTR de tipo selvagem e um alelo codifica CFTR Phe508del). Em certas modalidades, uma célula abriga uma mutação CFTR em pelo menos dois dos alelos do gene que codifica a proteína CFTR. Em certas modalidades, uma célula abriga a mesma mutação em pelo menos dois dos alelos do gene que codifica a proteína CFTR (por exemplo, ambos os alelos codificam um mutante Phe508del, isto é, homozigoto). Em certas modalidades, uma célula contém diferentes mutações em pelo menos dois dos alelos do gene que codifica a proteína CFTR (por exemplo, um alelo codifica um mutante Phe508del e um alelo codifica um mutante Gly551Asp, isto é, heterozigoto). Em certas modalidades, a célula é uma célula epitelial. Em certas modalidades, a célula epitelial é uma célula epitelial do pulmão. Em certas modalidades, a célula epitelial do pulmão é uma célula epitelial brônquica. Em certas modalidades, a célula epitelial brônquica é derivada de um paciente com fibrose cística.

[00201] O mutante Phe508del é o mutante mais comum entre pacientes com fibrose cística. O mutante Phe508del resulta de uma mutação de deleção na qual o códon para a fenilalanina na posição de aminoácido 508 é deletado, resultando em uma proteína CFTR que carece do resíduo 508 (por exemplo, tem 1479 aminoácidos de comprimento). CFTR Phe508del tem a seguinte sequência de aminoácidos padrão (GenBank e NCBI Referência Sequência Número de Acesso: (NM_000492.3 (CFTR): c.1521_1523delCTT):

MQRSPLEKASVVSKLFFSWTRPILRKGYRQRLELSDIYQIPSVDSADNLSEK LEREWD RELASKKNPKLINALRRCFFWRFMFYGIFLYLGEVTKAVQPLLLGRIIASYDP DNKEE RSIAIYLGIGLCLLFIVRTLLLHPAIFGLHHIGMQMRIAMFSLIYKKTLKLSSRV LDKISI GQLVSLLSNNLNKFDEGLALAHFVWIAPLQVALLMGLIWELLQASAFCGLG FLIVLA LFQAGLGRMMMKYRDQRAGKISERLVITSEMIENIQSVKAYCWEEAMEKMI ENLRQ TELKLTRKAAYVRYFNSSAFFFSGFFVVFLSVLPYALIKGIILRKIFTTISFCIVL RMAV TRQFPWAVQTWYDSLGAINKIQDFLQKQEYKTLEYNLTTTEVVMENVTAF WEEGFG ELFEKAKQNNNNRKTSNGDDSLFFSNFSLLGTPVLKDINFKIERGQLLAVAG STGAG KTSLLMVIMGELEPSEGKIKHSGRISFCSQFSWIMPGTIKENIIGVSYDEYRY RSVIKAC QLEEDISKFAEKDNIVLGEGGITLSGGQRARISLARAVYKDADLYLLDSPFG YLDVLT EKEIFESCVCKLMANKTRILVTSKMEHLKKADKILILHEGSSYFYGTFSELQN LQPDFS SKLMGCDSFDQFSAERRNSILTETLHRFSLEGDAPVSWTETKKQSFKQTG EFGEKRK NSILNPINSIRKFSIVQKTPLQMNGIEEDSDEPLERRLSLVPDSEQGEAILPRI SVISTGPT LQARRRQSVLNLMTHSVNQGQNIHRKTTASTRKVSLAPQANLTELDIYSRR LSQETG LEISEEINEEDLKE CFFDDMESIPAVTTWNTYLRYITVHKSLIFVLIWCLVIFLAEVAAS LVVLWLLGNTPLQDKGNSTHSRNNSYAVIITSTSSYYVFYIYVGVADTLLAM GFFRG LPLVHTLITVSKILHHKMLHSVLQAPMSTLNTLKAGGILNRFSKDIAILDDLLP LTIFDF IQLLLIVIGAIAVVAVLQPYIFVATVPVIVAFIMLRAYFLQTSQQLKQLESEGRS PIFTH LVTSLKGLWTLRAFGRQPYFETLFHKALNLHTANWFLYLSTLRWFQMRIEM IFVIFFI AVTFISILTTGEGEGRVGIILTLAMNIMSTLQWAVNSSIDVDSLMRSVSRVFK FIDMPT EGKPTKSTKPYKNGQLSKVMIIENSHVKKDDIWPSGGQMTVKDLTAKYTEG GNAIL ENISFSISPGQRVGLLGRTGSGKSTLLSAFLRLLNTEGEIQIDGVSWDSITLQ QWRKAF GVIPQKVFIFSGTFRKNLDPYEQWSDQEIWKVADEVGLRSVIEQFPGKLDF VLVDGG CVLSHGHKQLMCLARSVLSKAKILLLDEPSAHLDPVTYQIIRRTLKQAFADC TVILCE

HRIEAMLECQQFLVIEENKVRQYDSIQKLLNERSLFRQAISPSDRVKLFPHR NSSKCKS KPQIAALKEETEEEVQDTRL (SEQ ID NO: 2)

[00202] Em certas modalidades, uma proteína CFTR é uma proteína CFTR mutante, por exemplo, a sequência da proteína compreende a sequência de uma forma mutante de ocorrência natural da CFTR. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou mais, por exemplo, 100%, idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 70% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 80% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 90% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 95% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 96% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 97% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 98% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 99% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 99,5% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a proteína CFTR mutante é pelo menos 100% idêntica em sequência a CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2.

[00203] Em certas modalidades, a proteína CFTR não pode ser processada adequadamente pela maquinaria celular tradicional no retículo endoplasmático (ER). Em certas modalidades, a proteína CFTR não pode dobrar adequadamente. Em certas modalidades, a proteína CFTR não pode ser trafegada adequadamente para a membrana plasmática (por exemplo, permanece no citoplasma ou no retículo endoplasmático). Em certas modalidades, a proteína CFTR exibe funcionalidade de bloqueio do canal de íons prejudicada, isto é, não pode abrir adequadamente para que os íons de cloreto sejam transportados para fora da célula.

[00204] Em certas modalidades, a proteína CFTR é uma variante ou fragmento de CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que possui mais de 50%, 60%, 70%, 80 %, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 50% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 60% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 70% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 80% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 90% Phe508del CFTR SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo está acima de pelo menos 95% da CFTR Phe508del de SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 96% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 97% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 98% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 99% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, a variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 99,5% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Em certas modalidades, A variante CFTR compreende ou consiste em um polipeptídeo que está acima de pelo menos 100% da CFTR Phe508del da SEQ ID NO: 2. Estas variantes podem ser variantes biologicamente ativas da CFTR Phe508del, de modo que a função de bloqueio do canal iônico e/ou a função de transporte de cloreto da CFTR seja retida na variante. Estas variantes podem ser variantes biologicamente inativas da CFTR Phe508del, de modo que a função de bloqueio do canal iônico e/ou a função de transporte de cloreto da CFTR seja revogada (por exemplo, não funcional) na variante.

[00205] Em algumas modalidades, uma sequência de ácido nucleico de mamífero, por exemplo, uma sequência de ácido nucleico humana, por exemplo, uma sequência de DNA humano que codifica uma proteína CFTR (por exemplo, CFTR de tipo selvagem, CFTR Phe508del) pode ser otimizada por códons para expressão aumentada em uma célula. Em certas modalidades, uma sequência que codifica uma proteína CFTR pode ser otimizada por códons para expressão aumentada em uma célula epitelial. Em certas modalidades, a célula epitelial é uma célula epitelial do intestino delgado. Em certas modalidades, a célula epitelial é uma célula epitelial do pulmão. Em certas modalidades, a célula epitelial do pulmão é uma célula epitelial brônquica. A célula epitelial brônquica pode ser derivada de um sujeito com fibrose cística.

[00206] Em algumas modalidades, uma proteína CFTR fornecida em uma forma purificada. Em algumas modalidades, uma proteína CFTR é fornecida na forma de um lisado celular. Em algumas modalidades, uma proteína CFTR é fornecida na forma de um homogenato de tecido.

EXEMPLOS

[00207] A fim de que a invenção descrita neste documento possa ser mais completamente entendida, os exemplos a seguir são estabelecidos. Os exemplos descritos neste pedido são oferecidos para ilustrar os métodos, composições e sistemas fornecidos neste documento e não devem ser interpretados de forma alguma como limitando seu escopo. Experimental Geral

[00208] Equipamento de câmara de uso para cultura de células: sistema de câmara de uso EM-CSYS-8, câmaras P2300, controles deslizantes P2302, rensão/corrente multicanal VCC MC8, eletrodos P2020 e módulo de entrada de eletrodo de canal único DM MC6 e membranas fictícias (instrumentos fisiológicos, San Diego, CA).

[00209] Eletrodos: eletrodos de prata/cloreto de prata (Ag/AgCl) colocados em pontas de eletrodos contendo tampão ágar-Ringer a 4%.

[00210] Solução Ringer: 115 mM NaCl, 25 mM NaHCO 3-, 2,4 mM

K2HPO4, 0,4 mM KH2PO4, 1,2 mM MgCl 2, 1,2 mM CaCl2 e 20 mM HEPES. NaOH para ajustar o pH a 7,4. Osmolaridade 290-300 mOsm. Exemplo 1

[00211] São descritos neste documento aminoácidos selecionados (AA), ou suas combinações em uma formulação, que sejam capazes de estimular a secreção de cloreto e reduzir a atividade de ENaC, aumentando CFTR e diminuindo a expressão e atividade de ENaC na membrana apical. As formulações de AA foram testadas em células epiteliais brônquicas humanas primárias (HBEC) com a mutação CFTRΔF508. As células foram obtidas de pacientes com FC e não com FC. As células cresceram até 80% de confluência em placas de cultura e foram então transferidas para inserções permeáveis a snapwell. As células foram cultivadas para amadurecer e diferenciadas em suportes de cultura de células permeáveis durante ~ 30 dias na interface ar-meio. Posteriormente, as células foram estudadas na câmara de uso para medição da corrente transepitelial e resistência.

[00212] A corrente de curto-circuito (Isc) e a resistência (R) foram medidas em CFTRΔF508 HBEC homozigoto primário totalmente diferenciado, cultivado em uma interface ar-líquido durante 28 a 42 dias após a exposição à formulação AA selecionada (CF3AA, CF4AA-1/2/4, CF5AA), CF4AA-3 (controle negativo) e veículo (controle) em câmaras de uso. As alterações em Isc foram medidas após a inibição de ENaC com 6 µM de benzamil, ativação da atividade do canal CFTR ativado por cAMP usando 10 µM de forscolina, 1 µM de PG01 (potenciador), bloqueio do canal CFTR usando 20 µM CFTR (inh)-172, e bloqueio do canal basal de cloreto ativado por Ca (CaCC) usando 10 µM de CaCCinh-A01, respectivamente. Experimentos semelhantes foram repetidos em CFTRΔF508 HBEC tratado durante 24 horas antes do experimento com 6 µM C18, um corretor para CFTR mal dobrado. A expressão da proteína celular CFTR e ENaC foi analisada usando Western blot, e a localização da proteína foi demonstrada usando microscopia de imunofluorescência.

[00213] A FIG. 1A mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários aminoácidos individuais (AA) (n = 4). A FIG. 1B mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários AA individuais (n = 4). Benzamil é um bloqueador de ENaC, logo, a corrente insensível a benzamil representa a corrente restante após o bloqueio de ENaC. Para ambas as Figuras 1A e Figuras 1B, os melhores aminoácidos foram selecionados a partir dos aminoácidos individuais com base na mudança delta na corrente selecionada.

[00214] A FIG. 2A mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para várias combinações AA (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA-2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4). CF5AA-3 rendeu a corrente insensível a benzamila mais alta e CF4AA-3 foi um controle negativo. A FIG. 2B mostra um gráfico de corrente insensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos), Ringers básicos com DMSO e para várias combinações AA (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA- 2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4). CF5AA-3 ainda produziu a corrente insensível a benzamila mais alta e CF4AA-3 foi um controle negativo.

[00215] A FIG. 3A mostra um gráfico de corrente sensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários aminoácidos individuais (AA) (n = 4). A FIG. 3B mostra um gráfico de corrente sensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para vários aminoácidos individuais (AA) (n = 4). Uma corrente mais alta sensível a Benzamil significa que mais atividade

ENaC permanece. As soluções de AA que poderiam inibir a atividade de ENaC mostram uma corrente baixa sensível ao benzamil.

[00216] A FIG. 4A mostra um gráfico de corrente sensível a benzamil (µA) sem C18 para uma solução de controle (Ringers básicos) e para várias combinações AA (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA-2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4). A FIG. 4B mostra um gráfico da corrente sensível a benzamil (µA) com C18 para uma solução de controle (Ringers básicos), Ringers básicos com DMSO e para várias combinações (CF2AA, CF3AA-2, CF4AA, CF4AA-2, CF5AA-3, CF4AA-3 e CF4AA-4) (n = 4). CF5AA-3 produz a maior diminuição na corrente ENaC.

[00217] No geral, a resistência basal das células estava entre 350 e 500 Ohm. CF4AA-4 e CF5AA-3 reduziram a atividade de ENaC em comparação com os controles, conforme mostrado na Figura 4A (corrente sensível a benzamil). A corrente insensível ao benzamil representando a secreção de cloreto foi maior em células tratadas com formulações de AA, exceto para CF4AA-3, e C18 não resultou em uma mudança significativa em Isc (Figuras 2A e 2B). Forskolin e PG01 aumentaram ainda mais o Isc em células expostas para formulações de AA, quando comparados aos controles e CF4AA-3. CFTR foi o principal contribuinte para a secreção de cloreto em HBEC tratado com formulações de AA, mas não CaCC. O pré- tratamento com C18 mostrou um pequeno aumento em Isc após forscolina, PG01 e uma pequena inibição após CFTR (inh)-172 em comparação com os controles correspondentes. A expressão da proteína CFTR aumentou e o ENaC diminuiu em HBEC tratado com formulações de AA, com a maioria da CFTR localizada na membrana apical das células.

[00218] Em conclusão, as formulações baseadas em um conjunto selecionado de AAs podem melhorar a atividade disfuncional do cloreto e do canal de sódio em CFTRΔF508 HBEC, modificando a expressão e a função do canal de membrana. Essas formulações podem ser usadas sozinhas ou em conjunto com o padrão de tratamento existente. Exemplo 2

MATERIAIS E MÉTODOS

[00219] Modelo de célula: células epiteliais brônquicas humanas normais primárias totalmente diferenciadas (HBEC) e CFTRΔF508 HBEC homozigóticas (células CF) foram cultivadas em poços de pressão em uma interface ar-líquido durante 28 a 40 dias.

[00220] Câmara de uso: corrente transepitelial de curto-circuito (Isc), 22 36 resistência (R) e unidirecionais (Jms & Jsm) e fluxos de rede (Jnet) de Na e Cl foram medidos em células HBECs e CF normais, enquanto banhava-se no veículo, ou CF-5AA-3 e CF-4AA-3. A secreção de cloreto foi estimulada com forscolina (FSK, 10 µM apical e basolateral) e o potenciador GLPG1837 (3 µM apical) e benzamil (6 µM apical) e bumetanida (20 µM apical e basolateral) foram usados para bloquear ENaC e NKCC.

[00221] Estatísticas: as diferenças estatísticas entre o veículo e as formulações de AA foram calculadas usando a análise de variância (OriginPlus 2016). P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

[00222] Detalhes experimentais adicionais relacionados em particular às Figuras 10 e 11 são as seguintes:

[00223] O efeito de C18 e/ou VX661 em células epiteliais brônquicas humanas primárias com CFTR∆F508 foi investigado incubando as células com DMSO, C18 6 µM e/ou VX661 3 µM em DMSO durante 24 horas antes do experimento. Os experimentos foram repetidos na presença ou ausência de GLPG (N-(3-Carbamoil-5,5,7,7-tetrametil-5,7-di-hidro-4H-tieno[2,3- c]piran-2-il)-lH-pirazol-5-carboxamida). As células foram banhadas em Ringers básicos ou soluções de aminoácidos (AA) e borbulhadas com 5% de CO 2 e 95% de O2, respectivamente. As soluções Basolateral Basic Ringer ou AA continham glicose 5 mM.

[00224] Os tratamentos foram os seguintes:

1. 30 min de linha de base atual

2. 6 µM de benzamil (1 µL, M) – 15 min

3. Com ou sem Forskolin 10uM (1 µL, M/S) + GLPG1837 3uM (1 µL, M) – 15 min

4. 20 uM CFTR Inh 172 (2 µL, M/S) – 15 min

5. 10uM CaCC Inh AO1 (1 µL, M) – 10 min

6. Bumetanida 20 uM (2 µL, S) – 15 min

[00225] Lumacaftor: C18; Symdeko: VX661 (tezacaftor)/C18; Ivacaftor: GLPG1837 (potenciador reversível)

RESULTADOS

[00226] As Figuras 5-9 mostram que as combinações AA selecionadas podem melhorar a atividade disfuncional do canal de sódio e cloreto em CFTRΔF508 HBEC corrigindo e/ou modificando a função do canal da membrana plasmática. Essas formulações poderiam complementar com sucesso o padrão de atendimento existente em pacientes com a mutação CFTRΔF508.

[00227] A Figura 10A e a Figura 10B mostram que CF5AA-3 é mais eficaz do que o corretor e mais eficaz do que o corretor(es) mais potenciador. A Figura 10A e a Figura 10B também mostram que CF5AA-3 mais corretor(es) e potenciador agem sinergicamente.

[00228] A Figura 11 mostra que CF-5AA-3 induz um aumento estatisticamente significativo na secreção de cloreto em relação a C18 (corretor) sozinho, seja em relação ao fluxo de cloreto basal ou fluxo de cloreto estimulado.

[00229] A Figura 12 mostra um gráfico que mostra que CF5AA-3 aumentou a corrente aniônica via CFTR. A corrente do ânion por CF5AA-3 é significativamente maior e sustentada quando comparada à combinação tripla.

[00230] A Figura 12 mostra que CF5AA-3 estimula o canal CFTR melhor do que o corretor e melhor do que o corretor mais potenciador. Esses resultados apresentam evidências de que CF5AA-3 afeta diretamente o canal CFTR.

[00231] A Figura 13 mostra que CF5AA-3 estimula o canal CaCC melhor do que o corretor e melhor do que o corretor mais potenciador. Esses resultados apresentam evidências de que o CF5AA-3 afeta diretamente o canal CaCC. Exemplo 3

[00232] Antecedentes: em pacientes com Fibrose Cística, a mutação F508del homozigótica causa dobramento incorreto da proteína CFTR, tráfego defeituoso e bloqueio anormal, resultando em diminuição da secreção de cloreto que leva à inflamação crônica das vias aéreas e infecção. Combinações de pequenas moléculas que corrigem o mal dobramento/tráfego incorreto de CFTR (VX809 e VX661) e potencializam o bloqueio CFTR (VX770) foram aprovadas para tratamentos de pacientes com F508del com eficácia medicamentosa subótima e efeitos adversos. Os presentes inventores compararam a eficiência ou eficiência aditiva de CF5AA-3 ao tratamento com VX809/VX770 ou VX661/VX770 sozinho no tráfego da CFTR defeituosa e aumento da secreção de cloreto em células epiteliais brônquicas humanas primárias com F508del homozigoto (HBEC-F508del).

[00233] Métodos: a corrente transepitelial de curto-circuito e fluxo de 36 rede Cl (Jnet) foram medidos em HBEC-F508del diferenciado banhado em veículo (no AA), formulação de teste AA (CF5AA-3) ou controle negativo AA (NC; CF4AA-3) em câmaras Ussing. As células foram tratadas com C18 (análogo VX809), VX661 ou DMSO durante 24 horas. Após o bloqueio de ENaC com benzamil, a secreção de cloreto foi estimulada usando GLPG1837 (análogo VX770) com ou sem forscolina. CFTRinh-172, CaCCinh-A01 ou bumetanida foram adicionados para distinguir as correntes de cloreto sensíveis a CFTR, TMEM16A e NKCC1, respectivamente. Western blot foi realizado em frações de membrana HBEC-F508del para determinar a expressão de CFTR apical.

[00234] Resultados: HBEC-F508del banhado em AA mostrou correntes de ânions basais significativamente maiores quando comparadas ao veículo ou NC se células, pré-tratadas com DMSO (10,7±0,2µA vs 1,4±0,1µA vs 2,1±0,1µA), C18 (11,1±0,2µA vs 1,6±0,1µA vs 2,1±0,1µA) ou VX661 (10,8±0,3µA vs 1,5±0,2µA vs 2,0±0,2µA). A estimulação com GLPG1837 causou pequeno aumento na corrente, com pico de 12,7 ± 0,4µA em C18-AA. As correntes aniônicas foram significativamente maiores em HBEC-F508del pré-tratado com C18 e VX661 e estimuladas com forscolina e GLPG1837, e atingiu o pico em 14,8 ± 0,4 µA em VX661-AA, em comparação com 7,9 ± 0,7 µA em veículo VX661. Na presença de AA, CFTR contribuiu mais para as correntes estimuladas (60%), enquanto AA também ativou TMEM16A (16%) e outros canais de cloreto sensíveis a bumetanida (24%). Os estudos de fluxo 36 usando Cl confirmaram o aumento da secreção de cloreto em HBEC-F508del banhado em AA em comparação com o veículo ou NC, independentemente do tratamento anterior (Figura 14). A expressão da membrana CFTR (banda c) aumentou com AA com ou sem corretores: de 6 (unidades arbitrárias) (veículo DMSO) para 9 (veículo C18) e de 8 (DMSO-AA) para 12 (C18-AA) respectivamente. Ver Figura 14.

[00235] Conclusão: CF5AA-3 aumenta a secreção de ânion apical semelhante a corretores e potencializadores, indicando que CF5AA-3 é um ingrediente farmaceuticamente ativo promissor como uma opção de tratamento independente para pacientes com CF, ou como um aditivo em terapias conjuntas já implementadas para o tratamento de pacientes com CF após estudos pré-clínicos e clínicos. Exemplo 4 Modelo Animal de CF

[00236] Um modelo de rato geneticamente modificado será usado neste protocolo. Este modelo apresenta alterações em seu gene regulador da condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR). O modelo do rato possui a versão humana do gene CFTR, com uma mutação comum do paciente, G551D, inserida, de forma que produza uma proteína CFTR humanizada (hCFTR) com a mutação G551D (Classe III). O modelo de rato é referido neste documento e na técnica como hG551D. Como outros modelos animais de fibrose cística, aproximadamente 40% dos ratos hG551D apresentam bloqueio intestinal por volta das 6 semanas de idade. Alguma incidência de bloqueio intestinal pode ser prevenida com a administração de Go-LYTELY por meio de água, bem como DietGel adicionado à comida para hidratação. Além disso, os ratos com FC knock out (KO) desenvolvem anormalidades nos dentes, incluindo má oclusão, o que pode dificultar a mastigação. Portanto, os ratos receberão ração amolecida, três vezes por semana. Os ratos afetados também serão monitorados quanto à necessidade de aparar os dentes, para facilitar a alimentação e evitar morbidade ou mortalidade.

[00237] A cepa de rato hG551D foi projetada para imitar a fibrose cística da doença humana. Esta doença é caracterizada pela falta de secreção de cloreto através das camadas de células epiteliais, por exemplo, a camada epitelial nasal. Mostramos que as vias respiratórias de ratos hG551D apresentam características de doença pulmonar com fibrose cística. Em particular, o rato expressa glândulas submucosas nas vias aéreas, que são semelhantes às de pacientes humanos e, portanto, oferece uma patologia consistente com a observada em pacientes humanos com fibrose cística.

[00238] Para testar a secreção de cloreto em ratos hG551D e a resposta aos medicamentos, será realizado o procedimento de diferença de potencial nasal (NPD). Para o procedimento de NPD, a cauda do rato é suavemente raspada, colocada em solução de Ringer com lactato e conectada através de uma célula de calomelano a um seguidor de voltagem de alta impedância (VF 1; World Precision Instruments). Uma sonda exploradora é estabelecida conectando-se uma ponte de eletrodo (fio) de Ag/AgCl a uma seringa que bombeia soluções a uma taxa de 180 µl/h. Após aproximadamente cinco minutos, os ratos estão apropriadamente sonolentos para permitir a canulação da narina com uma cânula PE 10 puxada a um diâmetro de ponta de ~0,15 mm. As soluções perfundidas incluem Ringer lactato mais amilorida, uma solução de baixo [Cl] contendo g K2HPO4, KH2PO4, Na Gluconato, NaHCO3, Ca Gluconato e forscolina. Cada solução perfundida será administrada a uma taxa de aproximadamente 2mL/min, com menos de 80 uL no total por rato na cavidade nasal. Cada condição superperfundida é estudada durante 6 a 10 minutos. Os ratos terão permissão para se recuperar da anestesia e terão atipamazol administrado para reversão.

[00239] Os animais neste estudo serão, por exemplo, tratados com um dentre quatro compostos: uma formulação de teste (CF5AA-3), um controle positivo (ivacaftor), um controle negativo (CF4AA-3) ou o veículo. Ivacaftor será administrado por gavagem oral; os outros compostos serão administrados por nebulização em aerossol. Os animais serão tratados uma vez ao dia, durante sete dias, e então serão submetidos a um procedimento de diferença de potencial nasal para testar a eficácia do medicamento. A diferença do potencial nasal 24 horas após a dose final de ivacaftor ou VS-009 será comparada. Depois de concluído, os animais serão submetidos à eutanásia para coleta de tecido e posterior análise.

[00240] A Tabela C apresenta dosagem exemplificativa para os agentes indicados. Procedimento Agente Dosagem Via Frequência ou Objetivo Modulação CFTR ivacaftor 40mg/kg/dia gavagem diariamente, oral por sete dias Modulação CFTR CF5AA-3 3mM nebulização diariamente, por sete dias

Modulação CFTR CF4AA-3 3mM nebulização diariamente, por sete dias Modulação CFTR veículo NA nebulização diariamente, por sete dias

EQUIVALENTES E ESCOPO

[00241] Nas reivindicações, artigos como "um", "uma", "o" e "a" podem significar um ou mais do que um a menos que indicado em contrário, ou de outro modo evidente do contexto. Reivindicações ou descrições que incluem "ou" entre um ou mais membros de um grupo são consideradas satisfatórias se um, mais do que um, ou todos os membros do grupo estiverem presentes em, empregados em, ou de outra forma, forem relevantes para um determinado produto ou processo, salvo indicação em contrário ou, de outro modo, evidente do contexto. A invenção inclui modalidades nas quais exatamente um membro do grupo está presente em, empregados em, ou de outro modo relevantes para um determinado produto ou processo. A invenção inclui modalidades em que mais do que um, ou todos os membros do grupo se encontram presentes na, empregados em, ou de outro modo relevantes para um determinado produto ou processo.

[00242] Além disso, a invenção engloba todas as variações, combinações e permutações em que uma ou mais limitações, elementos, cláusulas e termos descritivos de uma ou mais das reivindicações listadas são introduzidas em outra reivindicação. Por exemplo, qualquer reivindicação dependente de outra reivindicação pode ser modificada para incluir uma ou mais limitações encontradas em qualquer outra reivindicação que seja dependente da mesma reivindicação de base. Em que os elementos são apresentados como listas, por exemplo, no formato do grupo Markush, cada subgrupo dentre os elementos é também descrito, e qualquer/quaisquer elemento(s) pode(m) ser removido(s) do grupo. Deve-

se entender que, em geral, quando a invenção, ou aspectos da invenção, é/são referidos como compreendendo elementos e/ou características particulares, certas modalidades da invenção ou aspectos da invenção consistem, ou consistem essencialmente em, tais elementos e/ou características. Para fins de simplicidade, essas modalidades não foram especificamente estabelecidas in haec verba neste documento. Deve-se notar também que os termos "compreendendo" e "contendo" são destinados a serem abertos e permitem a inclusão de elementos ou etapas adicionais.

[00243] Este pedido refere-se a várias patentes emitidas, pedidos de patente publicados, artigos de revistas e outras publicações, todas elas incorporadas neste documento por referência. Se houver um conflito entre qualquer uma das referências incorporadas e o presente relatório descritivo, o relatório descritivo deve vigorar. Além disso, qualquer modalidade particular da presente invenção que se enquadre na técnica anterior pode ser explicitamente excluída de qualquer uma ou mais das reivindicações. Devido a tais modalidades serem consideradas como sendo conhecimento de uma pessoa de conhecimento comum na técnica, essas podem ser excluídas, mesmo que a exclusão não seja estabelecida explicitamente neste documento. Qualquer modalidade particular da invenção pode ser excluída de qualquer reivindicação, por qualquer razão, relacionada ou não com a existência da técnica anterior.

[00244] Os versados na técnica reconhecerão ou serão capazes de determinar utilizando não mais do que experimentação de rotina, muitos equivalentes às modalidades específicas descritas neste documento. O escopo da presente modalidade descrita neste documento não está destinado a se limitar à descrição acima, mas sim ser estabelecido nas reivindicações anexas. Aqueles de conhecimento comum na técnica apreciarão que podem ser feitas várias alterações e modificações para esta descrição sem sair do espírito ou âmbito da presente invenção, conforme definido nas reivindicações seguintes. Quando as reivindicações ou descrição se referem a um produto (por exemplo, uma composição de matéria), deve-se entender que os métodos de fabricação ou uso do produto, de acordo com qualquer um dos métodos divulgados neste documento, e métodos de uso do produto para qualquer um ou mais das finalidades divulgadas neste documento, são englobados pela presente divulgação, quando aplicável, a menos que indicado de outra forma ou a menos que seja evidente para um versado na técnica que uma contradição ou inconsistência surgiria. Quando as reivindicações ou descrição se referem a um método, deve ser entendido que o(s) produto(s), por exemplo, composições de matéria, dispositivo(s) ou sistema(s) úteis para realizar uma ou mais etapas do método são abrangidos pela presente divulgação, quando aplicável, a menos que indicado de outra forma, ou a menos que seja evidente para um versado na técnica que uma contradição ou inconsistência surgiria.

[00245] Onde os intervalos são dados neste documento, modalidades são fornecidas nas quais os pontos finais são incluídos, modalidades em que ambos os pontos finais são excluídos e modalidades em que um ponto final está incluído e o outro é excluído. Deve-se presumir que ambos os pontos finais estejam incluídos, a menos que seja indicado o contrário. Além disso, deve-se entender que a menos que indicado de outra forma, ou de outra maneira evidente a partir do contexto e da compreensão de um versado na técnica, os valores que são expressos em faixas podem assumir qualquer valor ou subfaixa específica dentro das faixas amas indicadas em diferentes modalidades da invenção, ao décimo da unidade do limite inferior da faixa, a menos que o contexto dite claramente o contrário. É também entendido que onde uma série de valores numéricos é declarada neste documento, as modalidades que se relacionam analogamente a qualquer valor intermediário ou faixa definida por quaisquer dois valores na série são fornecidas, e que o valor mais baixo pode ser tomado como um mínimo e o maior valor pode ser tomado como um máximo.

Quando uma frase como "pelo menos", "até", "não mais que", ou frases semelhantes, precede uma série de números neste documento, deve ser entendido que a frase se aplica a cada número na lista em várias modalidades (entendendo-se que, dependendo do contexto, 100% de um valor, por exemplo, um valor expresso em porcentagem, pode ser um limite superior), a menos que o contexto indique claramente o contrário.

Por exemplo, "pelo menos 1, 2 ou 3" deve ser entendido como significando "pelo menos 1, pelo menos 2 ou pelo menos 3" em várias modalidades.

Também será entendido que todo e qualquer limite inferior razoável e limite superior são expressamente contemplados quando aplicável.

Um limite inferior ou superior razoável pode ser selecionado ou determinado por um versado na técnica com base, por exemplo, em fatores como conveniência, custo, tempo, esforço, disponibilidade (por exemplo, de amostras, agentes ou reagentes), considerações estatísticas, etc.

Em algumas modalidades, um limite superior ou inferior difere por um fator de 2, 3, 5 ou 10, de um valor particular.

Os valores numéricos, conforme usados neste documento, incluem valores expressos como porcentagens.

Para cada modalidade em que um valor numérico é precedido por "cerca de" ou "aproximadamente", são fornecidas as modalidades nas quais o valor exato é recitado.

Para cada modalidade em que um valor numérico não é precedido por "cerca de" ou "aproximadamente", são fornecidas modalidades em que o valor é precedido por "cerca de" ou "aproximadamente". "Aproximadamente" ou "cerca de" geralmente inclui números que se encaixam em uma faixa de 1%, ou em algumas modalidades em uma faixa de 5% de um número ou em algumas modalidades em uma faixa de 10% de um número em qualquer direção (maior que ou menos que o número), a menos que indicado de outra forma, ou de outra forma evidente a partir do contexto (exceto quando tal número for inadmissivelmente superior a 100% de um valor possível). Deve-se entender que, a menos que seja claramente indicado o contrário, em quaisquer métodos reivindicados neste documento que incluam mais de um ato, a ordem dos atos do método não está necessariamente limitada à ordem em que os atos do método são recitados, mas a invenção inclui modalidades nas quais a ordem é tão limitada. Em algumas modalidades, um método pode ser realizado por um indivíduo ou entidade. Em algumas modalidades, as etapas de um método podem ser realizadas por dois ou mais indivíduos ou entidades, de modo que um método seja realizado coletivamente. Em algumas modalidades, um método pode ser realizado, pelo menos em parte, solicitando ou autorizando outro indivíduo ou entidade a realizar uma, mais de uma ou todas as etapas de um método. Em algumas modalidades, um método compreende solicitar duas ou mais entidades ou indivíduos para cada um realizar pelo menos uma etapa de um método. Em algumas modalidades, o desempenho de duas ou mais etapas é coordenado de modo que um método seja executado coletivamente. Indivíduos ou entidades que executam diferentes etapas podem ou não interagir.

[00246] Os títulos das seções usados neste documento não devem ser interpretados como limitantes de qualquer forma. É expressamente contemplado que o assunto apresentado sob qualquer título de seção possa ser aplicável a qualquer aspecto ou modalidade descrita neste documento.

[00247] As modalidades ou aspectos deste documento podem ser direcionados a qualquer agente, composição, artigo, kit e/ou método descrito neste documento. É contemplado que qualquer uma ou mais modalidades, ou aspectos, podem ser combinados livremente com qualquer uma ou mais outras modalidades ou aspectos sempre que apropriado. Por exemplo, é fornecida qualquer combinação de dois ou mais agentes, composições, artigos, kits e/ou métodos que não sejam mutuamente inconsistentes. Será entendido que qualquer descrição ou exemplificação de um termo em qualquer lugar neste documento, possa ser aplicada onde quer que tal termo apareça neste documento (por exemplo, em qualquer aspecto ou modalidade em que tal termo seja relevante), a menos que indicado ou claramente evidente de outra forma.

REFERÊNCIAS

1. O’Sullivan BP and Freedman SD (2009) Cystic Fibrosis. Lancet, 373; pp. 1891-904.

2. Brodlie M, Haq IJ, Roberts K, Elborn JS (2015) Targeted therapies to improve CFTR function in cystic fibrosis. Genome Medicine, 7; doi: 10.1186/s13073-015-0223-6.

3. Corvol H, Thompson KE, Tabary O, et al. (2015) Translating the genetics of cystic fibrosis to personalized medicine. Transl Res; doi:

10.1016/j.trsl.2015.04.008.

4. McPhail GL and Clancy JP (2013) Ivacaftor: the first therapy acting on the primary cause of cystic fibrosis. Drugs Today, 49; pp. 253-260.

5. Ramsey BW, Davies J, McElvaney NG, et al. (2011) A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation. N Engl J Med, 365; pp. 1633-1672.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Formulação farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende: a) ingredientes farmaceuticamente ativos consistindo essencialmente em uma quantidade terapeuticamente eficaz de cada uma dentre cisteína e prolina como aminoácidos livres, e uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um aminoácido livre adicional selecionado do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido; e opcionalmente, b) pelo menos um ingrediente farmaceuticamente inativo.

2. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os aminoácidos livres são L-aminoácidos.

3. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende ainda água como um ingrediente farmaceuticamente inativo.

4. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que pelo menos um ingrediente farmaceuticamente inativo compreende um carreador, tampão, eletrólito, adjuvante ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

5. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica não compreende aminoácidos livres além da cisteína, prolina e pelo menos um aminoácido adicional selecionado do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina.

6. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica consiste essencialmente em:

cisteína e prolina como aminoácidos livres, e um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

7. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica consiste essencialmente em: cisteína e prolina como aminoácidos livres, e um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina, tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

8. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e glicina como aminoácidos livres, e opcionalmente um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em tirosina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

9. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e glicina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido, e não haja nenhum outro aminoácido livre.

10. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e tirosina como aminoácidos livres, e opcionalmente um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina e lisina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

11. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e tirosina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido, e não haja nenhum outro aminoácido livre.

12. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e lisina como aminoácidos livres, e opcionalmente um ou mais aminoácidos livres adicionais selecionados do grupo que consiste em glicina e tirosina, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

13. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e lisina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido, e não haja nenhum outro aminoácido livre.

14. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e glicina como aminoácidos livres, e opcionalmente, adicionalmente, compreende lisina como um aminoácido livre, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

15. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e glicina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido, e não haja nenhum outro aminoácido livre.

16. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e glicina como aminoácidos livres, e opcionalmente, adicionalmente, compreende tirosina como um aminoácido livre, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

17. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e lisina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido, e não haja nenhum outro aminoácido livre.

18. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e lisina como aminoácidos livres, e opcionalmente, adicionalmente, compreende glicina como um aminoácido livre, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

19. Formulação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina e lisina como aminoácidos livres, com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido, e não haja nenhum outro aminoácido livre.

20. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica compreende, consiste ou consiste essencialmente em cisteína, prolina, glicina, tirosina e lisina como aminoácidos livres, e com a condição de que pelo menos um dos aminoácidos livres seja um L-aminoácido.

21. Formulação, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que a formulação não compreende outros aminoácidos livres.

22. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica é estéril.

23. Formulação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizada pelo fato de que a formulação farmacêutica é formulada para administração por via entérica, pulmonar, inalatória, intranasal ou sublingual.

24. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 23, caracterizada pelo fato de que é para uso como um medicamento.

25. Formulação, de acordo com a reivindicação 46, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de fibrose cística.

26. Uso de uma formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de fibrose cística.

27. Método para tratar um sujeito que sofre de fibrose cística, o método caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito que sofre de fibrose cística a formulação conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 23, em que a administração reduz pelo menos um sintoma de fibrose cística.

28. Formulação para uso, uso ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 27, caracterizado pelo fato de que o sujeito expressa CFTR de tipo selvagem.

29. Formulação para uso, uso ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 28, caracterizado pelo fato de que o sujeito possui uma mutação no gene CFTR.

30. Formulação para uso, uso ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 29, caracterizado pelo fato de que o sujeito expressa CFTR de tipo selvagem e CFTR mutante.

31. Formulação para uso, uso ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 30, caracterizado pelo fato de que o sujeito sofre de fibrose cística em que uma proteína CFTR que é pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 99,5% idêntica à sequência de aminoácidos de CFTR de tipo selvagem está presente, em que a sequência de CFTR de tipo selvagem compreende a SEQ ID NO: 1.

32. Formulação para uso, uso ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 a 31, caracterizado pelo fato de que a mutação no CFTR compreende Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23, Phe508del ou uma combinação destes, em que X é qualquer aminoácido.

33. Formulação para uso, uso ou método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o CFTR é um mutante de CFTR Phe508del.

34. Formulação para uso, uso ou método de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 33, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de um agente terapêutico adicional.

35. Formulação para uso, uso ou método, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional compreende pelo menos um dentre uma droga de molécula pequena, droga proteica, droga de ácido nucleico ou uma combinação destes.

36. Formulação para uso, uso ou método, de acordo com a reivindicação 34 ou reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é pelo menos um dentre um potenciador CFTR, corretor CFTR, agente de leitura CFTR ou uma combinação destes.

37. Formulação para uso, uso ou método da reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que o agente terapêutico adicional é um potenciador CFTR.

38. Formulação para uso, uso ou método, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que o potenciador CFTR é ivacaftor.

39. Kit caracterizado pelo fato de que compreende: uma formulação farmacêutica conforme definida na reivindicação 22 ou reivindicação 23; e instruções para administrar a um sujeito ou contatar uma amostra biológica com a formulação.

40. Método para aumentar o número de proteínas reguladoras de condutância transmembrana de fibrose cística (CFTR) presentes na membrana plasmática de pelo menos uma célula, o método caracterizado pelo fato de que compreende: contatar a pelo menos uma célula com uma quantidade eficaz da formulação farmacêutica conforme definida na reivindicação 22 ou reivindicação 23, em que o contato promove pelo menos um dentre enovelamento de CFTR ou transporte de CFTR para a membrana plasmática, aumentando assim o número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula.

41. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o número de proteínas CFTR de tipo selvagem na membrana plasmática aumenta.

42. Método, de acordo com a reivindicação 40 ou reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o número de proteínas CFTR mutantes na membrana plasmática aumenta.

43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 42, caracterizado pelo fato de que o número de proteínas CFTR que são pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 99,5% idênticas à sequência de aminoácidos de CFTR do tipo selvagem na membrana plasmática aumenta, em que o CFTR do tipo selvagem compreende a SEQ ID NO: 1.

44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 43, caracterizado pelo fato de que uma ou mais das proteínas CFTR compreendem Gly542X, Gly551Asp, Arg553X, Arg117His, 120del23, Phe508del ou uma combinação destes, em que X é qualquer aminoácido.

45. Método, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que uma ou mais das proteínas CFTR compreendem a mutação Phe508del.

46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 45, caracterizado pelo fato de que o aumento do número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula é detectado pelo aumento da exportação de íon cloreto da célula.

47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 46, caracterizado pelo fato de que o aumento do número de proteínas CFTR presentes na membrana plasmática da célula está associado ao aumento da exportação de água da célula.

48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 47, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula epitelial.

49. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que a célula epitelial é uma célula epitelial do pulmão.

50. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a célula epitelial do pulmão é uma célula epitelial brônquica.

51. Método, de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a célula epitelial brônquica é isolada de um sujeito que sofre de fibrose cística.