ES2931448T3 - Derivados de purinona y su uso en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Derivados de purinona y su uso en el tratamiento del cáncer Download PDF

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Abstract

La memoria descriptiva generalmente se refiere a compuestos de Fórmula (I): (I) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde R1, A1, A2 y A3 tienen cualquiera de los significados definidos en este documento. La memoria descriptiva también se refiere al uso de tales compuestos y sales de los mismos para tratar o prevenir enfermedades mediadas por ADN-PK, incluido el cáncer. La memoria descriptiva se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos y sales; kits que comprenden tales compuestos y sales; métodos de fabricación de dichos compuestos y sales; intermedios útiles en la fabricación de dichos compuestos y sales; ya métodos de tratamiento de enfermedades mediadas por ADN-PK, incluido el cáncer, utilizando tales compuestos y sales. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de purinona y su uso en el tratamiento del cáncer
CAMPO
La memoria descriptiva generalmente se refiere a compuestos de purinona sustituidos y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Estos compuestos y sus sales farmacéuticamente aceptables modulan selectivamente la proteína cinasa dependiente de ADN ("ADN-PK") y, por lo tanto, la memoria descriptiva también se refiere al uso de tales compuestos y sales de los mismos para tratar o prevenir enfermedades mediadas por ADN-PK, incluyendo el cáncer. La memoria descriptiva se refiere además a formas cristalinas de compuestos de purinona y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos y sales; kits que comprenden tales compuestos y sales; métodos de fabricación de tales compuestos y sales; productos intermedios útiles en la fabricación de tales compuestos y sales; y a métodos de tratamiento de enfermedades mediadas por ADN-PK, incluyendo el cáncer, usando tales compuestos y sales.
ANTECEDENTES
ADN-PK es un complejo de proteína cinasa serina/treonina nuclear compuesto por la subunidad catalítica ADN-PKcs y un heterodímero de proteínas Ku (Ku70/Ku80). ADN-PK desempeña un papel crucial en la reparación de las roturas de doble cadena (DSB) del ADN, lo que sirve para mantener la integridad genómica y en el proceso de recombinación V(D)J, lo que da como resultado un repertorio sumamente diverso de anticuerpos/inmunoglobulinas y receptores de células T que se encuentran en las células B y T, respectivamente. ADN-PK también se ha implicado en una variedad de otros procesos biológicos, incluyendo la modulación de la estructura de la cromatina, el mantenimiento de los telómeros, la regulación transcripcional y la respuesta al estrés de replicación (Smith y Jackson, 1999; Goodwin y Knudsen, 2014).
Los DSB de ADN se consideran la lesión más letal que una célula puede encontrar. Para combatir las graves amenazas que plantean los DSB de ADN, las células eucariotas han desarrollado varios mecanismos para mediar en su reparación. En los eucariotas superiores, el mecanismo predominante es la unión final no homóloga del ADN (NHEJ). Esta es una ruta de reparación de DSB propensa a errores que implica la ligación directa de los extremos rotos de DSB que se produce durante todas las fases del ciclo celular, y se usa preferentemente durante las primeras fases G1/S, donde no hay cromátide hermana plantilla disponible (Hartlerode y Scully, 2009). Esto contrasta con la segunda ruta principal de reparación de DSB, la recombinación homóloga (HR), que se produce principalmente en las fases G2/M del ciclo celular cuando hay disponibles cromátides hermanas intactas (San Filippo et al., 2008). Otros mecanismos subyacentes a la selección de NHEJ o HR para la reparación de DSB no están completamente definidos, aunque NHEJ repara los extremos de ADN romos y mínimamente procesados, mientras que se requiere la resección del extremo 3' para que se produzca HR (Symington y Gautier, 2011). La resección final está controlada por una interacción de BRCA1 y 53BP1, con 53BP1 apoyando a NHEj al suprimir la resección final (Escribano-Diaz et al., 2013).
NHEJ se inicia a través del reconocimiento y la unión de extremos de ADN rotos por el heterodímero Ku70/Ku80 en forma de anillo, seguido del reclutamiento de ADN-PKcs a través de su interacción con Ku y ADN. El reclutamiento de ADN-PKcs facilita el movimiento del heterodímero Ku en el dúplex de DNA, lo que permite que ADN-PKcs sirva como atadura para los extremos de ADN rotos y evite la degradación por exonucleasas (Yoo y Dynan, 1999). La unión al ADN promueve la activación de la actividad catalítica de la ADN-PKcs. Quizás el sustrato más importante de la ADN-PK es la propia subunidad de la cinasa, ya que la autofosforilación es fundamental para la regulación del procesamiento final del DNA, la inactivación de enzimas y la disociación de complejos (Chan et al., 2002). Los sitios de autofosforilación mejor caracterizados son Ser2056 y Thr2609 (Douglas et al., 2002). ADN-PKcs fosforila y altera la actividad de una amplia gama de sustratos que median NHEJ, incluyendo Artemis, Ku70, Ku80 y ADN ligasa 4 (Neal y Meek, 2011); también fosforila Ser139 en la variante de histona H2AX (yH2AX); este es un marcador bien conocido de roturas de doble cadena de ADN (An et al., 2010).
Las roturas de doble cadena pueden generarse de forma endógena mediante la producción de especies reactivas de oxígeno durante el metabolismo o mediante la recombinación V(D)J del desarrollo en el sistema inmunitario, y de forma exógena mediante radiación ionizante, fármacos radiomiméticos como la bleomicina e inhibidores de la topoisomeriza II como el etopósido y la doxorrubicina. Por lo tanto, es probable que los inhibidores de ADN-PK aumenten la letalidad de estos agentes. Los inhibidores de ADN-PK también pueden ser eficaces como agentes únicos en tumores con altos niveles endógenos de daño en el ADN como resultado de defectos en otras vías de reparación del ADN como HR y reparación de desajustes. Por ejemplo, se ha mostrado que los inhibidores de ADN-PK son eficaces como agentes únicos contra los linfomas defectuosos de ATM (Riabinska et al., 2013). ATM es importante en la reparación de recursos humanos, y cuando las células cancerosas son deficientes en ATM, las células se vuelven «adictas» a NHEJ para permitir su supervivencia. También se ha demostrado una interacción letal sintética entre ADN-PK y MSH3 (Deitlein et al., 2014). ADN-PK es un miembro de la familia de proteínas cinasas fosfatidilinositol 3-cinasa relacionada con la cinasa (PIKK) y los inhibidores de ADN-PK de generación más antigua, tal como NU7026, NU7441, KU-0060648 y CC-115, han sufrido una escasa selectividad frente a otros miembros de la familia PIKK. Sin embargo, estos compuestos han demostrado el potencial terapéutico de dirigirse a ADN-PK consistente con los mecanismos de acción conocidos de la proteína ADN-PK. Por ejemplo, NU7026 y KU-0060648 pueden potenciar la citotoxicidad de los inhibidores de la topoisomerasa II (Willmore et al, 2004; Munck et al., 2012) y NU7441 potenció el efecto de la radiación ionizante en modelos de cáncer de mama (Ciszewski et al., 2014) .
Los documentos WO2018/114999 y WO2009/024824 dan a conocer derivados de purinona y uso de los mismos en el tratamiento del cáncer. Sin embargo, existe la necesidad de inhibidores de ADN-PK que sean selectivos, que demuestren una buena biodisponibilidad y que sean adecuados para la dosificación. Además, existe la necesidad de inhibidores de ADN-PK con una semivida más larga para proporcionar una mayor duración de la cobertura tras la dosificación crónica.
SUMARIO
Brevemente, esta memoria descriptiva describe, en parte, un compuesto de fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
A1 representa N o CR2A, A2 representa N o CR2B y A3 representa N o CR2C, donde no más de uno de A1, A2 y A3 representa N;
R1 representa cicloalquilo C4-6 o un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado de O, S y N, donde el cicloalquilo C4-6 o heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de flúor, alquilo C1-3 (opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de hidroxilo y alcoxilo C1-2), ciclopropilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)alquilo C1-2, azetidinilo y oxetanilo;
R2A, R2B y R2C cada uno independientemente representa hidrógeno, metilo o metoxilo.
Esta memoria descriptiva también describe, en parte, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Esta memoria descriptiva también describe, en parte, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la terapia.
Esta memoria descriptiva también describe, en parte, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.
Esta memoria descriptiva también describe, en parte, un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
Esta memoria descriptiva también describe, en parte, un método para tratar el cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 muestra la XRPD para la Forma A de 7-metil-9-(1-metilpiperidin-4-il)-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7.9- dihidro-8H-purin-8-ona (Compuesto A, Ejemplo 44).
La Figura 2 muestra la DSC para la Forma A de 7-metil-9-(1-metilpiperidin-4-il)-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7.9- dihidro-8H-purin-8-ona (Compuesto A, Ejemplo 44).
La Figura 3 muestra la XRPD para la Forma A de (S)-7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (Compuesto B, Ejemplo 21).
La Figura 4 muestra la DSC para la Forma A de (S)-7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (Compuesto B, Ejemplo 21).
La Figura 5 muestra la XRPD para la Forma A de 9-((3R,4R)-4-fluoropirrolidin-3-il)-7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (Compuesto C, Ejemplo 52).
DESCRIPCIÓN DE REALIZACIONES ILUSTRATIVAS
El contenido para el que se solicita la protección se define en las reivindicaciones. Cualquier referencia a una "divulgación" que no esté dentro del alcance de las reivindicaciones tiene fines explicativos y no forma parte de la invención. Cualquier referencia a un método de tratamiento debe interpretarse como una referencia a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).
Muchas realizaciones de la divulgación se detallan a lo largo de la memoria descriptiva y serán evidentes para un lector experto en la técnica. La divulgación no debe interpretarse como limitativa a ninguna realización particular de la misma. En la primera realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000004_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde:
A1 representa N o CR2A, A2 representa N o CR2B y A3 representa N o CR2C, donde no más de uno de A1, A2 y A3 representan N;
R1 representa cicloalquilo C4-6 o un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado de O, S y N, donde el cicloalquilo C4-6 o heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de flúor, alquilo C1-3 (opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de hidroxilo y alcoxilo C1-2), ciclopropilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)alquilo C1-2, azetidinilo y oxetanilo;
R2A, R2B y R2C cada uno independientemente representa hidrógeno, metilo o metoxilo.
Cicloalquilo C4-6 es un anillo carbocíclico no aromático saturado que no contiene heteroátomos. Cicloalquilo C4-6 es cualquier anillo carbocíclico que contiene de 4 a 6 átomos de carbono. Grupos cicloalquilo C4-6 incluyen ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexanilo, por ejemplo, ciclohexanilo.
El término "ciclohexanilo" se refiere a un anillo carbocíclico que contiene seis átomos de carbono. Los grupos 1-hidroxiciclohex-4-ilo y los grupos 4-hidroxiciclohex-1-ilo tienen la misma estructura, tal como se muestra a continuación.
Figure imgf000004_0002
Un grupo c/s-1-hidroxi-ciclohex-4-ilo es equivalente a un c/s-4-hidroxi-ciclohex-1-ilo y tiene la siguiente estructura:
Figure imgf000005_0001
En las estructuras anteriores, la línea discontinua indica la posición de unión del grupo relevante.
Un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros es un anillo no aromático saturado que comprende un heteroátomo seleccionado independientemente de nitrógeno, oxígeno o azufre con los miembros del anillo restantes siendo carbono. Los grupos heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros incluyen piperidinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, azetidinilo y oxetanilo, por ejemplo piperidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, oxetanilo y pirrolidinilo. Para evitar dudas, los sustituyentes en el anillo heterocicloalquilo pueden estar unidos a través de un átomo de carbono o un heteroátomo.
El término "dioxo" significa dos sustituyentes oxo que están unidos al mismo átomo. Los ejemplos de sustitución de dioxo incluyen casos en los que R1 representa tianilo, que también puede denominarse tetrahidrotiopiranilo, donde el átomo de azufre del anillo está sustituido con dos grupos oxo, es decir, 1, 1 -dióxido de tetrahidrotiopirano.
El prefijo Cp-q en alquilo Cp-q y otros términos (donde p y q son números enteros) indica el rango de átomos de carbono que están presentes en el grupo y, a menos que se indique lo contrario, los grupos alquilo y alcoxilo que contienen el número requerido de átomos de carbono pueden estar ramificados o no ramificados. Los grupos alquilo C1-3 incluyen metilo (Me), etilo (Et), n-propilo y i-propilo, por ejemplo metilo y etilo.
El término alcoxilo Cp-q comprende grupos -O-alquilo Cp-q. Los grupos alcoxilo C1-2 incluyen metoxilo y etoxilo, por ejemplo, metoxilo.
Cuando se utiliza el término "opcionalmente", se pretende que la característica posterior pueda producirse o no. Como tal, el uso del término "opcionalmente" incluye instancias en las que la característica está presente y también instancias en las que la característica no está presente. Por ejemplo, un grupo "opcionalmente sustituido con un grupo metoxilo" incluye grupos con y sin un sustituyente metoxilo.
El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos (por ejemplo, 1 o 2 hidrógenos, o alternativamente 1 hidrógeno) en el grupo designado se reemplazan por los sustituyentes indicados (por ejemplo, 1 o 2 sustituyentes, o alternativamente 1 sustituyente), siempre que cualquier átomo que lleve un sustituyente mantenga una valencia permitida. Las combinaciones de sustituyentes abarcan solo compuestos estables y productos intermedios sintéticos estables. "Estable" significa que el compuesto o producto intermedio relevante es lo suficientemente robusto para ser aislado y tener utilidad o bien como un producto intermedio sintético o bien como un agente que tiene una utilidad terapéutica potencial. Si un grupo no se describe como "sustituido" u "opcionalmente sustituido", debe considerarse como no sustituido (es decir, que ninguno de los hidrógenos del grupo designado ha sido reemplazado).
El término "farmacéuticamente aceptable" se usa para especificar que un objeto (por ejemplo, una sal, una forma de dosificación o un excipiente) es adecuado para su uso en pacientes. Una lista de ejemplo de sales farmacéuticamente aceptables puede encontrarse en the Handbook de Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl and C. G. Wermuth, editors, Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA, 2002.
Una realización adicional proporciona cualquiera de las realizaciones definidas en el presente documento (por ejemplo, la realización de la reivindicación 1) con la condición de que uno o más Ejemplos específicos (por ejemplo, uno, dos o tres Ejemplos específicos) seleccionados del grupo que consiste en los Ejemplos 1,2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8 , 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 y 52 no se reivindica individualmente.
En una realización, R1 representa ciclohexanilo o un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado de O, N o S.
En otra realización, R1 representa un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado de O o N.
En otra realización, R1 representa un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo N.
En otra realización, R1 se selecciona de ciclohexanilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, pirrolidinilo, piperidinilo y tetrahidrotiopiranilo.
En otra realización, R1 se selecciona de pirrolidinilo y piperidinilo.
En otra realización, R1 se selecciona de ciclohexanilo, oxetan-3-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidropiran-3-ilo, tetrahidropiran-4-ilo, pirrolidin-3-ilo, piperidi n-4-ilo y tetrahidrotiopiran-4-ilo.
En otra realización, R1 se selecciona de pirrolidin-3-ilo y piperidin-4-ilo.
En una realización, R1 está opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)Me y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo. En una realización, R1 está opcionalmente sustituido con flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2 y oxetanilo. En una realización, R1 está opcionalmente sustituido con flúor o metilo.
En una realización, R1 representa pirrolidinilo o piperidinilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2 y oxetanilo.
En una realización, R1 representa ciclohexanilo opcionalmente sustituido con hidroxilo, metilo o NH2.
En otra realización, R1 representa oxetan-3-ilo.
En otra realización, R1 representa tetrahidrofuran-3-ilo.
En otra realización, R1 representa tetrahidropiran-3-ilo o tetrahidropiran-4-ilo.
En otra realización, R1 representa pirrolidin-3-ilo opcionalmente sustituido con metilo.
En otra realización, R1 representa pirrolidin-3-ilo opcionalmente sustituido con flúor.
En otra realización, R1 representa 4-fluoropi rrolidin-3-ilo.
En otra realización, R1 representa piperidin-4-il opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de metilo, etilo (no sustituido o sustituido con metoxilo o hidroxilo), C(O)Me y oxetan-3-ilo. En otra realización, R1 representa piperidin-4-ilo opcionalmente sustituido con metilo.
En otra realización, R1 representa 1 -metilpiperidi n-4-ilo.
En otra realización, R1 representa dioxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-ilo.
En una realización, A1 representa CR2A, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C
En otra realización, A1 representa N, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C
En otra realización, A2 representa N, A1 representa CR2A y A3 representa CR2C.
En otra realización, A3 representa N, A1 representa CR2A y A2 representa CR2C.
En otra realización, A1 representa CR2A o N, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C
En una realización, R2A representa hidrógeno. En una realización, R2B representa hidrógeno. En una realización, R2C representa hidrógeno.
En otra realización, uno, dos o tres grupos seleccionados de R2A, R2B y R2C se selecciona(n) independientemente de metilo y metoxilo, y cualquier grupo R2A, R2B y/o R2C restante representa hidrógeno.
En otra realización, uno, dos o tres grupos seleccionados de R2A, R2B y R2C representan metilo.
En otra realización, uno, dos o tres grupos seleccionados de R2A, R2B y R2C representan metoxilo.
En otra realización, uno o dos grupos seleccionados de R2A, R2B y R2C se seleccionan independientemente de metilo y metoxilo.
En otra realización, uno o dos grupos seleccionados de R2A, R2B y R2C representan metilo.
En otra realización, uno o dos grupos seleccionados de R2A, R2B y R2C representan metoxilo.
En otra realización, un grupo seleccionado de R2A, R2B y R2C representa metilo.
En otra realización, un grupo seleccionado de R2A, R2B y R2C representa metoxilo.
La presente divulgación también proporciona compuestos de Fórmula (I), en la que:
A1 representa N o CR2A, A2 representa N o CR2B y A3 representa N o CR2C, donde no más de uno de A1, A2 y A3 representa N;
R1 representa ciclohexanilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, pirrolidinilo, piperidinilo o tetrahidrotiopiranilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)Me y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo; y
R2A, R2B y R2C cada uno independientemente representa hidrógeno, metilo o metoxilo.
La presente divulgación también proporciona compuestos de Fórmula (I), en la que:
A1 representa N o CR2A, A2 representa N o CR2B y A3 representa N o CR2C, donde no más de uno de A1, A2 y A3 representa N;
R1 representa pirrolidinilo o piperidinilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo; y
R2A, R2B y R2C cada uno independientemente representa hidrógeno, metilo o metoxilo.
En una realización, A1 representa N o CR2A, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C; R1 representa ciclohexanilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, pirrolidinilo, piperidinilo o tetrahidrotiopiranilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)Me y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo; y R2A, R2B y R2C cada uno representa independientemente hidrógeno, metilo o metoxilo.
En una realización, A1 representa CR2A o N, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C; R1 representa pirrolidinilo o piperidinilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo; y R2A, R2B y R2C cada uno representa independientemente hidrógeno, metilo o metoxilo.
En una realización, A1 representa CR2A, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C;R1 representa ciclohexanilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, pirrolidinilo, piperidinilo o tetrahidrotiopiranilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)Me y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo; y R2A, R2B y R2C cada uno representa independientemente hidrógeno, metilo o metoxilo.
En una realización, A1 representa CR2A, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C; R1 representa pirrolidinilo o piperidinilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo; y R2A, R2B y R2C cada uno representa independientemente hidrógeno, metilo o metoxilo.
En una realización, A1 y A2 ambos representan CH y A3 representa CR2C;R1 representa ciclohexanilo, oxetanilo, tetrahidropiranilo, pirrolidinilo, piperidinilo o tetrahidrotiopiranilo y está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados de flúor, metilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)Me y oxetanilo; y R2C representa hidrógeno, metilo o metoxilo. En otra realización, A1 representa N, y A2 y A3 ambos representan CH; R1 representa ciclohexanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo o piperidinilo y está opcionalmente sustituido con hidroxilo, metilo o C(O)Me.
En una realización, A1 representa CH o N, y A2 y A3 ambos representan CH; y R1 representa un heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado de N u O opcionalmente sustituido con flúor o metilo.
En otra realización, A1, A2 y A3 cada uno representa CH; y R1 representa piperidinilo sustituido con metilo.
En otra realización, A1, A2 y A3 cada uno representa CH; y R1 representa pirrolidinilo sustituido con flúor.
En otra realización, A1 representa N, y A2 y A3 representan CH; y R1 representa tetrahidrofuranilo.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
9-(1-acetilpiperidin-4-il)-7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-(1-acet¡lp¡peridm-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
9-(1-acet¡lp¡peridm-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumazolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
9-(1-acet¡lp¡peridm-4-¡l)-2-((2,7-d¡met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7-met¡l-7,9-d¡h¡dro-8H-purrn-8-ona;
9-(1-acet¡lp¡peridm-4-¡l)-2-((3,7-d¡met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7-met¡l-7,9-d¡h¡dro-8H-purrn-8-ona;
9-((1r,4r)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
9-((1r,4r)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
2-((4,7-d¡met¡lqumolm-6-¡l)ammo)-9-((1r,4r)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-7-met¡l-7,9-d¡h¡dro-8H-purrn-8-ona; 9-((1r,4r)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-2-((4-metox¡-7-met¡lqumolm-6-¡l)ammo)-7-met¡l-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-((1r,4r)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purrn-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purrn-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡ddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-4-met¡lddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-((1r,4r)-4-h¡drox¡-4-met¡lddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-4-met¡lddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-((1r,4r)-4-h¡drox¡-4-met¡lddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-((1r,4r)-4-h¡drox¡-4-met¡lddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-4-met¡lddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-1-met¡lddohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; (S)-7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
(S)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
(R)-7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
(R)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
(R)-7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
(R) -7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; (S) -7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; (S)-7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 7-met¡l-2-((7-met¡ldnnolm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqumolm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqumazolm-6-¡l)ammo)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona;
2-((2,7-d¡met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7-met¡l-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 2-((3,7-d¡met¡lqumoxalm-6-¡l)ammo)-7-met¡l-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-purin-8-ona; 9-(1,1-d¡ox¡dotetrah¡dro-2H-t¡op¡ran-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona; 7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(oxetan-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(p¡per¡d¡n-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((3S,4R)-3-fluorop¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-am¡no-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1r,4r)-4-am¡no-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(R) -7-met¡l-9-(1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(S) -7-met¡l-9-(1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((3S,4R)-3-fluoro-1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona; 7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(1-(oxetan-3-¡l)p¡per¡d¡n-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-(2-h¡drox¡et¡l)p¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-(2-metox¡et¡l)p¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-et¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-acet¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona; y
9-((3R,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-3-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona.
En una real¡zac¡ón se proporc¡ona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del mismo, donde el compuesto se selecc¡ona del grupo que cons¡ste en:
7-met¡l-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(S)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona; y
9-((3R,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-3-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona.
En una real¡zac¡ón se proporc¡ona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, en el que el compuesto es 7-met¡l-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona (tamb¡én denom¡nado como Compuesto A).
En una real¡zac¡ón se proporc¡ona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, en el que el compuesto es (S)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona (tamb¡én denom¡nado como Compuesto B).
En una real¡zac¡ón se proporc¡ona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, en el que el compuesto es 9-((3R,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-3-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona (tamb¡én denom¡nado como Compuesto C).
Los compuestos y sales descr¡tos en esta memor¡a descr¡pt¡va pueden ex¡st¡r en formas solvatadas y formas no solvatadas. Por ejemplo, una forma solvatada puede ser una forma h¡dratada, tal como un sem¡h¡drato, un monoh¡drato, un d¡h¡drato, un tr¡h¡drato o una cant¡dad alternat¡va de los m¡smos. La d¡vulgac¡ón abarca todas tales formas solvatadas y no solvatadas de los compuestos de Fórmula (I), part¡cularmente en la med¡da en que tales formas t¡enen act¡v¡dad ¡nh¡b¡dora de la ADN-PK, como por ejemplo med¡da usando las pruebas descr¡tas en el presente documento.
Los átomos de los compuestos y sales descr¡tos en esta memor¡a descr¡pt¡va pueden ex¡st¡r como sus ¡sótopos. La d¡vulgac¡ón abarca todos los compuestos de Fórmula (I) donde un átomo se reemplaza por uno o más de sus ¡sótopos (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I) donde uno o más átomos de carbono es un ¡sótopo de carbono 11C o 13C, o donde uno o más más átomos de hidrógeno es un isótopo 2H o 3H, o donde uno o más átomos de nitrógeno es un isótopo 15N o donde uno o más átomos de oxígeno es un isótopo 17O o 18O).
Ciertos compuestos y sales descritos en esta memoria descriptiva incluyen uno o más centros quirales (es decir, asimétricos). La divulgación incluye cualquier forma ópticamente activa o racémica de un compuesto de Fórmula (I) que tenga actividad inhibidora de la ADN-PK, medida por ejemplo usando las pruebas descritas en el presente documento. En la medida en que una estructura o nombre químico en esta memoria descriptiva no indique la quiralidad, la estructura o nombre pretende abarcar cualquier estereoisómero único (es decir, cualquier isómero quiral único) correspondiente a esa estructura o nombre, así como cualquier mezcla de estereoisómeros (por ejemplo, un racemato). En algunas realizaciones, se obtiene un estereoisómero único aislándolo de una mezcla de isómeros (por ejemplo, un racemato) usando, por ejemplo, separación cromatográfica quiral. En otras realizaciones, se obtiene un estereoisómero único mediante síntesis directa a partir de, por ejemplo, un material de partida quiral.
De acuerdo con una realización, se proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que es un solo enantiómero que tiene un exceso enantiomérico (%ee) de > 95%, > 98% o > 99%. Convenientemente, el enantiómero único está presente en un exceso enantiomérico (%ee) de > 99%.
De acuerdo con otra realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), que es un enantiómero único que se encuentra en un exceso enantiomérico (%ee) de > 95%, > 98% o >99 % o un compuesto farmacéuticamente sal aceptable del mismo, en asociación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Convenientemente, el enantiómero único está presente en un exceso enantiomérico (%ee) de > 99%. Ciertos compuestos de fórmula (I) y sales farmacéuticamente aceptables de cualquiera de estos compuestos existen como diastereoisómeros.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene un exceso diastereoisómero (%de) de > 95%, > 98% o > 99%. En una realización, el compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo está presente en exceso diastereomérico (%de) de > 99%.
Algunos de los compuestos de Fórmula (I) pueden ser cristalinos y pueden tener más de una forma cristalina. Debe entenderse que la divulgación abarca cualquier forma cristalina o amorfa, o mezclas de las mismas, que tienen propiedades útiles en la actividad inhibidora de la ADN-PK. Se sabe bien cómo determinar la eficacia de una forma cristalina o amorfa mediante las pruebas estándar que se describen a continuación en el presente documento.
Se sabe generalmente que los materiales cristalinos pueden analizarse usando técnicas convencionales tales como, por ejemplo, análisis de difracción de rayos X en polvo (a continuación en el presente documento, XRPD) y calorimetría diferencial de barrido (a continuación en el presente documento, DSC).
Como ejemplo, el compuesto del Ejemplo 44, 7-metil-9-(1-metilpiperidin-4-il)-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-uno exhibe cristalinidad y se ha identificado una forma cristalina, la Forma A.
Por consiguiente, en un aspecto adicional se proporciona la Forma A del Compuesto A (Ejemplo 44, 7-metil-9-(1-metilpiperidin-4-il)-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona).
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en aproximadamente 2-theta = 7,1°, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en aproximadamente 2-theta = 8,5°, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD con al menos dos picos específicos en aproximadamente 2-theta = 7,1° y 8,5°, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD con picos específicos en aproximadamente 2-theta = 7,1, 8,5, 12,7, 14,2, 15,4, 16,3, 18,8, 19,8, 21,5, 26,2°, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD sustancialmente igual al patrón de difracción de rayos X en polvo que se muestra en la Figura 1.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en 2-theta = 7,1° más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en 2-theta = 8,5° más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene una XRPD con al menos dos picos específicos en 2-theta = 7,1° y 8,5° donde dichos valores pueden ser más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto A, que tiene un patrón XRPD con picos específicos en 2-theta = 7,1, 8,5, 12,7, 14,2, 15,4, 16,3, 18,8, 19,8, 21,5, 26,2° donde dichos valores pueden ser más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
El análisis DSC del Compuesto A, Forma A muestra una endotermia de fusión con un inicio de aproximadamente 245°C y un pico a aproximadamente 246°C (Figura 2).
De acuerdo con un aspecto adicional se proporciona la Forma A del Compuesto B (Ejemplo 21, (S)-7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona).
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en aproximadamente 2-theta = 9,7°, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en aproximadamente 2-theta = 12,9°.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene una XRPD con al menos dos picos específicos en aproximadamente 2-theta = 9,7° y 12,9°, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene un patrón XRPD con picos específicos en aproximadamente 2-theta = 9,7, 12,5, 12,9, 15,8, 17,6, 17,9, 19,4, 21,0, 26,0, 26,4°, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona forma cristalina, Forma A del Compuesto B. que tiene un patrón XRPD sustancialmente igual al patrón XRPD mostrado en la Figura 3.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en 2-theta = 9,7° más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en 2-theta = 12,9° más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene un patrón XRPD con al menos dos picos específicos en 2-theta = 9,7° y 12,9° donde dichos valores pueden ser más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto B, que tiene un patrón XRPD con picos específicos en 2-theta = 9,7, 12,5, 12,9, 15,8, 17,6, 17,9, 19,4, 21,0, 26,0, 26,4° donde dichos valores pueden ser más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
El análisis DSC del Compuesto B, Forma A muestra una endotermia de fusión con un inicio de aproximadamente 227°C y un pico a aproximadamente 228(Figura 4).
De acuerdo con un aspecto adicional se proporciona la Forma A del Compuesto C (Ejemplo 52, 9-((3R,4R)-4-fluoropirrolidin-3-il)-7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona).
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en aproximadamente 2-theta = 7,3°, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en aproximadamente 2-theta = 15,0°.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene una XRPD con al menos dos picos específicos en aproximadamente 2-theta = 7,3° y 15,0°, medido usando radiación CuKa. De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD con picos específicos en aproximadamente 2-theta = 7,3, 15,0, 14,6, 26,5, 12,2, 26,0, 17,0, 15,9, 27,3, 10,8°, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD sustancialmente igual al patrón XRp D mostrado en la Figura 5.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en 2-theta = 7,3° más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD con al menos un pico específico en 2-theta = 15,0° más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD con al menos dos picos específicos en 2-theta = 7,3° y 15,0° donde dichos valores pueden ser más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
De acuerdo con la presente divulgación se proporciona una forma cristalina, Forma A del Compuesto C, que tiene un patrón XRPD con picos específicos en 2-theta = 7,3, 15,0, 14,6, 26,5, 12,2, 26,0, 17,0, 15,9, 27,3, 10,8° donde dichos valores pueden ser más o menos 0,2° 2-theta, medido usando radiación CuKa.
Cuando se afirma que la presente divulgación se relaciona con una forma cristalina de la Forma A del Compuesto A, la Forma A del Compuesto B y la Forma A del Compuesto C, el grado de cristalinidad es convenientemente superior al 60%, más convenientemente superior al 80%, preferentemente mayor que aproximadamente el 90% y más preferentemente mayor que aproximadamente el 95%. Lo más preferentemente, el grado de cristalinidad es superior a aproximadamente el 98%.
Se entenderá que los valores 2-theta del patrón XRPD pueden variar ligeramente de una máquina a otra o de una muestra a otra, y por tanto los valores citados no deben interpretarse como absolutos.
Se sabe que se puede obtener un patrón de XRPD que tiene uno o más errores de medición dependiendo de las condiciones de medición (tales como equipo o máquina usada). En particular, se sabe generalmente que las intensidades en un patrón de XRPD pueden fluctuar dependiendo de las condiciones de medición. Por lo tanto, debe entenderse que el Compuesto A, Forma A, Compuesto B, Forma A y Compuesto C, Forma A de la presente descripción no se limita a los cristales que proporcionan patrones de XRPD idénticos al patrón de XRPD que se muestra en las Figuras 1, 3 y 5 y cualquier cristal que proporcione patrones de XRPD sustancialmente iguales a los que se muestran en las Figuras 1, 3 y 5 se encuentran dentro del alcance de la presente divulgación. Un experto en la técnica de XRPD puede juzgar la identidad sustancial de los patrones de XRPD.
Los expertos en la técnica de XRPD comprenderán que la intensidad relativa de los picos puede verse afectada, por ejemplo, por granos de más de 30 micras de tamaño y relaciones de aspecto no unitarias, lo que puede afectar el análisis de las muestras. El experto también comprenderá que la posición de los reflejos puede verse afectada por la altura precisa a la que se asienta la muestra en el difractómetro y la calibración cero del difractómetro. La planitud de la superficie de la muestra también puede tener un pequeño efecto. Por lo tanto, los datos del patrón de difracción presentados no deben tomarse como valores absolutos. (Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures).
En general, un error de medición de un ángulo de difracción en un difractograma de rayos X en polvo es de aproximadamente más o menos 0 ,2 ° 2-theta, y tal grado de error de medición debe tenerse en cuenta al considerar los patrones de XRPD en las Figuras 1, 3 y 5 y al leer las tablas A, B y C. Además, debe entenderse que las intensidades pueden fluctuar según las condiciones experimentales y la preparación de la muestra (orientación preferida).
Los compuestos de Fórmula (I) pueden, por ejemplo, prepararse mediante la reacción de un compuesto de Fórmula (II):
Figure imgf000012_0001
o una sal del mismo, donde R1 es como se define en cualquiera de las realizaciones del presente documento, o una forma protegida del mismo, y X es un grupo saliente (por ejemplo, un átomo de halógeno, como un átomo de cloro) con un compuesto de Fórmula (III):
Figure imgf000013_0001
o una sal del mismo, donde A1, A2 y A3 son tal como se definen en cualquiera de las realizaciones en el presente documento. Se realiza la reacción convenientemente en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano) en presencia de una base (por ejemplo, carbonato de cesio) y, opcionalmente, en presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, Brettphos 3rd Gen) a una temperatura adecuada (por ejemplo, una temperatura en el intervalo de aproximadamente 80-100°C).
Los compuestos de Fórmula (II) o (III), y las sales de los mismos, son por tanto útiles como productos intermedios en la preparación de los compuestos de Fórmula (I) y proporcionan una realización adicional. En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (II), o una sal del mismo, donde:
R1 representa cicloalquilo C4-6 o un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado de O, S y N, donde el cicloalquilo C4-6 o heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de flúor, alquilo C1-3 (opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de hidroxilo y alcoxilo C1-2), ciclopropilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)alquilo C1-2, azetidinilo y oxetanilo; y
X es un grupo saliente.
En una realización X es un átomo de halógeno o un grupo de triflato. En una realización X es un átomo de cloro.
En cualquiera de las realizaciones en las que se menciona un compuesto de Fórmula (II) o (III) o una sal del mismo, debe entenderse que tales sales no necesitan ser sales farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de Fórmula (II) pueden, por ejemplo, prepararse por la reacción de un compuesto de Fórmula (IV):
Figure imgf000013_0002
donde R1 es tal como se define en cualquiera de las realizaciones en el presente documento, y X es un grupo saliente (por ejemplo un yodo, bromo, o átomo de cloro o un grupo triflato) con un agente metilante. Los agentes metilantes adecuados incluyen yoduro de metilo, DMF-DMA.
Los compuestos de Fórmula (IV) pueden, por ejemplo, prepararse por la reacción de un compuesto de Fórmula (V):
Figure imgf000013_0003
donde R1 es tal como se define en cualquiera de las realizaciones en el presente documento;
RA es hidrógeno; y
X es un grupo saliente (por ejemplo un yodo, bromo, átomo de cloro o un grupo triflato) con azida de difenilfosforilo (DPPA).
La reacción puede realizarse en condiciones estándar bien conocidas por los expertos en la técnica, por ejemplo, DPPA, trietilamina, THF, reflujo.
Los compuestos de Fórmula (IV) y (V) son por tanto útiles como productos intermedios en la preparación de los compuestos de Fórmula (I) y proporcionan una realización adicional.
Los compuestos de Fórmula (IV) y (V) pueden prepararse mediante métodos similares a los que se muestran en la sección de Ejemplos.
El compuesto de Fórmula (III) puede, por ejemplo, prepararse por la reacción de un compuesto de Fórmula (VI):
Figure imgf000014_0001
donde A1, A2 y A3 son tal como se definen en cualquiera de las realizaciones en el presente documento, con un agente reductor. Los agentes reductores adecuados incluyen Pd/C al 10% e hidrógeno, Pd/C al 10% y formiato de amonio, cloruro de hierro/amonio.
El compuesto de Fórmula (III) por ejemplo también puede prepararse por la reacción de un compuesto de Fórmula (VII):
Figure imgf000014_0002
donde A1, A2 y A3 son tal como se definen en cualquiera de las realizaciones en el presente documento, y X es un grupo saliente (por ejemplo, un átomo de bromo o cloro o un grupo triflato). Se realiza la reacción convenientemente en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano) en presencia de una base (por ejemplo, terc-butóxido de sodio) y un equivalente de amina (por ejemplo, benzofenona imina) y, opcionalmente, en presencia de un compuesto adecuado. catalizador (por ejemplo, Tris(dibencilidenacetona)dipaladio) y ligando (BINAP) a una temperatura adecuada (por ejemplo, una temperatura en el intervalo de aproximadamente 80-100°C).
El compuesto de Fórmula (III) por ejemplo también puede prepararse por la reacción de un compuesto de Fórmula (VIII):
Figure imgf000015_0001
Donde A1, A2 y A3 son tal como se definen en cualquiera de las realizaciones en el presente documento y PG representa un grupo protector adecuado, por ejemplo BOC o benzofenona imina. Se realiza la reacción convenientemente en un disolvente adecuado (por ejemplo, metanol) en presencia de un ácido (ácido clorhídrico) a una temperatura adecuada (por ejemplo, una temperatura en el intervalo de aproximadamente 20°c ).
Los compuestos de Fórmula (III), (VI), (VII) y (VIII) se pueden preparar mediante métodos similares a los que se muestran en la sección de Ejemplos.
Se apreciará que algunos de los diversos sustituyentes de anillo en los compuestos de la presente divulgación pueden introducirse mediante reacciones de sustitución aromática estándar o generarse mediante modificaciones convencionales de grupos funcionales, ya sea antes o inmediatamente después de los procesos mencionados anteriormente, y como tales se incluyen en el aspecto del proceso de la divulgación. Por ejemplo, los compuestos de Fórmula (I) pueden convertirse en otros compuestos de Fórmula (I) mediante reacciones de sustitución aromática estándar o mediante modificaciones de grupos funcionales convencionales. Dichas reacciones y modificaciones incluyen, por ejemplo, la introducción de un sustituyente mediante una reacción de sustitución aromática, reducción de sustituyentes, alquilación de sustituyentes y oxidación de sustituyentes. Los reactivos y las condiciones de reacción para tales procedimientos son bien conocidos en la técnica química. Algunos ejemplos particulares de reacciones de sustitución aromática incluyen la introducción de un grupo nitro utilizando ácido nítrico concentrado, la introducción de un grupo acilo utilizando, por ejemplo, un haluro de acilo y un ácido de Lewis (como el tricloruro de aluminio) en condiciones de Friedel Crafts; la introducción de un grupo alquilo utilizando un haluro de alquilo y un ácido de Lewis (como el tricloruro de aluminio) en condiciones Friedel Crafts; y la introducción de un grupo halógeno. Algunos ejemplos particulares de modificaciones incluyen la reducción de un grupo nitro a un grupo amino mediante, por ejemplo, la hidrogenación catalítica con un catalizador de níquel o el tratamiento con hierro en presencia de ácido clorhídrico con calentamiento; la oxidación de alquiltio a alquilsulfinilo o alquilsulfonilo.
También se apreciará que en algunas de las reacciones mencionadas en el presente documento puede ser necesario/deseable proteger cualquier grupo sensible en los compuestos. Los casos en los que la protección es necesaria o deseable y los métodos adecuados para la protección son conocidos por los expertos en la materia. Los grupos protectores convencionales pueden utilizarse de acuerdo con la práctica habitual (para una ilustración, véase T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Por tanto, si los reactivos incluyen grupos como amino, carboxi o hidroxi, puede ser deseable proteger el grupo en algunas de las reacciones mencionadas en el presente documento.
Los compuestos de Fórmula (I), (II) y (III), y cualquier producto intermedio usado para prepararlos, pueden prepararse mediante métodos similares a los que se muestran en la sección de Ejemplos.
Ensayos Biológicos
Se usaron los siguientes ensayos para medir los efectos de los compuestos descritos en el presente documento:
a) ensayo de potencia de la enzima DNAPK; b) Ensayo de potencia celular DNAPK. Durante la descripción de los ensayos, generalmente:
i. Se han usado las siguientes abreviaturas; DMSO = dimetilsulfóxido; DTT= ditiotreitol; EDTA = ácido etilendiaminotetraacético, TR-FRET = transferencia de energía por resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo, ATP = trifosfato de adenosina, DTT = ditiotreitol, ADN = ácido desoxirribonucleico, HEPES = ácido (2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico
ii. El valor CI50 fue la concentración del compuesto de prueba que inhibió el 50% de la actividad biológica.
Ensayo a): Ensayo de potencia de la enzima ADNPK (ADNA-PK enz)
Se determinó la actividad inhibitoria de los compuestos contra ADNPK mediante TR-FRET midiendo un sustrato peptídico marcado con fluorescencia que se convierte en un producto fosforilado. Se adquirió el sustrato peptídico marcado con fluorescencia de Thermo Fisher Scientific. Se generaron curvas de concentración-respuesta de compuesto de medio logaritmo de 12 puntos, con una concentración máxima de 100 |jM, a partir de disoluciones madre 10 mM de compuesto solubilizado en DMSO usando un Echo 555 (Labcyte Inc., Sunnyvale, CA). Se realizaron todos los ensayos en placas Greiner blancas de 1536 pocillos de bajo volumen (Greiner Bio-One, Reino Unido), en un volumen de reacción total de 3 j l y una concentración final de DMSO del 1% (v/v). Se añadieron las enzimas y los sustratos por separado a las placas compuestas y se incubaron a temperatura ambiente. A continuación, se extinguió la reacción de la cinasa mediante la adición de 3 j l de tampón de detención. Se leyeron las placas de ensayo detenidas usando un BMG Pherastar. Se calcularon los valores de CI50 usando un software Genedata Screener® (Genedata, Inc., Basilea, Suiza).
Se purificó la proteína ADNPK humana de longitud completa a partir de extracto de células HeLa mediante intercambio iónico. Inicialmente, se incubó la proteína ADNPK con el compuesto durante 30 minutos a temperatura ambiente en tampón de reacción (Hepes 50 mM, pH 7,5, Brij-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM, DTT 1 mM, ADN de timo de ternero 2 jg/mL). A continuación, se inició la reacción mediante la adición de ATP y un sustrato peptídico marcado con fluorescencia (Fluoresceína-EPPLSQEAFADLWKK, Thermo Fisher Scientific). Se extinguió la reacción de la cinasa (ATP 18 j M, DNAPK 35 pM, sustrato peptídico 1,6 j M) después de 40 minutos mediante la adición de 3 jL de tampón de detención (Tris 20 mM pH 7,5, azida sódica al 0,02%, Nonidet-P40 al 0,01%, EDTA 20 jm , Anticuerpo anti-fosfo-p53 [Ser15] Tb 4 nM. Se incubó la reacción durante una hora más y se leyeron las placas en un BMG Pherastar.
Se analizaron los datos y los valores de CI50 se calcularon usando el software Genedata Screener® (Genedata, Inc., Basilea, Suiza). Se calcularon los valores de pCI50 como el logaritmo negativo de la concentración molar del compuesto requerida para una reducción del 50% en la respuesta medida.
b) Ensayo de potencia celular ADNPK (célula ADN-PK)
Se dispensaron los compuestos o DMSO (dimetilsulfóxido) desde placas fuente que contenían compuestos a 10 mM en DMSO al 100% (v/v) o Dm SO al 100%, directamente en placas de ensayo de células usando un dispensador acústico Echo 555 (Labcyte Inc™). Se diluyeron las disoluciones madre de compuestos 10 mM 1:100 utilizando un manipulador de líquidos Agilent VPrep de 96 cabezales y punta fija (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) para obtener cuatro diluciones intermedias (10 mM, 100 j M, 1 j M, 10 nM). Luego se usó esta placa de dilución intermedia 1:100 por Echo para dispensar compuestos y DMSO directamente en las placas de célula con un intervalo de dosis de 12 puntos (30, 10, 3,125, 1,25, 0,3, 0,1, 0,03125, 0,0125, 0,003, 0,001, 0,0003125, 0,00003 j M) para calcular los valores de CI50 del compuesto, con una concentración total de DMSO en el ensayo del 0,3% (v/v).
Se realizó el ensayo ELISA de células DNAPK en la línea celular A549. Se cultivaron las células A549 en medios celulares compuestos por MEM-F12 (Minimum Essential Medium F12 Sigma n.° D6421), el 10% (v/v) suero de ternero fetal y el 1% (v/v) de L-glutamina 200 mM. Después de la recolección, se distribuyeron las células en placas Costar negras de 384 pocillos (#3712, Corning) proporcionando 15.000 células por pocillo en un volumen total de 40 jL de medio celular, y se incubaron durante la noche a 37°C, el 90% de humedad relativa y el 5% de CO2 en una incubadora rotatoria. Se recubrieron las placas ELISA de 384 pocillos de unión alta totalmente negras Greiner 781077 con 0,5 jg/m l de anticuerpo DNAPK (Abcam #ab1832) en PBS/A durante la noche a 4°C. Al día siguiente, se lavaron las placas de ELISA de Greiner 3 veces con PBS-T y se bloquearon con BSA al 3%/PBS durante ~2 h, antes de un lavado adicional de 3 veces con PBS-T.
Se dosificaron directamente los compuestos de prueba y los controles de referencia en las placas de células usando un dispensador acústico Labcyte Echo 555. A continuación, las placas de células se incubaron durante 1 hora a 37°C antes de recibir una dosis de radiación de 8 Gy (XRAD 320, altura de la mesa 65). Se incubaron las células durante 1 h más antes de retirar el medio celular. Se dispensó tampón de lisis (preparación interna con adición de comprimidos de cóctel de inhibidor de proteasa, Roche n.° 04693 116001 y comprimidos de inhibidor de fosfatasa, Roche n.° 04906837001) a 25 jl/pocillo y las placas se incubaron a 4°C durante 30 min. Se transfirieron los lisados celulares (20 jl/pocillo) a placas ELISA recubiertas con anticuerpos DNPK usando una plataforma de manipulación de líquidos CyBio Felix, y se incubaron las placas ELISA a 4°C durante la noche.
Al día siguiente, se lavaron las placas de ELISA 3 veces con PBS-T y se dispensaron con anticuerpo pS2056-DNAPK interno (0,5 jg/m l en BSA al 3%/PBS) a 20 ul/pocillo. Se incubaron las placas con anticuerpo durante 2 horas a temperatura ambiente (ta) antes de lavarlas 3x con PBS-T. Se dispensó el anticuerpo secundario HRP anti-conejo de cabra (dilución 1:2000 en BSA al 3%/PBS; Cell Signaling n.° 7074) a 20 jl/pocillo y se incubaron las placas a ta durante 1 h antes de lavar 3x con PBS-T.
Se dispensó la disolución de sustrato de trabajo QuantaBlu (Thermo Scientific n.° 15169, preparada de acuerdo con las instrucciones del fabricante) a 20 jl/pocillo y se incubaron las placas a temperatura ambiente durante 1 h antes de dispensar 20 ul/pocillo adicionales con la disolución de interrupción QuantaBlu provista en el kit (Thermo Scientific n.° 15169). Se determinó la intensidad de fluorescencia de los pocillos individuales usando un lector de placas PerkinElmer EnVision.
Se analizaron los datos y los valores de CI50 se calcularon usando el software Genedata Screener® (Genedata, Inc., Basilea, Suiza). Se calcularon los valores de pCI50 como el logaritmo negativo de la concentración molar del compuesto requerida para una reducción del 50% en la respuesta medida.
c) Ensayo de enzima TTK
Se determinó la actividad inhibidora de los compuestos frente a TTK en un ensayo de unión de cinasa Eu LanthaScreen® realizado por ThermoFisher Scientific como parte de su servicio de perfilado bioquímico de cinasa SelectScreen®. El formato de ensayo LanthaScreen® Eu Kinase Binding usa la unión de un conjugado o "trazador" de Alexa Fluor® a una cinasa, que se detecta mediante la adición de un anticuerpo antietiqueta marcado con Eu. La unión del trazador y el anticuerpo a una cinasa da como resultado un alto grado de FRET, mientras que el desplazamiento del trazador con un inhibidor de la cinasa da como resultado una pérdida de FRET. Se usa el grado de FRET medido en el ensayo para determinar la unión de un compuesto.
Se generaron curvas de concentración-respuesta del compuesto de dilución triple de 10 puntos, con una concentración máxima de 10 |jM a partir de soluciones madre 10 mM de compuesto solubilizado en DMSO. Se realizaron todos los ensayos en placas blancas Greiner de 384 pocillos de bajo volumen (n° de cat. 784207, Greiner), en un volumen de reacción total de 16 j L y el 1% (v/v) de concentración de d Ms O final. Se añadieron 3,84 j l de tampón de cinasa (HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM), 8 j l de mezcla de cinasa/anticuerpo 2x (concentraciones finales 5 nM TTK, 2 nM Eu-anti-GST, preparado en Tampón de Cinasa) y 4 j L de disolución trazadora etiquetada con Alexa Fluor® (concentraciones finales de 30 nM Trazador 236, preparado en Tampón de Cinasa) por separado a las placas compuestas, se colocaron en un agitador de placas durante 30 segundos y luego se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente. Luego se leyeron las placas usando un lector de placas de fluorescencia. Se calcularon los valores de CI50 usando el software XLfit (iDBS Ltd, Surrey, Reino Unido), con la curva ajustada al modelo número 205 (modelo de dosis-respuesta sigmoidal).
d) Ensayos enzimáticos Aurora-A, Aurora-B, JAK1, JAK2, JAK3
Se determinó la actividad inhibitoria de los compuestos contra AURKA, AURKB, JAK1, JAK2 y JAK3 en ensayos Z'-LYTE® realizados por ThermoFisher Scientific como parte de su servicio de perfilado bioquímico de cinasas SelectScreen®. El formato de ensayo bioquímico Z'-LYTE® emplea un formato de enzima acoplada basado en fluorescencia y se basa en la sensibilidad diferencial de los péptidos fosforilados y no fosforilados a la escisión proteolítica. El sustrato peptídico está marcado con dos fluoróforos, uno en cada extremo, que forman un par FRET. En la reacción primaria, la cinasa transfiere el gamma-fosfato de ATP a un solo residuo de tirosina, serina o treonina en un péptido FRET sintético. En la reacción secundaria, una proteasa específica del sitio reconoce y escinde los péptidos f ReT no fosforilados. La fosforilación de péptidos FRET suprime la escisión por el reactivo de desarrollo. La escisión interrumpe FRET entre los fluoróforos donante (es decir, cumarina) y aceptor (es decir, fluoresceína) en el péptido FRET, mientras que los péptidos FRET fosforilados no escindidos mantienen FRET. Para cuantificar el progreso de la reacción se usa un método radiométrico, que calcula la relación (la relación de emisión) entre la emisión del donante y la emisión del aceptor después de la excitación del fluoróforo donante a 400 nm. Los péptidos FRET, tanto escindidos como no escindidos, contribuyen a las señales de fluorescencia y, por lo tanto, a la relación de emisión. El grado de fosforilación del péptido FRET puede calcularse a partir de la razón de emisión. La relación de emisión permanecerá baja si el péptido FRET está fosforilado (es decir, sin inhibición de cinasa) y será alta si el péptido FRET no está fosforilado (es decir, inhibición de cinasa).
Se generaron curvas de concentración-respuesta del compuesto de dilución triple de 10 puntos, con una concentración máxima de 10 j M a partir de soluciones madre 10 mM de compuesto solubilizado en DMSO. Todos los ensayos se realizaron en placas Corning de 384 pocillos de bajo volumen, negras, no vinculantes (n° de cat. 4514, Corning), en un volumen de reacción total de 10 j L y el 1% (v/v) de concentración de DMSO final. Se añadieron 2,4 j L de tampón de cinasa (HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0,01 %, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM), 5 j L de mezcla de péptido/cinasa 2x (detallada a continuación para cada cinasa) y 2,5 j L de disolución de ATP 4x (preparada en tampón de cinasa) por separado a las placas compuestas, se colocaron en un agitador de placas durante 30 segundos y luego se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente. A continuación, se extinguió la reacción de la cinasa mediante la adición de 5 j l de reactivo de desarrollo (propiedad de ThermoFisher Scientific). Se colocaron las placas de ensayo en un agitador de placas durante 30 segundos, se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente y luego se leyeron con un lector de placas de fluorescencia. Se calcularon los valores de CI50 usando el software XLfit (iDBS Ltd, Surrey, Reino Unido), con la curva ajustada al modelo número 205 (modelo de dosis-respuesta sigmoidal).
Aurora A (AurA): Se preparó la mezcla 2X AURKA (Aurora A)/Ser/Thr 01 (propiedad de ThermoFisher Scientific) en HEPES 50 mM pH 7,5, b R|J-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM. La reacción de cinasa de 10 j L final consistió en AURKA 15 nM (Aurora A), Ser/Thr 01 2 j M y ATP 10 j M (Km app) en HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM. Después de 1 hora de incubación de la reacción de cinasa, se añadieron 5 j l de una dilución 1:4096 de reactivo de desarrollo.
Aurora B (AurB): Se preparó la mezcla 2X AURKB (Aurora B)/Ser/Thr 01 (propiedad de ThermoFisher Scientific) en HEPES 50 mM pH 7,5, b R|J-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM. La reacción de cinasa de 10 j L final consistió en AURKB 23 nM (Aurora B), Ser/Thr 01 2 j M y ATP 75 j M (Km app medido como ATP 81 j M) en HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0.01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM. Después de 1 hora de incubación de la reacción de cinasa, se añadieron 5 |jl de una dilución 1:4096 de reactivo de desarrollo.
JAK1: Se preparó la mezcla 2X JAK1/Tyr 06 (propiedad de ThermoFisher Scientific) en HEPES 50 mM pH 6,5, BRIJ-35 al 0,01%, MgCl210 mM, EGTA 1 mM, NaN3 al 0,02%. Los 10 jL de reacción de cinasa finales consistieron en JAK1 74 nM, Tyr 062 jM y ATP 75 jM (Km app medido como ATP 87 jM ) en HEPES 50 mM pH 7,0, BRIJ-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM, NaN3 al 0,01%. Después de 1 hora de incubación de la reacción de cinasa, se añadieron 5 j l de una dilución 1:128 de reactivo de desarrollo.
JAK2: Se preparó la mezcla 2X JAK2/Tyr 06 (propiedad de ThermoFisher Scientific) en HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0,01%, MgCl210 mM, EGTA 1 mM. Los 10 jL de reacción de cinasa finales consistieron en JAK2 0,27 nM, Tyr 062 jM y ATP 25 jM (Km app medido como ATP 31 jM ) en HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM. Después de 1 hora de incubación de la reacción de cinasa, se añadieron 5 j l de una dilución 1:128 de reactivo de desarrollo.
JAK3: Se preparó la mezcla 2X JAK3/Tyr 06 (propiedad de ThermoFisher Scientific) en HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0,01%, MgCl210 mM, EGTA 1 mM. Los 10 jL de reacción de cinasa finales consistieron en JAK32,4 nM, Tyr 062 jM y ATP 10 jM (Km app medido como ATP 14 jM ) en HEPES 50 mM pH 7,5, BRIJ-35 al 0,01%, MgCh 10 mM, EGTA 1 mM. Después de 1 hora de incubación de la reacción de cinasa, se añadieron 5 j l de una dilución 1:128 de reactivo de desarrollo.
Se sometieron a prueba los ejemplos en los ensayos anteriores y se observaron los siguientes datos (los datos que se muestran son la media aritmética de los valores de pCI50 observados en dos o más experimentos).
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A partir de los datos medidos, puede observarse que los Ejemplos son inhibidores de ADN-PK que son selectivos frente a estos objetivos particulares: TTK, JAK1, JAK2, JAK3, Aurora A, Aurora B. La comparación de los valores de la enzima pCI50 indica que los Ejemplos tienen >2,5 log unidades de selectividad de DNA-PK a los otros objetivos mostrados. Esto equivale a >300 veces la selectividad entre los valores CI50.
Además, ciertos inhibidores de ADN-PK de Fórmula (I) muestran un buen volumen de distribución y, en consecuencia, pueden tener una semivida in vivo más prolongada, en particular, cuando R1 es un grupo básico, por ejemplo, cuando R1 es pirrolidinilo o piperidinilo. La semivida más larga significa que estos compuestos pueden ser útiles para ciertos escenarios de terapia combinada.
Los datos farmacocinéticos para los Ejemplos 44 y 52 se muestran en la Tabla D. Se obtuvieron los datos de la recolección de plasma hasta 24 h después de una dosis aguda de un compuesto de Fórmula (I) a ratas han wistar o perros beagle. A las ratas han wistar se les administró: i) Ejemplo 44 como una dosis intravenosa de 1 mg/kg (100% de agua desionizada con pH ajustado a 3,96 usando HCl 1 M) o una dosis oral de 5 mg/kg (5% de DMSO/95% de SBE-B-CD (30% p/v) en agua pH ajustado a 3,87 usando HCl 1 M), o ii) Ejemplo 52 como una dosis intravenosa de 0,5 mg/kg (5% de DMSO/95% de SBE-B-CD (30% p/v) en agua) o una dosis oral de 1 mg/kg (100% (0,5% de HPMC/0,1% de TWe En en agua)). A los perros beagle se les administró: i) Ejemplo 44 (DMSO/95% SBE-B-CD (30% p/v) en agua para ambas vías de administración) como una dosis intravenosa de 0,5 mg/kg o una dosis oral de 1 mg/kg, o ii) el Ejemplo 52 como una dosis intravenosa de 0,5 mg/kg (DMSO al 5%/CD-B-SBE al 95 % (30% p/v) en agua) o una dosis oral de 1 mg/kg (100% (HPMC al 0,5%/ TWEEN 0,1% en agua)).
Tabla D
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Los compuestos pueden seleccionarse adicionalmente basándose en las propiedades biológicas o físicas adicionales que pueden medirse mediante técnicas conocidas en la técnica y que pueden usarse en la evaluación o selección de compuestos para aplicación terapéutica o profiláctica.
Como resultado de su actividad inhibidora de ADN-PK, se espera que los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos sean útiles en terapia.
En consecuencia, los compuestos de la presente divulgación son valiosos como agentes antitumorales. Particularmente, los compuestos de la presente divulgación son valiosos como agentes antiproliferativos, apoptóticos y/o antiinvasivos en la contención y/o tratamiento de enfermedades tumorales sólidas y/o líquidas. Particularmente, se espera que los compuestos de la presente divulgación sean útiles en la prevención o el tratamiento de aquellos tumores que son sensibles a la inhibición de ADN-PK. Además, se espera que los compuestos de la presente descripción sean útiles en la prevención o el tratamiento de aquellos tumores que están mediados solos o en parte por ADN-Pk . Por lo tanto, los compuestos pueden usarse para producir un efecto inhibidor de la enzima ADN-PK en un animal de sangre caliente que necesite tal tratamiento.
Tal como se establece en el presente documento, los inhibidores de ADN-PK deberían tener valor terapéutico para el tratamiento de enfermedades proliferativas tales como cáncer y, en particular, tumores sólidos y sus metástasis, y tumores hematológicos.
Los efectos anticancerosos que, por consiguiente, son útiles en el tratamiento del cáncer en un paciente incluyen, pero no se limitan a, efectos antitumorales, la tasa de respuesta, el tiempo hasta la progresión de la enfermedad y la tasa de supervivencia. Los efectos antitumorales de un método de tratamiento de la presente divulgación incluyen, pero no se limitan a, inhibición del crecimiento tumoral, retraso del crecimiento tumoral, regresión del tumor, reducción del tumor, aumento del tiempo para que el tumor vuelva a crecer al cesar el tratamiento, ralentización del enfermedad progresiva. Los efectos contra el cáncer incluyen el tratamiento profiláctico así como el tratamiento de la enfermedad existente.
Cuando se menciona "cáncer", esto incluye tanto el cáncer no metastásico como el cáncer metastásico, de modo que el tratamiento del cáncer implica el tratamiento tanto de los tumores primarios como de las metástasis tumorales.
"Actividad inhibidora de ADN-PK" se refiere a una disminución en la actividad de ADN-PK como respuesta directa o indirecta a la presencia de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en relación con la actividad de la cinasa de ADN-PK en ausencia del compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Una disminución de ese tipo en la actividad puede ser debida a la interacción directa del compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo con ADN-PK, o debido a la interacción del compuesto de Fórmula (I), o sal farmacéuticamente aceptable del mismo con uno o más otros factores que a su vez afectan la actividad de ADN-PK. Por ejemplo, el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede disminuir la ADN-PK uniéndose directamente a la ADN-PK, provocando (directa o indirectamente) que otro factor disminuya la actividad de la ADN-PK, o (directa o indirectamente) disminuyendo la cantidad de ADN-PK presente en la célula u organismo.
Se pretende que el término "terapia" tenga su significado normal de tratar una enfermedad con el fin de aliviar total o parcialmente uno, algunos o todos sus síntomas, o para corregir o compensar la patología subyacente. El término "terapia" también incluye "profilaxis" a menos que haya indicaciones específicas al contrario. Los términos "terapéutico" y "terapéuticamente" deben interpretarse de manera correspondiente.
El término "profilaxis" pretende tener su significado normal e incluye la profilaxis primaria para prevenir el desarrollo de la enfermedad y la profilaxis secundaria mediante la cual la enfermedad ya se ha desarrollado y el paciente está temporal o permanentemente protegido contra la exacerbación o el empeoramiento de la enfermedad o el desarrollo de nuevos síntomas asociados con la enfermedad.
El término "tratamiento" se usa como sinónimo de "terapia". De manera similar, el término "tratar" puede considerarse como "aplicar terapia" donde "terapia" es como se define en el presente documento.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la terapia.
En una realización se proporciona el uso del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento.
En una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad mediada por ADN-PK. En una realización, dicha enfermedad mediada por ADN-PK es cáncer. En una realización, dicho cáncer es un cáncer sólido o hematológico. En una realización, dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer hematológico, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer gástrico y carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello.
En una realización se proporciona a compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de cáncer.
En una realización se proporciona el uso del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad mediada por ADN-PK. En una realización, dicha enfermedad mediada por ADN-PK es cáncer. En una realización, dicho cáncer es un cáncer sólido o hematológico. En una realización, dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer hematológico, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer gástrico y carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello.
En una realización se proporciona el uso del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.
En una realización, se proporciona un método para tratar una enfermedad en la que la inhibición de la ADN-PK es beneficiosa en un animal de sangre caliente que necesita dicho tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, dicha enfermedad es cáncer. En una realización, dicho cáncer es un cáncer sólido o hematológico. En una realización, dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer hematológico, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer gástrico y carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello.
En una realización se proporciona un método para tratar el cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto de Fórmula (I) tal como se describe en cualquiera de las realizaciones del presente documento que es eficaz para proporcionar "terapia" en un sujeto, o para "tratar" una enfermedad o trastorno en un sujeto. En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente eficaz puede causar cualquiera de los cambios observables o medibles en un sujeto tal como se describe en la definición de "terapia", "tratamiento" y "profilaxis" anterior. Por ejemplo, la cantidad eficaz puede reducir el número de células cancerosas o tumorales; reducir el tamaño total del tumor; inhibir o detener la infiltración de células tumorales en los órganos periféricos, incluyendo, por ejemplo, los tejidos blandos y los huesos; inhibir y detener la metástasis tumoral; inhibir y detener el crecimiento tumoral; aliviar hasta cierto punto uno o más de los síntomas asociados con el cáncer; reducir la morbilidad y la mortalidad; mejorar la calidad de vida; o una combinación de tales efectos. Una cantidad eficaz puede ser una cantidad suficiente para disminuir los síntomas de una enfermedad que responde a la inhibición de la actividad de ADN-PK. Para la terapia del cáncer, la eficacia in vivo puede medirse, por ejemplo, evaluando la duración de la supervivencia, el tiempo hasta la progresión de la enfermedad (TTP), las tasas de respuesta (RR), la duración de la respuesta y/o la calidad de vida. Como reconocen los expertos en la técnica, las cantidades eficaces pueden variar dependiendo de la vía de administración, el uso de excipientes y el uso conjunto con otros agentes. Por ejemplo, cuando se usa una terapia de combinación, la cantidad del compuesto de fórmula (I) o la sal farmacéuticamente aceptable descrita en esta memoria descriptiva y la cantidad de otro(s) agente(s) farmacéuticamente activo(s) son, cuando se combinan, conjuntamente eficaces para tratar un trastorno específico en el paciente animal. En este contexto, las cantidades combinadas están en una "cantidad terapéuticamente eficaz" si, cuando se combinan, son suficientes para disminuir los síntomas de una enfermedad que responde a la inhibición de la actividad de la ADN-PK tal como se describió anteriormente. Típicamente, tales cantidades pueden ser determinadas por un experto en la técnica, por ejemplo, comenzando con el intervalo de dosificación descrito en esta memoria descriptiva para el compuesto de Fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y un intervalo de dosificación aprobado o publicado de otro modo del/de los otro(s) compuesto(s) farmacéuticamente activo(s).
Los "animales de sangre caliente" incluyen, por ejemplo, seres humanos.
En una realización se proporciona un método para tratar el cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En una realización, dicho cáncer es un cáncer sólido o hematológico. En una realización, dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer hematológico, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer gástrico y carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello.
En cualquier realización en la que el cáncer se mencione en un sentido general, dicho cáncer puede ser un cáncer sólido o un cáncer hematológico, por ejemplo, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer gástrico y carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello.
El tratamiento anticanceroso descrito en esta memoria descriptiva puede ser útil como terapia única, o puede implicar, además de la administración del compuesto de Fórmula (I), cirugía convencional, radioterapia o quimioterapia; o una combinación de tales terapias adicionales. Tal cirugía, radioterapia o quimioterapia convencionales pueden administrarse de manera simultánea, secuencial o por separado del tratamiento con el compuesto de Fórmula (I).
Cuando una terapia de combinación se administra "simultáneamente", esto incluye el tratamiento de un paciente con una forma farmacéutica única (por ejemplo, un comprimido) que comprende tanto un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como una sustancia anticancerígena adicional; y también la dosificación simultánea de formas farmacéuticas independientes, comprendiendo cada una por separado uno de los respectivos componentes de combinación.
Cuando una terapia de combinación se administra "secuencialmente" o "por separado", esto incluye el tratamiento de un paciente con una primera forma de dosificación (por ejemplo, un comprimido) que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seguido del tratamiento de el mismo paciente con una segunda forma de dosificación que comprende una sustancia anticancerígena adicional; o el tratamiento de un paciente con una forma de dosificación única (por ejemplo, un comprimido) que comprende una sustancia anticancerígena particular, seguido del tratamiento del mismo paciente con una segunda forma de dosificación que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El intervalo entre las dosis secuenciales o separadas puede ser juzgado por un médico experto con referencia a la información de esta memoria descriptiva.
La radioterapia puede incluir una o más de las siguientes categorías de terapia:
i. radioterapia externa mediante radiación electromagnética y radioterapia intraoperatoria mediante radiación electromagnética;
ii. radioterapia interna o braquiterapia; incluyendo radioterapia intersticial o radioterapia intraluminal; o
iii. Radioterapia sistémica, incluyendo, pero sin limitarse a, yodo 131 y estroncio 89.
Por lo tanto, en una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y radioterapia, para su uso en el tratamiento del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con radioterapia.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y radioterapia, para su uso en el tratamiento simultáneo, separado o secuencial del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra simultáneamente, por separado o secuencialmente con la radioterapia. En una realización, se proporciona un método para tratar el cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y radioterapia, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la radioterapia son conjuntamente eficaces para producir un efecto anticancerígeno.
En una realización, se proporciona un método para tratar el cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y simultáneamente, administrar radioterapia por separado o secuencialmente, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la radioterapia son conjuntamente eficaces para producir un efecto anticancerígeno. En una realización, el cáncer es un cáncer sólido.
En cualquier realización, la radioterapia se selecciona del grupo que consiste en una o más de las categorías de radioterapia enumeradas en los puntos (i) -(iii) anteriores.
La quimioterapia puede incluir una o más de las siguientes categorías de sustancias antitumorales:
i. fármacos antiproliferativos/antineoplásicos y combinaciones de los mismos, tal como se usan en oncología médica, tales como antibióticos antitumorales (por ejemplo, antraciclinas como adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, doxorrubicina liposomal, pirarrubicina, daunomicina, valrrubicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, amrubicina y mitramicina); e inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo, epipodofilotoxinas como etopósido y tenipósido, amsacrina, irinotecán, topotecán y camptotecina);
ii. inhibidores de los mecanismos de reparación del ADN tal como la cinasa CHK; inhibidores de ATM (tales como como AZD0156 y AZD1390); inhibidores de la polimerasa poli(ADP-ribosa) (inhibidores de PARP, incluyendo olaparib); inhibidores de la cinasa ATR (tales como cerelasertib/AZD6738); e inhibidores de la cinasa WEE1 (tales como adavosertib/AZD1775/MK-1775); y
iii. enfoques de inmunoterapia, incluyendo, por ejemplo, enfoques ex vivo e in vivo para aumentar la inmunogenicidad de las células tumorales del paciente, tal como el bloqueo de anticuerpos contra PD-L1 (por ejemplo, durvalumab/MEDI4736).
Por lo tanto, en una realización se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos una sustancia antitumoral adicional, para su uso en el tratamiento del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con un sustancia antitumoral adicional. En una realización hay una sustancia antitumoral adicional. En una realización hay dos sustancias antitumorales adicionales. En una realización hay tres o más sustancias antitumorales adicionales.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos una sustancia antitumoral adicional para su uso en el tratamiento simultáneo, por separado o secuencial del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra simultáneamente, por separado o secuencialmente con una sustancia antitumoral adicional.
En una realización, se proporciona un método para tratar el cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y en al menos una sustancia antitumoral adicional, donde las cantidades del compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la sustancia antitumoral adicional son conjuntamente eficaces para producir un efecto anticancerígeno.
En una realización, se proporciona un método para tratar el cáncer en un animal de sangre caliente que necesita tal tratamiento, que comprende administrar a dicho animal de sangre caliente un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y administrar simultáneamente, por separado o secuencialmente al menos una sustancia antitumoral adicional a dicho animal de sangre caliente, en el que las cantidades del compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y la sustancia antitumoral adicional son conjuntamente eficaces para produciendo un efecto anticancerígeno.
En cualquier realización, la sustancia antitumoral adicional se selecciona del grupo que consiste en una o más de las sustancias antitumorales enumeradas en los puntos (i) -(iii) anteriores.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y al menos un agente antineoplásico para su uso en el tratamiento del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con al menos un agente antineoplásico. En una realización, el agente antineoplásico se selecciona de la lista de agentes antineoplásicos del punto (i) anterior.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un agente antineoplásico para su uso en el tratamiento simultáneo, por separado o secuencial del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra simultáneamente, por separado o secuencialmente con al menos un agente antineoplásico. En una realización, el agente antineoplásico se selecciona de la lista de agentes antineoplásicos del punto (i) anterior.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos una sustancia antitumoral adicional seleccionada del grupo que consiste en doxorrubicina o doxorrubicina liposomal, olaparib, AZD6738 y AZD0156, para su uso en el tratamiento del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con al menos una sustancia antitumoral adicional seleccionada del grupo que consiste en doxorrubicina, doxorrubicina liposomal, olaparib, AZD6738 y AZD0156.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos una sustancia antitumoral adicional seleccionada del grupo que consiste en doxorrubicina o doxorrubicina liposomal, olaparib, AZD6738 y AZD0156, para su uso en el tratamiento simultáneo, por separado o secuencial del cáncer. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra simultáneamente, por separado o secuencialmente con al menos una sustancia antitumoral adicional seleccionada del grupo que consiste en doxorrubicina, doxorrubicina liposomal, olaparib, AZD6738 y AZD0156.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con olaparib. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra simultáneamente, por separado o secuencialmente con olaparib.
En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con doxorrubicina o doxorrubicina liposomal. En una realización, se proporciona un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra simultáneamente , por separado o secuencialmente con doxorrubicina o doxorrubicina liposomal.
En una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) y al menos una sustancia antitumoral adicional. En una realización, la composición farmacéutica también comprende al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
En una realización, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) y al menos una sustancia antitumoral adicional, para su uso en el tratamiento del cáncer. En una realización, la composición farmacéutica también comprende al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
De acuerdo con una realización adicional se proporciona un kit que comprende:
a) Un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en una primera forma farmacéutica unitaria;
b) Una otra sustancia antitumoral adicional en una forma farmacéutica unitaria adicional;
c) Medios de recipiente para contener dicha primera y otras formas farmacéuticas unitarias; y opcionalmente
d) Instrucciones para su uso.
En una realización, la sustancia antitumoral comprende un agente antineoplásico.
En cualquier realización cuando se menciona un agente antineoplásico, el agente antineoplásico es uno o más de los agentes enumerados en el punto (i) anterior.
Los compuestos de fórmula (I) y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden administrarse como composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.
Por lo tanto, en una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones pueden estar en una forma adecuada para uso oral (por ejemplo, comprimidos, pastillas para chupar, cápsulas duras o blandas, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones, polvos o gránulos dispersables, jarabes o elixires), para uso tópico (por ejemplo, como cremas, pomadas, geles o soluciones o suspensiones acuosas u oleosas), para su administración por inhalación (por ejemplo, un polvo finamente dividido o un aerosol líquido), para su administración por insuflación (por ejemplo, en forma de un polvo finamente dividido) o para administración parenteral (por ejemplo, en forma de una solución acuosa u oleosa estéril para administración intravenosa, subcutánea o intramuscular o como un supositorio para administración rectal). Las composiciones pueden obtenerse mediante procedimientos convencionales utilizando excipientes farmacéuticos convencionales bien conocidos en la técnica. Por tanto, las composiciones pensadas para uso oral pueden contener, por ejemplo, uno o más agentes colorantes, edulcorantes, aromatizantes y/o conservantes.
En una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en la terapia.
En una realización se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento del cáncer. En una realización, dicho cáncer es un cáncer sólido o un cáncer hematológico. En una realización, dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer hematológico, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer gástrico y carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello.
El compuesto de Fórmula (I) normalmente se administrará a un animal de sangre caliente en una dosis unitaria dentro del rango de 2,5 a 5000 mg/m2 de área corporal del animal, o aproximadamente de 0,05 a 100 mg/kg, y esto normalmente proporciona una dosis terapéuticamente eficaz. Una forma de dosis unitaria tal como un comprimido o cápsula normalmente contendrá, por ejemplo, 0,1-250 mg de principio activo. La dosis diaria variará necesariamente dependiendo del huésped tratado, la ruta particular de administración, las terapias que se administren conjuntamente y la gravedad de la enfermedad que se esté tratando.
EJEMPLOS
Las diversas realizaciones se ilustran por los siguientes Ejemplos. La realización no debe interpretarse como limitativa a los Ejemplos.
A menos que se indique lo contrario, los materiales de partida estaban disponibles comercialmente. Todos los disolventes y reactivos comerciales fueron de grado de laboratorio y se usaron tal como se recibieron.
Experimental General
Durante la preparación de los Ejemplos, generalmente:
(i) las operaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente (ta), es decir, en el intervalo de 17 a 25°C y bajo una atmósfera de un gas inerte tal como N2 o Ar, a menos que se indique lo contrario;
(ii) en general, el curso de las reacciones se seguía mediante cromatografía en capa fina (TLC) y/o cromatografía líquida analítica de alta resolución (HPLC o UPLC) que normalmente se acoplaba a un espectrómetro de masas (LCMS). Los tiempos de reacción que se dan no son necesariamente los mínimos alcanzables;
(iii) cuando fue necesario, se secaron las disoluciones orgánicas sobre MgSO4 anhidro o Na2SO4, los procedimientos de tratamiento se llevaron a cabo usando técnicas tradicionales de separación de fases o usando SCX tal como se describe en (xiii), se llevaron a cabo las evaporaciones o bien por evaporación rotatoria a vacío o bien en un Genevac HT-4 / EZ-2 o Biotage V10;
(iv) los rendimientos, cuando están presentes, no son necesariamente los máximos alcanzables, y cuando fue necesario, las reacciones se repitieron si se requería una mayor cantidad del producto de reacción;
(v) en general, las estructuras de los productos finales de fórmula (I) se confirmaron mediante resonancia magnética nuclear (RMN) y/o técnicas de espectro de masas; los datos espectrales de masas por electropulverización se obtuvieron típicamente usando un UPLC Acquity de Waters acoplado a un espectrómetro de masas de cuadrupolo simple de Waters que adquiría datos de iones tanto positivos como negativos y, en general, solo se informan los iones relacionados con la estructura original; Los valores de desplazamiento químico de RMN de protones se midieron en la escala delta usando o bien un espectrómetro Bruker AV500 que funciona a una intensidad de campo de 500 MHz, un Bruker AV400 que funciona a 400 MHz o bien un Bruker AV300 que funciona a 300 MHz. A menos que se indique lo contrario, se obtuvieron los espectros de RMN a 500 MHz en d6-dimetilsulfóxido. Se han usado las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; a, amplio; qn, quinteto; (vi) A menos que se indique lo contrario, los compuestos que contienen un átomo de carbono y/o azufre asimétrico no se resolvieron;
(vii) los productos intermedios no se purificaron necesariamente por completo, pero sus estructuras y pureza se evaluaron mediante TLC, HPLC/UPLC analítica y/o análisis de RMN y/o espectrometría de masas;
(viii) a menos que se indique lo contrario, la cromatografía en columna ultrarrápida (fcc) se realizó en sílice Kieselgel de Merck (Art. 9385) o en sílice de fase inversa (gel de sílice Fluka 90 C18) o en cartuchos Silicycle (sílice de 40-63 |jm, peso de 4 a 330 g) o en cartuchos Grace resolv (4 - 120 g) o en columnas RediSep Rf 1.5 Flash o en columnas RediSep Rf Gold Flash de alto rendimiento (150 - 415 g de peso) o en columnas RediSep Rf Gold C18 de fase reversa (20 - 40 jm de sílice) o bien de manera manual o bien automática usando un sistema Isco CombiFlash Companion o un sistema similar;
(ix) la HPLC preparativa de fase inversa (RP HPLC) se llevó a cabo en sílice de fase inversa C18, típicamente usando una columna Waters XSelect CSH C18 (sílice de 5 jm , 30 mm de diámetro, 100 mm de longitud) usando mezclas decrecientemente polares como eluyente, por ejemplo [que contenían ácido fórmico al 0,1% o hidróxido de amonio acuoso al 0,3-5% (d=0,91)] como disolvente A y acetonitrilo como disolvente B; un procedimiento típico sería el siguiente: un gradiente de disolvente durante 10-20 minutos, a 40-50 ml por minuto, desde una mezcla 95:5 de disolventes A y B respectivamente a una mezcla 5:95 de disolventes A y B (o razón alternativa según corresponda).
(x) se usaron los siguientes métodos analíticos de UPLC; en general, se usó sílice C18 de fase inversa con un caudal de 1 mL/minuto y la detección fue por Espectrometría de Masas por Electrospray y por absorbancia UV registrando un intervalo de longitud de onda de 220-320 nm. La UPLC analítica se realizó en sílice de fase inversa CSH C18, usando una columna Waters XSelect CSH C18 con dimensiones de 2,1 x 50 mm y tamaño de partícula de 1,7 micras). Se empleó el análisis de gradiente usando mezclas decrecientemente polares como eluyente, por ejemplo, mezclas decrecientemente polares de agua (que contiene ácido fórmico al 0,1% o amoníaco al 0,1%) como disolvente A y acetonitrilo como disolvente B. Un método UPLC analítico típico de 2 minutos emplearía un gradiente de disolvente durante 1,3 minutos, a aproximadamente 1 mL por minuto, de una mezcla 97:3 de disolventes A y B respectivamente a una mezcla 3:97 de disolventes A y B.
(xi) cuando ciertos compuestos se obtuvieron como una sal de adición de ácido, por ejemplo, una sal monoclorhidrato o una sal diclorhidrato, la estequiometría de la sal se basó en el número y la naturaleza de los grupos básicos en el compuesto, la estequiometría exacta de la sal generalmente no se determinó, por ejemplo por medio de datos de análisis elementales;
(xii) cuando las reacciones se refieran al uso de microondas, se usó uno de los siguientes reactores de microondas: Iniciador de Biotage, Personal Chemistry Emrys Optimizer, Personal Chemistry Smithcreator o CEM Explorer;
(xiii) los compuestos se purificaron mediante cromatografía de intercambio catiónico fuerte (SCX) usando columnas Isolute Sp E flash s Cx -2 o Sc X-3 (International Sorbent Technology Limited, Mid Glamorgan, RU);
(xiv) se llevaron a cabo los siguientes métodos de HPLC quiral preparativa usando un HPLC Gilson GX-281 y una columna DAICEL CHIRALPAK IC (2 x 25 cm, 5 jm ), DAICEL CHIRALPAK IF (2 x 25 cm, 5 um) o columna XBridge Prep OBD C18 ( 3 x 15 cm, 5 jm ); en general, un caudal de entre 10-350 ml/minuto y la detección se realizó mediante absorbancia UV a una longitud de onda típica de 254 nm. Se usó una concentración de muestra de alrededor de 1-100 mg/mL en una mezcla de disolventes adecuada con un volumen de inyección de entre 0,5-10 mL y un tiempo de ejecución de entre 10­ 150 minutos y una temperatura típica del horno de 25-35°C;
(xv) los siguientes métodos analíticos de HPLC quiral se llevaron a cabo usando Shimadzu UFLC y un Daicel CHIRALPAK IC-3 (50 x 4,6 mm 3 jm ) o Daicel CHIRALPAK IF-3 (50 x 4,6 mm 3 jm ); en general, un caudal de 1 mL/minuto y la detección se realizó mediante absorbancia UV a una longitud de onda típica de 254 nm. Se usó una concentración de muestra de aproximadamente 1 mg/mL en un disolvente adecuado como EtOH con un volumen de inyección de aproximadamente 10 j l y un tiempo de ejecución de entre 10-60 minutos y una temperatura típica del horno de 25-35°C;
(xvi) se usaron los siguientes métodos de cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) quiral preparativa; en general, un caudal de aproximadamente 70 mL/minuto y la detección se realizó mediante absorbancia Uv a una longitud de onda típica de 254 nm. Se usó una concentración de muestra de aproximadamente de 100 mg/mL en un disolvente adecuado como MeOH con un volumen de inyección de aproximadamente de 0,5 mL y un tiempo de ejecución de entre 10-150 minutos y una temperatura típica del horno de 25-35°C;
(xvii) en general, los ejemplos y los compuestos intermedios se nombraron usando ACD Name, "Structure to Name" parte de ChemDraw Ultra (CambridgeSoft) o Biovia Draw 2016;
(xviii) además de las mencionadas anteriormente, se han usado las siguientes abreviaturas:
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000027_0001
(xix) para el análisis de XRPD, el instrumento usado fue un Bruker D4. Se determinó el difractograma de rayos X en polvo montando una muestra del material cristalino en un montaje de oblea de cristal de silicio único (SSC) de Bruker y extendiendo la muestra en una fase delgada con la ayuda de un portaobjetos de microscopio. La muestra se hizo girar a 30 revoluciones por minuto (para mejorar las estadísticas de recuento) y se irradió con rayos X generados por un tubo de enfoque largo-fino de cobre operado a 40 kV y 40 mA con una longitud de onda de 1,5418 Angstrom. Se hizo pasar la fuente de rayos X colimada a través de una rendija de divergencia variable automática fijada en V20 y la radiación reflejada se dirigió a través de una rendija antidispersión de 5,89 mm y una rendija detectora de 9,55 mm. Se midieron las muestras en geometría de reflexión en configuración 0 - 20 en el intervalo de exploración de 2° a 40° 20 con una exposición nominal de 0,12 segundos por incremento de 0,02°. El instrumento estaba equipado con un detector sensible a la posición (Lynxeye). Los expertos en la técnica de la difracción de rayos X en polvo comprenderán que la intensidad relativa de los picos puede verse afectada, por ejemplo, por granos de más de 30 micras de tamaño y relaciones de aspecto no unitarias, lo que puede afectar el análisis de las muestras. El experto también comprenderá que la posición de los reflejos puede verse afectada por la altura precisa a la que se asienta la muestra en el difractómetro y la calibración cero del difractómetro. La planitud de la superficie de la muestra también puede tener un pequeño efecto. Por lo tanto, los datos del patrón de difracción presentados no deben tomarse como valores absolutos;
(xx) Para la Calorimetría Diferencial de Barrido el instrumento usado fue TA Instruments Q2000 DSC. Típicamente, menos de 3 mg de material contenido en una bandeja de aluminio estándar equipada con una tapa se calentó en el intervalo de temperatura de 25°C a 300°C a una velocidad de calentamiento constante de 10°C por minuto. Se usó un gas de purga que usaba nitrógeno - caudal de 50 mL por minuto. Los datos térmicos se analizaron usando el software estándar, por ejemplo, Universal v.4.5A de TA INSTRUMENTS®.
Producto intermedio 1: Ácido 5-amino-2-bromo-4-metilbenzoico
Figure imgf000028_0001
Se añadió en porciones NBS (11,87 g, 66,15 mmol) a ácido 3-amino-4-metilbenzoico (10,00 g, 66,15 mmol) en DMF (50 mL) a 5°C a lo largo de un periodo de 5 minutos de modo que la temperatura no aumente por encima de 15°C. Se agitó la disolución resultante a 5°C durante 1 h. Se vertió la mezcla de reacción en agua helada (250 mL) con agitación. Se filtró el sólido resultante, se lavó con helada enfriada con hielo y se secó produciendo el compuesto del título (15,21 g, 100%) como un sólido rosa pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,04 - 2,09 (3H, m), 5,21 (2H, s), 7,06 (1H, s), 7,21 (1H, d), 12,84 (1H, s).
Producto intermedio 2: 5-amino-2-bromo-4-metilbenzoato de metilo
Figure imgf000028_0002
Se añadió gota a gota cloruro de tionilo (4,80 mL, 66,11 mmol) a ácido 5-amino-2-bromo-4-metilbenzoico (15,21 g, 66,11 mmol) en MeOH (200 mL) a 20°C a lo largo de un periodo de 5 minutos. Se agitó la disolución resultante a reflujo durante 2 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara, se extinguió con una pequeña cantidad de agua y se eliminó el disolvente a vacío. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (250 mL), y se lavó secuencialmente con NaHCO3 saturado (100 mL), agua (100 mL), y salmuera sat. (100 mL). Se hizo pasar la fase orgánica a través de un papel de filtro de separación de fases y se evaporó produciendo el compuesto del título (14,85 g, 92%) como un aceite rojo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,06 - 2,11 (3H, m), 3,80 (3H, s), 5,28 (2H, s), 7,06 (1H, s), 7,22 - 7,28 (1H, m); miz MH+ 244.
Producto intermedio 3: 2-bromo-5-((terc-butoxicarbomlammo))-4-metNbenzoato de metilo
Figure imgf000028_0003
Se añadió dicarbonato de di-ferc-butilo (20,40 g, 93,47 mmol) a 5-amino-2-bromo-4-metilbenzoato de metilo (15,21 g, 62,31 mmol) en etanol (125 mL) a ta. Se agitó la disolución a ta durante 18 h. Se añadió un adicional de 0,5 eq de dicarbonato de di-ferc-butilo (6,80 g, 31,15 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante un adicional de 18 h. Se eliminó el EtOH a vacío y se diluyó la suspensión resultante con n-heptano (250 mL). Se retiró el sólido mediante filtración, se lavó con n-heptano y se secó produciendo el compuesto del título (14,82 g, 69%) como un sólido gris; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,48 (9H, s), 2,25 (3H, s), 3,84 (3H, s), 7,56 - 7,6 (1H, m), 7,89 (1H, s), 8,73 (1H, s); miz MH+ 344.
Producto intermedio 4: (4-bromo-5-formil-2-metilfenil)carbamato de terc-butilo
Figure imgf000028_0004
Se añadió hidruro de di/sobutilaluminio (1 M, 100 mL, 100,0 mmol) a 2-bromo-5-((ferc-butoxicarbonil)amino)-4-metilbenzoato de metilo (11,47 g, 33,33 mmol) en DCM (200 mL) a -78°C. Se agitó la disolución a -78°C durante 1 h. Se añadió lentamente metanol (20 mL) para extinguir la reacción y se calentó la disolución hasta ta. Se diluyó la mezcla de reacción con HCl ac. 0,5 M (250 mL) y dietil éter (250 mL). Se aisló la fase orgánica, se lavó con salmuera (200 mL), se hizo pasar a través de un papel de filtro de separación de fases y se eliminó el disolvente a vacío proporcionando una mezcla del aldehido y alcohol deseados. Se añadió óxido de manganeso(IV) (10,78 g, 124,1 mmol) en una porción a la mezcla en DCM (260 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Se añadió un adicional de 5 equivalentes de óxido de manganeso(IV) (14,48 g, 166,7 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite®, se lavó con DCM (500 mL) y se eliminó el disolvente a vacío produciendo el compuesto del título (9,97 g, 96%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,48 (9H, s), 2,29 (3H, s), 7,63 - 7,66 (1H, m), 7,95 (1H, s), 8,78 (1H, s), 10,14 (1H, s); m/z MH+ 314.
Producto intermedio 5: W-[4-bromo-5-[(Z)-2-bromoviml]-2-metil-feml]carbamato de terc-butilo
Figure imgf000029_0001
Se añadió en porciones 2-metilpropan-2-olato de potasio (4,18 g, 37,24 mmol) a bromuro de (bromometil)trifenilfosfonio (16,24 g, 37,24 mmol) en THF (500 mL) a -78°C. Se añadió gota a gota (4-bromo-5-formil-2-metilfenil)carbamato de tercbutilo (9,75 g, 31,03 mmol) en Th F (100 mL) a la suspensión resultante, y se agitó la mezcla durante 16 h y se dejó que calentara lentamente hasta ta. Se añadió n-heptano (500 mL) y se filtró el precipitado a través de Celite. Se eliminó el disolvente a vacío proporcionando un sólido marrón claro. Se purificó el producto mediante fcc, eluyendo con acetato de etilo al 0-10% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (9,12 g, 75%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,47 (9H, s), 2,21 (3H, s), 6,87 (1H, d), 7,20 (1H, d), 7,51 (1H, s), 7,74 (1H, s), 8,62 (1H, s); no se detectó un ion de masa para este producto intermedio.
Producto intermedio 6: 6-((ferc-butoxicarboml)ammo)-7-metilcmnolm-1,2-dicarboxilato de dimetilo
Figure imgf000029_0002
Se disolvió N-[4-bromo-5-[(Z)-2-bromovinil]-2-metil-fenil]carbamato de terc-butilo (9,12 g, 23,32 mmol) en 1,4-dioxano (150 mL) a ta bajo nitrógeno. Se desgasificó la mezcla de reacción burbujeando nitrógeno a través de la mezcla durante 5 minutos. Se añadieron carbonato de potasio (8,06 g, 58,30 mmol), hidrazin-1,2-dicarboxilato de dietilo (6,16 g, 34,98 mmol), N1,N2-dimetiletano-1,2-diamina (1,255 mL, 11,66 mmol) y yoduro de cobre(I) (1,110 g, 5,83 mmol) y se agitó la suspensión de color verde oscuro resultante a 100°C durante 18 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta, se filtró, se lavó con DCM (400 mL) y se concentró el filtrado a vacío. Se purificó el producto mediante fcc, eluyendo con acetato de etilo al 0-25% en n-heptano.produciendo el compuesto del título (6,63 g, 70%) como una espuma blanca; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,21 (6H, dt), 1,47 (9H, s), 2,22 (3H, s), 4,18 (4H, dq), 6,30 (1H, d), 7,11 (1H, s), 7,19 (1H, s), 7,25 (1H, s), 8,57 (1H, s); m/z MH+ 406.
Producto intermedio 7: (7-metilcinnolin-6-il)carbamato de terc-butilo
Figure imgf000029_0003
Se añadió NaOH ac.2 M (7,95 mL, 15,91 mmol) a 6-((terc-butoxicarbonil)amino)-7-metilcinnolin-1,2-dicarboxilato de dietilo (2,15 g, 3,18 mmol) en EtOH (25 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 18 h, luego se concentró a vacío. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 mL), y se aisló la fase orgánica y se lavó secuencialmente con agua (50 mL) y salmuera sat. (50 mL). Se hizo pasar la fase orgánica a través de un papel de filtro de separación de fases, se concentró a vacío, luego se purificó mediante fcc, eluyendo con EtOAc al 0-100% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (0,370 g, 45%) como una espuma de color naranja; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,53 (9H, s), 2,54 (3H, d), 8,09 (1H, dd), 8,24 (2H, d), 8,89 (1H, s), 9,19 (1H, d); m/z MH+ 260.
Producto intermedio 8: 7-metilcinnolin-6-amina
Figure imgf000030_0001
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (1,54 mL, 6,17 mmol) a (7-metilcinnolin-6-il)carbamato de terc-butilo (320 mg, 1,23 mmol) en MeOH (5 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 18 h, luego se concentró a vacío produciendo el compuesto del título (245 mg, 100%) como un sólido naranja brillante; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,42 (3H, d), 6,96 (1H, s), 7,91 (2H, s), 8,10 (1H, s), 8,22 (1H, d), 8,86 (1H, d); m/z MH+ 160.
Producto intermedio 9: W-(7-metil-6-qumolil)-1,1-difeml-metammma
Figure imgf000030_0002
Se añadieron Pd2(dba)3 (0,918 g, 1,13 mmol) y terc-butóxido de sodio (6,49 g, 67,54 mmol) a una suspensión desgasificada de 6-bromo-7-metilquinolina (10 g, 45,03 mmol), difenilmetanimina (8,31 mL, 49,53 mmol) y rac-BINAP (1,40 g, 2,25 mmol) en tolueno (172 mL). Se calentó la reacción a 90°C durante 1 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta, se diluyó con EtOAc (200 mL) y se lavó con agua (100 mL). Se extrajo la fase acuosa con EtOAc (2 x 100mL), luego se hicieron pasar las fases orgánicas combinadas a través de un papel de filtro de separación de fases y se eliminó el disolvente a vacío. Se purificó el producto en bruto mediante fcc, eluyendo con EtOAc al 0-100% en nheptano, produciendo el compuesto del título (14,30 g, 99%) como un sólido de color naranja; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,35 - 2,4 (3H, m), 6,92 (1H, s), 7,20 (2H, dd), 7,25 - 7,34 (4H, m), 7,49 - 7,55 (2H, m), 7,58 (1H, ddd), 7,72 - 7,79 (3H, m), 7,94 - 8,02 (1H, m), 8,66 (1H, dd); m/z MH+ 323.
Producto intermedio 10: 7-metilquinolin-6-amina
Figure imgf000030_0003
Se añadió HCl ac. 2 M (93,0 mL, 186,1 mmol) a N-(7-metil-6-quinolil)-1,1-difenilmetanimina (15,00 g, 46,52 mmol) en THF (35 mL) y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h. Se diluyó la reacción con EtOAc (100 mL) y se separaron las fases. Se extrajo además la fase acuosa con EtOAc (50 mL). Se neutralizó la fase acuosa con NaOH ac. 2 M y se recogió el sólido resultante mediante filtración, se lavó con un pequeño volumen de agua y se secó produciendo el compuesto del título (6,70 g, 91%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,25 - 2,32 (3H, m), 5,35 (2H, s), 6,87 (1H, s), 7,22 (1H, dd), 7,61 (1H, s), 7,87 - 7,98 (1H, m), 8,46 (1H, dd); m/z MH+ 159.
Producto intermedio 11: 6-bromo-4-metoxi-7-metilquinolina
Figure imgf000030_0004
Se añadió en una porción metanolato de sodio (221 mg, 4,09 mmol) a 6-bromo-4-cloro-7-metilquinolina (350 mg, 1,36 mmol) en metanol (8 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a 65°C durante 1 día, luego se dejó que se enfriara hasta ta. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (75 mL) y se lavó con agua (20 mL) y salmuera sat. (20 mL). Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío produciendo el compuesto del título (275 mg, 80%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,54 (3H, s), 4,05 (3H, s), 7,03 (1H, d), 7,94 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,74 (1H, d); m/z MH+ 252.
Producto intermedio 12: 4-metoxi-7-metilquinolin-6-amina
Figure imgf000031_0001
Se añadió Brettphos precat G3 (126 mg, 0,14 mmol) en una porción a 6-bromo-4-metoxi-7-metilquinolina (350 mg, 1,39 mmol), carbonato de cesio (905 mg, 2,78 mmol) y amoníaco 0,5 M en 1 ,4-dioxano (5,55 ml, 2,78 mmol) en dioxano (9 mL) a temperatura ambiente. Se calentó la mezcla de reacción en un reactor de microondas a 100°C durante 3 días. Se filtró la mezcla de reacción y se lavó el sólido con DCM (50 mL). Se combinaron las fases orgánicas y se concentraron a vacío, luego se purificaron mediante fcc, eluyendo con MeOH al 0-5% en DCM, produciendo el compuesto del título (200 mg, 77%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,27 (3H, s), 3,96 (3H, s), 5,30 (2H, s), 6,75 (1H, d), 7,15 (1H, s), 7,55 (1H, s), 8,33 (1H, d); miz MH+ 189.
Producto intermedio 13: M-(4-cloro-7-metil-6-qumolil)-1,1-difemlmetammma
Figure imgf000031_0002
Se añadieron Pd2(dba)3 (23,8 mg, 0,03 mmol) y ferc-butóxido de sodio (169 mg, 1,75 mmol) a una suspensión desgasificada de 6-bromo-4-cloro-7-metilquinolina (300 mg, 1,17 mmol), difenilmetanimina (216 pl, 1,29 mmol) y rac-BINAP (36,4 mg, 0,06 mmol) en tolueno (4,46 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 90°C durante 1 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se diluyó con EtOAc y se lavó con agua. Se extrajo la fase acuosa con EtOAc, luego se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO4, se concentraron a vacío y se purificaron mediante fcc, eluyendo con EtOAc al 0-25% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (408 mg, 98%) como una goma amarilla; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,43 (3H, s), 7,14 (3H, s), 7,23 (3H, s), 7,28 (1H, d), 7,38 - 7,56 (3H, m), 7,84 (3H, d), 8,55 (1H, d); miz MH+ 357.
Producto intermedio 14: W-(4,7-dimetil-6-qumolil)-1,1-difemlmetammma
Figure imgf000031_0003
Se añadió aducto de PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (37,3 mg, 0,05 mmol) en una porción a una mezcla desgasificada de 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinano (0,192 mL, 1,37 mmol), N-(4-cloro-7-metil-6-quinolil)-1,1-difenilmetanimina (326 mg, 0,91 mmol) y carbonato de cesio (595 mg, 1,83 mmol) en 1,4-dioxano (12 mL) a ta. Se agitó la suspensión resultante en un vial tapado a 120°C durante 15 h. Se dejó que la reacción se enfriara hasta ta y se filtró, luego se evaporó hasta sequedad y se purificó mediante fcc, eluyendo con EtOAc al 0-40% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (254 mg, 83%) como una goma amarilla; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,38 (3H, d), 2,43 (3H, d), 6,86 (1H, s), 6,94 - 7,07 (1H, m), 7,13 (2H, dd), 7,18 - 7,24 (3H, m), 7,38 - 7,59 (3H, m), 7,74 - 7,94 (3H, m), 8,55 (1H, d); miz MH+ 337.
Producto intermedio 15: 4,7-dimetilquinolin-6-amina
Figure imgf000031_0004
Se añadió HCl ac. 2 M (0,092 mL, 3,02 mmol) a N-(4,7-dimetil-6-quinolil)-1,1-difenilmetanimina (254 mg, 0,75 mmol) en THF (2 mL) y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h. Se añadió agua a la mezcla (para disolver el sólido) y se cargó la disolución en una columna SCX-2 de 10 g. Se eliminó la benzofenona por lavado con MeOH (2 x volúmenes de columna), luego se eluyó la columna con NH31 M en MeOH proporcionando el compuesto del título (129 mg, 99%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,29 (3H, d), 2,52 (3H, s), 5,37 (2H, s), 7,00 (1H, s), 7,04 - 7,13 (1H, m), 7,51 - 7,66 (1H, m), 8,33 (1H, d); miz MH+ 173.
Producto intermedio 16: 6-cloro-7-nitroquinoxalina
Figure imgf000031_0005
Se añadió oxalaldehído (40% en agua, 4,26 mL, 37,32 mmol) a 4-doro-5-nitrobenceno-1,2-diamina (5,00 g, 26,65 mmol) en etanol (100 mL) a ta. Se calentó la disolución resultante a reflujo durante 1 h. se enfrió la mezcla de reacción hasta ta y se eliminó mediante filtración el precipitado resultante y se secó produciendo el compuesto del título (4,50 g, 81%) como un sólido marrón; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 8,57 (1H, s), 8,91 (1H, s), 9,15 (1H, d), 9,17 (1H, d); m/z MH+ 210.
Producto intermedio 17: 6-metil-7-nitroquinoxalina
Figure imgf000032_0001
Se añadió 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinano (2,97 mL, 21,27 mmol) a 6-cloro-7-nitroquinoxalina (3,43 g, 16,37 mmol) en 1,4-dioxano (50 mL) y agua (5 mL) a ta. Se añadieron K2CO3 (6,79 g, 49,10 mmol) y dicloro-1, 1 '-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (1,197 g, 1,64 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a reflujo durante 2 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta, se diluyó con EtOAc (100 mL), se lavó con agua (50 mL) y salmuera sat. (50 mL), y se filtró la fase orgánica a través de un papel de filtro de separación de fases y se concentró a vac/oproduciendo el producto en bruto (2,50 g, 85% si era puro) que se usó directamente en la siguiente etapa; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,65 (3H, s), 8,19 (1H, s), 8,66 (1H, s), 9,04 (2H, dd); m/z MH+ 190.
Producto intermedio 18: 7-metilquinoxalin-6-amina
Figure imgf000032_0002
Se añadieron hierro (4,43 g, 79,29 mmol) y clorhidrato de amoníaco (0,707 g, 13,22 mmol) a 6-metil-7-nitroquinoxalina (2,50 g, 13,22 mmol) en EtOH (85 mL) y agua (15 mL) a ta. Se calentó la mezcla resultante a 100°C durante 1 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó con EtOH. Se concentró el filtrado a vac/o y se purificó el producto en bruto mediante fcc, eluyendo con MeOH al 0-5% en DCM produciendo el compuesto del título (1,80 g, 86%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,24 - 2,38 (3H, m), 5,83 (2H, s), 7,02 (1H, s), 7,61 - 7,68 (1H, m), 8,44 (1H, d), 8,57 (1H, d); m/z MH+ 160.
Productos intermedios 19 y 20: 7-cloro-2-metil-6-nitroquinoxalina (principal) y 6-cloro-2-metil-7-nitroquinoxalina (minoritario)
Figure imgf000032_0003
Se añadió 2-oxopropanal (4,80 g, 26,65 mmol) a 4-cloro-5-nitrobenceno-1,2-diamina (5,00 g, 26,65 mmol) en EtOH (100 mL) a ta. Se calentó la disolución resultante a reflujo durante 1 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se aisló el precipitado resultante mediante filtración y se secó a vacío proporcionando una mezcla 6:1 de 7-cloro-2-metil-6-nitroquinoxalina (principal) y 6-cloro-2-metil-7-nitroquinoxalina (4,67 g, 78% total durante ambos isómeros); 1H-RMN (400 MHz, DMSO, isómero principal) 2,78 (3H, s), 8,43 (1H, s), 8,84 (1H, s), 9,05 (1H, s); m/z [M-H]- 222.
Productos intermedios 21 y 22: 2,7-dimetil-6-nitroquinoxalina (principal) y 2,6-dimetil-7-nitroquinoxalina (minoritario)
Figure imgf000032_0004
Se añadió 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinano (1,60 mL, 11,40 mmol) a una mezcla 6:1 de 7-cloro-2-metil-6-nitroquinoxalina y 6-cloro-2-metil-7-nitroquinoxalina (2,04 g, 9,12 mmol) en 1,4-dioxano (50 mL) y agua (5 mL) a ta. Se añadieron carbonato de potasio (3.15 g, 22.81 mmol) y dicloro 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio (II) (Pd106) (0.57 g, 0.76 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a reflujo durante 2 h. Se dejó la reacción, se diluyó con EtOAc (100 mL) y se filtró. Se lavó el filtrado con agua (50 mL) y salmuera sat. (50 mL). Se aisló la fase orgánica, se filtró a través de un papel de filtro de separación de fases, se concentró a vac/o y se purificó mediante fcc, eluyendo con EtOAc al 0-50% en n-heptano produciendo los compuestos del título como una mezcla 6:1 de isómeros (1,01 g, 65% total) como un sólido de color tostado; 1H-RMN (400 MHz, DMSO, isómero principal) 2,69 (3H, s), 2,76 (3H, s), 8,10 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,98 (1H, s); m/z MH+ 204.
Productos intermedios 23 y 24: 2,7-dimetilquinoxalin-6-amina (principal) y 3,7-dimetilquinoxalin-6-amina (minoritario)
Figure imgf000033_0001
Se añadieron hierro (1,43 g, 25,69 mmol) y clorhidrato de amoníaco (229 mg, 4,28 mmol) a una mezcla 6:1 de 2,7-dimetil-6-nitroquinoxalina y 3,7-dimetilquinoxalin-6-amina (1,01 g, 4,28 mmol) en EtOH (30 mL) y agua (5 mL) a ta bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla resultante a 100°C durante 1 h. Se enfrió la mezcla de reacción, se filtró y se lavó con EtoH. Se eliminó el disolvente a vacío y se purificó el producto en bruto mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 5% en DCM, produciendo los compuestos del título (600 mg, 81%) como un sólido marrón (mezcla de ~5:1); 1H-RMN para el isómero principal (400 MHz, DMSO) 2,30 (3H, s), 2,56 (3H, s), 5,63 (2H, s), 7,01 (1H, s), 7,56 (1H, s), 8,50 (1H, s); miz MH+ 174.
Producto intermedio 25: 5-cloroquinazolin-6-amina
Figure imgf000033_0002
Se añadió N-clorosuccinimida (4,47 g, 33,48 mmol) en una porción a quinazolin-6-amina (4,86 g, 33,48 mmol) en DCM (150 mL) a 25°C. Se agitó la disolución resultante a 25°C durante 16 h. Se eliminó el disolvente a presión reducida y se purificó el residuo mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 30% en éter de petroleo. Se evaporaron las fracciones puras hasta sequedad produciendo el compuesto del título (6,30 g, 105%) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 6,31 (2H, s), 7,60 (1H, d), 7,76 (1H, d), 9,04 (1H, s), 9,41 (1H, s) miz MH+ 180.
Producto intermedio 26: 7-bromo-5-cloroquinazolin-6-amina
Figure imgf000033_0003
Se añadió NBS (5.00 g, 28.09 mmol) en una porción a 5-cloroquinazolin-6-amina (6.10 g, 33.96 mmol) en DCM (150 mL) a ta. Se agitó la disolución resultante a ta durante 16 h. Se extinguió la mezcla de reacción con Na2CO3 ac. sat. (200 mL), se extrajo con DCM (4 x 200 mL), y se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron. Se purificó el producto en bruto mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 20% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (0,91 g, 10%) como un sólido gris; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 5,03 (2H, s), 8,22 (1H, s), 9,19 (1H, s), 9,56 (1H, s); miz MH+ 258.
Producto intermedio 27: 5-cloro-7-metilquinazolin-6-amina
Figure imgf000033_0004
Se añadió Pd(Ph3P)4 (384 mg, 0,33 mmol) en una porción a 7-bromo-5-cloroquinazolin-6-amina (860 mg, 3,33 mmol), trimetilboroxina (2506 mg, 9,98 mmol) y K2CO3 (920 mg, 6,65 mmol) en THF (15 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a 80°C durante 48 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 30% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (540 mg, 84%) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,43 (3H, d), 6,03 (2H, s), 7,68 (1H, s), 9,02 (1H, s), 9,38 (1H, s); miz MH+ 194.
Producto intermedio 28: 7-metilquinazolin-6-amina
Figure imgf000033_0005
Se agitó PdiC al 10% (500 mg, 4,70 mmol), 5-cloro-7-metilquinazolin-6-amina (500 mg, 2,58 mmol) y Et3N (0,720 mL, 5,16 mmol) en MeOH (25 mL) bajo 3 atm de hidrógeno a ta durante 3 días. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite, y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante cromatografía ultrarrápida C18-ultrarrápida, gradiente de elución de MeCN del 0 al 30% en agua produciendo el compuesto del título (80 mg, 19%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2.32 (3H, d), 5.71 (2H, s), 6.95 (1H, s), 7.62 (1H, s), 8.86 (1H, s), 9.14 (1H, s); miz MH+ 160.
Producto intermedio 29: 2-cloro-4-((tetrahidro-2H-piran-4-M)ammo)pirimidm-5-carboxMato de etilo
Figure imgf000034_0001
Se añadió carbonato de potasio (62,50 g, 452,41 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (40,00 g, 180,97 mmol) y clorhidrato de tetrahidro-2H-piran-4-amina (24,90 g, 181,0 mmol) en acetonitrilo (1 L). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con THF (750 mL) y se concentraron las fases orgánicas combinadas a vacío. Se purificó el producto en bruto mediante fcc, gradiente de elución de THF del 0 al 2% en DCM, produciendo el compuesto del título (37,74 g, 73%) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (3H, t), 1,54-1,63 (2H, m), 1,85-1,89 (2H, m), 3,43-3,49 (2H, m), 3,83-3,88 (2H, m), 4,12-4,26 (1H, m), 4,29­ 4,34 (2H, m), 8,34 (1H, d), 8,64 (1H, s); miz MH+ 286.
Producto intermedio 30: Ácido 2-cloro-4-((tetrahidro-2H-piran-4-N)ammo)pirimidm-5-carboxnico
Figure imgf000034_0002
Se añadió una disolución de LiOH (13,11 g, 547,37 mmol) en agua (800 mL) a una disolución con agitación de 2-cloro-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-carboxilato de etilo (78,20 g, 273,7 mmol) en THF (800 mL). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (500 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (66,4 g, 92%) como un sólido blanco; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 1,48-1,61 (2H, m), 1,85-1,89 (2H, m), 3,41-3,49 (2H, m), 3,81-3,87 (2H, m), 4,10-4,22 (1H, m), 8,54 (1H, d), 8,59 (1H, s); miz MH+ 258.
Producto intermedio 31: 2-cloro-9-(tetrahidro-2H-piran-4-N)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000034_0003
Se añadió trietilamina (25,4 g, 251,5 mmol) a ácido 2-cloro-4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)pirimidin-5-carboxílico (64,8 g, 251,5 mmol) y azida de difenilfosforilo (69,2 g, 251,5 mmol) en DMA (330 mL). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h, luego se agitó a 120°C durante 16 h. Se vertió la mezcla de reacción en hielo (2 L), se recogió el precipitado mediante filtración, se lavó con agua (400 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (44,8 g, 70%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,66 - 1,70 (2H, m), 2,39-2,47 (2H, m), 3,45 (2H, t), 3,95-3,99 (2H, m), 4,38­ 4,46 (1H, m), 8,14 (1H, s), 11,65 (1H, s); miz MH+ 255.
Producto intermedio 32: 2-cloro-7-metM-9-(tetrahidro-2H-piran-4-N)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000034_0004
Se añadió una disolución de NaOH (31,0 g, 775,50 mmol) en agua (80 mL) a una disolución con agitación de 2-cloro-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (39,5 g, 155,1 mmol) y MeI (48,5 mL, 775,5 mmol) en THF (720 mL). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h. Se concentró la mezcla de reacción parcialmente a vacío, luego se diluyó con agua. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (300 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (32,5 g, 69%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,67-1,71 (2H, m), 2,39-2,48 (2H, m), 3,37 (3H, s), 3,46 (2H, t), 3,96-3,99 (2H, m), 4,42-4,50 (1H, m), 8,37 (1H, s); m/z MH+ 269.
Producto intermedio 33: 2-cloro-4-(((ls,4s)-4-hidroxiciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000035_0001
Se añadió carbonato de potasio (78,00 g, 565,5 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (50,00 g, 226,2 mmol) y clorhidrato de (1s,4s)-4-aminociclohexan-1-ol (34,30 g, 226,2 mmol) en acetonitrilo (700 mL) a ta bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se filtró a través de un lecho de Celite®. Se concentró parcialmente el filtrado a vacío y se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con MeCN (100 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (41,0 g, 61%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (3H, t), 1,42 -1,58 (2H, m), 1,60 - 1,75 (6H, m), 3,66 (1H, d), 4,06 (1H, dd), 4,33 (2H, q), 4,57 (1H, d), 8,46 (1H, d), 8,63 (1H, s); m/z MH+ 300.
Producto intermedio 34: Ácido 2-cloro-4-(((ls,4s)-4-hidroxiciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000035_0002
Se añadió LiOH (9,75 g, 407,00 mmol) a 2-cloro-4-(((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxilato de etilo (61,0 g, 203,50 mmol) en THF (400 mL) y agua (400 mL) a ta bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se concentraron parcialmente a vacío y se acidificó hasta pH~2 con HCl ac. 2 M. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (500 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (52 g, 94%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,51 (2H, d), 1,58 - 1,75 (6H, m), 3,66 (1H, s), 4,00 - 4,07 (1H, m), 4,56 (1H, s), 8,59 (1H, s), 8,69 (1H, d), 13,82 (1H, s); m/z MH+ 272.
Producto intermedio 35: 2-cloro-9-((ls,4s)-4-hidroxiciclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000035_0003
Se añadió trietilamina (28,2 mL, 202,4 mmol) a ácido 2-cloro-4-(((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico (55,0 g, 202,4 mmol) en acetonitrilo (550 mL) a ta bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 15 min. Se añadió DPPA (55,7 g, 202,4 mmol), y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min y luego se calentó a 90°C durante 6 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se vertió en agua (4 L). Se recogió el precipitado mediante filtración, se lavó con agua (1 L) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (34,9 g, 64,1%) como un sólido blanco; m/z MH+ 269.
Producto intermedio 36: 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000036_0001
Se añadió yodometano (31,70 g, 223,30 mmol) a 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (30,00 g, 111,65 mmol), NaOH (22,33 g, 558,24 mmol) en THF (300 mL) y agua (150 mL) a 25°C. Se agitó la mezcla de reacción a 25°C durante 16 h. Se concentró la mezcla de reacción a vacío. Se recogió el precipitado mediante filtración, se lavó con agua (250 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (24,02 g, 76%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,43 - 1,61 (4H, m), 1,79 (2H, d), 2,54 - 2,68 (2H, m), 3,34 (3H, s), 3,87 (1H, s), 4,15 - 4,21 (1H, m), 4,46 (1H, d), 8,34 (1H, s); miz MH+ 283.
Producto intermedio 37: 2-cloro-4-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexN)ammo)pirimidm-5-carboxNato de etilo
Figure imgf000036_0002
Se añadió gota a gota DIPEA (35,10 g, 271,5 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (40 g, 181,0 mmol) y (1/',4/')-4-aminociclohexan-1-ol (20,84 g, 181,0 mmol) en acetonitrilo (1,25 L) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta, luego se agitó a ta durante 16 h. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con THF (500 mL) y se aislaron las fases orgánicas combinadas y se concentraron a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de THF del 0 al 3% en DCM, produciendo el compuesto del título (42,0 g, 77%) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 1,23-1,45 (7H, m), 1,82-1,95 (4H, m), 3,47-3,48 (1H, m), 3,86-3,95 (1H, m), 4,27-4,34 (2H, m), 4,63 (1H, d), 8,26 (1H, d), 8,60 (1H, s); miz MH+ 300.
Producto intermedio 38: Ácido 2-cloro-4-(((lr,4r)-4-hidroxiciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000036_0003
Se añadió una disolución de LiOH (6,71 g, 280,23 mmol) en agua (420 mL) a una disolución con agitación de 2-cloro-4-(((1/',4/')-4-hidroxiciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxilato de etilo (42,00 g, 140,1 mmol) en THF (420 mL). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (350 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (34,29 g, 90%) como un sólido blanco, que se usó sin purificación adicional; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 1,24-1,43 (4H, m), 1,84 (2H, d), 1,94 (2H, d), 3,44-3,50 (1H, m), 3,88-3,90 (1H, m), 8,47 (1H, d), 8,58 (1H, s), 13,79 (1H, s), 1 protón intercambiable no visible; miz m H+ 272; miz MH+ 272.
Producto intermedio 39: 2-cloro-9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexN)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000036_0004
Se añadió gota a gota azida de difenilfosforilo (38,3 g, 139,1 mmol) a ácido 2-cloro-4-(((1r,4r)-4-hidroxicidohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico (36,0 g, 132,5 mmol), se añadió y trietilamina (18,47 mL, 132,50 mmol) en THF (800 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a 100°C durante 12 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se concentró a vacío y se diluyó el residuo con agua (700 mL). Se recogió el sólido mediante filtración, se secó a vacío y se trituró con DCM produciendo el compuesto del título (18,36 g, 51%) como un sólido blanco; m/z MH+ 269.
Producto intermedio 40: 2-cloro-9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000037_0001
Se añadió hidróxido de sodio (26,0 g, 651,28 mmol) en agua (350 mL) en una porción a 2-cloro-9-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (35,0 g, 130,3 mmol) y yoduro de metilo (40,7 mL, 651,3 mmol) en THF (700 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se aisló el sólido resultante mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (31,6 g, 86%) como un sólido amarillo claro; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 1,16 - 1,45 (2H, m), 1,61 - 1,81 (2H, m), 1,87 - 2,03 (2H, m), 2,15 - 2,39 (2H, m), 3,35 (3H, s), 3,40 - 3,60 (1H, m), 4,00 - 4,28 (1H, m), 4,70 (1H, d), 8,35 (1H, s); m/z MH+ 283.
Producto intermedio 41: (S)-2-cloro-4-((tetrahidro-2H-piran-3-il)ammo)pirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000037_0002
Se añadió gota a gota (S)-Tetrahidro-2H-piran-3-amina clorhidrato (1,99 g, 14,48 mmol) en MeCN (10 mL) a una mezcla de DIPEA (6,30 mL, 36,19 mmol) y 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (3,20 g, 14,48 mmol) en MeCN (60 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 5 min bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción durante 4 h, dejando que se calentara lentamente hasta ta, luego se agitó a ta durante 18 h y se concentró a vacío, se diluyó con EtOAc (100 mL), y se lavó con agua luego con salmuera sat.. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío, y se purificó mediante fcc, eluyendo con EtOAc al 0 - 40% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (3,24 g, 78%) como un aceite amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (3H, t), 1,49 - 1,6 (1H, m), 1,63 - 1,79 (2H, m), 1,83 - 1,94 (1H, m), 3,48 (1H, dd), 3,54 - 3,65 (2H, m), 3,74 (1H, dd), 4,08 - 4,19 (1H, m), 4,33 (2H, q), 8,57 (1H, d), 8,64 (1H, s); m/z [M-H]- 284.
Producto intermedio 42: Ácido 2-cloro-4-[[(3S)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000037_0003
Se añadió hidróxido de litio hidratado (0,933 g, 22,23 mmol) en una porción a (S)-2-cloro-4-((tetrahidro-2H-piran-3-il)amino)pirimidin-5-carboxilato de etilo (3,241 g, 11,12 mmol) en THF (20 mL) y agua (20 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 16 h. Se concentró parcialmente la mezcla de reacción a vacío, luego se acidificó con HCl ac. 2 M. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (50 mL) y se secó al aire durante la noche. Se secó además el sólido blanco resultante a vacío a 50°C durante 24 h produciendo el compuesto del título (2,40 g, 84%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,55 (1H, dq), 1,61 - 1,77 (2H, m), 1,85 - 1,95 (1H, m), 3,45 (1H, dd), 3,59 (2H, t), 3,75 (1H, dd), 4,06 - 4,16 (1H, m), 8,60 (1H, s), 8,76 (1H, d), 13,62 (1H, s); m/z MH+ 258.
Producto intermedio 43: (S)-2-cloro-9-(tetrahidro-2W-piran-3-il)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000038_0001
Se añadió azida de difenilfosforilo (2,00 mL, 9,29 mmol) en una porción a una disolución de ácido 2-cloro-4-[[(3S)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxílico (2,40 g, 9,29 mmol) y trietilamina (1,30 mL, 9,29 mmol) en THF (50 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a 80°C durante 24 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta luego se vertió en agua (40 mL), luego se concentró parcialmente a vacío provocando la formación de un precipitado blanco que se aisló mediante filtración, se secó a vacío, se lavó con agua, se secó al aire, luego se secó a vacío a 50°C produciendo el compuesto del título (1,84 g, 78%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,61 - 1,82 (2H, m), 1,88 - 1,99 (1H, m), 2,4 - 2,49 (1H, m), 3,3 - 3,37 (1H, m), 3,78 - 3,93 (3H, m), 4,2 - 4,32 (1H, m), 8,13 (1H, s), 11,63 (1H, s); miz MH+ 255.
Producto intermedio 44: 2-cloro-7-metil-9-[(3S)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-ona
Figure imgf000038_0002
Se añadió en porciones hidruro de sodio (60%) (0,434 g, 10,86 mmol) a (S)-2-cloro-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (1,843 g, 7,24 mmol) en Dm F (25 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción durante 30 minutos luego se añadió gota a gota yodometano (1,36 mL, 21,71 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a 0°C durante 1 h, luego se extinguió con agua (50 mL) y se eliminó mediante filtración el precipitado resultante y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (1,62 g, 83%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,64 - 1,82 (2H, m), 1,9 - 1,98 (1H, m), 2,41 - 2,48 (1H, m), 3,32 - 3,38 (4H, m), 3,79 - 3,91 (3H, m), 4,25 - 4,34 (1H, m), 8,35 (1H, s); miz MH+ 269.
Producto intermedio 45: 2-cloro-4-[[(3ft)-tetrahidropiran-3-il]ammo]pirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000038_0003
Se añadió gota a gota clorhidrato de (R)-tetrahidro-2H-piran-3-amina (1,00 g, 7,27 mmol) en acetonitrilo (5 mL) a una mezcla de DIPEA (3,16 mL, 18,17 mmol) y 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (1,606 g, 7,27 mmol) en acetonitrilo (30 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 5 minutos bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción durante 4 h, dejando que se calentara lentamente hasta ta y luego se agitó a ta durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción a vacío, se diluyó con EtOAc (100 mL), y se lavó con agua luego salmuera sat.. Se aisló la fase orgánica y se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (0,936 g, 45%) como un aceite amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,33 (3H, t), 1,57 (1H, dt), 1,71 (2H, dtd), 1,91 (1H, ddt), 3,48 (1H, dd), 3,55 - 3,66 (2H, m), 3,75 (1H, dd), 4,11 -4,2 (1H, m), 4,33 (2H, q), 8,58 (1H, d), 8,65 (1H, s); miz MH+ 286.
Producto intermedio 46: Ácido 2-cloro-4-[[(3ft)-tetrahidropiran-3-il]ammo]pirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000038_0004
Se añadió hidróxido de litio hidratado (276 mg, 6.57 mmol) en una porción a 2-cloro-4-[[(3R)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo (939 mg, 3.29 mmol) en THF (1.23 mL) y agua (4.10 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se aisló el sólido resultante mediante filtración y se secó a 45°C a vacío durante la noche produciendo el compuesto del título (806 mg, 95%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,56 (1H, dq), 1,70 (2H, ddt), 1,91 (1H, ddt), 3,46 (1H, dd), 3,60 (2H, t), 3,76 (1H, dd), 4,12 (1H, d), 8,61 (1H, s), 8,77 (1H, d), un protón intercambiable no observado; m/z MH+ 258. Producto intermedio 47: 2-cloro-9-[(3ft)-tetrahidropiran-3-il]-7W-purin-8-ona
Figure imgf000039_0001
Se añadió azida de difenilfosforilo (0.674 mL, 3.13 mmol) en una porción a una disolución de ácido 2-cloro-4-[[(3R)-tetrahidropiran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxílico (806 mg, 3.13 mmol) y trietilamina (0.436 mL, 3.13 mmol) en THF (17.3 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 24 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se vertió en agua (20 mL). Se concentró parcialmente la mezcla resultante a vacío y se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua, se secó al aire durante 2 h, luego a vacío durante la noche a 45°C produciendo el compuesto del título (565 mg, 71%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,64 - 1,83 (2H, m), 1,93 (1H, d), 2,4 - 2,49 (1H, m), 3,35 (1H, dd), 3,8 - 3,92 (3H, m), 4,21 - 4,36 (1H, m), 8,13 (1H, s), 11,64 (1H, s); m/z MH+ 255.
Producto intermedio 48: 2-cloro-7-metil-9-[(3ft)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-ona
Figure imgf000039_0002
Se añadió en porciones hidruro de sodio (60%) (133 mg, 3,33 mmol) a 2-cloro-9-[(3R)-tetrahidropiran-3-il]-7H-purin-8-ona (565 mg, 2,22 mmol) en DMF (5,13 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción durante 30 min luego se añadió gota a gota yodometano (0,42 mL, 6,66 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a 0°C durante 1 h, luego se extinguió con agua (50 mL) y se aisló el precipitado resultante mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (535 mg, 90%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,73 (2H, dddd), 1,94 (1H, d), 2,41 - 2,49 (1H, m), 3,36 (4H, s), 3,81 -3,92 (3H, m), 4,24 - 4,36 (1H, m), 8,36 (1H, s); m/z MH+ 269.
Producto intermedio 49: 2-cloro-4-[(4-oxociclohexil)amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000039_0003
Se añadió gota a gota DIPEA (4,19 mL, 24,0 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (4,42 g, 20,0 mmol) y clorhidrato de 4-aminociclohexan-1-ona (2,99 g, 20,0 mmol) en acetonitrilo (100 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 2 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta luego se agitó a ta durante 16 h, luego se concentró a vacío y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 5% en DCM, produciendo el compuesto del título (3,42 g, 57%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 1,41 (3H, t), 1,82 - 1,97 (2H, m), 2,28 - 2,41 (2H, m), 2,44 -2,62 (4H, m), 4,38 (2H, q), 4,52 - 4,66 (1H, m), 8,51 - 8,59 (1H, m), 8,71 (1H, s); m/z MH+ 298.
Producto intermedio 50: Ácido 2-cloro-4-((4-oxociclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000040_0001
Se añadió LiOH (0,502 g, 20,96 mmol) en una porción a 2-cloro-4-[(4-oxociclohexil)amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo (3,12 g, 10,48 mmol) en THF (25 mL) y agua (25 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 48 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (20 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (2,80 g, 99%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,80 - 1,98 (2H, m), 2,11 - 2,31 (4H, m), 2,50 - 2,63 (2H, m), 4,38 - 4,52 (1H, m), 8,62 (2H, d), 13,81 (1H, s); m/z MH+ 270.
Producto intermedio 51: 2-cloro-9-(4-oxociclohexil)-7,9-dihidro-8W-purrn-8-ona
Figure imgf000040_0002
Se añadió azida de difenilfosforilo (4,00 mL, 18,54 mmol) en una porción a ácido 2-cloro-4-((4-oxociclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico (5,00 g, 18,54 mmol) y EfeN (2,58 mL, 18,54 mmol) en THF (80 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 40% en DCM, produciendo el compuesto del título (3,50 g, 71%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,03 - 2,14 (2H, m), 2,25 - 2,35 (2H, m), 2,54 - 2,64 (2H, m), 2,64 - 2,77 (2H, m), 4,72 - 4,85 (1H, m), 8,15 (1H, s), 11,65 - 11,71 (1H, m); m/z MH+ 267.
Producto intermedio 52: 2-cloro-7-metil-9-(4-oxociclohexil)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000040_0003
Se añadió NaH (0,525 g, 13,12 mmol) en una porción a 2-cloro-9-(4-oxociclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (3,50 g, 13,12 mmol) en Dm F (50 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 30 min. Se añadió Mel (2,462 mL, 39,37 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se vertió en agua (150 mL). Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (50 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (3,30 g, 90%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, Dm SO) 2,03 - 2,14 (2H, m), 2,26 - 2,37 (2H, m), 2,53 - 2,65 (2H, m), 2,65 - 2,77 (2H, m), 3,37 (3H, s), 4,76 - 4,89 (1H, m), 8,38 (1H, s); m/z MH+ 281.
Producto intermedio 53: 2-cloro-9-(4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000040_0004
Se añadió bromuro de metilmagnesio (3 M, 0,89 mL, 2,67 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-(4-oxociclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (500 mg, 1,78 mmol) en THF (10 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 4 h, luego se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante cromatografía ultrarrápida C18, gradiente de elución de MeOH del 0 al 100% en agua, produciendo el compuesto del título (400 mg, 76%) como un sólido blanco (mezcla de diastereoisómeros); 1H-RMN (diastereoisómero principal) (300 MHz, CDCb) 1,30 (3H, s), 1,47 (1H, s), 1,51 - 1,92 (6H, m), 2,44 - 2,83 (2H, m), 3,44 (3H, s), 4,26 - 4,50 (1H, m), 8,01 (1H, s); m/z MH+ 297.
Producto intermedio 54: 2-cloro-4-(((ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)amino)-pirimidin-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000041_0001
Se añadió gota a gota DIPEA (8,76 mL, 50,31 mmol) a una mezcla de (1s,4s)-4-amino-1-metilciclohexan-1-ol (5,00 g, 38,70 mmol) y 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (8,55 g, 38,70 mmol) en acetonitrilo (143 mL) a -5°C a lo largo de un periodo de 15 min bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h, luego se dejó que se calentara lentamente hasta ta, se concentró a vacío, se diluyó con EtOAc (200 mL), y se lavó con agua luego con salmuera sat.. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío. Se suspendió l mezcla en bruto resultante en DCM (20 mL), y se aisló el sólido resultante mediante filtración y se lavó con DCM (5 mL) produciendo el compuesto del título (3,8 g). Se purificó el filtrado mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 70% en n-heptano, produciendo el compuesto del título adicional (5,3 g). Se combinaron ambos lotes produciendo el compuesto del título (9,10 g, 75%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,13 (3H, s), 1,32 (3H, t), 1,43 (2H, td), 1,53 - 1,61 (2H, m), 1,69 (4H, tt), 3,85 - 3,99 (1H, m), 4,15 (1H, s), 4,32 (2H, q), 8,27 (1H, d), 8,62 (1H, s); m/z MH+ 314.
Producto intermedio 55: Ácido 2-cloro-4-(((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000041_0002
Se añadió hidróxido de litio hidratado (2,17 g, 51,63 mmol) en una porción a 2-cloro-4-(((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)amino)-pirimidin-5-carboxilato de etilo (8,10 g, 25,81 mmol) en t Hf (97 mL) y agua (32,3 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se concentró parcialmente a vacío, y se acidificó con Hcl ac. 2 M, y se aisló el sólido resultante mediante filtración produciendo el compuesto del título (7,35 g, 100%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,13 (3H, s), 1,43 (2H, td), 1,52 - 1,75 (6H, m), 3,89 (1H, qd), 4,15 (1H, s), 8,50 (1H, d), 8,58 (1H, s), 13,75 (1H, s); m/z MH+ 286.
Producto intermedio 56: 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000041_0003
Se añadió azida de difenilfosforilo (4,79 mL, 22,22 mmol) en una porción a una disolución de ácido 2-cloro-4-(((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico (6,35 g, 22,22 mmol) y trietilamina (3,10 mL, 22,22 mmol) en THF (123 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 24 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se vertió en agua (100 mL). Se concentró parcialmente la mezcla resultante a vacío, y se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua, luego se secó a vacío a 45°C produciendo el compuesto del título (5,39 g, 86%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,15 (3H, s), 1,39 - 1,52 (4H, m), 1,66 (2H, d), 2,54 - 2,71 (2H, m), 4,10 (2H, qd), 8,11 (1H, s), 11,55 (1H, s); m/z MH+ 283.
Producto intermedio 57: 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000042_0001
Se añadió hidróxido de sodio ac. 2 M (37,5 mL, 74,98 mmol) en una porción a 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (4,24 g, 15,00 mmol) y yodometano (4,69 mL, 74,98 mmol) en THF (73,2 mL) a ta bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se concentró parcialmente a vacío. Se aisló el precipitado blanco resultante mediante filtración, se lavó con agua y se secó a vacío a 45°C produciendo el compuesto del título (3,64 g, 82%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,15 (3H, s), 1,47 (4H, d), 1,66 (2H, d), 2,58 -2,65 (2H, m), 3,36 (3H, s), 4,1 - 4,19 (2H, m), 8,33 (1H, s); m/z MH+ 297.
Producto intermedio 58: 2-cloro-4-(((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)ammo)-pirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000042_0002
Se añadió gota a gota DIPEA (17,53 mL, 100,62 mmol) a una mezcla de (1/',4/')-4-amino-1-metilciclohexan-1-ol (10,00 g, 77,40 mmol) y 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (17,11 g, 77,40 mmol) en acetonitrilo (300 mL) a -5°C a lo largo de 5 min bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción durante 18 h, dejando que se calentara lentamente hasta ta, luego se concentró a vacío, se diluyó con EtOAc (200 mL), y se lavó con agua luego con salmuera sat. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (17,85 g, 74%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,16 (3H, s), 1,32 (3H, t), 1,46 - 1,58 (6H, m), 1,82 - 1,94 (2H, m), 4,06 (1H, dq), 4,26 (1H, s), 4,32 (2H, q), 8,45 (1H, d), 8,61 (1H, s); m/z MH+ 314.
Producto intermedio 59: Ácido 2-cloro-4-(((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000042_0003
Se añadió hidróxido de litio hidratado (4,77 g, 113,77 mmol) en una porción a 2-cloro-4-(((1/',4/')-4-hidroxi-4-metilciclohexil)amino)-pirimidin-5-carboxilato de etilo (17,85 g, 56,89 mmol) en THF (213 mL) y agua (71,1 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración produciendo el compuesto del título (14,78 g, 91%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,16 (3H, s), 1,43 - 1,56 (6H, m), 1,89 (2H, dt), 3,96 - 4,12 (1H, m), 4,26 (1H, s), 8,58 (1H, s), 8,69 (1H, d), 13,73 (1H, s); m/z MH+ 286.
Producto intermedio 60: 2-cloro-9-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000042_0004
Se añadió azida de difenilfosforilo (11.15 mL, 51.73 mmol) en una porción a una disolución de ácido 2-cloro-4-(((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilcidohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico (14.78 g, 51.73 mmol) y trietilamina (7.21 mL, 51.73 mmol) en THF (286 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a 80°C durante 24 h., luego se dejó que se enfriara hasta ta luego se vertió en agua (200 mL). Se concentró parcialmente la mezcla resultante a vacío. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua y se secó a vacío a 45°C produciendo el compuesto del título (12,53 g, 86%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,27 (3H, s), 1,53 (2H, td), 1,6 - 1,72 (4H, m), 2,24 - 2,44 (2H, m), 4,15 (1H, tt), 4,41 (1H, s), 8,12 (1H, s), 11,60 (1H, s); m/z MH+ 283.
Producto intermedio 61: 2-cloro-9-((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000043_0001
Se añadió hidróxido de sodio 2 M (44,8 mL, 89,66 mmol) en una porción a 2-cloro-9-((1/',4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (5,07 g, 17,93 mmol) y yodometano (5,61 mL, 89,66 mmol) en THF (88 mL) a ta bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 5 h, luego se concentró parcialmente a vacío. Se aisló el sólido resultante mediante filtración, se lavó con agua y se secó a vacío 45°C produciendo el compuesto del título (4,00 g, 75%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,27 (3H, s), 1,46 - 1,6 (2H, m), 1,67 (4H, d), 2,33 (2H, ddd), 3,36 (3H, s), 4,19 (1H, ddt), 4,45 (1H, s), 8,35 (1H, s); m/z MH+ 297.
Producto intermedio 62: 2-cloro-4-((4-hidroxi-1-metilciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000043_0002
Se añadió gota a gota DIPEA (4,28 mL, 24,49 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (2,46 g, 11,13 mmol) y clorhidrato de 4-amino-4-metil-ciclohexanol (2,00 g, 11,13 mmol) en acetonitrilo (40 mL) a 0°C a lo largo de 5 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta, luego se agitó a ta durante 6 h y se concentró a vacío, se diluyó con EtOAc (300 mL) y se lavó con salmuera sat. (100 mL x 2). Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 20% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (2,82 g, 81%) como una goma de color amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,36 - 1,44 (3H, m), 1,44 - 1,58 (6H, m), 1,57 - 1,71 (1H, m), 1,72 - 2,13 (3H, m), 2,41 - 2,54 (2H, m), 3,63 - 3,75 (1H, m), 4,30 - 4,42 (2H, m), 8,52 - 8,59 (1H, m), 8,67 (1H, d); m/z MH+ 314.
Producto intermedio 63: Ácido 2-cloro-4-((4-hidroxi-1-metilciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000043_0003
Se añadió LiOH (0,43 g, 17,97 mmol) en una porción a 2-cloro-4-((4-hidroxi-1-metilciclohexil)amino)pirimidin-5-carboxilato de etilo (2,82 g, 8,99 mmol) en THF (25 mL) y agua (25 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 5 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac 2 M. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (20 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (2,17 g, 85%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,18 - 1,32 (2H, m), 1,34 - 1,52 (5H, m), 1,52 - 1,79 (2H, m), 2,21 - 2,30 (2H, m), 3,37 - 3,49 (1H, m), 4,55 (1H, s), 8,59 (1H, d), 8,74 (1H, s), 13,85 (1H, s); m/z MH+ 286.
Producto intermedio 64: 2-cloro-9-(4-hidroxM-metilciclohexil)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000044_0001
Se añadió azida de difenilfosforilo (1,64 mL, 7,59 mmol) en una porción a ácido 2-cloro-4-((4-hidroxi-1-metilcidohexil)amino)pirimidin-5-carboxílico (2,17 g, 7,59 mmol) y Et3N (1,06 mL, 7,59 mmol) en THF (20 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 2 días, luego se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en DCM, produciendo el compuesto del título (1,79 g, 83%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,09 - 1,25 (2H, m), 1,34 - 1,64 (5H, m), 1,65 - 1,77 (2H, m), 3,17 (2H, d), 3,41 - 3,57 (1H, m), 4,07 - 4,15 (1H, m), 8,10 (1H, d), 11,61 (1H, s); miz MH+ 283.
Productos intermedios 65 y 66: 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxM-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona y 2-cloro-9-((1r,4r)-4-hidroxi-1 -metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purm-8-ona
Figure imgf000044_0002
Se añadió una disolución de NaOH (1,27 g, 31,66 mmol) en agua (24 mL) a una mezcla con agitación de 2-cloro-9-(4-hidroxi-1-metilciclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (1,79 g, 6,33 mmol), yodometano (1,97 mL, 31,66 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio (0,204 g, 0,63 mmol) en DCM (40 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se extrajo con DCM (3 x 50 mL). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 40% en DCM, produciendo los compuestos del título:
Producto minoritario 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxi-1-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (0,26 g, 14%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 1,66 (3H, s), 1,67 - 1,85 (4H, m), 2,19 - 2,31 (2H, m), 2,91 - 3,02 (2H, m), 3,41 (3H, s), 3,89 - 3,99 (1H, m), 7,99 (1H, s), falta un protón intercambiable; miz MH+ 297. Producto principal 2-cloro-9-((1/',4/')-4-hidroxi-1-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (1,440 g, 77%) como un sólido blanco.; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 1,42 - 1,50 (2H, m), 1,51 (3H, s), 1,58 - 1,88 (2H, m), 1,88 -2,00 (2H, m), 3,40 (3H, s), 3,52 - 3,63 (2H, m), 3,72 - 3,84 (1H, m), 7,99 (1H, s), falta un protón intercambiable; miz MH+ 297.
Producto intermedio 67: 2-cloro-7-metil-9-(1-metil-4-oxociclohexil)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000044_0003
Se añadió peryodinano de Dess-Martin (1,07 g, 2,53 mmol) a 2-cloro-9-((1r,4r)-4-hidroxi-1-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin- 8-ona (0,50 g, 1,68 mmol) en DCM (10 ml). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 4 h, luego se extinguió con NaHCO3 ac. sat. (20 mL) y se extrajo con DCM (3 x 20 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron al vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante cromatografía ultrarrápida C18-ultrarrápida, gradiente de elución de MeOH del 0 al 50% en agua, produciendo el compuesto del título (0,43 g, 87%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,52 (3H, s), 1,88 - 2,05 (2H, m), 2,11 - 2,25 (2H, m), 2,37 - 2,49 (2H, m), 3,34 (3H, s), 3,45 - 3,60 (2H, m), 8,37 (1H, s); miz MH+ 295.
Producto intermedio 68: 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxM-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000045_0001
Se añadió borohidruro de sodio (135 mg, 3,56 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-(1-metil-4-oxociclohexil)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (700 mg, 2,37 mmol) en MeOH (15 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h a ta luego se extinguió con NH4Cl ac. sat. (1 mL) y se concentró a vacío. Se purificó la mezcla en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de DCM del 0 al 40% en EtOAc, produciendo el compuesto del título (50 mg, 7%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,43 - 1,53 (5H, m), 1,54 - 1,65 (2H, m), 2,01 - 2,13 (2H, m), 2,79 - 2,84 (2H, m), 3,32 (3H, s), 3,59 - 3,70 (1H, m), 4,51 (1H, d), 8,33 (1H, s); m/z MH+ 297.
Producto intermedio 69: 2-cloro-4-[[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]ammo]pirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000045_0002
Se añadió DIPEA (4,74 mL, 27,14 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (5,00 g, 22,62 mmol) y (R)-tetrahidrofuran-3-amina (1,97 g, 22,62 mmol) en MeCN (100 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 4 h, luego se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 9% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (4,90 g, 80%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 1,40 (3H, t), 1,80 - 1,98 (1H, m), 2,29 - 2,46 (1H, m), 3,69 - 3,78 (1H, m), 3,79 - 3,93 (1H, m), 3,95 - 4,05 (2H, m), 4,36 (2H, q), 4,68 - 4,90 (1H, m), 8,55 (1H, s), 8,66 - 8,71 (1H, m); m/z MH+ 272.
Producto intermedio 70: Ácido 2-cloro-4-[[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]ammo]pirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000045_0003
Se añadió una disolución de LiOH (0,864 g, 36,07 mmol) en agua (40,0 mL) a una disolución con agitación de 2-cloro-4-[[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo (4,90 g, 18,03 mmol) en THF (40 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 3 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (20 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (3,90 g, 89%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, CDCls) 2,01 - 2,14 (1H, m), 2,40 - 2,54 (1H, m), 3,89 - 4,23 (4H, m), 5,01 - 5,13 (1H, m), 8,78 (1H, s), 9,08 (1H, d), no se observó un protón intercambiable; m/z MH+ 244.
Producto intermedio 71: 2-cloro-9-[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]-7H-purm-8-ona
Figure imgf000045_0004
Se añadió azida de difenilfosforilo (3,45 mL, 16,01 mmol) a ácido 2-cloro-4-[[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxílico (3,90 g, 16,01 mmol) y trietilamina (2,23 mL, 16,01 mmol) en THF (70 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 24 h, luego se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en DCM, produciendo el compuesto del título (3,20 g, 83%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,16 - 2,30 (1H, m), 2,35 - 2,48 (1H, m), 3,81 - 3,94 (2H, m), 3,94 - 4,02 (1H, m), 4,05 - 4,15 (1H, m), 4,91 - 5,03 (1H, m), 8,14 (1H, s), 11,68 (1H, s); m/z MH+ 241.
Producto intermedio 72: 2-cloro-7-metil-9-[(3ft)-tetrahidro-3-furaml]-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000046_0001
Se añadió NaH (0,532 g, 13,30 mmol) a 2-cloro-9-[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]-7H-purin-8-ona (3,2 g, 13,30 mmol) en DMF (40 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a 0°C durante 1 h, luego se añadió MeI (5,66 g, 39,89 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 5 h, luego se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en DCM, produciendo el compuesto del título (3,20 g, 94%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (300 MHz, MeOD) 2,28 - 2,47 (1H, m), 2,50 - 2,67 (1H, m), 3,46 (3H, s), 3,94 - 4,15 (3H, m), 4,23 - 4,37 (1H, m), 5,08 - 5,24 (1H, m), 8,23 (1H, s); m/z MH+ 255.
Producto intermedio 73: 2-cloro-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000046_0002
Se añadió gota a gota DIPEA (4,74 mL, 27,14 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (5 g, 22,62 mmol) y (S)-tetrahidrofuran-3-amina (1,97 g, 22,62 mmol) en acetonitrilo (100 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 2 min. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta luego se agitó a ta durante 16 h y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 5% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (4,60 g, 75%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz , DMSO) 1,32 (3H, t), 1,83 - 1,95 (1H, m), 2,21 - 2,35 (1H, m), 3,61 - 3,69 (1H, m), 3,69 - 3,92 (3H, m), 4,27 - 4,37 (2H, m), 4,57 - 4,68 (1H, m), 8,44 (1H, d), 8,63 (1H, s); m/z MH+ 272.
Producto intermedio 74: Ácido 2-cloro-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000046_0003
Se añadió LiOH (0,811 g, 33,86 mmol) en una porción a 2-cloro-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo (4,60 g, 16,93 mmol) en THF (50 mL) y agua (25 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta, se agitó a ta durante 2 h, se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (20 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (3,50 g, 85%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,81 - 1,93 (1H, m), 2,21 - 2,35 (1H, m), 3,60 - 3,68 (1H, m), 3,69 - 3,94 (3H, m), 4,56 - 4,68 (1H, m), 8,63 (2H, d), 13,84 (1H, s); m/z MH+ 244.
Producto intermedio 75: 2-cloro-9-[(3S)-tetrahidro-3-furaml]-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000046_0004
Se añadió azida de difenilfosforilo (3,10 mL, 14,37 mmol) en una porción a ácido 2-cloro-4-[[(3S)-tetrahidrofuran-3-il]amino]pirimidin-5-carboxílico (3,5 g, 14,4 mmol) y Et3N (2,00 mL, 14,4 mmol) en THF (100 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 2 días. Se eliminó el disolvente a presión reducida. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en éter de petróleo, produciendo el compuesto del título (3,20 g, 93%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,16 - 2,32 (1H, m), 2,35 - 2,48 (1H, m), 3,81 - 3,92 (2H, m), 3,97 (1H, t), 4,10 (1H, q), 4,91 - 5,03 (1H, m), 8,14 (1H, s), 11,66 (1H, s); m/z MH+ 241.
Producto intermedio 76: 2-cloro-7-metil-9-[(3S)-tetrahidro-3-furaml]-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000047_0001
Se añadió NaH (0,532 g, 13,30 mmol) en una porción a 2-cloro-9-[(3S)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (3,2 g, 13,30 mmol) en DMF (30 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min. Se añadió Mel (2,49 mL, 39,9 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se extinguió con agua (5 mL) y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 40% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (2,90 g, 86%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,18 - 2,32 (1H, m), 2,35 - 2,48 (1H, m), 3,36 (3H, s), 3,82 - 3,94 (2H, m), 3,98 (1H, t), 4,11 (1H, q), 4,95 - 5,07 (1H, m), 8,36 (1H, s); m/z MH+ 255. Producto intermedio 77: 2-cloro-4-[(1,1-dioxotian-4-il)amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000047_0002
Se añadió gota a gota DIPEA (7,68 mL, 44,0 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (4,42 g, 20,0 mmol) y clorhidrato de 1, 1 -dióxido de 4-aminotetrahidro-2H-tiopirano (3,71 g, 20,0 mmol) en acetonitrilo (80 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 5 min. Se agitó la mezcla resultante a ta durante 6 h, luego se concentró a vacío, se diluyó con EtOAc (500 mL), y se lavó con salmuera sat. (100 mL x 2). Se aisló la fase orgánica y se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 6% en DCM, produciendo el compuesto del título (2,40 g, 36%) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, CDCb) 1,42 (3H, t), 2,23 - 2,38 (2H, m), 2,40 - 2,51 (2H, m), 3,10 - 3,27 (4H, m), 4,34 - 4,50 (3H, m), 8,57 (1H, d), 8,73 (1H, s); m/z MH+ 334.
Producto intermedio 78: Ácido 2-cloro-4-[(1,1-dioxotian-4-il)amino]pirimidin-5-carboxílico
Figure imgf000047_0003
Se añadió LiOH (0,344 g, 14,38 mmol) en una porción a 2-cloro-4-[(1,1-dioxotian-4-il)amino]pirimidin-5-carboxilato de etilo (2,40 g, 7,19 mmol) en THF (25 mL) y agua (25 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 5 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (50 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (2,08 g, 95%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,00 - 2,15 (2H, m), 2,18 - 2,30 (2H, m), 3,02 - 3,14 (2H, m), 3,34 - 3,55 (2H, m), 4,27 - 4,42 (1H, m), 8,57 (1H, d), 8,61 (1H, s), 13,84 (1H, s); m/z MH+ 306.
Producto intermedio 79: 2-cloro-9-(1,1-dioxotian-4-il)-7W-purin-8-ona
Figure imgf000048_0001
Se añadió azida de difenilfosforilo (1,46 mL, 6,80 mmol) en una porción a ácido 2-cloro-4-[(1,1-dioxotian-4-il)amino]pirimidin-5-carboxílico (2,08 g, 6,80 mmol) y trietilamina (0,948 mL, 6,80 mmol) en THF (40 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a 80°C durante 2 días, luego se vertió en agua (75 mL). Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (25 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (1,72 g, 84%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,05 - 2,15 (2H, m), 2,81 - 3,03 (2H, m), 3,07 - 3,23 (2H, m), 3,43 - 3,56 (2H, m), 4,59 - 4,72 (1H, m), 8,15 (1H, s), 11,69 (1H, s); miz MH+ 303.
Producto intermedio 80: 2-cloro-9-(1,1-dioxidotetrahidro-2W-tiopiran-4-il)-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000048_0002
Se añadió NaH (0,337 g, 8,42 mmol) en una porción a 2-cloro-9-(1,1-dioxotian-4-il)-7H-purin-8-ona (1,70 g, 5,62 mmol) en DMF (25 mL) a ta, y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min. Se añadió Mel (0,53 mL, 8,42 mmol), y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h, luego se diluyó con agua (50 mL). Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (20 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (1,67 g, 94%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,05 - 2,15 (2H, m), 2,81 - 2,96 (2H, m), 3,09 - 3,21 (2H, m), 3,36 (3H, s), 3,44 - 3,57 (2H, m), 4,64 - 4,77 (1H, m), 8,38 (1H, s); miz MH+ 317.
Producto intermedio 81: 2-cloro-5-mtro-W-(oxetan-3-il)pirimidm-4-amma
Figure imgf000048_0003
Se añadió gota a gota oxetan-3-amina (1,507 g, 20,62 mmol) a 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (4,00 g, 20,62 mmol) y DIPEA (4,67 mL, 26,81 mmol) en DCM (100 mL) a -78°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 2 h, luego se lavó secuencialmente con agua (100 mL) y salmuera sat. (100 mL). Se filtró la fase orgánica a través de un papel de filtro de separación de fases y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 100% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (3,70 g, 78%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 4,71 (2H, t), 4,77 (2H, t), 5,09 (1H, qd), 9,06 (1H, s), 9,34 (1H, d).
Producto intermedio 82: 2-cloro-W4-(oxetan-3-il)pirimidm-4,5-diamma
Figure imgf000048_0004
Se añadió platino (10% sobre carbono) (0,313 g, 1,60 mmol) a 2-cloro-5-nitro-N-(oxetan-3-il)pirimidin-4-amina (3,70 g, 16,04 mmol) en EtOAc (50 mL) a ta. Se purgó la mezcla de reacción con hidrógeno y se agitó bajo hidrógeno a ta durante 18 h. Se diluyó la mezcla de reacción con MeOH (para solubilizar el producto) y se filtró, lavanco el precipitado con MeOH. Se concentraron las fases de MeOH combinadas a vacío produciendo el compuesto del título (3,10 g, 96%) como un sólido blanquecino; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 4,49 (2H, t), 4,83 (2H, t), 4,9 - 5,06 (3H, m), 7,45 (1H, s), 7,50 (1H, d); miz MH+ 201.
Producto intermedio 83: 2-cloro-9-(oxetan-3-il)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000049_0001
Se colocó 2-doro-N4-(oxetan-3-il)p¡rim¡din-4,5-d¡am¡na (3,10 g, 15,45 mmol) en un matraz en THF (100 mL) a ta. Se añadió di(1 H-imidazol-1-il)metanona (4,01 g, 24,72 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a reflujo durante 1 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró parcialmente (~50%) a vacío. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (2,75 g, 79%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 4,77 (2H, dd), 5,24 (2H, t), 5,46 (1H, p), 8,15 (1H, s), 11,68 (1H, s); m/z MH+ 227.
Producto intermedio 84: 2-cloro-7-metil-9-(oxetan-3-il)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000049_0002
Se añadió en porciones hidruro de sodio (60%) (0,73 g, 18,20 mmol) a 2-cloro-9-(oxetan-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona (2,75 g, 12,13 mmol) en DMF (25 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción durante 30 min, luego se enfrió hasta 0°C y se añadió gota a gota yodometano (2,28 mL, 36,40 mmol). Se agitó la disolución resultante a ta durante 1 h. Se vertió la mezcla de reacción en agua, se eliminó mediante filtración el sólido y se secó al compuesto del título (2,80 g, 96%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 3,36 (3H, s), 4,79 (2H, dd), 5,23 (2H, t), 5,50 (1H, p), 8,38 (1H, s); m/z MH+ 241.
Producto intermedio 85: 4-[(1-ferc-butoxicarboml-4-piperidil)ammo]-2-cloro-pirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000049_0003
Se añadió gota a gota DIPEA (20,49 mL, 117,63 mmol) a una mezcla de 4-am¡nop¡per¡d¡n-1-carbox¡lato de terc-butilo (18,12 g, 90,48 mmol) y 2,4-d¡clorop¡r¡m¡d¡n-5-carbox¡lato de etilo (20,00 g, 90,48 mmol) en acetonitrilo (334 mL) a -5°C a lo largo de un periodo de 15 min bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h, dejando que se calentara lentamente hasta ta, luego se concentró a vacío, se diluyó con EtOAc (300 mL), y se lavó con agua luego salmuera sat. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 40% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (24,56 g, 71%) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (3H, t), 1,41 (9H, s), 1,43 - 1,53 (2H, m), 1,84 - 1,91 (2H, m), 2,9 - 3,03 (2H, m), 3,87 (2H, d), 4,17 (1H, ddt), 4,32 (2H, q), 8,31 (1H, d), 8,64 (1H, s); m/z MH+ 385.
Producto intermedio 86: Ácido 4-((1-(ferc-butoxicarboml)piperidm-4-il)ammo)-2-cloropirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000050_0001
Se añadió hidróxido de litio hidratado (5.36 g, 127.63 mmol) en una porción a 4-[(1-terc-butoxicarbonil-4-piperidil)amino]-2-cloro-pirimidin-5-carboxilato de etilo (24.56 g, 63.82 mmol) en THF (239 mL) y agua (80 mL) a 20°C. Se agitó la disolución resultante a 25°C durante 3 h.Se eliminó el disolvente orgánico a presión reducida. Se acidificó la mezcla resultante con HCl 2 M. Se filtró el sólido blanco resultante produciendo el compuesto del título (22.72 g, 100%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1.37 - 1.51 (11H, m), 1.89 (2H, dd), 2.97 (2H, s), 3.86 (2H, d), 4.14 (1H, qd), 8.56 (1H, d), 8.60 (1H, s); miz MH+ 357.
Producto intermedio 87: 4-(2-doro-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purm-9-il)piperidm-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000050_0002
Se añadió azida de difenilfosforilo (13.72 mL, 63.68 mmol) en una porción a una disolución de ácido 4-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)amino)-2-cloropirimidin-5-carboxílico (22.72 g, 63.68 mmol) y trietilamina (8.88 mL, 63.68 mmol) en THF (352 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 24 h, se dejó que se enfriara hasta ta, luego se vertió en agua (200 mL) y se concentró parcialemnte a vacío. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (23,56 g, 105%) como un sólido blanco que se usó en la siguiente etapa sin purificación; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,44 (9H, s), 1,68 - 1,8 (2H, m), 2,19 - 2,36 (2H, m), 2,87 (2H, s), 4,07 (2H, d), 4,38 (1H, tt), 8,14 (1H, s), 11,63 (1H, s); miz MH+ 354.
Producto intermedio 88: 4-(2-doro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purm-9-il)piperidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000050_0003
Se añadió NaOH ac. 2 M (159 mL, 317,97 mmol) en una porción a 4-(2-cloro-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (22,50 g, 63,59 mmol) y yodometano (19,88 mL, 317,97 mmol) en THF (310 mL) a ta bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se concentró parcialmente a vacío. Se recogió el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua y se secó a vacío a 45°C produciendo el compuesto del título (17,98 g, 77%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,44 (9H, s), 1,7 - 1,78 (2H, m), 2,26 (2H, qd), 2,88 (2H, s), 3,36 (3H, s), 4,07 (2H, d), 4,42 (1H, tt), 8,36 (1H, s); miz MH+ 368.
Producto intermedio 89: Clorhidrato de 2-doro-7-metil-9-(piperidm-4-il)-7,9-dihidro-8W-purm-8-ona
Figure imgf000051_0001
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (6,80 mL, 27,19 mmol) a 4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (2,0 g, 5,44 mmol) en metanol (25 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h, luego se concentró a vaeío. Se trituró el sólido resultante con EtOAc y una pequeña cantidad de metanol produciendo el compuesto del título (1,61g, 97%) como la sal de HCl; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,97 (2H, d), 2,58 (2H, dd), 3,04 - 3,16 (2H, m), 3,37 (3H, s), 3,41 (2H, d), 4,58 (1H, ddd), 8,39 (1H, s), 8,52 (1H, s), 9,08 (1H, s); m/z MH+ 268.
Producto intermedio 90: 2-cloro-7-metil-9-(1-metilpiperidm-4-il)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000051_0002
Se añadió formaldehído (37% en agua) (0,20 mL, 2,72 mmol) en una porción a 4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo (500 mg, 1,36 mmol) en ácido fórmico (2 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 55°C durante 18 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se concentró a vaeío, y se tomó en NaHCO3 ac. sat. (20 mL) y EtOAc (20 mL). Se aisló la fase orgánica y se hizo pasar a través de un filtró de separación de fases y se concentró a vaeío produciendo el compuesto del título (200 mg, 52%) como un sólido crema; 1H-Rm N (400 MHz, DMSO) 1,62 - 1,72 (2H, m), 1,94 - 2,04 (2H, m), 2,21 (3H, s), 2,45 (2H, td), 2,85 - 2,93 (2H, m), 3,36 (3H, s), 4,1 - 4,23 (1H, m), 8,35 (1H, s); m/z MH+ 282.
Producto intermedio 91: 9-(1-acetilpiperidm-4-il)-2-cloro-7-metil-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000051_0003
Se añadió cloruro de acetilo (0,472 mL, 6,62 mmol) en DCM (5 mL) a trietilamina (2,51 mL, 18,04 mmol) y clorhidrato de 2-cloro-7-metil-9-(piperidin-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (1,61 g, 5,29 mmol) en DCM (50 mL) a 0°C y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Se diluyó la mezcla de reacción con DCM (50 mL), se lavó secuencialmente con agua (50 mL) y salmuera sat. (40 mL). Se aisló la fase orgánica y se hizo pasar a través de un filtró de separación de fases y se concentró a vaeío produciendo el compuesto del título (1,36 g, 83%) como un sólido beige; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,80 (2H, t), 2,06 (3H, s), 2,18 (1H, qd), 2,26 - 2,38 (1H, m), 2,66 (1H, t), 3,20 (1H, t), 3,36 (3H, s), 3,96 (1H, d), 4,4 - 4,6 (2H, m), 8,37 (1H, s); m/z MH+ 310.
Producto intermedio 92: (4-(bencilamino)-1-metilciclohexil)carbamato de tere-butilo
Figure imgf000051_0004
Se añadió bencilamina (2,309 mL, 21,12 mmol) en una porción a (1-metil-4-oxociclohexil)carbamato de tere-butilo (4 g, 17,60 mmol) en DCM (45 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h. Se añadieron triacetoxiborohidruro de sodio (7,46 g, 35,20 mmol) y AcOH (0,050 mL, 0,88 mmol), y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se extinguió con Na2CO3 ac. sat. (100 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 mL). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (5,60 g, 100%) como un aceite incoloro; 1H-RMN (300 MHz, CDCh) 1,17 - 1,54 (15H, m), 1,73 - 1,89 (3H, m), 2,00 - 2,16 (1H, m), 2,44 - 2,69 (1H, m), 3,80 (2H, d), 4,40 - 4,49 (1H, m), 7,18 - 7,41 (5H, m), NH protones no observados; m/z MH+ 319.
Producto intermedio 93: (4-amino-1-metilciclohexil)carbamato de terc-butilo
Figure imgf000052_0001
Se agitó Pd/C al 10% (1,00 g, 9,40 mmol) y (4-(bencilamino)-1-metilciclohexil)carbamato de terc-butilo (5,60 g, 17,58 mmol) en etanol (50 mL) bajo 3 atm de hidrógeno a ta durante 30 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de Celite® y se concentró a vacío produciendo el compuesto del título (4,06 g, 101%) como un aceite amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, CDCh) 1,26 - 1,34 (5H, m), 1,42 (9H, s), 1,59 - 1,86 (5H, m), 2,00 - 2,12 (1H, m), 2,70-2,75 (1H, m), 3,45 (2H, s), 4,42 (1H, d).
Producto intermedio 94: 4-((4-((terc-butoxicarboml)ammo)-4-metilciclohexil)ammo)-2-cloropirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000052_0002
Se añadió gota a gota DIPEA (3,69 mL, 21,12 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (3,89 g, 17,60 mmol) y (4-amino-1-metilciclohexil)carbamato de terc-butilo (4,02 g, 17,6 mmol) en acetonitrilo (80 mL) a 0°C a lo largo de un periodo de 2 min. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 10% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (6,0 g, 83%) como una goma de color amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, CDCh) 1,33 - 1,43 (6H, m), 1,43 - 1,64 (11H, m), 1,70 - 1,82 (1H, m), 1,85 - 2,01 (4H, m), 2,17 (1H, s), 4,07-4,24 (2H, m), 4,30 - 4,42 (2H, m), 8,24 - 8,57 (1H, m), 8,67 (1H, s); m/z MH+ 413.
Producto intermedio 95: Ácido 4-((4-((terc-butoxicarboml)ammo)-4-metilciclohexil)ammo)-2-cloropirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000052_0003
Se añadió LiOH (0,696 g, 29,06 mmol) en una porción a 4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilciclohexil)amino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (6,0 g, 14,5 mmol) en THF (50 mL) y agua (50 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 5 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (20 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (5,24 g, 94%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,16 - 1,63 (16H, m), 1,67 - 1,89 (3H, m), 2,08 - 2,18 (1H, m), 3,82 - 4,08 (1H, m), 6,44 (1H, d), 8,56 (1H, s), 8,57 - 8,82 (1H, m); m/z MH+ 385.
Producto intermedio 96: (4-(2-cloro-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purin-9-il)-1-metilciclohexil)carbamato de terc-butilo
Figure imgf000053_0001
Se añadió azida de difenilfosforilo (2,91 mL, 13,51 mmol) en una porción a ácido 4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilcidohexil)amino)-2-doropirimidin-5-carboxílico (5,20 g, 13,51 mmol) y trietilamina (1,88 mL, 13,51 mmol) en THF (50 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 2 días, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se vertió en agua (150 mL). Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua (25 mL) y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (4.53 g, 88%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1.24 (3H, d), 1.34 -1.51 (10H, m), 1.58 - 1.80 (3H, m), 1.93 (1H, d), 2.27 - 2.46 (3H, m), 4.07 - 4.20 (1H, m), 6.52 (1H, d), 8.12 (1H, d), 11.62 (1H, d); miz MH+ 382.
Producto intermedio 97: (4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purin-9-il)-1-metilciclohexil)carbamato de tercbutilo
Figure imgf000053_0002
Se añadió DMF-DMA (2.01 mL, 15.0 mmol) en una porción a (4-(2-cloro-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)-1-metilciclohexil)carbamato de terc-butilo (1.909 g, 5.00 mmol) en DMF (20 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 6 h, se dejó que se enfriara hasta ta luego se extinguió con agua (100 mL) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 mL). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 30% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (1,540 g, 78%) como un sólido de color amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, CDCh) 1,36 - 1,55 (14H, m), 1,59 - 1,80 (2H, m), 1,99 - 2,09 (1H, m), 2,25 - 2,34 (1H, m), 2,49 - 2,66 (2H, m), 3,45 (3H, d), 4,29 - 4,47 (1H, m), 4,58 (1H, d), 8,01 (1H, d); miz MH+ 396.
Producto intermedio 98: 4-(((3S,4R)-1-(ferc-butoxicarboml)-3-fluoropiperidm-4-il)ammo)-2-cloropirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000053_0003
Se añadió DIPEA (5,19 mL, 29,78 mmol) en porciones a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (5,06 g, 22,91 mmol) y (3S,4R)-4-amino-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (5,00 g, 22,91 mmol) en acetonitrilo (100 mL) a 0°C. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 4 h, luego se concentró a vacío, se diluyó con EtOAc (200 mL) y se lavó secuencialmente con agua (100 mL) y salmuera sat. (100 mL). Se filtró la fase orgánica a través de un papel de filtro de separación de fases y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (4,87 g, 53%) como un sólido cristalino blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (3H, t), 1,41 (9H, s), 1,56 - 1,67 (1H, m), 1,82 (1H, d), 2,93 (1H, s), 4,01 (1H, s), 4,33 (5H, q), 4,86 (1H, d), 8,53 (1H, d), 8,69 (1H, s); miz MH+ 403.
Producto intermedio 99: Ácido 4-(((3S,4R)-1-(ferc-butoxicarboml)-3-fluoropiperidm-4-il)ammo)-2-cloropirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000054_0001
Se añadió hidróxido de litio hidratado (0,99 g, 23,58 mmol) en agua (45 mL) a 4-(((3S,4R)-1-(ferc-butoxicarbonil)-3-fluoropiperidin-4-il)amino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (4,75 g, 11,79 mmol) en THF (45 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h, luego se concentró parcialmente a vacío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se filtró el precipitado resultante, se lavó con agua y se secó proporcionando el compuesto del título (4.24 g, 96%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1.41 (9H, s), 1.60 (2H, d), 1.82 (1H, d), 4.01 (1H, s), 4.18 - 4.49 (3H, m), 4.85 (1H, d), 8.64 (1H, s), 8.79 (1H, s); m/z MH+ 375.
Producto intermedio 100: (3S,4R)-4-(2-cloro-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purm-9-il)-3-fluoropiperidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000054_0002
Se añadió azida de difenilfosforilo (2.44 mL, 11.31 mmol) a ácido 4-(((3S,4R)-1-(ferc-butoxicarbonil)-3-fluoropiperidin-4-il)amino)-2-cloropirimidin-5-carboxílico (4.24 g, 11.31 mmol) y trietilamina (1.58 mL, 11.31 mmol) en THF (75 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a 80°C durante 16 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se añadió agua (150 mL), y se concentró parcialmente a vacío. Se aisló el sólido resultante mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (3.94 g, 94%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1.43 (9H, s), 1.82 (1H, d), 4.09 - 4.37 (4H, m), 4.53 (1H, ddd), 4.82 (2H, d), 8.17 (1H, s), 11.71 (1H, s); m/z MH+ 372.
Producto intermedio 101: (3S,4R)-4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purm-9-il)-3-fluoropiperidm-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000054_0003
Se añadió NaOH ac. 2 M (23.13 mL, 46.26 mmol) en una porción a (3S,4R)-4-(2-cloro-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (3.44 g, 9.25 mmol) y yodometano (2.89 mL, 46.26 mmol) en THF (50 mL) a ta bajo aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se concentró a vacío y se diluyó con agua (50 mL). Se aisló el precipitado resultante mediante filtración y se lavó con agua produciendo el compuesto del título (2,08 g, 58%) como un sólido de color naranja pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,43 (9H, s), 1,82 (1H, d), 3,03 - 3,15 (2H, m), 3,38 (3H, s), 4,09 - 4,36 (3H, m), 4,58 (1H, ddt), 4,82 (1H, d), 8,39 (1H, s); m/z MH+ 386.
Producto intermedio 102: 4-[[(3R)-1-fere-butoxicarbomlpirrolidm-3-il]ammo]-2-cloropirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000055_0001
Se añadió gota a gota DIPEA (6,59 mL, 37,83 mmol) a una mezcla de RJ-3-aminopirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo (5,42 g, 29,10 mmol) y 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (6,43 g, 29,10 mmol) en acetonitrilo (108 mL) a -5°C a lo largo de un periodo de 15 min bajo aire. Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h, dejando que se calentara lentamente hasta ta. Se concentró la mezcla de reacción a vaeío, se diluyó con EtOAc (100 mL), y se lavó con agua luego salmuera sat.. Se secó la fase orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a vaeío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, eluyendo con EtOAc al 0-70% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (7,92 g, 73%) como un sólido amarillo pálido. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (3H, t), 1,41 (9H, s), 1,92 - 2,03 (1H, m), 2,19 (1H, s), 3,21 (1H, dd), 3,37 (2H, t), 3,62 (1H, dd), 4,32 (2H, q), 4,59 (1H, s), 8,39 (1H, d), 8,65 (1H, s); m/z MH+ 371.
Producto intermedio 103: Ácido 4-[[(3R)-1-terc-butoxicarbomlpirrolidm-3-il]ammo]-2-cloro-pirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000055_0002
Se añadió hidróxido de litio hidratado (1,79 g, 42,71 mmol) en una porción a 4-[[(3R)-1-fere-butoxicarbonilpirrolidin-3-il]amino]-2-cloro-pirimidin-5-carboxilato de etilo (7,92 g, 21,36 mmol) en THF (80 mL) y agua (26,7 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se concentró parcialmente a vaeío y se acidificó con HCl ac. 2 M. Se aisló el sólido blanco resultante mediante filtración y se secó a vaeío a 45°C produciendo el compuesto del título (7,07 g, 97%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,41 (9H, s), 1,95 (1H, s), 2,19 (1H, s), 3,20 (1H, dd), 3,37 (2H, t), 3,62 (1H, dd), 4,57 (1H, s), 8,61 (1H, s), 8,67 (1H, d), 13,80 (1H, s); m/z MH+ 343.
Producto intermedio 104: (3R)-3-(2-cloro-8-oxo-7R-purin-9-il)pirrolidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000055_0003
Se añadió azida de difenilfosforilo (4,44 mL, 20,63 mmol) en una porción a una disolución de ácido 4-[[(3R)-1-ferebutoxicarbonilpirrolidin-3-il] amino]-2-cloro-pirimidin-5-carboxílico (7,07 g, 20,63 mmol) y trietilamina (2,87 mL, 20,63 mmol) en THF (114 mL) a ta. Se agitó la disolución resultante a 80°C durante 24 h. Se dejó que la mezcla se enfriara luego se vertió en agua (100 mL), no se formó ningún precipitado. Se eliminó el disolvente a vaeío provocando la formación de un precipitado blanco en el agua. Se eliminó el precipitado mediante filtración a vacío, se lavó con agua, se secó al aire a vaeío durante 30 minutos, luego se colocó en un horno de vacío durante 4 h a 45°C produciendo el compuesto del título (5,45 g, 78%) como un sólido blanco que se usó en la siguiente etapa sin purificación. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,42 (9H, d), 2,19 (1H, s), 2,50 (1H, s)3,37 (1H, s), 3,53 - 3,67 (2H, m), 3,68 - 3,74 (1H, m), 4,94 (1H, q), 8,14 (1H, s), 11,64 (1H, s); m/z [M-H]- 338.
Producto intermedio 105: (3R)-3-(2-cloro-7-metil-8-oxo-purin-9-il)pirrolidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000056_0001
Se añadió hidróxido de sodio 2 M (36,8 mL, 73,6 mmol) en una porción a (3R)-3-(2-cloro-8-oxo-7H-purin-9-il)pirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo (5,00 g, 14,72 mmol) y yodometano (4,60 mL, 73,58 mmol) en THF (71,8 mL) a ta bajo el aire. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se concentraron parcialmente a vaeío y se extrajo con DCM (100 mL). Se aisló la fase orgánica y se hizo pasar a través de un filtró de separación de fases, luego se concentró a vaeío produciendo el compuesto del título (5,17 g, 99%) como una goma amarilla. 1H-RMN (400 m Hz , DMSO) 1,42 (9H, d), 2,21 (1H, s), 2,53 (1H, d), 3,36 (4H, s), 3,5 - 3,75 (3H, m), 4,91 - 5,07 (1H, m), 8,37 (1H, s); miz MH+ 354.
Producto intermedio 106: 4-[[(3S)-1-ferc-butoxicarbomlpirrolidm-3-il]ammo]-2-cloropirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000056_0002
Se añadió lentamente (S)-3-aminopirrolidin-1-carboxilato de tere-butilo (5,00 g, 26,84 mmol) a 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (5,93 g, 26,84 mmol) y DIPEA (6,08 mL, 34,90 mmol) en acetonitrilo (100 mL) a 0°C. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta y se agitó a ta durante 4 h, luego se concentró a vaeío, se diluyó con EtOAc (200 mL) y se lavó secuencialmente con agua (100 mL) y salmuera sat. (100 mL). Se filtró la fase orgánica a través de un papel de filtro de separación de fases y se concentró a vaeío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 50% en n-heptano, produciendo el compuesto del título (5,40 g, 54%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (3H, t), 1,41 (9H, s), 1,99 (1H, d), 2,19 (1H, s), 3,21 (1H, dd), 3,37 (2H, t), 3,62 (1H, dd), 4,32 (2H, q), 4,59 (1H, s), 8,39 (1H, d), 8,65 (1H, s); miz [M-H]- 369.
Producto intermedio 107: Ácido 4-[[(3S)-1-ferc-butoxicarbomlpirrolidm-3-il]ammo]-2-cloro-pirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000056_0003
Se añadió hidróxido de litio hidratado (1,22 g, 29,12 mmol) en agua (50 mL) a 4-[[(3S)-1-tere-butoxicarbonilpirrolidin-3-il]amino]-2-cloro-pirimidin-5-carboxilato de etilo (5,40 g, 14,56 mmol) en THF (50 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h, luego se concentró parcialmente a vaeío, se acidificó con HCl ac. 2 M, y se extrajo en DCM (100 mL). Se lavó la fase orgánica con salmuera (50 mL), se hizo pasar a través de un papel de filtro de separación de fases y se concentró a vaeío produciendo el compuesto del título (4,95 g, 99%); 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,41 (9H, s), 1,95 (1H, s), 2,19 (1H, s), 3,37 (2H, t), 3,59 - 3,64 (2H, m), 4,57 (1H, s), 8,61 (2H, s), 13,80 (1H, s); miz MH+ 343.
Producto intermedio 108: (3S)-3-(2-cloro-8-oxo-7W-purin-9-il)pirrolidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000057_0001
Se añadió azida de difenilfosforilo (3,08 mL, 14,29 mmol) a ácido 4-[[(3S)-1-terc-butoxicarbonilpirrolidin-3-il]amino]-2-cloropirimidin-5-carboxílico (4,90 g, 14,29 mmol) y trietilamina (1,99 mL, 14,29 mmol) en THF (50 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a reflujo durante 16 h, se dejó que se enfriara hasta ta y se diluyó con agua (100 mL). Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con agua y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (4,35 g, 90%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,41 (9H, s), 2,19 (1H, s), 3,37 (1H, d), 3,5 - 3,67 (3H, m), 3,67 - 3,74 (1H, m), 4,89 - 5,01 (1H, m), 8,14 (1H, s), 11,66 (1H, s); miz MH+ 340.
Producto intermedio 109: (3S)-3-(2-cloro-7-metil-8-oxo-purin-9-il)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000057_0002
Se añadió hidruro de sodio (60%) (0,662 g, 16,55 mmol) en porciones a (3S)-3-(2-cloro-8-oxo-7H-purin-9-il)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (3,75 g, 11,04 mmol) en DMF (30 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción durante 1 h, luego se enfrió hasta 0°C y se añadió gota a gota yodometano (2,07 mL, 33,11 mmol). Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta ta luego se agitó a ta durante 1 h. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (100 mL) y se lavó secuencialmente con agua (3 x 50 mL) y salmuera sat. (50 mL). Se hizo pasar la fase orgánica a través de un papel de filtro de separación de fases y se concentró a vacío. Se trituró el producto en bruto resultante con EtOAc produciendo el compuesto del título (1,65 g, 42%) como un sólido amarillo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,42 (9H, d), 2,21 (1H, s), 2,47 (1H, d), 3,36 (4H, s), 3,61 (2H, d), 3,70 (1H, dd), 4,92 - 5,04 (1H, m), 8,37 (1H, s); miz MH+354.
Producto intermedio 110: 4-(7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purin-9-il)piperidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000057_0003
Se añadió carbonato de cesio (33,4 g, 102,4 mmol) a 7-metilquinolin-6-amina (5,40 g, 34,1 mmol) y 4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (12,56 g, 34,13 mmol) en 2-metiltetrahidrofurano (110 mL). Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla de reacción durante 5 min. Se añadieron 2,2'-Bis(difenilfosfanil)-1, 1 '-binaftaleno (1,06 g, 1,71 mmol) y diacetoxipaladio (0,192 g, 0,85 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 1 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta. Se enfrió la mezcla de reacción hasta ta, se filtró y se lavó el sólido con MeOH al 10% en DCM (100 mL). Se concentró el filtrado a vacío. Se purificó el material en bruto mediante fcc, gradiente de elución del 0 al 100% (MeOH al 10% en EtOAc) en n-heptano, produciendo el compuesto del título (14,70 g, 88%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,35 (9H, s), 1,78 (2H, d), 2,36 (2H, qd), 2,50 (3H, s), 2,84 (2H, s), 3,30 (3H, s), 4,05 - 4,17 (2H, m), 4,37 (1H, tt), 7,38 (1H, dd), 7,84 (1H, s), 8,07 - 8,15 (1H, m), 8,16 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,51 (1H, s), 8,72 (1H, dd); miz MH+ 490.
Producto intermedio 111: (3R)-3-[7-metil-2-[(7-metil-6-qumolil)ammo]-8-oxo-purin-9-il]pirrolidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000058_0001
Se añadió carbonato de cesio (368 mg, 1,13 mmol) en una porción a 7-metilquinolin-6-amina (89 mg, 0,57 mmol) y (3R)-3-(2-cloro-7-metil-8-oxo-purin-9-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (200 mg, 0,57 mmol) en 1,4-dioxano (3,2 mL) a 20°C y se desgasificó burbujeando nitrógeno a través de la mezcla durante 5 minutos. Se añadió Brettphos precat G3 (25,6 mg, 0,03 mmol) y se calentó la reacción a 100°C durante 2 h. Se filtró en caliente la mezcla de reacción y se lavó la copa del filtro con d CM (20 mL). Se evaporó la fase de DCM y se absorbió el residuo en sílice luego se purificó mediante fcc (columna Interchim de 12g), gradiente de elución de MeOH del 0 al 5% en DCM produciendo el compuesto del título (174 mg, 64,7%) como una goma amarilla; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,37 (9H, s), 2,18 (1H, d), 2,5 (3H, s), 2,64 - 2,76 (1H, m), 3,33 (4H, s), 3,53 (1H, s), 3,64 (1H, s), 3,75 (1H, s), 4,96 (1H, s), 7,38 (1H, dd), 7,85 (1H, s), 8,12 (1H, s), 8,18 (1H, s), 8,30 (1H, d), 8,54 (1H, d), 8,73 (1H, dd); miz MH+ 476.
Producto intermedio 112: (3S)-3-[7-metil-2-[(7-metil-6-quinolil)amino]-8-oxo-purin-9-il]pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000058_0002
Se añadió carbonato de cesio (368 mg, 1,13 mmol) a 7-metilquinolin-6-amina (71,5 mg, 0,45 mmol) y (3S)-3-(2-cloro-7-metil-8-oxo-purin-9-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (200 mg, 0,57 mmol) en 1,4-dioxano (5 mL). Se añadió Brettphos precat G3 (25,6 mg, 0,03 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h. Se añadió un adicional del 5% de catalizador Brettphos precat G3 y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó el sólido con d Cm (10 mL). Se concentraron las fases orgánicas combinadas a vacío y se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 10% en DCM, produciendo el compuesto del título (80 mg, 30%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, CDCh) 1,47 (9H, d), 2,23 (1H, s), 2,59 (3H, s), 2,91 (1H, dq), 3,43 (4H, s), 3,66 - 3,91 (2H, m), 4,02 (1H, d), 5,10 (1H, s), 7,08 (1H, d), 7,31 (1H, s), 7,92 (1H, s), 7,97 (1H, s), 8,04 (1H, s), 8,69 (1H, d), 8,75 (1H, dd); miz MH+ 476.
Producto intermedio 113: 4-(7-metil-2-((7-metilcmnolm-6-il)ammo)-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purm-9-il)piperidm-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000058_0003
Se añadió carbonato de cesio (531 mg, 1,63 mmol) a 7-metilcinnolin-6-amina (130 mg, 0,82 mmol) y 4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (300 mg, 0,82 mmol) en 1,4-dioxano (6 mL). Se añadió Brettphos precat g 3 (37 mg, 0,04 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h. Se añadió un adicional del 5% del catalizador Brettphos precat G3 y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un adicional del 5% de catalizador y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h. Se añadió un adicional del 5% del catalizador y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se filtró, y se lavó el sólido con MeOH al 10% en DCM (3 mL). Se concentraron las fases orgánicas combinadas a vacío, y se purificó la mezcla en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 10% en DCM, produciendo el compuesto del título (138 mg, 35%) como un aceite marrón; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,33 (9H, s), 1,80 (2H, d), 2,08 (2H, s), 2,63 (3H, s), 2,88 (2H, s), 3,37 (3H, s), 4,11 (2H, s), 4,40 (1H, d), 7,88 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,28 (1H, s), 8,52 (1H, s), 8,68 (1H, s), 9,10 (1H, d); miz MH+ 491.
Producto intermedio 114: (3S,4ft)-3-fluoro-4-(7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-8-oxo-7,8-dihidro-9W-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de tere-butilo
Figure imgf000059_0001
Se añadió carbonato de cesio (760 mg, 2,33 mmol) a 7-metilquinolin-6-amina (123 mg, 0,78 mmol) y (3S,4R)-4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)-3-fluoropiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (300 mg, 0,78 mmol) en 2-metiltetrahidrofurano (4 mL). Se desgasificó la disolución burbujeando nitrógeno a través de la mezcla de reacción durante 5 minutos. Se añadieron 2,2'-Bis(difenilfosfanil)-1, 1 '-binaftaleno (24,2 mg, 0,04 mmol) y diacetoxipaladio (4,36 mg, 0,02 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 3 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se concentró a vacío,se tomó en DCM (3 mL) y se filtró. Se purificó el filtrado mediante fcc, gradiente de elución de metanol del 0 al 10% en DCM, produciendo el compuesto del título (132 mg, 33%) como un sólido dorado; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,21 -1,51 (9H, m), 1,88 (1H, d), 2,96 (1H, s), 3,11 - 3,29 (2H, m), 3,30 (3H, s), 3,36 (3H, s), 4,17 (1H, s), 4,31 (1H, s), 4,53 (1H, dd), 4,88 (1H, d), 7,36 (1H, dd), 7,83 (1H, s), 8,10 (1H, d), 8,21 (1H, s), 8,38 (1H, s), 8,49 (1H, s), 8,72 (1H, dd); miz MH+ 508.
Producto intermedio 115: 7-metil-2-[(7-metil-6-qumolil)ammo]-9-[(3ft)-pirrolidm-3-il]purin-8-ona
Figure imgf000059_0002
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,45 mL, 1,83 mmol) a (3R)-3-[7-metil-2-[(7-metil-6-quinolil)amino]-8-oxo-purin-9-il]pirrolidin-1 -carboxilato de ferc-butilo (174 mg, 0,37 mmol) en metanol (2,2 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Se diluyó la mezcla con agua (3 mL) para disolver los sólidos luego se cargó en una columna SCX de 5 g, lavando con MeOH, luego eluyendo con NH31 N en MeOH. Se eliminó el disolvente a vacío produciendo el compuesto del título (122 mg, 89%) como una goma amarilla, se usó directamente en la siguiente etapa; miz [M-H]- 374.
Producto intermedio 116: 7-metil-2-[(7-metil-6-quinolil)amino]-9-[(3S)-pirrolidin-3-il]purin-8-ona
Figure imgf000059_0003
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,21 mL, 0,84 mmol) a (3S)-3-[7-metil-2-[(7-metil-6-quinolil)amino]-8-oxo-purin-9-il]pirrolidin-1 -carboxilato de ferc-butilo (80 mg, 0,17 mmol) en metanol (1 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 2 h, luego se concentró a vacío produciendo la sal de HCl del compuesto del título (70 mg, 101%) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,32 - 2,41 (2H, m), 2,73 (3H, s), 3,32 (1H, dd), 3,37 (3H, s), 3,57 (2H, q), 3,77 (1H, d), 5,11 - 5,22 (1H, m), 7,95 (1H, dd), 8,23 (1H, s), 8,26 (1H, s), 8,78 (1H, s), 9,07 (2H, dd), 9,51 (2H, s), 9,84 (1H, s); miz [M-H]- 374.
Producto intermedio 117: 7-metil-2-((7-metilcmnolm-6-il)ammo)-9-(piperidm-4-il)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000060_0001
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,262 mL, 1,05 mmol) a 4-(7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (103 mg, 0,21 mmol) en metanol (1,2 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h, luego se concentró a vacío y se cargó en una columna s Cx de 5 g, lavando con MeOH, luego eluyendo con NH3 IN/MeOH. Se eliminó el disolvente a vacío, se añadió MeCN (3 mL) y se concentró a vacío produciendo el compuesto del título (61 mg, 74%) como un sólido marrón; 1H-RMN (400 MHz, d MSo ) 1,75 (2H, d), 2,53 (2H, s), 2,63 (1H, s), 2,65 (3H, s), 3,1 - 3,19 (3H, m), 3,37 (3H, s), 4,32 (1H, t), 8,08 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,28 (1H, s), 8,63 (1H, s), 8,75 (1H, s), 9,12 (1H, d); m/z MH+ 391.
Producto intermedio 118: 4-(((3R,4R)-1-(terc-butoxicarboml)-4-fluoropirrolidm-3-il)ammo)-2-cloropirimidm-5-carboxilato de etilo
Figure imgf000060_0002
Se añadió DIPEA (7,33 mL, 41.97 mmol) en una porción a una disolución con agitación de 2,4-dicloropirimidin-5-carboxilato de etilo (4,64 g, 20.98 mmol), y (3R,4R)-3-amino-4-fluoropirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (obtenido comercialmente) (4,5 g, 22,03 mmol) en MeCN (100 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 13 h. Se combinó la mezcla de reacción con una mezcla de reacción a escala menor que usó reactivos y condiciones similares (max 2,26 mmol del producto deseado) y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de EtOAc del 0 al 30% en éter de petroleo, produciendo el compuesto del título (7,60 g, 84% general) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,31 (3H, q), 1,43 (9H, s), 3,39 - 3,80 (4H, m), 4,21 - 4,38 (2H, m), 4,70 (1H, s), 5,26 (1H, d), 8,34 (1H, d), 8,69 (1H, s); m/z MH+ 389.
Producto intermedio 119: Ácido 4-(((3R,4R)-1-(terc-butoxicarboml)-4-fluoropirrolidm-3-il)ammo)-2-cloropirimidm-5-carboxílico
Figure imgf000060_0003
Se añadió una disolución de hidróxido de litio (0,91 g, 38,06 mmol) en agua (150 mL) en una porción a una disolución con agitación de 4-(((3R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-fluoropirrolidin-3-il)amino)-2-cloropirimidin-5-carboxilato de etilo (7,40 g, 19,03 mmol) en THF (150 mL) a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 16 h, luego se concentró a vacío, se diluyó con agua (100 mL) y se acidificó hasta pH 2 usando HCl ac. 2 M. Se recogió el precipitado resultante y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (6,10 g, 89%) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,43 (9H, s), 3,39 -3,81 (5H, m), 4,67 (1H, s), 5,25 (1H, d), 8,64 (1H, s), 13,78 (1H, s a); m/z MH+ 361.
Producto intermedio 120: (3R,4R)-3-(2-cloro-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)-4-fluoropirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000060_0004
Se añadió azida difenilfosfónica (3,57 g, 12,97 mmol) en una porción a ácido 4-(((3R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-fluoropirrolidin-3-il)amino)-2-doropirimidin-5-carboxílico (3,90 g, 10,81 mmol), y Et3N (4,52 mL, 32,43 mmol) en tolueno (140 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta. Se combinó la mezcla de reacción con una mezcla de reacción a menor escala que usaba reactivos y condiciones similares (máx. 4,16 mmol del producto deseado) y se diluyó la mezcla resultante con DCM (200 mL). Se aisló la fase orgánica y se lavó con salmuera sat., luego se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 5% en DCM, produciendo el compuesto del título (3,50 g, 67% general) como un aceite marrón. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,43 (9H, s), 3,53 - 4,06 (4H, m), 5,03 (1H, d), 5,44 - 5,64 (1H, m), 8,18 (1H, s), 11,82 (1H, s); miz MH+ 358.
Producto intermedio 121: (3ft,4ft)-3-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)-4-fluoropirrolidm-1 -carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000061_0001
Se añadió en porciones hidruro de sodio al 60% pip en aceite mineral (0,67 g, 16,77 mmol) a (3R,4R)-3-(2-cloro-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)-4-fluoropirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo (4,00 g, 11,18 mmol) en Dm F (100 mL) a 0°C y se agitó la mezcla de reacción a 0°C durante 10 min. Se añadió yodometano (1,40 mL, 22,36 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Se combinó la mezcla de reacción con una mezcla de reacción en escala menor que usó reactivos similares y condiciones (max 1,40 mmol de producto deseado). Se vertió la mezcla resultante en agua (1 L) y se recogió el precipitado resultante mediante filtración y se secó a vacío, luego se trituró con MTBE y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 3% en DCM, produciendo el compuesto del título (1,80 g, 39% general) como un sólido amarillo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,43 (9H, s), 3,36 (3H, s), 3,51 - 4,02 (4H, m), 5,06 (1H, d), 5,36 - 5,68 (1H, m), 8,40 (1H, s); miz MH+ 372.
Producto intermedio 122: (3ft,4ft)-3-fluoro-4-(7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo
Figure imgf000061_0002
Se añadió Brettphos Pd G3 (0,51 g, 0,56 mmol) en una porción a una mezcla con agitación de (3R,4R)-3-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)-4-fluoropirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (1,60 g, 4,30 mmol), Cs2CO3 (3,51 g, 10,76 mmol) y 7-metilquinolin-6-amina (0,72 g, 4,52 mmol) en 1,4-dioxano (60 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h. Se dejó que la mezcla se enfriara hasta ta y se diluyó con DCM (200 mL). Se lavó la mezcla resultante con salmuera sat., y se aisló la fase orgánica resultante y se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 2% en DCM, produciendo el compuesto del título (1,80 g, 85%) como un sólido amarillo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,35 (9H, s), 3,30 (3H, s), 3,31 (3H, s), 3,22 - 3,94 (4H, m), 5,02 (1H, d), 5,57 (1H, ddt), 7,38 (1H, dd), 7,83 (1H, s), 8,06 - 8,30 (3H, m), 8,62 (1H, d), 8,72 (1H, dd); miz MH+ 494.
Ejemplo 1: 9-(1-acetilpiperidm-4-il)-7-metil-2-((7-metilcmnolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000061_0003
Se añadió carbonato de cesio (210 mg, 0,65 mmol) a 9-(1-acetilpiperidin-4-il)-2-cloro-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,32 mmol) y 7-metilcinnolin-6-amina (51,4 mg, 0,32 mmol) en 1,4-dioxano (3 mL). Se añadió Brettphos Pd G3 (i 4,6 mg, 0,02 mmol) y se agitó la suspensión resultante a 100°C durante 1 h. Se añadió un adicional del 5% de catalizador Brettphos Pd G3 y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h, luego se añadió un adicional del 5% de catalizador de Pd y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se tomó el residuo en DMF (2 mL), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa. Se disolvió el residuo en DCM (1 mL) y se añadieron algunas gotas de n-heptano. Se eliminó el disolvente a vacío proporcionando un aceite amarillo. Se añadió acetonitrilo (2 mL) y se aisló el sólido mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (8,0 mg, 6%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,84 (2H, s), 1,95 (3H, s), 2,62 (5H, s), 3,1 - 3,24 (2H, m), 3,36 (3H, s), 3,96 (1H, d), 4,48 (1H, t), 4,59 (1H, d), 7,86 (1H, d), 8,23 (1H, s), 8,27 (1H, s), 8,49 (1H, s), 8,73 (1H, s), 9,09 (1H, d); m/z MH+ 433.
Ejemplo 2: 9-(1-acetilpiperidm-4-il)-7-metil-2-((7-metMqumoxalm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Figure imgf000062_0001
Se añadió carbonato de cesio (210 mg, 0,65 mmol) a 9-(1-acetilpiperidin-4-il)-2-cloro-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,32 mmol) y 7-metilquinoxalin-6-amina (51,4 mg, 0,32 mmol) en 1,4-dioxano (3 mL). Se añadió Brettphos Pd G3 (14,6 mg, 0,02 mmol) y se agitó la suspensión resultante a 100°C durante 1 h. Se añadió un adicional de Brettphos Pd G3 al 5% en moles (14,6 mg, 0,02 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un adicional de Brettphos Pd G3 al 5% en moles (14,6 mg, 0,02 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con DMF (2 mL), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa. Se añadieron DCM (2 mL) y unas pocas gotas de dietil éter y se concentró la mezcla a vacío produciendo el compuesto del título (27 mg, 19%) como un sólido verde; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,76 (1H, d), 1,85 (1H, d), 1,98 (3H, s), 2,15 - 2,27 (1H, m), 2,55 (5H, s), 3,15 (1H, t), 3,34 (3H, s), 3,96 (1H, d), 4,39 - 4,49 (1H, m), 4,52 (1H, d), 7,89 (1H, s), 8,22 (1H, s), 8,55 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,73 (1H, d), 8,76 (1H, d); m/z MH+ 433.
Ejemplo 3: 9-(1-acetilpiperidm-4-il)-7-metil-2-((7-metMqumazolm-6-M)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Figure imgf000062_0002
Se añadió RuPhos Pd G3 (9,2 mg, 11 |jmol) a 9-(1-acetilpiperidin-4-il)-2-cloro-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (68,1 mg, 0,22 mmol), 7-metilquinazolin-6-amina (35 mg, 0,22 mmol), RuPhos (10,3 mg, 0,02 mmol) y Cs2CO3 (215 mg, 0,66 mmol) en 1,4-dioxano (1 mL) bajo nitrógeno. Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío y se purificó mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (22 mg, 23%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,74 - 1,87 (2H, m), 1,95 (3H, s), 2,16 - 2,31 (1H, m), 2,34 - 2,49 (1H, m), 2,53 - 2,67 (4H, m), 3,09 - 3,21 (1H, m), 3,34 (3H, s), 3,95 (1H, d), 4,38 - 4,48 (1H, m), 4,48 - 4,58 (1H, m), 7,86 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,43 (1H, s), 8,78 (1H, s), 9,13 (1H, s), 9,36 (1H, s); m/z MH+ 433.
Ejemplo 4: 9-(1-acetilpiperidm-4-il)-2-((2J-dimetilqumoxalm-6-il)ammo)-7-metil-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Ejemplo 5: 9-(1-acetilpiperidm-4-il)-2-((3J-dimetilqumoxalm-6-il)ammo)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000063_0001
Se añadió carbonato de cesio (1,05 g, 3,23 mmol) a 9-(1-acetilpiperidin-4-il)-2-cloro-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (500 mg, 1,61 mmol), una mezcla de 2,7-dimetilquinoxalin-6-amina (224 mg, 1,29 mmol) y 3,7-dimetilquinoxalin-6-amina (55,9 mg, 0,32 mmol) en 1,4-dioxano (10 mL). Se añadió Brettphos Pd G3 (73,2 mg, 0,08 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h. Se añadió un adicional de Brettphos Pd G3 al 5% en moles (73,2 mg, 0,08 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó con DCM (10 mL). Se concentró el filtrado a vacío y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 10% en DCM, produciendo los compuestos del título como una mezcla. Se separaron los Ejemplos 4 y 5 mediante SFC produciendo los compuestos del título 4 (62 mg, 10%) como un sólido crema y 5 (20 mg, 3%) como un sólido crema.
Ejemplo 4: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,75 (1H, d), 1,84 (1H, d), 1,98 (3H, s), 2,21 (1H, qd), 2,45 (1H, dd), 2,52 (3H, s), 2,54 - 2,64 (1H, m), 2,66 (3H, s), 3,13 (1H, d), 3,34 (3H, s), 3,96 (1H, d), 4,44 (1H, tt), 4,52 (1H, d), 7,77 - 7,81 (1H, m), 8.19 (1H, s), 8,45 (1H, s), 8,61 (1H, s), 8,68 (1H, s); m/z MH+ 447.
Ejemplo 5: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,77 (1H, d), 1,85 (1H, d), 1,94 (3H, s), 2,15 - 2,27 (1H, m), 2,4 - 2,48 (1H, m), 2,52 (3H, s), 2,57 - 2,64 (1H, m), 2,66 (3H, s), 3,13 (1H, d), 3,34 (3H, s), 3,94 (1H, d), 4,45 (1H, ddd), 4,53 (1H, d), 7,83 (1H, s), 8.20 (1H, s), 8,39 (1H, s), 8,63 (2H, d); m/z MH+ 447.
Ejemplo 6: 9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7-metN-2-((7-metNqumolm-6-M)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000063_0002
Se añadió RuPhos Pd G3 (40,1 mg, 0,04 mmol) a 2-cloro-9-((1/',4/')-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (125 mg, 0,44 mmol), 7-metilquinolin-6-amina (70 mg, 0,44 mmol) y Cs2CO3 (288 mg, 0,88 mmol) en 1,4-dioxano (4 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó el sólido con MeOH (10 mL). Se concentraron las fases orgánicas combinadas a vacío, y se purificó mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (20 mg, 11%) como un sólido blanco; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 1,18 - 1,37 (2H, m), 1,67 - 1,78 (2H, m), 1,87 - 1,98 (2H, m), 2,28 - 2,43 (2H, m), 2,51 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,35 - 3,37 (1H, m), 4,06 - 4,24 (1H, m), 4,66 (1H, d), 7,42 (1H, dd), 7,85 (1H, s), 8,08 - 8,14 (1H, m), 8,14 - 8,21 (1H, m), 8,29 (1H, s), 8,61 (1H, s), 8,74 (1H, dd); m/z MH+ 405.
Ejemplo 7: 9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7-metN-2-((7-metNcmnolm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000063_0003
Se añadió carbonato de cesio (230 mg, 0,71 mmol) a 2-cloro-9-((1/',4/')-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,35 mmol) y 7-metilcinnolin-6-amina (56,3 mg, 0,35 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la mezcla de reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (32 mg, 0,04 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un adicional del 5% de Brettphos Pd G3 y se agitó durante 1 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se concentró. Se purificó el producto en bruto resultante mediante HPLC preparativa. Se combinaron las fracciones puras y se concentraron parcialmente, y se cristalizó el producto en agua, que se aisló mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (30 mg, 21%) como un sólido beige; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,32 (2H, q), 1,76 (2H, d), 1,96 (2H, d), 2,3 - 2,44 (2H, m), 2,64 (3H, s), 3,35 (3H, s), 3,43 (1H, s), 4,20 (1H, ddd), 4,67 (1H, d), 7,88 (1H, d), 8,26 (2H, s), 8,52 (1H, s), 8,71 (1H, s), 9,15 (1H, d); m/z MH+ 406.
Ejemplo 8: 2-((4,7-dimetilqumolm-6-M)ammo)-9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexM)-7-metM-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000064_0001
Se añadió carbonato de cesio (488 mg, 1,50 mmol) en una porción a 4,7-dimetilquinolin-6-amina (129 mg, 0,75 mmol) y 2-cloro-9-((1/',4/')-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (212 mg, 0,75 mmol) en 1,4-dioxano (5 mL) a ta y se desgasificó la mezcla de reacción burbujeando nitrógeno a través de la mezcla durante 5 minutos. Se añadió Brettphos Pd G3 (67,9 mg, 0,07 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 4 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se diluyó con DCM y se filtró a través de Celite. Se concentró la fase de DCM a vacío y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 5% en DCM, produciendo el compuesto del título (175 mg, 56%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,26 (2H, q), 1,71 (2H, d), 1,90 (2H, d), 2,22 - 2,38 (2H, m), 2,50 (3H, s), 2,59 - 2,66 (3H, m), 3,32 (3H, s), 3,33 - 3,37 (1H, m), 4,18 (1H, ddd), 4,61 (1H, d), 7,26 - 7,31 (1H, m), 7,84 (1H, s), 8,14 (1H, s), 8,40 (1H, s), 8,56 (1H, s), 8,60 (1H, d); m/z MH+ 419.
Ejemplo 9: 9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexN)-2-((4-metoxi-7-metNqumolm-6-N)ammo)-7-metN-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000064_0002
Se añadió carbonato de cesio (346 mg, 1,06 mmol) en una porción a 4-metoxi-7-metilquinolin-6-amina (100 mg, 0,53 mmol) y 2-cloro-9-((1/',4/')-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (150 mg, 0,53 mmol) en 1,4-dioxano (4 mL) a ta y se desgasificó la mezcla de reacción burbujeando nitrógeno a través de la mezcla durante 5 minutos. Se añadió Brettphos Pd G3 (48,1 mg, 0,05 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 18 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se diluyó con DCM y se filtró a través de Celite. Se concentró la fase de DCM a vacío y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 5% en DCM, produciendo el compuesto del título (70 mg, 30%) como un sólido crema; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,26 (2H, q), 1,70 (2H, d), 1,89 (2H, d), 2,32 (3H, q), 2,48 (3H, s), 3,32 (3H, s), 4,02 (3H, s), 4,09 - 4,19 (1H, m), 4,58 (1H, d), 6,92 (1H, d), 7,78 (1H, s), 8,14 (1H, s), 8,46 (1H, s), 8,51 (1H, s), 8,58 (1H, d); m/z MH+ 435.
Ejemplo 10: 9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexN)-7-metN-2-((7-metMqumoxalm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000064_0003
Se añadió carbonato de cesio (1,73 g, 5,31 mmol) a 2-cloro-9-((1/',4/')-4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-met¡l-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona (750 mg, 2,65 mmol) y 7-met¡lqu¡noxal¡n-6-am¡na (422 mg, 2,65 mmol) en 1,4-d¡oxano (15 mL). Se añad¡ó Brettphos Pd G3 (120 mg, 0,13 mmol) y se calentó la mezcla de reacc¡ón a 100°C durante 2 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó el sól¡do con DCM (10 mL). Se concentraron las fases de DCM comb¡nadas a vacío y se purificaron med¡ante fcc, grad¡ente de eluc¡ón de MeOH del 0 al 10% en DCM. Se suspend¡ó el sól¡do resultante en MeCN (50 mL). Se calentó la suspens¡ón a reflujo, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró, se lavó con una pequeña cant¡dad de MeCN y se secó el sól¡do a 45°C a vacío produc¡endo el compuesto del título (460 mg, 43%) como un sól¡do amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,29 (2H, q), 1,73 (2H, d), 1,94 (2H, d), 2,41 (2H, d), 2,58 (3H, s), 3,34 (3H, s), 3,54 (1H, d), 4,13 - 4,24 (1H, m), 4,60 (1H, d), 7,90 (1H, s), 8,22 (1H, s), 8,61 (1H, s), 8,69 (1H, s), 8,73 (1H, d), 8,80 (1H, d); miz MH+ 406.
Ejemplo 11: 9-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000065_0001
Se añad¡ó BrettPhos Pd G3 (64,1 mg, 0,07 mmol) a 2-cloro-9-((1s,4s)-4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-met¡l-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona (100 mg, 0,35 mmol), 7-met¡lqu¡nol¡n-6-am¡na (84 mg, 0,53 mmol) y Cs2CO3 (346 mg, 1,06 mmol) en 1,4-d¡oxano (3 mL). Se calentó la mezcla de reacc¡ón a 100°C durante 16 h. Se enfrió la mezcla de reacc¡ón hasta ta y se purificó d¡rectamente med¡ante fcc, grad¡ente de eluc¡ón de MeCN del 0 al 35% en agua (con FA al 0,1%), luego se purificó ad¡c¡onalmente med¡ante HPLC preparat¡va produc¡endo el compuesto del título (45 mg, 32%) como un sól¡do blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,47 - 1,61 (4H, m), 1,79 - 1,89 (2H, m), 2,52 (3H, s), 2,67 - 2,82 (2H, m), 3,33 (3H, s), 3,87 - 3,94 (1H, m), 4,15 - 4,28 (1H, m), 4,48 (1H, d), 7,38 (1H, dd), 7,83 (1H, s), 8,16 (1H, s), 8,32 (1H, dd), 8,38 (1H, s), 8,47 (1H, s), 8,70 (1H, dd); miz MH+ 405.
Ejemplo 12: 9-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-2-((7-metilcmnolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000065_0002
Se añad¡ó carbonato de ces¡o (230 mg, 0,71 mmol) a 2-cloro-9-((1s,4s)-4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-met¡l-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona (100 mg, 0,35 mmol) y 7-met¡lc¡nnol¡n-6-am¡na (56,3 mg, 0,35 mmol) en 1,4-d¡oxano (2 mL). Se desgas¡f¡có la mezcla de reacc¡ón con n¡trógeno y se añad¡ó Brettphos Pd G3 (16,0 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacc¡ón a 100°C durante 2 h. Se añad¡ó un ad¡c¡onal de catal¡zador de Pd al 5% y se calentó la mezcla de reacc¡ón a 100°C durante 2 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se concentró a vacío y se purificó med¡ante HPLC preparat¡va, luego se purificó ad¡c¡onalmente med¡ante tr¡turac¡ón con MeCN produc¡endo el compuesto del título (35 mg, 24%) como un sól¡do be¡ge; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,58 (4H, q), 1,87 (2H, d), 2,65 (3H, s), 2,79 (2H, q), 3,37 (3H, s), 3,95 (1H, s), 4,25 (1H, t), 4,56 (1H, d), 8,18 (1H, d), 8,23 (1H, s), 8,28 (1H, s), 8,49 (1H, s), 8,74 (1H, s), 9,10 (1H, d); miz MH+ 406.
Ejemplo 13: 9-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-2-((7-metilqumoxalm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000065_0003
Se añadió carbonato de cesio (230 mg, 0,71 mmol) a 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,35 mmol) y 7-metilquinoxalin-6-amina (56,3 mg, 0,35 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la mezcla de reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (16,0 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió Brettphos Pd G3 adicional (16,0 mg, 0,02 mmol) y luego se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con MeOH (3 mL), se filtró y se purificó mediante HpLC preparativa. Se combinaron las fracciones puras y se concentraron parcialmente. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (65 mg, 45%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,45 - 1,61 (4H, m), 1,83 (2H, d), 2,58 (3H, s), 2,66 - 2,79 (2H, m), 3,34 (3H, s), 3,91 (1H, s), 4,25 (1H, td), 4,34 (1H, d), 7,90 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,54 (1H, s), 8,70 (1H, s), 8,73 (1H, d), 8,79 (1H, d); miz MH+ 406.
Ejemplo 14: 9-((1s,4s)-4-hidroxi-4-metNciclohexN)-7-metN-2-((7-metNqumolm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Ejemplo 15: 9-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metNciclohexN)-7-metN-2-((7-metNqumolm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000066_0001
Se añadieron RuPhos Pd G3 (169 mg, 0,20 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',6'-di-i-propoxi-1, 1 '-bifenilo (94 mg, 0,20 mmol) a 2-cloro-9-(4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (300 mg, 1,01 mmol), 7-metilquinolin-6-amina (240 mg, 1,52 mmol) y Cs2CO3 (988 mg, 3,03 mmol) en 1,4-dioxano (5 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 5 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se purificó directamente mediante fcc, gradiente de elución de MeCN del 0 al 32% en agua (con FA al 0,1%), luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo 14 (102 mg, 24%) como un sólido blanco y 15 (36 mg, 9%) como un sólido blanco.
Ejemplo 14: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,17 (3H, s), 1,37 - 1,56 (4H, m), 1,66 - 1,75 (2H, m), 2,52 (3H, s), 2,65 - 2,80 (2H, m), 3,32 (3H, s), 4,11 - 4,24 (2H, m), 7,39 (1H, dd), 7,83 (1H, s), 8,15 (1H, s), 8,31 (1H, dd), 8,38 (1H, s), 8,45 (1H, s), 8,71 (1H, dd); miz MH+ 419.
Ejemplo 15: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 0,69 (3H, s), 1,35 - 1,48 (2H, m), 1,48 - 1,62 (4H, m), 2,18 - 2,34 (2H, m), 2,46 (3H, s), 3,31 (3H, s), 4,03 - 4,16 (1H, m), 4,31 (1H, s), 7,41 (1H, dd), 7,85 (1H, s), 8,08 (1H, s), 8,15 (2H, d), 8,68 (1H, s), 8,74 (1H, dd); miz MH+ 419.
Ejemplo 16: 9-((1s,4s)-4-hidroxi-4-metNciclohexN)-7-metN-2-((7-metNcmnolm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Ejemplo 17: 9-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metNciclohexN)-7-metN-2-((7-metNcmnolm-6-M)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000066_0002
Se añadió carbonato de cesio (220 mg, 0,67 mmol) a 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,34 mmol) y 7-metilcinnolin-6-amina (53,6 mg, 0,34 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se añadió Brettphos Pd G3 (15,3 mg, 0,02 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un adicional del 5% de catalizador y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con DCM (3 mL), se filtró y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 10% en DCM, produciendo el ejemplo 16 (15 mg, 11%) como un sólido marrón claro y el ejemplo 17 (25 mg, 18%) como un sólido beige.
Ejemplo 16: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,19 (3H, s), 1,50 (4H, q), 1,73 (2H, d), 2,64 (3H, s), 2,76 (2H, q), 3,36 (3H, s), 4,21 (2H, s), 8,15 (1H, d), 8,22 (1H, s), 8,27 (1H, s), 8,47 (1H, s), 8,72 (1H, s), 9,10 (1H, d); m/z MH+ 420.
Ejemplo 17: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 0,85 (3H, s), 1,42 - 1,54 (2H, m), 1,57 - 1,69 (4H, m), 2,27 - 2,4 (2H, m), 2,57 -2,64 (3H, m), 3,35 (3H, s), 4,17 (1H, dq), 4,34 (1H, s), 7,92 (1H, dd), 8,25 (2H, d), 8,33 (1H, s), 8,79 (1H, s), 9,15 (1H, d); m/z MH+ 420.
Ejemplo 18: 9-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-2-((7-metilqumoxalm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Ejemplo 19: 9-((1s,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-2-((7-metilqumoxalm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Figure imgf000067_0001
Se añadió carbonato de cesio (220 mg, 0,67 mmol) a 2-cloro-9-((1/',4/')-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,34 mmol) y 7-metilquinoxalin-6-amina (53,6 mg, 0,34 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la reacción y se añadió Brettphos Pd G3 (15,3 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un Brettphos Pd G3 al 5% en moles adicional (15,3 mg, 0,02 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con MeOH (3 mL), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa. Se combinaron las fracciones puras y se concentraron parcialmente a vacío y se aisló el precipitado resultante mediante filtración y se secó a vacío produciendo el ejemplo 18 (35 mg, 25%) como un sólido amarillo y el ejemplo 19 (55 mg, 39%) como un sólido beige.
Ejemplo 18: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 0,82 (3H, s), 1,4 - 1,51 (2H, m), 1,59 (4H, t), 2,22 - 2,4 (2H, m), 2,54 (3H, s), 3,34 (3H, s), 4,14 (1H, ddt), 4,30 (1H, s), 7,88 - 7,95 (1H, m), 8,21 (1H, s), 8,41 (1H, s), 8,71 (1H, s), 8,75 (1H, d), 8,79 (1H, d); m/z MH+ 420.
Ejemplo 19: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,16 (3H, s), 1,38 - 1,55 (4H, m), 1,68 (2H, d), 2,57 (3H, s), 2,66 - 2,78 (2H, m), 3,33 (3H, s), 4,10 (1H, s), 4,20 (1H, td), 7,89 (1H, s), 8,19 (1H, s), 8,50 (1H, s), 8,69 - 8,74 (2H, m), 8,78 (1H, d); m/z MH+ 420.
Ejemplo 20: 9-((1s,4s)-4-hidroxM-metilciclohexil)-7-metil-2-((7-metilqumoxalm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Figure imgf000067_0002
Se añadió RuPhos Pd G3 (14,1 mg, 0,02 mmol) a 2-cloro-9-((1s,4s)-4-hidroxi-1-metilciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (50 mg, 0,17 mmol), 7-metilquinoxalin-6-amina (26,8 mg, 0,17 mmol), Cs2CO3 (453 mg, 1,39 mmol) y RuPhos (15,7 mg, 0,03 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se concentró a vacío. Se purificó el residuo mediante fcc, gradiente de elución de MeCN del 0 al 50% en agua, produciendo el compuesto del título (45 mg, 64%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,44 - 1,56 (5H, m), 1,56 - 1,66 (2H, m), 1,99 - 2,11 (2H, m), 2,57 (3H, s), 2,90 - 2,95 (2H, m), 3,30 (3H, s), 3,62 - 3,68 (1H, m), 4,47 (1H, s), 7,89 (1H, s), 8,22 (1H, s), 8,51 (1H, s), 8,56 (1H, s), 8,73 (1H, d), 8,79 (1H, d); m/z MH+ 420.
Ejemplo 21: (S)-7-metil-2-((7-metilcmnolm-6-il)ammo)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Figure imgf000068_0001
Se añadieron RuPhos Pd G3 (263 mg, 0,31 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',6'-di-i-propoxi-1,1 '-bifenilo (147 mg, 0,31 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3S)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (960 mg, 3,77 mmol), 7-metilcinnolin-6-amina (500 mg, 3,14 mmol) y CS2CO3 (3,07 g, 9,42 mmol) en 1,4-dioxano (15 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se purificó directamente mediante fcc, gradiente de elución de MeCN del 0 al 40% en agua, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (847 mg, 72%) como un sólido amarillo claro; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 2,27 - 2,35 (1H, m), 2,36 - 2,48 (1H, m), 2,62 (3H, s), 3,35 (3H, s), 3,74 - 3,88 (1H, m), 3,92 - 4,19 (3H, m), 4,97 - 5,15 (1H, m), 7,94 (1H, d), 8,22 (1H, s), 8,27 (1H, s), 8,63 (1H, s), 8,67 (1H, s), 9,13 (1H, d); miz MH+ 378.
Forma A
Se analizó el producto final, (S)-7-metil-2-((7-metilcinolin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, por XRPD y d Sc y se encontró que era cristalino. XRPD de una muestra del material dio lugar a un patrón de difracción tal como se muestra en la Figura 3. Se caracteriza (S)-7-metil-2-((7-metilcinolin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, Forma A por al menos un pico en un valor de 209,7° o 12,9° medido usando radiación CuKa. Los diez picos más destacados de la XRPD se muestran en la Tabla A.
Tabla A: Diez picos de XRPD más destacados para la Forma A, (S)-7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purina-8-uno
Figure imgf000068_0003
donde los valores de 2-theta son i- 0 ,2°.
Ejemplo 22: (S)-7-metil-2-((7-metilquinoxalin-6-il)amino)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000068_0002
Se añadieron RuPhos Pd G3 (32,8 mg, 0,04 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',6'-di-i-propoxi-1, 1 '-bifenilo (18,3 mg, 0,04 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3S)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,39 mmol), 7-metilquinoxalin-6-amina (68,8 mg, 0,43 mmol) y Cs2CO3 (384 mg, 1,18 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se purificó directamente mediante fcc, gradiente de elución de MeCN del 0 al 70% en agua, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (44 mg, 30%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 2,18 - 2,32 (1H, m), 2,51 - 2,62 (4H, m), 3,35 (3H, s), 3,76 - 3,84 (1H, m), 3,88 (1H, dd), 3,97 (1H, t), 4,11 (1H, q), 4,92 - 5,05 (1H, m), 7,91 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,58 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,74 (1H, d), 8,80 (1H, d); m/z MH+ 378.
Ejemplo 23: (ft)-7-metN-2-((7-metMcmnolm-6-N)ammo)-9-(tetrahidrofuran-3-N)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000069_0001
Se añadieron RuPhos Pd G3 (26,3 mg, 0,03 mmol) y 2-dicidohexilfosfino-2',6'-di-i-propoxi-1,1'-bifenilo (14,7 mg, 0,03 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3R)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (96 mg, 0,38 mmol), 7-metilcinnolin-6-amina (50 mg, 0,31 mmol) y Cs2CÜ3 (205 mg, 0,63 mmol) en 1,4-dioxano (1,5 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h. Se dejó que la reacción se enfriara hasta ta y se purificó directamente mediante fcc, gradiente de elución de MeCN del 0 al 40% en agua, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (60 mg, 51%) como un sólido de color rosa; 1H-RMN (400 MHz, DMSÜ) 2,21 - 2,35 (1H, m), 2,38 -2,51 (1H, m), 2,64 (3H, d), 3,37 (3H, s), 3,76 - 3,86 (1H, m), 3,99 - 4,15 (3H, m), 5,02 - 5,14 (1H, m), 7,96 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,30 (1H, s), 8,69 (2H, d), 9,15 (1H, d); m/z MH+ 378.
Ejemplo 24: (ft)-7-metN-2-((7-metMqumoxalm-6-N)ammo)-9-(tetrahidrofuran-3-N)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000069_0002
Se añadieron RuPhos Pd G3 (32,8 mg, 0,04 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2',6'-di-i-propoxi-1, 1 '-bifenilo (18,32 mg, 0,04 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3R)-tetrahidro-3-furanil]-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,39 mmol), 7-metilquinoxalin-6-amina (68,8 mg, 0,43 mmol) y Cs2CÜ3 (256 mg, 0,79 mmol) en 1,4-dioxano (3 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 3 h. Se dejó que la reacción se enfriara hasta ta y se purificó directamente mediante fcc, gradiente de elución de MeCN del 0-34% en agua, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (71 mg, 48%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSÜ) 2,14 - 2,33 (1H, m), 2,50 - 2,62 (4H, m), 3,33 (3H, s), 3,72 - 4,02 (3H, m), 4,03 - 4,17 (1H, m), 4,89 - 5,05 (1H, m), 7,89 (1H, d), 8,23 (1H, s), 8,57 (1H, s), 8,64 (1H, s), 8,72 (1H, d), 8,78 (1H, d); m/z MH+ 378.
Ejemplo 25: (ft)-7-metN-2-((7-metMcmnolm-6-N)ammo)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-N)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000069_0003
Se añadió carbonato de cesio (243 mg, 0,74 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3R)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-ona (100 mg, 0,37 mmol) y 7-metilcinnolin-6-amina (59,2 mg, 0,37 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (16,9 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un catalizador de Pd al 5% adicional y se agitó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con DMF (3 mL), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (30 mg, 21%) como un sólido marrón; 1H-Rm N (400 MHz, DMSÜ) 1,70 (1H, d), 1,79 (1H, d), 1,97 (1H, d), 2,64 (3H, s), 3,2 - 3,3 (2H, m), 3,36 (3H, s), 3,85 (2H, d), 3,99 (1H, t), 4,29 - 4,4 (1H, m), 7,92 (1H, d), 8,27 (2H, s), 8,52 (1H, s), 8,76 (1H, s), 9,16 (1H, d); m/z MH+ 392.
Ejemplo 26: (ft)-7-metN-2-((7-metMqumoxalm-6-N)ammo)-9-(tetrahidro-2W-piran-3-M)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000070_0001
Se añadió carbonato de cesio (243 mg, 0,74 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3R)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-ona (100 mg, 0,37 mmol) y 7-metilquinoxalin-6-amina (59,2 mg, 0,37 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (16,9 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un Brettphos precat G3 al 5% en moles adicional (16,87 mg, 0,02 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con DMF (3 mL), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa. Se combinaron las fracciones puras y se concentraron parcialmente y se aisló el precipitado resultante mediante filtración y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (50 mg, 34%); 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,71 (2H, dt), 1,94 (1H, d), 2,59 (4H, s), 3,35 (3H, s), 3,41 (1H, td), 3,79 - 3,9 (2H, m), 4,05 (1H, t), 4,33 (1H, ddt), 7,91 (1H, s), 8,25 (1H, s), 8,65 (1H, s), 8,7 - 8,76 (2H, m), 8,79 (1H, d); miz MH+ 392.
Ejemplo 27: (S)-7-metN-2-((7-metNcmnolm-6-N)ammo)-9-(tetrahidro-2W-piran-3-N)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000070_0002
Se añadió carbonato de cesio (1,21 g, 3,72 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3S)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-ona (500 mg, 1,86 mmol) y 7-metilcinnolin-6-amina (296 mg, 1,86 mmol) en 1,4-dioxano (12 mL). Se desgasificó la reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (84 mg, 0,09 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 24 h. Se filtró la mezcla de reacción mientras estaba caliente, luego se lavó el sólido con DCM (10 mL). Se concentraron las fases orgánicas combinadas a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 5% en DCM, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa. Se agitó el sólido resultante durante la noche en MeCN luego se filtró produciendo el compuesto del título (153 mg, 21%) como un sólido marrón claro; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,63 - 1,83 (2H, m), 1,97 (1H, d), 2,53 - 2,58 (1H, m), 2,64 (3H, s), 3,25 (1H, td), 3,35 (3H, s), 3,82 - 3,9 (2H, m), 3,99 (1H, t), 4,34 (1H, ddt), 7,91 (1H, dd), 8,26 (2H, d), 8,52 (1H, s), 8,75 (1H, s), 9,15 (1H, d); miz MH+ 392.
Ejemplo 28: (S)-7-metil-2-((7-metilqumoxalm-6-il)ammo)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000070_0003
Se añadió carbonato de cesio (243 mg, 0,74 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-[(3S)-tetrahidropiran-3-il]purin-8-ona (100 mg, 0,37 mmol) y 7-metilquinoxalin-6-amina (59,2 mg, 0,37 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (16,9 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un Brettphos precat G3 al 5% en moles adicional (16,9 mg, 0,02 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con DMF (3 mL), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa. Se concentraron parcialmente las fracciones puras combinadas a vacío y se aisló el sólido resultante mediante filtración y se secó a vacío proporcionando el compuesto del título (65 mg, 45%) como un sólido marrón claro; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,70 (2H, dt), 1,93 (1H, d), 2,59 (4H, s), 3,35 (3H, s), 3,36 - 3,46 (1H, m), 3,8 - 3,9 (2H, m), 4,05 (1H, t), 4,33 (1H, ddd), 7,91 (1H, s), 8,25 (1H, s), 8,66 (1H, s), 8,71 - 8,75 (2H, m), 8,79 (1H, d); miz MH+ 392.
Ejemplo 29: 7-metN-2-((7-metNcmnolm-6-N)ammo)-9-(tetrahidro-2W-piran-4-N)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000071_0001
Se añadió carbonato de cesio (243 mg, 0,74 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,37 mmol) y 7-metilcinnolin-6-amina (59,2 mg, 0,37 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (16,9 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h. Se añadió un catalizador al 5% adicional y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con MeOH (3 mL), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa, luego mediante trituración con MeCN produciendo el compuesto del título (15 mg, 10%) como un sólido beige; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,75 (2H, d), 2,58 - 2,71 (5H, m), 3,37 (3H, s), 3,49 (2H, t), 4,03 (2H, dd), 4,51 (1H, ddd), 7,95 (1H, d), 8,25 (1H, s), 8,29 (1H, s), 8,70 (2H, d), 9,14 (1H, d); mlz MH+392.
Ejemplo 30: 7-metN-2-((7-metNqumolm-6-N)ammo)-9-(tetrahidro-2W-piran-4-N)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000071_0002
Se añadió RuPhos Pd G3 (218 mg, 0,24 mmol) a 2-diciclohexilfosfino-2',6'-di-i-propoxi-1, 1 '-bifenilo (112 mg, 0,24 mmol), 7-metilquinolin-6-amina (380 mg, 2,40 mmol), 2-cloro-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (645 mg, 2,40 mmol) y Cs2CO3 (1,56 g, 4,80 mmol) en 1,4-dioxano (4 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó el sólido con MeOH (10 mL). Se concentraron las fases orgánicas combinadas a vacío, y se purificaron mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (208 mg, 22%) como un sólido blanco; 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 1,64 - 1,76 (2H, m), 2,52 (3H, s), 2,54 - 2,71 (2H, m), 3,33 (3H, s), 3,44 (2H, dd), 3,92 - 4,04 (2H, m), 4,36 - 4,53 (1H, m), 7,41 (1H, dd), 7,84 (1H, s), 8,17 (1H, s), 8,19 (1H, d), 8,44 (1H, s), 8,55 (1H, s), 8,71 (1H, dd); miz MH+ 391.
Ejemplo 31: 7-metN-2-((7-metNqumoxalm-6-N)ammo)-9-(tetrahidro-2W-piran-4-N)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000071_0003
Se añadió carbonato de cesio (1,81 g, 5,58 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (750 mg, 2,79 mmol) y 7-metilquinoxalin-6-amina (444 mg, 2,79 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se añadió Brettphos Pd G3 (127 mg, 0,14 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 2 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó el sólido con DCM (10 mL). Se concentraron las fases orgánicas combinadas a vacío y se purificaron mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 10% en DCM, y se trituraron con MeCN produciendo el compuesto del título (340 mg, 31%) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,68 - 1,75 (2H, m), 2,54 - 2,63 (5H, m), 3,35 (3H, s), 3,43 (2H, t), 3,98 (2H, dd), 4,46 (1H, ddt), 7,91 (1H, s), 8,22 (1H, s), 8,60 (1H, s), 8,65 (1H, s), 8,74 (1H, d), 8,79 (1H, d); miz MH+ 392.
Ejemplo 32: 7-metil-2-((7-metilqumazolm-6-il)ammo)-9-(tetrahidro-2H-piran-4-M)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000072_0001
Se añadió RuPhos Pd G3 (9,2 mg, 11,0 ^mol) a 2-cloro-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (59,1 mg, 0,22 mmol), 7-metilquinazolin-6-amina (35 mg, 0,22 mmol), RuPhos (10,3 mg, 0,o2 mmol) y CS2CO3 (215 mg, 0,66 mmol) en 1,4-dioxano (1 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de MeCN del 0 al 40% en agua eluyente con NH4HCO3 al 0,1%, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (16 mg, 19%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,68 - 1,77 (2H, m), 2,54 - 2,70 (5H, m), 3,35 (3H, s), 3,41 - 3,52 (2H, m), 3,96 - 4,05 (2H, m), 4,41 - 4,54 (1H, m), 7,87 (1H, s), 8,23 (1H, s), 8,67 (1H, s), 8,73 (1H, s), 9,12 (1H, s), 9,40 (1H, s); m/z MH+ 392.
Ejemplo 33: 2-((2,7-dimetilqumoxalm-6-il)ammo)-7-metil-9-(tetrahidro-2tf-piran-4-il)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona Ejemplo 34: 2-((3,7-dimetilqumoxalm-6-il)ammo)-7-metil-9-(tetrahidro-2W-piran-4-il)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000072_0002
Se añadió carbonato de cesio (1,21 mg, 3,72 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (500 mg, 1,86 mmol), una mezcla de 2,7-dimetilquinoxalin-6-amina (258 mg, 1,49 mmol) y 3,7-dimetilquinoxalin-6-amina (64,5 mg, 0,37 mmol) en 1,4-dioxano (10 mL). Se añadió Brettphos Pd G3 (84 mg, 0,09 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h. Se añadió un Brettphos precat G3 al 5% en moles adicionalmente (84 mg, 0,09 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó el sólido con DCM (10 mL). Se concentró el filtrado combinado a vacío y se purificó el producto en bruto mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 10% en DCM, luego mediante trituración con EtOAc produciendo una mezcla de los compuestos del título. Se separaron los isómeros mediante SFC produciendo 33 (125 mg, 17%) como un sólido crema y 34 (25 mg, 3%) como un sólido crema.
Ejemplo 33: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,66 - 1,74 (2H, m), 2,53 - 2,62 (5H, m), 2,66 (3H, s), 3,34 (3H, s), 3,42 (2H, t), 3,97 (2H, dd), 4,45 (1H, tt), 7,76 - 7,82 (1H, m), 8,18 (1H, s), 8,48 (1H, s), 8,60 (1H, s), 8,70 (1H, s); m/z MH+ 406.
Ejemplo 34: 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,71 (2H, d), 2,53 - 2,63 (5H, m), 2,65 (3H, s), 3,35 (3H, s), 3,43 (2H, t), 3,98 (2H, dd), 4,46 (1H, ddd), 7,84 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,51 (1H, s), 8,60 (1H, s), 8,64 (1H, s); m/z MH+ 406.
Ejemplo 35: 9-(1,1-dioxidotetrahidro-2W-tiopiran-4-il)-7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000072_0003
Se añadió RuPhos Pd G3 (26,4 mg, 0,03 mmol) a 2-cloro-9-(1,1-dioxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,32 mmol), 7-metilquinolin-6-amina (59,9 mg, 0,38 mmol), RuPhos (14,7 mg, 0,03 mmol) y Cs2CO3 (309 mg, 0,95 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h. Se enfrió la reacción hasta ta y se purificó la mezcla mediante cromatografía ultrarrápida C18-ultrarrápida, gradiente de elución de MeCN del 0 al 50% en agua, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (42 mg, 30%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,14 (2H, d), 2,52 (3H, s), 3,00 (2H, q), 3,17 (2H, d), 3,34 (3H, s), 3,42 - 3,55 (2H, m), 4,60 - 4,73 (1H, m), 7,39 (1H, dd), 7,85 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,30 - 8,33 (1H, m), 8,34 (1H, s), 8,46 (1H, s), 8,72 (1H, dd); m/z, MH+ 439.
Ejemplo 36: 7-metN-2-((7-metNqumolm-6-N)ammo)-9-(oxetan-3-N)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000073_0001
Se añadió carbonato de cesio (271 mg, 0,83 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-(oxetan-3-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (100 mg, 0,42 mmol) y 7-metilquinolin-6-amina (65,7 mg, 0,42 mmol) en 1,4-dioxano (2 mL). Se desgasificó la reacción con nitrógeno y se añadió Brettphos Pd G3 (18,8 mg, 0,02 mmol). Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h. Se añadió un catalizador de Pd del 5% adicional y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h a 100°C. Se añadieron un adicional de 2 equivalentes de carbonato de cesio y el 5% de catalizador de Pd y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 18 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se diluyó el residuo con DCM (3 mL), se filtró y se purificó mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0 al 8% en DCM, produciendo el compuesto del título (15 mg, 10%) como un sólido blanquecino; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,52 (3H, d), 3,33 (3H, s), 4,83 (2H, dd), 5,36 (2H, t), 5,49 (1H, qn), 7,39 (1H, dd), 7,84 (1H, s), 8,17 (1H, d), 8,21 (1H, s), 8,51 (1H, s), 8,57 (1H, s), 8,71 (1H, dd); m/z MH+ 363.
Ejemplo 37: 7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-9-(piperidm-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000073_0002
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (0,23 mL, 0,92 mmol) a 4-(7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (90 mg, 0,18 mmol) en metanol (1 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Se eliminó el disolvente a vacío, y se cargó el residuo en una columna SCX de 5 g, lavando con MeOH, luego eluyendo con NH3 IN/MeOH. Se eliminó el disolvente a vacío, y se añadió MeCN (2 mL) y se concentró a vacío produciendo el compuesto del título (62 mg, 87%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMs O) 1,71 (2 H, d), 2,45 (2H, dt), 2,53 (3H, s), 2,61 (2H, t), 3,10 (2H, d), 3,33 (3H, s), 4,27 (1H, ddd), 7,40 (1H, dd), 7,85 (1H, s), 8,16 (1H, s), 8,27 (1H, d), 8,47 (2H, d), 8,72 (1H, dd); m/z MH+ 390.
Ejemplo 38: 9-((3S,4R)-3-fluoropiperidm-4-il)-7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000073_0003
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (1,00 mL, 4,00 mmol) a (3S,4R)-3-fluoro-4-(7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (85 mg, 0,17 mmol) en metanol (3 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h, luego se concentró a vacío. Se añadieron amoníaco 1 M en metanol (1,5 mL) y agua (1 mL) y se aisló el sólido resultante mediante filtración produciendo el compuesto del título (50 mg, 73%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,77 (1H, d), 2,06 (1H, s), 2,52 (3H, s), 2,62 (1H, d), 2,82 (1H, dd), 3,04 (1H, d), 3,20 (2H, d), 3,36 (3H, s), 4,35 - 4,5 (1H, m), 4,73 (1H, d), 7,40 (1H, dd), 7,84 (1H, s), 8,20 (2H, s), 8,47 (2H, d), 8,72 (1H, dd); m/z MH+ 408.
Ejemplo 39: 9-((1s,4s)-4-ammo-4-metNciclohexN)-7-metN-2-((7-metNqumolm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Ejemplo 40: 9-((1r,4r)-4-ammo-4-metilciclohexil)-7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000074_0001
Se añadió precatalizador RuPhos de tercera generación (84 mg, 0,10 mmol) y RuPhos (47,1 mg, 0,10 mmol) a terc-butil-(4-(2-cloro-7-metil-8-oxo-7,8- dihidro-9H-purin-9-il)-1-metilcidohexilo) (400 mg, 1,01 mmol), 7-metilquinolin-6-amina (240 mg, 1,52 mmol) y CS2CO3 (988 mg, 3,03 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml). Se agitó la mezcla de reacción a 100°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío produciendo (1-metil-4-(7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)ciclohexil)carbamato de ferc-butilo como una goma amarilla que se usó sin purificación adicional. Se añadió gota a gota HCl 4 M en 1,4-dioxano (10 mL, 40 mmol) a la mezcla en bruto y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 3 h, luego se purificó directamente mediante cromatografía ultrarrápida C18-ultrarrápida, gradiente de elución de MeCN del 0 al 70% en agua, luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo Ejemplo 39 (48 mg, 11%) como un sólido blanco y el Ejemplo 40 (46 mg, 11%)) como un sólido amarillo. Ejemplo 39: 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 1,03 (3H, s), 1,32 - 1,59 (6 H, m), 2,49 (4H, s), 2,51 - 2,59 (1H, m), 3,32 (3H, s), 4,02 - 4,19 (1H, m), 7,40 (1H, dd), 7,84 (1H, s), 8,14 (1H, s), 8,19 (1H, d), 8,23 (1H, s), 8,60 (1H, s), 8,73 (1H, dd); miz MH+ 418.
Ejemplo 40: 1H-RMN (300 MHz, DMSO) 0,61 (3H, s), 1,20 - 1,39 (2H, m), 1,39 - 1,59 (4H, m), 2,18 - 2,39 (2H, m), 2,46 (3H, s), 3,31 (3H, s), 3,98 - 4,16 (1H, m), 7,40 (1H, dd), 7,84 (1H, s), 8,08 (1H, s), 8,15 (2H, d), 8,67 (1H, s), 8,74 (1H, dd); miz MH+ 418.
Ejemplo 41: (ft)-7-metil-9-(1 -metilpirrolidm-3-il)-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000074_0002
Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (138 mg, 0,65 mmol) a 7-metil-2-[(7-metil-6-quinolil)amino]-9-[(3R)-pirrolidin-3-il]purin-8-ona (122 mg, 0,32 mmol), formaldehído (disolución ac. del 37%) (0,048 mL, 0,65 mmol) y ácido acético (0,074 mL, 1,30 mmol) en DCM (1 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 24 h luego se concentró a vacío. Se purificó el residuo mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (32 mg, 25%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,07 - 2,18 (4H, m), 2,27 (1H, ddd), 2,41 (1H, q), 2,48 (3H, s), 2,59 - 2,7 (2H, m), 2,90 (1H, t), 3,32 (3H, s), 4,85 (1H, dtd), 7,41 (1H, dd), 7,86 (1H, s), 8,15 (1H, s), 8,17 - 8,22 (2H, m), 8,58 (1H, s), 8,74 (1H, dd); miz [M-H]- 388.
Ejemplo 42: (S)-7-metil-9-(1-metilpirrolidm-3-il)-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000074_0003
Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (51,5 mg, 0,24 mmol) a una mezcla de formaldehído (37% disolución en agua, 19,7 mg, 0,24 mmol) y 7-metil-2-[(7-metil-6-quinolil)amino]-9-[(3S)-pirrolidin-3-il]purin-8-ona, HCl (50 mg, 0,12 mmol) en MeOH a ta. Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min. Se añadieron 2 eq más de triacetoxiborohidruro de sodio (51,5 mg, 0,24 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante 30 min, se concentró a vacío y se purificó mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (20 mg, 42%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 2,13 (4H, s), 2,22 - 2,31 (1H, m), 2,41 (1H, q), 2,48 - 2,49 (3H, m), 2,64 (2H, dq), 2,90 (1H, t), 3,32 (3H, s), 4,85 (1H, dtd), 7,41 (1H, dd), 7,86 (1H, s), 8,15 (1H, s), 8,19 (2H, d), 8,58 (1H, s), 8,74 (1H, dd); miz MH+ 390.
Ejemplo 43: 7-metil-2-((7-metilcmnolm-6-il)ammo)-9-(1-metilpiperidm-4-il)-7,9-dihidro-8W-purm-8-ona
Figure imgf000075_0001
Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (60,8 mg, 0,29 mmol) a 7-metil-2-((7-metMcinnolin-6-il)amino)-9-(piperidin-4-M)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (56 mg, 0,14 mmol), formaldehído (disolución ac. al 37%) (0,021 mL, 0,29 mmol) y ácido acético (0,033 mL, 0,57 mmol) en DCM (1 mL) a ta y se agitó la mezcla de reacción durante 3,5 h, luego se concentró a vacío y se purificó mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (22 mg, 38%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,73 (2H, d), 2 - 2,08 (3H, m), 2,29 (3H, s), 2,64 - 2,66 (3H, m), 2,72 (1H, d), 2,95 (2H, d), 3,37 (3H, s), 4,17 - 4,27 (1H, m), 8,07 (1H, d), 8,24 (1H, s), 8,29 (1H, s), 8,64 (1H, s), 8,84 (1H, s), 9,14 (1H, d); m/z MH+ 405.
Ejemplo 44: 7-metil-9-(1-metilpiperidm-4-il)-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8H-purm-8-ona
Figure imgf000075_0002
Se añadió paraformaldehído (568 mg, 1,46 mmol) a 7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-9-(piperidin-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (568 mg, 1,46 mmol) en MeOH (6 mL). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min. Se añadió cianotrihidroborato de sodio (275 mg, 4,38 mmol) a ta, luego se calentó la mezcla de reacción a 80°C durante 30 min, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante fcc, gradiente de elución de MeOH del 0-10% en (NH3 al 0,5% en DCM) produciendo el compuesto del título (390 mg, 66%) como un sólido blanco.1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,67 - 1,71 (2H, m), 1,99 - 2,08 (2H, m), 2,25 (3H, s), 2,54 (3H, s), 2,60 - 2,74 (2H, m), 2,92 (2H, d), 3,34 (3H, s), 4,12 - 4,22 (1H, m), 7,34 - 7,42 (1H, m), 7,84 (1H, s), 8,18 (1H, s), 8,28 - 8,30 (1H, m), 8,50 (1H, s), 8,58 (1H, s), 8,70 - 8,72 (1H, m); m/z MH+ 404.
Forma A
Se analizó el producto final, 7-metil-9-(1-metilpiperidin-4-il)-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, por XRPD y DSC y se encontró que era cristalino. XRPD de una muestra del material dio lugar al patrón de difracción tal como se muestra en la Figura 1. Se caracteriza 7-metil-9-(1-metilpipendin-4-il)-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, la forma A por al menos un pico en un valor de 20 de 7,1° o 8,5° medido usando radiación CuKa. Los diez picos más destacados de la XRPD se muestran en la Tabla B.
Tabla B: Diez picos de XRPD más destacados para la forma A, 7-metil-9-(1-metilpiperidin-4-il)-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000075_0003
Figure imgf000076_0004
donde los valores de 2-theta son /- 0.2°.
Ejemplo 45: 7-metil-9-(1-metilpiperidm-4-il)-2-((7-metilqumoxalm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Figure imgf000076_0001
Se añadieron RuPhos Pd G3 (47,5 mg, 0,06 mmol) y RuPhos (26,5 mg, 0,06 mmol) a 2-cloro-7-metil-9-(1-metilpiperidin-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (80 mg, 0,28 mmol), 7-metilquinoxalin-6-amina (54,2 mg, 0,34 mmol) y Cs2CÜ3 (185 mg, 0,57 mmol) en 1,4-dioxano (6 mL) a ta. Se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 4 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se concentró a vacío y se purificó el residuo mediante fcc, gradiente de elución de MeÜH del 0 al 10% en DCM luego se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (49 mg, 43%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSÜ) 1,68 (2H, d), 1,97 (2H, t), 2,17 (3H, s), 2,52 - 2,63 (5H, m), 2,88 (2H, d), 3,34 (3H, s), 4,11 - 4,25 (1H, m), 7,90 (1H, s), 8,20 (1H, s), 8,62 (2H, d), 8,73 (1H, d), 8,79 (1H, d); m/z MH+ 405.
Ejemplo 46: 9-((3S,4ft)-3-fluoro-1-metilpiperidm-4-il)-7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8W-purin-8-ona
Figure imgf000076_0002
Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (118 mg, 0,55 mmol) a una suspensión de formaldehído (disolución del 37% en agua, 90 mg, 1,11 mmol) y 9-((3S,4R)-3-fluoropiperidin-4-il)-7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (113 mg, 0,28 mmol) en ¡PrÜH (2 mL) a ta. Se añadió MeÜH (1 mL), y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (59 mg, 0,27 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 30 min. Se extinguió la mezcla de reacción con NaHCÜ3 ac. sat. (2 mL), y se extrajo con EtÜAc (2 x 2 mL). Se lavaron las fases orgánicas combinadas con salmuera sat. (1 mL), se hicieron pasar a través de un papel de filtro de separación de fases y se concentraron a vacío. Se añadió MecN (3 mL) al sólido resultante, y se aisló el sólido mediante filtración produciendo el compuesto del título (25 mg, 21%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (400 MHz, DMSÜ) 1,03 - 1,11 (1H, m), 1,83 (1H, s), 2,29 (3H, s), 2,53 (3H, s), 2,89 (1H, s), 3,18 (1H, s), 3,36 (3H, s), 3,44 - 3,57 (1H, m), 4,25 - 4,41 (1H, m), 4,56 - 4,72 (1H, m), 4,85 (1H, d), 7,40 (1H, dd), 7,83 (1H, s), 8,21 (1H, s), 8,25 (1H, d), 8,46 (1H, s), 8,58 (1H, s), 8,71 (1H, dd); m/z MH+ 422.
Ejemplo 47: 7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-9-(1-(oxetan-3-il)piperidm-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
Figure imgf000076_0003
Se añadió oxetan-3-ona (30,5 mg, 0,42 mmol) a 7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-9-(piperidin-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (150 mg, 0,39 mmol) en MeÜH (5 mL). Se calentó la mezcla de reacción a 60°C durante 1 h. Se añadió NaBH3CN (36,3 mg, 0,58 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 60°C durante 16 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta y se vertió en agua (125 mL) y se extrajo con DCM (3 x 125 mL). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4, se filtraron y se evaporaron, luego se purificaron mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (21 mg, 12%) como un sólido blanco; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,91 - 2,08 (2H, d), 2,33 - 2,53 (2H, t), 2,56 (3H, d), 2,67 - 2,71 (2H, m), 2,89 (2H, d),3,33 (3H, s), 3,44 - 3,47 (1H, m), 4,22 - 4,23 (1H, m), 4,48 - 4,59 (2H, t), 4,61 -4,62 (2H, t), 7,42 - 7,45 (1H, m), 7,85 (1H, s), 8,21 (1H, s), 8,48 (1H, s), 8,52 - 8,54 (1H, m), 8,71 - 8,75 (2H, m); m/z MH+ 446.
Ejemplo 48: 9-(1-(2-hidroxietM)piperidm-4-M)-7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona
ol (52,9 mg, 0,42 mmol) a 7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-9-(piperidin-4-il)-7,9-dihidro-8H-mmol) y DIPEA (0,202 mL, 1,16 mmol) en iPrOH (3 mL). Se calentó la mezcla de reacción a jó que se enfriara hasta ta y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante a produciendo el compuesto del título (18 mg, 11%) como un sólido blanco; 1H-RMN (300 MHz, m), 2,25 - 2,59 (2H, m), 2,59 - 2,65 (5H, m), 2,74 - 2,88 (2H, m), 3,16 - 3,20 (2H, m), 3,42 (3H, (1H, m), 7,43 - 7,47 (1H, m), 7,87 (1H, s), 8,09 (1H, s), 8,34 - 8,37 (1H, m), 8,67 - 8,69 (2H, m);
xietil)piperidm-4-N)-7-metN-2-((7-metNqumolm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
toxietano (58,9 mg, 0,42 mmol) a 7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-9-(piperidin-4-il)-7,9-0 mg, 0,39 mmol) y d Ip EA (0,202 mL, 1,16 mmol) en iPrOH (5 mL). Se calentó la mezcla de 6 h. Se dejó que la mezcla de reacción se enfriara hasta ta y se purificó directamente mediante endo el compuesto del título (26 mg, 15%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (300 MHz, CDCh) 2,64 (3H, s), 2,73 (2H, s), 2,92 (2H, s), 3,19 (2H, d), 3,21 - 3,63 (6H, m), 3,63 - 3,68 (2H, m), 7,28 - 7,34 (1H, m), 7,96 (2H, d), 8,30 (1H, d), 8,76 - 8,78 (1H, m), 8,97 (1H, s); m/z MH+ 448.
Figure imgf000077_0001
ridm-4-N)-7-metN-2-((7-metilqumolm-6-N)ammo)-7,9-dihidro-8tf-purin-8-ona
Se añadió acetaldehído (18,7 mg, 0,42 mmol) a 7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-9-(piperidin-4-il)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (150 mg, 0,39 mmol) en MeOH (5 mL). Se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h. Se añadió NaBHsCN (36,9 mg, 0,58 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 1 h, luego se vertió en agua (150 mL) y se extrajo con DCM (3 x 150 mL). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a vacío, luego se purificaron mediante HPLC preparativa produciendo el compuesto del título (49 mg, 31%) como un sólido amarillo; 1H-RMN (300 MHz, CDCls) 1,22 (3H, s), 1,85 - 1,88 (2H, d), 2,15 (2H, s), 2,57 - 2,63 (5H, s), 2,91 (2H, s), 3,20 (2H, s), 3,46 (3H, s), 4,41 - 4,45 (1H, m), 7,16 (1H, s), 7,28 - 7,33 (1H, m), 7,95 (2H, d), 8,35 - 8,37 (1H, m), 8,77 (1H, s), 9,01 (1H, s); m/z MH+ 418.
Ejemplo 51: 9-(1 -acetMpiperidm-4-il)-7-metil-2-((7-metilqumolm-6-il)ammo)-7,9-dihidro-8H-purm-8-ona
Figure imgf000078_0001
Se añadió carbonato de cesio (3,09 g, 9,49 mmol) a 9-(1-acetilpiperidin-4-il)-2-cloro-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona (840 mg, 2,71 mmol) y clorhidrato de 7-metilquinolin-6-amina (528 mg, 2,71 mmol) en 1,4-dioxano (15 mL). Se añadió Brettphos Pd G3 (123 mg, 0,14 mmol) y se calentó la mezcla de reacción a 100°C durante 1 h, luego se dejó que se enfriara hasta ta, se filtró y se lavó con DCM (10 mL). Se concentró el filtrado combinado a vacío y se purificó el residuo mediante fcc, eluyente MeOH del 0-10% en d Cm . Se tomó el aceite resultante en MeCN (20 mL) y se calentó brevemente la suspensión resultante a reflujo y luego se dejó que se enfriara hasta ta. Se aisló el precipitado resultante mediante filtración, se lavó con una pequeña cantidad de MeCN y se secó a vacío produciendo el compuesto del título (550 mg, 47,0 %) como un sólido amarillo pálido; 1H-RMN (400 MHz, DMSO) 1,81 (2H, t), 1,93 (3H, s), 2,21 - 2,32 (1H, m), 2,38 -2,47 (1H, m), 2,52 (3H, s), 2,62 (1H, t), 3,15 (1H, t), 3,34 (3H, s), 3,94 (1H, d), 4,44 (1H, ddd), 4,57 (1H, d), 7,39 (1H, dd), 7,85 (1H, s), 8,13 (1H, d), 8,17 (1H, s), 8,29 (1H, s), 8,59 (1H, s), 8,74 (1H, dd); m/z MH+ 432.
Ejemplo 52: 9-((3ft,4ft)-4-fluoropirrolidm-3-N)-7-metN-2-((7-metNqumolm-6-M)ammo)-7,9-dihidro-8H-purm-8-ona
Figure imgf000078_0002
Se añadió HCl 4 M en 1,4-dioxano (11,40 mL, 45,59 mmol) en una porción a una disolución con agitación de (3R,4R)-3-fluoro-4-(7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-8-oxo-7,8-dihidro-9H-purin-9-il)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (1,5 g, 3,04 mmol) en 1,4-dioxano (50 mL) a ta, y se agitó la mezcla de reacción a ta durante 12 h luego se concentró a vacío. Se diluyó el residuo resultante con DCM (200 mL), luego se basificó con NH37 M en MeOH (10 mL). Se lavó la mezcla con salmuera sat., se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a vacío. Se purificó el producto en bruto resultante mediante HPLC preparativa (columna XBridge Prep C18 OBD, 5 ^ de sílice, 19 mm de diámetro, 150 mm de longitud), usando mezclas decrecientemente polares de agua (que contenía NH4HCO3 al 0,1%) y MeCN como eluyentes, luego se trituró con MeCN produciendo un lote del compuesto del título. Se purificaron los licores de la trituración por HPLC preparativa (Columna: Columna XBridge Shield RP18 OBD 19*250 mm, 10 um; Fase móvil A: Agua (10 mmol/L NH4HCO3), Fase móvil B: ACN; Caudal: 25 mL/min; Gradiente: 25% de B al 35% de B en 7 min; 254; 220 nm; Tr: 6,83 min), produciendo el compuesto del título adicional. Se combinaron los dos lotes produciendo el compuesto del título (620 mg, 52%) como un sólido blanco. 1H-RMN (300 MHz, DMSO, 23°C) 2,49 (3H, s), 2,80 - 3,02 (2H, m), 3,02 - 3,31 (2H, m), 3,34 (3H, s), 4,75 (1H, dt), 5,57 (1H, dd), 7,41 (1H, dd), 7,86 (1H, s), 8,12 - 8,25 (3H, m), 8,67 (1H, s), 8,74 (1H, dd), falta un NH; m/z MH+ 394.
Forma A
El producto final, 9-((3R,4R)-4-fluoropirrolidin-3-il)-7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, se analizó mediante XRPD y se encontró que era cristalino. XRPD de una muestra del material dio lugar al patrón de difracción tal como se muestra en la Figura 5. 9-((3R,4R)-4-fluoropirrolidin-3-il)-7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona, Forma A se caracteriza por al menos un pico a un valor de 20 de 7,3° o 15,0° medido usando radiación CuKa. Los diez picos más prominentes de la XRPD se muestran en la Tabla C.
Tabla C: Diez picos de XRPD más prominentes para la Forma A, 9-((3R,4R)-4-fluoropirrolidin-3-il)-7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona en orden de intensidad, siendo el primer valor el de mayor intensidad
Figure imgf000079_0001
donde los valores de 2-theta son /- 0,2°.
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Claims (20)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de Fórmula (I):
Figure imgf000081_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
A1 representa N o CR2A, A2 representa N o CR2B y A3 representa N o CR2C, donde no más de uno de A1, A2 y A3 representan N;
R1 representa cicloalquilo C4-6 o un heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo seleccionado de O, S y N, donde el cicloalquilo C4-6 o heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de flúor, alquilo C1-3 (opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado de hidroxilo y alcoxilo C1-2), ciclopropilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)alquilo C1-2, azetidinilo y oxetanilo;
R2A, R2B y R2C cada uno independientemente representa hidrógeno, metilo o metoxilo.
2. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 1, en el que A1 representa CR2A, A2 representa CR2B y A3 representa CR2C.
3. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según cualquier reivindicación anterior, en el que R2A, R2B y R2C cada uno representa hidrógeno.
4. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según cualquier reivindicación anterior, en el que R1 se selecciona de ciclohexanilo, piperidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, oxetanilo y pirrolidinilo.
5. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según cualquier reivindicación anterior, en el que R1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2, dioxo, C(O)Me y oxetanilo, donde el etilo está opcionalmente sustituido con hidroxilo o metoxilo.
6. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según cualquier reivindicación anterior, en el que R1 se selecciona de piperidinilo y pirrolidinilo.
7. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según cualquier reivindicación anterior, en el que R1 está opcionalmente sustituido con uno o más grupos seleccionados de flúor, metilo, etilo, hidroxilo, NH2 y oxetanilo.
8. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según cualquier reivindicación anterior, en el que R1 es pirrolidin-3-ilo.
9. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según cualquier reivindicación anterior, en el que R1 es 4-fluoropirrolidin-3-ilo.
10. El compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según la reivindicación 1, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
9-(1-acetilpiperidin-4-il)-7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-(1-acetilpiperidin-4-il)-7-metil-2-((7-metilquinoxalin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-(1-acetilpiperidin-4-il)-7-metil-2-((7-metilquinazolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-(1-acetilpiperidin-4-il)-2-((2,7-dimetilquinoxalin-6-il)amino)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-(1-acetilpiperidin-4-il)-2-((3,7-dimetilquinoxalin-6-il)amino)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-2-((7-metilquinolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-2-((7-metilcinnolin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
2-((4,7-dimetilquinolin-6-il)amino)-9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-2-((4-metoxi-7-metilquinolin-6-il)amino)-7-metil-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona;
9-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-7-metil-2-((7-metilquinoxalin-6-il)amino)-7,9-dihidro-8H-purin-8-ona; 9-((1s,4s)-4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡c¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1r,4r)-4-h¡drox¡-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1r,4r)-4-h¡drox¡-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1r,4r)-4-h¡drox¡-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-h¡drox¡-1-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(S)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(S)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(R)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(R)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡drofuran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(R)-7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(R) -7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(S) -7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(S)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nazol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
2-((2,7-d¡met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7-met¡l-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
2-((3,7-d¡met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7-met¡l-9-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1,1-d¡ox¡dotetrah¡dro-2H-t¡op¡ran-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(oxetan-3-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(p¡per¡d¡n-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((3S,4R)-3-fluorop¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1s,4s)-4-am¡no-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((1r,4r)-4-am¡no-4-met¡lc¡clohex¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(R) -7-met¡l-9-(1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
(S) -7-met¡l-9-(1-met¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lc¡nnol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-9-(1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-2-((7-met¡lqu¡noxal¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-((3S,4R)-3-fluoro-1-met¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-9-(1-(oxetan-3-¡l)p¡per¡d¡n-4-¡l)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-(2-h¡drox¡et¡l)p¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-(2-metox¡et¡l)p¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-et¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona;
9-(1-acet¡lp¡per¡d¡n-4-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona; y
9-((3R,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-3-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona.
11. El compuesto de Fórmula (I) según la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, en el que el compuesto es 9-((3R,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-3-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona o una sal farmacéut¡camente aceptable del mismo.
12. El compuesto de Fórmula (I) según la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, en el que el compuesto es 9-((3R,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-3-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona.
13. El compuesto de Fórmula (I) según la re¡v¡nd¡cac¡ón 1, en el que el compuesto es una forma cr¡stal¡na de 9-((3R,4R)-4-fluorop¡rrol¡d¡n-3-¡l)-7-met¡l-2-((7-met¡lqu¡nol¡n-6-¡l)am¡no)-7,9-d¡h¡dro-8H-pur¡n-8-ona.
14. El compuesto de Fórmula (I) según la re¡v¡nd¡cac¡ón 13, en el que la forma cr¡stal¡na t¡ene un patrón de d¡fracc¡ón de rayos x en polvo que comprende p¡cos a 7,3° y 15,0° ± 0,2° 20 med¡do usando rad¡ac¡ón CuKa.
15. El compuesto de Fórmula (I) según la re¡v¡nd¡cac¡ón 13 o 14, en el que la forma cr¡stal¡na t¡ene un patrón de d¡fracc¡ón de rayos x en polvo sustanc¡almente tal como se muestra en la F¡gura 5 med¡do usando rad¡ac¡ón CuKa.
16. Una compos¡c¡ón farmacéut¡ca que comprende un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del m¡smo, según una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 15, y al menos un exc¡p¡ente farmacéut¡camente aceptable.
17. Un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del mismo, según una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 15, para su uso en la terap¡a.
18. Un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéut¡camente aceptable del mismo, según una cualqu¡era de las re¡v¡nd¡cac¡ones 1 a 15, para su uso en el tratam¡ento del cáncer.
19. Un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para su uso en el tratamiento de cáncer según la reivindicación 18, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con radioterapia
20. Un compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para su uso en el tratamiento de cáncer según la reivindicación 18, donde el compuesto de Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se administra en combinación con una sustancia antitumoral seleccionada del grupo que consiste en doxorrubicina, doxorrubicina liposomal, olaparib, AZD6738 y AZD0156.
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