ES2939316T3

ES2939316T3 - Composiciones sinérgicas y métodos

Info

Publication number: ES2939316T3
Application number: ES12722552T
Authority: ES
Inventors: Morris Zelkha; Yoav Blatt; Yossi Levy; Yoav Sharoni
Original assignee: Lycored Ltd
Current assignee: Lycored Ltd
Priority date: 2011-04-07
Filing date: 2012-04-05
Publication date: 2023-04-20
Anticipated expiration: 2032-04-05
Also published as: ZA201307187B; US20120258182A1; CN103619329A; CN103619329B; BR112013025878A2; EP2694044A1; JP6153922B2; CA2832273C; RU2013144735A; AU2012240955A1; JP2014513075A; EP2694044B1; JP2016196461A; US8460718B2; WO2012137209A1; RU2657594C2; AU2012240955B2; CA2832273A1

Abstract

Composiciones farmacéuticas para administración oral que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación sinérgica de un caroteno y al menos un fitoesterol en las que la proporción de dicho licopeno a dicho fitoesterol en dicha composición farmacéutica es un máximo de aproximadamente 5:1 y en las que dicha composición produce un efecto sinérgico se describen la inhibición del crecimiento celular y los efectos antiinflamatorios. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones sinérgicas y métodos

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud es una continuación en parte de la Solicitud de Patente de EE.UU. N.° 13/081.643, presentada el 7 de abril de 2011.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a carotenoides específicos que se encuentran principalmente en los tomates. Más particularmente, la presente invención se refiere a combinaciones de carotenoides y fitosteroles específicos que se encuentran comúnmente en diversos productos alimenticios, incluyendo tomates. Aún más particularmente, la presente invención se refiere a combinaciones de estos compuestos usados en composiciones farmacéuticas y que exhiben propiedades sinérgicas, particularmente en la inhibición del crecimiento de las células prostáticas.

Antecedentes de la invención

Los carotenoides son un grupo de pigmentos que se caracterizan por tener un color que va desde el amarillo hasta el rojo. Los carotenoides se producen comúnmente por una amplia diversidad de materiales vegetales y más comúnmente asociados a plantas tales como tomates, zanahorias y pimientos.

El licopeno y sus precursores, fitoeno y fitoflueno, se encuentran comúnmente en los tomates y el licopeno es la fuente predominante del color rojo brillante asociado a los tomates. El fitoeno es un precursor del fitoflueno, el licopeno y otros carotenoides, y también se encuentra en altas concentraciones en los tomates. El licopeno está generalmente presente en el plasma del cuerpo humano. Se sabe que los carotenoides tienen propiedades antioxidantes y, en consecuencia, proporcionan numerosos efectos beneficiosos para la salud incluyendo la reducción de los riesgos potenciales de enfermedades cardiovasculares y cánceres, así como ralentizar y/o revertir los efectos degenerativos del envejecimiento en diversas actividades fisiológicas humanas.

Los fitosteroles (esteroles vegetales) son un grupo de alcoholes esteroides o fitoquímicos que se encuentran de forma natural en las plantas y son los equivalentes del colesterol en los productos animales. La estructura es similar a la del colesterol con algunas modificaciones. Estas modificaciones implican una cadena lateral e incluyen la adición de un doble enlace y/o un grupo metilo o etilo. Los fitosteroles dietéticos más comunes son p-sitosterol, Campesterol y Estigmasterol. La dieta occidental contiene 80 mg de p-sitosterol/día. En la dieta finlandesa, 140-175 mg/día {véase Valsta et al, British Journal of Nutrition (2004), 92, 671-678), mientras que las dietas vegetariana y japonesa contienen 345 y 400 mg/día, respectivamente. Las mejores fuentes dietéticas de fitosteroles son aceites vegetales sin refinar, semillas, frutos secos y legumbres. El procesamiento de aceites vegetales (tales como el refinado y la desodorización) reduce el contenido de fitosteroles, pero la pérdida varía con el tipo de aceite. Sin embargo, la hidrogenación de aceites refinados tiene poco efecto sobre el contenido de fitosteroles.

Los esteroles vegetales y los soportes reducen eficazmente el colesterol LDL sérico y el riesgo de aterosclerosis (1). Además, los efectos potenciales de los esteroles y estanoles vegetales sobre otros procesos metabólicos aún no se han dilucidado (2).

Los fitosteroles no se sintetizan endógenamente en el cuerpo y, por lo tanto, derivan únicamente de la dieta por medio de la absorción intestinal. El nivel de fitosterol en plasma en el tejido de los mamíferos suele ser muy bajo, principalmente debido a la mala absorción del intestino y la excreción más rápida del hígado en comparación con el colesterol (3). Aunque la absorción de esteroles y estanoles vegetales (0,02-3,5 %) es baja en comparación con el colesterol (35-70 %), pequeñas cantidades se encuentran en la sangre y pueden influir en determinadas funciones fisiológicas. La absorción intestinal de fitosterol es selectiva; en animales el Campesterol se absorbe mejor que el psitosterol, mientras que el Estigmasterol solo se absorbe de forma mínima. Solo se encuentran 0,3-1,7 mg/dl de fitosteroles en el suero humano en condiciones normales, a pesar de ingestas dietéticas diarias de 160-360 mg/día. Las concentraciones totales de esteroles vegetales en plasma en adultos sanos varían de 7 |jmol/l y 24 |jmol/l, que representa menos del 1 % de las concentraciones de esterol en plasma total (4). Otros investigadores informaron que el p-sitosterol y el Campesterol eran los dos únicos fitosteroles detectables en la sangre (1, 5).

Los fitosteroles más comunes en la oleorresina de tomate son p-sitosterol, Campesterol y Estigmasterol como se muestra a continuación en la Tabla 1, como se determina de acuerdo con el procedimiento establecido en el Ejemplo 2 de este documento.

Tabla 1. Niveles de fitosteroles en oleorresina de tomate

El proceso inflamatorio, que forma una parte importante del sistema inmunitario inespecífico, se caracteriza por un conjunto complejo de cambios químicos y celulares que son esenciales para la defensa del hospedador frente a agentes microbianos y otros factores ambientales potencialmente dañinos. Los macrófagos juegan un papel importante en la defensa del hospedador contra sustancias nocivas y están implicados en diversos procesos patológicos, incluyendo enfermedades autoinmunitarias, infecciones y trastornos inflamatorios. Los estímulos inflamatorios tales como LPS e IFN-y activan los macrófagos para producir diversas citocinas proinflamatorias tales como TNFa e IL-Ip, así como otros mediadores inflamatorios incluyendo PGE2 y óxido nítrico (NO), que se sintetizan por la ciclooxigenasa-2 (COX-2) y la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS), respectivamente. Todos estos son importantes para la defensa del hospedador, sin embargo, su liberación aumentada puede promover un estado inflamatorio e inducir daño a las células asociado al estrés oxidativo. En muchos casos, la inflamación puede desencadenarse de manera inapropiada y/o puede persistir en un grado que se vuelve dañino para el hospedador. En tales casos, puede haber una necesidad de inhibir o prevenir el desarrollo de uno o más aspectos del proceso inflamatorio, en particular, en casos de enfermedades inflamatorias no infecciosas.

Se ha demostrado que un gran número de diferentes mediadores químicos están implicados en el desarrollo y el control del proceso inflamatorio. Estudios recientes realizados por varios laboratorios diferentes han implicado al óxido nítrico (NO) como un modulador importante de diversos trastornos inflamatorios agudos y crónicos, incluyendo diversos tipos de artritis, enfermedades gastrointestinales, afecciones inflamatorias del sistema nervioso central y determinadas formas de asma. Como consecuencia, se ha propuesto que la inhibición de la producción de NO podría proporcionar un mecanismo terapéutico útil para el tratamiento y/o el manejo de estos trastornos inflamatorios. Adicionalmente, también se ha demostrado que la inhibición de la síntesis de NO es útil en algunas afecciones o estados que no son principalmente de naturaleza inflamatoria. Por lo tanto, por ejemplo, se ha descubierto que la inhibición de la síntesis de NO reduce la absorción de glucosa en el tejido de las extremidades en personas con diabetes tipo 2 durante el ejercicio.

Varios otros compuestos, incluyendo una serie de productos naturales, también se han demostrado inhibir la producción de NO. Este último grupo incluye compuestos tales como Luteína [Rafi MM. et al. Mol Nutr Food Res. marzo de 2007;51 (3):333-40; Choi, J.S. Nutrition. jun de 2006; 22 (6): 668-71] y licopeno [Rafi, MM. et al. J Food Sci. ene de 2007;72(I):S069-74], Sin embargo, la eficacia y potencia de muchos de los productos naturales inhibidores de NO han demostrado no ser particularmente altas. Por lo tanto, existe la necesidad de composiciones inhibidoras de la producción de NO mejoradas de origen natural.

Otro mediador inflamatorio muy importante es el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a), que es una citocina producida por diversos tipos de células incluyendo macrófagos, neutrófilos y linfocitos. El TNF-a ocupa una posición clave en la etapa temprana del proceso inflamatorio y es responsable de estimular la producción y activación de una amplia gama de genes proinflamatorios. Por lo tanto, en vista de su papel proinflamatorio clave, TNF-a es claramente una diana terapéutica potencial importante para los agentes antiinflamatorios.

La producción descontrolada de especies reactivas de oxígeno (ROS) y metabolitos de ácido araquidónico (AA) contribuye a la patogenia de las enfermedades cardiovasculares y el cáncer. Las células inflamatorias infiltradas en la placa de ateroma o tumor, son una fuente importante de ROS y eicosanoides. De esta manera, se han estudiado los efectos del beta-Sitosterol, un fitosterol del aceite de oliva, sobre los niveles de ROS tales como el anión superóxido (O2 Q), el peróxido de hidrógeno (H2O2) y el óxido nítrico (*NO) (6). También se ha estudiado la liberación de AA y la producción de eicosanoides por macrófagos estimulados por ésteres de forbol (PMA) (células RAW 264.7). Se demostró que el beta-sitosterol disminuye la producción de O²(-) y (H²O²) inducida por PMA y ejerció sus efectos 3 6 horas después de la preincubación. El beta-sitosterol también redujo la liberación de *NO inducida por PMA, que se correlacionó con el deterioro de los niveles de óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) (6).

El cáncer de próstata y la hiperplasia prostática benigna (HPB) son afecciones relacionadas con el envejecimiento que afectan a la fisiología de la glándula prostática y deterioran la función urinaria en los hombres. A medida que los varones envejecen, sus glándulas prostáticas se agrandan lentamente provocando (a) síntomas obstructivos ejemplificados por chorros de orina débiles y/o intermitentes, una sensación de orina residual en la vejiga después de vaciar, goteo o fuga al final de la micción y/o (b) síntomas irritativos ejemplificados por la urgencia de la micción, aumento de la frecuencia de la micción y uracracia. Los síntomas urinarios obstructivos e irritativos se conocen comúnmente como síntomas del tracto urinario inferior (LUTS, por sus siglas en inglés). El tratamiento actual del cáncer de próstata, los síntomas de BPH y LUTS consisten en terapia farmacológica y, en casos extremos, requieren cirugía mayor. Las dos clases principales de medicamentos usados son los alfa bloqueantes y los inhibidores de la 5-alfa-reductasa, que deben tomarse de por vida para obtener una eficacia persistente. Cuando se lleva a cabo la cirugía, los resultados son habitualmente positivos, pero existen determinados riesgos asociados a tales operaciones quirúrgicas.

La Publicación de Patente de EE.UU. 2005/0031557 ("la publicación 557") describe una composición oral que contiene p-caroteno, luteína y licopeno e incluye, como posibles ingredientes añadidos, fitoeno y fitoflueno, para su uso como protección solar. Esta publicación no indica una preferencia por una cantidad específica de fitoeno o fitoflueno en relación con la luteína o cualquiera de la siguiente lista de fitoquímicos que consisten en alfa-caroteno, astaxantina, alfa-criptoxantina, beta-criptoxantina, zeaxantina, fitoeno, ftioflueno, gamma-caroteno y neurosporina. La Publicación '557 no proporciona una razón para incluir a ninguno de los miembros de esa lista en la composición.

Los estudios epidemiológicos y experimentales sugieren que los fitosteroles dietéticos pueden ofrecer protección contra la mayoría de los cánceres en las sociedades occidentales, tales como cáncer de colon, de mama y de próstata. Los posibles mecanismos por los cuales los fitosteroles ofrecen esta protección pueden incluir el efecto de los fitosteroles sobre la estructura de la membrana, la función del tumor y del tejido del hospedador, rutas de transducción de señales que regulan el crecimiento tumoral y la apoptosis (8) y la función inmunitaria (9) del hospedador. T ambién, el metabolismo del colesterol por parte del hospedador, suplementos de beta-sitosterol, colesterol reducido y otros lípidos en la membrana de la célula tumoral (10). Además, la Tabla 2 a continuación resume los resultados de varios estudios in vitro o los efectos de los fitosteroles sobre las líneas celulares de cáncer humano:

Tabla 2: Estudios in vitro con diversas líneas celulares de cáncer

Se han realizado estudios adicionales para identificar posibles mecanismos por los cuales dos fitoquímicos comunes, resveratrol y beta-sitosterol, inhiben el crecimiento del cáncer de próstata humano (14). En estos estudios, las células de cáncer de próstata humano (células PC-3) se suplementaron con resveratrol 50 |jM o beta-sitosterol 16 |jM, solos o en combinación, hasta durante 5 días (14). La combinación de los dos compuestos dio como resultado una mayor inhibición del crecimiento que cualquier compuesto solo. Basándose en estos datos, se concluyó que estos fitoquímicos pueden inducir la inhibición del crecimiento tumoral al estimular la apoptosis y detener las células en diferentes lugares del ciclo celular y que el mecanismo puede implicar alteraciones en la producción de ROS y prostaglandinas (14).

Los informes adicionales también indican que una combinación de fitosteroles y ácidos grasos omega-3 (n-3) reduce aún más los factores de riesgo cardiovascular (15).

Se informa que los esteroles y estanoles vegetales reducen las concentraciones en plasma de carotenoides de hidrocarburos, pero no las de los carotenoides oxigenados y tocoferoles (3, 16). En un informe, la capacidad de los ésteres de esteroles vegetales (PSE) en el aderezo para ensaladas para modificar los lípidos y carotenoides plasmáticos se determinó en 26 hombres y 27 mujeres que recibieron dietas de alimentación controlada, de mantenimiento de peso, isocalóricas (17). El consumo de 3,6 g de PSE resultó en una disminución del colesterol LDL (9,7 %) y los triglicéridos (7,3 %), pero no se observó ningún cambio en el colesterol HDL. Los carotenoides en plasma totales disminuyeron un 9,6 % con el consumo de PSE. Específicamente, hubo disminuciones significativas en el betacaroteno, alfa-caroteno y beta-criptoxantina. Los carotenoides plasmáticos en todas las dietas permanecieron dentro de los intervalos normales. En otro estudio, los datos indican que los esteroles libres de plantas y PSE redujeron la biodisponibilidad del beta-caroteno en aproximadamente un 50 % y la del alfa-tocoferol en aproximadamente un 20 % (18). El documento US2009/312287 desvela una composición de suplemento nutricional estable para administración oral que comprende, en una forma, aproximadamente el 71 % en peso, de un extracto de tomate que contiene en el mismo al menos del 2 % al 10 % en peso de licopeno, del 0,25 % al 2 % en peso de fitoeno y del 0,2 % al 2 % en peso de fitoflueno y aproximadamente el 29 % en peso, de una matriz encapsulante adecuada. El documento EP1997487 se refiere a un producto que contiene al menos licopeno y ácido oleico junto con antioxidantes de origen natural, tales como 2-carotenos, retinol, fitosteroles, tirosol y ácidos grasos, que se administra por vía oral y que está especialmente indicado en la prevención de enfermedades cardiovasculares y en patologías mediadas por una activación anómala del factor NF-kB, tales como enfermedades inflamatorias crónicas y determinados tipos de cáncer, incluyendo cáncer de colon y cáncer de próstata.

A pesar de los estudios mencionados anteriormente, sigue existiendo la necesidad de composiciones farmacéuticas que comprendan carotenoides, por ejemplo, licopeno, para su uso terapéutico.

Sumario de la invención

De acuerdo con la presente invención, una composición farmacéutica para administración oral comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una oleorresina de tomate que incluye licopeno en una cantidad de aproximadamente el 6 al 15 % en peso, fitoeno y fitoflueno en una cantidad de aproximadamente el 1,0 al 5,0 % en peso, tocoferoles en una cantidad de aproximadamente el 1,5 al 4,0 % en peso, beta-caroteno en una cantidad de aproximadamente el 0,2 al 1,0 % en peso, ácidos grasos en una cantidad de aproximadamente el 50 al 90 % en peso y al menos un fitosterol en una cantidad tal que la proporción de dicho licopeno a dicho al menos un fitosterol está entre aproximadamente 0,9:1 a 4,7:1 en peso, en donde dicho al menos un fitosterol comprende una mezcla de fitosteroles seleccionados del grupo que consiste en beta-sitosterol, Campesterol, beta-octasterol, Estigmasterol. Preferentemente, la proporción de licopeno a al menos un fitosterol es menos de aproximadamente 4,0:1, más preferentemente menos de aproximadamente 3,5:1 y lo más preferentemente menos de aproximadamente 3:1.

La proporción de licopeno a fitosterol produce una inhibición sinérgica del crecimiento de las células prostáticas. La proporción de licopeno a al menos un componente de fitosterol está entre aproximadamente 0,9:1 y 4,7:1, más preferentemente menos de aproximadamente 4:1, más preferentemente menos de aproximadamente 3:1. El al menos un fitosterol comprende beta-sitosterol, Campesterol, beta-octasterol, Estigmasterol.

De acuerdo con una realización de la composición farmacéutica de la presente invención, la concentración de al menos un fitosterol en la composición farmacéutica es de aproximadamente el 2,0 al 50 % en peso.

De acuerdo con otra realización de la composición farmacéutica de la presente invención, la composición incluye adicionalmente gamma-caroteno, delta-caroteno y Vitamina E.

No de acuerdo con la presente invención, se ha descubierto un método para producir una composición farmacéutica para administración oral que comprende preparar un extracto de tomate que comprende una oleorresina que incluye licopeno en una cantidad de aproximadamente el 6 al 15 % en peso, fosfolípidos en una cantidad de al menos aproximadamente el 0,01 % en peso, una mezcla de monoglicéridos y diglicéridos en una cantidad de aproximadamente el 2 al 6 % en peso y al menos un fitosterol en una cantidad de aproximadamente el 1 al 1,5 % en peso, en donde la proporción de licopeno a al menos un fosfolípido es de aproximadamente 2:1 y se añade una cantidad adicional suficiente de al menos un fitosterol para reducir la proporción de licopeno a al menos un fitosterol a menos de aproximadamente 3:1 y, preferentemente, entre aproximadamente 0,1 y 3:1, de tal manera que se produzca una inhibición sinérgica del crecimiento de las células prostáticas.

De acuerdo con otra realización de la presente invención, los componentes de licopeno y fitosteroles de las composiciones farmacéuticas de la presente invención son preferentemente de origen natural y preferentemente se extraen de los tomates como pulpa. La pulpa de tomate se extrae adecuadamente para producir una oleorresina que puede convertirse en las composiciones de la presente invención, tal como mediante la incorporación de cantidades adicionales de fitosteroles en la misma, y después puede procesarse en perlas o material en polvo seco. En diversas realizaciones, estas composiciones se encapsulan adecuadamente en cápsulas de gelatina blanda o, alternativamente, en cápsulas "duras", u opcionalmente, configurarse en comprimidos, o si así se desea, en paquetes de bolsitas y similares.

De esta manera, de acuerdo con una realización de la presente invención, ahora puede proporcionarse una oleorresina de tomate que, en comparación con las oleorresinas de tomate conocidas descritas en la Tabla 1, ahora incluye los niveles de fitosteroles como sigue (una vez más, como se determina de acuerdo con el procedimiento establecido en el Ejemplo 2 en el presente documento):

Ta ón

De acuerdo con otra realización de la presente invención, las oleorresinas de tomate que comprenden las composiciones de la presente invención pueden contener, además de licopeno y fitosteroles, fitoeno y componentes de fitoflueno, así como uno o más de beta-caroteno, gamma-caroteno y delta-caroteno, tocoferoles y fosfolípidos.

Breve descripción de los dibujos

El objetivo de la presente invención puede apreciarse más completamente con referencia a la siguiente descripción detallada, que a su vez se refiere a los dibujos, en los cuales:

La Figura 1A es una representación gráfica de la inhibición del crecimiento celular basada en el porcentaje de control de células LNCaP resultante del tratamiento con p-Sitosterol (-o-) y la combinación de p-Sitosterol con licopeno 0,4 |jM (-•-);

La Figura IB es una representación gráfica de la inhibición del crecimiento celular resultante del porcentaje de control de células LNCaP basado en el tratamiento con p-Campesterol y la combinación de p-Campesterol (-o-) con 0,4 j M de licopeno (-•-);

La Figura 1C es una representación gráfica de la inhibición del crecimiento celular resultante del porcentaje de control de células LNCaP basado en el tratamiento con p-Octosterol (-o-) y la combinación de p-Octosterol 0,4 j M con licopeno (-•-);

La Figura ID es una representación gráfica de la inhibición del crecimiento celular resultante del porcentaje de control de células LNCaP basado en el tratamiento con p-Estigmasterol (-o-) y la combinación de p-Estigmasterol con licopeno 0,4 j M (-•-);

La Figura IE es una representación gráfica de la inhibición del crecimiento celular basada en el porcentaje de control de las células LNCaP resultante del tratamiento con licopeno a varias concentraciones;

La Figura 2 es una representación gráfica de la inhibición sinérgica de la proliferación de células de cáncer de próstata dependiente de andrógenos humanos in vitro en presencia de una combinación de licopeno y el fitosterol Campesterol. En estos experimentos, las células LNCaP se preincubaron durante 24 horas en suero al 0,5 % y después se estimuló el crecimiento (cuantificado midiendo la incorporación de timidina) con DHT 1 nM. Las células estimuladas se trataron durante 3 días con la concentración indicada de fitosterol (0,4 j M) solo, con licopeno solo (0,4 j M) o en combinación con fitosterol y licopeno. Los datos presentados son la media ± SE de 2-3 experimentos independientes realizados por cuadruplicado;

La Figura 3 A es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de NO para un producto Lyc-O-Mato® que tiene una proporción de licopeno/fitosterol de más de 5,5;

La Figura 3 B es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de NO para una mezcla de Lyc-O-Mato® y fitosterol que tiene proporciones de licopeno/fitosterol de 3,6 y 3,68;

La Figura 3 C es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de NO para una mezcla de Lyc-O-Mato® y fitosterol que tiene proporciones de licopeno/fitosterol de 1,17 y 1,58;

La Figura 4 A es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de TNF-a para un producto Lyc-O-Mato® que tiene una proporción de licopeno/fitosterol de más de 5,5;

La Figura 4B es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de TNF-a para una mezcla de Lyc-O-Mato® y fitosterol que tiene proporciones de licopeno/fitosterol de 3,6 y 3,68;

La Figura 4C es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de TNF-a para una mezcla de Lyc-O-Mato® y fitosterol que tiene proporciones de licopeno/fitosterol de 1,17 y 1,58;

La Figura 5 A es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de NO para fitosteroles solos;

La Figura 5B es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de NO para una mezcla de Lyc-O-Mato® y fitosteroles que tienen diversas proporciones de licopeno/fitosteroles;

La Figura 6A es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de TNF-a para fitosteroles solos; y

La Figura 6B es una representación gráfica del porcentaje de inhibición de la producción de TNF-a para mezclas de Lyc-O-Mato® y fitosteroles que tienen diversas proporciones de licopeno/fitosterol.

Descripción detallada

Aunque la memoria descriptiva concluye con las reivindicaciones que señalan particularmente y reivindican claramente la invención, se cree que la presente invención se entenderá mejor a partir de la siguiente descripción.

Los términos tales como "aproximadamente", "generalmente", "sustancialmente" y similares deben interpretarse como una modificación de un término o valor de modo que este no sea absoluto, pero no lee sobre el estado de la técnica. Dichos términos estarán definidos por las circunstancias y los términos que modifican tal como los entienden los expertos en la materia. Esto incluye, al menos, el grado de error experimental esperado, el error de la técnica y el error del instrumento en una técnica determinada usada para medir un valor.

Todos los porcentajes, las partes y las proporciones como se usan en el presente documento son en peso de la composición total, salvo que se indique lo contrario. La totalidad de tales pesos que se relacionan con los ingredientes enumerados se basan en el nivel activo y, de esta manera, no incluyen disolventes ni subproductos que puedan incluirse en materiales disponibles en el mercado, salvo que se indique lo contrario. Todas las mediciones realizadas son a 25 °C y presión normal salvo que se indique lo contrario. T odas las temperaturas están en grados Celsius salvo que se especifique lo contrario.

Los intervalos numéricos como se usan en el presente documento tienen por objeto incluir cada número y subconjunto de números contenidos dentro de ese intervalo, ya sea que se desvelen específicamente o no. Además, debe interpretarse que estos intervalos numéricos proporcionan un soporte para una reivindicación referida a cualquier número o subconjunto de números en ese intervalo. Por ejemplo, debe interpretarse que una divulgación de 1 a 10 soporta un intervalo de 2 a 8, de 3 a 7, 5, 6, de 1 a 9, de 3,6 a 4,6, de 3,5 a 9,9 y así sucesivamente. Todos los intervalos mencionados en el presente documento incluyen los puntos finales, incluyendo aquellos que mencionan un intervalo "entre" dos valores.

Todas las referencias a características o limitaciones singulares de la presente invención incluirán la característica o limitación plural correspondiente y viceversa, a menos que se especifique otra cosa o quede implicado claramente lo contrario por el contexto en el que se hace la referencia. Por lo tanto, salvo que se indique lo contrario, como se usa en el presente documento, "uno" y "una" incluyen el plural, de tal manera que, por ejemplo, "un fitosterol" puede significar más de un fitosterol.

Todas las combinaciones de etapas del método o del proceso como se usan en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden, a menos que se especifique otra cosa o quede implicado claramente lo contrario por el contexto en el que se realiza la combinación referenciada.

Las composiciones farmacéuticas y los métodos correspondientes de la presente invención pueden comprender, consistir en o consistir esencialmente en los elementos esenciales y las limitaciones de la invención que se describen en el presente documento, así como cualquier ingrediente, componente o limitación adicional u opcional descritos en el presente documento o útiles de otro modo en el mismo. Como se usa en el presente documento, "que comprende" significa los elementos enumerados, o su equivalente en estructura o función, más cualquier otro elemento o elementos que no se mencionen. Las expresiones "que tiene" y "que incluye" también deben interpretarse como abiertos a menos que el contexto sugiera lo contrario.

La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden carotenos, tales como licopeno, de una amplia diversidad de fuentes diferentes, incluyendo fuentes sintéticas u otras fuentes naturales, tales como de tomates, de fermentación o por algas u hongos y uno o más fitosteroles para uso terapéutico. Como se contempla en el presente documento, el licopeno y sus precursores fitoeno y fitoflueno pueden encontrarse dentro de una oleorresina producida a partir de frutos de tomate. Los frutos de tomate adecuados se producen por plantas no modificadas genéticamente o modificadas genéticamente y preferentemente contienen altas concentraciones de licopeno y, como se hizo referencia anteriormente, que también incluyen fitosteroles. Sin embargo, los niveles de fitosteroles en estas composiciones conocidas son bajos y dan como resultado proporciones de licopeno y fitosteroles de aproximadamente 5:1 y más altas. De esta manera, para preparar las composiciones de la presente invención a partir de estas oleorresinas de tomate, deben añadirse fitosterol o fitosteroles adicionales para reducir la proporción de licopeno a fitosterol. Cuando se preparan las composiciones de la presente invención, están preferentemente encerrados en una cápsula de gelatina blanda y pueden comprender adicionalmente un aceite comestible ejemplificado por aceite de soja, aceite de semilla de calabaza, aceite de semilla de uva y similares. También se contemplan en el presente documento métodos de administración adecuados adicionales y son familiares para un experto en la materia.

Se ha demostrado que las composiciones de la presente invención tienen considerables efectos terapéuticos beneficiosos. Los datos presentados en el presente documento inicialmente demuestran un impacto importante, inesperado y sinérgico con respecto a la inhibición del crecimiento de las células prostáticas. Por lo tanto, su uso en el tratamiento del cáncer es una aplicación bastante significativa. Además, también se ha demostrado que estas composiciones tienen un impacto inesperado y sinérgico en la reducción de afecciones inflamatorias. Esto, por supuesto, plantea todo un campo de usos potenciales para las composiciones. Finalmente, estas composiciones también tienen aplicación para el tratamiento de diversas afecciones cardiovasculares, tal como en la oxidación del colesterol LDL y similares.

Aunque la presente invención comprende licopeno como el caroteno junto con el fitosterol, los solicitantes han descubierto que también es posible usar otros carotenos, particularmente aquellos que tienen una estructura similar a la del licopeno. Estos incluyen, por lo tanto, además de licopeno, beta-caroteno, luteína y astaxantina. Los solicitantes han descubierto por lo tanto que estos carotenos adicionales poseen efectos sinérgicos similares tales como los efectos antiinflamatorios analizados anteriormente. Por lo tanto, en el ámbito de la presente divulgación, aunque se da énfasis en el licopeno, se entiende que estos carotenos adicionales, particularmente incluyendo beta-caroteno, luteína y astaxantina, pueden sustituirse por el licopeno enfatizado en el presente documento.

Los componentes de licopeno y fitosteroles se procesan preferentemente a partir de frutos de tomate en extractos. Los componentes pueden concentrarse retirando el agua de la pulpa de tomate, produciendo de esta manera pulpas espesas que contienen concentraciones más altas de los fitosteroles, tales como los componentes de licopeno, de fitoeno y de fitoflueno, así como beta-caroteno, gamma-caroteno, delta-caroteno, vitamina E y fosfolípidos. Las pulpas espesadas pueden procesarse adecuadamente además en una oleorresina que después puede procesarse para formar una emulsión basada en oleorresina. El extracto de oleorresina de tomate puede encapsularse en cápsulas de gelatina blanda que contienen aceite de soja o, alternativamente, aceite de semilla de calabaza. Los extractos de tomate pueden formularse opcionalmente en perlitas que pueden envasarse si se desea en sobres o, alternativamente, se dispersa en vehículos adecuados (la oleorresina es un líquido y no puede secarse) y se procesa en polvos que opcionalmente pueden encapsularse o, alternativamente, comprimirse.

Los ejemplos no limitantes de una fuente preferida de licopeno incluyen un producto de oleorresina de tomate conocido como Lyc-O-Mato® en forma líquida dispersable en aceite y proporcionada por LycoRed Ltd., Bear Sheba, Israel, de acuerdo con su proceso para recuperar una oleorresina rica en licopeno de la pulpa de tomate de acuerdo con la patente de EE.UU. N-° 5.837.311, a la que se puede hacer referencia para más detalles.

Por lo tanto, puede prepararse una oleorresina rica en licopeno a partir de pulpa de tomate pretratando los propios tomates de forma convencional, sometiéndolos a un tratamiento térmico, separando los tomates triturados en suero y pulpa conteniendo al menos 2000 ppm y, preferentemente, de 1600 a 4500 ppm, de licopeno y, preferentemente, con un contenido de humedad no superior al 85 %, sometiendo la pulpa a extracción con disolvente para extraer una oleorresina que contiene licopeno, separar la pulpa usada y separar el extracto de licopeno de los solventes para obtener una oleorresina que contiene licopeno y otros fitoquímicos solubles en aceite y recuperar los disolventes. De esta manera, la oleorresina contiene de aproximadamente el 6 % al 15 % en peso de licopeno, de aproximadamente el 1,0 al 5 % en peso de fitoeno y/o fitoflueno, de aproximadamente el 1,5 al 4 % en peso de tocoferoles, de aproximadamente el 0,2 al 1 % en peso de beta-caroteno, de aproximadamente el 50 al 70 % en peso de ácidos grasos totales, junto con al menos un fitosterol en una cantidad de aproximadamente el 1 al 1,5 % en peso, de tal manera que la relación de los licopenos al menos un fitosterol sea al menos aproximadamente 4: 1. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden producirse a partir de esta oleorresina añadiendo una cantidad adicional suficiente de al menos un fitosterol para reducir la proporción de licopeno a al menos un fitosterol a menos de 4:1, y lo más preferentemente a menos de 3: 1, de tal manera que se produzca una inhibición sinérgica del crecimiento de las células prostáticas. Estas composiciones también pueden incluir al menos aproximadamente el 0,01 % y preferentemente de aproximadamente el 9,0 al 4,5 % de fosfolípidos y al menos aproximadamente el 0,01 % y de forma preferente aproximadamente el 2 al 6 % de una mezcla de mono y diglicéridos.

De esta manera, de acuerdo con la composición conocida, tal como el producto Lyc-O-Mato®, que contiene del 6 al 15 % de licopeno y del 0,6 al 1,1 % de fitosteroles, para estas composiciones, la proporción de licopeno a fitosteroles varía de 5,5 a 25,0, como sigue:

Por otro lado, con fitosteroles añadidos de acuerdo con la presente invención a estas mismas composiciones, conteniendo así del 6 al 15 % de licopeno con del 1,6 al 6,5 % de fitosteroles, la proporción de licopeno a fitosteroles ahora variará de 0,9 a aproximadamente 4,7 o menos de aproximadamente 5,0, como sigue:

Otro método más para preparar las composiciones farmacéuticas de la presente invención emplea un aceite que contiene fitosteroles y añade una fuente de licopeno a esa composición de fitosteroles. Por lo tanto, los fitosteroles pueden estar en forma de composiciones oleaginosas que contienen aproximadamente el 95 % de fitosteroles. Entre los fitosteroles de un aceite de fitosteroles típico se incluye hasta aproximadamente el 10 % de brasicasterol, del 15 al 30 % de Campesterol, del 15 al 30 % de estigmasterol y al menos aproximadamente el 40 % de beta-sitosterol. A esta composición de aceite de fitosterol se le puede añadir licopeno o una fuente de licopeno. La fuente de licopeno puede proporcionarse por las oleorresinas de tomate analizadas anteriormente, o por licopeno puro obtenido de la fermentación, o licopeno de fuentes sintéticas. En cualquier caso, debe añadirse suficiente licopeno al aceite de fitosterol para que la composición general incluya preferentemente de aproximadamente 5 a 10 % de licopeno. Por lo tanto, del 90 al 95 % restante de la composición comprende el aceite de fitosteroles que incluye los fitosteroles específicos generalmente en las cantidades analizadas anteriormente. En la composición general a este respecto, la proporción de licopeno a fitosterol será generalmente mucho más baja que la discutida anteriormente, tal como de aproximadamente 0,05 : 1 a aproximadamente 0,1 : 1.

De forma similar, las composiciones farmacéuticas para administración oral que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación sinérgica de licopeno y al menos un fitosterol como se describe en el presente documento, así como composiciones farmacéuticas para administración oral que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un extracto de tomate que comprende una oleorresina que incluye licopeno en una cantidad de aproximadamente el 6 al 15 % en peso, fosfolípidos en una cantidad de al menos aproximadamente el 0,01 % en peso, una mezcla de monoglicéridos y diglicéridos en una cantidad de aproximadamente el 2 a 6 % en peso, y al menos un fitosterol en una cantidad tal que la proporción de licopeno a al menos un fitosterol es menos de aproximadamente 5:1, preferentemente menos de aproximadamente 4:1 y más preferentemente menos de aproximadamente 3,5:1, tal como menos de aproximadamente 3:1 y en donde la proporción de licopeno a al menos un fitosterol produce una inhibición sinérgica del crecimiento de células prostáticas como se contempla particularmente en el presente documento puede prepararse mediante métodos convencionales familiares para un experto en la materia.

Las composiciones farmacéuticas sinérgicas de la presente invención, incluyendo las fórmulas y proporciones ejemplificadas descritas en el presente documento, pueden prepararse, por lo tanto, mediante cualquiera de diversas formulaciones o métodos de fabricación conocidos o efectivos por parte de un experto en la materia.

Estos métodos generalmente implican la obtención inicial de un extracto de tomate u oleorresina del Lyc-O-Mato® anterior, adición posterior de una fuente de los fitosteroles añadidos requeridos, seguido de dilución por medio de aceites comestibles con la concentración deseada resultante de licopeno, fitoeno, fitoflueno, luteína y fitosteroles. Además, como se usa en el presente documento, "que consiste esencialmente en" significa que la composición de la presente invención contiene otros componentes además de los específicamente identificados pero que tienen un efecto insignificante o neutral con respecto a los objetivos de la invención. Por lo tanto, es bien conocido que el extracto de tomate de Lyc-O-Mato® puede contener muchos componentes distintos a los específicamente identificados en las composiciones de la presente invención, pero dicho extracto de tomate esencialmente no contiene otros componentes o una proporción particular de componentes, que afectan a los objetivos de esta invención. También se contempla en el presente documento que diversas otras soluciones, mezclas u otros materiales puedan añadirse al extracto de tomate diluido deseado resultante antes, durante o después del procesamiento posterior. Por ejemplo, el extracto de tomate diluido puede, además de convertirse en cápsulas de gelatina blanda, después diluirse adicionalmente, tratarse térmicamente y envasarse para formar un líquido concentrado o listo para el consumo, o puede tratarse térmicamente y posteriormente procesarse y envasarse como un polvo reconstituible, por ejemplo, secado por aspersión con un vehículo adecuado, mezclado en seco o aglomerado.

Como se contempla en el presente documento, los fitosteroles para su uso en la presente invención incluyen una mezcla de fitosteroles seleccionados del grupo que consiste en p-Sitosterol, Campesterol, p-Octasterol y Estigmasterol.

Fosfolípidos para su uso con las composiciones farmacéuticas desveladas en el presente documento, por ejemplo, en una cantidad de al menos aproximadamente el 0,01 % en peso incluyen, por ejemplo, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ceramida-fosforilcolina (esfingomielina), ceramida fosforiletanolamina y ceramida fosforilglicerol.

Como se usa en el presente documento, una "mezcla de monoglicéridos y diglicéridos" para su uso con las composiciones descritas en el presente documento, incluyen, por ejemplo, I-palmitoil-2-oleoil-glicerol, 1-esteril-I-oleoilglicerol y I-palmitoil-2-estearil-glicerol.

Ejemplos

Ejemplo 1: El efecto anticancerígeno combinado de fitosteroles y licopeno

La meta de este estudio fue determinar los efectos de varios fitosteroles solos y en combinación con bajas concentraciones de licopeno en la proliferación de células de cáncer de próstata humano.

Métodos:

Ensayo de cultivo celular y proliferación celular: LNCaP, células de cáncer de próstata dependientes de andrógenos humanos, se adquirieron de American Type Culture Collection (Rockwell, MD). Las células se cultivaron en RPMI1640 que contenía 0,6 |jg/ml de insulina. Todos los medios de cultivo se suplementaron con L-glutamina (2 mM), penicilina (100 U/ml), estreptomicina (0,1 mg/ml), nistatina (12,5 jg/m l) y FCS al 10 %. Las células se sembraron en un medio que contenía FCS al 3 % o DCC al 3 % sin rojo de fenol y HEPES 10 mM en placas de 96 y 6 pocillos múltiples (4-7 103 y 1,7 x 105 células/pocillo, respectivamente). Un día después, el medio se cambió a FCS al 0,5 % o medio al 0 % durante un día adicional de incubación. Después se cambió el medio a uno que contenía los micronutrientes (fitosteroles, carotenoides, fosfolípidos, etc.) a las concentraciones indicadas y se continuó la incubación durante 1 3 días. Para asegurar que el agente estuvo continuamente presente durante la incubación prolongada, el medio se reemplazó diariamente con uno que contenía carotenoides frescos. El licopeno se disolvió en tetrahidrofurano a una concentración de 2 mM y se almacenó a -20 °C. Inmediatamente antes del experimento, la solución madre se añadió al medio de cultivo celular. La concentración final de licopeno en el medio se midió mediante espectrofotometría después de la extracción en 2-propanol y se realizó un ensayo de incorporación de n-hexano:diclorometano [3H]timidina en placas de 96 pocillos múltiples. Las células se incubaron con 1,25-2,50 uCi/pocillo de [3H]timidina (radiactividad específica 5 mCi/mmol en jCi/pocillo) durante una a cuatro horas. La incorporación de nucleótidos se detuvo mediante la adición de timidina sin marcar (0,5 jmol). Las células después se tripsinizaron y se recogieron en un filtro de fibra de vidrio usando un recolector de células (Inotech). La radiactividad se determinó mediante un analizador de imágenes radiactivas (BAS 1000, Fuji).

Todos los procedimientos se realizaron bajo luz tenue para evitar la degradación de los carotenoides.

Resultados: Las células de cáncer de próstata LNCaP se incubaron en presencia de una concentración fisiológica (0 50 jM ) de fitosteroles como se muestra en la Figura 1. Cuando se prueba solo, p-sitosterol inhibió la proliferación de células de cáncer de próstata de una manera dependiente de la dosis (círculos abiertos, Fig. 1A), mientras que los otros fitosteroles probados, Campesterol, p-octasterol y Estigmasterol (círculos abiertos, Figs. IB-ID, respectivamente) no tuvieron ningún efecto sobre la inhibición del crecimiento celular a la concentración probada. Sin embargo, en combinación con una concentración de licopeno de 0,4 jM (que por sí solo no inhibe la proliferación in vitro a esta concentración (como se ve en la Fig. IE)), los cuatro fitosteroles probados exhibieron una inhibición sinérgica sustancial del crecimiento de las células prostáticas in vitro. Adicionalmente, con referencia a la Figura IE, cuando se ensayó el licopeno solo, se obtuvo el resultado que se muestra en la misma.

Figuras 1 A-1E. Las células LNCaP se preincubaron durante 24 horas en suero al 0,5 % y después se estimuló el crecimiento (incorporación de timidina) con DHT 1 nM. Las células estimuladas se trataron durante 3 días con las concentraciones indicadas de los fitosteroles solos o en combinación con licopeno 0,4 jM . Los datos presentados son la media ± SE de 2-3 experimentos independientes realizados por cuadruplicado.

Ejemplo 2: Se estudiaron los efectos antiinflamatorios de la combinación de fitosteroles y licopeno. La meta del estudio fue determinar los efectos de los fitosteroles y el licopeno en las afecciones inflamatorias.

Métodos:

Aislamiento de macrófagos y cultivo celular: se recolectaron macrófagos peritoneales de la cavidad peritoneal de ratones ICR (región de control de impresión) machos de 6 a 8 semanas de edad (Harlan, Israel) a los que se les administró una inyección intraperitoneal de 4 ml de caldo de tioglicolato (4 %) 4 días antes de recolectar. Los macrófagos peritoneales se lavaron tres veces con PBS (solución salina tamponada con fosfato) y, si era necesario, se realizó una lisis hipotónica de los eritrocitos, produciendo del 90 al 95 % de pureza. Los macrófagos se identificaron mediante análisis FACS (sector de células activadas por fluorescencia) usando FITC (isotiocianato de fluoresceína)-anti-ratón de rata conjugado F4/80 (MCA497F) (Serotec, Oxford, Inglaterra) por microfluorimetría de flujo en FACS (Becton Dickinson, Mountain View, CA). Para cada muestra, se analizaron 10.000 células viables controladas por dispersión de luz. Los macrófagos peritoneales se cultivaron en medio RPMI 1640 que contenía FCS al 10 %, L-glutamina 2 mM; penicilina 100 U/ml; estreptomicina 100 jg/m l (Beit-Haemek, Israel) en placas de 96 pocillos (2 x 105 células/pocillo). Mezclas Lyc-0-Mato®+fitosterol, licopeno, fitosteroles y combinaciones de licopeno y fitosteroles (disueltos en DMSO (dimetilsulfóxido) y sometidos a ultrasonidos) se añadieron a las células. Una hora más tarde se añadió LPS (lipopolisacárido) (1 jg/m l) y los macrófagos se cultivaron a 37 °C en una atmósfera de CO2 al 5 % durante 24 horas. A los controles se añadieron volúmenes apropiados de DMSO y/o etanol y se calculó el porcentaje de inhibición de cada tubo de ensayo en relación con su tubo de control.

Ensayo de producción de NO: los niveles de NO en sobrenadantes de cultivos celulares se determinaron analizando los niveles de nitrito usando el reactivo de Griess y el nitrito sódico como un patrón.

Producción de TNFa: las concentraciones de TNF-a en sobrenadantes de cultivos celulares se cuantificaron mediante kits ELISA (Biolegend Inc., San Diego, CA).

Análisis estadístico. Los datos se presentan como la media ± SEM. La significación estadística para las comparaciones entre grupos se determinó usando la prueba t de dos colas pareadas de Student.

Resultados:

Inhibición sinérgica de la producción de NO y la producción de TNF-a por licopeno+fitosteroles (Figuras 3 y 4).

Se probaron dos grupos de mezclas con diferentes relaciones Lyc-0-Mato®/fitosterol.

Un grupo incluía dos mezclas con proporciones de licopeno/fitosterol de 3,6 y 3,68 y el segundo grupo incluía mezclas con proporciones de licopeno/fitosterol de 1,17, 1,3 y 1,58.

Se combinaron los resultados para cada grupo de mezclas. Los resultados se expresan como % de inhibición de la producción de NO (Figura 3) y la producción de TNF-a (Figura 4) y son las medias+SEM de tres experimentos independientes.

El efecto de respuesta a dosis de licopeno, de fitosteroles y de las mezclas de ambos sobre la producción de NO y la producción de TNF-a se estudiaron y se presentaron en las Figuras 3 y 4, respectivamente.

Los fitosteroles no provocaron ninguna inhibición de la producción de NO ni de la producción de TNF-a en todas las concentraciones estudiadas (Figuras 5A y 6A), mientras que la concentración de Lyc-O-Mato® provocó una inhibición de la producción de NO dependiente de la dosis, como se muestra en la Figura 3 A y de la producción de TNF-a, como se muestra en la Figura 4A. Las concentraciones de licopeno en el eje X representan las concentraciones de licopeno derivadas del contenido de Lyc-O-Mato® en cada tubo.

El efecto dependiente de la dosis de ambos grupos de mezclas se presenta en las Figuras 3 y 4.

La concentración de licopeno y fitosteroles en cada grupo de prueba se calculó y se presentó a lo largo del eje X. Las concentraciones de fitosteroles presentadas son el promedio de las concentraciones de los fitosteroles en las diferentes mezclas de cada grupo.

Como se muestra en las Figuras 3 y 4, existe una inhibición significativa dependiente de la dosis de la producción de NO y la producción de TNF-a en ambos grupos de mezclas, con un efecto más alto en el segundo grupo, teniendo una relación licopeno/fitosterol de entre 1,17 y 1,58 (Figuras 3C y 4C).

Ambas mezclas provocaron un efecto inhibitorio sinérgico significativo (pO.001), que es más significativo en 2 |jM de licopeno.

A 2 ^jM, las mezclas con proporciones de licopeno/fitosterol de 3,6 y 3,68 provocaron una inhibición 3,25 veces mayor en comparación con el licopeno solo (19,5+3,7 y 6+2,1 % de inhibición de la producción de NO por la mezcla y el licopeno, respectivamente). Mientras que las mezclas con relaciones licopeno/fitosterol de (1,17-1,58) provocaron una inhibición 4 veces mayor (24,1+3 y 6+2,1 % de inhibición por la mezcla y licopeno, respectivamente). Se obtuvieron efectos similares para la inhibición de la producción de TNF-a, como se presenta en la Figura 6.

La inhibición y el efecto sinérgico de las mezclas que contenían las proporciones más altas de fitosteroles (1,17-1,58) tuvieron un mejor efecto inhibidor, sugiriendo que al aumentar el contenido de fitosteroles en las mezclas aumenta el efecto inhibidor de la producción de NO.

Para verificar esta suposición y fortalecer los resultados, se estudió el efecto de mezclas de licopeno fitosteroles en diferentes proporciones.

Inhibición sinérgica de la producción de NO por licopeno+fitosteroles (Figura 5):

Los macrófagos se incubaron con diferentes combinaciones de: licopeno 2 j M y diferente concentración de fitosteroles durante 1 hora antes de la adición de LPS durante 16 horas a 37 °C. Se midió la producción de NO y se calculó y presentó el % de inhibición. Los resultados son las medias SEM de tres experimentos independientes.

Como se muestra en la Figura 4B, las diferentes combinaciones se expresaron de dos formas: (I) la concentración de licopeno y de fitosteroles y (2) la relación licopeno/fitosteroles. La incubación de los macrófagos con combinaciones de licopeno/fitosteroles provocó una inhibición de la producción de NO (Figura 5B) y de la producción de TNF-a (Figura 6B) que aumentó gradualmente con la elevación de los niveles de fitosteroles.

Los fitosteroles en las concentraciones usadas en las diferentes mezclas no inhibieron la producción de NO (Figura 5A) ni la producción de TNF-a (Figura 6A), mientras que el licopeno a 2 j M provocó el 9,8++2,1 % de inhibición de NO (Figura 5B) y el 23,2++2,6 % de TNF inhibición -a (Figura 6B).

Las diferentes combinaciones de licopeno/fitosterol provocaron una inhibición sinérgica significativa (p<0,001) de la producción de NO y la producción de TNF-a que aumentó gradualmente con la elevación del contenido de fitosterol.

Conclusiones:

Aunque los fitosteroles por sí solos no inhibieron la producción de NO ni la producción de TNF-a, su adición al licopeno o al Lyc-O-Mato® provocó una inhibición sinérgica significativa (p<0,001) de la producción de NO, que se hizo más eficiente al aumentar el contenido de fitosteroles en las mezclas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para administración oral que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una oleorresina de tomate que incluye licopeno en una cantidad de aproximadamente el 6 al 15 % en peso, fitoeno y fitoflueno en una cantidad de aproximadamente el 1,0 al 5,0 % en peso, tocoferoles en una cantidad de aproximadamente el 1,5 al 4,0 % en peso, beta-caroteno en una cantidad de aproximadamente el 0,2 al 1,0 % en peso, ácidos grasos en una cantidad de aproximadamente el 50 al 90 % en peso y al menos un fitosterol en una cantidad tal que la proporción de dicho licopeno a dicho al menos un fitosterol está entre aproximadamente 0,9:1 y 4,7:1 en peso, en donde dicho al menos un fitosterol comprende una mezcla de fitosteroles seleccionados del grupo que consiste en beta-sitosterol, Campesterol, beta-octasterol, Estigmasterol.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 en donde la concentración de dicho al menos un fitosterol en dicha composición farmacéutica es de aproximadamente el 2,0 al 50,0 % en peso.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 que además incluye gamma-caroteno, delta-caroteno y Vitamina E.