ES2941462T3

ES2941462T3 - Combinaciones de imetelstat y venetoclax para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda

Info

Publication number: ES2941462T3
Application number: ES17748613T
Authority: ES
Inventors: Fei Huang; Joshua J Rusbuldt; Aleksandra Rizo
Original assignee: Geron Corp
Current assignee: Geron Corp
Priority date: 2016-08-02
Filing date: 2017-07-28
Publication date: 2023-05-23
Anticipated expiration: 2037-07-28
Also published as: MD3493812T2; KR20190049708A; KR20230047206A; IL264451A; EP3493812A1; US11278561B2; CA3217021A1; CA3032118A1; IL264451B2; NZ750191A; PL3493812T3; FI3493812T3; RS64074B1; IL264451B1; MX2022010466A; CL2019000228A1; AU2017305950B2; EP3318276A1; KR102515378B1; EP4218768A1

Abstract

La presente invención se refiere a un tratamiento combinado para cánceres hematológicos. Más específicamente; una combinación de un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 es útil en el tratamiento de cánceres hematológicos, incluida la AML. En determinadas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat o imetelstat sódico y el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Combinaciones de imetelstat y venetoclax para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda

La divulgación proporcionada en el presente documento se refiere al tratamiento de cánceres hematológicos mediante la combinación de un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bc-2.

Antecedentes de la invención

Los pacientes de leucemia mieloide aguda (LMA) tienen opciones de tratamiento limitadas en el momento del diagnóstico; el tratamiento suele adoptar la forma de quimioterapia para reducir rápidamente la carga de células leucémicas. Los procedimientos invasivos de leucaféresis para eliminar grandes cantidades de leucocitos (normales y enfermos) pueden aplicarse en paralelo a la quimioterapia para reducir temporalmente la carga de células tumorales. La quimioterapia en la fase de inducción puede tener éxito, pero la mayoría de las células sanas que residen en la médula ósea del paciente también mueren, lo que causa enfermedad y requiere un tratamiento paliativo adicional para evitar infecciones y aumentar el recuento de leucocitos. Se pueden utilizar rondas adicionales de quimioterapia para intentar mantener a los pacientes en remisión, pero las recaídas son frecuentes.

La telomerasa está presente en más del 90 % de los tumores de todos los tipos de cáncer y falta en los tejidos sanos normales. El imetelstat de sodio es un nuevo e innovador inhibidor de la telomerasa que es un oligonucleótido 13 mero covalentemente lipidado (mostrado a continuación) complementario con la región molde del ARN de la telomerasa humana ("human telomerase RNA", hTR). El imetelstat de sodio no funciona a través de un mecanismo antisentido y, por lo tanto, carece de los efectos secundarios que suelen observarse con este tipo de terapias. El imetelstat de sodio es la sal de sodio del imetelstat (mostrada a continuación):

Imetelstat de sodio

A menos que se indique lo contrario o se deduzca claramente del contexto, las referencias que se hacen a continuación al imetelstat también incluyen sus sales. Como ya se ha mencionado, el imetelstat de sodio, en concreto, es la sal de sodio del imetelstat.

ABT-199/venetoclax (nombre comercial Venclexta) es un inhibidor de Bc-2 aprobado por la FDA para su uso en pacientes con leucemia linfocítica crónica (LLC) con del17p que han recaído/son refractarios. ABT-199 también se conoce como ABT 199, GDC0199, GDC-0199 o RG7601. El nombre químico del ABT-199 es 4-[4-[[2-(4-clorofenil)4,4-dimetilcidohexen-1-il]metil]piperazin-1-il]-N-[3-nitro-4-(oxan-4-ilmetilamino)fenil]sulfonil-2-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida (n.° CAS 1257044-40-8). A menos que se indique lo contrario o se deduzca claramente del contexto, las referencias a continuación al ABT-199 también incluyen las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Sin embargo, en los ejemplos, específicamente, ABT-199 se utilizó en la forma de base libre.

ABT-199, que se muestra a continuación en la forma de base libre, es altamente específico para Bcl-2, a diferencia de otros inhibidores de primera generación que muestran afinidad por miembros relacionados de la familia Bcl e inducen mayores efectos secundarios. La inhibición de Bcl-2 bloquea las señales proapoptóticas causadas por daños o anomalías en el ADN celular y, en última instancia, provoca la muerte celular programada en las células tratadas a través de la cascada de caspasas y la apoptosis por la vía intrínseca.

ABT-199 (mostrado en la forma de base libre)

El documento WO 2014/088785 describe el uso de inhibidores de la telomerasa para el tratamiento de trastornos mieloproliferativos y neoplasias mieloproliferativas. Farady et al., Nature Genetics, 47, 1020-1029 (2015) informa de un estudio sobre genómica y perfil farmacológico de la leucemia linfoblástica aguda mortal positiva a TCF3-HLF y analiza las opciones terapéuticas, incluido el uso de venetoclax (ABT-199).

Breve sumario de la invención

La administración combinada de imetelstat de sodio y ABT-199 en células de LMA proporciona un tratamiento novedoso para los cánceres hematológicos y, específicamente, para la LMA. El imetelstat de sodio se está investigando clínicamente en la fibrosis mieloide (FM) y el síndrome mielodisplásico (SMD). ABT-199 está aprobado por la FDA para la LLC y también se está investigando en la LMA.

Cuando se administran combinados, estos dos agentes pueden promover la apoptosis en las células cancerosas. Cuando se administran combinados, estos dos agentes pueden tratar el cáncer en un sujeto que lo necesite.

Los aspectos de la invención para los que se busca protección son como se definen en las reivindicaciones adjuntas. Las referencias a métodos de tratamiento en el resumen y en la descripción detallada de la invención en esta memoria descriptiva se deben interpretar como referencias a los compuestos, las composiciones farmacéuticas y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) por medio de terapia.

Según un primer aspecto de la invención, se proporciona imetelstat para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) en un paciente en tratamiento con ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Según un segundo aspecto de la invención, se proporciona ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) en un paciente en tratamiento con imetelstat. Según un tercer aspecto de la invención, aparece el imetelstat para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), comprendiendo el método administrar imetelstat y ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo combinados a un sujeto que lo necesite. Según un cuarto aspecto de la invención, se proporciona una combinación que comprende imetelstat y ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), comprendiendo el método la administración de la combinación a un sujeto que la necesite.

En los diversos aspectos de la invención descritos anteriormente, el imetelstat puede ser imetelstat de sodio.

Según los diversos aspectos de la invención descritos anteriormente, el imetelstat puede administrarse durante 1, 2, ^{3, 4, 5,}6 ^{, 7,}8 ^{o más de}8 ^{ciclos de dosificación, comprendiendo cada ciclo de dosificación: (a) la administración}intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat una vez cada cuatro semanas; (b) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat una vez por semana durante cuatro semanas; (c) la administración intravenosa de 2,5 a 7 mg/kg de imetelstat una vez cada tres semanas; o (d) la administración intravenosa de 0,5-9,4 mg/kg de imetelstat una vez cada cuatro semanas. El imetelstat puede ser imetelstat de sodio.

Según los diversos aspectos de la invención descritos anteriormente, en los que el ABT-199 puede ser para administración en una dosis de: (a) de 50 a 400 mg de ABT-199 al día; (b) 2 mg de ABT-199 el día 1 con escalada ^{diaria hasta una dosis final de 800 mg el día}6 ^{y a diario a partir de entonces; o (c) 25 mg de ABT-199 el día 1 con}escalada diaria hasta una dosis final de 400 mg el día 5 y a diario a partir de entonces.

Según los diversos aspectos de la invención descritos anteriormente, la administración de ABT-199 puede ser un día antes, un día después o el mismo día que la administración de imetelstat.

La presente invención también incluye imetelstat de sodio para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) según el tercer aspecto de la invención, comprendiendo el método administrar imetelstat de sodio y ABT-199 combinados a un sujeto que lo necesite. La presente invención también incluye ABT-199 para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) según el segundo aspecto de la invención, comprendiendo el método la administración de ABT-199 e imetelstat de sodio combinados a un sujeto que lo necesite. La presente invención también incluye una combinación que comprende imetelstat de sodio y ABT-199 para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) según el cuarto aspecto de la invención, comprendiendo el método la administración de la combinación a un sujeto que la necesite.

^{En tales aspectos de la invención, el imetelstat de sodio puede administrarse durante 1, 2, 3, 4, 5,}6 ^{, 7,}8 ^{o más de}8 ciclos de dosificación, comprendiendo cada ciclo de dosificación: (a) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada cuatro semanas; (b) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat de sodio una vez por semana durante cuatro semanas; (c) la administración intravenosa de 2,5 a 7 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada tres semanas; o (d) la administración intravenosa de 0,5 a 9,4 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada cuatro semanas.

En tales aspectos de la invención, el ABT-199 puede administrarse en una dosis de: (a) de 50 a 400 mg de ABT-199 al día; (b) 2 mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria hasta una dosis final de 800 ^{mg el día}6 ^{y a diario a partir de entonces; o (c) 25 mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria hasta una dosis final}de 400 mg el día 5 y a diario a partir de entonces.

En tales aspectos de la invención, la administración de ABT-199 puede ser un día antes, un día después o el mismo día que la administración de imetelstat de sodio.

Según un quinto aspecto de la invención, se proporciona un kit para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), que comprende: (a) imetelstat; y (b) ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En tales kits de la invención, el imetelstat puede ser imetelstat de sodio.

Según un sexto aspecto de la invención, se proporciona un método in vitro de inducción de apoptosis en una célula de leucemia mieloide aguda (LMA) que comprende: poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de imetelstat de sodio; y poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de ABT-199.

Según un séptimo aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende imetelstat y ABT-199. El imetelstat puede ser imetelstat de sodio. La composición puede utilizarse en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda.

Breve descripción de las figuras

Las figuras 1A y 1B muestran los efectos del tratamiento de células KG-1 con imetelstat de sodio y/o ABT-199 durante 48 horas. La figura 1A muestra gráficos de puntos de células KG-1 tras 48 horas de tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio y tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura 1B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 48 horas de células KG-1 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 2A y 2B muestran los efectos del tratamiento de células KG-1 con imetelstat de sodio y/o ABT-199 durante 96 horas. La figura 2A muestra gráficos de puntos de células KG-1 tras 96 horas de tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio y tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura 2B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 96 horas de células KG-1 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 3A y 3B muestran los efectos de tratar las células KG-1 con oligonucleótidos desapareados o no complementarios y ABT-199 durante 48 horas. La figura 3A muestra gráficos de puntos de células KG-1 tras 48 horas de tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control y tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura 3B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas como concentración de compuesto para 48 horas de tratamiento de células KG-1 con varias concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control. No comp. se refiere al oligonucleótido de control no complementario. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 4A y 4B muestran los efectos del tratamiento de células KG-1 con oligonucleótidos desapareados o no complementarios y ABT-199 durante 96 horas. La figura 4A muestra gráficos de puntos de células KG1 tras 96 horas de tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control y tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura 4B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas como concentración de compuesto para 48 horas de tratamiento de células KG-1 con varias concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control. No comp. se refiere al oligonucleótido de control no complementario. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 5A y 5B muestran los efectos del tratamiento de células MOLM-13 con imetelstat de sodio y/o ABT-199 durante 48 horas. La figura 5A muestra gráficos de puntos de células MOLM-13 tras 48 horas de tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio y tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura 5B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 48 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

^{Las figuras}6^{A y}6^{B muestran los efectos del tratamiento de células MOLM-13 con imetelstat de sodio y/o ABT-199 durante 48 horas. La figura}6^{A muestra gráficos de puntos de células MOLM-13 tras 96 horas de}tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio y tinción con anexina V y yoduro ^{de propidio. La figura}6^{B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la}concentración del compuesto para un tratamiento de 96 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 7A y 7B muestran los efectos del tratamiento de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótido de control durante 48 horas. La figura 7A muestra gráficos de puntos de células MOLM-13 tras 48 horas de tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control y tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura 7B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas como concentración de compuesto para 48 horas de tratamiento de células MOLM-13 con varias concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control. No comp. se refiere al oligonucleótido de control no complementario. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

^{Las figuras}8^{A y}8^{B muestran los efectos del tratamiento de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control durante 96 horas. La figura}8^{A muestra gráficos de puntos de}células MOLM-13 tras 96 horas de tratamiento con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos ^{de control y tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura}8^{B muestra un gráfico del porcentaje de}células apoptóticas como concentración de compuesto para 96 horas de tratamiento de células MOLM-13 con varias concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótidos de control. No comp. se refiere al oligonucleótido de control no complementario. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

La figura 9 muestra los niveles de transcripción hTERT medidos por RT-qPCR tras el tratamiento con imetelstat de sodio, ABT-199 o la combinación a las 48 y 96 horas en células K^g-1 o MOLM-13.

La figura 10 muestra los niveles de actividad de la enzima telomerasa medidos por qPCR TRAP tras el tratamiento con imetelstat de sodio, ABT-199 o la combinación a las 48 y 96 horas en células KG-1 o MOLM-13.

La figura 11 muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 48 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 12A y 12B muestran el porcentaje de células apoptóticas como concentración de compuesto para 48 horas de tratamiento de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199, oligonucleótido de control despareado y oligonucleótido no complementario. La figura 12A muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 48 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o del oligonucleótido de control desapareado indicado como "Desapareado". La figura 12B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 48 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótido de control no complementario indicado como "no comp.". Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

La figura 13 muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 96 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 14A y 14B muestran el porcentaje de células apoptóticas como concentración de compuesto para 48 horas de tratamiento de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199, oligonucleótido de control despareado y oligonucleótido no complementario. La figura 14A muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 96 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/o del oligonucleótido de control desapareado indicado como "Desapareado". La figura 14B muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas en función de la concentración del compuesto para un tratamiento de 96 horas de células MOLM-13 con diversas concentraciones de ABT-199 y/u oligonucleótido de control no complementario indicado como "no comp.". Las células apoptóticas se marcan doblemente con anexina V y yoduro de propidio.

Las figuras 15A-15D muestran las respuestas medias de cuatro muestras de PBMC ("peripheral blood mononuclear cell", células mononucleares de sangre periférica) purificadas a partir de sangre completa de pacientes con LMA y expuestas ex vivo al tratamiento con ABT-199 y/o imetelstat de sodio a diversas concentraciones durante 16 y 40 horas, y analizadas para determinar la viabilidad celular mediante un ensayo de citometría de flujo con tinción con anexina V y yoduro de propidio. La figura 15Ay la figura 15B muestran gráficos del porcentaje de células viables como concentración del compuesto durante 16 horas de tratamiento de PBMC purificadas por Ficoll de sangre completa de pacientes con LMA con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. La figura 15A muestra los resultados para los leucocitos CD45+. La figura 15B muestra los resultados para las células madre leucémicas CD45+/CD34+. La figura 15C y la figura 15D muestran gráficos del porcentaje de células viables como concentración del compuesto durante 40 horas de tratamiento de PBMC purificadas por Ficoll de sangre completa de pacientes con LMA con diversas concentraciones de ABT-199 y/o imetelstat de sodio. La figura 15^cmuestra los resultados para los leucocitos CD45+. La figura 15D muestra los resultados para las células madre leucémicas CD45+/CD34+. En las figuras 15A-15D, las barras de error representan las desviaciones estándar. Las células viables que quedan después del tratamiento no se marcan con anexina V ni con yoduro de propidio.

La figura 16 muestra la eficacia antitumoral in vivo y el beneficio para la supervivencia del imetelstat de sodio o de ABT-1 como monoterapia o de ambos agentes combinados en un modelo de ratón. Se inocularon ratones con las células MOLM-13 (modelo diseminado) y se trataron con: vehículo, imetelstat de sodio y/o ABT-199, o control de oligonucleótidos desapareados más ABT-199. Se controló la supervivencia de los ratones (n = 10 ratones/grupo al inicio) tras el tratamiento. Específicamente, la figura 16 muestra el porcentaje de supervivencia de los ratones en función de los días posteriores a la implantación de las células tumorales. Los ratones fueron tratados durante 31 días con: (i) Vehículos (MM PEG400/Phosal50/ETOH); (ii) imetelstat ^{de sodio (30 mg/kg), (iii) ABT-199}(100 ^{mg/kg), (iv) MM (oligo desapareado) (30 mg/kg) y a BT-199}(100 mg/kg); y (v) imetelstat de sodio (30 mg/kg) y ^aB^t-199 (100 mg/kg).

Las figuras 17A y 17B muestran las poblaciones apoptóticas a las 96 horas del tratamiento con una dosis única de imetelstat de sodio para las células MOLM-13 y HL-60. La figura 17A muestra la población apoptótica (doble marcaje) a las 96 horas después de una dosis única de tratamiento con imetelstat de sodio para MOLM-13. La figura 17B muestra la población apoptótica (doble marcaje) a las 96 horas tras una dosis única de tratamiento con imetelstat de sodio para la línea celular HL-60 de LMA.

Descripción detallada de la invención

La siguiente descripción detallada de la invención se entenderá mejor cuando se considere junto con las figuras adjuntas. Las figuras se proporcionan para ilustrar determinadas realizaciones de la invención. Para mayor claridad, y no a modo de limitación, la descripción detallada de la invención se divide en subsecciones que describen o ilustran determinadas características, realizaciones o aplicaciones de la presente invención.

La presente divulgación describe métodos de tratamiento de cánceres hematológicos con una combinación de un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2. Las poblaciones celulares resistentes a fármacos pueden provocar una respuesta incompleta al tratamiento o una recaída de la enfermedad. La presente divulgación describe la combinación de un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 que actúan sinérgicamente para inducir mayores niveles de apoptosis en células de LMA que los que cualquiera de los dos fármacos puede inducir de forma independiente. La presente divulgación describe un método de inducción de la apoptosis en una célula cancerosa hematológica que comprende poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de telomerasa y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de Bcl-2. En algunas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199. En algunas realizaciones, el cáncer hematológico es LMA.

En determinados casos, la combinación proporciona un efecto inhibidor mejorado en relación con cualquiera de los componentes solos; en algunos casos, la combinación proporciona un efecto supraaditivo o sinérgico en relación con los efectos combinados o aditivos de los componentes.

En algunas realizaciones, el método es un método de inducción de la apoptosis en una célula cancerosa hematológica. El método en cuestión puede incluir poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la telomerasa, y poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de Bcl-2. En determinadas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat. En algunas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat de sodio. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199. El contacto de la célula con el inhibidor de la telomerasa puede realizarse antes, durante y/o después de poner en contacto de la célula con el inhibidor de Bcl-2. El contacto de la célula con el inhibidor de la telomerasa y el inhibidor de Bcl-2 puede realizarse simultánea o secuencialmente.

En una realización, el inhibidor de la telomerasa es un oligonucleótido con actividad inhibidora de la telomerasa, en concreto, un oligonucleótido como se define en los documentos WO 2005/023994 y/o WO 2014/088785.

En general, pueden emplearse diversas combinaciones del inhibidor de la telomerasa y el inhibidor de Bcl-2, utilizadas secuencial o simultáneamente. Para dosis múltiples, los dos agentes pueden alternarse directamente, o pueden alternarse dos o más dosis de un agente con una dosis única del otro agente, por ejemplo. La administración simultánea de ambos agentes también puede alternarse o intercalarse con dosis de los agentes individuales. En ^{algunos casos, el tiempo entre las dosis puede ser de aproximadamente}1 ^a6 ^{horas, de aproximadamente}6 ^a12 horas, de aproximadamente 12 a 24 horas, de aproximadamente 1 a 2 días, de aproximadamente 1 a 2 semanas o más tras el inicio del tratamiento. Durante el tratamiento, puede reevaluarse la necesidad de completar las dosis previstas.

El término "apoptosis" se refiere al proceso de muerte celular programada, con los cambios morfológicos celulares y la pérdida de viabilidad celular que lo acompañan. En una realización, el método de inducción de la apoptosis proporciona un método para tratar un trastorno neoplásico en un organismo vertebrado.

En el contexto de este método, el término "inducir" significa una relación causal directa o indirecta. Así pues, la presencia y/o el mantenimiento de una determinada condición causa o conduce al resultado inducido.

"Aproximadamente", tal como se usa en el presente documento cuando se refiere a un valor medible, tal como una ^{cantidad, una duración temporal y similares, pretende abarcar variaciones de ±}0,1 ^{% y}±10 ^{%, preferentemente ±}20 ^%o 10 %, más preferentemente ±5 %, incluso más preferentemente ±1 %, y aún más preferentemente ±0,1 % del valor especificado, ya que tales variaciones son apropiadas para realizar los métodos descritos.

Tal como se utiliza en este documento, "LMA" se refiere a la leucemia mieloide aguda.

A. Tratamiento

Tal como se utiliza en el presente documento y como se entiende en la técnica, "tratamiento" es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados, incluidos los resultados clínicos. A efectos de la presente invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, entre otros, el alivio o la mejora de uno o más síntomas, la disminución del grado de la enfermedad, la estabilización (es decir, que no haya empeoramiento) del estado de la enfermedad, la prevención de la propagación de la enfermedad, el retraso o la ralentización de la progresión de la enfermedad, la mejora o la atenuación del estado de la enfermedad y la remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si no se recibe tratamiento.

La presente divulgación proporciona un tratamiento (para cánceres hematológicos, tales como la leucemia mieloide aguda) que comprende combinar la administración del inhibidor de la telomerasa imetelstat de sodio con la administración del inhibidor de Bcl-2 ABT-199. El método de tratamiento en cuestión puede ser más eficaz y producir una mayor respuesta al tratamiento en los pacientes con LMA que la observada con cualquiera de los dos fármacos por separado. En una realización, el método de tratamiento comprende administrar un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 combinados a un sujeto que necesita tratamiento para el cáncer hematológico. En otra realización, dicho cáncer hematológico es LMA. En otra realización, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat. En determinadas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat de sodio. En otra realización, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199.

En algunas realizaciones, la dosis del inhibidor de la telomerasa administrada al sujeto es una cantidad suficiente para tratar la enfermedad cuando el inhibidor de la telomerasa se utiliza solo. En determinadas realizaciones, la dosis del inhibidor de la telomerasa administrada al sujeto es inferior a la cantidad suficiente para tratar la enfermedad cuando el inhibidor de la telomerasa se utiliza solo. En una realización, la dosis del inhibidor de la telomerasa se reduce cuando se utiliza combinado con ABT-199 en el tratamiento de un sujeto al que se le ha diagnosticado LMA. En algunas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat. En algunas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat de sodio. En algunas realizaciones, la dosis de inhibidor de Bcl-2 administrada al sujeto es una cantidad suficiente para tratar la enfermedad cuando el inhibidor de Bcl-2 se utiliza solo. En determinadas realizaciones, la dosis de inhibidor de Bcl-2 administrada al sujeto es inferior a la cantidad suficiente para tratar la enfermedad cuando el inhibidor de Bcl-2 se utiliza solo. En algunas realizaciones, el inhibidor de Bcll-2 es ABT-199. En otra realización, la dosis del inhibidor de Bcl-2 se reduce cuando se utiliza combinado con imetelstat en el tratamiento de un sujeto al que se le ha diagnosticado LMA. En otra realización, las dosis de imetelstat del mismo y de ABT-199 se reducen cuando se usan combinados en el tratamiento de un sujeto al que se le ha diagnosticado l Ma

En otra realización, la duración del tratamiento con un inhibidor de la telomerasa se reduce cuando se utiliza combinado con un inhibidor de Bcl-2 en el tratamiento de un sujeto que tiene un cáncer hematológico. En otra realización, la duración del tratamiento con imetelstat se reduce cuando se utiliza combinado con ABT-199 en el tratamiento de un sujeto con un cáncer hematológico. En otra realización, la duración del tratamiento con ABT-199 se reduce cuando se utiliza combinado con imetelstat en el tratamiento de un sujeto al que se le ha diagnosticado un cáncer hematológico. En otra realización, la duración del tratamiento tanto con imetelstat como con ABT-199 se reduce cuando se utilizan combinados en el tratamiento de un sujeto al que se le ha diagnosticado un cáncer hematológico. En algunas realizaciones, el cáncer hematológico es LMA.

Las combinaciones de fármacos descritas en el presente documento pueden administrarse al sujeto como una composición que contenga ambos fármacos, o por separado. Las combinaciones de fármacos descritas en el presente documento pueden administrarse en una composición de fármacos combinados, por ejemplo, por administración intravenosa, o por separado.

B. Cánceres hematológicos

Los métodos de la presente divulgación pueden utilizarse para el tratamiento de cualquier neoplasia hematológica maligna conveniente. Las neoplasias hematológicas malignas son formas de cáncer que se originan en las células del tejido hematopoyético, tal como la médula ósea, o en las células del sistema inmunitario. Los ejemplos de cánceres hematológicos son las leucemias agudas y crónicas, los linfomas, el mieloma múltiple y los síndromes mielodisplásicos. En algunos casos, la neoplasia hematológica maligna se denomina cáncer hematológico. Las neoplasias mieloproliferativas, o NMP, son neoplasias hematológicas que surgen a partir de células progenitoras hematopoyéticas mieloides neoplásicas de la médula ósea, tales como las células precursoras de los eritrocitos, las plaquetas y los granulocitos. La proliferación de células progenitoras neoplásicas conduce a una hiperproducción de cualquier combinación de leucocitos, eritrocitos y/o plaquetas, dependiendo de la enfermedad. Estas células que han sido hiperproducidas también pueden ser anómalas, lo que puede dar lugar a más complicaciones clínicas. Existen diversos tipos de trastornos mieloproliferativos crónicos. Entre las neoplasias mieloproliferativas se incluyen la trombocitemia esencial, la policitemia vera, la leucemia mielógena crónica, la mielofibrosis, la leucemia neutrofílica crónica, la leucemia eosinofílica crónica y la leucemia mielógena aguda. Un síndrome mielodisplásico (SMD) es un grupo de síntomas que incluye el cáncer de la sangre y la médula ósea. Los SMD incluyen, entre otros, la anemia refractaria, la anemia refractaria con exceso de blastos, la citopenia refractaria con displasia multilinaje y la leucemia mielomonocítica crónica (LMC).

Los cánceres hematológicos de interés incluyen, entre otros, LMA, trombocitemia esencial, policitemia vera, mielofibrosis primaria, mastocitosis sistémica, leucemia mieloide crónica, leucemia neutrofílica crónica, leucemia eosinofílica crónica, anemia refractaria con sideroblastos anillados, citopenia refractaria con displasia multilinaje, ^{anemia refractaria con exceso de blastos de tipo}1^{, anemia refractaria con exceso de blastos de tipo}2 ^{, síndrome}mielodisplásico (SMD) con del (5q) aislado, ^sM^dinclasificable, leucemia mielomonocítica crónica (LMC), leucemia mieloide crónica atípica, leucemia mielomonocítica juvenil, síndromes mieloproliferativos/mielodisplásicos no clasificables, leucemia/linfoma linfoblástico B, leucemia/linfoma linfoblástico T, linfoma difuso de linfocitos B grandes, linfoma primario del sistema nervioso central, linfoma mediastínico primario de células B, linfoma/leucemia de Burkitt, linfoma folicular, leucemia linfocítica crónica (LLC)/linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de linfocitos B, linfoma linfoplasmocítico/macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de células del manto, linfomas de la zona marginal, trastornos linfoproliferativos postrasplante, linfomas asociados al VIH, linfoma de efusión primaria, linfoma intravascular de linfocitos B grandes, linfoma cutáneo primario de linfocitos B, leucemia de células pilosas, gammapatía monoclonal de importancia desconocida, mieloma múltiple latente y plasmocitomas solitarios (óseos y extramedulares solitarios).

Determinadas pautas de tratamiento de la divulgación son especialmente adecuadas para el tratamiento de la LMA. En determinadas realizaciones de la divulgación, el sujeto al que se administra el tratamiento padece LMA. Entre las LMA, las LMA refractarias a la quimioterapia, tales como las ^lM^arefractarias al tratamiento con citarabina combinada con daunorubicina o idarubicina, pueden tratarse utilizando los métodos descritos en el presente documento, por ejemplo, mediante la administración de imetelstat combinado con ABT-199. La respuesta de la LMA al tratamiento es conocida en la técnica. En la tabla 1 se muestra un ejemplo de evaluación de la respuesta de LMA.

Tabla 1: Evaluaciones de la respuesta de LMA

Las combinaciones de fármacos descritas en el presente documento son adecuadas para su uso en el tratamiento de una cualquiera de las enfermedades o los trastornos mencionados en el presente documento, incluido el cáncer hematológico (o sus subtipos). Los fármacos pueden administrarse simultánea o secuencialmente.

Las combinaciones de fármacos descritas en el presente documento son adecuadas para inducir la apoptosis en una célula cancerosa hematológica. Los fármacos pueden administrarse simultánea o secuencialmente.

También será evidente que las composiciones descritas en el presente documento son adecuadas para su uso en el tratamiento de una cualquiera de las enfermedades o los trastornos mencionados en el presente documento, incluido el cáncer hematológico (o sus subtipos).

C. Sujeto

Un sujeto es un mamífero que necesita tratamiento contra el cáncer. En general, el sujeto es un paciente humano. En algunas realizaciones de la divulgación, el sujeto puede ser un mamífero no humano, tal como un primate no humano, un modelo animal (por ejemplo, animales tales como ratones y ratas utilizados en la selección, la caracterización y la evaluación de medicamentos) y otros mamíferos. Tal como se utiliza en el presente documento, los términos paciente, sujeto e individuo se pueden utilizar indistintamente.

D. Agentes anticancerosos

La siguiente sección describe los fármacos utilizados en diversas realizaciones de la divulgación. Dado que estos fármacos son bien conocidos, sólo se ofrecen breves comentarios. Las publicaciones citadas en esta sección pretenden ilustrar aspectos del fármaco en beneficio del profesional; sin embargo, la cita de una publicación concreta en esta sección o en cualquier otra parte de la presente divulgación no pretende limitar la presente invención en ningún aspecto, incluidas las dosis, combinaciones y las indicaciones.

1. Inhibidores de la telomerasa

Los ejemplos de inhibidores de telomerasa incluyen, entre otros, imetelstat, específicamente imetelstat de sodio. En algunos casos, uno o más de un inhibidor de la telomerasa (por ejemplo, dos o tres inhibidores de la telomerasa) pueden administrarse a un mamífero para tratar una neoplasia hematológica maligna.

El imetelstat de sodio es la sal de sodio del imetelstat, que es un oligonucleótido 13-mero sintético N3'^P5'-tiofosforamidato conjugado con lípidos. El nombre químico del imetelstat de sodio es: ADN, d(3'-amino-3'-desoxi-P-tio) (T-A-G-G-G-T-T-A-G-A-C-A-A), 5'-[0-[2-hidroxi-3-(hexadecanoilamino)propil]fosforotioato], sal de sodio (1:13) (SEQ ID NO:1). El imetelstat y el imetelstat de sodio pueden producirse, formularse u obtenerse como se ha descrito en otros documentos (Asai et al., Cancer Res., 63(14):3931-3939 (2003), Herbert et al., Oncogene, 24:5262-5268 (2005), y Gryaznov, Chem. Biodivers., 7:477-493 (2010)).

El imetelstat y el imetelstat de sodio se dirigen a la plantilla de ARN de la telomerasa y se ha demostrado que inhiben la actividad de la telomerasa y la proliferación celular en diversas líneas celulares de cáncer y xenoinjertos de tumores en ratones. Los estudios de fase 1 en pacientes con cáncer de mama, cáncer de pulmón no microcítico y otros tumores sólidos, mieloma múltiple o leucemia linfocítica crónica han proporcionado información sobre la farmacocinética y farmacodinámica del fármaco y han ayudado a establecer 9,4 mg por kilogramo de peso corporal (administrados en infusión intravenosa de 2 horas). Un estudio posterior de fase 2 en pacientes con trombocitemia esencial mostró una actividad reductora de las plaquetas acompañada de una reducción significativa de la carga de alelos mutantes JAK2 V617F y CALR. El imetelstat de sodio se administra habitualmente por vía intravenosa; se contempla que, en la práctica de la presente invención, también puedan utilizarse otras vías de administración, tales como la administración intratecal, la inyección intratumoral, la administración oral y otras. El imetelstat de sodio puede administrarse en dosis comparables a las utilizadas clínicamente de forma habitual. En realizaciones preferidas, el imetelstat de sodio se administra como se describe en el presente documento.

Una realización concreta es según una cualquiera de las otras realizaciones, en la que imetelstat se limita al imetelstat de sodio.

2. Inhibidor de Bcl-2 ABT-199

ABT-199 (venetoclax) representa un innovador inhibidor oral selectivo de BCL-2 que conserva las plaquetas (figura 1B). Mostró afinidad subnanomolar con BCL-2 (Ki < 0,010 nM) y presenta actividad antitumoral contra el linfoma no hodgkiniano (LNH) y LLC in vitro. Los estudios in vivo con xenoinjertos de ratón mostraron actividad contra linfomas agresivos (Myc+), así como contra leucemias agudas. En un ensayo de fase Ia de ABT-199 en LNH R/R se utilizó una dosis diaria continua de 200 a 900 mg. Se administró una dosis única el séptimo día, seguida de un periodo de rodaje con una titulación ascendente escalonada a lo largo de 2 a 3 semanas. El agente único ABT-199 también se estudió en un ensayo multicéntrico sin enmascaramiento de fase 2 en pacientes con LMA R/R de alto riesgo y en pacientes no tratados que no eran aptos para la quimioterapia intensiva. El estudio permitió una escalada de dosis intrapaciente cuando un paciente recibió 20 mg de ABT-199 en la semana (S) 1 día 1. Se aplicó una escalada diaria para alcanzar ^{una dosis final de 800 mg el día}6 ^{y a diario a partir de entonces. Aquellos pacientes sin respuesta completa (RC) o}RC con recuperación hematológica incompleta (RCi) en la primera evaluación programada (final de la semana 4) pudieron escalar a 1200 mg. La dosis recomendada de ABT-199 en la fase 2 combinado con rituximab es de 400 mg al día.

E. Composiciones farmacéuticas

La presente divulgación también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor de la telomerasa (por ejemplo, imetelstat, en concreto, imetelstat de sodio) y un inhibidor de Bcl-2 (por ejemplo, ABT-199). En una realización, la composición farmacéutica comprende imetelstat, en concreto, imetelstat de sodio, y ABT-199. En una realización, la composición farmacéutica comprende imetelstat, en concreto, imetelstat de sodio y ABT-199. Las combinaciones de fármacos descritas en el presente documento pueden administrarse al sujeto como una composición que contenga ambos fármacos.

El vehículo o diluyente debe ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composición y no ser perjudicial para los receptores de la misma.

Para facilitar la administración, las combinaciones de fármacos descritas en el presente documento pueden formularse en diversas formas farmacéuticas con fines de administración. Las combinaciones de fármacos descritas en el presente documento pueden formularse en diversas formas farmacéuticas para su administración. Como composiciones apropiadas pueden citarse todas las composiciones empleadas habitualmente para la administración sistémica de fármacos.

Para preparar las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación, se combina una cantidad eficaz de una combinación de los fármacos descritos en el presente documento en una mezcla íntima con un vehículo farmacéuticamente aceptable, que puede adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas son deseables en forma farmacéutica unitaria adecuada, en concreto, para la administración por vía oral, rectal, percutánea, por inyección parenteral o por inhalación. En algunos casos, la administración puede realizarse mediante inyección intravenosa. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en una forma farmacéutica oral, puede emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos habituales, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones orales líquidas, tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones; o vehículos sólidos, tales como almidones, azúcares, caolín, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan las formas farmacéuticas unitarias orales más ventajosas, en cuyo caso se emplean obviamente vehículos farmacéuticos sólidos. Para las composiciones parenterales, el vehículo comprenderá normalmente agua estéril, al menos en gran parte, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para ayudar a la solubilidad. Por ejemplo, pueden prepararse soluciones inyectables en las que el vehículo comprenda solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y solución de glucosa. Por ejemplo, pueden prepararse soluciones inyectables en las que el vehículo comprenda solución salina, solución de glucosa o una mezcla de solución salina y solución de glucosa. Las soluciones inyectables que contienen la combinación de fármacos descrita en el presente documento pueden formularse en aceite para prolongar su acción. Los aceites apropiados para este fin son, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, aceite de semilla de algodón, aceite de maíz, aceite de soja, ésteres sintéticos de glicerol de ácidos grasos de cadena larga y mezclas de estos y otros aceites. También pueden prepararse suspensiones inyectables, en cuyo caso pueden emplearse vehículos líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. También se incluyen los preparados en forma sólida destinados a convertirse, poco antes de su uso, en preparados en forma líquida. En las composiciones adecuadas para la administración percutánea, el vehículo comprende opcionalmente un agente potenciador de la penetración y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinado con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones pequeñas, y estos aditivos no tienen efectos perjudiciales en la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administración a la piel y/o pueden ser útiles para preparar las composiciones deseadas. Estas composiciones pueden administrarse de diversas formas, por ejemplo, como parche transdérmico, como solución para unción dorsal, como pomada.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas en una forma farmacéutica unitaria para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. La forma farmacéutica unitaria, tal como se usa en el presente documento, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, conteniendo cada forma unitaria una cantidad predeterminada de principios activos calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. Los ejemplos de tales formas farmacéuticas unitarias son comprimidos (incluidos los comprimidos ranurados o recubiertos), cápsulas, píldoras, paquetes de polvo, obleas, supositorios, soluciones o suspensiones inyectables y similares, y sus múltiplos segregados.

Para mejorar la solubilidad y/o la estabilidad de los fármacos en las combinaciones descritas en el presente documento en composiciones farmacéuticas, puede ser ventajoso emplear a-, p- o Y-ciclodextrinas o sus derivados, en concreto, ^{ciclodextrinas sustituidas con hidroxialquilo, por ejemplo,}2^{-hidroxipropil-p-ciclodextrina o sulfobutil-p-ciclodextrina.}También los cosolventes, tales como los alcoholes, pueden mejorar la solubilidad y/o la estabilidad de los compuestos según la divulgación en las composiciones farmacéuticas.

Dependiendo del modo de administración, la composición farmacéutica comprenderá preferentemente del 0,05 al 99 % en peso, más preferentemente del 0,1 al 70 % en peso, aún más preferentemente del 0,1 al 50 % en peso de los fármacos en las combinaciones descritas en el presente documento, y del 1 al 99,95 % en peso, más preferentemente del 30 al 99,9 % en peso, aún más preferentemente del 50 al 99,9 % en peso de un vehículo farmacéuticamente aceptable, basándose todos los porcentajes en el peso total de la composición.

La frecuencia de administración puede ser cualquier frecuencia que reduzca la gravedad de un síntoma de una neoplasia hematológica maligna (por ejemplo, que reduzca o revierta la fibrosis de la médula ósea) sin producir una toxicidad significativa para el mamífero. Por ejemplo, la frecuencia de administración puede ser de aproximadamente una vez cada dos meses a aproximadamente una vez a la semana, o de aproximadamente una vez al mes a aproximadamente dos veces al mes, o de aproximadamente una vez cada seis semanas a aproximadamente dos veces al mes. La frecuencia de administración puede permanecer constante o ser variable durante la duración del tratamiento. Un tratamiento con una composición que contiene uno o más inhibidores de la telomerasa puede incluir períodos de descanso. Por ejemplo, una composición que contenga un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 puede administrarse semanalmente durante un periodo de tres semanas, seguido de un periodo de descanso de dos semanas, y dicha pauta puede repetirse varias veces. Al igual que ocurre con la cantidad eficaz, diversos factores pueden influir en la frecuencia real de administración utilizada para una aplicación concreta. Por ejemplo, la cantidad eficaz, la duración del tratamiento, el uso de múltiples agentes de tratamiento, la vía de administración y la gravedad de la neoplasia hematológica maligna pueden requerir un aumento o una disminución de la frecuencia de administración.

Una duración eficaz para administrar una composición que contiene un inhibidor de la telomerasa (por ejemplo, imetelstat o imetelstat de sodio) y un inhibidor de Bcl-2 (por ejemplo, ABT-199) puede ser cualquier duración que reduzca la gravedad de un síntoma de una neoplasia hematológica maligna (por ejemplo, que reduzca o revierta la fibrosis de la médula ósea) sin producir toxicidad significativa para el mamífero. Así, la duración eficaz puede variar de un mes a varios meses o años (por ejemplo, de un mes a dos años, de un mes a un año, de tres meses a dos años, de tres meses a diez meses o de tres meses a 18 meses). En general, la duración eficaz del tratamiento de una neoplasia hematológica maligna puede oscilar entre dos y veinte meses. En algunos casos, la duración eficaz puede ser mientras el mamífero esté vivo. Múltiples factores pueden influir en la duración eficaz real de un tratamiento concreto. Por ejemplo, una duración eficaz puede variar con la frecuencia de administración, la cantidad eficaz, el uso de múltiples agentes de tratamiento, la vía de administración y la gravedad de la neoplasia hematológica maligna.

En determinados casos, se puede seguir un tratamiento y la gravedad de uno o más síntomas relacionados con una neoplasia hematológica maligna. Se puede utilizar cualquier método para determinar si se reduce o no la gravedad de un síntoma de una neoplasia hematológica maligna. Por ejemplo, la gravedad de un síntoma de una neoplasia hematológica maligna (por ejemplo, fibrosis de la médula ósea) puede evaluarse mediante técnicas de biopsia.

La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal que es aceptable para la administración a un paciente, tal como un mamífero (sales con contraiones que tienen una seguridad aceptable para mamíferos para una pauta posológica determinada). Tales sales pueden derivarse de bases orgánicas o inorgánicas farmacéuticamente aceptables y de ácidos orgánicos o inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Una "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto, y estas sales proceden de una diversidad de contraiones orgánicos e inorgánicos bien conocidos en la técnica e incluyen, sólo a modo de ejemplo, sodio y similares; y cuando la molécula contiene una funcionalidad básica, sales de ácidos orgánicos o inorgánicos, tales como clorhidrato, y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables de interés incluyen, entre otras, sales de aluminio, amonio, arginina, bario, benzatina, calcio, colinato, etilendiamina, lisina, litio, magnesio, meglumina, procaína, potasio, sodio, trometamina, N-metilglucamina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, dietanolamina, etanolamina, piperazina, zinc, diisopropilamina, diisopropiletilamina, trietilamina y trietanolamina.

La expresión "sales del mismo" significa un compuesto formado cuando un protón de un ácido se sustituye por un catión, tal como un catión metálico o un catión orgánico y similares. Preferentemente, la sal utilizada es una sal farmacéuticamente aceptable. A modo de ejemplo, las sales de los presentes compuestos incluyen aquellas en las que el compuesto está protonado por un ácido orgánico o inorgánico para formar un catión, con la base conjugada del ácido orgánico o inorgánico como componente aniónico de la sal. Las sales de interés incluyen, entre otras, sales de aluminio, amonio, arginina, bario, benzatina, calcio, cesio, colinato, etilendiamina, litio, magnesio, meglumina, procaína, N-metilglucamina, piperazina, potasio, sodio, trometamina, zinc, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, dietanolamina, etanolamina, piperazina, diisopropilamina, diisopropiletilamina, trietilamina y trietanolamina. Se entiende que, para cualquiera de las estructuras oligonucleotídicas representadas en el presente documento, tales oligonucleótidos también pueden incluir cualquier forma de sal conveniente. En algunas realizaciones, las formas ácidas de los enlaces internucleósidos se representan por simplicidad. En algunos casos, la sal del compuesto en cuestión es una sal de catión monovalente. En determinados casos, la sal del compuesto en cuestión es una sal de catión divalente. En algunos casos, la sal del compuesto en cuestión es una sal de catión trivalente. "Solvato" se refiere a un complejo formado por la combinación de moléculas de disolvente con moléculas o iones del soluto. El disolvente puede ser un compuesto orgánico, un compuesto inorgánico o una mezcla de ambos. Algunos ejemplos de disolventes incluyen, entre otros, metanol, W,W-dimetilformamida, tetrahidrofurano, dimetilsulfóxido y agua. Cuando el disolvente es agua, el solvato formado es un hidrato.

"Estereoisómero" y "estereoisómeros" se refieren a compuestos que tienen la misma conectividad atómica, pero diferente disposición atómica en el espacio. Los estereoisómeros incluyen, por ejemplo, isómeros cis-trans, E y Z isómeros, enantiómeros y diastereómeros. Con respecto a cualquiera de los grupos divulgados en el presente documento que contienen uno o más sustituyentes, se entiende, por supuesto, que tales grupos no contienen ninguna sustitución ni patrón de sustitución que sean estéricamente impracticables y/o sintéticamente inviables. Se pretende incluir todos los estereoisómeros dentro del alcance de la presente divulgación.

Un experto en la técnica reconocería que son posibles otras disposiciones tautoméricas de los grupos descritos en la presente memoria. Se entiende que todas las formas tautoméricas de un compuesto en cuestión están incluidas en una estructura en la que se describe una posible disposición tautomérica de los grupos del compuesto, aunque no se indique específicamente.

Se pretende incluir un solvato de una sal farmacéuticamente aceptable de un tautómero de un estereoisómero del compuesto en cuestión. Se pretende incluir a estos en el ámbito de la presente divulgación.

F. Administración y pautas de administración

Para el tratamiento de cánceres hematológicos, los inhibidores de la telomerasa (por ejemplo, imetelstat o imetelstat de sodio) y los inhibidores de Bcl-2 (por ejemplo, ABT-199, ABT-263 y ABT-737) pueden administrarse combinados a un sujeto que necesite tratamiento. Un ejemplo de cáncer que puede tratarse con este método es la leucemia mieloide aguda (LMA), también llamada leucemia mielocítica aguda, leucemia mielógena aguda, leucemia granulocítica aguda o leucemia no linfocítica aguda. En la leucemia aguda, las células leucémicas son células sanguíneas inmaduras (denominadas blastos) que crecen rápidamente y se dividen con rapidez. Sin tratamiento, la mayoría de los pacientes con leucemia aguda vivirían sólo unos meses.

Los inhibidores de la telomerasa y los inhibidores de Bcl-2 utilizados en la presente divulgación pueden administrarse a cualquier dosis que sea terapéuticamente eficaz, tales como dosis comparables a las utilizadas clínicamente de forma habitual. Las pautas posológicas específicas para agentes anticancerígenos conocidas y aprobadas (por ejemplo, la dosis eficaz recomendada) son conocidas por los médicos y se ofrecen, por ejemplo, en las descripciones de los productos que se encuentran en la PHYSIClANS' DESK REFERENCE, 2003, 57a ed., Medical Economics Company, Inc., Oradell, N.J.; Goodman & Gilman's THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 2001, 10a edición, McGraw-Hill, Nueva York; y/o están disponibles en la Federal Drug Administration y/o se analizan en la bibliografía médica.

En algunos aspectos, la dosis de un inhibidor de la telomerasa, el imetelstat de sodio, administrada al sujeto es de aproximadamente 1,0 mg/kg a aproximadamente 13,0 mg/kg. En otros aspectos, la dosis de un inhibidor de la telomerasa es de aproximadamente 6,5 mg/kg a aproximadamente 11,7 mg/kg. En algunas realizaciones, la dosis de ^{un inhibidor de la telomerasa incluye al menos aproximadamente cualquiera de 6,5 mg/kg,}6,6 ^{mg/kg, 6,7 mg/kg,}6,8 mg/kg, 6,9 mg/kg, 7 mg/kg, 7,1 mg/kg, 7,2 mg/kg, 7,3 mg/kg, 7,4 mg/kg, 7,5 mg/kg, 7,6 mg/kg, 7,7 mg/kg, 7,8 mg/kg, ^{7,9 mg/kg,}8 ^{mg/kg, 8,1 mg/kg, 8,2 mg/kg, 8,3 mg/kg, 8,4 mg/kg, 8,5 mg/kg,}8,6 ^{mg/kg, 8,7 mg/kg,}8,8 ^{mg/kg, 8,9}mg/kg, 9,1 mg/kg, 9,2 mg/kg, 9,3 mg/kg, 9,4 mg/kg, 9,5 mg/kg, 9,6 mg/kg, 9,7 mg/kg, 9,8 mg/kg, 9,9 mg/kg, 10 mg/kg, 10,1 mg/kg, 10,2 mg/kg, 10,3 mg/kg, 10,4 mg/kg, 10,5 mg/kg, 10,6 mg/kg, 10,7 mg/kg, 10,8 mg/kg, 10,9 mg/kg, 11 mg/kg, 11,1 mg/kg, 11,2 mg/kg, 11.3 mg/kg, 11,4 mg/kg, 11,5 mg/kg, 11,6 mg/kg, 11,7 mg/kg, 11,8 mg/kg, 11,9 mg/kg, 12 mg/kg, 12,1 mg/kg, 12,2 mg/kg, 12,3 mg/kg, 12,4 mg/kg, 12,5 mg/kg, 12,6 mg/kg, 12,7 mg/kg, 12,8 mg/kg, 12,9 mg/kg o 13 mg/kg.

En algunas realizaciones, la cantidad eficaz de un inhibidor de la telomerasa administrada al individuo incluye al menos aproximadamente cualquiera de 1 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3,5 mg/kg, 5 mg/kg, 6,5 mg/kg, 7,5 mg/kg, 9,4 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg o 20 mg/kg. En diversas realizaciones, la cantidad eficaz de un inhibidor de la telomerasa administrada al individuo incluye menos de aproximadamente cualquiera de 350 mg/kg, 300 mg/kg, 250 mg/kg, 200 mg/kg, 150 mg/kg, 100 mg/kg, 50 mg/kg, 30 mg/kg, 25 mg/kg, 20 mg/kg, 10 mg/kg, 7,5 mg/kg, 6,5 mg/kg, 5 mg/kg, 3,5 mg/kg, 2,5 mg/kg, 1 mg/kg o 0,5 mg/kg de un inhibidor de la telomerasa.

Los ejemplos de frecuencias de dosis para las composiciones farmacéuticas (tales como una composición farmacéutica que incluye un inhibidor de la telomerasa y/o una composición farmacéutica que incluye un inhibidor de Bcl-2) incluyen, entre otros, diariamente; cada dos días; dos veces a la semana; tres veces por semana; semanal sin descanso; semanalmente, tres de cada cuatro semanas; una vez cada tres semanas; una vez cada dos semanas; semanalmente, dos de cada tres semanas. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se administra aproximadamente una vez cada semana, una vez cada 2 semanas, una vez cada 3 semanas, una vez cada 4 ^{semanas, una vez cada}6 ^{semanas o una vez cada}8 ^{semanas. En algunas realizaciones, la composición se administra al menos aproximadamente cualquiera de 1x, 2x, 3x, 4x, 5x,}6^{x o 7x (es decir, diariamente) a la semana, o tres veces}al día, dos veces al día. En algunas realizaciones, los intervalos entre cada administración son menores que ^{aproximadamente cualquiera de}6 ^{meses, 3 meses, 1 mes, 20 días, 15 días, 12 días, 10 días, 9 días,}8 ^{días, 7 días,}6 días, 5 días, 4 días, 3 días, 2 días o 1 día. En algunas realizaciones, los intervalos entre cada administración son más ^{de aproximadamente cualquiera de 1 mes, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses,}6 ^meses,8 ^{meses o 12 meses. En}algunas realizaciones, no hay interrupción en la pauta posológica. En algunas realizaciones, el intervalo entre cada administración no es más de aproximadamente una semana.

Los inhibidores de la telomerasa, tales como el imetelstat o el imetelstat de sodio, pueden administrarse mediante cualquier método apropiado. Por ejemplo, los inhibidores de la telomerasa, tales como imetelstat o imetelstat de sodio, pueden administrarse por vía intravenosa una vez cada 4 semanas durante un periodo de tiempo (por ejemplo, una, dos, tres, cuatro o cinco horas). En una realización, el imetelstat se administra por vía intravenosa una vez por semana durante un período de aproximadamente 2 horas de 7 a 10 mg/kg. En otra realización, el imetelstat se administra por vía intravenosa una vez cada 3 semanas durante un período de aproximadamente 2 horas de 2,5 a 7 mg/kg. En otra ^{realización, el imetelstat se administra por vía intravenosa durante un período de aproximadamente}2 ^{horas una vez}cada 4 semanas de 0,5 a 5 mg/kg. En otra realización, el imetelstat se administra por vía intravenosa una vez cada 3 semanas durante un período de aproximadamente 2 horas en una dosis de aproximadamente 2,5 a 10 mg/kg. En otra ^{realización, el imetelstat se administra por vía intravenosa durante un período de aproximadamente}2 ^{horas una vez}cada 4 semanas de aproximadamente 0,5 a 9,4 mg/kg.

En tales casos, cuando se trata con el inhibidor de Bcl-2, ABT-199, la dosis de ABT-199 puede ser de aproximadamente 400 mg orales al día o menor. Por ejemplo, un ser humano con una neoplasia hematológica maligna puede ser tratado con ABT-199 en una dosis de a) 20 mg orales al día, b) 50 mg orales al día, c) 100 mg orales al día, d) 200 mg orales al día o e) 400 mg orales al día. En otra realización, el ABT-199 se administra según una pauta posológica de aumento semanal durante 5 semanas hasta alcanzar la dosis diaria recomendada de 400 mg, comenzando con 20 mg orales al día en la semana 1, 50 mg orales al día en la semana 2, 100 mg orales al día en la semana 3, 200 mg orales al día en la semana 4 y 400 mg orales al día en la semana 5 y siguientes. En otra realización, ABT-199 se administra en una dosis de 400 mg orales al día. En otra realización, la administración se continúa hasta la progresión de la enfermedad o la aparición de toxicidad inaceptable.

Se apreciará que el tratamiento para el cáncer a veces implica múltiples "rondas" o "ciclos" de administración de un fármaco, donde cada ciclo comprende la administración del fármaco una o más veces según una pauta posológica especificada (por ejemplo, cada tres semanas durante tres días consecutivos; una vez por semana; etc.). Por ejemplo, ^{los fármacos contra el cáncer pueden administrarse durante}1 ^a8 ^{ciclos, o durante un periodo de tiempo más largo.}Cuando se administra más de un fármaco (por ejemplo, dos fármacos) a un sujeto, cada uno puede administrarse según su propia pauta posológica (por ejemplo, semanalmente; una vez cada tres semanas; etc.). Estará claro que la administración de fármacos, incluso los administrados con diferente periodicidad, puede coordinarse de modo que ambos fármacos se administren el mismo día al menos una parte del tiempo o, como alternativa, de modo que los fármacos se administren en días consecutivos al menos una parte del tiempo.

En las pautas de tratamiento en las que se administran combinados un inhibidor de la telomerasa (por ejemplo, imetelstat o imetelstat de sodio) y un inhibidor de Bcl-2 (por ejemplo, ABT-199 o venetoclax), estos pueden administrarse en cualquier orden. En determinadas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa se administra un día antes, un día después o el mismo día que la administración del inhibidor de Bcl-2. Se entenderá que pueden utilizarse otras pautas posológicas según determine el médico.

Tal como se entiende en la técnica, el tratamiento con fármacos terapéuticos contra el cáncer puede suspenderse temporalmente si se observa toxicidad, o por conveniencia para el paciente, sin apartarse del alcance de la invención, y luego reanudarse.

G. Administración combinada

Se administran dos o tres fármacos a un sujeto "combinados" cuando los fármacos se administran como parte del mismo tratamiento. Un tratamiento se refiere a la administración de combinaciones de fármacos que el profesional médico considera que actúan conjuntamente de forma aditiva, complementaria, sinérgica o de otro modo para producir un resultado más favorable que el previsto por la administración de un único fármaco. Un tratamiento puede durar uno 0 varios días, pero lo más frecuente es que se prolongue durante varias semanas.

Así, un ejemplo de administración combinada es la administración de imetelstat una vez cada 28 días durante 1 a 4 ciclos, comenzando el día 1, y la administración de ABT-199 una vez cada 7 días comenzando el día 1 durante 4 ciclos. En una realización la administración de ABT-199 comienza el día 1, día -1, o día 2 u otro día que dentro del ciclo. En una realización, la administración combinada es la administración de imetelstat una vez cada 28 días durante 1 a 4 ciclos, comenzando el día 1, y la administración de ABT-199 una vez cada día durante 28 días comenzando el día 1 durante 1 a 4 ciclos.

Cuando se administran dos fármacos combinados, se puede utilizar una diversidad de pautas posológicas. En un ^{caso, por ejemplo y sin limitación, el fármaco}1 ^{se administra por primera vez antes de la administración del fármaco}2 ^{, y el tratamiento con el fármaco}1 ^{se continúa durante la administración del fármaco}2 ^{; como alternativa, el fármaco}1 ^{se administra después del inicio o la finalización de la terapia con el fármaco}2^{; como alternativa, el fármaco}1 ^seadministra por primera vez simultáneamente con el inicio de la otra terapia contra el cáncer. En este contexto, "simultáneamente" significa que los dos fármacos se administran el mismo día o en días consecutivos.

Aunque en principio determinados fármacos pueden coformularse, en general se administran en composiciones separadas. Del mismo modo, aunque algunos fármacos pueden administrarse simultáneamente, lo más frecuente (sobre todo en el caso de los fármacos administrados por infusión) es que los fármacos se administren a distintas horas del mismo día, en días consecutivos o según otra pauta posológica.

La presente divulgación también se refiere a una combinación que comprende un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2. En concreto, el inhibidor de la telomerasa es el imetelstat y el inhibidor de Bcl-2 es el ABT-199. En concreto, el inhibidor de la telomerasa es el imetelstat de sodio y el inhibidor de Bcl-2 es el ABT-199.

La presente divulgación también se refiere a una combinación que comprende un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 para su uso como medicamento. En concreto, el inhibidor de la telomerasa es el imetelstat y el inhibidor de Bcl-2 es el ABT-199. En concreto, el inhibidor de la telomerasa es el imetelstat de sodio y el inhibidor de Bcl-2 es el ABT-199.

H. Diagnóstico

Para el diagnóstico de la LMA, los frotis de sangre y médula ósea se examinan morfológicamente utilizando una tinción de May-Grunwald-Giemsa o de Wright-Giemsa. Se recomienda contar al menos 200 leucocitos en los frotis sanguíneos y 500 células nucleadas en los frotis de médula, y que estos últimos contengan espículas. Para el diagnóstico de LMA se requiere un recuento de blastos en médula o sangre igual o superior al 20 %, excepto en el caso de LMA con t(15;17), t(8;21), inv(16) o t(16;16), y algunos casos de eritroleucemia. Los mieloblastos, los monoblastos y los megacarioblastos se incluyen en el recuento de blastos. En la LMA con diferenciación monocítica o mielomonocítica, los monoblastos y los promonocitos, pero no los monocitos anómalos, se cuentan como equivalentes blásticos. Los eritroblastos no se cuentan como blastos, excepto en el raro caso de la leucemia eritroide pura.

I. Kits

La presente divulgación también se refiere a un kit que comprende un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2^{. También se proporciona un kit que comprende un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-}2 ^{, para su uso en}el tratamiento de un cáncer hematológico. Dicha terapia comprende, en algunos casos, la administración del inhibidor de Bcl-2 a un sujeto, ya sea antes, después o al mismo tiempo que la administración del inhibidor de telomerasa. En algunos casos, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat.

En un aspecto relacionado, la divulgación proporciona un kit que contiene una dosis de un inhibidor de telomerasa en una cantidad eficaz para inhibir la proliferación de células cancerosas en un sujeto. En algunos casos, el kit incluye un prospecto con instrucciones para la administración del inhibidor de la telomerasa. El inserto puede proporcionar al usuario un conjunto de instrucciones para utilizar el inhibidor combinado con un inhibidor de Bcl-2. En algunos casos, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199.

En algunos casos, el conjunto de instrucciones para la terapia de combinación puede recomendar (i) una dosis más baja del inhibidor de la telomerasa, cuando se usa combinado con el inhibidor de Bcl-2, (ii) una dosis más baja del inhibidor de Bcl-2, cuando se usa combinado con el inhibidor de la telomerasa y/o (iii) una pauta posológica diferente para uno o ambos inhibidores de lo que normalmente se recomendaría.

Será evidente que, en los párrafos anteriores, en algunos casos, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat; en algunos casos, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat de sodio; en algunos casos, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199.

J. Ejemplos de realizaciones

Un ejemplo de realización de la divulgación es un método de tratamiento que comprende administrar un inhibidor de telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 combinados a un sujeto que necesita tratamiento para un cáncer hematológico. En determinadas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat. En otras realizaciones, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199, ABT-263 o ABT-737. En otra realización, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199. En una realización, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat y el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199.

El cáncer hematológico puede ser LMA, trombocitemia esencial, policitemia vera, mielofibrosis primaria, mastocitosis sistémica, leucemia mieloide crónica, leucemia neutrofílica crónica, leucemia eosinofílica crónica, anemia refractaria con sideroblastos anillados, citopenia refractaria con displasia multilinaje, anemia refractaria con exceso de blastos de tipo 1, anemia refractaria con exceso de blastos de tipo 2, síndrome mielodisplásico (SMD) con del (5q) aislado, SMD inclasificable, leucemia mielomonocítica crónica (LMC), leucemia mieloide crónica atípica, leucemia mielomonocítica juvenil, síndromes mieloproliferativos/mielodisplásicos no clasificables, leucemia/linfoma linfoblástico B, leucemia/linfoma linfoblástico T, linfoma difuso de linfocitos B grandes, linfoma primario del sistema nervioso central, linfoma mediastínico primario de linfocitos B, linfoma/leucemia de Burkitt, linfoma folicular, leucemia linfocítica crónica (LLC)/linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de linfocitos B, linfoma linfoplasmocítico/macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de células del manto, linfomas de la zona marginal, trastornos linfoproliferativos postrasplante, linfomas asociados al VIH, linfoma de efusión primaria, linfoma intravascular de linfocitos B grandes, linfoma cutáneo primario de linfocitos B, leucemia de células pilosas, gammapatía monoclonal de importancia desconocida, mieloma múltiple latente y plasmocitomas solitarios (extramedulares y óseos solitarios). En algunas realizaciones, dicho cáncer es metastásico.

^{En determinadas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa imetelstat se administra durante 1, 2, 3, 4, 5,}6 ^{, 7,}8 ^{o más de}8 ^{ciclos de dosificación, comprendiendo cada ciclo: a) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de}imetelstat una vez cada cuatro semanas, b) la administración intravenosa de aproximadamente 7 a 10 mg/kg de imetelstat una vez por semana durante cuatro semanas, c) la administración intravenosa de aproximadamente 25 a 7 mg/kg de imetelstat una vez cada tres semanas, o d) la administración intravenosa de aproximadamente 0,5 a 9,4 mg/kg de imetelstat una vez cada cuatro semanas. El imetelstat puede ser imetelstat de sodio.

En determinadas formas de realización, ABT-199 se administra en una dosis de: a) de aproximadamente 50 a 400 mg de ABT-199 al día; b) aproximadamente 2 mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria hasta una dosis final de ^{aproximadamente 800 mg el día}6 ^{y a diario a partir de entonces; o c) 25 mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria}hasta una dosis final de aproximadamente 400 mg el día 5 y a diario a partir de entonces. La administración de ABT-199 puede ser un día antes, un día después o el mismo día que la administración del inhibidor de la telomerasa.

Otra realización de la divulgación es un método de inducción de la apoptosis en una célula cancerosa hematológica que comprende poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de telomerasa y poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de Bcl-2. El método puede llevarse a cabo in vitro o in vivo. En una realización, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat. En otra realización, el imetelstat es imetelstat de sodio. En este método, el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199. En determinadas realizaciones, la célula cancerosa hematológica puede ser una célula de los siguientes tipos de cáncer: leucemia mieloide aguda (LMA); trombocitemia esencial; policitemia vera; mielofibrosis primaria; mastocitosis sistémica; leucemia mieloide crónica; leucemia neutrofílica crónica; leucemia eosinofílica crónica; anemia refractaria con sideroblastos anillados; citopenia ^{refractaria con displasia multilinaje; anemia refractaria con exceso de blastos de tipo}1^{; anemia refractaria con exceso}de blastos de tipo 2; síndrome mielodisplásico (SMD) con del (5q) aislado; SMD inclasificable; leucemia mielomonocítica crónica (LMC); leucemia mieloide crónica atípica; leucemia mielomonocítica juvenil; síndromes mieloproliferativos/mielodisplásicos no clasificables; leucemia/linfoma linfoblástico B; leucemia/linfoma linfoblástico T; linfoma difuso de linfocitos B grandes; linfoma primario del sistema nervioso central; linfoma mediastínico primario de linfocitos B; linfoma/leucemia de Burkitt; linfoma folicular; leucemia linfocítica crónica (LLC)/linfoma linfocítico pequeño; leucemia prolinfocítica de linfocitos B; linfoma linfoplasmocítico/macroglobulinemia de Waldenstrom; linfoma de células del manto; linfomas de la zona marginal; trastornos linfoproliferativos postrasplante; linfomas asociados al VIH; linfoma de efusión primaria; linfoma intravascular de linfocitos B grandes; linfoma cutáneo primario de linfocitos B; leucemia de células pilosas; gammapatía monoclonal de importancia desconocida; mieloma múltiple latente; y plasmocitomas solitarios (extramedulares y óseos solitarios). En una realización, la célula cancerosa hematológica es una célula de leucemia mieloide aguda (LMA).

La presente divulgación también proporciona kits para la terapia combinada. En consecuencia, una realización de la divulgación es un kit que contiene: (a) una dosis de un inhibidor de la telomerasa, en una cantidad eficaz cuando se administra, para inducir la apoptosis en una célula cancerosa hematológica; y (b) una dosis de un inhibidor de Bcl-2, en una cantidad eficaz cuando se administra, para inducir la apoptosis en una célula cancerosa hematológica. En una realización de este kit, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat, y el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199.

Una realización de la presente divulgación es una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de la telomerasa (por ejemplo, imetelstat/imetelstat de sodio) y un inhibidor de BCL-2 (por ejemplo, ABT-199) para su uso en el tratamiento del cáncer hematológico. En una realización, la composición farmacéutica comprende imetelstat/imetelstat de sodio y ABT-199.

Otra realización de la presente divulgación es un inhibidor de telomerasa para su uso en un método de tratamiento del cáncer hematológico, comprendiendo el método administrar el inhibidor de telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 combinados a un sujeto que lo necesita. Sin embargo, otra realización de la divulgación es un inhibidor de Bcl-2 para su uso en un método de tratamiento del cáncer hematológico, comprendiendo el método administrar el inhibidor de Bcl-2 y un inhibidor de la telomerasa combinados a un sujeto que lo necesita. Una realización alternativa de la divulgación es una combinación que comprende un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2 para su uso en un método de tratamiento del cáncer hematológico, comprendiendo el método la administración de la combinación a un sujeto que lo necesita. En estas realizaciones, la combinación del inhibidor de la telomerasa y el inhibidor de Bcl-2 induce la apoptosis de las células cancerosas hematológicas. En estas realizaciones, el inhibidor de la telomerasa puede ser imetelstat. En una realización, el imetelstat es imetelstat de sodio. También en estas realizaciones, el ^{inhibidor de Bcl-2 puede ser ABT-199. El imetelstat puede administrarse durante 1, 2, 3, 4, 5,}6 ^{, 7,}8 ^{o más de}8 ^ciclosde dosificación, comprendiendo cada ciclo: a) la administración intravenosa de aproximadamente 7 a 10 mg/kg de imetelstat una vez cada cuatro semanas, b) la administración intravenosa de aproximadamente 7 a 10 mg/kg de imetelstat una vez a la semana durante aproximadamente cuatro semanas, o c) la administración intravenosa de aproximadamente 25 a 7 mg/kg de imetelstat una vez cada tres semanas, o d) la administración intravenosa de aproximadamente 0,5 a 9,4 mg/kg de imetelstat una vez cada cuatro semanas. El ABT-199 puede administrarse en una dosis de: a) aproximadamente de 50 a 400 mg de ABT-199 al día; b) aproximadamente 2 mg de ABT-199 el día 1 ^{con escalada diaria hasta una dosis final de 800 mg el día}6 ^{y a diario a partir de entonces; o c) aproximadamente 25}mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria hasta una dosis final de 400 mg el día 5 y a diario a partir de entonces. En determinadas realizaciones, la administración de ABT-199 se realiza un día antes, un día después o el mismo día que la administración del inhibidor de la telomerasa.

En las realizaciones del inhibidor de la telomerasa, el inhibidor de Bcl-2 o la combinación, el cáncer hematológico puede ser leucemia mieloide aguda (LMA), trombocitemia esencial, policitemia vera, mielofibrosis primaria, mastocitosis sistémica, leucemia mieloide crónica, leucemia neutrofílica crónica, leucemia eosinofílica crónica, anemia refractaria con sideroblastos anillados, citopenia refractaria con displasia multilinaje, anemia refractaria con exceso de blastos de tipo 1, anemia refractaria con exceso de blastos de tipo 2, síndrome mielodisplásico (SMD) con del (5q) aislado, SMD inclasificable, leucemia mielomonocítica crónica (LMC), leucemia mieloide crónica atípica, leucemia mielomonocítica juvenil, síndromes mieloproliferativos/mielodisplásicos inclasificables, leucemia/linfoma linfoblástico B, leucemia/linfoma linfoblástico T, linfoma difuso de linfocitos B grandes, linfoma primario del sistema nervioso central, linfoma mediastínico primario de linfocitos B, linfoma/leucemia de Burkitt, linfoma folicular, leucemia linfocítica crónica (LLC)/linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmocítico/macroglobulinemia de Waldenstrom, linfoma de células del manto, linfomas de la zona marginal, trastornos linfoproliferativos postrasplante, linfomas asociados al VIH, linfoma de efusión primaria, linfoma intravascular de linfocitos B grandes, linfoma cutáneo primario de linfocitos B, leucemia de células pilosas, gammapatía monoclonal de importancia desconocida, mieloma múltiple latente y plasmocitomas solitarios (óseos y extramedulares solitarios). En una realización, el cáncer hematológico es leucemia mieloide aguda (LMA).

Una realización alternativa de la divulgación es un método in vitro para inducir la apoptosis en una célula cancerosa hematológica que comprende: poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de telomerasa; y poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de Bcl-2. En una realización, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat. El imetelstat puede ser imetelstat de sodio. El inhibidor de Bcl-2 puede ser ABT-199.

En determinadas realizaciones del método in vitro , la célula cancerosa hematológica es una célula de los siguientes tipos de cáncer leucemia mieloide aguda (LMA); trombocitemia esencial; policitemia vera; mielofibrosis primaria; mastocitosis sistémica; leucemia mieloide crónica; leucemia neutrofílica crónica; leucemia eosinofílica crónica; anemia refractaria con sideroblastos anillados; citopenia refractaria con displasia multilinaje; anemia refractaria con exceso de blastos de tipo 1; anemia refractaria con exceso de blastos de tipo 2; síndrome mielodisplásico (SMD) con del (5q) aislado; SMD inclasificable; leucemia mielomonocítica crónica (LMC); leucemia mieloide crónica atípica; leucemia mielomonocítica juvenil; síndromes mieloproliferativos/mielodisplásicos no clasificables; leucemia/linfoma linfoblástico B; leucemia/linfoma linfoblástico T; linfoma difuso de linfocitos B grandes; linfoma primario del sistema nervioso central; linfoma mediastínico primario de linfocitos B; linfoma/leucemia de Burkitt; linfoma folicular; leucemia linfocítica crónica (LLC)/linfoma linfocítico pequeño; leucemia prolinfocítica de linfocitos B; linfoma linfoplasmocítico/macroglobulinemia de Waldenstrom; linfoma de células del manto; linfomas de la zona marginal; trastornos linfoproliferativos postrasplante; linfomas asociados al VIH; linfoma de efusión primaria; linfoma intravascular de linfocitos B grandes; linfoma cutáneo primario de linfocitos B; leucemia de células pilosas; gammapatía monoclonal de importancia desconocida; mieloma múltiple latente; y plasmocitomas solitarios (óseos y extramedulares solitarios). En una realización del método in vitro, la célula cancerosa hematológica es una célula de leucemia mieloide aguda (LMA).

Otra realización de la presente divulgación es una combinación que comprende un inhibidor de la telomerasa y un inhibidor de Bcl-2. En una realización, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat y el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199. En otra realización, el inhibidor de la telomerasa es imetelstat de sodio y el inhibidor de Bcl-2 es ABT-199. La combinación puede usarse como un medicamento.

Otra realización de la divulgación es el uso de imetelstat o imetelstat de sodio para tratar un cáncer hematológico en un paciente sometido a terapia de inhibición de BCL. Una realización alternativa es el uso de ABT-199 para tratar un cáncer hematológico en un paciente sometido a terapia de inhibición de la telomerasa. Todavía otra realización de la divulgación es imetelstat de sodio para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), comprendiendo el método la administración de imetelstat de sodio y ABT-199 combinados a un sujeto que lo necesita. Otra realización es ABT-199 para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), comprendiendo el método la administración de ABT-199 e imetelstat de sodio combinados a un sujeto que lo necesite. Otra realización es una combinación que comprende imetelstat de sodio y ABT-199 para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), que comprende la administración de la combinación a un sujeto que lo necesite. Según corresponda, en estas realizaciones, el imetelstat de sodio puede administrarse durante 1, 2, 3, 4, ^5,6 ^{, 7,}8 ^{o más de}8 ^{ciclos de dosificación, comprendiendo cada ciclo: a) la administración intravenosa de}aproximadamente 7 a 10 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada cuatro semanas, b) la administración intravenosa de aproximadamente 7 a 10 mg/kg de imetelstat de sodio una vez por semana durante cuatro semanas, o c) la administración intravenosa de aproximadamente 2,5 a 7 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada tres semanas, o d) la administración intravenosa de aproximadamente 0,5 a 9,4 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada cuatro semanas. Además, en estas realizaciones, el ABT-199 puede administrarse en una dosis de: a) de aproximadamente 50 a 400 mg de ABT-199 al día; b) aproximadamente 2 mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria hasta una dosis ^{final de 800 mg el día}6 ^{y a diario a partir de entonces; o c) aproximadamente 25 mg de ABT-199 el día 1 con escalada}diaria hasta una dosis final de 400 mg el día 5 y a diario a partir de entonces. En algunas de estas realizaciones, la administración de ABT-199 tiene lugar un día antes, un día después o el mismo día que la administración de imetelstat de sodio.

Otra realización de la divulgación es un método in vitro para inducir la apoptosis en una célula de leucemia mieloide aguda (LMA) que comprende: poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de imetelstat de sodio; y poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de ABT-199.

La presente invención se ilustra más a fondo por medio de los ejemplos siguientes, pero no se limita a estos.

Ejemplos

Ejemplo 1: El inhibidor de la telomerasa imetelstat de sodio combinado con el inhibidor de BCL-2 venetoclax aumenta la apoptosis en líneas celulares de LMA in vitro

Se sembraron células tumorales de LMA KG-1 (ATCC n.° CCL-246) y MOLM-13 (DSMZ n.° ACC554) a una densidad de aproximadamente 20000 células por pocillo en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos de poliestireno con fondo en U (Corning n.° de catálogo 353777) en RPMI-1640 (ThermoFisher n.° de catálogo 11875-085) suplementado con suero fetal bovino al 10% (ThermoFisher n.° de catálogo 16140-089) y cóctel de antibióticos de penicilina/estreptomicina al 1 % (ThermoFisher n.° de catálogo 15140-122) y se cultivaron en una incubadora a 37 °C ^{bajo una atmósfera humidificada de 5 % de CO}2^{. Las células se trataron inmediatamente con imetelstat de sodio}(Janssen Biotech, Inc.) preparado en RPMI-1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% y/o ABT-199 (Selleckchem n.° de catálogo S8048) preparado como una disolución madre 1000x en DMSO, diluido 1:100 en solución salina tamponada con fosfato (PBS, vehículo; ThermoFisher n.° de catálogo 20012-027). En los experimentos de 96 horas, se aplicó una segunda dosis de compuesto o compuestos a las 48 horas sin añadir medio fresco, ya que tanto el ABT-199 como el imetelstat de sodio tienen semividas in vitro inferiores a 48 horas (Shammas et al., Leukemia, 22(7): 1410-1418 (2008)). El imetelstat de sodio se ensayó de 0 a 50 pM y el ABT-199 de 0 a 500 nM. Se usaron oligonucleótidos no complementarios y desapareados de control (documento US 7998938) mostrados en la tabla 2 a concentraciones idénticas a las del imetelstat de sodio para demostrar que los efectos son específicos de la combinación de imetelstat de sodio y ABT-199.

Tabla 2: Secuencia dirigida a hTR

A las 48 y 96 horas, se midieron las poblaciones de células sanas, apoptóticas tempranas y apoptóticas con un kit de ensayo de citometría de flujo de anexina V (tinción de la membrana celular interior) más yoduro de propidio ("propidium iodide", PI, tinte de unión al ADN) (BioLegend n.° de catálogo 640914). La anexina V detecta la externalización de fosfatidilserina en células apoptóticas utilizando anexina V recombinante conjugada con tinte FITC fluorescente verde y las células muertas utilizando yoduro de propidio (PI). El yoduro de propidio tiñe las células necróticas con fluorescencia roja. Tras el tratamiento con ambas sondas, las células apoptóticas tempranas muestran fluorescencia verde, las células apoptóticas (muertas) muestran fluorescencia roja y verde y las células vivas muestran poca o ninguna fluorescencia. Brevemente, las células se sedimentaron y se lavaron 2 veces con PBS antes de suspenderlas en tampón de unión a anexina V que contenía una proporción 1:2 de antianexina V-FITC y yoduro de propidio, según el protocolo sugerido por el fabricante. Las células se tiñeron durante 30 minutos a 4 °C en la oscuridad, seguido de 3 lavados con PBS y suspensión en tampón de tinción FACs (BD n.° de catálogo 554657) antes de la interrogación en un citómetro de flujo Bd FACs Canto para los canales de dispersión frontal, dispersión lateral, FITC y PE. Las poblaciones celulares se analizaron utilizando el software Cytobank y se compararon con las condiciones sin tratamiento (sin imetelstat de sodio o ABT-199) para establecer los límites de la ventana de análisis de las células viables (no teñidas en ninguno de los canales; es decir, población doblemente negativa). Para todos los experimentos, los gráficos de puntos de los datos de citometría de flujo muestran cuatro cuadrantes con el porcentaje de células vivas en el cuadrante inferior izquierdo, el porcentaje de células apoptóticas tempranas (anexina V+/PI-) en el cuadrante superior izquierdo y el porcentaje de células apoptóticas (muertas) (anexina V+/PI+ doblemente marcadas) en el cuadrante superior derecho. El porcentaje de células apoptóticas (doblemente marcadas) se utilizó para calcular los efectos de la combinación utilizando los modelos de aditividad de agente único más potente ("Highest Single ^{Agent", HSA) y de Bliss (J. Tang et al., Frontiers in Pharmacology, 2015,}6^{( 181)).}

Utilizando el modelo de HSA, el efecto citotóxico de la condición combinada ("C") se comparó con el efecto generado por cada uno de los controles de agente único ("A" o "B") para la dosis respectiva en la combinación:

Exceso sobre HSA = C - A(si A > B) o C - B (si A < B)

El modelo de Bliss realiza una comparación similar, pero en lugar del efecto más potente de cada agente individual, el modelo Bliss resta de la combinación un valor igual a la suma de cada agente individual menos su producto:

Exceso sobre Bliss = C - [(A B) - (A * B)]

Estos modelos son capaces de demostrar aditividad o sinergia débil en una combinación.

Resultados del tratamiento de la línea celular de LMA

Los gráficos de puntos de los datos de citometría de flujo para las células KG-1 después de 48 horas de tratamiento con imetelstat de sodio y/o ABT-199 se muestran en la figura 1A, con un gráfico del porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio mostradas en la figura IB. KG-1 muestra una sensibilidad menor al ABT-199 después de 48 horas (aproximadamente un 9% y aproximadamente un 14 % a 100 nM y 500 nM, respectivamente) y una sensibilidad mínima al imetelstat de sodio. Sin embargo, cuando el tratamiento de imetelstat de sodio 50 pM se combina con ABT-199 100 nM o 500 nM, se observa un mayor efecto sobre la muerte celular (aproximadamente un 27 % a 100 nM y aproximadamente un 50 % a 500 nM). Las tablas 3 y 4 muestran los cálculos de un efecto combinado utilizando los modelos de HSA o BLISS para el tratamiento de células KG-1 a las 48 horas. Los valores negativos no indican antagonismo en estos modelos, sólo falta de interacción.

Tabla 3: Exceso sobre el agente único más potente en células KG-1 a las 48 horas con ABT-199 e imetelstat de sodio

Tabla 4: Exceso sobre BLISS en células KG-1 a las 48 horas con ABT-199 e imetelstat de sodio

Los gráficos de puntos de los datos de citometría de flujo para las células KG-1 después de 96 horas de tratamiento con imetelstat de sodio y/o ABT-199 se muestran en la figura 2A, con un gráfico del porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio mostradas en ^{la figura 2B. KG-1 muestra una sensibilidad menor al ABT-199 después de 96 horas (aproximadamente un}6 ^{% y}aproximadamente un 10 % a 100 nM y 500 nM, respectivamente) y también se observa cierta sensibilidad al imetelstat de sodio (un 5 %, un 9 % y un 16 % a 10 |^jM, 20 |^jM y 50 |^jM, respectivamente). Sin embargo, cuando el tratamiento de imetelstat de sodio 25 o 50 ^jiM se combina con ABT-19920 a 500 nM, se observan mayores efectos sobre la muerte ^{celular en todas las concentraciones. Las tablas 5 y}6 ^{muestran los cálculos de un efecto combinado utilizando los}modelos de HSA o BLISS en el tratamiento de células KG-1 a las 96 horas.

Tabla 5: Exceso sobre el agente único más potente en células KG-1 a las 96 horas con ABT-199 e imetelstat de sodio

^Tabla6 ^{: Exceso sobre BLISS en células KG-1 a las 48 horas con ABT-199 e imetelstat de sodio}

Los gráficos de puntos de los datos de citometría de flujo para las células KG-1 se muestran después del tratamiento a las 48 horas (figura 3A) o 30 mg (figura 4A) con oligonucleótidos desapareados o no complementarios y ABT-199. Se muestran los gráficos del porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de oligonucleótidos durante 48 horas (figura 3B) o 96 horas (figura 4B). Los modelos de ^{exceso sobre el agente único más potente (tablas 7 y}8^{) y de exceso sobre Bliss (tablas 9 y 10) confirman la ausencia} de efecto con los controles de oligonucleótidos. Los valores negativos no indican antagonismo en estos modelos, sólo falta de interacción.

Tabla 7: Exceso sobre HSA en células KG-1 a las 48 horas con controles no complementarios o desapareados

^Tabla8^{: Exceso sobre HSA en células KG-1 a las 96 horas con controles no complementarios o desapareados}

Tabla 9: Exceso sobre BLISS en células KG-1 a las 48 horas con controles no complementarios o desapareados

Tabla 10: Exceso sobre BLISS en células KG-1 a las 96 horas con controles no complementarios o desapareados

Los gráficos de puntos de los datos de citometría de flujo para las células MOLM-13 después de 48 horas de tratamiento con imetelstat de sodio y/o ABT-199 se muestran en la figura 5A, con un gráfico del porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio mostradas en la figura 5B. MOLM-13 muestra cierta sensibilidad al ABT-199 después de 48 horas (aproximadamente un 19 % y aproximadamente un 30 % a 100 nM y 500 nM, respectivamente) y cierta sensibilidad al imetelstat de sodio (un 21,5 % a 50 ^jM). Sin embargo, cuando el imetelstat de sodio 25 ^jM se combinó con ABT-199, se observó un mayor efecto sobre la muerte celular (aproximadamente un 32 % y aproximadamente un 72 % a 100 nM y 500 nM, respectivamente). El mayor efecto sobre la muerte celular se observó con imetelstat de sodio 50 j M combinado con ^{AbT-199 a}100 ^{nM (un 62 %) y 500 nM (un}88 ^{%). Sorprendentemente, combinado con imetelstat de sodio a 50 j M,}se ha observado que ABT-199 tiene un efecto sobre la muerte celular a concentraciones más bajas de 5 nM y 20 nM. Las tablas 11 y 12 muestran los cálculos de un efecto combinado utilizando los modelos de HSA o BLISS para el tratamiento de las células MOLM-13 a las 48 horas.

Tabla 11: Exceso sobre el agente único más potente en células MOLM-13 a las 48 horas con ABT-199 e imetelstat de sodio

Tabla 12: Exceso sobre BLISS en células MOLM-13 a las 48 horas con ABT-199 e imetelstat de sodio

Los gráficos de puntos de los datos de citometría de flujo para las células MOLM-13 después de 96 horas de ^{tratamiento con imetelstat de sodio y/o ABT-199 se muestran en la figura}6^{A, con un gráfico del porcentaje de células}apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio ^{mostradas en la figura}6^{B. MOLM-13 muestra sensibilidad al ABT-199 después de 96 horas (>30 % de muerte celular} a 5, 20, 100 y 500 nM) y sensibilidad al imetelstat de sodio (>30 % a 10, 25 y 50 j M). En todas las concentraciones del tratamiento combinado de ABT-199 más imetelstat de sodio, se produce un aumento de la destrucción celular. Se observó una muerte celular superior al 90 % en la concentración más baja de imetelstat de sodio (10 ^jM) cuando se combinó con la concentración más alta de ABT-199 (500 nM). También se observó una muerte celular superior al 90 % en concentraciones de ABT-199 100 nM y 500 nM cuando se combinaron. A la concentración más alta de imetelstat de sodio (50 ^jM) se observó una muerte celular casi completa en concentraciones de ABT-199 de 5, 10, 20, 100 y 500 nM. Las tablas 13 y 14 muestran los cálculos de un efecto combinado utilizando los modelos de HSA o BLISS para el tratamiento de células MOLM-13 a las 96 horas.

Tabla 13: Exceso sobre el agente único más potente en células MOLM-13 a las 96 horas con ABT-199 e imetelstat de ^sodio

Tabla 14: Exceso sobre el agente único más potente en células MOLM-13 a las 96 horas con ABT-199 e imetelstat de sodio

Los gráficos de puntos de los datos de citometría de flujo para las células MOLM-13 se muestran después del ^{tratamiento a las 48 horas (figura 7A) o 30 mg (figura}8^{A) con oligonucleótidos desapareados o no complementarios y}ABT-199. Se muestran los gráficos del porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ^{ABT-199 a diversas concentraciones de oligonucleótidos durante 48 horas (figura 7B) o 96 horas (figura}8^{B). Los}modelos de exceso sobre el agente único más potente (tablas 15 y 17) y de exceso sobre Bliss (tablas 16 y 18) confirman la ausencia de efecto con los controles de oligonucleótidos. Los valores negativos no indican antagonismo en estos modelos, sólo falta de interacción.

Tabla 15: Exceso sobre HSA en células MOLM-13 a las 48 horas con controles no complementarios o desapareados

Tabla 16: Exceso sobre BLISS en células MOLM-13 a las 48 horas con controles no complementarios o desapareados

Tabla 17: Exceso sobre HSA en células MOLM-13 a las 96 horas con controles no complementarios o desapareados

Tabla 18: Exceso sobre BLISS en células MOLM-13 a las 96 horas con controles no complementarios o desapareados

Ejemplo 2: Estudios sobre el mecanismo de interacción entre imetelstat de sodio y ABT-199 en células tratadas Desde el punto de vista mecánico, el imetelstat de sodio actúa principalmente inhibiendo el sitio activo del complejo enzimático de la telomerasa. De este modo, los extremos de los telómeros sobre los que actúa la enzima no se alargan.

Con la rápida y repetida división celular de las células tumorales, con el tiempo se vuelven vulnerables al acortamiento progresivo de los telómeros. Con el proceso de renovación telomérica bloqueado, las células se acercan progresivamente a la crisis y acaban desencadenando la apoptosis (Bruedigam et al., Cell Stem Cell., 15: 775-790 (2014)).

Bcl-2 y los miembros de su familia relacionados desempeñan un papel en el transporte de señales antiapoptóticas a las células tumorales. Bcl-2 actúa inhibiendo a Bax, que es un mediador clave en la transducción de señales de la liberación de factores apoptóticos que provocan la muerte celular programada normal. Bajo estas señales, Bax se transloca a las mitocondrias, activando el citocromo c y otros factores apoptóticos que conducen a la activación de la cascada de caspasas y culminan en la muerte celular a través de la vía intrínseca (es decir, no mediada por receptores - TRAIL, TNFa, etc.). La presencia de Bcl-2 produce interferencias en estas señales, ya que Bcl-2 puede inhibir directamente a Bax. Sin Bax, los factores apoptóticos no se liberan y las células se liberan de las señales apoptóticas.

Estas dos vías convergen ya que el componente proteico primario de la telomerasa, hTERT, también desempeña funciones auxiliares en la vía apoptótica intrínseca que se cruzan con Bcl-2. Además, se sabe que Bcl-2 también aumenta la expresión de hTERT y la posterior actividad telomerasa, reduciendo aún más la apoptosis en las células tumorales. Se ha demostrado que hTERT es capaz de interceptar a Bax antes de que llegue a las mitocondrias y desencadene la cascada de señales apoptóticas. Además, dentro de las mitocondrias, el hTERT puede potenciar el efecto inhibidor de Bcl-2 sobre Bax. Para dilucidar mejor el mecanismo de interacción entre imetelstat de sodio y ABT-199 en las células tratadas, se midió la expresión de hTERT evaluando los niveles de transcripción mediante RT-qPCR y se evaluó la actividad telomerasa utilizando proteínas de células lisadas en un ensayo TRA^pbasado en PCR.

Niveles de transcripción de hTERT

Se recogieron muestras de experimentos celulares (y controles de agente único) para análisis moleculares con el fin de evaluar los efectos de combinación que contribuyen a los mecanismos de acción potenciales. Se cultivaron células ^{de LMA en matraces Falcon T25 (Corning n.° de catálogo 353135) en lotes de}8 ^{millones de células en}8 ^{ml de medio}dosificado con imetelstat de sodio 50 pM, ABT-199 20 nM, imetelstat de sodio 50 pM más ABT-199 20 nM, o sin fármaco durante 48 y 96 horas, de forma similar a los experimentos anteriores, y después se recogieron como sedimentos celulares para su lisado y extracción de ácidos nucleicos o proteínas. Los ácidos nucleicos se purificaron lisando primero las células con 350 pl de tampón RLT (Qiagen, n.° de catálogo 1030963) suplementado con 2-mercaptoetanol (Sigma, n.° de catálogo 63689-100ML-F). El ARN se purificó con el kit AllPrep RNA/DNA Mini Kit (Qiagen, n.° de catálogo 80204) y se transcribió inversamente a ADNc utilizando un kit de ADNc de alta capacidad (ThermoFisher, n.° de catálogo 4368814) y se preamplificó antes del análisis con TaqMan PreAmp Master Mix (ThermoFisher, n.° de catálogo 4384557B). Los productos se analizaron utilizando un ensayo Taq-Man RT-qPCR de desarrollo propio para medir los niveles de transcripción de hTERT (TaqMan Universal PCR Master Mix - ThermoFisher n.° de catálogo 4304437; las secuencias de cebadores y sondas se indican a continuación) utilizando un sistema de PCR en tiempo real ViiA7 de ThermoFisher:

hTERT de longitud completa directo: 5'-TGTACTTTGTCAAGGTGGATGTGA-3' (SEQ ID NO:4)

hTERT de longitud completa inverso: 5'-GCTGGAGGTCTGTCAAGGTAGAG-3' (SEQ ID NO:5)

^{hTERT sonda FAM: FAM 5'-CGCGTACGACACCAT-3' MGBNFQ (SEQ ID NO:}6 ⁾

en el que FAM es el indicador fluorescente y MGBNFQ es el extintor.

Los gráficos de barras que indican la expresión de hTERT después de 48 y 96 horas de tratamiento con imetelstat de sodio y/o ABT-199 se muestran en la figura 9. Los niveles de expresión del ARN medidos por RT-qPCR se muestran como porcentajes de los controles no tratados en el mismo momento de la exposición. Los resultados demuestran que las células KG-1 presentan una reducción mínima (del 90-95 % en comparación con los controles en cualquiera de los puntos temporales) de los niveles de ARN de hTERT con el tratamiento con ABT-199 y las células MOLM-13 muestran sólo una ligera reducción de los niveles de transcripción de hTERT tras 96 horas de dosificación (aproximadamente un 69 % en comparación con los controles). El tratamiento con imetelstat de sodio muestra una mayor reducción de los niveles de ARN para ambas líneas celulares, con una menor expresión a mayor tiempo de tratamiento (células KG-1 ^{del 72 % del control a las 48 horas y del 47 % del control a las 96 horas; células Mo Lm -13 del 39 % a las 48 horas}a indetectable por el ensayo a las 96 horas). En el caso de la combinación de imetelstat de sodio y ABT-199, la expresión de hTERT no se modificó en comparación con el imetelstat de sodio como agente único en KG-1. Para MOLM-13 en ambos puntos temporales, hTERT fue indetectable.

Niveles enzimáticos de hTERT

Las muestras de la sección anterior para el análisis de proteínas se recogieron como sedimentos celulares por centrifugación a 5 minutos con 1500 K para la lisis y la extracción de proteínas. Los lisados de proteínas se analizaron utilizando un método modificado combinado de dos fuentes primarias (Hou, et al. (2001), 43(3), 519-524; y Nature Protocols (2006), 1 (3), 1583-1590). Los lisados se generaron añadiendo 80 pl de un tampón Tris-EDTA 10 mM, NP-40 al 1 %, glicerol al 10%, NaCl 150 mM, MgCh 1 mM, desoxicolato de sodio 250 pM, AEBSF 100 pM, 2-mercaptoetanol 5 mM y se incubaron en hielo durante 30 minutos. Los lisados se centrifugaron durante 15 minutos a velocidad máxima y a 4 °C para precipitar los restos celulares. El rendimiento de proteínas de los lisados aclarados se cuantificó mediante un ensayo BCA (ThermoFisher n.° de catálogo 23252) y se sometieron a un ensayo qPCR basado en TRAP para determinar la actividad telomerasa relativa (Power SYBR Green PCR Master Mix - ThermoFisher n.° 4367659) utilizando un sistema de PCR en tiempo real ViiA7 de ThermoFisher. En este ensayo, los lisados de proteínas se exponen a oligonucleótidos sintéticos que imitan las secuencias teloméricas en presencia de un exceso de dNTP y tinte verde SYBR. Cuanto mayor sea la actividad de la telomerasa, mayor será la extensión de los cebadores sintéticos y, por tanto, mayor será la tinción del ácido nucleico y la señal generada por el tinte SYBR. Esta señal se compara con una curva patrón del lisado de proteínas del control para determinar la actividad telomerasa relativa entre muestras.

Cebador directo: 5' - AATCCGTCGAGCAGAGTT - 3' (SEQ ID NO:7)

^{Cebador inverso: 5' - GCGCGGCTTACCCTTACCCTTACCCTAACC - 3' (SEQ ID NO:}8⁾

Resultados de las interacciones moleculares

Los gráficos de barras que indican la actividad telomerasa después de 48 y 96 horas de tratamiento con imetelstat de sodio y/o ABT-199 se muestran en la figura 10. A las 48 horas, el ABT-199 no muestra ningún efecto sobre la actividad telomerasa tanto en las células KG-1 como en las MOLM-13 cuando se utiliza como agente único. A las 96 horas de tratamiento con ABT-199, la actividad de la telomerasa se redujo aproximadamente a un 80% en KG-1 y aproximadamente a un 70 %, lo que indica que ABT-199 tiene poco efecto sobre la actividad telomerasa. El imetelstat de sodio mostró reducciones de la actividad telomerasa en las líneas celulares KG-1 y MOLM-13. En las células MOLM-13, las reducciones en comparación con el control fueron comparables en ambos puntos temporales (un 37 % para las 48 horas, un 44 % para las 96 horas). Sin embargo, KG-1 mostró mayores reducciones de la actividad telomerasa con el tratamiento con imetelstat de sodio a las 96 horas (un 64 % a las 48 horas, un 16 % a las 96 horas). Con el tratamiento combinado, KG-1 mostró diferencias mínimas respecto al agente único imetelstat de sodio, mientras que, en MOLM-13, la reducción de la actividad telomerasa fue casi indetectable mediante el ensayo PCR.

Ejemplo 3: Esclarecimiento de la sinergia de la combinación

El tratamiento de la línea de células tumorales de LMA modelo MOLM-13 se repitió en el formato experimental descrito ^{en el ejemplo}1 ^{con los siguientes cambios: el imetelstat de sodio, el control de desapareamiento y el control de}compuestos no complementarios se ensayaron a concentraciones más altas de 0 a 75 pM (siete concentraciones totales) y ABT-199 se ensayó de 20 pM a 1 pM (nueve concentraciones totales). Las células tratadas se analizaron mediante citometría de flujo para la tinción con anexina V y yoduro de propidio, tal como se ha descrito anteriormente. Los acontecimientos seleccionados con la ventana de análisis en la población apoptótica (anexina V+/yoduro de propidio+) se utilizaron para determinar las puntuaciones de sinergia de la matriz de combinación. El análisis de los datos de combinación se generó con el software Horizon Chalice™ Analyzer (Horizon Discovery Group, Cambridge, Reino Unido). Se realizó otro experimento in vitro con MOLM-13 así como con la línea celular HL-60 para evaluar la sinergia del imetelstat de sodio más ABT-199 tras una única exposición a la combinación (es decir, sin volver a realizar una administración a las 48 horas). Los intervalos de dosis de ABT-199 se modificaron ligeramente (de 500 pM a 100 nM, cinco concentraciones totales) y se compararon con los puntos de datos equivalentes del experimento descrito anteriormente, en el que las células recibieron una segunda dosis a las 48 horas. En este experimento no se utilizaron controles de desapareamiento ni no complementarios.

Para calificar estadísticamente los efectos observados en las células MOLM-13 tratadas, se evaluaron combinaciones de dosis con la aplicación web del software Chalice™ Analyzer de Horizon, que resume los datos brutos del análisis isobolar de dosis de proporción fija según el método de Chou y Talalay (Chou T.C., Talalay P., Adv. Enzyme Regul., 1984, 22:27-55). Las condiciones de combinación se someten a un análisis isobolar para generar un índice de combinación y representar gráficamente el comportamiento de una combinación con pares sinérgicos que se encuentran por debajo del isobolograma y antagónicos que se encuentran por encima (se esperaría que las combinaciones aditivas se encontrarían sobre la línea). El software Horizon Chalice™ Analyzer proporciona además ^{una puntuación de sinergia, y los valores superiores a}1 ^{indican sinergia.}

Se muestran un gráfico de porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio para el tratamiento de 48 horas en la figura 11. La tabla 19 muestra los cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) en cada combinación para las células MOLM-13 tras 48 horas de tratamiento. Los valores superiores a cero se encuentran en el cuadrante superior derecho de la tabla 19, donde las concentraciones de ABT-199 son superiores o iguales a 20 nM y las concentraciones de imetelstat de sodio son superiores o iguales a 25 pM. El software Horizon Chalice™ Analyzer proporciona además una puntuación de sinergia, y los valores superiores a 1 indican sinergia. Para las células tratadas con imetelstat de sodio, tras 48 horas se determinó que la puntuación de sinergia era de 5,12. Esto contrasta con las puntuaciones de 0,22 y 0,41 para los controles desapareados y no complementarios (tabla 20 y 21), respectivamente. Se muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio durante 48 horas de tratamiento en la figura 12A y la figura 12B para los controles desapareados y no complementarios, respectivamente.

Tabla 19: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 48 horas de tratamiento con imetelstat de sodio

Tabla 20: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 48 horas de tratamiento con control desapareado

Tabla 21: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 48 horas de tratamiento con control no complementario

Se muestran un gráfico de porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio para el tratamiento de 96 horas en la figura 13. La tabla 22 muestra los cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) en cada combinación para las células MOLM-13 tras 96 horas de tratamiento. Los valores superiores a cero se encuentran en la diagonal superior derecha de la tabla 19. Sorprendentemente, incluso las concentraciones más bajas de ABT-199 (0,04 nM y 0,2 nM) muestran sinergia con imetelstat de sodio a 50 pM y 75 pM de imetelstat de sodio, respectivamente, y las concentraciones más bajas de imetelstat de sodio (1 pM y 5 pM) muestran sinergia con ABT-199 a 500 nM y 100 nM, respectivamente. El software Horizon Chalice™ Analyzer proporciona además una puntuación de sinergia, y los valores superiores a 1 indican sinergia. Para las células tratadas con imetelstat de sodio, tras 96 horas se determinó que la puntuación de sinergia era de 11,33. Esto contrasta con las puntuaciones de 0,03 y 0,06 para los controles desapareados y no complementarios (tabla 23 y 24), respectivamente. Se muestra un gráfico del porcentaje de células apoptóticas (doble marcaje) frente a la concentración de ABT-199 a diversas concentraciones de imetelstat de sodio durante 96 horas de tratamiento en la figura 14A y FIG. 14B para los controles desapareados y no complementarios, respectivamente.

Tabla 22: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 96 horas de tratamiento con imetelstat de sodio

Tabla 23: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 96 horas de tratamiento con control desapareado

Tabla 24: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 96 horas de tratamiento con control no complementario

La población apoptótica (doble marcaje) a las 96 horas después de una dosis única de tratamiento se muestra para MOLM-13 (figura 17A) y la línea celular de LMA HL-60 (figura 17B). En este experimento se utilizó un intervalo de dosis menor de ABT-199 para evaluar la eficacia del tratamiento conjunto con imetelstat de sodio. La tabla 25 muestra los cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) calculados por el software Horizon Chalice™ Analyzer para cada combinación MOLM-13, mientras que la tabla 26 muestra la del HL-60. Aunque hay sinergia en ambas líneas, se observa una mayor sinergia en MOLM-13, como pone de manifiesto tanto la mayor puntuación como el efecto potenciado sobre la apoptosis a concentraciones más bajas (5 y 10 pM) de imetelstat de sodio. La combinación con imetelstat de sodio resulta prometedora con concentraciones de ABT-199 hasta dosis de 1 a 5 nM.

Tabla 25: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 96 horas de tratamiento, dosis única de imetelstat de sodio en MOLM-13

Tabla 26: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 96 horas de tratamiento, dosis única de imetelstat de sodio en HL-60

A modo de comparación, los datos representados en la figura 13 y utilizados para generar la tabla 22 se volvieron a analizar con el software Horizon Chalice™ Analyzer sólo a las dosis utilizadas en la figura 17A y la tabla 25. Tal como se indica en la tabla 27, la puntuación de sinergia se reduce casi a la mitad (de 11,33 a 6,06) al eliminar los niveles superiores de la curva de valoración del ABT-199. Esta puntuación es aproximadamente el doble (6,06 frente a 3,24) de la obtenida en la condición de dosis única de 96 horas (tabla 25), lo que sugiere que la mayor sinergia de la combinación de ABT-199 con imetelstat de sodio se induce con la exposición continua.

Tabla 27: Cálculos en exceso de aditividad (modelo de Loewe) para 96 horas de tratamiento, repetición de la dosis en 48 horas en MOLM-13 (recreada a partir de la figura 13)

Ejemplo 4: El inhibidor de la telomerasa imetelstat de sodio combinado con el inhibidor de BCL-2 venetoclax mejora la apoptosis ex vivo en muestras de pacientes con LMA

La leucemia mieloide aguda (LMA) es un cáncer agresivo con opciones de tratamiento limitadas fuera de la quimioterapia, por lo que se necesitan agentes curativos para cubrir esta necesidad insatisfecha. Tanto hTERT, la subunidad catalítica de la telomerasa, como BCL-2, un regulador apoptótico, se expresan al alza en la LMA, correlacionándose con la gravedad de la enfermedad y el mal pronóstico, respectivamente. El imetelstat de sodio es un innovador inhibidor competitivo de la telomerasa con actividad clínica en neoplasias hematológicas malignas. El venetoclax (ABT-199), un inhibidor de BCL-2 aprobado para pacientes con LLC que presentan una deleción 17p y han recibido al menos un tratamiento previo, ha mostrado beneficios clínicos prometedores en pacientes con LMA. El estudio de este ejemplo investigó el efecto de imetelstat de sodio o venetoclax solos, o combinados en células de LMA in vitro.

Líneas celulares de LMA (véase el ejemplo 1) y muestras de células mononucleares de sangre periférica ("PBMC") de pacientes con LMA, que se obtuvieron de sangre completa pacientes con LMA después de la purificación con Ficoll, se trataron con imetelstat de sodio o venetoclax solos, o combinados, y las poblaciones viables y apoptóticas de células se evaluaron por citometría de flujo. Se investigó el mecanismo de acción de la actividad telomerasa, la expresión de hTERT y la disfunción mitocondrial. Las PBMC de pacientes con LMA recibieron imetelstat de sodio (0 |jM, 25 |^jM y 50 ^jiM), venetoclax (ABT-199) (0 nM, 20 nM y 100 nM) o la combinación durante 16 horas o 40 horas. La apoptosis se midió mediante citometría de flujo con tinción de anexina V y yoduro de propidio. Las células no teñidas (es decir, doblemente negativas) constituyen las células viables que quedan después del tratamiento.

Específicamente, la sangre completa de pacientes con LMA (n = 4) fue purificada usando Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare n.° de catálogo 17-1440-03) para purificar las PBMC. Se cargó Ficoll en tubos de centrífuga SepMate de 50 ml (StemCell Technologies n.° de catálogo 85450) y la sangre del paciente se prediluyó con solución salina tamponada con fosfato (PBS; ThermoFisher n.° de catálogo 20012-027) suplementada con suero bovino fetal al 2 % ("fetal bovine serum", FBS) con HyClone FBS (ThermoFisher n.° de catálogo SH30070.02) 1:1 antes de cargarla sobre el Ficoll. La sangre se centrifugó para separar las PBMC de los eritrocitos, granulocitos, etc., y las PBMC restantes se lavaron dos veces con PBS f Bs al 2 %. Las células se sembraron a una densidad de aproximadamente 300000 células por pocillo en placas de cultivo de tejidos de 96 pocillos de poliestireno con fondo en U (Corning, n.° de catálogo ^{353777) en RPMI}-1640 ^{(ThermoFisher, n.° de catálogo 11875-085) suplementado con FBS HyClone al 10% mencionado anteriormente y se cultivaron en una incubadora a 37 °C con humidificación de 5 % de CO}2^{. No se}utilizaron antibióticos con las PBMC ex vivo . Las células se trataron inmediatamente con imetelstat de sodio (Janssen Biotech, Inc.) preparado en RPMI-1640 suplementado con un FBS al 10 % y/o ABT-199 (Selleckchem n.° de catálogo S8048) preparado como una solución madre 1000x en DMSO, diluido 1:100 en PBS (vehículo). El imetelstat de sodio se ensayó de 0 a 50 jiM y el venetoclax (ABT-199) se ensayó de 0 a 100 nM.

Después de 16 y 40 horas de tratamiento, las células se midieron para poblaciones sanas, apoptóticas tempranas y apoptóticas con un kit de ensayo de citometría de flujo de anexina V (tinción de la membrana celular interior) más yoduro de propidio (PI, tinte de unión al ADN) (BioLegend n.° de catálogo 640914) como se describe en el ejemplo 1. Además, se tiñeron las PBMC para los siguientes marcadores de diferenciación: CD45 (conjugado con V500; BD n.° de catálogo 560777), y CD34 (conjugado con Pacific Blue; Biolegend n.° de catálogo 343512). Los acontecimientos se separaron primero para la positividad a CD45 y luego para CD34 antes de la evaluación con anexina V/yoduro de propidio como se describe en el ejemplo 1 anterior. Se determinaron las medias y las desviaciones estándar de los cuatro pacientes para las poblaciones CD45+ (leucocitos) y CD45+/CD34+ (células madre leucémicas).

Resultados de los tratamientos ex vivo

Las figuras 15A a 15D ilustran la respuesta media de cuatro muestras de PBMC de pacientes con LMA expuestas ex vivo a imetelstat de sodio y/o venetoclax (ABT-199). Se muestran los gráficos del porcentaje de células viables tras 16 horas de tratamiento de leucocitos CD45+ y células madre leucémicas CD45+/CD34+ de pacientes con LMA con diversas concentraciones de venetoclax (a BT-199) y/o imetelstat de sodio en las figuras 15a (leucocitos CD45+) y 15B (células madre leucémicas CD45+/CD34+). Se muestran los gráficos del porcentaje de células viables tras 40 horas de tratamiento de leucocitos CD45+ y células madre leucémicas CD45+/CD34+ de pacientes con LMA con diversas concentraciones de venetoclax (a BT-199) y/o imetelstat de sodio en las figuras 15c (leucocitos CD45+) y 15D (células madre leucémicas CD45+/CD34+). En general, la viabilidad de los leucocitos CD45+provenientes de pacientes con LMA no se vio afectada por el tratamiento con imetelstat de sodio solo y únicamente se vieron afectados moderadamente por venetoclax como agente único tras una exposición de 16 y 40 horas. Sin embargo, se observó una reducción de la viabilidad celular cuando se utilizó imetelstat de sodio combinado con venetoclax. Se observaron resultados similares para la población de células madre leucémicas CD45+/CD34+; se observó una actividad dependiente de la dosis en la reducción de la viabilidad celular cuando se utilizó imetelstat de sodio combinado con venetoclax en ambos puntos temporales, y fue más drástica a las 40 horas.

Se observó actividad sinérgica dependiente de la dosis en la inducción de la apoptosis en múltiples líneas celulares de LMA al combinar imetelstat de sodio con venetoclax (véase el ejemplo 1). Por ejemplo, en la línea celular MOLM-13, los agentes únicos imetelstat de sodio y venetoclax tuvieron una modesta actividad apoptótica a las 48 horas (un ^{22 % y un 30 %, respectivamente), pero la combinación alcanzó el}88 ^{% a las 48 horas y casi el 100 % a las 96 horas.}También se observó una actividad apoptótica similar en 4 muestras de pacientes con LMA. Los análisis moleculares mostraron que la combinación de imetelstat de sodio con venetoclax reducía la expresión de hTERT y la actividad telomerasa en mayor medida que cualquiera de los dos agentes por separado. Este ejemplo demuestra que la combinación de imetelstat de sodio con venetoclax en la LMA tiene un efecto sinérgico en la inducción de la apoptosis en líneas celulares y muestras de pacientes in vitro.

Ejemplo 5: El inhibidor de la telomerasa imetelstat de sodio combinado con el inhibidor de BCL-2 venetoclax mejora la supervivencia in vivo en la leucemia mieloide aguda

Tal como se analizó en el ejemplo 4, la leucemia mieloide aguda (LMA) es un cáncer agresivo con opciones de tratamiento limitadas fuera de la quimioterapia y, por lo tanto, se necesitan agentes curativos. En el ejemplo 4, se demostró que el inhibidor de la telomerasa imetelstat de sodio combinado con el inhibidor de BCL-2 venetoclax mejora la apoptosis in vitro. El estudio de este ejemplo investigó el efecto de imetelstat de sodio o venetoclax solos, o combinados en un modelo in vivo de leucemia mieloide aguda.

Métodos

Se realizó un estudio in vivo en el modelo de ratón MOLM-13 de LMA diseminada para evaluar la eficacia y la supervivencia. En concreto, en el día 0 del estudio se implantaron células tumorales de LMA MOLM-13 en ratones. Los ratones recibieron 31 días de tratamiento: (i) Vehículos (MM PEG400/Phosal50/ETOH); (ii) imetelstat de sodio (30 mg/kg); (iii) venetoclax (ABT-199) (100 mg/kg); (iv) MM (control de oligonucleótidos desapareados) (30 mg/kg) y A bT-199 (100 mg/kg); y (v) imetelstat de sodio (30 mg/kg) y ABT-199 (100 mg/kg). El porcentaje de supervivencia de los ratones se evaluó en función del tiempo (días tras la implantación de las células tumorales). El estudio duró un total de 108 días (77 días después de interrumpir el tratamiento).

^{Cincuenta ratones hembra SCID-beige}(6 ^{semanas de edad, Jackson Laboratory) fueron inyectados por vía}intravenosa con 1 millón de células MOLM-13 y divididos aleatoriamente en cinco grupos. El primer día tras la inyección, los ratones fueron tratados con una de las cinco condiciones que se indican en la tabla 28.

Tabla 28: Condiciones de tratamiento para ratones SCID-beige inoculados con el modelo de LMA diseminada MOLM-13

Los ratones fueron observados diariamente y se midió su peso corporal dos veces por semana. Se siguió la supervivencia de los ratones de cada grupo. El estudio finalizó el día 108, es decir, 77 días después del último tratamiento. El aumento de la duración de la vida ("increased life span", ILS) se evaluó para cada grupo, y se calculó el porcentaje de ILS frente al control del vehículo como:

en la que T es la mediana de supervivencia del grupo de tratamiento y C es la mediana de supervivencia del grupo de control.

Resultados del estudio in vivo

Un gráfico de supervivencia de Kaplan-Meier para el modelo de LMA diseminada MOLM-13 en el día 108 se muestra en la figura 16. En concreto, la figura 16 muestra el porcentaje de supervivencia de los ratones en función de los días posteriores a la implantación de las células tumorales. La mediana de supervivencia y el porcentaje de aumento de la duración de la vida ("ILS") calculados para los distintos grupos de tratamiento se muestran en la tabla 29. Los resultados muestran que la mediana del tiempo de supervivencia de los ratones tratados con imetelstat de sodio como agente único fue de 26,5 días, lo que se tradujo en un 20,4 % de ILS (p = 0,0009) en comparación con el vehículo. El tratamiento con venetoclax (ABT-199) como agente único dio lugar a una mediana de supervivencia de 30 días y un 36,3 % de ILS (p < 0,0001). Combinado con el oligo de control desapareado (MM), ABT-l99 produjo efectos similares al ABT-199 solo: mediana de tiempo de supervivencia de 31 días y un 40,9 % de ILS (p < 0,0001). La combinación de imetelstat de sodio con ABT-199 produjo el mejor resultado, con una mediana de supervivencia de 37 días y una eficacia significativa del 68,1 % de ILS (p < 0,0001). Además, cuatro ratones (40 %) de este grupo de tratamiento combinado fueron longevos y sobrevivieron más de 108 días, lo que demuestra un mayor beneficio para la supervivencia.

Tabla 29: Mediana del tiempo de supervivencia y porcentaje de aumento de la duración de la vida (% de ILS; en comparación con el control) de los ratones implantados con MOLM-13 tratados con imetelstat de sodio y/o venetoclax (ABT-199), o MM (control de oligonucleótidos desapareados)

Todos los ratones toleraron la combinación de imetelstat de sodio con venetoclax y se observó un aumento de la duración de la vida en comparación con imetelstat de sodio (un 39,6 %, p = 0,0011) o con venetoclax (un 23,3 %, p = 0,0001) solos. En el grupo de combinación, el 40 % de los ratones tratados seguían vivos 77 días después de interrumpir el tratamiento, lo que demuestra un beneficio significativo en la supervivencia con potencial curativo. Los resultados de este ejemplo, así como del ejemplo 4, demuestran que la combinación de imetelstat de sodio con venetoclax en la LMA tiene un efecto sinérgico en la inducción de la apoptosis en líneas celulares y muestras de pacientes in vitro, lo que se traduce en una supervivencia prolongada y una curación potencial en modelos de xenoinjerto.

Equivalentes

Aunque la presente invención se ha descrito con referencia a las realizaciones específicas de la misma, los expertos en la materia entenderán que pueden realizarse diversos cambios y pueden sustituirse equivalentes. Además, se pueden realizar muchas modificaciones para adaptar una situación, un material, una composición de materia, un proceso, una etapa o etapas del proceso concretos para lograr los beneficios proporcionados por la presente invención.

La mención de publicaciones y documentos de patente no pretende ser una admisión de que alguno sea una técnica anterior pertinente, ni constituye una admisión en cuanto al contenido o fecha de los mismos.

Claims

REIVINDICACIONES

1. - El imetelstat para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) en un paciente en tratamiento con ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. - El ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) en un paciente en tratamiento con imetelstat.

3. - El imetelstat para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), comprendiendo el método la administración de imetelstat y ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo combinados a un sujeto que lo necesita.

4. - Una combinación que comprende imetelstat y ABT-199 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), comprendiendo el método la administración de la combinación a un sujeto que lo necesita.

5. - El imetelstat para su uso según las reivindicaciones 1 a 3 o la combinación para su uso según la reivindicación 4, en los que el imetelstat es imetelstat de sodio.

6. - El imetelstat para su uso según las reivindicaciones 1 a 3 o la combinación para su uso según la reivindicación 4, en los que el imetelstat se administra durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más de 8 ciclos de dosificación, comprendiendo cada ciclo de dosificación:

(a) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat una vez cada cuatro semanas;

(b) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat una vez por semana durante cuatro semanas; (c) la administración intravenosa de 2,5 a 7 mg/kg de imetelstat una vez cada tres semanas; o

(d) la administración intravenosa de 0,5 a 9,4 mg/kg de imetelstat una vez cada cuatro semanas.

7. - El imetelstat para su uso según la reivindicación 6 o la combinación para su uso según la reivindicación 6, en los que el imetelstat es imetelstat de sodio.

8. - El imetelstat para su uso según las reivindicaciones 1 a 3 o la combinación para su uso según la reivindicación 4, en los que el ABT-199 es para administración en una dosis de:

(a) de 50 a 400 mg de ABT-199 al día;

(b) 2 mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria hasta una dosis final de 800 mg el día 6 y a diario a partir de entonces; o

(c) 25 mg de ABT-199 el día 1 con escalada diaria hasta una dosis final de 400 mg el día 5 y a diario a partir de entonces.

9. - El imetelstat para su uso según las reivindicaciones 1 a 3 o la combinación para su uso según la reivindicación 4, en los que la administración de ABT-199 se realiza un día antes, un día después o el mismo día que la administración del imetelstat.

10. - El imetelstat de sodio para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) según la reivindicación 3, comprendiendo el método la administración de imetelstat de sodio y ABT-199 combinados a un sujeto que lo necesita.

11. - El ABT-199 para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) según la reivindicación 2, comprendiendo el método administrar ABT-199 e imetelstat de sodio combinados a un sujeto que lo necesita.

12. - Una combinación que comprende imetelstat de sodio y ABT-199 para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA) según la reivindicación 4, comprendiendo el método la administración de la combinación a un sujeto que lo necesita.

13. - El imetelstat de sodio para su uso según la reivindicación 10, el ABT-199 para su uso según la reivindicación 11 o la combinación para su uso según la reivindicación 12, en los que el imetelstat de sodio se administra durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más de 8 ciclos de dosificación, comprendiendo cada ciclo de dosificación:

(a) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada cuatro semanas; (b) la administración intravenosa de 7 a 10 mg/kg de imetelstat de sodio una vez por semana durante cuatro semanas;

(c) la administración intravenosa de 2,5 a 7 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada tres semanas; o (d) la administración intravenosa de 0,5 a 9,4 mg/kg de imetelstat de sodio una vez cada cuatro semanas.

14. - El imetelstat de sodio para su uso según la reivindicación 10, el ABT-199 para su uso según la reivindicación 11 o la combinación para su uso según la reivindicación 12, en los que el ABT-199 se administra en una dosis de:

(a) de 50 a 400 mg de ABT-199 al día;

15. - El imetelstat de sodio para su uso según la reivindicación 10, el ABT-199 para su uso según la reivindicación 11 la combinación para su uso según la reivindicación 12, en los que la administración de ABT-199 se realiza un día antes, un día después o el mismo día que la administración del imetelstat de sodio.

16. - Un kit para su uso en un método de tratamiento de la leucemia mieloide aguda (LMA), que comprende:

(a) imetelstat; y

(b) ABT-199 o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

7.- El kit de la reivindicación 16, en el que el imetelstat es imetelstat de sodio.

18. - Un método in vitro de inducción de la apoptosis en una célula de leucemia mieloide aguda (LMA) que comprende: poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de imetelstat de sodio; y poner en contacto la célula con una cantidad terapéuticamente eficaz de ABT-199.

19. - Una composición farmacéutica que comprende imetelstat y ABT-199.

20.- La composición farmacéutica de la reivindicación 19, en la que el imetelstat es imetelstat de sodio.

21.- La composición farmacéutica de la reivindicación 19, en la que la composición es para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda.