ES2942310T3 - Inhibidores aza-heterobicíclicos de MAT2A y métodos de uso para el tratamiento del cáncer - Google Patents

Inhibidores aza-heterobicíclicos de MAT2A y métodos de uso para el tratamiento del cáncer Download PDF

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Abstract

La presente descripción proporciona compuestos según la Fórmula I y sus sales, tautómeros y/o isotopólogos farmacéuticamente aceptables como se describe en la descripción. Los compuestos son inhibidores de la isoforma 2A de metionina adenosiltransferasa (MAT2A). También se proporcionan composiciones farmacéuticas y métodos de uso de los compuestos para tratar cánceres, incluidos algunos cánceres en los que se elimina el gen que codifica la metiltioadenosina fosforilasa (MTAP). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores aza-heterobicíclicos de MAT2A y métodos de uso para el tratamiento del cáncer
ANTECEDENTES
La metionina adenosiltransferasa (MAT), que también se conoce como S-adenosilmetionina sintetasa, es una enzima celular que cataliza la síntesis de S-adenosil metionina (SAM o AdoMet) a partir de metionina y ATP; se considera que la catálisis es un paso limitante de la velocidad del ciclo de la metionina. SAM es el donante de propilamino en la biosíntesis de poliaminas, el principal donante de metilo para la metilación del ADN y está implicado en la transcripción de genes y la proliferación celular, así como en la producción de metabolitos secundarios.
Dos genes designados como MAT1A y MAT2A codifican dos isoformas de MAT catalíticas distintas, respectivamente. Un tercer gen, MAT2B, codifica una subunidad reguladora de MAT2A. MAT1A se expresa específicamente en el hígado adulto, mientras que MAT2A está ampliamente distribuido. Debido a que las isoformas de MAT difieren en la cinética catalítica y las propiedades reguladoras, las células que expresan MAT1A tienen niveles de SAM considerablemente más altos que las células que expresan MAT2A. Se ha descubierto que la hipometilación del promotor de MAT2A y la acetilación de histonas provocan una regulación por incremento de la expresión de MAT2A. Consultar, por ejemplo, M. Vázquez-Chantada et al., Gastroenterology 138 (2010) 1943-53; M. Frau et al., J. Hepatol. 59 (2013) 830-41; M. Frau et al., Hepatology 56 (2012) 165-75; y R.M. Pascale et al., Transí. Gastroenterol. Hepatol. 3 (2018) 36.
En el carcinoma hepatocelular (CHC), se produce la regulación por disminución de MAT1A y la regulación por incremento de MAT2A, lo que se conoce como cambio MAT1A:MAT2A. El cambio, acompañado de una regulación por incremento de MAT2B, da como resultado contenidos más bajos de SAM, lo que proporciona una ventaja de crecimiento para las células de hepatoma. Debido a que MAT2A desempeña un papel crucial en la facilitación del crecimiento de las células de hepatoma, es un objetivo para la terapia antineoplásica. Estudios recientes han demostrado que el silenciamiento mediante el uso de ARN de interferencia pequeño suprime sustancialmente el crecimiento e induce la apoptosis en las células de hepatoma. Consultar, por ejemplo, T. Li et al., J. Cancer 7(10) (2016) 1317-1327.
Algunas líneas de células cancerosas que son deficientes en MTAP son particularmente sensibles a la inhibición de MAT2A. Marjon et al. (Cell Reports 15(3) (2016) 574-587). La MTAP (metiltioadenosina fosforilasa) es una enzima ampliamente expresada en tejidos normales que cataliza la conversión de metiltioadenosina (MTA) en adenina y 5-metiltioribosa-1-fosfato. La adenina se recupera para generar monofosfato de adenosina y la 5-metiltioribosa-1-fosfato se convierte en metionina y formiato. Debido a esta vía de rescate, la MTA puede servir como una fuente alternativa de purina cuando se bloquea la síntesis de purina de novo, por ejemplo, con antimetabolitos, como la L-alanosina.
MAT2A está desregulado en cánceres adicionales que carecen de deleción de MTAP, incluyendo el carcinoma hepatocelular y la leucemia. J. Cai et al., Cancer Res. 58 (1998) 1444-1450; T.S. Jani et al., Cell. Res. 19 (2009) 358-369. El silenciamiento de la expresión de MAT2A a través de la interferencia de ARN da como resultado efectos antiproliferativos en varios modelos de cáncer. H. Chen et al., Gastroenterology 133 (2007) 207-218; P. Liu et al. Hepatol. Res. 37 (2007) 376-388.
Muchas células malignas humanas y murinas carecen de actividad de MTAP. La deficiencia de MTAP se encuentra no solo en células de cultivo de tejidos, sino que también está presente en leucemias primarias, gliomas, melanomas, cánceres de páncreas, cánceres de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cánceres de vejiga, astrocitomas, osteosarcomas, cánceres de cabeza y cuello, condrosarcomas mixoides, cánceres de ovario, cánceres de endometrio, cánceres de mama, sarcomas de tejidos blandos, linfoma no Hodgkin y mesoteliomas. El gen que codifica para MTAP humano se mapea en la región 9p21 en el cromosoma humano 9p. Esta región también contiene los genes supresores de tumores p16INK4A (también conocido como CDKN2A) y p15INK4B. Estos genes codifican p16 y p15, que son inhibidores de las quinasas cdk4 y cdk6 dependientes de ciclina D, respectivamente.
El transcrito de p16INK4A puede ser alternativamente un marco de lectura alternativo (ARF) cortado y empalmado en un transcrito que codifica p14ARF. p14ARF se une a MDM2 y previene la degradación de p53 (Pomerantz et al. (1998) Cell 92:713-723). La región cromosómica 9p21 es de interés porque con frecuencia se elimina homocigóticamente en una variedad de cánceres, incluyendo leucemias, NSLC, cánceres de páncreas, gliomas, melanomas y mesotelioma. Las deleciones a menudo inactivan más de un gen. Por ejemplo, Cairns et al. ((1995) Nat. Gen. 11:210-212) informó que después de estudiar más de 500 tumores primarios, casi todas las deleciones identificadas en tales tumores involucraban una región de 170 kb que contenía MTAP, p14ARF y P16INK4A. Carson et al. (WO 99/67634) informó que hay una correlación entre la etapa de desarrollo del tumor y la pérdida de homocigosidad del gen que codifica MTAP y el gen que codifica p16. Por ejemplo, se informó que la deleción del gen MTAP, pero no de p16INK4A, era indicativa de un cáncer en una etapa temprana de desarrollo, mientras que se informó que la deleción de los genes que codifican p16 y MTAP era indicativa de un cáncer en una etapa más avanzada. del desarrollo del tumor. En algunos pacientes con osteosarcoma, el gen MTAP estaba presente en el momento del diagnóstico pero se eliminó en un momento posterior (Garcia-Castellano et al., Clin.
Cáncer Res. 8(3) 2002782-787).
SUMARIO
La presente divulgación proporciona compuestos que inhiben MAT2A. Los compuestos y sus composiciones farmacéuticas son útiles en métodos para tratar varios tipos de cáncer, incluyendo aquellos que son refractarios a los tratamientos estándar, como cirugía, radioterapia, quimioterapia y terapia hormonal.
Por tanto, de acuerdo con algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula I o una de sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo:
Figure imgf000003_0001
En la fórmula I, L es O, S, NR o un enlace. R es H o alquilo C1-C6.
R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, carbociclilo C3-C6, -(alquil C1-C6)(carbociclilo C3-C6), y -(alquil C1-C6)(cicloalquenilo C3-C6) en donde cualquier alquilo en R1 es lineal o ramificado.
En una realización, R1 está opcionalmente sustituido con 1-6 halo o 1-6 deuterio.
Alternativamente, en una realización, cuando L es NR, entonces R y R1 en combinación con L representan un heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros (en donde 1-4 miembros del anillo se seleccionan independientemente de N,
O y S) opcionalmente sustituido por uno o más RA.
R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquinilo C2-C6, arilo C6-C10, carbociclilo C3-C6 , heteroarilo de 5 a 10 miembros (en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S), y heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalquilo se seleccionan independientemente de N, O y S). R2 y R3 están independientemente y opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes que se seleccionan del grupo que consiste en RA, ORA, halo,
-N=N-RA, -NRARB, -(alquilo C1-C6)NRARB, -C(O)ORA, -C(O)NRARB, -OC(O)RA, -Si(alquilo C rC 6 l)3 y -CN.
R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno o más halo, hidroxi o heterocicloalcoxi de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalcoxi se seleccionan independientemente de N, O, y S)), -O(alquilo C1-C6) (opcionalmente sustituido por uno o más halo), -OH, halo, -CN, -(alquilo C1-C6)NRARB, y -NRARB.
R5 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, halo, -CN y-NRCRD.
RA y RB se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, -CN, -hidroxi, oxo, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, -NH2, -S(O)0-2-(alquilo C1-C6), -S(O)0-2-(arilo C6-C10), -C(O)(alquilo C6), -C(O)(carbociclilo C3-C14), -carbociclilo C3-C14, -(alquilo C1-C6)(carbociclilo C3-C14), arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del heterocicloalquilo se seleccionan independientemente de N, O y S), y heteroarilo de 5 a 10 miembros
(en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O, y S).
Cada fracción alquilo, alcoxi, alquenilo, alquinilo, arilo, carbociclilo, heterocicloalquilo y heteroarilo de RA y
RB está opcionalmente sustituida con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en deuterio, hidroxi, halo, -NR'2 (en donde cada R' se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 , arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del anillo se seleccionan independientemente de N,
O y S), y heteroarilo de 5 a 10 miembros (en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S)), -NHC(O)(Oalquilo C1-C6), -NO2, -CN, oxo, -C(O)OH, -C(O)O(alquilo C1-C6), -alquilo C1-C6(alcoxi C1-C6), -C(O)NH2 , alquilo C1-C6, -C(O)alquilo C1-C6, -Oalquilo C1-C6 , -Si(alquilo C1-C6)3, -S(O)0-2 -(alquilo C1-C6), arilo C6-C10, -(alquilo C1-C6)(arilo C6-C10), heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterociclo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del heterociclo se seleccionan independientemente de N,
O y S), y -O(arilo C6-C14). Cada sustituyente alquilo, alquenilo, arilo y heterocicloalquilo en RA y RB está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en deuterio, hidroxi, -Oalquilo C1-C6 , halo, -NH2 , -(alquilo Ci -C6)NH2 , -C(O)OH, CN y oxo.
RC y RD se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-C6.
La divulgación proporciona en otra realización una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo como se describe en la presente, y un portador farmacéuticamente aceptable. Las referencias a los métodos de tratamiento en los párrafos posteriores de esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en métodos de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).
En otra realización, la divulgación proporciona un método para tratar un cáncer en un sujeto que lo padece, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto inhibidor de MAT2A como se describe en la presente.
Otra realización más de la divulgación es un método para inhibir la síntesis de S-adenosil metionina (SAM) en una célula, que comprende introducir en la célula una cantidad eficaz de un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo, como se describe en la presente.
La divulgación, en otra realización, se refiere a un método para inhibir la síntesis de S-adenosil metionina (SAM) en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de por lo menos un compuesto o una sal, tautómero y/o isotopólogo del mismo como se describe en la presente.
En una realización, la divulgación proporciona un método para tratar un cáncer en un sujeto que lo padece, en donde el cáncer se caracteriza por una reducción o ausencia de la expresión del gen de la metiltioadenosina fosforilasa (MTAP), la ausencia del gen MTAP o la función reducida de proteína MTAP, en comparación con los cánceres en los que el gen o la proteína MTAP está presente y/o en pleno funcionamiento, el método comprendiendo administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo, como se describe en la presente.
La divulgación también proporciona en otra realización un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo, como se describe en la presente, para inhibir la síntesis de S-adenosil metionina (SAM).
En otra realización más, la divulgación proporciona un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo, como se describe en la presente, para su uso en el tratamiento de un cáncer en un sujeto que lo padece.
La divulgación también proporciona el uso de un compuesto como se describe en la presente, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
Los compuestos descritos en la presente son inhibidores de MAT2A. Por lo tanto, la presente divulgación se refiere no solo a tales compuestos de conformidad con la Fórmula I, sino también a sus composiciones farmacéuticas, tautómeros e isotopólogos. Los compuestos y composiciones son útiles en el tratamiento de cánceres. Algunos cánceres incluyen varios cánceres con deleción de MTAP, es decir, aquellos cánceres caracterizados por la ausencia o deleción del gen/proteína MTAP o función reducida de la proteína MTAP.
Definiciones
"Alquilo" se refiere a grupos hidrocarbilo de cadena lineal y ramificada, de 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono. Por ejemplo, un alquilo puede tener de 1 a 10 átomos de carbono o de 1 a 6 átomos de carbono. El alquilo ejemplar incluye grupos alquilo de cadena lineal como metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo y similares, y también incluye isómeros de cadena ramificada de grupos alquilo de cadena lineal, por ejemplo sin limitación, -CH(CH3)2, -Ch (CH3)(CH2CH3), -CH(CH2CH3)2 , -C(CH3)3 , -C(CH2CH3)3, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH(CH2CH3)2, -CH2C(CH3)3, -CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH3)2, -CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH2CH3)2, -CH2CH2C(CH3)3, -CH2CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2, y similares. Por tanto, los grupos alquilo incluyen grupos alquilo primarios, grupos alquilo secundarios y grupos alquilo terciarios. Un grupo alquilo puede estar no sustituido o estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe a continuación en la presente.
La frase "alquilo sustituido" se refiere a alquilo sustituido en una o más posiciones, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o incluso 6 posiciones, cuyos sustituyentes están unidos a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, con sustitución como se describe en la presente. "Alquilo opcionalmente sustituido" se refiere a alquilo o alquilo sustituido.
Cada uno de los términos "halógeno", "haluro" y "halo" se refiere a -F, -Cl, -Br o -I.
El término "alquenilo" se refiere a grupos hidrocarbilo de cadena lineal o ramificada que incluyen de 2 a aproximadamente 20 átomos de carbono que tienen 1-3, 1-2 o por lo menos un enlace doble de carbono a carbono. Un grupo alquenilo puede estar no sustituido u opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe a continuación en la presente.
"Alquenilo sustituido" se refiere a alquenilo sustituido en 1 o más, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o incluso 6 posiciones, cuyos sustituyentes están unidos a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, con sustitución como se describe en la presente. "Alquenilo opcionalmente sustituido" se refiere a alquenilo o alquenilo sustituido.
"Alquino o "alquinilo" se refiere a un hidrocarburo insaturado de cadena lineal o ramificada que tiene el número indicado de átomos de carbono y por lo menos un enlace triple. Los ejemplos de un grupo alquinilo incluyen, pero no se limitan a, acetileno, propino, 1-butino, 2-butino, 1-pentino, 2-pentino, 1-hexino, 2-hexino, 3-hexino, 1-heptino, 2 -heptino, 3-heptino, 1-octino, 2-octino, 3-octino y 4-octino. Un grupo alquinilo puede estar no sustituido u opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe a continuación en la presente.
"Alquinilo sustituido" se refiere a un alquinilo sustituido en 1 o más, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o incluso 6 posiciones, cuyos sustituyentes están unidos a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, con sustitución como se describe en la presente. "Alquinilo opcionalmente sustituido" se refiere a alquinilo o alquinilo sustituido.
El término "alcoxi" se refiere a un grupo -O-alquilo que tiene el número indicado de átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo alcoxi (C1-C6) incluye -O-metilo, -O-etilo, -O-propilo, -O-isopropilo, -O-butilo, -O-sec-butilo, -O-terc. -butilo, -O-pentilo, -O-isopentilo, -O-neopentilo, -O-hexilo, -O-isohexilo y -O-neohexilo.
El término "carbociclilo" se refiere a un sistema de anillo monocíclico, bicíclico, tricíclico o policíclico de 3 a 14 miembros, que es o saturado, como "cicloalquilo", o insaturado, como "cicloalquenilo". El término "cicloalquenilo" se refiere específicamente a alquenilo cíclico, como cicloalquenilo C3-C6. El carbociclilo puede estar unido a través de cualquier átomo. Carbociclilo, por ejemplo, también contempla anillos fusionados en donde, por ejemplo, un carbociclilo está fusionado con un anillo arilo o heteroarilo como se define en la presente. Los ejemplos representativos de carbociclilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, fenilo, naftilo, antracilo, benzofuranilo y benzotiofenilo. Un grupo carbociclilo puede estar no sustituido o estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe a continuación en la presente.
"Carbociclilo sustituido" se refiere a carbociclilo sustituido en 1 o más, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o incluso 6 posiciones, cuyos sustituyentes están unidos a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, con sustitución como se describe en la presente. "Carbociclilo opcionalmente sustituido" se refiere a carbociclilo o carbociclilo sustituido.
"Arilo", cuando se usa solo o como parte de otro término, significa un grupo aromático carbocíclico, ya esté fusionado o no, que tenga el número de átomos de carbono designado o, si no se designa ningún número, hasta 14 átomos de carbono, como un arilo C6-C14. Los grupos arilo particulares son fenilo, naftilo, bifenilo, fenantrenilo, naftacenilo y similares (consultar, por ejemplo, Lang's Handbook of Chemistry (Dean, JA, ed) 13a ed. Tabla 7-2 [1985]). Un arilo particular es fenilo. "Arilo" también incluye sistemas de anillos aromáticos que están opcionalmente fusionados con un anillo carbociclilo, como se define en la presente. Un grupo arilo puede estar no sustituido o estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe a continuación en la presente.
Un "arilo sustituido" es un arilo que está independientemente sustituido con uno o más sustituyentes unidos a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, en donde los sustituyentes son como se describe en la presente. "Arilo opcionalmente sustituido" se refiere a arilo o arilo sustituido.
El término "heteroátomo" se refiere a N, O y S. Los compuestos que contienen átomos de N o S pueden oxidarse opcionalmente a los correspondientes compuestos de N-óxido, sulfóxido o sulfona.
"Heteroarilo", solo o en combinación con cualquier otra fracción descrita en la presente, se refiere a una estructura de anillo aromático monocíclico que contiene de 5 a 10, como 5 o 6 átomos en el anillo, o un grupo aromático bicíclico que tiene de 8 a 10 átomos, que contiene uno o más, como 1-4, 1-3 o 1-2 heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en O, S y N. También se pretende que el heteroarilo incluya S o N oxidado, como sulfinilo, sulfonilo y N-óxido de un nitrógeno de anillo terciario. Un carbono o heteroátomo es el punto de unión de la estructura del anillo de heteroarilo de tal manera que se produzca un compuesto estable. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, piridinilo, piridazinilo, pirazinilo, quinoxalilo, indolizinilo, benzo[b]tienilo, quinazolinilo, purinilo, indolilo, quinolinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, tienilo, isoxazolilo, oxatiadiazolilo, isotiazolilo, tetrazolilo, imidazolilo, triazolilo, furanilo, benzofurilo e indolilo. Un grupo heteroarilo puede estar no sustituido u opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe a continuación en la presente.
Un "heteroarilo sustituido" es un heteroarilo que está independientemente sustituido, a menos que se indique lo contrario, con uno o más, por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5, también 1, 2 o 3 sustituyentes, también 1 sustituyente, unido en cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, en donde los sustituyentes son como se describe en la presente. "Heteroarilo opcionalmente sustituido" se refiere a heteroarilo o heteroarilo sustituido.
"Heterocicloalquilo" significa un sistema de anillo monocíclico, bicíclico, tricíclico o policíclico, no aromático, saturado o insaturado, que tiene de 3 a 14, como de 3 a 6, átomos en los que de 1 a 4 átomos de carbono en el anillo se reemplazan por heteroátomos de O, S o N. Un heterocicloalquilo se fusiona opcionalmente con arilo o heteroarilo de 5-6 miembros del anillo, e incluye S o N oxidado, como sulfinilo, sulfonilo y N-óxido de un nitrógeno del anillo terciario. El punto de unión del anillo heterocicloalquilo está en un carbono o heteroátomo de tal manera que se retiene un anillo estable. Los ejemplos de grupos heterocicloalquilo incluyen, sin limitación, morfolino, tetrahidrofuranilo, dihidropiridinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, piperazinilo, dihidrobenzofurilo y dihidroindolilo. Un grupo heterocicloalquilo puede estar no sustituido u opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe en la presente a continuación.
"Heterocicloalquilo opcionalmente sustituido" indica un heterocicloalquilo que está sustituido con de 1 a 3 sustituyentes, por ejemplo, 1, 2 o 3 sustituyentes, unidos a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, en donde los sustituyentes son como se describe en la presente.
"Heterocicloalcoxi" se refiere a un grupo -O-heterocicloalquilo que tiene el número indicado de átomos miembros en un sistema de anillo monocíclico, bicíclico, tricíclico o policíclico y donde de 1 a 4 átomos de carbono en el anillo se reemplazan por heteroátomos de O, S o N.
"Heterocicloalcoxi opcionalmente sustituido" se refiere a un grupo heterocicloalcoxi que está sustituido con de 1 a 3 sustituyentes, por ejemplo, 1, 2 o 3 sustituyentes, unidos a cualquier átomo disponible para producir un compuesto estable, en donde los sustituyentes son como se describe en la presente.
El término "nitrilo" o "ciano" puede usarse indistintamente y se refiere a un grupo -CN que está unido a un átomo de carbono de un anillo de heteroarilo, un anillo de arilo y un anillo de heterocicloalquilo.
El término "oxo" se refiere a un átomo =O unido a una fracción saturada o insaturada. El átomo de O puede estar unido a un átomo de carbono, azufre o nitrógeno que sea parte de una fracción cíclica o acíclica.
Un "hidroxilo" o "hidroxi" se refiere a un grupo -OH.
El sustituyente -CO2H puede reemplazarse con reemplazos bioisostéricos como:
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y similares, donde R tiene la misma definición que RA como se define en la presente. Consultar, por ejemplo, THE PRACTICE OF MEDICINAL CHEMISTRY (Academic Press: New York, 1996), en la página 203.
Los compuestos descritos en la presente pueden existir en varias formas isoméricas, incluyendo isómeros configuracionales, geométricos y conformacionales, incluyendo, por ejemplo, conformaciones cis- o trans-. Los compuestos también pueden existir en una o más formas tautoméricas, incluyendo tanto tautómeros individuales como mezclas de tautómeros. Se pretende que el término "isómero" abarque todas las formas isoméricas de un compuesto de esta divulgación, incluyendo las formas tautoméricas del compuesto. Los compuestos de la presente divulgación también pueden existir en formas de cadena abierta o cicladas. En algunos casos, una o más de las formas cicladas pueden resultar de la pérdida de agua. La composición específica de las formas de cadena abierta y ciclada puede depender de cómo se aísle, almacene o administre el compuesto. Por ejemplo, el compuesto puede existir principalmente en forma de cadena abierta en condiciones ácidas pero ciclar en condiciones neutras. Todas las formas están incluidas en la divulgación.
Algunos compuestos descritos en la presente pueden tener centros asimétricos y, por lo tanto, existir en diferentes formas enantioméricas y diastereoisoméricas. Un compuesto de la divulgación puede estar en forma de un isómero óptico o un diastereoisómero. Por consiguiente, la divulgación abarca compuestos y sus usos como se describe en la presente en forma de sus isómeros ópticos, diastereoisómeros y mezclas de los mismos, incluyendo una mezcla racémica. Los isómeros ópticos de los compuestos de la divulgación pueden obtenerse mediante técnicas conocidas como síntesis asimétrica, cromatografía quiral, tecnología de lecho móvil simulado o mediante separación química de estereoisómeros mediante el empleo de agentes de resolución ópticamente activos.
A menos que se indique lo contrario, el término "estereoisómero" significa un estereoisómero de un compuesto que está sustancialmente libre de otros estereoisómeros de ese compuesto. Por tanto, un compuesto estereoméricamente puro que tenga un centro quiral estará sustancialmente libre del enantiómero opuesto del compuesto. Un compuesto estereoméricamente puro que tenga dos centros quirales estará sustancialmente libre de otros diastereoisómeros del compuesto. Un compuesto estereoméricamente puro típico comprende más de aproximadamente el 80% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 20% en peso de otros estereoisómeros del compuesto, por ejemplo más de aproximadamente el 90% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 10% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, o más de aproximadamente el 95% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 5% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, o más de aproximadamente el 97% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 3% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, o más de aproximadamente el 99% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente el 1% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto. El estereoisómero descrito anteriormente puede verse como una composición que comprende dos estereoisómeros que están presentes en sus respectivos porcentajes en peso descritos en la presente.
Como se usa en la presente, el término "isotopólogo" es un compuesto enriquecido isotópicamente. Como se usa en la presente, y a menos que se indique lo contrario, el término "enriquecido isotópicamente" se refiere a un átomo que tiene una composición isotópica distinta de la composición isotópica abundante de manera natural de ese átomo. "Isotópicamente enriquecido" también puede referirse a un compuesto que contiene por lo menos un átomo que tiene una composición isotópica diferente a la composición isotópica natural de ese átomo. En un isotopólogo, el "enriquecimiento isotópico" se refiere al porcentaje de incorporación de una cantidad de un isótopo específico de un átomo dado en una molécula en lugar de la composición isotópica natural de ese átomo. Por ejemplo, un enriquecimiento de deuterio del 1% en una posición determinada significa que el 1% de las moléculas de una muestra dada contienen deuterio en la posición especificada. Debido a que la distribución que se produce de manera natural del deuterio es de aproximadamente el 0,0156%, el enriquecimiento del deuterio en cualquier posición en un compuesto sintetizado usando materiales de partida no enriquecidos es de aproximadamente el 0,0156%.
Por tanto, como se usa en la presente, y a menos que se indique lo contrario, el término "factor de enriquecimiento isotópico" se refiere a la relación entre la composición isotópica y la composición isotópica natural de un isótopo especificado.
Con respecto a los compuestos proporcionados en la presente, cuando se designa que la posición de un átomo particular tiene deuterio o "D" o "H2", se entiende que la abundancia de deuterio en esa posición es sustancialmente mayor que la abundancia natural del deuterio, que es de aproximadamente el 0,015%. Una posición que se ha designado que tiene deuterio típicamente tiene un factor de enriquecimiento isotópico mínimo de, en realizaciones particulares, por lo menos 1000 (15% de incorporación de deuterio), por lo menos 2000 (30% de incorporación de deuterio), por lo menos 3000 (45% de incorporación de deuterio), por lo menos 3000 (45% de incorporación de deuterio), por lo menos 3500 (52,5% de incorporación de deuterio), por lo menos 4000 (60% de incorporación de deuterio), por lo menos 4500 (67,5% de incorporación de deuterio), por lo menos 5000 (75% de incorporación de deuterio), por lo menos 5500 (82,5% de incorporación de deuterio), por lo menos 6000 (90% de incorporación de deuterio), por lo menos 6333,3 (95% de incorporación de deuterio), por lo menos 6466,7 (97% de incorporación de deuterio), por lo menos 6600 (99% de incorporación de deuterio), o por lo menos 6633,3 (99,5% de incorporación de deuterio) en cada átomo de deuterio designado. El enriquecimiento isotópico y el factor de enriquecimiento isotópico de los compuestos proporcionados en la presente pueden determinarse usando métodos analíticos convencionales conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo espectrometría de masas y espectroscopia de resonancia magnética nuclear.
Si hay una discrepancia entre una estructura representada y un nombre dado a esa estructura, entonces prevalece la estructura representada. Además, si la estereoquímica de una estructura o una parte de una estructura no se indica, por ejemplo, con líneas en negrita o discontinuas, debe interpretarse que la estructura o parte de la estructura abarca todos los estereoisómeros de la misma. En algunos casos, sin embargo, donde existe más de un centro quiral, las estructuras y los nombres pueden representarse como enantiómeros individuales para ayudar a describir la estereoquímica relativa. Los expertos en la técnica de la síntesis orgánica sabrán si los compuestos se preparan como enantiómeros individuales a partir de los métodos usados para prepararlos.
Como se usa en la presente, y a menos que se especifique lo contrario, el término "compuesto" es inclusivo ya que abarca un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero, isotopólogo y/o tautómero del mismo. Así, por ejemplo, un compuesto de Fórmula I o II incluye una sal farmacéuticamente aceptable de un isotopólogo del compuesto.
En esta descripción, una "sal farmacéuticamente aceptable" es una sal de ácido o base orgánica o inorgánica farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la divulgación. Las sales farmacéuticamente aceptables representativas incluyen, por ejemplo, sales de metales alcalinos, sales alcalinotérreas, sales de amonio, sales solubles e insolubles en agua, como sales de acetato, amsonato (4,4-diaminoestilbeno-2,2-disulfonato), bencenosulfonato, benzonato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, butirato, calcio, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, clavulariato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexafluorofosfato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, bromuro de metilo, nitrato de metilo, sulfato de metilo, mucato, napsilato, nitrato, sal amónica de N-metilglucamina, 3-hidroxi-2-naftoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato (1,1-meteno-bis-2-hidroxi-3-naftoato, einbonato), pantotenato, fosfato/difosfato, picrato, poligalacturonato, propionato, p-toluenosulfonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, sulfosalicilato, suramato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietioduro y valerato. Una sal farmacéuticamente aceptable puede tener más de un átomo cargado en su estructura. En este caso, la sal farmacéuticamente aceptable puede tener múltiples contraiones. Por tanto, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener uno o más átomos cargados y/o uno o más contraiones.
Los términos "tratar", "que trata" y "tratamiento" se refieren a la mejora o erradicación de una enfermedad o los síntomas asociados con una enfermedad. En ciertas realizaciones, tales términos se refieren a minimizar la propagación o el empeoramiento de la enfermedad resultante de la administración de uno o más agentes profilácticos o terapéuticos a un paciente con dicha enfermedad.
Los términos "prevenir", "que previene" y "prevención" se refieren a la prevención de la aparición, recurrencia o propagación de la enfermedad en un paciente como resultado de la administración de un agente profiláctico o terapéutico.
El término "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto de la divulgación u otro ingrediente activo suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico o profiláctico en el tratamiento o prevención de una enfermedad o para retrasar o minimizar los síntomas asociados con una enfermedad. Además, una cantidad terapéuticamente eficaz con respecto a un compuesto de la divulgación significa esa cantidad de agente terapéutico solo, o en combinación con otras terapias, que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o prevención de una enfermedad. Usado en relación con un compuesto de la divulgación, el término puede abarcar una cantidad que mejora la terapia general, reduce o evita los síntomas o las causas de la enfermedad, o potencia la eficacia terapéutica o provoca sinergias con otro agente terapéutico.
Un "paciente" o sujeto" incluye un animal, como un humano, una vaca, un caballo, una oveja, un cordero, un cerdo, un pollo, un pavo, una codorniz, un gato, un perro, un ratón, una rata, un conejo o una cobaya. De acuerdo con algunas realizaciones, el animal es un mamífero como un no primate y un primate (por ejemplo, un mono y un humano). En una realización, un paciente es un humano como un bebé, niño, adolescente o adulto humano.
"Inhibidor" significa un compuesto que previene o reduce la cantidad de síntesis de SAM. En una realización, un inhibidor se une a MAT2A. En una realización, el inhibidor inhibe la función de MAT2A.
COMPUESTOS
Como se ha descrito de manera general con anterioridad, la presente divulgación proporciona compuestos y sales farmacéuticamente aceptables, tautómeros y/o isotopólogos de los mismos, en donde los compuestos se ajustan a la fórmula I.
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En la Fórmula I, L es O, S, NR o un enlace. R es H o alquilo C1-C6.
R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, carbociclilo C3-C6, -(alquil C1-C6)(carbociclilo C3-C6), y -(alquil C1-C6)(cicloalquenilo C3-C6) en donde cualquier alquilo en R1 es lineal o ramificado.
En una realización, R1 está opcionalmente sustituido con 1-6 halo o 1-6 deuterio.
Alternativamente, en una realización, cuando L es NR, entonces R y R1 en combinación con L representan un heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros (en donde 1-4 miembros del anillo se seleccionan independientemente de N,
O y S) opcionalmente sustituido por uno o más RA.
R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquinilo C2-C6, arilo C6-C10, carbociclilo C3-C6 , heteroarilo de 5 a 10 miembros (en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S), y heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalquilo se seleccionan independientemente de N, O y S). R2 y R3 están independientemente y opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes que se seleccionan del grupo que consiste en RA, ORA, halo,
-N=N-RA, -NRARB, -(alquilo C1-C6)NRARB, -C(O)ORA, -C(O)NRARB, -OC(O)RA, -Si(alquilo C ^ l ^ y -CN.
R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno o más halo, hidroxi o heterocicloalcoxi de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalcoxi se seleccionan independientemente de N, O, y S)), -O(alquilo C1-C6) (opcionalmente sustituido por uno o más halo), -OH, halo, -CN, -(alquilo C1-C6)NRARB, y -NRARB.
R5 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, halo, -CN y-NRCRD
RA y RB se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, -CN, -hidroxi, oxo, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, -NH2, -S(O)0-2-(alquilo C1-C6), -S(O)0-2-(arilo C6-C10), -C(O)(alquilo C6), -C(O)(carbociclilo C3-C14), -carbociclilo C3-C14, -(alquilo C1-C6)(carbociclilo C3-C14), arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del heterocicloalquilo se seleccionan independientemente de N, O y S), y heteroarilo de 5 a 10 miembros
(en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O, y S).
Cada fracción alquilo, alcoxi, alquenilo, alquinilo, arilo, carbociclilo, heterocicloalquilo y heteroarilo de RA y
RB está opcionalmente sustituida con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en deuterio, hidroxi, halo, -NR'2 (en donde cada R' se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 , arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del anillo se seleccionan independientemente de N,
O y S), y heteroarilo de 5 a 10 miembros (en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S)), -NHC(O)(Oalquilo C1-C6), -NO2, -CN, oxo, -C(O)OH, -C(O)O(alquilo C1-C6), -alquilo C1-C6(alcoxi C1-C6), -C(O)NH2 , alquilo C1-C6, -C(O)alquilo C1-C6, -Oalquilo C1-C6 , -Si(alquilo C1-C6)3, -S(O)0-2 -(alquilo C1-C6), arilo C6-C10, -(alquilo C1-C6)(arilo C6-C10), heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterociclo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del heterociclo se seleccionan independientemente de N,
O y S), y -O(arilo C6-C14). Cada sustituyente alquilo, alquenilo, arilo y heterocicloalquilo en RA y RB está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en deuterio, hidroxi, -Oalquilo Ci-Ca, halo, -NH2 , -(alquilo Ci -C6)NH2 , -C(O)OH, CN y oxo.
RC y RD se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-C6.
En algunas realizaciones, R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno o más halo, hidroxi o heterocicloalcoxi de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalcoxi se seleccionan independientemente de N, O y S)), -O(alquilo C1 -Ca), -(alquilo C1-Ca)NRARB, y -NRARB (en donde RA y RB se seleccionan independientemente de H y alquilo C1-Ca); y R5 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-Ca, alcoxi C1-Ca y -NRCRD.
En otras realizaciones, por lo menos uno de R4 y R5 es H. Por ejemplo, R4 es H o R5 es H. Alternativamente, cada uno de R4 y R5 es H.
Opcionalmente, en combinación con cualquier otra realización descrita en la presente, varias realizaciones proporcionan un compuesto de Fórmula I en el que R2 es arilo Ca-C10 opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido. En una realización, R2 es arilo Ca-C10 opcionalmente sustituido, como fenilo opcionalmente sustituido. En otra realización, R2 es heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido, y en donde 1 miembro del anillo es N. Por ejemplo, R2 es un heteroarilo de 5 o a miembros opcionalmente sustituido, o un heteroarilo de a miembros opcionalmente sustituido, un ejemplo del cual es piridilo opcionalmente sustituido.
En algunas realizaciones, opcionalmente en combinación con cualquier otra descrita en la presente, R3 es heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido. Los ejemplos no limitativos de R3 se seleccionan del grupo que consiste en benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, benzoxazolilo, piridinilo, piridinonilo, piridazinilo, bencimidazolilo, benzotriazolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinolinilo, quinazolinilo, imidazopiridinilo, pirazolopiridinilo, triazolopiridinilo, cinolinilo, isoxazolilo, pirazolilo, benzofuranilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzodioxinilo y tetrahidrobenzodioxinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido.
En otras realizaciones, R3 es arilo Ca-C10 opcionalmente sustituido. Un ejemplo es fenilo opcionalmente sustituido.
La divulgación proporciona algunos compuestos de Fórmula I en los que R2 es fenilo opcionalmente sustituido y R3 es heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido.
En varias realizaciones, la divulgación proporciona un compuesto de Fórmula I en donde L es O o NR. Además, de acuerdo con realizaciones adicionales, R1 es alquilo C1-Ca opcionalmente sustituido o carbociclilo C3-Ca opcionalmente sustituido. Un ejemplo de R1 es alquilo C1-C3 que está opcionalmente sustituido con 1-3 F.
Un subconjunto de compuestos de Fórmula I, de acuerdo con una realización, son aquellos en los que L es O o NR y R es H; R1 es alquilo C-C3 que está opcionalmente sustituido con 1-3 F; R2 es heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido (en donde 1 miembro del heterocicloalquilo o heteroarilo es N) o arilo Ca-C10 opcionalmente sustituido; R3 es heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido en donde de 1 a 3 miembros del heterocicloalquilo o heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S; y cada uno de R4 y R5 es H. En algunas realizaciones, L es NR.
En varias realizaciones, la divulgación proporciona ejemplos específicos de compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables, tautómeros y/o isotopólogos, como se expone en la Tabla 1 a continuación: Tabla 1
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En otras varias realizaciones, la divulgación proporciona ejemplos específicos adicionales de compuestos de Fórmula I y sus sales farmacéuticamente aceptables, tautómeros y/o isotopólogos, como se expone en la Tabla 2 a continuación.
Tabla 2
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continuación
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continuación
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COMPOSICION FARMACEUTICA
La divulgación también proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos de acuerdo con la Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero, tautómero y/o isotopólogo, mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición contiene además, de acuerdo con las prácticas aceptadas de composición farmacéutica, uno o más agentes terapéuticos adicionales, excipientes farmacéuticamente aceptables, diluyentes, adyuvantes, estabilizantes, emulsionantes, conservantes, colorantes, tampones, agentes que imparten sabor.
En una realización, la composición farmacéutica comprende un compuesto seleccionado de los ilustrados en la Tabla 1 o una sal farmacéuticamente aceptables, estereoisómero, tautómero y/o isotopólogo del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
La composición farmacéutica de la presente divulgación se formula, dosifica y administra de una manera consistente con la buena práctica médica. Los factores a considerar en este contexto incluyen el trastorno particular que se esté tratando, el sujeto particular que se esté tratando, la condición clínica del sujeto, la causa del trastorno, el sitio de administración del agente, el método de administración, el programa de administración, y otros factores conocidos por los practicantes médicos.
La “cantidad terapéuticamente eficaz” de un compuesto (o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero, tautómero y/o isotopólogo del mismo que se administre se rige por tales consideraciones, y es la cantidad mínima necesaria para ejercer un efecto citotóxico sobre un cáncer, o para inhibir la actividad de MAT2A, o ambos. Dicha cantidad puede estar por debajo de la cantidad que es tóxica para las células normales, o para el sujeto en su totalidad. Generalmente, la cantidad inicial terapéuticamente eficaz de un compuesto (o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo) de la presente divulgación que se administra está en el intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 200 mg/kg o de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal del paciente al día, siendo el intervalo inicial típico de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 15 mg/kg/día. Las formas de dosificación unitarias orales, como comprimidos y cápsulas, pueden contener de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg de un compuesto (o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo) de la presente divulgación. En otra realización, tales formas de dosificación contienen de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 500 mg de un compuesto (o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo) de la presente divulgación. En otra realización más, tales formas de dosificación contienen de aproximadamente 25 mg a aproximadamente 200 mg de un compuesto (o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo) de la presente divulgación. En otra realización más, tales formas de dosificación contienen de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 100 mg de un compuesto (o una sal, estereoisómero o tautómero farmacéuticamente aceptable del mismo) de la presente divulgación. En una realización adicional, tales formas de dosificación contienen de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 50 mg de un compuesto (o una sal, estereoisómero o tautómero farmacéuticamente aceptable del mismo) de la presente divulgación.
Las composiciones pueden administrarse por vía oral, tópica, parenteral, por inhalación o pulverización o por vía rectal en formulaciones unitarias de dosificación. El término parenteral como se usa en la presente incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión.
Las composiciones orales adecuadas de acuerdo con la divulgación incluyen, sin limitación, comprimidos, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas, jarabes o elixires.
Dentro del alcance de la divulgación se incluyen las composiciones farmacéuticas adecuadas para dosis unitarias individuales que comprenden un compuesto de la divulgación o su estereoisómero, sal o tautómero farmacéuticamente aceptable y un portador farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones adecuadas para uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas. Por ejemplo, las formulaciones líquidas de los compuestos contienen uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes para proporcionar preparaciones farmacéuticamente apetecibles del inhibidor de MAT2A.
Para las composiciones de comprimidos, se usa un compuesto de la presente divulgación mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos para la fabricación de comprimidos. Los ejemplos de tales excipientes incluyen, sin limitación, diluyentes inertes como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y disgregación, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o acacia, y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar sin recubrir o pueden recubrirse mediante técnicas de recubrimiento conocidas para retrasar la disgregación y la absorción en el tracto gastrointestinal y, por lo tanto, proporcionar una acción terapéutica sostenida durante un período de tiempo deseado. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo temporal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.
Las formulaciones para uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Para suspensiones acuosas, un compuesto de la presente divulgación se mezcla con excipientes adecuados para mantener una suspensión estable. Los ejemplos de tales excipientes incluyen, sin limitación, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidropropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma acacia.
Las suspensiones orales también pueden contener agentes dispersantes o humectantes, como fosfátidos de origen natural, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo, estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol como monooleato de polioxietilensorbitol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilensorbitán. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes, por ejemplo p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes aromatizantes, y uno o más agentes edulcorantes como sacarosa y sacarina.
Las suspensiones oleosas pueden formularse suspendiendo un compuesto de la presente divulgación en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico.
Pueden añadirse agentes edulcorantes como los expuestos anteriormente y agentes aromatizantes para proporcionar preparaciones orales apetecibles. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante como el ácido ascórbico.
Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan un compuesto de la presente divulgación mezclado con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes y los agentes de suspensión adecuados se ejemplifican mediante los ya mencionados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes y colorantes.
Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo parafina líquida o mezclas de estos. Los agentes emulsionantes adecuados pueden ser gomas de origen natural, por ejemplo, goma de acacia o goma de tragacanto, fosfátidos de origen natural, por ejemplo, soja, lecitina y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol, anhídridos, por ejemplo, monooleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de polioxietilensorbitán. Las emulsiones también pueden contener agentes edulcorantes y aromatizantes.
Los jarabes y elixires pueden formularse con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Tales formulaciones también pueden contener un demulcente, un conservante y agentes aromatizantes y colorantes. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de un inyectable estéril, una suspensión acuosa o una suspensión oleaginosa. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con la técnica conocida usando los agentes dispersantes o humectantes y los agentes de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse están el agua, la solución de Ringer y la solución isotónica de cloruro de sodio. Además, como solvente o medio de suspensión se emplean convencionalmente aceit4es fijos estériles. Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo suave, incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos como el ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables.
Los compuestos de Fórmula general I también pueden administrarse en forma de supositorios para la administración rectal del fármaco. Estas composiciones pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal y, por lo tanto, se derretirá en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales son manteca de cacao y polietilenglicoles.
Las composiciones para administración parenteral se administran en un medio estéril. Dependiendo del vehículo usado y la concentración del fármaco en la formulación, la formulación parenteral puede ser o una suspensión o una solución que contiene el fármaco disuelto. También pueden añadirse a las composiciones parenterales adyuvantes como anestésicos locales, conservantes y agentes tamponadores.
MÉTODOS DE USO
La enzima MAT2A cataliza la síntesis de S-adenosil metionina (SAM) a partir de metionina y ATP en las células. Por consiguiente, en otra realización de la presente divulgación se proporciona un método para inhibir en una célula la síntesis de SAM que comprende introducir en la célula una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero, tautómero y/o isotopólogo del mismo. En una realización, la célula está en un sujeto. En algunas realizaciones, se usa un compuesto de Fórmula I para identificar otros compuestos que son inhibidores de MAT2A, por ejemplo, en un ensayo competitivo para unirse a MAT2A o para inhibir la producción de SAM. La unión a MAT2A o la inhibición de la producción de SAM por un compuesto de prueba que tiene un marcador detectable puede medirse con y sin la presencia de un compuesto sin marcar de la presente divulgación.
La presente divulgación también proporciona un método para tratar un cáncer en un sujeto que padece el mismo, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto inhibidor de MAT2A como se describe en la presente. En algunas realizaciones, el inhibidor de MAT2A es un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, opcionalmente en combinación con cualquier otra realización, el sujeto es un mamífero, como un humano.
En una realización, el cáncer es un cáncer con MTAP eliminado. En algunas realizaciones, el cáncer es uno seleccionado del grupo que consiste en mesotelioma, neuroblastoma, carcinoma de intestino como carcinoma de recto, carcinoma de colon, carcinoma de poliposis familiarmente adenomatoso y cáncer colorrectal hereditario sin poliposis, carcinoma de esófago, carcinoma labial, carcinoma de laringe, carcinoma de hipofaringe, carcinoma de lengua, carcinoma de glándulas salivales, carcinoma gástrico, adenocarcinoma, carcinoma medular de tiroides, carcinoma papilar de tiroides, carcinoma renal, carcinoma de parénquima renal, carcinoma de ovario, carcinoma de cuello uterino, carcinoma del cuerpo uterino, carcinoma de endometrio, carcinoma de corion, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, carcinoma de vejiga, carcinoma de testículo, carcinoma de mama, carcinoma urinario, melanoma, tumores cerebrales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma, leucemia linfática aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), carcinoma hepatocelular, carcinoma de vesícula biliar, carcinoma bronquial, carcinoma de pulmón de células pequeñas (SCLC), carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), mieloma múltiple (MM), basaloma, teratoma, retinoblastoma, melanoma coroideo, seminoma, rabdomiosarcoma, osteosarcoma, condrosarcoma, miosarcoma, liposarcoma, fibrosarcoma, sarcoma de Ewing y plasmocitoma.
En otras realizaciones, el cáncer se selecciona de cáncer de pulmón, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células bronquioloalviolares, cáncer de huesos, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de recto cáncer, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cuello uterino, carcinoma de vagina, carcinoma de vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula suprarrenal, sarcoma de tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o de uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, mesotelioma, cáncer hepatocelular, cáncer biliar, leucemia crónica o aguda, linfoma linfocítico, neoplasias del sistema nervioso central (SNC), tumores del eje espinal, glioma del tronco encefálico, glioblastoma multiforme, astrocitomas, schwannomas, ependimomas, meduloblastomas, meningiomas, carcinomas de células escamosas, adenomas pituitarios, incluyendo versiones resistentes y/o refractarias de cualquiera de los cánceres anteriores, y una combinación de uno o más de los cánceres anteriores.
En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en leucemia linfocítica aguda de células B (B-ALL), mesotelioma, linfoma, carcinoma pancreático, cáncer de pulmón, cáncer gástrico, cáncer de esófago, carcinoma de vejiga, cáncer de cerebro, cáncer de cabeza y cuello, melanoma y cáncer de mama.
En otras realizaciones, el cáncer de pulmón es cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma de células escamosas de pulmón.
En otras realizaciones, el cáncer de mama es cáncer de mama triple negativo (TNBC).
En otras realizaciones, el cáncer cerebral es un tumor cerebral seleccionado del grupo que consiste en glioma, glioblastoma, astrocitoma, meningioma, meduloblastoma, tumores neuroectodérmicos periféricos y craneofaringioma.
En otras realizaciones más, el cáncer es un linfoma seleccionado del grupo que consiste en linfoma de células del manto, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y leucemia/linfoma de células T adultas (ATL). Tal como se usa en la presente, la expresión leucemia/linfoma de células T adultas se refiere a un linfoma de células T raro y a menudo agresivo que puede encontrarse en la sangre (leucemia), los ganglios linfáticos (linfoma), la piel o múltiples áreas del cuerpo.
Como se ha descrito de manera general anteriormente, la metiltioadenosina fosforilasa (MTAP) es una enzima que se encuentra en todos los tejidos normales y que cataliza la conversión de la metiltioadenosina (MTA) en adenina y 5-metiltioribosa-1-fosfato. La adenina se recupera para generar monofosfato de adenosina y la 5-metiltioribosa-1-fosfato se convierte en metionina y formiato. Debido a esta vía de rescate, la MTA puede servir como una fuente alternativa de purina cuando se bloquea la síntesis de purina de novo, por ejemplo, con antimetabolitos, como la L-alanosina. Muchas células malignas humanas y murinas carecen de actividad de MTAP. La deficiencia de MTAP no solo se encuentra en células de cultivo de tejidos, sino que también está presente en leucemias primarias, gliomas, melanomas, cánceres de páncreas, cánceres de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cánceres de vejiga, astrocitomas, osteosarcomas, cánceres de cabeza y cuello, condrosarcomas mixoides, cánceres de ovario, cánceres de endometrio, cánceres de mama, sarcomas de tejidos blandos, linfomas no Hodgkin y mesoteliomas. Por ejemplo, la proliferación de células cancerosas que son nulas para MTAP, es decir, con MTAP eliminado, se inhibe silenciando la expresión de MAT2A con ARNhc, lo que se confirmó usando inhibidores de molécula pequeña de MAT2A. K. Marjon et al.,Ce// Reports 15 (2016) 574-587, incorporado en la presente como referencia. Un cáncer con MTAP nulo o con MTAP eliminado es un cáncer en el que el gen MTAP se ha eliminado o perdido o desactivado de otro modo o un cáncer en el que la proteína MTAP tiene una función reducida o alterada, o una presencia reducida.
Por consiguiente, en una realización de la presente divulgación, se proporciona un método para tratar un cáncer en un sujeto en donde el cáncer se caracteriza por una reducción o ausencia de la expresión de MTAP o la ausencia del gen MTAP o función reducida de la proteína MTAP en comparación con los cánceres en donde el gen y/o la proteína MTAP están presentes y en pleno funcionamiento, o en comparación con cánceres con el gen MTAP de tipo salvaje. El método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo.
En otra realización, se proporciona un método para tratar un cáncer con eliminación de MTAP en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, el cáncer con eliminación de MTAP se selecciona de leucemia, glioma, melanoma, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de vejiga, astrocitoma, osteosarcoma, cáncer de cabeza y cuello, condrosarcoma mixoide, cáncer de ovario, cáncer de endometrio, cáncer de mama, sarcoma de tejidos blandos, linfoma y mesotelioma.
En una realización, el cáncer con eliminación de MTAP es cáncer de páncreas. En otra realización, el cáncer con eliminación de MTAP se selecciona de cáncer de vejiga, melanoma, cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de hígado, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de riñón, cáncer de colon, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), leucemia linfoblástica aguda (ALL), linfoma de células del manto (MCL), glioblastoma multiforme (GBM) y cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC).
El análisis genómico de las líneas celulares nulas para MTAP reveló que las líneas celulares que incorporaban una mutación KRAS o una mutación p53 eran sensibles a la inhibición de MAT2A. Por consiguiente, una realización de la presente divulgación proporciona un método para tratar un cáncer en un sujeto en donde el cáncer se caracteriza por la reducción o ausencia de expresión de MTAP o ausencia del gen MTAP o función reducida de la proteína MTAP, el método comprendiendo administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula I, en donde dicho cáncer se caracteriza además por la presencia de KRAS mutante o p53 mutante. En una realización, se proporciona un método para tratar un cáncer nulo para MTAP que tiene un mutante KRAS o un mutante p53 en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero y/o isotopólogo del mismo. Por ejemplo, el cáncer es nulo para MTAP y mutante para KRAS, nulo para MTAP y mutante para p53, o cada uno de nulo para MTAP, mutante para KRAS y mutante para p53.
El término "KRAS mutante" o "mutación de KRAS" se refiere a una proteína KRAS que incorpora una mutación activadora que altera su función normal y el gen que codifica dicha proteína. Por ejemplo, una proteína KRAS mutante puede incorporar una sustitución de un solo aminoácido en la posición 12 o 13. En una realización particular, el mutante KRAS incorpora una sustitución G12X o G13X, en donde X representa cualquier cambio de aminoácidos en la posición indicada. En una realización particular, la sustitución es G12V, G12R, G12C o G13D. En otra realización, la sustitución es G13D. Por"p53 mutante" o "mutación de p53" se entiende la proteína p53 (o el gen que codifica dicha proteína) que incorpora una mutación que inhibe o elimina su función supresora de tumores. En una realización, dicha mutación de p53 es Y126_splice, K132Q, M133K, R174fs, R175H, R196*, C238S, C242Y, G245S, R248W, R248Q, I255T, D259V, S261_splice, R267P, R273C, R282W, A159V o R280K. En una realización, el cáncer anterior es cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de páncreas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer gástrico, cáncer de mama, cáncer de colon o cáncer de ovario.
En otra realización, los compuestos divulgados en la presente son útiles como ligandos para la degradación de proteínas asociadas a enfermedades. Un ejemplo de este enfoque son los PROTAC (Quimeras de direccionamiento de proteólisis). Los PROTAC son moléculas bifuncionales que comprenden tanto una fracción de ligando seleccionada de uno de los compuestos divulgados en la presente que es capaz de unirse a la proteína objetivo, como una fracción de direccionamiento de ligasa, como una porción peptídica (denominada degrón) que es reconocido y es poliubiquitinado por E3 ligasa. Por tanto, el PROTAC se une de manera no covalente a una proteína diana y recluta la ligasa E3 a través del degrón, lo que da como resultado la poliubiquinación y la degradación del objetivo unido. Una serie de publicaciones describen el uso preclínico de PROTAC en una variedad de áreas terapéuticas, incluyendo la oncología. Consultar, por ejemplo, Lu et al. Chemistry & Biology 22 (2015) 755-763. EJEMPLOS
La presente divulgación se entenderá más completamente con referencia a los siguientes ejemplos. Sin embargo, no debe interpretarse que los ejemplos limitan el alcance de la presente divulgación.
Lista de unidades y términos:
anhy. anhidro
ac. acuoso
min minuto(s)
ml mililitro
mmol milimoles
mol mol(es)
MS espectrometría de masas
NMR resonancia magnética nuclear
TLC cromatografía de capa fina
HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento
TA(t.a.) temperatura ambiente
Espectros de NMR
Hz hercios
8 desplazamiento químico
J constante de acoplamiento
s singlete
d doblete
t triplete
q cuarteto
m multiplete
br amplio
qd cuarteto de dobletes
dquin doblete de quintetos
dd doblete de dobletes
dt doblete de tripletes
Solventes y Reactivos:
CHCl3 cloroformo
DCM diclorometano
DMF dimetilformamida
Et2O dietil éter
EtOH alcohol etílico
EtOAc acetato de etilo
EA acetato de etilo
MeOH alcohol metílico
MeCN acetonitrilo
PE éter de petróleo
THF tetrahidrofurano
AcOH ácido acético
HCl ácido clorhídrico
H2SO4 ácido sulfúrico
NH4Cl cloruro de amonio
KOH hidróxido de potasio
NaOH hidróxido de sodio
K2CO3 carbonato de potasio
Na2CO3 carbonato de sodio _
TFA ácido trifluoroacético
Na2SO4 sulfato de sodio
NaBH4 borohidruro de sodio
NaHCO3 bicarbonato de sodio
LiHMDS hexametildisililamida de litio
NaHMDS hexametildisililamida de sodio
LAH hidruro de litio y aluminio
NaBH4 borohidruro de sodio
LDA diisopropilamida de litio
Et3N trietilamina
DMAP 4-(dimetilamino)piridina
DIPEA N,N-diisopropiletilamina
NH4OH hidróxido de amonio
EDCI 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
HOBt 1-hidroxibenzotriazol
HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetra-metiluronio
Xphos 2-Diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo
BINAP 2,2'-bis(difenilfosfanil)-1,1 '-binaftilo
Experimental General
En los siguientes ejemplos, los reactivos y solventes se adquirieron de fuentes comerciales (como Alfa, Acros, Sigma Aldrich, TCI y Shanghai Chemical Reagent Company) y se usaron sin purificación adicional a menos que se especifique lo contrario. La cromatografía ultrarrápida se realizó en un Ez Purifier III usando una columna con partículas de gel de sílice de 200-300 mesh. Las placas de cromatografía en capa fina (TLC) analítica y preparativa fueron HSGF 254 (0,15-0,2 mm de espesor, Shanghai Anbang Company, China). Los espectros de resonancia magnética nuclear (NMR) se obtuvieron en un Brucker AMX-400 NMR (Brucker, Suiza). Los desplazamientos químicos se informaron en partes por millón (ppm, 8) campo abajo del tetrametilsilano. Los espectros de masas se proporcionaron con ionización por electropulverización (ESI) de un espectrómetro de masas Waters LCT TOF (Waters, USA). Las cromatografías de HPLC se registraron en una cromatografía líquida Agilent 1200 (Agilent, USA, columna: Ultimate 4,6 mm x 50 mm, 5 pm, fase móvil A: ácido fórmico al 0,1% en agua; fase móvil B: acetonitrilo). Las reacciones de microondas se realizaron en un sintetizador de microondas Initiator 2.5 (Biotage, Suecia).
Procedimiento General I:
Figure imgf000032_0001
Los compuestos de estructura 1.9, 1.11 y 1.12 se obtuvieron mediante el esquema descrito como Procedimiento General I. Comenzando con piridazinona 1.1, se usó bromación electrófila para generar bromuro heterocíclico 1.2. El grupo R3 deseado se instaló usando un acoplamiento Chan-Lam para generar el compuesto 1.3. En esta etapa, los grupos R4 y R5 deseados se instalaron usando un acoplamiento cruzado de Suzuki con el reactivo 1.4 (Método A) o un acoplamiento cruzado de Stille con el reactivo 1.5 (Método B). El producto intermedio resultante 1.6 se cicló luego al núcleo bicíclico deseado 1.7 en condiciones básicas. El grupo R2 deseado se instaló usando un acoplamiento cruzado de Suzuki para generar el compuesto 1.8. Luego se alquiló el compuesto 1.8 para instalar el grupo R1 deseado y proporcionar los compuestos finales de estructura 1.9. Alternativamente, el compuesto 1.8 se cloró para dar el cloruro de arilo 1.1 0 , y el R1 deseado se instaló mediante sustitución aromática nucleófila para proporcionar los compuestos finales de estructura 1.11 (Método C). Alternativamente, el compuesto 1.8 se activó usando BOP, y el R1 N-enlazado deseado se instaló mediante sustitución aromática nucleófila para proporcionar compuestos finales de estructura 1.12 (Método D).
Preparación del Ejemplo 101 a través del Procedimiento General I (Método A):
Figure imgf000033_0001
Paso A: 5-amino-6-bromo-4-doropiridazin-3(2H)-ona
A una suspensión de 5-amino-4-cloropiridazin-3(2H)-ona (1,2 g, 8,2 mmol, 1,0 eq.) y NaOAc (0,74 g, 9,1 mmol, 1,1 eq.) en MeCN (40 ml) se le añadió Br2 (1,45 g, 9,1 mmol, 1,1 eq.) a 80° C durante 5 min mediante una jeringuiNa. La mezcla resultante se agitó a 80° C durante 1 h adicional. Después de enfriarla a temperatura ambiente, los volátiles se eliminaron a presión reducida, se diluyeron con H2O enfriada con hielo (20 ml), el precipitado blanco resultante se filtró y la torta del filtro se recogió y se secó a presión reducida para dar 5-amino-6-bromo-4-cloropiridazin-3(2H)-ona (1,48 g, 80% de rendimiento) como un sólido blanco. LC-MS (ESI): m/z 224, 226 [M+H]+. Paso B: 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)piridazin-3(2H)-ona
A una suspensión de 5-amino-6-bromo-4-cloropiridazin-3(2H)-ona (590 mg, 2,63 mmol, 1,0 eq.) en DMF (15 ml) se le añadió ácido (2-metil-2H-indazol-5-il)borónico (555 mg, 3,15 mmol, 1,2 eq.), Cu(OAc)2 (478 mg, 2,63 mmol, 1,0 eq.) y piridina (422 pl, 5,26 mmol, 2,0 eq.). La mezcla resultante se agitó a 50° C (atmósfera de aire) durante 8 h y la reacción se monitorizó por TLC. Una vez se hubo completado, la mezcla de reacción se diluyó con H2O (30 ml), la suspensión resultante se agitó durante 30 min adicionales, el precipitado se recogió y se lavó sobre H2O enfriada con hielo (30 ml x 3) y se secó a presión reducida para proporcionar 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)piridazin-3(2H)-ona (770 mg, 82% de rendimiento) como un blanco grisáceo sólido. LC-MS (ESI): m/z 354, 356 [M+H]+.
Paso C: (E)-3-(4-amino-5-cloro-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo
A una solución de 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)piridazin-3(2H)-ona (500 mg, 1,41 mmol, 1,0 eq.) en DMF (10 ml) se le añadió (E)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborlan-2-il)acrilato de etilo (350 mg, 1,55 mmol, 1,1 eq.), Pd(dppf)Cl2 (103 mg, 0,14 mmol, 0,1 eq.) y K2CO3 (389 mg, 2,82 mmol, 2,0 eq.). La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 16 horas en atmósfera de N2. La mezcla de la reacción se vertió en agua con hielo (30 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, concentrado a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar (E)-3-(4-amino-5-cloro-1-(2-metil-2H-indazol-5-il))-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo (316 mg, 60% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 374 [M+H]+.
Paso D: 4-doro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
A una solución de (E)-3-(4-amino-5-doro-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo (400 mg, 1,07 mmol, 1,0 eq.) en EtOH (10 ml) se le añadió K2CO3 (295 mg, 2,l4 mmol, 2,0 eq.) a temperatura ambiente. La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 3 horas. Luego se añadió agua con hielo (30 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il) pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (319 mg, 85% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 328 [M+H]+.
Paso E: 4-(4-clorofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
Se agitó una solución de 4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (1 g, 3,05 mmol, 1,0 eq.), ácido (4-clorofenil)borónico (954 mg, 6,1 mmol, 2,0 eq.), Pd(OAc)2 (68 mg, 0,3 mmol, 0,1 eq.), S-Phos (251 mg, 0,61 mmol, 0,2 eq.) y K2CO3 (1,26 g, 9,15 mmol, 3,0 eq.) en dioxano/H2O (110 ml, 10/1, v/v) a110° C en atmósfera de N2 durante 2 horas. Se añadió agua con hielo (30 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (30 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4-(4-clorofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (700 mg, 57% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS: m/z 404 [M+H]+.
Paso F: 4-(4-clorofenil)-6-(ciclopropilmetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se agitó a temperatura ambiente por 16 h una solución de 4-(4-clorofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (200 mg, 0,495 mmol, 1,0 eq.), (bromometil)ciclopropano (0,2 ml, 2,0 mmol, 4,0 eq.), Cs2CO3 (484 mg, 1,5 mmol, 3,0 eq.) en DMF (3 ml). La mezcla de la reacción se concentró a presión reducida y el residuo resultante se purificó mediante HPLC preparativa para dar 4-(4-clorofenil)-6-(ciclopropilmetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido [3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 101).
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 5: 8.55 (s, 1H), 8.07 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.86 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.76 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.51 (dd, J=9.2 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J=9.2 Hz, 1H), 4.28 (s, 3H), 4.21 (d, J=7.2 Hz, 2H), 1.36-1.19 (m, 1H), 0.64-0.57 (m, 2H), 0.37-0.33 (m, 2H).
LC-MS (ESI): m/z 458 [M+H]+
Preparación del Ejemplo 102 a través del Procedimiento General I (Método B):
Figure imgf000034_0001
Paso C: 4-cloro-6-hidroxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-8-(trifluorometil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se agitó a 100° C durante 16 horas una solución de 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)piridazin-3(2H)-ona (1 g, 2,8 mmol, 1,0 eq.), (Z)-4,4,4-trifluoro-3-(tributilestannil)but-2-enoato de etilo (Ref: Synlett, 2012, 23, 755-759) (2,6 g, 5,6 mmol, 2,0 eq.), Pd(PPh3)4 (655 mg, 0,567 mmol, 0,2 eq.) y Cul (216 mg, 1,13 mmol, 0,4 eq.) en DMF (10 ml) en atmósfera de N2. La mezcla de la reacción se inactivó con CsF (ac. sat.) (30 ml) y se agitó durante 30 min adicionales, la suspensión resultante se filtró, el precipitado se recogió y se trituró con EtOAc (20 ml) para proporcionar 4-cloro-6- hidroxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-8-(trifluorometil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (800 mg, 71% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 396 [M+H]+.
Se sintetizó 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-8-(trifluorometil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 102) a partir de 2-(4-(difluorometoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano y trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoroetilo a través del procedimiento general I (Paso E, F).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5: 8.56 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.87 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.76 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.50 (dd, J=9.2 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.38 (t, Jhf=73.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.43 (tt, Jhf=54.0 Hz, J=2.8 Hz, 1H), 4.63 (td, Jhf=14.8 Hz, J=2.8 Hz, 2H), 4.25 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 568 [M+H]+.
Preparación del Ejemplo 103 a través del Procedimiento General I (Método C):
Figure imgf000035_0001
Paso G: 6-cloro-4-(4-clorofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se agitó una solución de 4-(4-clorofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (100 mg, 0,284 mmol 1,0 eq.) en POCl3 (5 ml) a 80° C durante 2 horas. El exceso de POCl3 se eliminó a presión reducida y el residuo se vertió cuidadosamente en NaHCO3 (ac. sat.) (10 ml) enfriado con hielo, la mezcla resultante se extrajo con DCM (10 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml) y se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 6-cloro-4-(4-clorofenil)-2-(2- metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (60 mg, 57% de rendimiento) como un sólido rojo. LC-MS (ESI): m/z 422 [M+H]+.
Paso H: 4-(4-clorofenil)-6-(etilamino)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas una solución de 6-cloro-4-(4-clorofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (60 mg, 0,142 mmol, 1,0 eq.), clorhidrato de etilamina (58 mg, 0,71 mmol, 5,0 eq.), CsF (108 mg, 0,71 mmol, 5,0 eq.) y DiPeA (92 mg, 0,71 mmol, 5,0 eq.) en THF (3 ml). La mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante HPLC preparativa para dar 4-(4-clorofenil)-6-(etilamino)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 103).
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 5: 8.46 (s, 1H), 8.34 (t, J=5.2 Hz, 1H), 7.94 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.82 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.67 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.61 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 3H), 6.79 (d, J=9.2 Hz, 1H), 4.22 (s, 3H), 3.37­ 3.30 (m, 2H), 1.15 (t, J=7.2 Hz, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 431 [M+H]+.
Preparación del Ejemplo 301 a través del ProcedimientoGeneral I (Método D):
Figure imgf000036_0001
Paso I: 2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-(6-metilpiridin-3-il)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona (Ejemplo 301)
A una solución de 6-hidroxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-(6-metMpiridin-3-M)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (100 mg, 0,26 mmol, 1,0 eq.), BOP (173 mg, 0,39 mmol, 1,5 eq.), en DMF (5 ml) se le añadió DiEA (0,13 ml, 0,78 mmol, 3,0 eq.). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 min, luego se añadió 2,2,2-trifluoroetan-1-amina (0,06 ml, 0,78 mmol, 3,0 eq.) y se agitó durante 2 h adicionales a temperatura ambiente. Una vez se hubo completado, la reacción se inactivó añadiendo agua con hielo (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-(6-metilpiridin-3-il)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 301).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8: 8.86 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.02 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.77 (d, J=9.5 Hz, 1H), 7.68 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J=9.7 Hz, 1H), 7.28 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.92 (d, J=9.6 Hz, 1H), 4.30-4.22 (m, 2H), 4.21 (s, 3H), 2.51 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 466 [M+H]+.
Se usó el procedimiento expuesto anteriormente para el Procedimiento general I (Método A) para sintetizar los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados:
Figure imgf000036_0002
(continuación)
Figure imgf000037_0001
(continuación)
Figure imgf000038_0001
(continuación)
Figure imgf000039_0001
continuación
Figure imgf000040_0001
(continuación)
Figure imgf000041_0001
(continuación)
Figure imgf000042_0001
continuación
Figure imgf000043_0001
(continuación)
Figure imgf000044_0001
continuación
Figure imgf000045_0001
continuación
Figure imgf000046_0001
(continuación)
Figure imgf000047_0001
continuación
Figure imgf000048_0001
continuación
Figure imgf000049_0001
continuación
Figure imgf000050_0001
Se usó el procedimiento expuesto anteriormente para el Procedimiento General I (Método C) para sintetizar los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados:
Figure imgf000050_0002
(continuación)
Figure imgf000051_0001
(continuación)
Figure imgf000052_0001
(continuación)
Figure imgf000053_0001
continuación
Figure imgf000054_0001
(continuación)
Figure imgf000055_0001
(continuación)
Figure imgf000056_0001
Se usó el procedimiento expuesto anteriormente para el Procedimiento General I (Método D) para sintetizar los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados:
Figure imgf000056_0002
continuación
Figure imgf000057_0001
(continuación)
Figure imgf000058_0002
Síntesis del producto intermedio ácido (6-(metM-d3)piridin-3-il)borónico
Figure imgf000058_0001
Paso A: 5-metoxi-2-(metil-d3)piridina
A una solución de 2-bromo-5-metoxipiridina (7 g, 37,2 mmol, 1,0 eq.) y Fe(acac)3 (1,31 g, 3,71 mmol, 0,1 eq.) en THF anhidro (70 ml) se le añadió CDsMgl (1 M en THF) (93 ml, 93 mmol, 2,5 eq.) gota a gota a 0° C en atmósfera de N2, la mezcla resultante se agitó durante 3 horas a 0° C. Una vez se hubo completado, la reacción se inactivó mediante la adición de NH4Cl (ac. sat.) (200 ml), luego se extrajo con EtOAc (70 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 5-metoxi-2-(metild3)piridina (4 g, 85%) como un aceite incoloro. LC-MS (ESI): m/z 127 [M+H]+.
Paso B: 6-(metil-d3)piridin-3-ol
A una solución de 5-metoxi-2-(metil-d3)piridina (1,6 g, 12,6 mmol, 1,0 eq.) en tolueno seco (20 ml) se le añadió L-Selectrida (1 M en THF) (37,8 ml, 37,8 mmol, 3,0 eq.) a través de un embudo de goteo a 0° C gota a gota, después de la adición, la mezcla de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, luego se pasó a un baño de aceite precalentado (110° C) y se agitó durante 3 horas adicionales. Una vez se hubo completado, la reacción se enfrió de nuevo a 0° C, se inactivó añadiendo cuidadosamente MeOH (10 ml), la mezcla resultante se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 6- (metil-d3)piridin-3-ol (1,2 g, 84,3%) como un sólido de color amarillo pálido. LC-m S (ESI): m/z 113 [M+H]+.
Paso C: trifluorometanosulfonato de 6-(metil-d3)piridin-3-ilo
A una solución de 6-(metil-d3)piridin-3-ol (500 mg, 4,46 mmol, 1,0 eq.) y piridina (0,54 ml, 6,69 mmol, 1,5 eq.) en DCM seco (10 ml), se le añadió gota a gota anhídrido tríflico (1,13 ml, 6,69 mmol, 1,5 eq.) a través de la jeringuilla a 0° C. La mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h adicionales. Una vez se hubo completado, la reacción se inactivó añadiendo H2O (20 ml), luego se extrajo con EtOAc (20 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl diluido (0,5 N, ac.) (20 ml), salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 6 -(metil-d3)trifluorometanosulfonato de piridin-3-ilo (1,0 g, 91%) como un aceite incoloro.
LC-MS (ESI): m/z 245 [M+H]+.
Paso D: ácido (6-(metil-d3)piridin-3-il)borónico
A una solución de trifluorometanosulfonato de 6 -(metil-d3)piridin-3-ilo (1,0 g, 4,09 mmol, 1,0 eq.) en 1,4-dioxano seco (10 ml), se le añadió bis(pinacolato)diboro (2,08 g, 8,2 mmol, 2,0 eq.), KOAc (1,6 g, 16,4 mmol, 4,0 eq.) y Pd(dppf)Cl2 (300 mg, 0,41 mmol, 0,1 eq.). La mezcla resultante se agitó a 100° C en atmósfera de N2 durante 16 horas. Una vez se hubo completado, la mezcla bruta se filtró a través de una almohadilla corta de Celite®, el filtrado se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante RP-prep-HPLC para dar ácido (6 -(metil-d3)piridin-3-il)borónico (460 mg, 80%). LC-MS (ESI): m/z 141 [M+H]+.
Procedimiento General II:
Figure imgf000059_0001
Los compuestos de estructura 2.8 y 2.11 se obtuvieron mediante el esquema representado como Procedimiento General II. Comenzando con piridazinona 2.1, el heterociclo se benciló para generar el compuesto 2.2. Los grupos R4 y R5 deseados se introdujeron usando un acoplamiento cruzado de Suzuki para proporcionar compuestos de estructura 2.3. Luego, el compuesto 2.3 se cicló en condiciones básicas para generar el compuesto bicíclico 2.4. El grupo R2 deseado se introdujo usando un acoplamiento de Suzuki para generar el compuesto 2.5. Luego se cloró el compuesto 2.5 para generar cloruro de arilo 2.6. El grupo R1 deseado se introdujo mediante sustitución aromática nucleófila, que al mismo tiempo desbenciló el núcleo heterocíclico para generar el compuesto 2.7. Por último, el grupo R3 deseado se introdujo usando un acoplamiento de Ullmann (Método A) o un acoplamiento de Chan-Lam (Método B) para proporcionar compuestos de estructura 2.8. Alternativamente, el Compuesto 2.5 podría activarse con BOP y hacerse reaccionar con la amina Ri deseada para proporcionar el heterociclo 2.9 (Método C). El grupo bencilo se eliminó usando t-BuOK para proporcionar el heterociclo 2.10 y el grupo R3 deseado se introdujo usando un acoplamiento de Ullmann para proporcionar compuestos de estructura 2.11.
Procedimiento General IIa (Método C):
Figure imgf000060_0001
Posteriormente, se desarrolló el Procedimiento General IIa (Método C) usando PMB como grupo protector alternativo al grupo protector Bn que se muestra en el Procedimiento General II (Método C). La desprotección del heterociclo 2.16 en condiciones ácidas llevó a una síntesis convergente de las estructuras del compuesto 2.11. Preparación del Ejemplo 166 a través del Procedimiento General II (Método A):
Figure imgf000060_0002
Paso A : 5-amino-2-bencil-6-bromo-4-cloropiridazin-3(2H)-ona
A una solución de 5-amino-6-bromo-4-cloropiridazin-3(2H)-ona (3 g, 13,4 mmol, 1,0 eq.), K2CO3 (3 , 7 g, 26,8 mmol, 2,0 eq.) en DMF (50 ml) se le añadió BnBr (2,5 g, 14,7 mmol, 1,1 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante la noche. La mezcla de la reacción se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar 5-amino-2-bencil-6-bromo-4-cloropiridazin-3(2H)-ona como un sólido blanco (2,46 g, 59% de rendimiento). LC-MS (ESI) m/z 314, 316 [M+H]+.
Paso B: (E)-3-(4-amino-1-bencil-5-cloro-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo
A una solución de 5-amino-2-bencil-6-bromo-4-cloropiridazin-3(2H)-ona (2,46 g, 7,8 mmol, 1,0 eq.), K2CO3 (2,2 g, 15,6 mmol, 2,0 eq.), (E)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)acrilato de etilo (1,94 g, 8,6 mmol, 1,1 eq.) en DMF (40 ml) se le añadió Pd(dppf)Ch (0,57 g, 0,8 mmol, 0,1 eq.) en atmósfera de N2 , la mezcla de la reacción se agitó a 100° C durante 3 horas. La mezcla de la reacción se diluyó con H2O (50 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía en columna para proporcionar en gel de sílice para dar (E)-3-(4-amino-1-bencil-5-cloro-6-oxo-1,6-dihidropiridazina-3-il)acrilato de etilo como un sólido marrón (1,89 g, 71% de rendimiento). LC-MS (ESI): m/z 334 [M+H]+.
Paso C: 2-bencil-4-cloropirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
A una solución agitada de (E)-3-(4-amino-1-bencil-5-cloro-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo (1,89 g, 5,66 mmol, 1,0 eq.) en EtOH (20 ml) se le añadió K2CO3 (2,34 g, 16,98 mmol, 3,0 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante la noche. La mezcla de la reacción se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida para dar 2-bencil-4-cloropirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona como un sólido marrón (1,5 g), que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. LC-MS (ESI): m/z 288 [M+H]+.
Paso D: 2-bencil-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
A una solución agitada de 2-bencil-4-cloropirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (1,5 g, 5,2 mmol, 1,0 eq.), 2-(4-(difluorometoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (2 g, 7,2 mmol, 1,4 eq.), K2CO3(1,54 g, 11,1 mmol, 2,1 eq.), X-Phos (0,52 g, 1,1 mmol, 0,2 eq.) en una mezcla de dioxano/H2O (88 ml, 10/1, v/v) se le añadió Pd(OAc)2 (0,12 g, 0,55 mmol, 0,1 eq.) bajo atmósfera de N2. La mezcla de la reacción se agitó a 110° C durante la noche. La mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice para proporcionar 2-bencil-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (1,4 g, 68% de rendimiento) como un sólido blanco. LC-MS (ESI): m/z 396 [M+H]+.
Paso E: 2-bencil-6-cloro-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se disolvió 2-bencil-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (400 mg, 1,01 mmol, 1,0 eq) en POCh (4 ml), la mezcla resultante se agitó a 80° C durante 4 horas. El exceso de POCh se eliminó a presión reducida y el residuo se vertió sobre NaHCO3 (ac. sat.) enfriado con hielo (20 ml) y se extrajo con DCM (30 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida para dar 2-bencil-6-cloro-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona en bruto, como un sólido amarillo (400 mg, 95% de rendimiento). LC-MS (ESI): m/z 414 [M+H]+.
Paso F: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
A una solución de 2-bencil-6-cloro-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (400 mg, 0,97 mmol, 1,0 eq.), 2,2-difluoroetan-1-ol (396 mg, 4,8 mmol, 5,0 eq.) en THF anhy. (8 ml) se le añadió t-BuOK (541 mg, 4,8 mmol, 5,0 eq.) en varias porciones a 0° C, después de la adición, la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de la reacción se diluyó con H2O (10 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice para dar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona como un sólido amarillo (150 mg, 42% producir). LC-MS (ESI): m/z 370 [M+H]+.
Paso G: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2,3-dimetil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Método A)
A una suspensión agitada de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (70 mg, 0,19 mmol, 1,0 eq.) en MeCN (3 ml) se le añadió 5-bromo-2,3-dimetil-2H-indazol (64,0 mg, 0,28 mmol, 1,5 eq.), CuI (36,2 mg, 0,19 mmol, 1,0 eq.), N1,N2-dimetilciclohexano-1,2-diamina (26,9 mg, 0,19 mmol, 1,0 eq.) y CsF (57,6 mg, 0,38 mmol, 2,0 eq.). La reacción se agitó en un tubo sellado a 85° C durante la noche en atmósfera de N2 y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2,3-dimetil-2H-indazol-5-il)pirido[ 3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 166).
1H NMR (400 MHz, DIVISOR) 5: 8.07 (d, J=9.4 Hz, 1H), 7.98 (d, J=1.4 Hz, 1H), 7.87 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.62 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=9.1 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.35 (t, Jhf=72.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.06 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.41 (tt, Jhf=54.4 Hz, J=3.3 Hz, 1H), 4.59 (td, Jhf=15.1 Hz, J=3.3 Hz, 2H), 4.10 (s, 3H), 2.64 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 514 [M+H]+.
Preparación del Ejemplo 167 a través del Procedimiento General II (Método B):
Figure imgf000062_0001
Paso G: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(1-metil-1H-benzo[d]imidazol-6-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Método B)
A una suspensión de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (70 mg, 0,19 mmol, 1,0 eq.) en DMF (5 ml) se le añadió ácido 1-metil-1H-benzo[d]imidazol-6-ilborónico (33,4 mg, 0,23 mmol, 1,2 eq.), Cu(OAc)2 (34,5 mg, 0,19 mmol, 1,0 eq.) y piridina (30,0 mg, 0,38 mmol, 2,0 eq.). Después de agitar la mezcla a 50° C durante la noche en atmósfera de aire, la mezcla de la reacción se inactivó añadiendo H2O (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). La capa orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(1-metil-1H-benzo[d] imidazol-6-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 167).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5: 8.34 (s, 1H), 8.06 (d, J=9.4 Hz, 1H), 7.92 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.88 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.79 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.47 (dd, J=8.6 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.35 (t, Jhf=72.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.41 (tt, Jhf=54.4 Hz, 3.3 Hz, 1H), 4.60 (td, Jhf=15.1 Hz, 3.3 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 500 [M+H]+.
Preparación del Ejemplo 321 a través del Procedimiento General II (Método C):
Figure imgf000062_0002
Paso H: 2-benc¡l-4-(6-(d¡fluoromet¡l)p¡r¡d¡n-3-¡l)-6-((et¡l-d5)am¡no)p¡rido[3,2-c]p¡r¡daz¡n-3(2H)-ona
A una solución de 2-bencil-4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (250 mg, 0,66 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 ml) se le añadió BOP (436 mg, 0,99 mmol, 1,5 eq.) y DIEA (584 pl, 3,29 mmol, 5,0 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se añadió clorhidrato de etilamina-ds ( 8 6 mg, 0,99 mmol, 1,5 eq.), la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas más. Una vez se hubo completado, la reacción se inactivó añadiendo agua con hielo (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4 -(6 -(difluorometil)piridin-3 -il)-6 -((etil-d5)amino)piridopiridazin-3(2H)-ona (234 mg, 8 6 %) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 413 [M+H]+.
Paso I: 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-6-((etil-d 5)amino)pirido[3 ,2 -c]piridazin-3 (2 H)-ona
A una solución de 2 -bencil-4 -(6 -(difluorometil)piridin-3 -il)-6 -((etil-d5)amino)piridopiridazin-3 (2 H)-ona (185 mg, 0,45 mmol, 1,0 eq.) en THF/DMF (2 ml, 1/1), se le añadió t-BuOK (251 mg, 2,25 mmol, 5,0 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a 70° C durante 8 horas. Una vez se hubo completado, el pH se ajustó a ~7 añadiendo HCl 1 N (ac.), luego la mezcla se extrajo con DCM (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml) y se secaron sobre Na2SO4 , se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida para dar 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-6-((etil-ds)amino)piridopiridazin-3(2H)-ona (50 mg) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 323 [M+H]+.
Paso J: 4 -(6 -(difluorometil)piridin-3 -il)-6 -((etil-d5)amino)-2 -(2 -(metil-d 3)-2 H-indazol-5 -il) pirid[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona A una solución de 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-6-((etil-ds)amino)piridopiridazin-3(2H)-ona (50 mg, 0,16 mmol, 1,0 eq.) y 5 -bromo-2 -(metil-d3)-2 H-indazol (50 mg, 0,23 mmol, 1,5 eq.) en ACN (1 ml) se le añadió Cul (30 mg, 0,16 mmol, 1,0 eq.), CsF (47 mg, 0,31 mmol, 2,0 eq.), N1,N2-dimetilciclohexano-1,2-diamina (22 mg, 0,16 mmol, 1,0 eq.), la mezcla resultante se agitó a 85° C durante 14 h. Una vez se hubo completado, la mezcla de la reacción se diluyó con H2O (5 ml), se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml) y se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó por RP-prep-HPLC para dar 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-6-((etil-ds)amino)-2-(2-(metil-d3)-2H-indazol-5-il)piridopiridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 321).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 (ppm): 9.06 (s, 1H), 8.46 (d, J=2.6 Hz, 2H), 8.39 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.73 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.66 (dd, J=11.5, 9.4 Hz, 2H), 7.42 (dd, J=9.2, 1.9 Hz, 1H), 6.99 (t, J=55.1 Hz, 1H), 6.82 (d, J=9.6 Hz, 1H).
LC-MS (ESI): m/z 456 [M+H]+.
Preparación del Ejemplo 322 a través del Procedimiento General Ila (Método C):
Figure imgf000063_0001
Paso A: 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(4-metoxibencil)piridazin-3(2H)-ona
A una solución de 5-amino-6-bromo-4-cloropiridazin-3(2H)-ona (2,0 g, 8,91 mmol, 1,0 eq.) y K2CO3 (2,5 g, 17,8 mmol, 2,0 eq.) en DMF (20 ml) se le añadió PMBCl (1,3 ml, 9,8 mmol, 1,1 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 14 horas. Una vez se hubo completado, la mezcla de la reacción se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(4-metoxibencil)piridazin-3(2H)-ona (2,0 g, 45%) como un blanco sólido. LC-MS (ESI): m/z 344 [M+H]+.
Paso B: (E)-3-(4-amino-5-cloro-1-(4-metoxibencil)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo
A una solución de 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(4-metoxibencil)piridazin-3(2H)-ona (2,0 g, 5,8 mmol, 1,0 eq.), K2CO3 (2,0 g, 14,5 mmol, 2,5 eq.) y (E)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborlan-2-il)acrilato de etilo (1,44 g, 6,4 mmol, 1,1 eq.) en DMF (20 ml) se le añadió Pd(dppf)Cl2 (0,43 g, 0,6 mmol, 0,1 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a 100° C en atmósfera de N2 durante 5 horas. La mezcla de la reacción se diluyó con H2O (30 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (40 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía en columna para proporcionar sobre gel de sílice para dar (E)-3-(4-amino-5-cloro-1-(4-metoxibencil)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo como un sólido marrón (1,4 g, 53%). LC-MS (ESI): m/z 364 [M+H]+.
Paso C: 4-cloro-2-(4-metoxibencil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
A una solución agitada de (E)-3-(4-amino-5-cloro-1-(4-metoxibencil)-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)acrilato de etilo (1,4 g, 3,85 mmol, 1,0 eq.) en EtOH (20 ml), se añadió K2CO3 (1,6 g, 11,54 mmol, 3,0 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 14 horas. La mezcla de la reacción se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida para dar 4-cloro-2-(4-metoxibencil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (0,6 g, bruto) como un sólido marrón, que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. LC-MS (ESI): m/z 318 [M+H]+.
Paso D: 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-metoxibencil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
A una solución de 4-cloro-2-(4-metoxibencil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (0,2 g, 0,63 mmol, 1,0 eq.), 2-(4-(difluorometoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (152 mg, 0,88 mmol, 1,4 eq.), K2CO3 (217 mg, 1,57 mmol, 2,5 eq..) y X-Phos (33 mg, 0,06 mmol, 0,1 eq.) en una mezcla de 1,4-dioxano/H2O (8 ml, 10/1, v/v) se le añadió Pd(OAc)2 (15 mg, 0,06 mmol, 0,1 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a 110° C bajo atmósfera de N2 durante la noche. Una vez se hubo completado, la mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-metoxibencil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (120 mg, 46%) como un sólido blanco. LC-mS (ESI): m/z 411 [M+H]+.
Paso E: 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-metoxibencil)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazin- 3(2H)-ona A una solución de 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-metoxibencil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (100 mg, 0,24 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 ml) se le añadió BOP (180 mg, 0,36 mmol, 1,5 eq.) y DIEA (157 mg, 1,22 mmol, 5,0 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, luego se añadió 2,2,2-trifluoroetan-1-amina (36 mg, 0,36 mmol, 1,5 eq.), la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h adicionales. Una vez se hubo completado, la reacción se inactivó añadiendo agua con hielo (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3), se secó sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-metoxibencil)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (80 mg, 67%) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 492 [M+H]+.
Paso F: 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
A una solución de 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-metoxibencil)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona (80 mg, 0,16 mmol, 1,0 eq.) en TFA (2 ml) se le añadió TfOH (142 pl, 1,6 mmol, 10,0 eq.) y Et3SiH (128 pl, 0,8 mmol, 5,0 eq.), la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Una vez se hubo completado, la reacción se inactivó con 10 ml de NaHCO3 (ac. sat.), se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml) y se secaron sobre Na2SO4, concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (40 mg, 66%) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 372 [M+H]+.
Paso G: 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-(metoxi-d3)fenil)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 322)
Se sintetizó 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-2-(4-(metoxi-d3)fenil)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c ]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 322) a partir de 4-(6-(difluorometil)piridin-3-il)-6-((2,2,2-trifluoroetil)amino)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona y 1-bromo-4-(metoxi-d3) benceno a través del Procedimiento General II (Método C, Etapa J).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 (ppm): 8.98 (s, 1H), 8.93 (t, J=5.9 Hz, 1H), 8.30 (dd, J=8.0 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J=9.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.59-7.53 (m, 2H), 7.09-7.04 (m, 2H), 7.00 (t, Jhf=56.0 Hz, 1H), 6.93 (d, J=9.5 Hz, 1H), 4.23-4.15 (m, 2H).
LC-MS (ESI): m/z 481 [M+H]+.
Se usó el procedimiento expuesto anteriormente para el Procedimiento General II (Método A) para sintetizar los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados:
Figure imgf000065_0001
(continuación)
Figure imgf000066_0001
(continuación)
Figure imgf000067_0001
continuación
Figure imgf000068_0001
(continuación)
Figure imgf000069_0001
(continuación)
Figure imgf000070_0001
Se usó el procedimiento expuesto anteriormente para el Procedimiento General II (Método B) para sintetizar los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados:
Figure imgf000071_0001
(continuación)
Figure imgf000072_0001
Se usó el procedimiento establecido anteriormente para el Procedimiento general II (Método C) para sintetizar los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados:
Figure imgf000072_0002
(continuación)
Figure imgf000073_0001
(continuación)
Figure imgf000074_0001
Figure imgf000075_0001
Los compuestos de estructura 3.6 se obtuvieron mediante el esquema descrito como Procedimiento General III. Comenzando con piridazinona 3.1 sustituida (sintetizada mediante el Procedimiento General I (Pasos A-B)), se introdujo el grupo R4 deseado usando un acoplamiento cruzado de Suzuki para generar el compuesto vinílico 3.2. Luego se oxidó el enlace doble en 3.2 para proporcionar el carbonilo 3.3. El grupo R2 deseado se introdujo usando un acoplamiento cruzado de Suzuki para generar el compuesto 3.4. El grupo R5 deseado se introdujo usando una olefinación de Horner-Wadsworth-Emmons, que llevó a la generación del heterociclo bicíclico 3.5 después de una ciclación intramolecular en tándem. Por último, el grupo R1 deseado se introdujo a través de una reacción de alquilación para proporcionar compuestos de estructura 3.6.
Preparación del Ejemplo 194 a través del Procedimiento General III:
Figure imgf000075_0002
Paso A : 5-amino-4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-vinilpiridazin-3(2H)-ona
Se agitó una solución de 5-amino-6-bromo-4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)piridazin-3(2H)-ona (2 g, 5,67 mmol, 1,0 eq., Procedimiento General I, (Pasos A-B)), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-1,3,2-dioxaborolano (1,738 g, 11,34 mmol, 2,0 eq.), Pd(dppf)Ch (0,826 g, 1,13 mmol, 0,2 eq.), K2CO3 (2,336 g, 16,99 mmol, 3,0 eq.) en dioxano/EtOH (48 ml, 3/1, v/v) en atmósfera de N2 a 80° C durante 16 horas. La mezcla de la reacción se filtró y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna en gel de sílice para dar 5-amino-4-doro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-vinilpiridazin-3(2H)-ona (1,02 g, 60% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 302 [M+H]+.
Paso B: 4-amino-5-cloro-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazina-3-carbaldehído
Se agitó a temperatura ambiente una solución de 5-amino-4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-vinilpiridazin-3(2H)-ona (1,6 g, 5,3 mmol, 1,0 eq.), NaIO4 (3,4 g, 15,9 mmol, 3,0 eq.) y K2OsO4-2 H2O (98 mg, 0,26 mmol, 0,05 eq.) en THF/H2O (20 ml, 3:1) durante 3 horas, y la mezcla resultante se filtró y se extrajo con DCM (50 ml x 3). El filtrado se lavó con salmuera (30 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar 4-amino-5-cloro-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazina-3-carbaldehído como un sólido blanco (1 g, 62% de rendimiento). LC-MS (ESI): m/z 304 [M+H]+.
Paso C: 4-amino-5-(4-(difluorometoxi)fenil)-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazina-3-carbaldehído Se agitó una solución de 4-amino-5-cloro-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazina-3-carbaldehído (650 mg, 2,15 mmol, 1,0 eq.), 2-(4-(difluorometoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (934 mg, 3,46 mmol, 1,6 eq.), Pd(OAc)2 (52 mg, 0,215 mmol, 0,1 eq.), X-Phos (205 mg, 0,43 mmol, 0,2 eq.), K2CO3 (594 mg, 4,3 mmol, 2,0 eq.) en dioxano/H2O (11 ml, 10/1, v/v) a 110° C en atmósfera de N2 durante 3 horas. Se añadió H2O y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (30 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4-amino-5-(4-(difluorometoxi)fenil)-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazina-3-carbaldehído (650 mg, 69% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 412 [M+H]+.
Paso D: 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-7-fluoro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
A una suspensión de 4-amino-5-(4-(difluorometoxi)fenil)-1-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-oxo-1,6-dihidropiridazina-3-carbaldehído (150 mg, 0,36 mmol, 1,0 eq.) y 2-(dietoxifosforil)-2-fluoroacetato de etilo (132 mg, 0,55 mmol, 1,5 eq.) en MeCN (5 ml) se le añadió NaH (suspensión al 30% en aceite mineral, 175 mg, 2,19 mmol, 6,0 eq.) en varias porciones a 0° C bajo atmósfera de N2. Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, la mezcla resultante se vertió en NH4Cl enfriado con hielo (ac. sat.) (10 ml), luego se extrajo con EtOAc (10 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml) y se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-7-fluoro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (120 mg, 73% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 454 [M+H]+.
Se sintetizó 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-7-fluoro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona (Ejemplo 194) a partir de 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-7-fluoro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoroetilo mediante un procedimiento similar al descrito en el Procedimiento general I (Paso F).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 : 8.56 (s, 1H), 8.10 (d, J=10.0 Hz, 1H), 8.07 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.91 (d, J=9.2 Hz, 2H), 7.77 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.51 (dd, J=9.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.41 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J=9.2 Hz, 2H), 6.50 (tt, Jhf=54.0 Hz, 3.2 Hz, 1H), 4.71 (td, Jhf=15.2 Hz, J=3.2 Hz, 2H), 4.28 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 518 [M+H]+.
Se usó el procedimiento expuesto anteriormente para el Procedimiento General III para sintetizar los siguientes compuestos usando materiales de partida apropiados:
Figure imgf000077_0001
Síntesis de 4-(4-bromofenil)-6-etoxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 198)
Figure imgf000078_0001
Paso A: 4-(4-aminofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
Se agitó una solución de (4-(2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3,6-dioxo-2,3,5,6-tetrahidropindo[3,2-c]piridazina-4-il)fenil)carbamato de terc-butilo (sintetizado a partir de 4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pindo[3,2-c]pindazina-3,6(2H,5H)-diona y (4-((terc-butoxicarbonil)amino)fenil)ácido borónico mediante el Procedimiento General I (Método A, Paso E)) (180 mg, 0,372 mmol) en TfA/DCM (1 ml/5 ml) a temperatura ambiente por 1 h. La mezcla de la reacción se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 4-(4-aminofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]pindazina-3,6(2H,5H)-diona (116 mg, 79% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 385 [M+H]+.
Paso B: 4-(4-bromofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona
A una solución de 4-(4-aminofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona (200 mg, 0,52 mmol, 1,0 eq.) y CuBr (299 mg, 2,08 mmol, 4,0 eq.) en ACN (10 ml) se le añadió nitrito de terc-butilo (215 mg, 2,08 mmol, 4,0 eq.) a 0° C gota a gota durante 10 min. La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla resultante se inactivó con Na2SO3 (acuoso saturado) (20 ml), se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar 4-(4-bromofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona como un sólido amarillo (70 mg, 30% de rendimiento). LC-MS (ESI): m/z 448 [M+H]+.
Paso C:
Se sintetizó 4-(4-bromofenil)-6-etoxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 198) a partir de 4-(4-bromofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y yodoetano mediante el Procedimiento General I (Método A, Paso F).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.49 (s, 1H), 8.00 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.97 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.70 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.45 (dd, J=8 . 8 Hz, 1.6 Hz, 1H), 6.95 (d, J=9.2 Hz, 1H), 4.33 (q, J=7.2 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 1.32 (t, J=7.2 Hz, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 476, 478 [M+H]+.
Síntesis de 4-(4-bromofenil)-6-isopropoxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 199)
Figure imgf000079_0001
Se sintetizo 4-(4-bromofeml)-6-isopropoxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 199) a partir de 4-(4-bromofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y 2-yodopropano a través del procedimiento general I (Método A, Paso F).
1H NMR (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8.49 (s, 1H), 8.00 (dd, J=2.0 Hz, 0.8 Hz, 1H), 7.96 (d, J=9.4 Hz, 1H), 7.74-7.68 (m, 3H), 7.64 (d, J=8 . 6 Hz, 2H), 7.45 (dd, J=9.1 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.15 (hept, J=6.2 Hz, 1H), 4.22 (s, 3H), 1.30 (d, J=6.2 Hz, 6 H).
LC-MS (ESI): m/z 490, 492 [M+H]+.
Síntesis de 4-(4-bromofenil)-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 200)
Figure imgf000079_0002
Se sintetizó 4-(4-bromofenil)-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (El ejemplo 200) a partir de 4-(4-bromofenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoroetilo mediante el Procedimiento General I (Método A, Paso F).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.51 (s, 1H), 8.07 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.03 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.72 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.66 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.47 (dd, J=9.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.41 (tt, Jhf=54.4 Hz, 3.2 Hz, 1H), 4.59 (td, Jhf=15.2 Hz, J=3.2 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 512, 514 [M+H]+.
Síntesis de 2-(benzo[d]tiazol-6-il)-4-(4-bromofenil)-6-(2,2-difluoroetoxi)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 201)
Figure imgf000080_0001
Se siguieron procedimientos similares a los descritos para el Ejemplo 198. Se sintetizó 2-(benzo[d]tiazol-6-il)-4-(4-bromofenil)-6-(2,2-difluoroetoxi)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 201) a partir de (4-(2-(benzo[d]tiazol-6-il)-3,6-dioxo-2,3,5,6-tetrahidropirido[3,2-c]piridazin-4-il)fenil)carbamato de terc-butilo mediante el Paso A-B (Ejemplo 198) y trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoroetilo mediante el Procedimiento General I (Método A, Paso F).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 9.53 (s, 1H), 8.54 (d, J=2.1 Hz, 1H), 8.25 (d, J=8.7 Hz, 1H), 8.07 (d, J=9.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J=8.7 Hz, 2.1 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8 . 6 Hz, 2H), 7.66 (d, J=8 . 6 Hz, 2H), 7.09 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.41 (tt, Jhf=54.4, 3.4 Hz, 1H), 4.60 (td, J=15.2, 3.4 Hz, 2H).
LC-MS (ESI): m/z 515, 517 [M+H]+.
Síntesis de 2-(benzo[d]tiazol-6-il)-4-(4-bromofenil)-6-isopropoxipirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 202)
Figure imgf000080_0002
Se sintetizó 2-(benzo[d]tiazol-6-il)-4-(4-bromofenil)-6-isopropoxipirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 202) a partir de 2-(benzo[d]tiazol-6-il)-4-(4-bromofenil)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y 2-yodopropano mediante el Procedimiento General I (Método A, Paso F).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 9.53 (s, 1H), 8.52 (d, J=2.1 Hz, 1H), 8.24 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.96 (d, J=9.4 Hz, 1H), 7.83 (dd, J=8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.72 (d, J=8 . 6 Hz, 2H), 7.65 (d, J=8 . 6 Hz, 2H), 6.93 (d, J=9.4 Hz, 1H), 5.16 (hept, J=6.4 Hz, 1H), 1.31 (d, J=6.4 Hz, 6 H).
LC-MS (ESI): m/z 493, 495 [M+H]+.
Síntesis de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenM)-2-(3-(dimetNammo)-2-metN-2H-mdazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 203) y 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-6-(dimetilamino)-2-(3-(dimetilamino)-2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 204)
Figure imgf000081_0001
Paso A: 2-(3-bromo-2-metil-2H-indazol-5-il)-6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
A una suspensión de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 125) (200 mg, 0,4 mmol, 1,0 eq.) en ACN (4 ml) se le añadió NBS (75 mg, 0,42 mmol, 1,05 eq.). Luego, la reacción se agitó a 80° C durante 3 horas. La reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó directamente mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar 2-(3-bromo-2-metil-2H-indazol-5-il)-6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (160 mg, 69% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 578; 580 [M+H]+.
Paso B: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(3-(dimetilamino)-2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona y 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-6-(dimetilamino)-2-(3-(dimetilamino)-2-metil-2H-indazol-5-il) pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
A una suspensión de 2-(3-bromo-2-metil-2H-indazol-5-il)-6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (160 mg, 0,28 mmol, 1,0 eq.) en tolueno (3 ml) se le añadió Cs2COa (90 mg, 0,28 mmol, 1,0 eq.), Pd2(dba)3 (25 mg, 0,028 mmol, 0 , 10 eq.), Ru-Phos (26 mg, 0,055 mmol, 0 , 2 eq.) y dimetilamina (2 M en THF) (1,4 ml, 2,8 mmol, 10,0 eq.). Luego, la reacción se selló en un tubo resistente a la presión y se agitó a 100° C durante 5 horas bajo atmósfera de N2. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice y RP-prep-HPLC para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(3-(dimetilamino)-2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 203) y 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-6-(dimetilamino)-2-(3-(dimetilamino)-2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 204).
Ejemplo 203:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.11 (s, 1H), 8.08 (d, J=9.4 Hz, 1H), 7.87 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.55 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J=10.6 Hz, 1H), 7.35 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.26 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.06 (d, J=9.3 Hz, 1H), 6.41 (tt, Jhf=54.4 Hz, J=3.3 Hz, 1H), 4.59 (td, Jhf=15.1 Hz, J=3.3 Hz, 2H), 3.99 (s, 3H), 2.97 (s, 6 H).
LC-MS (ESI): m/z 543 [M+H]+.
Ejemplo 204:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.04 (dd, J=2.0, 0.8 Hz, 1H), 7.93-7.84 (m, 2H), 7.76 (d, J=9.8 Hz, 1H), 7.52 (dd, J=9.1, 0.8 Hz, 1H), 7.33 (dd, J=9.2, 2.0 Hz, 1H), 7.31 (t, Jhf=74.2, 1H), 7.27 (d, J=9.8 Hz, 1H), 7.22­ 7.16 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.17 (s, 3H), 2.96 (s, 6 H).
LC-MS (ESI): m/z 506 [M+H]+.
Síntesis de 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-propilpirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 205)
Figure imgf000081_0002
A una mezcla de 6-cloro-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (sintetizado a partir de 4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y 2-(4-(difluorometoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano mediante el Procedimiento General I (Método C, Paso E, G) (120 mg, 0,26 mmol, 1,0 eq.) y Fe(acac) 3 (93 mg, 0,26 mmol, 1,0 eq.) en THF (5 ml) y NMP (1 ml) se le añadió bromuro de n-propilmagnesio (1 M en éter dietílico) (4,0 ml, 4,0 mmol, 15,4 eq.) gota a gota a 0° C bajo atmósfera de N2. La mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se inactivó cuidadosamente con agua con hielo (10 ml). La mezcla bruta se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante RP-prep-HPLC para dar 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-6-propilpirido[3,2-c] piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 205).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.51 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.99 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.83 (d, J=8 . 6 Hz, 2H), 7.72 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.35 (t, Jhf=72.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J=9.3 Hz, 1H), 7.26 (d, J=8 . 6 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 2.78 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.82-1.61 (m, 2H), 0.94 (t, J=7.4 Hz, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 462 [M+H]+.
Síntesis de 4-cidohexM-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metM-2H-mdazol-5-M)pirido[3,2-c]piridazm-3(2H)-ona (Ejemplo 206)
Figure imgf000082_0001
Paso A: 4-cloro-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se agitó una mezcla de 4,6-dicloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (300 mg, 0,87 mmol, 1,0 eq., sintetizado mediante el Procedimiento General I (Método A, Pasos A-D), trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoroetilo (278 mg, 1,3 mmol, 1,49 eq.) y Cs2CO3 (565 mg, 1,7 mmol, 1,95 eq.) en DMF ( 8 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y se inactivó con agua con hielo (10 ml). La mezcla bruta se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar 4-cloro-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (250 mg, 74% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 392 [M+H]+.
Paso B: 4-ciclohexil-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se agitó una mezcla de 4-cloro-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-2H,3H-pirido[3,2-c]piridazin-3-ona ( 1 0 0 mg, 0,26 mmol, 1 , 0 eq.), Fe(acac)3 (90 mg, 0,26 mmol, 1 , 0 eq.) y mezcla de NMP/Th F (0,5 ml/5 ml) se agitó a 0° C en atmósfera de N2. Se añadió bromuro de ciclohexilmagnesio (1 M en éter dietílico) (2,6 ml, 2,6 mmol, 10,0 eq.) gota a gota a 0° C. Luego, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche, la reacción se monitorizó por TLC, una vez se hubo completado, la reacción se inactivó con agua con hielo (10 ml), la mezcla bruta se extrajo con EtOAc (10 ml x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (30 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante RP-prep-HPLC para dar 4-ciclohexil-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[ 3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 206).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm) 8.48 (s, 1H), 7.99-7.92 (m, 2H), 7.69 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.39 (dd, J=9.1, 2.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.50 (t, Jhf=54.2 Hz, 1H), 4.79 (td, Jhf=15.1, 3.2 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 2.36-2.32 (m, 1H), 1.88-1.69 (m, 4H), 1.63-1.55 (m, 2H), 1.43-1.19 (m, 4H).
LC-MS (ESI): m/z 439 [M+H]+.
Síntesis de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-hidroxifenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 207)
Figure imgf000082_0002
Se agitó una mezcla de 4-cloro-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)ona (100 mg, 0,25 mmol, 1,0 eq.), Pd(OAc)2 (12 mg, 0,05 mmol, 0,2 eq.), K2CO3 (105 mg, 0,75 mmol, 3,0 eq.) y ácido (4-hidroxifenil)borónico (53 mg, 0,38 mmol) en una mezcla de dioxano/agua (5 ml, 10/1, v/v) a 100° C en atmósfera de N2. Luego, la mezcla de la reacción se vertió en agua con hielo (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante RP-prep-HPLC para dar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-hidroxifenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3, 2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 207).
1H NMR (400 MHz, DIVISOR) 8 (ppm): 8.49 (s, 1H), 8.04-7.97 (m, 2H), 7.77-7.62 (m, 3H), 7.44 (dd, J=9.1, 1.9 Hz, 1H), 7.03 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.42 (tt, Jhf=54.5, 3.5 Hz, 1H), 4.61 (td, J=15.0, 3.5 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 450 [M+H]+.
Síntesis de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(3-etil-2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c] piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 208)
Figure imgf000083_0001
Paso A: 1-(5-bromo-2-metil-2H-indazol-3-il)etanol
A una solución de 5-bromo-2-metil-2H-indazol (500 mg, 2,37 mmol, 1 eq.) en THF (10 ml) se le añadió n-BuLi (2,5 M en hexano) (4,7 ml, 11,85 mmol, 5 eq.) gota a gota a -65° C bajo atmósfera de N2. Después de 3 h, se añadió acetaldehído (5 M en THF) (0,6 ml, 3,0 mmol, 1,27 eq.). Luego, la reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. La mezcla de la reacción se vertió en NH4Cl ac. sat. (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 1-(5-bromo-2-metil-2H-indazol-3-il)etanol (500 mg, 83% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 255, 257 [M+H]+.
Paso B: 5-bromo-3-etil-2-metil-2H-indazol
Se agitó una mezcla de 1-(5-bromo-2-metil-2H-indazol-3-il)etanol (200 mg, 0,78 mmol, 1 eq.), trietilsilano (453 mg, 3,9 mmol, 5 eq.), TFA (889 mg, 7,8 mmol, 10 eq.) en DCM (5 ml) a 40° C durante 16 horas. Luego la mezcla se vertió en NaHCO3 ac. sat. (10 ml) a 0° C y se extrajo con DCM (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para dar 5-bromo-3-etil-2-metil-2H-indazol (80 mg, 43% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 239, 241 [M+H]+.
Se sintetizó 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(3-etil-2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 208) a partir de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona y 5-bromo-3-etil-2-metil-2H-indazol a través del Procedimiento General II (Método A, Paso G).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 : 8.13 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.07 (dd, J=2.0 Hz, 0.8 Hz, 1H), 7.93 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.68 (dd, J=9.2 Hz, 0.8 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=8 . 8 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.41 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.13 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.47 (tt, Jhf=54.4 Hz, 3.2 Hz, 1H), 4.65 (td, Jhf=15.2 Hz, 3.2 Hz, 2H), 4.20 (s, 3H), 3.17 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.33 (t, J=7.2 Hz, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 528 [M+H]+.
Síntesis de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)feml)-8-(hidroximetM)-2-(2-metN-2H-mdazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 209) y 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)feml)-8-(difluorometil)-2-(2-metil-2H -indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 210)
Figure imgf000084_0001
Paso A: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-(hidroximetil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona
A una solución de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-8-(((tetrahidro-2H- piran-2-il)oxi)metil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 142, sintetizado a partir de 4-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-2-enoato de (E)-metilo (Ref: Tetrahedron 2012, 6 8 , 3444-3449) mediante el Procedimiento general I (Método A, Paso E-F) (180 mg, 0,3 mmol, 1,0 eq.) en dioxano (3 ml) se le añadió HCl 1 N (ac.) (1 ml, 1 mmol, 3,3 eq.) a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Luego, la reacción se inactivó con agua con hielo (20 ml), se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-(hidroximetil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 209).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.50 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.84 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.70 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8 . 8 Hz, 1H), 7.34 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.94 (s, 1H), 6.39 (tt, Jhf=54.4 Hz, 3.2 Hz, 1H), 5.63 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.58 (td, Jhf=15.2 Hz, 3.2 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 530 [M+H]+.
Paso B: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazina-8 -carbaldehído
A una solución de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-(hidroximetil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (60 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) en CHCh (5 ml) se le añadió MnO2 recién activado (96 mg, 1,0 mmol, 10,0 eq.) en una porción. Luego, la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El progreso de la reacción se monitorizó por TLC. Una vez se hubo completado, la mezcla de la reacción se filtró a través de una almohadilla corta de Celite®, el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar 6 -(2,2-difluoroetoxi)-4-(4)-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazina-8-carbaldehído bruto (50 mg) como sólido amarillo, que se usó en el paso siguiente sin purificación adicional. LC-MS: m/z 528 [M+H]+.
Paso C: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-(difluorometil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona
A una solución de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazina-8-carbaldehído (50 mg, bruto) en DCM (3 ml) se le añadió DAST (46 mg) a -60° C. Después de la adición, se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas adicionales. Una vez se hubo completado la reacción, se añadió agua con hielo (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera ( 20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo se purificó mediante RP-prep-HPLC para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-(difluorometil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 210).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.53 (s, 1H), 8.08 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.73 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.51 (dd, J=9.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.45 (t, Jhf=53.6 Hz, 1H), 7.36 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.30-7.25 (m, 3H), 6.41 (tt, Jhf=54.4 Hz, 3.2 Hz, 1H), 4.61 (td, Jhf=15.2 Hz, 3.2 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 550 [M+H]+.
Síntesis de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)feml)-8-((dimetMammo)metM)-2-(2-metM-2H-mdazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 211)
Figure imgf000085_0001
Paso A: metanosulfonato de (6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazin-8-il)metilo
A una solución de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-(hidroximetil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (90 mg, 0,17 mmol, 1,0 eq., Ejemplo 209) en DCM (3 ml) se le añadió MsCI (29 mg, 0,25 mmol, 1,47 eq.) y TEA (34 mg, 0,34 mmol, 2,0 eq.) a temperatura ambiente. Y la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Luego, la mezcla de la reacción se vertió en agua con hielo (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar metanosulfonato de (6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazin-8-il)metilo (90 mg, 87% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS: m/z 608 [M+H]+.
Paso B: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-((dimetilamino)metil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[ 3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
A una solución de metanosulfonato de (6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazin-8-il)metilo (50 mg, 0,08 mmol, 1 , 0 eq.) en Dm sO (3 ml) se le añadió NH(Me)2 sal de HCl (33 mg, 0,41 mmol, 5,1 eq.), Nal (23 mg, 0,16 mmol, 2,0 eq.) y NaHCO3(14 mg, 0,16 mmol, 2,0 eq.) a temperatura ambiente. Y la mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 2 horas. Luego, la mezcla de la reacción se vertió en agua con hielo (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante RP-prep-HPLC para dar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-8-((dimetilamino)metil)-2-(2-metil- 2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 211).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 (ppm) 8.52 (s, 1H), 8.05 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.72 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=9.2, 2.0 Hz, 1H), 7.36 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.25 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 6.96 (s, 1H), 6.40 (tt, Jhf=54.4, 3.4 Hz, 1H), 4.23 (s, 3H), 3.77 (s, 2H), 2.29 (s, 6 H).
LC-MS (ESI): m/z 557 [M+H]+.
Síntesis de 8-ammo-6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)feml)-2-(2-metN-2H-mdazol-5-N)pirído[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 212)
Figure imgf000085_0002
Paso A: Ácido 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazina-8 -carboxílico
A una mezcla de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazina-8-carbaldehído (120 mg, 0,23 mmol, 1,0 eq., sintetizado como en el Ejemplo 210 Paso B) y HCO2H (0,1 ml, 2,65 mmol, 11,5 eq.) en H2O (0,5 ml) se le añadió lentamente H2O2 (30% en peso en H2O, 0, 1 ml, 1, 14 mmol, 5 eq.) a 4° C. Y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Luego, la mezcla se vertió en H2O (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar ácido 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazina-8-carboxílico (80 mg, 52% de rendimiento) como un sólido amarillo. LC-MS (ESI): m/z 544 [M+H]+.
Paso B: 8-amino-6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona
A una solución de ácido 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazina-8-carboxílico (80 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq.) en DMF (2 ml) se le añadió TEA (22 mg, 0,22 mmol, 1,45 eq.) y DPPA (61 mg, 0,22 mmol, 1,45 eq.). Y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Luego se añadieron 0,3 ml de agua a la solución y la mezcla de la reacción se agitó a 100° C durante la noche. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en H2O (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante RP-Prep-TLC para proporcionar 8-amino-6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil -2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 212).
1H NMR (400 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 8.49 (s, 1H), 8.05 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.69 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.51 (dd, J=9.2 Hz, 1.6 Hz, 1H), 7.32 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.23-7.14 (m, 4H), 6.31 (tt, Jhf=54.0 Hz, 3.6 Hz, 1H), 5.83 (s, 1H), 4.47 (td, J=14.8 Hz, 3.6 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 515 [M+H]+.
Síntesis de 6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-((trimetilsilil)etinil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 213), 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-etinil-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 214) y 4-((1H-pirazol-3-il)etinil)-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 215)
Figure imgf000086_0001
Paso A : 6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-((trimetilsilil)etinil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-uno
Se agitó una mezcla de 4-cloro-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (180 mg, 0,46 mmol, 1,0 eq., sintetizado como en el Ejemplo 206 Paso A), trimetil((tributilestannil)etinil)silano (268 mg, 0,69 mmol, 1,5 eq.) y Pd(PPh3)4 (58 mg, 0,05 mmol, 0,11 eq.) en dioxano (5 ml) a 80° C en atmósfera de N2 durante 15 horas. La mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna sobre gel de sílice para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-((trimetilsilil)etinil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 213).
1H NMR (400 MHz, DMSO-da) 5 (ppm): 8.50 (s, 1H), 8.08 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.98 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.41 (dd, J=9.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.09 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.54 (tt, Jhf=54.8 Hz, 3.6 Hz, 1H), 4.82 (td, Jhf=14.4 Hz, 3.6 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 0.28 (s, 9H).
LC-MS (ESI): m/z 454 [M+H]+.
Paso B: 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-etinil-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona
Se agitó una mezcla de 6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-4-((trimetilsilil)etinil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (126 mg, 0,28 mmol, 1,0 eq.) y Cs2CO3 (183 mg, 0,56 mmol, 2,0 eq) en 2,2-difluoroetan-1-ol (4 ml) a temperatura ambiente durante 4 horas La mezcla resultante se vertió en H2O (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-etinil-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 214).
1H NMR (400 MHz, DIVISOR) 8 (ppm): 8.51 (s, 1H), 8.08 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.99 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.72 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.41 (dd, J=9.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.10 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.52 (tt, Jhf=54.4 Hz, 3.2 Hz, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.83 (td, Jhf=14.8 Hz, 3.2 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 382 [M+H]+.
Paso C: 4-((1H-pirazol-3-il)etinil)-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona
Se agitó una mezcla de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-etinil-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (50 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq.), DIPEA (50 mg, 0,39 mmol, 3,0 eq.), Pd(PPh3)2Ch (10 mg, 0,013 mmol, 0,1 eq.) y 3-yodo-1H-pirazol (101 mg, 0,52 mmol, 4,0 eq.) y Cul (25 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq.) en DMF (5 ml) a temperatura ambiente en atmósfera de N2 durante 4 horas. Luego, la mezcla de la reacción se vertió en H2O (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante RP-prep-HPLC para proporcionar 4-((1H-pirazol-3-il)etinil)-6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 215).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 13.39 (br, s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.09 (d, J=9.2 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.91-7.81 (m, 1H), 7.72 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.44 (dd, J=9.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 6.55 (tt, Jhf=54.4 Hz, 3.2 Hz, 1H), 4.88 (td, Jhf=14.8 Hz, 3.2 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 448 [M+H]+.
Síntesis de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)feml)-2-(4-oxociclohexil)pirido[3,2-c]piridazm-3(2H)-ona (Ejemplo 216)
Figure imgf000087_0001
Se agitó una solución de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-7-en-8-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (sintetizada a partir de 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona y trifluorometanosulfonato de 1,4-dioxaespiro[4,5]dec-7-en-8-ilo mediante el Procedimiento general II (Método A, Paso G)) (10 mg, 0,0197 mmol) y HCl conc. (0,1 ml) en THF (1,5 ml) a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se vertió en NaHCO3 ac. sat. (5 ml) y se extrajo con EA (5 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera ( 20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. Luego se agitó una mezcla del residuo y Rh(PPh3)3Cl (18 mg, 0,0197 mmol) en tolueno (3 ml) a temperatura ambiente durante la noche en atmósfera de H2. Luego, la mezcla se vertió en H2O (5 ml) y se extrajo con EtOAc (5 ml x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante RP-prep-HPLC para proporcionar 6-(2,2-difluoroetoxi)-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(4-oxociclohexil)pirido[3,2-c]piridazina-3(2H)-ona (Ejemplo 216).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8.02 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.82 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.34 (t, Jhf=74.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.02 (d, J=9.6 Hz, 1H), 6.37 (tt, Jhf=54.4 Hz, 2.8 Hz, 1H), 5.62 (hept, J=4.8 Hz, 1H), 4.54 (td, Jhf=14.8 Hz, 2.8 Hz, 2H), 2.78-2.63 (m, 2H). 2.45-2.23 (m, 2H), 2.29-2.14 (m, 1H) (HCO2H salt).
LC-MS (ESI): m/z 466 [M+H]+.
Síntesis de 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-6-etoxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 217)
Figure imgf000088_0001
Se agitó una mezcla de 6-cloro-4-(4-(difluorometoxi)fenil)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]pindazin-3(2H)-ona (sintetizado a partir de 4-doro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y 2-(4-(difluorometoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano mediante el Procedimiento general I (Método C, Paso E, G) (120 mg, 0,26 mmol, 1,0 eq.) y EtONa (177 mg, 2,6 mmol, 10,0 eq.) en EtOH ( 8 ml) a 40° C durante 3 h. Luego, la mezcla de la reacción se vertió en agua con hielo (10 ml) y se extrajo con DCM (10 ml x 3). las capas orgánicas se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante RP-prep-HPLC para dar 4-(4-(difluorometoxi)fenil)-6-etoxi-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazin-3(2H)-ona (Ejemplo 217).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 : 8.49 (s, 1H), 8.04 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.97 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 7.70 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=9.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.34 (t, Jhf=74.0, 1H), 7.24 (d, J=8 . 8 Hz, 2H), 6.95 (d, J=9.6 Hz, 1H), 4.34 (q, J=7.2 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 1.32 (t, J=7.2 Hz, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 464 [M+H]+.
Síntesis de 5-(6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazin-4-il)-1H-indol-3-carbonitrilo (Ejemplo 331)
Figure imgf000088_0002
A una solución de 7-(2,2-difluoroetoxi)-3-(2-metil-2H-indazol-5-il)-1-(1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indazol-5-il)-3,4-dihidropirido[2,3-d]pirimidin-2(1H)-ona (54 mg, 0,09 mmol, 1,0 eq) (sintetizado a partir de 4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-3-carbonitrilo (Ref: WO2018215316) a través del Procedimiento General I (Método A, Paso E y F)) en DCM (3 ml) se le añadió TFA (1 ml), la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Luego, la mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo se volvió a disolver en MeOH (2 ml) y NH4OH conc. (1 ml), la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Una vez se hubo completado, la mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante RP-Prep-HPLC para dar 5-(6-(2,2-difluoroetoxi)-2-(2-metil-2H-indazol-5- il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazin-4-il)-1H-indol-3-carbonitrilo (Ejemplo 331).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8 12.29 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.12 (d, J=0.9 Hz, 1H), 8.10-8.01 (m, 2H), 7.75 (dd, J=8 . 6 Hz, 1.5 Hz, 1H), 7.71 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.60 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=9.1 Hz, 2.0 Hz, 1H), 7.06 (d, J=9.4 Hz, 1H), 6.38 (tt, Jhf=54.5 Hz, J=3.3 Hz, 1H), 4.54 (td, Jhf=15.0 Hz, J=3.4 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 498 [M+H]+.
Síntesis de 5-(6-(etilamino)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazin-4-il)-1H-indol-3-carbonitrilo (Ejemplo 332)
Figure imgf000089_0001
A una solución de 5-(6-(etNamino)-2-(2-metil-2H-indazol-5-N)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]pindazin-4-il)-1-((2-(trimetilsiMl)etoxi)metil)-1H-indol-3-carbonitrilo (100 mg, 0,17 mmol) (sintetizado a partir de 4-cloro-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)pirido[3,2-c]piridazina-3,6(2H,5H)-diona y 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-indol-3-carbonitrilo (Ref: WO2018215316) mediante el Procedimiento General I (Método A, Paso E; Método D, Paso I)) en DCM ( 6 ml) se le añadió TFA ( 6 ml), la mezcla de la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Luego, la mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo se volvió a disolver con MeOH (4 ml) y NH4OH conc. (2 ml), la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 h adicionales. Una vez se hubo completado, la mezcla de la reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante RP-prep-HPLC para dar 5-(6-(etilamino)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-3-oxo-2,3-dihidropirido[3,2-c]piridazin-4-il)-1H-indol-3-carbonitrilo (Ejemplo 332).
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) (ppm): 8 12.17 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.76 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.64 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.51 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J=8.9 Hz, 1H), 6.78 (d, J=9.3 Hz, 1H), 4.21 (s, 3H), 3.31 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.14 (t, J=7.1 Hz, 3H).
LC-MS (ESI): m/z 461 [M+H]+.
Ensayo bioquímico
La proteína Mat2A se expresó mediante baculovirus recombinante en células infectadas con SF9 usando el sistema Bacto Bac clonado en el vector pFASTBAC1 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Se aisló MAT2A recombinante del lisado celular de 150 g de células infectadas usando cromatografía en columna de HP Ni Sefarosa. El homodímero de MAT2A recombinante se eluyó con imidazol 250 y 500 mM, y las fracciones que contenían MAT2A se identificaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida de dodecilsulfato de sodio y se agruparon.
Para la determinación de la potencia inhibidora de los compuestos contra el homodímero de MAT2A, la proteína se diluyó a 4 pg/ml en tampón de ensayo (50 mM Tris, pH 8,0, KCl 50 mM, MgCh 15 mM, EDTA 0,3 mM, albúmina de suero bovino [BSA] al 0,005% [p/v]). El compuesto de prueba se preparó en sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 100% a 50 veces la concentración final deseada. Se añadió un volumen de 1 pl de dilución de compuesto a 40 pl de dilución de enzima y se permitió que la mezcla se equilibrara durante 60 minutos a 25° C. El ensayo enzimático se inició mediante la adición de 10 pl de mezcla de sustrato (ATP 500 pM, pH 7,0, L-metionina 400 pM en tampón de ensayo 1x), y la mezcla se incubó durante 60 minutos adicionales a 25° C. La reacción se detuvo y se midió el fosfato liberado soltado por la enzima en cantidades estequiométricas mediante la producción de S-adenosil metionina (SAM) usando el kit PiColorLock Gold (Innova Biosciences, Reino Unido). Las cantidades absolutas de producto se determinaron por comparación con una curva estándar de tampón de fosfato de potasio, pH 8,0.
Los compuestos específicos divulgados en la presente se probaron en el ensayo anterior y se determinó que inhibían MAT2A con una IC50 de acuerdo con las siguientes puntuaciones: (A) menos de 100 nM (>40% de inhibición máxima), (B) entre 100 nM y 1 pM (>40% de inhibición máxima) y (c ) entre 1 pM y 10 pM (>40% de inhibición máxima), como se muestra en la Tabla 2 a continuación.
Ensayo celular de interacción con el objetivo (SAM)
La medición de la actividad de MAT2A en células se realizó mediante cuantificación directa de la abundancia del producto de su actividad enzimática, SAM. Las células cancerosas se trataron con inhibidores de MAT2A candidatos durante un período de incubación adecuado, y luego las células se lisaron usando un reactivo que inactivó cualquier actividad enzimática adicional. Se recogieron los metabolitos solubles, incluyendo la SAM, y la propia SAM se midió directamente a partir del lisado mediante LC-MS/MS cuantitativa.
Se realizó un ensayo típico usando una línea celular de carcinoma de colon humano HCT116 que se había manipulado genéticamente para eliminar el gen MTAP (disponible comercialmente de Horizon Discovery). Se utilizó esta línea celular porque se determinó que la pérdida del gen MTAP predice la sensibilidad a los inhibidores de MAT2A. Las células se sembraron en placas de 96 pocillos a una densidad celular apropiada. Después de 24 horas, las células se trataron con el inhibidor de MAT2A candidato. Antes de la adición a las células, primero se diluyó en serie el compuesto en DMSO al 100%, típicamente como una dilución en serie de 3 veces a partir de 500 veces la dosis máxima con 10 puntos de dosis, incluyendo el control de DMSO únicamente. Luego se transfirió el compuesto a una placa madre de trabajo en medio de cultivo celular añadiendo 5 pl de compuesto en DMSO a 495 pl de medio de cultivo celular. Este stock de trabajo se añadió luego a las células a través de una dilución adicional de 5 veces, añadiendo 25 pl de stock de trabajo a 100 pl de células en medios de cultivo. Después de la adición del compuesto, las células se incubaron a 37° C/5% de CO2 durante 72 horas.
Para cuantificar los niveles de SAM después del tratamiento compuesto, las células se lavaron suavemente una vez en tampón de carbonato de amonio (75 mM a pH 7,4), se colocaron en hielo seco y se lisaron con tampón de extracción de metabolitos (80% de metanol frío y 2 0 % de agua (v/v) con ácido acético a una concentración final de 1 M con 200 ng/ml de d3-SAM deuterado como control interno). Después de la centrifugación a 4° C a 3200 rpm durante 30 minutos, el sobrenadante se recogió y almacenó a -80° C hasta su análisis por cromatografía líquida con espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS). El análisis LC-MS/MS se realizó usando un espectrómetro de masas API6500 (Sciex, Framingham, Mass., USA) funcionando en modo de pulverización de iones positivos y equipado con una columna BEH Amide Waters UPLC Acquity (Waters, Milford, Mass., USA). Se adquirieron datos de monitorización de reacción múltiple para SAM y el estándar d3-SAM, usando un par de transición de masas a m/z 399,2^-250,1 y 402,2^250,1, respectivamente. En un análisis LC-MS/MS típico, el caudal inicial fue de 0,5 ml/min de fase móvil A al 25% (acetonitrilo y agua a 5:95 (v/v) con ácido fórmico al 1 % y acetato de amonio 10 mM) y Fase móvil B al 75% (acetonitrilo y agua a 95:5 (v/v) con ácido fórmico al 1% y acetato de amonio 10 mM), 0,2-0,5 minutos con fase móvil B al 75%-35%, fase móvil A al 25%-65%, a 0,5 min fase móvil A al 65% y fase móvil B al 35%, 1 ,0 -1 ,1 minutos con fase móvil B al 35%-75%, fase móvil A al 65%-25%, a 1,1 min fase móvil A al 25% y fase móvil B al 75% con un tiempo de ejecución total de 1,5 minutos.
Los compuestos específicos divulgados en la presente se probaron en el ensayo anterior y se determinó que inhibían SAM con una IC50 de acuerdo con las siguientes puntuaciones: (A) menos de 100 nM (>60% de inhibición máxima), (B) entre 100 nM y 1 pM (>60% de inhibición máxima), (C) más de o igual a 1 pM (>60% de inhibición máxima) y (NT) no probado, como se muestra en la Tabla 2 a continuación.
Ensayo para la inhibición de la proliferación celular
El impacto del compuesto de prueba sobre el crecimiento de células cancerosas se evaluó tratando las células cancerosas con el compuesto durante 4 días y luego midiendo la proliferación usando una lectura de proliferación celular basada en ATP (Cell Titer Glo, Promega Corporation).
En un ensayo típico, se sembraron en placas un par isogénico de líneas celulares de carcinoma de colon humano HCT116 que varían solo en el estado de deleción de MTAP (HCT116 MTAP+/+ y HCT116 MTAP-/-) en placas de 96 pocillos a la densidad celular adecuada. Después de 24 horas, las células se trataron con el inhibidor de MAT2A candidato. Antes de la adición a las células, el compuesto se diluyó en serie primero en DMSO al 100%, típicamente como una dilución en serie de 3 veces a partir de 500 veces la dosis máxima con 10 puntos de dosis, incluyendo el control de DMSO únicamente. Luego se transfirió el compuesto a una placa de solución madre de trabajo en medio de cultivo celular añadiendo 5 pl de compuesto en DMSO a 495 pl de medio de cultivo celular. Esta solución madre de trabajo se añadió luego a las células a través de una dilución adicional de 5 veces, añadiendo 25 pl de solución madre de trabajo a 100 pl de células en medios de cultivo. Después de la adición del compuesto, las células se incubaron a 37° C/CO2 al 5% durante 4 días.
Para medir la inhibición de la proliferación celular, se permitió que las células se equilibraran a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se trataron con 125 pl de reactivo Cell Titer Glo. Luego, la placa se cubrió con papel de aluminio y se agitó durante 15 minutos para asegurar el mezclado completo y la lisis celular completa. Luego, se midió la señal luminiscente usando un luminómetro basado en placa Veritas versión 1.9.2 usando la curva estándar de ATP para confirmar la reproducibilidad del ensayo de una serie a otra. Esta medida de luminiscencia se convirtió en un índice de proliferación restando de cada punto de datos la señal de luminiscencia de ATP medida en un pocillo del banco (sin células) y dividiéndola por la señal de luminiscencia de ATP medida en el pocillo de control de DMSO al 0,2% ajustado para la señal en el pocillo en blanco. Luego se representó la actividad del compuesto como un cambio porcentual en la proliferación con respecto al control de DMSO en la placa frente alog10 de a concentración del compuesto en unidades molares (M).
Los compuestos específicos divulgados en la presente se probaron en el ensayo anterior y se determinó que inhibían la proliferación celular con una IC50 de acuerdo con las siguientes puntuaciones: (A) menos de 100 nM (>30% de inhibición máxima para MTAP -/-; >10% inhibición máxima para m Ta P /+), (B) entre 100 nM y 1 pM (>30% de inhibición máxima para MTAP -/- ; >10% de inhibición máxima para MTAP /+), (C) más de o igual a 1 pM, y (NT) no probado, como se muestra en la Tabla 2 a continuación.
Tabla 2
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continuación
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continuación
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continuación
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continuación
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Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de acuerdo con la Fórmula I:
Figure imgf000096_0001
en donde:
L es O, S, NR o un enlace;
R es H o alquilo C1-C6;
R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-C6 , alquenilo C2-C6, carbociclilo C3-C6, -(alquil C1-C6)(carbociclilo C3-C6), y -(alquil C1-C6)(cicloalquenilo C3-C6) en donde
cualquier alquilo en R1 es lineal o ramificad, y
R1 está opcionalmente sustituido con 1-6 halo o 1-6 deuterio.
o cuando L es NR, entonces R y R1 en combinación con L representan un heterocicloalquilo de 3 a 6 miembros (en donde 1-4 miembros del anillo se seleccionan independientemente de N, O y S) opcionalmente sustituido por uno o más RA;
R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquinilo C2-C6, arilo C6-C10, carbociclilo C3-C6 , heteroarilo de 5 a 10 miembros (en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S), y heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalquilo se seleccionan independientemente de N, O y S).
en donde R2 y R3 están independientemente y opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes que se seleccionan del grupo que consiste en RA, ORA, halo, -N=N-RA, -NRARB, -(alquilo C1-C6)NRARB, -C(O)Ora, -C(O)NRARB, -OC(O)RA, -Si(alquilo C ^ O a y -CN;
R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno o más halo, hidroxi o heterocicloalcoxi de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalcoxi se seleccionan independientemente de N, O, y S)), -O(alquilo C1-C6) (opcionalmente sustituido por uno o más halo), -OH, halo, -CN, -(alquilo C1-C6)NRARB, y -NRARB;
R5 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 , halo, -CN y-NRCRD;
RA y RB se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, -CN, -hidroxi, oxo, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 , alquenilo C2-C6 , alquinilo C2-C6, -NH2, -S(O)0-2-(alquilo C1-C6), -S(O)0-2-(arilo C6-C10), -C(O)(alquilo C1-C6), -C(O)(carbociclilo C3-C14), -carbociclilo C3-C14, -(alquilo C1-C6)(carbociclilo C3-C14), arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del heterocicloalquilo se seleccionan independientemente de N, O y S), y heteroarilo de 5 a 10 miembros (en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O, y S);
en donde cada fracción alquilo, alcoxi, alquenilo, alquinilo, arilo, carbociclilo, heterocicloalquilo y heteroarilo de RA y RB está opcionalmente sustituida con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en deuterio, hidroxi, halo, -NR'2 (en donde cada R' se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 , arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del anillo se seleccionan independientemente de N, O y S), y heteroarilo de 5 a 10 miembros (en donde 1-4 miembros del heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S)), -NHC(O)(Oalquilo C1-C6), -NO2, -CN, oxo, -C(O)OH, -C(O)O(alquilo C1-C6), -alquilo C1-C6(alcoxi C1-C6), -C(O)NH2, alquilo C1-C6 , -C(O)alquilo C1-C6, -Oalquilo C1-C6, -Si(alquilo C1-C6)3, -S(O)0-2 -(alquilo C1-C6), arilo C6-C10, -(alquilo C1-C6)(arilo C6-C10), heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros y -(alquilo C1-C6)-(heterociclo de 3 a 14 miembros) (en donde 1-4 miembros del heterociclo se seleccionan independientemente de N, O y S), y -O(arilo C6-C14). Cada sustituyente alquilo, alquenilo, arilo y heterocicloalquilo en RA y RBestá opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en deuterio, hidroxi, -Oalquilo C1-C6, halo, -NH2, -(alquilo C1-C6)NH2 , -C(O)OH, CN y oxo;
Re y r d se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-C6 ;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:
R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 (opcionalmente sustituido con uno o más halo, hidroxi o heterocicloalcoxi de 3 a 14 miembros (en donde 1-4 miembros del heterocicloalcoxi se seleccionan independientemente de N, O y S)), -O(alquilo C1 -C6), -(alquilo C1-C6)NRARB, y -NRARB (en donde RA y RB se seleccionan independientemente de H y alquilo C1-C6); y
R5 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-C6, alcoxi C1-C6 y -NRCRD.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde:
(a) por lo menos uno de R4 y R5 es H; y/o
(b) R4 es H; y/o
(c) R5 es H; y/o
(d) cada uno de R4 y R5 es H.
4. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R2 es arilo C6-C10 opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido, opcionalmente en donde R2 es:
(a) arilo C6-C10 opcionalmente sustituido,
opcionalmente en donde R2 es fenilo opcionalmente sustituido; o
(b) heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido, y en donde 1 miembro del anillo es N, opcionalmente en donde:
(i) R2 es un heteroarilo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido; y/o
(ii) R2 es un heteroarilo de 6 miembros opcionalmente sustituido; y/o
(iii) R2 es piridilo opcionalmente sustituido.
5. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde R3 es:
(a) heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido,
opcionalmente en donde R3 se selecciona del grupo que consiste en benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, benzoxazolilo, piridinilo, piridinonilo, piridazinilo, bencimidazolilo, benzotriazolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinolinilo, quinazolinilo, imidazopiridinilo, pirazolopiridinilo, triazolopiridinilo, cinolinilo, isoxazolilo, pirazolilo, benzofuranilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzodioxinilo y tetrahidrobenzodioxinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido; o
(b) es arilo C6-C10 opcionalmente sustituido,
opcionalmente en donde R3 es fenilo opcionalmente sustituido.
6. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R2 es fenilo opcionalmente sustituido y R3 es heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido.
7. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde L es O o NR, opcionalmente en donde R1 es:
(a) alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o carbociclilo C3-C6 opcionalmente sustituido; y/o
(b) alquilo C1-C3 que está opcionalmente sustituido con 1-3 F.
8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde
L es O o NR y R es H;
R1 es alquilo Ci-Cs que está opcionalmente sustituido con 1-3 F;
R2 es heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido (en donde 1 miembro del heterocicloalquilo o heteroarilo es N) o arilo C6-C10 opcionalmente sustituido;
R3 es heterocicloalquilo de 3 a 14 miembros opcionalmente sustituido o heteroarilo de 5 a 10 miembros opcionalmente sustituido en donde de 1 a 3 miembros del heterocicloalquilo o heteroarilo se seleccionan independientemente de N, O y S; y
cada uno de R4 y R5 es H,
opcionalmente en donde L es NR
9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto se selecciona de la tabla siguiente:
Figure imgf000098_0001
continuación
Figure imgf000099_0001
continuación
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(continuación)
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continuación
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continuación
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continuación
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(continuación)
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continuación
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(continuación)
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continuación
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10. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
11. Un compuesto inhibidor de MAT2A o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso en un método para tratar un cáncer en un sujeto que padece del mismo, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto inhibidor de MAT2A o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
12. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el cáncer es un cáncer con MTAP eliminado.
13. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de un cáncer en un sujeto que padece del mismo.
14. El compuesto para el uso de acuerdo con la reivindicación 13, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el cáncer:
(a) es un cáncer con MTAP eliminado, y/o
(b) se selecciona del grupo que consiste en mesotelioma, neuroblastoma, carcinoma de recto, carcinoma de colon, carcinoma de poliposis familiarmente adenomatoso y cáncer colorrectal hereditario sin poliposis, carcinoma de esófago, carcinoma labial, carcinoma de laringe, carcinoma de hipofaringe, carcinoma de lengua, carcinoma de glándulas salivales, carcinoma gástrico, adenocarcinoma, carcinoma medular de tiroides, carcinoma papilar de tiroides, carcinoma renal, carcinoma de parénquima renal, carcinoma de ovario, carcinoma de cuello uterino, carcinoma del cuerpo uterino, carcinoma de endometrio, carcinoma de corion, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, carcinoma de vejiga, carcinoma de testículo, carcinoma de mama, carcinoma urinario, melanoma, tumores cerebrales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma, leucemia linfática aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), carcinoma hepatocelular, carcinoma de vesícula biliar, carcinoma bronquial, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, mieloma múltiple, basalioma, teratoma, retinoblastoma, melanoma coroideo, seminoma, rabdomiosarcoma, osteosarcoma, condrosarcoma, miosarcoma, liposarcoma, fibrosarcoma, sarcoma de Ewing y plasmocitoma; y/o
(c) se selecciona del grupo que consiste en leucemia linfocítica aguda de células B (B-ALL), mesotelioma, linfoma, carcinoma pancreático, cáncer de pulmón, cáncer gástrico, cáncer de esófago, carcinoma de vejiga, cáncer de cerebro, cáncer de cabeza y cuello, melanoma y cáncer de mama,
opcionalmente en donde el cáncer es:
(i) un cáncer de pulmón seleccionado del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma de células escamosas de pulmón; o
(ii) cáncer de mama triple negativo (TNBC); o
(iii) un tumor cerebral seleccionado del grupo que consiste en glioma, glioblastoma, astrocitoma, meningioma, meduloblastoma, tumores neuroectodérmicos periféricos y craneofaringioma; o
(iv) un linfoma seleccionado del grupo que consiste en linfoma de células del manto, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de Burkitt, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y leucemia/linfoma de células T adultas.
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